JP2002214236A - 血中抗原検出方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 予め血球を除去することなく、全血を灌注し
て展開するだけで目的の血中抗原をイムノクロマトグラ
フィー法で検出できるようにする。 【解決手段】 クロマト展開用膜担体（３）と、検査対
象物質に対する呈色標識第一抗体と、前記検査対象物質
に対する第二抗体と、血球捕捉膜部材（７）とを有して
なる血中抗原検出装置において、前記第一抗体はクロマ
ト展開開始部位に配置された標識抗体含浸部材（２）に
含浸され、前記第二抗体は前記クロマト展開開始部位か
ら離隔した捕捉部位（３１）で前記担体に固定され、前
記血球捕捉膜部材はカルボキシメチルセルロース膜から
なり、前記含浸部材の上面に積層される。血液を全血の
まま血球捕捉膜部材に浸透させ、血球以外の血液成分を
含浸部材へ浸透させて担体上にクロマト展開し、検査対
象物質と第一抗体との複合体を捕捉部位で捕捉させて呈
色させる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、イムノクロマトグ
ラフィー法による血中抗原検出方法及び装置に関し、予
め血球を除去することなく、全血を灌注して展開するだ
けで血液中の検査対象物質の存否の検出及び半定量がで
きる方法及び装置に関する。

【０００２】

【従来の技術】イムノクロマトグラフィー法は、検査対
象物質に対する第一抗体及び第二抗体とクロマト展開用
膜担体とを用意し、第一抗体を予め呈色標識させておく
とともに第二抗体をクロマト展開用膜担体上の所定位置
に予め固定しておき、該呈色標識第一抗体と被検体との
混合物をクロマト展開用膜担体上でクロマト展開し、検
査対象物質と第一抗体との複合体を第二抗体に捕捉さ
せ、該第二抗体固定位置における呈色の有無及び強弱を
判定することにより検査対象物質の検出を行なう免疫検
出法である。この方法は、操作が簡単で反応時間も短
く、かかる抗体とクロマト展開用膜担体とを備えたキッ
トがあればどこでも簡単に検査が行えるという利点があ
る。

【０００３】一般的なキットは、例えば、特開平１０−
３３２７００号公報や特開平１１−１０８９３１号公報
に開示されている。かかるキットは、図３に示されるよ
うな細長のクロマト法テストストリップの形態で提供さ
れ、粘着シート１と、呈色標識第一抗体含浸部材（以下
「標識抗体含浸部材」ともいう）２と、クロマト展開用
膜担体３と、吸収用部材４と、試料添加用部材５とを備
えてなる。クロマト展開用膜担体３は粘着シート１の略
中央部に貼着され、呈色標識第一抗体含浸部材２はこの
クロマト展開用膜担体３のクロマト展開開始部位側（図
３において左側を意味し、この側を以下「上流側」と記
し、その反対側を以下「下流側」と記す）の端部の上に
その下流側端部を載せた状態で粘着シート１に貼着さ
れ、吸収用部材４はその上流側領域をクロマト展開用膜
担体３の上に載置させた状態で、その下流側領域にて粘
着シート１に貼着される。また、試料添加用部材５は、
その下流側領域を呈色標識第一抗体含浸部材２の上面に
積層させた状態で、その上流側領域にて粘着シート１に
貼着される。第二抗体は、呈色標識第一抗体含浸部材２
の下流側端部と吸収用部材４の上流側端部との間で露出
されたクロマト展開用膜担体３の部分に固定され、捕捉
部位３１を形成する。

【０００４】そして、被検体は、試料添加用部材５に灌
注されると、呈色標識第一抗体含浸部材２の中に浸透し
てそこで検査対象物質は呈色標識第一抗体と抗原抗体反
応し、クロマト展開用膜担体３の下流側に浸透してい
く。そして、検査対象物質と呈色標識第一抗体との複合
体は、第二抗体が固定された捕捉部位３１を通過すると
きに抗原抗体反応により第二抗体により捕捉され、そこ
に集積して呈色する。したがって、この呈色の有無で陽
性か陰性が判定できる。かかるテストストリップは、携
帯に便利で、操作し易く、一般家庭でも使用することが
でき、例えば、婦人尿中絨毛ゴナドトロピン（ＨＣＧ）
の検出による妊娠診断用のものが市販されている。

【０００５】ところで、近年、水環境中における内分泌
かくらん化学物質（環境ホルモン）の存在をスクリーニ
ングするために、魚類の血中ビテロジェニンを調査する
ことが提案されている。ビテロジェニンは、エストロジ
ェン等の刺激により魚類などの肝臓中で生合成されて血
中に分泌される雌特異タンパク質であり、正常の雄には
ほとんど検出されない。しかし、内分泌かくらん化学物
質、特に女性ホルモン様の作用物質に曝露された雄魚
は、その血中にビテロジェニンが検出されるようになる
ことが知られている。そして、かかる血中ビテロジェニ
ンの検出を行なうために免疫検出法を用いることが提案
されている（K. Arizono, Dojin News, No. 88 (198
8)）。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、血中ビ
テロジェニンを検出するために上述のようなクロマト法
テストストリップを用いようとした場合、血液をそのま
まテストストトリップに灌注すると、クロマト展開用膜
担体全体が血球の赤色に染められ、第二抗体固定位置で
ある捕捉部位での呈色反応を判別するのが極めて困難に
なる。これを避けるためには、遠心分離等の前処理操作
により、採取した血液から血球を分離して血漿又は血清
を得た後、該血漿又は血清をテストストリップに灌注せ
ざるを得ない。したがって、クロマト法テストストリッ
プの携帯性、易操作性、迅速性にもかかわらず、その特
質を十分に生かしきれない。

【０００７】また、医療現場においても、ベッドサイド
および診療室で臨床医が採取した血液を全血のままクロ
マト法テストストリップに灌注して血中抗原の検出を行
なうことができれば便利である。

【０００８】本発明は、イムノクロマトグラフィー法に
よる血中抗原検出方法及び装置において、予め血球を除
去することなく、全血を灌注して展開するだけで血液成
分中の検査対象物質を検出することができるようにする
ことを目的とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
の下に鋭意研究した結果、血液を全血のまま血球捕捉膜
を介してクロマト展開用膜担体に浸透させることによ
り、該血球捕捉膜に血球を捕捉させて、血漿のみをクロ
マト展開用膜担体に展開させることができることを見出
し、本発明を完成するに至った。

【００１０】したがって、本発明の第一の局面によれ
ば、検査対象物質に対する呈色標識第一抗体含浸部材と
前記検査対象物質に対する第二抗体とクロマト展開用膜
担体と血球捕捉膜部材とを少なくとも用意し、前記呈色
標識第一抗体含浸部材を前記担体の一端部に配置すると
ともにこの呈色標識第一抗体含浸部材の上面に前記血球
捕捉膜部材としてカルボキシメチルセルロース膜を積層
し、前記担体の前記一端部から離隔した位置に前記第二
抗体を固定して前記検査対象物質の捕捉部位を設け、血
液を灌注して前記血球捕捉膜部材を通過させることによ
り、これを通過した血液成分と前記呈色標識第一抗体と
の混合物を前記担体上に展開させるとともに、前記血液
成分中の検査対象物質と前記呈色標識第一抗体との複合
体を前記第二抗体に捕捉させることにより前記血液中の
検査対象物質を検出することを特徴とする血中抗原検出
方法が提供される。

【００１１】また、本発明の第二の局面によれば、クロ
マト展開用膜担体と、検査対象物質に対する呈色標識第
一抗体含浸部材と、前記検査対象物質に対する第二抗体
と、血球捕捉膜部材とを少なくとも有してなる血中抗原
検出装置において、前記呈色標識第一抗体含浸部材は前
記担体の一端部に配置され、前記第二抗体は前記担体の
前記一端部から離隔した位置に固定されて前記検査対象
物質の捕捉部位を形成し、前記血球捕捉膜部材は前記呈
色標識第一抗体含浸部材の上面に積層されたカルボキシ
メチルセルロース膜からなることを特徴とする血中抗原
検出装置が提供される。

【００１２】クロマト展開用膜担体は、固相化抗体を保
持する性質と、血液成分の展開がそれ自体の毛細管現象
で自動的に行なわれる性質とを併せ持つものであればよ
く、例えば、セルロース類膜（濾紙、ニトロセルロース
膜等）、ナイロン膜、ガラス繊維膜などが挙げられ、な
かでもニトロセルロース膜が好ましい。なお、クロマト
展開用膜担体の下流側端部には、通常、クロマト展開開
始部位からの毛細管現象による血液成分のクロマト展開
を補助するとともに、クロマト展開において捕捉部位で
トラップされなかったものを吸収、保持するために、吸
収用部材が連接される。この吸収用部材は、その上流側
領域をクロマト展開用膜担体の上面に載置させた状態
で、その下流側領域において粘着シートに貼着するとよ
い。吸収用部材の材料としては、液体をすみやかに吸
収、保持できる材質のものであればよく、綿布、濾紙、
およびポリエチレン、ポリプロピレン等からなる多孔質
プラスチック不織布等を挙げることができるが、特に濾
紙が最適である。

【００１３】第一抗体及び第二抗体は、検査対象物質を
抗原として常法にしたがって得ることができ、単クロー
ン抗体及び多クローン抗体のいずれであってもよい。但
し、第一抗体及び第二抗体の両者が単クローン抗体であ
る場合は、第一抗体と第二抗体とは抗原との免疫的結合
部位を異にする必要がある。単クローン抗体は、たとえ
ば、ケラー−ミルシュタインの方法によって得られる。
また、多クローン抗体は、例えば、ウサギを免疫して得
た抗血清から精製して得られる。

【００１４】第一抗体を標識する呈色標識物質として
は、コロイド金属および着色ラテックスなどが挙げられ
る。コロイド金属の代表例としては、金コロイドなどが
挙げられる。コロイド金属の粒子の大きさは、通常は、
直径３〜６０nm程度とされる。着色ラテックスの代表例
としては、赤色および青色などのそれぞれの顔料で着色
されたポリスチレンラテックスなどの合成ラテックスが
挙げられる。ラテックスとして天然ゴムラテックスのよ
うな天然ラテックスも使用することができる。着色ラテ
ックスの大きさは、直径数拾nm乃至数百nm程度から選択
することができる。これらの呈色標識物質は、市販品を
そのまま使用することができるが、場合によりさらに加
工し、または、それ自体公知の方法で製造することもで
きる。また、呈色標識としては、蛍光標識なども使用す
ることができる。

【００１５】第一抗体の呈色標識は、各呈色標識物質に
応じた常法に従って行なわれる。たとえば、呈色標識物
質が金コロイド粒子の場合には、通常は、第一抗体と金
ゾルとを室温乃至常温下で数分間、長くても１０分間、
混合することによって両者を物理的に結合せしめること
が可能である。

【００１６】呈色標識第一抗体含浸部材は、クロマト展
開用膜担体の一端部に配置され、クロマト法テストスト
リップの試料注入口などに相当する部位、すなわち、ク
ロマト展開開始部位を形成する。例えば、含浸部材に呈
色標識第一抗体を含浸させ、この呈色標識第一抗体含浸
部材の少なくとも一端部をクロマト展開用膜担体の上流
側端部に載置するなどによって該担体に連接させればよ
い。含浸部材の材料としては、あらかじめ含浸部材に呈
色標識第一抗体液を含浸させる際に、それをすみやかに
吸収・保持・乾燥し得るものであって、かつ、クロマト
展開される血液中の水分により、含浸部材の呈色標識第
一抗体が容易に再溶解され、それ以降のクロマト展開が
スムーズに進行するものであればよく、特にその材質を
選ばない。かかる含浸部材の材料として、例えば、ガラ
ス繊維布、セルロース類布（濾紙、ニトロセルロース
等）、ポリエチレン、ポリプロピレン等の多孔質プラス
チック布類が挙げられるが、特にガラス繊維布が好まし
い。第二抗体は、呈色標識第一抗体含浸部材から離隔し
たクロマト展開用膜担体の所定位置に固定され、前記検
査対象物質の捕捉部位を形成する。第二抗体の固定は、
公知の方法に従い、例えば、クロマト展開用膜担体の所
定位置に抗体溶液をスポット状またはライン状に塗布
し、これを室温で十分に乾燥させることにより行える。

【００１７】血球捕捉膜部材としては、カルボキシメチ
ルセルロース膜が用いられ、具体的には、アドバンテッ
ク東洋株式会社から販売されているイオン交換濾紙ＣＭ
（商品名）や、ワットマンジャパン株式会社から販売さ
れているイオン交換セルロースペーパーなどを用いるこ
とができる。

【００１８】血球捕捉膜部材は、呈色標識第一抗体含浸
部材の上面に積層される。さらに、該血球捕捉膜部材の
上面に試料添加用部材を積層するとよい。試料添加用部
材としては、たとえば、多孔質ポリエチレンおよび多孔
質ポリプロピレンなどのような多孔質合成樹脂のシート
またはフィルム、ならびに、濾紙および綿布などのよう
なセルロース製の紙または織布もしくは不織布を用いる
ことができる。

【００１９】しかして、血液を全血のまま試料添加用部
材に灌注して血球捕捉膜部材に浸透させることにより、
血液中の血球は血球捕捉膜部材により捕捉され、血球捕
捉膜部材を通過した血液成分中に存在する検査対象物質
は標識抗体含浸部材を通過する間に呈色標識第一抗体と
抗原抗体反応することにより複合体を生成し、さらに、
クロマト展開用膜担体上にクロマト展開される間に、こ
の生成した複合体は第二抗体によって捕捉され、当該捕
捉部位に集積して呈色する。そして、この捕捉部位にお
ける呈色の度合いを判定することにより、血液中検査対
象物質の存否の検出及び半定量ができる。

【００２０】本発明の検出方法は、クロマト法テストス
トリップの形態にされた装置を用いて簡便に実施でき
る。クロマト法テストストリップとは、帯状の固相担体
テストストリップからなり、クロマト法テストストリッ
プ用ケースなどに設けられた試料注入口部位に配置され
た試料添加用部材に検査試料を灌注することによりクロ
マト展開が開始され、血液成分が浸透して該テストスト
リップの標識抗体含浸部材に到達し、該部材の呈色標識
第一抗体と免疫反応して複合体が形成され、さらに、該
複合体が捕捉部位まで浸透して捕捉部位の第二抗体との
免疫反応により捕捉されて、捕捉部位が呈色せしめられ
る装置である。上記ケースは捕捉部位に判定孔を備えて
おり、使用者は、該判定孔から捕捉部位の呈色の有無を
観察できる。クロマト法テストストリップの作成には、
たとえば、特公平７−１３４６０号公報記載の方法が好
適に適用される。

【００２１】次に、本発明のクロマト法テストストリッ
プ形態の検出装置の代表例を図面を参照してさらに具体
的に説明する。すなわち、図１はクロマト法テストスト
リップを示し、ａは平面図、ｂはａで示されたクロマト
法テストストリップの縦断面図である。図２は図１で示
されたクロマト法テストストリップを収納するためのケ
ースを示し、ａは平面図、ｂはａで示されたケースの縦
断面図である。なお、図面は原理を示すためのものであ
り、寸法などは正確には示されていない。

【００２２】このクロマト法テストストリップは、粘着
シート１の粘着面に、クロマト展開開始部位側（図３と
同様に、図面の向かって左側を意味し、この側を以下
「上流側」と記し、その反対側を以下「下流側」と記
す）から順次、血球捕捉膜部材７、標識抗体含浸部材
２、クロマト展開用膜担体３および吸収用部材４を貼着
して作成される。すなわち、図１に示されるように、帯
状の粘着シート１の長手方向略中央部に帯状のクロマト
展開用膜担体３を貼着し、このクロマト展開用膜担体３
の上流側端部の上面に標識抗体含浸部材２の下流側端部
を載せた状態で、この標識抗体含浸部材２の残りの部分
を粘着シート１に貼着せしめ、さらに、血球捕捉膜部材
７をこの標識抗体含浸部材２の上面に両者の下流側端部
を合わせた状態で重ね合わせるとともに、この血球捕捉
膜部材７の上流側部分を粘着シートに貼着せしめる。次
いで、吸収用部材４を粘着シート１の上に両者の下流側
端部を合わせた状態で重ね合わせて貼着するとともに、
この吸収用部材４の上流側領域をクロマト展開用膜担体
３の下流側領域に載置する。これにより、呈色標識第一
抗体含浸部材２の下流側端部と吸収用部材４の上流側端
部との間に露出されたクロマト展開用膜担体３の領域に
第二抗体が固定された捕捉部位３１が形成される。さら
に、血球捕捉膜部材７の上に試料添加用部材５を積層し
て、クロマト法テストストリップが完成される。

【００２３】これら粘着シート１、標識抗体含浸部材
２、クロマト展開用膜担体３、吸収用部材４、試料添加
用部材５及び血球捕捉膜部材７はいずれも細長い長方形
で帯状とされている。クロマト展開用膜担体３の色は、
捕捉部位３１の呈色が明確に目視できるものであること
が好ましい。たとえば、呈色標識物質が金コロイドであ
る場合には、捕捉部位３１が陽性時に赤紫色を呈するの
で、クロマト展開用膜担体３の色は淡色が好ましく、白
が特に好ましい。

【００２４】上記のクロマト法テストストリップは、ケ
ース６に収納して提供されることが好ましい。ケース６
は、通常は、合成樹脂製である。ケース６は、容器本体
６１と蓋体６２とからなっている。蓋体６２は上記のク
ロマト法テストストリップの試料添加用部材５およびク
ロマト展開用膜担体３の捕捉部位３１のそれぞれに対応
する位置にそれぞれ開口を備え、前者は試料注入口６２
１を形成し、後者は判定孔６２２として供される。

【００２５】採取した血液は、蓋体６２の試料注入口６
２１から試料添加用部材５に灌注される。灌注された該
血液は試料添加用部材５に浸透して下方の血球捕捉膜部
材７に移行し、該血球捕捉部材７を通過する間に血球は
捕捉され、血球以外の血液成分が標識抗体含浸部材２へ
移行せしめられるとともに標識抗体含浸部材２の下流側
端部方向に向かって展開せしめられる。該血液成分中に
検査対象物質が含有されていた場合には、このクロマト
展開の間に検査対象物質と呈色標識第一抗体との免疫反
応によって両者からなる呈色複合体が形成される。

【００２６】該血液成分はさらにクロマト展開用膜担体
３を下流側端部方向に向かって展開せしめられる。この
呈色複合体は展開の途上において該クロマト展開用膜担
体３の捕捉部位３１で捕捉されて集積せしめられ呈色す
る。この呈色は判定孔６２２から肉眼で観察される。本
発明の検出方法によれば、通常、血液中の検査対象物質
と呈色標識第一抗体との間の免疫反応ならびにこの免疫
反応で生成せしめられた呈色複合体と第二抗体との間の
免疫反応はいずれも数分で完結せしめられるので、検査
自体は長くても１５分程度で終了する。

【００２７】本発明の検出方法を実施する際、血球の分
離とその他の血液成分の展開を容易にするために、血液
には灌注する前に予め血液凝固阻止剤を添加しておくこ
とが好ましく、また、生理食塩水などで４倍程度以上の
希釈を行なうことが好ましい。血液凝固阻止剤として
は、ヘパリンナトリウム、クエン酸ナトリウム、EDTA等
が使用できる。このために、クロマト法テストストリッ
プと、希釈用の生理食塩水及び／又は血液凝固阻止剤と
を組み合わせてキットとすることもできる。また、判定
を容易にするために、予め作成された蛋白濃度と呈色度
との関係表をクロマト法テストストリップに付属させる
こともできる。

【００２８】

【実施例】以下、本発明を実施例によって、さらに具体
的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定される
ものではない。

【００２９】実施例１（金コロイド標識抗ヒトＣＲＰマ
ウス単クローン抗体溶液および青色ラテックス標識抗ヒ
トＣＲＰマウス単クローン抗体溶液の作成） （１）金コロイド溶液の調製 加熱によって沸騰させた超純水９９ｍｌに、１％（ｖ/
ｗ）塩化金酸水溶液１ｍｌを加え、さらに、その１分後
に１％（ｖ/ｗ）クエン酸ナトリウム水溶液１．５ｍｌ
を加えて加熱し５分間沸騰させた後、室温に放置して冷
却した。次いで、この溶液に２００ｍＭ炭酸カリウム水
溶液を加えてｐＨ９．０に調製し、これに超純水を加え
て全量を１００ｍｌとして金コロイド溶液を得た。

【００３０】（２）金コロイド標識抗ヒトＣＲＰマウス
単クローン第一抗体溶液の調製 試料のヒトＣＲＰ（Ｃ Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ）に対して第一抗体として使用する抗ヒトＣＲＰマ
ウス単クローン第一抗体（株式会社日本バイオテスト研
究所の商品）の蛋白換算重量１μｇ（以下、抗体の蛋白
換算重量を示すとき、単に、その精製蛋白質の重量分析
による重量数値で示す）と上記の金コロイド溶液１ｍｌ
とを混合し、室温で２分間静置してこの抗体のことごと
くを金コロイド粒子表面に結合させた後、金コロイド溶
液における最終濃度が１％となるように１０％ウシ血清
アルブミン（以下、「ＢＳＡ」と記す）水溶液を加え、
この金コロイド粒子の残余の表面をことごとくこのＢＳ
Ａでブロックして、金コロイド標識抗ヒトＣＲＰマウス
単クローン第一抗体溶液（以下、「金コロイド標識第一
抗体」と記す）溶液を調製した。この溶液を遠心分離
（５６００×Ｇ、３０分間）して金コロイド標識第一抗
体を沈殿せしめ、上清液を除いて金コロイド標識第一抗
体を得た。この金コロイド標識第一抗体を１０％サッカ
ロース・１％ＢＳＡ・０．５％トリトン（Ｔｒｉｔｏ
ｎ）−Ｘ１００を含有する５０ｍＭトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７．４）に懸濁して金コロイド標識第一抗体溶液
を得た。

【００３１】（３）青色ラテックス標識抗ヒトＣＲＰマ
ウス単クローン第一抗体溶液の調製 抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体０．２５ｍｇ
に、１０％青色ラテックス懸濁液（青色ラテックス粒径
０．２μｍ、日本ペイント株式会社の商品）を精製水で
希釈して得られた１％青色ラテックス溶液１ｍｌを加え
て溶解し、室温で３０分間静置して抗ヒトＣＲＰマウス
単クローン第一抗体をこの青色ラテックスに結合させて
青色ラテックス標識抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一
抗体（以下、「青色ラテックス標識第一抗体」という）
溶液を調製した。この溶液を遠心分離（５０００×Ｇ、
３０分間）し、沈殿物として粗青色ラテックス標識第一
抗体を得た。この粗青色ラテックス標識第一抗体を１％
ＢＳＡおよび０．８５％塩化ナトリウムを含有する10ｍ
Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ7.4）１ｍｌに再分散し、その
懸濁液を遠心分離（５０００×Ｇ、３０分間）するとい
う操作を３回繰り返した。このように処理された青色ラ
テックス標識第一抗体を１％ＢＳＡおよび０．８５％塩
化ナトリウムを含有する10ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ7.
4）２０ｍｌに分散せしめて、固形物として約0.05％の
青色ラテックス標識第一抗体溶液を得た。

【００３２】実施例２（ヒトＣＲＰ測定用クロマト法テ
ストストリップの作成） （１）金コロイドまたは青色ラテックス標識第一抗体−
ヒトＣＲＰ複合体の捕捉部位 幅5ｍｍ、長さ36ｍｍの細長い帯状のニトロセルロース
膜をクロマトグラフ媒体のクロマト展開用膜担体として
用意した。抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体とは
ヒトＣＲＰとの免疫的結合部位を異にする抗ヒトＣＲＰ
マウス単クローン第二抗体を用意し、該第二抗体3.0ｍ
ｇ/ｍｌが含有されてなる抗体溶液0.5μｌを、このクロ
マト展開用膜担体におけるクロマト展開開始点とは逆方
向の末端から7.5ｍｍの位置にスポット状に塗布して、
これを室温で乾燥し、金コロイドまたは青色ラテックス
標識第一抗体−ヒトＣＲＰ複合体の捕捉部位とした。

【００３３】（２）金コロイドまたは青色ラテックス標
識第一抗体含浸部材 5ｍｍ×15ｍｍの帯状のガラス繊維不織布に、実施例１
で得られた金コロイド標識第一抗体溶液37.5μｌを含浸
せしめ、これを室温で乾燥させて金コロイド標識第一抗
体含浸部材とした。また、同様の帯状のガラス繊維不織
布に、実施例１で得られた青色ラテックス標識第一抗体
溶液37.5μｌを含浸せしめ、これを室温で乾燥させて青
色ラテックス標識第一抗体含浸部材とした。

【００３４】（３）血球捕捉膜部材 イオン交換セルロースペーパー（品名GF／CM３0、ワッ
トマンジャパン株式会社の商品）を、血球捕捉膜部材と
して用意した。このセルロースペーパーは、カルボキシ
メチルセルロース（ＣＭＣ）からなる薄手濾紙（厚さ0.
4ｍｍ）であり、カルボキシルメチル官能基の弱酸性陽
イオン交換能により抗凝固血液中の血球を完全に捕捉し
て、血漿成分のみを通過させると考えられる。

【００３５】（４）クロマト法テストストリップの作成 上記クロマト展開用膜担体、上記標識第一抗体含浸部材
及び上記血球捕捉膜部材の他に、試料添加用部材として
綿布と、吸収用部材として濾紙を用意した。そして、こ
れらの部材を用いて、図１を参照して上述したクロマト
法テストストリップを作成した。

【００３６】実施例３（被検体におけるヒトＣＲＰの半
定量的検出） （１）クロマト展開された各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理
食塩水溶液および生理食塩水で4倍希釈された各濃度ｒ
ヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液のクロマトス
トリップ捕捉部位での呈色度合いの肉眼判定 (1-1)各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶液の調製 既知濃度のｒ（リコンビナント）ヒトＣＲＰ（オリエン
タル酵母工業株式会社の商品）を生理食塩水で希釈し
て、それぞれ500ng／ml、1000 ng／ml、2000 ng／ml、4
000 ng／ml、8000 ng／ml、16000 ng／mlおよび32000 n
g／mlとした。さらに、この各ｒヒトＣＲＰ含有生理食
塩水溶液を生理食塩水でそれぞれ4倍希釈して、125 ng
／ml、250 ng／ml、500 ng／ml、1000 ng／ml、2000 ng
／ml、4000ng／mlおよび8000 ng／mlのｒヒトＣＲＰ含
有生理食塩水溶液を得た。

【００３７】(1-2)生理食塩水で4倍希釈された各濃度ｒ
ヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液の調製 血液1ｍｌ当たりヘパリンナトリウム（片山化学工業株
式会社の商品）20Ｕが添加されたヘパリン添加正常ヒト
血液（血液1ｍｌ中にＣＲＰ30ｎｇ含有）に上記のｒヒ
トＣＲＰを添加溶解し、ｒヒトＣＲＰの濃度がそれぞれ
500 ng／ml、1000 ng／ml、2000 ng／ml、4000 ng／m
l、8000 ng／ml、16000 ng／ml、および32000 ng／mlに
なるように調製した。さらに、この各ｒヒトＣＲＰ含有
ヘパリン添加正常ヒト血液を生理食塩水でそれぞれ4倍
希釈して、各生理食塩水で4倍希釈されたｒヒトＣＲＰ
含有ヘパリン添加正常ヒト血液を得た。

【００３８】(1-3)ヒトＣＲＰ測定用クロマト法テスト
ストリップによる各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶
液および生理食塩水で4倍希釈された各濃度ｒヒトＣＲ
Ｐ含有ヘパリン添加正常ヒト血液のクロマト展開 実施例２で得られた金コロイド標識第一抗体含浸部材を
有するクロマト法テストストリップの試料添加用部材
に、マイクロピペットで各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食
塩水溶液および生理食塩水で4倍希釈された各濃度ｒヒ
トＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液をそれぞれ150
μｌずつ添加してクロマト展開する。クロマト展開がそ
れぞれ15分間行われた各クロマト法テストストリップの
ヒトＣＲＰ第二抗体が含浸せしめられている捕捉部位で
捕捉された金コロイド標識第一抗体−ｒヒトＣＲＰ複合
体の捕捉量に比例して増減する赤紫色の呈色度合いを肉
眼で、−（着色なし）、±（微弱な着色）、＋（明確な
着色）、＋＋（著明な着色）、＋＋＋（強力な着色）の
５段階に区分して判定した。その結果を表１に示した。
クロマト展開後の捕捉部位における各濃度ｒヒトＣＲＰ
含有生理食塩水溶液および生理食塩水で４倍希釈された
各濃度ｒヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液の赤
紫色呈色度合いは、ともにヒトＣＲＰ含有量の増減に比
例し、かつ前者と後者におけるヒトＣＲＰ濃度が同じで
あれば両者の呈色度合いは全く同じであった。したがっ
て、本発明はヘパリン添加血液を血漿とすることなく、
そのままクロマト法テストストリップにチャージしてク
ロマト展開し、該血液のおおよそのＣＲＰ含量を知るこ
とができるため、ベッドサイドおよび診療室における臨
床医によるＣＲＰの半定量的検出に有用であることが示
された。

【００３９】

【表１】

【００４０】また、実施例２で得られた青色ラテックス
標識第一抗体含浸部材を有するクロマト法テストストリ
ップを用いて、上記の各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩
水溶液および生理食塩水で４倍希釈された各濃度ｒヒト
ＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液について全く同様
の操作を行ってクロマト展開したとき、捕捉部位におけ
る青色の呈色度合いの肉眼判定は、上記と全く同様の結
果となった。

【００４１】（２）病院患者ヒト血液のＣＲＰの半定量
的検出 (2-1)生理食塩水４倍希釈患者血漿におけるヒトＣＲＰ
濃度の定量 血液１ｍｌ当りヘパリンナトリウム20Ｕが添加された１
０人の病院患者ヒト血液を生理食塩水でそれぞれ４倍希
釈して生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加患者血液を調製
した。この各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加患者血液
の半量をそれぞれ遠心分離（１５００×Ｇ、３０分間）
し、その上清液からそれぞれの生理食塩水４倍希釈患者
血漿を得た。この各生理食塩水４倍希釈患者血漿１０μ
ｌにヒトＣＲＰ測定試薬エルピアエースＣＲＰ−Ｈ（株
式会社ヤトロンの商品名）の構成試薬の１つである抗ヒ
トＣＲＰ抗体標識ラテックス懸濁液４０μｌをそれぞれ
添加した。このラテックス懸濁液と生理食塩水４倍希釈
患者血漿のヒトＣＲＰとの結合反応によって生じたラテ
ックス凝集塊の形成度合いを全自動免疫測定装置ＬＰＩ
Ａ−１００（三菱化成工業株式会社の商品）により測定
した。さらに、この測定値を用いて、予め作成したエル
ピアエースＣＲＰ−ＨのＣＲＰ標準品溶液による標準線
からこれらの各生理食塩水４倍希釈患者血漿のヒトＣＲ
Ｐ濃度をそれぞれ求めた。

【００４２】(2-2)ヒトＣＲＰ測定用クロマト法テスト
ストリップによる生理食塩水４倍希釈のヘパリン添加患
者血液のクロマト展開 実施例２で得られた金コロイド標識第一抗体含浸部材を
有するクロマト法テストストリップの試料添加用部材に
マイクロピペットで上記残りの各半量の生理食塩水４倍
希釈のヘパリン添加患者血液をそれぞれ１５０μｌ添加
してクロマト展開した。クロマト展開がそれぞれ１５分
間行われた各クロマト法テストストリップの抗ヒトＣＲ
Ｐマウス単クローン第二抗体が含浸せしめられている捕
捉部位で捕捉された金コロイド標識第一抗体−ヒトＣＲ
Ｐ複合体の捕捉量に比例して増減する赤紫色の呈色度合
いを肉眼で、−（着色なし）、±（微弱な着色）、＋
（明確な着色）、＋＋（著明な着色）、＋＋＋（強力な
着色）の５段階に区分して判定した。その結果を表２に
示した。

【００４３】

【表２】

【００４４】また、実施例２で得られた青色ラテックス
標識第一抗体含浸部材を有するクロマト法テストストリ
ップを用いて、この生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加患
者血液について、金コロイド標識第一抗体含浸部材を有
するクロマト法テストストリップの場合と全く同様の操
作を行ってクロマト展開したとき、捕捉部位における青
色の呈色度合いの肉眼判定は、上記と全く同様の結果と
なった。

【００４５】本発明による各生理食塩水４倍希釈ヘパリ
ン添加患者血液のヒトＣＲＰ半定量的検出結果と、これ
らの各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加患者血液から得
られたそれぞれの生理食塩水４倍希釈患者血漿のヒトＣ
ＲＰの定量試薬であるエルピアエースＣＲＰ−Ｈによる
ヒトＣＲＰ測定値とがよく相関するので、本発明は抗凝
固剤添加血液から血球を分離することなく、直ちにヒト
ＣＲＰを測定することが可能であり、ベッドサイドなど
での即時診断に用いることができることが示された。

【００４６】実施例４（金コロイド標識抗ビテロジェニ
ン抗体ＩｇＧ溶液の作成） （１）ビテロジェニンの精製 卵黄形成期の雌コイ血液7ｍｌを４℃にて１時間静置
後、遠心分離（５０００×Ｇ、１５分間）し、血清2.5
ｍｌを得た。この血清2.5ｍｌを氷冷した蒸留脱イオン
水25ｍｌに添加して混合し、０℃にて３０分間静置して
沈殿を形成せしめた後、遠心分離（２５００×Ｇ、１５
分間、４℃）した。得られた沈殿を25ｍｌの水に再懸濁
して遠心分離して得たペレットを、0. 5ｍｌの２％塩化
ナトリウム及び0.1％アジ化ナトリウムを含有する20ｍ
Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.0）に溶解した。この溶液
0.5ｍｌを上記トリス塩酸緩衝液で平衡化したＳｅｐｈ
ａｒｏｓｅ６Ｂカラム（ファルマシアバイオテク株式会
社の商品、１.６×６０ｃｍ）にアプライした。

【００４７】クロマトグラフィー展開流速を１５ｍｌ／
ｈｒに調節し、各１．９ｍｌのクロマトグラフィー展開
フラクションを集めた。各フラクションのタンパク濃度
を280ｎｍで測定し、メインピーク画分を回収すること
により、精製されたビテロジェニン液約１０ｍｌを得
た。このビテロジェニン液約１０ｍｌをメンブレンフィ
ルター（ポアサイズ100ＫＤａ）からなるＡｍｉｃｏｎ
ｃｅｌｌ（アミコン株式会社の商品名）で濃縮した後
に生理食塩水で透析し、約５ｍｇ／ｍｌの精製ビテロジ
ェニン液を得た。

【００４８】（２）抗ビテロジェニンウサギ抗血清の作
成 上記の精製ビテロジェニン液を生理食塩水で希釈して1
ｍｇ／ｍｌ溶液とし、この溶液0.1ｍｌに等容量のフロ
イント完全アジュバンドもしくはフロイント不完全アジ
ュバンドを丹念に混合してエマルジョンとなし、フロイ
ント完全アジュバンドエマルジョンまたはフロイント不
完全アジュバンドエマルジョンを調製した。この何れか
のアジュバンドエマルジョンをウサギ（日本白色、雌）
背部皮下に数箇所分散投与した。何れの場合も投与は２
週間間隔で行い、初回及び２回目の投与はフロイント完
全アジュバンドエマルジョン各0.2ｍｌ、３回目及び最
後の４回目投与はフロイント不完全アジュバンドエマル
ジョン各0.2ｍｌを投与した。初回のフロイント完全ア
ジュバンドエマルジョン投与から数えて7週間目に全採
血を行い、血清約50ｍｌを得、これを抗ビテロジェニン
ウサギ抗血清とした。

【００４９】（３）抗ビテロジェニンウサギ抗血清のＩ
ｇＧ精製 上記の抗ビテロジェニンウサギ抗血清10ｍｌに硫安濃度
が40％になるように飽和硫安溶液を加えて混合した後遠
心分離（５０００×Ｇ、１５分間）し、グロブリン粗分
画の沈殿を得た。この沈殿を0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
7.4）7ｍｌに溶解し、同じ緩衝液に対して透析（４℃、
１晩）して透析液７ｍｌを得た。この透析液をＩｇＧ精
製用遺伝子操作プロテインＡ吸着セファロースカラムで
あるｒＰｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａ
ｓｔ Ｆｌｏｗ（ファルマシアバイオテク株式会社の商
品名）にアプライし、ＩｇＧ精製を行った。すなわち、
ｒＰｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ
ＦｌｏｗへのＩｇＧの吸着には20ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ7.4）を用い、ｒＰｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈ
ａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ ＦｌｏｗからのＩｇＧの溶出展
開は0.1Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ3.0）を用い、その展開
速度を30ｍｌ／ｈｒ、各フラクションを1ｍｌとした。
溶出された各フラクション液には、直ちに1Ｍトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ8.0）を一滴添加し、ｐＨを中性域に
調整した。各フラクション液の280ｎｍによる吸光度を
測定し、吸光度0.1ＡＢＳ以上のフラクション液を回収
し、0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ7.4）に対して透析（１
晩、４℃）を行い精製ＩｇＧ溶液を得、これを精製抗ビ
テロジェニンウサギ抗体ＩｇＧ溶液（18ｍｌ、蛋白濃度
5ｍｇ／ｍｌ）とした。

【００５０】（４）金コロイド標識抗ビテロジェニン抗
体ＩｇＧ溶液の調製 上記の精製抗ビテロジェニンウサギ抗体ＩｇＧ溶液0.2
μｌと実施例１の金コロイド溶液1ｍｌとを混合して、
室温で２分間静置して、この抗体ＩｇＧのことごとくを
金コロイド粒子表面に結合させた後、金コロイド溶液に
おける最終濃度が１％となるように10％ＢＳＡ水溶液を
加えてこの金コロイド粒子の残余の表面をことごとくＢ
ＳＡでブロックして、金コロイド標識抗ビテロジェニン
抗体ＩｇＧ溶液を調製した。この溶液を後遠心分離（５
６００×Ｇ、３０分間）し、遠心分離の沈殿物として金
コロイド標識抗ビテロジェニン抗体ＩｇＧを得た。

【００５１】この金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体
ＩｇＧを10％サッカロース・1％ＢＳＡ・0.5％トリトン
（Ｔｒｉｔｏｎ）−Ｘ１００を含有する50ｍＭトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ7.4）に懸濁して、金コロイド標識抗ビ
テロジェニン抗体ＩｇＧ溶液を得た。

【００５２】実施例５（ビテロジェニン測定用クロマト
法テストストリップの作成） 実施例２のヒトＣＲＰ測定用クロマト法テストストリッ
プの作成法に準拠して、ビテロジェニン測定用クロマト
法テストストリップを作成した。すなわち、ヒトＣＲＰ
測定用クロマト法テストストリップにおける金コロイド
または青色ラテックス標識第一抗体及び抗ヒトＣＲＰマ
ウス単クローン第二抗体の代わりに精製抗ビテロジェニ
ンウサギ抗体ＩｇＧ溶液を使用する以外はヒトＣＲＰ測
定用クロマト法テストストリップの作成と全く同様にし
てビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップを
作成した。

【００５３】実施例６（魚類血液におけるビテロジェニ
ンの半定量的検出） （１）クロマト展開された各濃度ビテロジェニン含有生
理食塩水溶液及び生理食塩水で４倍希釈された各濃度ビ
テロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液のクロマ
トストリップ捕捉部位での呈色度合いの肉眼判定 (1-1)各濃度ビテロジェニン含有生理食塩水溶液の調製 実施例４の精製ビテロジェニン液を生理食塩水で希釈し
て、それぞれ200ng／ml、400ng／ml、800 ng／ml、1600
ng／ml、3200 ng／ml、6400 ng／mlおよび12800 ng／m
lとした。さらに、この各ビテロジェニン含有生理食塩
水溶液を生理食塩水でそれぞれ4倍希釈して、ビテロジ
ェニンが50 ng／ml、100 ng／ml、200ng／ml、400ng／m
l、800 ng／ml、1600ng／mlおよび3200 ng／mlである各
濃度ビテロジェニン含有生理食塩水溶液を得た。

【００５４】(1-2)生理食塩水で４倍希釈された各濃度
ビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液の調製 血液1ｍｌ当たりヘパリンナトリウム20Ｕが添加された
ヘパリン添加正常雄コイ血液（血液中にビテロジェニン
は含有されていない）に精製ビテロジェニン液を添加混
合し、ビテロジェニンの濃度がそれぞれ200 ng／ml、40
0 ng／ml、800ng／ml、1600 ng／ml、3200 ng／ml、640
0 ng／mlおよび12800 ng／mlになるように調製した。さ
らに、この各ビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コ
イ血液を生理食塩水でそれぞれ4倍希釈して、ビテロジ
ェニンが50 ng／ml、100 ng／ml、200ng／ml、400ng／m
l、800 ng／ml、1600ng／mlおよび3200 ng／mlである各
濃度ビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液を
得た。

【００５５】(1-3)ビテロジェニン測定用クロマト法テ
ストストリップによる各濃度ビテロジェニン含有生理食
塩水溶液および生理食塩水で4倍希釈されたビテロジェ
ニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液のクロマト展開 実施例５で得られたビテロジェニン測定用クロマト法テ
ストストリップの試料添加用部材に、マイクロピペット
で各濃度ビテロジェニン含有生理食塩水溶液または生理
食塩水で4倍希釈された各濃度ビテロジェニン含有ヘパ
リン添加正常雄コイ血液をそれぞれ150μｌずつ添加し
てクロマト展開した。クロマト展開がそれぞれ15分間行
われた各クロマト法テストストリップの捕捉部位で捕捉
された金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体−ビテロジ
ェニン複合体の捕捉量に比例して増減する赤紫色の呈色
度合いを肉眼で、−（着色なし）、±（微弱な着色）、
＋（明確な着色）、＋＋（著明な着色）、＋＋＋（強力
な着色）の５段階に区分して判定した。その結果を表3
に示した。

【００５６】クロマト展開後の捕捉部位における各濃度
のビテロジェニン含有生理食塩水溶液および生理食塩水
で４倍希釈された各濃度のビテロジェニン含有ヘパリン
添加正常雄コイ血液の赤紫色呈色度合いは、ともにビテ
ロジェニン含有量の増減に比例し、また前者と後者にお
けるビテロジェニン濃度が同じ場合に両者の呈色度合い
は全く同じであった。したがって、本発明はヘパリン添
加血液を血漿とすることなく、そのままクロマト法テス
トストリップにチャージしてクロマト展開し、該血液の
おおよそのビテロジェニン含量を知ることができるた
め、水域環境ホルモンの魚類における影響を判断するフ
ィールドスクリーニング用キットとして使用でき、ビテ
ロジェニンの半定量的検出に有用である。

【００５７】

【表３】

【００５８】（２）異常雄コイ血液のビテロジェニンの
半定量的検出 (2-1)コイビテロジェニンＥＬＩＳＡキットによる生理
食塩水４倍希釈異常雄コイ血漿におけるビテロジェニン
濃度の定量 血液１ｍｌ当たりヘパリンナトリウム20Ｕが添加された
１０例の異常雄コイ血液（ビテロジェニン１００ｎｇ／
ｍｌ以上）を生理食塩水でそれぞれ４倍希釈して、生理
食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血液を調整し
た。この各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ
血液の半量をそれぞれ遠心分離（１５００×Ｇ、３０分
間）し、その上清液からそれぞれの生理食塩水４倍希釈
ヘパリン添加異常雄コイ血漿を得た。

【００５９】この各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異
常雄コイ血漿のそれぞれ１００μｌずつを、コイビテロ
ジェニンＥＬＩＳＡキット（株式会社クマモト抗体研究
所の商品）の抗コイビテロジェニン抗体固定化マイクロ
プレートの各ウェルに加え、室温で２時間インキュベー
ト後、コイビテロジェニンＥＬＩＳＡキットの構成試薬
の一つである洗浄液を用いて各ウェル洗浄した。次に、
該キットの構成試薬の一つであるＨＲＰ（ホースラディ
ッシュペルオキシダーゼ）標識抗コイビテロジェニン抗
体溶液を各ウェルに１００μｌずつ加え室温で１時間イ
ンキュベート後、上記の洗浄液を用いて洗浄した。さら
に、発色用基質であるＯＰＤ（オルトフェニレンジアミ
ン）溶液を各ウェルに１００μｌずつ加え室温で１５分
間発色反応を行い、492ｎｍの吸光度をマイクロプレー
トリーダーによって測定した。

【００６０】この操作により、ＨＲＰ標識抗コイビテロ
ジェニン抗体と生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄
コイ血漿のビテロジェニンとの免疫複合体とマイクロプ
レートに固定化された抗コイビテロジェニン抗体との結
合反応により生じたサンドイッチ型免疫複合体の形成度
合いを、ＨＲＰにより触媒される発色反応により測定し
た。さらに、この測定値を用いて予め作成したコイビテ
ロジェニンＥＬＩＳＡキットの構成試薬の一つであるビ
テロジェニン標準品溶液による標準線からこれらの各生
理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血漿のビテロ
ジェニン濃度をそれぞれ求めた。

【００６１】(2-2)ビテロジェニン測定用クロマト法テ
ストストリップによる生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加
異常雄コイ血液のクロマト展開 ビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップの試
料添加用部材に、マイクロピペットで上記残りの各半量
の生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血液をそ
れぞれ150μｌ添加してクロマト展開した。クロマト展
開がそれぞれ15分間行われた各クロマト法テストストリ
ップの抗ビテロジェニン抗体が含浸せしめられている捕
捉部位で捕捉された金コロイド標識抗ビテロジェニン抗
体−ビテロジェニン複合体の捕捉量に比例して増減する
赤紫色の呈色度合いを肉眼で上記の５段階に区分して判
定した。その結果を表４に示した。

【００６２】

【表４】

【００６３】本発明のビテロジェニン測定用クロマト法
テストストリップによる各生理食塩水４倍希釈ヘパリン
添加異常雄コイ血液におけるビテロジェニンの半定量的
検出結果と、これらの各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添
加異常雄コイ血液から得られたそれぞれの生理食塩水４
倍希釈異常雄コイ血漿のビテロジェニンの定量試薬であ
るコイビテロジェニンＥＬＩＳＡキットによるビテロジ
ェニン測定値とがよく相関するので、本発明は抗凝固剤
添加血液から血球を分離することなく、直ちにビテロジ
ェニンを測定することが可能であり、フィールドでの即
時測定に用いることができる。

【００６４】

【発明の効果】本発明によれば、全血をチャージするだ
けで、血液中の生体高分子及びその他の抗原性を有する
成分を検出できるので、簡便かつ短時間で、しかも、高
い精度で検査対象物質の存否を判定でき、また、採取さ
れた血液中に存在する検査対象物質の量も半定量するこ
とが可能である。したがって、フィールド調査の現場や
ベッドサイドおよび診療室での使用に好適である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ａは本発明によるクロマト法テストストリップ
の平面図、ｂはａで示されたクロマト法テストストリッ
プの縦断面図。

【図２】ａは図１で示されたクロマト法テストストリッ
プを収納するためのケースを示す平面図、ｂはａで示さ
れたケースの縦断面図。

【図３】ａは従来のクロマト法テストストリップの平面
図、ｂはａで示されたクロマト法テストストリップの縦
断面図。

【符号の説明】

１ 粘着シート ２ 標識抗体含浸部材 ３ クロマト展開用膜担体 ３１ 捕捉部位 ４ 吸収用部材 ５ 試料添加用部材 ６ ケース ６１ 容器本体 ６２ 蓋体 ６２１ 試料注入口（クロマト展開開始部位） ６２２ 判定孔 ７ 血球捕捉膜部材

フロントページの続き (72)発明者 原 彰彦 北海道函館市港町３−１−１ 北海道大学 水産学部内 (72)発明者 難波 靖治 静岡県沼津市大平1126番地の９ 株式会社 ビーエル内 (72)発明者 伊藤 敬三 北海道石狩市新港西１丁目777番地13号 株式会社サイエンスタナカ内 (72)発明者 佐々木 達 北海道札幌市厚別区下野幌テクノパーク１ 丁目２番14号 株式会社エコニクス内

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 検査対象物質に対する呈色標識第一抗体
   含浸部材と前記検査対象物質に対する第二抗体とクロマ
   ト展開用膜担体と血球捕捉膜部材とを少なくとも用意
   し、前記呈色標識第一抗体含浸部材を前記担体の一端部
   に配置するとともにこの呈色標識第一抗体含浸部材の上
   面に前記血球捕捉膜部材としてカルボキシメチルセルロ
   ース膜を積層し、前記担体の前記一端部から離隔した位
   置に前記第二抗体を固定して前記検査対象物質の捕捉部
   位を設け、血液を灌注して前記血球捕捉膜部材を通過さ
   せることにより、これを通過した血液成分と前記呈色標
   識第一抗体との混合物を前記担体上に展開させるととも
   に、前記血液成分中の検査対象物質と前記呈色標識第一
   抗体との複合体を前記第二抗体に捕捉させることにより
   前記血液中の検査対象物質を検出することを特徴とする
   血中抗原検出方法。
2. 【請求項２】 前記呈色標識第一抗体含浸部材は含浸部
   材に前記検査対象物質に対する呈色標識第一抗体を含浸
   せしめてなり、この呈色標識第一抗体含浸部材は少なく
   ともその一端部にて前記担体の前記一端部の上に配置さ
   れてなる請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記血液には予め血液凝固阻止剤が添加
   される請求項１または２に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記血液は予め希釈されている請求項１
   〜３の何れか１項に記載の方法。
5. 【請求項５】 クロマト展開用膜担体と、検査対象物質
   に対する呈色標識第一抗体含浸部材と、前記検査対象物
   質に対する第二抗体と、血球捕捉膜部材とを少なくとも
   有してなる血中抗原検出装置において、前記呈色標識第
   一抗体含浸部材は前記担体の一端部に配置され、前記第
   二抗体は前記担体の前記一端部から離隔した位置に固定
   されて前記検査対象物質の捕捉部位を形成し、前記血球
   捕捉膜部材は前記呈色標識第一抗体含浸部材の上面に積
   層されたカルボキシメチルセルロース膜からなることを
   特徴とする血中抗原検出装置。
6. 【請求項６】 前記呈色標識第一抗体含浸部材は含浸部
   材に前記検査対象物質に対する呈色標識第一抗体を含浸
   せしめてなり、この呈色標識第一抗体含浸部材は少なく
   ともその一端部にて前記担体の前記一端部の上に配置さ
   れてなる請求項５に記載の装置。
7. 【請求項７】 さらに、前記血球捕捉膜部材の上面に配
   置された試料添加用部材を有する請求項６に記載の装
   置。
8. 【請求項８】 さらに、前記担体の下流側端部の領域に
   載置された吸収用部材を有する請求項５〜７の何れか１
   項に記載の装置。
9. 【請求項９】 クロマト法テストストリップの形態にさ
   れた請求項７に記載の装置。
10. 【請求項１０】 前記クロマト法テストストリップは、
    前記試料添加用部材及び前記捕捉部位のそれぞれの上方
    で開口するケース内に収容されている請求項９に記載の
    装置。
11. 【請求項１１】 前記クロマト法テストストリップは、
    希釈用の生理食塩水及び／又は血液凝固阻止剤と組み合
    わされたキット形態である請求項９または１０に記載の
    装置。