JPH04351962A - 特異結合分析方法および特異結合分析装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、試料中の分析対象物を
、試料の希釈を行なうことなく、広範囲の測定感度の中
から所望の測定感度を選んで測定することが可能な分析
方法、および、該方法を行なうのに好適な分析装置に関
する。

【０００２】

【従来の技術】特異結合反応の一つとして、抗原とその
抗原に対する抗体との免疫反応があげられる。この免疫
反応は、生体内の微量成分を分析対象物とする測定に幅
広く応用されている。具体的には、定量的検出方法とし
て、ラジオイムノアッセイ法、蛍光免疫測定法、化学発
光免疫測定法および酵素免疫測定法等が知られており、
定性的検出方法としては、赤血球凝集法またはラテック
ス凝集法等が知られている。そして、これらの方法は、
各種疾患の診断や治療効果の判定等のために、臨床面で
大いに活用されている。

【０００３】このような免疫測定法の分野は、その発展
が目覚ましく、近年では、様々な簡易測定法やそれに使
用されるキットが発表されている。一例をあげると、特
開平０１−２９９４６４号公報、特表昭６１−５０２２
１４号公報等がある。そして、免疫測定法の医療現場で
の実施の観点からは、測定機器を用いずに、目視のみに
よって、試料中の分析対象物を定量または半定量できる
方法やキットが好ましい。

【０００４】ところで、従来における免疫反応の原理を
応用した生体内微量成分の検出においては、前記した簡
易測定法の場合も含め、分析対象物が微量成分であると
いう事実から当然のことであるが、その感度上昇に専ら
力が注がれていた。従って、分析対象物を含有する試料
は、特に必要がある場合以外は、そのままあるいは濃縮
されてから使用されていた。なお、特に必要がある場合
とは、試料の量が少なすぎる場合等であり、その場合は
、試料の希釈が行なわれていた。

【０００５】しかし、検査において、試料の濃縮や希釈
の工程があると、試料が例えばＨＢウイルス等を含む場
合等では、検査を行なう医療従事者等の健康を害するお
それを増幅させるので、このような工程は省略できるこ
とが好ましい。

【０００６】また、試料の濃縮や希釈工程を省いて測定
感度の調整を行なうために、免疫測定キットを構成する
不溶化物質量（濃度）、標識物質量（濃度）、あるいは
それらの分析対象物に対する結合親和力を変えるという
技術もある。一例をあげると、特開昭６０−１９２２６
１号公報（半定量）、特開平０１−２４５１５７号公報
（半定量）、特表平０１−５０３１７４号公報（定性）
、特開平０１−２４４３７０号公報（定性、定量）等が
ある。

【０００７】しかし、このような方法で測定感度を調整
すると、下記のような問題が生じる。これについて、図
１０に基づいて説明する。図１０（Ｉ）は、サンドイッ
チ法の原理に基づく免疫測定法を行なった際の、分析対
象物量（または濃度）と信号強度との関係を模式的に示
した図である。同図中の軌跡１〜３は、互いに標識物質
量のみが異なる測定系を用いた場合を示し、測定感度は
、高い方から順に、軌跡１、軌跡２、軌跡３の順である
。

【０００８】この測定系において、信号強度Ｘを境界と
して、分析対象物有（信号強度≧Ｘ）あるいは分析対象
物無（信号強度＜Ｘ）の定性的な判定を行なうとする。 その場合、軌跡１を描くように測定感度調整を行なった
キットでは、分析対象物量Ｙ１を境界として、分析対象
物量がＹ１以上では分析対象物有、Ｙ１未満では分析対
象物無の判定がなされる。また、軌跡２を描くように測
定感度調整を行なったキットでは、分析対象物量Ｙ２を
境界として、さらに、軌跡３を描くように測定感度調整
を行なったキットでは、分析対象物量Ｙ３を境界として
、分析対象物の有無の判定がなされる。

【０００９】ここで、測定感度の低下（境界となる分析
対象物量の増加）を行なうということは、同図において
、軌跡１ではなく、軌跡２または軌跡３を描くように測
定感度調整を行なうことである。その場合、同図から明
らかなように、試料中の分析対象物量を示す信号の最大
強度の低下は免れ得ず、それが、結果の判定に不正確さ
を招く要因となる。さらに、プロゾーン現象の出現域が
、分析対象物の低濃度側にシフトするという問題もある
。

【００１０】一方、競合法では、サンドイッチ法とは逆
に、分析対象物量（または濃度）の増大と共に信号強度
が低下する。この競合法において、測定感度の低下のた
めの一手段として、分析対象物と競合する標識物質量を
増大させる方法が挙げられる。これを、図１０（ＩＩＩ
）　に模式的に示した。なお、同図において、測定感度
は、高い方から順に、軌跡１、軌跡２、軌跡３となる。

【００１１】同図から明らかなように、この場合は、測
定感度の低下を行なおうとすると、信号の最大強度の増
大が免れ得ず、それが判定を不正確とする。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】前記の如く、免疫測定
法の分野では、様々な簡易測定法やキットが開発されて
いる。しかし、試料中の分析対象物量の変動にあわせて
感度調整を行なっても、測定される信号の最大強度の低
下がなく、プロゾーン現象の出現域の変動がなく、かつ
、このような測定法の開始前やキットに試料を供する前
に、試料の希釈の工程を設けなくても、結果として試料
が希釈されて用いられたと同様の検出結果を示す簡易測
定法や、そのような簡易測定法の実施に好適な、試料を
添加するだけで試料中の分析対象物の定性あるいは定量
的測定を行なえるキットは、未だ知られていない。

【００１３】本発明は、このような事実に鑑みてなされ
たものであり、特に半定量を高感度で行なうに際して有
用な分析方法および分析装置であって、試料をそのまま
用いても、結果として、試料が希釈されて用いられたと
同様の検出結果を得ることができ、かつ、信号の最大強
度の変動を招かずに、広範囲の測定感度の中から所望の
測定感度を設定できる分析方法と、その方法を行なうの
に好適な分析装置の提供を目的とする。

【００１４】

【課題を解決するための手段】本発明第一の態様は、試
料中の分析対象物を定性または定量するに際し、測定系
に特定物質を存在させ、該特定物質の存在により、分析
対象物量の指標として測定される標識物質量を小さくす
ることを特徴とする特異結合分析方法であり、本発明第
二の態様は、試料中の分析対象物を定性または定量する
に際し、測定系に特定物質を存在させ、該特定物質の存
在により、分析対象物量の指標として測定される標識物
質量を大きくすることを特徴とする特異結合分析方法で
ある。

【００１５】また、本発明第三の態様は、本発明第一の
態様および第二の態様の特異結合分析方法を実施するた
めの、試料添加部（Ａ）、特異結合物質存在部（Ｂ）、
検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）を順次有するク
ロマトグラフ型の特異結合分析装置である。

【００１６】以下に、本発明を詳細に説明する。はじめ
に、この明細書中の用語を説明する。

【００１７】分析対象物とは、本発明の方法または装置
により、定性的あるいは定量的に検出される物質である
。具体的には、抗原あるいは抗体として機能する各種蛋
白質やペプチド、核酸、エフェクター分子、レセプター
分子、酵素、インヒビター、アビジン、ビオチン、糖鎖
を有する化合物、レクチン等が例示され、さらに具体的
には、ＨＢｓ抗原、抗ＨＢｓ抗体、エストリオール（Ｅ
３　）、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、ヒト絨
毛性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）、黄体形成ホルモン（
ＬＨ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ２ミクログロ
ブリン（β２　ｍ）、フェリチン、ヒト胎盤ラクトゲン
（ｈＰＬ）等が例示される。

【００１８】また、分析対象物類縁物質とは、ある物質
との結合反応において、分析対象物と同様の挙動を示す
物質をいう。具体的には、前記分析対象物の各種アナロ
グが例示される。

【００１９】試料とは、分析対象物が含まれるかまたは
含まれると予想される液体のことであり、具体的には、
尿、血漿、血清、全血、唾液、涙液、髄液等が例示され
るが、固形またはゲル状物を緩衝液等の液体に溶解させ
たものであってもよい。

【００２０】特異結合物質とは、ある特定の構造を有す
る物質に特異的に結合する物質である。本明細書におい
ては、前記分析対象物やその類縁物質に対する特異結合
物質Ｉ、および、該特異結合物質Ｉに対する特異結合物
質ＩＩについて言及している。

【００２１】ある特定の構造を有する物質とそれに対す
る特異結合物質Ｉとの組合せとしては、抗原とそれに対
する抗体、相補的核酸配列、エフェクター分子とレセプ
ター分子、酵素とインヒビター、アビジンとビオチン、
糖鎖を有する化合物とレクチン等が例示される。また、
特異結合物質Ｉと特異結合物質ＩＩとの組合せとしては
、抗体とそれに対する抗体等が例示される。

【００２２】干渉するとは、例えば分析対象物と特異結
合物質Ｉのような一組の結合反応を立体障害や競合的結
合等の何らかの方法で阻害することをいう。

【００２３】標識物とは、試料中の分析対象物の有無あ
るいは濃度を、直接的または間接的に示す物質である。 具体的には、直接的に示すものとして、各種染料や各種
顔料等の色素類、　１２５Ｉ、３２Ｐ、　３Ｈ、１４Ｃ
等の放射性物質、ルミノール誘導体、アクリジニウムエ
ステル等の化学発光物質、ホタルルシフェリン、ウミホ
タルルシフェリン等の生物発光物質、フルオレセイン、
ローダミン等の蛍光物質、着色ラテックス、金コロイド
等が例示され、間接的に示すものとして、各種の酵素類
が例示される。

【００２４】なお、標識物として酵素を選択した場合に
は、酵素の働きによって基質あるいはクロモーゲンを変
化させ、その変化の結果として得られる物質の色濃度、
発光強度、蛍光強度等を測定する。

【００２５】このような酵素と基質（およびクロモーゲ
ン）の組合せを例示すると、ホースラディッシュペルオ
キシターゼ−Ｈ２　Ｏ２　（３，３´，５，５´−テト
ラメチルベンジジン）、アルカリフォスファターゼ−５
−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルフォスフェート
、ガラクトシダーゼ−２−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガ
ラクトシド等の酵素と発色基質との組合せ、アルカリフ
ォスファターゼ−３−（２´−スピロアダマンテン）−
４−メトキシ−４−（３″−フォスフォリルオキシフェ
ニル−１，２−ジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、ホースラ
ディッシュペルオキシダーゼ−ルミノール、ルシフェラ
ーゼ−ルシフェリン等の酵素と発光基質との組合せ、ア
ルカリフォスファターゼ−ウンベリフェリルフォスフェ
ート、ホースラディッシュペルオキシダーゼ−ｐ−ハイ
ドロキシフェニルプロピオン酸等の酵素と蛍光基質との
組合せ等がある。

【００２６】信号強度とは、前記標識物が直接または間
接的に示す色濃度、放射能強度、発光強度、蛍光強度等
をいう。

【００２７】標識物質とは、前記標識物部分を有する物
質をいう。

【００２８】試料添加部とは、測定する試料を注入する
部位であり、特異結合物質存在部とは、前記特異結合物
質等が存在している部位である。

【００２９】検出部とは、分析対象物、分析対象物類縁
物質、特異結合物質等が不溶化されており、実際に、前
記標識物に由来する信号を測定する部位であり、検出部
存在部とは、検出部およびその周辺部である。なお、検
出部存在部＝検出部であってもよい。

【００３０】吸収部とは、装置に注入された試料等の液
体を吸収、保持する部位である。

【００３１】以上のように定義された用語により、本発
明第一の態様、第二の態様および第三の態様を順次説明
する。

【００３２】本発明第一の態様は、試料中の分析対象物
を定性または定量するに際し、測定系に特定物質を存在
させ、該特定物質の存在により、分析対象物量の指標と
して測定される標識物質量を小さくすることを特徴とす
る特異結合分析方法である。

【００３３】ここで、特定物質とは、試料中の分析対象
物の量もしくは濃度に対応する、測定される標識物質量
を制御するに寄与する物質を指し、測定系ごとに、適切
な物質が選択されるが、具体的には、分析対象物に対す
る特異結合物質、分析対象物類縁物質等が例示される。

【００３４】また、標識物質も、測定系ごとに適切な物
質が選択されるが、具体的には、分析対象物に対する特
異結合物質を標識してなる物質、分析対象物に対する特
異結合物質に結合する物質を標識してなる物質、分析対
象物を標識してなる物質、分析対象物類縁物質を標識し
てなる物質等が例示される。なお、「標識してなる」と
は、ある物質に標識物が直接または間接的に結合してい
る状態を指す。

【００３５】次に、図面に基づいて、本発明第一の態様
に相当する具体例を説明する。

【００３６】まず初めに、図１に基づいて説明する。図
１に示された例は、特定物質が、分析対象物（ａ）と特
異的に結合する特異結合物質（ｂ）であり、標識物質が
、分析対象物（ａ）と特異結合物質（ｂ）との結合に干
渉せずに分析対象物（ａ）と特異的に結合する特異結合
物質（ｃ）に標識物（ｄ）が結合してなる標識特異結合
物質（ｅ）である測定系である。

【００３７】そして、図１に示された例は、分析対象物
（ａ）を、特異結合物質（ｂ）および／または標識特異
結合物質（ｅ）と同時または順に結合反応させ、次いで
、前記分析対象物（ａ）と前記標識特異結合物質（ｅ）
との結合物質（ｆ）を、不溶化されている前記特異結合
物質（ｂ）、または、前記分析対象物（ａ）との結合に
際し、前記標識特異結合物質（ｅ）とは干渉しないが、
前記特異結合物質（ｂ）とは干渉する不溶化されている
特異結合物質（ｇ）と結合反応をさせて固定し、その後
、固定された前記結合物質（ｆ）中の標識物（ｄ）に由
来する信号を読みとるものである（以下、方法１という
）。

【００３８】なお、特異結合物質（ｂ）と特異結合物質
（ｇ）との関係は、分析対象物（ａ）との結合に関して
干渉しあう関係であり、例えば分析対象物（ａ）が抗原
として機能する物質である場合、同じ抗原決定部位に対
して特異的に結合する異なる種類の抗体同士、あるいは
、結合する抗原決定部位は異なるが、特異結合物質（ｂ
）が分析対象物（ａ）に結合すると、特異結合物質（ｇ
）は分析対象物（ａ）に結合できなくなる関係にある物
質同士等である。

【００３９】また、方法１を行なった場合の、この測定
系に関与する各物質の結合状態の典型例は、図１に示す
通りである。

【００４０】この方法１では、不溶化されていない特異
結合物質（ｂ）が結合した分析対象物（ａ）は、不溶化
されている特異結合物質（ｂ）または特異結合物質（ｇ
）に結合できない。そのために、不溶化されていない特
異結合物質（ｂ）が結合した分析対象物（ａ）に結合し
た標識特異結合物質（ｅ）は、測定系外に排除されるの
である。そして、この排除の程度（希釈の程度）は、主
に、不溶化されていない特異結合物質（ｂ）と、不溶化
されている特異結合物質（ｂ）または不溶化されている
特異結合物質（ｇ）との量比、および／または、それら
と分析対象物（ａ）との結合親和力によって制御される
。

【００４１】方法１では、標識特異結合物質（ｅ）と、
不溶化されている特異結合物質（ｂ）または不溶化され
ている特異結合物質（ｇ）の量を一定にした場合、不溶
化されていない特異結合物質（ｂ）の量を増加させるに
従い、測定系外に排除される標識特異結合物質（ｅ）量
が増加し、反応後に読みとる標識物（ｄ）由来の信号強
度が低下する。そして、試料を希釈することによって、
分析対象物（ａ）量を低下させて用いた場合の信号強度
と同レベルとすることができる。

【００４２】従って、試料をそのまま用いたにもかかわ
らず、希釈して用いた場合と同様の効果（希釈効果とい
う）が得られ、かつ、所望の測定感度に対して適切な信
号強度での測定が可能となる。

【００４３】また、不溶化物質として、特異結合物質（
ｇ）を選択した場合は、分析対象物（ａ）に対する、不
溶化されていない特異結合物質（ｂ）と不溶化されてい
る特異結合物質（ｇ）との結合親和力を調整することに
よっても、同様に、所望の適切な希釈効果を得ることが
できる。

【００４４】次に、図２に基づいて説明する。図２に示
された例は、分析対象物（ｈ）が、１種類の特異的結合
に係わる部位を複数有することが明らかである場合に実
施する方法であり、特定物質は、分析対象物（ｈ）と特
異的に結合する特異結合物質（ｉ）であり、標識物質は
、分析対象物（ｈ）と特異結合物質（ｉ）との結合に干
渉して分析対象物（ｈ）と特異的に結合する特異結合物
質（ｊ）に標識物（ｄ）が結合してなる標識特異結合物
質（ｋ）である測定系である。

【００４５】この測定系では、分析対象物（ｈ）を、該
分析対象物（ｈ）に特異的に結合する特異結合物質（ｉ
）、同じく該分析対象物（ｈ）に特異的に結合する特異
結合物質（ｊ）に標識物（ｄ）が結合したものである標
識特異結合物質（ｋ）、および、不溶化されている、同
じく該分析対象物（ｈ）に特異的に結合する特異結合物
質（ｌ）と、同時または順に結合させ、前記分析対象物
（ｈ）の少なくとも一部を固定し、その後、固定された
分析対象物（ｈ）に結合した標識特異結合物質（ｋ）中
の標識物（ｄ）に由来する信号を読みとるものである（
以下、方法２という）。

【００４６】なお、特異結合物質（ｉ）、標識特異結合
物質（ｋ）を構成している特異結合物質（ｊ）、不溶化
されている特異結合物質（ｌ）は、分析対象物（ｈ）の
１種類の特異結合に係わる部位への結合に際し、互いに
干渉する物質であれば、同じであっても異なるものであ
ってもよい。

【００４７】また、方法２を行なった場合の、この測定
系に関与する各物質の結合状態の典型例は、図２に示す
通りである。

【００４８】この方法２では、分析対象物（ｈ）の１種
類の特異的結合に係わる部位全てに特異結合物質（ｉ）
および／または標識特異結合物質（ｋ）が結合した分析
対象物（ｈ）は、不溶化されている特異結合物質（ｌ）
に結合できないので、そのような状態で分析対象物（ｈ
）に結合した標識特異結合物質（ｋ）は、測定系外に排
除されるのである。そして、この排除の程度は、特異結
合物質（ｉ）、標識特異結合物質（ｋ）および不溶化さ
れている特異結合物質（ｌ）の量比、および／または、
それらと分析対象物（ｈ）との結合親和力によって制御
される。その結果、方法１の場合と同様に、希釈効果が
得られ、かつ、所望の測定感度で適切な信号強度を示す
ようにすることができる。

【００４９】図３に基づいて説明する。図３に示された
例は、特定物質が、不溶化された特異結合物質（ｏ）と
の結合に際し、分析対象物（ａ）と干渉する分析対象物
類縁物質（ｑ）であり、標識物質が、分析対象物（ａ）
と不溶化された特異結合物質（ｏ）との結合に干渉せず
に分析対象物（ａ）と特異的に結合する特異結合物質（
ｍ）に標識物（ｄ）が結合してなる標識特異結合物質（
ｎ）である測定系である。

【００５０】この測定系では、分析対象物（ａ）を、標
識特異結合物質（ｎ）と結合させ、次いで、前記分析対
象物（ａ）と前記標識特異結合物質（ｎ）との結合には
干渉されずに前記分析対象物（ａ）と特異的に結合する
不溶化されている特異結合物質（ｏ）に、前記分析対象
物（ａ）と前記標識特異結合物質（ｎ）との結合物質（
ｐ）、前記標識特異結合物質（ｎ）とは結合しないが前
記特異結合物質（ｏ）とは結合する分析対象物類縁物質
（ｑ）を結合反応させて固定し、その後、固定された前
記結合物質（ｐ）中の標識物（ｄ）に由来する信号を読
みとるものである（以下、方法３という）。

【００５１】また、この方法３を行なった場合の、この
測定系に関与する各物質の結合状態の典型例は、図３に
示す通りである。

【００５２】この方法３では、不溶化されている特異結
合物質（ｏ）に、結合物質（ｐ）および分析対象物類縁
物質（ｑ）が競合して結合するので、結合物質（ｐ）と
して、標識特異結合物質（ｎ）の一部が測定系外に排除
されるのである。そして、この排除の程度は、標識特異
結合物質（ｎ）、分析対象物類縁物質（ｑ）および不溶
化されている特異結合物質（ｏ）の量比、および／また
は、分析対象物（ａ）、分析対象物類縁物質（ｑ）と不
溶化されている特異結合物質（ｏ）との結合親和力によ
って制御される。その結果、方法１の場合と同様に、希
釈効果が得られ、かつ、所望の測定感度で適切な信号強
度を示すようにすることができる。

【００５３】図４に示された例は、特定物質が、不溶化
された特異結合物質（ｖ）とは結合しない分析対象物類
縁物質（ｔ）であり、標識物質が、分析対象物（ａ）お
よび分析対象物類縁物質（ｔ）と特異的に結合する特異
結合物質（ｒ）に標識物（ｄ）が結合してなる標識特異
結合物質（ｓ）である測定系である。

【００５４】この測定系では、標識特異結合物質（ｓ）
を、試料中の分析対象物（ａ）、および、該標識特異結
合物質（ｓ）と分析対象物（ａ）との結合に干渉する分
析対象物類縁物質（ｔ）と、同時または順に結合反応さ
せ、次いで、前記分析対象物（ａ）と前記標識特異結合
物質（ｓ）との結合物質（ｕ）および存在する場合は未
結合の分析対象物（ａ）を、前記分析対象物（ａ）との
結合に際し、前記標識特異結合物質（ｓ）とは干渉せず
、かつ、前記分析対象物類縁物質（ｔ）とは結合しない
、不溶化されている特異結合物質（ｖ）と結合反応させ
て固定し、その後、固定された前記結合物質（ｕ）中の
標識物（ｄ）に由来する信号を読みとるものである（以
下、方法４という）。

【００５５】また、この方法４を行なった場合の、この
測定系に関与する各物質の結合状態の典型例は、図４に
示す通りである。

【００５６】この方法では、標識特異結合物質（ｓ）に
、分析対象物（ａ）と分析対象物類縁物質（ｔ）が競合
して結合する。その結果、標識特異結合物質（ｓ）の一
部（分析対象物類縁物質（ｔ）と結合したもの）は、不
溶化されている特異結合物質（ｖ）に結合せずに、測定
系外に排除される。そして、この排除の程度は、標識特
異結合物質（ｓ）、分析対象物類縁物質（ｔ）および不
溶化されている特異結合物質（ｖ）の量比、および／ま
たは、標識特異結合物質（ｓ）に対する、分析対象物（
ａ）と分析対象物類縁物質（ｔ）との結合親和力によっ
て制御される。その結果、方法１の場合と同様に、希釈
効果が得られ、かつ、所望の測定感度で適切な信号強度
を示すようにすることができる。

【００５７】なお、この方法の実施に際しては、不溶化
されている特異結合物質（ｖ）の量は、分析対象物（ａ
）の量に対して大過剰用いることが好ましい。

【００５８】図５に示された例は、特定物質が、分析対
象物（ａ）との特異的に結合する特異結合物質（ｗ）で
あり、標識物質が、分析対象物（ａ）と特異結合物質（
ｗ）との結合に干渉して分析対象物（ａ）と特異的に結
合する特異結合物質（ｘ）に標識物（ｄ）が結合してな
る標識特異結合物質（ｙ）である測定系である。

【００５９】この測定系では、試料中の分析対象物（ａ
）を、特異結合物質（ｗ）、および、前記分析対象物（
ａ）との結合に際し、前記特異結合物質（ｗ）と干渉す
る標識特異結合物質（ｙ）と、同時または順に結合反応
させ、次いで、前記分析対象物（ａ）と前記特異結合物
質（ｗ）との結合物質（ｚ）、および、前記分析対象物
（ａ）と前記標識特異結合物質（ｙ）との結合物質（α
）を、前記分析対象物（ａ）との結合に際し、前記特異
結合物質（ｗ）および前記標識特異結合物質（ｙ）とは
干渉しない不溶化されている特異結合物質（β）と結合
反応をさせて固定し、その後、固定された前記結合物質
（α）中の標識物（ｄ）に由来する信号を読みとるもの
である（以下、方法５という）。

【００６０】また、この方法５を行なった場合の、この
測定系に関与する各物質の結合状態の典型例は、図５に
示す通りである。

【００６１】この方法では、分析対象物（ａ）に、特異
結合物質（ｗ）と標識特異結合物質（ｙ）とが競合して
結合する。その結果、分析対象物（ａ）に結合できない
標識特異結合物質（ｙ）が生じる。そして、この分析対
象物（ａ）に結合できなかった標識特異結合物質（ｙ）
が測定系外に排除される。この排除の程度は、主に、標
識特異結合物質（ｙ）と特異結合物質（ｗ）との量比、
および／または、それらと分析対象物（ａ）との結合親
和力によって制御される。その結果、方法１の場合と同
様に、希釈効果が得られ、かつ、所望の測定感度で適切
な信号強度を示すようにすることができる。

【００６２】以上の具体例（方法１〜５）は、いずれも
、標識物質が分析対象物に対する特異結合物質を標識し
てなる物質である例であった。次に、標識物質が、分析
対象物に対する特異結合物質に対して、分析対象物と特
異結合物質との結合には干渉せずに結合する物質を標識
してなる物質である例について述べる。

【００６３】図６に示された例は、特定物質が、分析対
象物（ａ）と特異的に結合する特異結合物質（γ）であ
り、標識物質が、分析対象物（ａ）と特異結合物質（γ
）との結合には干渉せずに特異結合物質（γ）に特異的
に結合する特異結合物質（δ）に標識物（ｄ）が結合し
てなる標識特異結合物質（ε）である測定系である。

【００６４】この測定系では、分析対象物（ａ）と特異
的に結合する特異結合物質（γ）を、試料中の分析対象
物（ａ）、および、前記特異結合物質（γ）との結合に
際し、前記分析対象物（ａ）とは干渉しない標識特異結
合物質（ε）と、同時または順に結合反応させ、次いで
、前記分析対象物（ａ）、前記特異結合物質（γ）およ
び前記標識特異結合物質（ε）の三者の結合物質（ζ）
、および、前記分析対象物（ａ）と前記特異結合物質（
γ）との結合物質（η）を、前記分析対象物（ａ）と前
記特異結合物質（γ）との結合には干渉されずに前記分
析対象物（ａ）と特異的に結合する不溶化されている特
異結合物質（θ）と結合反応をさせて固定し、その後、
固定された前記三者の結合物質（ζ）中の標識物（ｄ）
に由来する信号を読みとるものである（以下、方法６）
という）。

【００６５】また、この方法６を行なった場合の、この
測定系に関与する各物質の結合状態の典型例は、図６に
示す通りである。

【００６６】この方法では、特異結合物質（γ）≧標識
特異結合物質（ε）である場合には、標識特異結合物質
（ε）の一部が特異結合物質（γ）と結合して測定系外
に排除される。そして、この排除の程度は、主に、特異
結合物質（γ）と標識特異結合物質（ε）との量比によ
って制御される。従って、方法１の場合と同様に、希釈
効果が得られ、かつ、所望の測定感度で適切な信号強度
を示すようにすることができる。

【００６７】以上説明した具体例（方法１〜６）は、不
溶化されている物質への結合には競合法の原理が働かな
いものである。そして、方法１〜６では、標識物由来の
信号は、分析対象物の量が増すに従って大となってはい
くが、希釈効果がない方法に比べて小であり、かつ、信
号の最大強度は、希釈効果がない方法とほぼ同じである
という点に特徴がある。

【００６８】すなわち、前記したように、従来の測定感
度の低下方法は、図１０（Ｉ）に示すように、信号の最
大強度の低下を招く方法であった。しかし、上記した本
発明の方法（例えば方法１〜６）は、図１０（ＩＩ）に
示すように、適切な信号強度がＭである場合に、例えば
定性的判定において、分析対象物量が境界値（Ｎ１、Ｎ
２、Ｎ３、Ｎ４）である時に信号強度をＭに設定するこ
とが容易であり、かつ、そのように設定したときに、特
定物質の寄与による希釈効果のない場合（軌跡１）に比
べ、信号の最大強度は殆ど低下しないので、結果の判定
は正確となる。なお、同図中の軌跡２〜４は、本発明に
よるものである。

【００６９】次に、本発明第二の態様、すなわち、不溶
化されている物質への結合が競合法によるものである特
異結合分析方法の具体例について説明する。

【００７０】本発明第二の態様は、試料中の分析対象物
を定性または定量するに際し、測定系に特定物質を存在
させ、該特定物質の存在により、分析対象物量の指標と
して測定される標識物質量を大きくすることを特徴とす
る特異結合分析方法である。

【００７１】特定物質、標識物質は、先に、本発明第一
の態様についての説明で述べたとおりである。

【００７２】以下に、図面に基づいて、本発明第二の態
様に相当する具体例を説明する。これらの具体例では、
標識物由来の信号は、分析対象物の量が増すに従って小
となっていくが、希釈効果がない方法に比べて大であり
、かつ、信号の最大強度は、希釈効果がない方法とほぼ
同じであるという点に特徴がある。

【００７３】図７に示された例は、特定物質が、分析対
象物（ａ）と特異的に結合する特異結合物質（κ）であ
り、標識物質が、分析対象物（ａ）と特異結合物質（κ
）との結合に干渉して分析対象物（ａ）と特異的に結合
する特異結合物質（λ）に標識物（ｄ）が結合してなる
標識特異結合物質（μ）である測定系である。

【００７４】この測定系では、分析対象物（ａ）および
分析対象物類縁物質（ι）と特異的に結合する特異結合
物質（κ）と、該分析対象物（ａ）および該分析対象物
類縁物質（ι）との結合に際し、前記特異結合物質（κ
）と干渉する標識特異結合物質（μ）とを、試料中の分
析対象物（ａ）、および、不溶化されている分析対象物
（ａ）または分析対象物類縁物質（ι）と、同時または
順に結合反応させ、該標識特異結合物質（μ）の少なく
とも一部を、不溶化されている分析対象物（ａ）または
分析対象物類縁物質（ι）に固定し、その後、固定され
た標識特異結合物質（μ）中の標識物（ｄ）に由来する
信号を読みとるものである（以下、方法７という）。

【００７５】なお、不溶化物質として分析対象物類縁物
質（ι）を選択した場合、分析対象物類縁物質（ι）は
、特異結合物質（κ）および標識特異結合物質（μ）の
１種類の特異結合に係わる部位への結合に際し、分析対
象物（ａ）と互いに干渉する物質であればよい。

【００７６】また、方法７を行なった場合の、この測定
系に関与する各物質の結合状態の典型例は、図７に示す
通りである。

【００７７】この方法７では、試料中の分析対象物（ａ
）と不溶化されている分析対象物類縁物質（ι）または
不溶化されている分析対象物（ａ）に、特異結合物質（
κ）と標識特異結合物質（μ）とが競合して結合する。 その結果、試料中の分析対象物（ａ）と結合した標識特
異結合物質（μ）は測定系から排除されるが、その排除
される量は、特異結合物質（κ）と試料中の分析対象物
（ａ）との結合物質の存在のために、標識特異結合物質
（μ）に、試料中の分析対象物（ａ）と不溶化されてい
る分析対象物類縁物質（ι）または不溶化されている分
析対象物（ａ）とが競合して結合する測定系に比べて小
となる。よって、不溶化されている分析対象物類縁物質
（ι）または不溶化されている分析対象物（ａ）自体に
結合する標識特異結合物質（μ）の量が、希釈効果がな
い場合に比べて大となり、希釈効果が得られ、かつ、所
望の測定感度で適切な信号強度を示すようにすることが
できるのである。

【００７８】このように、この系では、二重に競合的結
合が行なわれる。そして、特異結合物質（κ）と標識特
異結合物質（μ）との量比、および／または、分析対象
物類縁物質（ι）、分析対象物（ａ）と、特異結合物質
（κ）、標識特異結合物質（μ）との結合親和力により
、希釈効果の程度を制御する。

【００７９】なお、この方法７の実施に際しては、不溶
化されている分析対象物類縁物質（ａ）または不溶化さ
れている分析対象物（ａ）の量は、特異結合物質（κ）
に対して大過剰に用いることが好ましい。

【００８０】図８に示された例は、特定物質が、分析対
象物（ａ）および分析対象物質類縁物質（ν）と特異的
に結合する特異結合物質（ξ）であり、標識物質が、分
析対象物（ａ）と特異結合物質（ξ）との結合には干渉
せずに特異結合物質（ξ）に特異的に結合する特異結合
物質（π）に標識物（ｄ）が結合してなる標識特異結合
物質（ρ）である測定系である。

【００８１】この測定系では、分析対象物（ａ）および
分析対象物類縁物質（ν）と特異的に結合する特異結合
物質（ξ）を、試料中の分析対象物（ａ）、不溶化され
ている分析対象物（ａ）または分析対象物類縁物質（ν
）、および、前記特異結合物質（ξ）との結合に際し、
前記分析対象物（ａ）、前記分析対象物類縁物質（ν）
とは干渉しない標識特異結合物質（ρ）と、同時または
順に結合反応させ、該標識特異結合物質（ρ）の少なく
とも一部を、前記特異結合物質（ξ）を介して不溶化さ
れている分析対象物（ａ）または分析対象物類縁物質（
ν）に固定し、その後、固定された標識特異結合物質（
ρ）中の標識物（ｄ）に由来する信号を読みとるもので
ある（以下、方法８という）。

【００８２】なお、不溶化物質として分析対象物類縁物
質（ν）を選択した場合、分析対象物類縁物質（ν）は
、特異結合物質（ξ）の１種類の特異結合に係わる部位
への結合に際し、分析対象物（ａ）と互いに干渉する物
質であればよい。

【００８３】方法８を行なった場合の、この測定系に関
与する各物質の結合状態の典型例は、図８に示す通りで
ある。

【００８４】この方法８では、特異結合物質（ξ）に、
試料中の分析対象物（ａ）と不溶化されている分析対象
物類縁物質（ν）または不溶化されている分析対象物（
ａ）自体が競合して結合する。その際に用いられる特異
結合物質（ξ）には、標識特異結合物質（ρ）と結合し
ているあるいはするものと、未結合のものとがある。 そして、その結果、特異結合物質（ξ）を介して試料中
の分析対象物（ａ）と結合して測定系から排除される標
識特異結合物質（ρ）の量は、特異結合物質（κ）の量
を標識特異結合物質（ρ）の量に対して多量とすればす
るほど小となる。よって、不溶化されている分析対象物
類縁物質（ν）または不溶化されている分析対象物（ａ
）自体に結合する標識特異結合物質（ρ）の量が、希釈
効果がない場合に比べて大となり、希釈効果が得られ、
かつ、所望の測定感度で適切な信号強度を示すようにす
ることができるのである。

【００８５】このように、この系では、通常は、特異結
合物質（ξ）標識特異結合物質（ρ）よりも多量に用い
る。そして、特異結合物質（ξ）と標識特異結合物質（
ρ）との量比、および／または、分析対象物類縁物質（
ν）と特異結合物質（ξ）との結合親和力により、希釈
効果の程度を制御する。

【００８６】なお、この方法８の実施に際しては、不溶
化されている分析対象物類縁物質（ν）あるいは不溶化
されている分析対象物（ａ）の量は、特異結合物質（κ
）に対して大過剰に用いることが好ましい。

【００８７】図９に示された例は、特定物質が、分析対
象物（ａ）に対する特異結合物質（ψ）であり、標識物
質が、分析対象物（ａ）自体に標識物（ｄ）が結合して
なる標識分析対象物（σ）、または、分析対象物類縁物
質（τ）に標識物（ｄ）が結合してなる標識分析対象物
類縁物質（φ）である測定系である。

【００８８】この測定系では、試料中の分析対象物（ａ
）と、標識分析対象物（σ）または標識分析対象物類縁
物質（φ）を、前記分析対象物（ａ）および前記標識分
析対象物類縁物質（τ）と特異的に結合する特異結合物
質（ψ）、および、不溶化されている特異結合物質（ψ
）、または、前記分析対象物（ａ）および前記標識分析
対象物類縁物質（φ）と前記特異結合物質（ψ）との結
合に干渉する不溶化されている特異結合物質（ω）と、
同時または順に結合反応させ、前記標識分析対象物（σ
）または前記標識分析対象物類縁物質（φ）の少なくと
も一部を固定し、その後、固定された標識分析対象物（
σ）または標識分析対象物類縁物質（φ）中の標識物（
ｄ）に由来する信号を読みとるものである（以下、方法
９という）。

【００８９】なお、特異結合物質（ψ）と特異結合物質
（ω）との関係は、分析対象物（ａ）および標識分析対
象物類縁物質（φ）との結合に関して干渉しあう関係で
あり、例えば分析対象物（ａ）が抗原として機能する物
質であり、標識分析対象物類縁物質（φ）が、分析対象
物（ａ）と同じ抗原決定部位を有するアナログに標識物
（ｄ）が結合したものである場合、その同じ抗原決定部
位に対して特異的に結合する異なる種類の抗体同士、あ
るいは、結合する抗原決定部位は異なるが、特異結合物
質（ψ）が分析対象物（ａ）または標識分析対象物類縁
物質（φ）に結合すると、特異結合物質（ω）はそれら
に結合できなくなる関係にある物質同士等である。

【００９０】また、方法９を行なった場合の、この測定
系に関与する各物質の結合状態の典型例は、図９に示す
通りである。

【００９１】この方法９では、不溶化されていない特異
結合物質（ψ）と、不溶化されている特異結合物質（ψ
）または不溶化されている特異結合物質（ω）に、試料
中の分析対象物（ａ）と、標識分析対象物（σ）または
標識分析対象物類縁物質（φ）が競合して結合する。そ
の結果、不溶化されていない特異結合物質（ψ）と結合
した標識分析対象物（σ）または標識分析対象物類縁物
質（φ）は測定系から排除されるが、その排除される量
は、不溶化されていない特異結合物質（ψ）と試料中の
分析対象物（ａ）との結合物質の存在のために、試料中
の分析対象物（ａ）と、標識分析対象物（σ）または標
識分析対象物類縁物質（φ）とが、直接的に、不溶化さ
れている特異結合物質（ψ）または不溶化されている特
異結合物質（ω）に競合して結合する測定系に比べて小
となる。よって、不溶化されている特異結合物質（ψ）
または不溶化されている特異結合物質（ω）に結合する
標識分析対象物（σ）または標識分析対象物類縁物質（
φ）の量が、希釈効果がない場合に比べて大となり、希
釈効果が得られ、かつ、所望の測定感度で適切な信号強
度を示すようにすることができるのである。

【００９２】このように、この系では、二重に競合的結
合が行なわれる。そして、不溶化されていない特異結合
物質（ψ）と、不溶化されている特異結合物質（ψ）ま
たは不溶化されている特異結合物質（ω）との量比、お
よび／または、分析対象物（ａ）、標識分析対象物類縁
物質（φ）と、特異結合物質（ψ）、特異結合物質（ω
）との結合親和力により、希釈効果の程度を制御する。

【００９３】以上説明した具体例（方法７、８、９）は
、前記したように、不溶化されている物質への結合が競
合法によるものである。そして、この方法によると、従
来の競合法の原理による方法に比べ、広範囲かつ適切に
測定感度を低下させることができる。

【００９４】すなわち、前記したように、従来の競合法
における測定感度の低下方法は、図１０（ＩＩＩ）　に
示すように、信号の最大強度の増大を招く方法であった
。しかし、上記した本発明の方法（例えば方法７、８、
９）は、図１０（ＩＶ）に示すように、所望の分析対象
物量のときに適切な信号強度となるように設定すること
が容易であり、かつ、そのように設定したときに、特定
物質の寄与による希釈効果のない場合（軌跡１）に比べ
、信号の最大強度は殆ど増大しないので、結果の判定は
正確となる。なお、同図中の軌跡２、３は、本発明によ
るものである。

【００９５】以上が、本発明第一の態様および第二の態
様の特異結合分析方法である。これらにおいて、Ｂ／Ｆ
分離や標識物に由来する信号の読みとりは、公知方法に
よればよい。

【００９６】このように、本発明の特異結合分析方法の
具体例には、様々な形態があるので、本発明において、
試料中の分析対象物（ａ）の特性、および、用いる特異
結合物質の特異性および親和力に応じて、特定物質およ
び方法（例えば方法１から方法９）を選択することがで
きる。

【００９７】分析対象物（ａ）に対する２種類の特異結
合物質の一方を不溶化し、他方を標識化して用いる測定
系に関して、方法１、方法５を例にして説明する。

【００９８】例えば、分析対象物（ａ）に対する特異性
が標識特異結合物質よりも不溶化特異結合物質の方が高
い場合、方法１を行なう、すなわち、特定物質は不溶化
特異結合物質（ｂ）を用いることが望ましい。また逆に
、分析対象物（ａ）に対する特異性が不溶化特異結合物
質よりも標識特異結合物質の方が高い場合、方法５を行
なう、すなわち、特定物質として特異結合物質（ｗ）を
用いる方法が望ましい。

【００９９】特に、試料中に、分析対象物（ａ）の他に
分析対象物（ａ）の構造的類似物質が存在している場合
には、このように、適当な不溶化物質、標識物質および
特定物質を選択することによって初めて、目的とする分
析対象物（ａ）の信号強度を特異的に制御できる

【０１
００】すなわち、例えば、試料中のｈＣＧを定量する際
、本発明によれば、試料中に存在するｈＣＧの構造的類
似物質であるＬＨまたはＦＳＨと区別して測定すること
ができるが、方法１、方法５を選択した場合の特定物質
等は、下記の通りである。

【０１０１】ｈＣＧ測定系に用いる不溶化物質および標
識物質として、抗ｈＣＧβ抗体および抗ｈＣＧα抗体を
用いる場合、抗ｈＣＧβ抗体の方がｈＣＧα抗体よりも
ｈＣＧに対する特異性が高いため、不溶化抗体を抗ｈＣ
Ｇβ抗体とし、標識側の抗体を抗ｈＣＧα抗体とした場
合、方法１を行なう、すなわち、特定物質を抗ｈＣＧβ
抗体とすることが望ましい。また、不溶化抗体を抗ｈＣ
Ｇα抗体とし、標識側の抗体を抗ｈＣＧβ抗体とした場
合、方法５を行なう、すなわち、特定物質を抗ｈＣＧβ
抗体とすることが望ましい。

【０１０２】このように、方法１、方法５のいずれによ
っても、ｈＣＧの測定は可能であるが、２種類の特異結
合物質のうちの一方が分析対象物（ａ）に対して特異性
が高く、他方が試料中の分析対象物（ａ）以外とも反応
する可能性がある場合、一般的には、分析対象物（ａ）
に対して高い特異性を有する特異結合物質を不溶化する
方が望ましいので、上記のｈＣＧ測定の場合は方法１の
方が望ましい。

【０１０３】同様に、ＣＥＡに特有のエピトープと反応
する抗体、および、ＣＥＡ以外のＣＥＡ関連抗原とも反
応し得る抗体を用いたＣＥＡ測定系の場合には、ＣＥＡ
に対して特異性の高い抗ＣＥＡ抗体を不溶化特異結合物
質として用い、ＣＥＡ以外のＣＥＡ関連抗原とも反応し
うる抗体を標識特異結合物質として用い、特定物質は、
不溶化した抗ＣＥＡ抗体の同等物を用いることが望まし
い。

【０１０４】また、特定のウイルスに対するＩｇＧ抗体
価測定の場合には、ウイルス特異抗原を不溶化特異結合
物質として用い、抗ヒトＩｇＧ抗体を標識特異結合物質
として用いるのが一般的である。そして、この場合、抗
ヒトＩｇＧ抗体は、抗ウイルス抗体以外のヒトＩｇＧに
も結合するため、方法１、すなわち、特定物質として不
溶化したウイルス特異抗原と同等物を用いる方法が望ま
しい。

【０１０５】続いて、これら本発明第一の態様、第二の
態様の方法を実施する際に好適な、本発明第三の態様の
特異結合分析装置について説明する。

【０１０６】本発明第三の態様の特異結合分析装置は、
少なくとも１つの試料添加部（Ａ）、少なくとも１つの
特異結合物質存在部（Ｂ）、少なくとも１つの検出部存
在部（Ｃ）、および、少なくとも１つの吸収部（Ｄ）を
この順に有し、かつ、特異結合物質存在部（Ｂ）には、
前記したような特定物質が存在し、さらに、検出部存在
部（Ｃ）には、試料中の分析対象物（ａ）の量もしくは
濃度の指標となる標識物（ｄ）を間接的に固定するため
の物質が不溶化された検出部（Ｅ）が存在する。

【０１０７】その詳細については下記するが、このよう
な本発明第三の態様の装置を使用することにより、試料
の添加のみで、試料中の分析対象物（ａ）以外の成分と
共に特異結合物質存在部（Ｂ）へ流れ込んだ分析対象物
（ａ）を、好適な順序で、特定物質、標識物質等と反応
させることが可能となり、さらに、それらの反応生成物
（結合物質）等を含む試料を、人為的な操作を加えずに
検出部存在部（Ｃ）へ導き、必要なものを検出部（Ｅ）
に固定すると共に、不必要なものは吸収部（Ｄ）に導く
ことが可能となったものである。

【０１０８】以下に、本発明第三の態様を、図面に基づ
いて説明する。

【０１０９】図１１は、本発明第三の態様の分析装置の
典型例を示し、（Ｉ）は平面図、（ＩＩ）は側面図であ
る。すなわち、試料添加部（Ａ）、特異結合物質存在部
（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）を順次
有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置である。な
お、検出部（Ｅ）は、検出部存在部（Ｃ）中にあり、Ｆ
は支持体である。

【０１１０】このような分析装置は、プラスチック板、
フィルム等、より好ましくは、両面粘着テープを貼った
プラスチック板等の支持体（Ｆ）上に、試料添加部（Ａ
）、特異結合物質存在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）お
よび吸収部（Ｄ）の各々を構成する材料を、各材料中を
流れる液体が毛管現象で均一に移動可能な状態で接する
ように配置すればよい。

【０１１１】ここで、試料添加部（Ａ）は、まさに試料
を添加する部位であるので、後述する特異結合物質（Ｂ
）が試料添加部（Ａ）を兼ねてもよい。

【０１１２】しかし、試料添加部（Ａ）を独立した部位
として設ければ、下記の利点がある。

【０１１３】すなわち、独立した部位としての試料添加
部（Ａ）は、試料中の一部の成分のみを特異結合物質存
在部（Ｂ）および検出部存在部（Ｃ）へ導くための試料
の前処理の場として、あるいは、液流速の調節、液流の
均一化などの場として働き、特異結合物質存在部（Ｂ）
での特異結合物質（特定物質、標識物質等）の溶解およ
び結合反応、および、検出部（Ｅ）での結合反応が適正
に行なわれるようにする役割を果たし得る。

【０１１４】本発明では、特異結合物質存在部（Ｂ）で
の特異結合物質（特定物質、標識物質等）の溶解および
結合反応が不適正であると、希釈効果の精度が低下する
ことがある。

【０１１５】なお、前記不適性さを来す原因としては、
■試料中に含まれる粒子（例えば、生体成分の非特異的
会合物、粘液成分、血球成分、微生物、外来性のゴミ粒
子など）が毛管現象を阻害し、液流の停滞、液流速度の
低下もしくは増大、液流前線（フロントライン）の乱れ
が生じることによるもの、■試料添加部（Ａ）へ添加さ
れた試料量の変動や試料性状（粘度など）の変動により
、液流速度が変動することによるもの、および、■後述
する複数ユニットを有する特異結合分析装置において、
各ユニットに配分される試料液量の変動により、各ユニ
ットの液流速度が異なってしまうことによるものなどが
挙げられる。

【０１１６】試料中の分析対象物（ａ）の材質への非特
異的吸着の極小化および安定した液性成分吸収能を備え
ていることなどを考慮すると、試料添加部（Ａ）の材質
として、セルロース濾紙、ガラス繊維製濾紙、布、不織
布、多孔性セラミックスなどが好ましく、クロマトグラ
フ用セルロース濾紙が特に好ましい。これは、クロマト
グラフ用セルロース濾紙が均質な紙質、均一な吸水速度
、およびセルロース繊維の適度な配向性を有しているた
めである。

【０１１７】このようなクロマトグラフ用濾紙の中で、
比較的吸水性が優れている濾紙、例えばＮｏ．５２６（
アドバンテック東洋社）などは、厚さが均一であるため
、カットする大きさを規定することにより、試料添加部
（Ａ）を試料量に再現性良く対応させることができる。

【０１１８】また、この濾紙を方形の断片にカットして
試料添加部（Ａ）とする場合、その配向方向を液流方向
と一致させ、液流方向に垂直な１つの断端を特異結合物
質存在部（Ｂ）の断端に均等に接触させるか、もしくは
、液流方向に０．５〜２．０ｍｍの重なりをもって均等
に接触させると、液流の均一性が保たれ、前記■〜■に
記述した現象の解消に効果が認められるため好ましい。

【０１１９】さらに、後述する複数ユニットを有する装
置の場合であって、特異結合物質存在部（Ｂ）への試料
中の液性成分の分配を必要とする場合、複数の特異結合
物質存在部（Ｂ）に接触している複数のもしくは１つの
前記方形濾紙断片上に、もう１つの濾紙断片をその配向
方向が互いに垂直となるように重積して試料添加部（Ａ
）を形成すると、前記■に記述した現象の解消に好まし
い効果がある。

【０１２０】ところで、試料添加部（Ａ）は、前記した
ような濾紙のみで形成してもよいが、それらの濾紙に、
種々の添加剤を含浸せしめて乾燥させたものを用いても
よい。

【０１２１】例えば、界面活性剤は、前記■〜■に記述
した現象の解消に効果が認められる。なかでも特に効果
的なのは、非イオン性界面活性剤、例えば０．０１〜０
．５％ツィーン２０もしくは０．０１〜０．５％トリト
ン×−１００を、濾紙等にその材料の最大吸収量添加し
、乾燥させた場合である。

【０１２２】また、添加試料の性状の変動の影響を抑制
する効果が認められるのは、蛋白成分であり、例えば０
．０５〜０．５％のウシ血清アルブミンもしくは０．０
５〜０．５％のゼラチンの０．０６７Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ５．５〜７．５）溶液もしくは０．１Ｍトリス緩衝
液（ｐＨ６．０〜８．０）溶液を、濾紙等にその材質の
最大吸収量添加し、乾燥させた場合に特に効果的である
。

【０１２３】ただし、試料添加部（Ａ）の材質、連通性
もしくは添加剤によって、特異結合物質存在部（Ｂ）以
降で行なわれる反応等を制御する方法は、上記したこれ
らの方法に限定されるものではない。また、試料添加部
（Ａ）と、特異結合物質存在部（Ｂ）および／または検
出部存在部（Ｃ）の特性との組み合わせによっても、さ
らに効果を高めうる。そのような組み合わせに係る効果
については、後述する。

【０１２４】特異結合物質存在部（Ｂ）は、試料添加部
（Ａ）と同様、均質な特性を有し、厳密な大きさの加工
が可能で、試料中の分析対象物（ａ）、および、特異結
合物質、分析対象物、分析対象物類縁物質、標識物質等
の非特異的吸着が極小化できる材料、例えば、セルロー
ス濾紙、ガラス繊維製濾紙、布、不織布、多孔性セラミ
ックスなどで作製することが好ましい。そして、適当な
特異結合物質、分析対象物、分析対象物類縁物質、標識
物質等を、添加剤（非特異吸着防止成分、安定か成分、
溶解調節成分等）と共に、前記材料、特にガラス繊維製
濾紙、ポリエステル系不織布へ含浸、乾燥させたもので
構成するとよい。

【０１２５】特定物質、標識物質および分析対象物等の
非特異的吸着による特異結合物質存在部（Ｂ）の材料へ
の不動化が、測定の不正確さを来すことは自明である。 しかし、不動化に至らなくても、特定物質と前記材料、
標識物質と前記材料もしくは分析対象物と前記材料との
間の弱い相互作用は差があるので、標識物質および特定
物質が前記材料内を移動する際にその移動速度に差が生
じ、そのために、希釈効果の制御が困難となり、測定感
度設定の不正確さを来すことがある。例えば、特定物質
が標識物質よりも先に移動してしまう傾向があると、前
記方法３、方法５および方法６の場合は、特定物質の効
果が高まり、信号強度が低くなりすぎてしまう場合があ
る。

【０１２６】分析対象物、標識物質、特異結合物質等の
移動速度のズレを極小化し、このような現象を防ぐには
、前記した添加剤、特に非特異吸着防止成分を用いるこ
とが好ましく、蛋白質成分、特に０．１〜１％ウシ血清
アルブミンもしくは０．１〜１％ゼラチン、および／ま
たは、界面活性剤、好ましくは非イオン性界面活性剤、
例えば０．０１〜０．５％ツィーン２０もしくは０．０
１〜０．５％トリトン×−１００を、その材料の最大吸
収量添加し、洗浄後もしくはそのまま乾燥させたものを
、特異結合物質存在部（Ｂ）の形成に用いるとよい。

【０１２７】また、本発明の装置においては、その保存
過程において、特異結合物質存在部（Ｂ）に存在する特
定物質、標識物質等の活性が低下することがあるが、そ
の活性の低下率が物質ごとに異なると、装置製造時に設
定した測定感度が示され得なくなる。これを解消するた
めには、安定化成分である、糖類、特に０．５〜８％の
サッカライドもしくはラクトースを、その材料の最大吸
収量添加し、乾燥させたものを、特異結合物質存在部（
Ｂ）の形成に用いるとよい。

【０１２８】さらに、本発明の装置においては、特異結
合物質存在部（Ｂ）中の特定物質および標識物質等の溶
解速度の差も、測定感度制御に影響を与える場合がある
。この溶解速度の差は、試料の性状、特定物質および標
識物質等の種類および量に依存し、また、特定物質によ
る分析対象物量の指標として測定される標識物質量の制
御方法によってその影響の大きさが異なる。

【０１２９】そこで、溶解調節成分として、糖類、特に
０．５〜８％のサッカライドを用いて特異結合物質存在
部（Ｂ）を形成すると、溶解速度の差を解消する効果が
一般的に得られる。また、標識物（ｄ）が疎水性の高い
物質、例えば染料などである場合には、界面活性剤、特
に非イオン性界面活性剤がその溶解速度の上昇に効果が
ある。ただし、特異結合物質等と標識物（ｄ）との結合
が非共有結合によってなされている場合には、溶解調節
成分、特に界面活性剤が、保存中の不安定化成分として
作用してしまい、標識物（ｄ）と特異結合物質等との解
離を来たし、好ましくない場合がある。この場合には、
特異結合物質存在部（Ｂ）へは溶解調節成分を存在させ
ず、試料添加部（Ａ）にこの溶解調節成分を存在させれ
ば、特異結合物質存在部（Ｂ）での種々の物質の溶解性
向上に同等の効果が得られる。

【０１３０】検出部存在部（Ｃ）の構成は、物質の不溶
化の方法により、二種類に分けられる。すなわち、特定
の物質を、検出部存在部（Ｃ）を構成する材料の一部に
物理的または化学的結合様式にて不溶化させれば、不溶
化された部分が検出部（Ｅ）となる（直接不溶化）。あ
るいは、特定の物質を、微粒子に物理的または化学的結
合様式にて不溶化させ、次に、その微粒子を、検出部存
在部（Ｃ）を構成する多孔性の材料にトラップさせると
、微粒子（検出部（Ｅ））がトラップされた検出部存在
部（Ｃ）が形成される（間接不溶化）。

【０１３１】なお、検出部存在部（Ｃ）を構成する材料
として、直接不溶化の場合は、多孔性セルロース誘導体
の膜、多孔性ニトロセルロース膜、ガラスキャピラリー
、多孔性セラミックス、ガラス繊維製濾紙、不織布、布
、プラスチックネット等か、またはそれらに結合用の活
性基がついたものが好ましく、間接不溶化の場合は、ポ
リスチレン微粒子、ラテックス、ガラス微粒子等の微粒
子か、またはそれらに結合用の活性基がついたものと、
ガラス繊維製濾紙、不織布、布、プラスチックネット、
多孔性セルロース誘導体の膜、多孔性ニトロセルロース
膜、多孔性セラミックス等（前記微粒子をトラップする
材料）とを用いることが好ましい。

【０１３２】また、検出部存在部（Ｃ）の形成に際し、
添加剤を用いてもよく、その場合の添加剤の役割等につ
いては、先に特異結合物質存在部（Ｂ）についての説明
で述べた通りである。

【０１３３】さらに、その詳細は後記するが、前記特異
結合物質存在部（Ｂ）と検出部存在部（Ｃ）とは、同じ
領域であってもよい。

【０１３４】吸収部（Ｄ）は、試料等の添加された液体
を吸収、保持する部位であるので、吸水性ポリマーを不
織布、織布、プラスチックネット等にトラップさせた材
料や、セルロース濾紙等の吸水性材料等で構成する。

【０１３５】吸収部（Ｄ）は、検出部（Ｅ）に残存すべ
きでない余剰の標識物質等を、液流量を増量することに
より検出部（Ｅ）から吸収除去する作用があり、検出部
（Ｅ）における信号強度の測定の精度を高める効果が認
められる。しかし、同時に、液流量の変動が信号強度の
変動につながる場合もある。従って、そのような場合に
は、吸収部（Ｄ）を独立の部位とすることなく、検出部
存在部（Ｃ）の検出部（Ｅ）よりも下流側を吸収部（Ｄ
）とすればよい。

【０１３６】以上、本発明第三の態様の装置の各部位に
ついて説明したが、これら各部位の構成は、相互に関連
して測定感度の調整に寄与する。以下に、本発明第三の
態様の装置について、部位間の関連性の観点からさらに
説明する。

【０１３７】本発明第三の態様の装置は、その製造に際
し、試料添加部（Ａ）の材質、大きさ、厚さおよび添加
物など、特異結合物質存在部（Ｂ）の材質、大きさ、厚
さおよび添加物など、および、試料添加部（Ａ）と特異
結合物質存在部（Ｂ）との連通性（接合線の長さ、重ね
合わせの面積、接触圧など）を任意に組合わせることに
より、試料中の液性成分が特異結合物質存在部（Ｂ）へ
流れ込む速度（液流速度）を自由に設定できる。これに
よって、特異結合物質存在部（Ｂ）以降で生じる特異結
合反応を、その反応方法に応じて最も好適に行ないうる
ように制御可能である。

【０１３８】また、同様に、特異結合物質存在部（Ｂ）
の材質、大きさ、厚さ、添加物など、検出部存在部（Ｃ
）の材質、大きさ、厚さ、添加物など、および、特異結
合物質存在部（Ｂ）と検出部存在部（Ｃ）との連通性（
重ね合わせの面積、接触圧等）を任意に組合わせること
により、試料中の液性成分が検出部存在部（Ｃ）へ流れ
込む速度（液流速度）を自由に設定できる。これによっ
て、検出部（Ｅ）で生じる反応を、その反応方法に応じ
て最も好適に行ないうるように制御可能である。

【０１３９】特に、検出部（Ｅ）における信号強度は、
検出部（Ｅ）における特異結合反応によって結合、蓄積
する標識物質量によって決まり、一般には、検出部（Ｅ
）を通過する液量の増大と共に、信号強度も増大する。 また、信号強度は、液流の停止によって一定値に達する
。従って、特定物質の存在による測定感度制御を精度よ
く実現するためには、検出部（Ｅ）通過液量の制御もし
くは液流の停止を制御する必要があるが、本発明第三の
態様の装置では、試料添加部（Ａ）、特異結合物質存在
部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）の材
質、大きさ、厚さなどの選択、組合わせにより、試料中
の液性成分の検出部（Ｅ）の通過液量を任意に設定でき
、また、液流の停止も自由にかつ精度よく制御可能であ
る。

【０１４０】まず、各部位の材質の組合せについて述べ
ると、各部位についての説明で述べた材料を、任意に組
合せて用いればよいが、試料添加部（Ａ）、特異結合物
質存在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ
）のうちのいずれか２つの部位ないしは４つの部位を同
一の材質とすることが好適である場合は、共通の材料を
使用でき、あるいは、２つまたは３つの部位を兼ねる領
域を設けてもよい。

【０１４１】次に、各部位の大きさについて述べる。本
発明第三の態様の装置を用いた場合における希釈効果の
程度、有効性および精度は、試料添加部（Ａ）、特異結
合物質存在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部
（Ｄ）の各部位の材質および添加剤を規定した場合であ
っても、各部位の大きさの影響を受ける。これは、主と
して次のような要因で、検出部（Ｅ）における信号強度
が各部位の大きさに依存することによるものである。■
特定物質により、試料中の分析対象物（ａ）の量もしく
は濃度に対応する検出部（Ｅ）における信号強度を制御
する工程に係る反応時間は、液流速度とその液流距離に
依存し、これは、主として、試料添加部（Ａ）から検出
部（Ｅ）までの液流方向の長さおよび厚み、特に、特定
物質が存在する特異結合物質存在部（Ｂ）の試料添加部
（Ａ）側の断端から、検出部（Ｅ）までの長さおよび厚
みに依存する。■検出部（Ｅ）における信号強度は、検
出部（Ｅ）を通過する液性成分量に依存し、この量は、
主として、検出部（Ｅ）以降の検出部存在部（Ｃ）およ
び吸収部（Ｄ）の長さおよび厚みに依存する。

【０１４２】従って、試料添加部（Ａ）の大きさは、そ
の形成に用いる材料の最大吸収液量を考慮して決定する
とよい。特に、用いる材料の最大吸収液量が、添加試料
の液性成分量の２０〜８０％の液量に相当するように、
試料添加部（Ａ）の大きさを選択することが好ましい。

【０１４３】具体的に述べると、試料添加部（Ａ）の形
成に、例えば、クロマトグラフ用セルロース濾紙Ｎｏ．
５２６（アドバンテック東洋社）を用いる場合であって
、添加試料の液量が２００μｌである場合には、０．６
〜２．３平方ｃｍが好適である。

【０１４４】特異結合物質存在部（Ｂ）および検出部存
在部（Ｃ）の大きさは、前記試料添加部（Ａ）の大きさ
と関連して決定される。

【０１４５】例えば、試料液量を２００μｌとし、各部
位の幅を１０ｍｍとし、試料添加部（Ａ）にはクロマト
グラフ用セルロース濾紙Ｎｏ．５２６（アドバンテック
東洋社）を用い、長さ１０ｍｍ×幅１０ｍｍ×厚さ０．
７ｍｍに設定した場合、上述した検出部（Ｅ）における
信号強度が特異結合物質存在部（Ｂ）および検出部存在
部（Ｃ）の大きさに依存することを考慮しなければ、特
異結合物質存在部（Ｂ）用の材料および大きさとして、
例えばポリエステル不織布であって、長さ２〜５０ｍｍ
、厚さ０．１〜２ｍｍのもの、もしくは、ガラス繊維製
濾紙であって、長さ２〜５０ｍｍ、厚さ０．１〜２ｍｍ
のものが、そして、検出部存在部（Ｃ）用の材料および
大きさとしては、例えばニトロセルロース膜であって、
長さ２〜１００ｍｍ、厚さ０．０５〜０．２ｍｍのもの
が好適である。

【０１４６】しかし、上述した検出部（Ｅ）における信
号強度が特異結合物質存在部（Ｂ）および検出部存在部
（Ｃ）の大きさに依存することを考慮すると、検出部（
Ｅ）における信号強度の制御の有効性および精度を好適
にする。すなわち、試料中の分析対象物（ａ）の量の指
標となる信号の最大強度の低下を招かないためには、特
異結合物質存在部（Ｂ）は、例えば厚さ０．５ｍｍのポ
リエステル不織布を用いる場合は長さ１０ｍｍ以下、そ
して検出部存在部（Ｃ）は、例えば厚さ０．１６ｍｍの
ニトロセルロース膜を用いる場合を特異結合物質存在部
（Ｂ）側の断端から検出部（Ｅ）までの長さを５０ｍｍ
以下とすることが特に好ましい。

【０１４７】さらに、特異結合物質存在部（Ｂ）の大き
さは、そこに存在させる特異結合物質（特定物質および
標識物質等）の量に応じて変化する。すなわち、多量の
物質を小さい面積に乾燥状態で存在させると、その溶解
性が悪くなる場合が多い。従って、特異結合物質の性質
および存在させる量に応じて、好適な面積を選択する必
要がある。

【０１４８】続いて、各部位の連通性について述べる。 本発明第三の態様の装置において、各部位間の連通を各
々の部位を構成する材料の断面の接合で行なわせる場合
には、断面を一定とすると、この接合線の長さが大きい
ほど、液性成分の移動効率が増大し、その結果、液流速
度は増加する。実際には、各部位を構成する材料の材質
および厚みなどによって条件は変わるが、一般的には、
接合線の長さは３〜２０ｍｍが好適である。

【０１４９】各部位間の連通性は、液流速度および液流
前線（フロントライン）の均一性などに影響を与え、そ
の結果、信号強度の制御に影響を及ぼす。従って、均一
な接触、より確実には、０．５〜２ｍｍの重なりをもっ
て接合させることが好ましい。

【０１５０】以上説明したように、本発明第三の態様の
装置の各部位は、相互に関連して信号強度の制御を司る
。

【０１５１】このような本発明第三の態様の装置におい
て、特異結合物質存在部（Ｂ）や検出部（Ｃ）に付着あ
るいは不溶化される物質は、どのような方法で得られた
ものでもよい。精製品でも遺伝子工学的手法で作製され
たものであってもよく、また、それが抗体である場合に
は、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体
であってもよい。さらに、標識物（ｄ）とある物質との
結合物質も、どのような方法で得られたものであっても
よい。

【０１５２】また、本発明第三の態様の装置は、各部位
を各々形成後、各部位を所定の位置に配置し、その上か
ら、厚さ１００μｍ以下の透明粘着テープを、毛細現象
を阻害しない均質な圧力で貼付けて製造することが好ま
しい。

【０１５３】以上、本発明の特異結合分析装置の構成に
ついて説明したが、次に、前記本発明第一の態様、第二
の態様についての説明の項で示した具体例を実施するた
めの各装置について述べる。

【０１５４】前記方法１を実施するための装置は、前記
特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結合物質（ｂ
）および前記標識特異結合物質（ｅ）が存在し、前記検
出部（Ｅ）には、前記特異結合物質（ｂ）または前記特
異結合物質（ｇ）が不溶化されている。ここで、前記特
異結合物質存在部（Ｂ）において、前記特異結合物質（
ｂ）および前記標識特異結合物質（ｅ）は、試料の流れ
方向（図１２（Ｉ）中の矢印方向）に沿って順に（図１
２（Ｉ）および（ＩＩ）参照）存在してもよいし、混在
（図１２（ＩＩＩ）　参照）してもよい。あるいは、前
記特異結合物質存在部（Ｂ）と前記検出部（Ｃ）とが同
じ領域であってもよい（図１２（ＩＶ）参照）。さらに
は、前記試料添加部（Ａ）と前記特異結合物質存在部（
Ｂ）とが同じ領域である（図１２（Ｖ）参照）とか、前
記試料添加部（Ａ）、前記特異結合物質存在部（Ｂ）お
よび前記検出部存在部（Ｃ）が同じ領域である装置（図
１２（ＶＩ）参照）も、本発明第三の態様に包含される
。

【０１５５】また、前記方法２を実施するための装置は
、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結合物
質（ｉ）および前記標識特異結合物質（ｋ）が存在し、
前記検出部（Ｅ）には、前記特異結合物質（ｌ）が不溶
化されている。ここで、前記特異結合物質存在部（Ｂ）
において、前記特異結合物質（ｉ）および前記標識特異
結合物質（ｋ）は混在してもよい。あるいは、前記特異
結合物質存在部（Ｂ）と前記検出部存在部（Ｃ）とが同
じ領域であり、そこに、前記特異結合物質（ｉ）、前記
標識特異結合物質（ｋ）および不溶化されている前記特
異結合物質（ｌ）が混在していてもよいし、前記試料添
加部（Ａ）と前記特異結合物質存在部（Ｂ）とが同じ領
域であってもよいし、さらには、前記試料添加部（Ａ）
、前記特異結合物質存在部（Ｂ）および前記検出部存在
部（Ｃ）が同じ領域であってもよい。 しかし、なかでも、前記特異結合物質存在部（Ｂ）が独
立した部位として存在し、そこに、前記特異結合物質（
ｉ）と前記標識特異結合物質（ｋ）とが、試料の流れ方
向に沿ってこの順に存在しているのがよい。

【０１５６】前記方法３を実施するための装置は、前記
特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記標識特異結合物質
（ｎ）および前記分析対象物類縁物質（ｑ）が存在し、
前記検出部（Ｅ）には、前記特異結合物質（ｏ）が不溶
化されている。ここで、前記特異結合物質存在部（Ｂ）
において、前記標識特異結合物質（ｎ）および前記分析
対象物類縁物質（ｑ）は、試料の流れ方向に沿って任意
の順に存在しても混在してもよく、また、前記特異結合
物質存在部（Ｂ）と前記検出部存在部（Ｃ）とが同じ領
域であってもよい。あるいは、方法１、方法２を実施す
るための装置についての説明の欄に述べたようなその他
の変形例であってもよい。

【０１５７】前記方法４を実施するための装置は、前記
特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記標識特異結合物質
（ｓ）および前記分析対象物類縁物質（ｔ）が存在し、
前記検出部（Ｅ）には、前記特異結合物質（ｖ）が不溶
化されている。ここで、前記特異結合物質存在部（Ｂ）
において、前記標識特異結合物質（ｓ）および前記分析
対象物類縁物質（ｔ）は、混在していてもよい。あるい
は、前記特異結合物質存在部（Ｂ）と前記検出部存在部
（Ｃ）とが同じ領域であってもよい。さらには、前記し
たその他の変形例の構成であってもよいが、特異結合物
質存在部（Ｂ）が独立した部位として存在し、そこに、
前記分析対象物類縁物質（ｔ）と前記標識特異結合物質
（ｓ）とが、試料の流れ方向に沿ってこの順に存在して
いるのがよい。

【０１５８】前記方法５を実施するための装置は、前記
特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結合物質（ｗ
）および前記標識特異結合物質（ｙ）が存在し、前記検
出部（Ｅ）には、前記特異結合物質（β）が不溶化され
ている。ここで、前記特異結合物質存在部（Ｂ）におい
て、前記特異結合物質（ｗ）および前記標識特異結合物
質（ｙ）は、混在していてもよい。あるいは、前記特異
結合物質存在部（Ｂ）と前記検出部（Ｃ）とが同じ領域
であってもよい。さらには、前記したその他の変形例の
構成であってもよいが、特異結合物質存在部（Ｂ）が独
立した部位として存在し、そこに、前記特異結合物質（
ｗ）と前記標識特異結合物質（ｙ）とが、試料の流れ方
向に沿ってこの順に存在しているのがよい。

【０１５９】前記方法６を実施するための装置は、前記
特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結合物質（γ
）および前記標識特異結合物質（ε）が存在し、前記検
出部（Ｅ）には、前記特異結合物質（θ）が不溶化され
ている。ここで、前記特異結合物質存在部（Ｂ）におい
て、前記特異結合物質（γ）および前記標識特異結合物
質（ε）は、試料の流れ方向に沿って任意の順に存在し
てもよいし、混在していてもよい。あるいは、前記特異
結合物質存在部（Ｂ）と前記検出部存在部（Ｃ）とが同
じ領域であってもよい。さらには、前記したその他の変
形例の構成であってもよい。

【０１６０】前記方法７を実施するための装置は、前記
特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結合物質（κ
）および前記標識特異結合物質（μ）が存在し、前記検
出部（Ｅ）には、前記分析対象物（ａ）または前記分析
対象物類縁物質（ι）が不溶化されている。ここで、前
記特異結合物質（κ）および前記標識特異結合物質（μ
）は、特異結合物質存在部（Ｂ）において、試料の流れ
方向に沿って順に存在してもよいし、混在していてもよ
い。あるいは、前記特異結合物質存在部（Ｂ）と前記検
出部存在部（Ｃ）とが同じ領域であり、そこに、前記特
異結合物質（κ）、前記標識特異結合物質（μ）および
不溶化されている前記分析対象物（ａ）または分析対象
物類縁物質（ι）が混在していてもよい。さらには、前
記したその他の変形例の構成であってもよい。

【０１６１】前記方法８を実施するための装置は、前記
特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結合物質（ξ
）および前記標識特異結合物質（ρ）が存在し、前記検
出部（Ｅ）には、前記分析対象物（ａ）または分析対象
物類縁物質（ν）が不溶化されている。ここで、前記特
異結合物質（ξ）および前記標識特異結合物質（ρ）は
、特異結合物質存在部（Ｂ）において、試料の流れ方向
に沿って順に存在してもよいし、混在してもよい。ある
いは、前記特異結合物質存在部（Ｂ）と前記検出部存在
部（Ｃ）とが同じ領域であり、そこに、前記特異結合物
質（ξ）、前記標識特異結合物質（ρ）および不溶化さ
れている前記分析対象物（ａ）または分析対象物類縁物
質（ν）が混在していてもよい。さらには、前記したそ
の他の構成の変形例であってもよい。

【０１６２】前記方法９を実施するための装置は、前記
特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記標識分析対象物（
σ）または前記標識分析対象物類縁物質（φ）と、前記
特異結合物質（ψ）が存在し、前記検出部（Ｅ）には、
前記特異結合物質（ψ）または前記特異結合物質（ω）
が不溶化されている。ここで、前記特異結合物質存在部
（Ｂ）において、前記標識分析対象物（σ）または前記
標識分析対象物類縁物質（φ）と、前記特異結合物質（
ψ）とが混在してもよい。あるいは、前記特異結合物質
存在部（Ｂ）と前記検出部存在部（Ｃ）とが同じ領域で
あってもよい。さらには、前記したその他の構成の変形
例であってもよい。しかし、特異結合物質存在部（Ｂ）
が独立した部位として存在し、そこに、前記特異結合物
質（ψ）と前記標識分析対象物（σ）または前記標識分
析対象物類縁物質（φ）とが、試料の流れ方向に沿って
この順に存在しているのがよい。

【０１６３】まとめとして、表１に、図１〜図９に基づ
いて説明した方法１〜方法９の各方法の、特異結合反応
に関与する物質相互の結合性を示した。表１に記載の通
り、方法１〜方法９を実施するに際し、本発明第三の態
様の装置を用いる場合、特異結合物質存在部（Ｂ）にお
ける標識物質と特定物質との配置により、発明の効果の
程度が変化する場合がある。すなわち、方法２、方法４
、方法５、方法９においては、特定物質の存在部を標識
物質存在部よりも試料添加部（Ａ）側に配置することが
好ましい。

【０１６４】特異結合物質存在部（Ｂ）で液流方向に対
して順序をつけて、特定物質と標識物質とを配置するに
は、例えば、特異結合物質存在部（Ｂ）を二領域にわけ
、それぞれに特定物質もしくは標識物質を存在させるか
、あるいは、特定物質を存在させた特異結合物質存在部
（Ｂ−１）と標識物質を存在させた特異結合物質存在部
（Ｂ−２）とを作製し、それらを好ましい順序で連通配
置させればよい。

【０１６５】

【表１】

【０１６６】ところで、本発明第三の態様の装置は、前
記したような１レーンのものに限定されない。方法１を
実施するための装置を例に説明すると、試料中の分析対
象物を半定量することが可能な特異結合分析装置であっ
て、共通の前記試料添加部（Ａ）と、複数の、前記特異
結合物質存在部（Ｂ）および前記検出部存在部（Ｃ）を
含むユニットが存在し、各ユニットは互いに独立してお
り、前記吸収部（Ｄ）は、共通部分として存在するか、
あるいは、前記ユニット各々に含まれ、かつ、前記特異
結合物質存在部（Ｂ）に存在する前記特異結合物質（ｂ
）および前記標識特異結合物質（ｅ）と、前記検出部（
Ｅ）に存在する前記特異結合物質（ｂ）または前記特異
結合物質（ｇ）のうちのいずれか１種以上の物質量がユ
ニットごとに異なるものである。

【０１６７】すなわち、図１３（Ｉ）に示すように、共
通の試料添加部（Ａ）と吸収部（Ｄ）との間に、特異結
合物質存在部（Ｂ）および検出部存在部（Ｃ）から構成
されるユニットが複数存在するもの、あるいは、図１３
（ＩＩ）に示すように、共通の試料添加部（Ａ）と、そ
の下流側に、特異結合物質存在部（Ｂ）、検出部存在部
（Ｃ）および吸収部（Ｄ）から構成されるユニットが複
数存在するものである。

【０１６８】なお、図１３（Ｉ）および（ＩＩ）におい
て、特異結合物質存在部（Ｂ）に存在する特異結合物質
（ｂ）および標識特異結合物質（ｅ）は、混在していて
もよい。

【０１６９】また、図１３（Ｉ）に示された装置の変形
例としては、図１４（Ｉ）に示す、共通の試料添加部（
Ａ）と吸収部（Ｄ）との間に、特異結合物質存在部（Ｂ
）兼検出部存在部（Ｃ）からなるユニットが複数存在す
るもの等があり、図１３（ＩＩ）に示された装置の変形
例としては、図１４（ＩＩ）に示す、共通の試料添加部
（Ａ）と、その下流側に、特異結合物質存在部（Ｂ）兼
検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）からなるユニッ
トが複数存在するもの、あるいは、図１４（ＩＩＩ）　
に示す、共通の試料添加部（Ａ）と、その下流側に、特
異結合物質存在部（Ｂ）および検出部存在部（Ｃ）兼吸
収部（Ｄ）からなるユニットが複数存在するもの等があ
る。

【０１７０】なお、図１４（ＩＩＩ）　に示す例におい
ては、検出部存在部（Ｃ）中の検出部（Ｅ）よりも下流
側が、吸収部（Ｄ）を兼ねている。

【０１７１】方法２〜方法９を実施するための装置であ
って、試料中の分析対象物を半定量することが可能な装
置については、各々説明しないが、特異結合物質存在部
（Ｂ）に存在する物質や、検出部（Ｅ）に不溶化されて
いる物質が異なる他は、上記した方法１を実施するため
の装置と同様である。

【０１７２】このような装置では、付着および／または
不溶化されている物質の量がユニットごとに異なり、そ
のために、検出部（Ｅ）における検出感度が異なるもの
となり、従って、標準曲線あるいは対照表なしで、半定
量が可能となるのである。ただし、信号強度は、各ユニ
ットで同等とし得る。

【０１７３】変量される物質は、いずれであってもよい
。例えば方法４、７、８などでは、検出部（Ｅ）に不溶
化される物質の量は大過剰であることが好ましく、特異
結合物質存在部（Ｂ）に存在する物質のうちのいずれか
あるいは全てを変量するのがよい。また、不溶化物質へ
の結合が競合法である場合（例えば方法７、８、９）は
、標識物質の量は一定とするのがよい。それにより、異
なる感度の測定結果の比較ができる。

【０１７４】その際、特異結合物質存在部（Ｂ）に存在
する物質のうちの、標識されていないいずれかの物質の
量が０であるユニットもあってもよい。その場合、その
ユニットは、本発明によって達成される希釈効果を示さ
ないが、そのユニットの結果と、希釈効果を示す他のユ
ニットにおける結果とを比較することで、やはり、異な
る感度の測定結果の比較が達成される。

【０１７５】なお、このような装置を定性または半定量
に用いる場合は、標識物として、染料、顔料、着色ラテ
ックス、金コロイド等の可視的に見ることのできるもの
を用いるのが好ましい。

【０１７６】また、定量に用いる場合は、各ユニットの
検出部存在部（Ｃ）を独立させる（他のユニットの検出
部存在部（Ｃ）の影響を受けないようにする）ために、
例えば、ユニット間に隔壁を設ける等の手段をとるとよ
い。

【０１７７】このような装置においても、先に１レーン
の装置についての説明で述べたように、各部位を構成す
る材料の材質、大きさ、厚さ、相互の連通性もしくは添
加剤の使用の有無等の条件は重要な因子である。そして
、前記ユニットごとに、これらの条件を変化させること
によっても、測定感度を変化させ得る。

【０１７８】このような検出感度の異なる複数のユニッ
トを有する装置を用いて測定した結果の一例を、図１５
および図１６に示す。

【０１７９】図１５の装置では、３ケ所の検出部（Ｅ−
１、Ｅ−２およびＥ−３）の検出感度が異なるものとな
るように、３ケ所の特異結合物質存在部（Ｂ−１、Ｂ−
２およびＢ−３）に存在せしめる特異結合物質等の量あ
るいは量比を変化させてある。なお、これは、不溶化さ
れた物質に対する他の物質の結合は、競合法によらない
例である。そして、分析対象物の量あるいは濃度が、（
Ｉ）は、検出感度未満であった例、（ＩＩ）は、Ｅ−１
の検出感度以上、Ｅ−２の検出感度未満であった例、（
ＩＩＩ）　は、Ｅ−２の検出感度以上Ｅ−３の検出感度
未満であった例、（ＩＶ）および（Ｖ）は、Ｅ−３の検
出感度以上であった例を示す。また、不溶化された物質
に対する他の物質の結合が競合法である場合は、分析対
象物の量あるいは濃度とそれに対する結果例は、この逆
順となる。

【０１８０】図１６の装置は、原理的には図１５の装置
と同じものであるが、結果が１、１０、１００、１００
０の数字として読みとれるように工夫したものである。

【０１８１】このような半定量に好適な装置は、癌患者
術後の腫瘍マーカーによるフォロー、ウイルス等の病原
体感染症における抗体価の変動のモニター、血中薬物濃
度のモニター、移植手術後の拒絶免疫反応のモニター、
炎症時における急性期蛋白の変動モニター、およびホル
モンの経時変化等を、迅速かつ簡便に半定量する場合に
特に有用である。

【０１８２】例えば、ヒト胎盤性ラクトゲン（ｈＰＬ）
は、ヒト胎盤より産生分泌されるホルモンであり、その
血中の半減期は１５分と短い。そのため、血中ｈＰＬ値
は、胎盤機能をまさに反映するものであるとされている
。

【０１８３】妊娠末期での血中ｈＰＬの正常値は４〜１
０μｇ／ｍｌであり、４μｇ／ｍｌ以下は切迫流産等の
危険域とされるが、ｈＰＬレベルは妊娠週数あるいは個
人差によっても異なるため、個人毎のｈＰＬの血中レベ
ルを経時的に測定して知っておくことが必要である。従
って、妊婦管理において、ｈＰＬの個人レベルを把握し
ながら、切迫流産等の緊急時に対応できる迅速な測定方
法が切望されていた。

【０１８４】このような場合、血中ｈＰＬの検出感度が
２，４，６μｇ／ｍｌである３ケ所の検出部（Ｅ）を有
する半定量の分析装置を用いて測定すれば、試料中のｈ
ＰＬ濃度は、＜２μｇ／ｍｌ、２〜４μｇ／ｍｌ、４〜
６μｇ／ｍｌ、＞６μｇ／ｍｌといった測定範囲に分け
られ、その結果、個人差あるいは妊娠週数を考慮して、
血中ｈＰＬ値が正常であるか否かを、的確に判断できる
ようになる。

【０１８５】従来、ｈＰＬの簡易定量法としては、赤血
球凝集法もしくはラテックス凝集法が用いられていたが
、半定量値を得るためには、試料の希釈列の調製を必要
とした。しかし、本発明によれば、このような試料の希
釈を必要とせず、試料を試料添加部（Ａ）に１回添加す
るだけで、異なる検出感度の検出部（Ｅ）の呈色強度の
比較のみで、試料中のｈＰＬ濃度が半定量できるように
なる。

【０１８６】また、別の例として、児を希望する夫婦に
おいて、婦人の排卵日の予知は、重要な意味をもつ。排
卵の予知は、月経周期中の血中あるいは尿中ＬＨ濃度ピ
ーク（ＬＨサージ）を検出することによって行なわれる
。ＬＨサージは、月経周期中の特定の日だけに検出され
る現象であるため、経時的な測定が必要である。また、
排卵はＬＨサージの１８時間後から２４時間後起こるこ
とから、ＬＨサージの日付の正確な特定を迅速に行なう
ことが必要である。

【０１８７】しかし、卵胞期あるいは黄体期のＬＨ基礎
値およびＬＨのピーク時の濃度も個人差があることが知
られている。すなわち、尿中ＬＨ濃度は、卵胞期または
黄体期で５０ＩＵ／１以下、ＬＨサージ１００〜４００
ＩＵ／ｌの範囲で個人差あるいは試料差が見られる。

【０１８８】従来、ＬＨの簡易半定量は、赤血球凝集法
またはＥＩＡ法で行なっていた。赤血球凝集法は、半定
量のためには試料の希釈列の調製が必要であり、希釈し
た試料数分だけの測定が必要となる。また、ＥＩＡ法で
は、濃度の異なる数種のＬＨ標準物質を試料と同時に反
応させて呈色強度を比較して半定量するため、迅速性と
簡易性にかける。

【０１８９】さらに、ＬＨの簡易定性法として、金コロ
イド凝集法が知られているが、検出感度ＬＨ　　１００
ＩＵ／ｌの金コロイド凝集法にて測定を行なうと、ＬＨ
ピークが高濃度である場合、ＬＨピークの前後の日の試
料も陽性となる可能性があり、ＬＨサージの特定が困難
となる。また、この方法の判定は、凝集による金コロイ
ド溶液の赤色から灰色への色変化を目視で行なうため、
逆にＬＨピークが低濃度の場合、判定結果が曖昧になり
、ＬＨサージの位置の特定が困難である。

【０１９０】しかし、例えば、尿中ＬＨの検出感度が５
０，１００，２００ＩＵ／ｌである検出部（Ｅ）を有す
る半定量用の本発明の分析装置を用いて測定すれば、＜
５０ＩＵ／ｌ、５０〜１００ＩＵ／ｌ、１００〜２００
ＩＵ／ｌμｇ、＞２００ＩＵ／ｌといったＬＨ濃度範囲
に確実に分けられる。これにより、試料を試料添加部（
Ａ）に添加する操作と検出部（Ｅ）での判定だけで、個
人のＬＨ基礎値を考慮してＬＨサージの確実な特定が可
能となる。

【０１９１】また、別の例として、ＨＢウイルス感染の
測定が挙げられる。ＨＢウイルスの感染の診断は緊急を
要する。この時、ＨＢｓ抗原の同定と定量は、活動性Ｈ
Ｂウイルスの状態をよく反映するため、その迅速かつ簡
便な定量が必要である。さらに、ＨＢｓ抗原を、ＨＢウ
イルス感染時以降に経時的に測定すれば、ＨＢウイルス
の増殖性、慢性肝炎への移行、または治療効果の判定等
に有用である。

【０１９２】一方、ウイルス抗原の他に、抗ＨＢｓ抗体
価の測定も、病態の判定に有用である。抗ＨＢｓ抗体価
の経時的定量測定ができれば、それが過去のウイルス感
染で獲得した抗体価であるか、現在ウイルスに感染して
抗体価が上昇しているのか、あるいはウイルス感染から
回復して抗体価が減少しているのかを知ることができる
。

【０１９３】本発明の装置は、迅速性と簡便性を兼ね備
え、かつ、経時的な分析対象物の変量追跡を容易とする
ものである。さらに、上記のＨＢウイルス等の測定に際
し、従来は、測定者はウイルス感染者の血清試料を扱う
ため、二次感染の恐れがあったが、本法では、試料を試
料添加部（Ａ）に添加するだけで測定可能であるため、
このようなリスクは回避されるのである。

【０１９４】以上述べた例は、本発明の装置の適用の一
例であり、迅速かつ簡便に定量値もしくは半定量値を的
確に判断する必要のある他の測定項目にも、本発明の装
置は有効に応用できる。

【０１９５】また、本発明第三の態様の装置には、下記
のような変形例も含まれる。

【０１９６】前記したように、図１５に示される装置は
、特異結合物質存在部（Ｂ）と検出部存在部（Ｃ）から
なるユニットを３個有するものであるが、この各ユニッ
トに存在する特異結合物質等の種類を変えることで、単
一試料中の複数の分析対象物を同時に測定することが可
能な特異結合分析装置とすることも可能である。もちろ
ん、条件によっては、図１３（Ｉ）、（ＩＩ）、図１４
（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）に示したような装置であ
っても同様である。

【０１９７】図１５に示される装置について述べると、
単一試料中の複数の分析対象物の同時測定の一例として
は、特異結合物質存在部（Ｂ−１）と検出部存在部（Ｃ
−１）からなるユニットは、ＣＥＡを検出し、特異結合
物質存在部（Ｂ−２）と検出部存在部（Ｃ−２）からな
るユニットは、ＡＦＰを検出し、特異結合物質存在部（
Ｂ−３）と検出部存在部（Ｃ−３）からなるユニットは
、ｈＣＧを検出する装置が考えられる。

【０１９８】さらに、本発明第三の態様には、複数の試
料を同時に測定することが可能な特異結合分析装置も包
含される。このような装置は、図１７に示すように、少
なくとも連続する試料添加部（Ａ）、特異結合物質存在
部（Ｂ）および検出部存在部（Ｃ）を有するユニットを
複数有し、各ユニットの構成は同じであるが互いに独立
しているものであり、集団検診等の多数の試料を同時に
測定する場合に有用である。この装置においても、特異
結合物質存在部（Ｂ）と検出部存在部（Ｃ）とが同じ領
域を占めている等の変形例も可能である。。

【０１９９】また、本発明第三の態様の装置のさらなる
変形例として、検出部存在部（Ｃ）と吸収部（Ｄ）との
関係のみが垂直方向となった、図１８および図１９に示
す例（各々、（Ｉ）が平面図、（ＩＩ）がｘ−ｘ線にお
ける断面図である）等もあげられる。

【０２００】以上説明した本発明第三の態様の装置は、
各々、本発明第一の態様あるいは第二の態様の方法を実
施するのに好適なものであり、上記した特徴に加え、試
料の添加工程と結果の判定工程のみで特異結合分析方法
を行ない得るという特徴も有する。また、結果の判定は
、視覚的に行なえるようにする（標識物として染料等を
用いる）と、専門の医療技術者でなくても、正確な判定
を行ない得る。

【０２０１】しかし、Ｂ／Ｆ分離等の工程も加える場合
は、本発明第一の態様あるいは第二の態様を実施するた
めの装置として、添加された試料等の液体が垂直方向に
移動する装置も可能である。

【０２０２】この一例として、先に説明した特異結合物
質存在部（Ｂ）と検出部（Ｃ）とが同じ領域を占める装
置であって、単一試料中の複数の分析対象物を測定可能
な装置を図２０に示す。なお、図２０において、（Ｉ）
は平面図、（ＩＩ）は（Ｉ）のｘ−ｘ線における断面図
である。

【０２０３】

【実施例】以下に、実施例をもって本発明を具体的に説
明する。

【０２０４】（実施例１）尿中ｈＣＧの測定（その１）
（１）分析装置の製造 下記の如く、図１５（Ｉ）に示す分析装置を製造した。

【０２０５】（ａ）染料標識抗ｈＣＧβ抗体の調製食塩
加リン酸緩衝液（０．０６７Ｍ　　ＰＢＳ、ｐＨ６．４
）にて２００μｇ／ｍｌの濃度に調製されたマウスモノ
クローナル抗ｈＣＧβ抗体（持田製薬（株））溶液０．
５ｍｌと、分散染料（フォロンブリリアントブルー、サ
ンド社）の水懸濁液（６５０ｎｍにおける吸光度が約２
００）０．５ｍｌとを混合し、それを、転倒攪拌しなが
ら、４℃にて一晩インキュベートした。インキュベート
終了後、ＰＢＳ（ｐＨ６．４）４．５ｍｌを添加し、１
５０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離し、得られた沈澱
をＰＢＳ（ｐＨ６．４）５．５ｍｌに再懸濁させた。こ
れを、１５０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離し、得ら
れた沈澱に保存液（０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳ
Ａ）／４％サッカライド／０．１％アジ化ナトリウム／
ＰＢＳ（ｐＨ６．４））５．５ｍｌを添加して染料標識
抗ｈＣＧβ抗体を得た。使用時まで４℃で保存した。

【０２０６】（ｂ）試料添加部（Ａ）の調製クロマトグ
ラフ用セルロース濾紙（アドバンテック東洋社、Ｎｏ．
５２６、厚さ０．７ｍｍ）をカッターで切断して、液進
方向（セルロース繊維の配向性がある方向）が１０ｍｍ
、液進方向の垂直方向が１７ｍｍの大きさの濾紙片（１
０×１７ｍｍ）を調製した。これに、０．３％ＢＳＡ／
０．１％ツイーン２０／ＰＢＳ（ｐＨ６．４）溶液を１
片あたり１００μｌ含浸させ、４５℃で乾燥した。

【０２０７】（ｃ）特異結合物質存在部（Ｂ）の調製染
料標識マウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体（（ａ）に
て調製したもの）を、バッファーＡ（１０％正常ウサギ
血清／４％サッカライド／０．５％ＢＳＡ／０．０６７
Ｍ　　ＰＢＳ（ｐＨ６．４））にて８倍に希釈した。こ
れと、バッファーＡにて、０、２、８μｇ／ｍｌに濃度
調整されたマウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体（非標
識物）溶液とを、各々１：１（ｖ：ｖ）の割合で混合し
、３種の溶液を調製した。これら３種の溶液を１種ずつ
、ポリエステル不織布（１０×５ｍｍ、厚さ０．５ｍｍ
）に２５μｌ含浸させ、４５℃で乾燥した。これにより
、後述する検出部（Ｅ−１，Ｅ−２，Ｅ−３）の検出感
度が、各々、ｈＣＧ１０ＩＵ／ｌ、ｈＣＧ４０ＩＵ／ｌ
、ｈＣＧ１６０ＩＵ／ｌとなる量比で前記２種の抗ｈＣ
Ｇ抗体を含有する、特異結合物質存在部（Ｂ−１，Ｂ−
２，Ｂ−３）として用いるポリエステル不織布３枚が得
られた。

【０２０８】（ｄ）検出部（Ｅ）を有する膜（検出部存
在部（Ｃ））の調製 ニトロセルロース膜（アドバンテック東洋社、孔径５μ
ｍ、２５×５ｍｍ、厚さ０．１６ｍｍ）の中心点に、５
００μｇ／ｍｌの濃度のウサギポリクローナル抗ｈＣＧ
抗体溶液（１０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含有）１μｌ
をスポットした。これを室温で乾燥した後、０．５％Ｂ
ＳＡ／０．１％ツイーン２０／ＰＢＳ（ｐＨ６．４）中
に浸漬してブロッキングし、濾紙上で乾燥した。同じも
のをさらに２枚調製した。

【０２０９】（ｅ）分析装置の組立て その断面図が図１１（ＩＩ）になるように、支持体（Ｆ
）である粘着シート上に、検出部存在部（Ｃ−１，Ｃ−
２，Ｃ−３）を１ｍｍ間隔で互い平行に固定後、特異結
合存在部（Ｂ−１，Ｂ−２，Ｂ−３）各々の一方の断端
と検出部存在部（Ｃ−１，Ｃ−２，Ｃ−３）各々の一方
の断端を１．５ｍｍの重なりを持って接合し、吸収部（
Ｄ）となるセルロース濾紙（アドバンテック東洋社、Ｎ
ｏ．５８５、１０×１７ｍｍ、厚さ０．８ｍｍ）の断端
と検出部存在部（Ｃ−１，Ｃ−２，Ｃ−３）各々のもう
一方の断端を１．５ｍｍの重なりを持って接合した。 次いで、試料添加部（Ａ）の断端と特異結合存在部（Ｂ
−１，Ｂ−２，Ｂ−３）各々のもう一方の断端を接触さ
せた。このように配置後、撥水性の紙を乗せ、その上か
ら軽くローラーをかけ、固定を確実にした。このように
して、３箇所の検出部（Ｅ−１，Ｅ−２，Ｅ−３）を有
する分析装置（図１５（Ｉ））を組み立てた。同じもの
を、全部で６コ製造した。なお、この分析装置は、マウ
スモノクロナール抗ｈＣＧβ抗体（非標識物）量により
、検出感度および信号（色）強度を調整したものである
。

【０２１０】（２）測定 （ａ）試料 ｈＣＧを０、１０、４０、１００、２００、５００ＩＵ
／ｌ含む尿試料を、各々１８０μｌ用意した。

【０２１１】（ｂ）測定手技 （１）で製造した分析装置各々の試料添加部（Ａ）に、
上記尿試料のうちのいずれかを、１８０μｌ添加した。 これにより、尿試料中のｈＣＧは、特異結合物質存在部
（Ｂ）にて、染料標識マウスモノクローナル抗ｈＣＧβ
抗体またはマウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体（非標
識物）と結合した後、検出部存在部（Ｃ）に運ばれ、検
出部（Ｅ）に不溶化されているウサギポリクローナル抗
ｈＣＧ抗体と結合した。その後、検出部（Ｅ）において
、染料標識マウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体由来の
信号（色）を測定した。なお、余剰の尿試料、染料標識
マウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体、マウスモノクロ
ーナル抗ｈＣＧβ抗体（非標識物）は、吸収部（Ｄ）に
吸収、保持された。

【０２１２】（ｃ）結果の判定 各尿試料が添加された分析装置の検出部（Ｅ−１，Ｅ−
２，Ｅ−３）における呈色は、表２および図１５に示す
通りであった。なお、表２においては、有色スポットを
認める場合を＋、＋＋（ただし、＋＋は＋よりも呈色強
度が大であることを示す。）有色スポットを認めない場
合を−で示した。また、図１５において、（Ｉ）は、ｈ
ＣＧ量が０ＩＵ／ｌの尿試料が添加された分析装置、（
ＩＩ）は、ｈＣＧ量が１０ＩＵ／ｌの尿試料が添加され
た分析装置、（ＩＩＩ　）は、ｈＣＧ量が４０または１
００ＩＵ／ｌの尿試料が添加された分析装置、（ＩＶ）
は、ｈＣＧ量が２００ＩＵ／ｌの尿試料が添加された分
析装置、（Ｖ）は、ｈＣＧ量が５００ＩＵ／ｌの尿試料
が添加された分析装置を示す。

【０２１３】

【０２１４】（実施例２）尿中ｈＣＧの測定（その２）
（１）分析装置の製造 下記の如く、図１５（Ｉ）に示す分析装置を製造した。

【０２１５】（ａ）染料標識抗マウスＩｇＧ抗体の調製
ＰＢＳにて２００μｇ／ｍｌの濃度に調製されたウサギ
抗マウスＩｇＧ抗体（ダコパッズ社）溶液０．５ｍｌと
、分散染料（フォロンブリリアントブルー、サンド社）
の水懸濁液（６５０ｎｍにおける吸光度が約２００）０
．５ｍｌとを用い、実施例１（１）（ａ）と同様の方法
で、染料標識抗マウスＩｇＧ抗体を得た。使用時まで４
℃で保存した。

【０２１６】（ｂ）試料添加部（Ａ）の調製実施例（１
）（ｂ）と同様に調製した。

【０２１７】（ｃ）特異結合物質存在部（Ｂ）の調製染
料標識抗マウスＩｇＧ抗体（（ａ）にて調製したもの）
を、バッファーＡにて８倍に希釈した。これと、バッフ
ァーＡにて、０．２、２．０、８．０μｇ／ｍｌに濃度
調整されたマウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体溶液と
を、各々１：１（ｖ：ｖ）の割合で混合し、３種の溶液
を調製した。これら３種の溶液を１種ずつ、ポリエステ
ル不織布（１０×５ｍｍ、厚さ０．５ｍｍ）に２５μｌ
含浸させ、４５℃で乾燥した。これにより、後述する検
出部（Ｅ−１，Ｅ−２，Ｅ−３）の検出感度が、各々、
ｈＣＧ１０ＩＵ／ｌ、ｈＣＧ４０ＩＵ／ｌ、ｈＣＧ１６
０ＩＵ／ｌとなる量比で染料標識抗マウスＩｇＧ抗体と
マウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体とを含有する、特
異結合物質存在部（Ｂ−１，Ｂ−２，Ｂ−３）として用
いるポリエステル不織布３枚が得られた。

【０２１８】（ｄ）検出部（Ｅ）を有する膜（検出部存
在部（Ｃ））の調製 実施例１（１）（ｄ）と同様に調製した。

【０２１９】（ｅ）分析装置の組立て 実施例１（１）（ｅ）と同様に組立てた。なお、この分
析装置は、マウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体量によ
り、検出感度を調整したものである。

【０２２０】（２）測定 （ａ）試料 ｈＣＧを０、１０、４０、１００、２００、５００ＩＵ
／ｌ含む尿試料を、各々１８０μｌ用意した。

【０２２１】（ｂ）測定手技 （１）で製造した分析装置各々の試料添加部（Ａ）に、
上記尿試料のうちのいずれかを、１８０μｌ添加した。 これにより、尿試料中のｈＣＧは、特異結合物質存在部
（Ｂ）にて、マウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体を介
して染料標識抗マウスＩｇＧ抗体と結合した後、あるい
は結合せずに、検出部存在部（Ｃ）に運ばれ、検出部（
Ｅ）に不溶化されているウサギポリクローナル抗ｈＣＧ
抗体と結合した。その後、検出部（Ｅ）において、染料
標識抗マウスＩｇＧ抗体由来の信号（色）を測定した。 なお、余剰の尿試料、染料標識抗マウスＩｇＧ抗体、マ
ウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体は、吸収部（Ｄ）に
吸収、保持された。

【０２２２】（ｃ）結果の判定 各尿試料が添加された分析装置の検出部（Ｅ−１，Ｅ−
２，Ｅ−３）における呈色は、表３および図１５に示す
通りであった。なお、表３においては、有色スポットを
認める場合を＋、＋＋（ただし、＋＋は＋よりも呈色強
度が大であることを示す。）有色スポットを認めない場
合を−で示した。また、図１５において、（Ｉ）は、ｈ
ＣＧ量が０ＩＵ／ｌの尿試料が添加された分析装置、（
ＩＩ）は、ｈＣＧ量が１０ＩＵ／ｌの尿試料が添加され
た分析装置、（ＩＩＩ）　は、ｈＣＧ量が４０または１
００ＩＵ／ｌの尿試料が添加された分析装置、（ＩＶ）
は、ｈＣＧ量が２００ＩＵ／ｌの尿試料が添加された分
析装置、（Ｖ）は、ｈＣＧ量が５００ＩＵ／ｌの尿試料
が添加された分析装置を示す。

【０２２３】

【０２２４】（実施例３）血清中ＡＦＰの測定（１）分
析装置の製造 下記の如く、図１５（Ｉ）に示す分析装置を製造した。

【０２２５】（ａ）染料標識マウスモノクローナル抗ヒ
トＡＦＰ抗体Ｎｏ．１の調製 ＰＢＳにて２００μｇ／ｍｌの濃度に調製されたマウス
モノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗体Ｎｏ．１（持田製薬（
株））溶液０．５ｍｌと、分散染料（カヤロンファスト
ルビンＢ、日本化薬（株））０．５ｍｌとを用い、実施
例１（１）（ａ）と同様の方法で、染料標識マウスモノ
クローナル抗ヒトＡＦＰ抗体Ｎｏ．１を得た。使用時ま
で４℃で保存した。

【０２２６】（ｂ）試料添加部（Ａ）の調製ガラス繊維
製濾紙（アドバンテック東洋社、ＧＣ−５０、１０×１
５ｍｍ、厚さ０．２ｍｍ）へ０．３％ＢＳＡ／０．１％
ツイーン２０／ＰＢＳ（ｐＨ６．４）溶液を１片あたり
６０μｌ含浸させ、４５℃で乾燥した。

【０２２７】（ｃ）特異結合物質存在部（Ｂ）の調製染
料標識マウスモノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗体Ｎｏ．１
（（ａ）にて調製したもの）を、バッファーＡにて８倍
に希釈した。これと、バッファーＡにて、０、４、６μ
ｇ／ｍｌに濃度調整されたマウスモノクローナル抗ＡＦ
Ｐ抗体Ｎｏ．２（持田製薬（株））溶液とを、各々１：
１（ｖ：ｖ）の割合で混合し、３種の溶液を調製した。 これら３種の溶液を１種ずつ、ポリエステル不織布（１
０×５ｍｍ、厚さ０．５ｍｍ）に２５μｌ含浸させ、４
５℃で乾燥した。これにより、後述する検出部（Ｅ−１
，Ｅ−２，Ｅ−３）の検出感度が、各々、ＡＦＰ５ｎｇ
／ｍｌ、ＡＦＰ１００ｎｇ／ｍｌ、ＡＦＰ５００ｎｇ／
ｍｌとなる量比で前記２種の抗ＡＦＰ抗体を含有する、
特異結合物質存在部（Ｂ−１，Ｂ−２，Ｂ−３）として
用いるポリエステル不織布３枚が得られた。

【０２２８】（ｄ）検出部（Ｅ）を有する膜（検出部存
在部（Ｃ））の調製 ニトロセルロース膜（アドバンテック東洋社、孔径５μ
ｍ、２５×１７ｍｍ、厚さ０．１６ｍｍ）上に、５ｍｍ
間隔に、厚さ１．０ｍｍのプラスチック板のエッジで線
を２本引き、連通しない３つの部分に分けた。次に、５
００ｎｇ／ｍｌの濃度のマウスモノクロ−ナル抗ＡＦＰ
抗体Ｎｏ．２溶液１μｌを、エッジで分けられた３つの
部分の中心点に各々ひとつずつスポットし、検出部（Ｅ
−１）、検出部（Ｅ−２）、および検出部（Ｅ−３）と
した。これを乾燥させた後、０．５％ＢＳＡ／０．１％
ツイーン２０／ＰＢＳ（ｐＨ６．４）中に浸漬し、再度
乾燥させ、３箇所の検出部（Ｅ−１，Ｅ−２，Ｅ−３）
を有する膜（検出部存在部（Ｃ））を調製した。

【０２２９】（ｅ）分析装置の組立て その断面図が図１１（ＩＩ）になるように、支持体（Ｆ
）である粘着シート上に、検出部存在部（Ｃ）を固定後
、特異結合存在部（Ｂ−１，Ｂ−２，Ｂ−３）各々の一
方の断端と検出部存在部（Ｃ）の一方の断端を、１．５
ｍｍの重なりを持って接合し、吸収部（Ｄ）となるセル
ロース濾紙（アドバンテック東洋社、Ｎｏ．５８５、１
０×１７ｍｍ、厚さ０．８ｍｍ）の断端と検出部存在部
（Ｃ）のもう一方の断端を１．５ｍｍの重なりを持って
接合した。次いで、試料添加部（Ａ）の断端と特異結合
存在部（Ｂ−１，Ｂ−２，Ｂ−３）各々のもう一方の断
端を接触させた。このように配置後、撥水性の紙を乗せ
、その上から軽くローラーをかけ、固定を確実にした。 このように配置後、撥水性の紙を乗せ、その上から軽く
ローラーをかけ、固定を確実にした。このようにして、
３箇所の検出部（Ｅ−１，Ｅ−２，Ｅ−３）を有する分
析装置（図１５（Ｉ））を組み立てた。同じものを、全
部で５コ製造した。なお、この分析装置は、マウスモノ
クロナール抗ＡＦＰ抗体Ｎｏ．２（不溶化されていない
もの）の量により、検出感度を調整したものである。

【０２３０】（２）測定 （ａ）試料 ＡＦＰを０、５、１００、５００、１０００ｎｇ／ｍｌ
含む血清試料を、各々１８０μｌ用意した。

【０２３１】（ｂ）測定手技 （１）で製造した分析装置各々の試料添加部（Ａ）に、
上記血清試料のうちのいずれかを、１８０μｌ添加した
。これにより、血清試料中のＡＦＰは、特異結合物質存
在部（Ｂ）にて、染料標識マウスモノクローナル抗ヒト
ＡＦＰ抗体Ｎｏ．１および／またはマウスモノクローナ
ル抗ヒトＡＦＰ抗体Ｎｏ．２と結合した後、検出部存在
部（Ｃ）に運ばれ、マウスモノクローナル抗ヒトＡＦＰ
抗体Ｎｏ．２と結合しなかったものが、検出部（Ｅ）に
不溶化されているマウスモノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗
体Ｎｏ．２と結合した。その後、検出部（Ｅ）において
、染料標識マウスモノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗体Ｎｏ
．１に由来する信号（色）を測定した。なお、余剰の血
清試料や、ＡＦＰに結合した、あるいは結合しない染料
標識マウスモノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗体Ｎｏ．１、
マウスモノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗体Ｎｏ．２は、吸
収部（Ｄ）に吸収、保持された。

【０２３２】（ｃ）結果の判定 各血清試料が添加された分析装置の検出部Ｅ（Ｅ−１，
Ｅ−２，Ｅ−３）における呈色は、表４および図１５に
示す通りであった。なお、表４においては、有色スポッ
トを認める場合を＋、＋＋（ただし、＋＋は＋よりも呈
色強度が大であることを示す。）、有色スポットを認め
ない場合を−で示した。また、図１５において、（Ｉ）
は、ＡＦＰ量が０ｎｇ／ｍｌの血清試料が添加された分
析装置、（ＩＩ）は、ＡＦＰ量が５ｎｇ／ｍｌの血清試
料が添加された分析装置、（ＩＩＩ）　は、ＡＦＰ量が
１００ｎｇ／ｍｌの血清試料が添加された分析装置、（
ＩＶ）は、ＡＦＰ量が５００ｎｇ／ｍｌの血清試料が添
加された分析装置、（Ｖ）　は、ＡＦＰ量が１０００ｎ
ｇ／ｍｌの血清試料が添加された分析装置を示す。

【０２３３】

【０２３４】（実施例４）尿中エストロゲンの測定（そ
の１） （１）分析装置の製造 下記の如く、図１５（Ｉ）に示す装置であって、ただし
、特異結合物質存在部（Ｂ）および検出部存在部（Ｃ）
が各々２箇所である分析装置を製造した。

【０２３５】（ａ）１７−カルボキシメチルエストロン
−ＢＳＡの調製 １７−カルボキシメチルエストロンを、酸無水物法（Ｅ
ｒｌａｎｇｅｒ，　Ｂ．Ｆ．，　ｅｔ．ａｌ．，　Ｍｅ
ｔｈｏｄ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　
ｅｄ．ｂｙ　Ｗｉｌｌｉａｍ，　Ｃ．Ａ．，　Ｖｏｌ．
１，　ｐ．ｐ．１４１−１５１，　Ａｃａｄｅｍｉｃ　
ｐｒｅｓｓ　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，　１９６８）にてＢＳ
Ａに結合（モル比にて、１７−カルボキシメチルエスト
ロン：ＢＳＡ＝１１：１）させ、セファデックスＧ−２
５で精製し、１７−カルボキシメチルエストロン−ＢＳ
Ａを調製した。

【０２３６】（ｂ）金コロイド標識１７−カルボキシメ
チルエストロン−ＢＳＡの調製 （ａ）で調製した１７−カルボキシメチルエストロン−
ＢＳＡ０．２ｍｇを、０．２Ｍの炭酸カリウム溶液を添
加してｐＨ７．４としたコロイド金溶液（金コロイドの
粒径１０ｎｍ、バイオセル　　リサーチ　　ラボラトリ
ー社製）２０ｍｌに添加し、室温で１０分間攪拌後、０
．１％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６０００を０
．５ｍｌ添加し、さらに１０分間室温で攪拌した。その
後、１５０００ｒｐｍにて６０分間の遠心分離をした。 得られた沈殿に、０．３％ＢＳＡ／０．２５％ＰＥＧ６
０００／０．１Ｍトリス（ハイドロキシメチル）アミノ
メタン（Ｔｒｉｓ）（塩酸でｐＨ７．６としたもの）１
０ｍｌを添加し、再び１５０００ｒｐｍにて６０分間の
遠心分離をした。得られた沈殿に、バッファーＢ（０．
３％ＢＳＡ／０．２５％ＰＥＧ６０００／４％サッカラ
イド／０．１Ｍ　　Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６））４ｍｌに
懸濁し、金コロイド標識１７−カルボキシメチルエスト
ロン−ＢＳＡを得た。使用時まで４℃で保存した。

【０２３７】（ｃ）試料添加部（Ａ）の調製ガラス繊維
製濾紙（アドバンテック東洋社、ＧＣ−５０、１０×１
１ｍｍ、厚さ０．２ｍｍ）へ０．３％ＢＳＡ／０．２５
％ＰＥＧ６０００／０．１Ｍ　　Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６
）溶液を１片あたり７０μｌ含浸させ、４５℃で乾燥さ
せた。

【０２３８】（ｄ）特異結合物質存在部（Ｂ）の調製金
コロイド標識１７−カルボキシメチルエストロン−ＢＳ
Ａ（（ｂ）にて調製したもの）を、バッファーＢにて８
倍に希釈した。これと、バッファーＢにて、０または１
６μｇ／ｍｌに濃度調整されたマウスモノクローナル抗
Ｅ３　抗体（持田製薬（株））溶液とを、各々１：１（
ｖ：ｖ）の割合で混合し、２種の溶液を調製した。これ
ら２種の溶液を１種ずつ、ガラス繊維製濾紙（アドバン
テック東洋社、ＧＣ−５０、１０×５ｍｍ、厚さ０．２
５ｍｍ）に２５μｌ含浸させ、４５℃で乾燥した。これ
により、後述する検出部（Ｅ−１，Ｅ−２）の検出感度
が、各々、Ｅ３１μｇ／ｍｌ、Ｅ３　　　１０μｇ／ｍ
ｌとなる量比で金コロイド標識１７−カルボキシメチル
エストロン−ＢＳＡとマウスモノクローナル抗Ｅ３　抗
体とを含有する、特異結合物質存在部（Ｂ−１，Ｂ−２
）として用いるガラス繊維製濾紙２枚が得られた。

【０２３９】（ｅ）検出部（Ｅ）を有する膜（検出部存
在部（Ｃ））の調製 ニトロセルロース膜（アドバンテック東洋社、孔径５μ
ｍ、２５×５ｍｍ、厚さ０．１６ｍｍ）の中心点に、２
００μｇ／ｍｌの濃度のマウスモノクローナル抗Ｅ３抗
体（持田製薬（株）、１０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含
有）溶液１μｌをスポットし、室温で乾燥させたあと、
これを、０．５％ＢＳＡ／０．２５％ＰＥＧ６０００／
０．１Ｍ　　Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）中に浸漬してブロ
ッキングし、その後乾燥させた。同じものをもう１枚調
製した。

【０２４０】（ｆ）分析装置の組立て その断面図が図１１（ＩＩ）になるように、支持体（Ｆ
）である粘着シート上に、検出部存在部（Ｃ−１，Ｃ−
２）を１ｍｍ間隔で互い平行に固定後、特異結合存在部
（Ｂ−１，Ｂ−２）各々の一方の断端と検出部存在部（
Ｃ−１，Ｃ−２）各々の一方の断端を１．５ｍｍの重な
りを持って接合し、次に、吸収部（Ｄ）となるセルロー
ス濾紙（アドバンテック東洋社、Ｎｏ．５８５、１０×
１７ｍｍ、厚さ０．８ｍｍ）の断端と検出部存在部（Ｃ
−１，Ｃ−２）各々のもう一方の断端を各々１．５ｍｍ
の重なりを持って接合した。次いで、試料添加部（Ａ）
の断端と特異結合存在部（Ｂ−１，Ｂ−２）各々のもう
一方の断端を接触させた。このように配置後、撥水性の
紙を乗せ、その上から軽くローラーをかけ、固定を確実
にした。このようにして、２箇所の検出部（Ｅ−１，Ｅ
−２）を有する分析装置を組み立てた。同じものを、全
部で５コ製造した。なお、この分析装置は、マウスモノ
クローナル抗Ｅ３　抗体（不溶化されていないもの）の
量により、検出感度を調整したものである。

【０２４１】（２）測定 （ａ）試料 Ｅ３　を０、０．５、１．０、５．０、１０μｇ／ｍｌ
含む尿試料を、各々１８０μｌ用意した。

【０２４２】（ｂ）測定手技 （１）で製造した分析装置各々の試料添加部（Ａ）に、
上記尿試料のうちのいずれかを、１２０μｌ添加した。 これにより、特異結合物質存在部（Ｂ）に存在する金コ
ロイド標識１７−カルボキシメチルエストロン−ＢＳＡ
（（ｂ）にて調製したもの）とマウスモノクローナル抗
Ｅ３　抗体（持田製薬（株））とが尿試料中に溶けて検
出部存在部（Ｃ）に運ばれ、マウスモノクローナル抗Ｅ
３　抗体（不溶化されていないもの）と結合しなかった
金コロイド標識１７−カルボキシメチルエストロン−Ｂ
ＳＡと尿試料中のＥ３　とが、競合して、検出部（Ｅ）
に不溶化されているマウスモノクローナル抗Ｅ３　抗体
と結合した。その後、検出部（Ｅ）において、金コロイ
ド標識１７−カルボキシメチルエストロン−ＢＳＡに由
来する信号（金コロイドの色）を測定した。なお、余剰
の尿試料や、マウスモノクローナル抗Ｅ３　抗体に結合
したあるいは結合しない金コロイド標識１７−カルボキ
シメチルエストロン−ＢＳＡは、吸収部（Ｄ）に吸収、
保持された。

【０２４３】（ｃ）結果の判定 各尿試料が添加された分析装置の検出部（Ｅ−１，Ｅ−
２）における呈色は、表５に示す通りであった。なお、
表５においては、有色スポットを認める場合を＋、有色
スポットを認めない場合を−で示した。

【０２４４】

【０２４５】（実施例５）尿中エストロゲンの測定（そ
の２） （１）分析装置の製造 下記の如く、図１５（Ｉ）に示す装置であって、ただし
、特異結合物質存在部（Ｂ）および検出部存在部（Ｃ）
が各々２箇所である分析装置を製造した。

【０２４６】（ａ）金コロイド標識マウスモノクローナ
ル抗Ｅ３　抗体の調製 １７−カルボキシメチルエストロン−ＢＳＡのかわりに
マウスモノクローナル抗Ｅ３　抗体（持田製薬（株））
を使用した以外は、実施例４（１）（ｂ）と同様の方法
により、金コロイド標識マウスモノクローナル抗Ｅ３　
抗体を得た。使用時まで４℃で保存した。

【０２４７】（ｂ）試料添加部（Ａ）の調製実施例４（
１）（ｃ）と同様に調製した。

【０２４８】（ｃ）特異結合物質存在部（Ｂ）の調製金
コロイド標識マウスモノクローナル抗Ｅ３　抗体（（ａ
）にて調製したもの）を、バッファーＢにて８倍に希釈
した。これと、バッファーＢにて、０または１２μｇ／
ｍｌに濃度調整されたマウスモノクローナル抗Ｅ３　抗
体（持田製薬（株））溶液とを、各々１：１（ｖ：ｖ）
の割合で混合し、２種の溶液を調製した。これら２種の
溶液を１種ずつ、ガラス繊維製濾紙（アドバンテック東
洋社、ＧＣ−５０、１０×５ｍｍ、厚さ０．２５ｍｍ）
に２５μｌ含浸させ、４５℃で乾燥した。これにより、
後述する検出部（Ｅ−１，Ｅ−２）の検出感度が、各々
、Ｅ３１μｇ／ｍｌ、Ｅ３　　　１０μｇ／ｍｌとなる
量比で金コロイド標識マウスモノクローナル抗Ｅ３　抗
体と非標識マウスモノクローナル抗Ｅ３　抗体とを含有
する、特異結合物質存在部（Ｂ−１，Ｂ−２）として用
いるガラス繊維製濾紙２枚が得られた。

【０２４９】（ｄ）検出部（Ｅ）を有する膜（検出部存
在部（Ｃ））の調製 ニトロセルロース膜（アドバンテック東洋社、孔径５μ
ｍ、２５×５ｍｍ、厚さ０．１６ｍｍ）の中心点に、２
００μｇ／ｍｌの濃度の１７−カルボキシメチルエスト
ロン−ＢＳＡのＰＢＳ溶液１μｌをスポットし、室温で
乾燥させたあと、これを、０．５％ＢＳＡ／０．２５％
ＰＥＧ６０００／０．１Ｍ　　Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）
中に浸漬してブロッキングし、その後乾燥させた。同じ
ものをもう１枚調製した。

【０２５０】（ｅ）分析装置の組立て 実施例４（１）（ｆ）と同様に行ない、２箇所の検出部
（Ｅ−１，Ｅ−２）を有する分析装置を組み立てた。同
じものを全部で５コ製造した。なお、この分析装置は、
非標識マウスモノクローナル抗Ｅ３　抗体の量により、
検出感度を調整したものである。

【０２５１】（２）測定 （ａ）試料 Ｅ３　を０、０．５、１．０、５．０、１０μｇ／ｍｌ
含む尿試料を、各々１８０μｌ用意した。

【０２５２】（ｂ）測定手技 （１）で製造した分析装置各々の試料添加部（Ａ）に、
上記尿試料のうちのいずれかを、１２０μｌ添加した。 これにより、特異結合物質存在部（Ｂ）に存在する金コ
ロイド標識マウスモノクローナル抗Ｅ３　抗体（（ａ）
にて調製したもの）と非標識マウスモノクローナル抗Ｅ
３　抗体（持田製薬（株））とが尿試料中に溶けて検出
部存在部（Ｃ）に運ばれ、尿試料中のＥ３と結合しなか
った、金コロイド標識マウスモノクローナル抗Ｅ３　抗
体と非標識マウスモノクローナル抗Ｅ３　抗体とが競合
して、検出部（Ｅ）に不溶化されている１７−カルボキ
シメチルエストロン−ＢＳＡと結合した。その後、検出
部（Ｅ）において、金コロイド標識マウスモノクローナ
ル抗Ｅ３抗体に由来する信号（金コロイドの色）を測定
した。なお、余剰の尿試料や、Ｅ３　と結合した（ある
いは結合しない）金コロイド標識マウスモノクローナル
抗Ｅ３　抗体および非標識マウスモノクローナル抗Ｅ３
　抗体は、吸収部（Ｄ）に吸収、保持された。

【０２５３】（ｃ）結果の判定 各尿試料が添加された分析装置の検出部（Ｅ−１，Ｅ−
２）における呈色は、表６に示す通りであった。なお、
表６においては、有色スポットを認める場合を＋、有色
スポットを認めない場合を−で示した。

【０２５４】

【０２５５】（実施例６）血清ＨＢｓ抗体価の測定（１
）分析装置の製造 下記の如く、図１５（Ｉ）に示す装置であって、ただし
、特異結合物質存在部（Ｂ）および検出部存在部（Ｃ）
が各々２箇所である分析装置を製造した。

【０２５６】（ａ）染料標識ＨＢｓ抗原の調製ＰＢＳに
て２００μｇ／ｍｌの濃度に調製された精製ＨＢｓ抗原
（血漿由来、チェイルシュガー社）溶液０．５ｍｌと、
分散染料（フォロンブリリアントブルー、サンド社）の
水懸濁液（６５０ｎｍにおける吸光度が約２００）０．
５ｍｌとを用い、実施例１（１）（ａ）と同様の方法で
、染料標識ＨＢｓ抗原を得た。使用時まで４℃で保存し
た。

【０２５７】（ｂ）試料添加部（Ａ）の調製ガラス繊維
製濾紙（アドバンテック東洋社、ＧＣ−５０、１０×１
１ｍｍ、厚さ０．１６ｍｍ）へ０．３％ＢＳＡ／０．１
％ツイーン２０／０．０６７Ｍ　　ＰＢＳ（ｐＨ６．４
）溶液を１片あたり７０μｌ含浸させ、４５℃で乾燥し
た。

【０２５８】（ｃ）特異結合存在部（Ｂ）の調製染料標
識ＨＢｓ抗原（（ａ）にて調製したもの）を、バッファ
ーＡにて８倍に希釈した。これと、バッファーＡにて、
０または１０μｇ／ｍｌに濃度調整されたＨＢｓ抗原（
酵母由来リコンビナントＨＢｓ）（非標識物）溶液とを
、各々１：１（ｖ：ｖ）の割合で混合し、２種の溶液を
調製した。これら２種の溶液を１種ずつ、ポリエステル
不織布（１０×５ｍｍ、厚さ０．５ｍｍ）に２５μｌ含
浸させ、４５℃で乾燥した。これにより、後述する検出
部（Ｅ−１，Ｅ−２）の検出感度が、受身赤血球凝集法
（ＰＨＡ法）での力価１６倍以上の試料が陽性となる、
あるいは、該力価１２８倍以上の試料が陽性となる量比
で前記２種のＨＢｓ抗原を含有する、特異結合物質存在
部（Ｂ−１，Ｂ−２）として用いるポリエステル不織布
２枚が得られた。

【０２５９】（ｄ）検出部（Ｃ）を有する膜の調製ニト
ロセルロース膜（アドバンテック東洋社、孔径５μｍ、
１０×５ｍｍ、厚さ０．１６ｍｍ）の中心点に、２４７
μｇ／ｍｌの濃度のＨＢｓ抗原（酵母由来リコンビナン
トＨＢｓ）のＰＢＳ溶液１μｌをスポットし、それを乾
燥した後、０．５％カゼイン／０．１％ツイーン２０／
ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中に浸漬してブロッキングし、濾
紙上で乾燥した。同じものをさらに１枚調製した。

【０２６０】（ｅ）分析装置の組立て 実施例４（１）（ｆ）と同様に行ない、２箇所の検出部
（Ｅ−１，Ｅ−２）を有する分析装置を組み立てた。同
じものを、全部で５コ製造した。なお、この分析装置は
、ＨＢｓ抗原（酵母由来リコンビナントＨＢｓ）（不溶
化されていないもの）の量により、検出感度を調整した
ものである。

【０２６１】（２）測定 （ａ）試料 ＨＢｓ陰性血清試料、ＨＢｓ陽性血清試料１（ＰＨＡ法
での力価１６倍）、ＨＢｓ陽性血清試料２（ＰＨＡ法で
の力価６４倍）、ＨＢｓ陽性血清試料３（ＰＨＡ法での
力価１２８倍）、ＨＢｓ陽性血清試料４（ＰＨＡ法での
力価５１２倍）を、各々１８０μｌ用意した。

【０２６２】（ｂ）測定手技 （１）で製造した分析装置各々の試料添加部（Ａ）に、
上記血清試料のうちのいずれかを、１８０μｌ添加した
。これにより、血清試料中の抗ＨＢｓ抗体は、特異結合
物質存在部（Ｂ）にて、染料標識ＨＢｓ抗原（（ａ）に
て調製したもの）および／またはＨＢｓ抗原（酵母由来
リコンビナントＨＢｓ）（非標識物）と結合した後、検
出部存在部（Ｃ）に運ばれ、ＨＢｓ抗原との結合部位が
残存している抗ＨＢｓ抗体が、検出部（Ｅ）に不溶化さ
れているＨＢｓ抗原（酵母由来リコンビナントＨＢｓ）
と結合した。そして、検出部（Ｅ）に不溶化されている
ＨＢｓ抗原に、血清試料中の抗ＨＢｓ抗体を介して結合
した染料標識ＨＢｓ抗原由来の信号（色）を測定した。

【０２６３】（ｃ）結果の判定 各尿試料が添加された分析装置の検出部（Ｅ−１，Ｅ−
２）における呈色は、表７に示す通りであった。なお、
表７においては、有色スポットを認める場合を＋、＋＋
（ただし、＋＋は＋よりも呈色強度が大であることを示
す。）、有色スポットを認めない場合を−で示した。

【０２６４】

【０２６５】（実施例７）血清ＨＢｓの測定（１）分析
装置の製造 下記の如く、図１５（Ｉ）に示す分析装置を製造した。

【０２６６】（ａ）染料標識マウスモノクローナル抗Ｈ
Ｂｓ抗体Ｎｏ．１の調製 マウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体のかわりにマウス
モノクローナル抗ＨＢｓ抗体Ｎｏ．１（持田製薬（株）
）を用いた以外は、実施例１（１）（ａ）と同様に行な
い、染料標識マウスモノクローナル抗ＨＢｓ抗体Ｎｏ．
１を得た。使用時まで４℃で保存した。

【０２６７】（ｂ）試料添加部（Ａ）の調製実施例１（
１）（ｂ）と同様に調製した。

【０２６８】（ｃ）特異結合物質存在部（Ｂ）の調製染
料標識マウスモノクローナル抗ＨＢｓ抗体Ｎｏ．１（（
ａ）にて調製したもの）を、バッファーＡにて１０倍に
希釈した。これと、バッファーＡにて、０、２、８μｇ
／ｍｌに濃度調整されたマウスモノクローナル抗ＨＢｓ
抗体Ｎｏ．２（持田製薬（株）、非標識物）溶液とを、
各々１：１（ｖ：ｖ）の割合で混合し、３種の溶液を調
製した。これら３種の溶液を１種ずつ、ポリエステル不
織布（１０×５ｍｍ、厚さ０．５ｍｍ）に２５μｌ含浸
させ、４５℃で乾燥した。これにより、後述する検出部
（Ｅ−１，Ｅ−２，Ｅ−３）の検出感度が、各々、ＨＢ
ｓ５ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、１０００ｎｇ／ｍ
ｌとなる量比で前記染料標識マウスモノクローナル抗Ｈ
Ｂｓ抗体Ｎｏ．１、マウスモノクローナル抗ＨＢｓ抗体
Ｎｏ．２を含有する、特異結合物質存在部（Ｂ−１，Ｂ
−２，Ｂ−３）として用いるポリエステル不織布３枚が
得られた。

【０２６９】（ｄ）検出部（Ｅ）を有する膜（検出部存
在部（Ｃ））の調製 ウサギポリクローナル抗ｈＣＧ抗体のかわりにマウスモ
ノクローナル抗ＨＢｓ抗体Ｎｏ．２（持田製薬（株））
を用いた以外は、実施例１（１）（ｄ）と同様に調製し
た。同じものをさらに２枚調製した。

【０２７０】（ｅ）分析装置の組立て 実施例１（１）（ｅ）と同様に組み立てた。なお、この
分析装置は、マウスモノクローナル抗ＨＢｓ抗体Ｎｏ．
２（不溶化されていないもの）の量により、検出感度を
調整したものである。

【０２７１】（２）測定 （ａ）試料 下記の血清試料を、各々１８０μｌ用意した。カッコ内
は感染してからの経過時間を示す。 （ＨＢＶ感染患者の血清試料１〜５） 試料１：ＨＢＶ感染前の血清 試料２：ＨＢＶ感染後１０週の血清 試料３：ＨＢＶ感染後２０週の血清 試料４：ＨＢＶ感染後３０週の血清 試料５：ＨＢＶ感染後４０週の血清

【０２７２】（ｂ）測定手技 （１）で製造した分析装置各々の試料添加部（Ａ）に、
上記血清試料のうちのいずれかを、１８０μｌ添加した
。これにより、血清試料中のＨＢｓ抗原は、特異結合物
質存在部（Ｂ）にて、染料標識マウスモノクローナル抗
ＨＢｓ抗体Ｎｏ．１および／またはマウスモノクローナ
ル抗ＨＢｓ抗体Ｎｏ．２（非標識物）と結合した後、検
出部存在部（Ｃ）に運ばれ、マウスモノクローナル抗Ｈ
Ｂｓ抗体Ｎｏ．２と結合しなかったものが、検出部（Ｅ
）に不溶化されているマウスモノクローナル抗ＨＢｓ抗
体Ｎｏ．２と結合した。その後、検出部（Ｅ）において
、染料標識マウスモノクローナル抗ＨＢｓ抗体Ｎｏ．１
由来の信号（色）を測定した。

【０２７３】（３）結果の判定 各試料が添加された分析装置の検出部（Ｅ−１，Ｅ−２
，Ｅ−３）における呈色は、図２１に示す通りであった
。

【０２７４】（実施例８）尿中ＬＨの測定における従来
法との比較 健常婦人の月経周期尿の尿中ＬＨ測定において、本発明
法（半定量）と従来法（定性：金コロイド凝集法；半定
量：赤血球凝集法；定量：ラジオイムノアッセイ法）と
を比較した。

【０２７５】（１）分析装置の製造 下記の如く、図１５（Ｉ）に示す分析装置を製造した。

【０２７６】（ａ）染料標識マウスモノクローナル抗Ｌ
Ｈα抗体の調製 マウスモノクローナル抗ｈＣＧβ抗体のかわりにマウス
モノクローナル抗ＬＨα抗体（持田製薬（株））を用い
た以外は、実施例１（１）（ａ）と同様に行ない、染料
標識マウスモノクローナル抗ＬＨα抗体を得た。使用時
まで４℃で保存した。

【０２７７】（ｂ）試料添加部（Ａ）の調製実施例１（
１）（ｂ）と同様に調製した。

【０２７８】（ｃ）特異結合物質存在部（Ｂ）の調製染
料標識マウスモノクローナル抗ＬＨα抗体（（ａ）にて
調製したもの）を、バッファーＡにて１０倍に希釈した
。これと、バッファーＡにて、０．１、１．２、６μｇ
／ｍｌに濃度調整されたマウスモノクローナル抗ＬＨβ
抗体（持田製薬（株）、非標識物）溶液とを、各々１：
１（ｖ：ｖ）の割合で混合し、３種の溶液を調製した。 これら３種の溶液を１種ずつ、ポリエステル不織布（１
０×５ｍｍ、厚さ０．５ｍｍ）に２５μｌ含浸させ、４
５℃で乾燥した。これにより、後述する検出部（Ｅ−１
，Ｅ−２，Ｅ−３）の検出感度が、各々、ＬＨ　　５０
ＩＵ／ｌ、ＬＨ　　１００ＩＵ／ｌ、ＬＨ　　２００Ｉ
Ｕ／ｌとなる量比で前記染料標識マウスモノクローナル
抗ＬＨα抗体、非標識マウスモノクローナル抗ＬＨβ抗
体を含有する、特異結合物質存在部（Ｂ−１，Ｂ−２，
Ｂ−３）として用いるポリエステル不織布３枚が得られ
た。

【０２７９】（ｄ）検出部（Ｅ）を有する膜（検出部存
在部（Ｃ））の調製 ウサギポリクローナル抗ｈＣＧ抗体のかわりにマウスモ
ノクローナル抗ＬＨβ抗体（持田製薬（株））を用いた
以外は、実施例１（１）（ｄ）と同様に調製した。同じ
ものをさらに２枚調製した。

【０２８０】（ｅ）分析装置の組立て 実施例１（１）（ｅ）と同様に組み立てた。なお、この
分析装置は、マウスモノクローナル抗ＬＨβ抗体（不溶
化されていないもの）の量により、検出感度を調整した
ものである。

【０２８１】（２）測定 （ａ）本発明法 （１）で調製した分析装置を用いて行なった。すなわち
、尿試料１８０μｌを試料添加部（Ａ）に添加し、１０
分後に検出部（Ｅ−１，Ｅ−２，Ｅ−３）の呈色強度を
観察し、半定量を行なった。

【０２８２】（ｂ）従来法 金コロイド凝集法は、凍結乾燥抗ＬＨ不溶化金コロイド
に緩衝液を添加してそれを溶解させた後、尿試料を添加
し、３０分後の金コロイド溶液の色で判定した。判定は
、金コロイド溶液の色の赤から灰色への色変化を目視判
別できたものを陽性（＋）とした。赤血球凝集法（持田
製薬（株）、ハイゴナビス）は、尿原液と、キット付属
の希釈剤にて４倍および８倍希釈した希釈試料のそれぞ
れについて凝集反応を行ない、凝集したものを陽性（＋
）と判定した。ラジオイムノアッセイ法（ブーツセルテ
ック社、スクロセップＬＨキット）は、マニュアルに従
って行なった。

【０２８３】（３）測定結果の比較 結果は図２２に示すとおりであった。すなわち、四法の
結果はよく相関し、この事実より、本発明の装置を用い
る本発明法は、操作が簡便で、測定試料は１回につき１
種のみであるにもかかわらず、正確な半定量が行ない得
ることが明らかとなった。

【０２８４】（実施例９）尿中ｈＣＧの測定における従
来法との比較 尿中ｈＣＧの測定において、本発明法（半定量）と従来
法（半定量：ＥＩＡ法；定量：ＥＩＡ法）とを比較した
。

【０２８５】（１）本発明法による測定ｈＣＧを０〜３
２０ＩＵ／ｌ含む尿試料を用い、実施例１と同様に行な
った。 （２）従来法による測定 （ａ）半定量 ｈＣＧ定性用ＥＩＡキット（ｈＣＧテストパック、アボ
ット社、検出感度２５ＩＵ／ｌ）を用い、尿原液（所定
量のｈＣＧを含む尿試料）と、ｈＣＧの含まれていない
希釈溶液（複数の男子尿をプールしたもの）にて２倍お
よび４倍希釈した希釈試料のそれぞれについて、マニュ
アルに従って測定し、呈色したものを陽性（＋）と判定
した。 （ｂ）定量 ｈＣＧＥＩＡキット（エルモテックＨＣＧ、持田製薬（
株））を用いた。このキットでは、ガラス試験管に、抗
ｈＣＧ抗体が不溶化されていると共に、凍結乾燥された
ペルオキシダーゼ標識抗ｈＣＧ抗体が封入されている。 このガラス試験管に、ｈＣＧを含む試料を添加混合する
ことによって反応が開始される。洗浄後、過酸化水素水
と３，３´，５，５´−テトラメチルベンジジンの基質
発色剤混合溶液を添加し、ｈＣＧに対応した基質発色剤
混合溶液の呈色の吸光度（６５０ｎｍ）を測定すること
によって定量を行なう。 （３）測定結果の比較 結果は図２３に示すとおりであった。すなわち、三法の
結果はよく相関し、この事実より、本発明の装置を用い
る本発明法は、操作が簡便で、測定試料は１検体につき
１種のみであるにもかかわらず、正確な半定量が行ない
得ることが明らかとなった。

【０２８６】

【発明の効果】本発明により、特に半定量を高感度で行
なうに際して有用な分析方法および分析装置であって、
試料の添加の工程のみで、結果として、試料が希釈され
て用いられたと同様の検出結果を得ることができ、かつ
、信号の最大強度の低下を招かずに、広範囲の測定感度
の中から所望の測定感度を設定することのできる分析方
法と、その方法を行なうのに好適な分析装置が提供され
る。

【０２８７】本発明によれば、簡便に、専門の医療技術
者でなくても、正確な測定を行ない得る。

【０２８８】また、本発明によれば、試料の事前の希釈
が不要で、添加された試料の装置からの流出がないので
、測定を行なう者等が試料によって汚染され、健康を害
するおそれが低減される。

【０２８９】さらに、本発明によれば、従来に比べて容
易に、分析装置の検出感度および信号強度を様々に設定
し得るので、半定量をより詳細に行ない得る。

【０２９０】加えて、本発明によれば、簡便に、多項目
同時測定や多試料同時測定も行なうことができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の特異結合分析方法を説明するための模
式図である。

【図２】本発明の特異結合分析方法を説明するための模
式図である。

【図３】本発明の特異結合分析方法を説明するための模
式図である。

【図４】本発明の特異結合分析方法を説明するための模
式図である。

【図５】本発明の特異結合分析方法を説明するための模
式図である。

【図６】本発明の特異結合分析方法を説明するための模
式図である。

【図７】本発明の特異結合分析方法を説明するための模
式図である。

【図８】本発明の特異結合分析方法を説明するための模
式図である。

【図９】本発明の特異結合分析方法を説明するための模
式図である。

【図１０】本発明および従来の特異結合分析方法におけ
る、分析対象物量と信号強度との関係を示すグラフであ
る。

【図１１】本発明の特異結合分析装置の好適例を示す図
である。

【図１２】本発明の特異結合分析装置の好適例を示す図
である。

【図１３】本発明の特異結合分析装置の好適例を示す図
である。

【図１４】本発明の特異結合分析装置の好適例を示す図
である。

【図１５】本発明の特異結合分析方法を行なった結果を
示す模式図である。

【図１６】本発明の特異結合分析方法を行なった結果を
示す模式図である。

【図１７】本発明の特異結合分析装置の好適例を示す図
である。

【図１８】本発明の特異結合分析装置の変形例を示す図
である。

【図１９】本発明の特異結合分析装置の変形例を示す図
である。

【図２０】本発明の特異結合分析方法を実施するための
他の特異結合分析装置を示す図である。

【図２１】実施例７の結果を示す模式図である。

【図２２】実施例８の結果を示す模式図である。

【図２３】実施例９の結果を示す模式図である。

【符号の説明】

Ａ　　試料添加部 Ｂ　　特異結合物質存在部 Ｃ　　検出部存在部 Ｄ　　吸収部 Ｅ　　検出部 Ｆ　　支持体

Claims (58)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　試料中の分析対象物を定性または定量
   するに際し、測定系に特定物質を存在させ、該特定物質
   の存在により、分析対象物量の指標として測定される標
   識物質量を小さくすることを特徴とする特異結合分析方
   法。
2. 【請求項２】　　前記特定物質が前記分析対象物に対す
   る特異結合物質である請求項１に記載の特異結合分析方
   法。
3. 【請求項３】　　前記特定物質が前記分析対象物の類縁
   物質である請求項１に記載の特異結合分析方法。
4. 【請求項４】　　前記標識物質が、前記分析対象物に対
   する特異結合物質を標識してなる物質である請求項１〜
   ３のいずれかに記載の特異結合分析方法。
5. 【請求項５】　　前記標識物質が、前記分析対象物に対
   する特異結合物質に、該分析対象物と該特異結合物質と
   の結合には干渉せずに結合する物質を標識してなる物質
   である請求項１または２に記載の特異結合分析方法。
6. 【請求項６】　　試料中の分析対象物（ａ）を、該分析
   対象物（ａ）と特異的に結合する特異結合物質（ｂ）、
   および、前記分析対象物（ａ）との結合に際し、前記特
   異結合物質（ｂ）とは干渉しない特異結合物質（ｃ）に
   標識物（ｄ）が結合したものである標識特異結合物質（
   ｅ）と、同時または順に結合反応させ、次いで、前記分
   析対象物（ａ）と前記標識特異結合物質（ｅ）との結合
   物質（ｆ）を、不溶化されている前記特異結合物質（ｂ
   ）、または、前記分析対象物（ａ）との結合に際し、前
   記標識特異結合物質（ｅ）とは干渉しないが、前記特異
   結合物質（ｂ）とは干渉する不溶化されている特異結合
   物質（ｇ）と結合反応をさせて固定し、その後、固定さ
   れた前記結合物質（ｆ）中の標識物（ｄ）に由来する信
   号を読みとる請求項４に記載の特異結合分析方法。
7. 【請求項７】　　試料中の、１種類の特異的結合に係わ
   る部位を複数有する分析対象物（ｈ）を、該分析対象物
   （ｈ）の前記１種類の特異的結合に係わる部位に特異的
   に結合する特異結合物質（ｉ）、前記１種類の特異的結
   合に係わる部位に特異的に結合する特異結合物資（ｊ）
   に標識物（ｄ）が結合したものである標識特異結合物質
   （ｋ）、および、不溶化されている、前記１種類の特異
   結合に係わる部位に特異的に結合する特異結合物質（ｌ
   ）と、同時または順に結合させ、前記分析対象物（ｈ）
   の少なくとも一部を固定し、その後、固定された分析対
   象物（ｈ）に結合した標識特異結合物質（ｋ）中の標識
   物（ｄ）に由来する信号を読みとる請求項４に記載の特
   異結合分析方法。
8. 【請求項８】　　試料中の分析対象物（ａ）を、該分析
   対象物（ａ）と特異的に結合する特異結合物質（ｍ）に
   標識物（ｄ）が結合したものである標識特異結合物質（
   ｎ）と結合させ、次いで、前記分析対象物（ａ）と前記
   標識特異結合物質（ｎ）との結合には干渉されずに前記
   分析対象物（ａ）と特異的に結合する不溶化されている
   特異結合物質（ｏ）に、前記分析対象物（ａ）と前記標
   識特異結合物質（ｎ）との結合物質（ｐ）、前記標識特
   異結合物質（ｎ）とは結合しないが前記特異結合物質（
   ｏ）とは結合する分析対象物類縁物質（ｑ）、および、
   存在する場合は未結合の分析対象物（ａ）を結合反応さ
   せて固定し、その後、固定された前記結合物質（ｐ）中
   の標識物（ｄ）に由来する信号を読みとる請求項４に記
   載の特異結合分析方法。
9. 【請求項９】　　分析対象物（ａ）と特異的に結合する
   特異結合物質（ｒ）に標識物（ｄ）が結合したものであ
   る標識特異結合物質（ｓ）を、試料中の分析対象物（ａ
   ）、および、該標識特異結合物質（ｓ）と分析対象物（
   ａ）との結合に干渉する分析対象物類縁物質（ｔ）と、
   同時または順に結合反応させ、次いで、前記分析対象物
   （ａ）と前記標識特異結合物質（ｓ）との結合物質（ｕ
   ）および存在する場合は未結合の分析対象物（ａ）を、
   前記分析対象物（ａ）との結合に際し、前記標識特異結
   合物質（ｓ）とは干渉せず、かつ、前記分析対象物類縁
   物質（ｔ）とは結合しない、不溶化されている特異結合
   物質（ｖ）と結合反応させて固定し、その後、固定され
   た前記結合物質（ｕ）中の標識物（ｄ）に由来する信号
   を読みとる請求項４に記載の特異結合分析方法。
10. 【請求項１０】　　試料中の分析対象物（ａ）を、該分
    析対象物（ａ）と特異的に結合する特異結合物質（ｗ）
    、および、前記分析対象物（ａ）との結合に際し、前記
    特異結合物質（ｗ）と干渉する特異結合物質（ｘ）に標
    識物（ｄ）が結合したものである標識特異結合物質（ｙ
    ）と、同時または順に結合反応させ、次いで、前記分析
    対象物（ａ）と前記特異結合物質（ｗ）との結合物質（
    ｚ）および前記分析対象物（ａ）と前記標識特異結合物
    質（ｙ）との結合物質（α）を、前記分析対象物（ａ）
    との結合に際し、前記特異結合物質（ｗ）および前記標
    識特異結合物質（ｙ）とは干渉しない不溶化されている
    特異結合物質（β）と結合反応させて固定し、その後、
    固定された前記結合物質（α）中の標識物（ｄ）に由来
    する信号を読みとる請求項４に記載の特異結合分析方法
    。
11. 【請求項１１】　　分析対象物（ａ）と特異的に結合す
    る特異結合物質（γ）を、試料中の分析対象物（ａ）、
    および、前記特異結合物質（γ）との結合に際し、前記
    分析対象物（ａ）とは干渉しない前記特異結合物質（γ
    ）への特異結合物質（δ）に標識物（ｄ）が結合したも
    のである標識特異結合物質（ε）と、同時または順に結
    合反応させ、次いで、前記分析対象物（ａ）、前記特異
    結合物質（γ）および前記標識特異結合物質（ε）の三
    者の結合物質（ζ）、および、前記分析対象物（ａ）と
    前記特異結合物質（γ）との結合物質（η）を、前記分
    析対象物（ａ）と前記特異結合物質（γ）との結合には
    干渉されずに前記分析対象物（ａ）と特異的に結合する
    不溶化されている特異結合物質（θ）と結合反応をさせ
    て固定し、その後、固定された前記三者の結合物質（ζ
    ）中の標識物（ｄ）に由来する信号を読みとる請求項５
    に記載の特異結合分析方法。
12. 【請求項１２】　　試料中の分析対象物を定性または定
    量するに際し、測定系に特定物質を存在させ、該特定物
    質の存在により、分析対象物量の指標として測定される
    標識物質量を大きくすることを特徴とする特異結合分析
    方法。
13. 【請求項１３】　　前記特定物質が前記分析対象物に対
    する特異結合物質である請求項１２に記載の特異結合分
    析方法。
14. 【請求項１４】　　前記標識物質が、前記分析対象物に
    対する特異結合物質を標識してなる物質である請求項１
    ２または１３に記載の特異結合分析方法。
15. 【請求項１５】　　前記標識物質が、前記分析対象物に
    対する特異結合物質に、該分析対象物と該特異結合物質
    との結合には干渉せずに結合する物質を標識してなる物
    質である請求項１２または１３に記載の特異結合分析方
    法。
16. 【請求項１６】　　前記標識物質が、分析対象物または
    その類縁物質を標識してなる物質である請求項１２また
    は１３に記載の特異結合分析方法。
17. 【請求項１７】　　分析対象物（ａ）および分析対象物
    類縁物質（ι）と特異的に結合する特異結合物質（κ）
    、および、該分析対象物（ａ）および該分析対象物類縁
    物質（ι）との結合に際し、前記特異結合物質（κ）と
    干渉する特異結合物質（λ）に標識物（ｄ）が結合した
    ものである標識特異結合物質（μ）を、試料中の分析対
    象物（ａ）、および、不溶化されている分析対象物（ａ
    ）または分析対象物類縁物質（ι）と、同時または順に
    結合反応させ、前記標識特異結合物質（μ）の少なくと
    も一部を固定し、その後、固定された標識特異結合物質
    （μ）中の標識物（ｄ）に由来する信号を読みとる請求
    項１４に記載の特異結合分析方法。
18. 【請求項１８】　　分析対象物（ａ）および分析対象物
    類縁物質（ν）と特異的に結合する特異結合物質（ξ）
    を、試料中の分析対象物（ａ）、不溶化されている分析
    対象物（ａ）または分析対象物類縁物質（ν）、および
    、前記特異結合物質（ξ）との結合に際し、前記分析対
    象物（ａ）、前記分析対象物類縁物質（ν）とは干渉し
    ない前記特異結合物質（ξ）への特異結合物質（π）に
    標識物（ｄ）が結合したものである標識特異結合物質（
    ρ）と、同時または順に結合反応させ、該標識特異結合
    物質（ρ）の少なくとも一部を前記特異結合物質（ξ）
    を介して固定し、その後、固定された標識特異結合物質
    （ρ）中の標識物（ｄ）に由来する信号を読みとる請求
    項１５に記載の特異結合分析方法。
19. 【請求項１９】　　試料中の分析対象物（ａ）、および
    、分析対象物（ａ）に標識物（ｄ）が結合したものであ
    る標識分析対象物（σ）または分析対象物（ａ）の類縁
    物質（τ）に標識物（ｄ）が結合したものである標識分
    析対象物類縁物質（φ）を、前記分析対象物（ａ）およ
    び前記標識分析対象物（σ）または前記標識分析対象物
    類縁物質（φ）と特異的に結合する特異結合物質（ψ）
    、および、不溶化されている前記特異結合物質（ψ）、
    または、前記分析対象物（ａ）および前記標識分析対象
    物（σ）または前記標識分析対象物類縁物質（φ）と前
    記特異結合物質（ψ）との結合に干渉する不溶化されて
    いる特異結合物質（ω）と、同時または順に結合反応さ
    せ、前記標識分析対象物（σ）または前記標識分析対象
    物類縁物質（φ）の少なくとも一部を固定し、その後、
    固定された標識分析対象物（σ）または標識分析対象物
    類縁物質（φ）中の標識物（ｄ）に由来する信号を読み
    とる請求項１６に記載の特異結合分析方法。
20. 【請求項２０】　　請求項６に記載の特異結合分析方法
    を実施するための、試料添加部（Ａ）、特異結合物質存
    在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）を
    順次有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置であっ
    て、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結合
    物質（ｂ）および前記標識特異結合物質（ｅ）が存在し
    、前記検出部存在部（Ｃ）には、前記特異結合物質（ｂ
    ）または前記特異結合物質（ｇ）が不溶化されている検
    出部（Ｅ）が存在することを特徴とする特異結合分析装
    置。
21. 【請求項２１】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）と前
    記検出部存在部（Ｃ）とが同じ領域である、請求項２０
    に記載の特異結合分析装置。
22. 【請求項２２】　　試料中の分析対象物を半定量するこ
    とが可能な特異結合分析装置であって、共通の前記試料
    添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含むユニットが存在
    し、各ユニットは互いに独立しており、前記吸収部（Ｄ
    ）は、共通部分として存在するか、あるいは、前記ユニ
    ット各々に含まれ、かつ、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）に存在する前記特異結合物質（ｂ）および前記標識特
    異結合物質（ｅ）と、前記検出部（Ｅ）に存在する前記
    特異結合物質（ｂ）または前記特異結合物質（ｇ）のう
    ちのいずれか１種以上の物質量がユニットごとに異なる
    、請求項２０または２１に記載の特異結合分析装置。
23. 【請求項２３】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）に存
    在する前記特異結合物質（ｂ）の量が０であるユニット
    を有する、請求項２２に記載の特異結合分析装置。
24. 【請求項２４】　　請求項７に記載の特異結合分析方法
    を実施するための、試料添加部（Ａ）、特異結合物質存
    在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）を
    順次有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置であっ
    て、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結合
    物質（ｉ）および前記標識特異結合物質（ｋ）が存在し
    、前記検出部存在部（Ｃ）には、前記特異結合物質（ｌ
    ）が不溶化されている検出部（Ｅ）が存在することを特
    徴とする特異結合分析装置。
25. 【請求項２５】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）にお
    いて、前記特異結合物質（ｉ）および前記標識特異結合
    物質（ｋ）が試料の流れ方向に沿って任意の順に存在す
    る、請求項２４に記載の特異結合分析装置。
26. 【請求項２６】　　試料中の分析対象物を半定量するこ
    とが可能な特異結合分析装置であって、共通の前記試料
    添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含むユニットが存在
    し、各ユニットは互いに独立しており、前記吸収部（Ｄ
    ）は、共通部分として存在するか、あるいは、前記ユニ
    ット各々に含まれ、かつ、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）に存在する前記特異結合物質（ｉ）および前記標識特
    異結合物質（ｋ）と、前記検出部（Ｅ）に存在する前記
    特異結合物質（ｌ）のうちのいずれか１種以上の物質量
    がユニットごとに異なる、請求項２４または２５に記載
    の特異結合分析装置。
27. 【請求項２７】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）に存
    在する前記特異結合物質（ｉ）の量が０であるユニット
    を有する、請求項２６に記載の特異結合分析装置。
28. 【請求項２８】　　請求項８に記載の特異結合分析方法
    を実施するための、試料添加部（Ａ）、特異結合物質存
    在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）を
    順次有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置であっ
    て、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記標識特異
    結合物質（ｎ）および前記分析対象物類縁物質（ｑ）が
    存在し、前記検出部存在部（Ｃ）には、前記特異結合物
    質（ｏ）が不溶化されている検出部（Ｅ）が存在するこ
    とを特徴とする特異結合分析装置。
29. 【請求項２９】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）にお
    いて、前記標識特異結合物質（ｎ）および前記分析対象
    物類縁物質（ｑ）が試料の流れ方向に沿って任意の順に
    存在する、請求項２８に記載の特異結合分析装置。
30. 【請求項３０】　　試料中の分析対象物を半定量するこ
    とが可能な特異結合分析装置であって、共通の前記試料
    添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含むユニットが存在
    し、各ユニットは互いに独立しており、前記吸収部（Ｄ
    ）は、共通部分として存在するか、あるいは、前記ユニ
    ット各々に含まれ、かつ、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）に存在する前記標識特異結合物質（ｎ）および前記分
    析対象物類縁物質（ｑ）と、前記検出部（Ｅ）に存在す
    る前記特異結合物質（ｏ）のうちのいずれか１種以上の
    物質量がユニットごとに異なる、請求項２８または２９
    に記載の特異結合分析装置。
31. 【請求項３１】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）に存
    在する前記分析対象物類縁物質（ｑ）の量が０であるユ
    ニットを有する、請求項３０に記載の特異結合分析装置
    。
32. 【請求項３２】　　請求項９に記載の特異結合分析方法
    を実施するための、試料添加部（Ａ）、特異結合物質存
    在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）を
    順次有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置であっ
    て、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記標識特異
    結合物質（ｓ）および前記分析対象物類縁物質（ｔ）が
    存在し、前記検出部存在部（Ｃ）には、前記特異結合物
    質（ｖ）が不溶化されている検出部（Ｅ）が存在するこ
    とを特徴とする特異結合分析装置。
33. 【請求項３３】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）にお
    いて、前記標識特異結合物質（ｓ）および前記分析対象
    物類縁物質（ｔ）が試料の流れ方向に沿って任意の順に
    存在する、請求項３２に記載の特異結合分析装置。
34. 【請求項３４】　　試料中の分析対象物を半定量するこ
    とが可能な特異結合分析装置であって、共通の前記試料
    添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含むユニットが存在
    し、各ユニットは互いに独立しており、前記吸収部（Ｄ
    ）は、共通部分として存在するか、あるいは、前記ユニ
    ット各々に含まれ、かつ、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）に存在する前記標識特異結合物質（ｓ）および前記分
    析対象物類縁物質（ｔ）と、前記検出部（Ｅ）に存在す
    る前記特異結合物質（ｖ）のうちのいずれか１種以上の
    物質量がユニットごとに異なる、請求項３２または３３
    に記載の特異結合分析装置。
35. 【請求項３５】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）に存
    在する前記分析対象物類縁物質（ｔ）の量が０であるユ
    ニットを有する、請求項３４に記載の特異結合分析装置
    。
36. 【請求項３６】　　請求項１０に記載の特異結合分析方
    法を実施するための、試料添加部（Ａ）、特異結合物質
    存在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）
    を順次有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置であ
    って、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結
    合物質（ｗ）および前記標識特異結合物質（ｙ）が存在
    し、前記検出部存在部（Ｃ）には、前記特異結合物質（
    β）が不溶化されている検出部（Ｅ）が存在することを
    特徴とする特異結合分析装置。
37. 【請求項３７】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）にお
    いて、前記特異結合物質（ｗ）および前記標識特異結合
    物質（ｙ）が試料の流れ方向に沿って任意の順に存在す
    る、請求項３６に記載の特異結合分析装置。
38. 【請求項３８】　　試料中の分析対象物を半定量するこ
    とが可能な特異結合分析装置であって、共通の前記試料
    添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含むユニットが存在
    し、各ユニットは互いに独立しており、前記吸水部（Ｄ
    ）は、共通部分として存在するか、あるいは、前記ユニ
    ット各々に含まれ、かつ、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）に存在する前記特異結合物質（ｗ）および前記標識特
    異結合物質（ｙ）と、前記検出部（Ｅ）に存在する前記
    特異結合物質（β）のうちのいずれか１種以上の物質量
    がユニットごとに異なる、請求項３６または３７に記載
    の特異結合分析装置。
39. 【請求項３９】　　前記特異結合物質（ｗ）の量が０で
    あるユニットを有する、請求項３８に記載の特異結合分
    析装置。
40. 【請求項４０】　　請求項１１に記載の特異結合分析方
    法を実施するための、試料添加部（Ａ）、特異結合物質
    存在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）
    を順次有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置であ
    って、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結
    合物質（γ）および前記標識特異結合物質（ε）が存在
    し、前記検出部存在部（Ｃ）には、前記特異結合物質（
    θ）が不溶化されている検出部（Ｅ）が存在することを
    特徴とする特異結合分析装置。
41. 【請求項４１】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）にお
    いて、前記特異結合物質（γ）および前記標識特異結合
    物質（ε）が試料の流れ方向に沿って任意の順に存在す
    る、請求項４０に記載の特異結合分析装置。
42. 【請求項４２】　　試料中の分析対象物を半定量するこ
    とが可能な特異結合分析装置であって、共通の前記試料
    添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含むユニットが存在
    し、各ユニットは互いに独立しており、前記吸収部（Ｄ
    ）は、共通部分として存在するか、あるいは、前記ユニ
    ット各々に含まれ、かつ、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）に存在する前記特異結合物質（γ）および前記標識特
    異結合物質（ε）と、前記検出部存在部（Ｃ）に存在す
    る前記特異結合物質（θ）のうちのいずれか１種以上の
    物質量がユニットごとに異なる、請求項４０または４１
    に記載の特異結合分析装置。
43. 【請求項４３】　　請求項１７に記載の特異結合分析方
    法を実施するための、試料添加部（Ａ）、特異結合物質
    存在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）
    を順次有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置であ
    って、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結
    合物質（κ）および前記標識特異結合物質（μ）が存在
    し、前記検出部存在部（Ｃ）には、前記分析対象物（ａ
    ）または前記分析対象物類縁物質（ι）が不溶化されて
    いる検出部（Ｅ）が存在することを特徴とする特異結合
    分析装置。
44. 【請求項４４】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）にお
    いて、前記特異結合物質（κ）および前記標識特異結合
    物質（μ）が試料の流れ方向に沿って任意の順に存在す
    る、請求項４３に記載の特異結合分析装置。
45. 【請求項４５】　　試料中の分析対象物を半定量するこ
    とが可能な特異結合分析装置であって、共通の前記試料
    添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含むユニットが存在
    し、各ユニットは互いに独立しており、前記吸収部（Ｄ
    ）は、共通部分として存在するか、あるいは、前記ユニ
    ット各々に含まれ、かつ、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）に存在する前記特異結合物質（κ）および前記標識特
    異結合物質（μ）と、前記検出部（Ｅ）に存在する前記
    分析対象物（ａ）または前記分析対象物類縁物質（ι）
    のうちのいずれか１種以上の物質量がユニットごとに異
    なる、請求項４３または４４に記載の特異結合分析装置
    。
46. 【請求項４６】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）に存
    在する前記特異結合物質（κ）の量が０であるユニット
    を有する、請求項４５に記載の特異結合分析装置。
47. 【請求項４７】　　請求項１８に記載の特異結合分析方
    法を実施するための、試料添加部（Ａ）、特異結合物質
    存在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）
    を順次有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置であ
    って、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結
    合物質（ξ）および前記標識特異結合物質（ρ）が存在
    し、前記検出部存在部（Ｃ）には、前記分析対象物（ａ
    ）または前記分析対象物類縁物質（ν）が不溶化されて
    いる検出部（Ｅ）が存在することを特徴とする特異結合
    分析装置。
48. 【請求項４８】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）にお
    いて、前記特異結合物質（ξ）および前記標識特異結合
    物質（ρ）が試料の流れ方向に沿って任意の順に存在す
    る、請求項４７に記載の特異結合分析装置。
49. 【請求項４９】　　試料中の分析対象物を半定量するこ
    とが可能な特異結合分析装置であって、共通の前記試料
    添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含むユニットが存在
    し、各ユニットは互いに独立しており、前記吸収部（Ｄ
    ）は、共通部分として存在するか、あるいは、前記ユニ
    ット各々に含まれ、かつ、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）に存在する前記特異結合物質（ξ）および前記標識特
    異結合物質（ρ）と、前記検出部（Ｅ）に存在する前記
    分析対象物（ａ）または前記分析対象物類縁物質（ν）
    のうちのいずれか１種以上の物質量がユニットごとに異
    なる、請求項４７または４８に記載の特異結合分析装置
    。
50. 【請求項５０】　　請求項１９に記載の特異結合分析方
    法を実施するための、試料添加部（Ａ）、特異結合物質
    存在部（Ｂ）、検出部存在部（Ｃ）および吸収部（Ｄ）
    を順次有するクロマトグラフ型の特異結合分析装置であ
    って、前記特異結合物質存在部（Ｂ）には、前記特異結
    合物質（ψ）、および、前記標識分析対象物（σ）また
    は前記標識分析対象物類縁物質（φ）が存在し、前記検
    出部存在部（Ｃ）には、前記特異結合物質（ψ）または
    前記特異結合物質（ω）が不溶化されていることを特徴
    とする特異結合分析装置。
51. 【請求項５１】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）にお
    いて、前記特異結合物質（ψ）、および、前記標識分析
    対象物（σ）または前記標識分析対象物類縁物質（φ）
    が、試料の流れ方向に沿って任意の順に存在する、請求
    項５０に記載の特異結合分析装置。
52. 【請求項５２】　　試料中の分析対象物を半定量するこ
    とが可能な特異結合分析装置であって、共通の前記試料
    添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含むユニットが存在
    し、各ユニットは互いに独立しており、前記吸収部（Ｄ
    ）は、共通部分として存在するか、あるいは、前記ユニ
    ット各々に含まれ、かつ、前記特異結合物質存在部（Ｂ
    ）に存在する前記特異結合物質（ψ）、および、前記標
    識分析対象物（σ）または前記標識分析対象物類縁物質
    （φ）と、前記検出部（Ｅ）に存在する前記特異結合物
    質（ψ）または前記特異結合物質（ω）のうちのいずれ
    か１種以上の物質量がユニットごとに異なる、請求項５
    ０または５１に記載の特異結合分析装置。
53. 【請求項５３】　　前記特異結合物質存在部（Ｂ）に存
    在する前記特異結合物質（ψ）の量が０であるユニット
    を有する、請求項５２に記載の特異結合分析装置。
54. 【請求項５４】　　前記試料添加部（Ａ）と前記特異結
    合物質存在部（Ｂ）とが同じ領域である、請求項２０、
    ２１、２４、２８、３２、３６、４０、４３、４７、５
    ０のいずれかに記載の特異結合分析装置。
55. 【請求項５５】　　前記物質量がユニットごとに順次変
    量されている、請求項２２、２３、２６、２７、３０、
    ３１、３４、３５、３８、３９、４２、４５、４６、４
    ９、５２、５３のいずれかに記載の特異結合分析装置。
56. 【請求項５６】　　複数試料を同時に測定することが可
    能な特異結合分析装置であって、少なくとも連続する試
    料添加部（Ａ）、特異結合物質存在部（Ｂ）および検出
    部存在部（Ｃ）を有するユニットを複数有し、各ユニッ
    トが互いに独立している、請求項２０、２１、２４、２
    ５、２８、２９、３２、３３、３６、３７、４０、４１
    、４３、４４、４７、４８、５０、５１のいずれかに記
    載の特異結合分析装置。
57. 【請求項５７】　　前記試料添加部（Ａ）と前記特異結
    合物質存在部（Ｂ）とが同じ領域である、請求項５６に
    記載の特異結合分析装置。
58. 【請求項５８】　　単一試料中の複数の分析対象物を同
    時に測定することが可能な特異結合分析装置であって、
    共通の前記試料添加部（Ａ）と、複数の、前記特異結合
    物質存在部（Ｂ）および前記検出部存在部（Ｃ）を含む
    ユニットが存在し、各ユニットは互いに独立しており、
    前記吸収部（Ｄ）は、共通部分として存在するか、ある
    いは、前記ユニット各々に含まれ、かつ、各ユニットに
    存在する物質が、互いに異なる分析対象物の測定に使用
    されるものである、請求項２０、２１、２４、２５、２
    ８、２９、３２、３３、３６、３７、４０、４１、４３
    、４４、４７、４８、５０、５１のいずれかに記載の特
    異結合分析装置。