MX2012004105A - Dispositivo para deteccion de antigenos y usos del mismo. - Google Patents

Abstract

Se describen dispositivos y métodos para la detección de antígenos. Se describen los dispositivos y métodos para detectar los patógenos transportados en alimentos.

Description

DISPOSITIVO PARA DETECCION DE ANTIGENOS Y USOS DEL MISMO Campo de la Invención La presente invención se relaciona, en parte, a un dispositivo y ensayo para detectar uno o más antígenos y métodos para usar el mismo.

Antecedentes de la Invención La detección de antígenos es importante para muchas áreas de la investigación científica, uso diagnóstico y usos terapéuticos. Hay varios métodos por los cuales pueden ser detectados los antígenos. Se describen varios métodos en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica: 5,160,701, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica: 5,141,850, Publicación de PCT solicitud WO 91/12336, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica: 5,451,504, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica: 5,559,041, Solicitud de Patente Europea No. : 0505636A1, Publicación de PCT solicitud No. WO 88/08534, Solicitud de Patente Europea No. 0284 232A1, Solicitud de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica No. 20070020768 y Patente de los Estados Unidos de Norteamérica No. RE39664. Los métodos y dispositivos disponibles antes a la presente invención pueden todavía requerir mejoras en la sensibilidad o velocidad en la cual pueden ser obtenidos resultados. Estos factores pueden ser importantes donde el tiempo es la esencia cuando se intenta REF.:229881 determinar la presencia o ausencia de un antígeno.

En el área para detectar contaminantes patogénicos transportados en alimentos, aproximadamente setenta y seis millones de personas en los Estados Unidos de Norteamérica llegan a ser afectados con una enfermedad transportada en los alimentos. De aquellos setenta y seis millones, aproximadamente 325,000 llegarán a enfermar violentamente, requiriendo hospitalización y aproximadamente 5,000 morirán. La mayoría de las enfermedades transportadas en alimentos son provocadas por Sal onella, E. coli, y Campylobacter costando aproximadamente 35 billones de dólares .

Las medidas actuales para asegurar un suministro de alimentos seguro implica una combinación de autoridad locales, estatales y federales así como también un sistema elaborado de inspectores y redes de sobrevivencia. Los fabricantes de alimentos son mantenidos para ciertas regulaciones el Departamento de Agricultura de los EUA (USDA, por sus siglas en inglés) , la administración de alimentos y fármacos de los EUA (FDA, por sus siglas en inglés) , y el Servicio Nacional de Pesca Marina (NMFS, por sus siglas en inglés) que son reforzadas por ley. La USDA ha creado un sistema de inspectores de salud que están encargados en realizar inspecciones de comidas diarias, producción y otros productos consumibles hechos o procesados en instalaciones de fabricación y procesamiento. Estas inspecciones implican un análisis estadístico detallado para asegurar mejor la seguridad y esterilidad del alimento antes de que alcance al consumidor. Por otra parte, la mayoría de la industria de alimentos ha adoptado técnicas de radiación para demostrar además la esterilidad de los productos. En un bajo nivel, los departamentos de salud locales y municipales trabajan para asegurar que distribuidores locales, restaurantes y distribuidores sigan pautas estrictas para asegurar un suministro de alimentos seguro. Sin embargo, a pesar de esta red elaborada, son todavía comunes enfermedades transportadas en alimentos.

Una vez que inicia un brote es fuertemente suspendido, e inicia una investigación. Se hace una búsqueda para la mayoría de los casos entre personas quienes han sido expuestos. Los síntomas y tiempo de inicio y ubicación de posibles casos son determinados, y una "definición del caso" es desarrollada la cual describe estos casos típicos. El brote es descrito sistemáticamente por tiempo, lugar y persona. Se dibuja una gráfica del número de gente que se enferma en cada día sucesivo para mostrar gráficamente cuándo ocurre. Calculando la distribución de los casos por la edad y sexo muestra quién es afectado.

Con frecuencia el microbio causante es desconocido, por tanto deben ser recolectadas heces fecales o sangre a partir de la gente enferma y enviarla al laboratorio de salud pública para hacer un diagnóstico. Cada recolección y muestreo puede costar hasta 500 dólares por prueba y con frecuencia toma 2-4 días estos análisis (CDC "Infecciones transportados en alimentos") .

Antes a la presente invención, para identificar el alimento u otra fuente del brote, los investigadores primero entrevistan unas cuantas personas con la mayoría de los casos típicos acerca de las exposiciones que hayan tenido en unos cuántos días antes de que enfermaran. En esta forma, ciertas exposiciones potenciales pueden ser excluidas mientras que otras que son mencionadas repetidamente emergen como posibilidades de la fuente. Combinadas con otra información, como fuentes probables para el microbio específico implicado, se prueban hipótesis en una investigación epidemiológica formal. Los investigadores conducen entrevistas sistemáticas acerca de una lista de posibles exposiciones con las personas enfermas y con un grupo comparable de gente quienes no están enfermas. Por comparar con qué frecuencia se reporta una exposición por la gente enferma y por la gente sana, los investigadores pueden medir la asociación de la exposición con la enfermedad. Usando estadísticas de probabilidad, la probabilidad de no asociación es directamente calculada.

En cuanto a nuevos problemas transportados en alimentos emergen hay una necesidad para dispositivos y métodos novedosos para detectar patógenos transportados en alimentos. La presente invención proporciona un dispositivo para la detección de antígenos, como antígenos a partir de bacterias transportadas en alimentos y llena las necesidades de tener un dispotivo y ensayo con sensibilidad incrementada y/o velocidad de detección. La presente invención llena otras necesidades así como también será discutida en la presente.

Sumario de la Invención En algunas modalidades, la presente invención proporciona dispositivos para detectar un antígeno. En algunas modalidades, el dispositivo comprende un alojamiento que comprende un primer miembro de alojamiento y un segundo miembro de alojamiento, en donde el alojamiento además comprende a) una entrada en el primer miembro de alojamiento; b) un sistema de membrana para detección del antígeno el cual comprende un cojincillo conjugado, un miembro adhesivo, una membrana de prueba y un miembro absorbente; y e) un miembro de fuerza. En algunas modalidades, por lo menos una porción de cada uno de los cojincillos conjugados, membrana de prueba y miembro absorbente son substancialmente paralelos entre sí. En algunas modalidades, el dispositivo tiene una altura de menos de aproximadamente 0.15 cm, un ancho de menos de aproximadamente 2.1 cm, y una profundidad de menos de aproximadamente 4.7 cm.

En algunas modalidades, el miembro de fuerza es un sujetador de acero inoxidable. En algunas modalidades, el primer miembro de alojamiento es unido o está en contacto con el cojincillo conjugado, en donde el movimiento o remoción del primer miembro de alojamiento mueve el cojincillo conjugado o remueve el cojincillo conjugado a partir del dispositivo. En algunas modalidades, los dispositivos comprenden un cojincillo conjugado que comprende un primer anticuerpo específico al antígeno.

En algunas modalidades, el antígeno reconocido por el primer anticuerpo específico al antígeno es un antígeno patógeno transportado en alimento.

En algunas modalidades, la presente invención proporciona dispositivos para detectar un antígeno que comprende un primer miembro exterior y un segundo miembro exterior que comprende: un cojincillo conjugado, un primer miembro interno, y un segundo miembro interno, en donde el primer miembro interno y segundo miembro interno están en contacto entre sí, en donde el primer miembro externo y el primer miembro interno comprenden una entrada, y en donde entre el primer y segundo miembro internos está un sistema de membrana de detección de antígeno el cual comprende en el siguiente: una membrana de prueba, y un miembro absorbente; y en donde por lo menos una porción de cada uno del cojincillo conjugado, membrana de prueba, y miembro absorbente son substancialmente paralelos entre sí, y en donde el sistema de membrana de detección de antígeno está comprendido entre el primer miembro de y el segundo miembro interno, y en donde el cojincillo conjugado no está comprendido entre el primero y segundo miembro interno.

En algunas modalidades, la presente invención proporciona sistemas que comprenden un dispositivo como se describe en la presente y un recipiente de amortiguador o un recolector de muestra.

La presente invención también proporciona métodos para detectar un antígeno que usa cualquiera de los dispositivos y/o sistemas descritos en la presente .

En algunas modalidades, la presente invención proporciona un kit que comprende un dispositivo como se describe en la presente y uno o más de un control positivo, un control negativo, un folleto de instrucciones, un recipiente de amortiguador, y un recolector de muestra, o cualquiera combinaciones de los mismos.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 representa una vista lateral y una vista superior de un dispositivo representativo de acuerdo a algunas modalidades de la presente invención.

La Figura 2 representa un tipo de sistema de membrana de detección de antígeno para un dispositivo representativo de acuerdo a algunas modalidades de la presente invención.

La Figura 3 representa un tipo de sistema de membrana de detección de antígeno para un dispositivo representativo de acuerdo a las modalidades de la presente invención.

La Figura 4 representa un tipo de sistema de membrana de detección de antígeno para un dispositivo representativo de acuerdo a las modalidades de la presente invención .

La Figura 5 representa un tipo de sistema de membrana de detección de antígeno para un dispositivo representativo de acuerdo a algunas modalidades de la presente invención.

La Figura 6 representa miembros de fuerza representativos para un dispositivo representativo de acuerdo a algunas modalidades de la presente invención.

Las Figuras 7A-7D representan un dispositivo representativo de acuerdo a algunas modalidades de la presente invención.

Las Figuras 8A-8C representan un dispositivo representativo de acuerdo a algunas modalidades de la presente invención.

La Figura 9 representa un dispositivo representativo de acuerdo a algunas modalidades de la presente invención.

Descripción Detallada de la Invención Como se usa en la presente y a menos que se indique de otra forma, el término "aproximadamente" se propone para significar + 5% del valor que modifica. De esta forma, aproximadamente 100 significa 95 a 105.

La presente invención proporciona dispositivos y métodos para detectar antígenos u otras moléculas. En algunas modalidades, los dispositivos usan ensayos cromatográficos . En algunas modalidades, los ensayos de enlace específicos son empleados para indicar la presencia o ausencia de un antígeno .

El término "reactivo de captura" se refiere a un reactivo, por ejemplo un anticuerpo o proteína de enlace de antígeno o un fragmento de la misma, capaz de enlazar una molécula objetiva o analito a ser detectado en una muestra biológica. Un reactivo de captura puede también ser, por ejemplo, un oligonucleótido o un peptoide .

El término "detectar" o "detección" es usado en el sentido más amplio para incluir mediciones cualitativas y/o cuantitativas de un analito objetivo.

Los términos "unido" o "unión" pueden incluir tanto unión directa o unión indirecta. Dos componentes que están unidos directamente entre sí están también en contacto físico entre sí. Dos componentes que están unidos indirectamente entre si están unidos a través de un componente intermediario. Por ejemplo, el componente A puede estar unido indirectamente al componente B si el componente A está directamente unido al componente C y el componente C está unido al componente B. Por lo tanto, en el ejemplo, el componente A está unido indirectamente al componente B.

El término "aislado" se refiere a una molécula que está separada substancialmente de su ambiente natural . Por ejemplo, una proteína aislada es una que está separada substancialmente de la célula o fuente de tejido a partir de la cual se deriva.

El término "purificado" se refiere a una molécula que está substancialmente libre de otro material que se asocia con la molécula en su ambiente natural. Por ejemplo, una proteína purificada es substancialmente libre del material celular u otras proteínas a partir de la célula o tejido de la cual se deriva. El término se refiere a las preparaciones donde la proteína aislada es suficientemente pura para ser analizada, o por lo menos 70% a 80% (p/p) pura, por lo menos 80% a 90% (p/p) pura, por lo menos 90 a 95% pura; o por lo menos 95%, por lo menos 96%, por lo menos 97%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o por lo menos 100% (p/p) pura.

Los términos "enlace específico", "enlaza específicamente" y similares, significa que dos o más moléculas forman un complejo que es medible bajo condiciones fisiológicas o de ensayo y es selectivo. Un anticuerpo o proteína de enlace de antígeno u otra molécula es para "enlazar específicamente" a una proteína, antígeno, o epítopo si, bajo condiciones seleccionadas apropiadamente, el enlace no es inhibido substancialmente , mientras que al mismo tiempo no se inhibe enlace no específico. El enlace específico es caracterizado por una alta afinidad y es selectivo para el compuesto, proteína, epítopo, o antígeno. Enlace no específico usualmente tiene una baja afinidad. El enlace en anticuerpos IgG por ejemplo es generalmente caracterizado por una afinidad de por lo menos 10"7 M, tal como por lo menos aproximadamente 10"8 M, o por lo menos aproximadamente 10"9 M, o por lo menos aproximadamente 10"10 M, o por lo menos aproximadamente 10"11 M, o por lo menos aproximadamente 10"12 M. El término es también aplicable donde, por ejemplo, un dominio de enlace a antígeno es específico para un epítopo particular que no es realizado por antígenos numerosos, caso en el cual el anticuerpo o proteína que enlaza al antígeno que porta el dominio de enlace de antígeno generalmente no enlazar otros antígenos. En algunas modalidades, el reactivo de captura tiene un Kd igual o menos a 10"9M, 10"10M, o 10"1:1M para su pareja de enlace (por ejemplo antígeno) . En algunas modalidades, el reactivo de captura tiene un Ka mayor a o igual a 109 _1 para su pareja de enlace.

El reactivo de captura también se refiere a, por ejemplo, por ejemplo, anticuerpos. Los anticuerpos intactos, también conocidos como inmunoglobulinas , son típicamente proteínas glicosiladas tetraméticas compuestas de dos cadenas ligeras (L) de aproximadamente 25 kDa cada una, y dos cadenas pesadas (H) de aproximadamente 50 kDa cada una. Dos tipos de cadena ligera, nombradas lambda y kappa, existen en los anticuerpos. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de cadenas pesadas, las inmunglobulinas son asignadas a cinco clases principales: A, D, E, G y M, y varias de estas pueden ser divididas en subclases (isotipos), por ejemplo IgGl, IgG2, IgG3 , IgG4 , IgAl, y IgA2. Cada cadena ligera está compuesta de un dominio variable N-terminal . (VL por sus siglas en inglés) y un dominio constante (CL por sus siglas en inglés) . Cada cadena pesada está compuesta de un domino variable N-terminal (VH) , tres o cuatro dominios constantes (CH) , y una región de bisagra. El dominio CH más proximal a VH es designado CH1. Los dominios VH y VL consisten de cuatro regiones de secuencias conservadas relativamente nombradas regiones de cuadro (FR1 , FR2 , FR3 , and FR4 ) , las cuales forman un andamio para tres regiones de secuencias hipervariables (regiones determinantes de complementaridad, CDR por sus siglas en inglés) . Las regiones CDR contienen la mayoría de los residuos responsables para interacciones específicas del anticuerpo o proteína que enlaza al antígeno con el antígeno.

Las CDR son referidas como CDR1 , CDR2 , y CDR3. Por consiguiente, los constituyentes CDR sobre la cadena pesada son referidos como Hl, H2 , y H3 , mientras que los constituyentes CDR sobre la cadena ligera son referidos como Ll, L2 y L3. CDR3 es la fuente más grande de diversidad molecular dentro del anticuerpo o sitio de enlace de proteína de enlace al antígeno. H3 , por ejemplo, puede ser tan corta como dos residuos de aminoácidos o mayor a 26 aminoácidos. Las estructuras de subunidad y tres configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas en la técnica. Para una revisión de la estructura del anticuerpo, ver Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Eds . Harlow et al., 1988. Un experto en la técnica reconocerá que cada estructura de subunidad, por ejemplo, una estructura CH, VH, CL, VL, CDR, y/o FR, comprende fragmentos activos. Por ejemplo, los fragmentos activos pueden consistir de la porción de la subunidad VH, VL, o CDR que enlaza al antígeno, es decir, el fragmento de enlace del antígeno, o la porción de la subunidad CH que enlaza a y/o activa un receptor y/o complemento de Fe.

Ejemplos no limitantes de fragmentos de enlace comprendidos dentro del término "anticuerpo específico a antígeno" usado en la presente incluye: (i) un fragmento de Fab, un fragmento monovalente que consiste de los dominios VL, VH, CL y CH1 ; (ii) un fragmento F(ab' )2# un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab enlazados por un puente disulfuro en la región de bisagre; (iii) un fragmento Fd que consiste de los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste de los dominios VL y VH de una brazo sencillo de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb, el cual consiste de un dominio VH; y (vi) una CDR aislada. Adicionalmente , aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, son codificados por genes separados, pueden ser unidos recombinantemente por un enlazador sintético, creando una cadena de proteína sencilla en la cual los dominios VL y VH se emparejan para formar moléculas monovalentes (conocidas como cadena sencilla Fv (scFv) ) . El enlazador usado más comúnmente es un residuo 15 péptido (Gly4Ser)3, pero otros enlazadores son también conocidos en la técnica. Los anticuerpos de cadena sencilla son también propuestos para estar comprendidos dentro de los términos "anticuerpo o proteína de enlace de antígeno" o "fragmento de enlace de antígeno" de un anticuerpo. El anticuerpo puede también ser un anticuerpo policlonal, anticuerpo monoclonal, anticuerpo quimérico, fragmento de enlace de antígeno, fragmento Fe, anticuerpos de cadena sencilla, o cualesquiera derivados de los mismos.

Estos anticuerpos son obtenidos usando técnicas convencionales conocidas para aquellos expertos en la técnica, y los fragmentos son tamizados para utilidad en la misma forma como anticuerpos intactos. La diversidad de anticuerpo es creada por genes de línea germinal múltiples que codifican dominios variables y una variedad de eventos somáticos. Los eventos somáticos incluyen recombinación de segmentos de genes variables con segmentos de genes de diversidad (D) y de unión (J) para hacer un dominio VH completo, y la recombinación de segmentos de genes variables y de unión para hacer un dominio VL completo. El proceso de recombinación por si mismo es impreciso, resultando en la pérdida o adición de aminoácidos en las uniones V(D)J. Estos mecanismos de diversidad ocurren en la célula B de desarrollo antes a la exposición de antígeno. Después de la estimulación antigénica, los genes de anticuerpo expresados en las células B sufren de mutación somática. En base al número estimado de segmentos de genes de línea germinal, la recombinación aleatoria de estos segmentos, y emparejamiento VH-VL aleatoria, hasta l.6xl07 anticuerpos diferentes pueden ser producidos (Fundamental Immunology, 3rd ed. (1993), ed. Paul, Raven Press, New York, N.Y.) . Cuando otros procesos que contribuyen a la diversidad de anticuerpo (como la mutación somática) son tomados en cuenta, se piensa que arriba de lxlO10 diferentes anticuerpos pueden ser generados ( Immunoglobulin Genes, 2nd ed. (1995), eds . Jonio et al., Academic Press, San Diego, Calif.). Debido a los muchos procesos implicados en generar diversidad de anticuerpos, es improbable que los anticuerpos monoclonales derivados independientemente con la misma especificidad de antígeno tendrá secuencias de aminoácidos idénticas.

El anticuerpo o moléculas de proteína de enlace al antígeno capaces de interactuar específicamente con los antígenos, epítopos, u otras moléculas descritas en la presente pueden ser producidos por métodos bien conocidos para aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales pueden ser producidos por generación de hibridomas de acuerdo con métodos conocidos. Los hibridomas formados en esta forma pueden entonces ser tamizados usando métodos estándar, como ensayo inmunoadsorbente enlazado a enzima (ELISA por sus siglas en inglés), y análisis Biacore, para identificar uno o más hibridomas que producen un anticuerpo un anticuerpo que interactúa específicamente con una molécula o compuesto de interés .

Como una alternativa para preparar los hibridomas secretores de anticuerpo monoclonales, un anticuerpo monoclonal a un polipéptido de la presente invención puede ser identificado y aislado por tamizar una biblioteca de inmunoglob lina combinatorial recombinante (por ejemplo, una biblioteca de exhibición de fago de anticuerpo) con un polipéptido de la presente invención para por lo mismo aislar los miembros de biblioteca de inmunoglobulina que enlazan al péptido. Las técnicas y kits comercialmente disponibles para generar y tamizar bibliotecas de exhibición de fagos son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. Adicionalmente , ejemplos de métodos y reactivos particularmente capaces para uso en generar y tamizar anticuerpo o bibliotecas de exhibición de fagos de proteína de enlace de antígeno pueden ser encontrados en la literatura .

El término "reactivo de captura" también incluye anticuerpos quiméricos, como anticuerpos humanizados, así cmo también anticuerpos totalmente humanizados. En algunas modalidades el reactivo de captura es un anticuerpo anti-E. coli 0157 :H7 de cabra (Cat #: 70-XG13, Fitzgerald Industries); E. coli 0157:H7 mono (Cat #: 10-E13A, Fitzgerald Industries); E. coli 0157:H7 (Cat #: 10C-CR1295M3 , Fitzgerald Industries); E. coli 0157:H7 mono (Cat #: 10-E12A, Fitzgerald Industries); o IgG anti-ratón de cabra (Cat #: ABSE-020, DCN) .

Con referencia a los dibujos, en algunas modalidades, las figuras 1 a 9 representan dispositivos representativos, componentes de los dispositivos representativos y varias vistas de los dispositivos representativos .

La Figura 1 representa un dispositivo representativo que comprende un primer miembro de alojamiento (2) que además comprende una entrada de alojamiento (6) , y un segundo miembro de alo amiento (4) . En algunas modalidades, el primer y segundo miembros de alojamiento pueden ser construidos como una unidad simple. La entrada de alojamiento permite la introducción de una muestra en los componentes dentro del alojamiento. La entrada del alojamiento puede ser de suficiente tamaño para manejar una cantidad apropiada de volumen de una solución que es agregada al dispositivo. En algunas modalidades, el tamaño de la abertura creada por el alojamiento es suficiente para manejar aproximadamente 0.1 a aproximadamente 3 mi, aproximadamente 0.1 a aproximadamente 2.5 mi, aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2.0 mi, aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1.0 mi , aproximadamente 0.5 a aproximadamente 1.5 mi , aproximadamente 0.5 a aproximadamente 1.0 mi , y aproximadamente 1.0 a aproximadamente 2.0 mi. En algunas modalidades, las dimensiones del dispositivo son de tal forma que cualquier dimensión (por ejemplo, ancho, profundidad o altura) es menor a o igual a aproximadamente 5.08 cm (2.000 pulgadas) . En algunas modalidades , la altura del dispositivo es menor a aproximadamente 0.635 cm (0.250 pulgadas) , menor a aproximadamente 0. 254 cm (0 .100 pulgadas) , menor a aproximadamente 0. 191 cm (0 .075 pulgadas) , menor a aproximadamente 0. 165 cm (0 .065 pulgadas) , menor a aproximadamente 0. 152 cm (0.06 pulgadas) , o menor a aproximadamente 0.140 cm (0.055 pulgadas) . En algunas modalidades, la altura del dispositivo es aproximadamente 0.127 cm (0.050 pulgadas). En algunas modalidades, el ancho o profundidad del dispositivo es menor a o igual a aproximadamente 5.08 cm (2.000 pulgadas), aproximadamente 4.83 cm (1.900 pulgadas), aproximadamente 4.699 cm (1.850 pulgadas) , aproximadamente 4.572 cm (1.800 pulgadas) , aproximadamente 4.445 cm (1.750 pulgadas), aproximadamente 4.191 cm (1.650 pulgadas), aproximadamente 4.064 cm (1.600 pulgadas), o aproximadamente 3.81 cm (1.500 pulgadas). En algunas modalidades, el dispositivo es aproximadamente 0.127 cm (0.050 pulgadas) en altura, aproximadamente 4.445 cm (1.750 pulgadas) en profundidad, y aproximadamente 3.81 cm (1.500 pulgadas) en ancho.

En algunas modalidades, el dispositivo comprende una pluralidad de componentes que comprenden uno o más de: un miembro removible, un cojincillo conjugado, un miembro adhesivo, una membrana de prueba, un miembro absorbente, un miembro de fuerza, un miembro de soporte, o cualquier combinación de los mismos.

En algunas modalidades, el dispotivo comprende un miembro de fuerza, el dispositivo comprende un miembro de fuerza, un miembro removible, un cojincillo conjugado, una membrana de prueba, un miembro adhesivo y/o un miembro adsorbente. En algunas modalidades, el dispositivo comprende un sistema de membrana de detección de antígeno. En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno comprende un cojincillo conjugado, una membrana de prueba, y un miembro adsorbente. En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno comprende una membrana permeable adicional, pero el dispositivo puede también ser libre de una membrana permeable. En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno comprende en el siguiente orden: un cojincillo conjugado, un miembro adhesivo, una membrana de prueba, y un miembro absorbente.

La Figura 2 representa una vista separada del interior de un dispositivo representativo que comprende un miembro removible (5), un cojincillo conjugado (50), un miembro adhesivo (10) , una membrana de prueba (30) , un miembro absorbente (40), y un miembro de soporte (20), en donde el miembro de soporte además comprende una entrada de miembro de soporte opcional (25) . El miembro removible y el miembro adhesivo puede también comprender la entrada de miembro removible opcional (8) y entrada de miembro adhesivo (12), respectivamente. Los componentes pueden residir dentro, por ejemplo,, del dispositivo de la Figura 1.

La Figura 3 representa los componentes de otro dispositivo representativo que comprende un miembro adhesivo (10) , un miembro de soporte (20) , una membrana de prueba (30) , y un miembro absorbente (40) . Como puede ser observado en la Figura 3, una muestra puede fluir a través del miembro adhesivo (10) y contactar la membrana de prueba.

La Figura 4 representa un miembro adhesivo (10) , un miembro de soporte (20) , una membrana de prueba (30) , y un miembro absorbente (40) . La Figura 4 representa los componentes que son substancialmente paralelos entre sí. La Figura 4 representa además el miembro de soporte (20) que comprende una entrada de miembro de soporte (25) . Esta entrada puede ser usada para permitir a la muestra fluir verticalmente a través del dispositivo.

La Figura 5 representa, en parte, un cojincillo conjugado (50), una membrana de prueba (30), y un miembro absorbente (40) . La Figura 5 también representa el cojincillo conjugado en contacto y/o unido a un miembro removible (5) . La Figura 5 también representa el miembro removible que es removido o movido lejos del dispositivo, el cual también se remueve o mueve lejos del dispositivo el cojincillo conjugado. El movimiento del cojincillo conjugado permite a la membrana de prueba, ser visualizada, lo cual facilita el análisis y detección de antígenos.

La Figura 6 representa ejemplos de miembros de fuerza. Miembros de fuerza representativos pueden llegar en una variedad de conformaciones, tamaños y configuraciones, pero cada miembro aplica presión en los componentes que son colocados en o en el miembro de fuerza. Cada miembro de fuerza puede también comprender una abertura (+) en la cual la muestra de análisis es aplicada. La Figura 6 representa ejemplos no limitantes de miembros de fuerza con un primer miembro (110) y un segundo miembro (100) .

Las Figuras 7A, 7B, 7C y 7D representan, en parte, un miembro de fuerza que comprende un primer miembro (110) , b) un segundo miembro (100), una entrada (115), y un sistema de detección de membrana de antígeno (120) . Las Figuras 7A y 7B también representan, en parte, un cojincillo conjugado (50) . El cojincillo conjugado no se observa en las Figuras 7C y 7D . Las Figuras 7c y 7D también representan, en parte, una membrana de prueba (30) que es parte del sistema de detección de membrana de antígeno. La Figura 7D también representa en parte, una membrana de prueba (30) que ha sido reaccionada con un control, la cual es visualizada por la banda.

Las Figuras 8A-8C representan, en parte, un recipiente que comprende una lengüetaremovible o movible (200), una entrada (210), un cojincillo conjugado (50), y la lengüetadel cojincillo conjugado (250). La lengüetadel cojincillo conjugado (255) puede ser usado para remover el cojincillo conjugado (50) a partir del dispositivo para exponer la membrana de prueba. Por ejemplo, un usuario puede jalar la lengüetadel cojincillo de conjugado (250) para remover el cojincillo conjugado (50) del recipiente. Lo que no se visualiza es el sistema de membrana de detección de antígeno que está comprimido entre un primer miembro (110) y un segundo miembro (100) como se describe en la presente.

La Figura 9, representa, en parte, un primer miembro externo (310) , un segundo miembro externo (320) , una lengüetamovible o removible (330), y un cojincillo conjugado (50) . La lengüetamovible o removible (330) comprende una entrada que expone el cojincillo conjugado (50) de tal forma que la muestra puede ser aplicada al cojincillo conjugado. La Figura 9 no muestra el primer miembro interno (110) y el segundo miembro interno (100) que comprende el sistema de membrana de detección del antígeno (120) . La lengüetaremovible o movible cuando se mueve o remueve, mueve o remueve el cojincillo conjugado (50), lo cual permite que la membrana de prueba sea visualizada y analizada.

La entrada del miembro removible dentro del miembro removible permite la introducción de una muestra sobre el cojincillo conjugado. La entrada puede ser de tamaño suficiente para manejar una cantidad apropiada de volumen de una solución que es agregada al dispositivo. En algunas modalidades, el tamaño de la entrada es lo suficientemente grande para manejar aproximadamente 0.1 a aproximadamente 3 mi, aproximadamente 0.1 a aproximadamente 2.5 mi, aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2.0 mi, aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1.0 mi , aproximadamente 0.5 a aproximadamente 1.5 mi , aproximadamente 0.5 a aproximadamente 1.0 mi , y aproximadamente 1.0 a aproximadamente 2.0 mi . El miembro removible puede también ser construido de tal forma que una porción del miembro removible es permeable a soluciones (es decir, el área definida por la entrada del miembro removible) y otra área es impermeable. El área permeable puede actuar como una entrada ya que puede permitir que las soluciones crucen el miembro removible y el contacto al cojincillo conjugado. La entrada del miembro removible puede tener cualquiera de las numerosas conformaciones y tamaños. En algunas modalidades, el primer miembro de alojamiento sirve como el miembro removible. En otras modalidades, el primer miembro de alojamiento y el miembro removible son componentes separados. En modalidades donde el primer miembro de alojamiento y el miembro removible son componentes separados, por lo menos una porción de la entrada de alojamiento y la entrada miembro removible se traslapan de tal forma que puede entrar la solución a través de ambas entradas.

En algunas modalidades, el miembro removible contacta una primera superficie de un cojincillo conjugado. El miembro removible puede también estar unido al cojincillo conjugado. El miembro removible puede estar unido al cojincillo conjugado por cualquier medio de tal forma que cuando se remueve el miembro removible a partir del dispositivo o su posición se cambia, se remueve también el cojincillo o la posición del cojincillo conjugado también se cambia. El miembro removible puede estar unido al cojincillo conjugado con, por ejemplo, pero no limitado a, un adhesivo. Los adhesivos incluyen, pero no son limitados a, pegamento, cinta adhesiva, u otra substancia que pueda permitir que el miembro removible y el cojincillo conjugado estén unidos uno al otro .

El miembro removible, en algunas modalidades, contacta directamente el cojincillo conjugado o contacta indirectamente el cojincillo conjugado a otra capa. La muestra puede ser, en algunas modalidades, directamente aplicado al cojincillo conjugado a través de la abertura en el miembro removible.

El cojincillo conjugado puede ser una membrana u otro tipo de material que pueda comprender un reactivo de captura. El cojincillo conjugado puede ser un acetato de celulosa, nitrato de celulosa, poliamida, policarbonato, fibra de vidrio, membrana, polietersulfona , celulosa regenerada (RC por sus siglas en inglés) , politetrafluoroetileno (PTFE por sus siglas en inglés) , poliéster (por ejemplo, tereftalato de polietileno) , policarbonato (por ejemplo, 4 , 4 -hidroxi -difenil - 2 - 2 " -propano) , óxido de aluminio, éster celulosa mixta (por ejemplo, (por ejemplo, mezcla de acetato de celulosa y nitrato de celulosa) , nylon (por ejemplo, poliamida, hexametílendiamina, y Nylon 66 ) , polipropileno, PVDF, polietileno de alta densidad (HDPE por sus siglas en inglés) + agente de nucleación "dibenzoato de aluminio" (DBS por sus siglas en inglés) (por ejemplo 80u 0.024 HDPE DBS (Porex) ) , y HDPE, o cualesquiera mezclas de los mismos. Ejemplos de cojincillos conjugados también incluyen, CYCLOPORE® (tereftalato de polietileno) , NUCLEOPORE® (tereftalato de polietileno) , MEMBRA-FIL® (acetato y nitrato de celulosa) , WHATMAN® (acetato y nitrato de celulosa) , Whatman #12 -S (rayón) , ANOPORE® (óxido de aluminio) , A ODISC® (óxido de aluminio) , Sartorius (acetato de celulosa, por ejemplo 5 µt?) , y Whatman Standard 17 (vidrio enlazado) . En algunas modalidades, el cojincillo conjugado puede ser una matriz a base de nanopartículas como, pero no limitadas a, una hoja 2D, o matriz 3D comprendida de nanopartículas a base de carbono, nanopartículas de oro o de aleación de metal, matrices de copolímero, así como también semiconductores monodispersos , nanocristales magnéticos, metálicos y ferroeléctricos .

En algunas modalidades, el cojincillo conjugado o membrana de prueba, o ambos, comprenden un reactivo de captura. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado o membrana de prueba, o ambos, se pone en contacto con el reactivo de captura y entonces se permite secar. El cojincillo conjugado o membrana de prueba, o ambos, puede también comprender composiciones para conservar el reactivo de captura de tal forma que puede ser almacenado establemente en temperatura ambiente o bajo refrigeración o temperaturas de congelamiento. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado o membrana de prueba,, o ambos, se enjuaga con un amortiguador antes a que se aplique el reactivo de captura. En algunas modalidades, el amortiguador es un amortiguador de bloqueo que se usa para evitar el enlace no específico. En algunas modalidades, el amortiguador comprende Borato, BSA, PVP40 y/o Tween-100, o cualesquiera mezclas de los mismos. En algunas modalidades, el amortiguador es borato 10 mM, BSA al 3%, PVP40 al 1%, y Tween-100 al 0.25%. En algunas modalidades el reactivo de captura se aplica al cojincillo conjugado o membrana de prueba o ambos en una solución que comprende trehalosa y sacarosa. En algunas modalidades, el reactivo de captura es aplicado al cojincillo conjugado o membrana de prueba, o ambos, en una solución que comprende trehalosa, sacarosa y fosfato y/o BSA. En algunas modalidades, el reactivo de captura es aplicado en una solución que contiene trehalosa 5%, sacarosa 20%, fosfato 10 mM y BSA al 1%.

En algunas modalidades, el cojincillo conjugado o membrana de prueba, o ambos, comprende aproximadamente 0.5 a aproximadamente 5.0 yg de un reactivo de captura, aproximadamente 1 a aproximadamente 3 pg de un reactivo de captura, aproximadamente 1 a aproximadamente 2 µ de un reactivo de captura, aproximadamente a 2 a aproximadamente 3 pg de un reactivo de captura, aproximadamente 1.5 pg de un reactivo de captura, aproximadamente 2.5 \ig de un reactivo de captura, o aproximadamente 2.7 g de un reactivo de captura. En algunas modalidades, el miembro removible contacta una primera superficie del cojincillo conjugado y el miembro adhesivo contacta una segunda superficie del cojincillo conjugado .

En algunas modalidades, el dispositivo comprende un miembro adhesivo. El miembro adhesivo puede comprender una entrada del miembro adhesivo que permite que la muestra fluya a través del cojincillo conjugado y contacte la membrana de prueba. En algunas modalidades, la entrada del miembro adhesivo es el mismo tamaño o conformación como la entrada del miembro removible. En algunas modalidades, la entrada del miembro adhesivo es un tamaño o conformación diferente como la entrada del miembro removible. En algunas modalidades, las entradas en el miembro adhesivo tienen la misma conformación pero tienen diferentes áreas. Las entradas con diferentes áreas pueden ser consideradas para tener diferentes tamaños. El miembro adhesivo puede ser hecho de cualquier substancia para adherir un miembro o membrana a otro miembro o membrana. En algunas modalidades, el miembro adhesivo es impermeable a líquidos. En algunas modalidades, el miembro adhesivo contacta el miembro removible .

La membrana de prueba es una membrana donde ocurre la detección de una pareja de enlace a un reactivo de captura. Las membrana de prueba incluyen, pero no se limitan a, membrana de nitrocelulosa, una membrana de nylon, una membrana de fluoruro de polivinilideno, una membrana de polietersulfona, y similares. La membrana de prueba puede ser cualquier material que puede ser usado por una personan con experiencia en la técnica para detectar la presencia de una pareja de enlace del reactivo de captura (por ejemplo, antígeno o epítopo) . La membrana de prueba puede también comprender un reactivo de captura. En algunas modalidades, la membrana de prueba está en contacto con un reactivo de captura y el reactivo de captura es permitido para secar y adherirse a la membrana de prueba. Ejemplos de las membranas de prueba incluyen, pero no se limitan a Protran BA83, hatman, Opitran BA-SA83, y 0.22 µp\ de white plain (Millipore Producto no. SA3J036107) . Las membranas de prueba pueden también estar comprendidas de matrices de nanopartículas a las cuales se enlazan los reactivos de captura. Los nanocristales pueden estar dispuestos en hojas 2D y matrices 3D con materiales como, pero no limitados a, partículas a base de carbono, partículas de oro o aleación de metal, matrices de copolímero, así como también semiconductores monodispersos , nanocristales magnéticos, metálicos y ferroeléctricos . La membrana de prueba puede comprender una pluralidad de reactivos de captura. En algunas modalidades, la membrana de prueba comprende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10 reactivos de captura. En algunas modalidades, la membrana de prueba comprende una pluralidad de áreas cada una con un reactivo de captura diferente. En algunas modalidades, la pluralidad de áreas no traslapa o coincide con la otra. Por usar una pluralidad de reactivos de captura, pueden ser detectadas parejas de enlace múltiple (por ejemplo, epítopos o antígenos) .

En algunas modalidades, el dispositivo también comprende un miembro absorbente. El miembro absorbente puede también ser referido como "membrana de mechar" o "cojincillo de mecha" o "cojincillo de mechar". El miembro absorbente absorbe el fluido que fluye a través del dispositivo cuando se aplica la muestra al dispositivo y proporcionar una fuerza de mechado que ayuda en el flujo de la muestra cuando se aplica al dispositivo.

El miembro absorbente puede ser cualquier material que pueda facilitar el flujo de la muestra a través del cojincillo conjugado y a la membrana de prueba. Ejemplos de miembros absorbentes incluyen, pero no se limitan a celulosa, super polímeros absorbentes, cojincillos de fibra de vidrio (por ejemplo C083 (Millipore) ) , y similares. En algunas modalidades, el dispositivo comprende una pluralidad (por ejemplo 2 ó más) de miembros absorbentes. En algunas modalidades, el alojamiento comprende 2, 3, 4, ó 5 miembros absorbentes. En algunas modalidades, el dispositivo comprende un miembro absorbente. En algunas modalidades, el miembro absorbente comprende una o más membranas hasta 10 membranas individuales, y cada membrana puede ser el mismo material o un material diferente. En algunas modalidades, el dispositivo consiste de solamente 1 membrana que es un miembro absorbente .

En algunas modalidades, el dispositivo comprende un miembro de fuerza. La Figura 6 representa ejemplos representativos, pero no limitantes de miembros de fuerza. El miembro de fuerza puede, en algunos casos, ser usado para aplicar presión o para comprimir los otros componentes del sistema de membrana de detección de antígeno contra otro. El miembro de fuerza puede ser hecho de cualquier material incluyendo, pero no limitado a acero inoxidable. El acero inoxidable puede ser cortado con láser de tal forma que puede actuar como un sujetador. El miembro de fuerza (por ejemplo, clip) actúa para aplicar presión al sistema de membrana. El miembro de fuerza no está limitado a un clip, sino más bien puede tener cualquier forma que pueda aplicar presión al sistema de membrana (por ejemplo matrices de nanopartícula) y pistón como estructuras colocadas estratégicamente dentro del ensamble. El miembro de fuerza permite al dispositivo trabajar con flujo vertical como lo opuesto a depender sobre el flujo lateral. En algunas modalidades, el miembro de fuerza contacta una superficie del miembro absorbente. En algunas modalidades, el miembro de fuerza contacta una superficie del miembro absorbente y una superficie de la capa removible. En algunas modalidades, el miembro de fuerza comprende el sistema de detección de membrana a partir de la parte superior e inferior del sistema de detección de membrana. Por ejemplo, el miembro de fuerza puede emparedar todas las capas del. sistema de detección de membrana. En algunas modalidades se une el miembro de fuerza al miembro de soporte. Ver, por ejemplo, la Figura 7C que muestra un componente (110) unido al componente (100) .

En algunas modalidades, el dispositivo comprende, en el siguiente orden, un miembro removible, un cojincillo conjugado y un miembro adhesivo.

El dispositivo puede también comprender un miembro de soporte. El miembro de soporte, en algunas modalidades, contacta una superficie del miembro absorbente. El miembro de soporte puede también tener una entrada del miembro de soporte. La entrada puede tener el mismo tamaño y/o conformación como la entrada en el miembro removible y/o el miembro adhesivo. En algunas modalidades, el miembro de soporte comprende una entrada que tiene diferente tamaño y /o conformación como la entrada en el miembro removible y/o el miembro adhesivo. El miembro de soporte puede ser hecho de cualquier material incluyendo, pero no limitado a, plástico. En algunas modalidades, el segundo miembro de alojamiento sirve como el miembro de soporte.

Los dispositivos descritos en la presente pueden ser usados en ensayos para detectar la presencia de una pareja de enlace del reactivo de captura. Por ejemplo, un antígeno puede ser detectado por un anticuerpo usando los dispositivos de la presente invención. El dispositivo de la presente invención emplea flujo vertical, "flujo vertical" se refiere a la dirección en que la muestra fluye entre las diferentes membranas y miembros presentes en el dispositivo. Flujo vertical se refiere a una muestra que fluye a través de la membrana (por ejemplo, de la parte superior a la inferior) opuesto al flujo lateral, el cual se refiere a una muestra que fluye entre (por ejemplo lado a lado) una membrana, cojincillo o miembro absorbente. En un dispositivo de flujo lateral, las membranas y cojincillos son asentados horizontalmente adyacentes uno al otro substancialmente en el mismo plano. En un dispositivo de flujo vertical, cada membrana o cojincillo es substancialmente paralelo o completamente paralelo uno al otro y ocupan planos espaciales substancialmente diferentes en el dispositivo. Las membranas y cojincillos pueden ocupar planos similares cuando están comprimidos o colocados bajo presión. En algunas modalidades, por lo menos una porción de cada miembro, membrana o cojincillo es estratificado en la parte superior de otro. En algunas modalidades, por lo menos una porción de cada capa de miembro, membrana o cojincillo es substancialmente paralelo a otro. En algunas modalidades, por lo menos una porción de cada capa está en un plano espacial diferente a cada una de otra capa .

Para permitir que ocurra el flujo vertical eficientemente, en algunas modalidades, el cojincillo conjugado, la membrana de prueba, la membrana de prueba y el miembro adhesivo está substancialmente paralelos entre sí. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado, membrana de prueba , y el miembro adhesivo están presentes en diferentes planos espaciales. En algunas modalidades, el alojamiento también comprende una membrana hidrofóbico (no mostrada) que puede hacer lento o detener el flujo vertical de la muestra. La membrana hidrofóbica puede estar en contacto con la membrana de prueba, lo cual puede permitir a la muestra alojarse o descansar sobre la membrana de prueba. El alojamiento puede permitir la sensibilidad y detección incrementadas. El flujo vertical es modulado por la presión que es aplicada a la membrana, cojincillo, y miembros. En algunas modalidades, la presión es aplicada perpendicular a la membrana de prueba y/o el cojincillo conjugado. La presión puede ser aplicada de tal forma que el cojincillo conjugado está comprimido contra el alojamiento.

El miembro de fuerza puede aplicar presión que es substancialmente perpendicular a la membrana de prueba. La presión facilita el flujo vertical. La presión permite a cada componente del sistema de membrana de detección de antígeno estar en contacto con otro componente. La presión puede ser liberada para detener el flujo de tal forma que la muestra de prueba puede alojarse o descansar sobre la membrana de prueba, lo cual puede permitir mayor sensibilidad. La presión puede entonces ser reaplicada para permitir que continúe el flujo vertical por permitir que la muestra fluya en el miembro adhesivo (s). El miembro de fuerza puede aplicar presión de tal forma que el cojincillo conjugado contacta una porción del alojamiento (por ejemplo, primer miembro de alojamiento o capa removible) . En algunas modalidades, el cojincillo conjugado contacta el alojamiento cuando no está bajo la presión que es ejercida por el miembro de fuerza pero ante el miembro de fuerza que ejerce presión al cojincillo conjugado está comprimido contra una porción del alojamiento.

En algunas modalidades, el cojincillo conjugado contacta el perímetro de la entrada del alojamiento. La entrada del alojamiento puede también comprender un collar u otra característica similar, como un anillo 0. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado contacta el perímetro de un collar y/o anillo O. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado es capaz de ser comprimido contra el perímetro de la entrada del alojamiento, el cual puede incluir, en algunas modalidades, un collar y/o un anillo O.

"Capaz de ser comprimido contra el perímetro del alojamiento de entrada" se refiere a una membrana o cojincillo (por ejemplo, cojincillo conjugado) que está comprimido ya sea directamente en contacto con el perímetro de la entrada de alojamiento o que está comprimido contra otra capa o material (por ejemplo, membrana) que está en contacto con el perímetro de la entrada de alojamiento.

En algunas modalidades, el cojincillo conjugado no está en contacto físico directo con el alojamiento pero está en contacto fluido con el alojamiento. "Contacto fluido" significa que si una muestra es aplicada al dispositivo a través de la entrada de aloj miento u otra abertura, el fluido contactará el cojincillo conjugado. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado puede ser separado del alojamiento por otra membrana, tal como una membrana permeable, donde la otra membrana está en contacto físico directo con el alojamiento o en contacto físico directo con el collar o anillo 0. Cuando la muestra es aplicada al dispositivo, el fluido puede contactar la otra primera membrana y entonces contacta el cojincillo conjugado. Esto es solo un ejemplo del cojincillo conjugado que está en contacto fluido con el alojamiento. Hay numerosas modalidades diferentes donde el cojincillo conjugado no está en contacto directo físico con el alojamiento, el collar o el anillo O, pero está en contacto fluido con el alojamiento.

El miembro de fuerza puede aplicar cualquier presión que sea suficiente para facilitar el flujo vertical entre las diferentes capas. En algunas modalidades, la fuerza es menor a 0.450 kgs (1 lbf) . La fuerza puede también comprender una membrana hidrofóbica o impermeable también si una está presente en el dispositivo.

En algunas modalidades, el miembro de fuerza contacta una primera superficie de un miembro adhesivo. En algunas modalidades, un cojincillo conjugado contacta una membrana de prueba. En algunas modalidades, una primera superficie de una membrana de prueba contacta una membrana permeable. En algunas modalidades, una segunda superficie de la membrana de prueba contacta una segunda superficie del cojincillo absorbente. En algunas modalidades, el dispositivo comprende una membrana hidrofóbica, y, por ejemplo, la membrana hidrofóbica contacta una segunda superficie de la membrana de prueba. En algunas modalidades, la membrana hidrofóbica contacta una primera superficie del cojincillo absorbente. En algunas modalidades, un cojincillo conjugado contacta , un miembro adhesivo. En algunas modalidades, una membrana de prueba contacta un miembro adhesivo.

En algunas modalidades, una primera superficie del cojincillo conjugado contacta el alojamiento y una segunda superficie del cojincillo conjugado contacta una primera superficie del miembro adhesivo, en donde la segunda superficie del miembro adhesivo contacta una primera superficie de la membrana de prueba, en donde una segunda superficie de la membrana de prueba contacta una primera superficie del cojincillo absorbente, en donde una segunda superficie del cojincillo absorbente contacta el miembro de soporte. En algunas modalidades, la primera superficie del cojincillo conjugado contacta un perímetro de la entrada de alojamiento. En algunas modalidades, la primera superficie del cojincillo conjugado contacta un perímetro de un collar o un anillo 0.

En algunas modalidades, cualquiera de una o más de las entradas comprende una abertura elegida de un intervalo d aproximadamente 0.2 a aproximadamente 20 era2. En algunas modalidades, cualquiera de una o más de las entradas tiene aproximadamente 1 a aproximadamente 2 era en diámetro. En algunas modalidades, cualquiera de una o más de las entradas tiene aproximadamente 1 o aproximadamente 1.5 cm en diámetro. En algunas modalidades, cualquiera o más de las entradas tiene aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, o aproximadamente 5 en diámetro.

En algunas modalidades, un dispositivo para detectar un antígeno comprende un primer miembro y un segundo miembro. En algunas modalidades, el primer miembro y el Segundo miembros están en contacto entre sí. En algunas modalidades, el primer miembro comprende una o más entradas. En algunas modalidades, entre el primer y el segundo miembro está un sistema de membrana de detección de antígeno. En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno entre el primer y segundo miembros comprende un cojincillo conjugado, un miembro adhesivo, una membrana de prueba y un miembro adhesivo. En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno comprende en el siguiente orden: un cojincillo conjugado; un miembro adhesivo; una membrana de prueba ; y un miembro adhesivo. Como se discute en la presente, en algunas modalidades, por lo menos una porción d cada uno del cojincillo conjugado, membrana de prueba, y miembro adhesivo están substancialmente paralelos entre sí.

En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno está comprendido entre el primer y segundo miembros (por ejemplo del miembro de fuerza) . En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno está comprendido entre un plano formado por el primer miembro y un plano formado por el segundo miembro en donde los planos formados por el primer y segundo miembros están substancialmente paralelos entre sí y el sistema de membrana de detección de antígeno. En algunas modalidades, los planos están paralelos uno al otro y el sistema de membrana de detección de antígeno. En algunas modalidades, el primer y Segundo miembros que comprenden el sistema de detección de membrana de antígeno es un miembro de fuerza. Por ejemplo, el miembro de fuerza puede ser referido como que comprende un primer y segundo miembros para crear la fuerza que comprende el sistema de detección de membrana de antígeno .

En algunas modalidades, el primer y segundo miembros están unidos entre si a lo largo del obre del primer miembro que está paralelo a un borde del segundo miembro. En algunas modalidades, el primer y segundo miembros están unidos por un resorte, bisagra y similares. La forma por la cual el primer y segundo miembros están unidos no está limitado y puede ser por cualquier estructura que permite al sistema de membrana de antígeno estar comprimido entre el primer y segundo miembros. En algunas modalidades, el primer y segundo miembros están contiguos entre si y forman un clip. Ejemplos de clips (por ejemplo, miembros de fuerza) son mostrados en toda la presente solicitud (por ejemplo Figura 6) . El clip, puede ser por ejemplo cortado del metal u otro tipo de material que permite al primer miembro ser flexible de tal forma que el sistema de detección de membrana de antígeno pueda ser insertado entre el el primer y segundo miembros. En algunas modalidades, el primer miembro es removable .

En algunas modalidades, el primer miembro es unido o está en contacto con el cojincillo conjugado, en donde el movimiento o remoción del primer miembro mueve el cojincillo conjugado o remueve el cojincillo conjugado a partir del dispositivo. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado es removible .

En algunas modalidades, el cojincillo conjugado es removido del dispositivo que comprende el primer y segundo miembros por remover solamente el cojincillo conjugado.

En algunas modalidades, el cojincillo conjugado comprende una lengüeta. La lengüeta puede ser usada para remover o facilitar la remoción del cojincillo conjugado.

En algunas modalidades, el dispositivo descrito en la presente es colocado en un recipiente. En algunas modalidades, el recipiente es un empaque o bolsa. En algunas modalidades, el recipiente comprende una entrada. En algunas modalidades, el recipiente comprende un miembro removible o movible o capa que cuando se mueve o remueve expone la entrad permitiendo a la muestra ser aplicada al sistema de membrana de detección de antígeno. Ejemplos de un miembro removible o movible o capa incluye, pero no es limitado a, tapa o lengüeta. Una tapa o lengüeta, por ejemplo es mostrada en las Figuras 8A-8C y 9. En algunas modalidades, la capa removable o capa movable puede tambiéna actuar como un sello para el recipiente. El sello puede proteger al cojincillo conjugado y/o el miembro de detección de membrana de antígeno.

En algunas modalidades de los dispositivos y sistemas descritos en la presente, la capa removible o movible está en contacto con o unida al cojincillo conjugado.

En algunas modalidades, un dispositivo para detectar un antígeno comprende un primer miembro externo y un segundo miembro externo en donde el primer miembro interno y el segundo miembro interno están en contacto entre si. En algunas modalidades, el primer miembro externo comprende una entrada. En algunas modalidades, el primer miembro externo y el primer miembro interno comprenden una entrada. En algunas modalidades, entre el primero y el segundo miembro internos está un sistema de membrana de detección de antígeno. En algunas modalidades, el dispositivo comprende un cojincillo conjugado. En algunas modalidades, el dispositivo carece de un cojincillo conjugado. En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno comprende una membrana de prueba y un miembro adhesivo y opcionalmente un cojincillo conjugado. En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno comprende en el siguiente orden una membrana de prueba y un miembro adhesivo. En algunas modalidades, por lo menos una porción de cada uno del cojincillo conjugado opcional, membrana de prueba, y miembro adhesivo están substancialmente paralelos entre sí. En algunas modalidades, como se discute anteriormente, el sistema de membrana de detección de antígeno está comprendido entre el primer miembro interno y segundo miembro interno. En algunas modalidades, el dispositivo y/o sistema comprenden un miembro adhesivo como se describe anteriormente. En algunas modalidades, el dispositivo comprende una membrana de filtración. En algunas modalidades, la membrana de filtración puede estar dentro del sistema de membrana de detección de antígeno. En algunas modalidades, la primera superficie de la membrana de filtración contacta una superficie del primer miembro interno y una segunda superficie de la membrana de filtración contacta otra membrana o miembro del sistema de membrana de detección de antígeno. En algunas modalidades, una segunda superficie de una membrana de filtración contacta una superficie de una membrana de prueba. La membrana de filtración puede ser cualquier material como se describe anteriormente. Por ejemplo, la membrana de filtración, en algunas modalidades, puede ser los mismos materiales que pueden ser un cojincillo conjugado, membrana de prueba, miembro adhesivo, y similares. En algunas modalidades, la membrana de filtración es un cojincillo de fibra de vidrio.

En algunas modalidades, donde el cojincillo conjugado no está presente dentro del dispositivo o el sistema, el conjugado es suministrado como un líquido o como un material que puede ser disuelto en un líquido (por ejemplo, agua, solución amortiguada, solución salina y similares) . El conjugado puede ser suministrado en un recipiente separado (por ejemplo tubo) y ser proporcionado con un dispositivo o sistema descrito en la presente. Donde el conjugado es suministrado en un recipiente el conjugado es incubado con la muestra antes de que se aplique al sistema de membrana de detección de antígeno. La muestra puede ser producida por cualquier métodos y/o descrita en la presente. Por ejemplo, una pieza de carne puede ser humedecida o impregnada y para producir una muestra de prueba. La muestra de prueba puede entonces ser incubada o contactada con el conjugado para producir una mezcla de muestra de prueba-conjugado. Esta mezcla puede entonces ser aplicada al sistema de membrana de detección de antígeno como se describe en la presente usando un dispositivo y/o sistema como se describe en la presente. En algunas modalidades, la mezcla de muestra de prueba-conjugado se aplica directamente a la membrana de prueba . En algunas modalidades, la mezcla de muestra de prueba-conjugado es filtrada o pasa a través de otra membrana antes a contactar la membrana de prueba.

En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno está comprendido entre el primer y segundo miembros internos. En algunas modalidades, el sistema de membrana de detección de antígeno está comprendido entre un plano . formado por el primer miembro interno y un plano formado por el segundo miembro interno en donde los planos formados por el primer miembro interno y el segundo miembro interno están substancialmente paralelos entre sí y el sistema de membrana de detección de antígeno. En algunas modalidades, los planos están paralelos entre sí y el sistema de membrana de detección de antígeno. En algunas modalidades, los planos están substancialmente paralelos al primer y segundo miembros externos .

En algunas modalidades de dispositivos descritos en la presente y en toda ella, el cojincillo conjugado no está comprimido por el primero y segundo miembro internos o por los miembros de fuerza descritos en la presente.

En algunas modalidades, el primer miembro externo comprende una lengüeta removible o movible. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado es unido al primer miembro externo. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado está unido a la lengüeta removible o movible. En algunas modalidades, el primer miembro externo y Segundo miembro externo forman un recipiente y el recipiente encapsula el primer y segundo miembros internos . En algunas modalidades, el recipiente es un empaque, bolsa (por ejemplo, sellable (por ejemplo, con cierre, adhesivo y similares) o cualquier otro tipo de recipiente que puede comprender el sistema de detección de membrana d antígeno y que está comprendido entre el primer y segundo miembros interno.

En algunas modalidades, el container comprende una lengüeta removible o movible . La lengüetaremovible o movible puede tener cualquier conformación y puede ser completamente removible o movible a un grado que expone la entrada. En algunas modalidades, lengüeta cuando se mueve o es removida remueve o mueve el cojincillo conjugado. El cojincillo conjugado puede ser movido, por ejemplo, una distancia suficiente de tal forma que los resultados de la membrana de prueba pueden ser analizados (por ejemplo visualizados) .

En algunas modalidades, una primera superficie del cojincillo conjugado está en contacto con el primer miembro externo y una segunda superficie del cojincillo conjugado está en contacto con el primer miembro interno.

En algunas modalidades, el primer y segundo miembro internos están unidos al otro en un borde del primer miembro interno que está paralelo a un borde del segundo miembro interno. En algunas modalidades, el primer y segundo miembro internos están unidos por un resorte, bisagra y similares. La forma por la cual el primer y segundo miembros internos están unidos no está limitado y puede ser por cualquier estructura que permita al sistema de membrana de antígeno ser comprimido entre el primer y segundo miembros. En algunas modalidades, el primer y segundo miembros internos están contiguos entre si y forman, por ejemplo un clip. Ejemplos de clips son mostrados en toda la presente solicitud. El clip, puede ser por ejemplo, cortado del metal o de otro tipo de material que permita al primer miembro interno ser flexible de tal forma que el sistema de detección de membrana de antígeno puede ser insertado entre el primer y segundo miembros. En algunas modalidades, el primer miembro interno es removible.

Como se discute anteriormente, los dispositivos y sistemas pueden comprender una capa removible o movible (por ejemplo lengüeta) . La capa removible o movible puede ser removida o movida por fuerza manual, como, pero no limitada a, pelado o desgarrado. La capa removible o movible puede también ser removida o movida por fuerza mecánica. La forma por la cual la capa removible o movible es movida puede ser por cualquier medio. Ejemplos de una capa removible o movible incluye pero no se limita a, lengüetas, solapas y similares. Como se discute anteriormente, esta solapa o lengüeta puede actuar como un sello y similares.

Como se discute anteriormente, el cojincillo conjugado puede comprender un reactivo de captura específico a antígeno. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado comprende una pluralidad de reactivos de captura específicos a antígeno. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado comprende 1, 2, 3, 4, o 5 reactivos de captura específicos a antígeno. El antígeno puede ser cualquier molécula que puede ser reconocida específicamente por un reactivo de captura. Ejemplos de antígenos incluyen incluyen una molécula de polinucleótido (por ejemplo, ADN, ARN, ARNsi, oligonucleótido antisentido) un péptido, una proteína, un sacárido, un polisacárido, un carbohidrato y similares. El antígeno puede también referirse a epítopos presentes en la misa proteína o polipéptido .

El reactivo de captura puede también ser, por ejemplo, proteína A, proteína G y similares.

En algunas modalidades, la proteína detectada es una proteína patógena. Una proteína patógeno se refiere a una proteína que es de un patógeno. Ejemplos de patógenes incluyen, pero no se limitan a, virus, organismos procariotes, y eucariotes como organismos patogénicos unicelulares y parásitos multicelulares. Los patógenes también pueden incluir patógenos protozoarios los cuales incluyen una etapa en el ciclo de ida donde hay patógenes intracelulares . Como se usa en la presente, el término "patógeno intracelular" se entiende para referirse a un virus u organismo patogénico que, por lo menos en parte de su ciclo reproductivo o de vida existe dentro de una célula huésped y en la misma produce o provoca que se produzcan proteínas patógenas .

Los patógenos bacterianos incluyen, pero no se limitan a, cocos gram positivos patogénicos bacterianos, los cuales incluyen, pero no se limitan a: neumococos, estafilococos, y estreptococos. Cocos gram negativos patogénicos incluyen pero no se limitan a: meningococos y gonococos. Los bacilos gram negativos entéricos patogénicos incluyen, pero no se limitan a: enterobacterias, Pseudomonas, acinobacterias, eicenelas, melioidosis, Salmonella, shigelosis, hemofilus, chancroide, brucelosis, tularemia, yersinia (pasteurella) , streptobacillus moniliformis y spirilum, listeria monocytogenes, erysipelothrix rhusiopathiae, difteria, cólera, ántrax, donovanosis (granloma inguinal), y bartonelosis . Las bacterias anaeróbicas patogénicas incluyen, pero no se limitan a: tétano, botulismo, otros clostridios, , tuberculosis, lepra, y otras microbacterias . La enfermedades por espiroquetas patogénicas incluyen, pero no se limitan a: sífilis, treponematosis , frambesia, pinta and sífiles endémica y leptospirosis . Otras infecciones provocadas por bacterias patogénicas superiores y hongos patogénicos incluyen, pero no se limitan a: actinomicosis , nocardiosis, criptococosis , blastomicosis , histoplasmosis y cocidiodomicosis , candidiasis, aspergilosis , y mucormicosis , esporotricosis , paracocidiodomicosis , petrielidiosis , torulopsosis , micetoma y cromomicosis, y dermatofitosis . Infecciones por riquetsias incluyen riquetsias y riquetsiosis. Ejemplos de micoplasma e infecciones clamidiales incluyen, pero no se limitan a: microplasma pneumoniae, lymphogranuíorna venereum, psittacosis, e infecciones clamidiales perinatales . Los protozoarios patogénicos y helmintos incluyen, pero no se limitan a, amibiosis, malaria, lesmaniasis, tripanosomiasis, toxoplasmosis , przeumocystís carinii, babesiosis, giardiasis, triquinosis, filariasis, esquistosomiasis , infecciosos nemátodos, tremátodos o tremátodo y céstodos (tenia solitaria, and cestodos . Las bacterias también incluyen E. coli, un Campylobacter, y una Salmonella.

En algunas modalidades, E. coli es E. coli 0157.

Ejemplos de virus incluyen, pero no se limitan a, VIH, hepatitis A, B y C, FIV, lentivirus, pestivirus, virus del Nilo West, sarampión, viruela, viruela bovina, ébola, coronavirus, y similares. Otros patógenos son también descritos en la publicación de solicitud de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica 2008-0139494, los cuales son incorporados para referencia.

En algunas modalidades, el patógeno es un patógeno transportado en alimentos. El antígeno puede estar presente en un patógeno transportado en alimentos. Los patógenos transportados por alimentos son patógenos (por ejemplo, virales o bacterianos) que provocan enfermedades después de comer el alimento contaminado. El producto por sí mismo no provoca directamente la enfermedad, sino es más bien el consumo del patógeno transportado en el alimento que está presente en el alimento que provoca la enfermedad. En algunas modalidades, el patógeno transportado en alimentos es E. coli, Campylobacter, o Salmonella. En algunas modalidades, el antígeno es un antígeno elegido de un antígeno patógeno transportado en alimentos. Por ejemplo, el antígeno patógeno transportado en alimentos puede ser, pero no se limita a, elegido de un antígeno de E. coli, un antígeno Campylobacter, o un antígeno Salmonella. En algunas modalidades, el antígeno es la especie específica del antígeno O En algunas modalidades, el antígeno O es el antígeno 0 de E. coli y/o de Salmonella y puede ser usado para detección de E. coli and Salmonella. En algunas modalidades, el antígeno es un antígeno de flagelina. En algunas modalidades, el antígeno es el antígeno de flagelina Campylobacte .

En algunas modalidades, el reactivo de captura comprende un reactivo de detección. El reactivo de detección puede ser cualquier reactivo que puede ser usado para detectar la presencia del reactivo de captura que enlaza a su pareja de enlace específica. El reactivo de captura puede comprender un reactivo de detección directamente o el reactivo de captura puede comprender una partícula que comprende el reactivo de detección. En algunas modalidades, el reactivo de captura y/o partículas comprende color, oro coloidal, lengüeta radioactiva, lengüeta fluorescnte, o substrato quimioluminiscente . En algunas modalidades, el reactivo de captura o partículas comprende un nanocristal, naopartículas convertidoras ascendentes, nanopartículas de fusión de selenuro de cadmio/sulfuro de cadmio, puntos de cuantos, y un fluoróforo infrarrojo cercano (NRI) o material (como pero no limitado a materiales como glomérulos de lentanuro y ftalaocianinas , así como también diodos de emisión de luz que consisten de CuPc, PdPc, y PtPc) capaz de emitir luz en el espectro de NIR. Las partículas pueden ser, por ejemplo, una partícula viral, una partícula de látex, un partícula de lípidos, una partícula fluorescente. En algunas modalidades, el oro colloidal tiene un tamaño de diámetro de: aproximadamente 20 nm, aproximadamente 30 nm, o aproximadamente 40 nm o en el intervalo de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 nm, aproximadamente 20 a aproximadamente 40 nm, aproximadamente 30 a aproximadamente 40 nm, o aproximadamente 35 a aproximadamente 40 nm. En algunas modalidades, la partícula comprende una partícula de aleación de metal. En algunas modalidades, la particular de aleación de metal tiene un diámetro de aproximadamente 10 a aproximadamente 200 nm. Ejemplos de partículas de aleación de metal incluyen, pero no se limitan a, partículas de aleación de metal, partículas bimetálicas de oro-plata, partículas de aleación de cobre, partículas de cadmio-selenio, partículas de aleación de paladio, partículas de aleación de platino y nanopartículas de plomo.

En algunas modalidades, la membrana de prueba también comprende uno o más reactivos de captura.

Los reactivos de captura de la presente invención pueden también incluir un anti-anticuerpo, es decir, un anticuerpo que reconoce otro anticuerpo pero no es específico a un antígeno, como, pero no limitado a, anticuerpo anti-IgG, anti-IgM, o ant-IgE. Donde la membrana de prueba comprende un anti-anticuerpo, como anticuerpo anti-IgG, anti-IgM, o anti-IgE, este anticuerpo no específico puede ser usado como un control positivo para detectar si el conjugado ha sido liberado a partir del cojincillo conjugado. Cuando la muestra se aplica al dispositivo permite que se libere un primer reactivo de captura del cojincillo conjugado. En cuanto se libera el reactivo de captura y fluye a través del dispositivo, ya sea unido al antígeno o no, puede contactar el anti-anticuerpo, como el anticuerpo anti-IgG or anti-IgM, el cual puede entonces ser detectado. La detección puede ser usada para mostrar que el dispositivo está trabajando apropiadamente .

En algunas modalidades, la membrana de prueba comprende un segundo reactivo de captura específico a antígeno. En algunas modalidades, la membrana de prueba comprende una primera área que comprende un primer reactivo de captura que comprende un reactivo de captura anti-IgG; y una segunda área que comprende un segundo reactivo de captura específico a antígeno, en donde la primera y segunda áreas no se traslapan completamente o coinciden entre sí. Esta modalidad no limitante puede ser usada para demostrar que el dispositivo está trabajando apropiadamente y sea usado para detectar la presencia del antígeno de interés.

En algunas modalidades, el cojincillo conjugado comprende un primer reactivo de captura específico a antígeno y la membrana de prueba comprende un segundo reactivo de captura específico a antígeno, en donde el primer y segundo reactivos de captura específicos a antígeno enlazan a epítopos no competitivos presentes en el antígeno. El dispositivo puede, por ejemplo, emplear un ensayo del tipo de emparedado que ocurre en dos etapas. La primera etapa es el enlace del antígeno al reactivo de captura presente en el cojincillo conjugado. Después de enlazar el primer reactivo de captura específico a antígeno el antígeno puede fluir a través o hacer contacto con la membrana de prueba donde está presente un segundo reactivo de captura específico a antígeno. Ante interacción con la membrana de prueba si el antígeno de prueba puede enlazar al segundo reactivo de captura específico a antígeno será capaz de ser detectado ya sea a través de visualización o a través del uso de otro dispositivo de detección como, pero no limitado a, lector fluorescente. La membrana de prueba y el cojincillo conjugado pueden comprender reactivos de captura específicos a antígeno adicionales que reconocen diferentes antígenos o diferentes epítopos . En algunas modalidades, la membrana de prueba o el cojincillo conjugado comprende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 reactivos de captura específicos a antígeno. En algunas modalidades, la membrana de prueba o el cojincillo conjugado comprende una pluralidad de reactivos de captura específicos a antígeno. En algunas modalidades, cada reactivo de captura específico a antígeno reconoce un antígeno diferente o un epítopo diferente en el mismo antígeno.

"Diferentes antígenos" puede también referirse a la misma proteína pero una proteína que es de cepas diferentes del mismo organismo. Los antígenos diferentes pueden también referirse a antígenos de diferentes organismos. Por ejemplo, hay cualesquiera de muchas cepas de E. coli. No todas las cepas de E. coli provocan una enfermedad transportada en alimentos. La presente invención puede ser usada, por ejemplo, para detectar un antígeno a partir de una cepa patogénia de E. coli opuesto a detectar un antígeno a partir de una cepa no patogénica de E. coli. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado y/o membrana de prueba comprende un primer y segundo reactivos de captura específicos a antígeno, en donde el primer y segundo reactios de captura reconocen diferentes antígenos. En algunas modalidades, la membrana de prueba y/o cojincillo conjugado comprende una pluralidad de reactivos de captura específicos a antígeno, en donde la pluralidad de los rectivos de captura específicos a antígeno reconocen diferentes antígenos. En algunas modalidades, la pluralidad de áeas no se traslapan completamente o coinciden entre sí. En algunas modalidades, la pluralidad de antígenos son cada uno independientemente elegidos del antígeno de E. coli, un antígeno Campylobacter, y un antígeno de Salmonella. En algunas modalidades de la presente invención, la pluralidad de antígenos es 2 , 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más de 10 antígenos.

El dispositivo puede ser alojado en forma sencilla, en pares, o en configuraciones múltiples. El alojamiento puede ser impermeable al agua para evitar filtraciones y puede ser fabricado a partir de una variedad de materiales inertes, como materiales de polímero. La entra, en algunas modalidades, puede ser de tamaño suficiente para contener cualquier cantidad requerida de muestra o reactivos a ser usados con la invención.

Ya que las membranas, miembros o cojincillos del dispositivo son adecuadamente inertes químicamente, pueden tener que ser activados en cualquier sitio de reacción donde se desee para inmovilizar un reactivo de enlace específico contra transporte de solvente. Varios métodos pueden ser requeridos para llevar al reactivo a ser inmovilizado de acuerdo a la naturaleza química particular del reactivo. Generalmente, cuando el medio es nitrocelulosa o un éster de nitrocelulosa mixto, ningún enlace químico especial es requerido para la inmovilización de reactivos. Pueden ser usadas varias técnicas para otros materiales y reactivos los cuales incluyen funcionalización con materiales como carbonildiimidazol , glutaraldehído o ácido succínico, o tratamiento con materiales como bromuro de cianógeno. Otras reacciones adecuadas incluyen tratamiento con bases Schiff y borohidruro para reducción del aldehido, grupos carbonil y amino. ADN, ARN y ciertos antígenos pueden ser inmovilizados contra transporte de solvente por hornearlo en el material cromatográfico . El horneado puede ser realizado en temperaturas en el intervalo de 60°C a aproximadamente 120°C por tiempos que varían de aproximadamente cinco minutos a aproximadamente 12 horas, en algunas modalidades, en aproximadamente 80°C por aproximadamente dos horas.

La presente invención también proporciona sistemas que comprenden el dispositivo descrito en la presente y un recipiente de amortiguador. El recipiente de amortiguador puede ser cualquier amortiguador con el que pueda ser mezclada la muestra que está siendo probada y entonces aplicado al dispositivo. Por ejemplo, la muestra puede ser tomada de una fuente y la muestra puede ser mezclada con el amortiguador. El amortiguador puede ser un amortiguador de lisis que lisará las células o un amortiguador que mantiene el pH de la muestra de tal forma que puede ser hecho apropiadamente el análisis. El recipiente de amortiguador puede tener cualquier conformación y puede ser incluido fuera o dentro del dispositivo.

En algunas modalidades, la presente invención proporciona un sistema que comprende un recolector de muestra. El recolector de muestra puede ser cualquier material que puede tomar una muestra a partir de la fuente y permitir que se prueba la muestra. Por ejemplo, el recolector de muestra puede ser un hisopo, como un hisopo de algodón. En algunas modalidades, el recolector de muestra es un inoculador. En algunas modalidades, el alojamiento comprende el recolector de muestra y una porción del recolector de muestra está dentro del alojamiento. En algunas modalidades, el recolector de muestra es parcialmente fuera y parcialmente dentro del alojamiento. En algunas modalidades, el recolector de muestra está completamente dentro del alojamiento.

La presente invención también proporciona kits que comprende el dispositivo descrito en la presente. El kit puede incluir un dispositivo como se describe en la presente, un recolector de muestra, un recipiente de amortiguador, un manual de instrucción, un control positivo, un control negativo, o cualesquiera combinaciones de los mismos. Con respecto al kit, un control positivo es una muestra que es conocida para contener el antígeno que puede ser detectado con el dispositivo presente en el kit. En contraste el control negativo, no puede contener un antígeno que puede ser detectado por el kit. El control negativo cuando se usa junto con el anti anticuerpo puede ser capaz de demostrar que el dispositivo está trabajando apropiadamente.

Los amortiguadores pueden también ser incluidos en la presente invención. Ejemplos de amortiguadores incluyen, pero no se limitan a, IX PBS (10 mM fosfato, 137 mM cloruro de sodio, 2.7 mM cloruro de potasio), un amortiguador de lavado (por ejemplo 10 mM fosfato de sodio, 150 mM NaCl , 0.5% Tween-20, 0.05% azida de sodio), un amortiguador de membrana (por ejemplo 10 mM fosfato de sodio, 0.1% de sacarosa, 0.1% BSA, 0.2% PVP-40 pH 7.21, filtrado con filtro de 0.2pm) , amortiguador de bloque del conjugado policlonal (por ejemplo borato 50 mM, 10% BSA, pH 8.93 ) ; diluyente de conjugado policlonal (por ejemplo, 50 mM borate, 1% BSA, pH 9.09), o amortiguadores de bloqueo (por ejemplo 10 mM fosfato de sodio, 0.1% de sacarosa, 0.025% Silwet pH 7.42; 10 mM fosfato de sodio, 1% de sacarosa, 1% de trehalosa, 0.01% BSA, 0.025% Tween-20; 0.05% azida de sodio, 0.025% Silwet pH 7.4; 10 mM fosfato de sodio, 0.1% de sacarosa, 0.1% BSA, 0.2% PVP-40 pH 7.21). El amortiguador puede también ser, pero no se limita a, un amortiguador de bloqueo (por ejemplo 10% BSA en agua deionizada, pH 7.4 o 1% BSA en agua deionizada, pH 7.4); 10 mM borato, 3% BSA, 1% PVP40, y 0.25% Tween-100; y similares.

El cojincillo conjugado y la membrana de prueba puede ser contactados con cualquiera de los amortiguadores descritos en la presente ya sea en la presencia o ausencia de un reactivo de captura, en algunas modalidades, se permite secar .

Ejemplos de amortiguadores que son amortiguadores de lisis incluyen, por ejemplo, pero no se limitan a, 2% Tween (v/v) y 0.1% Tritón (v/v) ; 2% Tween (v/v) y 0.1% SDS (w/v) ; 2% Tween (v/v) y 0.1% BSA (w/v) ; 2% Tween (v/v) y 1% BSA (w/v), 0.1% SDS (w/v), 1% BSA (w/v), o cualquier combinación de los mismos. Los amortiguadores de lisis pueden también ser, por ejemplo, 5% Tween/PBS; 2% Tween/PBS + 0.1% SDS; 2% Tween/PBS + 1% BSA. Otros ejemplos de amortiguadores de lisis incluyen, pero no se limitan a, 5% Tween-80 (v/v) ; 5% Tritón X-100 (v/v); 5% NP40 (v/v); 2% Tween-80 (v/v); 2% Tritón X-100 (v/v) ; 2% NP40 (v/v) ; 1% Tween-80 (v/v) ; 1% Tritón X-100 (v/v) ; y 1% NP40 (v/v) . Los detergentes y otros componentes de los amortiguadores pueden ser hechos con cualquier amortiguador adecuado para proteínas e incluye, pero no está limitado a, agua y solución salina amortiguada con fosfato. Los amortiguadores de lisis pueden ser usados para preparar las muestras antes a las muestras que hacen contacto con el dispositivo descrito en la presente. En algunas modalidades, no se usa un amortiguador de lisis. Un amortiguador de lisis no es usado en una muestra cuando se desea detectar una proteína superficial o antígeno superficial. Por consiguiente, en algunas modalidades, la muestra no está sometida a lisis o condiciones que pueden provocar que sea lisada una célula.

La presente invención también proporciona métodos para detectar un antígeno que comprende poner en contacto una muestra que usa un dispositivo y/o sistema como se describe en la presente, en donde la muestra está en contacto con el el cojincillo conjugado y la membrana de prueba, en donde una reacción positiva con la membrana de prueba indica la presencia del antígeno, en donde el cojincillo conjugado comprende un primer reactivo de captura específico a antígeno y la membrana de prueba comprende un segundo reactivo de captura específico a antígeno. Una reacción positiva es indicada por el reactivo de captura presente en la membrana de prueba que enlaza a un antígeno en la muestra de prueba. El reactivo de captura en la membrana de prueba es aplicador a la membrana de prueba de tal forma que indicará una reacción positiva cuando enlaza a su antígeno específico. El reactivo de captura específico puede ser aplicado en cualquier forma de tal manera que cuando se detecta puede formar una línea, un círculo, un signo positivo, una línea punteada, una "X" o cualquier otro patrón. En algunas modalidades, la línea de control que indica que el dispositivo está trabajando apropiadamente cruzará la línea específica de antígeno y cuando el reactivo de captura específico a antígeno enlaza al antígeno la etiqueta detectable formará un signo positivo. La detección puede ser determinada por la detección del reactivo de detección como se describe en la presente y por métodos de rutina conocidos para un experto en la técnica.

En algunas modalidades, una muestra contacta el dispositivo, el cual es entonces seguido por un amortiguador que se aplica al dispositivo después de que la muestra ha contacto el dispositivo. Por ejemplo, una muestra que comprende un antígeno puede ser contacta con el cojincillo conjugado de tal forma que se transfiere la muestra al cojincillo conjugado. Después de contactar con el cojincillo conjugado puede ser aplicada una solución separada al dispositivo para facilitar o iniciar el flujo vertical a través de los dispositivos descritos en la presente.

En algunas modalidades como se describe en la presente el reactivo de captura es un anticuerpo. En algunas modalidades, la muestra que es probada es una solución pero puede también ser una mezcla de solución o amortiguador o amortiguador y material sólido que puede ser aplicado al dispositivo. La solución será entonces solubilizar el antígeno y permitir al reactivo de captura del cojincillo conjugado estar en contacto con los antígenos presentes en la muestra. En algunas modalidades, la muestra comprende un lisado celular. En algunas modalidades, el lisado celular ha sido clarificado por centrifugación u otro medio para remover materiales no solubles.

En algunas modalidades, los métodos comprenden poner en contacto una muestra de prueba con un recolector de muestra y poner en contacto el recolector de muestra con el dispositivo. En algunas modalidades, los métodos comprenden poner en contacto el recolector de muestra con una solución o amortiguador, en donde la solución o amortiguador es aplicado al dispositivo. En algunas modalidades, las muestras son contactadas con el cojincillo conjugado antes a que la muestra llegue a estar en contacto con la membrana de prueba. En algunas modalidades, la muestra es puesta en contacto con el cojincillo conjugado y la membrana de prueba simultáneamente .

En algunas modalidades, los métodos comprenden mover el cojincillo conjugado del dispositivo descrito en la presente, en donde el movimiento o remoción del cojincillo conjugado expone la membrana de prueba a detección. En algunas modalidades, el movimiento o remoción del miembro removible mueve o remueve el cojincillo conjugado. En algunas modalidades, el cojincillo conjugado es unido al miembro removible y/o miembro adhesivo. En algunas modalidades, cuando el miembro removable es movido o removido es movido el miembro adhesivo también con respecto a su posición original o removido del dispositivo. El antígeno que el método puede usar para detección puede ser cualquier antígeno. Los antígenos pueden ser aquelllos que son discutidos anteriormente en la presente o cualesquiera otros antígenos que pueden ser detectados usando métodos y dispositivos descritos en la presente invención. En algunas modalidades, el método comprende aplicar la muestra al dispositivo y permitir a la muestra fluir a través del dispositivo por medio de flujo vertical.

Los ejemplos proporciones en la presente son para propósitos de ilustración solamente y la invención no debe ser construida como para limitar estos ejemplos, sino más bien debe ser construida para comprender cualquiera y todas las variaciones las cuales llegan a ser evidentes como un resultado de la enseñanza proporcionada en la presente. Aquellos con experiencia en la técnica reconocerán fácilmente una variedad de parámetros no críticos que pueden ser cambiados o modificados para producir resultados esencialmente similares.

Mientras que esta invención ha sido descrita con referencia a modalidades específicas, es aparente que otras modalidades y variaciones de esta invención pueden ser concebidas por otros expertos en la técnica sin alejarse del espíritu y alcance verdadero de la invención. Las reivindicaciones anexas son propuestas para ser construidas para incluir todas las modalidades y variaciones equivalentes .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (58)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un dispositivo para detectar un antígeno caracterizado porque comprende: Un alojamiento que comprende un primer miembro de alojamiento y un segundo miembro de alojamiento, en donde el alojamiento comprende: a) una entrada en el primer miembro de alojamiento; b) un sistema de membrana de detección de antígeno que comprende en el siguiente orden: un cojincillo conjugado; un miembro adhesivo una membrana de prueba; y un miembro absorbente; c) un miembro de fuerza; en donde por lo menos una porción de cada uno del cojincillo conjugado, membrana de prueba, y miembro absorbente son substancialmente paralelos entre sí; y en donde el dispositivo tiene una altura de menos de aproximadamente 0.15 cm, un ancho de menos de aproximadamente 2.1 cm y una profundidad de menos de aproximadamente 4.7 cm.

2. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el miembro de fuerza es un clip.

3. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el primer miembro de alojamiento es removible .

4. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el primer miembro de alojamiento está unido o en contacto con el cojincillo conjugado, en donde el movimiento o remoción del primer miembro de alojamiento mueve el cojincillo conjugado o remueve el cojincillo conjugado a partir del dispositivo.

5. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el cojincillo conjugado comprende un primer anticuerpo específico a antígeno .

6. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el antígeno reconocido por el primer anticuerpo específico a antígeno es un polinucleótido, un péptido, una proteína, un sacárido, o un carbohidrato .

7. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el antígeno reconocido por el primer anticuerpo específico a antígeno es una proteína patógena o fragmento antigénico de la misma.

8. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el primer anticuerpo específico a antígeno es un anticuerpo policlonal, anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, un fragmento Fe, o un anticuerpo de cadena sencilla.

9. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el antígeno reconocido por el primer anticuerpo específico a antígeno es un antígeno patógeno transportado en alimento.

10. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el antígeno patógeno transportado en alimento es un antígeno de E. coli, una especie Campylobacter, o una especie de Salmonella.

11. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el primer anticuerpo específico a antígeno es conjugado a nanocristal, nanopartículas de conversión ascendente, fluoróforo de infrarrojo cercano (NIR por sus siglas en inglés) , oro coloidal, molécula fluorescente, lengüetaradioactiva , o un substrato quimioluminiscente .

12. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la membrana de prueba comprende un segundo anticuerpo específico a antígeno, en donde el segundo anticuerpo específico a antígeno y el primer anticuerpo específico a antígeno enlaza a epítopos no competitivos sobre el mismo antígeno.

13. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la membrana de prueba comprende : una primera área que comprende un anti primer anticuerpo específico a antígeno; y una segunda área que comprende el segundo anticuerpo específico a antígeno; en donde la primer y segunda áreas no se traslapan completamente.

14. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el cojincillo conjugado además comprende un tercer anticuerpo específico a antígeno, en donde el primer anticuerpo específico a antígeno y el tercer anticuerpo específico a antígeno reconocen diferentes antígenos.

15. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la membrana de prueba además comprende un cuarto anticuerpo específico a antígeno, en donde el cuarto anticuerpo específico a antígeno y el tercer anticuerpo específico a antígeno enlazan a epítopos no competitivos en el mismo antígeno.

16. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el antígeno reconocido por el primer anticuerpo específico a antígeno y el tercer anticuerpo específico a antígeno son cada uno independientemente elegidos de un antígeno de E. coli, un antígeno Campylojbacfcer, y un antígeno de Salmonella .

17. Un dispositivo para detectar un antígeno caracterizado porque comprende: un primer miembro y un segundo miembro en contacto uno con el otro en la presente el primer miembro comprende una entrada, y en donde entre el primer y segundo miembros está un sistema de membrana de detección de antígeno que comprende en el siguiente orden: un cojincillo conjugado; un miembro adhesivo; una membrana de prueba; y un miembro adhesivo; y en donde por lo menos una porción de cada uno del cojincillo conjugado, membrana de prueba, y miembro adhesivo son substancialmente paralelos entre sí, y en donde el sistema de membrana de detección de antígeno está comprimido entre el primer y segundo miembros.

18. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el primer y segundo miembros están unidos entre si a lo largo del borde del primer miembro que está paralelo a un borde del segundo miembro .

19. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el primer y segundo miembros están unidos entre sí con una bisagra o resorte o en donde el primer y segundo miembros están contiguos y forman un clip.

20. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el primer miembro es removible .

21. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el primer miembro está unido o en contacto con el cojincillo conjugado, en donde el movimiento o remoción del primer miembro mueve el cojincillo conjugado o remueve el cojincillo conjugado a partir del dispositivo.

22. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el cojincillo conjugado es removible.

23. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el cojincillo conjugado una etiqueta.

24. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la lengüeta facilita la remoción del cojincillo conjugado.

25. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el cojincillo conjugado comprende un primer anticuerpo específico a antígeno .

26. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el antígeno reconocido por el primer anticuerpo específico a antígeno es un polinucleótido, un péptido, una proteína, un sacárido, o un carbohidrato.

27. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el antígeno reconocido por el primer anticuerpo específico a antígeno es una proteína patógena o un fragmento antigénico del mismos.

28. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el primer anticuerpo específico a antígeno es un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, un fragmento Fe, o un anticuerpo de cadena simple.

29. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el antígeno reconocido por el primer anticuerpo específico a antígeno es un antígeno patógeno transportado en alimentos.

30. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el antígeno patógeno transportado en alimentos es un antígeno de E. coli, una especie Campylobacter, o una especie Salmonella.

31. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el primer anticuerpo específico a antígeno es conjugado a nanocristal, nanopartículas convertidoras ascendentes, fluoróforo de infrarrojo cercano (NRI ) , oro coloidal, molécula fluorescente, lengüeta radioactiva, o un substrato quimioluminiscente .

32. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la membrana de prueba comprende un segundo anticuerpo específico a antígeno en donde el segundo anticuerpo específico a antígeno y el primer anticuerpo específico a antígeno enlazan a epítopos no competitivos sobre el mismos antígeno.

33. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la membrana de prueba comprende : una primera área que comprende un anti primer anticuerpo específico a antígeno; y una segunda área que comprende el segundo anticuerpo específico a antígeno; en donde la primera y segunda áreas no se traslapan completamente .

34. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el cojincillo conjugado comprende además un tercer anticuerpo específico a antígeno, en donde el primer anticuerpo específico a antígeno y el tercer anticuerpo específico a antígeno reconocen diferentes antígenos.

35. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la membrana de prueba comprende además comprende un cuarto anticuerpo específico a antígeno, en donde el cuarto anticuerpo específico a antígeno y el tercer anticuerpo específico a antígeno enlazan a epítopos no competitivos en el mismo antígeno.

36. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque el antígeno reconocido por el primero anticuerpo específico a antígeno y el tercer anticuerpo específico a antígeno son cada uno independientemente elegidos de antígeno de E. coli, un antígeno de Campyl oj acter, y un antígeno de Salmonella .

37. Un recipiente caracterizado porque comprende el dispositivo de conformidad con la reivindicación 17.

38. El recipiente de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el contenedor comprende una entrada.

39. El recipiente de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el contenedor comprende una capa removible o movible que expone una entrada cuando se mueve .

40. El dispositivo para detectar un antígeno que comprende un primer miembro externo y un segundo miembro externo caracterizado porque comprende: un cojincillo conjugado, un primer miembro interno y un segundo miembro interno, en donde el primer miembro interno y el segundo miembro interno están en contacto entre si, en donde el primer miembro externo y el primer miembro interno comprenden una entrada, y en donde entre el primer y segundo miembros internos está un sistema de membrana de detección de antígeno el cual comprende en el siguiente orden: una membrana de prueba; y un miembro adhesivo; y en donde por lo menos una porción de cada uno del cojincillo conjugado, membrana de prueba, y miembro adhesivo están substancialmente paralelos entre sí, y en donde el sistema de membrana de detección de antígeno está comprendido entre el primer miembro interno y el segundo miembro interno y en donde el cojincillo conjugado no está comprimido entre el primero y segundo miembros internos.

41. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el primer miembro externo comprende una capa removible o movible.

42. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el cojincillo conjugado opcional está unido al primer miembro externo.

43. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque el cojincillo conjugado opcional está unido a la capa removible o movible.

44. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el cojincillo conjugado es un cojincillo conjugado de fibra de vidrio.

45. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el primer miembro externo y el segundo miembros externos forman un recipiente.

46. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque el recipiente comprende una capa removible o movible .

47. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque la capa removible o movible es para remover o mover el cojincillo conjugado.

48. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque la primera superficie del cojincillo conjugado está en contacto con el primer miembro externo y una segunda superficie del cojincillo conjugado está en contacto con el primer miembro interno.

49. · El dispositivo de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el primer miembro externo y el segundo miembro externo están unidos entre sí a lo largo del borde del primer miembro que está paralelo al borde del segundo miembro.

50. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el primer miembro externo y el segundo miembro interno están unidos entre sí con un resorte o bisagra.

51. Un sistema caracterizado porque comprende un dispositivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-50 y un recipiente amortiguador o un colector de muestra.

52. Un kit caracterizado porque comprende el dispositivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-50 y uno o más de un control positivo, un control negativo, un folleto de instrucciones, un recipiente de amortiguador, y un recolector de muestra, o cualquiera de las combinaciones de los mismos.

53. Un método para detectar un antígeno caracterizado porque comprende: poner en contacto una muestra con el cojincillo conjugado del dispositivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-50: remover el co incillo conjugado; e identificar una reacción positiva o negativa para el antígeno; en donde la muestra fluye verticalmente a partir del cojincillo conjugado a la membrana de prueba.

54. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque el cojincillo conjugado es removido por : remover o mover la capa removible; o remover o mover la lengüeta removible o movible .

55. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque una reacción positiva con el antígeno indica la presencia del antígeno en la muestra.

56. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque el antígeno es un antígeno patógeno transportado en alimentos.

57. El método de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque el antígeno patógeno transportado en alimentos es un antígeno de un E. coli, una especie de Campylobacter, o una especie de Salmonella .

58. El método de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque una reacción positiva del antígeno patógeno transportado en alimentos indica la presencia de E. coli, una especie de Campylojbacter, o una especie de Salmonella en la muestra.