JPH0588785B2 - - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は一般に、分析装置及び方法に関する。
更に詳細には、本発明は、結合アツセイの実施の
際有用な新規な材料、改良分析装置、並びにこの
材料及び装置を利用してアツセイを行なう方法に
関する。本発明の概念は、血清、血しよう、全
血、尿、脊髄及び羊膜液、粘膜液のような生物流
体及び生産物の酵素イムノアツセイの実施例の際
特に有利である。 背景技術 流体その他の材料中存在することがある、興味
ある又は臨床上の意義のある物質の存在及び（又
は）濃度を決定するアツセイにおいて、種々の分
析操作及び装置が広く用いられている。このよう
な臨床上の意義又は興味がある物質は、普通「分
析物」（analyte）と称され、例えば、抗体、抗原
及び「リガンド」（ligand）という用語で普通知
られている広い範ちゆうの物質を含むことができ
る。特に疾病又はその他の人体の条件に関して
は、適時の、臨床上意義のあるいくつかの分析物
の、生物液中の存在又は量の精密な決定は、健康
管理専門家が病的生理不全を処置管理し、、又妊
娠のような生理条件を早期かつ精密に決定するこ
とができるのに大きな影響を有する。 人体の種々の障害又は条件の診断の際次第に応
用されている１つのアツセイ法は、結合アツセ
イ、特に酵素イムノアツセイ（EIA）として知ら
れる型の結合アツセイである。EIA技術は、高等
生物の免疫系を利用し、系中生物に病原性又は異
質である物質（即ち、抗原）の生物中の存在に反
応して抗体が生じる。１種又はそれ以上の抗原が
特定の抗原に反応して生じ、又それと反応するこ
とができ、それによつてその特定の抗原を測定す
るのに、試験管内で、有利に利用することができ
る高度に特異性の反応機構がつくり出される。 常用のEIA操作は、液体試薬を使用する一連の
湿式化学工程を含み、アツセイ中の試料生物流
体、例えば、尿、全血又は血清の試験試料中の抗
原又は抗体が検出される。１つの型のEIA操作に
おいては、試料中の分析物は、はじめ試料中に導
入される対応する抗原又は抗体試薬に結合するよ
うになる。次に、他の抗原又は抗体が導入され
る。しかし、この第２の抗原又は抗体は、多くは
追加の適当な色原体又は色素のような指示試薬と
反応する時又はその存在下に、発色のような検出
可能な反応を生じるか又は引きおこすことができ
る酵素その他の物質で標識又はコンプレツクス化
されている。次にこのようにして生じた検出可能
な反応を、原試料中存在する抗原又は抗体の存在
又は量の指示又は尺度として、可視的に又は機器
により、読みとり解釈することができる。 固相EIA操作は一般に、ラジオイムノアツセイ
（RIA）その他の常用の湿式化学法のような従来
用いられている液体試薬結合アツセイ技術に比し
て、安全、使用の容易さ、特異性及び感度の故
に、抗体及び抗原のアツセイに対して共に好適で
あると考えられる。更に、分光光度計の使用のよ
うな、機器により発色を読む可能性は、多くの固
相EIA技術の特徴であり、その結果それらは広く
使用されている。 かくして、１つの型の常用の固相EIA「サンド
イツチ」アツセイにおいては、興味のある抗体又
は抗原を含有することが疑われている試験試料
は、表面上に抗原又は抗体の固定化によるか又は
それとの化学結合によつてそれを支持体の表面に
保持することができるタンパクまたはその他の物
質で予め被覆されている固体の、実質的に不活性
なプラスチツク又はガラスビーズ、その他の支持
材料とはじめに接触させられる。第２の抗原又は
抗体〔これは、普通酵素と結合（化学的に結合）
されている〕を次に添加し、この第２の種は、支
持体上対応する抗体又は抗原に結合するようにな
る。１回又はそれ以上の洗浄工程によつて非結合
材料を除去して後、指示薬物質、例えば、酵素の
存在下に反応性である色原体物質を次に添加し、
酵素の存在に対するその感受性により、検出可能
な色反応を生じる。発色反応、その密度等は、試
料中に存在した抗原又は抗体量を可視的に又は機
器により決定することができ、それと相関させる
ことができる。 このようなアツセイ技術、並びにこのようなア
ツセイにおいて必要な免疫学的反応及び変化を行
なうための固相ビーズその他の支持体は周知であ
るが、欠点がないわけではない。例えば、アツセ
イを実施し、又用いられる液体試薬を含有する精
巧な装置が必要である結果、特に個々の試料の低
容量試験のためには、実質な労力及び装置のコス
トがかかることが多い。更に、このようなアツセ
イと結びつけられた常法で被覆された支持体その
他の装置を製造することはしばしば困難で、特定
のアツセイに対して、所定の感度及び特異性の要
求に適合せしめるように、その中に使用される材
料すべてを特別に設計することは難かしく、この
ようなアツセイの精度及び再現性を最適のものと
することは難かしい。従つて、EIA操作におおい
て有利に使用することができ、又多くの面倒な湿
式化学工程又は複雑な機器の必要なしに、前述し
たような常用の方法に比して迅速、敏感かつ高度
に再現性の結果を生じることができる、比較的単
純な、使用容易かつ比較的安価な固相材料及び分
析装置が必要であるのである。 発明の要約 本発明は、前述した必要性に直接向けられ、一
面においては、本発明は、液体試料中分析物の存
在又はその量を決定するための特異的結合アツセ
イに使用する固相アツセイ装置において、 該装置は反応表面域を有し、その反応表面域は
負の対照域と正の対照域とを有しており且つ表示
シグナルを生成する標識の存在下に試験結果の有
効性を示すための手段を提供し、そこでは該試験
結果が有効であるとは該表示シグナルを生成する
標識が該正の対照域の少なくとも一部に実質的に
結合しており、該表示シグナルを生成する標識が
該負の対照域には実質的に存在しないことを必要
とするものであり： さらにその反応表面域は分析物結合域を有して
おり、その分析物結合域は該分析物を特異的に結
合せしめる手段を有し； 該装置において上記三つの領域は (a) 試料及び／又は試薬の一度の適用により各域
がそれと接触せしめられ； (b) 表示シグナルを生成する標識の供与及び該試
料中検知しうる分析物の存在下では、第一の表
示シンボルが形成せしめられていて、有効で正
の試験結果を示し、該第一の表示シンボルの少
なくとも一部は該標識が特異的な結合をなすこ
とによりその分析物結合域中に形成せしめられ
且つ第一の表示シンボルの少なくとも一部は該
標識が特異的な結合をなすことにより該正の対
照域中に形成せしめられるものであり；且つ (c) 表示シグナルを生成する標識の供与及び該試
料中検知しうる分析物の非存在下では、第二の
表示シグボルが形成せしめられていて、有効で
負の試験結果を示し、該第二の表示シンボルは
該第一の表示シンボルから該分析物結合域によ
り形成されて第一の表示シンボルに寄与せしめ
られるところのものを除いたものであることを
特徴とする固相アツセイ装置を提供することに
関するものである。 更に、一具体的な典型例においては、該正の対
照域が、長方形の棒の形で反応表面域上形成せし
められるものである上記の固相アツセイ装置を提
供する。 また、このような固相アツセイ装置は、該分析
物結合域が該正の対照域をはさんで反対側にある
二つの長方形の棒形のものでありそして該正の対
照域に対して垂直に配向された形でその反応表面
域上に形成せしめられるものであり、それにより
該分析物結合域は該正の対照域と一緒になり、
“＋”符号の形を形成せしめ且つ該正の対照域は
単独で負の試験結果の生起の場合“−”符号の形
を形成せしめるものであつてよい。 ここで、該正の対照域及び該分析物結合域の少
なくとも１つが、該正の対照域及び該分析物結合
域のそれとは別のものに実質的に隣接した点の形
で形成せしめられるものであることができる。 さらに、この固相アツセイ装置では、該負の対
照域が正の対照域及び該分析物結合域を囲んでい
るものであることができる。 この固相アツセイ装置では、液体試料及びアツ
セイを実施する際使用される試薬を受け入れるた
めの流体チヤンバーを有し、該流体チヤンバーが
少なくとも１つの側壁及び１つの底壁によつて定
められ、該底壁は反応表面域からなり、単位容量
のその液体試料及びアツセイで使用される試薬に
よつて同時に接触せしめられるものであることも
できる。 本発明は、別の一面においては、試験試料中分
析物の存在又は量を決定するため結合アツセイの
実施の際有用である新規な材料、並びにこの材料
を利用するアツセイを提供する。他の一面におい
ては、本発明は、改良固相分析装置、並びにこの
装置を使用する結合アツセイを提供し、それは先
行技術の装置及びアツセイ法よりきわめて有利で
ある。尚別の一面においては、本発明は、固相分
析装置の使用について独特の、内臓された操作の
コントロールを提供する。尚別の一面において
は、本発明は、固相分析装置中液流を制限する障
壁手段を提供する。 本発明の新規な材料は、繊維の多孔性マトリツ
クス及び約0.1〜約10ミクロン、好適には約0.1〜
５ミクロンの平均直径を有する、複数の実質的に
球形の固体粒子よりなり、粒子は、繊維上マトリ
ツクス内に保持固定されている。好適な１実施態
様においては、粒子は、その表面上試料中の分析
物と反応することができる物質を有している。更
に１実施態様においては、粒子の平均直径は、マ
トリツクス平均孔径より小さい。 本発明の改良装置は、前述した材料の実質的に
平面の層よりなり、それは結合アツセイのための
反応マトリツクスを形成する。実質的に平面の層
は、第１の試料接触面及び第１の面に対している
第２の面を有する。実質的に平面の層は、装置が
結合アツセイの実施に際して使用される時、第１
の面に接触する試料の少なくとも一部が実質的に
平面の層を通つて第２の面に送られるように装置
中配置されている。好適には、本発明のアツセイ
装置は、その外、装置が使用されている時、試料
液が第１の面に接触する前に過手段を通るよう
な、第１の実質的に平面の層との関係で配置され
ている過手段よりなる。更に、本発明の装置
は、吸収剤手段（実質的に平面の層を通る液を吸
収するため）よりなることが好適である。 本発明の概念は、試験試料中種々の分析物の未
知の存在又は濃度を決定するための結合アツセイ
の実施の際のみならず、固相アツセイ装置に対し
て内蔵されたコントロールを提供するのに有利で
ある。下に、更に詳述するように、本発明による
好適な固相分析装置は、可視のアツセイ系中試験
結果のあいまいでない解釈を可能にする、負の結
果を示すための可視の正の対照域のような、アツ
セイ対照をその中に組入れることができる。又、
例えば、本発明の概念を利用する好適な操作コン
トロール装置は、本発明の材料、分析中の試験試
料中分析物に検出可能な反応を生じることができ
る物質をその多孔性の繊維のマトリツクス中に有
する材料よりなることができる。 本発明の障壁手段は、吸収剤手段に入る液が反
応マトリツクスと再接触するのを制限するため
の、固相分析装置の反応マトリツクスと吸収剤手
段との間に置かれた障壁手段よりなる。 その外、本発明によれば、本発明の材料及び装
置を利用する結合アツセイを実施する改良法が提
供される。１つのこのような好適な方法において
は、分析物、例えば、抗原又は抗体を含有する試
料がこの材料からつくられる反応マトリツクスと
接触される。分析物は、マトリツクスの材料内に
保持されている粒子上試薬と結合するようにな
る；次に、マトリツクス中保持されている試薬に
よつて結合されている分析物に結合するようにな
ることができる第２の「標識」（labelled）試薬
とマトリツクスが接触される。別法として、第２
の試薬は、標識されていない抗体であることがで
き、次いで抗体に向けられる標識物質又は試薬を
添加する（増幅又は間接イムノアツセイ）。その
後、非結合材料は、例えば、洗浄によつて除去さ
れ、装置は、指示薬物質と接触され、これは、第
２の試薬の「標識」の存在下に、試料中分析物の
存在及び（又は）量を示す検出可能な反応を生じ
る。このような検出可能な反応は、可視的に又は
機器により読むことができ、有利には、特にアツ
セイから夫々正又は負の結果のみが必要であるか
又は望ましい場合には、最も望ましくはアツセイ
の結果を示すため“＋”又は“−”符号可視的出
現の形態の、色反応であることができる。別法と
して、定量的又は半定量的結果は、検出可能な反
応を可視的に又は機器により読むことによつて得
ることができる。 第１図は、本発明による分析装置の部分断面の
側面図である。 第２図は、第１図の装置の上部平面図である。 第３Ａ，３Ｂ及び３Ｃ図は、第１図の装置の特
に好適な実施態様の上部平面図である。 第４Ａ，４Ｂ及び４Ｃ図は、第１図の装置の別
の実施態様の上部平面図である。 第５図は、第１図の装置の透視図であり、装置
の本体から取り出されたプレーフイルターを示
す。 発明の詳細な説明 本発明な新規な材料、並びにそれから得られる
装置は、多くの型の分析に応用可能であるが、前
述したような、生物流体の呈色その他のEIAを実
施するための常用の固相イムノアツセイを改良す
るために、イムノアツセイ中使用される時特に有
利である。本発明によつて得られる装置は、比較
的使用するのが容易であり、先行技術のアツセイ
に比して、少ない操作工程及び複雑でないアツセ
イ技術を要し、又未知の試料の試験のため迅速な
定量的、半定量的又は定性的結果の利点を更に提
供する。この材料及び装置は、その外、例えば、
このようなアツセイの精度及び信頼性を評価する
ため、対照として有利に使用するのに適してい
る。更に、製造にあたつては、本発明の装置は、
比較的容易につくることができる。本発明のこの
ような装置を利用するアツセイは、又種々の水準
の分析物に対して高度に敏感であることが見出さ
れている。前記の利点、並びに他の利点は、明細
書中述べられる本発明の詳細な説明から明らかに
なる。 本発明の概念は、種々の型の結合アツセイに応
用可能である。抗原及び抗体分析物についてのい
くつかのこのような型のアツセイの例の模式表示
を次のとおり述べることができる。しかし、当該
技術熟練者は、抗原又は抗体以外の分析物を含
む、多くの他の型のアツセイについて推考するこ
とができることが認められ、これらに本発明の概
念を応用することができる。 １ 直接アツセイ Ａ 抗原（Ag）アツセイ 【化】 Abは、Ab2と同一であつてもなくてもよく、
種々のモノクロナール又はポリクロナール抗体で
あつてよい。前記の反応模式を使用し、本発明に
従つて決定できる抗原分析物の例は、限定はない
が、ストレプーＡ（Strep−Ａ）、ベーターhCG及
び肝炎Ｂ表面抗原（HBsAg）含む。 Ｂ 抗体（Ab）アツセイ 【化】 分析物例（これには限定されない） ａ−HTLV− ａ−HBc−IgM ａ−ルベラ（Rubella） 【化】 分析物例：ａ−HAV−IgM ２ 間接アツセイ 抗原アツセイ 【化】 これは、標識が分析物に向けられていないアツ
セイの１群である。この実施態様においては、抗
−Abは、一般に、Abに向けられていてよく、或
いはAb中に組み入れられている１種又はそれ以
上の官能基に向けられていてよい。若干の場合に
は、次のとおり、固相上直接に分析物を捕捉する
ことも望ましい。 【化】 ３ 競合アツセイ 抗体アツセイ 固相 【化】 アツセイ模式３においては、試料及び標識は共
に、固相上抗原に向けられる。結合する標識の量
は、試料中抗体の量を反映する。 図面の第１及び２図について、本発明の分析装
置の好適な実施態様は、一般に10で示される。好
適な装置１０は、実質的に平面の、一般に円形
の、デイスク形の反応マトリツクス１２を含む。
マトリツクス１２は、明細書中説明されるとお
り、本発明の新規な材料よりなり、分析中の試料
中分析物の存在又は量を決定するため、装置１０
がこのようなアツセイの際に使用される時（下に
詳細説明されるとおり）、マトリツクス１２内で
結合アツセイに必要な種々の化学反応及び変化が
おこるように、装置１０内に配置されている。マ
トリツクス１２は、試料接触面１２ａ及びそれに
対している面１２ｂを有する；マトリツクス１２
の好適な組成は、下の実施例中更に詳細に説明さ
れている。 好適な装置１０は、その外に、キヤリヤー１４
を含み、その中にマトリツクス１２が配置されて
いる。キヤリヤー１４は、プラチツク、金属その
他の剛体又は半剛体物質のような任意の適当な材
料からつくられることができる。キヤリヤー１４
のための材料として特に好適なのは、“ABS”と
して市場で知られ、ミズーリ州セントルイス在モ
ンサント・カンパニーから入手し得るプラスチツ
クである。図示される好適な実施態様において
は、キヤリヤー１４は、マトリツクス１２を完全
に囲み、その支持体及びホルダーとして機能す
る。この機能を行なうために、キヤリヤー１４
は、マトリツクス１２を密に支持し保持するため
一般に円形のフランジを有する。第１及び３ａ図
において最もよく示されるとおり、流体試料及び
アツセイの実施の際使用される試薬を受け取るた
めのチヤンバー１７は、フランジ１６の外側壁面
１６ａによつて形成される側壁及びマトリツクス
１２の試料接触面１２ａによつて形成される底壁
によつて装置１０中定められている。 好適な装置１０は更に、アツセイ装置の使用の
間液を吸収するため、図示されるとおり、キヤリ
ヤー１４中配置されている吸収剤手段よりなる。
装置１０の吸収剤手段２０は、１つ又はそれ以上
の材料の層よりなり、使用される時、障壁材料１
８と、或いは反応マトリツクス１２と、図示され
るように物理的に接触している。この特に有利な
特徴は、装置１０を使用するアツセイの実施の
間、過剰の液がアツセイ操作の間に反応マトリツ
クス１２から送られて後、必要に応じて、過剰の
液が容易に吸収されることを可能にする。吸収剤
手段２０は、任意の水分又は流体保持性の材料、
例えば、ジエームス・リバーから入手でき、「105
ポイント」又は「50ポイント」と称されるもの、
或いは、特に好適なものとして、前述したものの
各々の１つ又はそれ以上の層の組合せである。 本発明の他の一面においては、固相分析装置中
液の流れを制限するため障壁手段が提供される。
この面は、透過性反応面又はマトリツクス、或い
はフイルター層、並びに装置中使用される液を吸
収するための吸収剤層を有する固相分析装置中使
用される時、吸収剤層から反応マトリツクスへの
液の通流を防止しながら、反応面から吸収剤手段
又は層への液流を可能にするのに特に有利であ
る。 第１図示されるとおり、障壁手段は、マトリツ
クス１２の下、かつキヤリヤー１４内に拡がる障
壁材料１８の層よりなる。障壁材料１８は、マト
リツクス１２の面１２ｂと接触しており、装置が
使用されている時、マトリツクス１２を通つて面
１２ｂに送られ、そしてそれを通つて層１８中に
入る液が面１２ｂと再接触するのを制限する機能
をもつ。層１８を液制限層として利用してマトリ
ツクス１２中「背景（バツクグラウンド）」干渉
を防止するか又は排除するのを助けることが、本
発明の装置中最も好適であるが、この特徴は、マ
トリツクス１２の基本的機能又は概念として必須
又は肝要ではなく、所望の場合には装置から省略
することができることを認めるべきである。省略
される場合にも、装置は一般に、アツセイにおい
て十分な性能をもつが、感度が低くなる（検出可
能な反応の低下）可能性がある。 層１８は、制限的で、流体又は水分の実質的に
「一方向」の流れにすることができる任意の適当
な材料よりなることができる。この目的のために
特に適当な材料の例は、“Ｘ−6057”（1.0ミル）
及び“Ｘ−6108”（1.25ミル）と称してルイジア
ナ州バトン・ルージユ在エチル・ヴイスクイー
ン・コーポレーシヨンによつて製造販売されてい
るポリエチレンウイーブ材料、並びに米国特許
3929135及び4342314に記載されている材料であ
る。 下に説明されるとおり、好適な装置１０が試験
試料中分析物を示す発色のような可視的に読むこ
とができる反応を得ることができる外に、アツセ
イが実施される時、その中におこる化学的及び生
物学的反応の結果としてマトリツクス１２によつ
て得られる、例えば、可視光線の反射率又は螢光
強度等に対応する、それからの検出可能な反応を
用いて機器測定を行なうことができる。従つて、
装置１０からの検出可能な反応は、例えば、常用
の分光光度計によつて測定することができる。例
えば、特定のアツセイの間の反応及び変化によつ
て得られるマトリツクス１２中の検出可能な反応
が、発色する、又増大する発色が分析を受ける試
験試料中特定の分析物の増大する水準を示すもの
である場合には、分光光度計にマトリツクス１２
から反射される光の減少する水準が、試料中分析
物の増大する水準に対応する。このような結果の
解釈は、大部分常用のエレクトロニクスを使用し
て分光光度計の検出器によつてつくられるアナロ
グ信号をデイジタル情報に変換することのよう
な、当該技術熟練者に周知の方式で行なうことが
できる。このようなエレクトロニクスも当該技術
熟練者に周知であり、、試験試料中分析物の存在
及び（又は）量に対応するか又は相関するデイジ
タル情報からヒトが読める信号を得ることができ
る。 次に図面の第１，２及び５図について更に詳細
に説明すると、本発明の分析装置１０の特に好適
な実施態様は、更に反応マトリツクス１２の表面
１２ａ上に配置されている過手段２２を含む。
過手段２２は、保持リング２２ａによつてキヤ
リヤー１４中にプレス−フイツトされており、好
適にはハンドル部分２２ｃを有する取出し可能な
部分２２ｂを有する。手段２２は更に、例えば、
プラスチツク周囲部中ガラス又はセルロース膜の
ような適当な多孔性、繊維質材料２２ｄから構成
される；特に好適なのは、単一又は組合せの、リ
ドルからの「リデール商標グレード254」、並びに
ワツトマンからの“GF／Ｆ”又は“GF／Ｄ”で
ある。装置１０がアツセイを実施するのに使用さ
れる時は、手段２２は、種々の機能を果すことが
できる。行なわれるアツセイの型及び試験試料の
種類によつて、手段２２は、試料を保持するか又
は反応マトリツクス１２への試料又は試薬の通過
をおそくするリザーバ；アツセイ中使用される試
薬、例えば、凍結乾燥された試薬を保持する容
器；又試料中外来物を除去するか、或いは、例え
ば、血しようを通過させながら全血試料から血球
を分離保持するための「プレフイルター」のよう
な機能を果す。その外、第５図に示されるよう
に、フイルター手段２２が装置から少なくとも部
分的に取出し可能である（本発明において好適で
あるが、必須ではない特徴）場合には、装置１０
を使用するアツセイの実施例の間、所望に応じて
その中に保持されているかも知れない材料を取り
出すか、或いは試薬の添加のためにマトリツクス
１２を露出させるか又はそれから検出可能な反応
を読むために、アツセイの１工程の間に、フイル
ター手段２２の取出し可能な部分22bを取り出す
ことができる。その場合にはフイルター手段２２
の膜部分は、その取出し可能な部分の不可分の部
分である。 本発明によれば、本発明の分析装置及び方法中
有用である材料は、多孔性の繊維マトリツクスよ
りなる。「多孔性」（porous）とは、マトリツク
スが、流体が流入することができ、かつ容易に通
ることができる材料から構成されていることを意
味する。本発明の材料においては、多孔性の性質
は、ガラス、セルロース、ナイロンそその他の当
該技術熟練者に周知の繊維質の材料のような適当
な原料を単に選択することによつて達成されるこ
とができる。 例えば、使用するのに特に好適な材料は、「ワ
ツトマンGF／Ｄ」ガラス繊維紙であり、これ
は、0.032インチの公称厚さを有する。このよう
な材料の厚さは重大ではなく、流動性及び分析物
の十分な結合を可能にするだけの時間材料内に試
料を保持する必要性のような、アツセイされる試
料（及び分析物）の性質に大きく基ずいて決めら
れ、日常操作者の選択の問題である。 その外、本発明によれば、繊維質材料は好適に
は、約0.1〜約10ミクロン又はそれ以上、最も好
適には約0.1〜約５ミクロンの平均直径を有し、
材料の繊維上保持固定されている、複数の実質的
に球形の固体粒子を有する。「保持固定」
（retained and immobilized）とは、粒子が材料
の繊維上にあるかぎり、材料内の別の位置（即
ち、他の繊維）に実質的に動くことができない
か、或いはその破壊なしに材料から完全には取り
出すことができないことを意味する。粒子がこの
ように保持固定される機構は知られていないが、
繊維及び粒子の間、並びに（或いは）粒子自体の
間の物理的表面吸引によるものであろう。粒子
は、任意の適当な型の、一般に「ミクロ粒子」
（microparticles）として知られる特定の材料か
ら該技術熟練者によつて選ばれることができる；
このような粒子は典型的には、例えば、ポリスチ
レン、ポリアクリル酸メチル、ポリプロピレン、
ラテツクス、ポリテトラフルオロエチレン、ポリ
アクリロニトリル、ポリカーボネート又は同様の
材料から構成される。本発明において使用するた
めにどの型のミクロ粒子が選択されようとも、粒
子が構成される物質は、粒子の表面上試験試料、
例えば抗体又は抗原と反応することができる物
質、或いはその組合せを保持することができる
か、又はそれ自体粒子の表面上分析物を保つこと
ができるが重要である。更に、粒子の大きさは重
大ではなく、粒子の平均直径が実質的にに前記の
範囲内であるかぎり（粒子の平均直径は、繊維質
マトリツクスの平均孔径より小さいことが好適で
あるが）、前述した性質を有する任意の型の粒子
は、使用するのに適当である。 本発明によつて提供される材料及び分析装置
は、多種多様の、それ以外は周知のアツセイ技術
及び操作において有利に用いられることができ、
明細書中詳細説明された特定のイムノアツセイ技
術に応用が限定されないことが認められるべきで
ある。それらは、かくしていわゆる「競合結合」
（competitive binding）アツセイ又は類似の結合
アツセイ操作において使用されることができ、そ
の外、グルコース、尿酸等のような分析物のため
の典型的な酵素アツセイのような他のアツセイに
おいて用いられることができ、それらはイムノア
ツセイではないが、本発明の装置の材料又は反応
マトリツクス内の粒子上に、このようなアツセイ
において使用される少なくとも１種の試薬をはじ
めに保持させることによつて有利に実施すること
ができる。本発明は、種々の型のアツセイ操作に
おいて多種多用の用途に有利に応用することがで
き、かくして明細書中説明されたアツセイ及び操
作の特定の細部に決して限定されないことが、分
析技術熟練者に容易に明らかである。 しかし、本発明の原理によつて得られる新規な
材料、並びに分析装置は、酵素イムノアツセイ、
特にいわゆる「サンドイツチ」及び間接酵素イム
ノアツセイにおいて特に有利に用いることができ
る。このようなアツセイは、比較的精巧な、時間
がかかりかつコストがかかる装置及び材料を必要
とする先行技術の典型的な「ビーズ」（bead）そ
の他のアツセイより実質的に簡単である方式で、
本発明の材料及び装置を使用して行なうことがで
きる。このようなアツセイは又、驚くべき感度を
もつことができることが見出されている。 本発明の材料を利用する１つの現在好適な「サ
ンドイツチ」イムノアツセイ操作の一般化した例
は、次のとおりである： 工程ａ 前述したとおり、材料中粒子上に抗体又
は抗原を保持して、反応マトリツクスを形成さ
せる； 工程ｂ 決定されるべき抗原又は抗体を含有する
試験試料をマトリツクスに適用する； 工程ｃ 酵素複合型抗体又は抗原を工程ｂ）の抗
原又は抗体に適用する； 工程ｄ 洗浄して非結合材料を除去する；そして 工程ｅ 工程ｃ）の複合物の酵素部分の存在下
に、反応マトリツクス中検出可能な色その他反
応を生じる指示薬物質を適用する。 本発明の装置を使用してこのような「サンドイ
ツチ」アツセイをいかに有利に試料することがで
きるかの更に詳細な論述は、下の実施例中述べら
れる。 本発明によれば、分析装置の材料又は反応マト
リツクス中検出可能な反応が得られる；この反応
は、分析中の試料中分析物の存在及び（又は）量
を示すものである。本発明の好適な実施態様にお
いては、このような検出可能な反応は、前述した
もののような、一連のアツセイ工程に続く発色で
あることができ、或いは分析技術において周知で
あり、又同様な目的に対して使用される任意の数
の反応であることができる。例えば、得られる反
応は、当該技術熟練者に周知であるように、適当
な試薬がアツセイにおいて用いられるならば、螢
光の反応であることができる。この反応は又、化
学発光、或いは可視的にか、種々の既知の装置に
よつて機器で検出可能な種々の放射活性エネルギ
ー反応のいずれか（例えば、放射活性放出）であ
ることができる。かくして、本発明の材料及び装
置を使用する際、多くの異なつた型の検出可能な
反応が可能でありかつ望ましく、本発明の概念は
それによつて限定されないことが特に認められる
べきである。 本発明の概念の他の一面においては、「内蔵さ
れた」（on−board）対照域が固相分析装置に備
えられており、単一の分析装置反応面において正
の対照（これは試験試料中興味のある分析物の存
在又は不存在に関係なく、有効なアツセイ結果を
示す検出可能な反応を示す）、負の対照（これは、
アツセイ結果が有効でない場合にのみ検出可能な
反応の変化を示す）及び試料分析物に対応する検
出可能な反応を同時に示す。本発明のこの面にお
いては、同じ容量の試験試料及びアツセイ試薬
が、操作対照及び試験域に同時に接触させられ、
それによつて、当該技術において一般に実施され
ているような別の対照試験の必要が避けられる。
本発明のこの面は、今まで説明したような現在特
に好適な反応マトリツクス及び分析装置につい
て、後で詳述されるが、本発明のこの面は、複数
又は多種の反応結果を同時に示すことができる反
応面を有する任意の分析装置の場合同様に用いる
ことができることが当該技術熟練者に明らかであ
る。このような他の型の反応面は、例えば、被覆
型又は非被覆型繊維マトリツクス、フイルター又
は膜、比較的平面の固体面等を含む。 次に第３Ａ，３Ｂ，３Ｃ，４Ａ，４Ｂ及び４Ｃ
図について、内蔵された負及び生の対照域３０及
び３２は、夫々分析装置１０の反応面又はマトリ
ツクス１２上に備えられるのが好適である。負及
び正の対照域は、定量的に機能し、それによつて
負及び正のアツセイレフアレンズ対照として機能
することができ、或いは定性的に機能し、それに
よつてアツセイの実施の際使用される操作及び試
薬の有効性を示す操作対照として機能することが
できる。明細書中使用される場合、用語「対照」
（control）は、定量的及び定性的実施態様を共に
包含する。負の対照域３０は、明細書中説明され
たように、結合アツセイの実施の際、装置１０の
正常な使用の間酵素標識その他の信号反応材料を
保持する物質を含まない、マトリツクス１２の対
照域３０を保持することによつて形成される。正
の対照域３２は、試験試料中興味がある分析物の
存在又は不存在に関係なく、マトリツクスの対照
域３２内に酵素標識その他の信号反応材料と結合
することができる物質を備えることによつて形成
される。前述したような特に好適な反応マトリツ
クスに関連して使用される場合、正の対照域３２
は、対照域３２内のミクロ粒子を、結合アツセイ
の実施の間区域３２内で酵素標識を結合又は保持
させることができる分析物その他の物質で被覆す
ることによつて形成されてよい。その外、結合ア
ツセイの実施の間区域３４上試験試料からの興味
がある分析物を結合又は保持させるため、１つ又
はそれ以上の分析物結合域３４がマトリツクス１
２上に備えられる。分析物結合域３４は、分析物
を結合することができる、抗原又は抗体のような
物質で、マトリツクス１２の区域３４内のミクロ
粒子を被覆することによつて、本明細書中説明さ
れた特に好適な反応マトリツクス材料中に形成さ
れてよい。 正の対照域３２及び分析物結合域３４は、結合
アツセイの実施の際装置１０の使用を容易にする
いずれの形状で備えられてもよい。しかし、正の
対照域及び分析物結合域を、正の試験結果がおこ
ると正の対照域が分析物結合域と相互作用して、
使用者に既知の意味を有する第１の表示シンボル
を形成し、そして負の試験結果がおこると正の対
照域のみが第１の表示シンボルと異なつた、使用
者に既知の意味を有する第２の表示シンボルを形
成する相互作用する形状で備えることが本発明で
は好適である。相互作用する正の対照及び分析物
結合域は、第３Ａ，３Ｂ及び３Ｃ図の特に好適な
実施態様中最もよく示され、ここでは、正の対照
域３２は、長方形の棒又は“−”符号のの形で形
成され、一方分析物結合域は、正の対照域の反対
側、かつそれについて垂直に配向された長方形の
棒の形で形成される。従つて、第３Ａ，３Ｂ及び
３Ｃ図の装置の使用の際、装置１０の正しい使用
から得られる正の試験結果は、第３Ｃ図に示され
るように、正の対照域３２及び分析物結合域３４
共に“＋”符号の形で、検出可能な反応を生じ、
使用者に“＋”又は正の試験結果を示す。装置１
０の正しい使用から得られる負の試験結果は、第
３Ｂ図に示されるように、正の対照域３２におい
てのみ“−”符号の形で、検出可能な反応を生
じ、使用者に“−”又は負の試験結果を示す。結
合アツセイが正しく実施されない場合には、或い
はアツセイにおいて使用される試薬が正しく機能
しない場合には、第３Ａ図に示されるように、正
の対照域３２か又は分析物結合域３４において検
出可能な反応が得られず、有効でない試験結果を
示す。その外、非特異的結合又はアツセイの実施
の際洗浄工程を正しく行なわなかつたことのよう
な、負の対照域における検出可能な反応いずれ
も、有効でない試験結果を示すことができる。第
３Ａ，３Ｂ及び３Ｃ図の形状は、試験結果の正
（＋）又は負（−）の本性について、並びにアツ
セイの有効性について、あいまいでないシンボル
の形態の使用者に対する即刻の情報であることが
証明されているので、本発明において特に好適で
ある。 別法として、操作対照域及び分析物結合域は、
所望に応じて、他の形状で備えられてよい。第４
Ａ，４Ｂ及び４Ｃ図の別の実施態様においては、
正の対照域３２及び分析物結合域３４は、図示さ
れるとおり、点の形で形成されている。かくし
て、正の試験結果は、第４Ｃ図に示されるよう
に、２つの点の形の存在によつて示され、負の試
験結果は、第４Ｂ図に示されるように、正の対照
域３２においてのみ検出可能な反応の存在によつ
て示され、そして有効でない試験結果は、第４Ａ
図に示されるように、検出可能な反応に欠けるこ
とによつて示される。他のシンボル、数等のよう
な、負の対照域３０、正の対照域３２及び分析物
結合域３４の他の均等な形状は、当該技術熟練者
に容易に明らかである。 実施例 次の実施例は、本発明の新規な材料を製造使用
する好適な方式、及びこの材料を使用する分析装
置、並びにそれらを利用するアツセイ操作を例示
する。つくられた分析装置は、第１及び２図につ
いて明細書中示され説明されている装置の、実質
的に全形態及び外観を有しており、次の操作を使
用して本発明によるアツセイにおいて製造し利用
された。しかし、実施例は、例示のみであり、決
して本発明の範囲に限定を置くと解されるべきで
なく、この範囲は、特許請求の範囲によつてのみ
定められる。 別示されないかぎり、ここで表わされる百分率
は重量による。 例１：抗体被覆型ミクロ粒子の製造 スルホン酸メチルエチル（MES）緩衝液（５
ミリモル（mM）、PH4.75）1.0ミリリツトル（ml）
及び抗体溶液（ベーターhCG）（ミリリツトルあ
たり２ミリグラム（mg／ml））75ミクロリツトル
にカルボキシレート変質型ミクロ粒子（2.5％の
固形分；0.45ミクロンの平均直径；ポリサイエン
ス・アンド・シーラジエンから市販）100マイク
ロリツトルを添加した。この溶液を撹拌し、１−
エチル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミドHCl（EDAC）（10mlのH2Oあたり２
mg）100mlを次に添加した。この溶液を１夜２〜
８℃において撹拌し、その後ミクロ粒子を遠心分
離によつて単離し、0.1％「ツイーン−20」溶液
で２回洗浄し、“PBS”リン酸緩衝食塩水
（0.01MKH2PO4；0.15M NaCl；PH7.2）に再懸
濁して0.125％の溶液を得た。PBS中再懸濁の後、
粒子を、次の操作において後で使用するために貯
蔵した。 例２：固相反応マトリツクスの製造 ワツトマンGF／Ｄガラスフイルターの中心に、
例１からの抗体被覆型ミクロ粒子50マイクロリツ
トルを滴加した；次にブタ血清を添加し、湿潤チ
ヤンバー中室温においてフイルター及びミクロ粒
子を30分間温置した。この後、今ミクロ粒子を含
有しているフイルターをPBSを緩衝液300マイク
ロリツトル中３回洗浄した。次にフイルターを、
次のイムノアツセイ例中使用されるまで湿潤チヤ
ンバー中貯蔵した。走査電子顕微鏡により、ミク
ロ粒子を観察してフイルター材料のガラス繊維上
不可逆的に捕捉又は集塊になつていることが見出
された。 前述した例中記載された技術の外、種々の方
法；例えば、吸着又は種々の化学活性化剤の使用
によつて抗体（又は抗原）を連結することができ
ることを注記するべきである。又、粒子は、例え
ば、動物の血清が添加されて後、繊維質マトリツ
クスに添加すすることができること、又このよう
な血清の使用は、決定的に重要なものでないこと
が認められるべきである。従つて、マトリツクス
への粒子の添加の順序及びマトリツクス中に組み
入れて後又はその前のその処理は、本発明に対し
て決定的ではない。更に、ポリスチレン被覆型ガ
ラスのような被覆型繊維質材料は、ここで特定し
て説明されたガラスフイルターマトリツクス材料
の代りに使用することができ、それによつても本
発明の利点を実現することができることが認めら
れる。 例３：イムノアツセイのプロトコール（ベータ−
hCGの決定） 前述したように抗体被覆型ミクロ粒子を含有す
るガラス繊維材料を切断して実質的に円形の「デ
イスク」（disks）を得、反応マトリツクスを形成
するデイスクを、アツセイ中使用される溶液から
過剰の液を吸収するためブロツター材料と接触状
態にした。その後、ゼロ、並びに50及び
100mmIU／mlの水準のベータ−hCGを含有する
ヒト尿（約280マイクロリツトル）（下、表１）の
試験試料５滴を各マトリツクスの上に位置してい
るプレフイルターに試料の滴を通して後各マトリ
ツクスに添加した。次に抗体−酵素複合体（下、
表１）３滴を、プレフイルターを通して各マトリ
ツクスに添加し、各マトリツクスを室温において
約２分間温置した。次にプレフイルターを除き、
各マトリツクスに洗剤洗浄溶液1.0mlを添加して
過剰の抗体−酵素複合体を除去した。次に、色原
体指示薬（下、表１）１滴を各マトリツクスに添
加し、２分後各マトリツクスを発色について眼で
チエツクした。ベータ−hCGを含有する試験試料
の場合発色が観察され、常用の分光光度計を使用
して機器により発色に相関する光の吸光度を決定
した。結果を次の表に述べる。 【表】 【表】 前述した抗体−酵素複合体は、一般に次の参考
文献に従つて製造された：HRPO：ナカネ、P.
K.及びカワオイ、A.，The Journal of
Histochemistry and Cytochemistry，22(12)1084
〜1092（1974）；アルカリ性ホスフアターゼ：ベー
リンガー・マンハイムGmbHから入手されるグ
ルタールジアルデヒド操作に僅かに修正によつて
製造。 12人の非妊娠及び６人の確実妊娠婦人からの尿
試料を、上に説明されたHRPO−抗体酵素複合
体、並びに実質的に例３に記載操作を使用して試
験した。非妊娠者からの12の試料は、反応マトリ
ツクス中見える色を生じなかつた；即ち、吸光度
はすべて0.050より小さく、この閾値より下では
色は容易には見えることができない。６人の妊娠
者のすべてからの試料は、試験すると見える色を
生じた。 例４：ベータ−hCG操作対照の製造 表面にベータ−hCGに対する抗体が連結されて
いるミクロ粒子（前述したとおり、0.125％の固
形分）1.0mlをベータ−hCG溶液（1.0mg／ml）
14.0マイクロリツトルと反応させた。この溶液を
３時間室温において撹拌し、次に必要になるまで
２〜８℃において貯蔵した。粒子を更に洗浄する
必要はなかつた。 表面にベータ−hCGが結合されている前述した
操作対照ミクロ粒子を種々の濃度に希釈し、抗体
被覆型ミクロ粒子が適用された（上述）のと同じ
方式で、前述したガラス繊維フイルター材料に適
用した。次に各希釈の活性を、HRPO−抗体酵
素複合体２滴（約100マイクロリツトル）を添加
し、５分間温置し、洗剤洗浄液1.0mlで洗浄し、
次にTMB溶液１滴（約50マイクロリツトル）の
添加によつて発色させることによりチエツクし
た。次に、次の表に述べるとおり、常用の分光光
度計を使用して各対照の吸光度を測定した。 表 ３ストツク溶液の希釈
650nmにおける２分後の吸光度 １：８ 0.7118 １：32 0.2358 １：64 0.0983 １：32希釈における操作対照の吸光度は、
100mIU／mlのベータ−hCG標準のものにほぼ等
しいことが見出された。 例５：細菌試験−非対応細菌 ストレプＡ抗原に対するアツセイ、並びに次の
表にリストされた種々の生物についての抗原に対
するアツセイを、前述した本発明の装置を使用し
て実施した。アツセイのプロトコールは次のとお
り要約することができる： １ 予め調製された細菌綿棒試料（周知の技術に
よつて調製）を溶液中に入れ、装置の反応マト
リツクスのフイルター組立物上にピペツトでお
いた。試料をフイルターを通した。 ２ 抗体−酵素複合体２滴（約100マイクロリツ
トル）を添加し、フイルターを通した。 ３ 次にフイルターを除き、マトリツクスを
PBS緩衝液10〜12滴（約500マイクロリツト
ル）で洗浄した。 ４ TMB1滴（約50マイクロリツトル）を添加
し、室温において２分の温置の後マトリツクス
中の発色を読んだ。 次に、次の表にリストされている微生物抗原
を含有する試料について、前述したように実施
されたアツセイの結果として、常用の反射率装
置を使用して、マトリツクスから反射される
650ノナメートルの光の吸光度を決定した。 【表】 【表】 においてアツセイされた。
b. 650ノナメートルにおける吸光度。
例６：固相評価：本発明による種々の反応マトリ
ツクス材料の使用 ゼロ濃度及び250mIU／mlの濃度のベータ−
hCG含有尿試料を、本発明に従つて、種々の繊維
質マトリツクス材料に組み入れられている微生物
を使用して前述した（例３）ようにアツセイし
た。次の表中リストされている材料は、異なつた
孔径及び流速のものであつた。ワツトマンGF／
Ｄ材料も、粒子の添加の前に前処理された。
HRPO複合体が使用された。各アツセイにおい
て、アツセイの成功を示す発色が眼で観察され、
650ノナメートルにおいて吸光度の読みを取つた。
結果は次の表にまとめられる。 【表】 前述したデータは、本発明の装置の新規な材料
及び反応マトリツクス中種々の原料繊維質材料を
使用することができることを示す。所望に応じて
（例えば、流速）、材料の特性をいくらか変えるた
めにタンパク血清又はポリスチレン（親水性又は
疎水性）を用いて前処理した後このような別の原
料を使用することができる。 例７：粒子径の効果 マトリツクス材料（ワツトマンGF／Ｄ）の試
料に0.19〜約3.0ミクロンの径（平均直径）の範
囲の粒子を添加した。試料あたり抗体の量は、約
30マイクログラムに保ち、ゼロ及び100mIU／ml
のベータ−hCG含有尿試料を、アルカリ性ホスフ
アターゼ複合体を使用して前述したとおりアツセ
イした。650ノナメートルにおいて吸光度の読み
を取つた。結果を表６に述べる。 【表】 上の結果は、直径が0.19〜約3.0ミクロンの径
範囲の粒子が特に有効であり、かくして好適であ
ることを証明する。しかし、約0.1〜約５ミクロ
ンの範囲内の粒子は、本発明において使用するの
に適当である。又、GF／Ｄフイルター材料の孔
径は約2.7ミクロンであるので、データは、この
繊維質マトリツクス材料の平均孔径よりはるかに
小さいか、或いは大きい粒子を使用することがで
きることを示す。 例８：ベータ−hCGに対する迅速アツセイ ベータ−hCGに対する有利に迅速、かつ操作が
簡易であるアツセイを、第１及び２図について前
に示し説明されたように、本発明に従つて得られ
た分析装置を使用して実施した。アツセイのプロ
トコールは次のとおりであつた。 患者の尿試料５滴を、移動ピペツトを使用し、
装置の反応マトリツクス上のフイルターの中央に
医学用滴下器から適用した。試料をマトリツクス
を通して浸漬させた（約10秒）。次に抗体−酵素
複合体（アルカリ性ホスフアターゼ）３滴を添加
し、反応マトリツクスを60秒間室温において温置
した。 次にフイルターを除き、棄却し、ツイーン及び
トライトン緩衝液と組み合わせたクエン酸／
NaCl洗浄液１mlを添加し、マトリツクスを通し
た。 次に色原体酵素基質（ブロモ−クロロインドー
ルホスフエートニトロ−ブルーテトラゾリウム）
を添加し、２分間マトリツクス中発色させた。可
視検出可能な正の符号（＋）の出現は、試料が上
昇した（約50mIU／mlより大きい）水準のベー
タ−hCGを含有することを示した。前述した操作
を使用して実施されたが、このような上昇した水
準のベータ−hCGを含有しない試料は、マトリツ
クス中負の符号（−）を生じた。 例８と実質的に同様のプロトコールを用いて実
施されたが、正（＋）又は負（−）の符号の出現
を生じなかつた試験は、試薬の正しくない添加
か、或いは試薬の劣化を示した。 以下は、本発明による分析装置の製造の一般例
であり、それは固相の場合の試料の非特異的反応
性（干渉）を決定するため、更に操作対照域を組
み入れている。 本発明の材料を用いる反応マトリツクスは、実
質的に前述したとおり製造することができ、粒子
は、実質的に「＋字」（cross）の全体の形を有す
るパターンで材料に組み入れられる。「＋字」の
縦軸は、表面に分析物結合性の物質を有する粒子
から形成されることができるが、「＋字」の横軸
は、酵素標識を結合することができる物質（即
ち、標識と「複合」（conjugated）又はそれに連
結することができる抗体）から形成されることが
できる。従つて、これらの反応マトリツクスが、
例えば、ベータ−hCGのアツセイ（前述したよう
な）において使用される時、試料中検出可能な水
準の分析物が存在しない場合には、マトリツクス
の「操作対照域」（procedural control area）の
みが検出可能な反応を生じる、即ち、「＋字」の
縦軸 （「マイナス」符号）のみが発色その他の
反応を生じ、負の結果を示す。しかし、検出可能
な水準の分析物が存在する場合には、分析物は、
標識と共に、横及び縦軸において共に粒子に結合
し、両軸中検出可能な反応（「プラス」符号）を
生じる。 別法として、反応が生じるマトリツクスの区域
は、「点」（dots）、円、数などの形をとることが
できる。かくして、ミクム粒子は、マトリツクス
の材料中に噴霧その他施用して、所望に応じて
種々のパターンで、前述したようにして組み入れ
ることができる。前述した対照は、本発明の好適
なマトリツクス材料と組み合わせて使用されるよ
うにこの例において説明されたが、内臓された対
照を、前述したように、他固相分析装置と組み合
わせて同様に用いてよい。前述した材料及び装置
中、並びに他の型のマトリツクス材料を使用する
固相アツセイ装置中へこのような操作対照を組み
入れることの利点は、ａ）対照が各アツセイ実施
について材料の有効性の尺度を与える；ｂ）各ア
ツセイ実施の場合の対照が、特に「プラス」（＋）
及び「マイナス」（−）符号のような特定のパタ
ーンが使用される時、結果の比較解釈を可能にす
る；又ｃ）各アツセイ装置中への対照の組み入れ
がアツセイの適切な効力確認を与え、使用者をア
ツセイの結果に更に信用をもたせることを含む。 特許請求の範囲に述べられるような、本発明の
精神及び範囲から離れることなしに、明細書中詳
述された本発明の特定の好適な実施態様において
種々の修飾及び改変を行なうことができることが
認められるべきである。 本発明のうちからは、次の実施態様をあげるこ
とができる。 １ 試験試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて有用な材料であつ
て、繊維の多孔性マトリツクス及び0.1〜10ミ
クロンの平均直径を有する実質的に球形の固体
粒子よりなり、粒子が繊維上該マトリツクス内
に保持固定されてなる材料。 ２ 該粒子がその表面に試料中の分析物と反応す
ることができる物質を有することよりなる前項
第１項記載の材料。 ３ 粒子の平均直径がマトリツクスの平均孔径よ
り小さいことよりなる前項第１項記載の材料。 ４ 流体試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて有用な固相アツセイ
装置であつて、繊維の多孔性のマトリツクス及
び0.1〜10ミクロンの平均直径を有する実質的
に球形の固体粒子を有する材料の実質的に平面
の層よりなり、粒子が繊維上該マトリツクス内
に保持固定され、実質的に平面の層が第１の試
料接触面及び第１の面に対している第２の面を
有し、そしてアツセイの実施に装置が使用され
ている時、第１の面に接触する試料の少なくと
も一部分が実質的に平面の層を通して第２の面
に送られるように装置中配置されている固相ア
ツセイ装置。 ５ 装置が更に、試料液が第１の面に接触する前
に濾過手段を通るような、実質的に平面の層の
第１の面との関係で配置されている濾過手段よ
りなる前項第４項記載の固相アツセイ装置。 ６ 装置が更に、実質的に平面の層を通る液の少
なくとも一部分が吸収剤手段によつて吸収され
るような、実質的に平面の層の低い方の面との
関係で配置されている吸収剤手段よりなる前項
第４項記載の固相アツセイ装置。 ７ 装置が更に、実質的に平面の層と吸収剤手段
との間に置かれた障壁手段よりなり、障壁手段
が、吸収剤手段によつて保持されている液が実
質的に平面の層に戻るのを制限するように適応
されている前項第６項記載の固相アツセイ装
置。 ８ 障壁層がポリエチレンウイーブ材料より構成
される前項第７項記載のアツセイ装置。 ９ 次の工程よりなる試験試料中分析物の存在又
は量を決定するための結合アツセイ法であつ
て、 ａ 繊維のマトリツクス及び0.1〜10ミクロン
の平均直径を有する複数の実質的に球形の固
体粒子（粒子は、繊維上該マトリツクス内に
保持固定されている）を試料と接触させ、そ
れによつて試料中の分析物が粒子と結合する
ようになり、粒子上分析物コンプレツクスを
生成する； ｂ 粒子上コンプレツクスを含有する材料を分
析物と反応することができる第２の物質（こ
れは、分析物及び指示薬の存在下に検出し得
る反応を生じることができる物質で標識され
ている）と接触させる； ｃ 材料から非結合標識物質を除去する； ｄ 材料を指示薬物質と接触させる；そして ｅ 試料中分析物の存在又は量の関数として得
られる反応を検出することを特徴とする方
法。 10 検出し得る反応が、試料中に検出し得る量の
分析物が存在する時には可視検出可能な“＋”
符号であり、試料中に検出し得る量の分析物が
存在しない時には可視検出可能な“−”符号で
ある前項第９項記載の固相アツセイ方法。 11 分析物がベータ−hCG、ストレプ−Ａ抗原、
或いはHBsAgである前項第９項記載のアツセ
イ方法。 12 粒子がその表面上試料中の分析物と反応する
ことができる物質を有する前項第９項記載のア
ツセイ方法。 13 次の工程よりなる流体中分析物の存在又は量
を決定するのに有用な材料の製法であつて、 ａ 約0.1〜約５ミクロンの平均直径を有する、
複数の実質的に球形の固体粒子（粒子は、そ
の表面上に固定されて、分析物と反応するこ
とができる結合性物質を有している）を流体
の試料と共に温置し、それによつて分析物は
この物質に結合されるようになつて粒子上分
析物／結合性物質コンプレツクスを生成す
る；そして ｂ 多孔性繊維質マトリツクスを温置された種
子と接触させ、それによつて粒子の少なくと
も一部分は、繊維の少なくとも一部分上マト
リツクス内に保持固定されるようにすること
を特徴とする製法。 14 流体試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて使用するための固相
アツセイ装置であつて、正の対照域が分析物結
合域と相互作用して、装置の使用の際正の試験
結果がおこると第１の意味を有する第１の表示
シンボルを生成し、そして装置の使用の際負の
試験結果がおこると第１の表示シンボルと異な
る第２の表示シンボルを生成するような構造に
なつている、負の対照域、正の対照域及び分析
物結合域を有する反応面よりなる装置。 15 正の対照域が長方形の棒の形で反応面上形成
されている前項第14項記載の固相アツセイ装
置。 16 分析物結合域が反応面上、正の対照域の反対
側の、かつそれに垂直に配向された２つの長方
形の棒の形で形成されており、それによつて分
析物結合域が、正の対照域と共に“＋”符号の
形を形成し、正の対照域が負の試験結果がおこ
ると単独で作用して“−”の符号を形成する前
項第15項記載の固相アツセイ装置。 17 正の対照域及び分析物結合域が点の形で形成
される前項第14項記載の固相アツセイ装置。 18 負の対照域が正の対照域及び分析物結合域を
囲んでいる前項第14項記載の固相アツセイ装
置。 19 流体試料及びアツセイを実施する際使用され
る試薬を受け取るための流体チヤンバーを有
し、流体チヤンバーが少なくとも１側壁及び１
底壁によつて定められ、底壁が反応面よりなる
ので、単一容量の流体試料及びアツセイ中使用
される試薬によつて同時に接触される前項第14
項記載の固相アツセイ装置。 本発明に従えば、次なる態様、装置も提供され
る。 (1) 試験試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて有用な材料であつ
て、繊維の多孔性マトリツクス及び0.1〜10ミ
クロンの平均直径を有する実質的に球形の複数
の固体粒子よりなり、該粒子の平均直径は該マ
トリツクスの平均的孔の大きさより小さいもの
であり、そこでは該粒子はその表面上で、該試
料中の分析物と反応することができる物質を有
し、粒子が繊維上該マトリツクス内に保持固定
されてなる材料。 (2) 流体試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて有用な固相アツセイ
装置であつて、繊維の多孔性のマトリツクス及
び0.1〜10ミクロンの平均直径を有する実質的
に球形の複数の固体粒子を有し、該粒子の平均
直径は該マトリツクスの平均的孔の大きさより
小さいものであり、そこでは該粒子はその表面
上で、該試料中の分析物と反応することができ
る物質を有し、粒子が繊維上該マトリツクス内
に保持固定されてなる試料の実質的に平面の層
よりなり、該実質的に平面の層は第１の試料接
触面及び第１の面に対している第２の面を有
し、そしてアツセイの実施に装置が使用されて
いる時、第１の面に接触する試料の少なくとも
一部分が実質的に平面の層を通して第２の面に
送られるように装置中配置されている固相アツ
セイ装置。 (3) 類似の大きさのさらなるマイクロ粒子からな
り、そのさらなるマイクロ粒子はその表面に検
知することのできる標識と反応することのでき
る物質を持つており、それにより検知すること
のできる反応を生起でき、該さらなるマイクロ
粒子は、適当な標識物質を加えた場合分析物の
存在すると否とに関係なく、検知することので
きる反応が“−”符号の形で形成されるような
形態に該マトリツクス中に保持され固定化され
ているものである本項(2)記載の固相アツセイ装
置。 (4) 該分析物と反応することのできる物質をその
表面上に有している該マイクロ粒子は検知しう
る量の分析物及び適当な標識物質を加えた場
合、検知することのできる反応が、“＋”符号
の形で形成されるような形態に該マトリツクス
中に保持され固定化されているものである本項
(3)記載の固相アツセイ装置。 (5) 装置が更に、実質的に平面の層を通る液の少
なくとも一部分が吸収剤手段によつて吸収され
るような、実質的に平面の層の低い方の面との
関係で配置されている吸収剤手段よりなる本項
(2)記載のアツセイ装置。 (6) 装置が更に、実質的に平面の層と吸収剤手段
との間に置かれた障壁層よりなり、障壁層が、
吸収剤手段によつて保持されている液が実質的
に平面の相に戻るのを制限するように適応され
ている本項(5)記載の固相アツセイ装置。 (7) 次の工程よりなる試験試料中分析物の存在又
は量を決定するための結合アツセイ方法であつ
て： ａ 繊維の多孔性マトリツクス及び0.1〜10ミ
クロンの平均直径を有する実質的に球形の複
数の固体粒子よりなり、該粒子の平均直径は
該マトリツクスの平均的孔の大きさより小さ
いものであり、そこでは該粒子はその表面上
で、該試料中の分析物と反応することができ
る物質を有し、粒子が繊維上該マトリツクス
内に保持固定されてなる多孔性マトリツクス
を試料と接触させ、それによつて試料中の分
析物が粒子と結合するようになり、粒子上分
析物コンプレツクスを生成する； ｂ 粒子上コンプレツクスを含有する材料を、
分析物と反応することができる第２の物質で
あつて、これは、分析物及び指示薬の存在下
に検出し得る反応を生じるそれにより、標識
された物質は該粒子上のコンプレツクスに結
合することになることができる物質で標識さ
れているものと接触させる； ｃ 該材料から非結合標識物質を除去する； ｄ 該材料を指示薬物質と接触させる；そして ｅ 試料中分析物の存在又は量の関数として得
られる反応を検出することを特徴とする方
法。 (8) 検出し得る反応が、試料中に検出し得る量の
分析物が存在する時には可視検出可能な
“＋”符号であり、試料中に検出し得る量の
分析物が存在しない時には可視検出可能な
“−”符号である本項(7)記載のアツセイ方法。 (9) 分析物がベータ−hCG、ストレプーＡ抗原、
或いはHBsAgである本項(7)記載のアツセイ方
法。 (10) 粒子がそその表面上試料中の分析物と反応す
ることができる物質を有する本項(7)記載のアツ
セイ方法。 (11) 次の工程よりなる流体中分析物の存在又は量
を決定するのに有用な材料の製法であつて： ａ 約0.1〜約５ミクロンの平均直径を有する、
複数の実質的に球形の固体粒子（粒子は、そ
の表面上に固定されて、分析物と反応するこ
とができる結合性物質を有している）を流体
の試料と共に温置し、それによつて分析物は
この物質に結合されるようになつて粒子上分
析物／結合性物質コンプレツクスを生成す
る；そして ｂ 多孔性繊維質マトリツクスを温置された粒
子と接触させ、該粒子は繊維マトリツクスの
平均的孔の大きさより小さいものでありそれ
によつて粒子の少なくとも一部分は、繊維の
少なくとも一部分上マトリツクス内に保持固
定されるようになるものであることを特徴と
する製法。 (12) 該繊維質マトリツクス中で該分析物／結合性
物質コンプレツクスの存在を検知する工程を含
んでいる本項(11)記載の方法。 (13) 該検知工程が、該マトリツクスをその分析物
と反応することのできる第２の物質と接触せし
め、該第２の物質は検知することのできる反応
を生起せしめることのできる物質でもつて標識
されており、次に該材料からは未結合の標識物
質を除去し、試料中の分析物の存在または量の
関数として生成せしめられた反応を検知するも
のである本項(12)記載の方法。
更に詳細には、本発明は、結合アツセイの実施の
際有用な新規な材料、改良分析装置、並びにこの
材料及び装置を利用してアツセイを行なう方法に
関する。本発明の概念は、血清、血しよう、全
血、尿、脊髄及び羊膜液、粘膜液のような生物流
体及び生産物の酵素イムノアツセイの実施例の際
特に有利である。 背景技術 流体その他の材料中存在することがある、興味
ある又は臨床上の意義のある物質の存在及び（又
は）濃度を決定するアツセイにおいて、種々の分
析操作及び装置が広く用いられている。このよう
な臨床上の意義又は興味がある物質は、普通「分
析物」（analyte）と称され、例えば、抗体、抗原
及び「リガンド」（ligand）という用語で普通知
られている広い範ちゆうの物質を含むことができ
る。特に疾病又はその他の人体の条件に関して
は、適時の、臨床上意義のあるいくつかの分析物
の、生物液中の存在又は量の精密な決定は、健康
管理専門家が病的生理不全を処置管理し、、又妊
娠のような生理条件を早期かつ精密に決定するこ
とができるのに大きな影響を有する。 人体の種々の障害又は条件の診断の際次第に応
用されている１つのアツセイ法は、結合アツセ
イ、特に酵素イムノアツセイ（EIA）として知ら
れる型の結合アツセイである。EIA技術は、高等
生物の免疫系を利用し、系中生物に病原性又は異
質である物質（即ち、抗原）の生物中の存在に反
応して抗体が生じる。１種又はそれ以上の抗原が
特定の抗原に反応して生じ、又それと反応するこ
とができ、それによつてその特定の抗原を測定す
るのに、試験管内で、有利に利用することができ
る高度に特異性の反応機構がつくり出される。 常用のEIA操作は、液体試薬を使用する一連の
湿式化学工程を含み、アツセイ中の試料生物流
体、例えば、尿、全血又は血清の試験試料中の抗
原又は抗体が検出される。１つの型のEIA操作に
おいては、試料中の分析物は、はじめ試料中に導
入される対応する抗原又は抗体試薬に結合するよ
うになる。次に、他の抗原又は抗体が導入され
る。しかし、この第２の抗原又は抗体は、多くは
追加の適当な色原体又は色素のような指示試薬と
反応する時又はその存在下に、発色のような検出
可能な反応を生じるか又は引きおこすことができ
る酵素その他の物質で標識又はコンプレツクス化
されている。次にこのようにして生じた検出可能
な反応を、原試料中存在する抗原又は抗体の存在
又は量の指示又は尺度として、可視的に又は機器
により、読みとり解釈することができる。 固相EIA操作は一般に、ラジオイムノアツセイ
（RIA）その他の常用の湿式化学法のような従来
用いられている液体試薬結合アツセイ技術に比し
て、安全、使用の容易さ、特異性及び感度の故
に、抗体及び抗原のアツセイに対して共に好適で
あると考えられる。更に、分光光度計の使用のよ
うな、機器により発色を読む可能性は、多くの固
相EIA技術の特徴であり、その結果それらは広く
使用されている。 かくして、１つの型の常用の固相EIA「サンド
イツチ」アツセイにおいては、興味のある抗体又
は抗原を含有することが疑われている試験試料
は、表面上に抗原又は抗体の固定化によるか又は
それとの化学結合によつてそれを支持体の表面に
保持することができるタンパクまたはその他の物
質で予め被覆されている固体の、実質的に不活性
なプラスチツク又はガラスビーズ、その他の支持
材料とはじめに接触させられる。第２の抗原又は
抗体〔これは、普通酵素と結合（化学的に結合）
されている〕を次に添加し、この第２の種は、支
持体上対応する抗体又は抗原に結合するようにな
る。１回又はそれ以上の洗浄工程によつて非結合
材料を除去して後、指示薬物質、例えば、酵素の
存在下に反応性である色原体物質を次に添加し、
酵素の存在に対するその感受性により、検出可能
な色反応を生じる。発色反応、その密度等は、試
料中に存在した抗原又は抗体量を可視的に又は機
器により決定することができ、それと相関させる
ことができる。 このようなアツセイ技術、並びにこのようなア
ツセイにおいて必要な免疫学的反応及び変化を行
なうための固相ビーズその他の支持体は周知であ
るが、欠点がないわけではない。例えば、アツセ
イを実施し、又用いられる液体試薬を含有する精
巧な装置が必要である結果、特に個々の試料の低
容量試験のためには、実質な労力及び装置のコス
トがかかることが多い。更に、このようなアツセ
イと結びつけられた常法で被覆された支持体その
他の装置を製造することはしばしば困難で、特定
のアツセイに対して、所定の感度及び特異性の要
求に適合せしめるように、その中に使用される材
料すべてを特別に設計することは難かしく、この
ようなアツセイの精度及び再現性を最適のものと
することは難かしい。従つて、EIA操作におおい
て有利に使用することができ、又多くの面倒な湿
式化学工程又は複雑な機器の必要なしに、前述し
たような常用の方法に比して迅速、敏感かつ高度
に再現性の結果を生じることができる、比較的単
純な、使用容易かつ比較的安価な固相材料及び分
析装置が必要であるのである。 発明の要約 本発明は、前述した必要性に直接向けられ、一
面においては、本発明は、液体試料中分析物の存
在又はその量を決定するための特異的結合アツセ
イに使用する固相アツセイ装置において、 該装置は反応表面域を有し、その反応表面域は
負の対照域と正の対照域とを有しており且つ表示
シグナルを生成する標識の存在下に試験結果の有
効性を示すための手段を提供し、そこでは該試験
結果が有効であるとは該表示シグナルを生成する
標識が該正の対照域の少なくとも一部に実質的に
結合しており、該表示シグナルを生成する標識が
該負の対照域には実質的に存在しないことを必要
とするものであり： さらにその反応表面域は分析物結合域を有して
おり、その分析物結合域は該分析物を特異的に結
合せしめる手段を有し； 該装置において上記三つの領域は (a) 試料及び／又は試薬の一度の適用により各域
がそれと接触せしめられ； (b) 表示シグナルを生成する標識の供与及び該試
料中検知しうる分析物の存在下では、第一の表
示シンボルが形成せしめられていて、有効で正
の試験結果を示し、該第一の表示シンボルの少
なくとも一部は該標識が特異的な結合をなすこ
とによりその分析物結合域中に形成せしめられ
且つ第一の表示シンボルの少なくとも一部は該
標識が特異的な結合をなすことにより該正の対
照域中に形成せしめられるものであり；且つ (c) 表示シグナルを生成する標識の供与及び該試
料中検知しうる分析物の非存在下では、第二の
表示シグボルが形成せしめられていて、有効で
負の試験結果を示し、該第二の表示シンボルは
該第一の表示シンボルから該分析物結合域によ
り形成されて第一の表示シンボルに寄与せしめ
られるところのものを除いたものであることを
特徴とする固相アツセイ装置を提供することに
関するものである。 更に、一具体的な典型例においては、該正の対
照域が、長方形の棒の形で反応表面域上形成せし
められるものである上記の固相アツセイ装置を提
供する。 また、このような固相アツセイ装置は、該分析
物結合域が該正の対照域をはさんで反対側にある
二つの長方形の棒形のものでありそして該正の対
照域に対して垂直に配向された形でその反応表面
域上に形成せしめられるものであり、それにより
該分析物結合域は該正の対照域と一緒になり、
“＋”符号の形を形成せしめ且つ該正の対照域は
単独で負の試験結果の生起の場合“−”符号の形
を形成せしめるものであつてよい。 ここで、該正の対照域及び該分析物結合域の少
なくとも１つが、該正の対照域及び該分析物結合
域のそれとは別のものに実質的に隣接した点の形
で形成せしめられるものであることができる。 さらに、この固相アツセイ装置では、該負の対
照域が正の対照域及び該分析物結合域を囲んでい
るものであることができる。 この固相アツセイ装置では、液体試料及びアツ
セイを実施する際使用される試薬を受け入れるた
めの流体チヤンバーを有し、該流体チヤンバーが
少なくとも１つの側壁及び１つの底壁によつて定
められ、該底壁は反応表面域からなり、単位容量
のその液体試料及びアツセイで使用される試薬に
よつて同時に接触せしめられるものであることも
できる。 本発明は、別の一面においては、試験試料中分
析物の存在又は量を決定するため結合アツセイの
実施の際有用である新規な材料、並びにこの材料
を利用するアツセイを提供する。他の一面におい
ては、本発明は、改良固相分析装置、並びにこの
装置を使用する結合アツセイを提供し、それは先
行技術の装置及びアツセイ法よりきわめて有利で
ある。尚別の一面においては、本発明は、固相分
析装置の使用について独特の、内臓された操作の
コントロールを提供する。尚別の一面において
は、本発明は、固相分析装置中液流を制限する障
壁手段を提供する。 本発明の新規な材料は、繊維の多孔性マトリツ
クス及び約0.1〜約10ミクロン、好適には約0.1〜
５ミクロンの平均直径を有する、複数の実質的に
球形の固体粒子よりなり、粒子は、繊維上マトリ
ツクス内に保持固定されている。好適な１実施態
様においては、粒子は、その表面上試料中の分析
物と反応することができる物質を有している。更
に１実施態様においては、粒子の平均直径は、マ
トリツクス平均孔径より小さい。 本発明の改良装置は、前述した材料の実質的に
平面の層よりなり、それは結合アツセイのための
反応マトリツクスを形成する。実質的に平面の層
は、第１の試料接触面及び第１の面に対している
第２の面を有する。実質的に平面の層は、装置が
結合アツセイの実施に際して使用される時、第１
の面に接触する試料の少なくとも一部が実質的に
平面の層を通つて第２の面に送られるように装置
中配置されている。好適には、本発明のアツセイ
装置は、その外、装置が使用されている時、試料
液が第１の面に接触する前に過手段を通るよう
な、第１の実質的に平面の層との関係で配置され
ている過手段よりなる。更に、本発明の装置
は、吸収剤手段（実質的に平面の層を通る液を吸
収するため）よりなることが好適である。 本発明の概念は、試験試料中種々の分析物の未
知の存在又は濃度を決定するための結合アツセイ
の実施の際のみならず、固相アツセイ装置に対し
て内蔵されたコントロールを提供するのに有利で
ある。下に、更に詳述するように、本発明による
好適な固相分析装置は、可視のアツセイ系中試験
結果のあいまいでない解釈を可能にする、負の結
果を示すための可視の正の対照域のような、アツ
セイ対照をその中に組入れることができる。又、
例えば、本発明の概念を利用する好適な操作コン
トロール装置は、本発明の材料、分析中の試験試
料中分析物に検出可能な反応を生じることができ
る物質をその多孔性の繊維のマトリツクス中に有
する材料よりなることができる。 本発明の障壁手段は、吸収剤手段に入る液が反
応マトリツクスと再接触するのを制限するため
の、固相分析装置の反応マトリツクスと吸収剤手
段との間に置かれた障壁手段よりなる。 その外、本発明によれば、本発明の材料及び装
置を利用する結合アツセイを実施する改良法が提
供される。１つのこのような好適な方法において
は、分析物、例えば、抗原又は抗体を含有する試
料がこの材料からつくられる反応マトリツクスと
接触される。分析物は、マトリツクスの材料内に
保持されている粒子上試薬と結合するようにな
る；次に、マトリツクス中保持されている試薬に
よつて結合されている分析物に結合するようにな
ることができる第２の「標識」（labelled）試薬
とマトリツクスが接触される。別法として、第２
の試薬は、標識されていない抗体であることがで
き、次いで抗体に向けられる標識物質又は試薬を
添加する（増幅又は間接イムノアツセイ）。その
後、非結合材料は、例えば、洗浄によつて除去さ
れ、装置は、指示薬物質と接触され、これは、第
２の試薬の「標識」の存在下に、試料中分析物の
存在及び（又は）量を示す検出可能な反応を生じ
る。このような検出可能な反応は、可視的に又は
機器により読むことができ、有利には、特にアツ
セイから夫々正又は負の結果のみが必要であるか
又は望ましい場合には、最も望ましくはアツセイ
の結果を示すため“＋”又は“−”符号可視的出
現の形態の、色反応であることができる。別法と
して、定量的又は半定量的結果は、検出可能な反
応を可視的に又は機器により読むことによつて得
ることができる。 第１図は、本発明による分析装置の部分断面の
側面図である。 第２図は、第１図の装置の上部平面図である。 第３Ａ，３Ｂ及び３Ｃ図は、第１図の装置の特
に好適な実施態様の上部平面図である。 第４Ａ，４Ｂ及び４Ｃ図は、第１図の装置の別
の実施態様の上部平面図である。 第５図は、第１図の装置の透視図であり、装置
の本体から取り出されたプレーフイルターを示
す。 発明の詳細な説明 本発明な新規な材料、並びにそれから得られる
装置は、多くの型の分析に応用可能であるが、前
述したような、生物流体の呈色その他のEIAを実
施するための常用の固相イムノアツセイを改良す
るために、イムノアツセイ中使用される時特に有
利である。本発明によつて得られる装置は、比較
的使用するのが容易であり、先行技術のアツセイ
に比して、少ない操作工程及び複雑でないアツセ
イ技術を要し、又未知の試料の試験のため迅速な
定量的、半定量的又は定性的結果の利点を更に提
供する。この材料及び装置は、その外、例えば、
このようなアツセイの精度及び信頼性を評価する
ため、対照として有利に使用するのに適してい
る。更に、製造にあたつては、本発明の装置は、
比較的容易につくることができる。本発明のこの
ような装置を利用するアツセイは、又種々の水準
の分析物に対して高度に敏感であることが見出さ
れている。前記の利点、並びに他の利点は、明細
書中述べられる本発明の詳細な説明から明らかに
なる。 本発明の概念は、種々の型の結合アツセイに応
用可能である。抗原及び抗体分析物についてのい
くつかのこのような型のアツセイの例の模式表示
を次のとおり述べることができる。しかし、当該
技術熟練者は、抗原又は抗体以外の分析物を含
む、多くの他の型のアツセイについて推考するこ
とができることが認められ、これらに本発明の概
念を応用することができる。 １ 直接アツセイ Ａ 抗原（Ag）アツセイ 【化】 Abは、Ab2と同一であつてもなくてもよく、
種々のモノクロナール又はポリクロナール抗体で
あつてよい。前記の反応模式を使用し、本発明に
従つて決定できる抗原分析物の例は、限定はない
が、ストレプーＡ（Strep−Ａ）、ベーターhCG及
び肝炎Ｂ表面抗原（HBsAg）含む。 Ｂ 抗体（Ab）アツセイ 【化】 分析物例（これには限定されない） ａ−HTLV− ａ−HBc−IgM ａ−ルベラ（Rubella） 【化】 分析物例：ａ−HAV−IgM ２ 間接アツセイ 抗原アツセイ 【化】 これは、標識が分析物に向けられていないアツ
セイの１群である。この実施態様においては、抗
−Abは、一般に、Abに向けられていてよく、或
いはAb中に組み入れられている１種又はそれ以
上の官能基に向けられていてよい。若干の場合に
は、次のとおり、固相上直接に分析物を捕捉する
ことも望ましい。 【化】 ３ 競合アツセイ 抗体アツセイ 固相 【化】 アツセイ模式３においては、試料及び標識は共
に、固相上抗原に向けられる。結合する標識の量
は、試料中抗体の量を反映する。 図面の第１及び２図について、本発明の分析装
置の好適な実施態様は、一般に10で示される。好
適な装置１０は、実質的に平面の、一般に円形
の、デイスク形の反応マトリツクス１２を含む。
マトリツクス１２は、明細書中説明されるとお
り、本発明の新規な材料よりなり、分析中の試料
中分析物の存在又は量を決定するため、装置１０
がこのようなアツセイの際に使用される時（下に
詳細説明されるとおり）、マトリツクス１２内で
結合アツセイに必要な種々の化学反応及び変化が
おこるように、装置１０内に配置されている。マ
トリツクス１２は、試料接触面１２ａ及びそれに
対している面１２ｂを有する；マトリツクス１２
の好適な組成は、下の実施例中更に詳細に説明さ
れている。 好適な装置１０は、その外に、キヤリヤー１４
を含み、その中にマトリツクス１２が配置されて
いる。キヤリヤー１４は、プラチツク、金属その
他の剛体又は半剛体物質のような任意の適当な材
料からつくられることができる。キヤリヤー１４
のための材料として特に好適なのは、“ABS”と
して市場で知られ、ミズーリ州セントルイス在モ
ンサント・カンパニーから入手し得るプラスチツ
クである。図示される好適な実施態様において
は、キヤリヤー１４は、マトリツクス１２を完全
に囲み、その支持体及びホルダーとして機能す
る。この機能を行なうために、キヤリヤー１４
は、マトリツクス１２を密に支持し保持するため
一般に円形のフランジを有する。第１及び３ａ図
において最もよく示されるとおり、流体試料及び
アツセイの実施の際使用される試薬を受け取るた
めのチヤンバー１７は、フランジ１６の外側壁面
１６ａによつて形成される側壁及びマトリツクス
１２の試料接触面１２ａによつて形成される底壁
によつて装置１０中定められている。 好適な装置１０は更に、アツセイ装置の使用の
間液を吸収するため、図示されるとおり、キヤリ
ヤー１４中配置されている吸収剤手段よりなる。
装置１０の吸収剤手段２０は、１つ又はそれ以上
の材料の層よりなり、使用される時、障壁材料１
８と、或いは反応マトリツクス１２と、図示され
るように物理的に接触している。この特に有利な
特徴は、装置１０を使用するアツセイの実施の
間、過剰の液がアツセイ操作の間に反応マトリツ
クス１２から送られて後、必要に応じて、過剰の
液が容易に吸収されることを可能にする。吸収剤
手段２０は、任意の水分又は流体保持性の材料、
例えば、ジエームス・リバーから入手でき、「105
ポイント」又は「50ポイント」と称されるもの、
或いは、特に好適なものとして、前述したものの
各々の１つ又はそれ以上の層の組合せである。 本発明の他の一面においては、固相分析装置中
液の流れを制限するため障壁手段が提供される。
この面は、透過性反応面又はマトリツクス、或い
はフイルター層、並びに装置中使用される液を吸
収するための吸収剤層を有する固相分析装置中使
用される時、吸収剤層から反応マトリツクスへの
液の通流を防止しながら、反応面から吸収剤手段
又は層への液流を可能にするのに特に有利であ
る。 第１図示されるとおり、障壁手段は、マトリツ
クス１２の下、かつキヤリヤー１４内に拡がる障
壁材料１８の層よりなる。障壁材料１８は、マト
リツクス１２の面１２ｂと接触しており、装置が
使用されている時、マトリツクス１２を通つて面
１２ｂに送られ、そしてそれを通つて層１８中に
入る液が面１２ｂと再接触するのを制限する機能
をもつ。層１８を液制限層として利用してマトリ
ツクス１２中「背景（バツクグラウンド）」干渉
を防止するか又は排除するのを助けることが、本
発明の装置中最も好適であるが、この特徴は、マ
トリツクス１２の基本的機能又は概念として必須
又は肝要ではなく、所望の場合には装置から省略
することができることを認めるべきである。省略
される場合にも、装置は一般に、アツセイにおい
て十分な性能をもつが、感度が低くなる（検出可
能な反応の低下）可能性がある。 層１８は、制限的で、流体又は水分の実質的に
「一方向」の流れにすることができる任意の適当
な材料よりなることができる。この目的のために
特に適当な材料の例は、“Ｘ−6057”（1.0ミル）
及び“Ｘ−6108”（1.25ミル）と称してルイジア
ナ州バトン・ルージユ在エチル・ヴイスクイー
ン・コーポレーシヨンによつて製造販売されてい
るポリエチレンウイーブ材料、並びに米国特許
3929135及び4342314に記載されている材料であ
る。 下に説明されるとおり、好適な装置１０が試験
試料中分析物を示す発色のような可視的に読むこ
とができる反応を得ることができる外に、アツセ
イが実施される時、その中におこる化学的及び生
物学的反応の結果としてマトリツクス１２によつ
て得られる、例えば、可視光線の反射率又は螢光
強度等に対応する、それからの検出可能な反応を
用いて機器測定を行なうことができる。従つて、
装置１０からの検出可能な反応は、例えば、常用
の分光光度計によつて測定することができる。例
えば、特定のアツセイの間の反応及び変化によつ
て得られるマトリツクス１２中の検出可能な反応
が、発色する、又増大する発色が分析を受ける試
験試料中特定の分析物の増大する水準を示すもの
である場合には、分光光度計にマトリツクス１２
から反射される光の減少する水準が、試料中分析
物の増大する水準に対応する。このような結果の
解釈は、大部分常用のエレクトロニクスを使用し
て分光光度計の検出器によつてつくられるアナロ
グ信号をデイジタル情報に変換することのよう
な、当該技術熟練者に周知の方式で行なうことが
できる。このようなエレクトロニクスも当該技術
熟練者に周知であり、、試験試料中分析物の存在
及び（又は）量に対応するか又は相関するデイジ
タル情報からヒトが読める信号を得ることができ
る。 次に図面の第１，２及び５図について更に詳細
に説明すると、本発明の分析装置１０の特に好適
な実施態様は、更に反応マトリツクス１２の表面
１２ａ上に配置されている過手段２２を含む。
過手段２２は、保持リング２２ａによつてキヤ
リヤー１４中にプレス−フイツトされており、好
適にはハンドル部分２２ｃを有する取出し可能な
部分２２ｂを有する。手段２２は更に、例えば、
プラスチツク周囲部中ガラス又はセルロース膜の
ような適当な多孔性、繊維質材料２２ｄから構成
される；特に好適なのは、単一又は組合せの、リ
ドルからの「リデール商標グレード254」、並びに
ワツトマンからの“GF／Ｆ”又は“GF／Ｄ”で
ある。装置１０がアツセイを実施するのに使用さ
れる時は、手段２２は、種々の機能を果すことが
できる。行なわれるアツセイの型及び試験試料の
種類によつて、手段２２は、試料を保持するか又
は反応マトリツクス１２への試料又は試薬の通過
をおそくするリザーバ；アツセイ中使用される試
薬、例えば、凍結乾燥された試薬を保持する容
器；又試料中外来物を除去するか、或いは、例え
ば、血しようを通過させながら全血試料から血球
を分離保持するための「プレフイルター」のよう
な機能を果す。その外、第５図に示されるよう
に、フイルター手段２２が装置から少なくとも部
分的に取出し可能である（本発明において好適で
あるが、必須ではない特徴）場合には、装置１０
を使用するアツセイの実施例の間、所望に応じて
その中に保持されているかも知れない材料を取り
出すか、或いは試薬の添加のためにマトリツクス
１２を露出させるか又はそれから検出可能な反応
を読むために、アツセイの１工程の間に、フイル
ター手段２２の取出し可能な部分22bを取り出す
ことができる。その場合にはフイルター手段２２
の膜部分は、その取出し可能な部分の不可分の部
分である。 本発明によれば、本発明の分析装置及び方法中
有用である材料は、多孔性の繊維マトリツクスよ
りなる。「多孔性」（porous）とは、マトリツク
スが、流体が流入することができ、かつ容易に通
ることができる材料から構成されていることを意
味する。本発明の材料においては、多孔性の性質
は、ガラス、セルロース、ナイロンそその他の当
該技術熟練者に周知の繊維質の材料のような適当
な原料を単に選択することによつて達成されるこ
とができる。 例えば、使用するのに特に好適な材料は、「ワ
ツトマンGF／Ｄ」ガラス繊維紙であり、これ
は、0.032インチの公称厚さを有する。このよう
な材料の厚さは重大ではなく、流動性及び分析物
の十分な結合を可能にするだけの時間材料内に試
料を保持する必要性のような、アツセイされる試
料（及び分析物）の性質に大きく基ずいて決めら
れ、日常操作者の選択の問題である。 その外、本発明によれば、繊維質材料は好適に
は、約0.1〜約10ミクロン又はそれ以上、最も好
適には約0.1〜約５ミクロンの平均直径を有し、
材料の繊維上保持固定されている、複数の実質的
に球形の固体粒子を有する。「保持固定」
（retained and immobilized）とは、粒子が材料
の繊維上にあるかぎり、材料内の別の位置（即
ち、他の繊維）に実質的に動くことができない
か、或いはその破壊なしに材料から完全には取り
出すことができないことを意味する。粒子がこの
ように保持固定される機構は知られていないが、
繊維及び粒子の間、並びに（或いは）粒子自体の
間の物理的表面吸引によるものであろう。粒子
は、任意の適当な型の、一般に「ミクロ粒子」
（microparticles）として知られる特定の材料か
ら該技術熟練者によつて選ばれることができる；
このような粒子は典型的には、例えば、ポリスチ
レン、ポリアクリル酸メチル、ポリプロピレン、
ラテツクス、ポリテトラフルオロエチレン、ポリ
アクリロニトリル、ポリカーボネート又は同様の
材料から構成される。本発明において使用するた
めにどの型のミクロ粒子が選択されようとも、粒
子が構成される物質は、粒子の表面上試験試料、
例えば抗体又は抗原と反応することができる物
質、或いはその組合せを保持することができる
か、又はそれ自体粒子の表面上分析物を保つこと
ができるが重要である。更に、粒子の大きさは重
大ではなく、粒子の平均直径が実質的にに前記の
範囲内であるかぎり（粒子の平均直径は、繊維質
マトリツクスの平均孔径より小さいことが好適で
あるが）、前述した性質を有する任意の型の粒子
は、使用するのに適当である。 本発明によつて提供される材料及び分析装置
は、多種多様の、それ以外は周知のアツセイ技術
及び操作において有利に用いられることができ、
明細書中詳細説明された特定のイムノアツセイ技
術に応用が限定されないことが認められるべきで
ある。それらは、かくしていわゆる「競合結合」
（competitive binding）アツセイ又は類似の結合
アツセイ操作において使用されることができ、そ
の外、グルコース、尿酸等のような分析物のため
の典型的な酵素アツセイのような他のアツセイに
おいて用いられることができ、それらはイムノア
ツセイではないが、本発明の装置の材料又は反応
マトリツクス内の粒子上に、このようなアツセイ
において使用される少なくとも１種の試薬をはじ
めに保持させることによつて有利に実施すること
ができる。本発明は、種々の型のアツセイ操作に
おいて多種多用の用途に有利に応用することがで
き、かくして明細書中説明されたアツセイ及び操
作の特定の細部に決して限定されないことが、分
析技術熟練者に容易に明らかである。 しかし、本発明の原理によつて得られる新規な
材料、並びに分析装置は、酵素イムノアツセイ、
特にいわゆる「サンドイツチ」及び間接酵素イム
ノアツセイにおいて特に有利に用いることができ
る。このようなアツセイは、比較的精巧な、時間
がかかりかつコストがかかる装置及び材料を必要
とする先行技術の典型的な「ビーズ」（bead）そ
の他のアツセイより実質的に簡単である方式で、
本発明の材料及び装置を使用して行なうことがで
きる。このようなアツセイは又、驚くべき感度を
もつことができることが見出されている。 本発明の材料を利用する１つの現在好適な「サ
ンドイツチ」イムノアツセイ操作の一般化した例
は、次のとおりである： 工程ａ 前述したとおり、材料中粒子上に抗体又
は抗原を保持して、反応マトリツクスを形成さ
せる； 工程ｂ 決定されるべき抗原又は抗体を含有する
試験試料をマトリツクスに適用する； 工程ｃ 酵素複合型抗体又は抗原を工程ｂ）の抗
原又は抗体に適用する； 工程ｄ 洗浄して非結合材料を除去する；そして 工程ｅ 工程ｃ）の複合物の酵素部分の存在下
に、反応マトリツクス中検出可能な色その他反
応を生じる指示薬物質を適用する。 本発明の装置を使用してこのような「サンドイ
ツチ」アツセイをいかに有利に試料することがで
きるかの更に詳細な論述は、下の実施例中述べら
れる。 本発明によれば、分析装置の材料又は反応マト
リツクス中検出可能な反応が得られる；この反応
は、分析中の試料中分析物の存在及び（又は）量
を示すものである。本発明の好適な実施態様にお
いては、このような検出可能な反応は、前述した
もののような、一連のアツセイ工程に続く発色で
あることができ、或いは分析技術において周知で
あり、又同様な目的に対して使用される任意の数
の反応であることができる。例えば、得られる反
応は、当該技術熟練者に周知であるように、適当
な試薬がアツセイにおいて用いられるならば、螢
光の反応であることができる。この反応は又、化
学発光、或いは可視的にか、種々の既知の装置に
よつて機器で検出可能な種々の放射活性エネルギ
ー反応のいずれか（例えば、放射活性放出）であ
ることができる。かくして、本発明の材料及び装
置を使用する際、多くの異なつた型の検出可能な
反応が可能でありかつ望ましく、本発明の概念は
それによつて限定されないことが特に認められる
べきである。 本発明の概念の他の一面においては、「内蔵さ
れた」（on−board）対照域が固相分析装置に備
えられており、単一の分析装置反応面において正
の対照（これは試験試料中興味のある分析物の存
在又は不存在に関係なく、有効なアツセイ結果を
示す検出可能な反応を示す）、負の対照（これは、
アツセイ結果が有効でない場合にのみ検出可能な
反応の変化を示す）及び試料分析物に対応する検
出可能な反応を同時に示す。本発明のこの面にお
いては、同じ容量の試験試料及びアツセイ試薬
が、操作対照及び試験域に同時に接触させられ、
それによつて、当該技術において一般に実施され
ているような別の対照試験の必要が避けられる。
本発明のこの面は、今まで説明したような現在特
に好適な反応マトリツクス及び分析装置につい
て、後で詳述されるが、本発明のこの面は、複数
又は多種の反応結果を同時に示すことができる反
応面を有する任意の分析装置の場合同様に用いる
ことができることが当該技術熟練者に明らかであ
る。このような他の型の反応面は、例えば、被覆
型又は非被覆型繊維マトリツクス、フイルター又
は膜、比較的平面の固体面等を含む。 次に第３Ａ，３Ｂ，３Ｃ，４Ａ，４Ｂ及び４Ｃ
図について、内蔵された負及び生の対照域３０及
び３２は、夫々分析装置１０の反応面又はマトリ
ツクス１２上に備えられるのが好適である。負及
び正の対照域は、定量的に機能し、それによつて
負及び正のアツセイレフアレンズ対照として機能
することができ、或いは定性的に機能し、それに
よつてアツセイの実施の際使用される操作及び試
薬の有効性を示す操作対照として機能することが
できる。明細書中使用される場合、用語「対照」
（control）は、定量的及び定性的実施態様を共に
包含する。負の対照域３０は、明細書中説明され
たように、結合アツセイの実施の際、装置１０の
正常な使用の間酵素標識その他の信号反応材料を
保持する物質を含まない、マトリツクス１２の対
照域３０を保持することによつて形成される。正
の対照域３２は、試験試料中興味がある分析物の
存在又は不存在に関係なく、マトリツクスの対照
域３２内に酵素標識その他の信号反応材料と結合
することができる物質を備えることによつて形成
される。前述したような特に好適な反応マトリツ
クスに関連して使用される場合、正の対照域３２
は、対照域３２内のミクロ粒子を、結合アツセイ
の実施の間区域３２内で酵素標識を結合又は保持
させることができる分析物その他の物質で被覆す
ることによつて形成されてよい。その外、結合ア
ツセイの実施の間区域３４上試験試料からの興味
がある分析物を結合又は保持させるため、１つ又
はそれ以上の分析物結合域３４がマトリツクス１
２上に備えられる。分析物結合域３４は、分析物
を結合することができる、抗原又は抗体のような
物質で、マトリツクス１２の区域３４内のミクロ
粒子を被覆することによつて、本明細書中説明さ
れた特に好適な反応マトリツクス材料中に形成さ
れてよい。 正の対照域３２及び分析物結合域３４は、結合
アツセイの実施の際装置１０の使用を容易にする
いずれの形状で備えられてもよい。しかし、正の
対照域及び分析物結合域を、正の試験結果がおこ
ると正の対照域が分析物結合域と相互作用して、
使用者に既知の意味を有する第１の表示シンボル
を形成し、そして負の試験結果がおこると正の対
照域のみが第１の表示シンボルと異なつた、使用
者に既知の意味を有する第２の表示シンボルを形
成する相互作用する形状で備えることが本発明で
は好適である。相互作用する正の対照及び分析物
結合域は、第３Ａ，３Ｂ及び３Ｃ図の特に好適な
実施態様中最もよく示され、ここでは、正の対照
域３２は、長方形の棒又は“−”符号のの形で形
成され、一方分析物結合域は、正の対照域の反対
側、かつそれについて垂直に配向された長方形の
棒の形で形成される。従つて、第３Ａ，３Ｂ及び
３Ｃ図の装置の使用の際、装置１０の正しい使用
から得られる正の試験結果は、第３Ｃ図に示され
るように、正の対照域３２及び分析物結合域３４
共に“＋”符号の形で、検出可能な反応を生じ、
使用者に“＋”又は正の試験結果を示す。装置１
０の正しい使用から得られる負の試験結果は、第
３Ｂ図に示されるように、正の対照域３２におい
てのみ“−”符号の形で、検出可能な反応を生
じ、使用者に“−”又は負の試験結果を示す。結
合アツセイが正しく実施されない場合には、或い
はアツセイにおいて使用される試薬が正しく機能
しない場合には、第３Ａ図に示されるように、正
の対照域３２か又は分析物結合域３４において検
出可能な反応が得られず、有効でない試験結果を
示す。その外、非特異的結合又はアツセイの実施
の際洗浄工程を正しく行なわなかつたことのよう
な、負の対照域における検出可能な反応いずれ
も、有効でない試験結果を示すことができる。第
３Ａ，３Ｂ及び３Ｃ図の形状は、試験結果の正
（＋）又は負（−）の本性について、並びにアツ
セイの有効性について、あいまいでないシンボル
の形態の使用者に対する即刻の情報であることが
証明されているので、本発明において特に好適で
ある。 別法として、操作対照域及び分析物結合域は、
所望に応じて、他の形状で備えられてよい。第４
Ａ，４Ｂ及び４Ｃ図の別の実施態様においては、
正の対照域３２及び分析物結合域３４は、図示さ
れるとおり、点の形で形成されている。かくし
て、正の試験結果は、第４Ｃ図に示されるよう
に、２つの点の形の存在によつて示され、負の試
験結果は、第４Ｂ図に示されるように、正の対照
域３２においてのみ検出可能な反応の存在によつ
て示され、そして有効でない試験結果は、第４Ａ
図に示されるように、検出可能な反応に欠けるこ
とによつて示される。他のシンボル、数等のよう
な、負の対照域３０、正の対照域３２及び分析物
結合域３４の他の均等な形状は、当該技術熟練者
に容易に明らかである。 実施例 次の実施例は、本発明の新規な材料を製造使用
する好適な方式、及びこの材料を使用する分析装
置、並びにそれらを利用するアツセイ操作を例示
する。つくられた分析装置は、第１及び２図につ
いて明細書中示され説明されている装置の、実質
的に全形態及び外観を有しており、次の操作を使
用して本発明によるアツセイにおいて製造し利用
された。しかし、実施例は、例示のみであり、決
して本発明の範囲に限定を置くと解されるべきで
なく、この範囲は、特許請求の範囲によつてのみ
定められる。 別示されないかぎり、ここで表わされる百分率
は重量による。 例１：抗体被覆型ミクロ粒子の製造 スルホン酸メチルエチル（MES）緩衝液（５
ミリモル（mM）、PH4.75）1.0ミリリツトル（ml）
及び抗体溶液（ベーターhCG）（ミリリツトルあ
たり２ミリグラム（mg／ml））75ミクロリツトル
にカルボキシレート変質型ミクロ粒子（2.5％の
固形分；0.45ミクロンの平均直径；ポリサイエン
ス・アンド・シーラジエンから市販）100マイク
ロリツトルを添加した。この溶液を撹拌し、１−
エチル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミドHCl（EDAC）（10mlのH2Oあたり２
mg）100mlを次に添加した。この溶液を１夜２〜
８℃において撹拌し、その後ミクロ粒子を遠心分
離によつて単離し、0.1％「ツイーン−20」溶液
で２回洗浄し、“PBS”リン酸緩衝食塩水
（0.01MKH2PO4；0.15M NaCl；PH7.2）に再懸
濁して0.125％の溶液を得た。PBS中再懸濁の後、
粒子を、次の操作において後で使用するために貯
蔵した。 例２：固相反応マトリツクスの製造 ワツトマンGF／Ｄガラスフイルターの中心に、
例１からの抗体被覆型ミクロ粒子50マイクロリツ
トルを滴加した；次にブタ血清を添加し、湿潤チ
ヤンバー中室温においてフイルター及びミクロ粒
子を30分間温置した。この後、今ミクロ粒子を含
有しているフイルターをPBSを緩衝液300マイク
ロリツトル中３回洗浄した。次にフイルターを、
次のイムノアツセイ例中使用されるまで湿潤チヤ
ンバー中貯蔵した。走査電子顕微鏡により、ミク
ロ粒子を観察してフイルター材料のガラス繊維上
不可逆的に捕捉又は集塊になつていることが見出
された。 前述した例中記載された技術の外、種々の方
法；例えば、吸着又は種々の化学活性化剤の使用
によつて抗体（又は抗原）を連結することができ
ることを注記するべきである。又、粒子は、例え
ば、動物の血清が添加されて後、繊維質マトリツ
クスに添加すすることができること、又このよう
な血清の使用は、決定的に重要なものでないこと
が認められるべきである。従つて、マトリツクス
への粒子の添加の順序及びマトリツクス中に組み
入れて後又はその前のその処理は、本発明に対し
て決定的ではない。更に、ポリスチレン被覆型ガ
ラスのような被覆型繊維質材料は、ここで特定し
て説明されたガラスフイルターマトリツクス材料
の代りに使用することができ、それによつても本
発明の利点を実現することができることが認めら
れる。 例３：イムノアツセイのプロトコール（ベータ−
hCGの決定） 前述したように抗体被覆型ミクロ粒子を含有す
るガラス繊維材料を切断して実質的に円形の「デ
イスク」（disks）を得、反応マトリツクスを形成
するデイスクを、アツセイ中使用される溶液から
過剰の液を吸収するためブロツター材料と接触状
態にした。その後、ゼロ、並びに50及び
100mmIU／mlの水準のベータ−hCGを含有する
ヒト尿（約280マイクロリツトル）（下、表１）の
試験試料５滴を各マトリツクスの上に位置してい
るプレフイルターに試料の滴を通して後各マトリ
ツクスに添加した。次に抗体−酵素複合体（下、
表１）３滴を、プレフイルターを通して各マトリ
ツクスに添加し、各マトリツクスを室温において
約２分間温置した。次にプレフイルターを除き、
各マトリツクスに洗剤洗浄溶液1.0mlを添加して
過剰の抗体−酵素複合体を除去した。次に、色原
体指示薬（下、表１）１滴を各マトリツクスに添
加し、２分後各マトリツクスを発色について眼で
チエツクした。ベータ−hCGを含有する試験試料
の場合発色が観察され、常用の分光光度計を使用
して機器により発色に相関する光の吸光度を決定
した。結果を次の表に述べる。 【表】 【表】 前述した抗体−酵素複合体は、一般に次の参考
文献に従つて製造された：HRPO：ナカネ、P.
K.及びカワオイ、A.，The Journal of
Histochemistry and Cytochemistry，22(12)1084
〜1092（1974）；アルカリ性ホスフアターゼ：ベー
リンガー・マンハイムGmbHから入手されるグ
ルタールジアルデヒド操作に僅かに修正によつて
製造。 12人の非妊娠及び６人の確実妊娠婦人からの尿
試料を、上に説明されたHRPO−抗体酵素複合
体、並びに実質的に例３に記載操作を使用して試
験した。非妊娠者からの12の試料は、反応マトリ
ツクス中見える色を生じなかつた；即ち、吸光度
はすべて0.050より小さく、この閾値より下では
色は容易には見えることができない。６人の妊娠
者のすべてからの試料は、試験すると見える色を
生じた。 例４：ベータ−hCG操作対照の製造 表面にベータ−hCGに対する抗体が連結されて
いるミクロ粒子（前述したとおり、0.125％の固
形分）1.0mlをベータ−hCG溶液（1.0mg／ml）
14.0マイクロリツトルと反応させた。この溶液を
３時間室温において撹拌し、次に必要になるまで
２〜８℃において貯蔵した。粒子を更に洗浄する
必要はなかつた。 表面にベータ−hCGが結合されている前述した
操作対照ミクロ粒子を種々の濃度に希釈し、抗体
被覆型ミクロ粒子が適用された（上述）のと同じ
方式で、前述したガラス繊維フイルター材料に適
用した。次に各希釈の活性を、HRPO−抗体酵
素複合体２滴（約100マイクロリツトル）を添加
し、５分間温置し、洗剤洗浄液1.0mlで洗浄し、
次にTMB溶液１滴（約50マイクロリツトル）の
添加によつて発色させることによりチエツクし
た。次に、次の表に述べるとおり、常用の分光光
度計を使用して各対照の吸光度を測定した。 表 ３ストツク溶液の希釈
650nmにおける２分後の吸光度 １：８ 0.7118 １：32 0.2358 １：64 0.0983 １：32希釈における操作対照の吸光度は、
100mIU／mlのベータ−hCG標準のものにほぼ等
しいことが見出された。 例５：細菌試験−非対応細菌 ストレプＡ抗原に対するアツセイ、並びに次の
表にリストされた種々の生物についての抗原に対
するアツセイを、前述した本発明の装置を使用し
て実施した。アツセイのプロトコールは次のとお
り要約することができる： １ 予め調製された細菌綿棒試料（周知の技術に
よつて調製）を溶液中に入れ、装置の反応マト
リツクスのフイルター組立物上にピペツトでお
いた。試料をフイルターを通した。 ２ 抗体−酵素複合体２滴（約100マイクロリツ
トル）を添加し、フイルターを通した。 ３ 次にフイルターを除き、マトリツクスを
PBS緩衝液10〜12滴（約500マイクロリツト
ル）で洗浄した。 ４ TMB1滴（約50マイクロリツトル）を添加
し、室温において２分の温置の後マトリツクス
中の発色を読んだ。 次に、次の表にリストされている微生物抗原
を含有する試料について、前述したように実施
されたアツセイの結果として、常用の反射率装
置を使用して、マトリツクスから反射される
650ノナメートルの光の吸光度を決定した。 【表】 【表】 においてアツセイされた。
b. 650ノナメートルにおける吸光度。
例６：固相評価：本発明による種々の反応マトリ
ツクス材料の使用 ゼロ濃度及び250mIU／mlの濃度のベータ−
hCG含有尿試料を、本発明に従つて、種々の繊維
質マトリツクス材料に組み入れられている微生物
を使用して前述した（例３）ようにアツセイし
た。次の表中リストされている材料は、異なつた
孔径及び流速のものであつた。ワツトマンGF／
Ｄ材料も、粒子の添加の前に前処理された。
HRPO複合体が使用された。各アツセイにおい
て、アツセイの成功を示す発色が眼で観察され、
650ノナメートルにおいて吸光度の読みを取つた。
結果は次の表にまとめられる。 【表】 前述したデータは、本発明の装置の新規な材料
及び反応マトリツクス中種々の原料繊維質材料を
使用することができることを示す。所望に応じて
（例えば、流速）、材料の特性をいくらか変えるた
めにタンパク血清又はポリスチレン（親水性又は
疎水性）を用いて前処理した後このような別の原
料を使用することができる。 例７：粒子径の効果 マトリツクス材料（ワツトマンGF／Ｄ）の試
料に0.19〜約3.0ミクロンの径（平均直径）の範
囲の粒子を添加した。試料あたり抗体の量は、約
30マイクログラムに保ち、ゼロ及び100mIU／ml
のベータ−hCG含有尿試料を、アルカリ性ホスフ
アターゼ複合体を使用して前述したとおりアツセ
イした。650ノナメートルにおいて吸光度の読み
を取つた。結果を表６に述べる。 【表】 上の結果は、直径が0.19〜約3.0ミクロンの径
範囲の粒子が特に有効であり、かくして好適であ
ることを証明する。しかし、約0.1〜約５ミクロ
ンの範囲内の粒子は、本発明において使用するの
に適当である。又、GF／Ｄフイルター材料の孔
径は約2.7ミクロンであるので、データは、この
繊維質マトリツクス材料の平均孔径よりはるかに
小さいか、或いは大きい粒子を使用することがで
きることを示す。 例８：ベータ−hCGに対する迅速アツセイ ベータ−hCGに対する有利に迅速、かつ操作が
簡易であるアツセイを、第１及び２図について前
に示し説明されたように、本発明に従つて得られ
た分析装置を使用して実施した。アツセイのプロ
トコールは次のとおりであつた。 患者の尿試料５滴を、移動ピペツトを使用し、
装置の反応マトリツクス上のフイルターの中央に
医学用滴下器から適用した。試料をマトリツクス
を通して浸漬させた（約10秒）。次に抗体−酵素
複合体（アルカリ性ホスフアターゼ）３滴を添加
し、反応マトリツクスを60秒間室温において温置
した。 次にフイルターを除き、棄却し、ツイーン及び
トライトン緩衝液と組み合わせたクエン酸／
NaCl洗浄液１mlを添加し、マトリツクスを通し
た。 次に色原体酵素基質（ブロモ−クロロインドー
ルホスフエートニトロ−ブルーテトラゾリウム）
を添加し、２分間マトリツクス中発色させた。可
視検出可能な正の符号（＋）の出現は、試料が上
昇した（約50mIU／mlより大きい）水準のベー
タ−hCGを含有することを示した。前述した操作
を使用して実施されたが、このような上昇した水
準のベータ−hCGを含有しない試料は、マトリツ
クス中負の符号（−）を生じた。 例８と実質的に同様のプロトコールを用いて実
施されたが、正（＋）又は負（−）の符号の出現
を生じなかつた試験は、試薬の正しくない添加
か、或いは試薬の劣化を示した。 以下は、本発明による分析装置の製造の一般例
であり、それは固相の場合の試料の非特異的反応
性（干渉）を決定するため、更に操作対照域を組
み入れている。 本発明の材料を用いる反応マトリツクスは、実
質的に前述したとおり製造することができ、粒子
は、実質的に「＋字」（cross）の全体の形を有す
るパターンで材料に組み入れられる。「＋字」の
縦軸は、表面に分析物結合性の物質を有する粒子
から形成されることができるが、「＋字」の横軸
は、酵素標識を結合することができる物質（即
ち、標識と「複合」（conjugated）又はそれに連
結することができる抗体）から形成されることが
できる。従つて、これらの反応マトリツクスが、
例えば、ベータ−hCGのアツセイ（前述したよう
な）において使用される時、試料中検出可能な水
準の分析物が存在しない場合には、マトリツクス
の「操作対照域」（procedural control area）の
みが検出可能な反応を生じる、即ち、「＋字」の
縦軸 （「マイナス」符号）のみが発色その他の
反応を生じ、負の結果を示す。しかし、検出可能
な水準の分析物が存在する場合には、分析物は、
標識と共に、横及び縦軸において共に粒子に結合
し、両軸中検出可能な反応（「プラス」符号）を
生じる。 別法として、反応が生じるマトリツクスの区域
は、「点」（dots）、円、数などの形をとることが
できる。かくして、ミクム粒子は、マトリツクス
の材料中に噴霧その他施用して、所望に応じて
種々のパターンで、前述したようにして組み入れ
ることができる。前述した対照は、本発明の好適
なマトリツクス材料と組み合わせて使用されるよ
うにこの例において説明されたが、内臓された対
照を、前述したように、他固相分析装置と組み合
わせて同様に用いてよい。前述した材料及び装置
中、並びに他の型のマトリツクス材料を使用する
固相アツセイ装置中へこのような操作対照を組み
入れることの利点は、ａ）対照が各アツセイ実施
について材料の有効性の尺度を与える；ｂ）各ア
ツセイ実施の場合の対照が、特に「プラス」（＋）
及び「マイナス」（−）符号のような特定のパタ
ーンが使用される時、結果の比較解釈を可能にす
る；又ｃ）各アツセイ装置中への対照の組み入れ
がアツセイの適切な効力確認を与え、使用者をア
ツセイの結果に更に信用をもたせることを含む。 特許請求の範囲に述べられるような、本発明の
精神及び範囲から離れることなしに、明細書中詳
述された本発明の特定の好適な実施態様において
種々の修飾及び改変を行なうことができることが
認められるべきである。 本発明のうちからは、次の実施態様をあげるこ
とができる。 １ 試験試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて有用な材料であつ
て、繊維の多孔性マトリツクス及び0.1〜10ミ
クロンの平均直径を有する実質的に球形の固体
粒子よりなり、粒子が繊維上該マトリツクス内
に保持固定されてなる材料。 ２ 該粒子がその表面に試料中の分析物と反応す
ることができる物質を有することよりなる前項
第１項記載の材料。 ３ 粒子の平均直径がマトリツクスの平均孔径よ
り小さいことよりなる前項第１項記載の材料。 ４ 流体試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて有用な固相アツセイ
装置であつて、繊維の多孔性のマトリツクス及
び0.1〜10ミクロンの平均直径を有する実質的
に球形の固体粒子を有する材料の実質的に平面
の層よりなり、粒子が繊維上該マトリツクス内
に保持固定され、実質的に平面の層が第１の試
料接触面及び第１の面に対している第２の面を
有し、そしてアツセイの実施に装置が使用され
ている時、第１の面に接触する試料の少なくと
も一部分が実質的に平面の層を通して第２の面
に送られるように装置中配置されている固相ア
ツセイ装置。 ５ 装置が更に、試料液が第１の面に接触する前
に濾過手段を通るような、実質的に平面の層の
第１の面との関係で配置されている濾過手段よ
りなる前項第４項記載の固相アツセイ装置。 ６ 装置が更に、実質的に平面の層を通る液の少
なくとも一部分が吸収剤手段によつて吸収され
るような、実質的に平面の層の低い方の面との
関係で配置されている吸収剤手段よりなる前項
第４項記載の固相アツセイ装置。 ７ 装置が更に、実質的に平面の層と吸収剤手段
との間に置かれた障壁手段よりなり、障壁手段
が、吸収剤手段によつて保持されている液が実
質的に平面の層に戻るのを制限するように適応
されている前項第６項記載の固相アツセイ装
置。 ８ 障壁層がポリエチレンウイーブ材料より構成
される前項第７項記載のアツセイ装置。 ９ 次の工程よりなる試験試料中分析物の存在又
は量を決定するための結合アツセイ法であつ
て、 ａ 繊維のマトリツクス及び0.1〜10ミクロン
の平均直径を有する複数の実質的に球形の固
体粒子（粒子は、繊維上該マトリツクス内に
保持固定されている）を試料と接触させ、そ
れによつて試料中の分析物が粒子と結合する
ようになり、粒子上分析物コンプレツクスを
生成する； ｂ 粒子上コンプレツクスを含有する材料を分
析物と反応することができる第２の物質（こ
れは、分析物及び指示薬の存在下に検出し得
る反応を生じることができる物質で標識され
ている）と接触させる； ｃ 材料から非結合標識物質を除去する； ｄ 材料を指示薬物質と接触させる；そして ｅ 試料中分析物の存在又は量の関数として得
られる反応を検出することを特徴とする方
法。 10 検出し得る反応が、試料中に検出し得る量の
分析物が存在する時には可視検出可能な“＋”
符号であり、試料中に検出し得る量の分析物が
存在しない時には可視検出可能な“−”符号で
ある前項第９項記載の固相アツセイ方法。 11 分析物がベータ−hCG、ストレプ−Ａ抗原、
或いはHBsAgである前項第９項記載のアツセ
イ方法。 12 粒子がその表面上試料中の分析物と反応する
ことができる物質を有する前項第９項記載のア
ツセイ方法。 13 次の工程よりなる流体中分析物の存在又は量
を決定するのに有用な材料の製法であつて、 ａ 約0.1〜約５ミクロンの平均直径を有する、
複数の実質的に球形の固体粒子（粒子は、そ
の表面上に固定されて、分析物と反応するこ
とができる結合性物質を有している）を流体
の試料と共に温置し、それによつて分析物は
この物質に結合されるようになつて粒子上分
析物／結合性物質コンプレツクスを生成す
る；そして ｂ 多孔性繊維質マトリツクスを温置された種
子と接触させ、それによつて粒子の少なくと
も一部分は、繊維の少なくとも一部分上マト
リツクス内に保持固定されるようにすること
を特徴とする製法。 14 流体試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて使用するための固相
アツセイ装置であつて、正の対照域が分析物結
合域と相互作用して、装置の使用の際正の試験
結果がおこると第１の意味を有する第１の表示
シンボルを生成し、そして装置の使用の際負の
試験結果がおこると第１の表示シンボルと異な
る第２の表示シンボルを生成するような構造に
なつている、負の対照域、正の対照域及び分析
物結合域を有する反応面よりなる装置。 15 正の対照域が長方形の棒の形で反応面上形成
されている前項第14項記載の固相アツセイ装
置。 16 分析物結合域が反応面上、正の対照域の反対
側の、かつそれに垂直に配向された２つの長方
形の棒の形で形成されており、それによつて分
析物結合域が、正の対照域と共に“＋”符号の
形を形成し、正の対照域が負の試験結果がおこ
ると単独で作用して“−”の符号を形成する前
項第15項記載の固相アツセイ装置。 17 正の対照域及び分析物結合域が点の形で形成
される前項第14項記載の固相アツセイ装置。 18 負の対照域が正の対照域及び分析物結合域を
囲んでいる前項第14項記載の固相アツセイ装
置。 19 流体試料及びアツセイを実施する際使用され
る試薬を受け取るための流体チヤンバーを有
し、流体チヤンバーが少なくとも１側壁及び１
底壁によつて定められ、底壁が反応面よりなる
ので、単一容量の流体試料及びアツセイ中使用
される試薬によつて同時に接触される前項第14
項記載の固相アツセイ装置。 本発明に従えば、次なる態様、装置も提供され
る。 (1) 試験試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて有用な材料であつ
て、繊維の多孔性マトリツクス及び0.1〜10ミ
クロンの平均直径を有する実質的に球形の複数
の固体粒子よりなり、該粒子の平均直径は該マ
トリツクスの平均的孔の大きさより小さいもの
であり、そこでは該粒子はその表面上で、該試
料中の分析物と反応することができる物質を有
し、粒子が繊維上該マトリツクス内に保持固定
されてなる材料。 (2) 流体試料中分析物の存在又は量を決定するた
めの結合アツセイにおいて有用な固相アツセイ
装置であつて、繊維の多孔性のマトリツクス及
び0.1〜10ミクロンの平均直径を有する実質的
に球形の複数の固体粒子を有し、該粒子の平均
直径は該マトリツクスの平均的孔の大きさより
小さいものであり、そこでは該粒子はその表面
上で、該試料中の分析物と反応することができ
る物質を有し、粒子が繊維上該マトリツクス内
に保持固定されてなる試料の実質的に平面の層
よりなり、該実質的に平面の層は第１の試料接
触面及び第１の面に対している第２の面を有
し、そしてアツセイの実施に装置が使用されて
いる時、第１の面に接触する試料の少なくとも
一部分が実質的に平面の層を通して第２の面に
送られるように装置中配置されている固相アツ
セイ装置。 (3) 類似の大きさのさらなるマイクロ粒子からな
り、そのさらなるマイクロ粒子はその表面に検
知することのできる標識と反応することのでき
る物質を持つており、それにより検知すること
のできる反応を生起でき、該さらなるマイクロ
粒子は、適当な標識物質を加えた場合分析物の
存在すると否とに関係なく、検知することので
きる反応が“−”符号の形で形成されるような
形態に該マトリツクス中に保持され固定化され
ているものである本項(2)記載の固相アツセイ装
置。 (4) 該分析物と反応することのできる物質をその
表面上に有している該マイクロ粒子は検知しう
る量の分析物及び適当な標識物質を加えた場
合、検知することのできる反応が、“＋”符号
の形で形成されるような形態に該マトリツクス
中に保持され固定化されているものである本項
(3)記載の固相アツセイ装置。 (5) 装置が更に、実質的に平面の層を通る液の少
なくとも一部分が吸収剤手段によつて吸収され
るような、実質的に平面の層の低い方の面との
関係で配置されている吸収剤手段よりなる本項
(2)記載のアツセイ装置。 (6) 装置が更に、実質的に平面の層と吸収剤手段
との間に置かれた障壁層よりなり、障壁層が、
吸収剤手段によつて保持されている液が実質的
に平面の相に戻るのを制限するように適応され
ている本項(5)記載の固相アツセイ装置。 (7) 次の工程よりなる試験試料中分析物の存在又
は量を決定するための結合アツセイ方法であつ
て： ａ 繊維の多孔性マトリツクス及び0.1〜10ミ
クロンの平均直径を有する実質的に球形の複
数の固体粒子よりなり、該粒子の平均直径は
該マトリツクスの平均的孔の大きさより小さ
いものであり、そこでは該粒子はその表面上
で、該試料中の分析物と反応することができ
る物質を有し、粒子が繊維上該マトリツクス
内に保持固定されてなる多孔性マトリツクス
を試料と接触させ、それによつて試料中の分
析物が粒子と結合するようになり、粒子上分
析物コンプレツクスを生成する； ｂ 粒子上コンプレツクスを含有する材料を、
分析物と反応することができる第２の物質で
あつて、これは、分析物及び指示薬の存在下
に検出し得る反応を生じるそれにより、標識
された物質は該粒子上のコンプレツクスに結
合することになることができる物質で標識さ
れているものと接触させる； ｃ 該材料から非結合標識物質を除去する； ｄ 該材料を指示薬物質と接触させる；そして ｅ 試料中分析物の存在又は量の関数として得
られる反応を検出することを特徴とする方
法。 (8) 検出し得る反応が、試料中に検出し得る量の
分析物が存在する時には可視検出可能な
“＋”符号であり、試料中に検出し得る量の
分析物が存在しない時には可視検出可能な
“−”符号である本項(7)記載のアツセイ方法。 (9) 分析物がベータ−hCG、ストレプーＡ抗原、
或いはHBsAgである本項(7)記載のアツセイ方
法。 (10) 粒子がそその表面上試料中の分析物と反応す
ることができる物質を有する本項(7)記載のアツ
セイ方法。 (11) 次の工程よりなる流体中分析物の存在又は量
を決定するのに有用な材料の製法であつて： ａ 約0.1〜約５ミクロンの平均直径を有する、
複数の実質的に球形の固体粒子（粒子は、そ
の表面上に固定されて、分析物と反応するこ
とができる結合性物質を有している）を流体
の試料と共に温置し、それによつて分析物は
この物質に結合されるようになつて粒子上分
析物／結合性物質コンプレツクスを生成す
る；そして ｂ 多孔性繊維質マトリツクスを温置された粒
子と接触させ、該粒子は繊維マトリツクスの
平均的孔の大きさより小さいものでありそれ
によつて粒子の少なくとも一部分は、繊維の
少なくとも一部分上マトリツクス内に保持固
定されるようになるものであることを特徴と
する製法。 (12) 該繊維質マトリツクス中で該分析物／結合性
物質コンプレツクスの存在を検知する工程を含
んでいる本項(11)記載の方法。 (13) 該検知工程が、該マトリツクスをその分析物
と反応することのできる第２の物質と接触せし
め、該第２の物質は検知することのできる反応
を生起せしめることのできる物質でもつて標識
されており、次に該材料からは未結合の標識物
質を除去し、試料中の分析物の存在または量の
関数として生成せしめられた反応を検知するも
のである本項(12)記載の方法。
第１図は、本発明による分析装置の部分断面の
側面図である。第２図は、第１図の装置の上部平
面図である。第３Ａ，３Ｂ及び３Ｃ図は、第１図
の装置の特に好適な実施態様の上部平面図であ
る。第４Ａ，４Ｂ及び４Ｃ図は、第１図の装置の
別の実施態様の上部平面図である。第５図は、第
１図の装置の透視図であり、装置の本体から取り
出されたプレフイルターを示す。
側面図である。第２図は、第１図の装置の上部平
面図である。第３Ａ，３Ｂ及び３Ｃ図は、第１図
の装置の特に好適な実施態様の上部平面図であ
る。第４Ａ，４Ｂ及び４Ｃ図は、第１図の装置の
別の実施態様の上部平面図である。第５図は、第
１図の装置の透視図であり、装置の本体から取り
出されたプレフイルターを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 液体試料中分析物の存在又はその量を決定す
るための特異的結合アツセイに使用する固相アツ
セイ装置において、該装置は反応表面域を有し、
その反応表面域は負の対照域と正の対照域とを有
しており且つ表示シグナルを生成する標識の存在
下に試験結果の有効性を示すための手段を提供
し、そこでは該試験結果が有効であるとは該表示
シグナルを生成する標識が該正の対照域の少なく
とも一部に実質的に結合しており、該表示シグナ
ルを生成する標識が該負の対照域には実質的に存
在しないことを必要とするものであり： さらにその反応表面域は分析物結合域を有して
おり、その分析物結合域は該分析物を特異的に結
合せしめる手段を有し； 該装置において上記三つの領域は (a) 試料及び／又は試薬の一度の適用により各域
がそれと接触せしめられ； (b) 表示シグナルを生成する標識の供与及び該試
料中検知しうる分析物の存在下では、第一の表
示シンボルが形成せしめられていて、有効で正
の試験結果を示し、該第一の表示シンボルの少
なくとも一部は該標識が特異的な結合をなすこ
とによりその分析物結合域中に形成せしめられ
且つ第一の表示シンボルの少なくとも一部は該
標識が特異的な結合をなすことにより該正の対
照域中に形成せしめられるものであり；且つ (c) 表示シグナルを生成する標識の供与及び該試
料中検知しうる分析物の非存在下では、第二の
表示シンボルが形成せしめられていて、有効で
負の試験結果を示し、該第二の表示シンボルは
該第一の表示シンボルから該分析物結合域によ
り形成されて第一の表示シンボルに寄与せしめ
られるところのものを除いたものであることを
特徴とする固相アツセイ装置。 ２ 該正の対照域が、長方形の棒の形で反応表面
域上形成せしめられるものである特許請求の範囲
第１項記載の固相アツセイ装置。 ３ 該分析物結合域が該正の対照域をはさんで反
対側にある二つの長方形の棒の形のものでありそ
して該正の対照域に対して垂直に配向された形で
その反応表面域上に形成せしめられるものであ
り、それにより該分析物結合域は該正の対照域と
一緒になり、“＋”符号の形を形成せしめ且つ該
正の対照域は単独で負の試験結果の生起の場合
“−”符号の形を形成せしめるものである特許請
求の範囲第２項記載の固相アツセイ装置。 ４ 該正の対照域及び該分析物結合域の少なくと
も１つが、該正の対照域及び該分析物結合域のそ
れとは別のものに実質的に隣接した点の形で形成
せしめられるものである特許請求の範囲第１項記
載の固相アツセイ装置。 ５ 該負の対照域が正の対照域及び該分析物結合
域を囲んでいるものである特許請求の範囲第１項
記載の固相アツセイ装置。 ６ 液体試料及びアツセイを実施する際使用され
る試薬を受け入れるための流体チヤンバーを有
し、該流体チヤンバーが少なくとも１つの側壁及
び１つの底壁によつて定められ、該底壁は反応表
面域からなり、単位容量のその液体試料及びアツ
セイで使用される試薬によつて同時に接触せしめ
られるものである特許請求の範囲第１項記載の固
相アツセイ装置。
Applications Claiming Priority (4)
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|---|---|---|---|
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| US831013 | 1986-02-18 | ||
| US784416 | 2004-02-20 |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3355456A Division JPH05180841A (ja) | 1985-10-04 | 1991-11-28 | 固相アッセイ装置 |
| JP3355455A Division JP2514878B2 (ja) | 1985-10-04 | 1991-11-28 | 固相アッセイ装置及びその使用法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
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| JPS62228167A JPS62228167A (ja) | 1987-10-07 |
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ID=27120280
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61234728A Granted JPS62228167A (ja) | 1985-10-04 | 1986-10-03 | 固相分析装置及びその使用法 |
| JP3355456A Pending JPH05180841A (ja) | 1985-10-04 | 1991-11-28 | 固相アッセイ装置 |
| JP3355455A Expired - Fee Related JP2514878B2 (ja) | 1985-10-04 | 1991-11-28 | 固相アッセイ装置及びその使用法 |
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| JP3355456A Pending JPH05180841A (ja) | 1985-10-04 | 1991-11-28 | 固相アッセイ装置 |
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| GR (1) | GR862328B (ja) |
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