JPS63305251A - ラテツクス凝集反応を利用する免疫学的測定方法 - Google Patents

ラテツクス凝集反応を利用する免疫学的測定方法

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JPS63305251A
JPS63305251A JP62141236A JP14123687A JPS63305251A JP S63305251 A JPS63305251 A JP S63305251A JP 62141236 A JP62141236 A JP 62141236A JP 14123687 A JP14123687 A JP 14123687A JP S63305251 A JPS63305251 A JP S63305251A
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thin film
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hole
liquid
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Naoya Okusa
大草　直也
Taira Kaneda
平 金田
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はラテックス凝集を利用する。改良された免疫学
的測定方法に関する。
〔従来の技術及びその問題点〕
従来、病気の診断や感染の有無の判断に抗原抗体反応が
広く利用されている。
しかしながら、抗原抗体反応は、それ自体を直接肉眼的
に観察することができないので。
これを知覚するための種々の工夫がなされ、凝集反応系
、凝集阻止反応系さらに酵素や放射性物質を利用した方
法などが実用化されている。
このうち、凝集反応系、凝集阻止反応系では操作が極め
て簡単であり、かつ高価な機器を必要とせず５判定時間
も短いという長所を有する反面、凝集状態が判定しにく
く、定性的な判定にしか適用されないという短所を有す
る。また、酵素や放射性物質を利用した方法は定量測定
が可能であり、感度面でも鋭敏であるが操作の繁雑さ、
試薬の安定性が悪い、高価な機器を要するなどの短所を
有する。更に、ラテックス凝集を利用して定量する方法
も実用化されており、一つは凝集を比濁計で測定する方
式があり、他の一つは凝集体の大きさを粒度分布測定機
によって測定する方式があるが、いずれも高価な測定機
が必要であり、オフィス検査、緊急検査、在宅検査には
不向な方法である。
すなわち、従来の方法のうち、肉眼で観察する方法は、
（１）判定がしにくい％（２）定性的にしか測定できな
いという欠点があり、機器を利用する方法は、定量測定
に利用し得るが、（１）操作が繁雑である、（２）機器
の価格が高く、どこでも使用するというわけにはいかな
いという欠点があった。
〔問題を解決するための手段〕
本発明者らは、ラテックス凝集反応を利用する免疫学的
測定方法で生成した凝集ラテックスのみを収集し、その
量を測定することができれば、容易に定量的な免疫学的
測定方法をおこなうことができ、上記した欠点が解消し
得るであろうと予想した。
ところで、従来、比較的大きな粒径の溶質分子をＱＯ５
〜２μｍ程度の小分子溶質から分離し、捕捉する操作と
して知られている一般的手段は膜濾過法であり１通常こ
の膜は、その構造が網目状であり、その厚さは１００〜
１５０μｍの範囲であった。そして、この膜−過去を現
実にラテックス凝集粒子に適用すると、膜孔がアミ目状
であり、かつ膜が厚いために透過したい非凝集ラテック
スは膜上に留まり、凝集ラテックスとの分離はほとんど
不可能であった。また１分離されたラテックス凝集粒子
もそのままではその量を測定することが難しいという欠
点もあった。
斯る実状において、本発明者らは更に研究をおこなった
結果、ラテックスとして着色ラテックス粒子を用い、膜
濾過に用いる膜として直孔を有する薄膜を用いれば凝集
ラテックスのみを有利に分離することができ、その量の
測定も容易であることを見出し１本発明を完成した。
すなわち１本発明は、ラテックス凝集反応を利用する免
疫学的測定方法において、ラテックスとして着色ラテッ
クスを用い、免疫反応により生成した着色ラテックス凝
集粒子を、直孔を有する薄膜で捕捉し、この量を測定す
ることを特徴とする免疫学的測定方法である。
本発明方法において用いる着色ラテックスは、市販のも
のを利用することができ、例えばエスタ？−ル（ローヌ
プーラン社（７ランス）製）等を採用することができる
。これら着色ラテックスは、膜上に捕捉されたとき肉眼
で明瞭に確認できる程度の色相を有していれば良い。そ
して、このラテックスは１球形で、しかも粒径が小さい
ことが好ましい。具体的な粒径としては、免疫反応の感
度、表面エネルギー増大洗よる凝集等をも考慮して０１
〜１．０μｍ程度とすることが望ましい。
また、本発明で用いる薄膜は、従来の膜よりかなり薄い
ものであり、好ましくは５〜１０μｍの厚さのものであ
り１例としては、ニュクリ？アコー？レーション社（米
国）カらニュクリーア・メングレンの商品名で市販ス凝
集粒子の粒径から定まる。すなわち、直孔の径はラテッ
クス粒子が通過し、ラテックス凝集粒子が通過しない大
きさであることが必要であり、一般には直径は０４〜４
．０μｍであることが好ましい。薄膜の材質としては、
例えば？リカーゲネートのようなプラスチック、セラミ
ックス、金属等が用いられる。また、薄膜の濾過面は被
検物の濃度によって決められるべきものであるが、一般
には５〜８ｍｍ径の円型濾過面とすることが好ましい。
本発明方法におけるラテックス凝集反応は、ラテックス
として着色ラテックスを用いる以外は公知のラテックス
凝集反応と同一であり、検出すべき抗原あるいは抗体（
被検物質）を含む、尿、血清、だ液等を検体とし、被検
物質に対する抗体あるいは抗原を含むラテックス試薬を
利用することにより、実施される。
このラテックス凝集反応により生成したラテックス凝集
粒子を膜ｒ遇するには、濾過流量の大きい一過板あるい
はガラス繊維ｒ紙に直孔を有する薄膜を密着させ、表面
張力によってＰ遇する方法あるいはｆ過ホルダーに該薄
膜を固定し、これに注射筒と針を接続して機械的圧力に
よりｒ遇する方法等の公知のどの方法でもよい。
なお、薄膜上の着色ラテックス凝集粒子はその色相を肉
眼で定性的に観察することもできるが、単色光による反
射率を測定することにより定量も可能である。
〔発明の効果〕
本発明になる免疫学的測定方法は、測定対象として抗原
、抗体いづれＫも、また、反応型式として競合反応（固
相法）、非競合反応（サンドウィッチ法）のいづれＫも
適用できるＯ そして、この方法は、次に示すような特長を有するもの
である。
（１）測色対象となる着色ラテックス結合体の色相は肉
眼で明瞭であり、かつ安定である。
（２）結合相−遊離相分離操作が容易である。そしてこ
の場合、高価な測定機を必要とせず。
単色光照射による反射率測定機により分析可能である。
（３）所要操作時間が極めて短かい。
（４）反射率測定により微量測定が可能である。
（５）肉眼的に判定した場合に比較して客観的な判定が
できかつ感度は上昇する。
以上のように本発明は従来の免疫学的測定法の短所を補
い、かつ検出限界についても従来法より明らかに低く、
検査薬として有用性が大きいものである。
〔実施例〕
次に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明する。
実施例１ （１）膜ｆ適用器具及び試験片 第１図に示す試験片を、第３図に示すように吸着槽３に
取り付は使用した。この試験片は、担体１の片側末端に
径約６ｍｍのチー、Ｑ−をすした孔を開け、その孔の下
に径１３　ｍｍのポリカーｌネート製丸型薄膜（最大孔
径０８μｍの円筒状直孔を持つ膜、厚さ１０μｍ、孔密
度３ＸＩＯ’個／ｃｍ”、ニュクリボアコー？レーショ
ン製）１−接着、固定したものである。この接着は、両
面粘着テープ（バイエルスドルフ社製「テサパンド」）
を用いておこなったっ 吸着槽３中には、濾過流量の大きいｆ過板として東洋Ｆ
紙ｍ　１０３４−３　Ａ　（又はガラス繊維ｊ’ＪｉＧ
Ａ−２００でも良い）が充填されており、これと薄膜２
とを密着させて膜濾過をおこなった。
（２）　　赤色ラテックス抗ｈｅＧ−αモノクローナル
抗体懸濁液（ｈｅＧ−α検出試薬）の製法予め４℃に冷
却した１％赤色ラテックス（粒子径Ｑ２３μｍ）懸濁液
１ｄに１００μｆ　／　ｍｌ　抗ｈｃＧ−αモノクロー
ナル抗体３６ｍｌを素早く混和後、４゛Ｃで２時間放置
する。
つぎにその混和液を攪拌させながらアルブミン含有トリ
ス緩衝液４．６　ｄを加え、４℃、２時間放置後遠心洗
浄を行なう。これに再びアルブミン含有トリス緩衝液４
６ｄを加えて再懸濁を行ない、引き続き遠心洗浄を行な
う。
続いて食塩−アルブミン含有トリス緩衝液４、６　ｄを
加えて再懸濁を行ない、これを−３７℃で２時間放置す
る。遠心洗浄した後、再び前記食塩−アルブミン含有ト
リス緩衝液ａ３ｄを加えて再懸濁を行ない、赤色ラテッ
クス抗ｈｅＧ−αモノクローナル抗体懸濁液を調製した
。
（３）赤色ラテックス抗ｈｃＧ−βモノクローナル抗体
懸濁液（ｈｃＧ−β／検出試薬）の製法予め４℃に冷却
した１％赤色ラテックス（粒径Ｑ２３μｍ）Ｗ！Ａ濁液
ＩＭ１４ｃ２００μｔ／ｄ抗ｈｅＧ−βモノクローナル
抗体３６ｍを素早く混和後４℃で２時間放置する。つぎ
からの操作は（２）と同様に行ない、最後に食塩−アル
ブミン含有トリス緩衝液８３ｍを加えて再懸濁を行ない
、赤色ラテックス抗ｈｃＧ−βモノクローナル抗体懸濁
液を調製した０ （４）　　測定方法 前記（１）で示した試験片を、濾過板としてガラス繊維
１紙ＧＡ−２００（東洋ｆ紙■製）を装着した吸着槽に
取り付ける。
前記（２）及び（３）で得たｈｅＧ−α及びｈｃＧ−β
検出試薬各４０μｔづつを取り、これをｈｅＧ抗原を含
む被検尿４０／Ｊｔに加え混和した。
３分間揺動後、この混合液を薄膜上に注入する。つづい
てアルブミン含有トリス緩衝液６００μｔを圧加する。
液が薄膜を通過後。
試験片を吸着槽から抜き取り、単色光５４０ｎｒｎ　ｋ
薄膜に照射し反射率を測定する。ｈｃＧ抗原濃度と反射
率の関係は表１および第５図に示す通りであり、これよ
りｈｅＧ抗原濃度を測定した。
（５）結果 ｈｅＧ（Ｊ１度と５４０　ｎｍでの反射率の関係は表１
の通りである。この結果から作成した検量線は第５図に
示す通りであり、本発明方法が定量法として使用できる
ことが明らかとなった。
以下余白 表　　１ 実施例２ 薄膜によるｒ過失の妥当性について吟味した。濾過前後
の平均粒径を粒度測定機により測定し、薄膜による分離
を確認した。表２に示すように抗原であるｈｅＧを含ま
ない系での濾過前後の粒径はほぼ等しいが、　　ｈｅＧ
を含む凝集系での濾過前後の粒径は明らかな差が認めら
れ、大きな粒子は膜上に捕捉されていることが確認され
た。なお、本実験において。
試験片並びにｈｅＧ−α及びｈｅＧ−β検出試薬は実施
例１と同じものを用い、これら試薬は、４０μｔの割合
でそれぞれ添加した。また。
膜−過は、ホルダーに注射筒、針を装着し、圧力による
Ｐｉでおこなった。
表　　２ 実施例３ 本発明方法とスライド法について、肉眼によるラテック
ス凝集の検出限界を比較した。
本発明方法としては、実施例１に示す方法、及び試薬（
それぞれ４０μｔで用いた）を用いてラテックス凝集粒
子を作成、収集した。
この結果を表３に示す。
本スライド法：凝集状態をスライド板上で観察する方法 表　　３ この結果から明らかなように、本発明方法は定性分析法
としても従来法より感度の高い優れたものである。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明方法で用いる試験片の一例を示す斜視図
であり、第２図は、その中央部縦断面図である。 第３図は、試験片を吸着槽に取シ付けた状態を示す斜視
図であり％第４図は、その中央部縦断面図である。 第５図は、本発明方法で得られる、ｈｃＧ濃度と５４０
ｎｍでの反射率の関係を示す図面である。 以上 第１図 第２図 第３図 第４圀 第５図 ｈＣＧ（”／ｍｅ） 寺許庁長官小用邦夫殿 １、事件の表示 昭和６２年特許願第１４１２３６号 ２、発明の名称 ラテックス凝集反応を利用する免疫学的測定方法３、補
正をする者 事件との関係　　　出願人 名称　第一化学薬品株式会社 ４、代理人 住所　東京都中央区日本橋人形町１丁目３番６号（〒１
０３）６、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」および［図面の簡単な説
明］の欄、並びに図面 ７、補正の内容 （］）明細書第１１頁、第１０行 「を付した孔を開け、］とあるを、 「を付した周縁部５を有する孔６を開け、」と訂正する
。 （２）同第１ｆ頁、第１θ行 「その孔の下に」とあるを、 「その１■体１の片面の前記孔６に対応する位置に」と
訂正する。 （３）同第１１頁、第１１行 「丸環薄膜」とあるを、 「丸環薄膜２」と訂正する。 （４）同第１１頁、第１５行 「枯骨テープ」とあるを、 「粘着テープ７」と訂正する。 （５）同第１２頁、第３行 Ｆ５濾過板」とあるを、 「：、濾過板４」と訂正する。 （６）同第１９頁、第６行 「その中央部」とあるを、 「第１図の矢印■−■方向に見た」と訂正する。 （７）同第１９頁、第９行〜第１０行 「その中央部」とあるを、 ［第３図の矢印ｒＶ−ＩＶ方向に見た」と訂正する。 （８）第１図〜第５図を別紙の通り訂正下る。 第１図 第３図 第４図 第５図 ＦＩＣＧ　（”／ｍｌ　）

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、ラテックス凝集反応を利用する免疫学的測定方法に
    おいて、ラテックスとして着色ラテックスを用い、免疫
    反応により生成した着色ラテックス凝集粒子を、直孔を
    有する薄膜で捕捉し、この量を測定することを特徴とす
    る免疫学的測定方法。 ２、薄膜の直孔の直径が０．４〜４．０μｍである特許
    請求の範囲第１項記載の免疫学的測定方法。
JP62141236A 1987-06-05 1987-06-05 ラテツクス凝集反応を利用する免疫学的測定方法 Pending JPS63305251A (ja)

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