KR20170005008A - 불완전 항체를 이용하여 혈액형 항원를 검출하기 위한 기기 및 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 액체 시료내의 세포 결합 분석물질을 확인하기 위한 기기로서, 적어도 하나의 지시 영역을 갖는 분리 매트릭스를 포함하는 기기에 관한 것이다. 본 발명은 상기 지시 영역이 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체 또는 이의 단편 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항체인 것을 특징으로 한다. 상기 분리 매트릭스는 측방 유동 분석 기기의 막의 형태 또는 겔 매트릭스 형태로 디자인되는 것이 바람직하다. 특히 바람직하게는, 상기 기기는 액체 시료를 도입하기 위한 작업 영역(5)을 갖는 막(2), 상기 세포 결합 분석물질과 상호작용할 수 있는 적어도 하나의 지시 영역, 및 상기 지시 영역을 통과한 후의 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역(3)을 포함한다. 상기 지시 영역은 상기 작업 영역(5)과 흡수 영역(3)의 사이에 놓인다. 본 발명은 상기 지시 영역이 상기 세포 결합 분석물질에 대한 항체 또는 이의 단편 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항체인 것을 특징으로 한다.
Description
본 발명은 불완전 항체를 이용하여 혈액형 항원들을 확인, 특히 혈액형 항원들을 동시에 확인하기 위한 기기 및 방법에 관한 것이다.
혈액형의 혈청 테스트 진단에서는, 수혈 또는 신생아의 용혈성 질환과 관련하여 특히 중요하게 되는 파라미터들이 일반적으로 검출된다. 이는 혈액형의 특징이 되는 적혈구 표면상의 항원을 검출하는 것을 특히 포함한다. 또한, 수혈 및/또는 이식에서 마찬가지로 역할을 하는 혈소판, 과립구 및 임파구 상에서도 더욱 중요한 항원 군들이 확인된다.
혈액형 항원을 확인하기 위하여, 검사하고자 하는 사람(공여자 또는 수여자)의 적혈구가, 혈액형 특이적 항체를 함유하는 시약과 접촉된다는 것이 알려져 있다. 그 검사는 대개 액상 검사인데, 적혈구 함유 시료를 특정 혈액형에 대한 항체를 함유하는 시료와 혼합하여 테스트 배치(test batch)가 제조된다. 다음에, 그 테스트 배치는 정해진 시간 동안 정해진 조건하에서 정치(incubation)되고, 그 정치의 완료 시 또는 원심분리 단계 바로 이후, 그 배치가 육안으로 검사되거나 또는 적혈구의 가능한 응집 또는 흡수를 위한 광학적 방법을 통해 검사된다. 혈액형 혈청 테스트(blood group serology)에서의 일반적인 종말점(end-point) 측정법은 계속하여 혈구응집법(haemagglutination)이다. 직접적인 응집 항체는 혈액형 혈청 테스트에서는 완전 항체라고도 나타낸다. 유사하게, 적혈구를 직접 응집시킬 수 없는 항체들은 혈액형 혈청 테스트에서는 불완전 항체라고 나타낸다.
측방 유동 검사법(속성검사법; lateral flow test format)을 이용하여 혈액형 항원들을 동시에 확인하는 것이 WO 2005/005991호로부터 알려져 있다. WO 2005/005991호의 실시예들은, 완전 항체이고 직접적으로 혈구응집시키는 IgM 항체를 이용하여 혈액형 항원들을 확인하는 것을 개시하고 있다. 그러나, 상기 WO의 명세서는 측방 유동 검사법을 통해 불완전 항체를 이용하여 혈액형 항원들을 확인하는 것을 개시하고 있지 않다.
오늘날, 측방 유동 검사법은 감염 마커를 확인하기 위한 신속 검사법(예를 들어, 임신 검사법) 또는 약물 선별법(drug screen)으로서 널리 이용되고 있다. 측방 유동 검사 기기는 검사하고자 하는 시료의 작업 영역(work zone)이 도포되는 고체 담체와, 결합 성분(예를 들어, 포획 항체 또는 항원)이 결합되고 결합 반응이 검출될 수 있는 분리 막과, 검사하고자 하는 시료가 분리막을 통해 유동할 수 있도록 하는 흡수제 흡수 영역으로 구성된다.
통상적인 측방 유동 검사법의 검사막(test membrane)은 크로마토그래피와 같은 분리법을 이용하는 것으로 일반적으로 기재되어 있다. 시료 내의 분석물질은 막 내의 결합 성분(binding element)에 특이적으로 결합하는데, 상기 결합 성분은 수평 또는 수직으로 위치한 밴드에서 지시 영역(indicator zone)으로 배치된다. 결합 복합체(binding complex)는 결합체 방출 패드(conjugate release pad)에서 건조 형태로 기기내에 일반적으로 이미 존재하는 지시 입자(indicator particles)를 통해 눈에 보일 수 있게 된다. 결합체 방출 영역은 작업 영역과 막의 사이에 배치되는 것이 일반적이다. 미리 코팅된 지시 입자에는 예를 들어, 원하는 분석물질에 대한 항체가 코팅된다.
오늘날 환자 또는 공여자에 대한 예비 수혈 검사시에 정규적으로 분류되어야 하는 가장 중요한 혈액형 특징으로는 하기의 것들이 있다: A, B, D, C, E, c, e, Cw, K, k, Jka, Jkb, Fya, Fyb, M, N, S, s, P1, Lea, Leb, Kpa, Kpb, Lua, Lub. 검사하고자 하는 항원 또는 항원 에피토프로는 예를 들어 하기의 것들이 있다: ABO 혈액형 군의 것들, Rh, Kell, Lewis-Hh, Duffy-Kidd, MNS, Lutheran 및 P 군의 것들, 혈액형 군들인 Diego, Yt, Scianna, Dombrock, Colton, Chido/Rodgers, Gerbich, Cromer, Knops, Landsteiner-Wiener, Xg, Kx, Indian, Ok, Raph, John Milton Hagen, Langereis, Sid, FORS, JR 및/또는 LAN의 것들, 특히, A1, A2, AB, B, D, C, c, E, e, Cw, K, k, M, N, S, s, Jka, Jkb, Fya, Fyb, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb, Lea, Leb, Lua, Lub, P1, I, H, Xga, U, Vw, Wra, Lan, Vel, Dia 및/또는 Mia.
그의 음성 순표면 전하(negative net surface charge) 및 이에 의한 제타 전위(zeta potential) 때문에, 적혈구들은 그들 세포 사이에서 약 300 옹스트롬의 자연 통계학적 최소 거리를 갖는다. 그 최소 거리에는 당연히 IgG 부류의 항체가 아니라 그 분자 크기 때문에 생리학적 매질(physiological medium) 내의 IgM 류의 항체가 놓여질 수 있다. 이는 일반적으로, IgM 류의 항체만이 혈구응집에 의한 직접 종말점 측정(direct end-point measurement)을 위해 혈액형 혈청 테스트에서 이용될 수 있다는 것을 의미한다. 직접 응집 항체는 혈액형 혈청 테스트에서 완전 항체라고 나타낸다(대부분의 IgM 항체는 완전 항체이다).
오늘날의 종래 기술에 따르면, 일반적으로 혈액형은 직접 혈구응집을 통한 IgG에 의해서는 검출될 수 없다. 유사하게, 적혈구를 직접적으로 응집시킬 수 없는 항체들은 혈액형 혈청 테스트에서 불완전 항체라고 나타낸다(대부분의 IgG 항체는 불완전 항체이다).
따라서, (단일 클론; monoclonal) IgM들 또는, 다른 한편으로 단일 클론 IgG들 또는 다클론 항체들(polyclonal antibodies)이 이 특정의 혈액형 특성의 검출을 위해 이용될 수 있는 지의 여부에 따라 이른바 상이한 상들(phases) 및 반응 시간들 및 온도들을 이용하여 처리하는 것이 필수적이게 되어, 조화되거나 일치하는 처리 과정들이 더욱 어렵게 된다.
IgM 항체들이 이용가능한 경우, 추가의 항체 또는 증감제(intensifier) 또는 단백질분해효소를 혼합하지 않고 또 정치(즉각적인 회전)하지 않고, 종말점으로서 혈구응집을 이용한 직접 확인이 종종 가능하게 된다. 널리 사용되는 겔 기법의 경우, 이러한 검사법의 성능을 위해 정치(incubation)가 필수적인 것은 아닌데, 검사하고자 하는 적혈구 및 항체 시약을 포함하는 반응 혼합물은 겔 카드(gel card)의 작업 영역 내로 피페팅되어야 하고, 중성의 생리학적 매질, 즉, 항체를 함유하지 않는 생리학적 매질(예를 들어, Diagnostic Grifols사의 DG Gel Neutral Card)에서 9 내지 10 분간 원심분리되어야 한다. 동일한 기법의 또 다른 변형예에서는, IgM류의 혈액형 특이적 항체들이 겔 매트릭스내로 미리 도입된다. 다음에, 검사하고자 하는 적혈구는 겔 카드(Diagnostic Grifols사의 DG Gel ABO RH (2D))의 작업 영역내로 간단히 피페팅되어야 한다.
특정 혈액형 특징을 확인하기 위해 이용가능한 항체가 IgM류에 속하지 않는 경우, 혈구응집이 종말점으로 가능하도록 하기 위하여 기법/상(phase) 변화가 요구된다. 이에는 예를 들어, 상업적으로 입수가능한 IgM 항체들이 현재의 종래 기술에 따라 이용될 수 없는 상기 언급한 특징들 중 하기의 것들이 해당한다: k, Fya, Kpa, Kpb 및 Lua. 하기의 추가의 특징들이 마찬가지로 관심을 받고 있다: Dia, Jsa, Jsb, Coa, Cob, Wra, Xga. 상업적인 단일 클론 IgM 항체는 이러한 항원들 중 어느 것에 대하여도 이용될 수 없다.
일반적으로, IgG 항체들은 자연적인 반발로 인해 두 개의 적혈구 사이에 존재하는 거리를 극복할 수 없기 때문에, 항원 특이적 IgG 항체와의 반응은, 간단한 육안 진단 검출에 필요한 혈구응집의 시각적인 종말점이 없이, 특정 항원에 대하여 양성인 세포의 감작(sensitisation) (즉, 혈구응집이 아니라 항체 결합이므로 진단 종말점이 없음)만을 달성할 수 있다. 예를 들어, 혈액형 특징인 Duffy a (Fya)를 가지는 적혈구가 IgG류의 항(anti)-Fya 항체와 함께 정치(incubation)되는 경우, 항체-항원 반응(감작)이 일어나지만, 이는 혈구응집의 가시적 종말점(visible end point)을 유도하지 않는다. 이를 달성하기 위하여, 그 감작된 세포는, IgG 항체로 감작된 세포가 가교될 수 있도록 하고 혈구응집의 종말점이 생성될 수 있도록 도움을 주는 부류 특이적 항체(이 경우 항-IgG)와 함께 추가로 정치되어야 한다(간접적 Coombs 검사). 이러한 목적을 위해 널리 사용되는 겔 기법은 이러한 검사법의 경우 37 ℃에서 10 내지 15분의 정치 시간 및 이후에 항-인간 글로블린(anti-human globulin) 또는 Coombs 카드(예를 들어, Diagnostic Grifols사의 DG Gel Coombs Card)에서 9 내지 10분간의 원심 분리를 필요로 한다.
마찬가지로 널리 이용되고 있는 튜브 기법에 있어서는, 약 20 초 동안의 원심 분리 이전의 정치는 즉각적인 회전(immediate spin)의 경우에는 필요하지 않다. 간접적인 Coombs 검사법의 경우, 우선 37 ℃에서 15 내지 60분간 혈액형 특이적 불완전 항체와의 정치가 수행된 다음, 다수의 세척 단계들이 요구되고, 그 다음 항-인간 글로불린 시약이 첨가된 다음 원심분리가 20초간 수행된다.
따라서, 표준화된 IgM 항체, 특히 상업적으로 입수가능한 IgM 항체가 이용될 수 없는 세포 결합 분석물질(cell-bound analyte), 특히 혈액형 항원을 확인하기 위한 기기 및 방법이 필요하다. 또한, 중래 기술에서 두 분석물질들의 확인이 상(phase) 또는 기법 변화를 필요로 하도록, 상업적으로 입수가능한 항체와 같은 표준화된 IgM 항체가 두개의 세포 결합 분석물질들 중 하나에만 이용가능한 것으로 기기 및 방법으로서, 적어도 두 개의 세포 결합 분석물질들을 동시에 확인하기 위한 기기 및 방법이 필요하다.
본 발명의 제 1 측면에 따라, 액체 시료 내의 세포 결합 분석물질을 확인하기 위한 기기로서, 적어도 하나의 지시 영역을 갖는 분리 매트릭스(separating matrix)를 포함하는 기기에 있어서, 상기 지시 영역은 상기 세포 결합 분석물질(cell-bound analyte)에 대한 제 1 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분(bindign element)을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항체인 것을 특징으로 하는 기기가 제공된다.
바람직한 실시예에 따라, 상기 기기는 액체 시료의 도입을 위한 작업 영역(5)을 갖는 막(2), 세포 결합 분석물질과 상호작용할 수 있는 적어도 하나의 지시 영역, 및 상기 지시 영역을 통과한 후의 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역(3)을 포함하고, 상기 지시 영역은 작업 영역(5)과 적어도 하나의 흡수 영역(3)의 사이에 놓이고, 상기 지시 영역은 상기 세포 결합 분석물질에 대한 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항체인 것을 특징으로 한다.
추가의 바람직한 실시예에 따라, 상기 기기는 겔 물질이 채워진 튜브들을 포함한다. 적혈구의 응집 반응을 확인하기 위해 겔 기법이 이용된다. 겔 칼럼은 응집되지 않은 적혈구를 기준으로 한 응집 적혈구의 이동을 지연 또는 중지시켜서 분리를 달성하는 필터로서 작용한다. 본 발명에 따라, 상기 겔의 지시 영역은 상기 세포 결합 분석물질에 대한 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항체이다.
본 발명의 제 2 측면에 따라, 액체 시료 내의 제 1 및 제 2 세포 결합 분석물질을 동시에 확인하기 위한 기기로서, 액체 시료의 도입을 위한 작업 영역(5)을 갖는 막(2), 상기 세포 결합 분석물질과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 지시 영역, 및 상기 지시 영역을 통과한 후의 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역(3)을 포함하고, 상기 지시 영역이 상기 작업 영역(5)과 적어도 하나의 흡수 영역(3) 사이에 놓여져 있는 기기에 있어서, (i) 상기 제 1 지시 영역이 상기 제 1 세포 결합 분석물질에 대한 불완전 항체인 제 1 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 포함하고, (ii) 상기 제 2 지시 영역이 (a) 상기 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 완전 항체인 제 1 항체를 포함하거나, (b) 상기 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 불완전 항체인 제 1 항체, 및 그 항체에 대한 결합 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 기기가 제공된다.
놀랍게도, 본 발명의 발명자들은 지시 영역에 제 1 불완전 항체 및 상기 제 1 항체에 대한 제 2 항체를 일제히 도입함으로써, 상기 제 1 항체로서 불완전 항체를 이용하여 세포 결합 분석물질을 확인하는 것이 가능하도록, 바람직하게는 측방 유동 검사 기기의 막의 형태 또는 겔 매트릭스 형태의 분리 매트릭스를 갖는 기기를 구성하는 것이 가능하다는 것을 확인했다. 그 결과, 측방 유동 검시 기기와 같은 분리 매트릭스를 이용하여, IgM 타입의 상업적으로 입수가능한 항체와 같은 표준화된 항체가 이용될 수 없는 세포 결합 분석물질을 확인하는 것이 최초로 가능하게 된다. 그 결과, 추가의 정치 단계를 필요로 하는 간접 Coombs 검사법을 통해서만 예전에 일반적으로 확인될 수 있었던 그러한 분석물질들을 확인하는데 필요한 시간이 상당히 단축된다. 또한, 예를 들어 항-IgG 분자를 제 2 항체로 이용하는 경우, 이들 분자는 전혈에서 고농도로 존재하는 분석물질 비특이적 IgG 분자에 의해 중화된 것으로 판단하였기 때문에, 본 발명에 따른 과정은 당업자에게 놀라운 것이다.
따라서, 종래 기술에서는, 기법 또는 상 변화를 필요로 하지 않고 두 개의 혈액형 항원을 동시에(즉, 단일 측방 유동 기기에서 또는 복수의 파라미터를 측정하기 위한 복수의 겔 튜브를 갖는 단일 켈 카드에서) 확인하는 것이 불가능하였는데, 제 1 항원은 IgG 항체에 의해 확인되고, 제 2 항원은 IgM 항체에 의해 확인된다. 따라서, 본 발명은 상이한 매질들 및 상이한 정치들이 없이 단일의 균등한 방법만을 필요로 하는 단일 측방 유동 기기를 이용하여 동시에 확인하는 이점을 제공한다.
본 발명의 제 3 측면에 따르면, 상기 기기를 제조하기 위한 방법으로서, 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 제 2 항체 또는 이의 단편을 도입하는 것을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항체인, 방법이 제공된다.
본 발명의 제 4 측면에 따르면, 적어도 하나의 세포 결합 분석물질을 확인하기 위한 방법으로서, 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 지시 영역에 도입하는 것을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항체인, 방법이 제공된다.
본 발명의 제5 측면에 따르면, 혈액을 분석, 특히 혈액형 항원 또는 항원 에피토프를 확인하기 위한 본 발명에 따른 기기의 용도가 제공된다.
도 1은 혈액형 항원들을 동시에 확인하기 위한 측방 유동 검사를 위한 본 발명의 일 실시예에 따른 기기의 사시도,
도 2는 혈액형 항원인 Jka, Jkb, Fya, Fyb, S, s, k 및 P1을 동시에 확인하는 것을 도시한 도면,
도 3a는 사용된 분배 방법을 도시한 도면, 도 3b 내지 도 3e는 상이한 공여자들의 시료들을 이용하여 얻은 실험 결과를 도시한 도면이다.
도 2는 혈액형 항원인 Jka, Jkb, Fya, Fyb, S, s, k 및 P1을 동시에 확인하는 것을 도시한 도면,
도 3a는 사용된 분배 방법을 도시한 도면, 도 3b 내지 도 3e는 상이한 공여자들의 시료들을 이용하여 얻은 실험 결과를 도시한 도면이다.
정의
본 발명에 있어서, 하기의 표현들은 아래에 주어진 의미를 갖는다.
표현 "완전 항체(complete antibody)"는 생리학적 식염 매질에서 적혈구의 응집을 유도하는 항체를 의미한다. 완전 항체로는 IgM 항체 또는 이의 단편이 있는데, 그 단편은 여전히 응집할 수 있는 것이다. 상기 IgM 항체는 단일 클론성 또는 다클론성이다.
표현 "불완전 항체(incomplete antibody)"는 적혈구와 함께 정치시 그 적혈구의 응집을 유도하지 않는 항체를 의미한다. 불완전 항체로는 IgG 항체, IgA 항체, IgD 항체, IgE 항체 및 이들의 아류(subclass) 또는 항체 단편이 있는데, 상기 단편은 완전 항체에 대한 제 2 항체를 여전히 결합할 수 있는 것이다. 이러한 항체는 단일 클론성 또는 다클론성일 수 있다. 여러가지 부류의 항체를 제조하는 방법이 당업자에게 알려져 있다.
표현 "세포 결합 분석물질(cell-bound analyte)"은 세포, 바람직하게는 인간 세포, 특히 적혈구의 표면에 자연적으로 결합되는 임의의 분자를 의미한다. 이의 예로는 수용체 또는 혈액형 항원이 있는데, 혈액형 항원이 바람직하다.
표현 "혈액형 항원(blood group antigen)"은 ABO 혈액형 군의 항원, Rh, Kell, Lewis-Hh, Duffy-Kidd, MNS, Lutheran 및 P 군의 항원, 혈액형 군인 Diego, Yt, Scianna, Dombrock, Colton, Chido/Rogers, Gerbich, Cromer, Knops, Landsteiner-Wiener, Xg, Kx, Indian, Ok, Raph, John Milton Hagen, Langereis, Sid, FORS, JR 및/또는 LAN의 항원, 특히 A1, A2, AB, B, D, C, c, E, e, Cw, K, k, M, N, S, s, Jka, Jkb, Fya, Fyb, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb, Lea, Leb, Lua, Lub, P1, I, H, Xga, U, Vw, Wra, Lan, Vel, Dia 및/또는 Mia를 포함한다.
측방 유동 기기의 제조
측방 유동 기기(lateral flow device)를 제조하는데 원칙적으로 적당한 방법이 DE 10330982 A1호 및 WO 2005/005986호에 기재되어 있지만, 아래에 나타낸 바와 같이 변경된다. DE 10330982 A1호 및 WO 2005/005986호의 개시내용은 본원에 참조로 삽입된다.
본 발명에 따른 기기를 제조하는 방법은
세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 지시 영역에 도입하는 것을 포함하고, 상기 제 1 항체는 불안전 항체이다.
상기 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분은 함께 또는 서로 개별적으로 지시 영역의 막에 도입될 수 있다. 이들 항체가 서로 개별적으로 도입되는 경우, 제 1 항체의 도입 후 및 결합 성분의 도입 전에 건조 단계가 일어나는 것이 바람직하다. 상기 제 1 항체의 농도는 경험적으로 결정되고 세포 결합 분석물질에 대한 친화성에 의존한다. 상기 결합 성분의 농도는 제 1 항체의 농도 및 이의 특성에 기반하여 일련의 실험을 통해 최적화될 수 있다.
확인하고자 하는 분석물질은 혈액형 항원인 것이 바람직하다. 상기 제 1 항체는 혈액형 항원인 A, B, AB, D, C, E, c, e, Cw, K, k, Jka, Jkb, Fya, Fyb, M, N, S, s, P1, Kpa, Kpb, Lua, Lub, Lea, Leb, Mia, Dia, Jsa, Jsb, Coa, Cob, Wra 및 Xga, 특히 k, S, Fya, Kpa, Kpb, Lua, Lea, Leb, Mia, Lua, Lub, Dia, Jsa, Jsb, Coa, Cob, Wra 및 Xga로부터 선택된 세포 결합 분석물질에 대한 항체인 것이 특히 바람직하다. 이 경우 제 1 항체는 불완전 항체, 바람직하게는 IgG 또는 IgA 항체, 특히 바람직하게는 IgG 항체이다. 예를 들어, 하기의 항체들이 사용될 수 있다: 항-Fya: 클론 P3TIM (Merck Millipore사, VL); 항-S: 클론 P3S13JS123 (Diagast사, ref. 78007); 항-k: 클론 P3A118OL67 (Merck Millipore사, FA); 및 항-D: 클론 ESD-1 (Alba Bioscience사).
바람직하게, 상기 결합 성분은 상기 제 1 항체에 대한 항체 또는 이의 단편, 및 렉틴 또는 이의 단편으로부터 선택된다. 상기 제 1 항체에 대한 항체는 항-IgG 항체인 것이 특히 바람직하다. 항-IgG 항체는 상업적으로 입수가능하고, 특히 바람직한 것으로는 클론 MS-278 (Merck Millipore사) 및 다클론 항체로서 예를 들어 모노-타입 또는 항-IgG 항-인간 글로불린(Medion Grifols Diagnostics사)이 있다. 상기 제 1 항체가 IgA 항체인 경우, 제 2 항체는 항-IgA 항체이다. 항-IgA 항체는 상업적으로 입수가능하다. 항-IgG 또는 항-IgA 항체는 IgM 또는 IgG 타입일 수 있는데, IgM류의 단일 클론 항-IgG가 바람직하다. 바람직한 렉틴은 단백질 A 및 단백질 G 이다.
본 발명의 제 2 측면에 따라 제 1 및 제 2 세포 결합 분석물질을 동시에 확인하기 위한 기기가 제조되는 경우, (i) 제 1 지시 영역은 제 1 세포 결합 분석물질에 대한 불완전 항체인 제 1 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 포함하고, (ii) 제 2 지시 영역은 (a) 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 완전 항체인 제 1 항체, 또는 (b) 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 불완전 항체인 제 1 항체, 및 그 항체에 대한 결합 성분을 포함한다.
제 1 세포 결합 분석물질은 혈액형 항원인 k, Fya, Kpa, Kpb, Lua, Lub, Mia, Dia, Jsa, Jsb, Coa, Cob, Wra, Xga 및 S로부터 선택되는 것이 바람직하고, 제 2 세포 결합 분석물질은 A, B, AB, C, D, E, c, e, Cw, K, Lea, Leb, Jka, Jkb, Fyb, P1 및 s로부터 선택되는 것이 바람직하다.
상기 택일적인 (a)에 따른 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체는 혈구응집을 직접적으로 유도하는 완전 항체, 특히 IgM 항체이다. 상기 택일적인 (b)에 따른 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체는 불완전 항체이고, 바람직하게는 상기 택일적인 (b)에 따른 제 1 항체는 IgG 또는 IgA 항체이다. 상기 택일적인 (b)에 따른 제 1 항체에 대한 결합 성분은 혈구응집에 의한 확인을 가능하게 한다. 상기 결합 성분은 IgG 또는 IgM 항체이다. 택일적으로, 단백질 A 또는 단백질 G와 같은 렉틴이 사용될 수도 있다.
본 발명에 따른 기기의 막은 다공성 막이다. 바람직한 막의 예로는 니트로셀룰로오스(예를 들어, Sartorius사의 UniSart, Millipore사의 HiFlow, Whatman Schleicher & Schuell사의 Whatman, AE99 또는 FF85/100), 폴리에틸렌(Porex Corporation사의 Lateral Flo) 또는 나일론(CUNO사의 Novylon)이 있다. 상기 막은 가능하면 큰 공극 크기를 갖는 것이 바람직한데, 상기 막의 높은 공극률은 확인하고자 하는 시료의 세포 성분, 특히 적혈구가 다공질 구조내로 침투하는 것을 용이하게 하기 때문이다. 흡수 막을 사용하는 것이 특히 유리하다. 그러나, 본 발명에 따른 기기는 이러한 특성으로 제한되지 않는다. 바람직한 것은 높은 모세관 유속을 갖는 임의의 막이고, 상기 모세관 유속은 염료 용액이 소정의 막 상에서 40 mm의 거리를 커버하는데 필요한 시간[초]이다. 그 모세관 유속이 < 100인 막이 특히 바람직하다.
본 발명의 바람직한 실시예에서, 밀봉 부재(sealing element)가 본 발명에 따른 기기의 작업 영역의 하류측(유동 방향 기준)의 다공성 막에 배치된다. 이차원 또는 삼차원 밀봉 부재가 사용되어 다공성 막 상에 위치하고, 이와 함께, 다공성 막의 표면의 나머지로부터 분리된 시료 작업 영역이 생긴다. 본 발명에 따라, 상기 밀봉 부재는 주로 액체 장벽으로 작용하고, 시료 액체 및 검사 시약이 다공성 막 내로 방향성 분포하는 것을 가능하게 한다. 본 발명에 따라, 상기 밀봉 부재는 액체가 측방 유동 기기의 다른 영역에 바람직하지 못하게 유입되는 것을 방지하기 위하여 시료 작업 영역을 더욱 더 밀봉한다.
상기 밀봉 부재의 바람직한 구체예는 웨브(web) 또는 홈통 또는 깔대기 형상이다. 상기 밀봉 부재는 밀봉 부재를 제조하기 위해 사용된 재료를 절단하여 얻어진다. 깔대기 또는 홈통 형상의 경우, 상기 밀봉 부재는 내측 개구부를 구비하고, 그의 바람직한 변형예는 깔대기 형상의 경우 그 밀봉 부재의 하부면(막 접촉면)을 향해 점차 가늘어지는 원형, 정사각형 또는 직사각형이다. 상기 밀봉 부재에 대한 바람직한 재료는 물을 흡수하지 않는(소수성) 재료이다. 특정의 실시예에서, 그 재료는 일면이 접착 필름, 예를 들어, 압감성 또는 또는 자기접착성 아크릴레이트 접착제가 코팅된다. 따라서, 상기 밀봉 부재는 다공성 막의 표면에 직접 결합될 수 있다. 택일적으로, 상기 밀봉 부재는 측방 유동 케이싱에 연결(예를 들어, 접착 결합)될 수 있는데, 이러한 실시예에서의 측방 유동 케이싱(casing)은 다공성 막의 표면 상에서 밀봉 부재를 내리누름으로써 밀봉 부재의 기능이 달성된다.
이차원적 밀봉 부재를 형성하기 위한 바람직한 재료는 임의의 형태의 접착 테이프 또는 접착 포일(예를 들어, Beiersdorf AG사의 Tesa 4124, Adhesives Research사의 ARcare 7815)이다. 삼차원적 밀봉 부재를 형성하기 위한 바람직한 재료는 상이한 재료 두께(바람직하게는 3-5 mm)를 갖는 유연하고 공극이 밀폐된 탄성중합체 재료 또는 유연한 실리콘 재료(예를 들어, Pitzner사의 EPDM140 셀룰라 고무, Castan사의 실리콘 고무 또는 고체 고무(경도 40˚이하)이다.
추가의 바람직한 실시예에서, 예를 들어 20개의 개별적인 공동부(홈통 형상)를 갖는 원피스(one piece)로 구성되는 다수의 밀봉 부재들이 하나의 막상에 배치된다.
이러한 디자인의 결과로서, 본 발명에 따른 기기는 세포를 여과 제거하지 않고 전혈과 같은 세포를 함유하는 액체 시료를 흡수할 수 있다. 또한, 상기 밀봉 부재는 다공성 막을 넘치지 않고 큰 시료 체적이 다공성 막(작업 영역)에 도입되도록 할 수 있다. 따라서, 상기 밀봉 부재는 다공성 막의 흡수 특성을 유지한다. 또한, 상기 밀봉 부재는 방향성 시료 흐름을 확보한다. 그러나, 본 발명에 따른 기기는 밀봉 부재를 갖거나 갖지 않고도 잘 기능할 수 있다.
본 발명에 따른 기기의 흡수 영역(흡수 패드)의 경우, 20 내지 30g/100㎠의 물 흡수 능력을 갖는 기계적으로 안정한 재료(예를 들어, Millipore)가 바람직하다. 본 발명에 따른 기기의 흡수 패드와 측방 유동 막 사이의 접촉은 압력 및 다공성 막과의 중첩에 의해 설정된다. 막 상에 흡수 패드를 정밀하게 위치시키는 것은 측방 유동 막을 갖는 배킹 시트(backing sheet)에 흡수 패드를 접착 결합시킴으로써 달성된다.
추가의 실시예에서, 본 발명에 따른 기기의 구성요소들은 기계적 강화의 목적을 위해 기판 또는 배킹 시트에 도입된다. 그러나, 본 발명에 따른 기기는 배킹 시트가 있거나 없어도 잘 기능할 수 있다. 바람직하게는 100㎛ 이상의 재료 두께를 갖고, 일면 또는 양면이 접착 필름, 예를 들어, 압감성(pressure-sensitive) 또는 자가 접착성(self-adhesive) 아크릴레이트 접착제(예를 들어, 0.005" 폴리에스테르 W/GL-187, G&L)가 코팅되어 있고 물을 흡수하지 않는 기계적으로 안정한 재료가 바람직하다. 상기 다공성 막 및 흡수 패드는 배킹 시트에 고정된다. 양면에서 접착제를 갖는 배킹 시트의 경우, 접착성의 제 2 면은 예를 들어 측방 유동 케이싱 내의 추가의 표면들에 적층체(stack)를 고정하기 위해 사용된다.
추가의 실시예에서, 본 발명에 따른 기기의 구성요소들이 적용되는 배킹 시트를 갖거나 갖지 않는 본 발명의 기기는 케이싱에서 구성됨으로써, 막의 구성요소들은 서로에 대하여 압착되고 상기 케이싱은 밀봉 부재의 기능을 유지한다. 그러나 이 경우, 본 발명에 따른 기기는 케이싱을 갖거나 갖지 않는 경우에도 잘 기능한다.
확인 방법
상기 방법은 액체 시료를 도입함으로써 수행된다. 상기 액체 시료는 혈액 또는 혈액의 구성성분, 특히 바람직하게는 전혈의 구성성분, 적혈구 농축물, 응고 혈액 또는 시험 액체(대조 혈액과 같은)로 구성되는 것이 바람직하다. 이 경우, 상기 시료는 도입되기 전에 완충액으로 희석될 수 있다.
본 발명은 도면 및 실시예를 통해 더욱 상세히 설명되지만, 이러한 도면 및 실시예로 제한되지 않는다.
도 1은, 예를 들어, 혈액형 항원들을 동시에 확인하기 위한 측방 유동 검사를 위한 본 발명에 따른 기기의 사시도이다. 본 실시예에서, 상기 기기는 배킹 시트(1), 다공성 막(2), 흡수 패드(3), 및 이차원적 웨브 형태 또는 삼차원적 홈통 형태인 밀봉 부재(4)로 구성된다. 다공성 막(2)은 압감성 또는 자가 접착성 아크릴레이트를 구비한 배킹 시트(1)에 고정된다. 마찬가지로, 흡수 패드(3)는 배킹 시트(1)에 고정되는데, 상기 흡수 패드(3)의 일부는 다공성 막(2)과 중첩된다. 다공성 막(2)의 상면에 고정된 밀봉 부재(4)는 막 표면의 나머지로부터 작업 영역(5)을 분리하고, 시료 액체 및 검사 시약이 다공성 막(2)내로 방향성 분포되는 것을 가능하게 한다. 지시 영역(6)은 흡수 패드(3)와 접촉 상태에 있는 다공성 막(2)의 영역과 작업 영역(5)의 사이에 배치된다.
도 2는 혈액형 항원인 Jka, Jkb, Fya, Fyb, S, s, k 및 P1을 성공적으로 동시에 확인하는 것을 도시한다. 공여체는 Jka-Jkb+Fya-Fyb+S-s+k+P1+ 이다. 시료는 중간부에 놓여진 작업 영역에 도입된다. 그 시료는 작업 영역의 좌측에 놓여진 지시 영역 및 작업 영역의 우측에 놓여진 지시 영역 모두를 통해 유동한다.
도 3은 한편으로는 혈액형 항원인 D, Fya 및 k에 대한 제 1 IgG 항체 및 상기 제 1 항체에 대한 제 2 항-IgG 항체를 이용한 본 발명에 따른 방법과 다른 한편으로는 상기 제 2 항체가 없는 비교 방법의 비교를 도시한다. 우측에는 추가의 음성 대조구로서 항-IgG가 3회 도입된다. 도 3a는 사용된 분배 방법을 도시한다. 도 3b 내지 도 3e는 상이한 공여자들의 시료들을 이용하여 얻은 실험 결과를 도시한다.
실시예
실시예 1: 혈액형 확인
검사 스트립의 제조
검사 스트립은 막의 중간부에 위치한 작업 영역, 및 그 중앙 작업 영역의 양측에 등거리를 두고 배치된 두 개의 지시 영역 및 두 개의 흡수 영역으로 구성된다. Millipore HiFlow Plus 065 타입의 막을, 8-밴드(band) 내지 10-밴드 디자인을 위해 19 x 48 mm (폭/길이; x/y)의 크기로 스트립에서 가공하고 배킹 스트립(예를 들어 G&L 사의 제품)에 접착 결합한다. 치수가 19 x 17 mm이고 막과 7 mm 만큼 중첩되는 두 개의 흡수 패드(Millipore사)를 작업 영역에서 떨어진 막의 말단부에 접착 결합한다. 상이한 혈액형 특이적 항체들의 용액의 6 mm 길이 밴드들(각각 0.6 μl)을 두 개의 선형 열에서 오프셋되도록 디스펜서를 이용하여 지시 영역에 도입한다. 상기 항체들의 예는 AD3200 (Biodot사): anti-Jka: 클론 P3HT7 (Diagast사, ref. 78003); 항-Jkb: 클론 P3 143 (Diagast사, ref. 78004); 항-Fya: 클론 P3TIM + 항-IgG 클론 MS278 (Merck Millipore사, VL+JZ); 항-Fyb: 클론 SpA264LBg1 (Merck Millipore사, FF); 항-S: 클론 P3S13JS123 + 항-IgG 클론 MS278 (Diagast사, ref. 78007 + Merck Millipore사, JZ); 항-s: 클론 P3BER (Merck Millipore사, FE); 항-P1: 클론 P3MON2 (Merck Millipore사, VN); 항-k: 클론 P3A118OL67 + 항-IgG 클론 MS278 (Merck Millipore사, FA+JZ) 이다. 상기 항체들은 모두 제형화 전에 약 10배 농축한다.
항-Jka 항체를 위치 x = 3 mm/y = 9 mm 내지 y = 15에서 작업 영역의 좌측에 배치한다. 세 개의 다른 항체(항-Jkb, 항-Fya 및 항-Fyb)를 항-Jka 항체의 위치와 평행하게 x = 2.5 mm의 간격으로 반복적으로 분배한다. 항-S 항체를, 위치 3 mm/y = 34 mm 내지 y = 40에서 작업 영역의 우측에 배치한다. 세 개의 다른 항체(항-s, 항-k 및 항-P1)를 상기 항-S 항체의 위치에 평행하게 x = 2.5 mm의 간격으로 반복적으로 분배한다.
항-적혈구 특이적 확인 항체(Val = 공정 대조구; 항-인간 RBC의 토끼 IgG 분획, Rockland사, 209-4139)를 상기 혈액형 특이적 항체들의 열의 마지막 밴드에 오프셋되도록 x = 2.5 mm/y = 3 mm에 도트(dot)로 도입한다. 대조 도트(Ctl = 음성 대조구; 항체를 제외하고 여러 항체 제제들의 구성성분들을 함유함)를 Val 도트에 오프셋되도록 y = 3 mm에 도입한다. 상기 항체들은 모두 1 % BSA 및 9.4 % APP3 용액[32.4 % (w/v) D(+)-트레할로스 이무수물, 0.055 % (v/v) Genapol PF10, 21.8 % (v/v) 메탄올, PPB 완충액: 15 mM 인산칼륨 완충액/10 mM NaCl/0.05 % (w/v) NaN3]을 함유한다. 상기 항체들은, pH 4를 갖는 0.01M 시트르산염 완충액에 희석되는 항-P를 제외하고, pH 7을 갖는 0.07M Tris/HCl에 희석한다. 상기 항체들은 다음과 같이 희석된다: 항-Jka 1:5, 항-Jkb 1:5, 항-Fya 1:5 + 항-IgG 1:25, 항-S 1:5 + 1:100, 항-s (small) 1:16.7, 항-k 1:10 + 항-IgG 1:100, 항-P1 1:10 및 항-RBC 1:10. 상기 항체들이 분배된 후, 막을 45 ℃에서 1 시간 동안 건조하고 폴리카보네이트 케이싱(Medion Grifols Diagnostics AG사)에서 밀봉 부재와 용접한다.
테스트 셋업
혈액 시료들은 통상적인 항응고제(예를 들어, EDTA, CPDA-1, ACD, 시트레이트)를 함유하는 튜브에 첨가될 수 있거나 그대로 사용될 수 있다. 테스트 튜브에서, 1 방울(50 μl)의 항응고 전혈을 4 방울(200 μl)의 희석제 F (Medion Grifols Diagnostics사)와 혼합하거나, 1 방울의 적혈구 성분을 8 방울(400 μl)의 희석제 F와 혼합하거나, 2 방울(100 μl)의 응고 혈액의 세포를 2 방울의 희석제 F와 혼합한다. 2 방울(100 μl)의 얻어지는 현탁액을 전술한 검사 기기의 작업 영역에 도입한다. 30 초후, 6 방울(300 μl)의 희석제 F를 작업 영역에 도입한다. 5 분후, 결과를 판독하고 기록한다.
결과
검사는, 항-RBC 확인 도트(val)가 명백히 양성 신호(적색 도트)를 나타내고 대조 도트(ctl)가 음성 결과를 나타내는 경우에 유효하다. 적색 밴드가 존재하는 것은 검사된 혈액 시료가 특정의 혈액형 특징에 대하여 양성이라는 것을 나타낸다. 작업 영역의 해당하는 위치에서 밴드가 없는 것은 검사된 혈액 시료가 해당하는 혈액형 특징에 대하여 음성이라는 것을 나타낸다.
도 2는 혈액형 항원인 Jka, Jkb, Fya, Fyb, S, s, k 및 P1이 성공적으로 동시에 확인된다는 것을 도시한다. 공여체는 Jka-Jkb+Fya-Fyb+S-s+k+P1+ 이다.
실시예 2: 본 발명 및 비교예에 따른 방법을 이용한 혈액형 확인
실시예 1과 유사하게 검사 스트립을 제조했다. 하기의 항체들이 사용되었다: 항-D, 클론 ESD-1 (Alba), 인간 IgG; 항-k (cellano사), 클론 P3A118OL67 (Millipore사), 인간 IgG; 항-Fya, 클론 P3TIM (Millipore사), 인간 IgG. 하기의 제 2 항체가 사용되었다: 항-IgG, 클론 MS278 (Millipore사), 마우스 IgM.
도 3a는 사용된 분배 방법을 도시한다. 도 3b 내지 도 3e는 상이한 공여자들 유래의 시료들을 이용하여 얻은 실험 결과를 도시한다. 혈액형 항원에 대한 IgG 류의 제 1 항체 및 상기 제 1 항체에 대한 제 2 항체를 이용한 확인은 명백히 검출가능한 밴드를 유도하는 반면에, IgG류의 제 1 항체를 이용한 확인은 명백하게 인식가능한 밴드를 유도하지 않는다는 것을 명백히 알 수 있다. 우측 편에서, 항-IgG 항체가 추가의 음성 대조구로서 3회 도입된다. 도 3b 내지 도 3e는 이러한 음성 대조구의 경우 밴드가 얻어지지 않았다는 것을 나타낸다.
Claims (25)
- 액체 시료 내의 세포 결합 분석물질을 확인하기 위한 기기로서, 적어도 하나의 지시 영역을 갖는 분리 매트릭스를 포함하는 기기에 있어서, 상기 지시 영역은 상기 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항원인 것을 특징으로 하는 기기.
- 제 1 항에 있어서, 상기 액체 시료의 도입을 위한 작업 영역(5)을 갖는 막(2), 상기 세포 결합 분석물질과 상호작용할 수 있는 적어도 하나의 지시 영역, 및 상기 지시 영역을 통과한 후의 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역(3)을 포함하고, 상기 지시 영역이 상기 작업 영역(5)과 흡수 영역(3)의 사이에 놓여여 있는, 기기에 있어서, 상기 지시 영역이 상기 세포 결합 분석물질에 대한 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항체인 것을 특징으로 하는 기기.
- 제 1 항에 있어서, 상기 기기는 겔 물질이 채워진 튜브를 포함하는 기기.
- 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 결합 분석물질이 혈액형 항원인, 기기.
- 제 4 항에 있어서, 상기 세포 결합 분석물질이 혈액형 항원인 A, B, AB, D, C, E, c, e, Cw, K, k, Jka, Jkb, Fya, Fyb, M, N, S, s, P1, Kpa, Kpb, Lua, Lub, Lea, Leb, Mia, Dia, Jsa, Jsb, Coa, Cob, Wra 및 Xga로부터 선택되는, 기기.
- 제 5 항에 있어서, 상기 세포 결합 분석물질이 혈액형 항원인 k, S, Fya, Kpa, Kpb, Mia, Lua, Lub, Dia, Jsa, Jsb, Coa, Cob, Wra 및 Xga로부터 선택되는, 기기.
- 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 항체가 IgG 또는 IgA 타입, 바람직하게는 IgG 타입의 항체인, 기기.
- 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분이 상기 제 1 항체에 대한 항체 또는 이의 단편, 및 렉틴 또는 이의 단편으로부터 선택되는, 기기.
- 제 8 항에 있어서, 상기 항체가 항-IgG 또는 항-IgA 항체, 바람직하게는 IgM 류의 단일 클론 항-IgG 항체이거나, 상기 렉틴이 단백질 A 또는 단백질 G인, 기기.
- 액체 시료내의 제 1 및 제 2 세포 결합 분석물질을 동시에 확인하기 위한 기기로서, 상기 액체 시료의 도입을 위한 작업 영역(5)을 갖는 막(2), 상기 세포 결합 분석물질과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 지시 영역, 및 상기 지시 영역을 통과한 후의 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역(3)을 포함하고, 상기 지시 영역이 상기 작업 영역(5)과 상기 적어도 하나의 흡수 영역(3)의 사이에 놓여져 있는, 기기에 있어서,
(i) 상기 제 1 지시 영역은 상기 제 1 세포 결합 분석물질에 대한 불완전 항체인 제 1 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 포함하고,
(ii) 상기 제 2 지시 영역은 (a) 상기 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 완전 항체인 제 1 항체를 포함하거나, (b) 상기 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 불완전 항체인 제 1 항체, 및 상기 항체에 대한 결합 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 기기. - 제 10 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 세포 결합 분석물질이 혈액형 항원인, 기기.
- 제 11 항에 있어서, 상기 제 1 세포 결합 분석물질이 혈액형 항원인 k, Fya, Kpa, Kpb, Lua, Lub, Mia, Dia, Jsa, Jsb, Coa, Cob, Wra, Xga 및 S로부터 선택되고, 상기 제 2 세포 결합 분석물질이 A, B, AB, C, D, E, c, e, Cw, K, Lea, Leb, Jka, Jkb, Fyb, P1 및 s로부터 선택되는, 기기.
- 제 10 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 지시 영역(i)의 제 1 항체 및/또는 상기 제 2 지시 영역(ii)의 제 1 항체가 IgG 또는 IgA 타입, 바람직하게는 IgG 타입의 항체인, 기기.
- 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 지시 영역(i) 및/또는 상기 제 2 지시 영역(ii)의 제 1 항체에 대한 결합 성분이 상기 제 1 항체에 대한 항체 또는 이의 단편, 및 렉틴 또는 이의 단편인, 기기.
- 제 14 항에 있어서, 상기 결합 성분이 항-IgG 또는 항-IgA 항체이거나, 또는 상기 렉틴이 단백질 A 또는 단백질 G인, 기기.
- 제 14 항에 있어서, 상기 제 1 지시 영역(i)의 결합 성분 및/또는 상기 제 2 지시 영역(ii)의 제 2 항체가 IgM 또는 IgG 항체인, 기기.
- 제 10 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 지시 영역(i)에서의 제 1 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분 및/또는 상기 제 2 지시 영역(ii)에서의 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체 및 상기 제 1 항체에 대한 제 2 결합 성분이 IgG 항체인, 기기.
- 제 10 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 2 지시 영역(ii)이 상기 제 2 세포 결합 분석물질에 대한 IgM 항체를 포함하는, 기기.
- 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 기기의 제조 방법으로서,
지시 영역에 세포 결합 분석물질에 대한 제 1 항체 또는 이의 단편, 및 상기 제 1 항체에 대한 결합 성분을 도입하는 것을 포함하고, 상기 제 1 항체가 불완전 항체인, 방법. - 제 19 항에 있어서, 상기 제 1 항체 및 결합 성분이 서로 개별적으로 또는 혼합물 형태로 도입되는, 방법.
- 적어도 하나의 세포 결합 분석물질을 확인하기 위한 방법으로서,
제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 기기의 막(2)의 작업 영역(5)에 시료를 도입하고,
상기 시료는, 상기 시료 액체가 지시 영역을 통해 흡수 영역(3)으로 유동하고 상기 시료 액체 내의 분석물질이 지시 영역에서 복합체를 형성하기에 충분한 양으로 존재하는, 방법. - 제 21 항에 있어서, 상기 방법은 상기 세포 결합 분석물질이 막에 도입되기 전에 상기 세포 결합 분석물질을 항체와 함께 정치하는 것을 포함하지 않는, 방법.
- 제 21 항 또는 제 22 항에 있어서, 상기 액체 시료가 혈액 또는 혈액의 구성성분, 바람직하게는 전혈의 구성성분, 적혈구 농축물, 응고 혈액, 또는 대조 혈액과 같은 테스트 액체로 구성되는, 방법.
- 혈액을 분석, 특히 혈액형 항원 또는 항원 에피토프를 확인하기 위한 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 기기의 용도.
- 혈액을 분석, 특히 하기의 것들중 복수의 것들을 동시에 확인하기 위한 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 기기의 용도: A, B, AB, D, C, E, c, e, Cw, K, k, Jka, Jkb, Fya, Fyb, M, N, S, s, P1, Kpa, Kpb, Lua, Lub, Lea, Leb, Mia, Dia, Jsa, Jsb, Coa, Cob, Wra 및/또는 Xga 혈액형 항원 또는 항원 에피토프.
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