JPH0464062A - 抗原の存在を検出する方法及びこれに用いる装置 - Google Patents

抗原の存在を検出する方法及びこれに用いる装置

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JPH0464062A
JPH0464062A JP2164349A JP16434990A JPH0464062A JP H0464062 A JPH0464062 A JP H0464062A JP 2164349 A JP2164349 A JP 2164349A JP 16434990 A JP16434990 A JP 16434990A JP H0464062 A JPH0464062 A JP H0464062A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は生物、特に人間の体液中の抗原の存在を検出、
測定する方法及びこれに用いる装置、並びに抗原の存在
を検出、測定する方法及びこれに用いる装置に関する。
免疫反応による診断試験は体液抗原、ホルモン、病原体
及び血清抗体の検出に広く用いられている。
免疫検定法（イムノアッセイ）は一般に大別して次の２
つの方法に分類される。第一の方法には、抗体−抗原沈
降試験法例えば放射免疫拡散法、血球凝集反応法、及び
被覆したラテックス粒子の凝集反応法がある。第二の方
法には、標識した試薬試験法例えば放射線免疫検定法（
ラジオイムノアッセイ）及び酵素結合免疫検定法がある
。
沈降型の免疫検定試験法は手作業で実施し得るという利
点を有し、肉眼で読める使い捨て用具中で工業的に用い
られ、格別の器具を要しない。沈降型免疫検定法からの
解読は、供試試料又は競合抗原の一連の既知希釈法の各
々で凝集反応の有無として通常表わされる。沈降型試験
法の欠点は、該試験では標識した試薬検定法よりも感作
性が、ずっと低く、時間のかかる反応操作を必要とし、
且つ沈降反応の肉眼による識別によって主観的な錯誤を
受は易いということである。
標識した試薬による免疫検定法は定量的で高度に感作性
であるが、それでもなお成る欠点を有する。放射線免疫
検定法では放射性トレーサーを用いるのでγ線の検出装
置を必要とする。放射性トレーサーは貯蔵寿命が短く、
技術者に健康障害を生起し、法的規制を受けている。
酵素結合免疫抗体吸着検定法［ｅｎｚｙｍｅ−１１ｎｋ
ｅｄｉｓ＋ＩＩ＋ｕｎｏａｂｓｏｒｂａｎｔ　ａｓｓａ
ｙ（ＥＬＩＳＡ）コでは酵素で標識した試薬を用いる。
この酵素は、容易に測定し得る（例えば発色により）生
成物を生ずる基質との反応により検出する。ＥＬＩＳＡ
法では放射性物質を必要とせず、貯蔵寿命の長い試薬を
用いる。
ＥＬＩＳＡ検定法はプラスチック製液溜めの底部の如き
固相支持体に対照試薬を結合することから始める。供試
流体を酵素で標識した試薬と混合し、該流体を前記の結
合対照試薬と反応させる。多数の希釈、反応及び洗浄操
作（１４回口の多数の操作）を介して、結合試薬及び遊
離試薬が分離され、着色反応を開始する。種々の段階希
釈法で形成させた発色の強さは定量的な尺度を与える。
標準的なあＥＬＩＳＡ法は、実施するのに４〜１２時間
要する。
従って、ＥＬＩＳＡ法の主たる欠点は、多数の希釈、反
応及び洗浄操作であり、これは時間がかかり錯誤を受は
易い。
本発明の装置は、前記した型式の検定法に伴なう多数の
障害を克服するのに用いるものである。
詳しく言えば、本発明の装置を用いることにより、希釈
操作や洗浄操作を必要とせずしかも反応操作が１回で短
期間で検定ができる改良ＥＬＩＳＡ法が得られる。この
本発明による検定は、供試流体に直接暴露した時に発色
反応を形成する乾燥層状試片の形である。この試片は定
量に必要な希釈操作か自動的に実施され、遊離抗体から
結合抗体が分離される。発色反応は肉眼で読み取ること
ができ、あるいは分光光度計の如き器具を用いて読み取
ることができる。更には、本発明の装置は細片形に形成
でき且つ薬剤又は尿中のホルモンの如き抗原を迅速に検
出する浸漬棒（ｃｔｌｐｓｔｆｃｋ）として用い得る。
本発明の装置の特定の応用例は、救急室での薬剤適量を
迅速に検出するものであり、あるいは家庭での妊娠試験
として用いるものである。
従って、本発明によると、第１の層と第２の層と第３の
層とを有してなる繊維質積層体からなる試料液中の抗原
の存在を検出する装置であって、前記繊維質積層体中の
第１の層は、試験される前記抗原と免疫学的に反応して
保護（ｐｒｏｔｅｃｔｊｖｅ）酵素結合抗体−抗原・複
合体を生成し得る酵素結合抗体を含有しており；前記繊
維質積層体の第２の層は、前記の第１の層で反応しなか
った酵素結合抗体と免疫学的に反応し得る該第２の層に
結合され固定された抗原を含有しており；且っ前記繊維
質積層体の第３の層は前記の酵素結合抗体−抗原・複合
体と反応して前記の試料液中の抗原の存在を示す発色反
応を生じうる物質を含有していることを特徴とする、試
料液中の抗原の存在を検出する装置が提供される。
別の要旨によると、本発明によって、試料液中の抗原の
存在を検出する方法において、第１の層と第２の層と第
３の層とを有してなる繊維質積層体を有する装置であっ
て、前記の第１の層は、試験される前記抗原と免疫学的
に反応して保護酵素結合抗体−抗原・複合体を生成し得
る酵素結合抗体を含有しており；前記の第２の層は、前
記の第１の層で反応しなかった酵素結合抗体と免疫学的
に反応し得る該第２の層に結合され固定された抗原を含
有しており：且っ前記の第３の層は前記の酵素結合抗体
−抗原・複合体と反応して前記の試料液中の抗原の存在
を示す発色反応を生じうる物質を含有しているものであ
る前記装置の前記の第１の層に、抗原の存在を試験すべ
き液体を接触させる工程と、前記の液体を前記の繊維質
装置に浸透させる工程と、前記の第３の層における発色
変化の有無を観察して、試験した前記試料液中の抗原の
有無を検出する工程と、からなることを特徴とする、試
料液中の抗原を検出する方法が提供される。
また、別の要旨によると、本発明によって、第１の層と
第２の層と第３の層とを有してなる繊維質積層体からな
る試料液中の抗体の存在を検出する装置であって、前記
繊維質積層体中の第１の層は、試験される前記抗体と免
疫学的に反応して保護酵素結合抗原−抗体・複合体を生
成し得る酵素結合抗原を含有しており；前記繊維質積層
体の第２の層は、前記の第１の層で反応しなかった酵素
結合抗原と免疫学的に反応し得る該第２の層に結合され
固定された抗体を含有しており：且っ前記繊維質積層体
の第３の層は前記の酵素結合抗原抗体・複合体と反応し
て前記の試料液中の抗体の存在を示す発色反応を生じう
る物質を含有していることを特徴とする、試料液中の抗
体の存在を検出する装置が提供される。
更にまた別の要旨によると、本発明によって、試料液中
の抗体の存在を検出する方法において、第１の層と第２
の層と第３の層とを有してなる繊維質積層体を有する装
置であって、前記の第１の層は、試験される前記抗体と
免疫学的に反応して保護酵素結合抗原−抗体・複合体を
生成し得る酵素結合抗原を含有しており、前記の第２の
層は、前記の第１の層で反応しなかった酵素結合抗原と
免疫学的に反応し得る該第２の層に結合され固定された
抗体を含有しており：且っ前記の第３の層は前記の酵素
結合抗原−抗体・複合体と反応して前記の試料液中の抗
体の存在を示す発色反応を生じうる物質を含有している
ものである前記装置の前記の第１の層に、抗体の存在を
試験すべき液体を接触させる工程と、前記の液体を前記
の繊維質装置に浸透させる工程と、前記の第３の層にお
ける発色変化の有無を観察して、試験した前記試料液中
の抗体の有無を検出する工程と、からなることを特徴と
する、試料液中の抗原を検出する方法が提供される。
本発明を図面を参照して説明する。
第１図は本発明の装置の図解図であり、該装置１０は３
つの相異なる層１２．１４及び１６で構成される。
該装置１０は図示の如く支持部材２２上に配置しである
。層１２（第１の層）は多孔質材料から形成され、その
中に可溶性の酵素結合抗体２４が分散している。
層１４（第２の層）もまた多孔質材料から形成され、該
材料に抗原２６が結合している。層１Ｂ（第３の層）も
同様に多孔質材料から形成され、しかも結合した着色用
試薬１７すなわち酵素と反応すると発色する物質を含有
する。
第２図は第１図の装置を用いて本発明の方法を実施した
際の図解図である。詳しく言えば、流体２８を層１２（
第１の層）の表面３０に施用する。流体２Ｂがこのマト
リックス（ｍａｔｒｉｘ）の層１２を通って拡散するに
つれて、流体２８中の遊離抗原３２は酵素結合抗体２４
と接触し且つ結合する。短時間の反応（ｉ　ｎｃｕｂａ
ｔ　ｔｏｎ）後に、認識部位が飽和された酵素結合抗体
２４は酵素結合抗体−抗原・複合体を生成し層１４（第
２の層）を通って自由に拡散し、層１６（第３の層）に
移行し、層１６で該酵素は着色用試薬１７と反応して特
色ある発色を生じる。これは施用した流体２８中に抗原
が存在することを示している。
第３図は第１図の装置を用いて本発明の方法を実施した
際の図解図であり、供試流体３４中に抗原がない場合に
は何が起こるかを示す図解図である。
詳しく言えば、流体３４を層１２（第１の層）の表面３
０に施用する。流体３４がこのマトリックスの層１２を
通って拡散するにつれて、酵素結合抗体２４は可溶化し
て層１４（第２の層）に移動し、層１４で該抗体２４は
結合抗原２６と係合しこれに結合し固定される。従って
、酵素結合抗体２４は層１６に移動し得ないために層１
６中の発色試薬１７に到達せず、発色変化は観察されな
い。勿論これは流体３４中に抗原が存在しないことを示
している。
本発明の好ましい実施法では、免疫検定装置は多孔質基
材層の３層からなるサンドイッチ積層体（第１図参照）
である。第１の多孔質層には、酵素と結合した特異抗体
を含浸させる。第２の多孔質層は、この層に固定した（
結合）対照抗原を含有する。前記の対照抗原は第１の多
孔質層中の抗体により特異的に認識される型式の抗原で
ある。
第３の多孔質層は、抗体に結合した酵素と反応する発色
基質を含有する。
免疫検定装置の操作は次の如くである（第２図及び第３
図参照）。
試験すべき抗原を含有する流体試料は第１の層と接触さ
せておく。供試試料液中の遊離抗原は第１の層で、酵素
と結合した特異抗体と反応し結合し酵素結合抗体−抗原
・複合体を形成し、第２の層中に拡散し、次いで第３の
層中に拡散する。酵素結合抗体は供試流体試料中の遊離
抗原と結合し酵素結合抗体−抗原・複合体を形成した場
合には、第２の層中に拡散した際に第２の層中に固定さ
れた対照抗原と反応しないので自由に第３の層中に拡散
し、第３の層中で発色反応を生じる。供試流体試料が抗
原を含有しない場合には、全ての酵素結合抗体は自由な
結合個所を有したまま第２の層中に拡散し、第２の層中
に固定された対照抗原と結合し第２の層中に固定される
。この場合には、酵素結合抗体は、第２の層中に固定さ
れた対照抗原と結合し第２の層中に固定されることによ
り第３の層中に拡散し得ないために、第３の層中では発
色反応を生しない。
第３の層中で酵素結合抗体−抗原・複合体中の標識酵素
と反応して分解した発色基質の量の差異（及び生じた発
色の強さ）は、供試試料中の遊離抗原の量に比例する。
第１の層中の酵素標識抗体の所与量に対して、本発明の
装置の感度は第２の層中に存在する対照抗原の量によっ
て決定される。
例えば、試験装置は一連のサンドイッチ複合体を含有し
、各々の複合体が種々の対照抗原を有する。
一連の対照抗原濃度を前もって決定して、測定される供
試溶液に適当な成る範囲の感度を計測する。
ＥＬＩＳ＾試片ては陽性の発色反応は、試験される抗原
の存在を示していることが強調されるべきである。
本発明の装置を形成するのに用いる材料は当業者には周
知である。しかしながら、実際にはニトロセルロース又
はジアゾベンジルオキシメチル（ＤＢＭ）紙の如き編成
繊維から好ましい装置のＩＦ域又は層を形成するのが望
ましいことが見出された。
ニトロセルロース紙は蛋白質に直接結合し、抗原を固定
するのに有用であることが示された。ＤＢＭ基材（マト
リックス）は共有結合によりジアゾニウム基にＤＮＡ、
　ＲＮＡ及び蛋白質を結合させる。更にはポリアクリル
アミド、アガロース又はコラーゲンの如き多孔質ゲルも
利用し得る。抗原は上記ゲルの細孔内に捕捉され得るか
又は抗原は配位子のアミノ基及び基材上のカルボキシル
基を介して多孔質ゲルに架橋結合し得る。また、セルロ
ース又はプラスチック繊維基材内に捕捉された結合配位
子を含有する粒子又はビーズをも用い得る。満足な例は
直径５〜１０ミクロンのポリアクリルアミドビーズであ
り、ペプチド結合を介してビーズの表面に抗原を結合さ
せたものである。該ビーズは１〜２ミクロンの孔径を有
するセルロース　フィルター基材内に捕捉される。
適当な基質即ち発色試薬は当業者には周知である。この
点に関して、多数の種々の型式の精製酵素がＥＬＩＳＡ
の如き免疫検定法に用いる普通の標識酵素である。これ
らの酵素には西洋ワサビのペルオキシダーゼ、アルカリ
性ホスファターゼ及びβガラクトシダーゼがある。しか
しながら、本発明は抗体又は抗原を標識するのにこれら
の酵素の使用には限定されない、抗体を標識するのに用
いた酵素は、発色剤と直接又は間接的に作用することに
より試験装置の第３の層内で発色し得る。
例えばジアミノベンジン又はＰ−ニトロフェニルホスフ
ェートの如き当業者に周知の基質は過酸化水素の存在下
に西洋ワサビのペルオキシダーゼと反応して褐色又は黒
色を生ずる０本発明の１形式では、本発明装置の使用中
に過酸化水素を外部から加える。別法として、凍結乾燥
した発色用帯域は結合グルコースオキシダーゼを含有で
き、第１の看破はグルコースを含有できる０本発明の装
置抗体に結合した酵素は、第３の層中で、該帯域の透過
性を生ずる如き間接的な手段により発色し得る。本発明
に適当と見出されたこの方法の１例は抗体に結合した酵
素として高度に精製されたコラゲナーゼ（ｃｏｌｌａｇ
ｅｎａｓｅ）を用いることである。
この酵素はコラーゲン（ｃｏｌ　ｌａｇｅｎ）を小さな
ペプチドに分解する。コラゲナーゼ標識を検出するには
、結合して発色する２つの試薬をコラーゲン基質バリヤ
ーにより分離する。コラゲナーゼで標識した抗体の存在
が検出される。その理由はコラゲナーゼがコラーゲンバ
リヤーを分解させ次いで分離された２つの試薬を混合さ
せしかも発色させるからである。適当なコラゲナーゼは
当業者に周知の手段により精製したヒストリチフス菌か
ら得られるコラゲナーゼである。適当なコラーゲン基質
は三重螺旋の（天然の）形又は特質を失なった（ゼラチ
ン）形での生型Ｉコラーゲンにより形成されたコラーゲ
ン基質である。
次の実施例により本発明の実施を更に説明する。
反応することにより過酸化水素を発生する。
エ蓋■土 笠！ 用いた物質は次の如くである。
ａ）抗原二人間の絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）ｂ）
抗体二人間のｈＣＧに対するラビットの抗血清Ｃ）抗体
に結合した酵素：西洋ワサビのペルオキシダーゼ ｄ）発色用酵素基質ニジアミノベンジジンｅ）多孔質層
を形成する検査紙材料 二ニトロセルロース 皿ｊＺ析法 皿ｊ」−発色試薬を含有する層の潤製：厚さ０．２−の
ニトロセルロース基材のシートを幅２Ｃ１１、長さ１０
ｃｍの試片に切断した。酸シートを、蒸留水に溶かした
０、１■／ｄのジアミノベンジジンの溶液に３０分間浸
漬した０次いで該シートをドライアイスのベレットで被
覆することにより前記シートを凍結した。凍結したシー
トを慣用の凍結乾燥機中で凍結乾燥した。
１立又　抗原含有層の調製： 抗原を５．０１．ＩＪ、／ｗｌの濃度で燐酸塩緩衝塩水
中に可溶化させ且つ一連の段階希釈率すなわち１：１．
１：２，１：４，１：８，１：１６，１：３２１：６４
及び１：１００の希釈液をｇｊＩ製した。
８群のニトロセルロースシートを各々、種々の希釈率の
抗原溶液中に４°Ｃで３０分間浸漬した０次いで全ての
シートを、燐酸塩緩衝塩水に溶かした中型血清アルブミ
ンの１％溶液中に浸漬してニトロセルロース上の全ての
遊離蛋白質結合部位を飽和させた（Ｔｏｂｉｎ　ら’Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　ｏｆＳｃｉ、　、
１４６．４３５０〜４３５４．１９７９）　。
次いで該シートを前記の如く凍結乾燥した。
１立エ　酵素結合抗体含有層の調製： Ｗｉ　］ｓｏｎ及びＮａｋａｎｅの標準的なペリオデー
ト法（’Ｉ＊ｍｕｎ　ｏｆ　１ｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　
＆　Ｒｅ１ａｔｅｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」Ｅｌｓｅ
ｖｉｅｒ社発行、Ｐ、２１５〜２２５．１９７８年）に
よりペルオキシダーゼ酵素を抗体に結合させた。積土法
により該結合体を精製した後に、ＰＢＳ中でｌａｇ／ｄ
の濃度に調製した。前記の層に含浸すべ舌酵素結合Ａ濃
度は、１：３２の希釈率での固定抗原を含有するニトロ
セルロースシートの表面に施用した２０μ！の液滴が固
定抗原に対する全ての抗体の完全な結合を示すまで酵素
結合抗体溶液を希釈することにより測定した（標準希釈
曲線の製造）。
この濃度の酵素結合抗体をセルロース吸取紙よりなる材
料の試片に浸漬させ、前記の操作１の如く凍結乾燥した
。
１立土　３層サンドインチ積層体の製造：ＩＣ１四方の
各々凍結乾燥させた層を、前記細片から切断した。固体
支持体はｌ０ＣＩＸ　１　ｃｍＸＱ、ｌ閣（厚さ）の透
明なポリカーボネートプラスチンクの細片である０発色
基質を含有するニトロセルロースの８枚の四角形シート
をラテックス基剤セメントでプラスチック支持体に接合
した。これらの四角形シート、の頂部に抗原含有シート
をその周囲でラテックス　セメントを用いて接合した。
８種類の相異なる抗原濃度を用いた。最後に、抗原含有
層の頂部に、酵素結合抗体含有層を接合した。
１立エ 免疫検定を実施するには、５０μ！の供試溶液を頂部層
の表面に施用する。供試溶液は０．１％ｉａａ化水素と
共に燐酸塩緩衝塩、水（ｐＦ＋７．４）中の標準抗原よ
りなる。免疫検定の感度は０．３　ＩＩＩのｈＣＧであ
り、これは１：３２希釈率の固定抗原で発色反応を示し
た。
庭−来 前記の如く形成したＥＬＩＳＡ試片を標準的な血球凝集
反応法に対する感度について比較する。供試試料は妊娠
していると前もって決定された６人の患者から採取した
人間の尿である。
１：１　　　　　２−５１０ １　　＋　　２　　　　　’　　１．２　　ｌ１１１　
　：　　４　　　　　０．６　　ＩＵｌ　　：　　８　
　　　　０．３　　ｌ１１１　　：１６　　、　　　　
０．０１　　ｌ１ｌＥＬＩＳＡ試片法の感度は、 よりも大きい。
（＋）　　　　（＋） （÷）（＋） （＋）　　　　　（−） （＋）　　　　　（−） 慣用の血球凝集反応法 １蓋■又 間の血清よりなる。
（ａ）３層構造体の第１の層に含浸させた酵素結合抗体
の濃度を種々に変えた際の発色時間を測定する試験。
■）人間の肝炎Ｂ抗原（ＨＢＡ）を検出する実用性を測
定する試験。
１詐去丘上 試片を実施例１と同一の方法により構成した。
第１の層は、次の希釈率すなわち１／２．１１５．１１
５０１／２２５．１／６２５及び１／３１２５のペルオ
キシダーゼ結合・抗−１（ＢＡを含浸させた凍結乾燥セ
ルロース基質を含有する。実験（ａ）では、第２の層は
抗原を含有しない、実験０））では第２の層は５００ナ
ノグラム／ｄの濃度で結合ＨＢＡを含有する。
第３の層はｈＣＧを検出するのに実施例１の如く製造し
たＤＡＢ基質を含有する。
詰−来 実験（ａ）　　供試試料は０．１％の過酸化水素を含有
する燐酸塩緩衝塩水で１／１０に希釈した通常の人１／
２　　　濃、　　ＢＮ−ＢＬＫ １１５　　　濃、　　ＢＮ−ＢＩＪ ｌ　１５０　　　ＢＮ−ＢＬＫ １　／２２５　　８Ｎ １　／６２５　　　淡、　　ＢＮ １　／３１２５　　発色なし 同　　じ　　　　同 同　　じ　　　　同 同　　じ　　　　同 暗、　ＢＮ　　　　同 ＢＮ　　　　　　暗。
ごく淡い、ＢＮ　　淡い ＢＮ 但し　ＢＮ−褐色、　　ＢＬＫ−黒色 箱二」會 第２の層が１ｃｄ当り５００ナノグラムのＨＢＡを含有
する場合には、酵素結合抗体の最ｉ！ｉｆＸ度は１／６
２５である。　ＨＢＡを検出する実用性は１　／６２５
の希釈率で結合対照抗原に対して遊離抗原が競合して存
在することにより証明された。
！狂回土 第１層中の酵素結合抗体これは供試試料が抗原を含有し
ていない場合には、第２の層中の対照抗原に完全に結合
している最適な最大濃度の測定。
１　／２２５ １　／６２５ １　／３１２５ ＢＮ 淡、　ＢＮ ごく淡い、　　ＢＮ 発色セす （対照抗原による完全な結合） 発色せず １００ナノグラフ／ＩＩＮでのＨＢＡを検出するのに１
　／６２５希釈率（前記表０））１から）の結合体を選
択した。
ＨＢＡ存在 ＨＢＡ不在 淡、ＢＮ　　　　ＢＮ 発色せず　発色せず 本発明の技術は、抗体並びに抗原との両方の検出に同等
に応用し得る。抗原及び抗体の役割は単純に逆になる。
抗体を検出するには、抗原を酵素で標識して第１の層中
に配置し、対照抗体を第２の層に固定させる。供試試料
中に遊離抗体が存在しない場合には、酵素で標識した抗
原は第１の層から第２の層中に拡散し、第２の層中に固
定された対照抗体に結合して固定されるものであり、ｊ
＠３の層中に拡散して発色できない。供試試料中に遊離
抗体が存在する場合には、該抗体は第１の層中で、酵素
で標識された抗原と反応して酵素標識抗原−抗体・複合
体を形成し、第１の層から第２の層中に拡散し、次いて
第３の層中に拡散してそこで発色反応を生じる物質と反
応して発色する。この場合には、陽性発色反応は、供試
試料中に遊離抗体が存在することを示す。
本発明を抗体の検出に適用する時には、第１の層と第２
の層と第３の層とを収容してなる装置を用い、前記の第
１の層は、試験される前記抗体と免疫学的に反応して保
護酵素結合抗原−抗体・複合体を生成し得る酵素結合抗
原を含有しており、前記の抗原はこれが、第１の層に拡
散し入来する抗体と反応した時には保護酵素結合抗原−
抗体・複合体を生成し第１の層から第２の層に移行する
が、かかる抗体の不存在下では前記の抗原が第１の層か
ら第２の層に移行しえるように第１の層に配置されてお
り：前記の第２の層には、前記の第１の層で反応しなか
った酵素結合抗原と免疫学的に反応し得る対照抗体が該
第２の層に結合され固定されて配置されており、且つ前
記の第３の層は前記の酵素結合抗体−抗原・複合体と直
接又は間接に反応して前記の試料液中の抗体の存在を示
す発色反応を生じつる物質を含有しているものである。
本発明の好ましい具体例が現在記載されているけれども
、本発明から逸脱することなく種々の変更及び改良をこ
こで成し害ることは当業者には明らかであり、それ数本
発明の範囲内に全てのかかる変更及び改良を包含するこ
とは明白である。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明の装置（１０）の図解図であり、第２図
及び第３図は第１図の装置を用いて本発明の方法を実施
した際の図解図である。図中、１２は第１の層、１４は
第２の層、１６は第３の層、２２は支持部材、２４は酵
素結合抗体、２６は抗原、１７は発色試薬、２８及び３
４は供試流体、３２は遊離抗原をそれぞれ表わす。 】。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、第１の層と第２の層と第３の層とを有してなる繊維
    質積層体からなる試料液中の抗原の存在を検出する装置
    であって、前記繊維質積層体中の第１の層は、試験され
    る前記抗原と免疫学的に反応して保護酵素結合抗体−抗
    原・複合体を生成し得る酵素結合抗体を含有しており；
    前記繊維質積層体の第２の層は、前記の第１の層で反応
    しなかった酵素結合抗体と免疫学的に反応し得る該第２
    の層に結合され固定された抗原を含有しており；且つ前
    記繊維質積層体の第３の層は前記の酵素結合抗体−抗原
    ・複合体と反応して前記の試料液中の抗原の存在を示す
    発色反応を生じうる物質を含有していることを特徴とす
    る、試料液中の抗原の存在を検出する装置。 ２、試料液中の抗原の存在を検出する方法において、第
    １の層と第２の層と第３の層とを有してなる繊維質積層
    体を有する装置であって、前記の第１の層は、試験され
    る前記抗原と免疫学的に反応して保護酵素結合抗体−抗
    原・複合体を生成し得る酵素結合抗体を含有しており；
    前記の第２の層は、前記の第１の層で反応しなかった酵
    素結合抗体と免疫学的に反応し得る該第２の層に結合さ
    れ固定された抗原を含有しており；且つ前記の第３の層
    は前記の酵素結合抗体−抗原・複合体と反応して前記の
    試料液中の抗原の存在を示す発色反応を生じうる物質を
    含有しているものである前記装置の前記の第１の層に、
    抗原の存在を試験すべき液体を接触させる工程と、前記
    の液体を前記の繊維質装置に浸透させる工程と、前記の
    第３の層における発色変化の有無を観察して、試験した
    前記試料液中の抗原の有無を検出する工程と、からなる
    ことを特徴とする、試料液中の抗原を検出する方法。 ３、第１の層と第２の層と第３の層とを有してなる繊維
    質積層体からなる試料液中の抗体の存在を検出する装置
    であって、前記繊維質積層体中の第１の層は、試験され
    る前記抗体と免疫学的に反応して保護酵素結合抗原−抗
    体・複合体を生成し得る酵素結合抗原を含有しており；
    前記繊維質積層体の第２の層は、前記の第１の層で反応
    しなかった酵素結合抗原と免疫学的に反応し得る該第２
    の層に結合され固定された抗体を含有しており；且つ前
    記繊維質積層体の第３の層は前記の酵素結合抗原−抗体
    ・複合体と反応して前記の試料液中の抗体の存在を示す
    発色反応を生じうる物質を含有していることを特徴とす
    る、試料液中の抗体の存在を検出する装置。 ４、試料液中の抗体の存在を検出する方法において、第
    １の層と第２の層と第３の層とを有してなる繊維質積層
    体を有する装置であって、前記の第１の層は、試験され
    る前記抗体と免疫学的に反応して保護酵素結合抗原−抗
    体・複合体を生成し得る酵素結合抗原を含有しており；
    前記の第２の層は、前記の第１の層で反応しなかった酵
    素結合抗原と免疫学的に反応し得る該第２の層に結合さ
    れ固定された抗体を含有しており；且つ前記の第３の層
    は前記の酵素結合抗原−抗体・複合体と反応して前記の
    試料液中の抗体の存在を示す発色反応を生じうる物質を
    含有しているものである前記装置の前記の第１の層に、
    抗体の存在を試験すべき液体を接触させる工程と、前記
    の液体を前記の繊維質装置に浸透させる工程と、前記の
    第３の層における発色変化の有無を観察して、試験した
    前記試料液中の抗体の有無を検出する工程と、からなる
    ことを特徴とする、試料液中の抗原を検出する方法。
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