JPH11332565A - 植物のユビキチンプロモ―タ―系 - Google Patents
植物のユビキチンプロモ―タ―系Info
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- JPH11332565A JPH11332565A JP11132055A JP13205599A JPH11332565A JP H11332565 A JPH11332565 A JP H11332565A JP 11132055 A JP11132055 A JP 11132055A JP 13205599 A JP13205599 A JP 13205599A JP H11332565 A JPH11332565 A JP H11332565A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8237—Externally regulated expression systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
Abstract
(57)【要約】
【課題】 植物組織中で構造遺伝子を選択的に発現させ
ることができる調節プロモーター系からなる新規ＤＮＡ
セグメントおよび構築物とを提供すること。 【解決手段】 植物ユビキチン調節システムを含む２ｋ
ｂ以下のＤＮＡ配列であって、該調節システムが熱ショ
ック要素およびイントロンを含む、ＤＮＡ配列。
ることができる調節プロモーター系からなる新規ＤＮＡ
セグメントおよび構築物とを提供すること。 【解決手段】 植物ユビキチン調節システムを含む２ｋ
ｂ以下のＤＮＡ配列であって、該調節システムが熱ショ
ック要素およびイントロンを含む、ＤＮＡ配列。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は，植物の分子生物学
の分野に属し，組換えＤＮＡ技術による植物の遺伝子工
学に関する。植物のユビキチン遺伝子の上流の転写され
ない領域由来のＤＮＡセグメントの同定と特徴とについ
て述べる。このセグメントは，単子葉植物と双子葉植物
の両者由来の組換え体ＤＮＡを有する組織中の，近くの
発現可能な植物遺伝子の転写を開始させ駆動することが
できる。ここに記載したＤＮＡセグメントは，植物組織
の所望の構造遺伝子を選択して発現し調節することがで
きる。
の分野に属し，組換えＤＮＡ技術による植物の遺伝子工
学に関する。植物のユビキチン遺伝子の上流の転写され
ない領域由来のＤＮＡセグメントの同定と特徴とについ
て述べる。このセグメントは，単子葉植物と双子葉植物
の両者由来の組換え体ＤＮＡを有する組織中の，近くの
発現可能な植物遺伝子の転写を開始させ駆動することが
できる。ここに記載したＤＮＡセグメントは，植物組織
の所望の構造遺伝子を選択して発現し調節することがで
きる。
【０００２】
【従来の技術】ユビキチンは，真核細胞中に見い出され
る８．５ｋＤａのタンパクであり，遊離のモノマー状態
か，または種々の細胞質タンパク，核タンパク，もしく
は膜タンパクと共有結合している。このタンパクは，７
６個のアミノ酸残基を有し，そのアミノ酸の配列は，異
常に高度に保護されている。ユビキチンの配列は，ヒ
ト，ウシ，チチュウカイミバエ，アフリカツメガエルお
よびニワトリのような多種類の種の間で同一である〔ユ
ー ボンドおよびエム シュレジンガー（Ｕ．Ｂｏｎｄ
ａｎｄ Ｍ．Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ），Ｍｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５巻， ９４９−９５６頁， １９
８５年〕。酵母とヒトのユビキチンは，３個の異なるア
ミノ酸だけが違っている〔ケイ．オズケイナックら
（Ｋ．Ｏｚｋａｙｎａｋ ｅｔ ａｌ），Ｎａｔｕｒ
ｅ，３１２巻，６６３−６６６頁，１９８４年〕。他
方，植物のユビキチンは，酵母のユビキチンと２個のア
ミノ酸が異なっている。配列内のこの２個または３個の
アミノ酸の相違によって，動物，植物および酵母の少な
くとも３種のユビキチンがあることは明らかである。
る８．５ｋＤａのタンパクであり，遊離のモノマー状態
か，または種々の細胞質タンパク，核タンパク，もしく
は膜タンパクと共有結合している。このタンパクは，７
６個のアミノ酸残基を有し，そのアミノ酸の配列は，異
常に高度に保護されている。ユビキチンの配列は，ヒ
ト，ウシ，チチュウカイミバエ，アフリカツメガエルお
よびニワトリのような多種類の種の間で同一である〔ユ
ー ボンドおよびエム シュレジンガー（Ｕ．Ｂｏｎｄ
ａｎｄ Ｍ．Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ），Ｍｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５巻， ９４９−９５６頁， １９
８５年〕。酵母とヒトのユビキチンは，３個の異なるア
ミノ酸だけが違っている〔ケイ．オズケイナックら
（Ｋ．Ｏｚｋａｙｎａｋ ｅｔ ａｌ），Ｎａｔｕｒ
ｅ，３１２巻，６６３−６６６頁，１９８４年〕。他
方，植物のユビキチンは，酵母のユビキチンと２個のア
ミノ酸が異なっている。配列内のこの２個または３個の
アミノ酸の相違によって，動物，植物および酵母の少な
くとも３種のユビキチンがあることは明らかである。
【０００３】ユビキチンは，３つの主要な細胞の区画，
つまり細胞質膜，細胞質および核，で見出されている。
このタンパクは，細胞内タンパクのＡＴＰ依存性分解，
つまり，損傷したかまたは異常なタンパク，および半減
期が短かい正常なタンパクを細胞から除去する非リソゾ
ーム経路において，必要とされる〔エイ ハーシュコら
（Ａ．Ｈｅｒｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ），Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１巻，１６１９−
１６２３頁，１９８４年；ディ ファインリィら（Ｄ．
Ｆｉｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ），Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏ
ｌ．Ｓｃｉ．１０巻，３４３−３４７頁，１９８５
年〕。ユビキチンは，標的タンパクに結合し，これに分
解のための標識をつける。その共有結合は，ユビキチン
のカルボキシル末端（グリシン）と標的タンパク中のリ
シル側鎖のε−アミノ基とのイソペプチド結合による。
つまり細胞質膜，細胞質および核，で見出されている。
このタンパクは，細胞内タンパクのＡＴＰ依存性分解，
つまり，損傷したかまたは異常なタンパク，および半減
期が短かい正常なタンパクを細胞から除去する非リソゾ
ーム経路において，必要とされる〔エイ ハーシュコら
（Ａ．Ｈｅｒｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ），Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１巻，１６１９−
１６２３頁，１９８４年；ディ ファインリィら（Ｄ．
Ｆｉｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ），Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏ
ｌ．Ｓｃｉ．１０巻，３４３−３４７頁，１９８５
年〕。ユビキチンは，標的タンパクに結合し，これに分
解のための標識をつける。その共有結合は，ユビキチン
のカルボキシル末端（グリシン）と標的タンパク中のリ
シル側鎖のε−アミノ基とのイソペプチド結合による。
【０００４】ユビキチンは，また，熱ショック，および
金属（亜ヒ酸塩）の濃度の増大のようなストレスに対す
る細胞の反応で１つの役割をはたす〔ディ．ファインレ
イら（Ｄ．Ｆｉｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ）前出，１９８５
年〕。ほとんどの生きている細胞は，ストレス（例え
ば，正常な生理的温度より数度高い温度，または重金
属，エタノール，オキシダントおよびアミノ酸類似体の
高濃度への暴露）に反応して，小さなセットの遺伝子を
活性化して，選択的に，ストレスタンパク（または熱シ
ョックタンパクともよばれる）を合成する。ほとんどの
生物において，このようなストレスタンパクは，８９，
７０および２３ｋＤａの分子量のサブユニットを有する
ことが見い出された（ユー ボンドおよびエム シュレ
ジンガー，前出，１９８５年）。ユビキチンは，約８．
５ｋＤａの分子量を有し，これもまたストレスに反応す
る。その理由は，異なる種（酵母，マウス，アレチネズ
ミおよびニワトリの胚線維芽細胞）では，ユビキチンｍ
ＲＮＡおよびユビキチンタンパクのレベルが，ストレス
条件が変化するために増大するからである。
金属（亜ヒ酸塩）の濃度の増大のようなストレスに対す
る細胞の反応で１つの役割をはたす〔ディ．ファインレ
イら（Ｄ．Ｆｉｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ）前出，１９８５
年〕。ほとんどの生きている細胞は，ストレス（例え
ば，正常な生理的温度より数度高い温度，または重金
属，エタノール，オキシダントおよびアミノ酸類似体の
高濃度への暴露）に反応して，小さなセットの遺伝子を
活性化して，選択的に，ストレスタンパク（または熱シ
ョックタンパクともよばれる）を合成する。ほとんどの
生物において，このようなストレスタンパクは，８９，
７０および２３ｋＤａの分子量のサブユニットを有する
ことが見い出された（ユー ボンドおよびエム シュレ
ジンガー，前出，１９８５年）。ユビキチンは，約８．
５ｋＤａの分子量を有し，これもまたストレスに反応す
る。その理由は，異なる種（酵母，マウス，アレチネズ
ミおよびニワトリの胚線維芽細胞）では，ユビキチンｍ
ＲＮＡおよびユビキチンタンパクのレベルが，ストレス
条件が変化するために増大するからである。
【０００５】真核系では，遺伝子の発現は，プロモータ
ーと呼ばれるＤＮＡ配列の領域で誘導される。一般に，
プロモーターは，ＤＮＡの一部とみなされ，コドン領域
より上流にあり，ＲＮＡポリメラーゼIIの結合部位を有
し，そして，ＤＮＡの転写を開始する。プロモーター領
域はまた，遺伝子発現の調節遺伝子として働く他の要素
をも含有する。これらは，約−３０の近傍にＴＡＴＡボ
ックスの共通配列を有し，また転写開始部位，すなわち
キャップ部位に対して５’側の約−７５ｂｐの位置にＣ
ＡＡＴボックスの共通配列を持っている場合が多く，こ
れは＋１と定義される〔アール ブリースナッハおよび
ピー チャンボン（Ｒ．Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ ａｎｄ
Ｐ．Ｃｈａｍｂｏｎ），Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．５０巻，３４９−３８３頁，１９８１年；ジェイ
メシングら（Ｊ．Ｍｅｓｓｉｎｇ ｅｔ ａ１），Ｇ
ｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｐｌａ
ｎｔｓ，ティ コスゲ，シー ピー．メレディスおよび
エイ ホレンダー（Ｔ．Ｋｏｓｕｇｅ，Ｃ．Ｐ．Ｍｅｒ
ｅｄｉｔｈ ａｎｄ Ａ．Ｈｏ１１ａｅｎｄｅｒ）編，
２１１−２２７頁，１９８３年〕。植物では，ＣＡＡＴ
ボックスは，ＡＧＧＡボックスで置換されることがある
（ジェイ メシングら，１９８３年，前出）。存在する
他の調節要素は，照明もしくは栄養入手可能性のような
環境刺激，または熱ショック，嫌気生活もしくは重金属
の存在のような不利な条件に応答して遺伝子の発現に影
響する要素である。さらに，発育中もしくは組織特異的
な様式で，遺伝子発現を制御するＤＮＡ配列が存在す
る。見出されているその他の調節要素は，エンハンサー
（動物系中）もしくは上流の活性化配列（酵母中）であ
り，これら調節要素は，近傍の遺伝子の全発現を，その
近傍の遺伝子に対する位置や方向とは無関係に，高める
働きを有する。動物のエンハンサーコアの共通配列，
５’−ＧＧＴＧＴＧＧＡＡＡ（またはＴＴＴ）Ｇ−３’
と相同の配列は，植物について発表されている。例え
ば，転写開始部位に対して約−１８０の位置の豆レグミ
ン遺伝子中に見出されており〔ジー ライセットら
（Ｇ．Ｌｙｃｅｔｔｅｔ ａ１），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１２巻，４４９３−４５０６頁，
１９８４年〕，そして，転写開始部位からそれぞれ約−
２００および−１７０ｂｐの位置のトウモロコシのＡｄ
ｈ１およびＡｄｈ２の遺伝子にも見出されている。一般
に，プロモーターは，対応する遺伝子のコドン領域の開
始点に対して５’側すなわち上流に見出され，このプロ
モーター領域はすべての補助調節要素を有し，１０〜１
０００またはそれ以上のヌクレオチドを有し得る。遺伝
子の発現を制御する調節要素の中で，熱ショック要素
は，おそらく最も広く研究されている要素である。熱シ
ョックに対して細胞が例外なく反応するということは，
ほとんど１０年前から知られているが，ストレスを与え
られた細胞によって選択的に合成される熱ショックタン
パクの機能については，まだほとんど知られていない。
ストレスタンパク合成の誘発は，転写レベルで起こり，
その反応は，細菌，真菌，昆虫および哺乳類については
類似していることが知られている〔イー．クレイグ
（Ｅ．Ｃｒａｉｇ），ＣＴＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．，１８巻，２３９−２８０頁，１９８５
年〕。ストレスに応答して，従来の熱ショックタンパク
が合成され蓄積されるのに加えて，ストレスが加えられ
た細胞はまた，プロテアーゼ類とユビキチンとを合成す
る。イー コリ内では，ＡＴＰ依存性タンパク加水分解
活性を有する９４ｋＤａの酵素が，発現が熱ショックレ
ギュロンの制御下にある１ｏｎ（ｃａｐＲ）遺伝子でコ
ードされている〔イー オズケイナックら（Ｅ．Ｏｚｋ
ａｙｎａｋ ｅｔ ａｌ），Ｎａｔｕｒｅ，３１２巻，
６６３〜６６６頁，１９８４年〕。ニワトリの胚線維芽
細胞では，ユビキチンｍＲＮＡのレベルは，熱ショック
後もしくは５０μＭの亜ヒ酸塩に暴露後には５倍に増大
した〔ユー ボンドら（Ｕ．Ｂｏｎｄ ｅｔ ａ１），
Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５巻，９４９〜９５６
頁，１９８５年〕。各ｍＲＮＡは，縦方向に繰返した同
一のポリペプチドを有し，このｍＲＮＡは，ポリユビキ
チン分子として翻訳する際多重ユビキチン分子を生じ，
遺伝子情報を増幅する特有の機構を与える。ユビキチン
ｍＲＮＡの高レベルは熱ショック後の回復時は持続せ
ず，このことは，ストレスに反応している間の遊離ユビ
キチンに対する過渡的な役割を示している。
ーと呼ばれるＤＮＡ配列の領域で誘導される。一般に，
プロモーターは，ＤＮＡの一部とみなされ，コドン領域
より上流にあり，ＲＮＡポリメラーゼIIの結合部位を有
し，そして，ＤＮＡの転写を開始する。プロモーター領
域はまた，遺伝子発現の調節遺伝子として働く他の要素
をも含有する。これらは，約−３０の近傍にＴＡＴＡボ
ックスの共通配列を有し，また転写開始部位，すなわち
キャップ部位に対して５’側の約−７５ｂｐの位置にＣ
ＡＡＴボックスの共通配列を持っている場合が多く，こ
れは＋１と定義される〔アール ブリースナッハおよび
ピー チャンボン（Ｒ．Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ ａｎｄ
Ｐ．Ｃｈａｍｂｏｎ），Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．５０巻，３４９−３８３頁，１９８１年；ジェイ
メシングら（Ｊ．Ｍｅｓｓｉｎｇ ｅｔ ａ１），Ｇ
ｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｐｌａ
ｎｔｓ，ティ コスゲ，シー ピー．メレディスおよび
エイ ホレンダー（Ｔ．Ｋｏｓｕｇｅ，Ｃ．Ｐ．Ｍｅｒ
ｅｄｉｔｈ ａｎｄ Ａ．Ｈｏ１１ａｅｎｄｅｒ）編，
２１１−２２７頁，１９８３年〕。植物では，ＣＡＡＴ
ボックスは，ＡＧＧＡボックスで置換されることがある
（ジェイ メシングら，１９８３年，前出）。存在する
他の調節要素は，照明もしくは栄養入手可能性のような
環境刺激，または熱ショック，嫌気生活もしくは重金属
の存在のような不利な条件に応答して遺伝子の発現に影
響する要素である。さらに，発育中もしくは組織特異的
な様式で，遺伝子発現を制御するＤＮＡ配列が存在す
る。見出されているその他の調節要素は，エンハンサー
（動物系中）もしくは上流の活性化配列（酵母中）であ
り，これら調節要素は，近傍の遺伝子の全発現を，その
近傍の遺伝子に対する位置や方向とは無関係に，高める
働きを有する。動物のエンハンサーコアの共通配列，
５’−ＧＧＴＧＴＧＧＡＡＡ（またはＴＴＴ）Ｇ−３’
と相同の配列は，植物について発表されている。例え
ば，転写開始部位に対して約−１８０の位置の豆レグミ
ン遺伝子中に見出されており〔ジー ライセットら
（Ｇ．Ｌｙｃｅｔｔｅｔ ａ１），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１２巻，４４９３−４５０６頁，
１９８４年〕，そして，転写開始部位からそれぞれ約−
２００および−１７０ｂｐの位置のトウモロコシのＡｄ
ｈ１およびＡｄｈ２の遺伝子にも見出されている。一般
に，プロモーターは，対応する遺伝子のコドン領域の開
始点に対して５’側すなわち上流に見出され，このプロ
モーター領域はすべての補助調節要素を有し，１０〜１
０００またはそれ以上のヌクレオチドを有し得る。遺伝
子の発現を制御する調節要素の中で，熱ショック要素
は，おそらく最も広く研究されている要素である。熱シ
ョックに対して細胞が例外なく反応するということは，
ほとんど１０年前から知られているが，ストレスを与え
られた細胞によって選択的に合成される熱ショックタン
パクの機能については，まだほとんど知られていない。
ストレスタンパク合成の誘発は，転写レベルで起こり，
その反応は，細菌，真菌，昆虫および哺乳類については
類似していることが知られている〔イー．クレイグ
（Ｅ．Ｃｒａｉｇ），ＣＴＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．，１８巻，２３９−２８０頁，１９８５
年〕。ストレスに応答して，従来の熱ショックタンパク
が合成され蓄積されるのに加えて，ストレスが加えられ
た細胞はまた，プロテアーゼ類とユビキチンとを合成す
る。イー コリ内では，ＡＴＰ依存性タンパク加水分解
活性を有する９４ｋＤａの酵素が，発現が熱ショックレ
ギュロンの制御下にある１ｏｎ（ｃａｐＲ）遺伝子でコ
ードされている〔イー オズケイナックら（Ｅ．Ｏｚｋ
ａｙｎａｋ ｅｔ ａｌ），Ｎａｔｕｒｅ，３１２巻，
６６３〜６６６頁，１９８４年〕。ニワトリの胚線維芽
細胞では，ユビキチンｍＲＮＡのレベルは，熱ショック
後もしくは５０μＭの亜ヒ酸塩に暴露後には５倍に増大
した〔ユー ボンドら（Ｕ．Ｂｏｎｄ ｅｔ ａ１），
Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５巻，９４９〜９５６
頁，１９８５年〕。各ｍＲＮＡは，縦方向に繰返した同
一のポリペプチドを有し，このｍＲＮＡは，ポリユビキ
チン分子として翻訳する際多重ユビキチン分子を生じ，
遺伝子情報を増幅する特有の機構を与える。ユビキチン
ｍＲＮＡの高レベルは熱ショック後の回復時は持続せ
ず，このことは，ストレスに反応している間の遊離ユビ
キチンに対する過渡的な役割を示している。
【０００６】熱ショックタンパク遺伝子の活性化を引き
起こす代謝ストレスは，通常の機構で作用するとみなさ
れている〔ジェイ アナサンら（Ｊ．Ａｎａｔｈａｎ
ｅｔａ１），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３２巻，５２２−５２
４頁，１９８６年〕。熱ショック遺伝子を活性化する代
謝ストレスは，細胞内タンパクの変性を起こすが，異常
タンパクが蓄積して，熱ショック遺伝子を活性化するシ
グナルとして働く。異常タンパクを分解すべき標的とす
るユビキチンの役割と，種々のタンパク分解酵素の役割
とは，熱ショックタンパク遺伝子の調節のこのようなモ
デルと適合する。
起こす代謝ストレスは，通常の機構で作用するとみなさ
れている〔ジェイ アナサンら（Ｊ．Ａｎａｔｈａｎ
ｅｔａ１），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３２巻，５２２−５２
４頁，１９８６年〕。熱ショック遺伝子を活性化する代
謝ストレスは，細胞内タンパクの変性を起こすが，異常
タンパクが蓄積して，熱ショック遺伝子を活性化するシ
グナルとして働く。異常タンパクを分解すべき標的とす
るユビキチンの役割と，種々のタンパク分解酵素の役割
とは，熱ショックタンパク遺伝子の調節のこのようなモ
デルと適合する。
【０００７】熱ショック遺伝子に関する初期の研究のほ
とんどは，ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）
種で行われた。特に，ショウジョウバエｈｓｐ７０遺伝
子は組換えの研究に広く使用された。相同系において，
ショウジョウバエｈｓｐ７０遺伝子が，イー コリ β
−ガラクトシダーゼ構造遺伝子と融合され，その雑種遺
伝子の活性が，受容体のショウジョウバエ中の５つの常
在性ｈｓｐ７０熱ショック遺伝子から区別された。ショ
ウジョウバエの熱ショック遺伝子はまた，非相同系，例
えばサルＣＯＳ細胞およびマウス細胞にも導入された
〔エイチ ペルハム（Ｈ．Ｐｅｌｈａｍ），Ｃｅｌｌ，
３０巻，５１７−５２８頁，１９８２年〕。熱ショック
による調節は，ショウジョウバエ生殖系列に組み込まれ
た雑種ｈｓｐ７０−ｌａｃＺ遺伝子において観察され
た。この遺伝子には，ｈｓｐ７０構造遺伝子の中央部に
７ｋｂのイー コリ β−ガラクトシダーゼＤＮＡ断片
が挿入されている。その形質転換体で得られたガラクト
シダーゼ活性は，熱ショックによって調節されることが
わかった〔ジェイ リスら（Ｊ．Ｌｉｓ ｅｔ ａ
ｌ），Ｃｅｌｌ ３５巻，４０３〜４１０頁，１９８３
年〕。
とんどは，ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）
種で行われた。特に，ショウジョウバエｈｓｐ７０遺伝
子は組換えの研究に広く使用された。相同系において，
ショウジョウバエｈｓｐ７０遺伝子が，イー コリ β
−ガラクトシダーゼ構造遺伝子と融合され，その雑種遺
伝子の活性が，受容体のショウジョウバエ中の５つの常
在性ｈｓｐ７０熱ショック遺伝子から区別された。ショ
ウジョウバエの熱ショック遺伝子はまた，非相同系，例
えばサルＣＯＳ細胞およびマウス細胞にも導入された
〔エイチ ペルハム（Ｈ．Ｐｅｌｈａｍ），Ｃｅｌｌ，
３０巻，５１７−５２８頁，１９８２年〕。熱ショック
による調節は，ショウジョウバエ生殖系列に組み込まれ
た雑種ｈｓｐ７０−ｌａｃＺ遺伝子において観察され
た。この遺伝子には，ｈｓｐ７０構造遺伝子の中央部に
７ｋｂのイー コリ β−ガラクトシダーゼＤＮＡ断片
が挿入されている。その形質転換体で得られたガラクト
シダーゼ活性は，熱ショックによって調節されることが
わかった〔ジェイ リスら（Ｊ．Ｌｉｓ ｅｔ ａ
ｌ），Ｃｅｌｌ ３５巻，４０３〜４１０頁，１９８３
年〕。
【０００８】熱ショック反応を与えるＤＮＡ配列は，シ
ョウジョウバエｈｓｐ７０熱ショックプロモーターに欠
失変異を作って分析することによって５’−ＣＴＧＧＡ
ＡＴ ＴＴＣＴＡＧＡ−３’であると同定された〔エイチ
ペルハムら，ＨｅａｔＳｈｏｃｋ Ｆｒｏｍ Ｂａｃ
ｔｅｒｉａ ｔｏ Ｍａｎ，コールドスプリングハーバ
ー ラボラトリー，４３−４８頁，１９８２年〕。この
ＤＮＡ配列は遺伝子の−６６，〜−４７の領域，すなわ
ちＴＡＴＡボックスの約２６塩基上流に位置している。
この要素の化学的に合成されたコピーは，ヘルペスウイ
ルス チミジンキナーゼ遺伝子のＴＡＴＡボックスの上
流に，通常の上流のプロモーター要素の代わりに配置す
ると，サルＣＯＳ細胞とアフリカツメガエルの卵母細胞
のチミジンキナーゼ遺伝子に，充分に，熱誘発性を与え
るということが証明された（チミジンキナーゼ遺伝子
は，通常，熱誘発性ではない）これらの熱ショック配列
は，熱ショックタンパクを誘発させる熱ショック特異的
転写因子と相互作用する〔シー パーカーら（Ｃ．Ｐａ
ｒｋｅｒ ｅｔ ａ１），Ｃｅｌｌ，３７巻，２７３〜
２８３頁，１９８４年〕。熱ショック遺伝子の誘発物質
は，細胞内の熱ショックタンパクの濃度を変化（減少）
させて，熱ショック遺伝子の転写と翻訳とを制御する因
子であり得る。
ョウジョウバエｈｓｐ７０熱ショックプロモーターに欠
失変異を作って分析することによって５’−ＣＴＧＧＡ
ＡＴ ＴＴＣＴＡＧＡ−３’であると同定された〔エイチ
ペルハムら，ＨｅａｔＳｈｏｃｋ Ｆｒｏｍ Ｂａｃ
ｔｅｒｉａ ｔｏ Ｍａｎ，コールドスプリングハーバ
ー ラボラトリー，４３−４８頁，１９８２年〕。この
ＤＮＡ配列は遺伝子の−６６，〜−４７の領域，すなわ
ちＴＡＴＡボックスの約２６塩基上流に位置している。
この要素の化学的に合成されたコピーは，ヘルペスウイ
ルス チミジンキナーゼ遺伝子のＴＡＴＡボックスの上
流に，通常の上流のプロモーター要素の代わりに配置す
ると，サルＣＯＳ細胞とアフリカツメガエルの卵母細胞
のチミジンキナーゼ遺伝子に，充分に，熱誘発性を与え
るということが証明された（チミジンキナーゼ遺伝子
は，通常，熱誘発性ではない）これらの熱ショック配列
は，熱ショックタンパクを誘発させる熱ショック特異的
転写因子と相互作用する〔シー パーカーら（Ｃ．Ｐａ
ｒｋｅｒ ｅｔ ａ１），Ｃｅｌｌ，３７巻，２７３〜
２８３頁，１９８４年〕。熱ショック遺伝子の誘発物質
は，細胞内の熱ショックタンパクの濃度を変化（減少）
させて，熱ショック遺伝子の転写と翻訳とを制御する因
子であり得る。
【０００９】高等植物では，ストレス反応が，大豆，エ
ンドウ豆，キビ，トウモロコシ，ヒマワリ，ワタ，およ
び小麦内で熱ショックに反応してタンパクの合成が増大
することによって証明された〔ティー バーネットら
（Ｔ．Ｂａｒｎｅｔｔ ｅｔａｌ），Ｄｅｖ．Ｇｅｎｅ
ｔ．１巻，３３１−３４０頁，１９８０年；ジェイキイ
ら（Ｊ．Ｋｅｙ ｅｔ ａｌ）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８巻，３５２６〜３５３０
頁，１９８１年〕。植物の種によって見い出される熱シ
ョック反応の主な相違は，次のとおりである。（ａ）ス
トレスに反応して合成される全タンパクの量；（ｂ）合
成される各種タンパクの大きさの分布，；（ｃ）熱ショ
ックタンパクを誘発する最適温度；および（ｄ）致死
（切断点）温度〔ｌｅｔｈａｌ（ｂｒｅａｋｐｏｉｎ
ｔ）ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ〕である。高分子量のタン
パクは，種が異なっても電気泳動性が類似していること
がわかっている。低分子量（１５〜２７ｋＤａ）の熱シ
ョックタンパクは，種によって，電気泳動性の非相同性
が高分子量のものよりも大きい。植物においては，高分
子量タンパクは，ショウジョウバエ内で産生されるタン
パクと似ている。しかし，植物およびショウジョウバエ
の低分子量熱ショックタンパクの複雑性には著しい差が
ある。２２，３４，３６および２７ｋＤａの４つの熱シ
ョックタンパクがショウジョウバエ内で合成されるが，
大豆は，１５〜１８ｋＤａの範囲の分子量を有する２０
種を越える熱ショックタンパクを産生する。大豆の低分
子量タンパクの遺伝子は，熱ショック条件下で，最も活
発に発現され，適切に調節される遺伝子である〔エフシ
ョッフルら（Ｆ．Ｓｃｈｏｆｆｌ ｅｔ ａｌ），Ｊ．
Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１巻，３０１〜３１
４頁，１９８２年〕。
ンドウ豆，キビ，トウモロコシ，ヒマワリ，ワタ，およ
び小麦内で熱ショックに反応してタンパクの合成が増大
することによって証明された〔ティー バーネットら
（Ｔ．Ｂａｒｎｅｔｔ ｅｔａｌ），Ｄｅｖ．Ｇｅｎｅ
ｔ．１巻，３３１−３４０頁，１９８０年；ジェイキイ
ら（Ｊ．Ｋｅｙ ｅｔ ａｌ）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８巻，３５２６〜３５３０
頁，１９８１年〕。植物の種によって見い出される熱シ
ョック反応の主な相違は，次のとおりである。（ａ）ス
トレスに反応して合成される全タンパクの量；（ｂ）合
成される各種タンパクの大きさの分布，；（ｃ）熱ショ
ックタンパクを誘発する最適温度；および（ｄ）致死
（切断点）温度〔ｌｅｔｈａｌ（ｂｒｅａｋｐｏｉｎ
ｔ）ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ〕である。高分子量のタン
パクは，種が異なっても電気泳動性が類似していること
がわかっている。低分子量（１５〜２７ｋＤａ）の熱シ
ョックタンパクは，種によって，電気泳動性の非相同性
が高分子量のものよりも大きい。植物においては，高分
子量タンパクは，ショウジョウバエ内で産生されるタン
パクと似ている。しかし，植物およびショウジョウバエ
の低分子量熱ショックタンパクの複雑性には著しい差が
ある。２２，３４，３６および２７ｋＤａの４つの熱シ
ョックタンパクがショウジョウバエ内で合成されるが，
大豆は，１５〜１８ｋＤａの範囲の分子量を有する２０
種を越える熱ショックタンパクを産生する。大豆の低分
子量タンパクの遺伝子は，熱ショック条件下で，最も活
発に発現され，適切に調節される遺伝子である〔エフシ
ョッフルら（Ｆ．Ｓｃｈｏｆｆｌ ｅｔ ａｌ），Ｊ．
Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１巻，３０１〜３１
４頁，１９８２年〕。
【００１０】キイら（Ｋｅｙ ｅｔ ａｌ）（特願昭６
０−７０１２７号，１９８５年４月１２日出願）は，植
物の熱ショック遺伝子のプロモーター領域を研究した。
４つの大豆熱ショック遺伝子（１５〜１８ｋＤａの熱シ
ョックタンパクをコードする３つの遺伝子および，１
７．３ｋＤａの熱ショックタンパクをコードする１つの
遺伝子）がクローン化され配列が決定された。４つの熱
ショック遺伝子のコード配列とそれに隣接する配列が決
定された。これらの４つの遺伝子のプロモーター領域
が，サブクローン化され，Ｔ−ＤＮＡシャトルベクター
に連結され，アグロバクテリウム ツメファシエンス
（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）に形質転換された。１５〜１８ｋＤａのタンパクを
コードする大豆熱ショック遺伝子の組換え体クローンの
１つは，４６２個のヌクレオチドの読取り枠と，ＡＴＧ
翻訳開始コドンの上流の２９１個のヌクレオチドのプロ
モーター領域とを有していた。このプロモーターは，Ｔ
ＡＴＡボックス，ＣＡＡＴボックス，転写開始部位，お
よび５’−ＣＴ ＧＡＡ ＴＴＣ ＡＧ−３’の配列を
有するＡＴＧ翻訳開始コドンの上流に熱ショック共通配
列１３１〜１４４のヌクレオチドを備えている。４つの
クローンの内３つだけがこのプロモーター領域内でかな
りの相同性を示したが，４つのクローン全部の熱ショッ
ク共通配列は，著しく類似していた。４つの大豆熱ショ
ック遺伝子の，コード配列，上流のプロモーター領域お
よび下流の隣接領域は，ショウジョウバエ熱ショック遺
伝子の対応する領域とはほとんど類似していなかったこ
とは重要である。ショウジョウバエおよび大豆の熱ショ
ック遺伝子のプロモーター領域の共通配列は類似してい
るが，大豆熱ショック遺伝子のプロモーター領域は，シ
ョウジョウバエ遺伝子の特徴である逆方向反復塩基配列
をもっていない。
０−７０１２７号，１９８５年４月１２日出願）は，植
物の熱ショック遺伝子のプロモーター領域を研究した。
４つの大豆熱ショック遺伝子（１５〜１８ｋＤａの熱シ
ョックタンパクをコードする３つの遺伝子および，１
７．３ｋＤａの熱ショックタンパクをコードする１つの
遺伝子）がクローン化され配列が決定された。４つの熱
ショック遺伝子のコード配列とそれに隣接する配列が決
定された。これらの４つの遺伝子のプロモーター領域
が，サブクローン化され，Ｔ−ＤＮＡシャトルベクター
に連結され，アグロバクテリウム ツメファシエンス
（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）に形質転換された。１５〜１８ｋＤａのタンパクを
コードする大豆熱ショック遺伝子の組換え体クローンの
１つは，４６２個のヌクレオチドの読取り枠と，ＡＴＧ
翻訳開始コドンの上流の２９１個のヌクレオチドのプロ
モーター領域とを有していた。このプロモーターは，Ｔ
ＡＴＡボックス，ＣＡＡＴボックス，転写開始部位，お
よび５’−ＣＴ ＧＡＡ ＴＴＣ ＡＧ−３’の配列を
有するＡＴＧ翻訳開始コドンの上流に熱ショック共通配
列１３１〜１４４のヌクレオチドを備えている。４つの
クローンの内３つだけがこのプロモーター領域内でかな
りの相同性を示したが，４つのクローン全部の熱ショッ
ク共通配列は，著しく類似していた。４つの大豆熱ショ
ック遺伝子の，コード配列，上流のプロモーター領域お
よび下流の隣接領域は，ショウジョウバエ熱ショック遺
伝子の対応する領域とはほとんど類似していなかったこ
とは重要である。ショウジョウバエおよび大豆の熱ショ
ック遺伝子のプロモーター領域の共通配列は類似してい
るが，大豆熱ショック遺伝子のプロモーター領域は，シ
ョウジョウバエ遺伝子の特徴である逆方向反復塩基配列
をもっていない。
【００１１】大豆熱ショック遺伝子のプロモーター領域
は，大豆遺伝子と外来遺伝子（大豆中には通常見られな
い遺伝子）とを活性化するのに用いられ，ストレスによ
る反応の調節が示された〔キイら，特願昭６０−７９１
２７号，１９８５年４月１２日出願〕。このプロモータ
ーが，転写開始点から下流に延びる６５ｋｂのＤＮＡ断
片として大豆ＳＢ１３熱ショック遺伝子から単離され
た。これには翻訳されないリーダー配列の主要部分が含
まれているが，翻訳の開始コドンは含まれていない。β
−ガラクトシダーゼ遺伝子は，Ａ．ツメファシエンス内
に存在する安定形のＴｉプラスミドのＴ−ＤＮＡ中の熱
ショックプロモーターの制御下におかれており，次いで
植物もしくは植物細胞培養物に移入される。ＤＮＡ移入
が起こったことは，５−ブロモ−４−クロロ−３−イン
ドリル−β−Ｄガラクトシダーゼ基質分子を含有する培
地内で熱処理後に青色を呈するβ−ガラクトシダーゼ遺
伝子の発現によって確識された〔エム ローズら（Ｍ．
Ｒｏｓｅ ｅｔ ａｌ），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７８巻，２４６０−２４６４頁，１
９８１年〕。
は，大豆遺伝子と外来遺伝子（大豆中には通常見られな
い遺伝子）とを活性化するのに用いられ，ストレスによ
る反応の調節が示された〔キイら，特願昭６０−７９１
２７号，１９８５年４月１２日出願〕。このプロモータ
ーが，転写開始点から下流に延びる６５ｋｂのＤＮＡ断
片として大豆ＳＢ１３熱ショック遺伝子から単離され
た。これには翻訳されないリーダー配列の主要部分が含
まれているが，翻訳の開始コドンは含まれていない。β
−ガラクトシダーゼ遺伝子は，Ａ．ツメファシエンス内
に存在する安定形のＴｉプラスミドのＴ−ＤＮＡ中の熱
ショックプロモーターの制御下におかれており，次いで
植物もしくは植物細胞培養物に移入される。ＤＮＡ移入
が起こったことは，５−ブロモ−４−クロロ−３−イン
ドリル−β−Ｄガラクトシダーゼ基質分子を含有する培
地内で熱処理後に青色を呈するβ−ガラクトシダーゼ遺
伝子の発現によって確識された〔エム ローズら（Ｍ．
Ｒｏｓｅ ｅｔ ａｌ），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７８巻，２４６０−２４６４頁，１
９８１年〕。
【００１２】１つの植物の種の遺伝子が種々の種での発
現について試験される，交差発現の実験によって，特異
的な機能の理解の範囲が広くなった。これらの実験で
は，自らのプロモーターの制御下にある遺伝子か，また
は異なるプロモーターもしくは非天然のプロモーターに
人工的に融合させた遺伝子を挿入することが示されてい
る。１９８３年にムライら（Ｍｕｒａｉ ｅｔ ａｌ）
は（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２２巻，４７６〜４８２頁），
ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ）の組織内でファセオ
ラス ブルガリス Ｌ．（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌ
ｇａｒｉｓ Ｌ．）由来のインゲン豆遺伝子を，次の２
つの条件下で発現させた：（ｉ）インゲン豆遺伝子がそ
れ自身のプロモーターの制御下にある場合；および（ｉ
ｉ）該遺伝子がスプライスされ，Ｔ−ＤＮＡプロモータ
ーの制御下にある場合。その後の実験で，その天然プロ
モーターの制御下にあるインゲン豆の構造遺伝子をタバ
コ内で発現させることができ，この非相同宿主（ｈｅｔ
ｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｈｏｓｔ）（タバコ）内の組織特
異的発現が本来の宿主（マメ）内のそれと類似している
ことがわかった〔シー セングプターゴパレンら（Ｃ．
Ｓｅｎｇｕｐｔａ−Ｇｏｐａｌｅｎ ｅｔ ａｌ），Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２
巻，３３２０〜３３２４頁，１９８５年〕。
現について試験される，交差発現の実験によって，特異
的な機能の理解の範囲が広くなった。これらの実験で
は，自らのプロモーターの制御下にある遺伝子か，また
は異なるプロモーターもしくは非天然のプロモーターに
人工的に融合させた遺伝子を挿入することが示されてい
る。１９８３年にムライら（Ｍｕｒａｉ ｅｔ ａｌ）
は（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２２巻，４７６〜４８２頁），
ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ）の組織内でファセオ
ラス ブルガリス Ｌ．（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌ
ｇａｒｉｓ Ｌ．）由来のインゲン豆遺伝子を，次の２
つの条件下で発現させた：（ｉ）インゲン豆遺伝子がそ
れ自身のプロモーターの制御下にある場合；および（ｉ
ｉ）該遺伝子がスプライスされ，Ｔ−ＤＮＡプロモータ
ーの制御下にある場合。その後の実験で，その天然プロ
モーターの制御下にあるインゲン豆の構造遺伝子をタバ
コ内で発現させることができ，この非相同宿主（ｈｅｔ
ｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｈｏｓｔ）（タバコ）内の組織特
異的発現が本来の宿主（マメ）内のそれと類似している
ことがわかった〔シー セングプターゴパレンら（Ｃ．
Ｓｅｎｇｕｐｔａ−Ｇｏｐａｌｅｎ ｅｔ ａｌ），Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２
巻，３３２０〜３３２４頁，１９８５年〕。
【００１３】その後の実験〔ジェイ ジョーンズら
（Ｊ．Ｊｏｎｅｓｅｔら），ＥＭＢＯＪ．４巻２４１１
〜２４１８頁，１９８５年〕で，オクトピン シンテタ
ーゼ遺伝子（ｏｃｓ）が，再生された形質転換相同（ｈ
ｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）植物（ペチュニア）と非相同（ｈ
ｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）植物（タバコ）内で発現する
ことが発表された。この研究で，ｏｓｃ遺伝子がペチュ
ニアのクロロフィルａ／ｂ結合タンパクのプロモーター
に融合された。交差発現が，ダブリュ ガーリイら
（Ｗ．Ｇｕｒｌｅｙ ｅｔ ａ１），Ｍｏｌ．Ｃｅｌ
ｌ．Ｂｉｏｌ．６巻，５５９−５６５頁，１９８６年；
およびキイら，特願昭６０−７９１２７号（１９８５年
４月１２日出願）に記載されている。後者には，それ自
身のプロモーターの制御下にある大豆熱ショック遺伝子
のヒマワリの腫瘍組織内での強い転写が報告されてい
る。この場合においては，機能活性は，正確な熱誘発反
応として測定された。
（Ｊ．Ｊｏｎｅｓｅｔら），ＥＭＢＯＪ．４巻２４１１
〜２４１８頁，１９８５年〕で，オクトピン シンテタ
ーゼ遺伝子（ｏｃｓ）が，再生された形質転換相同（ｈ
ｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）植物（ペチュニア）と非相同（ｈ
ｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）植物（タバコ）内で発現する
ことが発表された。この研究で，ｏｓｃ遺伝子がペチュ
ニアのクロロフィルａ／ｂ結合タンパクのプロモーター
に融合された。交差発現が，ダブリュ ガーリイら
（Ｗ．Ｇｕｒｌｅｙ ｅｔ ａ１），Ｍｏｌ．Ｃｅｌ
ｌ．Ｂｉｏｌ．６巻，５５９−５６５頁，１９８６年；
およびキイら，特願昭６０−７９１２７号（１９８５年
４月１２日出願）に記載されている。後者には，それ自
身のプロモーターの制御下にある大豆熱ショック遺伝子
のヒマワリの腫瘍組織内での強い転写が報告されてい
る。この場合においては，機能活性は，正確な熱誘発反
応として測定された。
【００１４】双子葉植物宿主中の単子葉植物プロモータ
ーから開始された転写の最初の情報は，マツケら（Ｍａ
ｔｚｋｅ ｅｔ ａｌ），ＥＭＢＯＪ．３巻，１５２５
−１５３１頁，１９８４年，により刊行された。これら
の研究者らは，トウモロコシゼインＺ４遺伝子をクロー
ン化し，Ｔｉ由来のベクターにこれを組み込み，そして
ヒマワリの小茎に導入した。得られたゼインｍＲＮＡは
次いで小麦細胞系内で翻訳することができたが，形質転
換されたヒマワリのカルス内では翻訳できなかった。
ーから開始された転写の最初の情報は，マツケら（Ｍａ
ｔｚｋｅ ｅｔ ａｌ），ＥＭＢＯＪ．３巻，１５２５
−１５３１頁，１９８４年，により刊行された。これら
の研究者らは，トウモロコシゼインＺ４遺伝子をクロー
ン化し，Ｔｉ由来のベクターにこれを組み込み，そして
ヒマワリの小茎に導入した。得られたゼインｍＲＮＡは
次いで小麦細胞系内で翻訳することができたが，形質転
換されたヒマワリのカルス内では翻訳できなかった。
【００１５】その後の研究で，主要クロロフィルａ／ｂ
結合タンパクをコードする小麦遺伝子ｗｈＡＢ １．６
が，Ｔ−ＤＮＡ含有ベクターにクローン化され，ペチュ
ニアおよびタバコの両方に形質転換された〔ジー ラン
パら（Ｇ．Ｌａｍｐｐａ ｅｔ ａｌ）Ｎａｔｕｒｅ，
３１６巻，７５０〜７５２頁，１９８５年〕。上記の単
子葉植物と双子植物の宿主の両方で発現が起こり，光誘
導性および組織特異的であることが決定された。さらに
最近の研究〔ロチェスターら（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ ｅ
ｔ ａｌ），ＥＭＢＯ Ｊ，５巻，４５１−４５８頁，
１９８６年〕では，遺伝子移入ペチュニア内でトウモロ
コシの熱ショックｈｓｐ ７０遺伝子が発現された。ト
ウモロコシｈｓｐ ７０ ｍＲＮＡは，熱ストレスにの
み反応して合成された。上記の３つの研究が，トランス
ジェニック双子葉植物中に単子葉植物の遺伝子を発現さ
せることに成功したことを記載した報告のすべてであ
る。しかし，トウモロコシのアルコール，デヒドロゲナ
ーゼ遺伝子は，タバコの宿主内ではごくわずかかまたは
全く発現しなかったと述べた否定的な報告もあり〔レウ
エリンら（Ｌｌｅｗｅｌｌｙｎ ｅｔ ａｌ），Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｆｏｒｍ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｏｍｅ，エルバン
ブロテンードティング，ジイ エス グルートおよびテ
ィー ホール（Ｌ．ｖａｎ Ｖｌｏｔｅｎ−Ｄｏｔｉｎ
ｇ，Ｇ．Ｓ．Ｇｒｏｏｔ ａｎｄ Ｔ．Ｈａｌｌ）編，
Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｉｎｇ Ｃｏｒｐ，５９３
〜６０８頁，１９８５年；ジェイジィー エリスら
（Ｊ．Ｇ．Ｅｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ），ＥＭＢＯ Ｊ．
６巻，１１−１６頁，１９８７年〕，このことは単子葉
植物および双子葉植物のプロモーターの間には，固有の
種に特異的な差が存在する可能性を示唆している。
結合タンパクをコードする小麦遺伝子ｗｈＡＢ １．６
が，Ｔ−ＤＮＡ含有ベクターにクローン化され，ペチュ
ニアおよびタバコの両方に形質転換された〔ジー ラン
パら（Ｇ．Ｌａｍｐｐａ ｅｔ ａｌ）Ｎａｔｕｒｅ，
３１６巻，７５０〜７５２頁，１９８５年〕。上記の単
子葉植物と双子植物の宿主の両方で発現が起こり，光誘
導性および組織特異的であることが決定された。さらに
最近の研究〔ロチェスターら（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ ｅ
ｔ ａｌ），ＥＭＢＯ Ｊ，５巻，４５１−４５８頁，
１９８６年〕では，遺伝子移入ペチュニア内でトウモロ
コシの熱ショックｈｓｐ ７０遺伝子が発現された。ト
ウモロコシｈｓｐ ７０ ｍＲＮＡは，熱ストレスにの
み反応して合成された。上記の３つの研究が，トランス
ジェニック双子葉植物中に単子葉植物の遺伝子を発現さ
せることに成功したことを記載した報告のすべてであ
る。しかし，トウモロコシのアルコール，デヒドロゲナ
ーゼ遺伝子は，タバコの宿主内ではごくわずかかまたは
全く発現しなかったと述べた否定的な報告もあり〔レウ
エリンら（Ｌｌｅｗｅｌｌｙｎ ｅｔ ａｌ），Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｆｏｒｍ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｏｍｅ，エルバン
ブロテンードティング，ジイ エス グルートおよびテ
ィー ホール（Ｌ．ｖａｎ Ｖｌｏｔｅｎ−Ｄｏｔｉｎ
ｇ，Ｇ．Ｓ．Ｇｒｏｏｔ ａｎｄ Ｔ．Ｈａｌｌ）編，
Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｉｎｇ Ｃｏｒｐ，５９３
〜６０８頁，１９８５年；ジェイジィー エリスら
（Ｊ．Ｇ．Ｅｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ），ＥＭＢＯ Ｊ．
６巻，１１−１６頁，１９８７年〕，このことは単子葉
植物および双子葉植物のプロモーターの間には，固有の
種に特異的な差が存在する可能性を示唆している。
【００１６】熱ショック反応は，その外の点では容認さ
れない温度に対して熱保護性もしくは耐熱性を与えるも
のと考えられている〔エム シュレジンガーら（Ｍ．Ｓ
ｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ），Ｈｅａｔ Ｓｈ
ｏｃｋ ｆｒｏｍ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｔｏ Ｍａｎ，
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ，米国ニューヨーク州，コールド スプリング
ハーバー，３２９頁，１９８２年〕。容認しうる熱シ
ョック温度は，熱ショック反応を誘発するのに充分高い
温度であるが，死に至る程高い温度ではない。植物の芽
生えの耐熱性は，次のような各種の処理法で得ることが
できる。（ａ）４０℃での連続的熱ショックに１〜２時
間さらした後，４５℃で保温する方法；（ｂ）４０℃で
３０分間熱ショックを与えた後，２８℃で２〜３時間処
理してから４５℃に移行する方法；（ｃ）４５℃で１０
分間熱ショックを与え，次に２８℃で約２時間処理し，
４５℃に移行する方法；および（ｄ）芽生えを５０μＭ
の亜ヒ酸塩で，２８℃にて３時間またはそれ以上処理
し，４５℃に移行する方法。枯死に至る可能性のある温
度で保温する前に，予備処理する間に，熱ショックタン
パクが合成され，蓄積される。さらに植物の芽生えが上
記のように予め処理されると，熱ショックｍＲＮＡと熱
ショックタンパクの合成が４５℃で起こる。温度が生理
学的レベル（例えば，２８℃）に戻されると，正常な転
写と翻訳とが再開され，正常温度で３〜４時間経過する
と熱ショックタンパクの検出可能な合成はもはや認めら
れない〔ジェイ キイら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８巻，３２５６〜３５３０頁，
１９８１年；エム シュレジンガーら，Ｔｒｅｎｄｓ
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１巻，２２２〜２２５頁，１
９８２年〕。４０℃での熱ショック処理中に合成された
熱ショックタンパクは，非常に安定ですぐには分解しな
い。
れない温度に対して熱保護性もしくは耐熱性を与えるも
のと考えられている〔エム シュレジンガーら（Ｍ．Ｓ
ｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ），Ｈｅａｔ Ｓｈ
ｏｃｋ ｆｒｏｍ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｔｏ Ｍａｎ，
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ，米国ニューヨーク州，コールド スプリング
ハーバー，３２９頁，１９８２年〕。容認しうる熱シ
ョック温度は，熱ショック反応を誘発するのに充分高い
温度であるが，死に至る程高い温度ではない。植物の芽
生えの耐熱性は，次のような各種の処理法で得ることが
できる。（ａ）４０℃での連続的熱ショックに１〜２時
間さらした後，４５℃で保温する方法；（ｂ）４０℃で
３０分間熱ショックを与えた後，２８℃で２〜３時間処
理してから４５℃に移行する方法；（ｃ）４５℃で１０
分間熱ショックを与え，次に２８℃で約２時間処理し，
４５℃に移行する方法；および（ｄ）芽生えを５０μＭ
の亜ヒ酸塩で，２８℃にて３時間またはそれ以上処理
し，４５℃に移行する方法。枯死に至る可能性のある温
度で保温する前に，予備処理する間に，熱ショックタン
パクが合成され，蓄積される。さらに植物の芽生えが上
記のように予め処理されると，熱ショックｍＲＮＡと熱
ショックタンパクの合成が４５℃で起こる。温度が生理
学的レベル（例えば，２８℃）に戻されると，正常な転
写と翻訳とが再開され，正常温度で３〜４時間経過する
と熱ショックタンパクの検出可能な合成はもはや認めら
れない〔ジェイ キイら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８巻，３２５６〜３５３０頁，
１９８１年；エム シュレジンガーら，Ｔｒｅｎｄｓ
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１巻，２２２〜２２５頁，１
９８２年〕。４０℃での熱ショック処理中に合成された
熱ショックタンパクは，非常に安定ですぐには分解しな
い。
【００１７】ユビキチンは，環境ストレス（熱ショック
を含む）に応答して調節されるが，ユビキチンの転写調
節は，従来の熱ショックタンパクの転写の調節とは異な
っている。ユビキチンと熱ショックタンパクのｍＲＮＡ
のレベルは細胞のストレスに反応して増大する。しか
し，従来の熱ショックタンパクは，熱ショックを与えて
いる間は蓄積し，回復期には存続するが，熱ショックを
与えている間に蓄積されたユビキチンｍＲＮＡは，スト
レス処理後，数時間以内に急速に分解する。この不安定
なｍＲＮＡの転写は，熱ショック中におけるユビキチン
の特別の過渡的な役割を示唆し，ユビキチン遺伝子のプ
ロモーター領域における唯一のＤＮＡ配列に関連があ
り，ストレスに対する細胞の反応中の特別な調節制御を
規定している。
を含む）に応答して調節されるが，ユビキチンの転写調
節は，従来の熱ショックタンパクの転写の調節とは異な
っている。ユビキチンと熱ショックタンパクのｍＲＮＡ
のレベルは細胞のストレスに反応して増大する。しか
し，従来の熱ショックタンパクは，熱ショックを与えて
いる間は蓄積し，回復期には存続するが，熱ショックを
与えている間に蓄積されたユビキチンｍＲＮＡは，スト
レス処理後，数時間以内に急速に分解する。この不安定
なｍＲＮＡの転写は，熱ショック中におけるユビキチン
の特別の過渡的な役割を示唆し，ユビキチン遺伝子のプ
ロモーター領域における唯一のＤＮＡ配列に関連があ
り，ストレスに対する細胞の反応中の特別な調節制御を
規定している。
【００１８】
【発明が解決しようとする課題】この発明の目的は，植
物組織中で構造遺伝子を選択的に発現させることができ
る調節プロモーター系からなる新規ＤＮＡセグメントお
よび構築物とを提供することにある。
物組織中で構造遺伝子を選択的に発現させることができ
る調節プロモーター系からなる新規ＤＮＡセグメントお
よび構築物とを提供することにある。
【００１９】
【課題を解決するための手段】本発明は、植物ユビキチ
ン調節システムを含む２ｋｂ以下のＤＮＡ配列であっ
て、該調節システムが熱ショック要素およびイントロン
を含む、ＤＮＡ配列に関する。
ン調節システムを含む２ｋｂ以下のＤＮＡ配列であっ
て、該調節システムが熱ショック要素およびイントロン
を含む、ＤＮＡ配列に関する。
【００２０】この発明の第１の目的は当業者が，植物組
織中で構造遺伝子を選択的に発現させることができる調
節プロモーター系からなる新規ＤＮＡセグメントおよび
構築物とを提供することにある。上記のプロモーター
は，プロモーターの制御下にある遺伝子の転写を開始し
調節する，植物ユビキチン遺伝子の５’側の非転写領域
由来のＤＮＡ配列をもっている。その好ましい実施態様
では，このプロモーターの配列は，トウモロコシのユビ
キチン遺伝子の上流領域由来のものである。
織中で構造遺伝子を選択的に発現させることができる調
節プロモーター系からなる新規ＤＮＡセグメントおよび
構築物とを提供することにある。上記のプロモーター
は，プロモーターの制御下にある遺伝子の転写を開始し
調節する，植物ユビキチン遺伝子の５’側の非転写領域
由来のＤＮＡ配列をもっている。その好ましい実施態様
では，このプロモーターの配列は，トウモロコシのユビ
キチン遺伝子の上流領域由来のものである。
【００２１】植物中で活性であり下流遺伝子の発現を制
御および調節するプロモーターの単離と特徴付けについ
て，本発明で開示する。このＤＮＡ配列は，トウモロコ
シのゲノム・ライブラリィから分離されたユビキチン構
造遺伝子の上流に天然に存在する領域である。Ｓ１ヌク
レアーゼマッピングで決定された転写開始部位すなわち
キャップ部位は塩基１と呼称され，転写開始部位の５’
側の約８９９の塩基と５’側の翻訳開始部位を除いたキ
ャップ部位の３’側の約１０９３塩基内に包含された配
列がユビキチンプロモーターを構成している。上記のほ
ぼ２ｋｂのプロモーター領域には，ＴＡＴＡボックス
（−３０）２つの重複する熱ショックコンセンサス要素
（−２０４と−２１４），転写開始部位に隣接する８３
ヌクレオチドのリーダー配列，および塩基８４から塩基
１０９３までのびるイントロンか位置している。
御および調節するプロモーターの単離と特徴付けについ
て，本発明で開示する。このＤＮＡ配列は，トウモロコ
シのゲノム・ライブラリィから分離されたユビキチン構
造遺伝子の上流に天然に存在する領域である。Ｓ１ヌク
レアーゼマッピングで決定された転写開始部位すなわち
キャップ部位は塩基１と呼称され，転写開始部位の５’
側の約８９９の塩基と５’側の翻訳開始部位を除いたキ
ャップ部位の３’側の約１０９３塩基内に包含された配
列がユビキチンプロモーターを構成している。上記のほ
ぼ２ｋｂのプロモーター領域には，ＴＡＴＡボックス
（−３０）２つの重複する熱ショックコンセンサス要素
（−２０４と−２１４），転写開始部位に隣接する８３
ヌクレオチドのリーダー配列，および塩基８４から塩基
１０９３までのびるイントロンか位置している。
【００２２】この発明の他の目的は，植物の発現可能な
プロモーターと植物の発現可能な構造遺伝子とからな
る，組替え体ＤＮＡ分子を提供することにある。ここで
構造遺伝子は，プロモーターの転写開始要素および転写
活性化要素全体の調節制御下にある。特に，植物のユビ
キチンのプロモーターは，各種のＤＮＡ配列，代表的な
ものとしては構造遺伝子と結合することができ，前記Ｄ
ＮＡ配列の転写と翻訳を調節し，高温でストレスが与え
られた際に発現を調節制御するＤＮＡ構築物を提供す
る。
プロモーターと植物の発現可能な構造遺伝子とからな
る，組替え体ＤＮＡ分子を提供することにある。ここで
構造遺伝子は，プロモーターの転写開始要素および転写
活性化要素全体の調節制御下にある。特に，植物のユビ
キチンのプロモーターは，各種のＤＮＡ配列，代表的な
ものとしては構造遺伝子と結合することができ，前記Ｄ
ＮＡ配列の転写と翻訳を調節し，高温でストレスが与え
られた際に発現を調節制御するＤＮＡ構築物を提供す
る。
【００２３】上記の組換え体ＤＮＡ分子は，植物組織に
導入され，プロモーター／構造遺伝子の組合せを発現す
る。この発明の方法は，単子葉植物と双子葉植物の両者
における構造遺伝子の発現に一般に適用できると考えら
れる。
導入され，プロモーター／構造遺伝子の組合せを発現す
る。この発明の方法は，単子葉植物と双子葉植物の両者
における構造遺伝子の発現に一般に適用できると考えら
れる。
【００２４】本発明のＤＮＡ配列は，植物ユビキチン調
節システムを含む２ｋｂ以下のＤＮＡ配列であって，該
調節システムは熱ショック要素およびイントロンを含
む。
節システムを含む２ｋｂ以下のＤＮＡ配列であって，該
調節システムは熱ショック要素およびイントロンを含
む。
【００２５】該記熱ショック要素は，好ましくは熱ショ
ックコンセンサス配列に対して少なくとも７５％の相同
性を有する。
ックコンセンサス配列に対して少なくとも７５％の相同
性を有する。
【００２６】本発明のＤＮＡ構築物は，植物ユビキチン
調節システムを含む２ｋｂ以下のＤＮＡ配列と，植物発
現性構造遺伝子とを有するＤＮＡ構築物であって，該調
節システムは熱ショック要素およびイントロンを含み，
そして，該構造遺伝子は該植物ユビキチン調節システム
の調節制御下に置かれている。
調節システムを含む２ｋｂ以下のＤＮＡ配列と，植物発
現性構造遺伝子とを有するＤＮＡ構築物であって，該調
節システムは熱ショック要素およびイントロンを含み，
そして，該構造遺伝子は該植物ユビキチン調節システム
の調節制御下に置かれている。
【００２７】本発明はさらに，植物細胞における構造遺
伝子を構成的に発現させるための，および選択されたス
トレス誘導による該構造遺伝子の発現を増強するための
方法を提供する。該方法は，（ａ）熱ショック要素およ
びイントロンを含む植物ユビキチン調節システムと，該
植物ユビキチン調節システムの調節制御下にある植物発
現性構造遺伝子とを含むＤＮＡ構築物で該植物細胞を形
質転換すること，および（ｂ）該形質転換した植物細胞
にストレス状態を選択的に与え，該構造遺伝子の発現増
強を誘導すること，を包含する。
伝子を構成的に発現させるための，および選択されたス
トレス誘導による該構造遺伝子の発現を増強するための
方法を提供する。該方法は，（ａ）熱ショック要素およ
びイントロンを含む植物ユビキチン調節システムと，該
植物ユビキチン調節システムの調節制御下にある植物発
現性構造遺伝子とを含むＤＮＡ構築物で該植物細胞を形
質転換すること，および（ｂ）該形質転換した植物細胞
にストレス状態を選択的に与え，該構造遺伝子の発現増
強を誘導すること，を包含する。
【００２８】
【発明の実施の形態】以下の定義は，本発明の明細書と
特許請求の範囲に用いる用語の目的と範囲についてあい
まいさを除くために行うものである。
特許請求の範囲に用いる用語の目的と範囲についてあい
まいさを除くために行うものである。
【００２９】発現とは，構造遺伝子の転写および／また
は翻訳を意味する。
は翻訳を意味する。
【００３０】プロモーターとは，転写の開始を指示す
る，構造遺伝子の５’末端に存在するヌクレオチド配列
を意味する。プロモーター配列は，下流の遺伝子を発現
させるために必要であるが，必ずしも充分ではない。一
般に，真核系のプロモーターは，転写開始（キャップ）
部位の５’側に約１０〜３０ｂｐのコンセンサス５’−
ＴＡＴＡＡＴ−３’（ＴＡＴＡ）ボックスに相同の特徴
的なＤＮＡ配列を有する。キャップ部位は便宜上＋１と
番号を付してある。キャップ部位に対して３’側の塩基
には正の数字を付け，一方キャップ部位に対して５’側
の塩基には負の数字を付け，その数字は，キャップ部位
からの各塩基の距離を表している。もう１つのプロモー
ター要素であるＣＡＡＴボックスは，ＴＡＴＡボックス
の５’側の約３０〜７０ｂｐの位置に見出されることが
多く，標準形の５’−ＣＣＡＡＴ−３’に対して相同で
ある（Ｊ．Ｍｅｓｓｉｎｇら（１９８３），ｉｎ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｐｌａｎ
ｔｓ，Ｔ．Ｋｏｓｕｇｅら（編著），Ｐｌｅｎｕｍ Ｐ
ｒｅｓｓ，ｐｐ．２１１−２２７）。植物中で，ＣＡＡ
Ｔボックスは，ＡＧＧＡボックスとして知られている配
列で，かつトリプレットＧ（またはＴ）ＮＧに対称的に
隣接するアデニン残基を有する領域で置換される場合が
ある（Ｒ．ＢｒｅａｔｈｎａｃｈとＰ．Ｃｈａｍｂｏｎ
（１９８１）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５０：
３４９−３８３）。転写に対して調節効果を与える別の
配列が，プロモーター領域内に見出され，キャップ部位
から，１０００ｂｐもしくはそれ以上延びて存在してい
る。
る，構造遺伝子の５’末端に存在するヌクレオチド配列
を意味する。プロモーター配列は，下流の遺伝子を発現
させるために必要であるが，必ずしも充分ではない。一
般に，真核系のプロモーターは，転写開始（キャップ）
部位の５’側に約１０〜３０ｂｐのコンセンサス５’−
ＴＡＴＡＡＴ−３’（ＴＡＴＡ）ボックスに相同の特徴
的なＤＮＡ配列を有する。キャップ部位は便宜上＋１と
番号を付してある。キャップ部位に対して３’側の塩基
には正の数字を付け，一方キャップ部位に対して５’側
の塩基には負の数字を付け，その数字は，キャップ部位
からの各塩基の距離を表している。もう１つのプロモー
ター要素であるＣＡＡＴボックスは，ＴＡＴＡボックス
の５’側の約３０〜７０ｂｐの位置に見出されることが
多く，標準形の５’−ＣＣＡＡＴ−３’に対して相同で
ある（Ｊ．Ｍｅｓｓｉｎｇら（１９８３），ｉｎ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｐｌａｎ
ｔｓ，Ｔ．Ｋｏｓｕｇｅら（編著），Ｐｌｅｎｕｍ Ｐ
ｒｅｓｓ，ｐｐ．２１１−２２７）。植物中で，ＣＡＡ
Ｔボックスは，ＡＧＧＡボックスとして知られている配
列で，かつトリプレットＧ（またはＴ）ＮＧに対称的に
隣接するアデニン残基を有する領域で置換される場合が
ある（Ｒ．ＢｒｅａｔｈｎａｃｈとＰ．Ｃｈａｍｂｏｎ
（１９８１）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５０：
３４９−３８３）。転写に対して調節効果を与える別の
配列が，プロモーター領域内に見出され，キャップ部位
から，１０００ｂｐもしくはそれ以上延びて存在してい
る。
【００３１】調節制御とは，転写開始部位（の５’側）
の上流に，最初に，ただし排他的ではなく，位置するＤ
ＮＡ配列要素によって誘発される遺伝子発現の変調を意
味する。調節によって，環境の刺激に対して全てが無か
の応答が生じるか，または遺伝子発現のレベルが変化す
る。この発明において，熱ショック調節要素は，急激な
温度上昇に反応して，下流の遺伝子の発現のレベルを一
時的に促進する作用をする。
の上流に，最初に，ただし排他的ではなく，位置するＤ
ＮＡ配列要素によって誘発される遺伝子発現の変調を意
味する。調節によって，環境の刺激に対して全てが無か
の応答が生じるか，または遺伝子発現のレベルが変化す
る。この発明において，熱ショック調節要素は，急激な
温度上昇に反応して，下流の遺伝子の発現のレベルを一
時的に促進する作用をする。
【００３２】プロモーターもしくは調節要素の調節制御
下に構造遺伝子を置くということは，遺伝子の発現がこ
れらの配列で制御されるように構造遺伝子を位置させる
ことを意味する。一般にプロモーターは，プロモーター
が制御する遺伝子に対し５’側（上流）に位置すること
が知られている。したがって，異種のプロモーター／構
造遺伝子の組合わせを構築する際には，プロモーター
は，該遺伝子の上流に位置するのが好ましく，プロモー
ターの転写開始部位からの距離は，プロモーターが自然
のセッティングで制御する遺伝子との距離とほぼ等しく
する。当該技術分野で知られているように，プロモータ
ーの機能の損失がなければ，上記の距離はいくらか変え
てもよい。同様に，その制御下にある異種遺伝子に対す
る調節要素の好ましい位置は，調節要素が自然に調節す
る構造遺伝子に対するその自然の位置を反映している。
当該技術分野で知られているように，この距離もいくら
か変えてもよい。
下に構造遺伝子を置くということは，遺伝子の発現がこ
れらの配列で制御されるように構造遺伝子を位置させる
ことを意味する。一般にプロモーターは，プロモーター
が制御する遺伝子に対し５’側（上流）に位置すること
が知られている。したがって，異種のプロモーター／構
造遺伝子の組合わせを構築する際には，プロモーター
は，該遺伝子の上流に位置するのが好ましく，プロモー
ターの転写開始部位からの距離は，プロモーターが自然
のセッティングで制御する遺伝子との距離とほぼ等しく
する。当該技術分野で知られているように，プロモータ
ーの機能の損失がなければ，上記の距離はいくらか変え
てもよい。同様に，その制御下にある異種遺伝子に対す
る調節要素の好ましい位置は，調節要素が自然に調節す
る構造遺伝子に対するその自然の位置を反映している。
当該技術分野で知られているように，この距離もいくら
か変えてもよい。
【００３３】プロモーターの調節制御下での構造遺伝子
の発現中のプロモーターの機能は，転写段階では，ＤＮ
Ａ−ＲＮＡハイブリダイゼーション検定法（“ノーザ
ン”ブロット法）を用い，翻訳段階では，合成タンパク
に対する特定の機能検定法を用いて（例えば酵素活性に
よるかまたは該タンパクの免疫検定法による）試験をす
ることができる。
の発現中のプロモーターの機能は，転写段階では，ＤＮ
Ａ−ＲＮＡハイブリダイゼーション検定法（“ノーザ
ン”ブロット法）を用い，翻訳段階では，合成タンパク
に対する特定の機能検定法を用いて（例えば酵素活性に
よるかまたは該タンパクの免疫検定法による）試験をす
ることができる。
【００３４】構造遺伝子は，タンパク，ポリペプチドま
たはその一部分をコードするＤＮＡセグメントからなる
遺伝子の部分であり，転写を開始させる５’側の配列を
除く。構造遺伝子は，通常細胞内に見出される遺伝子
か，またはそれが導入される細胞の位置に通常は見出さ
れない遺伝子であり，後者の場合，異種遺伝子と呼ばれ
る。異種遺伝子は，当該技術分野で公知のあらゆる起源
からその全体もしくは部分を得ることができる。それら
の起源には，細菌のゲノムもしくはエピソーム，真核Ｄ
ＮＡ，核ＤＮＡ，プラスミドＤＮＡ，ｃＤＮＡ，ウイル
スＤＮＡまたは化学的に合成されたＤＮＡが包含され
る。構造遺伝子は，コーディング領域もしくは非翻訳領
域に１つ以上の修飾部分を持っていてもよい。この修飾
部分は，発現産物の生物学的活性もしくは化学的構造，
発現速度または発現制御のしかたに影響する。かような
修飾部分としては，限定はしないが，１つ以上のヌクレ
オチドの変異部分，挿入部分，欠失部分および置換部分
がある。構造遺伝子は，途切れないコーディング配列を
形成するか，または，適当なスプライス接合で結合され
た１つ以上のイントロンを有している。構造遺伝子は，
複数の起源由来のセグメントの複合体でもよく，また天
然に生成したものまたは合成のものでもよい。構造遺伝
子は，融合タンパクをコードしてもよい。植物組織に，
プロモーター／構造遺伝子／ポリアデニル化シグナルの
複合体を有する組換え体ＤＮＡ分子を導入することに
は，構造遺伝子とそのプロモーターが各々異なる植物種
由来のものである構造物を構築することが包含されると
考える。
たはその一部分をコードするＤＮＡセグメントからなる
遺伝子の部分であり，転写を開始させる５’側の配列を
除く。構造遺伝子は，通常細胞内に見出される遺伝子
か，またはそれが導入される細胞の位置に通常は見出さ
れない遺伝子であり，後者の場合，異種遺伝子と呼ばれ
る。異種遺伝子は，当該技術分野で公知のあらゆる起源
からその全体もしくは部分を得ることができる。それら
の起源には，細菌のゲノムもしくはエピソーム，真核Ｄ
ＮＡ，核ＤＮＡ，プラスミドＤＮＡ，ｃＤＮＡ，ウイル
スＤＮＡまたは化学的に合成されたＤＮＡが包含され
る。構造遺伝子は，コーディング領域もしくは非翻訳領
域に１つ以上の修飾部分を持っていてもよい。この修飾
部分は，発現産物の生物学的活性もしくは化学的構造，
発現速度または発現制御のしかたに影響する。かような
修飾部分としては，限定はしないが，１つ以上のヌクレ
オチドの変異部分，挿入部分，欠失部分および置換部分
がある。構造遺伝子は，途切れないコーディング配列を
形成するか，または，適当なスプライス接合で結合され
た１つ以上のイントロンを有している。構造遺伝子は，
複数の起源由来のセグメントの複合体でもよく，また天
然に生成したものまたは合成のものでもよい。構造遺伝
子は，融合タンパクをコードしてもよい。植物組織に，
プロモーター／構造遺伝子／ポリアデニル化シグナルの
複合体を有する組換え体ＤＮＡ分子を導入することに
は，構造遺伝子とそのプロモーターが各々異なる植物種
由来のものである構造物を構築することが包含されると
考える。
【００３５】植物ユビキチンの調節系とは，トウモロコ
シ・ユビキチン遺伝子の翻訳開始部位の５’側の約１ｋ
ｂのヌクレオチド配列を意味し，転写の開始，転写の調
節，発現レベルの制御，ストレス遺伝子の誘発，および
ストレスに応答した発現の促進とを導く配列で構成され
ている。調節系は，プロモーターと調節の両方の機能を
もっており，遺伝子発現の調節制御すなわち変調を行う
ＤＮＡ配列である。植物ユビキチンの調節系の調節制御
下に構造遺伝子があるということは，遺伝子の調節され
た発現がユビキチンの調節系からなる配列によって制御
されるような位置に構造遺伝子があることを意味する。
シ・ユビキチン遺伝子の翻訳開始部位の５’側の約１ｋ
ｂのヌクレオチド配列を意味し，転写の開始，転写の調
節，発現レベルの制御，ストレス遺伝子の誘発，および
ストレスに応答した発現の促進とを導く配列で構成され
ている。調節系は，プロモーターと調節の両方の機能を
もっており，遺伝子発現の調節制御すなわち変調を行う
ＤＮＡ配列である。植物ユビキチンの調節系の調節制御
下に構造遺伝子があるということは，遺伝子の調節され
た発現がユビキチンの調節系からなる配列によって制御
されるような位置に構造遺伝子があることを意味する。
【００３６】ポリアデニル化シグナルとは，ｍＲＮＡ処
理を行うことができる核酸配列を意味し，通常，ｍＲＮ
Ａ前駆体の３’末端にポリアデニル酸のからなる領域を
付加していることで特徴付けられる。ポりアデニル化シ
グナルのＤＮＡセグメントは，それ自体，天然生成もし
くは合成の数種の起源に由来するセグメントの複合体で
あって，ゲノムＤＮＡもしくはｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡ
を起源とする。ポリアデニル化シグナルは，標準形の
５’−ＡＡＴＡＡ−３’に対する相同性の存在によって
通常認識されるが，距離の変動，部分的な“読み過し”
および多重タンデム標準配列はまれなことではない
（Ｊ．Ｍｅｓｓｉｎｇら，前記文献）。標準の“ポリア
デニル化シグナル”は，実際に，転写の終結を起こす
が，ポリアデニル化反応自体を起さないということは認
識されるべきである（Ｃ．Ｍｏｎｔｅｌｌら（１９８
３）Ｎａｔｕｒｅ ３０５：６００−６０５）。
理を行うことができる核酸配列を意味し，通常，ｍＲＮ
Ａ前駆体の３’末端にポリアデニル酸のからなる領域を
付加していることで特徴付けられる。ポりアデニル化シ
グナルのＤＮＡセグメントは，それ自体，天然生成もし
くは合成の数種の起源に由来するセグメントの複合体で
あって，ゲノムＤＮＡもしくはｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡ
を起源とする。ポリアデニル化シグナルは，標準形の
５’−ＡＡＴＡＡ−３’に対する相同性の存在によって
通常認識されるが，距離の変動，部分的な“読み過し”
および多重タンデム標準配列はまれなことではない
（Ｊ．Ｍｅｓｓｉｎｇら，前記文献）。標準の“ポリア
デニル化シグナル”は，実際に，転写の終結を起こす
が，ポリアデニル化反応自体を起さないということは認
識されるべきである（Ｃ．Ｍｏｎｔｅｌｌら（１９８
３）Ｎａｔｕｒｅ ３０５：６００−６０５）。
【００３７】植物組織には，限定はないが，根，新芽，
葉，花粉，種子，腫瘍組織，ならびに培養中の各種形態
の細胞，原形質体，胚およびカルス組織のような単細胞
を包含する，植物の分化した組織と分化していない組織
が含まれる。植物組織は，イン・プランタ（ｉｎ ｐｌ
ａｎｔａ）または器官内の組織もしくは細胞培養物であ
る。
葉，花粉，種子，腫瘍組織，ならびに培養中の各種形態
の細胞，原形質体，胚およびカルス組織のような単細胞
を包含する，植物の分化した組織と分化していない組織
が含まれる。植物組織は，イン・プランタ（ｉｎ ｐｌ
ａｎｔａ）または器官内の組織もしくは細胞培養物であ
る。
【００３８】相同性は，本願で用いる場合，ヌクレオチ
ドおよび／またはアミノ酸配列が同一もしくはほぼ同一
であることを意味する。当該技術分野で理解されている
ように，ヌクレオチドの不整合がコドン内の３番目の塩
基すなわちゆらぎ塩基に起こることがあるが，最終的な
ポリペプチド配列においてアミノ酸の置換を起こすこと
はない。また，遺伝子配列のいくつかの領域における小
さなヌクレオチドの修飾（例えば置換，挿入もしくは欠
失）は，このような修飾によるアミノ酸配列の変化が，
最終生成物の機能を変えない限り，許容することがで
き，かつ重要でないと考えられる。遺伝子配列の全体も
しくは一部分の化学的に合成されたコピーが，遺伝子の
機能を損なうことなく，天然の遺伝子中の対応する領域
と置換し得ることが分かっている。特定のＤＮＡ配列の
同族体は，当該技術分野で周知の厳密の条件下での核酸
のクロスハイブリダイゼーション試験法を用いて，当業
者によって同定することができる（ＨａｍｅｓとＨｉｇ
ｇｅｎｓ編集（１９８５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ
Ｈｙｂｒｉｄｉｓａｔｉｏｎ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，英
国，オックスフォードに記載されている）。相同性の程
度は，比較される配列間の同一性の百分率によって評価
されることが多い。したがって，本開示では，小さな配
列の変動が相同配列の中に存在し得ることが分かる。
ドおよび／またはアミノ酸配列が同一もしくはほぼ同一
であることを意味する。当該技術分野で理解されている
ように，ヌクレオチドの不整合がコドン内の３番目の塩
基すなわちゆらぎ塩基に起こることがあるが，最終的な
ポリペプチド配列においてアミノ酸の置換を起こすこと
はない。また，遺伝子配列のいくつかの領域における小
さなヌクレオチドの修飾（例えば置換，挿入もしくは欠
失）は，このような修飾によるアミノ酸配列の変化が，
最終生成物の機能を変えない限り，許容することがで
き，かつ重要でないと考えられる。遺伝子配列の全体も
しくは一部分の化学的に合成されたコピーが，遺伝子の
機能を損なうことなく，天然の遺伝子中の対応する領域
と置換し得ることが分かっている。特定のＤＮＡ配列の
同族体は，当該技術分野で周知の厳密の条件下での核酸
のクロスハイブリダイゼーション試験法を用いて，当業
者によって同定することができる（ＨａｍｅｓとＨｉｇ
ｇｅｎｓ編集（１９８５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ
Ｈｙｂｒｉｄｉｓａｔｉｏｎ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，英
国，オックスフォードに記載されている）。相同性の程
度は，比較される配列間の同一性の百分率によって評価
されることが多い。したがって，本開示では，小さな配
列の変動が相同配列の中に存在し得ることが分かる。
【００３９】ここで使用されている「〜に由来する」と
は起源から取り出された，得られた，受けとられた，複
写された，複製された，伝来したことを意味している
（化学的に，および／または生物学的に）。誘導物は元
の起源の化学的または生物学的操作（置換，添加，挿
入，欠失，抽出，単離，変異，および複製を含むがこれ
らに限定はされない）によって調製され得る。
は起源から取り出された，得られた，受けとられた，複
写された，複製された，伝来したことを意味している
（化学的に，および／または生物学的に）。誘導物は元
の起源の化学的または生物学的操作（置換，添加，挿
入，欠失，抽出，単離，変異，および複製を含むがこれ
らに限定はされない）によって調製され得る。
【００４０】ＤＮＡ配列に関する「化学的に合成され
た」とは成分ヌクレオチドがｉｎ ｖｉｔｒｏで組み立
てられたことを意味している。手作業的ＤＮＡ化学合成
は既に確立されている方法（Ｍ．Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ
（１９８３），Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ｏｆ ＤＮＡ
ａｎｄ ＲＮＡ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，Ｗｅｉｓｓ
ｍａｎ（編著），Ｐｒａｅｇｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ
ｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）第１章）で実施され，また自動
化された化学合成は種々の市販装置の一つを使用して行
われ得る。
た」とは成分ヌクレオチドがｉｎ ｖｉｔｒｏで組み立
てられたことを意味している。手作業的ＤＮＡ化学合成
は既に確立されている方法（Ｍ．Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ
（１９８３），Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ｏｆ ＤＮＡ
ａｎｄ ＲＮＡ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，Ｗｅｉｓｓ
ｍａｎ（編著），Ｐｒａｅｇｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ
ｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）第１章）で実施され，また自動
化された化学合成は種々の市販装置の一つを使用して行
われ得る。
【００４１】熱ショック要素とは突然の温度上昇という
ストレスに応じて遺伝子発現を調節するＤＮＡ配列を指
す。応答は下流遺伝子の発現レベルの一過性であるが急
な上昇として表れる。熱ショック遺伝子についての最初
の研究はショウジョウバエ属（Ｄｒｏ−ｓｏｐｈｉｌ
ａ）を使用して行われたが，植物を含む他の多くの種も
ストレスに対し同様の応答を示す（Ｔ．Ｂａｒｎｅｔｔ
ら（１９８０）Ｄｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．１：３３１−３４
０）。熱ショック要素の必須第１成分はショウジョウバ
エ属ではコンセンサス配列５’−ＣＴＧＧＡＡＴ−ＴＴ
ＣＴＡＧＡ−３’を有し，転写開始部位の上流の残基−
６６から−４７ｂｐまでの領域に位置していると記述さ
れている（Ｈ．ＰｅｌｈａｍとＭ．Ｂｉｅｎｚ（１９８
２）前記文献）。このコンセンサス配列の化学合成され
たオリゴヌクレオチドのコピーは熱ショック誘導性に関
しては天然配列に取って代わることができる。他の系で
はプロモーター領域内に多重の熱ショック要素がみとめ
られている。例えば，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒら（１９８
６）前記文献は，トウモロコシのｈｓｐ７０の遺伝子に
２個の熱ショック要素を確認している。
ストレスに応じて遺伝子発現を調節するＤＮＡ配列を指
す。応答は下流遺伝子の発現レベルの一過性であるが急
な上昇として表れる。熱ショック遺伝子についての最初
の研究はショウジョウバエ属（Ｄｒｏ−ｓｏｐｈｉｌ
ａ）を使用して行われたが，植物を含む他の多くの種も
ストレスに対し同様の応答を示す（Ｔ．Ｂａｒｎｅｔｔ
ら（１９８０）Ｄｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．１：３３１−３４
０）。熱ショック要素の必須第１成分はショウジョウバ
エ属ではコンセンサス配列５’−ＣＴＧＧＡＡＴ−ＴＴ
ＣＴＡＧＡ−３’を有し，転写開始部位の上流の残基−
６６から−４７ｂｐまでの領域に位置していると記述さ
れている（Ｈ．ＰｅｌｈａｍとＭ．Ｂｉｅｎｚ（１９８
２）前記文献）。このコンセンサス配列の化学合成され
たオリゴヌクレオチドのコピーは熱ショック誘導性に関
しては天然配列に取って代わることができる。他の系で
はプロモーター領域内に多重の熱ショック要素がみとめ
られている。例えば，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒら（１９８
６）前記文献は，トウモロコシのｈｓｐ７０の遺伝子に
２個の熱ショック要素を確認している。
【００４２】リーダー配列とは転写開始部位と翻訳開始
部位の間に位置する約１００個のヌクレオチドから成る
ＤＮＡ配列を意味している。リーダー配列内にはリポソ
ーム結合部位を特定する領域が包含されている。
部位の間に位置する約１００個のヌクレオチドから成る
ＤＮＡ配列を意味している。リーダー配列内にはリポソ
ーム結合部位を特定する領域が包含されている。
【００４３】イントロンあるいは介在配列とは本件の場
合は，コード配列（エキソン）と一緒に転写されるが，
その後成熟ｍＲＮＡの形成に際して取り除かれるような
ＤＮＡ配列の領域を言う。イントロンは転写された配列
内のいたる所，つまり同じまたは異なる遺伝子のコード
配列間，遺伝子のコード配列内に存在してそのアミノ酸
配列を遮断し分断している，またプロモーター領域内
（翻訳開始部位の５’側）にも存在し得る。イントロン
は一次転写の際に切除され，同時に且つ正確にコード配
列が連結され，成熟ｍＲＮＡを形成する。イントロンと
エキソンの連結部がスプライス部位となる。イントロン
の塩基配列はＧＵで始まり，ＡＧで終わる。同じスプラ
イシング信号は高等真核生物の多くに認められる。
合は，コード配列（エキソン）と一緒に転写されるが，
その後成熟ｍＲＮＡの形成に際して取り除かれるような
ＤＮＡ配列の領域を言う。イントロンは転写された配列
内のいたる所，つまり同じまたは異なる遺伝子のコード
配列間，遺伝子のコード配列内に存在してそのアミノ酸
配列を遮断し分断している，またプロモーター領域内
（翻訳開始部位の５’側）にも存在し得る。イントロン
は一次転写の際に切除され，同時に且つ正確にコード配
列が連結され，成熟ｍＲＮＡを形成する。イントロンと
エキソンの連結部がスプライス部位となる。イントロン
の塩基配列はＧＵで始まり，ＡＧで終わる。同じスプラ
イシング信号は高等真核生物の多くに認められる。
【００４４】本発明は植物細胞に於けるＤＮＡコードセ
グメントの発現に有用な組み換えベクターの開発に関す
る。本発明では，ベクターは挿入されたＤＮＡコードセ
グメントの発現を制御するのにトウモロコシのユビキチ
ンプロモーターを採用している。転写調節配列を既定宿
主の染色体外複製系と結合することができる。遺伝子挿
入のための制限部位をもつ他のＤＮＡ配列を加えて，該
宿主に於て挿入された遺伝子の転写と翻訳を調節するた
めのベクターとすることができる。このベクターにはま
た原核細胞宿主で増殖を可能とならしめる原核細胞複製
系，選択のためのマーカー，および他のＤＮＡ領域が含
まれる。これにより植物および哺乳類宿主を形質変換す
る以前に，特徴付けられた細菌系で大量のベクターを増
殖させることができる。プロモーターと遺伝子配列が互
いに適切に位置付けられているベクターを構築する原理
は当業者によく知られている事柄である。ある条件で
は，所望の構造遺伝子にプロモーター系を結合し，得ら
れた構造ＤＮＡを直接宿主に導入するのが望ましい。こ
の直接導入法には，これらに限定されるものではない
が，原形質体形質変換，エレクトロポレーション法，Ｄ
ＮＡの核への直接注入，およびカルシウム沈澱による同
時形質転換が包含される。
グメントの発現に有用な組み換えベクターの開発に関す
る。本発明では，ベクターは挿入されたＤＮＡコードセ
グメントの発現を制御するのにトウモロコシのユビキチ
ンプロモーターを採用している。転写調節配列を既定宿
主の染色体外複製系と結合することができる。遺伝子挿
入のための制限部位をもつ他のＤＮＡ配列を加えて，該
宿主に於て挿入された遺伝子の転写と翻訳を調節するた
めのベクターとすることができる。このベクターにはま
た原核細胞宿主で増殖を可能とならしめる原核細胞複製
系，選択のためのマーカー，および他のＤＮＡ領域が含
まれる。これにより植物および哺乳類宿主を形質変換す
る以前に，特徴付けられた細菌系で大量のベクターを増
殖させることができる。プロモーターと遺伝子配列が互
いに適切に位置付けられているベクターを構築する原理
は当業者によく知られている事柄である。ある条件で
は，所望の構造遺伝子にプロモーター系を結合し，得ら
れた構造ＤＮＡを直接宿主に導入するのが望ましい。こ
の直接導入法には，これらに限定されるものではない
が，原形質体形質変換，エレクトロポレーション法，Ｄ
ＮＡの核への直接注入，およびカルシウム沈澱による同
時形質転換が包含される。
【００４５】本発明は植物ユビキチンプロモーターの単
離と特徴づけに関する最初の報告である。本発明に記載
されているトウモロコシユビキチンプロモーターは，Ｒ
ＮＡポリメラーゼ認識および結合部位，転写開始配列
（キャップ部位），誘発転写を引きおこす調節配列，お
よび転写開始部位と翻訳開始部位との間の翻訳されない
介在配列（イントロン）を包含する。二重の熱ショック
コンセンサス配列が転写開始部位の５’側（−２１４と
−２０４）に位置する。キャップ部位のすぐ隣りには８
３ヌクレオチドのエキソンが存在し，これに大きいイン
トロン（約１ｋｂ）が続いている。
離と特徴づけに関する最初の報告である。本発明に記載
されているトウモロコシユビキチンプロモーターは，Ｒ
ＮＡポリメラーゼ認識および結合部位，転写開始配列
（キャップ部位），誘発転写を引きおこす調節配列，お
よび転写開始部位と翻訳開始部位との間の翻訳されない
介在配列（イントロン）を包含する。二重の熱ショック
コンセンサス配列が転写開始部位の５’側（−２１４と
−２０４）に位置する。キャップ部位のすぐ隣りには８
３ヌクレオチドのエキソンが存在し，これに大きいイン
トロン（約１ｋｂ）が続いている。
【００４６】ユビキチンプロモーター並びにユビキチン
構造遺伝子はトウモロコシゲノムの２個の約２ｋｂＰｓ
ｔ断片上に単離することができる（図１）。断片全体は
ｍＲＮＡまたはタンパクの発現を監視することによりプ
ロモーター機能を示すために用いられ得る。ユビキチン
翻訳開始コドンの下流に異種遺伝子を導入することによ
って融合タンパクが発現する。ユビキチンプロモーター
と翻訳開始コドンとの間に異種遺伝子（それ自身の開始
コドンと停止コドンを有する）を挿入すると，挿入され
た遺伝子に対応する自然のポリペプチドが発現する。所
望の構造遺伝子を挿入するには遺伝子の末端に平滑末端
のリンカーを使用すると最も好都合に実施できる。
構造遺伝子はトウモロコシゲノムの２個の約２ｋｂＰｓ
ｔ断片上に単離することができる（図１）。断片全体は
ｍＲＮＡまたはタンパクの発現を監視することによりプ
ロモーター機能を示すために用いられ得る。ユビキチン
翻訳開始コドンの下流に異種遺伝子を導入することによ
って融合タンパクが発現する。ユビキチンプロモーター
と翻訳開始コドンとの間に異種遺伝子（それ自身の開始
コドンと停止コドンを有する）を挿入すると，挿入され
た遺伝子に対応する自然のポリペプチドが発現する。所
望の構造遺伝子を挿入するには遺伝子の末端に平滑末端
のリンカーを使用すると最も好都合に実施できる。
【００４７】代わりに，ユビキチン遺伝子断片を特に構
造遺伝子の開始直前の部位，または転写開始部位の前の
部位で制限することもできる。例えば，本発明ではプロ
モーター断片を約２ｋｂＰｓｔＩ断片としてユビキチン
遺伝子から誘導した。プロモーター断片に翻訳開始コド
ンが欠けていることを確実にするため，５’側領域を有
する断片を所望の数のヌクレオチド対を除去する様に制
御された条件下で二本鎖エキソヌクレアーゼで選択的に
消化した。好ましくはユビキチン翻訳開始コドンを取り
除き，その結果挿入された遺伝子の翻訳はそれ自身の開
始部位から開始する。次にリンカーまたはホモポリマー
テーリングを使用して単離された（かつ，−短くなっ
た）プロモーター断片をベクターに挿入し，べクターの
残余領域と適合する所望の制限部位を導入する。一般に
は，プロモーター断片を特殊制限酵素で開裂し，その結
果生じた短いＤＮＡ断片についてプロモーター機能をテ
ストし，無傷プロモーターの機能と比較する。さらに，
ＤＮＡコドンを加え，および／または現存の配列に変更
を加えて，プロモーター機能を保持する誘導ＤＮＡ断片
を調製する。
造遺伝子の開始直前の部位，または転写開始部位の前の
部位で制限することもできる。例えば，本発明ではプロ
モーター断片を約２ｋｂＰｓｔＩ断片としてユビキチン
遺伝子から誘導した。プロモーター断片に翻訳開始コド
ンが欠けていることを確実にするため，５’側領域を有
する断片を所望の数のヌクレオチド対を除去する様に制
御された条件下で二本鎖エキソヌクレアーゼで選択的に
消化した。好ましくはユビキチン翻訳開始コドンを取り
除き，その結果挿入された遺伝子の翻訳はそれ自身の開
始部位から開始する。次にリンカーまたはホモポリマー
テーリングを使用して単離された（かつ，−短くなっ
た）プロモーター断片をベクターに挿入し，べクターの
残余領域と適合する所望の制限部位を導入する。一般に
は，プロモーター断片を特殊制限酵素で開裂し，その結
果生じた短いＤＮＡ断片についてプロモーター機能をテ
ストし，無傷プロモーターの機能と比較する。さらに，
ＤＮＡコドンを加え，および／または現存の配列に変更
を加えて，プロモーター機能を保持する誘導ＤＮＡ断片
を調製する。
【００４８】得られたＤＮＡ構築物は植物宿主に於ける
目的の構造遺伝子に対するクローニング用の媒体として
役に立つものである。本発明では，トウモロコシユビキ
チンプロモーターまたはカリフラワーモザイクウイルス
プロモーターの制御下で，ＣＡＴをコードしている構造
遺伝子をオート麦とタバコ細胞で発現させた。ユビキチ
ンプロモーターを採用した場合，双子葉宿主より単子葉
宿主に於ける方が発現の度合が大きく，カリフラワーモ
ザイクウイルスプロモーターを使用した場合は単子葉よ
り双子葉宿主で発現の度合が大きくなった。発現レベル
の差異は異なるプロモーターが持つ固有の相違，並びに
単子葉類と双子葉類間の発現調節と過程に於ける基本的
な細胞の相違に由来している。現在までのところ，単子
葉類プロモーターが双子葉類の宿主細胞内でうまく機能
するか否かは定常的でなく不明確で，予測できない。
目的の構造遺伝子に対するクローニング用の媒体として
役に立つものである。本発明では，トウモロコシユビキ
チンプロモーターまたはカリフラワーモザイクウイルス
プロモーターの制御下で，ＣＡＴをコードしている構造
遺伝子をオート麦とタバコ細胞で発現させた。ユビキチ
ンプロモーターを採用した場合，双子葉宿主より単子葉
宿主に於ける方が発現の度合が大きく，カリフラワーモ
ザイクウイルスプロモーターを使用した場合は単子葉よ
り双子葉宿主で発現の度合が大きくなった。発現レベル
の差異は異なるプロモーターが持つ固有の相違，並びに
単子葉類と双子葉類間の発現調節と過程に於ける基本的
な細胞の相違に由来している。現在までのところ，単子
葉類プロモーターが双子葉類の宿主細胞内でうまく機能
するか否かは定常的でなく不明確で，予測できない。
【００４９】酵素，ホルモンなどの所望のタンパクの生
成のために多くの構造遺伝子が本願のＤＮＡクローニン
グベクターに導入され得る。さらに，この型のＤＮＡ構
成物は特殊な遺伝子由来のＤＮＡの産生を増加させるた
めに，並びにｃＤＮＡ産生に使用することができるｍＲ
ＮＡの産生を増加させるために使用することができる。
特殊ＤＮＡ配列を有するこのようなベクターは広く応用
されており，非常に有用である；例えばこれらは細菌に
於ける遺伝子増幅，あるいはさらに付加的な細胞機能を
発揮できる高等細胞に於ける発現に使用することができ
る。医用および農業用に有用なタンパクを商業生産する
のに高等真核生物の組み換え系を利用する利点は原核生
物や下等真核生物宿主に於ては複写することが難しい翻
訳後の正確な修飾が確保できることである。
成のために多くの構造遺伝子が本願のＤＮＡクローニン
グベクターに導入され得る。さらに，この型のＤＮＡ構
成物は特殊な遺伝子由来のＤＮＡの産生を増加させるた
めに，並びにｃＤＮＡ産生に使用することができるｍＲ
ＮＡの産生を増加させるために使用することができる。
特殊ＤＮＡ配列を有するこのようなベクターは広く応用
されており，非常に有用である；例えばこれらは細菌に
於ける遺伝子増幅，あるいはさらに付加的な細胞機能を
発揮できる高等細胞に於ける発現に使用することができ
る。医用および農業用に有用なタンパクを商業生産する
のに高等真核生物の組み換え系を利用する利点は原核生
物や下等真核生物宿主に於ては複写することが難しい翻
訳後の正確な修飾が確保できることである。
【００５０】本発明でトウモロコシユビキチンプロモー
ターが単子葉類と双子葉類の例としてオート麦とタバコ
で機能を果たすことが示され，そしてこのプロモーター
が他の細胞でも同様に機能を果たすと考えられる。この
ような系には，これに限定されるものではないが，例と
して述べると，ユビキチン遺伝子が単離でき，高度に維
持されることが判明している細胞，例えばトウモロコシ
に加えて他の単子葉類,タバコ以外の双子葉類，酵母の
ような下等真核生物および哺乳類細胞が包含される。ト
ウモロコシユビキチンプロモーターと共に使用するのに
適した細胞系のスクリーニングは，ここに記した方法に
従って，実施され得，過度の実験を必要としない。個々
の系に於てＤＮＡコードセグメントの発現に適したベク
ターの構築については既に詳細に論述されている。複数
の宿主内で複製可能なシャトルベクター，例えば酵母と
哺乳類細胞の両方，植物と動物細胞，および植物と細菌
細胞に対するシャトル発現ベクターについても論述され
ている。さらに，植物プロモーターとしての機能に関し
てはトウモロコシユビキチン遺伝子と類似している，他
の系由来のユビキチン遺伝子がユビキチンプロモーター
配列のための起源として採用できることが理解されるだ
ろう。
ターが単子葉類と双子葉類の例としてオート麦とタバコ
で機能を果たすことが示され，そしてこのプロモーター
が他の細胞でも同様に機能を果たすと考えられる。この
ような系には，これに限定されるものではないが，例と
して述べると，ユビキチン遺伝子が単離でき，高度に維
持されることが判明している細胞，例えばトウモロコシ
に加えて他の単子葉類,タバコ以外の双子葉類，酵母の
ような下等真核生物および哺乳類細胞が包含される。ト
ウモロコシユビキチンプロモーターと共に使用するのに
適した細胞系のスクリーニングは，ここに記した方法に
従って，実施され得，過度の実験を必要としない。個々
の系に於てＤＮＡコードセグメントの発現に適したベク
ターの構築については既に詳細に論述されている。複数
の宿主内で複製可能なシャトルベクター，例えば酵母と
哺乳類細胞の両方，植物と動物細胞，および植物と細菌
細胞に対するシャトル発現ベクターについても論述され
ている。さらに，植物プロモーターとしての機能に関し
てはトウモロコシユビキチン遺伝子と類似している，他
の系由来のユビキチン遺伝子がユビキチンプロモーター
配列のための起源として採用できることが理解されるだ
ろう。
【００５１】本発明はまた，トウモロコシユビキチンプ
ロモーターの熱ショックプロモーターとしての利用に−
関する。２個の熱ショックコンセンサス配列はトウモロ
コシユビキチン遺伝子の上流，−２１４と−２０４の位
置に存在する。多くの真核生物では，熱ショックコンセ
ンサス配列と相同の天然に存在する配列および化学合成
された配列が遺伝子発現の誘導を調節することが判明し
ている。ユビキチンプロモーターは熱ショック要素の配
列と同一の配列を含有しているが，このプロモーターは
（１）転写開始部位の３’側に非翻訳イントロンを有
し，（２）ユビキチン発現を構成的並びに誘発的に調節
する点で従来の熱ショックプロモーターとは区別され
る。熱ショック要素とプロモーター領域内に存在する大
きなイントロン間の機能的関係は現在までの技術段階で
は解明されていない。これらの特徴的な配列間のヌクレ
オチドの距離および一方の要素の他方に対する方向と位
置づけは本発明に於ては派生した調節断片の基本的プロ
モーター機能が活性に保たれている限りは，可変である
と仮定する。
ロモーターの熱ショックプロモーターとしての利用に−
関する。２個の熱ショックコンセンサス配列はトウモロ
コシユビキチン遺伝子の上流，−２１４と−２０４の位
置に存在する。多くの真核生物では，熱ショックコンセ
ンサス配列と相同の天然に存在する配列および化学合成
された配列が遺伝子発現の誘導を調節することが判明し
ている。ユビキチンプロモーターは熱ショック要素の配
列と同一の配列を含有しているが，このプロモーターは
（１）転写開始部位の３’側に非翻訳イントロンを有
し，（２）ユビキチン発現を構成的並びに誘発的に調節
する点で従来の熱ショックプロモーターとは区別され
る。熱ショック要素とプロモーター領域内に存在する大
きなイントロン間の機能的関係は現在までの技術段階で
は解明されていない。これらの特徴的な配列間のヌクレ
オチドの距離および一方の要素の他方に対する方向と位
置づけは本発明に於ては派生した調節断片の基本的プロ
モーター機能が活性に保たれている限りは，可変である
と仮定する。
【００５２】プロモーター領域内のイントロンの存在は
未処理のｍＲＮＡ転写物の相対的安定性に関連し，間接
的に，合成されたタンパクのレベルに関連する（Ｃａｌ
ｌｉｓｅｔａ１．（１９８７）ＧｅｎｅｓａｎｄＤｅv
ｅｌｏｐｍｅｎｔ１：１１８３−１２００）。構成的に
発現したユビキチンｍＲＮＡはニワトリ胎児の線維芽細
胞では安定レベルに保たれ，一方，ストレスに応答して
形成されたユビキチンｍＲＮＡの半減期は約１．５〜２
時間であると報告されている。
未処理のｍＲＮＡ転写物の相対的安定性に関連し，間接
的に，合成されたタンパクのレベルに関連する（Ｃａｌ
ｌｉｓｅｔａ１．（１９８７）ＧｅｎｅｓａｎｄＤｅv
ｅｌｏｐｍｅｎｔ１：１１８３−１２００）。構成的に
発現したユビキチンｍＲＮＡはニワトリ胎児の線維芽細
胞では安定レベルに保たれ，一方，ストレスに応答して
形成されたユビキチンｍＲＮＡの半減期は約１．５〜２
時間であると報告されている。
【００５３】酵母に於ては４個の明確なユビキチンコー
ド遺伝子座が報告されている。構成的に発現されたユビ
キチンはユビキチン遺伝子の３個のうちの１個以上のも
のによってコードされている。３個のうちの２個はコー
ド領域のすぐ内側に約４００ｂｐのイントロンを含有し
ている。４個目のユビキチン遺伝子は非翻訳イントロン
を欠いているが多重の熱ショック要素から成っており，
主としてストレスに応答してユビキチン発現を誘導する
働きをする。後者のユビキチン遺伝子は構成的に機能す
るのではなく，むしろ熱ショックやストレス信号に応答
して機能する（Ｅ．Ｏｚｋａｙｎａｋｅｔａｌ．（１９
８７）ＥＭＢＯＪ．６：１４２９−１４３９）。
ド遺伝子座が報告されている。構成的に発現されたユビ
キチンはユビキチン遺伝子の３個のうちの１個以上のも
のによってコードされている。３個のうちの２個はコー
ド領域のすぐ内側に約４００ｂｐのイントロンを含有し
ている。４個目のユビキチン遺伝子は非翻訳イントロン
を欠いているが多重の熱ショック要素から成っており，
主としてストレスに応答してユビキチン発現を誘導する
働きをする。後者のユビキチン遺伝子は構成的に機能す
るのではなく，むしろ熱ショックやストレス信号に応答
して機能する（Ｅ．Ｏｚｋａｙｎａｋｅｔａｌ．（１９
８７）ＥＭＢＯＪ．６：１４２９−１４３９）。
【００５４】トウモロコシではユビキチンは小さい多重
遺伝子核によってコードされる。本発明ではユビキチン
遺伝子の１個についてのヌクレオチド配列が記載されて
いる。転写および翻訳開始部位間の大きなイントロン
（約１ｋｂ）並びにコンセンサス熱ショック配列に対応
するヌクレオチド配列がトウモロコシユビキチンプロモ
ーター領域内にみとめられる。これら２つの特殊な領域
は多分ユビキチン合成と，外部の影響に対応してユビキ
チンレベルを調節するのにかかわっている。ユビキチン
プロモーター内に包含されているイントロンと熱ショッ
ク要素との間の機能上の関係は解明されていない。本発
明ではトウモロコシユビキチンプロモーターが正常条件
下および熱ショック条件下の両方でｍＲＮＡの合成を調
節すること，および転写調節の変化が熱ショック後ユビ
キチン合成が増大した理由となっていることについて報
告する。以下に本発明を例示するために，実施例を示す
が，これらは本発明を限定するものではない。
遺伝子核によってコードされる。本発明ではユビキチン
遺伝子の１個についてのヌクレオチド配列が記載されて
いる。転写および翻訳開始部位間の大きなイントロン
（約１ｋｂ）並びにコンセンサス熱ショック配列に対応
するヌクレオチド配列がトウモロコシユビキチンプロモ
ーター領域内にみとめられる。これら２つの特殊な領域
は多分ユビキチン合成と，外部の影響に対応してユビキ
チンレベルを調節するのにかかわっている。ユビキチン
プロモーター内に包含されているイントロンと熱ショッ
ク要素との間の機能上の関係は解明されていない。本発
明ではトウモロコシユビキチンプロモーターが正常条件
下および熱ショック条件下の両方でｍＲＮＡの合成を調
節すること，および転写調節の変化が熱ショック後ユビ
キチン合成が増大した理由となっていることについて報
告する。以下に本発明を例示するために，実施例を示す
が，これらは本発明を限定するものではない。
【００５５】
【実施例】（実施例１：トウモロコシ・ユビキチン遺伝
子の単離および特徴付け） Ａ．植物の成長 トウモロコシの近交系Ｂ７３を，暗所にて２５℃で４〜
５日間，湿潤バーミキュライトにおいて成長させた。中
茎節から茎頂までの実生苗の部分を採取し，液体窒素中
で凍結させ，−８０℃で保存した。
子の単離および特徴付け） Ａ．植物の成長 トウモロコシの近交系Ｂ７３を，暗所にて２５℃で４〜
５日間，湿潤バーミキュライトにおいて成長させた。中
茎節から茎頂までの実生苗の部分を採取し，液体窒素中
で凍結させ，−８０℃で保存した。
【００５６】Ｂ．ＲＮＡの単離および分析 チオシアン酸グアニジン法を用いて凍結組織から全細胞
ＲＮＡを抽出した。ポリＵ−セファデックス（Ｂｅｔｈ
ｅｓｄａＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，
Ｇａｉｔｈｅｒｓ−ｂｕｒｇ，ＭＤ）カラムを通過させ
ることにより，全細胞ＲＮＡからポリ（Ａ）+ＲＮＡを
単離した。全ＲＮＡあるいはポリ（Ａ）+ＲＮＡを，３
％（ｗｔ／ｖｏＩ）ホルムアルデヒドを含む１．５％ア
ガロースゲルで電気泳動した。２５ｍＭリン酸ナトリウ
ム（ｐＨ６．５）を用いた毛細管ブロッティングによ
り，ＲＮＡをＧｅｎｅＳｃｒｅｅｎTM（ＤｕＰｏｎｔ）
に移した。
ＲＮＡを抽出した。ポリＵ−セファデックス（Ｂｅｔｈ
ｅｓｄａＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，
Ｇａｉｔｈｅｒｓ−ｂｕｒｇ，ＭＤ）カラムを通過させ
ることにより，全細胞ＲＮＡからポリ（Ａ）+ＲＮＡを
単離した。全ＲＮＡあるいはポリ（Ａ）+ＲＮＡを，３
％（ｗｔ／ｖｏＩ）ホルムアルデヒドを含む１．５％ア
ガロースゲルで電気泳動した。２５ｍＭリン酸ナトリウ
ム（ｐＨ６．５）を用いた毛細管ブロッティングによ
り，ＲＮＡをＧｅｎｅＳｃｒｅｅｎTM（ＤｕＰｏｎｔ）
に移した。
【００５７】ブロットは，５０％ホルムアミド，５×Ｓ
ＳＣ，１００μｇ変性サケＤＮＡ，４０ｍＭリン酸ナト
リウム（ｐＨ６．８），０．５％ＢＳＡ，および１％Ｓ
ＤＳ中でプレハイブリダイズさせた。ブロットは，５０
％ホルムアルデビド，５×ＳＳＣ，１００μｇ／ｍｌ変
性サケＤＮＡ，４０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．
８），および１０％硫酸デキストラン中でハイブリダイ
ズさせた。
ＳＣ，１００μｇ変性サケＤＮＡ，４０ｍＭリン酸ナト
リウム（ｐＨ６．８），０．５％ＢＳＡ，および１％Ｓ
ＤＳ中でプレハイブリダイズさせた。ブロットは，５０
％ホルムアルデビド，５×ＳＳＣ，１００μｇ／ｍｌ変
性サケＤＮＡ，４０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．
８），および１０％硫酸デキストラン中でハイブリダイ
ズさせた。
【００５８】Ｃ．ｃＤＮＡライブラリ一の構成 二本鎖ｃＤＮＡをＭｕｒｒａｙら（１９８３），Ｐｌａ
ｎｔＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．２：７５−８４の方法の改良法
によって，ポリ（Ａ）+ＲＮＡから合成した。二本鎖ｃ
ＤＮＡのオリゴ（ｄＣ）テイリングと，オリゴ（ｄＧ）
テイルｐＢＲ３２２によるオリゴ（ｄＣ）テイルｃＤＮ
Ａのアニーリングとを，標準的技術を用いて実施した。
アニールしたＤＮＡを，Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１に形質
転換し，テトラサイクリン（１５μｇ／ｍｌ）を含むＬ
寒天プレート上のニトロセルロースフィルター（Ｍｉｌ
ｌｉｐｏｒｅ，ＨＡＴＦ；０．４５μｍ）に直接プレー
トした。
ｎｔＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．２：７５−８４の方法の改良法
によって，ポリ（Ａ）+ＲＮＡから合成した。二本鎖ｃ
ＤＮＡのオリゴ（ｄＣ）テイリングと，オリゴ（ｄＧ）
テイルｐＢＲ３２２によるオリゴ（ｄＣ）テイルｃＤＮ
Ａのアニーリングとを，標準的技術を用いて実施した。
アニールしたＤＮＡを，Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１に形質
転換し，テトラサイクリン（１５μｇ／ｍｌ）を含むＬ
寒天プレート上のニトロセルロースフィルター（Ｍｉｌ
ｌｉｐｏｒｅ，ＨＡＴＦ；０．４５μｍ）に直接プレー
トした。
【００５９】Ｄ．ユビキチンｃＤＮＡの同定 分別ハイブリダイゼーションによりｃＤＮＡライブラリ
ーをスクリーニングして，潜在的に光調節されたｍＲＮ
Ａを表現する数多くのｃＤＮＡを得た。これらのｃＤＮ
Ａの一部を選択し，ＲＮＡブロット分析によってさらに
スクリーンして光調節を確認した。１つのｃＤＮＡクロ
ーン，ｐ６Ｒ７．２ｂ１は，赤色光調節ｍＲＮＡを表現
しないが，大きさおよび生産量の異なる３つのポリ
（Ａ）+ＲＮＡとハイブリダイズしたことから注目され
た。ニックトランスレーションしたｐ６ｔ７．２ｂ１
は，２，１００ヌクレオチドおよび１，６００ヌクレオ
チドのｍＲＮＡとは強くハイブリダイズしたが，８００
ヌクレオチドの転写物とはわずかしかハイブリダイズし
なかった。しかしながら，ｐ６Ｔ７．２ｂ１のｃＤＮＡ
挿入物をｐＳＰ６４にサブクローン化して構築したプラ
スミドである線形ｐＣＡ２１０のＳＰ６ポリメラーゼ転
写により生成される一本鎖32ｐ一標識ＲＮＡとのノーザ
ンブロットのハイブリダイゼーションは，３つの転写物
全部を容易に検出した。
ーをスクリーニングして，潜在的に光調節されたｍＲＮ
Ａを表現する数多くのｃＤＮＡを得た。これらのｃＤＮ
Ａの一部を選択し，ＲＮＡブロット分析によってさらに
スクリーンして光調節を確認した。１つのｃＤＮＡクロ
ーン，ｐ６Ｒ７．２ｂ１は，赤色光調節ｍＲＮＡを表現
しないが，大きさおよび生産量の異なる３つのポリ
（Ａ）+ＲＮＡとハイブリダイズしたことから注目され
た。ニックトランスレーションしたｐ６ｔ７．２ｂ１
は，２，１００ヌクレオチドおよび１，６００ヌクレオ
チドのｍＲＮＡとは強くハイブリダイズしたが，８００
ヌクレオチドの転写物とはわずかしかハイブリダイズし
なかった。しかしながら，ｐ６Ｔ７．２ｂ１のｃＤＮＡ
挿入物をｐＳＰ６４にサブクローン化して構築したプラ
スミドである線形ｐＣＡ２１０のＳＰ６ポリメラーゼ転
写により生成される一本鎖32ｐ一標識ＲＮＡとのノーザ
ンブロットのハイブリダイゼーションは，３つの転写物
全部を容易に検出した。
【００６０】ＲＮＡ−ＲＮＡハイブリッドはＤＮＡ−Ｒ
ＮＡハイブリッドよりも熱に安定であることが知られて
いるので，ノーザンブロットハイブリダイゼーションに
おいては，ニックトランスレーションしたＤＮＡプロー
ブではなく一本鎖ＲＮＡプローブを使用した。やはり，
ブロットがニックトランスレーションしたＤＮＡあるい
は一本鎖ＲＮＡプローブのいずれとハイブリダイズした
かにかかわらず，ノーザンブロット法で測定されるよう
に，１，６００塩基の転写物は，２，１００塩基の転写
物の約３分の１しか認められなかった。最も少ない転写
物は，ＲＮＡプローブとハイブリダイズしたブロットに
おける２，１００塩基のｍＲＮＡの約半分であった。
ＮＡハイブリッドよりも熱に安定であることが知られて
いるので，ノーザンブロットハイブリダイゼーションに
おいては，ニックトランスレーションしたＤＮＡプロー
ブではなく一本鎖ＲＮＡプローブを使用した。やはり，
ブロットがニックトランスレーションしたＤＮＡあるい
は一本鎖ＲＮＡプローブのいずれとハイブリダイズした
かにかかわらず，ノーザンブロット法で測定されるよう
に，１，６００塩基の転写物は，２，１００塩基の転写
物の約３分の１しか認められなかった。最も少ない転写
物は，ＲＮＡプローブとハイブリダイズしたブロットに
おける２，１００塩基のｍＲＮＡの約半分であった。
【００６１】制限断片をＭ１３ｍｐ１８および／あるい
はｍｐ１９にサブクローン化し，ジデオキシヌクレオチ
ド鎖終結法によって配列決定した。クローンの配列分析
は，ＴＡＡ停止コドンで終結する８１８ｂｐの単一の長
いオープンリーディングフレームを明らかにした Ｎａ
ｔｉｏｎａｌＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＦ
ｏｕｎｄａｔｉｏｎのライブラリーを，ＤｆａｓｔＰプ
ログラムを用いて，推定アミノ酸配列と相同なタンパク
配列について検索した。トウモロコシｃＤＮＡクローン
の推定アミノ酸配列と，ウシおよびヒトのユビキチン配
列との間には，９５％以上の相同性が認められた。
はｍｐ１９にサブクローン化し，ジデオキシヌクレオチ
ド鎖終結法によって配列決定した。クローンの配列分析
は，ＴＡＡ停止コドンで終結する８１８ｂｐの単一の長
いオープンリーディングフレームを明らかにした Ｎａ
ｔｉｏｎａｌＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＦ
ｏｕｎｄａｔｉｏｎのライブラリーを，ＤｆａｓｔＰプ
ログラムを用いて，推定アミノ酸配列と相同なタンパク
配列について検索した。トウモロコシｃＤＮＡクローン
の推定アミノ酸配列と，ウシおよびヒトのユビキチン配
列との間には，９５％以上の相同性が認められた。
【００６２】Ｅ．ゲノムライブラリーの構築およびスク
リーニング 高分子量のトウモロコシＤＮＡを，凍結トウモロコシ実
生苗から単離した。ＤＮＡをＳａｕ３Ａによって部分的
に消化させ，大きさによって分別し，Ｃｈａｒｏｎ３５
（Ｌｏｅｎｅｎら（１９８３）Ｇｅｎｅ２６：１７１−
１７９）のＢａｍＨＩ部位にクローン化した。約２×１
０6ｐｆｕのライブラリーを，ユビキチンｃＤＮＡクロ
ーンをハイブリダイゼーションプローブとして用いて，
ｉｎｓｉｔｕプラークハイブリダイゼーションにより，
ユビキチンｃＤＮＡクローンと相同の配列を含む組換え
体ファージについてスクリーニングした。ブロス溶解産
物から組換え体ファージを精製し，標準的技術を用いて
ファージＤＮＡを単離した。制限エンドヌクレアーゼの
消化は，製造業者の指示書に従って実施した。
リーニング 高分子量のトウモロコシＤＮＡを，凍結トウモロコシ実
生苗から単離した。ＤＮＡをＳａｕ３Ａによって部分的
に消化させ，大きさによって分別し，Ｃｈａｒｏｎ３５
（Ｌｏｅｎｅｎら（１９８３）Ｇｅｎｅ２６：１７１−
１７９）のＢａｍＨＩ部位にクローン化した。約２×１
０6ｐｆｕのライブラリーを，ユビキチンｃＤＮＡクロ
ーンをハイブリダイゼーションプローブとして用いて，
ｉｎｓｉｔｕプラークハイブリダイゼーションにより，
ユビキチンｃＤＮＡクローンと相同の配列を含む組換え
体ファージについてスクリーニングした。ブロス溶解産
物から組換え体ファージを精製し，標準的技術を用いて
ファージＤＮＡを単離した。制限エンドヌクレアーゼの
消化は，製造業者の指示書に従って実施した。
【００６３】Ｆ．ゲノミックサザンブロット分析 単離した高分子量のトウモロコシＤＮＡを，ＥｃｏＲ
Ｉ，ＨｉｎｄIII，およびＳａｃＩで消化し，０．７％
アガロースゲル上で分画し，これらのＤＮＡ断片をＧｅ
ｎｅＳｃｒｅｅｎＰｌｕｓTM（ＤｕＰｏｎｔ）に移し
た。フィルターを，６×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝０．１５
ＭＮａＣｌ，０．０２５Ｍクエン酸ナトリウム），５×
デンハート培地，１００μｇ／ｍｌの音波処理した変性
サケＤＮＡ，２０μｇ／ｍｌポリアデニル酸，１０ｍＭ
ＥＤＴＡ二ナトリウム，および０．５％ＳＤＳ中で，６
５℃にて６〜８時間プレハイブリダイズさせた。フィル
ターは，新鮮な緩衝液中で６５℃にて，32ｐ−標識プラ
スミドＤＮＡ（ｐＣＡ２１０）とハイブリダイズさせ
た。ＫｏｄａｋＸ−ＯＭＡＴＡＲフィルムおよびＤｕＰ
ｏｎｔＣｒｏｎｅｘＬｉｇｈｔｎｉｎｇＰｌｕｓ増感ス
クリーンを１枚使用して，−８０℃でオートラジオグラ
フィーを行った。各消化物において，８〜１０の制限断
片が，ニックトランスレーションしたｐＣＡ２１０プロ
ーブとハイブリダイズした。このことは，ユビキチンが
小さな多重遺伝子群によってコードされることを示唆し
ている。ユビキチンが小さな多重遺伝子群によってコー
ドされるという証拠は，ツメガエル，大麦，および酵母
についても報告されている。
Ｉ，ＨｉｎｄIII，およびＳａｃＩで消化し，０．７％
アガロースゲル上で分画し，これらのＤＮＡ断片をＧｅ
ｎｅＳｃｒｅｅｎＰｌｕｓTM（ＤｕＰｏｎｔ）に移し
た。フィルターを，６×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝０．１５
ＭＮａＣｌ，０．０２５Ｍクエン酸ナトリウム），５×
デンハート培地，１００μｇ／ｍｌの音波処理した変性
サケＤＮＡ，２０μｇ／ｍｌポリアデニル酸，１０ｍＭ
ＥＤＴＡ二ナトリウム，および０．５％ＳＤＳ中で，６
５℃にて６〜８時間プレハイブリダイズさせた。フィル
ターは，新鮮な緩衝液中で６５℃にて，32ｐ−標識プラ
スミドＤＮＡ（ｐＣＡ２１０）とハイブリダイズさせ
た。ＫｏｄａｋＸ−ＯＭＡＴＡＲフィルムおよびＤｕＰ
ｏｎｔＣｒｏｎｅｘＬｉｇｈｔｎｉｎｇＰｌｕｓ増感ス
クリーンを１枚使用して，−８０℃でオートラジオグラ
フィーを行った。各消化物において，８〜１０の制限断
片が，ニックトランスレーションしたｐＣＡ２１０プロ
ーブとハイブリダイズした。このことは，ユビキチンが
小さな多重遺伝子群によってコードされることを示唆し
ている。ユビキチンが小さな多重遺伝子群によってコー
ドされるという証拠は，ツメガエル，大麦，および酵母
についても報告されている。
【００６４】各消化物中の２〜３の断片はプローブと強
くハイブリダイズしたが，残りの断片は弱くハイブリダ
イズした。ハイブリダイゼーション強度の差は配列相同
性の相違を反映すると考えられ，そのためｃＤＮＡプロ
ーブはそれが誘導された遺伝子と優先的にハイブリダイ
ズする。
くハイブリダイズしたが，残りの断片は弱くハイブリダ
イズした。ハイブリダイゼーション強度の差は配列相同
性の相違を反映すると考えられ，そのためｃＤＮＡプロ
ーブはそれが誘導された遺伝子と優先的にハイブリダイ
ズする。
【００６５】酵母およびツメガエル由来のユビキチン遺
伝子の特徴付けが行われており，それぞれ６個および少
なくとも１２個のユビキチンリピートを有している。ノ
ーザンブロットで検出された３つの転写物に相当するト
ウモロコシ遺伝子は，２．１ｋｂ，１．６ｋｂ，および
０．８ｋｂのｍＲＮＡに，それぞれ７個，５個，および
１または２個のユビキチンリピートを有しうる。本発明
中で述べるトウモロコシ・ユビキチン遺伝子は７個のリ
ピートをコードする。従って，サザンブロットで観察さ
れたハイブリダイゼーション強度の差は，制限断片が異
なる数のユビキチンリピートを含むことの結果である。
伝子の特徴付けが行われており，それぞれ６個および少
なくとも１２個のユビキチンリピートを有している。ノ
ーザンブロットで検出された３つの転写物に相当するト
ウモロコシ遺伝子は，２．１ｋｂ，１．６ｋｂ，および
０．８ｋｂのｍＲＮＡに，それぞれ７個，５個，および
１または２個のユビキチンリピートを有しうる。本発明
中で述べるトウモロコシ・ユビキチン遺伝子は７個のリ
ピートをコードする。従って，サザンブロットで観察さ
れたハイブリダイゼーション強度の差は，制限断片が異
なる数のユビキチンリピートを含むことの結果である。
【００６６】ユビキチンのｃＤＮＡクローンは，Ｅｃｏ
ＲＩおよびＨｉｎｄIII部位を含まなかった。しかしな
がら，トウモロコシのユビキチン遺伝子は，ゲノム消化
物において使用される制限エンドヌクレアーゼによって
切断されるイントロンを含みうる。この結果，ユビキチ
ンのエクソンが異なる断片に存在することになり，サザ
ンブロットで観察されたハイブリダイゼーション強度の
差が説明される。
ＲＩおよびＨｉｎｄIII部位を含まなかった。しかしな
がら，トウモロコシのユビキチン遺伝子は，ゲノム消化
物において使用される制限エンドヌクレアーゼによって
切断されるイントロンを含みうる。この結果，ユビキチ
ンのエクソンが異なる断片に存在することになり，サザ
ンブロットで観察されたハイブリダイゼーション強度の
差が説明される。
【００６７】Ｇ．ユビキチン配列の分析および転写開始
部位の分析 ＤＮＡポリメラーゼ１（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎ
ｈｅｉｍ）のクレノー断片を使用して，ジデオキシヌク
レオチド鎖終結法による配列決定を実施した。ｃＤＮＡ
クローンｐ６Ｔ７．２ｂ．１に相同なゲノミッククロー
ン７．２ｂ１（図１Ｂ参照）の１．８５ｋｂＰｓｔＩ断
片と，ＡＣ３＃９Ｍ１３ＲＦと命名された直ぐ上流の２
ｋｂＰｓｔＩ断片とを，両方向でＭ１３ｍｐ１９にサブ
クローン化した。組換え体ファージＲＦＤＮＡをプラス
ミドＤＮＡに関して調製した。これらのＰｓｔＩ断片の
両方の鎖を配列決定するために，一方向進行性欠失クロ
ーンを調製した。エキソヌクレアーゼ皿とエキソヌクレ
アーゼVIIとは，それぞれＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏ
ｌａｂｓおよびＢｅｔｈｅｓｄａＲｅｓｅａｒｃｈＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓより入手した。Ｕｎｉｖｅｒｓｉ
ｔｙｏｆＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐ
ｕｔｅｒＧｒｏｕｐより提供されたプログラムを用いて
ＤＮＡ配列のコンピューター分析を実施した。ユビキチ
ン遺伝子の転写開始部位およびこの遺伝子の５’非翻訳
領域のイントロンとエキソンとの３’接合部を，Ｓ１ヌ
クレアーゼマッピングによって決定した。Ｓ１プローブ
に適した断片は以下のように調製した。ユビキチンＤＮ
ＡをＢｑIIIまたはＸｈｏＩのいずれかで消化した。次
に，−32ＰＡＴＰ（６，０００Ｃｉ／mmｏｌ，ＮｅｗＥ
ｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）お
よびＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（ＮｅｗＥｎｇｌａ
ｎｄＢｉｏｌａｂｓ）を用いて，これらを32ｐで標識し
た。ＢｑｌIIおよびＸｈｏＩ切断部位をキナーゼ処理し
た断片を，それぞれＰｓｔＩおよびＥｃｏＲＩでさらに
消化すると，９４６ｂｐのＰｓｔＩ−Ｂｑｌ II 断片お
よび６４３ｂｐのＥｃｏＲＩ−ＸｈｏＩ断片が生成し
た。５％ポリアクリルアミドゲルを通して電気泳動する
ことにより，これらの断片を他の末端標識断片から分離
した。９４６ｂｐのＰｓｔＩ−ＢｑｌII 断片および６
４３ｂｐのＥｃｏＲＩ−ＸｈｏＩ断片を含む切片を，ゲ
ルから切除し，標識ＤＮＡをゲルから溶出した。末端標
識ＤＮＡ断片（１０〜２０ｆｍｏｌ）を，８０％の脱イ
オン化ホルムアミドを含有する緩衝液３０μｌ，０．４
Ｍ塩化ナトリウム，４０ｍＭＰＩＰＥＳ（ｐＨ６．
４），および１ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）中で，２μ
ｇのポリ（Ａ）+ＲＮＡとハイブリダイズさせた。核酸
溶液を８０℃にて約１６時間加熱した。２８０ｍＭ塩化
ナトリウム，５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．６），
４．５ｍＭ硫酸亜鉛，および２０μｇ／ｍｌの一本鎖Ｄ
ＮＡを含む氷冷Ｓ１消化緩衝液（３００μｌ）を添加
し，ＤＮＡを２５０単位／ｍｌのＳ１ヌクレアーゼ（Ｎ
ｅｗＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ）で消化した。２．
５Ｍ酢酸アンモニウムおよび５０ｍＭＥＤＴＡを含むＳ
１終結混合物７５μｌで反応を停止させた。次に，Ｓ１
ヌクレアーゼ消化産物を６％ポリアクリルアミド／８Ｍ
尿素ゲル上で分離し，オートラジオグラフィーにより可
視化した。ユビキチン配列中のＳ１保護断片の終点は，
Ｓ１プローブとして使用した末端標識断片にマクサム／
ギルバート塩基修飾−切断反応を実施して生成した梯子
形配列と比較することによって決定された。トウモロコ
シのユビキチン−１遺伝子，７．２ｂ１のＤＮＡ配列を
図２に示す。この配列は，翻訳開始部位の上流にある８
９９塩基，５’非翻訳配列およびイントロン配列の１９
９２塩基，３’配列の２４９塩基に先行する７個のユビ
キチンタンパクリピートをコードする１９９９塩基とを
有する「ＴＡＴＡ」ボックスは，−３０位に位置し，２
個の重複する熱ショック要素は，−２１４位と−２０４
位とに位置する。トウモロコシに由来するユビキチン−
１遺伝子，７．２ｂ１のコーディングおよび３’領域の
ＤＮＡ配列を図３に示す。トウモロコシ，ユビキチンの
誘導されたアミノ酸配列は上方に示され，７個のユビキ
チンリピートのヌクレオチド配列はその下に並べられて
いる。ゲノミックＤＮＡ中の７個の完全なユビキチン単
位の構成の概要を図１Ｃに示す。
部位の分析 ＤＮＡポリメラーゼ１（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎ
ｈｅｉｍ）のクレノー断片を使用して，ジデオキシヌク
レオチド鎖終結法による配列決定を実施した。ｃＤＮＡ
クローンｐ６Ｔ７．２ｂ．１に相同なゲノミッククロー
ン７．２ｂ１（図１Ｂ参照）の１．８５ｋｂＰｓｔＩ断
片と，ＡＣ３＃９Ｍ１３ＲＦと命名された直ぐ上流の２
ｋｂＰｓｔＩ断片とを，両方向でＭ１３ｍｐ１９にサブ
クローン化した。組換え体ファージＲＦＤＮＡをプラス
ミドＤＮＡに関して調製した。これらのＰｓｔＩ断片の
両方の鎖を配列決定するために，一方向進行性欠失クロ
ーンを調製した。エキソヌクレアーゼ皿とエキソヌクレ
アーゼVIIとは，それぞれＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏ
ｌａｂｓおよびＢｅｔｈｅｓｄａＲｅｓｅａｒｃｈＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓより入手した。Ｕｎｉｖｅｒｓｉ
ｔｙｏｆＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐ
ｕｔｅｒＧｒｏｕｐより提供されたプログラムを用いて
ＤＮＡ配列のコンピューター分析を実施した。ユビキチ
ン遺伝子の転写開始部位およびこの遺伝子の５’非翻訳
領域のイントロンとエキソンとの３’接合部を，Ｓ１ヌ
クレアーゼマッピングによって決定した。Ｓ１プローブ
に適した断片は以下のように調製した。ユビキチンＤＮ
ＡをＢｑIIIまたはＸｈｏＩのいずれかで消化した。次
に，−32ＰＡＴＰ（６，０００Ｃｉ／mmｏｌ，ＮｅｗＥ
ｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）お
よびＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（ＮｅｗＥｎｇｌａ
ｎｄＢｉｏｌａｂｓ）を用いて，これらを32ｐで標識し
た。ＢｑｌIIおよびＸｈｏＩ切断部位をキナーゼ処理し
た断片を，それぞれＰｓｔＩおよびＥｃｏＲＩでさらに
消化すると，９４６ｂｐのＰｓｔＩ−Ｂｑｌ II 断片お
よび６４３ｂｐのＥｃｏＲＩ−ＸｈｏＩ断片が生成し
た。５％ポリアクリルアミドゲルを通して電気泳動する
ことにより，これらの断片を他の末端標識断片から分離
した。９４６ｂｐのＰｓｔＩ−ＢｑｌII 断片および６
４３ｂｐのＥｃｏＲＩ−ＸｈｏＩ断片を含む切片を，ゲ
ルから切除し，標識ＤＮＡをゲルから溶出した。末端標
識ＤＮＡ断片（１０〜２０ｆｍｏｌ）を，８０％の脱イ
オン化ホルムアミドを含有する緩衝液３０μｌ，０．４
Ｍ塩化ナトリウム，４０ｍＭＰＩＰＥＳ（ｐＨ６．
４），および１ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）中で，２μ
ｇのポリ（Ａ）+ＲＮＡとハイブリダイズさせた。核酸
溶液を８０℃にて約１６時間加熱した。２８０ｍＭ塩化
ナトリウム，５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．６），
４．５ｍＭ硫酸亜鉛，および２０μｇ／ｍｌの一本鎖Ｄ
ＮＡを含む氷冷Ｓ１消化緩衝液（３００μｌ）を添加
し，ＤＮＡを２５０単位／ｍｌのＳ１ヌクレアーゼ（Ｎ
ｅｗＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ）で消化した。２．
５Ｍ酢酸アンモニウムおよび５０ｍＭＥＤＴＡを含むＳ
１終結混合物７５μｌで反応を停止させた。次に，Ｓ１
ヌクレアーゼ消化産物を６％ポリアクリルアミド／８Ｍ
尿素ゲル上で分離し，オートラジオグラフィーにより可
視化した。ユビキチン配列中のＳ１保護断片の終点は，
Ｓ１プローブとして使用した末端標識断片にマクサム／
ギルバート塩基修飾−切断反応を実施して生成した梯子
形配列と比較することによって決定された。トウモロコ
シのユビキチン−１遺伝子，７．２ｂ１のＤＮＡ配列を
図２に示す。この配列は，翻訳開始部位の上流にある８
９９塩基，５’非翻訳配列およびイントロン配列の１９
９２塩基，３’配列の２４９塩基に先行する７個のユビ
キチンタンパクリピートをコードする１９９９塩基とを
有する「ＴＡＴＡ」ボックスは，−３０位に位置し，２
個の重複する熱ショック要素は，−２１４位と−２０４
位とに位置する。トウモロコシに由来するユビキチン−
１遺伝子，７．２ｂ１のコーディングおよび３’領域の
ＤＮＡ配列を図３に示す。トウモロコシ，ユビキチンの
誘導されたアミノ酸配列は上方に示され，７個のユビキ
チンリピートのヌクレオチド配列はその下に並べられて
いる。ゲノミックＤＮＡ中の７個の完全なユビキチン単
位の構成の概要を図１Ｃに示す。
【００６８】すべてのユビキチンリピートの誘導された
アミノ酸配列は同じである（図３）。末端（７番目）の
ユビキチンリピートは，ＴＡＡ停止コドンの前に，付加
的な７７番目のアミノ酸であるグルタミンを含む。この
付加的なアミノ酸は成熟ユビキチンには見られず，明ら
かにプロセッシングの間に除去される。ヒト遺伝子にお
ける最終リピートの７７番目のアミノ酸はバリンであ
り，２つのニワトリ遺伝子においてはチロシンおよびア
スパラギンである。酵母ならびに大麦も，それぞれ余分
なアミノ酸，アスパラギンおよびリジンを持っている；
しかしながら，ツメガエル遺伝子では余分なアミノ酸は
見られなかった。この余分なアミノ酸は，未処理のポリ
ユビキチンの標的タンパクヘの接合に対するブロックと
して機能すると言われている。ポリアデニル化シグナル
（ＡＡＴＡＡＴ）は，停止コドンから１１３ｂｐの３’
非翻訳配列に存在する。
アミノ酸配列は同じである（図３）。末端（７番目）の
ユビキチンリピートは，ＴＡＡ停止コドンの前に，付加
的な７７番目のアミノ酸であるグルタミンを含む。この
付加的なアミノ酸は成熟ユビキチンには見られず，明ら
かにプロセッシングの間に除去される。ヒト遺伝子にお
ける最終リピートの７７番目のアミノ酸はバリンであ
り，２つのニワトリ遺伝子においてはチロシンおよびア
スパラギンである。酵母ならびに大麦も，それぞれ余分
なアミノ酸，アスパラギンおよびリジンを持っている；
しかしながら，ツメガエル遺伝子では余分なアミノ酸は
見られなかった。この余分なアミノ酸は，未処理のポリ
ユビキチンの標的タンパクヘの接合に対するブロックと
して機能すると言われている。ポリアデニル化シグナル
（ＡＡＴＡＡＴ）は，停止コドンから１１３ｂｐの３’
非翻訳配列に存在する。
【００６９】７個のリピートはすべて同じアミノ酸配列
をコードするが，これらのリピートのヌクレオチド配列
は３９個ものヌクレオチドが変化している。これは，ユ
ビキチン遺伝子間のヌクレオチド配列の相同性について
報告されているのと同様である。ユビキチンリピート間
におけるヌクレオチド不整合の約８０％は，コドンの第
３（ゆらぎ）塩基におけるものである。残りのヌクレオ
チドミス不整合は，ロイシン（５コドン），セリン（３
コドン）および，アルギニン（３コドン）に対する代替
コドンの使用によって説明される。
をコードするが，これらのリピートのヌクレオチド配列
は３９個ものヌクレオチドが変化している。これは，ユ
ビキチン遺伝子間のヌクレオチド配列の相同性について
報告されているのと同様である。ユビキチンリピート間
におけるヌクレオチド不整合の約８０％は，コドンの第
３（ゆらぎ）塩基におけるものである。残りのヌクレオ
チドミス不整合は，ロイシン（５コドン），セリン（３
コドン）および，アルギニン（３コドン）に対する代替
コドンの使用によって説明される。
【００７０】トウモロコシ，ユビキチンのアミノ酸配列
は，他の２つのより高等な植物である燕麦および大麦に
関して決定されたものと同じである。この配列は，酵母
に関して報告された配列とは２個のアミノ酸が異なって
いる；２８位および５７位のセリンがアラニンに置換さ
れている。また，トウモロコシの配列は，すべての動物
由来のユビキチンについて報告されている配列ともわず
かに異なる；１９位のプロリンがセリンに，２４位のグ
ルタミン酸がアスパラギン酸に，５７位のセリンがアラ
ニンに置換されている。従って，配列に基づけば，３種
類のユビキチンが存在すると思われる：植物，動物，お
よび酵母。
は，他の２つのより高等な植物である燕麦および大麦に
関して決定されたものと同じである。この配列は，酵母
に関して報告された配列とは２個のアミノ酸が異なって
いる；２８位および５７位のセリンがアラニンに置換さ
れている。また，トウモロコシの配列は，すべての動物
由来のユビキチンについて報告されている配列ともわず
かに異なる；１９位のプロリンがセリンに，２４位のグ
ルタミン酸がアスパラギン酸に，５７位のセリンがアラ
ニンに置換されている。従って，配列に基づけば，３種
類のユビキチンが存在すると思われる：植物，動物，お
よび酵母。
【００７１】（実施例２：トウモロコシのユビキチンプ
ロモーターおよび構造遺伝子を有するプラスミドｐＵＢ
−ＣＡＴの構築） Ａ．プロモーターの単離およびｐＵＢ−ＣＡＴの構築 ユビキチン遺伝子上流領域−クロラムフェニコールアセ
チルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子融合物の構築
に使用した手順の概略を図４に示す。ＣＡＴ遺伝子と，
ノパリンシンターゼ（ＮＯＳ）の３’非翻訳領域と，ｐ
ＮＯＳ−ＣＡＴのポリアデニル化シグナル（Ｆｒｏｍｍ
ら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．８２：５８２４−５８２８）とを含むＢａｍＨＩ−
ＨｉｎｄIII制限断片を，ＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄIII
で消化したｐＵＣ１８にサブクローン化した。この構築
物をｐＵＢ−ＣＡＴと命名した。
ロモーターおよび構造遺伝子を有するプラスミドｐＵＢ
−ＣＡＴの構築） Ａ．プロモーターの単離およびｐＵＢ−ＣＡＴの構築 ユビキチン遺伝子上流領域−クロラムフェニコールアセ
チルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子融合物の構築
に使用した手順の概略を図４に示す。ＣＡＴ遺伝子と，
ノパリンシンターゼ（ＮＯＳ）の３’非翻訳領域と，ｐ
ＮＯＳ−ＣＡＴのポリアデニル化シグナル（Ｆｒｏｍｍ
ら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．８２：５８２４−５８２８）とを含むＢａｍＨＩ−
ＨｉｎｄIII制限断片を，ＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄIII
で消化したｐＵＣ１８にサブクローン化した。この構築
物をｐＵＢ−ＣＡＴと命名した。
【００７２】トウモロコシ・ユビキチン遺伝子７．２ｂ
１のユビキチンポリタンパクコード領域の直ぐ上流にあ
る約２．０ｋｂＰｓｔＩ切断を，Ｍ１３ｍｐ１９にサブ
クローン化した。このＤＮＡセグメントは，図２に示し
たトウモロコシ・ユビキチン配列のヌクレオチド−８９
９〜１０９２に及ぶ。この組換え体ＤＮＡはＡＣ３＃９
Ｍ１３ＲＦと命名され，ユビキチンプロモーターと，
５’非翻訳リーダー配列と，図４でＵＢＩ−５’と名付
けられた約１ｋｂのイントロンとを含む。ユビキチンプ
ロモーター−ＣＡＴリポーター一遺伝子融合物を，Ｔ4
ＤＮＡポリメラーゼでＡＣ３＃９Ｍ１３ＲＦの２．０ｋ
ｂＰｓｔＩ断片を平滑末端化し，この断片をＳｍａＩ消
化のｐＵＣ１８−ＣＡＴにクローン化することによって
構築した。この構築物をｐＵＢ−ＣＡＴと命名した。
１のユビキチンポリタンパクコード領域の直ぐ上流にあ
る約２．０ｋｂＰｓｔＩ切断を，Ｍ１３ｍｐ１９にサブ
クローン化した。このＤＮＡセグメントは，図２に示し
たトウモロコシ・ユビキチン配列のヌクレオチド−８９
９〜１０９２に及ぶ。この組換え体ＤＮＡはＡＣ３＃９
Ｍ１３ＲＦと命名され，ユビキチンプロモーターと，
５’非翻訳リーダー配列と，図４でＵＢＩ−５’と名付
けられた約１ｋｂのイントロンとを含む。ユビキチンプ
ロモーター−ＣＡＴリポーター一遺伝子融合物を，Ｔ4
ＤＮＡポリメラーゼでＡＣ３＃９Ｍ１３ＲＦの２．０ｋ
ｂＰｓｔＩ断片を平滑末端化し，この断片をＳｍａＩ消
化のｐＵＣ１８−ＣＡＴにクローン化することによって
構築した。この構築物をｐＵＢ−ＣＡＴと命名した。
【００７３】Ｂ．燕麦およびタバコのプロトプラストヘ
の組換え体ＤＮＡの導入 ５〜６日齢の黄化した燕麦実生苗の葉（２ｇ）をカミソ
リの刃で細かく切り刻んだ。この組織を消化培地（３ｍ
ＭＭＥＳ，ｐＨ５．７，１０ｍＭ塩化カルシウム，０．
５Ｍマンニトール，および２ｍｇ／ｍｌアルギニン）で
数回洗浄し，次いで２％セルラーゼを含む２０ｍｌの消
化培地とともに室温で４時間インキュベートした。この
組織を時々攪拌してプロトプラストを放出させた。この
材料を６３μｍのメッシュで濾過し，５０×ｇで５分間
遠心分離した。上澄み液を取り除き，プロトプラストを
消化培地で２回洗浄し，次いでエレクトロポレーション
緩衝液中に懸濁して，各エレクトロポレーションにつき
０．５ｍｌのプロトプラスト懸濁液を調製した。エレク
トロポレーション緩衝液は次のものから構成されてい
た：１０ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．２，１５０ｍＭ塩化
ナトリウム，４ｍＭ塩化カルシウム，および０．５Ｍマ
ンニトール。
の組換え体ＤＮＡの導入 ５〜６日齢の黄化した燕麦実生苗の葉（２ｇ）をカミソ
リの刃で細かく切り刻んだ。この組織を消化培地（３ｍ
ＭＭＥＳ，ｐＨ５．７，１０ｍＭ塩化カルシウム，０．
５Ｍマンニトール，および２ｍｇ／ｍｌアルギニン）で
数回洗浄し，次いで２％セルラーゼを含む２０ｍｌの消
化培地とともに室温で４時間インキュベートした。この
組織を時々攪拌してプロトプラストを放出させた。この
材料を６３μｍのメッシュで濾過し，５０×ｇで５分間
遠心分離した。上澄み液を取り除き，プロトプラストを
消化培地で２回洗浄し，次いでエレクトロポレーション
緩衝液中に懸濁して，各エレクトロポレーションにつき
０．５ｍｌのプロトプラスト懸濁液を調製した。エレク
トロポレーション緩衝液は次のものから構成されてい
た：１０ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．２，１５０ｍＭ塩化
ナトリウム，４ｍＭ塩化カルシウム，および０．５Ｍマ
ンニトール。
【００７４】エレクトロポレーション緩衝液中のプロト
プラスト（０．５ｍｌ）を氷上で，４０μｇのプラスミ
ドＤＮＡと，１００μｇの音波処理したサケＤＮＡとを
含む０．５ｍｌのエレクトロポレーション緩衝液と混合
した。これらのプロトプラストを，３５０Ｖ，７０ｍｓ
ｅｃパルスにより，氷上でエレクトロポレーションし
た。これらのプロトプラストを氷上でさらに１０分間イ
ンキュベートし，１０ｍｌのムラシゲースクーグ（Ｍ
Ｓ）培地中に希釈して，室温で２４時間インキュベート
した。
プラスト（０．５ｍｌ）を氷上で，４０μｇのプラスミ
ドＤＮＡと，１００μｇの音波処理したサケＤＮＡとを
含む０．５ｍｌのエレクトロポレーション緩衝液と混合
した。これらのプロトプラストを，３５０Ｖ，７０ｍｓ
ｅｃパルスにより，氷上でエレクトロポレーションし
た。これらのプロトプラストを氷上でさらに１０分間イ
ンキュベートし，１０ｍｌのムラシゲースクーグ（Ｍ
Ｓ）培地中に希釈して，室温で２４時間インキュベート
した。
【００７５】プロトプラストを５０×ｇで５分間遠心分
離してペレット化した。上澄み液を取り除き，これらの
プロトプラストをＭＳ培地で１回洗浄した。このプロト
プラストペレットを２００μｌの緩衝液Ａ（０．２５Ｍ
Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．８，１ｍＭＥＤＴＡ，１ｍＭβ−メ
ルカプトエタノール）中に懸濁し，微小遠心分離管に移
した。最低出力で５〜１０秒間音波処理してプロトプラ
ストを粉砕した。プロトプラストの破片を４℃で５分間
遠心分離してペレット化した。上澄み液を取り除き，１
０分間６５℃に加熱し，−２０℃で保存した。
離してペレット化した。上澄み液を取り除き，これらの
プロトプラストをＭＳ培地で１回洗浄した。このプロト
プラストペレットを２００μｌの緩衝液Ａ（０．２５Ｍ
Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．８，１ｍＭＥＤＴＡ，１ｍＭβ−メ
ルカプトエタノール）中に懸濁し，微小遠心分離管に移
した。最低出力で５〜１０秒間音波処理してプロトプラ
ストを粉砕した。プロトプラストの破片を４℃で５分間
遠心分離してペレット化した。上澄み液を取り除き，１
０分間６５℃に加熱し，−２０℃で保存した。
【００７６】Ｃ．形質転換したプロトプラストのＣＡＴ
活性の測定 エレクトロポレーションしたプロトプラスト抽出物（組
換え体ＤＮＡで形質転換した細胞の抽出物）のアリクォ
ット（１００μｌ）を，８０μｌの緩衝液Ａと，２０μ
ｌ14Ｃ−クロラムフェニコール（４０〜６０ｍＣｉ／ｍ
Ｍ），２ｍｇアセチルＣｏＡ，および２３０μｌ緩衝液
Ａの混合物２０μｌとに添加した。この反応物を３７℃
で９０分間インキュベートした。反応生産物を６００μ
ｌの酢酸エチルで抽出し，この酢酸エチルを蒸発させ，
１０μｌの酢酸エチルに再懸濁することにより濃縮し
た。クロロホルム：メタノール（９５：５，ｖ／ｖ）溶
媒を使用して薄層クロマトグラフィーにより反応生産物
を分離し，オートラジオグラフィーによって検出した。
活性の測定 エレクトロポレーションしたプロトプラスト抽出物（組
換え体ＤＮＡで形質転換した細胞の抽出物）のアリクォ
ット（１００μｌ）を，８０μｌの緩衝液Ａと，２０μ
ｌ14Ｃ−クロラムフェニコール（４０〜６０ｍＣｉ／ｍ
Ｍ），２ｍｇアセチルＣｏＡ，および２３０μｌ緩衝液
Ａの混合物２０μｌとに添加した。この反応物を３７℃
で９０分間インキュベートした。反応生産物を６００μ
ｌの酢酸エチルで抽出し，この酢酸エチルを蒸発させ，
１０μｌの酢酸エチルに再懸濁することにより濃縮し
た。クロロホルム：メタノール（９５：５，ｖ／ｖ）溶
媒を使用して薄層クロマトグラフィーにより反応生産物
を分離し，オートラジオグラフィーによって検出した。
【００７７】プロモーター−遺伝子融合構築物内に含ま
れる構造遺伝子により発現される酵素活性の量を測定す
ることにより，宿主細胞の形質転換を測定した。本実施
例では，ＤＮＡ構築物において，クロラムフェニコール
アセチルトランスフェラーゼをコードする構造遺伝子を
使用した。組換え体ＤＮＡ融合構築物において使用した
プロモーターの効力を試験するために，トウモロコシ・
ユビキチンプロモーター−ＣＡＴ遺伝子融合物ｐＵＣ−
ＣＡＴと，Ｖ．Ｗａｌｂｏｔ，ＳｔａｎｆｏｒｄＵｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙより入手したカリフラワーモザイクウイ
ルス３５Ｓプロモーター−ＣＡＴ遺伝子融合物ｐＣａＭ
Ｖ−ＣＡＴ（Ｆｒｏｍｍら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：５８２４−５８
２８）とのいずれかを使用して，平行エレクトロポレー
ションを実施した。図５に示すように，燕麦のプロトプ
ラストにおいては，発現される酵素活性の量から判定す
ると，ユビキチンプロモーターはＣａＭＶプロモーター
よりも「強力」である。
れる構造遺伝子により発現される酵素活性の量を測定す
ることにより，宿主細胞の形質転換を測定した。本実施
例では，ＤＮＡ構築物において，クロラムフェニコール
アセチルトランスフェラーゼをコードする構造遺伝子を
使用した。組換え体ＤＮＡ融合構築物において使用した
プロモーターの効力を試験するために，トウモロコシ・
ユビキチンプロモーター−ＣＡＴ遺伝子融合物ｐＵＣ−
ＣＡＴと，Ｖ．Ｗａｌｂｏｔ，ＳｔａｎｆｏｒｄＵｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙより入手したカリフラワーモザイクウイ
ルス３５Ｓプロモーター−ＣＡＴ遺伝子融合物ｐＣａＭ
Ｖ−ＣＡＴ（Ｆｒｏｍｍら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：５８２４−５８
２８）とのいずれかを使用して，平行エレクトロポレー
ションを実施した。図５に示すように，燕麦のプロトプ
ラストにおいては，発現される酵素活性の量から判定す
ると，ユビキチンプロモーターはＣａＭＶプロモーター
よりも「強力」である。
【００７８】（実施例３：熱ショック反応） Ａ．熱ショック処理 熱ショックを与えるために，４〜５日齢の黄化した実生
苗を４２℃のインキュベーターに移し，１，３，および
８時間後に採取した。全ＲＮＡ（７μｇ）を単離し，変
性し，１．５％アガロース３％ホルムアルデヒドゲルに
通して電気泳動した。このＲＮＡをＧｅｎｅＳｃｒｅｅ
ｎに移し，ＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼを用いて線状ｐＣ
Ａ２１０から転写された一本鎖ＲＮＡをプローブとして
調べた。（組換え体プラスミドｐＣＡ２１０は，ＳＰ６
ＲＮＡポリメラーゼがユビキチンｍＲＮＡとのハイブリ
ダイゼーションに特異的なＲＮＡプローブを合成するよ
うに，ｐ６Ｒ７．２ｂ１の９７５ｂｐ挿入物をｐＳＰ６
４（Ｐｒｏｍｅｇａ）にサブクローン化することによっ
て構築した。）オートラジオグラフィーを実施した後，
バンドを切断し，フィルターに結合した放射能の量を液
体シンチレーションによって測定した。ノーザンブロッ
トの分析から，３つのユビキチン転写物のレベルを決定
した。
苗を４２℃のインキュベーターに移し，１，３，および
８時間後に採取した。全ＲＮＡ（７μｇ）を単離し，変
性し，１．５％アガロース３％ホルムアルデヒドゲルに
通して電気泳動した。このＲＮＡをＧｅｎｅＳｃｒｅｅ
ｎに移し，ＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼを用いて線状ｐＣ
Ａ２１０から転写された一本鎖ＲＮＡをプローブとして
調べた。（組換え体プラスミドｐＣＡ２１０は，ＳＰ６
ＲＮＡポリメラーゼがユビキチンｍＲＮＡとのハイブリ
ダイゼーションに特異的なＲＮＡプローブを合成するよ
うに，ｐ６Ｒ７．２ｂ１の９７５ｂｐ挿入物をｐＳＰ６
４（Ｐｒｏｍｅｇａ）にサブクローン化することによっ
て構築した。）オートラジオグラフィーを実施した後，
バンドを切断し，フィルターに結合した放射能の量を液
体シンチレーションによって測定した。ノーザンブロッ
トの分析から，３つのユビキチン転写物のレベルを決定
した。
【００７９】４２℃に移してから１時間後に，２．１ｋ
ｂ転写物のレベルは，２．５〜３倍に上昇した。１．６
ｋｂ転写物については約２倍の上昇が見られたが，０．
８ｋｂ転写物では上昇が見られなかった。実生苗を高温
に移してから３時間後までに，大きい方の２つのユビキ
チン転写物のレベルは，ショックを与えていない組織で
見い出されたレベルに戻っており，少なくともさらに５
時間は，そのレベルのままであった。トウモロコシでの
熱ショック反応におけるユビキチンの一過性の性質は，
ユビキチンが熱ショックにおいて特殊な役割を持ち，短
期間だけのユビキチンレベルの上昇が必要であることを
示している。
ｂ転写物のレベルは，２．５〜３倍に上昇した。１．６
ｋｂ転写物については約２倍の上昇が見られたが，０．
８ｋｂ転写物では上昇が見られなかった。実生苗を高温
に移してから３時間後までに，大きい方の２つのユビキ
チン転写物のレベルは，ショックを与えていない組織で
見い出されたレベルに戻っており，少なくともさらに５
時間は，そのレベルのままであった。トウモロコシでの
熱ショック反応におけるユビキチンの一過性の性質は，
ユビキチンが熱ショックにおいて特殊な役割を持ち，短
期間だけのユビキチンレベルの上昇が必要であることを
示している。
【００８０】Ｂ．熱ショック配列 トウモロコシのユビキチン遺伝子のヌクレオチド配列を
図２に示す。プロモーター領域内では，ヌクレオチド配
列は，異種プロモーターの上流に位置する場合にストレ
ス誘発性を与えることが示されている（Ｐｅｌｈａｍ
（１９８２）前出）コンセンサス熱ショック配列と相同
である。ショウジョウバエの熱ショック要素に対するコ
ンセンサス配列は， ５’−ＣＴＧＧＡＡＴ＿ＴＴＣＴＡＧＡ−３’ であり，一般に転写開始部位より約２６塩基上流に見い
出される。
図２に示す。プロモーター領域内では，ヌクレオチド配
列は，異種プロモーターの上流に位置する場合にストレ
ス誘発性を与えることが示されている（Ｐｅｌｈａｍ
（１９８２）前出）コンセンサス熱ショック配列と相同
である。ショウジョウバエの熱ショック要素に対するコ
ンセンサス配列は， ５’−ＣＴＧＧＡＡＴ＿ＴＴＣＴＡＧＡ−３’ であり，一般に転写開始部位より約２６塩基上流に見い
出される。
【００８１】トウモロコシ・ユビキチンプロモーターの
転写開始部位に対して５’側の９００塩基内に位置する
のは，２つの重複する熱ショック配列である： −２１４位のヌクレオチドに始まる５’−ＣＴＧＧＡＣ
ＣＣＣＴＣＴＣＧＡ−３’，および −２０４位のヌクレオチドに始まる５’−ＣＴＣＧＡＧ
ＡＧＴＴＣＣＧＣＴ−３’。
転写開始部位に対して５’側の９００塩基内に位置する
のは，２つの重複する熱ショック配列である： −２１４位のヌクレオチドに始まる５’−ＣＴＧＧＡＣ
ＣＣＣＴＣＴＣＧＡ−３’，および −２０４位のヌクレオチドに始まる５’−ＣＴＣＧＡＧ
ＡＧＴＴＣＣＧＣＴ−３’。
【００８２】ニワトリの胚線維芽細胞由来のユビキチン
プロモーターも，２つの重複する熱ショックコンセンサ
スプロモーター配列を含むことが見い出された： −３６９位のヌクレオチドに始まる５’−ＣＴＣＧＡＡ
ＴＣＴＴＣＣＡＧ−３’，および −３５９位のヌクレオチドに始まる５’−ＣＣＡＧＡＧ
ＣＴＴＴＣＴＴＴＴ−３’。
プロモーターも，２つの重複する熱ショックコンセンサ
スプロモーター配列を含むことが見い出された： −３６９位のヌクレオチドに始まる５’−ＣＴＣＧＡＡ
ＴＣＴＴＣＣＡＧ−３’，および −３５９位のヌクレオチドに始まる５’−ＣＣＡＧＡＧ
ＣＴＴＴＣＴＴＴＴ−３’。
【００８３】酵母のユビキチン遺伝子ＵＢ１４（Ｅ．Ｏ
ｚｋａｙｎａｋら（１９８７）前出）の５’隣接領域
は，翻訳開始部位から３６５塩基上流にある１８ｋｂの
回転対称（回文対構造）配列，５’−ＴＴＣＴＡＧＡＡ
ＣＧＴＴＣＴＡＧＡＡ−３’を有する。この１８ｂｐ配
列の中央の１４塩基（下線部）は，推定される転写開始
部位の約２８４ヌクレオチド上流から始まる回転対称コ
ンセンサス「熱ショックボックス」ヌクレオチド配列に
対する厳密な相同性を有する。
ｚｋａｙｎａｋら（１９８７）前出）の５’隣接領域
は，翻訳開始部位から３６５塩基上流にある１８ｋｂの
回転対称（回文対構造）配列，５’−ＴＴＣＴＡＧＡＡ
ＣＧＴＴＣＴＡＧＡＡ−３’を有する。この１８ｂｐ配
列の中央の１４塩基（下線部）は，推定される転写開始
部位の約２８４ヌクレオチド上流から始まる回転対称コ
ンセンサス「熱ショックボックス」ヌクレオチド配列に
対する厳密な相同性を有する。
【００８４】転写開始コドンに関する熱ショック配列の
相対的な位置，および熱ショックや他のストレスに対す
る誘発反応の程度への最終的な影響は，大部分が不明の
ままであるが，熱ショック要素が転写開始部位から５’
側へ遠く位置すればするほど，ストレスに対する反応の
誘発レベルはより小さいことが示唆されている。（Ｕ．
Ｂｏｎｄら（１９８６）前出）。
相対的な位置，および熱ショックや他のストレスに対す
る誘発反応の程度への最終的な影響は，大部分が不明の
ままであるが，熱ショック要素が転写開始部位から５’
側へ遠く位置すればするほど，ストレスに対する反応の
誘発レベルはより小さいことが示唆されている。（Ｕ．
Ｂｏｎｄら（１９８６）前出）。
【００８５】本発明においては，熱ショック配列がユビ
キチンプロモーター内の異なる位置に任意に配置されう
ること，および改変されたプロモーター配列がストレス
条件下および非ストレス条件下での転写の開始，方向づ
け，および調節を含むユビキチンプロモーター機能を保
持する限り，配列を化学的に変化させるか，あるいは合
成相同配列で置き換えうることを仮定する。ヌクレオチ
ドを挿入および／あるいは欠失し，得られたＤＮＡ断片
を操作するのに必要な生化学的技術は，遺伝子再設計に
関する当業者には周知である。
キチンプロモーター内の異なる位置に任意に配置されう
ること，および改変されたプロモーター配列がストレス
条件下および非ストレス条件下での転写の開始，方向づ
け，および調節を含むユビキチンプロモーター機能を保
持する限り，配列を化学的に変化させるか，あるいは合
成相同配列で置き換えうることを仮定する。ヌクレオチ
ドを挿入および／あるいは欠失し，得られたＤＮＡ断片
を操作するのに必要な生化学的技術は，遺伝子再設計に
関する当業者には周知である。
【００８６】（実施例４：ユビキチンプロモーター内の
熱ショック配列および大型イントロンの存在）トウモロ
コシ由来のユビキチンプロモーターは，転写開始部位よ
り約２００ｂｐ上流の２つの重複する熱ショック配列の
存在と，転写開始部位および翻訳開始コドンの間の大型
（約１ｋｂ）イントロンの存在とにより構造的に特徴付
けられる。このプロモーター構造は，ニワトリ胚線維芽
細胞由来のユビキチンプロモーターについて報告されて
いるもの（Ｕ．Ｂｏｎｄら（１９８６）前出）と非常に
類似している。ニワトリ胚線維芽細胞では，２つの重複
する熱ショック配列が転写開始部位の約３５０ｂｐ上流
に位置し，６７４ｂｐのイントロンが転写開始コドンと
翻訳開始コドンとの間に含まれている。最近（Ｅ．Ｏｚ
ｋａｙｎａｋら（１９８７）前出），酵母ユビキチンＵ
Ｂ１４遺伝子由来のプロモーター領域のヌクレオチド配
列が決定され，転写開始部位の約２８０ｂｐ上流に熱シ
ョック配列を含むことが明らかになったが，この酵母ユ
ビキチンプロモーターは，転写開始部位と翻訳開始部位
との間に大型イントロンを有さなかった。しかしなが
ら，イントロンを含む他の２つの酵母ユビキチン遺伝子
は，Ｐｅｌｈａｍの「熱ショックボックス」配列と相同
な配列を欠いていることが見い出された。
熱ショック配列および大型イントロンの存在）トウモロ
コシ由来のユビキチンプロモーターは，転写開始部位よ
り約２００ｂｐ上流の２つの重複する熱ショック配列の
存在と，転写開始部位および翻訳開始コドンの間の大型
（約１ｋｂ）イントロンの存在とにより構造的に特徴付
けられる。このプロモーター構造は，ニワトリ胚線維芽
細胞由来のユビキチンプロモーターについて報告されて
いるもの（Ｕ．Ｂｏｎｄら（１９８６）前出）と非常に
類似している。ニワトリ胚線維芽細胞では，２つの重複
する熱ショック配列が転写開始部位の約３５０ｂｐ上流
に位置し，６７４ｂｐのイントロンが転写開始コドンと
翻訳開始コドンとの間に含まれている。最近（Ｅ．Ｏｚ
ｋａｙｎａｋら（１９８７）前出），酵母ユビキチンＵ
Ｂ１４遺伝子由来のプロモーター領域のヌクレオチド配
列が決定され，転写開始部位の約２８０ｂｐ上流に熱シ
ョック配列を含むことが明らかになったが，この酵母ユ
ビキチンプロモーターは，転写開始部位と翻訳開始部位
との間に大型イントロンを有さなかった。しかしなが
ら，イントロンを含む他の２つの酵母ユビキチン遺伝子
は，Ｐｅｌｈａｍの「熱ショックボックス」配列と相同
な配列を欠いていることが見い出された。
【００８７】ユビキチンプロモーターは，酵母，ニワト
リ胚線維芽細胞，およびトウモロコシにおいて，熱ショ
ックに応答してユビキチンの発現を上昇調節することが
示されている。３つの系全部において，ユビキチンｍＲ
ＮＡのレベルは，熱ショック処理後に上昇し，トウモロ
コシおよびニワトリ胚線維芽細胞ではユビキチンレベル
の上昇は約３倍と測定された。この熱ショック応答した
ユビキチン発現の増強は，他の熱ショック遺伝子で得ら
れるものよりも有意に低い。ニワトリ胚線維芽細胞で
は，４５℃に曝露した細胞中のユビキチンｍＲＮＡのレ
ベルは，２．５時間にわたって２．５倍に上昇するが，
ＨＳＰ７０ｍＲＮＡのレベルは同じ熱ショック条件下で
１０倍に上昇することが見い出された。さらに，３時間
の熱ショックから細胞が回復する間（半減期：約１．５
〜２時間）におけるユビキチンｍＲＮＡの相対的な不安
定性は，安定であると見い出されたＨＳＰ７０ｍＲＮＡ
の不安定性とは有意に異なることが判明した。
リ胚線維芽細胞，およびトウモロコシにおいて，熱ショ
ックに応答してユビキチンの発現を上昇調節することが
示されている。３つの系全部において，ユビキチンｍＲ
ＮＡのレベルは，熱ショック処理後に上昇し，トウモロ
コシおよびニワトリ胚線維芽細胞ではユビキチンレベル
の上昇は約３倍と測定された。この熱ショック応答した
ユビキチン発現の増強は，他の熱ショック遺伝子で得ら
れるものよりも有意に低い。ニワトリ胚線維芽細胞で
は，４５℃に曝露した細胞中のユビキチンｍＲＮＡのレ
ベルは，２．５時間にわたって２．５倍に上昇するが，
ＨＳＰ７０ｍＲＮＡのレベルは同じ熱ショック条件下で
１０倍に上昇することが見い出された。さらに，３時間
の熱ショックから細胞が回復する間（半減期：約１．５
〜２時間）におけるユビキチンｍＲＮＡの相対的な不安
定性は，安定であると見い出されたＨＳＰ７０ｍＲＮＡ
の不安定性とは有意に異なることが判明した。
【００８８】ユビキチンプロモーターとは対照的に，Ｈ
ＳＰ７０遺伝子が転写開始コドンと翻訳開始コドンとの
間に大型イントロンを含まないのは興味深いことであ
る。ユビキチンプロモーターと他の熱ショックプロモー
ターとの間のもう１つの相違点は，ユビキチンが構成的
かつ誘導的に発現されるのに対して，従来の熱ショック
タンパクの発現は，主として熱ショックあるいは他のス
トレスに応答して起こることである。本発明によれぱ，
当業者は，ユビキチンの構成的および／あるいは誘導的
発現を変化させるために，イントロン配列および熱ショ
ック配列の両方の組成配列ならびに位置を改変すること
ができる。また，得られた改変ＤＮＡのプロモーター機
能を保持または向上させるように，トウモロコシのユビ
キチンプロモーター領域内のヌクレオチド配列を再配置
したり，化学的に変化させたりするためには，標準的な
組換え技術が使用できる。ユビキチンプロモーター機能
に関する試験は，実施例２で述べたように実施できる。
ＳＰ７０遺伝子が転写開始コドンと翻訳開始コドンとの
間に大型イントロンを含まないのは興味深いことであ
る。ユビキチンプロモーターと他の熱ショックプロモー
ターとの間のもう１つの相違点は，ユビキチンが構成的
かつ誘導的に発現されるのに対して，従来の熱ショック
タンパクの発現は，主として熱ショックあるいは他のス
トレスに応答して起こることである。本発明によれぱ，
当業者は，ユビキチンの構成的および／あるいは誘導的
発現を変化させるために，イントロン配列および熱ショ
ック配列の両方の組成配列ならびに位置を改変すること
ができる。また，得られた改変ＤＮＡのプロモーター機
能を保持または向上させるように，トウモロコシのユビ
キチンプロモーター領域内のヌクレオチド配列を再配置
したり，化学的に変化させたりするためには，標準的な
組換え技術が使用できる。ユビキチンプロモーター機能
に関する試験は，実施例２で述べたように実施できる。
【００８９】
【発明の効果】トウモロコシのユビキチン遺伝子の上流
非翻訳領域由来のＤＮＡセグメントが開示されている。
このユビキチンプロモーター領域は，熱ショックコンセ
ンサス要素を含み，該プロモーターの制御下に置かれて
いる遺伝子の転写の開始および調節を行なう。また，高
温のストレスを受けた場合に，構造遺伝子の発現の調節
および発現の調節制御を行なうために，ユビキチンプロ
モーターが植物発現可能な構造遺伝子と結合されている
ような組換えＤＮＡ分子について述べられている。この
ような組換えＤＮＡ分子が植物組織中に導入され，プロ
モーター／構造遺伝子の組合せが発現される。
非翻訳領域由来のＤＮＡセグメントが開示されている。
このユビキチンプロモーター領域は，熱ショックコンセ
ンサス要素を含み，該プロモーターの制御下に置かれて
いる遺伝子の転写の開始および調節を行なう。また，高
温のストレスを受けた場合に，構造遺伝子の発現の調節
および発現の調節制御を行なうために，ユビキチンプロ
モーターが植物発現可能な構造遺伝子と結合されている
ような組換えＤＮＡ分子について述べられている。この
ような組換えＤＮＡ分子が植物組織中に導入され，プロ
モーター／構造遺伝子の組合せが発現される。
【図１】図１は，トウモロコシユビキチンのゲノムクロ
ーンの分析図である。すなわち（Ａ）はユビキチン遺伝
子７．２ｂｌの制限地図；（Ｂ）はユビキチン遺伝子１
の２つのサブクローン化されたＰｓｔＩ断片の制限地
図；（Ｃ）はトウモロコシのユビキチン遺伝子１の構成
の概略図である。５’側の非翻訳エキソンは白４角で，
縦列のユビキチンをコードする領域は，番号を付けた４
角でそれぞれ示してある。
ーンの分析図である。すなわち（Ａ）はユビキチン遺伝
子７．２ｂｌの制限地図；（Ｂ）はユビキチン遺伝子１
の２つのサブクローン化されたＰｓｔＩ断片の制限地
図；（Ｃ）はトウモロコシのユビキチン遺伝子１の構成
の概略図である。５’側の非翻訳エキソンは白４角で，
縦列のユビキチンをコードする領域は，番号を付けた４
角でそれぞれ示してある。
【図２】図２はユビキチン遺伝子１のＤＮＡ配列と推定
のアミノ酸配列を示す。Ｓ１ヌクレアーゼマッピングで
決定された転写開始点は，塩基１と表示されている。推
定の“ＴＡＴＡ”ボックス（−３０）を示す配列と，２
つの重複する熱ショックコンセンサス配列（−２１４と
−２０４）には下線を付けてある。イントロンは塩基８
４から塩基１０９３へと延び，ポリユビキチンタンパク
をコードする配列は，塩基１０９４から塩基２６９３へ
と延びている。
のアミノ酸配列を示す。Ｓ１ヌクレアーゼマッピングで
決定された転写開始点は，塩基１と表示されている。推
定の“ＴＡＴＡ”ボックス（−３０）を示す配列と，２
つの重複する熱ショックコンセンサス配列（−２１４と
−２０４）には下線を付けてある。イントロンは塩基８
４から塩基１０９３へと延び，ポリユビキチンタンパク
をコードする配列は，塩基１０９４から塩基２６９３へ
と延びている。
【図３】図３はユビキチンをコードする７つの反復部分
全部が，同じアミノ酸配列をコードすることを示す。上
記の７つの反復部分のヌクレオチド配列を，誘導された
アミノ酸配列の下に並べて示してある。追加の７７番の
アミノ酸，グルタミンが，終止コドンの前の７番目の反
復部分内に存在している。ポリアデニル化シグナル，Ａ
ＡＴＡＡＴは，終止コドンから１１３ｂｐの位置の３’
側非翻訳領域内に存在している。
全部が，同じアミノ酸配列をコードすることを示す。上
記の７つの反復部分のヌクレオチド配列を，誘導された
アミノ酸配列の下に並べて示してある。追加の７７番の
アミノ酸，グルタミンが，終止コドンの前の７番目の反
復部分内に存在している。ポリアデニル化シグナル，Ａ
ＡＴＡＡＴは，終止コドンから１１３ｂｐの位置の３’
側非翻訳領域内に存在している。
【図４】図４は，トウモロコシユビキチンのプロモータ
ー領域とクロラムフェニコールアセチントランスフェラ
ーゼ（ＣＡＴ）遺伝子との融合体を構築するのに用いら
れた手順の概略図である。
ー領域とクロラムフェニコールアセチントランスフェラ
ーゼ（ＣＡＴ）遺伝子との融合体を構築するのに用いら
れた手順の概略図である。
【図５】図５は，ユビキチンプロモーターの検定法を示
す。ＣａＭＶ−ＣＡＴは，カリフラワーモザイクウイル
ス３５ＳプロモーターとＣＡＴ遺伝子の融合体；ＵＢＱ
−ＣＡＴは，トウモロコシユビキチンプロモーターとＣ
ＡＴ遺伝子の融合体を示す。
す。ＣａＭＶ−ＣＡＴは，カリフラワーモザイクウイル
ス３５ＳプロモーターとＣＡＴ遺伝子の融合体；ＵＢＱ
−ＣＡＴは，トウモロコシユビキチンプロモーターとＣ
ＡＴ遺伝子の融合体を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 594063131 1209 ＯＲＡＮＧＥ ＳＴＲＥＥＴ，ＷＩ ＬＭＩＮＧＴＯＮ，ＤＥＬＡＷＡＲＥ 19801 Ｕ．Ｓ．Ａ. (72)発明者 アラン エッチ．クリスチャンセン アメリカ合衆国 カリフォルニア 94706 アルバニー，カインズ アベニュー ナ ンバー201 820 (72)発明者 ハワード ピー． ハーシー アメリカ合衆国 ペンシルベニア 19382 ウェスト チェスター，コックバーン ドライブ 1129 (72)発明者 ロバート エー．シャーロック アメリカ合衆国 カリフォルニア 94530 エル セリット，リッチモンド ストリ ート 846 (72)発明者 トーマス ディー．サリバン アメリカ合衆国 ウィスコンシン 53711 マジソン，ケイズ アベニュー 2305
Claims (1)
- 【請求項１】 植物ユビキチン調節システムを含む２ｋ
ｂ以下のＤＮＡ配列であって、該調節システムが熱ショ
ック要素およびイントロンを含む、ＤＮＡ配列。
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| US194.824 | 1988-05-17 |
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|---|---|
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Family
ID=22719034
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|---|---|---|---|
| JP12408889A Expired - Lifetime JP3509855B2 (ja) | 1988-05-17 | 1989-05-17 | 植物のユビキチンプロモーター系 |
| JP11132055A Withdrawn JPH11332565A (ja) | 1988-05-17 | 1999-05-12 | 植物のユビキチンプロモ―タ―系 |
| JP2002357267A Withdrawn JP2003174880A (ja) | 1988-05-17 | 2002-12-09 | 植物のユビキチンプロモーター系 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12408889A Expired - Lifetime JP3509855B2 (ja) | 1988-05-17 | 1989-05-17 | 植物のユビキチンプロモーター系 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002357267A Withdrawn JP2003174880A (ja) | 1988-05-17 | 2002-12-09 | 植物のユビキチンプロモーター系 |
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| EP (1) | EP0342926B1 (ja) |
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| CA (1) | CA1339684C (ja) |
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| DE68918494T2 (de) * | 1988-05-17 | 1995-03-23 | Lubrizol Genetics Inc | Pflanzliches Ubiquitinpromotorsystem. |
| HU218034B (hu) * | 1992-01-09 | 2000-05-28 | Novartis Ag. | Új növényi promoter |
| DE4227061A1 (de) * | 1992-08-12 | 1994-02-17 | Inst Genbiologische Forschung | DNA-Sequenzen, die in der Pflanze die Bildung von Polyfructanen (Lävanen) hervorrufen, Plasmide enthaltend diese Sequenzen sowie Verfahren zur Herstellung transgener Pflanzen |
| US5527695A (en) * | 1993-01-29 | 1996-06-18 | Purdue Research Foundation | Controlled modification of eukaryotic genomes |
| US6222099B1 (en) * | 1993-02-05 | 2001-04-24 | Regents Of The University Of Minnesota | Transgenic plants expressing maize acetyl COA carboxylase gene and method of altering oil content |
| US6414222B1 (en) | 1993-02-05 | 2002-07-02 | Regents Of The University Of Minnesota | Gene combinations for herbicide tolerance in corn |
| US6069298A (en) | 1993-02-05 | 2000-05-30 | Regents Of The University Of Minnesota | Methods and an acetyl CoA carboxylase gene for conferring herbicide tolerance and an alteration in oil content of plants |
| US5955573A (en) * | 1993-06-04 | 1999-09-21 | Demegen, Inc. | Ubiquitin-lytic peptide fusion gene constructs, protein products deriving therefrom, and methods of making and using same |
| IL114697A0 (en) * | 1994-07-22 | 1995-11-27 | Demeter Biotech Ltd | Polypeptides comprising ubiquitin-lytic peptide fusion protein products deriving therefrom their preparation and use |
| US5750868A (en) * | 1994-12-08 | 1998-05-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Reversible nuclear genetic system for male sterility in transgenic plants |
| US5837851A (en) * | 1994-12-08 | 1998-11-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | DNA promoter 5126 and constructs useful in a reversible nuclear genetic system for male sterility in transgenic plants |
| US5962769A (en) * | 1995-06-07 | 1999-10-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Induction of male sterility in plants by expression of high levels of avidin |
| US6040496A (en) * | 1995-06-30 | 2000-03-21 | Novartis Finance Corporation | Use of translationally altered RNA to confer resistance to maize dwarf mosaic virus and other monocotyledonous plant viruses |
| US5804694A (en) * | 1995-11-06 | 1998-09-08 | Prodigene, Inc. | Commercial production of β-glucuronidase in plants |
| HUT76355A (en) * | 1995-11-24 | 1997-08-28 | Bay Zoltan Alkalmazott Kutatas | Plant gene-expression vector family based on dna fragments regulating alfalfa h3 histon gene variant (ms h3g1) |
| EP0877814A1 (en) * | 1996-01-29 | 1998-11-18 | Agritope, Inc. | Raspberry promoters for expression of transgenes in plants |
| JP2001501804A (ja) * | 1996-02-01 | 2001-02-13 | ハー マジェスティー イン ライト オブ カナダ，リプレゼンティッド バイ ザ ミニスター オブ アグリカルチャー アンド アグリ―フード カナダ | タバコ由来プロモーター |
| US6072050A (en) | 1996-06-11 | 2000-06-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Synthetic promoters |
| NZ333323A (en) * | 1996-06-11 | 2000-02-28 | Pioneer Hi Bred Int | A synthetic plant core promoter |
| ES2259191T3 (es) * | 1996-06-12 | 2006-09-16 | Japan Tobacco Inc. | Metodo para expresar genes foraneos y vectores para ello. |
| EP0961830A1 (en) * | 1997-01-29 | 1999-12-08 | Neurosearch A/S | EXPRESSION VECTORS AND METHODS FOR $i(IN VIVO) EXPRESSION OF THERAPEUTIC POLYPEPTIDES |
| US6319503B1 (en) | 1998-02-19 | 2001-11-20 | Proteinix Company | Heat shock fusion-based vaccine system |
| WO1999005902A1 (en) * | 1997-07-30 | 1999-02-11 | Purdue Research Foundation | Transgenic plants tolerant of salinity stress |
| US6777546B2 (en) * | 1997-10-07 | 2004-08-17 | Loma Linda University | Methods and substances for preventing and treating autoimmune disease |
| US7098191B2 (en) | 1997-11-03 | 2006-08-29 | The Arizona Board Of Reagents | Hyperthermic inducible expression vectors for gene therapy and methods of use thereof |
| US6709858B1 (en) | 1997-11-03 | 2004-03-23 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Hyperthermic inducible expression vectors for gene therapy and methods of use thereof |
| US20060121051A1 (en) * | 1998-02-19 | 2006-06-08 | Kenten John H | Heat shock fusion-based vaccine system |
| BR9907720A (pt) * | 1998-02-25 | 2001-09-04 | Du Pont | Fragmento de ácido nucléico isolado, gene quimérico, célula hospedeira transpormada, polipeptìdeo de elf-4e, método de alteração do nìvel de expressão de uma proteìna elf-4e, em uma célula hospedeira, método de obtenção de um de um fragmento de ácido nucléico codificador de toda ou uma parte substancial da sequência aminoácida codificadora de uma proteìna elf-4e e produto |
| EP1462522B1 (en) * | 1998-02-26 | 2006-08-16 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize Met-1 promoter |
| AR014072A1 (es) * | 1998-02-26 | 2001-01-31 | Pioneer Hi Bred Int | Molecula de acido nucleico aislada que tiene una secuencia nucleotidica para un promotor que es capaz de iniciar una transcripcion constitutiva en unacelula de planta, construccion adn, vector, celula huesped, metodo para expresar en forma constitutiva una secuencia nucleotidica heteroloca en una |
| US6686513B1 (en) | 1998-03-19 | 2004-02-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Sugarcane ubi9 gene promoter sequence and methods of use thereof |
| US6706948B1 (en) | 1998-03-19 | 2004-03-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Sugarcane UBI9 gene promoter and methods of use thereof |
| AR020078A1 (es) | 1998-05-26 | 2002-04-10 | Syngenta Participations Ag | Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta |
| US6504083B1 (en) | 1998-10-06 | 2003-01-07 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize Gos-2 promoters |
| CA2345904A1 (en) | 1998-10-09 | 2000-04-20 | Planttec Biotechnologie Gmbh | Nucleic acid molecules encodeing a branching enzyme from bacteria of the genus neisseria as well as methods for the production of .alpha.-1,6-branched .alpha.-1,4-glucans |
| JP2002529094A (ja) | 1998-11-09 | 2002-09-10 | プランテック バイオテクノロジー ゲーエムベーハー | コメ由来核酸分子および改変デンプンの生産のためのその使用 |
| US6528701B1 (en) | 1999-03-02 | 2003-03-04 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Rice ubiquitin-derived promoters |
| US7932374B2 (en) | 1999-03-25 | 2011-04-26 | Arborgen, Inc. | Compositions and methods for the modification of gene expression |
| US6380459B1 (en) | 1999-03-25 | 2002-04-30 | Genesis Research & Development Corporation Ltd. | Compositions and methods for the modification of gene expression |
| US7211711B2 (en) * | 1999-03-25 | 2007-05-01 | Arborgen, Llc | Compositions and methods for the modification of gene expression |
| US7518034B2 (en) * | 1999-03-25 | 2009-04-14 | Arborgen Llc | Compositions and methods for the modification of gene expression |
| EP1163340B1 (en) * | 1999-03-25 | 2005-06-15 | Genesis Research & Development Corporation Limited | Compositions and methods for the modification of gene expression |
| US6596925B1 (en) | 1999-03-25 | 2003-07-22 | Genesis Research & Development Corp. Ltd. | Compositions and methods for the modification of gene expression |
| WO2001012216A1 (en) * | 1999-08-13 | 2001-02-22 | Proteinix Company | Heat shock fusion-based vaccine system |
| PL354747A1 (en) | 1999-09-09 | 2004-02-23 | Monsanto Uk Ltd | Modified ubiquitin regulatory system |
| WO2001032897A2 (en) * | 1999-11-05 | 2001-05-10 | South African Sugar Association | A high level, stable, constitutive promoter element for plants |
| AU2001275433A1 (en) | 2000-06-09 | 2001-12-17 | Prodigene, Inc. | Plant ubiquitin promoter sequences and methods of use |
| NZ523633A (en) * | 2000-06-20 | 2004-07-30 | Genesis Res & Dev Corp Ltd | Polynucleotide regulatory sequences that modify expression of endogenous and/or heterologous polynucleotides in transgenic plants |
| JP2004512020A (ja) * | 2000-06-23 | 2004-04-22 | イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー | 組換え構築物ならびにこれを遺伝子発現を減少させる際に用いる方法 |
| US7517975B2 (en) | 2000-09-26 | 2009-04-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
| US6734340B2 (en) | 2000-10-23 | 2004-05-11 | Bayer Cropscience Gmbh | Monocotyledon plant cells and plants which synthesise modified starch |
| US6660915B2 (en) | 2000-12-29 | 2003-12-09 | Anna Christina Douma | Low lipoxygenase 1 barley |
| EP1346030B1 (en) | 2000-12-29 | 2011-11-02 | Carlsberg Research Laboratory | Low-lipoxygenase 1 barley |
| AR035799A1 (es) | 2001-03-30 | 2004-07-14 | Syngenta Participations Ag | Toxinas insecticidas aisladas de bacillus thuringiensis y sus usos. |
| CA2445354A1 (en) * | 2001-04-25 | 2002-10-31 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.V. | Nucleic acid molecules encoding starch degrading enzymes |
| EP1950305A1 (en) | 2001-05-09 | 2008-07-30 | Monsanto Technology, LLC | Tyr a genes and uses thereof |
| EP1279737A1 (en) | 2001-07-27 | 2003-01-29 | Coöperatieve Verkoop- en Productievereniging, van Aardappelmeel en Derivaten AVEBE B.A. | Transformation method for obtaining marker-free plants |
| US8592663B2 (en) | 2001-11-13 | 2013-11-26 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Tobacco nicotine demethylase genomic clone and uses thereof |
| US7812227B2 (en) | 2001-11-13 | 2010-10-12 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Cloning of cytochrome p450 genes from nicotiana |
| US7700834B2 (en) * | 2001-11-13 | 2010-04-20 | U.S. Smokless Tobacco Company | Nicotiana nucleic acid molecules and uses thereof |
| US10266836B2 (en) | 2001-11-13 | 2019-04-23 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Tobacco nicotine demethylase genomic clone and uses thereof |
| US20050034188A1 (en) * | 2002-03-20 | 2005-02-10 | J. R. Simplot Company | Refined plant transformation |
| ATE509111T1 (de) * | 2002-03-20 | 2011-05-15 | Simplot Co J R | Verfeinerte pflanzentransformation |
| BR0308614A (pt) | 2002-03-21 | 2005-02-09 | Monsanto Technology Llc | Construções de ácidos nucléicos e processos para a produção de composições oleosas de sementes alteradas |
| US7566813B2 (en) | 2002-03-21 | 2009-07-28 | Monsanto Technology, L.L.C. | Nucleic acid constructs and methods for producing altered seed oil compositions |
| CA2911801A1 (en) | 2002-03-22 | 2003-10-02 | Greta Arnaut | Novel bacillus thuringiensis insecticidal proteins |
| JP3940793B2 (ja) | 2002-05-15 | 2007-07-04 | 独立行政法人農業生物資源研究所 | 任意のペプチドを植物のタンパク顆粒で蓄積させる方法 |
| DE10224889A1 (de) * | 2002-06-04 | 2003-12-18 | Metanomics Gmbh & Co Kgaa | Verfahren zur stabilen Expression von Nukleinsäuren in transgenen Pflanzen |
| CA2494626A1 (en) | 2002-08-07 | 2004-03-04 | Basf Plant Science Gmbh | Nucleic acid sequences encoding proteins associated with abiotic stress response |
| US7214859B2 (en) * | 2002-08-16 | 2007-05-08 | National Research Council Of Canada | Brassica pyruvate dehydrogenase kinase gene |
| US7365186B2 (en) * | 2002-11-22 | 2008-04-29 | Arborgen, Llc | Vascular-preferred promoter sequences and uses thereof |
| KR20050084390A (ko) | 2002-12-20 | 2005-08-26 | 메타노믹스 게엠베하 운트 코. 카게아아 | 아미노산의 제조 방법 |
| AU2003303589B2 (en) | 2002-12-26 | 2008-04-24 | Syngenta Participations Ag | Cell proliferation-related polypeptides and uses therefor |
| BRPI0406624A (pt) | 2003-01-03 | 2005-12-06 | Texas A & M Univ Sys | Promotor de defesa vegetal stem-regulated e seus usos em expressões tecido-especìficas em monocotiledÈneas |
| ATE549397T1 (de) * | 2003-01-03 | 2012-03-15 | Texas A & M Univ Sys | Stammgesteuerte promotoren von pflanzeneigenen abwehrkräften und deren verwendung bei der gewebespezifischen expression in monokotyledonen pflanzen |
| EP2322633A3 (en) | 2003-02-17 | 2011-08-17 | Metanomics GmbH | Preparation of organisms with faster growth and/or higher yield |
| EP1641930B1 (en) | 2003-04-15 | 2011-06-29 | BASF Plant Science GmbH | Nucleic acid sequences encoding proteins associated with abiotic stress response and plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress |
| US8022271B2 (en) * | 2003-05-16 | 2011-09-20 | North Carolina State University | Polyubiquitin Rubi3 promoter and 5' regulatory sequences |
| EP1670922A2 (en) | 2003-10-03 | 2006-06-21 | University of Florida Research Foundation, Incorporated | Materials and methods for synthesis of a flavor and aroma volatile in plants |
| CN1926235B (zh) * | 2003-10-16 | 2012-07-18 | 美国无烟烟草有限责任公司 | 从烟草克隆细胞色素p450基因 |
| US8637731B2 (en) * | 2003-10-16 | 2014-01-28 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Nicotiana nucleic acid molecules and uses thereof |
| EP1699926B1 (en) | 2003-12-10 | 2014-06-18 | Monsanto Technology, LLC | Stress tolerant plants and methods thereof |
| CN104293826A (zh) | 2003-12-16 | 2015-01-21 | 先锋高级育种国际公司 | 显性基因抑制性转基因及其使用方法 |
| US7230162B2 (en) * | 2003-12-19 | 2007-06-12 | Monsanto Technology Llc | CEP1 gene promoter sequences from Zea mays and methods of use |
| CA2558621C (en) | 2004-03-08 | 2013-04-30 | Syngenta Participations Ag | Promoter from maize prolamin seed storage protein and uses thereof |
| AT500838B1 (de) * | 2004-04-20 | 2007-11-15 | Veterinaermedizinische Uni Wie | Multiple hse |
| US8586837B2 (en) | 2004-04-29 | 2013-11-19 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Nicotiana nucleic acid molecules and uses thereof |
| DK1763582T3 (en) | 2004-07-08 | 2015-01-12 | Dlf Trifolium As | Means and method of controlling the flowering of plants |
| CN104178511A (zh) | 2004-07-31 | 2014-12-03 | 梅坦诺米克斯有限公司 | 制备具有更快生长和/或更高产量的生物 |
| US20070199097A1 (en) * | 2004-09-03 | 2007-08-23 | U.S. Smokeless Tobacco Company | Tobacco plants having a mutation in a nicotine demethylase gene |
| CN101056983B (zh) * | 2004-09-13 | 2012-03-14 | 孟山都技术有限公司 | 用于植物的启动子分子 |
| BRPI0515302A (pt) * | 2004-09-14 | 2008-07-15 | Monsanto Technology Llc | moléculas promotoras para uso em plantas |
| US20080134351A1 (en) * | 2004-09-23 | 2008-06-05 | Basf Plant Science Gmbh | Recombination Cassettes and Methods For Sequence Excision in Plants |
| CA2579927A1 (en) | 2004-09-24 | 2006-03-30 | Basf Plant Science Gmbh | Plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress |
| CN103289961A (zh) | 2004-09-24 | 2013-09-11 | 巴斯福植物科学有限公司 | 编码与非生物性胁迫反应相关的蛋白质的核酸序列和环境胁迫抗性增加的植物细胞和植物 |
| SG184723A1 (en) * | 2004-09-24 | 2012-10-30 | Monsanto Technology Llc | Promoter molecules isolated from brassica napus for use in plants |
| EP1851317B1 (en) | 2005-02-23 | 2011-10-26 | North Carolina State University | Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes |
| DE602006016756D1 (de) | 2005-03-16 | 2010-10-21 | Athenix Corp | Auf cis einwirkende regulierende elemente aus tripsacum-dactyloiden |
| US8173871B2 (en) | 2005-07-08 | 2012-05-08 | Universidad Nacional Autonoma De Mexico | Bacterial proteins with pesticidal activity |
| AU2006274964A1 (en) * | 2005-07-27 | 2007-02-08 | Basf Plant Science Gmbh | Selection system for maize transformation |
| EP1915452A2 (en) | 2005-08-12 | 2008-04-30 | BASF Plant Science GmbH | Nucleic acid sequences encoding proteins associated with abiotic stress response and plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress |
| CN101351555A (zh) * | 2005-09-13 | 2009-01-21 | 巴斯福植物科学有限公司 | 用于小麦的新选择系统 |
| US7377231B2 (en) * | 2005-10-19 | 2008-05-27 | Ming-Liang Tsai | Retractable pet house |
| JP2009526518A (ja) * | 2005-12-16 | 2009-07-23 | ケイヘーネ・エヌ・ブイ | 構成的植物プロモーター |
| US7622573B2 (en) * | 2006-01-17 | 2009-11-24 | Biolex, Inc. | Expression control elements from the lemnaceae family |
| CN101500403A (zh) | 2006-03-10 | 2009-08-05 | 孟山都技术有限责任公司 | 大豆种子和油的组成以及产生所述种子的方法 |
| US20090172834A1 (en) | 2006-03-24 | 2009-07-02 | Basf Plant Science Gmbh | Proteins Associated With Abiotic Stress Response And Homologs |
| US8735555B2 (en) * | 2006-04-18 | 2014-05-27 | The Regents Of The University Of California | Transgenic plants comprising a mutant phytochrome and showing altered photomorphogenesis |
| EP2041284B1 (en) | 2006-07-05 | 2021-05-26 | Arkansas State University Research and Development Institute | Production of stilbenes and stilbene derivatives in plant hairy root cultures |
| PL2049663T3 (pl) | 2006-08-11 | 2015-08-31 | Dow Agrosciences Llc | Homologiczna rekombinacja za pośrednictwem nukleazy z palcami cynkowymi |
| CN101589148B (zh) | 2006-10-13 | 2014-07-02 | 巴斯福植物科学有限公司 | 产量提高的植物 |
| US8319011B2 (en) | 2006-12-15 | 2012-11-27 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Tobacco plants having reduced nicotine demethylase activity |
| US11332753B2 (en) | 2006-12-15 | 2022-05-17 | U.S. Smokeless Tobacco Company Llc | Tobacco plants having reduced nicotine demethylase activity |
| US8338664B2 (en) | 2006-12-20 | 2012-12-25 | Monsanto Do Brasil Ltda. | Nucleic acid molecules encoding plant proteins in the C3HC4 family and methods for the alteration of plant cellulose and lignin content |
| BRPI0720468A2 (pt) | 2006-12-20 | 2014-01-14 | Alellyx Sa | Construtos de ácido nucleico e métodos para alterar o comprimento da fibra da planta e/ou a altura da planta |
| BRPI0701172B1 (pt) * | 2007-02-05 | 2019-11-26 | Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuaria Embrapa | composições e métodos para modificar a expressão de genes usando o promotor do gene da proteína de conjugação à ubiquitina de plantas de soja |
| BRPI0701230B1 (pt) * | 2007-02-05 | 2018-06-26 | Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária - Embrapa | Composições e métodos para modificar a expressão de genes usando o promotor do gene da proteína de conjugação à ubiquitina de plantas de algodoeiro |
| US7393948B1 (en) * | 2007-04-03 | 2008-07-01 | Ms Technologies, Inc. | Ubiquitin regulatory nucleic acids, vectors, and methods of using same |
| US20100293664A1 (en) * | 2007-04-03 | 2010-11-18 | Sathish Puthigae | Control of plant gene expression |
| CA2584934A1 (en) | 2007-04-17 | 2008-10-17 | University Of Guelph | Nitrogen-regulated sugar sensing gene and protein and modulation thereof |
| CA2684370C (en) | 2007-04-17 | 2017-10-17 | Plant Research International B.V. | Mammalian-type glycosylation in plants by expression of non-mammalian glycosyltransferases |
| DE112008001452T5 (de) | 2007-05-22 | 2010-12-16 | Basf Plant Science Gmbh | Pflanzen mit erhöhter Toleranz und/oder Resistenz gegen Umweltstress und erhöhter Biomasseproduktion |
| US20100240597A1 (en) | 2007-06-15 | 2010-09-23 | Arkansas State University | Methods of delivery of molecules to cells using a ricin subunit and compositions relating to same |
| MY156447A (en) * | 2007-07-26 | 2016-02-26 | Puthigae Sathish | Methods and polynucleotides for improving plants |
| CA2695530C (en) | 2007-08-03 | 2016-07-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Msca1 nucleotide sequences impacting plant male fertility and method of using same |
| MX2010002931A (es) | 2007-09-18 | 2010-06-01 | Basf Plant Science Gmbh | Plantas con rendimiento incrementado. |
| DE112008002456T5 (de) | 2007-09-21 | 2011-01-13 | Basf Plant Science Gmbh | Pflanzen mit erhöhtem Ertrag |
| EP2220231B1 (en) | 2007-11-12 | 2017-10-11 | North Carolina State University | Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes |
| BRPI0821748A2 (pt) * | 2007-12-19 | 2019-09-24 | Basf Plant Science Gmbh | método para produzir uma planta com rendimento aumentado, molécula isolada de ácido nucleico, construção de ácido nucleico, vetor, processo para produzir um polipeptídeo, polipeptídeo, anticorpo, núcleo de célula de planta, célula de planta, tecido de planta, material de propagação, semente, pólen, progênie, ou uma parte de planta, ou uma planta com rendimento aumento, processo para a indentificação de um composto, método para a produção de uma composição agrícola, composição, polipeptídeo ou molécula de ácido nucleico, uso dos ácidos nucléicos, e, método para a indentificação de uma planta com um rendimento aumentado |
| MX2010009010A (es) * | 2008-02-27 | 2010-09-09 | Basf Plant Science Gmbh | Plantas con mayor rendimiento. |
| WO2009123479A1 (en) * | 2008-04-03 | 2009-10-08 | Sathish Puthigae | Gene expression control in plants |
| NZ568190A (en) | 2008-05-12 | 2010-09-30 | Nz Inst Plant & Food Res Ltd | Chimeric compositions and methods for regulating plant gene expression |
| AU2009251938B2 (en) * | 2008-05-28 | 2014-07-10 | Insight Genomics Limited | Methods and compositions for plant improvement |
| MX2010013248A (es) * | 2008-06-03 | 2011-01-21 | Vialactia Biosciences Ltd | Composiciones y metodos para mejorar plantas. |
| CN103923892A (zh) | 2008-08-19 | 2014-07-16 | 巴斯夫植物科学有限公司 | 通过在植物或其部分中提高或产生一种或更多活性具有提高产量的植物 |
| US20110195843A1 (en) | 2008-09-23 | 2011-08-11 | Basf Plant Science Gmbh | Plants with Increased Yield (LT) |
| EP2350289A1 (en) | 2008-10-23 | 2011-08-03 | BASF Plant Science GmbH | Plants with increased yield (nue) |
| AU2009306369A1 (en) | 2008-10-23 | 2010-04-29 | Basf Plant Science Gmbh | A method for producing a transgenic cell with increased gamma-aminobutyric acid (GABA) content |
| EP2184351A1 (en) | 2008-10-30 | 2010-05-12 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Polynucleotides encoding caryophyllene synthase and uses thereof |
| NZ593148A (en) | 2008-12-01 | 2012-02-24 | Vialactia Biosciences Nz Ltd | Method of producing a plant with increased tolerance to enviromental stresses |
| WO2010114395A1 (en) | 2009-04-01 | 2010-10-07 | Vialactia Biosciences (Nz) Limited | Control of gene expression in plants using a perennial ryegrass (lolium perenne l.) derived promoter |
| CN102459615B (zh) | 2009-06-08 | 2017-05-03 | 纽海姆有限公司 | 耐旱植物 |
| BRPI1010858B1 (pt) * | 2009-06-11 | 2021-01-26 | Syngenta Participations Ag | sequências de ácido nucleico, método de expressão de um gene heterólogo e cassete de expressão |
| AU2010275363A1 (en) | 2009-07-23 | 2012-02-02 | Basf Plant Science Company Gmbh | Plants with increased yield |
| PL2456786T5 (pl) | 2009-07-24 | 2017-10-31 | Immune Design Corp | Wektory lentiwirusowe pseudotypowane glikoproteiną otoczki wirusa sindbis |
| WO2011025394A1 (en) | 2009-08-27 | 2011-03-03 | Pastoral Greenhouse Gas Research Ltd | Complete genome sequence of the methanogen methanobrevibacter ruminantium |
| EP2501816A4 (en) | 2009-11-17 | 2013-07-03 | Basf Plant Science Co Gmbh | PLANTS WITH INCREASED PERFORMANCE |
| BR112012012444A2 (pt) | 2009-11-27 | 2015-09-22 | Basf Plant Science Co Gmbh | "endonuclease quimérica, polinucleotídeo isolado, cassete de expressão, vetor, organismo não humano, método para fornecer uma endonuclease quimérica, método para recombinação homóloga de polinucleotídeos, método para mutação alvejada de polinucleotídeosa e método para recombinação homóloga ou mutação alvejada" |
| CN102686726B (zh) | 2009-11-27 | 2015-12-16 | 巴斯夫植物科学有限公司 | 嵌合内切核酸酶及其用途 |
| AU2010325549B2 (en) | 2009-11-27 | 2017-04-20 | Basf Plant Science Company Gmbh | Optimized endonucleases and uses thereof |
| DK2512222T3 (en) | 2009-12-16 | 2018-03-26 | Dow Agrosciences Llc | COMBINED USE OF CRY1CA AND CRY1FA PROTEINS FOR MANAGING INSECT RESISTANCE |
| BR112012015690A2 (pt) | 2009-12-23 | 2015-08-25 | Bayer Intelectual Property Gmbh | Plantas tolerantes a herbicidas inibidores de hppd. |
| CN102770531A (zh) | 2009-12-23 | 2012-11-07 | 拜尔知识产权有限公司 | 对hppd抑制剂型除草剂耐受的植物 |
| ES2668222T3 (es) | 2009-12-23 | 2018-05-17 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de la HPPD |
| AR080353A1 (es) | 2009-12-23 | 2012-04-04 | Bayer Cropscience Ag | Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd |
| CN102762724A (zh) | 2009-12-23 | 2012-10-31 | 拜尔知识产权有限公司 | 对hppd抑制剂型除草剂耐受的植物 |
| WO2011088180A1 (en) | 2010-01-15 | 2011-07-21 | North Carolina State University | Compositions and methods for minimizing nornicotine synthesis in tobacco |
| CN103220905A (zh) | 2010-05-28 | 2013-07-24 | 纽海姆有限公司 | 果实大小增大的植物 |
| RU2611188C2 (ru) | 2010-07-29 | 2017-02-21 | ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи | Штаммы agrobacterium, модифицированные для увеличения частоты трансформации растений |
| ES2657233T3 (es) | 2010-08-30 | 2018-03-02 | Dow Agrosciences, Llc | Potenciador viral baciliforme de la caña de azúcar (SCBV) y su uso en la genómica vegetal funcional |
| ES2588991T3 (es) | 2010-11-10 | 2016-11-08 | Bayer Cropscience Ag | Variantes de HPPD y procedimientos de uso |
| WO2012074868A2 (en) | 2010-12-03 | 2012-06-07 | Ms Technologies, Llc | Optimized expression of glyphosate resistance encoding nucleic acid molecules in plant cells |
| BRPI1107331A2 (pt) | 2010-12-30 | 2017-03-01 | Dow Agrosciences Llc | moléculas de ácido nucléico que conferem resistência às pragas coleópteras |
| WO2012092580A2 (en) | 2010-12-30 | 2012-07-05 | Dow Agrosciences Llc | Nucleic acid molecules that target the vacuolar atpase h subunit and confer resistance to coleopteran pests |
| KR20130130804A (ko) | 2010-12-30 | 2013-12-02 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 공포 ａｔｐａｓｅ ｃ 서브유닛을 표적화하고 딱정벌레목 해충에 대한 저항성을 부여하는 핵산 분자 |
| EP2675473A1 (en) | 2011-02-15 | 2013-12-25 | Immune Design Corp. | Methods for enhancing immunogen specific immune responses by vectored vaccines |
| KR20140034160A (ko) | 2011-02-28 | 2014-03-19 | 알트리아 클라이언트 서비시스 인코포레이티드 | 담배 근친교배 식물체 albex1f 및 albex1ms |
| RU2013139871A (ru) | 2011-02-28 | 2015-04-10 | Норт Каролина Стейт Юниверсити | Инбредные растения табака ncbex1f, ncbex1mc и nc ex90 |
| US8648230B2 (en) | 2011-03-18 | 2014-02-11 | Ms Technologies, Llc | Regulatory regions preferentially expressing in non-pollen plant tissue |
| KR102003176B1 (ko) | 2011-03-25 | 2019-07-24 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 식물 조절 요소 및 그의 용도 |
| US9078446B2 (en) | 2011-03-25 | 2015-07-14 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of N-(tetrazol-4-yl)- or N-(triazol-3-yl)arylcarboxamides or their salts for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to HPPD inhibitor herbicides |
| EA201391302A1 (ru) | 2011-03-25 | 2014-04-30 | Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх | Применение n-(1,2,5-оксадиазол-3-ил)бензамидов для борьбы с нежелательными растениями в районах произрастания трансгенных культурных растений, устойчивых к гербицидам - ингибиторам hppd |
| EP2694099B1 (en) | 2011-04-08 | 2019-10-16 | Immune Design Corp. | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| UY34014A (es) | 2011-04-15 | 2012-11-30 | Dow Agrosciences Llc | Genes sintéticos para expresar proteínas en células de maíz, construcciones, plantas transgénicas, métodos para controlar pestes y composiciones |
| CA2837664C (en) | 2011-05-31 | 2022-12-06 | Keygene N.V. | Pest resistant plants with 7-epizingiberene synthase activity and methods of making same |
| US9861105B2 (en) | 2011-07-28 | 2018-01-09 | Syngenta Participations Ag | Methods and compositions for controlling nematode pests |
| EP2748323B1 (en) | 2011-08-22 | 2019-05-01 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Methods and means to modify a plant genome |
| AR087888A1 (es) | 2011-09-14 | 2014-04-23 | Dow Agrosciences Llc | Plantas con caracteristicas relacionadas al estres y metodos para producirlas |
| CN104039957A (zh) | 2011-10-19 | 2014-09-10 | 凯金公司 | 用于产生补身醇的方法和组合物 |
| WO2013095125A1 (en) | 2011-12-16 | 2013-06-27 | Keygene N.V. | Method for producing a plant having enhanced disease resistance to nematodes |
| AR090418A1 (es) | 2012-02-01 | 2014-11-12 | Dow Agrosciences Llc | Peptido de transito al cloroplasto |
| AU2013219927B2 (en) | 2012-02-16 | 2018-11-08 | Syngenta Participations Ag | Engineered pesticidal proteins |
| US8952229B1 (en) | 2012-02-21 | 2015-02-10 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize inbred PH1K0H1 |
| US8975469B1 (en) | 2012-02-21 | 2015-03-10 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize hybrid X13C704HR |
| EP2820136B1 (en) | 2012-02-29 | 2018-03-28 | Dow AgroSciences LLC | Sugarcane bacilliform viral (scbv) enhancer and its use in plant functional genomics |
| US9644213B2 (en) | 2012-03-09 | 2017-05-09 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Method of enhancing plant drought tolerance by expression of NDR1 |
| EA038702B1 (ru) | 2012-03-30 | 2021-10-07 | Иммьюн Дизайн Корп. | Лентивирусные векторные частицы, имеющие улучшенную эффективность трансдукции клеток, экспрессирующих dc-sign |
| AU2013205557B2 (en) | 2012-04-17 | 2016-04-21 | Corteva Agriscience Llc | Synthetic brassica-derived chloroplast transit peptides |
| PL2850431T3 (pl) | 2012-05-16 | 2018-09-28 | Immune Design Corp. | Szczepionki przeciwko HSV-2 |
| US20130312136A1 (en) * | 2012-05-21 | 2013-11-21 | Syngenta Participations Ag | Methods and Compositions for Modulating Gene Expression in Plants |
| RU2015101749A (ru) | 2012-06-22 | 2016-08-10 | Зингента Партисипейшнс Аг | Биологический контроль жесткокрылых вредителей |
| KR20150041788A (ko) * | 2012-08-17 | 2015-04-17 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 식물에서의 트랜스진 발현을 위한 옥수수 비번역 영역의 용도 |
| WO2014043435A1 (en) | 2012-09-14 | 2014-03-20 | Bayer Cropscience Lp | Hppd variants and methods of use |
| CN105602952B (zh) | 2012-11-09 | 2019-11-19 | 深圳市作物分子设计育种研究院 | 一种育性基因及其应用 |
| US9598707B2 (en) | 2012-11-26 | 2017-03-21 | Arkansas State University-Jonesboro | Method to increase the yield of products in plant material |
| AU2013362921B2 (en) * | 2012-12-19 | 2018-03-01 | Monsanto Technology Llc | Plant regulatory elements and uses thereof |
| US9603335B2 (en) | 2013-01-11 | 2017-03-28 | North Carolina State University | Tobacco inbred plants K326 SRC, CMS K326 SRC, K346 SRC, CMS K346 SRC, NC1562-1 SRC, NCTG-61 SRC, CMS NCTG-61 SRC and hybrid NC196 SRC |
| AU2014211570A1 (en) | 2013-01-29 | 2015-07-23 | The University Court Of The University Of Glasgow | Methods and means for increasing stress tolerance and biomass in plants |
| US8921672B1 (en) | 2013-02-13 | 2014-12-30 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize inbred PH24DS |
| US8916744B1 (en) | 2013-02-13 | 2014-12-23 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize inbred PH24DV |
| US8907159B1 (en) | 2013-02-13 | 2014-12-09 | Pioneer Hi Bred International Inc | Maize inbred PH24DM |
| US9783817B2 (en) | 2013-03-04 | 2017-10-10 | Arkansas State University | Methods of expressing and detecting activity of expansin in plant cells |
| EP2964016A1 (en) | 2013-03-05 | 2016-01-13 | North Carolina State University | Tobacco inbred and hybrid plants and uses thereof |
| KR102270069B1 (ko) | 2013-03-14 | 2021-06-28 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 식물 조절 성분 및 이의 용도 |
| WO2014142647A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Wageningen Universiteit | Fungals strains with improved citric acid and itaconic acid production |
| CN105518136A (zh) | 2013-07-10 | 2016-04-20 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于通过抑制CYP51基因表达来控制致植物病真菌和卵菌的RNAi |
| BR102014021330A2 (pt) | 2013-08-30 | 2015-09-22 | Dow Agrosciences Llc | construtos para expressão de transgenes usando elementos reguladores de genes de ubiquitina de panicum |
| WO2015036593A2 (en) | 2013-09-13 | 2015-03-19 | University Of Bremen | Transgenic plants for nitrogen fixation |
| US10767188B2 (en) | 2013-09-25 | 2020-09-08 | Nutech Ventures | Methods and compositions for obtaining useful plant traits |
| CA2933613A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Dow Agrosciences Llc | Rnapii-140 nucleic acid molecules that confer resistance to coleopteran pests |
| BR102014031844A2 (pt) | 2013-12-20 | 2015-10-06 | Dow Agrosciences Llc | ras oposto (rop) e moléculas de ácido nucleico relacionadas que conferem resistência a pragas de coleópteros e hemípteros |
| TW201527315A (zh) * | 2013-12-31 | 2015-07-16 | Dow Agrosciences Llc | 新穎玉米泛素啓動子（四） |
| TW201527312A (zh) | 2013-12-31 | 2015-07-16 | Dow Agrosciences Llc | 新穎玉米泛素啓動子（一） |
| TW201527313A (zh) | 2013-12-31 | 2015-07-16 | Dow Agrosciences Llc | 新穎玉米泛素啓動子（二） |
| TW201527314A (zh) | 2013-12-31 | 2015-07-16 | Dow Agrosciences Llc | 新穎玉米泛素啓動子（三） |
| TW201527316A (zh) | 2013-12-31 | 2015-07-16 | Dow Agrosciences Llc | 新穎玉米泛素啓動子（五） |
| US10683513B2 (en) | 2013-12-31 | 2020-06-16 | Dow Agrosciences Llc | Tissue-specific expression and hybrid plant production |
| US9714429B2 (en) | 2014-01-28 | 2017-07-25 | Arkansas State University | Regulatory sequence of cupin family gene |
| SG11201606625RA (en) | 2014-02-14 | 2016-09-29 | Immune Design Corp | Immunotherapy of cancer through combination of local and systemic immune stimulation |
| FR3017771B1 (fr) | 2014-02-24 | 2023-03-17 | Centre Nat Rech Scient | Plantes a rendement accru et methode d'obtention de telles plantes |
| EP3113603A1 (en) | 2014-03-03 | 2017-01-11 | North Carolina State University | Tobacco inbred and hybrid plants and tobacco products made thereof |
| EP3113602A1 (en) | 2014-03-03 | 2017-01-11 | North Carolina State University | Tobacco inbred and hybrid plants and tobacco products made thereof |
| EP3113604A1 (en) | 2014-03-03 | 2017-01-11 | North Carolina State University | Tobacco inbred and hybrid plants and tobacco products made thereof |
| CA2942171C (en) | 2014-03-11 | 2023-05-09 | Bayer Cropscience Lp | Hppd variants and methods of use |
| TW201542093A (zh) | 2014-03-21 | 2015-11-16 | 艾格里遺傳學股份有限公司 | 用於控制玉米穗蟲之Ｃｒｙ１Ｄ |
| RU2016146483A (ru) | 2014-05-07 | 2018-06-09 | ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи | Молекулы нуклеиновой кислоты dre4, сообщающие резистентность к жесткокрылым вредителям |
| EP2944190A1 (en) | 2014-05-15 | 2015-11-18 | ETH Zurich | Means and methods for modifying the amylose content in plant starch |
| CA2955015A1 (en) | 2014-07-15 | 2016-01-21 | Immune Design Corp. | Prime-boost regimens with a tlr4 agonist adjuvant and a lentiviral vector |
| ES2773601T3 (es) | 2014-07-22 | 2020-07-13 | Nmc Inc | Sistemas de fijación de carbono mejorados en plantas y algas |
| WO2016050512A1 (en) | 2014-10-03 | 2016-04-07 | Bayer Cropscience Nv | Methods and means for increasing stress tolerance and biomass in plants |
| WO2016077624A1 (en) | 2014-11-12 | 2016-05-19 | Nmc, Inc. | Transgenic plants with engineered redox sensitive modulation of photosynthetic antenna complex pigments and methods for making the same |
| EP3795582B1 (en) | 2014-12-12 | 2023-09-13 | Syngenta Participations Ag | Compositions and methods for controlling plant pests |
| WO2016100333A1 (en) | 2014-12-15 | 2016-06-23 | Syngenta Participations Ag | Pesticidal microrna carriers and use thereof |
| ES2811279T3 (es) | 2014-12-22 | 2021-03-11 | Fraunhofer Ges Forschung | Moléculas de ácido nucleico de Nucampholin para controlar plagas de insectos coleópteros |
| PT3237617T (pt) | 2014-12-23 | 2019-05-30 | Syngenta Participations Ag | Controlo biológico de pragas de coleópteros |
| BR112017016789A2 (pt) | 2015-02-11 | 2018-05-08 | Basf Se | métodos para produzir uma planta transgênica, para controlar a vegetação indesejada e para o cultivo da planta, molécula de ácido nucleico, construção de ácido nucleico, vetor, polipeptídeo hppd mutado, núcleo de célula vegetal, núcleo de célula vegetal transgênica, planta transgênica, uso do ácido nucleico, combinação útil, processo para a preparação de uma combinação útil e uso de uma combinação útil |
| EP3067424A1 (en) | 2015-03-13 | 2016-09-14 | Dow AgroSciences LLC | Rna polymerase i1 nucleic acid molecules to control insect pests |
| BR112017021639A2 (pt) | 2015-04-10 | 2018-07-24 | Syngenta Participations Ag | composições de ração animal e métodos de uso |
| BR102016012010A2 (pt) | 2015-05-29 | 2020-03-24 | Dow Agrosciences Llc | Molécula de ácido nucleico, de ácido ribonucleico (rna) e de ácido ribonucleico de filamento duplo (dsrna), usos de célula, planta e semente, produto primário, bem como métodos para controlar uma população de pragas coleópteras e/ou hemípteras, para melhorar o rendimento de uma cultura, e para produzir uma célula vegetal transgênica e uma planta transgênica |
| CA2996806A1 (en) | 2015-09-04 | 2017-03-09 | Keygene N.V. | Diplospory gene |
| MX2018003044A (es) | 2015-09-11 | 2018-04-11 | Bayer Cropscience Ag | Variantes de hppd y metodos de uso. |
| RU2021134624A (ru) | 2015-10-22 | 2022-03-15 | Джуно Терапьютикс Гмбх | Способы, наборы, средства и устройства для трансдукции |
| BR112018008911A2 (pt) | 2015-11-09 | 2018-11-27 | Immune Design Corp | composições compreendendo vetores lentivirais que expressam il-12 e métodos de uso das mesmas |
| KR20180074699A (ko) | 2015-11-09 | 2018-07-03 | 이뮨 디자인 코포레이션 | 이종 핵산을 발현하는 rna 레플리콘의 발현 및 투여를 위한 레트로바이러스 벡터 |
| JP2019509275A (ja) | 2016-02-23 | 2019-04-04 | イミューン デザイン コーポレイション | マルチゲノムレトロウイルスベクター調製物ならびにそれらを産生および使用するための方法およびシステム |
| SG11201807333UA (en) | 2016-03-11 | 2018-09-27 | Monsanto Technology Llc | Plant regulatory elements and uses thereof |
| US11666012B2 (en) | 2016-03-16 | 2023-06-06 | Basf Se | Plants comprising wheat G-type cytoplasmic male sterility restorer genes, molecular markers and uses thereof |
| WO2017158126A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Bayer Cropscience Nv | Plants comprising wheat g-type cytoplasmic male sterility restorer genes, molecular markers and uses thereof |
| AU2017235484B2 (en) | 2016-03-16 | 2023-03-30 | Basf Se | Plants comprising wheat G-type cytoplasmic male sterility restorer genes, molecular markers and uses thereof |
| US11624076B2 (en) | 2016-04-21 | 2023-04-11 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | TAL-effector mediated herbicide tolerance |
| US10982223B2 (en) * | 2016-06-13 | 2021-04-20 | Benson Hill, Inc. | Increasing plant growth and yield by using a phenylalanine ammonia lyase sequence |
| AU2017300617A1 (en) | 2016-07-18 | 2019-02-07 | Basf Se | Plants comprising wheat G-type cytoplasmic male sterility restorer genes, molecular markers and uses thereof |
| CN109715811A (zh) | 2016-07-18 | 2019-05-03 | 巴斯夫欧洲公司 | 包含小麦g型胞质雄性不育恢复基因、分子标志物的植物及其用途 |
| AU2017301881A1 (en) | 2016-07-29 | 2019-02-07 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for assessing the presence or absence of replication competent virus |
| CN117604023A (zh) | 2016-08-17 | 2024-02-27 | 孟山都技术公司 | 通过操纵赤霉素代谢增加可收获产量的用于矮株型植物的方法和组合物 |
| US20190225974A1 (en) | 2016-09-23 | 2019-07-25 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Targeted genome optimization in plants |
| WO2018076335A1 (en) | 2016-10-31 | 2018-05-03 | Institute Of Genetics And Developmental Biology, Chinese Academy Of Sciences | Compositions and methods for enhancing abiotic stress tolerance |
| MX2019005835A (es) | 2016-11-23 | 2019-10-30 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Genes de toxinas axmi669 y axmi991 y metodos para su uso. |
| BR112019011207A2 (pt) | 2016-12-05 | 2019-10-08 | Juno Therapeutics Inc | produção de células modificadas para terapia celular adotiva |
| FR3059870A1 (fr) | 2016-12-09 | 2018-06-15 | Etablissements Andre Laboulet | Plantes de lin a haute teneur en omega-3 |
| CN110225974B (zh) | 2016-12-22 | 2024-03-29 | 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 | 使用cry14来控制线虫害虫 |
| EP3342780A1 (en) | 2016-12-30 | 2018-07-04 | Dow AgroSciences LLC | Pre-mrna processing factor 8 (prp8) nucleic acid molecules to control insect pests |
| EP3571303A1 (en) | 2017-01-18 | 2019-11-27 | Basf Agricultural Solutions Seed Us Llc | Bp005 toxin gene and methods for its use |
| AR110756A1 (es) | 2017-01-18 | 2019-05-02 | Bayer Cropscience Lp | Uso de bp005 para el control de patógenos de planta |
| EP3354738A1 (en) | 2017-01-30 | 2018-08-01 | Kws Saat Se | Transgenic maize plant exhibiting increased yield and drought tolerance |
| WO2018148180A2 (en) | 2017-02-07 | 2018-08-16 | Immune Design Corp. | Materials and methods for identifying and treating cancer patients |
| WO2018165091A1 (en) | 2017-03-07 | 2018-09-13 | Bayer Cropscience Lp | Hppd variants and methods of use |
| RU2763468C2 (ru) | 2017-05-09 | 2021-12-29 | Бейджинг Некст Дженерейшен Хайбрид Вит Байотекнолоджи Ко., Лтд. | СВЯЗАННЫЙ С ФЕРТИЛЬНОСТЬЮ ГЕН ТаМS7 ПШЕНИЦЫ И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ |
| WO2019083808A1 (en) | 2017-10-24 | 2019-05-02 | Basf Se | IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE AGAINST HPPD INHIBITORS BY REGULATION OF PUTATIVE REDUCED 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE REDUCES IN SOYBEANS |
| US11279944B2 (en) | 2017-10-24 | 2022-03-22 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Of herbicide tolerance to 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) inhibitors by down-regulation of HPPD expression in soybean |
| WO2019138083A1 (en) | 2018-01-12 | 2019-07-18 | Basf Se | Gene underlying the number of spikelets per spike qtl in wheat on chromosome 7a |
| US11535903B2 (en) | 2018-01-31 | 2022-12-27 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods and reagents for assessing the presence or absence of replication competent virus |
| WO2019161151A1 (en) | 2018-02-15 | 2019-08-22 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for improving crop yields through trait stacking |
| EP3752621A4 (en) | 2018-02-15 | 2021-12-01 | Monsanto Technology LLC | COMPOSITIONS AND METHODS FOR IMPROVING CROP YIELD BY STACKING CHARACTERS |
| AU2019255192B2 (en) * | 2018-04-18 | 2023-02-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Genes, constructs and maize event DP-202216-6 |
| EP3800996A1 (en) | 2018-05-25 | 2021-04-14 | Basf Se | Plants comprising wheat g-type cytoplasmic male sterility restorer genes and uses thereof |
| WO2019224359A1 (en) | 2018-05-25 | 2019-11-28 | Basf Se | Plants comprising wheat g-type cytoplasmic male sterility restorer genes and uses thereof |
| CA3099656A1 (en) | 2018-05-25 | 2019-11-28 | Basf Se | Plants comprising wheat g-type cytoplasmic male sterility restorer genes and uses thereof |
| WO2019234231A1 (en) | 2018-06-08 | 2019-12-12 | Basf Se | Plants comprising wheat g-type cytoplasmic male sterility restorer genes and uses thereof |
| EP3976633A1 (en) | 2019-05-29 | 2022-04-06 | Keygene N.V. | Gene for parthenogenesis |
| AU2020310877A1 (en) | 2019-07-11 | 2022-02-24 | Consejo Nacional De Investigaciones Científicas Y Técnicas | Methods for improved regeneration of transgenic plants using Growth-Regulating Factor (GRF), GRF-Interacting Factor (GIF), or chimeric GRF-GIF genes and proteins |
| US20240084317A1 (en) * | 2019-10-31 | 2024-03-14 | Phylos Bioscience, Inc. | Cannabis Ubiquitin Promoter |
| CA3160186A1 (en) | 2019-11-05 | 2021-05-14 | Pairwise Plants Services, Inc. | Compositions and methods for rna-encoded dna-replacement of alleles |
| WO2021113788A1 (en) | 2019-12-06 | 2021-06-10 | Pairwise Plants Services, Inc. | Recruitment methods and compounds, compositions and systems for recruitment |
| US20210222183A1 (en) * | 2020-01-22 | 2021-07-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Dominant crispr inverted-repeat alleles to down-regulate gene expression in heterozygous plants |
| JP2023512209A (ja) | 2020-01-28 | 2023-03-24 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | Ｔ細胞形質導入のための方法 |
| WO2021155109A1 (en) | 2020-01-30 | 2021-08-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Compositions, systems, and methods for base diversification |
| CA3165291A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Suppression of shade avoidance response in plants |
| US20230063560A1 (en) | 2020-02-04 | 2023-03-02 | Pairwise Plans Services, Inc. | Thornless and/or prickleless rubus plants |
| US20210261978A1 (en) | 2020-02-21 | 2021-08-26 | Pairwise Plants Services, Inc. | Resistance to soybean cyst nematode through gene editing |
| WO2021188526A1 (en) | 2020-03-16 | 2021-09-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Natural guide architectures and methods of making and using the same |
| US20210301282A1 (en) | 2020-03-26 | 2021-09-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| CA3172499A1 (en) | 2020-03-27 | 2021-09-30 | Mathias Schuetz | Compositions and methods for recombinant biosynthesis of cannabinoids |
| US11882808B2 (en) | 2020-03-27 | 2024-01-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for improving resistance to soybean rust |
| WO2021207148A1 (en) | 2020-04-06 | 2021-10-14 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for increasing resistance to ear rot and stem rot disease in maize |
| EP4135512A1 (en) | 2020-04-16 | 2023-02-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| CA3175683A1 (en) | 2020-04-29 | 2021-11-04 | Xueyang FENG | Compositions and methods for enhancing recombinant biosynthesis of cannabinoids |
| WO2021247477A1 (en) | 2020-06-02 | 2021-12-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| BR112022025598A2 (pt) | 2020-06-17 | 2023-01-03 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para controlar o tamanho do meristema para melhoria da safra |
| EP4172328A1 (en) | 2020-06-30 | 2023-05-03 | Pairwise Plants Services, Inc. | Compositions, systems, and methods for base diversification |
| MX2023002160A (es) | 2020-08-28 | 2023-04-25 | Pairwise Plants Services Inc | Proteinas dise?adas y metodos de uso de las mismas. |
| CA3200521A1 (en) | 2020-11-06 | 2022-05-12 | Pairwise Plants Services, Inc. | Compositions and methods for rna-encoded dna-replacement of alleles |
| US20220186231A1 (en) | 2020-12-11 | 2022-06-16 | Willow Biosciences, Inc. | Recombinant acyl activating enzyme (aae) genes for enhanced biosynthesis of cannabinoids and cannabinoid precursors |
| BR112023015909A2 (pt) | 2021-02-11 | 2023-11-21 | Monsanto Technology Llc | Métodos e composições para modificar níveis de citocinina oxidase em plantas |
| CA3211121A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-09-01 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture in plants |
| KR20240034182A (ko) | 2021-06-03 | 2024-03-13 | 마젠 애니멀 헬스 인코포레이티드 | 사이토카인 수준을 변경하고 갓 태어난 돼지에게 수동 면역을 제공하기 위한 코로나바이러스 스파이크 단백질의 경구 투여 |
| US20220403475A1 (en) | 2021-06-14 | 2022-12-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Reporter constructs, compositions comprising the same, and methods of use thereof |
| WO2022266271A1 (en) | 2021-06-17 | 2022-12-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of growth regulating factor family transcription factors in soybean |
| UY39827A (es) | 2021-06-24 | 2023-01-31 | Pairwise Plants Services Inc | Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento |
| CN117794358A (zh) | 2021-07-01 | 2024-03-29 | 成对植物服务股份有限公司 | 用于增强根系发育的方法和组合物 |
| CA3227215A1 (en) | 2021-07-30 | 2023-02-02 | Trish Choudhary | Recombinant prenyltransferase polypeptides engineered for enhanced biosynthesis of cannabinoids |
| CA3229056A1 (en) | 2021-08-12 | 2023-02-16 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| CA3229224A1 (en) | 2021-08-17 | 2023-02-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants |
| CA3227236A1 (en) | 2021-08-19 | 2023-02-23 | Trish Choudhary | Recombinant olivetolic acid cyclase polypeptides engineered for enhanced biosynthesis of cannabinoids |
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| WO2023049720A1 (en) | 2021-09-21 | 2023-03-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for reducing pod shatter in canola |
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| WO2023114750A1 (en) | 2021-12-13 | 2023-06-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Model editing systems and methods relating to the same |
| WO2023118541A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Basf Se | Regulatory nucleic acid molecules for modifying gene expression in cereal plants |
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| US20230383271A1 (en) | 2022-02-28 | 2023-11-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Engineered proteins and methods of use thereof |
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| US20230383305A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-11-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| US20230348922A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-02 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance |
| WO2023215809A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits |
| WO2024006679A1 (en) | 2022-06-27 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants |
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