JP4854853B2 - トランスフェクション薬剤 - Google Patents

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Description

【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、カチオン性脂質、ならびに高分子および他の物質の細胞内への送達のための脂質凝集体における利用を有するカチオン性脂質の組成物に関する。
【０００２】
（関連技術）
リポソームのような脂質凝集体は、高分子（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質）、および小さな化学物質（医薬品など）を細胞に導入するための、送達のための薬剤として有用であることが見出されている。特に、カチオン性脂質成分を含む脂質凝集体は、アニオン性分子の細胞への送達において、特に有効であることが示されている。部分的に、カチオン性脂質の有効性は、その多くが正味の負の電荷を有する細胞に対する増強された親和性から生じると考えられる。また、部分的に、カチオン性脂質を含む脂質凝集体上の正味の正の電荷により、凝集体がポリアニオン（例えば、核酸）に結合することが可能となる。ＤＮＡを含む脂質凝集体は標的細胞の効率的なトランスフェクションのための有効な薬剤であることが知られている。
【０００３】
種々のタイプの脂質凝集体の構造は、組成および凝集体を形成する方法に依存して変化する。このような凝集体には、リポソーム、単ラメラ（ｕｎｉｌａｍｍｅｌｌｅｒ）ベシクル、多重ラメラベシクル、ミセルなどが挙げられ、ナノメートルからマイクロメートルの範囲の特定のサイズを有する。脂質凝集体を作製する方法は、これまでに当該分野において周知である。送達のための従来のリン脂質含有リポソームの使用に対する主な欠点は、送達される物質がカプセル化されなくてならず、そしてこのリポソーム組成物は、負に荷電した細胞表面に引きつけられない、正味の負の電荷を有しているということである。カチオン性脂質化合物とリン脂質を合わせることによって、正に荷電したベシクルおよび他のタイプの脂質凝集体は、ＤＮＡ（これは負に荷電している）に結合し得、標的細胞によって取り込まれ得、そして標的細胞をトランスフェクトし得る（Ｆｅｌｇｎｅｒ，Ｐ．Ｌ．ら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７；Ｅｐｐｓｔｅｉｎ，Ｄ．ら、米国特許第４，８９７，３５５号）。
【０００４】
周知のカチオン性脂質は、塩化Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）である。このＤＯＴＭＡの構造は以下の通りである：
【０００５】
【化６６】
Figure 0004854853
ＤＯＴＭＡそれ自体、またはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）との１：１の組合せにおいて、ＤＯＴＭＡは、標準的な技術を使用してリポソームへ処方される。上記のＦｅｌｇｎｅｒらは、このようなリポソームは、核酸のいくつかのタイプの細胞への効率的な送達を提供することを立証した。ＤＯＴＭＡ：ＰＯＰＥ（１：１）処方物は、商品名ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）で市販されている。別の市販されているカチオン性脂質は、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＯＴＡＰ）であり、これは、オレオイル部分が、プロピルアミンへのエーテル結合ではなく、エステルを介して結合されていることのみがＤＯＴＭＡとは異なる。関連した群の化合物は、トリメチルアンモニウム基のメチル基の１つがヒドロキシエチル基によって置換されている点で、ＤＯＴＭＡおよびＤＯＴＡＰとは異なる。このタイプの化合物は、ホスホリパーゼＡのローゼンタールインヒビター（ＲＩ）（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ，Ａ．Ｆ．およびＧｅｙｅｒ，Ｒ．Ｐ．（１９６０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３５：２２０２−２２０６）と類似しており、このローゼンタールインヒビターは、プロピルアミンコアに結合したステアロイルエステルを有する。ＲＩのジオレオイルアナログは、脂肪酸部位のプロピルアミンコアへの結合に依存して、ＤＯＲＩエーテルおよびＤＯＲＩエステルと、一般に略記される。ヒドロキシ基が、さらなる官能基化のための部位として使用され得る。
【０００６】
ＲＩのジミリスチルオキシアナログは、ＤＭＲＩＥとして知られている。１：１（Ｍ／Ｍ）ＤＭＲＩＥ：コレステロール処方物は、商品名ＤＭＲＩＥ−Ｃ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）で市販されている。ＤＭＲＩＥの構造は、以下の通りである：
【０００７】
【化６７】
Figure 0004854853
別のクラスの化合物が、Ｂｅｈｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６９８２−６９８６（１９８９）；ＥＰＯ公開 ０ ３９４ １１１（１９９０年１０月２４日）（ここで、カルボキシスペルミンが、２つのタイプの脂質と結合体化されている））によって開示されている。５−カルボキシスペルミルグリシンジオクタデシルアミド（ＤＯＧＳ）の構造は以下の通りである：
【０００８】
【化６８】
Figure 0004854853
ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン５−カルボキシスペルミルアミド（ＤＰＰＥＳ）の構造は以下の通りである：
【０００９】
【化６９】
Figure 0004854853
ＤＯＧＳおよびＤＰＰＥＳの両方は、プラスミドをコーティングし、効率的なトランスフェクションを提供する脂質凝集体複合体を形成するために、使用されてきた。これらの化合物は、いくつかの細胞株のトランスフェクションに対して、ＤＯＴＭＡより効率的で、そして、より毒性が低いことが主張される。ＤＯＧＳは、ＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭTM（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）として市販されている。
【００１０】
カルボキシスペルミンがアミド結合を介して脂質に結合体化された別の種類の化合物がまた、記載されている（Ｇｅｂｅｙｅｈｕ，Ｇ．ら、米国特許第５，３３４，７６１号）。これらの化合物は、核酸の種々の細胞への効率的な送達のために有用であり、また他のこのような脂質を作製するための中間体である。２，３−ジ−オレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミン−カルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパン−アミニウム（ＤＯＳＰＡ）は、ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）の商品名で、ＤＯＰＥとの３：１（ｗ／ｗ）処方物として入手可能である。ＤＯＳＰＡの構造は以下の通りである：
【００１１】
【化７０】
Figure 0004854853
スペルミンヘッドグループを有する脂質化合物もまた、記載される（Ｈａｃｅｓ，Ａ．，ら、米国特許第５，６７４，９０８号）。これらの化合物は、核酸の昆虫細胞への送達のために特に有用である。テトラメチルテトラパルミチルスペルミン（ＴＭ−ＴＰＳ）のＤＯＰＥに対する１：１．５（Ｍ／Ｍ）処方物は、商品名ＣｅｌｌＦＥＣＴＩＮ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）で市販されている。ＴＭ−ＴＰＳの構造は以下に示される：
【００１２】
【化７１】
Figure 0004854853
カチオン性コレステロール誘導体（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）は合成され、ＤＯＰＥとの組合せでリポソームへ処方されてきた（Ｇａｏ．Ｘ．およびＨｕａｎｇ，Ｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７９：２８０〜２８５）。この化合物の構造は以下の通りである：
【００１３】
【化７２】
Figure 0004854853
ＤＣ−Ｃｈｏｌを用いて処方されたリポソームは、ＤＯＴＡＭ含有リポソームより効率的なトランスフェクションおよびより低い毒性を、いくつかの細胞株に提供すると言われる。
【００１４】
リポポリリシン（これは、ポリリシンのＤＯＰＥへの結合体化によって形成される）は、血清の存在下（インビボで遭遇するような条件）でのトランスフェクションに対して特に有効であることが報告されている（Ｚｈｏｕ、Ｘ．ら（１９９１）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０６５：８−１４）。
【００１５】
その分野での進歩にもかかわらず、種々の改善されたカチオン性脂質化合物に対する必要性が残っている。特に、全ての細胞型に十分に作用する、単一のカチオン性脂質は現在まで見出されていない。異なる細胞型は、膜組成が互いに異なるために、脂質凝集体の異なる組成およびタイプは、異なる細胞型に対して、標的細胞膜と接触および融合するそれらの能力または移動プロセス自体の局面のいずれかに起因して有効であることは驚くべきことではない。現在のところ、これらのプロセスは、十分には理解されておらず、従って、有効なリポソーム前駆体の設計は、大部分が経験的である。含量および移動の他に、他のファクター（例えば、意図した目的に適切な脂質凝集体を形成する能力、血清の存在下で細胞をトランスフェクトする可能性、標的細胞への毒性、送達される化合物に対するキャリアとしての安定性、およびインビボ環境において機能する能力）が重要である。さらに、脂質凝集体は、細胞に送達され得る物質の範囲を広くすることによって改善され得る。本発明のカチオン性脂質化合物は、いくつかの先の特性に関して改善された機能を有する。
【００１６】
（発明の要旨）
本発明は、一般式（Ａ）：
【００１７】
【化７３】
Figure 0004854853
に従う新規なカチオン性脂質を提供し、ここで、
ＱはＮ、ＯおよびＳからなる群から選択され；
Ｌは各Ｑと共有結合し得る任意の２価の有機基であり、これらの例は、Ｃ、ＣＨ、（ＣＨ2）lまたは｛（ＣＨ2）i−Ｙ−（ＣＨ2）j｝kであり、ここで、ＹはＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カーボネート、ホスフェート、スルフェート、スルホキシド、イミン、カルボニル、および第二級アミノ基からなる群から選択され、そしてここで、Ｙは必要に応じて−Ｘ1−Ｌ’−Ｘ2−Ｚまたは−Ｚによって置換され；
Ｒ1〜Ｒ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｄ−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、およびアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、アルキルチオ、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基の１つ以上によって、必要に応じて置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そしてここで、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6の少なくとも１つは、直鎖もしくは分枝鎖、環状の、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール基であり；そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6の任意の少なくとも１つは、必要に応じて、互いに、ＹまたはＬ（ＬがＣまたはＣＨである場合）と共有結合し、環状部位を形成し；
Ｚは、アミン、スペルミイル（ｓｐｅｒｍｉｙｌ）、カルボキシスペルミイル（ｃａｒｂｏｘｙｓｐｅｒｍｉｙｌ）、グアニジル、スペルミジニル、プトリシニル、ジアミノアルキル、ピリジル、ピペリジニル、ピロリジニル、ポリアミン、アミノ酸、ペプチド、およびタンパク質からなる群から選択され；
Ｘ1およびＸ2は、互いに独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、アルキレン、およびアリーレンからなる群から選択され；
Ｌ’は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレン、アルキレンエーテル、およびポリエーテルからなる群から選択され；
ＤはＱまたは結合であり；
Ａ1およびＡ2は、互いに独立して、ＣＨ2Ｏ、ＣＨ2Ｓ、ＣＨ2ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（ＮＨ）、Ｃ（Ｓ）、および（ＣＨ2）tからなる群から選択され；
Ｘは生理学的に受容可能なアニオンであり；
ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、ｕ、ｖ、ｗおよびｙは０または１であり、但し、ｍおよびｎの両方が０の場合、ｒ、ｓ、ｕおよびｙの少なくとも１つは０以外であり；
ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐおよびｔは０〜約１００であり；
ｑは１〜１０００の整数であり；そして
ａはアニオンの価数によって除算された正電荷の数である。
【００１８】
さらに、本発明は、以下の一般式（Ｂ）：
【００１９】
【化７４】
Figure 0004854853
に従う新規なカチオン性脂質を提供し、ここで、
Ｌは、（ＣＨ2）lまたは｛（ＣＨ2）i−Ｙ−（ＣＨ2）j｝kであり、ここで、Ｙはエーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カーボネート、および第二級アミノ基からなる群から選択され；
Ｒ1〜Ｒ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、ならびに必要に応じて１つ以上のアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり、好ましくは、約２〜１００個、好ましくは４〜７５個、より好ましくは６〜６４個、より好ましくは８〜５０個、より好ましくは８〜４０個、より好ましくは８〜３０個、より好ましくは６〜３０個、より好ましくは４〜３０個、より好ましくは２〜３０個、最も好ましくは８〜約２４個の炭素原子を有し、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの任意の１つ以上が、必要に応じて、互いに共有結合され、環状部位を形成し得；
Ｚは、アミン、スペルミイル、カルボキシスペルミイル、グアニジル、スペルミジニル、プトリシニル、ジアミノアルキル、ピリジル、ピペリジニル、ピロリジニル、ポリアミン、アミノ酸、アミノ酸誘導体、ペプチド、およびタンパク質からなる群から選択され；
Ａ1およびＡ2は、互いに独立して、ＣＨ2Ｏ、ＣＨ2Ｓ、ＣＨ2ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（ＮＨ）、Ｃ（Ｓ）、および（ＣＨ2）tからなる群から選択され；
Ｘは生理学的に受容可能なアニオン（例えば、ハロゲン化物アニオン、塩化物、臭化物およびヨウ化物、ならびにアセテート、スルフェート、トリフルオロアセテートなど）であり；
ｍ、ｎ、ｖおよびｗは０または１であり；
ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐおよびｔは、１〜約１００、より好ましくは１〜５０、より好ましくは１〜２５、より好ましくは１〜１５、より好ましくは１〜１０であり、最も好ましくは１〜約４の整数であり；
ｑは、１〜約１０００、好ましくは１〜約５００、より好ましくは１〜約２５０、より好ましくは１〜約１００、より好ましくは１〜約５０、より好ましくは１〜約２５、より好ましくは１〜約１２、最も好ましくは１〜約６の整数であり；そして
ａは、アニオンの価数によって除算された正電荷の数であり、ここで、ｍおよびｎが０である場合、ａは０である。
【００２０】
また、本発明は、以下の式（Ｃ）
【００２１】
【化７５】
Figure 0004854853
に従う新規のカチオン性脂質を提供し、ここで、
ＹはＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カルボネート、ホスフェート、スルフェート、スルホキシド、イミン、カルボニル、および第二級アミノ基からなる群から選択され、そしてここで、Ｙは必要に応じて−Ｘ1−Ｌ’−Ｘ2−Ｚまたは−Ｚによって置換され；
Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｄ−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、アルキルチオ、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基の１つ以上によって、必要に応じて置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そして、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6の少なくとも１つは、直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール基であり、最も好ましくは約８〜約２４個の炭素原子を有し、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6は、必要に応じて、互いに、またはＹと共有結合し、環状部位を形成し得；
Ｚは、アミン、スペルミイル、カルボキシスペルミイル、グアニジル、スペルミジニル、プトリシニル、ジアミノアルキル、ピリジル、ピペリジニル、ピロリジニル、ポリアミン、アミノ酸、ペプチド、およびタンパク質からなる群から選択され；
Ｘ1およびＸ2は、互いに独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、アルキレン、およびアリーレンからなる群から選択され；
Ｌ’は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレン、アルキレンエーテル、およびポリエーテルからなる群から選択され；
ＤはＱまたは結合であり；
ｍおよびｎは０または１であり；そして
ｉ、ｊ、ｋ、ｌおよびｐは０〜約１０の整数である。
【００２２】
さらに、本発明は、以下の式（Ｄ）：
【００２３】
【化７６】
Figure 0004854853
に従う化合物またはポリカチオンを提供し、ここで、
Ｌは、Ｃ、ＣＨ、（ＣＨ2）lまたは｛（ＣＨ2）i−Ｙ−（ＣＨ2）j｝kであり、ここで、ＹはＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カーボネート、ホスフェート、スルフェート、スルホキシド、イミン、カルボニルおよび第二級アミノ基からなる群から選択され、そしてここで、Ｙは必要に応じて−Ｘ1−Ｌ’−Ｘ2−Ｚまたは−Ｚによって置換され；
Ｒ1〜Ｒ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｄ−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、ならびに必要に応じて１つ以上のアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、アルキルチオ、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そしてここで、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり、好ましくは約２〜約３０個の炭素原子、より好ましくは８〜２４個の炭素原子を有し；
Ｚは、アミン、スペルミイル、カルボキシスペルミイル、グアニジル、スペルミジニル、プトリシニル、ジアミノアルキル、ピリジル、ピペリジニル、ピロリジニル、ポリアミン、アミノ酸、アミノ酸誘導体、ペプチド、およびタンパク質からなる群から選択され；
Ｘ1およびＸ2は、互いに独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、アルキレン、およびアリーレンからなる群から選択され；
Ｌ’は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレン、アルキレンエーテル、およびポリエーテルからなる群から選択され；
Ａ1およびＡ2は、互いに独立して、ＣＨ2Ｏ、ＣＨ2Ｓ、ＣＨ2ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（ＮＨ）、Ｃ（Ｓ）、および（ＣＨ2）tからなる群から選択され；
ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、ｕ、ｖ、ｗおよびｙは０または１であり、但し、ｍおよびｎの両方が０の場合、ｒ、ｓ、ｕおよびｙの少なくとも１つは０以外であり；
ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐおよびｔは、０〜約１００の整数であり；そして
ｑは１〜約１０００の整数である。
【００２４】
本発明はまた、以下の式（Ｉ）に従う化合物またはポリカチオンを提供する：
【００２５】
【化７７】
Figure 0004854853
ここで、
Ｌは、（ＣＨ2）lまたは｛（ＣＨ2）i−Ｙ−（ＣＨ2）j｝kであり、ここで、Ｙは、ＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カルボネート、および２級アミノ基からなる群から選択され；
Ｒ1〜Ｒ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルケニルまたはアリール基であり、好ましくは、約２〜約３０個の炭素原子を有し、より好ましくは、約８個〜約２４個の炭素原子を有し；
Ｚは、アミン、スペルミイル、カルボキシスペルミイル、グアニジル、スペルミジニル、プトリシニル、ジアミノアルキル、ピリジル、ピペリジニル、ピロリジニル、ポリアミン、アミノ酸、アミノ酸誘導体、ペプチド、およびタンパク質からなる群から選択され；
Ａ1およびＡ2は、互いに独立して、ＣＨ2Ｏ、ＣＨ2Ｓ、ＣＨ2ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（ＮＨ）、Ｃ（Ｓ）および（ＣＨ2）tからなる群から選択され；
ｍ、ｎ、ｖおよびｗは、０または１であり；
ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐおよびｔは、１〜約１００の整数であり；そして
ｑは、１〜約１０００の整数である。
【００２６】
本発明はまた、上記の式の範囲内に入る新規な化合物を提供する。
【００２７】
本発明の化合物は、単独で、またはリポソームもしくは他の脂質凝集体内への処方のための他の脂質凝集体形成成分（例えば、ＤＯＰＥ、ＤＯＰＣまたはコレステロール）と組み合わせにおいてのいずれかで、有用である。このような凝集体は、ポリカチオン性であり、核酸のようなアニオン性高分子と安定な複合体を形成し得る。この脂質凝集体高分子複合体は、細胞による吸収および摂取に対してポリアニオン性高分子を有用にする細胞と相互作用する。
【００２８】
本発明は、本発明の１つ以上の化合物を含む脂質凝集体を提供する。好ましくは、この脂質凝集体は、少なくとも１つの脂質凝集体形成化合物を含む。好ましくは、この脂質凝集体形成化合物は、ＤＯＰＥ、ＤＯＰＣおよびコレステロールからなる群から選択される。
【００２９】
本発明の化合物はまた、タンパク質、ペプチド、成長因子などのような種々の有用な分子および物質に結合され得るか、または混合され得るか、または組み合わせて使用され得、細胞ターゲッティング、摂取、内在化、核ターゲッティングおよび発現を向上させる。
【００３０】
本発明はまた、本発明の１つ以上の化合物またはそれらの混合物を含む脂質凝集体を含む。このような脂質凝集体は、１以上の凝集体形成成分および／またはトランスフェクションエンハンサーと組み合わせられ得る。
【００３１】
本発明の化合物もしくは組成物（例えば、上記のもの）またはそれらの混合物を採用する本発明のトランスフェクション方法は、細胞のインビトロトランスフェクションおよびインビボトランスフェクション、特に、動物細胞、ヒト細胞、昆虫細胞、植物細胞、鳥類細胞、魚類細胞、哺乳動物細胞などを含む真核生物細胞または組織のトランスフェクションに適用され得る。
【００３２】
従って、本発明は、細胞（単数または複数）内へポリアニオンを導入するための方法を提供し、ここでこの方法は、本発明に従う正に荷電した化合物からリポソームを形成すること、リポソームをポリアニオンと接触させて正に荷電したポリアニオン−リポソーム複合体を形成すること、およびこの複合体を細胞（単数または複数）でインキュベートすることを包含する。
【００３３】
本発明の方法は、有用な遺伝子産物を発現するトランスフェクトされた細胞または組織を発生させるために使用され得る。本発明の方法はまた、トランスジェニック動物の産生における１工程として使用され得る。本発明の方法は、細胞または組織への核酸の導入を必要とする任意の治療学的方法において有用である。特に、これらの方法は、ガン治療、インビボおよびエクスビボ遺伝子治療、ならびに診断学的方法において有用である。例えば、Ｆｅｌｇｎｅｒらの米国特許第５，５８９，４６６号、および１９９５年５月２５日に出願されたＪｅｓｓｅｅらの米国特許出願第０８／４５０，５５５号を参照のこと。本発明のトランスフェクション化合物または組成物は、研究目的のために行われた細胞または組織の任意のトランスフェクションにおける研究薬剤として使用され得る。本発明の方法によってトランスフェクトされ得る核酸は、天然の塩基または非天然の塩基を含む任意の供給源由来のＤＮＡおよびＲＮＡを含み、そして細胞または組織内の治療学的または別に有用であるタンパク質をコードし発現し得るもの、細胞または組織内の核酸の発現を阻害するもの、反応を触媒するもの（リボザイム）、および診断学的アッセイにおいて機能するものを含む。
【００３４】
本明細書中に与えられる化合物、組成物および方法はまた、特に、ポリアミン、ポリアミン酸、ポリペプチド、タンパク質、ビオチン、およびポリサッカリドを含む核酸を除く生物学的に活性な高分子または物質を細胞内に導入するために、本明細書中の開示の点で容易に適用され得る。例えば、治療学的薬剤、診断学的物質および研究薬剤の他の有用な物質は、本発明の方法によって細胞内に導入され得る。好ましい局面において、任意の核酸ベクターは本発明によって細胞にまたは細胞内に送達され得る。
【００３５】
従って、本発明は、生物学的に活性な物質を細胞内に導入するための方法を提供し、ここでこの方法は、本発明に従う化合物および生物学的に活性な物質のリポソームを形成すること、ならびに細胞または細胞培地でリポソームをインキュベートすることを包含する。
【００３６】
本発明はまた、本発明の化合物ならびに核酸、細胞、緩衝液、培養培地、生物学的に活性な物質、中性脂質およびトランスフェクションエンハンサー、好ましくは核酸からなる群から選択される１つ以上の追加の成分を含む組成物に関する。
【００３７】
本発明はまた、本発明の１つ以上の化合物もしくは組成物またはそれらの混合物を含むトランスフェクションキットを含む。特に、本発明は、本発明の１つ以上の化合物および、細胞（単数および複数）、細胞培養培地、核酸、トランスフェクションエンハンサーからなる群から選択される少なくとも１つの追加の成分ならびに細胞（単数または複数）をトランスフェクトするための説明書を含むキットを提供する。
【００３８】
本発明はまた、中間体ならびに本発明の化合物または組成物を生成するためのこのような中間体を使用するための方法に関する。本発明はまた、本発明の合成方法において使用される物質（中間体、化合物、脂質など）の相互作用によって得られる組成物、化合物または成分に関する。
【００３９】
本発明の他の好ましい実施形態は、本発明の以下の図面および記載の点で、当業者にとって明らかである。
【００４０】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本発明は、細胞内への高分子および他の化合物の送達のための脂質凝集体における有用性を有するカチオン性脂質およびカチオン性脂質の組成物に関する。この化合物は、単独で、あるいはインビトロまたはインビボのいずれかで標的細胞への化合物のトランスフェクションまたは送達に対して適切であるリポソームおよび他の脂質凝集体を調製するために他の化合物と組み合わせて使用され得る。
【００４１】
本発明の化合物は、好ましくはポリカチオン性であり、好ましくは従って種々のアニオン性高分子、特に核酸のようなポリアニオンと高度に安定な複合体を形成する。これらの化合物は、水中に分散される際に、それらのカチオン性部分を介してポリアニオンと強く会合する脂質凝集体を形成するという特性を有する。アニオン性化合物に対して過剰のカチオン性電荷を使用することによって、ポリアニオン−脂質複合体が細胞膜上に吸着され得、それによって細胞による所望の化合物の摂取を容易にする。
【００４２】
本発明はまた、本発明の化合物および組成物を調製するための中間体に関する。
【００４３】
より具体的には、本発明は、高スループット適用に対して有用にする発現研究（ＣＨＯ−Ｋ１、ＣＯＳ−７、およびＨＥＫ２９３）において使用される３つの最も通常の細胞タイプの市販される製品より大きなトランスフェクション効率を有し；そして追加の薬剤（例えば、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから利用可能なＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ ＰＬＵＳ Ｒｅａｇｅｎｔ）が必要とされないという事実によって規定されるプロトコルを使用するための単純さを有し、血清の除去、従って培地の交換が必要とされず、そしてＤＮＡ／脂質複合体がアッセイ前に細胞から除去される必要がない、トランスフェクションのためのカチオン性脂質に関する。
【００４４】
本発明に従う化合物は、以下の式（Ａ）を有する：
【００４５】
【化７８】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑは、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択され；
Ｌは、Ｃ、ＣＨ、（ＣＨ2）l、または｛（ＣＨ2）i−Ｙ−（ＣＨ2）j｝kのような各Ｑを共有結合し得る任意の二価の有機基であり、ここで、Ｙは、ＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カルボネート、ホスフェート、スルフェート、スルホキシド、イミン、カルボニル、および２級アミノ基からなる群から選択され、そしてここで、Ｙは、−Ｘ1−Ｌ’−Ｘ2−Ｚまたは−Ｚによって必要に応じて置換されており；
Ｒ1〜Ｒ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｄ−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、アルキルチオ、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そしてここで、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；そしてＲ1とＲ4が、またはＲ3とＲ6が、Ｙによって、またはＬ（ＬがＣまたはＣＨであり、環式部分を形成する場合）によって、必要に応じて互いに共有結合され得；
Ｚは、アミン、スペルミイル、カルボキシスペルミイル、グアニジル、スペルミジニル、プトリシニル、ジアミノアルキル、ピリジル、ピペリジニル、ピロリジニル、ポリアミン、アミノ酸、ペプチド、およびタンパク質からなる群から選択され；
Ｘ1およびＸ2は、互いに独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、アルキレン、およびアリーレンからなる群から選択され；
Ｌ’は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレン、アルキレンエーテル、およびポリエーテルからなる群から選択され；
Ｄは、Ｑまたは結合であり；
Ａ1およびＡ2は、互いに独立して、ＣＨ2Ｏ、ＣＨ2Ｓ、ＣＨ2ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（ＮＨ）、Ｃ（Ｓ）および（ＣＨ2）tからなる群から選択され；
Ｘは、生理学的に受容可能なアニオンであり；
ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、ｕ、ｖ、ｗおよびｙは、０または１であり、但し、ｍおよびｎの両方が０である場合、ｒ、ｓ、ｕおよびｙのうちの少なくとも１つが、０ではなく；
ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐおよびｔは、０〜約１００の整数であり；
ｑは、１〜約１０００の整数であり；そして
ａは、アニオンの価数によって除算された正電荷の数である。
【００４６】
好ましくは、必要に応じて１つ以上のアルコール基によって置換されるアルキルエーテルは、炭水化物を含む。好ましくは、炭水化物は、ガラクトース、フルクトース、グルコース、マルトース、スクロース、セロビオース、ラクトース、マンノース、グルコピラノース、マンノピラノースおよびガラクトピラノースからなる群から選択される。
【００４７】
好ましくは、ｉ、ｊ、ｋ、ｌおよびｔは、１〜１００、より好ましくは１〜５０、より好ましくは１〜２５、より好ましくは１〜１５、より好ましくは１〜１０および最も好ましくは１〜約４から独立して選択される整数である。好ましくは、ｌ、ｂおよびｃは、１〜約４の整数であり、ｉおよびｊは約２〜約３の整数であり、そしてｋは１〜約３の整数である。
【００４８】
好ましくは、ｑは１〜約５００、より好ましくは１〜約２５０、より好ましくは１〜約１００、より好ましくは１〜約５０、より好ましくは１〜約２５、より好ましくは１〜約１２、最も好ましくは１〜約６の整数である。
【００４９】
好ましくは、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6の少なくとも１つは、約２〜１００個、好ましくは４〜７５個、より好ましくは６〜６４個、より好ましくは８〜５０個、より好ましくは８〜４０個、より好ましくは８〜３０個、より好ましくは６〜３０個、より好ましくは４〜３０個、および最も好ましくは８〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基である。
【００５０】
本発明の全ての局面において、同じかまたは異なり得、好ましくは同じである最も適切なＲ1およびＲ4基は、脂肪酸または脂肪アシルクロリドのようなそれらの活性化された誘導体から誘導されるＣ6-30炭化水素基（ｈｙｄｒａｃａｒｂｏｎ ｒａｄｉｃａｌ）である。従って、代表的なＲ1およびＲ4基は、Ｃ6-30アルキルまたはアルケニル基である。
【００５１】
好ましくは、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されるアルキルからなる群から選択され、そして、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、約８〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基である。
【００５２】
好ましくは、ＱはＮである。
【００５３】
好ましくは、ＹはＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される。
【００５４】
上記の式（Ａ）の範囲内にある有用な化合物は、以下の式（Ａ１）〜（Ａ１０）を有する化合物を含む：
【００５５】
【化７９】
Figure 0004854853
ここで、
ＱおよびＬが、上記に定義される通りであり；
Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6が、互いに独立して、ＨおよびＣ1−Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｒ、ｓ、ｕおよびｙが、０または１であり；そして
Ｒ7およびＲ8は、独立して、Ｈまたは炭水化物である；
【００５６】
【化８０】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑが、上記に定義される通りであり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4およびＲ5が、互いに独立して、ＨおよびＣ1−Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
Ｚは、スペルミイル（ｓｐｅｒｍｉｙｌ）、スペルミジイル（ｓｐｅｒｍｉｄｉｙｌ）、アミノ酸、ペプチジル、ジアミノアルキル、およびポリアミンからなる群から選択され；
ｍ、ｎ、ｒおよびｕは、０または１であり；そして
ｌ、ｂおよびｃが、１〜約４から独立して選択される整数である；
【００５７】
【化８１】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑ、Ｒ1、Ｒ4、ｍ、ｎ、ｒおよびｕが、上記に定義される通りであり；
Ｒ2およびＲ5が、互いに独立して、ＨおよびＣ1−Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
Ｚが、スペルミイル、スペルミジイル、アミノ酸、ペプチジル、ジアミノアルキル、およびポリアミンからなる群から選択され；
Ｒ7およびＲ8が、独立して、Ｈまたは炭化水素であり；そして
ｌが１〜約４の整数である；
【００５８】
【化８２】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑは、上記に定義される通りであり、好ましくは、Ｎであり；
Ｒ1およびＲ4のうちの少なくとも１つが、約８〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨおよびＣ1−Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
Ｚは、スペルミイル、スペルミジイル、アミノ酸、ペプチジル、ジアミノアルキル、およびポリアミンからなる群から選択され；
Ｒ7およびＲ8が、独立して、Ｈまたは炭化水素であり、好ましくはＨであり；
ｍおよびｎは上記に定義される通りであり；そして
ｌが１〜約４の整数である；
【００５９】
【化８３】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑ、Ｒ1、Ｒ4、ｒ、ｕ，ｍおよびｎは、上記に定義される通りであり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、Ｈ、およびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；そして
ｋは、１個〜約３個の整数である；
【００６０】
【化８４】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑ、Ｒ1、Ｒ4、ｒ、ｕ，ｍおよびｎは、上記に定義される通りであり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、Ｈ、およびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；
ｋは、１個〜約３個の整数であり；
Ｌ1およびＬ2は、互いに独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり；そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される；
【００６１】
【化８５】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑ、Ｒ1、Ｒ4、ｒ、ｕ，ｍおよびｎは、上記に定義される通りであり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、Ｈ、およびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；
ｋは、１個〜約３個の整数であり；
Ｌ1およびＬ2は、互いに独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり：そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される；
【００６２】
【化８６】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑ、Ｒ1、Ｒ4、ｒ、ｕ，ｍおよびｎは、上記に定義される通りであり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、Ｈ、およびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；
ｋは、１個〜約３個の整数であり；
Ｌ1およびＬ2は、互いに独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり；そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される；
【００６３】
【化８７】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑ、Ｒ1、Ｒ2、ｒ、ｕ，ｍおよびｎは、上記に定義される通りであり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨおよびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；
ｋは、１個〜約３個の整数であり；
Ｌ1およびＬ2は、互いに独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり：そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される；ならびに
【００６４】
【化８８】
Figure 0004854853
ここで、
Ｑ、Ｒ1、Ｒ4、ｒ、ｕ、ｍ、およびｎは、上記に定義される通りであり、
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨおよびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに必要に応じて１つ以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で置換されるアルキルからなる群から選択され；
ｉおよびｊは、約２〜約３の整数であり；
ｋは、１〜約３の整数であり；
Ｌ1およびＬ2は、互いに独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり；そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される。
【００６５】
また、本発明の化合物は、式（Ｂ）を有する：
【００６６】
【化８９】
Figure 0004854853
Ｌは、（ＣＨ2）l、または｛（ＣＨ2）i−Ｙ−（ＣＨ2）j｝kであり、ここでＹは、ＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カーボネート、および第二級アミノ基からなる群から選択され；
Ｒ1〜Ｒ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、および必要に応じて１つ以上のアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6の少なくとも１つが、直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のいずれか１つ以上が必要に応じて、互いに共有結合して環式部分を形成し得；
Ｚは、アミン、スペルミイル、カルボキシスペルミイル、グアニジル、スペルミジニル、プトリシニル、ジアミノアルキル、ピリジル、ピペリジニル、ピロリジニル、ポリアミン、アミノ酸、ペプチド、およびタンパク質からなる群から選択され；
Ａ1およびＡ2は、互いに独立して、ＣＨ2Ｏ、ＣＨ2Ｓ、ＣＨ2ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（ＮＨ）、Ｃ（Ｓ）および（ＣＨ2）tからなる群から選択され；
Ｘは、生理学的に受容可能なアニオンであり；
ｍ、ｎ、ｖおよびｗは、０または１であり；
ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐおよびｔは、１〜約１００の整数であり；
ｑは、１〜約１０００の整数であり；そして
ａは、上記アニオンの価数によって除算された正電荷の数であり、ここで、ｍおよびｎが０である場合、ａは０である。
【００６７】
好ましくは、Ｒ1〜Ｒ6、ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐ、ｔ、ｑ、ｂおよびｃは、式（Ａ）に関して定義される通りである。
【００６８】
好ましくは、Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される。
【００６９】
式（Ｂ）の範囲内にある有用な化合物は、以下の式を有する化合物を包含する：
【００７０】
【化９０】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6が、互いに独立して、ＨおよびＣ1−Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、約８〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；そして
ｌ、ｂおよびｃが、１〜約４から独立して選択される整数である；
【００７１】
【化９１】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6が、互いに独立して、ＨおよびＣ1−Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、約８〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；
Ｒ7およびＲ8は、独立して、Ｈまたは炭水化物であり；そして
ｌが、１〜約４の整数である；
【００７２】
【化９２】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4およびＲ5が、互いに独立して、ＨおよびＣ1−Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびにアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され、そしてＲ1、Ｒ2、Ｒ4およびＲ5のうち少なくとも１つが、約８〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；
Ｚが、スペルミイル、スペルミジイル、アミノ酸、ペプチジル、ジアミノアルキル、およびポリアミンからなる群から選択され；
ｍおよびｎは、０または１であり；そして
ｌ、ｂおよびｃが、１〜約４から独立して選択される整数である；
【００７３】
【化９３】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1およびＲ4のうちの少なくとも１つが、約８〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；そして
ｌ、ｂおよびｃが、独立して、１〜約４から選択される整数である；
【００７４】
【化９４】
Figure 0004854853
ここで：
Ｒ1およびＲ4のうちの少なくとも１つが、約８〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；Ｒ7およびＲ8が、独立して、水素または炭化水素であり、好ましくは水素であり；そして
ｌは、独立して、１〜約４の整数である；
【００７５】
【化９５】
Figure 0004854853
ここで
Ｚは、上記に定義される通りであり；
Ｒ1およびＲ4の少なくとも１個は、約８個〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール基であり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨおよびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
Ｒ7およびＲ8は、独立して、Ｈまたは炭水化物であり；
ｍおよびｎは、０または１であり；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；そして
ｋは、１個〜約３個の整数である；
【００７６】
【化９６】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1およびＲ4の少なくとも１個は、約８個〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール基であり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨおよびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｍおよびｎは、０または１であり；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；そして
ｋは、１個〜約３個の整数である；
【００７７】
【化９７】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1およびＲ4の少なくとも１個は、約８個〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール基であり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨおよびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｍおよびｎは、０または１であり；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；そして
ｋは、１個〜約３個の整数である；
【００７８】
【化９８】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1およびＲ4の少なくとも１個は、約８個〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール基であり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨおよびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｍおよびｎは、０または１であり；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；
ｋは、１個〜約３個の整数であり；そして
Ｌ1およびＬ2は、互いに独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり；そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される；
【００７９】
【化９９】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1およびＲ4の少なくとも１個は、約８個〜約２４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール基であり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨおよびＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、ならびに１個以上のアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基で必要に応じて置換されているアルキルからなる群から選択され；
ｍおよびｎは、０または１であり；
ｉおよびｊは、約２個〜約３個の整数であり；
ｋは、１個〜約３個の整数であり；そして
Ｌ1およびＬ2は、互いに独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり；そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される；
【００８０】
【化１００】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1およびＲ4のうちの少なくとも１つが、約８個〜約２４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨならびにＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、およびアルキル（必要に応じて、アルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基の１つ以上によって置換される）からなる群から選択され；
ｍおよびｎは、０または１であり；
ｉおよびｊは、約２〜約３の整数であり；
ｋは、１〜約３の整数であり；
Ｌ1およびＬ2は、互いから独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり；そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択され；
【００８１】
【化１０１】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1およびＲ4のうちの少なくとも１つが、約８個〜約２４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨならびにＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、およびアルキル（必要に応じて、アルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基の１つ以上によって置換される）からなる群から選択され；
ｍおよびｎは、０または１であり；
ｉおよびｊは、約２〜約３の整数であり；
ｋは、１〜約３の整数であり；
Ｌ1およびＬ2は、互いから独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり；そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択され；そして
【００８２】
【化１０２】
Figure 0004854853
ここで、
Ｒ1およびＲ4のうちの少なくとも１つが、約８個〜約２４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；
Ｒ2およびＲ5は、互いに独立して、ＨならびにＣ1〜Ｃ8アルキル、アルケニル、アリール、およびアルキル（必要に応じて、アルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基の１つ以上によって置換される）からなる群から選択され；
ｍおよびｎは、０または１であり；
ｉおよびｊは、約２〜約３の整数であり；
ｋは、１〜約３の整数であり；
Ｌ1およびＬ2は、互いから独立して、アルキレンまたはアルキレンエーテルであり；そして
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される。
【００８３】
式（Ｂ１）〜（Ｂ１３）のそれぞれにおいて、好ましくは、Ｒ1およびＲ4は、それぞれ、Ｃ6-30アルキルまたはアルケニル、より好ましくは、Ｃ8-24アルキルまたはアルケニルであり、そしてＲ2およびＲ5またはＲ3およびＲ6は、それぞれ水素またはＣ1-8アルキルである。
【００８４】
本発明の範囲の特定の化合物は、以下の例を含む。式中のＲ7およびＲ8は独立して、Ｈまたは炭水化物であり、好ましくはＨである。
【００８５】
【化１０３】
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
Figure 0004854853
さらに、本発明に従う化合物は、以下の式（Ｃ）を有する：
【００８６】
【化１０４】
Figure 0004854853
ここで、
Ｙは、ＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カルボネート、ホスフェート、スルフェート、スルホキシド、イミン、カルボニル、および２級アミノ基からなる群から選択され、そしてここで、Ｙは、−Ｘ1−Ｌ’−Ｘ2−Ｚまたは−Ｚによって必要に応じて置換され；
Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｄ−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、およびアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、アルキルチオ、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そして、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6が、互いにまたはＹと、必要に応じて共有結合され得て、環式部分を形成し得；
Ｚは、アミン、スペルミイル、カルボキシスペルミイル、グアニジル、スペルミジニル、プトリシニル、ジアミノアルキル、ピリジル、ピペリジニル、ピロリジニル、ポリアミン、アミノ酸、ペプチド、およびタンパク質からなる群から選択され；
Ｘ1およびＸ2は、互いに独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、アルキレン、およびアリーレンからなる群から選択され；
Ｌ’は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレン、アルキレンエーテル、およびポリエーテルからなる群から選択され；
Ｄは、Ｑまたは結合であり；
ｍおよびｎは、０または１であり；そして
ｉ、ｊ、ｋ、ｌおよびｐは、独立して１〜約１０から選択される整数である。
【００８７】
好ましくは、Ｙは、ＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カルボネート、および２級アミノ基からなる群から選択される。
【００８８】
好ましくは、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、およびアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そして、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり、そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6が、互いに必要と応じて共有結合され得て、環式部分を形成し得る。
【００８９】
好ましくは、Ｒ1およびＲ4のうちの少なくとも１つが、約２個〜１００個、好ましくは４個〜７５個、より好ましくは、６個〜６４個、より好ましくは、８個〜５０個、より好ましくは、８個〜４０個、より好ましくは、８個〜３０個、より好ましくは６個〜３０個、より好ましくは４個〜３０個、そして最も好ましくは８個〜約２４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基である。
【００９０】
好ましくは、Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択される。
【００９１】
本発明の化合物およびポリカチオンは、以下の式（Ｄ）を有する：
【００９２】
【化１０５】
Figure 0004854853
ここで、
Ｌは、Ｃ、ＣＨ、（ＣＨ2）l、または｛（ＣＨ2）i−Ｙ−（ＣＨ2）j｝kであり、ここで、Ｙは、ＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カルボネート、ホスフェート、スルフェート、スルホキシド、イミン、カルボニル、および２級アミノ基からなる群から選択され、そしてここで、Ｙは、−Ｘ1−Ｌ’−Ｘ2−Ｚまたは−Ｚによって必要に応じて置換され；
Ｒ1〜Ｒ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｄ−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、およびアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、アルキルチオ、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そしてここで、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；
Ｚは、アミン、スペルミイル、カルボキシスペルミイル、グアニジル、スペルミジニル、プトリシニル、ジアミノアルキル、ピリジル、ピペリジニル、ピロリジニル、ポリアミン、アミノ酸、アミノ酸誘導体、ペプチド、およびタンパク質からなる群から選択され；
Ｘ1およびＸ2は、互いに独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、アルキレン、およびアリーレンからなる群から選択され；
Ｌ’は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレン、アルキレンエーテル、およびポリエーテルからなる群から選択され；
Ａ1およびＡ2は、互いに独立して、ＣＨ2Ｏ、ＣＨ2Ｓ、ＣＨ2ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（ＮＨ）、Ｃ（Ｓ）および（ＣＨ2）tからなる群から選択され；
ｍ、ｎ、ｒ、ｓ、ｕ、ｖ、ｗおよびｙは、０または１であり、但し、ｍおよびｎの両方が０である場合、ｒ、ｓ、ｕおよびｙのうちの少なくとも１つが、０ではなく；
ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐおよびｔは、０〜約１００の整数であり；
ｑは、１〜約１０００の整数である。
【００９３】
また、本発明の化合物およびポリカチオンは、以下の式（Ｅ）を有する：
【００９４】
【化１０６】
Figure 0004854853
ここで、
Ｌは、（ＣＨ2）lまたは｛（ＣＨ2）i−Ｙ−（ＣＨ2）j｝kであり、ここで、Ｙは、ＣＨ2、エーテル、ポリエーテル、アミド、ポリアミド、エステル、スルフィド、ウレア、チオウレア、グアニジル、カルバモイル、カルボネート、および２級アミノ基からなる群から選択され；
Ｒ1〜Ｒ6は、互いに独立して、Ｈ、−（ＣＨ2）p−Ｚ、アルキル、アルケニル、アリール、およびアルコール、アミノアルコール、アミン、アミド、エーテル、ポリエーテル、ポリアミド、エステル、メルカプタン、ウレア、チオウレア、グアニジル、またはカルバモイル基のうちの１つ以上によって必要に応じて置換されるアルキルまたはアルキルエーテルからなる群から選択され、そして、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4およびＲ6のうちの少なくとも１つが、直鎖もしくは分枝鎖、環式の、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基であり；Ｚ、Ａ1、Ａ2、ｍ、ｎ、ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐ、ｔおよびｑが上記のように定義される。
【００９５】
上記式（Ｄ）および（Ｅ）において、Ｒ1〜Ｒ6、Ｙ、ｉ、ｊ、ｋ、ｌ、ｐ、ｔおよびｑは、好ましくは、式（Ａ）に関して定義される通りである。
【００９６】
ＱがＯまたはＳである場合、置換基の数は、その価数に従うべきであることは，当業者に明らかである。
【００９７】
本発明の特定の化合物は、送達方法およびトランスフェクション方法のために使用するための生理学的媒体に、不充分な溶解性であり得る。当業者は、水性媒体におけるこのような化合物の溶解性を高めるための、当該分野で利用可能な種々の技術が存在することを理解する。このような方法は、本明細書中に記載される化合物に対して過度の実験なしに容易に適用可能である。
【００９８】
（定義）
有用なアリール基は、Ｃ6-100アリール、好ましくはＣ6-75アリール、より好ましくはＣ6-64アリール、より好ましくはＣ6-50アリール、より好ましくはＣ6-40アリール、より好ましくはＣ6-30アリール、最も好ましくはＣ6-24アリールである。典型的なＣ6-100アリール基には、フェニル、ナフチル、フェナントリル、アントラシル、インデニル、アズレニル、ビフェニル、ビフェニレニル、フルオレニル、ピレニル、アセアントレニル、コラントレニル、アセフェナントレニル、ビオランテレニル（ｖｉｏｌａｎｔｈｅｒｅｎｙｌ）、ヘキサフェニル、ヘキサアセニル（ｈｅｘａｃｅｎｙｌ）、トリナフチル、およびピランチル（ｐｙｒａｎｔｈｙｌ）基が挙げられる。
【００９９】
有用なアルキル基は、直鎖または分枝鎖のＣ2-100アルキル基、好ましくはＣ4-75アルキル、より好ましくはＣ6-64アルキル、より好ましくはＣ8-50アルキル、より好ましくはＣ8-40アルキル、より好ましくはＣ8-30アルキル、より好ましくはＣ6-30アルキル、より好ましくはＣ4-30アルキル、最も好ましくはＣ8-24アルキルである。典型的にはＣ2-100アルキル基には、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ．−ブチル、ｔｅｒｔ．−ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、エイコシル、ドコシル、テトラコシル、ヘキサコシル、オクタコシル、およびトリアコンチル基が挙げられる。また、本発明の化合物の任意のベンゼン環の２つの隣接する位置上で置換されるトリメチレン基も考慮される。
【０１００】
有用なアルケニル基は、直鎖または分枝鎖のＣ2-100アルケニル、好ましくはＣ4-75アルケニル、より好ましくはＣ6-64アルケニル、より好ましくはＣ8-50アルケニル、より好ましくはＣ8-40アルケニル、より好ましくはＣ8-30アルケニル、より好ましくはＣ6-30アルケニル、より好ましくはＣ4-30アルケニル、最も好ましくはＣ8-24アルケニルである。典型的にはＣ2-100アルケニル基には、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、ｓｅｃ．−ブテニル、ヘキセニル、オクテニル、デセニル、ドデセニル（特に９−ドデセニル）、テトラデセニル（特に９−テトラデセニル）、ヘキサデセニル（特に９−ヘキサデセニル）、オクタデセニル（特に９−オクタデセニル）、エイコセニル、ドコセニル、テトラコセニル、ヘキサコセニル、オクタコセニル、およびトリアコンテニルが挙げられる。
【０１０１】
有用なアルキニル基は、直鎖または分枝鎖のＣ2-100アルキニル、好ましくはＣ4-75アルキニル、より好ましくはＣ6-64アルキニル、より好ましくはＣ8-50アルキニル、より好ましくはＣ8-40アルキニル、より好ましくはＣ8-30アルキニル、より好ましくはＣ6-30アルキニル、より好ましくはＣ4-30アルキニル、最も好ましくはＣ8-24アルキニルである。典型的にはＣ2-100アルキニル基には、エチニル、プロピニル、ブチニル、−ブチニル、ヘキシニル、オクチニル、デシニル、ドデシニル、テトラデシニル、ヘキサデシニル、オクタデシニル、エイコシニル、ドコシニル、テトラコシニル、ヘキサコシニル、オクタコシニル、およびトリアコンチニル基が挙げられる。
【０１０２】
典型的なアルキルエーテル基には、エーテル基を有する上記Ｃ2-100アルキル基のいずれかを含む。
【０１０３】
エーテル基は、−Ｏ−である。
【０１０４】
典型的なポリエーテル基は、−（ＣＨＲ14−ＣＨ2−Ｏ）t−を含み、ここで、Ｒ14は、ＨまたはＣ1-4アルキル基であり、そしてｔは、上のように定義された整数であり、好ましくはｔは２〜５である。
【０１０５】
本発明の目的のために、アミド基は、官能基として−ＮＨＣ（Ｏ）−を有する有機ラジカルである。典型的なアミド基には、アルキルアミド、アルケニルアミド、アルキニルアミド、およびアリールアミドが挙げられ、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、およびアリールは、上に定義した通りである。
【０１０６】
典型的なポリアミド基は、上に定義される２種以上のアミド基を有する有機ラジカルを含む。
【０１０７】
典型的には、エステル基は、官能基として−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−を有する有機ラジカルである。典型的なエステル基は、Ｒ14−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ15を含み、ここで、Ｒ14およびＲ15は、上に定義するようなアルキレン、アルケニレン、アルキニレンおよびアリーレン基である。
【０１０８】
典型的には、ウレア基は、官能基として−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−を有する有機ラジカルである。典型的なウレア基は、Ｒ14ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ14、Ｒ14ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ15、Ｒ14Ｒ15Ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ14Ｒ15を含み、ここで、Ｒ14およびＲ15は、上に定義したようなアルキレン、アルケニレン、アルキニレンおよびアリーレン基である。
【０１０９】
典型的には、チオウレア基は、上に定義されるウレア基を有する有機ラジカルであり、ここで、ウレア基の酸素が硫黄によって置換される。
【０１１０】
典型的には、グアニジル基は、官能基として−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ−を有する有機ラジカルである。典型的なグアニジル基は、Ｒ14ＮＨ−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨＲ14、Ｒ14ＮＨ−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨＲ15、およびＲ14Ｒ15Ｎ−Ｃ（ＮＨ）−ＮＲ14Ｒ15を含み、ここで、Ｒ14およびＲ15は、上に定義したようなアルキレン、アルケニレン、アルキニレンおよびアリーレン基である。
【０１１１】
カルバモイル基は、−ＮＨ−ＣＯ）−である。
【０１１２】
典型的には、カルボネート基は、ＣＯ3 2-ラジカル（すなわち−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ）を含む有機ラジカルを含む。
【０１１３】
ホスフェート基は、ＰＯ4 3-ラジカルである。
【０１１４】
スルフェート基は、ＳＯ4 2-ラジカルである。
【０１１５】
スルホキシド基は、−Ｓ（Ｏ）−である。
【０１１６】
イミン基は、−Ｃ（Ｎ）−である。
【０１１７】
カルボニル基は、−Ｃ（Ｏ）−である。
【０１１８】
第２級アミノ基は、−ＮＨ−である。
【０１１９】
典型的には、アミノアルコール基は、上に定義される第２級アミノ基とヒドロキシル基の両方を有する有機ラジカルである。典型的なアミノアルコールは、アミノエタノール、アミノプロパノールおよびアミノブタノールを含む。
【０１２０】
定義「Ｄは結合である」は、ＤがＱでない場合、（ＣＨ2）pとＺとの間に単結合が存在することを意味する。
【０１２１】
生物学的に活性な物質は、インビトロおよび／またはインビボにおいて生物学的効果を及ぼす任意の分子または混合物または分子の複合体を示し、これには、医薬品、薬物、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、ホルモン、ビタミン、ステロイド、ポリアニオン、ヌクレオシド、ヌクレオチド、核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）、ヌクレオチド、ポリヌクレオチドなどが挙げられる。
【０１２２】
カチオン性脂質は、トランスフェクションに使用し得る任意のカチオン性脂質を示し、これには、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＴＭＡ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＧＳおよびＴＭ−ＴＰＳが挙げられるが，これらに限定されない。
【０１２３】
細胞は、任意の型のかつ任意の供給源由来の真核細胞を示す。真核細胞の型には、一次細胞（ｐｒｉｍａｒｙ ｃｅｌｌ）、腫瘍細胞または不朽化細胞株由来の、上皮細胞、線維芽細胞、ニューロン細胞、造血細胞が挙げられる。このような細胞の供給源には、ヒト、イヌ、マウス、ハムスター、ネコ、ウシ、ブタ、サル（ｍｏｎｋｅｙ、ａｐｅ）、ヒツジ、魚、昆虫、真菌のような任意の動物、ならびに作物用植物（ｃｒｏｐ ｐｌａｎｔ）、装飾用植物および木を含む任意の植物が挙げられる。
【０１２４】
所望の化合物が標的細胞の内側に、あるいは標的細胞膜の内部にまたはその上に最終的に配置されるように、標的細胞へと所望の化合物を移動（ｔｒａｎｓｆｅｒ）させるプロセスを示すために、送達（ｄｅｌｉｖｅｒｙ）が使用される。本発明の化合物の多くの用途において、所望の化合物は標的細胞に容易に取り込まれず、そして脂質凝集体を介した送達は、所望の化合物を細胞内に入れるための手段である。特定の用途において、特にインビボ条件において、特定の標的細胞型への送達が好ましく、そして本発明の化合物によって促進され得る。
【０１２５】
薬物とは、ヒトまたは動物の疾患の予防、診断、緩和、処置、もしくは治癒に使用される、食物以外の任意の治療剤または予防剤を言う。
【０１２６】
キットとは、本発明の化合物を１つ以上、またはそれらの混合物を含むトランスフェクションキットもしくはタンパク質発現キットを言う。このようなキットは、運搬手段を含み得、この運搬手段は、１つ以上の容器手段（例えば、バイアル、試験管など）を緊密に封じ込め（ｃｏｎｆｉｎｅｍｅｎｔ）て受容するように区画化されている。このような容器手段の各々は、トランスフェクションを実施するに必要な成分またはこれらの成分の混合物を含む。このようなキットは、核酸（好ましくは、１つ以上のベクター）、細胞、１つ以上の本発明の化合物、脂質凝集体形成化合物、トランスフェクションエンハンサー、生物学的に活性な基質などから選択される１つ以上の成分を含み得る。
【０１２７】
脂質凝集体とは、全ての型（ユニラメラ（ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ）およびマルチラメラ（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌｅｒ）の両方）のリポソーム、ならびにカチオン性脂質またはリン脂質およびステロイドなどの両親媒性の脂質と混合された脂質のミセルおよびよりアモルファスな凝集体を含む一般的な用語である。
【０１２８】
脂質凝集体形成化合物（Ｌｉｐｉｄ Ａｇｒｅｇａｔｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）とは、天然の化合物または脂質（例えば、ＤＯＰＥ、ＤＯＰＣおよびコレステロールなど）を言う。
【０１２９】
標的細胞とは、所望の化合物に対するキャリアとしての脂質凝集体を使用して、所望の化合物が送達される任意の細胞を言う。
【０１３０】
本明細書中で使用されるトランスフェクションは、核酸、タンパク質、または他の巨大分子の標的細胞への送達を意味し、その結果、核酸、タンパク質または他の巨大分子がその細胞内で発現されるか、またはその中で生物学的機能を有することを意味する。用語「発現可能な核酸」は、分子量に関わらずにＤＮＡおよびＲＮＡの両方を含み、そして用語「発現」は、限定しないが、一時的な発現および安定な発現の両方を含む、その細胞内で核酸が機能的に存在する任意の出現を意味する。機能的な局面には、オリゴヌクレオチドまたはタンパク質の送達による発現の阻害を含む。
【０１３１】
トランスフェクションエンハンサーは、一般に、例えば、細胞ターゲッティング、取り込み、インターナリゼーション、核ターゲッティングおよび発現を高めるタンパク質、ペプチド、成長因子などの分子および物質を言う。このような分子および物質としては、細胞表面を標的とするインスリン、トランスフェリン、フィブロネクチンなどのリガンド；細胞性インテグリンレセプターを標的とするペプチド；および他の化合物（例えば、Ｐｌｕｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄから入手可能）が挙げられる。トランスフェクションエンハンサーの例は、米国特許第５，７３６，３９２号および米国出願番号０９／０３９，７８０（１９９８年３月１６日出願）に見出され得る。
【０１３２】
本発明は、さらに、以下の実施例によって明らかにされる。以下の実施例は、本発明の単なる例示であることが意図される。ポリカチオン性脂質を以下に記載される一般的な反応スキームに従って調製した。
【０１３３】
（実施例１）
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレオイル−ジアミノブタン（Ｉ）の合成）
１，４−ジアミノブタン（４．２８ｇ、４８．６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２０．４ｍｌ、１４６ｍｍｏｌ）の乾燥メチレンクロリド（１０ｍＬ）溶液を、オレオイルクロリド（３０．０ｇ、９９．７ｍｍｏｌ）の無水メチレンクロリド（３００ｍｌ）溶液に、０℃の氷浴中でゆっくりと添加した。反応混合物をメカニカルスターラーで激しく攪拌した。添加が完了した後、氷浴を除去し、そして混合物を室温で２．５日間攪拌した。ＴＬＣ分析によって、反応が完全に進行し、そして生成物が沈殿したことを確認した。過剰のオレノイルクロリドをろ過によって除去した。沈殿を５０ｍｌのメチレンクロリドで２回洗浄した。母液を濃縮し、そして更なる生成物を沈殿させた。この沈殿物をろ過し、そして以前の沈殿と合わせた。この得られた固体を４時間、減圧乾燥した。全体で２７．０ｇの所望の生成物の白色固体、Ｎ1，Ｎ4−ジオレオイル−ジアミノブタンを得た。
【０１３４】
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−ジアミノブタン（ＩＩ）の合成）
リチウムアルミニウムヒドリド（８．６２ｇ、９５％、２１６ｍｍｏｌ）を、０℃で４００ｍｌの無水ジエチルエーテル中のＮ1，Ｎ4−ジオレオイル−ジアミノブタン（２７．０ｇ、４３．８ｍｍｏｌ）の懸濁液に注意深く添加した。添加後、氷浴を除去した。反応混合物をゆっくりと室温まで昇温し、次いで、適切な凝縮デバイスを用いて緩やかに加熱して還流し、そして１６時間攪拌した。反応混合物を次いで冷却し、そして７０ｍＬの１Ｎの水酸化ナトリウム溶液で０℃で注意深くクエンチした。さらに５００ｍＬのジエチルエーテルを添加し、そして混合物を室温でさらに２時間攪拌した。上部のエーテル層は徐々に透明に変わり、次いで分離した。この水相をそれぞれ１００ｍＬのジエチルエーテルで３回抽出した。この合わせたエーテル溶液を濃縮し、そして高真空下で一晩乾燥した。全体で１７．０ｇの油状無色Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−ジアミノブタンを得た。
【０１３５】
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−フタルアミド）プロピル］−ジアミノブタン（ＩＩＩ）の合成）
ジイソプロピルエチルアミン（１１．１ｍＬ、６３．７ｍｍｏｌ）を、Ｎ1，Ｎ4−ジオレイルジアミノブタン（１５．５ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）およびＮ−（２，３−エポキシプロピル）−フタルアミド（１５．６ｇ、７６．８ｍｍｏｌ）の１１０ｍＬの乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの懸濁液に添加した。窒素でのパージ後、反応混合物を丸底フラスコでシールし、そして約９０℃で２４時間加熱した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびジイソプロピルエチルアミンを除去し、そして黄色オイルを得た。この粗物質をエタノールから再結晶した。全量が１８．６ｇの白色固体、Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−フタルアミド）プロピル］ジアミノ−ブタンを得た。
【０１３６】
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノブタン（ＩＶ）（以後、ＤＨＤＯＳと呼ぶ）の合成）
ヒドラジン（４．０ｍＬ、８０％水性、１０３ｍｍｏｌ）を、室温で２５０ｍＬの乾燥エタノール中のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−フタルアミド）プロピル］−ジアミノブタン（１７．０ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。適切な凝縮デバイスを使用して、反応混合物を加熱還流した。この時点で、懸濁液は透明な溶液に変わった。油浴を８５℃に設定した。４５分後、白色固体がこの溶液から沈殿した。反応混合物を４時間、還流させて攪拌し、その後、−２０℃に冷却した。白色固体が底に沈降した。上部の透明なエタノール溶液をデカントした。残渣を冷エタノールで２回洗浄した。この合わせたエタノール溶液を濃縮し、そして減圧下で一晩乾燥した。１２．４ｇの油状Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノブタンを得た。
【０１３７】
以下の化合物を、対応するジアミンおよび長鎖アシルクロリドを使用して上記の方法によって合成した：
Ｎ1，Ｎ4−ジミリスチル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノブタン；
Ｎ1，Ｎ4−ジパルミチル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノブタン；
Ｎ1，Ｎ4−ジパルミトリル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノブタン；
Ｎ1，Ｎ4−ジステアリル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノブタン；
Ｎ1，Ｎ4−ジラウリル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノブタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジミリスチル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジパルミチル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジパルミトリル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジステアリル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジラウリル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノエタン；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジミリスチル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジパルミチル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジパルミトリル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジステアリル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジラウリル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジオレイル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ。
【０１３８】
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−カルボキサミジン）アミノプロピル］−ジアミノブタン（Ｖ）の合成）
１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジンヒドロクロリド（４５ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を、１ｍＬの乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］−ジアミノ−ブタン（１１５ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この塩はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）にあまり溶解しなかった。しかし、この混合物は、ジイソプロピルエチルアミン（５５μｌ、０．３１ｍｍｏｌ）を添加した後、透明に変わった。この混合物を、窒素下、室温で１８時間撹拌した。溶媒を除去した後、粗物質をＣ−１８逆相フラッシュカラムに充填し、そしてＭｅＯＨ中２０％のＨ2Ｏ〜ＭｅＯＨ中１０％のＨ2Ｏで溶離した。純粋な画分を収集し、そして濃縮した。８１ｍｇの無色で油状のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−カルボキサミジン）アミノプロピル］−ジアミノブタンが得られ、これをそのＴＦＡおよびＨＣＬ塩に変換した。
【０１３９】
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−｛２−ヒドロキシ−３−［Ｎ−（ＮI，ＮII，ＮIII，ＮIV−ブトキシカルボニル−スペルミンカルボキサミド）］アミノプロピル｝ジアミノブタン（ＶＩ）の合成）
混合溶媒（１００ｍＬのＤＭＦおよび１００ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2）中の、Ｂｏｃ−スペルミン酸（２１．７ｇ、３３．５ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（３．９１ｇ、３４．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルカルボジイミド（５．３２ｍＬ、３４．０ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。２．５時間撹拌した後、塩化メチレンおよびＤＭＦ（４０ｍＬ）中のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−アミノプロピル）］ジアミノブタン（１０ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。この混合物をさらに５時間撹拌し、その後、２．５％炭酸水素ナトリウム溶液（２００ｍＬ）でクエンチした。さらに３００ｍＬの塩化メチレンを添加した。水溶液を、１２０ｍＬの塩化メチレンで３回抽出した。合わせた有機溶液を水で２回洗浄し、そして無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濃縮した後、淡黄色の油状物を得た。粗物質を、シリカゲルを用いてＣＨ2Ｃｌ2中２％ＭｅＯＨ〜ＣＨ2Ｃｌ2中５％ＭｅＯＨで溶離して、精製した。全部で１３．１ｇの白色固体のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−｛２−ヒドロキシ−３−［Ｎ−（ＮI，ＮII，ＮIII，ＮIV−ブトキシカルボニルスペルミンカルボキサミド）］アミノプロピル｝ジ−アミノブタンを得た。
【０１４０】
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノブタン（ＶＩＩ）の合成）
１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）中のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−｛２−ヒドロキシ−３−［Ｎ−（ＮI，ＮII，ＮIII，ＮIV−ブトキシカルボニルスペルミンカルボキサミド）］アミノプロピル｝ジアミノブタン（１１．８ｇ、５．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、１，４−ジオキサン中４．０Ｍの塩酸溶液（１００ｍＬ）を、室温で添加した。この酸の添加１０分後、この反応混合物は濁った。室温で２．５時間撹拌した後、過剰の酸および溶媒を除去した。残渣を少なくとも５時間真空下で乾燥し、その後、Ｃ−１８逆相フラッシュカラムに充填した。このカラムを、初めはＭｅＯＨ中２５％Ｈ2Ｏ、次いで２０％、そして次いで、１７％で溶離した。純水な画分を回収し、そして濃縮した。３．０６ｇの無色固体のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノブタンを得た。
【０１４１】
以下の化合物を、必要なジアミンおよび長鎖アシルクロリドで出発する、上記のプロトコルを使用して合成した：
Ｎ1，Ｎ4−ジミリスチル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノブタン；
Ｎ1，Ｎ4−ジパルミチル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノブタン；
Ｎ1，Ｎ4−ジパルミトリル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノブタン；
Ｎ1，Ｎ4−ジステアリル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノブタン；
Ｎ1，Ｎ4−ジラウリル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノブタン；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジミリスチル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジパルミチル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジパルミトリル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジステアリル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジラウリル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジオレイル−Ｎ 1 ，Ｎ 9 −ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ；
Ｎ1，Ｎ2−ジミリスチル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジパルミチル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジパルミトリル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジステアリル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジラウリル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノエタン；
Ｎ1，Ｎ2−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ2−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノエタン。
【０１４２】
（ジヒドロキシ−ジオレイオール（ｄｉｏｌｅｙｏｌ）−ジスペルミンカルボキサミドスペルミンおよびアナログの合成（スキーム１））
【０１４３】
【化１０７】
Figure 0004854853
Figure 0004854853
（実施例２）
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−３−シアノプロピルジアミノブタン（ＶＩＩＩ）の合成）
エタノール（２０ｍＬ）中のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−ジアミノブタン（１．８ｇ、３．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、アクリロニトリル（０．４３ｍＬ、６．５３ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。この混合物を３０分間撹拌した。全ての出発物質が生成物に変換したことを、ＴＬＣ分析によって確認した。粗物質をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2中１％ＭｅＯＨ）を使用して精製した。透明なオイルを高収率で得た。
【０１４４】
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−３−（アミノプロピル）−ジアミノブタン（ＩＸ）の合成）
無水ジエチルエーテル（１５ｍＬ）中のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−３−シアノプロピル−ジアミノブタン（２．１２ｇ、３．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬＡＨ（９．２ｍＬ、エーテル中１Ｍ、９．２ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でゆっくりと添加した。添加後、この混合物を室温で２０時間撹拌した。全ての出発物質が消費された。この反応混合物を、０℃で、１Ｎ ＮａＯＨ溶液でクエンチした。室温で２時間撹拌した後、この混合物をジエチルエーテルで３回抽出した。合わせたエーテル溶液を濃縮し、そして真空下で３時間乾燥した。油状のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−３−（アミノプロピル）ジアミノブタンを高収率で得た。
【０１４５】
（Ｎ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノブタン（ＸＩ）の合成）
上記のＮ1，Ｎ4−ジオレイル−Ｎ1，Ｎ4−ジ−［２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−スペルミンカルボキサミド）−アミノプロピル］−ジアミノブタンを作製するための手順を行った。
【０１４６】
（ジオレイオール−ジスペルミンカルボキサミドスペルミンおよびアナログの合成（スキーム２））
【０１４７】
【化１０８】
Figure 0004854853
（実施例３）
（コレステロールアナログの合成）
以下に示されたスキームを使用することによって、コレステロールアナログを合成し得る（スキーム３）。ジェフアミン（ｊｅｆａｍｉｎｅ）をコレストリル（ｃｈｏｌｅｓｔｒｙｌ）クロリドを用いてアルキル化し、ジコレストリルジェファミンアナログ（ＸＩＩ）を得る。エポキシドフタルアミド（ＸＩＩＩ）を用いてさらにアルキル化し、そしてヒドラジンを用いて脱保護して、本発明の化合物（ＸＩＶ）を得る。
【０１４８】
【化１０９】
Figure 0004854853
（実施例４）
（モノアルキルアナログの合成）
モノアルキルアナログが所望される場合、上記スキーム１は、出発物質中のアミンのうちの１つが、アシル化工程の前に保護されるように、改変され得る。従って、トリチル保護ジアミノブタン（ＸＶ）は、アルカノイルクロリド（例えば、オレオイルクロリド）を用いてアシル化され、続いて、ＬＡＨ還元され、化合物ＸＶＩＩＩが得られる。次いで、このアミンは、所望のフタルアミドエポキシドを用いてアルキル化されて、化合物ＸＶＩＩＩが得られる。ヒドラジンを使用してフタルアミドを除去することによって、所望のアミンＸＩＸが得られる（スキーム４を参照のこと）。
【０１４９】
【化１１０】
Figure 0004854853
（実施例５）
（環状アナログの合成）
以下のスキーム（スキーム５）は環状アナログを作製するために使用し得る。所望の鎖を有するトリチル保護アミノアルコール（ＸＸ）を、ジブロモアルキル（例えば、ジブロモブタン）を使用してアルキル化する。トリチルを所望のダイマー（ＸＸＩ）から除去し、そしてジアシルクロリド（例えば、スクシニルクロリド）を使用してアシル化する。次いで、アミド（ＸＸＩＩＩ）をＬＡＨを用いて還元し、そして所望のフタルアミドエポキシドを使用してアルキル化する。フタルアミドの除去によって、本発明の所望の化合物を得る。
【０１５０】
【化１１１】
Figure 0004854853
Figure 0004854853
（実施例６）
（ポリマーアナログの合成）
本発明のポリマーアナログは、ポリマーアミン（例えば、出発物質としてのＰＥＩ、またはデントリマーポリアミン）を使用することによって合成し得る。例えば、ＰＥＩは、アルキロイルクロリド（例えば、オレオイルクロリド）でアシル化され得、次いでこのアシル化されたＰＥＩは、水素化リチウムアルミニウムで還元され得、本発明の化合物を与える。
【０１５１】
上記の方法は、特定の化合物の合成を例示するが、反応スキームは、本発明に従う様々な化合物を調製するための一般的な方法を提供する。当業者は、本明細書中で詳述されたもの以外の代替の方法および試薬が、本発明の化合物を生成するように使用されるか、または容易に適合されることを理解する。
【０１５２】
本発明の化合物は、従来技術の化合物（例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＧＳ、ＤＯＳＰＡなど）と同様の様式で使用され得る。このようなカチオン性脂質を脂質凝集体に組み込むための方法は、当該分野で周知である。代表的な方法は、以下により開示される：Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出；Ｅｐｐｓｔｅｉｎら、前出；Ｂｅｈｒら、前出；Ｂａｎｇｈａｍ，Ａ．ら（１９６５）Ｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３：２３８〜２５２；Ｏｌｓｏｎ，Ｆ．ら（１９７９）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ５５７：９〜２３；Ｓｚｏｋａ，Ｆ．ら（１９７８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：４１９４〜４１９８；Ｍａｙｈｅｗ，Ｅ．ら（１９８４）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ７７５：１６９〜１７５；Ｋｉｍ，Ｓ．ら（１９８３）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ７２８：３３９〜３４８；およびＦｕｋｕｎａｇａ，Ｍ．ら（１９８４）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１１５：７５７〜７６１。送達ビヒクルとして使用するのに適切なサイズの脂質凝集体を調製するための技術には、超音波処理、ならびに凍結融解および押出し（おそらく最も一般的に使用される）が挙げられる。例えば、Ｍａｙｅｒ，Ｌ．ら（１９８６）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ８５８：１６１〜１６８を参照のこと。ミクロ流動化は、一貫して小さく（５０〜２００ｎｍ）そして比較的均一な凝集体が所望される場合に使用される（Ｍａｙｈｅｗ，Ｅ．前出）。直径約５０ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の凝集対が好ましい。しかし、それより大きいサイズの凝集体および小さいサイズの凝集体の両方が機能的である。
【０１５３】
他の化合物をトランスフェクションおよび送達する方法は、当該分野で周知である。本発明の化合物および組成物は、他の公知のトランスフェクション試薬にのために使用される同一のプロセスにおいて使用され得る脂質凝集体を生成する。
【０１５４】
多くの一般的なパラメーターがトランスフェクションまたは送達の最適な効率に重要であることが当業者に容易に明らかである。これらのパラメーターには、例えば、カチオン性脂質の濃度、送達される化合物の濃度、トランスフェクトされる細胞の数、送達のために用いられる媒体、細胞がポリアニオン−脂質複合体でインキュベートされる時間の長さ、およびカチオン性脂質および非カチオン性脂質の相対量が挙げられる。これらのパラメーターを各々の特定の細胞型について最適化する必要があり得る。このような最適化は、本明細書中で提供されるガイダンスおよび当該分野で一般的に利用可能な知識を慣用的に使用する。
【０１５５】
本明細書中で詳述されるもの以外の代替の方法、試薬、手順および技術が、本発明のリポソーム前駆体およびトランスフェクション組成物を生成するために、使用され得るか、または容易に適合され得ることもまた、当業者に明らかである。このような代替の方法、試薬、手順および技術は本発明の精神および範囲内である。
【０１５６】
本発明の代表的な化合物の使用は、以下の実施例を参照することによってより詳述される。本明細書中で使用される全ての略語は、当該分野で標準的な略語である。詳述されない特定の手順は参照されるか、または当該分野で周知であるかのいずれかである。
【０１５７】
（実施例７）
この実施例は、市販のカチオン性脂質トランスフェクション試薬および本発明の化合物を使用して、ＨＥＫ−２９３（ヒト胚性腎臓由来の細胞株）、ＣＯＳ−７（ＳＶ４０形質転換サル細胞株）、ＣＨＯ−Ｋ１（チャイニーズハムスター卵巣由来の細胞株）およびＨｅＬａ（ヒト頸部癌由来の細胞株）の細胞のトランスフェクションを、β−ガラクトシダーゼレポータープラスミドＤＮＡ ｐＣＭＶ・ＳＰＯＲＴ−β−ｇａｌ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）と比較する。
【０１５８】
これらの細胞を、トランスフェクションの前日に、２４ウェル組織培養プレートに、０．４ｍｌ ＤＭＥＭ培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）（これは、１％可欠アミノ酸（ＮＥＡＡ）溶液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１０％ＦＢＳを含有する）の総容量でプレートした。ＨＥＫ−２９３およびＣＯＳ−７細胞について、組織培養プレートは、細胞付着を増加するために、ポリ−Ｌ−リジンで予めコーティングした。
【０１５９】
次の日、ＤＮＡトランスフェクション試薬複合体を以下のように調製した：
カチオン性脂質試薬およびＤＮＡを、１％のＮＥＡＡを含有する血清を含まないＤＭＥＭの２５μｌアリコートに別々に希釈した。ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ ＰＬＵＳについて、７〜１４μｌのＰＬＵＳ試薬をこのＤＮＡに添加し、混合し、そして室温で１５分間インキュベートした。この希釈したＤＮＡを、希釈した脂質と合わせ、そして室温で１５分間インキュベートし、ＤＮＡおよび脂質に複合体を形成させた。このインキュベーションに続いて、この複合体を培地に直接滴下し、そして培養プレートを前後に振動させることによって混合した。この細胞をさらに、３７℃で、全部で２４時間インキュベートし、レポータープラスミドである、ｐＣＭＶ・ＳＰＯＲＴ−β−ｇａｌによりコードされるｌａｃＺ導入遺伝子を発現させた。トランスフェクション後２４時間で、増殖培地およびトランスフェクション複合体をウェルから除去し、そして各ウェル中の細胞を１ｍｌのＤ−ＰＢＳ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＭＳ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）で手短かにリンスした。各ウェル中の細胞を、０．１５〜２．０ｍｌの０．１％Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０、０．１Ｍ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有する）を添加することによって溶解した。このプレートを、−８０℃で最低２時間冷凍し、そして室温または３７℃で解凍した。この解凍した細胞溶解物を、遠心分離により清浄化し、上清を、酵素基質ＯＮＰＧを使用して、β−ｇａｌ活性についてアッセイした。細胞溶解物中の全タンパク質の濃度もまた、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ ＣＡ）を使用して決定した。トランスフェクトされた細胞抽出物におけるβ−ｇａｌ活性を、標準曲線に対して計算し、そしてトランスフェクション毎の全活性を示すために組織培養プレートの表面積あたりのｎｇβ−ｇａｌ（ｎｇ／ｃｍ2）として表すか、または特異的活性を示すために、全タンパク質１μｇあたりのｎｇβ−ｇａｌ（ｎｇ／μｇ）として表した。
【０１６０】
ＨＥＫ−２９３（図１）、ＣＯＳ−７（図２）、ＣＨＯ−Ｋ１（図３）、およびＨｅＬａ（図４）の細胞を、０．４または０．８μｇのｐＣＭＶ・ＳＰＯＲＴ−β−ｇａｌＤＮＡおよび０．２〜４．０μｌのトランスフェクション試薬でトランスフェクトした。試験されたトランスフェクション試薬は、中性のｃｏ−脂質であるコレステロールと共に、２ｍｇ／ｍｌで処方されたＤＨＤＯＳ（ＩＶ）（１：１５（Ｍ／Ｍ）のＤＨＤＯＳ対コレステロールの比）；中性のｃｏ−脂質であるＤＯＰＥ（ジオレイルホスファチジルエタノールアミン）と共に２ｍｇ／ｍｌで処方されたＤＨＤＯＳ（１：１（Ｍ／Ｍ）のＤＨＤＯＳ対ＤＯＰＥの比）；ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ ＰＬＵＳ（ＬＩＦＥ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ ＭＤ）；およびＦｕＧＥＮＥTM−６（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）であった。ＤＨＤＯＳ処方物を、０．２〜１．５μｌの範囲で試験した；ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ ＰＬＵＳおよびＦｕＧＥＮＥ−６を０．２〜４．０μｌの範囲で試験した。ＦｕＧＥＮＥ−６をメーカーの奨励するプロトコルに従って使用した。ＤＨＤＯＳおよびＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ ＰＲＵＳを、上記のプロトコルに従って使用した。図に示されるデータは、トランスフェクトＤＮＡによる全ての発現をより良く比較するために、総活性（ｎｇ／ｃｍ2）として表される。０．４および０．８μｇのＤＮＡを用いた場合に得られる結果と同様であるため、０．８μｇのＤＮＡを用いた場合の結果のみを示す。
【０１６１】
（実施例８）
一次、継代、正常ヒト線維芽細胞（ＮＨＦ）を、１ウェルにつき１．６×１０4個の細胞の密度で９６ウェルプレートにプレートし、そして次の日にトランスフェクトした。各ウェル中の細胞を、４０ｎｇのｐＣＭＶ・ＳＰＯＲＴ−β−ｇａｌＤＮＡおよび０．１または０．２μｌの脂質でトランスフェクトした。このＤＮＡおよび脂質を１０μｌのＤＭＥＭに別々に希釈した。このＤＮＡを単独で使用するか、または、脂質と複合体化する前に、ＰＬＵＳ、インスリン、トランスフェリンまたはインテグリンターゲッティングペプチドと予備混合した。複合体化して１５分後、ＤＮＡ−脂質を細胞に添加した。細胞を、上記のように、β−ｇａｌ活性についてアッセイした。
【０１６２】
【表１】
Figure 0004854853
これらの結果は、これらのカチオン性脂質処方物がＤＮＡ分子のみを送達し得るが、脂質が、ＤＮＡと結合する、ペプチドまたはタンパク質と共に使用される、および／または細胞表面レセプターに対するリガンドとしてはたらくか、あるいはそうでなければ細胞および／または核の取り込みを増加する場合、送達および最終的に遺伝子発現が高められ得ることを示す。
【０１６３】
理解を明確にする目的のために、図示および実施例によって幾分か詳細に本発明をここで十分に記載してきたが、条件、処方物および他のパラメーターの広範かつ等価な範囲内で、本発明を改変または変更することによって、発明の範囲またはその任意の特定の実施形態に影響することなく、同様なものが実施され得、そしてこのような改変および変更は、添付の特許請求の範囲内に包含されることが意図されることが当業者に明らかである。
【０１６４】
本明細書中に記載される全ての刊行物、特許および特許出願は、本発明に関係する当業者のレベルを示し、そして各個々の刊行物、特許または特許出願が参考として詳細かつ個別に援用されることが示される場合と同じ程度の参考として、本明細書中で援用される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、カチオン性トランスフェクション薬剤を用いたＨＥＫ−２９３細胞のトランスフェクションを示すグラフである。
【図２】 図２は、カチオン性トランスフェクション薬剤を用いたＣＯＳ−７細胞のトランスフェクションを示すグラフである。
【図３】 図３は、カチオン性トランスフェクション薬剤を用いたＣＨＯ−Ｋ１細胞のトランスフェクションを示すグラフである。
【図４】 図４は、カチオン性トランスフェクション薬剤を用いたＨｅＬａ細胞のトランスフェクションを示すグラフである。

Claims (27)

  1. 以下である化合物であって：
    Figure 0004854853
    ここで、Ｒ7およびＲ8が、独立して、Ｈである、化合物。
  2. Ｒ7およびＲ8がＨである、請求項１に記載の化合物。
  3. 以下である化合物であって：
    Figure 0004854853
    ここで、Ｒ7およびＲ8が、Ｈである、化合物。
  4. 以下の式で表される化合物であって：
    Figure 0004854853
    ここで、Ｒ7およびＲ8が、独立して、Ｈである、化合物。
  5. Ｒ7およびＲ8がＨである、請求項４に記載の化合物。
  6. 以下の式を有する化合物であって：
    Figure 0004854853
    ここで、Ｒ7およびＲ8が、独立して、Ｈである、化合物。
  7. Ｒ7およびＲ8がＨである、請求項６に記載の化合物。
  8. １つまたは複数の細胞に、ポリアニオンを導入するための組成物であって、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物および少なくとも１つのさらなる成分を含む、組成物。
  9. 前記１つの少なくとも１つのさらなる成分が、細胞、複数の細胞、細胞培養物、細胞培養培地、中性脂質、核酸、およびトランスフェクションエンハンサーからなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
  10. 少なくとも１つのさらなる成分が、中性脂質である、請求項９に記載の組成物。
  11. 少なくとも１つのさらなる成分が、核酸である、請求項９に記載の組成物。
  12. 中性脂質をさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
  13. 中性脂質がジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルコリンまたはコレステロールである、請求項１０または１２に記載の組成物。
  14. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の１以上の化合物を含む脂質凝集物。
  15. 少なくとも１つの中性脂質を含む、請求項１４に記載の脂質凝集物。
  16. 前記脂質凝集物形成化合物が、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルコリンおよびコレステロールからなる群から選択される、請求項１５に記載の脂質凝集物。
  17. １つまたは複数の細胞をトランスフェクトするためのキットであって、
    （ａ）請求項１〜７のいずれか１項に記載の１以上の化合物；
    （ｂ）１つの細胞、複数の細胞、細胞培養培地、核酸、およびトランスフェクションエンハンサーからなる群から選択される、少なくとも１つのさらなる成分；および
    （ｃ）１つまたは複数の細胞をトランスフェクトするための説明書、
    を含む、キット。
  18. インビトロで１つまたは複数の細胞に、ポリアニオンを導入するための方法であって、該方法が、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物から脂質凝集物を形成する工程、該脂質凝集物をポリアニオンと接触させて、正に荷電したポリアニオン−脂質凝集物複合体を形成する工程、および該複合体を１つまたは複数の細胞と共にインキュベートする工程、を含む方法。
  19. 前記ポリアニオンが核酸である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記脂質凝集物がリポソームである、請求項１８または１９に記載の方法。
  21. インビトロで細胞に、生物学的に活性な物質を導入するための方法であって、該方法が、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物および生物学的に活性な物質のリポソームを形成する工程、ならびに該リポソームを細胞または細胞培養物と共にインキュベートする工程を含む、方法。
  22. ポリアニオンをインビトロまたはエクスビボで細胞に導入するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物およびポリアニオンを含むポリアニオン−脂質凝集物複合体の使用。
  23. ポリアニオンを細胞に導入するための組成物の製造における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物およびポリアニオンを含むポリアニオン−脂質凝集物複合体の使用。
  24. 前記脂質凝集物がリポソームである、請求項２２または２３に記載の使用。
  25. 生物学的に活性な物質をインビトロまたはエクスビボで細胞に導入するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物および生物学的に活性な物質を含むリポソームの使用。
  26. 生物学的に活性な物質を細胞に導入するための組成物の製造における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物および生物学的に活性な物質を含むリポソームの使用。
  27. 前記細胞が、インビトロの細胞である、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の使用。
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