JP2005529860A

JP2005529860A - ジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミンに基づいたジェミニ界面活性剤化合物

Info

Publication number: JP2005529860A
Application number: JP2003580278A
Authority: JP
Inventors: パトリック・カミレッリ; マルティヌス・セー・フェイテルス; アンソニー・ジョン・カービー; ゲール・アラン・ベルトラン・ロンサン; ルーラント・ヨハネス・マリア・ノルテ; クリスティナ・レオノル・ガルシア
Original assignee: Glaxo Group Ltd; Cambridge University Technical Services Ltd CUTS; Radboud University Nijmegen
Current assignee: Glaxo Group Ltd; Cambridge University Technical Services Ltd CUTS; Radboud University Nijmegen
Priority date: 2002-03-27
Filing date: 2003-03-26
Publication date: 2005-10-06
Also published as: AU2003217028A1; EP1487788A1; US20060148734A1; WO2003082809A1

Abstract

本発明は、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物を開示する。化合物は、ペプチド基および任意でヒドロカルボキシ基が結合した、ジアミノ酸−ポリアミンまたはジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン骨格に基づく。ジアミノ酸−ポリアミンの使用：ペプチドに基づくジェミニ化合物およびこれらを産生するための方法もまた開示する。

Description

発明の詳細な説明

（技術分野）
本出願は２００２年３月２７日に出願された英国優先出願番号ＧＢ０２０７２８３．３および２００２年６月１３日に出願されたＧＢ０２１３６４６．３の利益を請求するものであり、その内容は出典を明示することで本明細書の一部とする。

本発明は、新規に同定されたジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドおよびジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミンに基づくジェミニ界面活性剤化合物、かかる化合物の使用、およびそれらの製造法に関する。本発明は、また、薬剤のデリバリーのために細胞内への化合物の輸送を促進する、ジアミノ酸ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の使用に関する。

（背景技術）
界面活性剤は、たとえ低濃度であっても、液体の表面特性に著しく影響を及ぼす物質である。例えば、界面活性剤は水または水溶液に溶解された際に表面張力を有意に減少し、２つの液体間または液体と固体間に働く界面張力を減少させるだろう。この界面活性剤分子の特性は、工業、特に洗剤および石油工業において広く利用されてきた。１９７０年代において、疎水性の架橋により結合した、極性末端を有する２本の疎水鎖により特徴付けられる、新規なクラスの界面活性剤分子が報告された（Deinega ,Yら., Kolloidn. Zh. 36, 649, 1974）。「ジェミニ」と呼ばれた（Menger, FMおよびLittau, CA, J. Am. Chem. Soc. 113, 1451, 1991）これらの分子は、モノマー等価物よりも非常に望ましい特性を有する。例えば、それらは油および水に基づく液体間に働く界面張力の減少において高度に効果的であり、非常に低い臨界ミセル濃度を有する（Menger, FMおよびKeiper, JS, Angewandte. Chem. Int. Ed. Engl., 2000, 39, 1906）。

特に培養中にポリヌクレオチドを細胞内にトランスフェクションするために、陽イオン界面活性剤が用いられ、かかる薬剤の例は遺伝子技術に関わる科学者に市販されている（例えば、Promega Corp. WI, USAより入手可能である真核細胞のトランスフェクション用の試薬ＴｆｘＴＭ−５０）。

遺伝子治療またはアンチセンス治療のいずれかに対して、いかに効率的にインビボで細胞にＤＮＡをデリバリーするかがここ数年大きな目標であった。デリバリービヒクルとしてのウイルス、例えば嚢胞性線維症（ＣＦ）の矯正的遺伝子治療を目的とした気道の上皮細胞に対するアデノウイルスの使用に大きな関心が向けられてきた。しかしながら、ＣＦ患者における遺伝子輸送の成功的な証拠が有るにも関わらず、アデノウイルス経路は、炎症性副作用および輸送された遺伝子の発現が一過性に制限されるため、問題が残ったままである。陽イオン界面活性剤を使用した研究を含む、インビボ遺伝子デリバリーに対するいくつかの代替的な方法が研究されてきた。Gao, Xら. Gene Ther. 2, 710-722, 1995は、陽イオン脂質を運ぶアミンを使用して、ＣＦマウスの気道上皮内にＣＦ膜貫通コンダクタンス調節因子（ＣＦＴＲ）に対する正常なヒト遺伝子を用いる方法の可能性を証明した。このグループは引き続きリポソームＣＦ遺伝子治療試験を行い、単に部分的に成功したにすぎないが、ヒトにおけるこの方法の可能性を証明した（Caplen、Njら., Nature Medicine, 1, 39-46, 1995）。更に最近では他のグループが、例えばコレステロール誘導体（Oudrhiri, Nら. Proc. Natl. Acad. Sci. 94, 1651-1656, 1997）などの遺伝子デリバリーに対する他の陽イオン脂質の可能性を研究している（Miller, A, Angew. Int. Ed. Engl., 37, 1768-1785, 1998）。この限定された研究は、インビトロおよびインビボの両方で上皮細胞内への遺伝子の輸送を促進する、これらのコレステロールに基づく化合物の能力を証明し、それによってこの一般的な方法の妥当性の支持を導いた。

これらおよびその他の研究は、この新たな研究分野において、細胞に基づく実験におけるトランスフェクションの場合インビトロ、および遺伝子治療およびアンチセンス治療の場合インビボの両方において、ポリヌクレオチドを細胞内に効果的に輸送することを促進する、新規な低毒性界面活性剤分子を開発する継続的な要求があることを示す。システイン（ＷＯ９９／２９７１２）に基づく、またはスペルミン（ＷＯ００／７７０３２）またはジアミン（ＷＯ００／７６９５４）に基づくジェミニ界面活性剤が以前に作られていた。ジェミニ界面活性剤の他の例がＷＯ００／２７７９５、ＷＯ０２／３０９５７およびＷＯ０２／５０１００において見られる。

本発明は、既存の化合物により示される問題を解決しようとするものである。

（発明の開示）
本発明は、ジアミノ酸−ポリアミンまたはジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン骨格を有し、式（Ｉ）：

［式中：
ｍは０ないし６であり；
ｎは０ないし７であり；
ｐは０ないし６であり；ここに

Ｘは、結合、ＣＨ_２、（ＣＨ_２）_２、ｑが２ないし６であるＮＨ（ＣＨ_２）_ｑＮＨまたは

（式中、Ｒ_９ないしＲ_１２は、同一であっても、または異なっていてもよく、Ｈ、Ｏまたはｒが０ないし６であるＣ_ｒＨ_２ｒ＋１から選択される：ただし、Ｒ_９およびＲ_１２がＯであるか、あるいはＲ_９およびＲ_１１がＯである場合は、Ｒ_１０およびＲ_１１またはＲ_１０およびＲ_１２は、各々Ｈである）
であり；

Ｙは、結合、ＣＨ_２、

（式中、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７およびＲ_８は水素であり、Ｒ_１およびＲ_２は、２４個までの炭素原子を有し、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合した飽和または不飽和ヒドロカルボキシ基であるか；あるいは

Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５およびＲ_６は、水素であり、Ｒ_１およびＲ_２は、２４個までの炭素原子を有し、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合した飽和または不飽和ヒドロカルボキシ基であり、Ｒ_７およびＲ_８は、同一であっても、または異なっていてもよく、アミド（ＣＯＮＨ）結合により一緒になって結合し、さらに、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合し、直鎖または分枝鎖であり、１つまたはそれ以上のアミノ酸から形成される、一般式（ＩＩ）：

（ここに、ｐ１およびｐ２の値は、同じであっても、または異なっていてもよく、０ないし５、好ましくは１であり；

ｐ３およびｐ４の値は、同じであっても、または異なっていてもよく、０ないし５、好ましくは０であり；
Ａ１、Ａ３およびＡ４は、同じであっても異なっていてもよく、セリン、リシン、オルニチン、トレオニン、ヒスチジン、システイン、アルギニンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ａ２は、リシン、オルニチンおよびヒスチジンから選択されるアミノ酸である）
を有する、ペプチドである］
で示される一般構造に一致する、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物またはその医薬上許容される塩に関する。

好ましくは、化合物は対称性、すなわち、Ｒ_１およびＲ_２は互いに同一であり、Ｒ_３およびＲ_４は互いに同一であり、Ｒ_５およびＲ_６は互いに同一であり、Ｒ_７およびＲ_８は互いに同一である。
好ましい具体例において、Ａ１はリシン、セリンまたはトレオニン、好ましくはリシンである。好ましくは、Ａ３およびＡ４はリシン、オルニチン、ヒスチジンまたはアルギニンである。

さらに好ましい具体例において、ヒドロカルボキシ基は：

より選択される。

最も好ましくは、ヒドロカルボキシ基は（ＣＨ_２）_７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_２）_７ＣＨ_３天然混合物、シス型（ＣＨ_２）_７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_２）_７ＣＨ_３およびトランス型（ＣＨ_２）_７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_２）_７ＣＨ_３より選択される。

好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは（ＣＨ_２）または（ＣＨ_２）_２であり、Ｙは結合であり、ｐは０ないし４である。

さらに好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは、ｑが２ないし５であるＮＨ（ＣＨ_２）_ｑＮＨであり、Ｙは結合であり、ｐは２ないし５である。

他の好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは

［式中、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１およびＲ_１２は全てＨである］
であり、Ｙは結合であり、ｐは２ないし５である。

さらにより好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは（ＣＨ_２）または（ＣＨ_２）_２であり、ｐは０ないし４であり、Ｙは

ある。

さらにより好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは、ｑが２ないし５であるＮＨ（ＣＨ_２）_ｑＮＨであり、ｐは２ないし５であり、Ｙは

である。

さらにより好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは

［式中、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１およびＲ_１２は全てＨである］
であり、ｐは２ないし５であり、Ｙは

である。

さらに好ましい具体例においては、Ｘは

であり、Ｙは結合であり、ｐは１ないし６であり、ｎは１ないし７である。

本発明の化合物は、当業者によく知られている合成ペプチド化学を使用して、容易に入手可能である出発物質から調製されうる。図１に示されるスキームは、ヒドロカルボキシ基がジアミノ酸のα−アミノ基に結合し、さらにジアミノ酸がアミド結合によりポリアミン骨格部位に結合している、本発明の化合物を合成するための一般的なスキームを示し、図２に示されるスキームは、ヒドロカルボキシ基がジアミノ酸の末端アミノ基に結合しており、さらにジアミノ酸がアミド結合によりポリアミン骨格部位に結合している、本発明の化合物を合成するための一般的なスキームを示し、図３に示されるスキームは、アミノ酸がアミド結合により、ジアミノ酸のアミノ基（αまたは末端）に結合しており、さらにジアミノ酸がアミド結合によりポリアミン部位に結合しているジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物を合成するための一般的なスキームを示す。

本発明の他の態様は、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物を使用する方法に関連する。かかる使用は、全ての生物におけるアンチセンス、遺伝子治療および（抗体の形成のため）遺伝子的免疫法のために、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドの細胞内への輸送を促進することを含む。他の使用は、例えばとりわけ遺伝子発現研究およびアンチセンスコントロール実験において、培養物中の細胞内へのポリヌクレオチドのトランスフェクションが必要となった場合に、かかるトランスフェクションを促進するために本発明の化合物を利用することを含む。かかるポリヌクレオチドおよびアンチセンス分子の調製のためのプロトコルは当該分野でよく知られている（例えば、Sambrookら., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989), Cohen, JS ed. Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression, CRC Press, Boca Raton, FL (1989)）。ポリヌクレオチドを該化合物と混合し、細胞に加え、ポリヌクレオチドを取り込みが可能になるようにインキュベートすることができる。さらなるインキュベートの後、細胞はトランスフェクションされたＤＮＡにより与えられる表現型特性に関してアッセイすることができ、あるいは、該ＤＮＡから発現されるｍＲＮＡのレベルを、ノーザンブロッティングにより、または例えばＴａｑｍａｎ（登録商標）法（Perkin Elmer, Connecticut, USA）などのＰＣＲに基づく定量方法を用いることにより、決定できる。本発明の化合物は、先行技術における化合物と比較して、培養中の細胞におけるＤＮＡの細胞性取り込みの効率を、典型的には３倍ないし６倍の間で有意に改善する。トランスフェクションプロトコルにおいて、ジェミニ化合物を、トランスフェクションの効率を上昇させるため、１つまたはそれ以上の補足物と組み合わせて使用してよい。かかる補足物は、例えば：

（ｉ）中性担体、例えばジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）（Farhood, H.,ら(1985) Biochim. Biophys. Acta, 1235-1289）；
（ｉｉ）複合化試薬、例えば市販されているＰＬＵＳ試薬（Life Technologies Inc. Maryland, USA）または、ポリリシンまたはポリオルニチンペプチドなどのペプチド、または排他的ではないが、主にリシン、オルニチンおよび／またはアルギニンなどの基本アミノ酸を含むペプチド、
から選択されうる。上記一覧が全てを網羅しているわけではなく、トランスフェクションの効率を上昇させる補足物が本発明の範囲内に含まれうる。

さらに他の態様において、本発明は、本発明の化合物を使用した遺伝子治療における遺伝子的物質の輸送に関する。例えば、当業者は、当該分野でよく知られたプロトコルを用いて、本発明のジェミニ界面活性剤化合物の使用に関連した、遺伝子治療における使用のための遺伝子デリバリー方法論を開発し得る。例えば、遺伝子輸送ベクターの肺へのデリバリーのための界面活性剤の使用は、Weiss, DJ (2002) Molecular Therapy 6(2) pp148から152において論評される。

本発明のさらなる他の態様は、本発明の化合物を使用した、インビトロおよびインビボでの、非ヌクレオチドに基づく薬剤化合物の細胞内へのデリバリーをもたらす方法に関連する。

本明細書に頻繁に用いられるある特定の用語の理解を容易にするため、以下の定義を提供する。

「アミノ酸」は、⁺Ｈ_３ＮＣＨ（Ｒ）ＣＯ_２ ⁻の形態の二極性イオン（双極性イオン）をいう。これらは、Ｒ基の性質により区別され、Ｒが水素以外である場合、これらは不斉であり得、ＤおよびＬファミリーを形成する。Ｒ基が、例えば非極性（例えばアラニン、ロイシン、フェニルアラニン）または極性（例えば、グルタミン酸、ヒスチジン、アルギニンおよびリシン）であり得る２０種の天然に生じるアミノ酸が存在する。非天然アミノ酸の場合、Ｒは天然のアミノ酸において見られない他のいずれの基であり得る。

「ポリヌクレオチド」は、一般に、いずれのポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドをいい、非修飾ＲＮＡまたはＤＮＡあるいは修飾ＲＮＡまたはＤＮＡであってもよい。「ポリヌクレオチド」は、制限するものではないが、１本鎖および２本鎖ＤＮＡ、１本鎖および２本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、１本鎖および２本鎖ＲＮＡ、および１本鎖および２本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、１本鎖またはより典型的には、２本鎖であるＤＮＡおよびＲＮＡまたは１本鎖および２本鎖領域の混合物を含むハイブリッド分子を含む。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡまたはＤＮＡあるいはＲＮＡかつＤＮＡ両方を含む３本鎖領域をいう。ポリヌクレオチドなる語は、また、１つまたはそれ以上の修飾塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡおよび安定性または他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡを含む。「修飾」塩基は、例えば、トリチル化された塩基およびイノシンのような異常塩基を含む。種々の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡに施され；かくして、「ポリヌクレオチド」は、典型的には、天然に見られるような、化学的、酵素的または代謝的に修飾されたポリヌクレオチドの形態、ならびにウイルスおよび細胞に特有のＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」は、また、しばしばオリゴヌクレオチドと呼ばれる比較的短いポリヌクレオチドを包含する。

「トランスフェクション」は、化学的または物理的方法のいずれかによる細胞膜の修飾に関する方法を用いる、培養中の細胞内へのポリヌクレオチドの導入をいう。かかる方法は、例えばSambrookら., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)に記載されている。ポリヌクレオチドは、直線状または環状の、１本鎖または２本鎖であってもよく、ポリヌクレオチドの複製またはポリヌクレオチドの一部を含む同種または異種遺伝子の発現を調節する要素を含みうる。

この度、本発明を、以下の実施例により記載する。
（実施例）
実施例１：
ＣＲ−１１０

Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（５．０２ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）および２０．５ｍＬのＮａＯＨ１Ｍを０℃に冷却した８５Ｍｌの水−アセトン（１：２ｖ／ｖ）に溶解した溶液に、ｐＨが９以上となるよう維持するため、４．４３ｇ（２０．３ｍｍｏｌ）のドデシルクロリドおよびＮａＯＨ水溶液１Ｍを交互に滴下した。加えた後、１０分間、０℃でさらに攪拌を継続する。ＨＣｌ１０％をｐＨ２となるまで加えた。固体を濾過し、ｐＨ７となるまで水で洗浄する。Ｐ_２Ｏ_５で乾燥する。白色固体である化合物ＣＲ−１１０の収率が４６％となるまで固体をシリカ上で、ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨでクロマトグラフィする。α_D ²⁰ -1.0 (c 1.48 , MeOH) ; IR(KBr)ν_max 3347, 2921, 2851, 1717, 1681, 1521 cm^-1; ¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) 4.26 (dd, 1H, J= 4.77, 8.92 Hz, CH-COOH), 2.94 ( t, 2H, J= 6.7 Hz, CH₂N), 2.16 (t, 2H, J= 7.4 Hz, CH₂CON), 1.78-1.74 (m, 1H, HCH-CH(COOH), 1.63-1.45 (m, 7H, HCH-CH(COOH), CH ₂CH ₂N および CH ₂CH₂CON), 1.35 (s, 9H, (CH ₃)₃C), 1.22 (s, 16H, CH₃(CH₂)₈), 0.82 (t, 3H, J=6.8 Hz, CH₃); ¹³C (75 MHz, CD₃OD) 176.32 C(O)NCH₂), 175.45 (COOH), 158.42 (C(O)NO), 79.73 (C(CH₃)₃), 54.84 (CH), 41.16 (CH₂N), 36.97, 33.04, 32.64, 30.74-29.99 (CH₂), 28.83 (CH₃), 26.98, 24.26, 23.71 (CH₂), 14.48 (CH₃)。

実施例２：
ＣＲ−１１６

２．４ｇ（５．６ｍｍｏｌ）のＣＲ−１１０を−２０℃のＴＨＦに溶解した溶液に、Ｅｔ_３Ｎ（０．７８ｍＬ、５．６ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＣＯＣｌ（０．５５ｍＬ、５．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をこの温度で３０分間攪拌し、２４６ｍｇ（２．８ｍｍｏｌ）の１，４−ジアミノブタンを加え、さらに−２０℃で１時間攪拌した後、反応混合液を室温で温め、一晩攪拌した。真空で溶媒を除去し、残渣物をＣＨＣｌ_３に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３ａｑおよび食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４ａｎｈ上で乾燥した。得られた残渣物をクロマトグラフィして、白色固体である化合物ＣＲ−１１６（５０％）を与えた。：α_D ²⁰ -10.06 (c 1.51 , MeOH); IR(KBr)ν_max 3415-3307, 2920, 2851, 1688, 1637, 1515 cm^-1; ¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) 4.17 (dd, 1H, J= 5.5, 8.5 Hz, CH-COOH), 3.12 (m, 2H, CH₂N), 2.96 ( q, 2H, J= 6.4 Hz, CH₂N), 2.17 (t, 2H, J= 7.4 Hz, CH₂C(O)N), 1.69-1.64 (m, 1H, HCH-HC(COOH), 1.58-1.42 (m, 5H, HCH-HC(COOH), CH ₂CH₂CO, CH ₂CH₂N), 1.36 (s, 9H, (CH₃)₃C), 1.22 (s, 16H, CH₃(CH₂)₈CH₂), 0.88 (t, 2H, J=6.8 Hz, CH₃); ¹³C (75 MHz, CD₃OD) 176.26, 174.46 C(O)NCH₂), 158.42 (C(O)N), 79.93 (C(CH₃)₃), 54.82 (CH), 41.11 および 39.96 (CH₂N), 36.89, 33.09, 32.92, 30.77-30.38 (CH₂), 28.85 (CH₃), 27.63, 26.94, 24.28, 23.74(CH₂), 14.48 (CH₃)。

実施例３：
ＣＲ−１１７：ＧＳＮ１１

１．２２９９ｇ（１．３５ｍｍｏｌ）のＣＲ−１１６をＥｔＯＡｃ４Ｍで４５分間処理した。白色固体である化合物ＣＲ−１１７（４９％）を得るため、固体を濾過およびＭｅＯＨより再結晶化し、ＥｔＯＡｃを加えた：α_D ²⁰ -13.98 (c 1.76 , MeOH); IR(KBr)ν_max 3422, 3298, 3089, 2920, 2851, 1638 cm^-1; ¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) 4.20 (dd, 1H, J= 5.6, 8.4 Hz, CH-COOH), 3.12 (m, 2H, CH₂N), 2.84 ( t, 2H, J= 6.4 Hz, CH₂N), 2.18 (t, 2H, J= 7.6 Hz, CH₂C(O)N), 1.74-1.72 (m, 1H, HCH-CH(COOH), 1.69-1.34 (m, 5H, HCH-CH(COOH) + CH ₂CH₂CO+ CH ₂CH₂N), 1.22 (s, 16H, CH₃(CH₂)₈CH₂), 0.82 (t, 2H, J=6.8 Hz, CH₃); ¹³C (75 MHz, CD₃OD) 176.39, 174.22 C(O)NCH₂), 54.59 (CH), 40.55, 39.99 (CH₂N), 33.08, 32.57, 30.76-30.41(CH₂), 28.23, 27.61, 26.93 (CH₂), 14.44 (CH₃); C₄₀H₈₀Cl₂N₆O₄ ^. H₂O 778.56 calc C 60.94 %,H 10.36 %, N 10.65 % found C 60.88%, H10.22%, N 10.08%。

実施例４
ＲＧ００／７８１

Ｎ−ε−（第３ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシン（１．２４ｇ、５．０３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１４０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ_２ＣＯ_３（０．７５ｇ、５．４３ｍｍｏｌ、１．０８等量）を水（２０ｍＬ）に溶解した溶液およびオレイルコハク酸イミデート（１．９２ｇ、５．０６ｍｍｏｌ、１等量）を加えた。反応物を室温で２０時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦが蒸発した。水およびＣＨＣｌ_３（各３０ｍＬ）を加え、有機層を分離した。水層をｐＨ２まで酸性化し、ＣＨＣｌ_３（２ｘ３０ｍＬ）を用いて２回抽出した。有機層を水および食塩水（各２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させ、油を与えた。収率：２．４６ｇ（４．８２ｍｍｏｌ、９６％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO): δ 12.4 (m, 1 H^OH), 7.92 (d, 1 H, J = 7.8, HN^α), 6.70 (t, 1 H, J = 6.0, HN^ε), 5.29 (m, 2 CH^9,10), 4.10 (dt, 1 H, J = 5.0, 8.9, CH^α), 2.85 (q, 2 H, J = 6.2, CH₂ ^ε), 2.07 (dt, 2 H, J = 2.2, 7.0, CH₂ ²), 1.95 (q, 4 H, J = 6.0, CH₂ ^8,11), 1.62 (m, 1 H, CH^β), 1.51 (m, 1 H, CH^β), 1.45 (m, 2 H, CH₂ ³), 1.33 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1.2 (m, 26 H, 2 CH₂ ^γ，δ および 10 CH₂ オレオイル), 0.82 (t, J = 6.4, 3 H, CH₃ ¹⁸)。

実施例５
ＲＧ００／３６６

Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（ダイサンブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシン（１．８０ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（０．４１ｇ、３．５６ｍｍｏｌ、１．０１等量）およびＤＣＣ（０．７３ｇ、３．５４ｍｍｏｌ、１．０１等量）を加えた。反応物を室温で１６時間攪拌した。沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃに再溶解し、再び濾過した。残渣物をＣＨＣｌ_３に溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させ、白色固体であるＮ−α−オレイン酸−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデートを与えた。収率：１．９８ｇ（９３％）．NMR ¹H (400 MHz, CDCl₃) : ^δ 6.11 (m, 1 H, HN^α), 5.38 (m, 2 H, H^9,10), 4.94 (m, 1 H, CH^α), 4.65 (m, 1 H, HN^ε), 3.12 (m, 2 H, CH₂ ^ε), 2.79 (s, 4 H, 2 CH₂ ^Su), 2.20 (t, J = 6.1, 2 H, CH₂ ²), 2.00 (m, 5 H, CH^β および 2 CH₂ ^8,11), 1.84 (m, 1 H, CH^β), 1.63 (m, 2 H, CH₂ ³), 1.48 (m, 4 H, 2 CH₂ ^γ，δ), 1.37 (s, 9 H, 3 CH₃), 1.27 (m, 20 H, 10 CH₂ オレオイル), 0.83 (t, J = 6.3 Hz, 3 H, CH₃ ¹⁸)。

実施例６
ＲＧ００／２５０

Ｎ^４，Ｎ^９−ビス−（第３ブチルオキシカルボニル）−１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン（６２９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解した溶液およびＫ_２ＣＯ_３（０．２９ｇ、２．１ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデート（１２４６ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ、２．０５等量）の溶液を加えた。反応物を室温で一晩攪拌した。ほとんどのＴＨＦは蒸発し、水（３０ｍＬ）を加えた。水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機層を水、０．１ＭＨＣｌ、水および食塩水（各２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過、蒸発およびカラムクロマトグラフィによりＳｉＯ_２（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ：９５／５、Ｒｆ＝０．３０）上で精製し、油を与えた。収率：１０６０ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ、７６％）．¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) : δ 7.30 (bs, 2 H, 2 NHC^1'), 6.33 (bs, 2 H, 2 NH^α), 5.31 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.71 (bs, 2 H, 2 NH^ε), 4.41 (m, 2 H, 2 CH^α), 3.18 (m, 12 H, 2 CH₂ ^1', 2 CH₂ ^3'), 3.08 (m, 4 H, 2 CH₂ ^3' および 2 CH₂ ^ε), 2.18 (t, 4 H, J = 6.8, 2 CH₂ ²), 1.98 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.90 (m, 2 H, 2 CH^β), 1.79 (m, 2 H, 2 CH^β), 1.60 (m, 10 H, 2 CH₂ ^2', 2 CH₂ ^γ および 2 CH₂ ³), 1.45 (m, 26 H, 2 CH₂ ^δ, 2 CH₂ ^5' および 2 C(CH₃)₃), 1.40 (s, 18 H, 2 C(CH₃)₃), 1.25 (m, 40 H, 2 x 10 CH₂ ^Tail), 0.86 (m, 6 H, J = 6.6, 2 CH₃ ¹⁸). ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) : δ 171.1, 174.3, 155.6, 155.7, 129.5, 129.3, 79.4, 78.5, 76.8, 52.4, 48.6, 46.4, 39.6, 36.1, 33.5, 31.4, 29.3, 29.2, 29.0, 28.8, 28.7, 28.0, 26.7, 25.3, 24.5, 22.2, 22.1, 13.7。

実施例７
ＲＧ００／２６７：ＧＳＣ１０２

ＲＧ００／２５０（１．０４ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）をＭＯＨ（２０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加え、反応物を室温で２時間攪拌した。それから溶媒を除去し、残渣物を水（８０ｍＬ）に再溶解し、フリット上で濾過し、再び蒸発させた。残渣物を最少量のメタノールに再溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させ、濾過の後に淡黄色の固体を与えた。収率：０．７３４ｇ（０．６５ｍｍｏｌ、８６％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ9.02 (m, 4 H, 2 NH), 8.16 (t, 2 H, J = 6.0, 2 NHC^1'), 7.98 (s, 6 H, 2 N^αH および 2 N^εH₂), 5.29 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.10 (q, 2 H, J = 7, 2 CH^α), 3.10 (hp, 4 H, J = 6.4, 2 CH₂ ^1'), 2.85 (m, 8 H, 2 CH₂ ^3' および 2 CH₂ ^4'), 2.71 (m, 4 H, 2 CH₂ ^ε), 2.10 (AB, 4 H, J = 6.4, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.76 (m, 4 H, 2 CH₂ ^2'), 1.68 (m, 4 H, 2 CH₂ ^5'), 1.65 1.42 (m, 12 H, 2 CH₂ ^β, 2 CH₂ ^δ および 2 CH₂ ³), 1.25 (m, 44 H, 10 CH₂ ^Ol および 2 CH₂ ^γ), 0.83 (t, 6 H, 2 CH₃ ¹⁸). MS (+ES) : 999.8 [M+Na]。

実施例８
ＲＧ００／３７１

Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシン（９００ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、炭酸カリウム（２２５ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１．１等量）を水（６ｍＬ）に溶解した溶液およびＮ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシン（３６５ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ、１等量）を加えた。それから溶液を室温で１６時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水溶液のｐＨを２に調節し、ＣＨＣｌ_３（２ｘ８０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）および食塩水（４０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させた。それから得られた油を最少量のＣＨＣｌ_３に溶解し、Ｅｔ_２Ｏを加えた。それから白色固体を採取した。収率：１００８ｍｇ（１．４６ｍｍｏｌ、９９％）．¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) : δ12.60 (m, 1 H, COOH), 8.55 (m, 1 H, NH), 7.10 (m, 1 H, 1 NH), 6.70 (m, 1 H, 1 NH), 5.32 (m, 2 H, CH^9,10), 4.80 (m, 1 H, NH), 4.51 (m, 2 H, 2 CH^α), 3.08 (m, 4 H, 2 CH₂ ^ε), 2.20 (t, 2 H, J = 7.0, 2 CH₂ ²), 1.99 (m, 4 H, CH₂ ^8,11), 1.60 (m, 4 H, 2 CH₂ ^β), 1.50 1.20 (m, 44 H), 0.87 (t, 3 H, J = 6.8, CH₃ ¹⁸)。

実施例９
ＲＧ００／３７６

Ｎ−α−（Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシル）−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル））−Ｌ−リシン（１００８ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（１７７ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ、１．０２等量）およびＤＣＣ（３１１ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１．０３等量）を加えた。反応物を室温で一晩攪拌し、それからＤＣＵを濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。それから溶媒を除去し、残渣物をＥｔＯＡｃに再溶解し、ＤＣＵを再び濾過し、蒸発させた後白色固体を単離した。収率：１１４７ｍｇ（１．３６ｍｍｏｌ、９３％）。

実施例１０
ＲＧ００／３８４

Ｎ^４，Ｎ^９−ビス−（第３ブチルオキシカルボニル）−１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン（２４１ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に溶解した溶液およびＫ_２ＣＯ_３（０．１０ｇ、０．７３ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（８ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−α−（Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシル）−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル））−Ｌ−リシルコハク酸イミド（６００ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。反応物を室温で一晩攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水（３０ｍＬ）を加えた。水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ６０ｍＬ）で抽出した。有機層を水、０．１ＭＨＣｌ、水および食塩水（各２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、蒸発およびＳｉＯ_２（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ：９／１、Ｒｆ＝０．２７）上で精製し、白色固体を与えた。収率：４９７ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ、７５％）．¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ8.40 (m, 2 H, 2 NH), 6.90 (m, 2 H, 2 NH), 6.40 (m, 2 H, 2 NH), 5.33 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.85 (m, 4 H, 4 N^εH), 4.40 (m, 4 H, 2 x 2 CH^α), 3.28 3.02 (m, 20 H, 2 x 2 CH₂ ^ε, 2 CH₂ ^1', 2 CH₂ ^3' および 2 CH₂ ^4'), 2.22 (m, 4 H, 2 CH₂ ²), 1.99 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.80 (m, 4 H, 2 CH₂ ^β), 1.72 1.25 (m, 126 H), 0.83 (t, 6 H, J = 6.8, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例１１
ＲＧ００／４０４

ＲＧ００／３８４（４７０ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加え、反応物を室温で１時間攪拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣物を水（８０ｍＬ）に再溶解し、濾過し、再び蒸発させた。残渣油をＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させ、黄色粉末を与えた。収率：２８４ｍｇ（０．１９４ｍｍｏｌ、７６％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ9.10 (m, 4 H, 2 NH₂ ⁺), 8.18 (m, 4 H, 4 NHC), 8.10 7.98 (m, 16 H, 2 x 2 N^αH および 2 x 2 N^εH₃ ⁺), 5.29 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.18 (m, 2 H, CH^α), 4.11 (m, 2 H, 2 CH^α), 3.10 (m, 4 H, 2 CH₂ ^1'), 2.85 (m, 8 H, 2 CH₂ ^3' および 2 CH₂ ^4'), 2.71 (m, 8 H, 2 x 2 CH₂ ^ε), 2.10 (m, 4 H, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.80 1.39 (m, 28 H), 1.25 (m, 48 H, 10 CH₂ ^Ol および 2 x 2 CH₂ ^γ), 0.83 (t, 6 H, J = 6.8, 2 CH₃ ¹⁸）。

実施例１２
ＲＧ００／２７８

Ｎ−α−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシン（７７９ｍｇ、３．１６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、炭酸カリウム（０．５２４ｇ、３．７９ｍｍｏｌ、１．２等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液およびオルコイルコハク酸イミデート（１．２０ｇ、３．１６ｍｍｏｌ、１等量）を加えた。反応物を室温で一晩攪拌する。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水（４０ｍＬ）を加えた。水層をｐＨ２まで酸性化し、ＣＨＣｌ_３（３ｘ６０ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（３０ｍＬ）および食塩水（４０ｍＬ）で洗浄、硫酸ナトリウム上で乾燥、濾過および蒸発させ、無色油であるＮ−α−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−オレオイル−Ｌ−リシンを与えた。収率：１．３１ｇ（２．５６ｍｍｏｌ、８１％）．¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) : d 5.78 (t, 1 H, J = 8.0, NH^ε), 5.33 (m, 2 H, CH^9,10), 5.27 (d, 1 H, J = 7.8, NH^α), 4.27 (m, 1 H, CH^α), 3.24 (q, 2 H, J = 8.0, CH₂ ^ε), 2.26 (t, 2 H, J = 6.8, CH₂ ²), 1.98 (m, 4 H, CH₂ ^8,11), 1.85 (m, 1 H, CH^β), 1.70 (m, 1 H, CH^β), 1.60 (m, 2 H, CH₂ ³), 1.55 (m, 2 H, CH₂ ^δ), 1.43 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1.40 (m, 2 H, CH₂ ^γ), 1.27 (m, 20 H, 10 CH₂ ^Tail), 0.87 (m, 3 H, J = 6.6, CH₃ ¹⁸). HRMS (+ES) : 533.40327 calculated for C₂₉H₅₄O₅N₂Na found 533.39110。

実施例１３
ＲＧ００／２８１

Ｎ−α−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−オレオイル−Ｌ−リシン（１．８０ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（０．４１ｇ、３．５６ｍｍｏｌ、１．０１等量）およびＤＣＣ（０．７３ｇ、３．５４ｍｍｏｌ、１．０１等量）を加えた。反応物を室温で１６時間攪拌した。沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃに再溶解し、再び濾過した。残渣物をＣＨＣｌ_３に溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させ、白色固体であるＮ−α−オレイン酸−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデートを与えた。収率：１．９８ｇ（９３％）．¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) : d 5.80 (t, 1 H, J = 8.0, NH^ε), 5.32 (m, 2 H, CH^9,10), 5.12 (d, 1 H, J = 7.8, NH^α), 4.66 (m, 1 H, CH^α), 3.24 (q, 2 H, J = 8.0, CH₂ ^ε), 2.82 (s, 4 H, 2 CH₂ ^Su), 2.14 (t, 2 H, J = 6.8, CH₂ ²), 1.98 (m, 4 H, CH₂ ^8,11), 1.90 (m, 2 H, 2 CH^β), 1.60 (m, 2 H, CH₂ ³), 1.55 (m, 2 H, CH₂ ^δ), 1.44 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1.39 (m, 2 H, CH₂ ^γ), 1.25 (m, 20 H, 10 CH₂ ^Tail), 0.86 (m, 3 H, J = 6.6, CH₃ ¹⁸）。

実施例１４
ＲＧ００／２８６

Ｎ^４，Ｎ^９−ビス−（第３ブチルオキシカルボニル）−１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン（４１４ｍｇ、０．６５９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に溶解した溶液およびＫ_２ＣＯ_３（２００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、２．２等量）を水（７ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−α−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−オレオイル−Ｌ−リシニルコハク酸アミデート（８００ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。反応物を室温で一晩攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水（３０ｍＬ）を加えた。水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ３０ｍＬ）で抽出した。有機層を水、０．１ＭＨＣｌ、水および食塩水（各３０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過、蒸発およびＳｉＯ_２（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ：９５／５、Ｒｆ＝０．２７）上で精製し、油を与えた。収率：７４０ｍｇ（０．５３３ｍｍｏｌ、８１％）．¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) : δ 7.20 (bs, 2 H, 2 NHC^1'), 5.72 (bs, 2 H, NH^ε), 5.33 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 5.25 (bs, 2 H, 2 NH^α), 4.08 (m, 2 H, 2 CH^α), 3.24 (m, 12 H, 2 CH₂ ^1', 2 CH₂ ^4' および 2 CH₂ ^ε), 3.12 (m, 4 H, 2 CH₂ ^3'), 2.13 (t, 4 H, J = 6.8, 2 CH₂ ²), 1.98 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.80 (m, 2 H, 2 CH^β), 1.60 (m, 10 H, 2 CH₂ ^2', 2 CH^β および 2 CH₂ ³), 1.50 (m, 4 H, 2 CH₂ ^δ), 1.47 (m, 4 H, 2 CH₂ ^5'), 1.45 (s, 18 H, 2 C(CH₃)₃), 1.42 (s, 18 H, 2 C(CH₃)₃), 1.37 (m, 4 H, 2 CH₂ ^γ), 1.25 (m, 40 H, 2 x 10 CH₂ ^Tail), 0.86 (m, 6 H, J = 6.6, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例１５
ＲＧ００／３２０：ＧＳＣ１０１

ＲＧ００／２９６（７５０ｍｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから蒸発させた。残渣物を水（６０ｍＬ）に再溶解し濾過した。水を蒸発させ、残渣物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させ、黄色固体を与えた。収率：５３３ｍｇ（０．４７０ｍｍｏｌ、９０％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ9.02 (m, 4 H, 2 NH₂ ⁺), 8.83 (t, 2 H, J = 6.0, 2 NHC^1'), 8.30 (d, 6 H, J = 4.0, 2 N^αH₃ ⁺), 8.83 (t, 2 H, J = 6.0, 2 N^εH), 5.30 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 3.70 (q, 2 H, J = 7, 2 CH^α), 3.22 (m, 2 H, 2 CH^1'), 3.13 (m, 2 H, 2 CH^1'), 2.97 (m, 4 H, 2 CH₂ ^ε), 2.71(m, 8 H, 2 CH₂ ^3' および 2 CH₂ ^4'), 2.10 (t, 4 H, J = 7.3, 2 CH₂ ²), 1.95 (q, 8 H, J = 6.0, 2 CH₂ ^8,11), 1.82 (h, 4 H, J = 7.0, 2 CH₂ ^2'), 1.68 (m, 8 H, 2 CH₂ ^β および 2 CH₂ ^5'), 1.43 (qu, 4 H, J = 6.2, 2 CH₂ ³), 1.35 (m, 4 H, 2 CH₂ ^δ), 1.25 (m, 44 H, 2 x 10 CH₂ ^Ol および 2 CH₂ ^γ), 0.82 (t, 6 H, 2 CH₃ ¹⁸). MS (+ES) : 999.8 [M+Na]。

実施例１６
ＲＧ００／５１８

活性型アミノ酸ＲＧ００／３６６（６１０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４５ｍＬ）に溶解した溶液に、ビス−Ｎ−アミノプロピル−ピペラジン（０．０８１ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ、０．５等量）およびそれから炭酸カリウム（０．１５ｇ、１．１ｍｍｏｌ、２．２等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液を加え、反応物を室温で２０時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを真空下で除去し、ＣＨＣｌ_３を加え、有機層を抽出、水（２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させた。残渣物をシリカ（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ：８．５／１．５、Ｒｆ＝０．３）上でカラムクロマトグラフィにより精製し、白色固体を与えた。収率：４９０ｍｇ（０．４１３ｍｍｏｌ、８３％）．¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7.68 (m, 2 H, 2 NHC¹), 6.46 (m, 2 H, 2 N^αH), 5.32 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.86 (m, 2 H, 2 N^εHboc), 4.33 (q, 2 H, J = , 2 CH^α), 3.38 (m, 2 H, CH^1'), 3.28 (m, 2 H, CH^1'), 3.05 (m, 4 H, 2 CH₂ ^ε), 2.47 (m, 12 H, 2 CH₂ ^3' および 4 CH₂ ^2'), 2.18 (t, 4 H, J = , 2 CH₂ ²), 1.99 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,10), 1.82 1.54 (m, 12 H, 2 CH₂ ^2', 2 CH₂ ³ および 2 CH₂ ^β), 1.48 (m, 4 H, 2 CH₂ ^γ), 1.42 (s, 18 H, 2 (CH₃)₃), 1.21 (m, 24 H, 10 CH₂ ^Ol および 2 CH₂ ^γ), 0.87 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH₃ ¹⁸). ¹³C NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 175.2, 173.4, 157.5, 129.9, 129.8, 78.8, 56.0, 53.8, 52.9, 41.3, 40.1, 37.7, 35.9, 32.1, 31.9, 29.9, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 27.9, 27.2, 26.2, 26.0, 23.3, 22.8, 13.5。

実施例１７
ＲＧ００／５２２＝ＧＳＣ１７０

保護ＲＧ００／５１８（４９０ｍｇ、０．４１３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加えた。反応物を１時間攪拌し、それから溶媒を蒸発させた。残渣物を水（４０ｍＬ）に再溶解、濾過および蒸発させた。本実施例において、ＭｅＯＨ／Ｅｔ_２Ｏを使用して化合物を沈殿させることは不可能であった。白色固体を採取した。収率：３８１ｍｇ（０．３３７ｍｍｏｌ、８１％）．HRMS (+ES) : 985.8879 calculated for C₅₈H₁₁₃N₈O₄, found 985.8890.
注釈：ＴＦＡを使用した同様の手順およびＫ_２ＣＯ_３を用いた中和を、遊離アミンを同量の収率で単離するため使用した。¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO): δ 7.78 (2 d, 4 H, J = 8.0, 4 NHCO), 5.29 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.12 (q, 2 H, J = 6.2, 2 CH^α), 3.04 (m, 4 H, 2 CH₂ ^1'), 2.47 (m, 8 H, 4 CH₂ ⁴), 2.29 (m, 4 H, 2 NH₂), 2.19 (t, 4 H, J = 6.2, 2 CH₂ ^3'), 2.05 (m, 4 H, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,10), 1.35 1.69 (m, 12 H, 2 CH₂ ^2', 2CH₂ ³ および 2 CH₂ ^β), 1.21 (m, 26 H, 10 CH₂ ^Ol および CH₂ ^δ および CH₂ ^γ), 0.82 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例１８
ＲＧ００／７９４

ビスアミノ化合物（１５０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ_２ＣＯ_３（４２ｍｇ、ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（２ｍＬ）に溶解した溶液およびＮ，Ｎ−ビス−（第３ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデート（１４０ｍｇ、０．３０４ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。それから反応物を室温で１６時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、残渣物をＣＨＣｌ_３に再溶解した。水（１０ｍＬ）を加え、有機層を抽出し、水（２ｘ１０ｍＬ）および食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発の後、残渣物をＳｉＯ_２（溶出液：ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨ：８７／１２／１、Ｒｆ＝０．２８）上で精製する。それからＥｔ_２Ｏを加え、生じる白色固体を濾過分離する。収率：０．１２４ｇ（０．０７６ｍｍｏｌ、５０％）．¹H NMR (400 MHz, d⁶-DMSO) : δ 7.75 (m, 4 H, 2 NH^α1 および 2 NHC¹), 7.68 (t, 2 H, J = , 2 NH^ε1), 6.69 (t, 2 H, J = , 2 NH^ε2), 6.63 (d, 2 H, J = , 2 NH^α2), 5.29 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.10 (q, 2 H, J = , 2 CH^α1), 3.78 (q, 2 H, J = , 2 CH^α2), 3.00 (m, 6 H, 2 CH₂ ^ε1 および 2 CH^1'), 2.95 (m, 2 H, 2 CH^1'), 2.84 (m, 4 H, 2 CH₂ ^ε2), 2.29 (m, 8 H, 4 CH₂ ^4'), 2.19 (m, 4 H, 2 CH₂ ^3'), 2.06 (t, 4 H, J = , 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,10), 1.55 1.4 (m, 16 H), 1.32 (s, 36 H, 4 C(CH₃)₃), 1.20 (m, 48 H), 0.82 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例１９
ＲＧ００／８１３＝ＧＳＣ１８４

ＲＧ００／７９４（１２４ｍｇ、０．０７５５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（５ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから溶媒を真空下で除去した。残渣物を水に溶解し、濾過および蒸発させた。化合物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させた。生じる固体を濾過および採取した。収率：０．１０２ｇ（０．０７０ｍｍｏｌ、９３％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ 8.66 (d, 2 H, J = 7.8, 2 NH^ε1), 8.28 (m, 6 H, 2 N^αH₃ ⁺), 8.09 (m, 2 H, 2 NHC¹), 8.05 (m, 6 H, 2 N^εH₃ ⁺), 7.98 (d, 2 H, J = 7.0, 2 N^αH), 5.29 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.09 (m, 2 H, 2 CH^α1), 3.72 (m, 2 H, 2 CH^α2), 3.65 (m, 2 H, 2 NH⁺), 3.10 (m, 12 H, 2 CH₂ ^ε1, 2 CH₂ ^3' および 2 CH₂ ^1'), 2.74 (m, 8 H, 2 CH₂ ^ε2), 2.11 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,10), 1.82 (m, 2 H, 2 CH₂ ^δ1), 1.70 (m, 2 H, 2 CH₂ ^β2), 1.57 (m, 6 H, 2 CH₂ ^δ2 および 2 CH^β1), 1.50 1.15 (m, 66 H), 0.84 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH₃ ¹⁸). MS (+ES) : 1264.9 [M+Na]。

実施例２０
ＲＧ００／７８７

１，６−ジアミノヘキセン（７２ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に溶解した溶液およびＫ_２ＣＯ_３（１８０ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデート（７５０ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ、２等量）溶液を加えた。反応物を室温で一晩攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水（３０ｍＬ）を加えた。水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機層を水、０．１ＭＨＣｌ、水および食塩水（各２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過、蒸発およびＳｉＯ_２（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ：９／１、Ｒｆ＝０．３３）上でカラムクロマトグラフィにより精製し、油を与えた。収率：６５０ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ、９５％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ 7.73 (m, 4 H, 2 N^αH および 2 N^1'H), 6.68 (t, 2 H, J = 5.0, 2 N^εH), 5.28 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.12 (m, 2 H, 2 CH^α), 2.99 (q, 4 H, J = 6.4, 2 CH^1'), 2.83 (q, 4 H, J = 6.6, 2 CH₂ ^ε), 2.07 (dt, 4 H, J = 3.2, 7.0, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.52 (m, 2 H, 2 CH^β), 1.42 (m, 6 H, 2 CH₂ ³ および 2 CH^β), 1.32 (s, 18 H, 2 C(CH₃)₃), 1.31 1.15 (m, 56 H, 2 x 10 CH₂ ^Tail, 2 CH₂δ, 2 CH₂ ^γ, 2 CH₂ ^2' および 2 CH₂ ^3'), 0.82 (t, 6 H, J = 6.8, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例２１
ＲＧ００／８７３：ＧＳＮ１４

保護化合物（６４０ｍｇ、０．５８１ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を加えた。本能物を室温で１時間攪拌し、それから（共役的蒸発をさせるためのいくらかのＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）を使用して）蒸発させた。それから油性残渣物をＣＨ_２Ｃｌ_２に溶解し、１０％水性Ｋ_２ＣＯ_３（１０ｍＬ）、水および食塩水で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させることで淡褐色固体を与え、これをＥｔ_２Ｏで粉砕、濾過および乾燥することで白色固体を与えた。収率：４６０ｍｇ（０．５１０ｍｍｏｌ、８８％）。メタノール中の濃ＨＣｌを使用して脱保護を実行し得て、ＧＳＮ１４なる名称の塩酸塩を与える。¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ 7.80 (m, 4 H, 2 N^αH および 2 N^1'H), 5.28 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.16 (m, 2 H, 2 CH^α), 3.20 (bs, 4 H, 2 NH₂), 2.99 (q, 4 H, J = 6.4, 2 CH^1'), 2.53 (m, 4 H, 2 CH₂ ^ε), 2.10 (dt, 4 H, J = 3.2, 7.0, 2 CH₂ ²), 1.91 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.52 (m, 2 H, 2 CH^β), 1.48 (m, 2 H, 2 CH^β),1.42 (m, 4 H, 2 CH₂ ³), 1.31 1.15 (m, 56 H, 2 x 10 CH₂ ^Tail, 2 CH₂ ^δ, 2 CH₂ ^γ, 2 CH₂ ^2' および 2 CH₂ ^3'), 0.81 (t, 6 H, J = 6.8, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例２２
ＲＧ００／８７４

ＲＧ００／８７３（１００ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３２ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ、２．１等量）を含む水およびＴＨＦ（２０ｍＬ）の１／９混合液に、Ｎ，Ｎ−ビス−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデート（１０３ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ、２．１等量）を加えた。反応物を室温で２０時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを除去し、残渣物を水（１０ｍＬ）およびＣＨＣｌ_３（４０ｍＬ）で希釈した。有機層をデカンテーションし、連続して水（１０ｍＬ）、０．１ＭＨＣｌ（２０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）および食塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥、濾過および蒸発させた。生じる油をＥｔ_２Ｏより結晶化した。白色固体を採取した。収率：１６４ｍｇ（０．１０５ｍｍｏｌ、９５％）。

実施例２３
ＲＧ００／８７５＝ＧＳＣ１９７

ＲＧ００／８７４（１６０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶解した溶液に濃ＨＣｌ（５ｍＬ）を加えた。反応物を１時間攪拌し、それから蒸発し乾燥させた。それから残渣物を水（３０ｍＬ）に溶解し、珪華フリット漏斗（Ｎ°３）で濾過し、共役的蒸発をさせるためのＥｔＯＨを使用して蒸発し乾燥させた。残渣物を最少量のメタノールに溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させて淡褐色固体として目的の化合物を与えた。収率：１２４ｍｇ（０．９５１ｍｍｏｌ、９５％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ 8.59 (t, 2 H, J = 5.0, 2 N^1'H), 8.22 (m, 6 H, 2 N^α2H₃ ⁺), 7.96 (m, 6 H, 2 N^ε2H₃ ⁺), 7.89 (d, 2 H, J = 8.0, 2 N^α1H), 7.89 (t, 2 H, J = 5.8, 2 N^ε1H), 5.29 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.14 (dt, 2 H, J = 5.4, 8.0, 2 CH^α1), 3.70 (m, 2 H, 2 CH^α2), 3.05 (m, 4 H, 2 CH₂ ^1'), 2.98 (q, 4 H, J = 5.8, 2 CH₂ ^ε1), 2.72 (m, 4 H, 2 CH₂ ^ε2), 2.09 (t, 4 H, J = 7.0, 2 CH₂ ²), 1.94 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.69 (m, 2 H, 2 CH₂ ^β2), 1.55 (m, 6 H, 2 CH₂ ^δ2 および 2 CH^β1), 1.48 1.15 (m, 56 H), 0.81 (t, 6 H, J = 6.6, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例２４
ＲＧ００／８０４

ＲＧ００／７９４（１１０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（７ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（７ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから共役的蒸発をさせるためのＥｔＯＨを使用して真空下で溶媒を除去した。残渣物を水に溶解し、濾過および蒸発させた。化合物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させた。生じる固体を濾過し、白色粉末として採取した。収率：８８ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ、９４％）．^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ_６−ＤＭＳＯ）：δ 8.69 (d, 2 H, J = 7.8, 2 NH^α2), 8.30 (m, 2 H, 2 NH^α1), 8.12 (m, 2 H, 2 NHC¹), 7.95 (m, 12 H, 2 NH^ε2, 2 NH^ε3 および NH^α3), 5.29 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.20 (m, 2 H, 2 CH^α1), 4.08 (m, 2 H, 2 CH^α3), 3.84 (m, 2 H, 2 CH^α2), 3.65 (m, 2 H, 2 NH⁺), 3.10 (m, 12 H, 2 CH₂ ^3' および 2 CH₂ ^4'), 3.05 (m, 2 H, 2 CH^1'), 2.95 (m, 2 H, 2 CH^1'), 2.74 (m, 8 H, 2 CH₂ ^ε1および 2 CH₂ ^ε2), 2.11 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,10), 1.80 1.12 (m, 82 H), 0.84 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH₃ ¹⁸). MS (+ES) : m/z [M+H]²⁺ 750.1。

実施例２５
ＲＧ００／７９７

ビスアミノ化合物（１４０ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４８ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ_２ＣＯ_３（４０ｍｇ、ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液および（Ｂｏｃ）_４−ＫＫＫＯＳｕ（２５６ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。それから反応物を室温で１６時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、残渣物をＣＨＣｌ_３に再溶解した。水（１０ｍＬ）を加え、有機層を抽出し、５％Ｋ_２ＣＯ_３、水（１０ｍＬ）および食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発の後、残渣物をＳｉＯ_２（溶出液：ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ／ＮＥｔ_３：８５／１５／１、Ｒｆ＝０．３２）上で精製した。それからＥｔ_２Ｏを加え、生じる白色固体を濾過分離する。収率：０．３１０ｇ（０．１２１ｍｍｏｌ、８５％）．^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ_６−ＤＭＳＯ）：δ 8.00 (m, 2 H, 2 NH^α),7.85 (m, 2 H, 2 NH^α), 7.75 (m, 4 H, 2 NH^α および 2 NHC¹), 6.85 (m, 2 H, 2 N^αH), 6.68 (m, 6 H, 2 x 3 N^εH), 5.29 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.18 (m, 2 H, 2 CH^α), 4.09 (m, 4 H, 2 x 2 CH^α), 3.82 (m, 4 H, 2 x 2 CH^α), 3.00 (m, 6 H, 2 CH₂ ^ε および 2 CH^1'), 2.75 (m, 2 H, 2 CH^1'), 2.84 (m, 12 H, 2 x 3 CH₂ ^ε), 2.47 (m, 8 H, 2 x 2 CH₂ ^4'), 2.29 (m, 4 H, 2 CH₂ ^3'), 2.09 (t, 4 H, J = 9.0, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,10), 1.65 1.15 (m, 168 H), 0.82 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例２６
ＲＧ００／８０５

ＲＧ００／７９７（１１０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（７ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（７ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから溶媒を、共役的蒸発をさせるためのＥｔＯＨを使用して真空下で除去した。残渣物を水（４０ｍＬ）に溶解し、濾過および蒸発させた。化合物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させた。生じる固体を濾過し、淡褐色粉末として採取した。収率：８８ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ、９４％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ8.80 (d, 2 H, J = 7.8, 2 NH^α), 8.30 (m, 6 H, 2 x 3 NH^α), 8.03 (m, 14 H, 2 NHC¹ および 2 x 3 N^εH₃ ⁺), 5.30 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.28 (m, 2 H, 2 CH^α), 4.18 (m, 2 H, 2 CH^α), 4.08 (m, 2 H, 2 CH^α), 3.85 (m, 2 H, 2 CH^α), 3.65 (m, 2 H, 2 NH⁺), 3.10 (m, 16 H, 2 CH₂ ^ε1, 2 CH₂ ^3' および 2 x 2 CH₂ ^4'), 3.02 (m, 2 H, 2 CH^1'), 2.95 (m, 2 H, 2 CH^1'), 2.74 (m, 8 H, 2 x 3 CH₂ ^ε), 2.10 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,10), 1.71 (m, 4 H, 2 CH₂ ^β), 1.60 1.17 (m, 108 H), 0.84 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH₃ ¹⁸).. MS (+ES) : m/z [M+H]²⁺ 750.1。

実施例２７
ＲＧ００／８２３

ビスアミノ化合物（７６ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶解した溶液に、連続してＫ_２ＣＯ_３（２２ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ、２．０６等量）を水（２ｍＬ）に溶解した溶液およびＢｏｃ_３（Ｋ−^ε−Ｋ）−ＯＳｕ（１０５ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（８ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。それから反応物を室温で１６時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、残渣物をＣＨＣｌ_３に再溶解した。水（１０ｍＬ）を加え、有機層を抽出し、水（２ｘ１０ｍＬ）および食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過、および蒸発の後、残渣物をＳｉＯ_２（溶出液：ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ／ＮＥｔ_３：９１／８／１、Ｒｆ＝０．３０）上で精製した。それからＥｔ_２Ｏを加え、生じる白色固体を濾過分離する。収率：０．１２４ｇ（０．０５９ｍｍｏｌ、７７％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ 7.79 (m, 4 H, 2 NH^α および 2 NH^ε), 7.67 (m, 4 H, 2 NHC¹ および 2 NH^ε), 6.69 (m, 2 H, 2 NH^ε), 8.28 (m, 8 H, 2 x 2 NH^α), 5.28 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.10 (m, 2 H, 2 CH^α1), 3.78 (m, 4 H, 2 x 2 CH^α), 3.00 (m, 6 H, 2 CH^ε および 2 CH^1'), 2.98 (m, 2 H, 2 CH^1'), 3.13 (m, 12 H, 2 x 2 CH₂ ^ε), 2.47 (m, 4 H, 2 CH₂ ^3'), 2.25 (m, 8 H, 2 x 2 CH₂ ^4'), 2.08 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,10), 1.80 1.14 (m, 138 H), 0.82 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例２８
ＲＧ００／８３０

ＲＧ００／８２３（１２４ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（６ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから溶媒を、共役的蒸発をさせるためのＥｔＯＨを使用して真空下で除去した。残渣物を水（４０ｍＬ）に溶解し、濾過および蒸発させた。化合物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ_２Ｏで沈殿させた。生じる固体を濾過し、淡桃色粉末として採取した。収率：１０１ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ、９６％）．¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) : δ 8.73 (t, 2 H, J = 7.8, 2 NH^ε), 8.67 (m, 2 H, 2 NH^ε1), 8.28 (m, 8 H, 4 NH₂ ^α), 8.15 (m, 6 H, 2 NHC¹, 2 NH^ε2 および 2 NH^ε3), 7.99 (m, 2 H, 2 NH^α1), 5.29 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.09 (m, 2 H, 2 CH^α1), 3.72 (m, 4 H, 2 CH^α3および 2 CH^α2), 3.65 (m, 2 H, 2 NH⁺), 3.08 (m, 10 H, 2 CH₂ ^ε1, 2 CH₂ ^ε2,2 CH₂ ^3' および 2 CH₂ ^4'), 2.74 (m, 2 H, 2 CH₂ ^1'), 2.11 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,10), 1.80 1.14 (m, 82 H), 0.83 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH₃ ¹⁸)。

実施例２９ないし４０は、ＧＳＣ１７０およびその誘導体の合成のための代替経路を記載する。

実施例２９（ＲＧ００／７８１）

Ｎ−ε−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシン（４４６ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５３ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ_２ＣＯ_３（２８８ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を水（８ｍＬ）に溶解した溶液およびオレオイルコハク酸イミデート（７５４ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１５時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦを蒸発させた。水およびＨＣｌ_３（各２５ｍＬ）を加え、混合液を１ＭＨＣｌによりｐＨ：２まで酸性化した。有機層を分離し、水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ２０ｍｌ）で抽出した。有機層を食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させ、白色固体を与えた。収率：９４０ｍｇ（１．８４ｍｍｏｌ、９７％）．Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．２８（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ９２：８）．
RMN-¹H (500 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 5.33 (m, 2 H, CH^9,10), 4.15 (m, 1 H, CH^α), 3.05 (m, 2 H, CH₂ ^ε), 2.15 (m, 2 H, J = 6.0 Hz, CH₂ ²), 1.98 (m, 4 H, CH₂ ^8,11), 1.80-1.48 (m, 4 H, CH₂ ³, CH₂ ^β), 1.46-1.20 (m, 33 H, CH₂ ^γ, CH₂ ^δ, C(CH₃)₃, 10 CH₂ ^ol), 0.84 (t, 3 H, J = 6.8 Hz, CH₃ ¹⁸).
RMN-¹³C (125 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 178.6, 174.4, 156.2, 129.9, 129.7, 78.9, 54.5, 40.0, 36.4, 31.9, 31.3, 29.8, 29.5, 29.4, 29.3, 28.5, 27.3, 27.2, 25.9, 25.0, 22.9, 22.7, 14.1。
HRMS (+ ESI): C₂₉H₅₄N₂O₅Na [M+Na], 計算値: m/z = 533.3930, 実測値： m/z = 533.3903

実施例３０（ＲＧ００／５１８）

アミノ酸ＲＧ００／７８１（４１０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｍｌ）に溶解した溶液に、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジン−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（４１８ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２８０μｌ、１．６１ｍｍｏｌ）および１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン（６４μｌ、０．３１ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１６時間攪拌した。溶媒を除去し、ＣＨＣｌ_３（４０ｍＬ）を加え、有機層を５％ＮａＨＣＯ_３（３ｘ１２ｍＬ）および食塩水（３０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させた。残渣物を逆転相（Ｃ−１８）でカラムクロマトグラフィにより精製し、シロップを与えた。収率：２９５ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ、８１％）、Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．４６（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ８５：１５）、Ｒｆ（Ｃ−１８）：０．１５（ＭｅＯＨ）．
RMN-¹H (500 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 7.49 (m, 2 H, NHCO), 6.52 (m, 2 H, N^αHCO), 5.32 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.81 (m, 2 H, NHBOC), 4.29 (m, 2 H, CH^α), 3.30 (m, 4 H, 2 CH₂ ^1'), 3.05 (m, 4 H, J = 6.0 Hz, 2 CH₂ ^ε), 2.76 (s broad, 8 H, 4 CH₂ ^4'), 2.61 (s broad, H, 2 CH₂ ^3'), 2.19 (t, 4 H, J = 7.4 Hz, 2 CH₂ ²), 1.97 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.72 (m, 6 H, 2 CH₂ ^2', 2 CH_a ^β), 1.68 (m, 6 H, 2 CH₂ ³, 2 CH_b ^β), 1.52-1.15 (m, 66 H, 2 CH₂ ^γ, 2 CH₂ ^δ, 2 x 10 CH₂ ^ol, 2 C(CH₃)₃), 0.85 (t, 6 H, J = 6.7 Hz, 2 CH₃ ¹⁸).
RMN-¹³C (125 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 173.6, 172.3, 156.2, 130.0, 129.7, 79.0, 55.7, 53.1, 52.0, 40.0, 38.0, 36.5, 32.0, 31.9, 29.7, 29.5, 29.3, 29.2, 28.4, 27.2, 25.8, 25.7, 24.8, 22.7, 22.6, 14.1.
HRMS (+ ESI): C₆₈H₁₂₉N₈O₈ [M+H], 計算値: m/z = 1185.9928, 実測値： m/z = 1186.0006.

実施例３１（ＧＳＣ１７０）

ＲＧ００／５１８（７１０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解した溶液に、４．９ＮＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色固体を与えた。収率５４２ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ、８０％）、Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．６３（ＭｅＯＨ−ＮＨ_４ＯＨ８０：２０）。
RMN-¹H (500 MHz, DMSO-d₆), δ (ppm): 8.12 (m, 2 H, NHCO), 8.05-7.87 (m, 8 H, N^αHCO, 2 N^εH₃ ⁺), 5.31 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.10 (m, 2 H, J = 5.0 Hz, 8.4 Hz, 2 CH^α), 3.70 (s broad, 4 H, 4 CH _axial ^4'), 3.44 ( s broad, 4 H, 4 CH _ecuat. ^4'), 3.10 (m, 8 H, 2 CH₂ ^1', 2 CH₂ ^3'), 2.72 (m, 4 H, J = 6.2 Hz, 2 CH₂ ^ε), 2.12 (m, 4 H, J = 6.8 Hz, 2 CH₂ ²), 1.95 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.84 (m, 4 H, J = 6.3 Hz, 2 CH₂ ^2'), 1.65-1.40 (m, 12 H, 2 CH₂ ^β, 2 CH₂ ^δ, 2 CH₂ ³), 1.35-1.15 (m, 44 H, 2 CH₂ ^γ, 2 x 10 CH₂ ^ol), 0.83 (t, 6 H, J = 6.7 Hz, 2 CH₃ ¹⁸)。
RMN-¹³C (125 MHz, DMSO-d₆), δ (ppm): 172.5, 172.1, 129.7, 55.0, 53.7, 52.7, 48.1, 40.1, 39.9, 39.8, 39.6, 39.4, 39.3, 39.1, 38.5, 31.4, 29.3, 29.2, 28.9, 28.8, 28.7, 28.7, 26.7, 25.3, 22.2, 14.1。
HRMS (+ ESI): C₅₈H₁₁₃N₈O₄ [M+H], 計算値: m/z = 985.8879, 実測値： m/z = 985.8805。

実施例３２（化合物４）

Ｎ−δ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−オルニチン（４４０ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５３ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ_２ＣＯ_３（２８８ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を水（８ｍＬ）に溶解した溶液およびオレオイルコハク酸イミデート（７５５ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１５時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦを蒸発させた。水およびＣＨＣｌ_３（２５ｍＬｅａｃｈ）を加え、混合液を１ＭＨＣｌによりｐＨ：２まで酸性化した。有機層を分離し、水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ２０ｍｌ）で抽出した。有機層を食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させ、白色固体を与えた。収率：８９８ｍｇ（１．８１ｍｍｏｌ、９６％）．Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．１６（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ９２：８）。
RMN-¹H (500 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 7.03 (m, 1 H, NHCO), 5.32 (m, 2 H, CH^9,10), 4.40 (m, 1 H, CH^α), 3.11 (m, 2 H, CH₂ ^δ), 2.19 (t, 2 H, J = 7.4 Hz, CH₂ ²), 1.99 (m, 4 H, CH₂ ^8,11), 1.85 (m, 1 H, CH_a ^β), 1.70-1.20 (m, 34 H, CH_b ^β, CH₂ ³, CH₂ ^γ, C(CH₃)₃, 10 CH₂ ^ol), 0.87 (t, 6 H, J = 6.7 Hz, CH₃ ¹⁸)。
RMN-¹³C (125 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 176.6, 174.4, 156.5, 130.0, 129.7, 79.4, 53.0, 39.8, 36.4, 33.9, 31.9, 29.8, 29.5, 29.4, 29.3, 29.1, 28.9, 28.4, 27.2, 26.4, 25.7, 25.6, 24.8, 22.7, 14.1.
HRMS (+ ESI): C₂₈H₅₂N₂O₂ [M+H], 計算値: m/z = 519.3774, 実測値： m/z = 519.3767。

実施例３３（化合物５）

アミノ酸４（５４８ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（５．５ｍｌ）に溶解した溶液に、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジン−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（５７４ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（３８５μｌ、２．２０ｍｍｏｌ）および１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン（８４μｌ、０．４１ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１８時間攪拌した。溶媒を除去し、ＣＨＣｌ_３（４０ｍＬ）を加え、有機層を５％ＮａＨＣＯ_３（３ｘ１０ｍＬ）および食塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させた。残渣物を、逆転相（Ｃ−１８）でカラムクロマトグラフィにより精製し、シロップを与えた。収率：３６０ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ、７６％）、Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．４６（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ８５：１５）、Ｒｆ（Ｃ−１８）：０．２２（ＭｅＯＨ）。
RMN-¹H (500 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 7.60 (m, 2 H, 2 NHCO), 6.50 (m, 2 H, J = 6.5 Hz, 2 N^αHCO), 5.36 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.85 (m, 2 H, 2 NHBOC), 4.48 (m, J = 5.7 Hz, 2 H, 2 CH^α), 3.38 (m, J = 13.2 Hz, J = 6.6 Hz, 2 H, 2 CH_a ^1'), 3.28 (m, 4 H, 2 CH_b ^1', 2 CH_a ^δ), 3.11 (m, 2 H, J = 13.2 Hz, J = 6.3 Hz, 2 CH_b ^δ), 2.48 (m, 12 H, 2 CH₂ ^3', 4 CH₂ ^4'), 2.23 (t, 4 H, J = 7.8 Hz, 2 CH₂ ²), 2.03 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.87-1.40 (m, 34 H, 2 CH₂ ^β, 2 CH₂ ^2', 2 CH₂ ³, 2 CH₂ ^γ, 2 C(CH₃)₃), 1.30-1.22 (m, 40 H, 2 x 10 CH₂ ^ol), 0.91 (t, 6 H, J = 6.4 Hz, 2 CH₃ ¹⁸)。
RMN-¹³C (125 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 173.2, 171.5, 156.4, 130.0, 129.8, 79.2, 57.0, 53.3, 52.2, 39.7, 39.2, 36.7, 31.9, 30.6, 29.8, 29.5, 29.3, 29.2, 28.5, 27.2, 26.5, 25.7, 25.2, 22.7, 14.1。
HRMS (+ ESI): C₅₈H₁₁₃N₈O₄ [M+H], 計算値: m/z 1157.9615, 実測値： m/z = 1157.9531。

実施例３４（ＧＳＣ１７０Ｏｒｎ）

化合物５（１３８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、４．９ＮＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ）を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色固体を与えた。収率１１６ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ、８３％）、Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．６１（ＭｅＯＨ−ＮＨ_４ＯＨ８０：２０）。
RMN-¹H (500 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 8.24 (s broad, 2 H, 2 NHCO), 8.04 (d, 2 H, J = 7.8 Hz, 2 NH^αCO), 7.94 ( s broad, 6 H, 2 NH₃ ⁺), 5.33 (m, 4 H, 2 CH^9,10), 4.20 (m, J = 5.5 Hz, 2 H, 2 CH^α), 3.76 (m, 4 H, 4 CH_axial ^4'), 3.48 (m, 4 H, 4 CH_ecuat ^4'), 3.12 (m, 8 H, 2 CH₂ ^1', 2 CH₂ ^3'), 2.76 (m, 4 H, J = 5.7 Hz, 2 CH₂ ^δ), 2.14 (t, 4 H, J = 7.4 Hz, 2 CH₂ ²), 1.98 (m, 8 H, 2 CH₂ ^8,11), 1.84 (m, 4 H, 2 CH₂ ^2'), 1.70 (m, 2 H, 2 CH_a ^β), 1.64-1.40 (m, 10 H, 2 CH_b ^β, 2 CH₂ ³, 2 CH₂ ^γ), 1.24 (m, 40 H, 2 x 10 CH₂ ^ol), 0.86 (t, 6 H, J = 6.7 Hz, 2 CH₃ ¹⁸)。
RMN-¹³C (125 MHz, CDCl₃), δ (ppm): 172.5, 171.8, 129.7, 79.3, 53.8, 51.9, 48.1, 38.3, 35.3, 31.4, 29.3, 29.2, 28.9, 28.8, 28.7, 26.7, 25.3, 22.2, 14.1。
HRMS (+ ESI): C₅₈H₁₁₃N₈O₄ [M+H], 計算値: m/z 957.8572, 実測値： m/z = 957.8575。

実施例３５（化合物７）

Ｎ−γ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ジアミノ酪酸（２０３ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２７ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ_２ＣＯ_３（１４１ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を水に（４ｍＬ）に溶解した溶液およびオレオイルコハク酸イミデート（３７１ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１６時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦを蒸発させた。水およびＣＨＣｌ_３（各１０ｍＬ）を加え、混合液を１ＭＨＣｌによりｐＨ：２まで酸性化した。有機層を分離し、水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ１０ｍｌ）で抽出した。有機層を食塩水（８ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させ、シロップを与えた。収率：４４１ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ、９８％）．Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．３５（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ８５：１５）。

実施例３６（化合物８）

アミノ酸７（４１０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｍｌ）に溶解した溶液に、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジン−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（４４２ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２９６μｌ、１．７０ｍｍｏｌ）および１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン（６７μｌ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１６時間攪拌した。溶媒を除去し、ＣＨＣｌ_３（４０ｍＬ）を加え、有機層を５％ＮａＨＣＯ_３（３ｘ１２ｍＬ）および食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させた。残渣物を逆転相（Ｃ−１８）でカラムクロマトグラフィにより精製し、シロップを与えた。収率：３１６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ、８５％）、Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．５１（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ８５：１５）、Ｒｆ（Ｃ−１８）：０．１４（ＭｅＯＨ）。

実施例３７（ＧＳＣ１７０Ｄａｂ）

化合物８（２４４ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解した溶液に、４．９ＮＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色固体を与えた。収率１９８ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ、８２％）、Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．５２（ＭｅＯＨ−ＮＨ_４ＯＨ８５：１５）。

実施例３８（化合物１０）

Ｎ−β−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ジアミノプロピオン酸（５６０ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（７７ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ_２ＣＯ_３（４１６ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ）を水（１１ｍＬ）に溶解した溶液およびオレオイルコハク酸イミデート（１．０４ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１８時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦを蒸発させた。水およびＣＨＣｌ_３（各３０ｍＬ）を加え、混合液を１ＭＨＣｌによりｐＨ：２まで酸性化した。有機層を分離し、水層をＣＨＣｌ_３（２ｘ３０ｍｌ）で抽出した。有機層を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させ、白色固体を与えた。収率：１．２５ｇ（２．６７ｍｍｏｌ、９７％）．Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．３５（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ８５：１５）。

実施例３９（化合物１１）

アミノ酸１０（１．２２ｇ、２．６０ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１４ｍｌ）に溶解した溶液に、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジン−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（１．３５ｇ、２．６０ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（９１０μｌ、５．２１ｍｍｏｌ）および１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン（２０６μｌ、１．００ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１５時間攪拌した。溶媒を除去し、ＣＨＣｌ_３（７５ｍＬ）を加え、有機層を５％ＮａＨＣＯ_３（３ｘ３０ｍＬ）および食塩水（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過および蒸発させた。残渣物を逆転相（Ｃ−１８）でカラムクロマトグラフィにより精製し、シロップを与えた。収率：９４０ｍｇ（０．８５ｍｍｏｌ、８５％）、Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．５２（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ８５：１５）、Ｒｆ（Ｃ−１８）：０．１６（ＭｅＯＨ）。

実施例４０（ＧＳＣ１７０Ｄａｐ）

化合物１１（３５５ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に溶解した溶液に、４．９ＮＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色固体を与えた。収率２８０ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ、８４％）、Ｒｆ（ＳｉＯ_２）：０．３４（ＭｅＯＨ−ＮＨ_４ＯＨ９９：１）。

実施例４１
リシン−ポリアミンに基づくジェミニ化合物を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドの細胞内へのトランスフェクション
リシン−ポリアミンに基づくジェミニ化合物を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドの細胞内へのトランスフェクション。接着細胞系ＣＨＯ−ＤＧ４４を用いて、トランスフェクション研究を行った。完全培地は、１０％ｖ／ｖウシ胎児血清を補足したＭＥＭアルファ培地および１ｘＬ−グルタミンにより構成された。全ての培地および補足物を、Life Technologiesから得た。インビトロ遺伝子トランスフェクション。約ウェル当たり３ｘ１０^４細胞数の密度で、トランスフェクションの１６ないし１８時間前に、細胞をＢｉｏｃａｔのポリ−Ｄ−リシン９６ウェル・ブラック・プレート（ＢＤ）に播種した。トランスフェクションに関して、ウェル当たり０．１ｍｇのルシフェラーゼレポーター遺伝子プラスミド、ｐＧＬ３−コントロールベクター（Promega）を、様々な濃度のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物および複合物質と共に、最終容量１００μｌでインキュベートした。室温で３０分間インキュベートした後、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）培地（Life Technologies）をトランスフェクション混合物に加え、溶液を細胞上に載せた（ウェル当たり最終容量：１００μｌ）。３７℃で３時間または一晩のインキュベートした後、トランスフェクション溶液を完全培地で置換し、細胞をさらに３７℃でインキュベートした。トランスフェクション後、約４８時間して、レポーター遺伝子アッセイを、製品ガイドライン（Roche Diagnostics）に従って行った。Packard TopCount NXT Microplate ScintillationおよびLuminescence Counterで発光を測定した。図４。ジェミニ界面活性剤ＧＳＣ１０２を用いたＣＨＯ−ＤＧ４４細胞のトランスフェクション。Ｘ軸上の数字は、ｍＭでのジェミニ化合物濃度を表す。図の右側の５本の黒いバーは、ＤＮＡをポリ−リシンと先に混合した場合に得られたデータを示す。左側の５本の黒いバーは、ポリ−リシンを用いなかった場合のデータを示す。Ｙ軸上の数字は、ルシフェラーゼアッセイ由来のＣＰＳ（秒当たりの計数）を表す。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ±平均の標準誤差を表す。図５。ジェミニ界面活性剤ＧＳＮ１４を用いたＣＨＯ−ＤＧ４４細胞のトランスフェクション。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ（秒当たりの計数）±平均の標準誤差を表す。図６。ジェミニ界面活性剤ＧＳＣ１９７を用いたＣＨＯ−ＤＧ４４細胞のトランスフェクション。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ（秒当たりの計数）±平均の標準誤差を表す。

ジェミニ界面活性剤（ＧＳＣ１７０）を用いる、細胞系／一次細胞への蛍光オリゴヌクレオチドのデリバリー
ＧＳＣ１７０（水中で１ｍｇ／ｍｌ）をＯｐｔｉｍｅｍ血清フリー培地で１０ｘ溶液に希釈した。ＦＩＴＣ標識オリゴヌクレオチドを、同様にＯｐｔｉｍｅｍで１０ｘの最終濃度で希釈した。ついで、ＧＳＣ１７０およびオリゴヌクレオチドを１：１で混合し、室温で１５分間インキュベートした。接着細胞系：ＲＢＬ−２Ｈ３、Ｊ７７４および１６ＨＢＥ１４ｏを、トランスフェクションの前日にプレートから除いた。ネズミの一次Ｔ細胞に、不活性化段階またはＴヘルパー２細胞への分化後いずれかでトランスフェクションした。
ＧＳＣ１７０：オリゴ複合体をＯｐｔｉｍｅｍで１ｘに希釈し、Ｏｐｔｉｍｅｍで一度洗浄した接着細胞に加え、ついで、全ての培地を除去した。オリゴヌクレオチドの核デリバリーを２４時間の期間に渡って観察し、市販の試薬であるリポフェクタミン２０００（ＬＦ２Ｋ）と比較した。

トランスフェクション効率を表１に示す：

本明細書に引用される、特許および特許出願に限らずそれらを含む全ての出版物は、仮に各出版物が明確に個々において、仮にその内容が十分記載されているとしても出典を明示することでその内容を本明細書の一部とすることを意図されるとしても、出典を明示することで本明細書の一部とするものである。

図１は、疎水性末端がジアミノ酸のα−アミノ基に結合しており、さらにはこれがアミド結合によりポリアミン部位に結合している、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の合成の一般的スキームを示す。図２は、疎水性末端がジアミノ酸の末端アミノ基に結合しており、さらにはこれがアミド結合によりポリアミン部位に結合している、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の合成の一般的スキームを示す。図３は、アミノ酸がアミド結合によりジアミノ酸のα−アミノ基に結合しており、さらにはこれがアミド結合によりポリアミン部位に結合している、ジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の合成の一般的スキームを示す。図４は、ＧＳＣ１０２を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドのＣＨＯ−ＤＧ４４細胞内へのトランスフェクションを示す。Ｘ軸上の数字は、ｍＭでのジェミニ化合物濃度を表す。図の右側の５本の黒いバーは、ＤＮＡをポリ−リシンと先に混合した場合に得られたデータを示す。左側の５本の黒いバーは、ポリ−リシンを用いなかった場合のデータを示す。Ｙ軸上の数字は、ルシフェラーゼアッセイ由来のＣＰＳ（秒当たりの計数）を表す。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ±平均の標準誤差を表す。図５は、ＧＳＮ１４を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドのＣＨＯ−ＤＧ４４細胞内へのトランスフェクションを示す。Ｘ軸上の数字は、ｍＭでのジェミニ化合物濃度を表す。図の右側の５本の黒いバーは、ＤＮＡをポリ−リシンと先に混合した場合に得られたデータを示す。左側の５本の黒いバーは、ポリ−リシンを用いなかった場合のデータを示す。Ｙ軸上の数字は、ルシフェラーゼアッセイ由来のＣＰＳ（秒当たりの計数）を表す。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ±平均の標準誤差を表す。図６は、ＧＳＣ１９７を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドのＣＨＯ−ＤＧ４４細胞内へのトランスフェクションを示す。Ｘ軸上の数字は、ｍＭでのジェミニ化合物濃度を表す。図の右側の５本の黒いバーは、ＤＮＡをポリ−リシンと先に混合した場合に得られたデータを示す。左側の５本の黒いバーは、ポリ−リシンが用いなかった場合のデータを示す。Ｙ軸上の数字は、ルシフェラーゼアッセイ由来のＣＰＳ（秒当たりの計数）を表す。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ±平均の標準誤差を表す。

Claims

ジアミノ酸−ポリアミンまたはジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン骨格を有し、式（I）：

［式中：
ｍは０ないし６であり；
ｎは０ないし７であり；
ｐは０ないし６であり；ここに
Ｘは、結合、ＣＨ_２、（ＣＨ_２）_２、ｑが２ないし６であるＮＨ（ＣＨ_２）_ｑＮＨまたは

（式中、Ｒ_９ないしＲ_１２は、同一であっても、または異なっていてもよく、Ｈ、Ｏまたはｒが０ないし６であるＣ_ｒＨ_２ｒ＋１から選択される：ただし、Ｒ_９およびＲ_１２がＯであるか、あるいはＲ_９およびＲ_１１がＯである場合は、Ｒ_１０およびＲ_１１またはＲ_１０およびＲ_１２は、各々Ｈである）
であり；
Ｙは、結合、ＣＨ_２、

（式中、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７およびＲ_８は水素であり、Ｒ_１およびＲ_２は、２４個までの炭素原子を有し、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合した飽和または不飽和ヒドロカルボキシ基であるか；あるいは
Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５およびＲ_６は、水素であり、Ｒ_１およびＲ_２は、２４個までの炭素原子を有し、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合した飽和または不飽和ヒドロカルボキシ基であり、Ｒ_７およびＲ_８は、同一であっても、または異なっていてもよく、アミド（ＣＯＮＨ）結合により一緒になって結合し、さらに、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合し、直鎖または分枝鎖であり、１つまたはそれ以上のアミノ酸から形成される、一般式（ＩＩ）：

（ここに、ｐ１およびｐ２の値は、同じであっても、または異なっていてもよく、０ないし５、好ましくは１であり；
ｐ３およびｐ４の値は、同じであっても、または異なっていてもよく、０ないし５、好ましくは０であり；
Ａ１、Ａ３およびＡ４は、同じであっても異なっていてもよく、セリン、リシン、オルニチン、トレオニン、ヒスチジン、システイン、アルギニンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ａ２は、リシン、オルニチンおよびヒスチジンから選択されるアミノ酸である）
を有する、ペプチドである］
で示される一般構造に一致する、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物またはその医薬上許容される塩。
Ｒ_１およびＲ_２が互いに同一であり、Ｒ_３およびＲ_４が互いに同一であり、Ｒ_５およびＲ_６が互いに同一であり、Ｒ_７およびＲ_８が互いに同一である対称性である、請求項１に記載の化合物。
Ａ１がリシン、セリンまたはトレオニンであり、Ａ３およびＡ４がリシン、オルニチン、ヒスチジンまたはアルギニンである、請求項１または２に記載の化合物。
ヒドロカルボキシ基が：

より選択される、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物。
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが（ＣＨ_２）または（ＣＨ_２）_２であり、Ｙが結合であり、ｐが０ないし４である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが、ｑが２ないし５であるＮＨ（ＣＨ_２）_ｑＮＨであり、Ｙが結合であり、ｐが２ないし５である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが

［式中、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１およびＲ_１２は、全てＨである］
であり、Ｙが結合であり、ｐが２ないし５である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが（ＣＨ_２）または（ＣＨ_２）_２であり、ｐが０ないし４であり、Ｙが

である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが、ｑが２ないし５であるＮＨ（ＣＨ_２）_ｑＮＨであり、ｐが２ないし５であり、Ｙが

である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが

［式中、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１およびＲ_１２は全てＨである］
であり、ｐが２ないし５であり、Ｙが

である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
Ｘが

であり、Ｙが結合であり、ｐが１ないし６であり、ｎが１ないし７である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
式：

で示される化合物ＧＳＮ１１。
式：

で示される化合物ＧＳＮ１４。
式：

で示される化合物ＧＳＣ１０２。
式：

で示される化合物ＧＳＣ１５７。
式：

で示される化合物ＧＳＣ１７０。
式：

で示される化合物ＧＳＣ１８４。
式：

で示される化合物ＧＳＣ１０１。
インビボまたはインビトロでの、真核または原核細胞内へのＤＮＡもしくはＲＮＡまたはそのアナログのトランスフェクションを可能にすることにおける、請求項１ないし１８のいずれか１項に記載のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の使用。
化合物が：
（ｉ）中性担体、または
（ｉｉ）複合化試薬
よりなる群から選択される１つまたはそれ以上の補足物と組み合わせて使用される、請求項１９に記載のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物。
中性担体がジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）である、請求項２０に記載の使用。
複合化試薬がＰＬＵＳ試薬である、請求項２０に記載の使用。
複合化試薬が主に塩基性アミノ酸を含むペプチドである、請求項２０に記載の使用。
ペプチドが塩基性アミノ酸より構成される、請求項２３に記載の使用。
塩基性アミノ酸がリシンまたはアルギニンから選択される、請求項２３または２４に記載の使用。
ペプチドがポリリシンまたはポリオルニチンである、請求項２３に記載の使用。
遺伝治療のためにインビボでポリヌクレオチドを細胞内にトランスフェクションする方法であって、遺伝子治療用ベクターと一緒に、または別個に、請求項１ないし１８のいずれか１項に記載のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の投与を含む方法。
抗感染治療における使用のために、原核または真核生物内へのポリヌクレオチドまたは抗感染化合物の輸送を促進するための、請求項１ないし１８のいずれか１項に記載のジアミノ酸−ポリアミンに基づくジェミニ化合物の使用。
培養中の細胞の、互いに、あるいは固体または半固体表面への接着を促進するための、請求項１ないし１８のいずれか１項に記載のジアミノ酸−ポリアミンに基づくジェミニ化合物の使用。
請求項１記載のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の製造方法であって、溶媒としてのテトラヒドロフランおよび水の混合物中、塩基として炭酸カリウムを用いる、ポリアミンリンカーに結合したヒドロカルボキシ鎖に結合したαまたは末端アミノ基に結合したジアミノ酸のコハク酸イミデートエステルのカップリングを含む方法。