JP4468684B2 - 走査型共焦点顕微鏡装置 - Google Patents
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Description
図1は、この発明の実施の形態1である走査型共焦点顕微鏡装置100の概要構成を示すブロック図である。走査型共焦点顕微鏡装置100は、励起光と蛍光とを制御する励起照射ユニット90Aと、刺激光を制御する刺激光照射ユニット92と、励起照射ユニット90Aと刺激光照射ユニット92とを制御する制御部40Aとを有し、励起光と蛍光とが通る励起蛍光光路91と、刺激光が通る刺激光光路93とが共用する共通光路94に配置される合成ダイクロイックミラー66と、対物レンズ71と、対物レンズ71を支持するガイド駆動機構72と、ガイド駆動機構72を駆動させるモータ70と、観察対象である試料1と、試料1を載置する試料ステージ3とを有している。
つぎに、この発明の実施の形態2について説明する。上述した実施の形態1では、デフォーマブルミラー31を用いて励起光の集光点の深さ方向の位置を変化させていたが、この実施の形態2では、デフォーマブルミラー31Bを共通光路94外の刺激光光路93にも設け、所望空間に刺激光により刺激を与えながら所望空間の蛍光分布が取得できるようにしている。
2,2a,2b 励起光走査面
3 試料ステージ
4,4a,4b 刺激光集光点
4A 刺激光走査面
5,5a,5b 励起光集光点
10 励起光源レーザユニット
10a アルゴンレーザ発振器
10b 音響光学素子
20 シングルモードファイバ
30A 励起光走査ユニット
30B 励起蛍光ユニット
31,31B デフォーマブルミラー
32 コリメートレンズ
33A 光検知器
33B CCDカメラ
34 バリアフィルタ
35 共焦点ピンホール
36 励起ダイクロイックミラー
37 共焦点レンズ
38,38B,68 反射ミラー
39,62 ガルバノミラーユニット
39a,39b,62a,62b ガルバノミラー
40 レンズ
40A,40B,40C,40D 制御部
40a,40e 励起光走査制御部
40b,40f 励起光集光位置制御部
40c 刺激光走査制御部
40d 刺激光集光位置制御部
41 可視光レーザ導入ポート
50 刺激光源ユニット
51 電動シャッタ
52,53 ビームエクスパンダ
60A,60B 刺激光走査ユニット
63 瞳投影レンズ
64,65 結像レンズ
66 合成ダイクロイックミラー
67 ミラー
70,81 モータ
71 対物レンズ
72 ガイド駆動機構
80 画像処理部
82 ニポウディスク
90,90A,90C 励起光照射ユニット
91 励起蛍光光路
92 刺激光照射ユニット
93 刺激光光路
94 共通光路
100,110,120,130 走査型共焦点顕微鏡装置
101,102,103,104,105 所望空間
106 特定点
Claims (10)
- 試料に光化学変化をもたらす刺激光を照射し、励起光を励起光集光点に集光させて前記試料に照射し、少なくとも前記励起光を深さ方向に垂直な面で走査させ、前記刺激光の影響を含めた蛍光を観察する走査型共焦点顕微鏡装置において、
少なくとも前記刺激光の集光位置の深さ方向に垂直な所定面を走査させる刺激光走査手段と、
前記刺激光の走査領域を所望の領域に制御する刺激光走査制御手段と、
前記励起光と前記蛍光とが通る光路のうち前記刺激光がさらに通る共通光路を除いた光路である励起蛍光光路上に設けられ少なくとも前記励起光の集光位置を深さ方向に変化させる励起光集光位置変化手段と、
前記励起光の集光位置を所望の位置に可変に制御する励起光制御手段と、
を備えたことを特徴とする走査型共焦点顕微鏡装置。 - 前記刺激光走査制御手段は、前記試料の所望の点又は所望の領域に刺激を与えるように前記刺激光を制御するとともに、
前記励起光制御手段は、前記励起光の集光位置の深さ方向の変化を加えて所定空間を走査させるように前記励起光を制御し、所定空間の蛍光分布を取得することを特徴とする請求項1に記載の走査型共焦点顕微鏡装置。 - 前記刺激光が通る刺激光光路のうち前記共通光路を除いた前記刺激光光路上に設けられ少なくとも前記刺激光の集光位置を深さ方向に変化させる刺激光集光位置変化手段と、
前記刺激光の集光位置を所望の位置に可変に制御する刺激光制御手段と、
を備えたことを特徴とする請求項1または2に記載の走査型共焦点顕微鏡装置。 - 前記刺激光制御手段は、前記刺激光の集光位置の深さ方向の変化を加えて所定空間を走査させるように前記刺激光を制御し、所定空間に刺激を与えるとともに、前記励起光制御手段は、前記励起光の集光位置の深さ方向の変化を加えて所定空間を走査させるように前記励起光を制御し、所定空間の蛍光分布を取得することを特徴とする請求項3に記載の走査型共焦点顕微鏡装置。
- 所望空間の蛍光分布を所定時間間隔毎に順次取得することを特徴とする請求項1〜4のいずれか一つに記載の走査型共焦点顕微鏡装置。
- 前記刺激光制御手段は前記刺激光集光位置変化手段を制御し、前記刺激光走査制御手段は前記刺激光走査手段を制御し、複数の空間又はポイントを順次切換えて前記刺激光により照射しながら、前記励起光制御手段は前記励起光の集光位置の深さ方向の変化を加えて所定面を走査させるように前記励起光を制御し、前記試料から発する反応光を検出することにより、前記試料の所望の空間の画像を取得することを特徴とする請求項3〜5のいずれか一つに記載の走査型共焦点顕微鏡装置。
- 前記励起光集光位置変化手段および前記刺激光集光位置変化手段の少なくともいずれかは、収差の補償を含めて入出力波面の変換を行う波面変換素子であることを特徴とする請求項1〜6のいずれか一つに記載の走査型共焦点顕微鏡装置。
- 前記波面変換素子は、デフォーマブルミラーまたは液晶光学素子であることを特徴とする請求項7に記載の走査型共焦点顕微鏡装置。
- 前記刺激光は、多光子励起に用いられる赤外パルスレーザ光であることを特徴とする請求項1〜8のいずれか一つに記載の走査型共焦点顕微鏡装置。
- 試料に励起光を照射し、該励起光を励起光集光点に集光させ、少なくとも該励起光を深さ方向に垂直な面で走査させるとともに、前記試料に光化学変化をもたらす刺激光を照射し、該刺激光を刺激光集光点に集光させ、少なくとも該刺激光を深さ方向に垂直な面で走査させ、前記励起光集光点から発する前記刺激光の影響を含めた蛍光を観察する走査型共焦点顕微鏡装置において、
前記刺激光が通る光路のうち前記励起光および前記蛍光とがさらに通る共通光路を除いた光路である刺激光光路上に設けられ、収差の補償を含めて入出力波面の変換を行って少なくとも前記刺激光の集光位置を深さ方向に変化させる波面変換素子と、
前記刺激光の集光位置を所望の位置に可変に制御する刺激光制御手段と、
を備えたことを特徴とする走査型共焦点顕微鏡装置。
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