JP4869749B2 - 走査型顕微鏡 - Google Patents

Description

本発明は、走査型顕微鏡に関するものである。

従来、観察用レーザ光源と刺激用レーザ光源とを備え、観察用レーザ光および刺激用レーザ光を別個の走査手段により標本上で２次元的に走査する走査型レーザ顕微鏡が知られている（例えば、特許文献１参照。）。

この特許文献１に開示されている走査型レーザ顕微鏡は、刺激用レーザ光源から出射される刺激用レーザ光は、シングルモードファイバを介して伝播されスキャナによりその照射位置を調節されるようになっている。シングルモードファイバから出射される刺激用レーザ光は、比較的大きな開口数を有するので、対物レンズにより集光された標本上におけるビーム径は極めて小さくなる。その結果、標本上における刺激用レーザ光のビーム径を小さくすることで、細胞の一部のように極めて微細な部位に光刺激を与えることができるという利点がある。
特開２００５−３０８９８５号公報

しかしながら、観察の種類によっては、細胞全体のように広い領域を光刺激したい場合がある。このような場合に、特許文献１のようにシングルモードファイバを使用した走査型レーザ顕微鏡では、小さく絞られたビーム径を有する刺激用レーザ光を刺激したい広い領域にわたって走査しなければならない。その結果、走査範囲全体に光刺激を与えるには、一定の時間が必要となって、一度に光刺激を与えることができず、瞬時に発生する反応を観察することができないという問題がある。
また、シングルモードファイバにより伝播可能なレーザ光の種類および波長には制限があり、多種のレーザ光を用いた多様な観察を行うことが困難であるという問題もある。

本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、細胞全体のように広い領域を一度に光刺激することができ、瞬時に発生する反応を観察可能な走査型顕微鏡を提供することを目的としている。

上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、観察用励起光を発する観察用励起光源と、刺激光を発する刺激用光源と、該観察用励起光源から発せられた観察用励起光を標本上で２次元的に走査する走査手段と、該走査手段により走査された観察用励起光および／または刺激用光源から発せられた刺激光を標本に照射する一方、標本から発せられた蛍光を集光する対物レンズと、該対物レンズにより集光された蛍光を検出する検出手段と、前記刺激用光源と前記対物レンズとの間に配置され刺激光を伝播するマルチモードファイバと、該マルチモードファイバと前記対物レンズとの間に設けられ、標本上における刺激光の２次元的な位置を調節する刺激位置調節手段と、を備え、前記マルチモードファイバの出射端と前記標本とが共役であり、前記出射端により標本に投影される領域に一度に光刺激を与える走査型顕微鏡を提供する。

本発明によれば、観察用励起光源から発せられた観察用励起光は、走査手段により２次元的に走査され、対物レンズを介して標本に照射され、標本内の蛍光物質を励起して蛍光を発生させる。標本において発生した蛍光は対物レンズにより集光された後、検出手段により検出される。走査手段による観察用励起光の標本上における走査位置と、検出手段により検出された蛍光の強度とを対応づけることにより、標本の蛍光画像を取得することができる。

一方、刺激用光源から発せられた刺激光は、マルチモードファイバを介して伝播される間にビーム径を広げられ、対物レンズを介して標本に照射される。標本上には、マルチモードファイバの出射端に形成される比較的大きな光スポットが形成されるので、刺激光は、標本上の比較的広い領域に一度に照射され、その領域全体の標本に光刺激を与える。その結果、光刺激後に瞬時に発生する反応を逃すことなく観察することができる。また、刺激位置調節手段の作動により、標本上における刺激光の位置を調節し、観察範囲に対して光刺激の位置を任意に調節することができる。

上記発明においては、前記マルチモードファイバと対物レンズとの間に配置され、マルチモードファイバの出射端面の標本面への投影倍率を調節する倍率調節手段を備えることとしてもよい。
このようにすることで、マルチモードファイバの出射端面の標本面への投影倍率を倍率調節手段により調節することができる。したがって、一度に光刺激を与えることができる領域を拡大縮小することができる。

また、上記発明においては、前記刺激用光源と前記対物レンズとの間に、前記マルチモードファイバと並列に配置されるシングルモードファイバと、該シングルモードファイバまたはマルチモードファイバを切り替えて、刺激光を選択的に伝播させるファイバ切替手段とを備えることとしてもよい。

このようにすることで、ファイバ切替手段の作動により、刺激光を伝播させるファイバをシングルモードファイバとマルチモードファイバとで切り替えることにより、標本上におけるビーム径を切り替えて、微細な領域の光刺激または広い領域の光刺激を切り替えることができる。

また、上記本発明においては、前記刺激位置調節手段が走査手段であることが好ましい。走査手段によれば、簡易かつ迅速に光刺激の位置を調節することができる。

本発明によれば、細胞全体のように広い領域を一度に光刺激することができ、瞬時に発生する反応を逃すことなく観察することができるという効果を奏する。

以下、本発明の第１の実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡（走査型顕微鏡）１について、図１を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡１は、図１に示されるように、観察用レーザ光（観察用励起光）Ｌ１を発する観察用レーザユニット２と、刺激用レーザ光（刺激光）Ｌ２を発する刺激用レーザ光源３と、観察用レーザ光Ｌ１を標本Ａ上で２次元的に走査する第１のスキャナ（走査手段）４と、刺激用レーザ光Ｌ２の標本Ａ上での２次元的な位置を設定する第２のスキャナ（刺激位置調節手段）５と、観察用レーザ光Ｌ１と刺激用レーザ光Ｌ２とを同一の光路に入射させるビームスプリッタユニット６と、該ビームスプリッタユニット６を通過した観察用レーザ光Ｌ１および／または刺激用レーザ光Ｌ２を集光して標本Ａに照射する一方、標本Ａから発せられた蛍光Ｆを集光する対物レンズ７と、該対物レンズ７により集光された蛍光Ｆを検出する検出部８とを備えている。

観察用レーザユニット２は、４８８ｎｍの波長のアルゴンレーザ光Ｌ１１を発振するアルゴンレーザ光源９と、５４３ｎｍの波長のヘリウムネオンレーザ光Ｌ１２を発振するヘリウムネオンレーザ光源１０とを備えている。図中、符号１１はミラー、符号１２はダイクロイックミラーである。図１においてダイクロイックミラー１２は、アルゴンレーザ光Ｌ１１を反射し、ヘリウムネオンレーザ光Ｌ１２を透過するようになっている。これにより、２つのレーザ光源９，１０から出射されたレーザ光Ｌ１１，Ｌ１２の光路が単一の光路に合成されるようになっている。

また、２つのレーザ光源９，１０からの光路が合成された単一の光路には、音響光学可変フィルタ（以下、ＡＯＴＦという。）１３およびカップリングレンズ１４が配置されている。
ＡＯＴＦ１３は、観察用レーザ光Ｌ１の波長の選択および調光を波長ごとに独立して行うことができるようになっている。

ＡＯＴＦ１３から出射された観察用レーザ光Ｌ１は、カップリングレンズ１４によりシングルモードファイバ１５の入射端に集光されるようになっている。
シングルモードファイバ１５の出射端から出射された観察用レーザ光Ｌ１は、コリメートレンズ１６、ミラー１７およびビームスプリッタユニット１８を介して第１のスキャナ４に入射されるようになっている。

ビームスプリッタユニット１８は、例えば、回転ターレットにより構成され、透過率特性の異なるダイクロイックビームスプリッタ１８ａが周方向に間隔をあけて複数配列されている。モータ１８ｂの回転駆動により回転ターレットが回転させられると、いずれかのダイクロイックビームスプリッタ１８ａが選択的に光路上に配置されるようになっている。

第１のスキャナ４は、例えば、直交する２方向に観察用レーザ光Ｌ１を偏向するための２枚のガルバノミラー４ａ，４ｂを備えている。そして、これらのガルバノミラー４ａ，４ｂの揺動角度を変化させることにより、観察用レーザ光Ｌ１の偏向角度を変化させ、観察用レーザ光Ｌ１を標本Ａ上において光軸に交差する方向に沿って２次元的に走査することができるようになっている。

第１のスキャナ４により走査された観察用レーザ光Ｌ１は、瞳投影レンズ１９、結像レンズ２０、ビームスプリッタユニット６、ミラー２１および対物レンズ７を介して標本Ａに照射されるようになっている。観察用レーザ光Ｌ１は、対物レンズ７により標本Ａ上の焦点位置に結像され標本Ａにおいて蛍光物質を励起することにより蛍光Ｆを発生させる。

標本Ａにおいて発生した蛍光Ｆは、観察用レーザ光Ｌ１とは逆の光路を辿ってビームスプリッタユニット１８まで戻り、ダイクロイックビームスプリッタ１８ａを透過することで観察用レーザ光Ｌ１の光路から分岐される。そして、共焦点レンズ２２、共焦点ピンホール２３、ダイクロイックミラー２４およびバリアフィルタ２５を介して、波長ごとに異なる光検出器８ａ，８ｂにより検出されるようになっている。

刺激用レーザ光源３は、半導体レーザユニット２６と、赤外パルスレーザユニット２７とを備えている。
半導体レーザユニット２６は、例えば、４０５ｎｍの波長の刺激用レーザ光Ｌ２１を発振するものである。
赤外パルスレーザユニット２７は、例えば、８００ｎｍの波長の刺激用パルスレーザ光Ｌ２２を発振するパルスレーザ発振器２８と、刺激用パルスレーザ光Ｌ２２をオンオフするための電動シャッタ２９とを備えている。

本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡１においては、半導体レーザユニット２６からの刺激用レーザ光Ｌ２１の光路に、マルチモードファイバ３０が配置されている。半導体レーザユニット２６から出射された刺激用レーザ光Ｌ２１は、カップリングレンズ３１によりマルチモードファイバ３０の入射端に集光され、マルチモードファイバ３０により伝播された後、コリメートレンズ３２、ミラー３３、ダイクロイックミラー３４およびミラー３５を介して第２のスキャナ５に入射されるようになっている。
マルチモードファイバ３０の出射端にも電動シャッタ３６が配置され、半導体レーザユニット２６からの刺激用レーザ光Ｌ２１の標本Ａへの照射をオンオフすることができるようになっている。

また、赤外パルスレーザユニット２７から出射された刺激用パルスレーザ光Ｌ２２は、ミラー３７において反射された後、前記ダイクロイックミラー３４により、前記半導体レーザユニット２６からの刺激用レーザ光Ｌ２１の光路に合成され、第２のスキャナ５に入射されるようになっている。

第２のスキャナ５も第１のスキャナ４と同様に、例えば、直交する２方向に刺激用レーザ光Ｌ２を偏向するための２枚のガルバノミラー５ａ，５ｂを備え、これらのガルバノミラー５ａ，５ｂの揺動角度を変化させることにより、刺激用レーザ光Ｌ２の偏向角度を変化させ、標本Ａ上における刺激用レーザ光Ｌ２の照射領域を、光軸に交差する方向に沿って２次元的に変化させることができるようになっている。

第２のスキャナ５により照射位置を調節された刺激用レーザ光Ｌ２は、瞳投影レンズ３８および結像レンズ３９を介して前記ビームスプリッタユニット６に入射される。ビームスプリッタユニット６は、刺激用レーザ光Ｌ２の光路と観察用レーザ光Ｌ１の光路との交点に配置され、これらの光路を合成するようになっている。

ビームスプリッタユニット６は、透過率特性の異なる複数のダイクロイックビームスプリッタ（図示略）を備え、モータ６ａの作動により、ダイクロイックビームスプリッタを択一的に光路上に配置することができるようになっている。

観察用レーザユニット２のＡＯＴＦ１３、ビームスプリッタユニット６，１８のモータ６ａ，１８ｂ、半導体レーザユニット２６の発振のオンオフ、刺激用レーザ光源３の電動シャッタ２９，３６および第１、第２のスキャナ４，５には、これらの機器に対して制御信号を出力する制御部４０が接続されている。また、制御部４０には、図示はしないが、光検出器８ａ，８ｂも接続され、該光検出器８ａ，８ｂにより取得された蛍光強度情報が入力されるようになっている。

そして、制御部４０においては、第１のスキャナ４による観察用レーザ光Ｌ１の照射位置情報と、光検出器８ａ，８ｂにより得られた蛍光強度情報とに基づいて、蛍光画像が構築され、制御部４０に接続された記憶部４１に記憶され、あるいは、制御部４０に接続された表示部４２により表示されるようになっている。

このように構成された本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡１の作用について以下に説明する。
本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡１を用いて光刺激を行いながら蛍光観察を行うには、例えば、刺激用レーザ光Ｌ２として半導体レーザユニット２６から発せられる波長４０５ｎｍの刺激用レーザ光Ｌ２１を選択し、観察用レーザ光Ｌ１としては、アルゴンレーザ光源９から発振される波長４８８ｎｍのアルゴンレーザ光Ｌ１１およびヘリウムネオンレーザ光源１０から発振される波長５４３ｎｍのヘリウムネオンレーザ光Ｌ１２を使用する。

このとき、制御部４０の作動により、２つのビームスプリッタユニット６，１８に対して制御信号が送られ、モータ６ａ，１８ｂの作動により、適正なダイクロイックビームスプリッタ１８ａが選択されて光路上に配置される。また、制御部４０からはＡＯＴＦ１３に対して制御信号が送られ、ＡＯＴＦ１３は、制御信号により指示された波長４８８ｎｍと５４３ｎｍのレーザ光Ｌ１１，Ｌ１２を含む観察用レーザ光Ｌ１を選択的に出射するようになる。

ＡＯＴＦ１３から出射された観察用レーザ光Ｌ１は、シングルモードファイバ１５を伝播した後、コリメートレンズ１６により略平行光に変換され、ミラー１７を介してビームスプリッタユニット１８に入射される。そして、観察用レーザ光Ｌ１は、このビームスプリッタユニット１８において反射されることにより、第１のスキャナ４に入射され、２次元的に走査された後、瞳投影レンズ１９、結像レンズ２０、ビームスプリッタユニット６、ミラー２１および対物レンズ７を介して標本Ａに集光される。

この場合において、観察用レーザ光Ｌ１は、シングルモードファイバ１５を通過させられるので、シングルモードファイバ１５の出射端において極めて小さい光源（点光源）が形成される。標本Ａ上においては、当該シングルモードファイバ１５の出射端に形成された光源の像が結像されることになるため、第１のスキャナ４により標本Ａ上において走査される観察用レーザ光Ｌ１は、その各位置において、極めて微細かつ高い光子密度の光スポットを形成する。その結果、解像度が高く明るい蛍光画像を取得することができる。

一方、刺激用レーザ光Ｌ２として、半導体レーザユニット２６から発振される波長４０５ｎｍの刺激用レーザ光Ｌ２１が選択されると、制御部４０は、半導体レーザユニット２６に制御信号を送り、半導体レーザユニット２６がオン状態とされる。半導体レーザユニット２６から出射された刺激用レーザ光Ｌ２１は、マルチモードファイバ３０を伝播して、コリメートレンズ３２により略平行光とされ、ミラー３３，ダイクロイックミラー３４およびミラー３５を介して第２のスキャナ５に入射される。

第２のスキャナ５は、制御部４０からの制御信号によって定められた標本Ａ上の位置に刺激用レーザ光Ｌ２の光スポットを形成するように、２つのガルバノミラー５ａ，５ｂの揺動角度が調節される。そして、第２のスキャナ５により位置調節された刺激用レーザ光Ｌ２は、瞳投影レンズ３８、結像レンズ３９、ビームスプリッタユニット６および対物レンズ７を介して標本Ａ上に集光される。

この場合において、刺激用レーザ光Ｌ２は、マルチモードファイバ３０を通過させられるので、マルチモードファイバ３０の出射端において比較的大きな光源が形成される。標本Ａ上においては、当該マルチモードファイバ３０の出射端に形成された光源の像が結像されることになるため、刺激用レーザ光Ｌ２は、その各結像位置において、比較的大きな光スポットを形成する。その結果、例えば、細胞１個分にも相当するような広い領域に一度に光刺激を与えることができる。

このように、本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡１によれば、比較的大きな光スポットにより標本Ａに一度に光刺激を与えることができ、光刺激後、瞬時に発生する反応を逃すことなく観察することができるという利点がある。

また、本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡１によれば、コア径の大きなマルチモードファイバ３０により刺激用レーザ光Ｌ２を伝播するので、面光源であるＬＥＤを刺激用光源として利用することができる。したがって、選択可能な光源の種類を増加させることができる。また、ＬＥＤを用いることにより、安価にかつ選択可能な波長の範囲を増加させることができる。
さらに、コア径の大きなマルチモードファイバ３０を使用することにより、環境温度変化による光軸ズレの影響を受けにくく、長時間観察でも安定的に観察することができるという利点もある。

また、コア径の小さなシングルモードファイバでは、刺激用レーザ光源Ｌ２としてＵＶレーザ（３５０ｎｍ程度）を使用すると、シングルモードファイバの劣化が問題となる。しかし、コア径の大きなマルチモードファイバ３０を使用することで劣化の問題を解消し、ＵＶレーザ光をも刺激用レーザ光源３として使用することが可能となる。

また、紫外領域（３５０ｎｍ）から可視域（６９０ｎｍ程度）までの広範囲の波長の刺激用レーザ光Ｌ２をシングルモードファイバで伝播する場合、屈曲により光量変動が発生するという問題がある。これに対して、コア径の大きなマルチモードファイバ３０においては屈曲による曲げ損失が発生しないので、広範囲にわたる波長の刺激用レーザ光Ｌ２を１本のマルチモードファイバ３０で伝播することができる。

さらに、本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡１によれば、標本Ａ上における光スポットの大きさが、マルチモードファイバ３０の出射端に形成される光源の大きさによって決定される。そこで、図２に示されるように、マルチモードファイバ３０の出射端と第２のスキャナ５との間に、ズーム光学系（倍率調節手段：標本Ａ上での光スポットの大きさを調節する手段）４３を配置することにより、マルチモードファイバの出射端の標本への投影倍率を拡大あるいは縮小することとしてもよい。ズーム光学系４３は制御部４０に接続され、制御部４０からの制御信号に応じて、投影倍率を変更することができるようになっている。

このようにすることで、標本Ａ上における光スポットの大きさを変化させることができ、用途に応じて最適な大きさの光スポットを標本Ａに照射して、所望の観察結果を得ることができるという利点がある。
また、本実施形態においては、刺激用パルスレーザユニット２７を備えた場合を例示したが、これに限定されるものではなく、刺激用パルスレーザユニット２７はなくてもよい。

次に、本発明の第２の実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡５０について、図３を参照して以下に説明する。
なお、本実施形態の説明において、上述した第１の実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡１と構成を共通とする箇所には同一符号を付して説明を省略する。

本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡５０は、図３に示されるように、半導体レーザユニット２６からの刺激用レーザ光Ｌ２１の光路に、シングルモードファイバ５１およびマルチモードファイバ３０が並列に配置され、刺激用レーザ光Ｌ２１が各光ファイバ３０，５１に分岐されるとともに、これら光ファイバ３０，５１のいずれを使用するのかを選択するファイバ切替手段５２が設けられている点において、第１の実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡１と相違している。

本実施形態においては、半導体レーザユニット２６に、刺激用レーザ光Ｌ２１を分岐するためにハーフミラー５３およびミラー５４が設けられ、分岐された刺激用レーザ光Ｌ２１がそれぞれカップリングレンズ３１によってシングルモードファイバ５１またはマルチモードファイバ３０の入射端に入射されるようになっている。

また、ファイバ切替手段５２は、各光ファイバ３０，５１の出射端に、これらの光ファイバ３０，５１を介して伝播されてきた刺激用レーザ光Ｌ２１をオンオフするように設けられた電動シャッタ５２ａ，５２ｂにより構成されている。各光ファイバ３０，５１内を伝播されてきた刺激用レーザ光Ｌ２１は、それぞれ、コリメートレンズ３２により略平行光とされた後に、ミラー５５あるいはダイクロイックミラー５６を介して同一の光路に合成されるようになっている。

電動シャッタ５２ａ，５２ｂは制御部４０に接続され、制御部４０から送られてくる制御信号により、シングルモードファイバ５１内を伝播されてきた刺激用レーザ光Ｌ２１またはマルチモードファイバ３０内を伝播されてきた刺激用レーザ光Ｌ２１のいずれかを択一的に標本Ａに照射することができるようになっている。

このように構成された本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡５０によれば、半導体レーザユニット２６から出射される刺激用レーザ光Ｌ２１を伝播する光ファイバとしてマルチモードファイバ３０が選択されたときには、制御部４０は電動シャッタ５２ａをオン状態とし、電動シャッタ５２ｂをオフ状態とする。これにより、標本Ａ上における光スポットの大きさを大きくして刺激用レーザ光Ｌ２１の照射範囲を大きくすることができる。

一方、半導体レーザユニット２６から出射される刺激用レーザ光Ｌ２１を伝播する光ファイバとしてシングルモードファイバ５１が選択されたときには、制御部４０は電動シャッタ５２ｂをオン状態とし、電動シャッタ５２ａをオフ状態とする。これにより、標本Ａ上における光スポットの大きさを極微細にして刺激用レーザ光Ｌ２１の照射範囲を極めて小さい領域に限定することができる。

このように、本実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡５０によれば、ファイバ切替手段５２の作動により、標本Ａ上における光スポットの大きさを任意のタイミングで２段階に切り替えることができる。その結果、一度に光刺激を与える範囲の大きさを変更することができ、多様な観察を行うことができる。

なお、電動シャッタ５２ａ，５２ｂの位置は、各光ファイバ３０，５１の出射端とコリメートレンズ３２との間に限定されるものではなく、ハーフミラー５３と光ファイバ３０，５１との間等に配置することとしてもよい。
また、半導体レーザユニット２６としては波長４０５ｎｍのレーザ光Ｌ２１のみならず、複数波長のレーザ光Ｌ２１を合成したものを用いてもよい。

また、ファイバ切替手段５２として電動シャッタ５２ａ，５２ｂを用いた例を示したが、これに限定されるものではなく、光路に挿脱される反射ミラー（図示略）によって光路を切り替えることとしてもよい。
また、図４に示されるように、図２の場合と同様に、ズーム光学系４３を設けることとしてもよい。このようにすることで、ファイバ切替手段５２によりマルチモードファイバ３０が選択されたとき、ズーム光学系４３を作動させることにより、標本Ａ上に得られる光スポットの大きさを任意に調節することができる。

本発明の第１の実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡を示す全体構成図である。 図１の走査型レーザ顕微鏡の変形例を示す全体構成図である。 本発明の第２の実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡を示す全体構成図である。 図３の走査型レーザ顕微鏡の変形例を示す全体構成図である。

符号の説明

Ａ 標本
Ｆ 蛍光
Ｌ１ 観察用レーザ光（観察用励起光）
Ｌ２ 刺激用レーザ光（刺激光）
１ 走査型レーザ顕微鏡（走査型顕微鏡）
２ 観察用レーザユニット（観察用励起光源）
３ 刺激用レーザ光源（刺激用光源）
４ 第１のスキャナ（走査手段）
５ 第２のスキャナ（走査手段：刺激位置調節手段）
７ 対物レンズ
８ａ，８ｂ 光検出器（検出手段）
３０ マルチモードファイバ
４３ ズーム光学系（倍率調節手段）
５１ シングルモードファイバ
５２ａ，５２ｂ 電動シャッタ（ファイバ切替手段）

Claims (5)

1. 観察用励起光を発する観察用励起光源と、
   刺激光を発する刺激用光源と、
   該観察用励起光源から発せられた観察用励起光を標本上で２次元的に走査する走査手段と、
   該走査手段により走査された観察用励起光および／または刺激用光源から発せられた刺激光を標本に照射する一方、標本から発せられた蛍光を集光する対物レンズと、
   該対物レンズにより集光された蛍光を検出する検出手段と、
   前記刺激用光源と前記対物レンズとの間に配置され刺激光を伝播するマルチモードファイバと、
   該マルチモードファイバと前記対物レンズとの間に設けられ、標本上における刺激光の２次元的な位置を調節する刺激位置調節手段と、を備え、
   前記マルチモードファイバの出射端と前記標本とが共役であり、前記出射端により標本に投影される領域に一度に光刺激を与える走査型顕微鏡。
2. 前記マルチモードファイバと対物レンズとの間に配置され、マルチモードファイバの出射端面の標本面への投影倍率を調節する倍率調節手段を備える請求項１に記載の走査型顕微鏡。
3. 前記刺激用光源と前記対物レンズとの間に、前記マルチモードファイバと並列に配置されるシングルモードファイバと、
   該シングルモードファイバまたはマルチモードファイバを切り替えて、刺激光を選択的に伝播させるファイバ切替手段と、を備える請求項１または請求項２に記載の走査型顕微鏡。
4. 前記刺激位置調節手段が走査手段である請求項１乃至請求項３の何れか１項に記載の走査型顕微鏡。
5. 前記マルチモードファイバは、前記刺激光として紫外領域の刺激用レーザ光を伝播することを特徴とする請求項１乃至請求項４の何れか１項に記載の走査型顕微鏡。

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