JP3226545B2 - ラパマイシン誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ラパマイシン誘導体、その製造法、その医
薬としての使用およびそれを含む医薬組成物に関する。

ラパマイシンは、式A: で示される構造式を有する、ストレプトマイセス・ヒグ
ロスコピクス（Streptomyces hygroscopicus）により産
生される既知のマクロライド系抗生物質である。例え
ば、MacAlpine J.B.ら、J.Antibiotics（1991）44:668;
Schreiber S.L.ら、J.Am.Chem.Soc.（1991）113:7433;
米国特許第3929992号、参照。（ラパマイシンについ
て、種々の番号付の方法が提案されている。混乱を避け
るために、特定のラパマイシン誘導体が本明細書に記載
されている場合、名称は式Ａの番号付の方法に対応して
記載する。）ラパマイシンは非常に有効な免疫抑制剤で
あり、また抗癌および抗真菌活性を有することも示され
ている。しかしながら、その医薬としての実用性は、そ
の非常に低く、変化しやすい生体内利用能により制限さ
れている。更に、ラパマイシンは難溶性であり、安定性
を欠き、安定なガレヌス製剤の調剤が難しい。多くのラ
パマイシン誘導体が知られている。ある40−Ｏ−置換ラ
パマイシンは、例えば、米国特許第5258389号およびWO9
4/09010（Ｏ−アルキルラパマイシン）;WO92/05179（カ
ルボン酸エステル）、米国特許第5118677号（アミドエ
ステル）、米国特許第5118678号（カルバメート）、米
国特許第5100883号（臭素化エステル）、米国特許第515
1413号（アセタール）および米国特許第5120842号（シ
リルエーテル）に記載されている。

本発明により、ラパマイシンのある新規誘導体がラパ
マシンよりも改善された薬理学的特性を有し、高い安定
性を示すことが判明した。

本発明により、式I: 〔式中、 R₁は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ
アルキル、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニ
ル、ベンジル、アルコキシベンジルまたはクロロベンジ
ル； R₂は、式IIまたは式III （式中、R₃は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニ
ル、アリール、チオアルキル、アリールアルキル、ヒド
ロキシアリールアルキル、ヒドロキシアリール、ヒドロ
キシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアル
コキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキ
ル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキ
シアルキル、アルキルカルボニルオキシアルキル、アミ
ノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカル
ボニルアミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアル
キル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒ
ドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カル
ボアルコキシアルキルおよびアルキルシリルから選択さ
れる基； R₄は、Ｈ、メチルまたはR₃と一緒になってC_2-6アルキレ
ンを形成する； R₅は、R₆O−CH₂−（ここでR₆は、Ｈ、アルキル、アルケ
ニル、アルキニル、アリール、アルキルカルボニル、ア
リールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヒドロ
キシアルキルカルボニル、アミノアルキルカルボニル、
ホルミル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキ
シアリールアルキル、ヒドロキシアリール、ヒドロキシ
アルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキ
シアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジ
ヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアル
キル、アルキルカルボニルオキシアルキル、アミノアル
キル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニル
アミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、
アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキ
シアルキルアリル、ジオキソラニルアリルおよびカルボ
アルコキシアルキルから選択される基）;R₇CO−（ここ
でR₇は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリ
ールオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アミノ酸残基、
またはN,N−二置換アミノ、ここで置換基は（ａ）アル
キル、アリールまたはアリールアルキルから選択される
基または（ｂ）ヘテロ環構造を形成する）;R₈NCH−、こ
こでR₈は、アルキル、アリール、アミノ、アルキルアミ
ノ、アリールアミノ、ヒドロキシ、アルコキシまたはア
リールスルホニルアミノ；−Ｏ−CH−Ｏ−；または置換
ジオキシメチレン； ＹはＯ、（O,OH）および（H,OR₉）（ここで、R₉はC_1-4
アルキル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、
ヘテロアリールカルボニル、ヒドロキシアルキルカルボ
ニル、アミノアルキルカルボニル、ホルミルまたはアリ
ール）；および ＸはOHまたはH: ここで、“アルキ（アルコ）”または“アルキル”は、
所望により酸素架橋により中断されていてもよいC_1-10
脂肪族置換基を意味する；および“アル”または“アリ
ール”は、単環式であり、所望によりヘテロ環式であっ
てよく、所望により置換されていてもよい、C_4-14芳香
族置換基を意味する； ただし、ＸがOH、R₁がアルキルおよびR₂が式IIである場
合、R₃がＨ以外である。〕 で示される化合物が提供される。

上記“アルキ（アルコ）”部分または“アルキル”
は、分枝鎖、直鎖状または環状であり得る；好ましく
は、それは、所望により酸素架橋により中断されていて
もよい、より好ましくは酸素により一つ中断されている
C_1-6脂肪族置換基である。

上記“アル”部分または“アリール”の例は、所望に
より置換されていてもよく、例えば、フェニル、ベンジ
ル、トリル、ピリジル等を含む。

R₁がクロロベンジルまたはアルコキシベンジルである
時、置換基は好ましくはオルトである。

R₇CO−がN,N−ジ置換−カルバモイルである時、それ
は、例えば、Ｎ−メチル−Ｎ−（２−ピリジン−２−イ
ル−エチル）−カルバモイル、（４−メチル−ピペラジ
ン−１−イル）−カルボニルまたは（モルホリン−４−
イル）−カルボミルであり得る。

R₅が置換ジオキシメチレンである時、それは、例え
ば、O,O−（アルキレン）−ジオキシ−メチレン、即
ち、２個の酸素がアルキレン基により結合されているも
のであり得る。

式Ｉの化合物において、以下の意味が個々にまたは任
意の組み合わせで、または下位の組み合わせで好まし
い： 1.XがOHおよびR₁がC_3-10アルキニルまたはC_3-10ヒドロ
キシアルキニル、好ましくはC_3-10アルキ−２−イニル
またはC_3-10ヒドロキシアルキ−２−イニル、より好ま
しくはC_3-6アルキ−２−イニル； 2.XはＨおよびR₁はC_1-10アルキル、C_3-10アルキ−２−
エニル、C_3-10ヒドロキシアルキ−２−エニル、C_3-10ア
ルキ−１−イニル、C_3-10ヒドロキシアルキ−２−イニ
ルまたはC_1-10アルコキシC_1-10アルキル、好ましくはC
_1-6アルキルまたはC_3-6アルキ−２−イニル、より好ま
しくはC_1-4アルキル、最も好ましくはメチル； 3.R₁としてのC_3-6アルキニルは２−プロピニルまたはペ
ンチ−２−イニル、好ましくはペンチ−２−イニル； 4.YはＯ、（H,OH）または（H,C_1-4アルコキシ）、好ま
しくはO; 5.R₂は式IIの残基； 6.式IIの残基において、R₃はＨ、C_1-6アヒドロキシアル
キル、ヒドロキシ−C_1-6アルコキシ−C_1-6アルキル、
（C_1-6アルキル）−カルボニル−アミノ−C_1-6アルキ
ル、C_1-6アルコキシ−C_1-6アルコキシまたはアミノ−C
_1-6アルキル、好ましくはＨ、ヒドロキシエチル、ヒド
ロキシプロピオル、ヒドロキシエトキシエチル、メトキ
シエチルまたはアセチルアミノエチル；特にＸがＨの
時、またはＸがOHの時、ＨおよびR₁がアルキニル； 7.式IIの残基において、R₄はメチル； 8.R₂は式IIIの残基（式中、R₅はR₆OCH₂−、ここで、R₆
はＨ、C_1-6アルキル、C_3-6アルキ−２−エニル、C_3-6ア
ルキ−２−イニル、アリール、C_1-6アルキル−カルボニ
ル、アリールカルボニル、ヒドロキシC_1-6アルキル、C
_1-6アルコキシ−C_1-6アルキルまたはアミノC_1-6アルキ
ル;R₇CO−、ここで、R₇はＨ、ヒドロキシ、C_1-6アルコ
キシ、アミノ、C_1-6アルキルアミノ、アミノ酸残基、N,
N−二置換アミノ、ここで置換基は（ａ）C_1-6アルキル
またはアリールまたは（ｂ）ヘテロ環構造を形成する;R
₈NCH−、ここでR₈はアルキル、アリール、アミノ、アル
キルアミノ、アリールアミノ、ヒドロキシ、アルコキシ
またはアリールスルホニルアミノ；−Ｏ−CH−Ｏ−；ま
たは置換ジオキシメチレンから選択される）。

好ましい化合物は、式I a 〔式中、R₁、R₂およびＹは上記で定義の意味、好ましく
は上記1.および3.から8.の好ましい定義の意味〕 の化合物およびI b: 〔式中、R₁、R₂およびＹは上記で定義の意味、好ましく
は上記2.から8.の好ましい定義の意味〕 の化合物である。

特に好ましい化合物は （ｉ）32−デオキソ−ラパマイシン； （ii）16−Ｏ−ペンチ−２−イニル−32−デオキソ−ラ
パマイシン； （iii）16−Ｏ−ペンチ−２−イニル−32−デオキソ−4
0−Ｏ−（２−ヒドロキシ−エチル）−ラパマイシン； （iv）16−Ｏ−ペンチ−２−イニル−32（Ｓ）−ジヒド
ロ−ラパマイシン； （ｖ）16−Ｏ−ペンチ−２−イニル−32（Ｓ）−ジヒド
ロ−40−Ｏ−（２−ヒドロキシ−エチル）ラパマイシ
ン； （vi）32（Ｓ）−ジヒドロ−40−Ｏ−（２−メトキシ）
エチルラパマイシン； （vii）32（Ｓ）−ジヒドロ−40−Ｏ−（２−ヒドロキ
シエチル）ラパマイシン； を含む。

式Ｉの化合物は、異性体性を示し得、従って、更に異
性体形が存在する。本発明は式Ｉの化合物、式Ｉ′ 〔式中、R₁、R₂およびＸは上記で定義の意味〕 の個々の異性体およびそれらの混合物を含むことが理解
される。

個々の異性体は、当分野で既知の方法と同様にして分
離し得る。

本発明は、式Ｉの化合物の製造法も提供し、それは ａ）ＸがＨである式Ｉの化合物の製造のために、保護ま
たは非保護形の式IV a 〔式中、R₁、R₂およびＹは上記で定義の意味〕 の化合物の32位のカルボニルを還元的除去する； ｂ）ＸがOHである式Ｉの化合物の製造のために、上記で
定義の式IV aの化合物の32位のカルボニルを立体選択的
に還元する；または ｃ）R₁がアルキルである式Ｉの化合物を変換し、式Ｉが
アルキル以外である式Ｉの化合物を提供する ことを含む。

工程ａ）において、式IV aの化合物は好ましくは保護
形であり、即ち、反応に関係しない官能基、例えば、R₂
が式IIの残基である時、28位および所望により40位、ま
たはR₂が式IIIの残基である時、39位のOHの保護基を含
み得る。

式Ｉの32−デオキソ化合物への還元ａ）は、簡便には
２段階で行い得る： ｉ）好ましくは保護形の式IV aの化合物をハイドライ
ド、例えば、ジイソブチルアルミニウムハイドライド、
また好ましくはトリ−tert−ブトキシカルミニウムハイ
ドライドと反応させ、対応する32−ジヒドロ化合物を製
造する。他の方法および当分野でケトンの還元用として
既知の試薬を、対応するケトンから32−ジヒドロ化合物
を製造するのに使用し得る。それら、例えば、水素添
加、金属による還元、Comprehensive Organic Transfor
mations,R.C.Larock,VCH Publishers Inc.,New York,19
89,pp.527−535,section 7.1.1−7.14に記載のような水
素化金属還元および、例えば、Comprehensive Organic
Transformations,R.C.Larock,VCH Pubishers Inc.,New
York,1989,pp.540−547,section 7.1.15に記載のような
ケトンの非対称還元を含み、次いで ii）32−ジヒドロ化合物を対応する32−ハロ−誘導体、
例えば、32−ブロモまたは（好ましくは）32−ヨード−
誘導体に変換し、次いでそれらを例えば所望の32−デオ
キソ誘導体にハイドライドにより還元し、得られる化合
物の必要な脱保護を行う。ハライドの還元に使用するた
めのような他の試薬は、例えば、低原子価金属（即ち、
リチウム、ナトリウム、マグネシウムおよび亜鉛）およ
び水素化金属（水素化アルミニウム、ボロハイドライ
ド、シラン、水素化銅）を使用し得、含む（Comprehens
ive Organic Transformations,R.C.Larock,VCH Publish
ers Inc.,New York,1989,pp.18−20,section 1.5.1−1.
5.2.）。あるいは、ハライド還元を、水素または水素源
（即ち、ギ酸またはその塩）を使用して、適当な金属触
媒（即ち、ラネイ−ニッケル、白金金属または白金錯
体、ロジウムまたはルテニウムの錯体）の存在下で達成
できる（Comprehensive Organic Transformations,R.C.
Larock,VCH Publishers Inc.,New York,1989,pp.20−2
4,section 1.5.3.）。更に、アルコールを対応するデオ
キシ化合物に変換するために使用される既知の方法を使
用し得る。これらの方法は、例えば、直接還元または中
間体リン化合物、スルホネート、チオカルボネート、チ
オカルバメートまたはキサンテートの還元を含み、例え
ば、Comprehensive Organic Transformations,R.C.Laro
ck,VCH Publishers Inc.,New York,1989,pp.27−31,sec
tion 1.9.1.−1.9.4.に記載されている。

適当なヒドロキシ保護基およびその形成および除去法
は当分野で既知であり、例えば、Protective Groups in
Organig Synthesis,second ed.T.W.GreeneおよびP.G.
M.Wuts,John Wiley ＆ Sons,New York,1991,Chapter2お
よびその引用文献参照。好ましいOH保護基は、例えば、
トリ（C_1-6）アルキルシリル（例えば、トリメチルシリ
ル、トリエチルシリル）、トリイソプロピルシリル、イ
ソプロピルジメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリ
ル、トリアリールシリル（例えば、トリフェニルシリ
ル）またはトリアラルキルシリル（例えば、トリベンジ
ルシリル）のようなトリ有機シリル基である。

還元工程ｉ）は、簡便には、低温、例えば、−10から
−80℃で行う。

工程ii）において、所望により、保護形の、好ましく
は32（Ｒ）−ジアステレオ異性体の32−ジヒドロ化合物
を、エステル、好ましくはスルホネート、例えば、メシ
ラート、トシラート、ノシラートまたはトリフラートに
変換し、続いて適当なハライド、例えば、ヨウ素化また
はホウ素化ナトリウム、ヨウ素化またはホウ素化アンモ
ニウムで、好ましくは塩基、例えばアミンの存在下で置
換する。32（Ｒ）−ジアステレオ異性体は、既知の技
術、例えばクロマトグラフィーにより分離し得る。

32−ハロ化合物を還元するための適当なハライドは、
例えば、トリブチルスズハライドまたはトリス−（トリ
メチルシリル）−シランのようなラジカルハライドを含
む。還元は、ラジカルイニシエーター、例えば、2,2′
−アゾビスイソブチロニトリルまたは好ましくはEtB₃の
非存在下または存在下で、簡便には０゜から80℃の温度
でまた行い得る。

酢酸銅のようなオキシダントを、必要であれば、ｉ）
またはii）の還元工程後に添加し、例えば、９位で起こ
り得る望ましくない副還元をカルボニルに再酸化するの
が簡便である。

あるいは、32−ジヒドロ誘導体を直接、当分野で既知
の方法により、例えば、Ｎ−ブロモまたはＮ−ヨード−
サクシンイミド、炭素テトラブロミドまたはテトラヨウ
ジド、1,2−ジブロモテトラクロロエタン、2,4,5−トリ
ブロモ−または−トリヨードイミダゾール、ヨウ素、1,
2−ジヨードエタンと組み合わせたトリフェニルホスフ
ィンを使用して、または臭素化チオニルまたはメチルト
リフェノキシホスホニウムヨウジドハライドに変換し得
る。

32位のカルボニルの32−デオキソ誘導体への還元は、
また、トシルヒドラゾンの形成、続くボラン、例えば、
カテコールボランの処理により、またはジチアンの形
成、続く適当な、例えば、ラネイ−ニッケルまたはハイ
ドライド、例えば、トリブチルスズハイドライドでの還
元により行い得る。ケトンを対応するアルカンに変換す
る他の既知の方法を使用し得る：このような方法は、例
えば、直接還元（Comprehensive Organic Transformati
ons,R.C.Larock,VCH Publishers Inc.,New York,1989,p
p.35−37,section 1.12.1.参照）またはヒドラゾンを経
由した還元（Comprehensive Organic Transformations,
R.C.Larock,VCH Publishers Inc.,New York,1989,pp.37
−38,section 1.12.2.参照）または硫黄およびセレニウ
ム誘導体を経由した還元（Comprehensive Organic Tran
sformations,R.C.Larock,VCH Publishers Inc.,New Yor
k,1989,pp.34−35,section 1.10.および1.11.参照）を
含む。

式Ｉの32（Ｒ）−ジヒドロ化合物への還元工程ｂ）
は、選択条件下で行う。好ましくは、32（Ｓ）への還元
に非常に好ましい還元剤、例えば、トリエチルボロハイ
ドライドナトリウムを使用する。還元は、簡便には、低
温、例えば、−50から−80℃で、不活性溶媒、例えばTH
F、ジエチルエーテル、グリム、ジグリムまたはメチル
t.−ブチルエーテル中で行い得る。32（Ｓ）−ジヒドロ
化合物の少量の製造された32（Ｓ）−ジヒドロ化合物か
らの分離は、当分野で既知の方法、例えば、カラムクロ
マトグラフィー、逆相クロマトグラフィーにより行い得
る。

必要であれば、28位および所望により40位のヒドロキ
シ基を、例えば、上記のように還元工程前に保護し、そ
の後脱保護し得る。好ましくは還元工程ｂ）はOH保護な
しで行う。

変換工程ｃ）は、当分野で既知の方法により行い得
る。例えば、R₁がアルキル、好ましくはメチルである式
Ｉの化合物を、R_X−Ｏ（式中、R_Xはアルキニルまたはヒ
ドロキシアルキニル）の化合物を反応させ、R₁がアルキ
ニルまたはヒドロキシアルキニルである式Ｉの化合物を
提供し得る。反応は、簡便には、中性溶媒、例えば、ジ
クロロメタン、トルエン、アセトニトリルまたはTHF中
で、酸性条件下で行い得る。

好ましくは、32位の還元、特に反応工程ｂ）は、R₁が
既に所望の意味を有する、例えば、R₁がアルキニルであ
る式IV aの化合物で行い、還元後の変換を避ける。出発
物質として使用するR₁がアルキニルまたはヒドロキシア
ルキニルである式IV aの化合物は、上記のように化合物
R_X−OHを使用して製造し得る。

出発物質として使用する化合物は、例えば、USP52583
89、WO94/09010、WO95/16691、USP5120842等に記載のよ
うな当分野で既知で実施されている方法と同様に製造し
得る。

以下の実施例は本発明を説明する。全ての温度は℃で
ある。以下の略語を使用する： THF＝テトラヒドロフラン TES＝トリエチルシリル 実施例1:32−デオキソラパマイシン（R₁＝CH₃、R₂＝II
（式中、R₃＝ＨおよびR₄＝CH₃）;X＝H;Y＝Ｏ） THF260ml中の28,40−ビス−Ｏ−TES−ラパマイシン2
6.1g（22.85mmol）の撹拌し、冷却（−78゜）した溶液
に、THF中のリチウムトリ−t.−ブトキシアルミニウム
ハイドライドの1M溶液を添加する。得られた混合物を−
15゜まで、２時間にわたり暖める。次いで、冷却浴を氷
浴に代え、温度を０゜にし、撹拌をその温度で１時間続
ける。反応混合物を酢酸エチル750mlおよび氷冷2N水性
クエン酸400ml含有分液漏斗に注ぎ、短く振る。水性相
を分離し、冷酢酸エチルで２回抽出する。合わせた有機
溶液を氷冷2N水性クエン酸、水、飽和水性炭酸水素ナト
リウムで、２回飽和食塩水で洗浄し、次いで無水炭酸ナ
トリウムで乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮する。32
（Ｒ）−ジヒドロ−28,40−ビス−Ｏ−TES−ラパマイシ
ンおよび（32R）9,32−ビス−ジヒドロ−28,40−ビス−
Ｏ−TES−ラパマイシンの混合物からなる残渣を更に精
製することなくメタノール260mlに溶解する。この溶液
を０゜に冷却し、酢酸第二銅6.85g（34.31mmol）で処理
する。１時間撹拌後、得られた懸濁液をメチル−t.−ブ
チルエーテルで希釈し、２回水および２回飽和食塩水で
洗浄する。水性相をメチル−ｔ−ブチルエーテルで逆抽
出する。合わせた有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥
させ、濾過し、減圧下濃縮させる。残渣をシリカゲルク
ロマトグラフィー（60:40ヘキサン／メチル−ｔ−ブチ
ルエーテル）で精製し、純粋32（Ｒ）−ジヒドロ−28,4
0−ビス−Ｏ−TES−ラパマイシンを白色固体として得
る。¹ H NMR（CDCl₃）回転異性体4:1の混合物、括弧内の化学
シフトはマイナー回転異性体を意味する δ0.72（1H,dd,H−38ax）,1.63（1.60）（3H,s,C17−CH
₃）,1.66（1.69）（3H,s,C29−CH₃）,1.77 and 1.81
（Ｈ−33）,2.46（1H,m,H−31）,2.82（2.91）（1H,m,H
−25）,2.91（1H,m,H−39）,3.13（3H,s,C16−OCH₃）,
3.26（3H,s,C27−OCH₃）,3.41（1H,m,H−40）,3.43（3
H,s,C39−OCH₃）,3.62（1H,m,H−32）,3.75（3.57）（1
H,d,H−27）,4.10（1H,d,H−28）,4.81（1H,broad s,C1
0−OH）,5.05（1H,d,H−34）,5.27（1H,d,H−30）,5.36
（1H,d,H−２）,5.69（1H,dd,H−22）,6.03（5.96）（1
H,d,H−18）,6.15（1H,dd,H−21）,6.33（1H,dd,H−2
0）,6.40（1H,dd,H−19） MS（FAB、LiIマトリックス）m/z1150（［Ｍ＋Li］^＋）
（相対強度100） トリエチルアミン200ml中の32（Ｒ）−ジヒドロ−28,
40−ビス−Ｏ−TES−ラパマイシン20.69g（18.10mmol）
およびトリエチルアミン7.55ml（54.27mmol）の撹拌
し、冷却（−15゜）した溶液に、塩化メタンスルホニル
2.10ml（27.02mmol）を添加する。混合物を20分撹拌
し、次いで酢酸エチルで希釈し、飽和水性炭酸水素ナト
リウムを添加する。相を分離し、水性相を酢酸エチルで
３回抽出する。合わせた有機相を飽和水性炭酸水素ナト
リウムおよび食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾
燥させ、濾過して減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲル
クロマトグラフィー（80:20ヘキサン／酢酸エチル）で
精製し、純粋32（Ｒ）−ジヒドロ−32−Ｏ−メシル−2
8,40−ビス−Ｏ−TES−ラパマイシンを白色固体として
得るが、慣用手順により粗生産物を次工程に更に精製す
ることなく使用する。¹ H NMR（CDCl₃）δ0.77（1H,dd,H−38ax）,1.67（3H,s,
C17−CH₃）,1.72（3H,s,C29−CH₃）,2.77（1H,M,H−2
5）,2.92（1H,m,H−39）,3.03（3H,s,C16−OCH₃）,3.17
（3H,s,C27−OCH₃）,3.21（3H,s,C39−OCH₃）,3.42（1
H,m,H−40）,3.45（3H,s,CH₃SO₃）,3.91（1H,d,H−2
7）,4.10（1H,d,H−28）,4.72（1H,m,H−32）,4.94（1
H,s,C10−OH）,5.12（1H,m,H−34）,5.25（1H,d,H−3
0）,5.43（1H,d,H−２）,5.88（1H,dd,H−22）,6.03（1
H,d,H−18）,6.18（1H,dd,H−21）,6.37（1H,dd,H−2
0）,6.44（1H,dd,H−19） MS（FAB、LiIマトリックス）m/z1228（［Ｍ＋Li］^＋）
（相対強度68）、1132（［（Ｍ＋CH₃SO₃H）＋Li］^＋）
（相対強度100） THF 400ml中の32（Ｒ）−ジヒドロ−32−Ｏ−メシル
−28,40−ビス−Ｏ−TES−ラパマイシン22.35g、ヨウ素
化ナトリウム27.50g（183.33mmol）およびジイソプロピ
ルエチルアミン6.3mlの混合物を６時間加熱還流し、次
いで室温に冷却する。得られた混合物を酢酸エチルで希
釈し、38.4％水性硫酸ビスルフィトで処理する。相を分
離する。有機相を３回飽和水性炭酸水素ナトリウムおよ
び１回飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
させ、濾過して減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲルク
ロマトグラフィー（83:17ヘキサン／酢酸エチル）で精
製し、純粋32（Ｒ）−ジヒドロ−ヨード−メシル−28,4
0−ビス−Ｏ−TES−ラパマイシンを得る。¹ H NMR（CDCl₃）回転異性体1.5:1の混合物、括弧内の
化学シフトはマイナー回転異性体を意味する δ0.73（1H,dd,H−38ax）,1.68（1.66）（6H,s,C17−CH
₃and C29−CH₃）,2.72（1H,m,H−25）,2.91（2H,m,H−3
2 and H−39）,3.15（3H,s,C−16−OCH₃）,3.30（3.3
1）（3H,s,C27−OCH₃）,3.43（3.41）（3H,s,C39−OC
H₃）,3.77（3.91）（1H,d,H−27）,4.21（4.25）（1H,
d,H−28）,4.51（1H,s,C10−OH）,5.45（5.48）（1H,d,
H−30）,5.60（5.79）（1H,dd,H−22）,6.02（5.85）
（1H,d,H−18） MS（FAB,LiIマトリックス）m/z1260（［Ｍ＋Li］^＋）
（相対強度100） トルエン190ml中の32（Ｓ）−デオキソ−32−ヨード
−28,40−ビス−Ｏ−TES−ラパマイシン16.79g（13.19m
mol）の撹拌し、冷却（０゜）した溶液に、水素化トリ
ブチルスズ7ml（26.38mmol）、続いてヘキサン中のトリ
エチルボランの1M溶液1.3ml（1.30mmol）を添加する。
混合物を30分撹拌し、飽和水性塩化アンモニウムで停止
させる。相を分離し、水性相を２回酢酸エチルで抽出す
る。合わせた有機相を水、飽和炭酸水素ナトリウム、水
および３回飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲ
ルクロマトグラフィー（75:25ヘキサン／メチル−ｔ−
ブチルエーテル）で精製し、純粋32（Ｒ）−デオキソ−
28,40−ビス−Ｏ−TES−ラパマイシンを白色固体として
得る。¹ H NMR（CDCl₃）回転異性体2.5:1の混合物、括弧内の
化学シフトはマイナー回転異性体を意味する δ0.73（1H,dd,H−38ax）,1.62（1.57）（3H,s,C17−CH
₃）,1.68（1.72）（3H,s,C29−CH₃）,2.77（2.91）（1
H,m,H−25）,2.91（1H,m,H−39）,3.15（3H,s,C16−OCH
₃）,3.27（3.25）（3H,s,C27−OCH₃）,3.43（3.45）（3
H,s,C39−OCH₃）,3.70（3.67）（1H,d,H−27）,4.11
（4.07）（1H,d,H−28）,4.57（1H,broad,s,C10−OH）,
4.87（4.67）（1H,d,H−34）,5.19（5.08）（1H,d,H−3
0）,5.32（1H,d,H−２）,5.60（5.66）（1H,dd,H−2
2）,6.01（5.92）（1H,d,H−18）,6.17（1H,dd,H−2
1）,6.30（1H,dd,H−20）,6.40（1H,dd,H−19） MS（FAB,LiIマトリックス）m/z1134（［Ｍ＋Li］^＋）
（相対強度100） メタノール85ml中の32−デオキソ−28,40−ビス−Ｏ
−TES−ラパマイシン10.73g（9.52mmol）の撹拌し、冷
却（−15゜）した溶液に、2N水性硫酸9.5mlを滴下す
る。添加が完了した後、反応混合物を０゜に暖め、1.5
時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈して飽和炭酸水素
ナトリウムで停止させる。相を分離し、水性相を３回酢
酸エチルで抽出する。合わせた有機相を３階飽和炭酸水
素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮する。残渣をジエ
チルエーテルに溶解すると、所望の32−デオキソ−ラパ
マイシンが結晶化する（無色結晶）。¹ H NMR（CDCl₃）回転異性体3:1の混合物、括弧内の化
学シフトはマイナー回転異性体を意味する δ0.70（1H,dd,H−38ax）,1.44 and 1.32（Ｈ−32）,1.
56（Ｈ−33）,1.65（1.62）（3H,s,C17−CH₃）,1.68
（1.70）（3H,s,C29−CH₃）,2.31（2H,m,H−23 and H−
31）,2.82（2.95）（1H,m,H−25）,2.95（1H,m,H−3
9）,3.14（3H,s,C16−OCH₃）,3.32（3H,s,C27−OCH₃）,
3.38（1H,m,H−40）,3.43（3.41）（3H,s,C39−OCH₃）,
3.61（1H,d,H−27）,4.12（1H,d,H−28）,4.80（4.71）
（1H,d,H−34）,5.22（1H,d,H−30）,5.31（1H,d,H−
２）,5.56（1H,dd,H−22）,5.95（5.87）（1H,d,H−1
8）,6.16（1H,dd,H−21）、6.36（1H,dd,H−20）,6.41
（1H,dd,H−19） MS（FAB、LiIマトリックス）m/z906（［Ｍ＋Li］^＋）
（相対強度100） 実施例2:16−ペンチ−２−イニルオキシ−32（Ｓ）−ジ
ヒドロラパマイシン（R₁＝ペンチ−２−イニル、R₂＝II
（式中、R₃＝ＨおよびR₄＝CH₃）;X＝OH,Y＝Ｏ） 塩化メチレン20ml中の32（Ｓ）−ジヒドロラパマイシ
ン970mg（1.06mmol）および２−ペンチン−１−オル1.3
9ml（15.00mmol）の撹拌し、冷却（０゜）した溶液に、
トリフルオロ酢酸0.50ml（6.50mmol）を添加する。得ら
れた混合物を０゜で３時間撹拌し、飽和水性炭酸水素ナ
トリウムで停止させる。相を分離し、水性相を酢酸エチ
ルで３回抽出する。合わせた有機溶液を飽和食塩水で洗
浄し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して
減圧下で濃縮する。粗生産物をシリカゲルクロマトグラ
フィー（20:80ヘキサン／酢酸エチル）、次いで逆相HPL
C（RP18、18:19メタノール：水）で精製し、標題化合物
を白色固体として得る。¹ H NMR（CDCl₃）回転異性体2.5:1の混合物、括弧内の
化学シフトはマイナー回転異性体を意味する δ0.71（1H,dd,H−38ax）,1.13（1.05）（3H,t,CH₃CH₂C
CCH₂O）,1.67（3H,s,17−CH₃）,1.69（3H,s,29−CH₃）,
2.21（2H,qt,CH₃CH₂CCCH₂O）,2.96（1H,m,H−39）,3.33
（3.37）（3H,s,27−OCH₃）,3.41（3.39）（3H,s,39−O
CH₃）,3.78（1H,dt,CH₃CH₂CCCHHO）,4.0（1H,dt,CH₃CH₂
CCCHHO）,5.52（5.71）（1H,dd,H−22）,5.98（5.83）
（1H,d,H−18）,6.15（1H,m,H−21）,6.30（1H,dd,H−2
0）,6.40（1H,dd,H−19） MS（FAB、LiIマトリックス）m/z974（［Ｍ＋Li］^＋） 実施例3:16−ペンチ−２−イニルオキシ−32（Ｓ）−ジ
ヒドロラパマイシン（別法） ラパマイシンを実施例２の方法と同様にして２−ペン
チン−１−オールと反応させて16−ペンチ−２−イニル
オキシ−ラパマイシンを得る。

THF 180ml中の16−デメトキシ−16−ペンチ−２−イ
ルオキシ−ラパマイシン17.5g（18.1mmol）の撹拌し、
冷却（−77゜）した溶液に、THF中のトリエチルボロハ
イドライドナトリウムの1M溶液21.7ml（21.7mmol）を添
加する。１時間後、−77゜で反応を停止させ、10％クエ
ン酸水性溶液で中和する。次いで、反応混合物を室温に
させ、ほとんどのTHFを減圧下留去して除去する。得ら
れた溶液を酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、
硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶媒の留去後、粗反応生
産物をヘキサン／アセトン7/3で溶出するシリカゲルク
ロマトグラフィーに付す。最終精製を、分取HPLC（RP−
18、76:24メタノール：水）で行い、白色無定形固体と
して標題化合物を得る。

スペクトルデータは、他の経路で得た生産物のものと
同一である。

実施例4:32（Ｓ）−ジヒドロ−40−Ｏ−（２−メトキ
シ）エチル−ラパマイシン（R₁＝CH₃、R₂＝II（式中、R
₃＝メトキシ−エチルおよびR₄＝CH₃）;X＝OH;Y＝Ｏ） THF 20ml中の40−Ｏ−（２−メトキシ）エチル−28
−Ｏ−TES−ラパマイシン2.17g（2.00mmol）の撹拌し、
冷却（０゜）した溶液に、THF中のＬ−Selectride（登
録商標）の1M溶液4.4ml（4.4mmol）を添加する。得られ
た黄色溶液を０゜で３時間撹拌し、過剰なハイドライド
試薬をMeOH 2mlの添加によりで停止させる。溶液をメ
チル−ｔ−ブチルエーテルで希釈し、飽和水性ロシェル
塩溶液を添加する。混合物を室温まで暖め、撹拌を15分
続ける。相を分離し、有機溶液を冷1N HCl、飽和食塩
水、1N炭酸水素ナトリウムおよび再び食塩水で洗浄す
る。水性洗浄物をメチル−ｔ−ブチルエーテルで逆抽出
する。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、濾過して減圧下で濃縮して32−ジヒドロ−40−Ｏ−
（２−メトキシ）エチル−28−Ｏ−TES−ラパマイシン
の32Sおよび32Rの粗混合物を得る。

上記で得た粗混合物をアセトニトリル20mlに溶解し、
０゜に冷却する。得られた溶液にHF.ピリジン錯体2mlを
添加する。撹拌を１時間続け、1N炭酸水素ナトリウムを
添加する。この混合物を３回メチル−ｔ−ブチルエーテ
ルで抽出する。合わせた有機溶液を1N炭酸水素ナトリウ
ム、飽和食塩水で洗浄し、無類硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、濾過して減圧下に濃縮する。精製を逆相HPLC（RP1
8、５μｍ、60分で50:50−100:0アセトニトリル：水）
で精製し、32（Ｓ）−ジヒドロ−40−Ｏ−（２−メトキ
シ）エチル−ラパマイシンおよび副産物として32（Ｒ）
−ジヒドロ−40−Ｏ−（２−メトキシ）エチル−ラパマ
イシンを得る。

32（Ｓ）−ジヒドロ−40−Ｏ−（２−メトキシ）エチル
−ラパマイシン:¹H NMR（CDCl₃）回転異性体2:1の混合
物、括弧内の化学シフトはマイナー回転異性体を意味す
る δ0.77（1H,dd,H−38ax）,1.67（6H,s,C17−CH₃and C29
−CH₃）,2.50（1H,m,H−31）,3.01（1H,m,H−25）,3.12
（2H,m,H−39 and H−40）,3.14（3.15）（3H,s,OC
H₃）,3.28（1H,m,H−32）,3.36（3.34）（3H,s,OCH₃）,
3.39（3.38）（3H,s,OCH₃）,3.48（3.46）（3H,s,OC
H₃）,3.55 and 3.75（4H,2m,OCH₂CH₂O）,3.84（1H,m,H
−14）,4.12（4.16）（1H,d,H−28）,4.73（1H,s,C10−
OH）,5.03（1H,m,H−34） MS（FAB、LiIマトリックス）m/z980（［Ｍ＋Li］^＋） 実施例5:（32S）−ジヒドロ−40−Ｏ−（２−ヒドロキ
シ）エチル−ラパマイシン（R₁＝CH₃、R₂＝II（式中、R
₃＝−CH₂CH₂OHおよびR₄＝CH₃）;X＝OH;Y＝Ｏ） 実施例４の方法に従うが、適当な出発物質を使用し
て、標題化合物を得る。（32S）−ジヒドロ−40−Ｏ−
（２−ヒドロキシ）エチル−ラパマイシン:¹H NMR（CD
Cl₃）回転異性体1.7:1の混合物、括弧内の化学シフトは
マイナー回転異性体を意味する δ0.76（1H,dd,H−38ax）,2.50（1H,m,H−31）,3.10（1
H,m,H−39）,3.13（3.14）（3H,s,C16−OCH₃）,3.20（1
H,m,H−40）,3.28（1H,m,H−32）,3.36（3.38）（3H,s,
C27−OCH₃）,3.45（3.43）（3.41）（3H,s,C39−OC
H₃）,3.50（1H,d,H−27）,3.58 and 3.70（4H,m,OCH₂CH
₂OH）,4.12（4.16）（1H,d,H−28）,5.06（1H,m,H−3
4）,5.60（1H,dd,H−22）,5.99（1H,d,H−18）,6.17（1
H,dd,H−21）,6.33（1H,dd,H−20）,6.42（1H,dd,H−1
9） MS（FAB、LiIマトリックス）m/z966（［Ｍ＋Li］^＋）
（相対強度100） 実施例6:16−ペンチ−２−イニルオキシ−32−デオキソ
−ラパマイシン（R₁＝ペンチ−２−イニル、R₂＝II（式
中、R₃＝ＨおよびR₄＝CH₃）;X＝H;Y＝Ｏ） 実施例１および２または３の方法に従うが、適当な出
発物質を使用して、標題化合物を得る。¹ H NMR（CDCl₃）δ0.70（1H,dd,H−38ax）,1.23（3H,t,
CH₃CH₂CCCH₂O）,2.21（2H,ddq,CH₃CH₂CCCH₂O）,2.78（1
H,m,H−25）,2.94（1H,m,H−39）,3.31（3H,s,C27−OCH
₃）,3.42（3H,s,C39−OCH₃）,3.62（1H,d,H−27）,3.78
（1H,ddd,CH₃CH₂CCCH₂O）,4.02（1H,ddd,CH₃CH₂CCCH
₂O）,4.12（1H,d,H−28）,4.79（1H,m,H−34）,5.20（1
H,d,H−30）,5.28（1H,broad,H−２）,5.50（1H,dd,H−
22）,5.97（1H,d,H−18）,6.14（1H,dd,H−21）,6.30
（1H,dd,H−20）,6.38（1H,dd,H−19） MS（FAB、LiIマトリックス）m/z958（［Ｍ＋Li］^＋）
（相対強度100） 式Ｉの化合物は薬理活性を示し、従って、医薬として
有用である。

式Ｉの特定の化合物は、以下のインビトロおよびイン
ビボ試薬法で示すように免疫抑制および抗増殖活性を有
する。

1.リンパ球混合培養反応（MLR） リンパ球混合培養反応は、元来、同種移植片に関連し
て、可能性のある器官提供者と受容者の間の組織適合性
の評価のために開発され、インビトロ免疫反応の最も確
立されたモデルの一つである。例えば、T.Meo“Immunol
ogical Methods"、L.LefkovitsおよびB.Peris編、Acade
mic Press、N.Y.、227−239頁（1979）に記載のよう
に、マウスモデルMLRを新規化合物の免疫抑制作用を証
明するために使用する。Balb/cマウス（雌、８−10週
齢）の脾臓細胞（2.5×10⁵）を、CBAマウス（雌、８−1
0週齢）の放射線処理（2000ラド）またはマイトマイシ
ンＣ処理脾臓細胞0.5×10⁶と、５日間、マイクロタイタ
ープレートで共インキュベーションする。放射線処理同
種移植細胞は、Balb/c脾臓細胞で増殖反応を誘発し、そ
れは標識前駆体のDNA取り込みにより測定できる。刺激
細胞は、放射線処理（またはマイトマイシンＣ処理）さ
れているため、Balb/c細胞に増殖で応答しないが、その
抗原性は残っている。式Ｉの化合物のBalb/c細胞におけ
る抗増殖性作用を種々の希釈で測定し、細胞増殖の50％
阻害をもたらす濃度（IC₅₀）を計算する。試験サンプル
の阻害能力は、ラパマイシンと比較し得、相対的IC
₅₀（即ち、IC₅₀試験サンプル/IC₅₀ラパマイシン）とし
て示す。実施例１および２の化合物はそれぞれ0.3およ
び0.08のIC₅₀を示すことが判明した。

2.IL−６媒介増殖（IL−6PROL） 式Ｉの化合物の成長因子関連信号伝達経路を妨害する
能力を、インターロイキン−６（IL−６）依存性マウス
ハイブリドーマ細胞系を使用して評価する。検定を96ウ
ェルマイクロタイタープレートで行う。5000細胞／ウェ
ルを、組換えIL−６ 1ng/ml添加無血清培地（M.H.Schr
eierおよびR.Teesら、Immunological methods、I.Lefko
vitsおよびB.Pernis編、Academic Press、1981、Vol.I
I、263−275頁記載のような）で培養する。試験サンプ
ル存在下または非存在下での66時間のインキュベーショ
ンに続いて、細胞を１μCi（³H）−チミジン／ウェルで
更に６時間パルスし、回収し、液体シンチレーションで
計数する。（³H）−チミジンのDNAへの取り込みは細胞
数増加と関連し、従って細胞増殖の目盛りである。試験
サンプルの一連の希釈は、細胞増殖の50％阻害をもたら
す濃度（IC₅₀）の計算を可能にする。試験サンプルの阻
害能力は、ラパマイシンと比較し得、相対的IC₅₀（即
ち、IC₅₀試験サンプル/IC₅₀ラパマイシン）として示
す。実施例１および２の化合物はそれぞれ0.2および0.0
9のIC₅₀を示すことが判明した。

3.マクロフィリン結合検定（MBA） ラパマイシンおよび構造的に関連のある免疫抑制剤、
FK−506は、両方ともマクロフィリン−12（FK−506結合
タンパク質またはFKBP−12としても既知）にインビボで
結合することが知られており、この結合はこれらの化合
物の免疫抑制活性に関連があると考えられている。式Ｉ
の化合物もまた、競合結合検定で証明されるように、強
くマクロフィリン−12に結合する。この検定において、
BSAに結合したFK−506をマイクロタイターウェルをコー
トするのに使用する。ビオチニル化組換えヒトマクロフ
ィリン−12（biot−MAP）を、非動化FK−506に、試験サ
ンプルの存在下または非存在下で結合させる。（非特異
的結合マクロフィリン除去のための）洗浄後、結合biot
−MAPをストレプトアビジン−アルカリホスファターゼ
接合体とインキュベーションすることにより評価する。
読み取りは405nmのODである。試験サンプルのbiot−MAP
への結合は、FK−506に結合するbiot−MAPの量の減少、
即ちOD405の減少をもたらす。試験サンプルの連続希釈
は、非動化FK−506に結合するbiot−MAPの50％阻害をも
たらす濃度（IC₅₀）の決定を可能にする。試験サンプル
の阻害能力は、標準としての遊離FK506のIC₅₀と比較し
得、相対的IC₅₀（即ち、IC₅₀試験サンプル/IC₅₀遊離FA5
06）として示す。実施例１、２および５の化合物はそれ
ぞれ１、2.8および2.5の相対的IC₅₀を示すことが判明し
た。

4.局所移植片対宿主（GvH）反応 式Ｉの化合物のインビボ作用は、例えば、Fordら、TR
ANSPLANTATION 10（1970）258に記載のように、好適な
動物モデルにおいて提供される。６週齢、雌ウィスター
／フルス（WF）ラット脾臓細胞（１×10⁷）を、体重約1
00gの雌（F344×WF）F₁ラットの左後足に０日に皮下注
射する。動物を連続４日間処理し、膝窩リンパ節を除
き、７日目に秤量する。２つのリンパ節の重量の差を反
応を評価するパラメーターとして取る。

5.ラットにおける腎臓同種移植片反応 DA（RT1^a）またはブラウン・ノルウェー（BN）（RT
1ⁿ）ドナーラットの一つの腎臓を、端々吻合を使用し
て、片側のみ（左側）腎摘徐した（Lewis RT1¹）レシピ
エントラットの腎臓血管に移植する。尿管吻合もまた端
々吻合である。処置を、移植の日から開始して14日目ま
で続ける。反対側の腎臓摘徐を移植７日後に行い、受容
者に供給者腎臓の働きのみに頼らせる。移植片受容者の
生存を、機能的移植片のパラメーターとして取る。

6.ラットにおける実験的アレルギー性脳脊髄炎（EAE） EAEにおける式Ｉの化合物の作用を、例えば、Levine
＆ Wenk、AMER.J.PATH 47（1965）61;McFarlinら、J.IM
MUNOL.113（1974）712;Borel、TRANSPLANT.＆ CLIN.IMM
UNOL 13（1981）３に記載の方法により測定する。EAE
は、多発性硬化症の広く認められるモデルである。雄ウ
ィスターラットの後足に、ウシ脊索とフロインド完全ア
ジュバントの混合物を注射する。疾病の症状（尾および
両後足の麻痺）は、通常16日以内に発症する。病気の動
物の数および病気の発症時間を記録する。

7.フロインドアジュバント関節炎 実験誘発関節炎に対する作用は、例えば、Winter ＆
Nuss、ARTHRITIS ＆ RHEUMATISM 9（1966）394:Billing
ham ＆ Davies、HANDBOOK OF EXPERIMENTAL PHARMACOL
（Vane ＆ Ferreira編、Spring−Verlag、ベルリン）50
/II（1979）108−144に記載の方法を使用して示す。OFA
およびウィスターラット（雄または雌、体重150g）の尾
の根元または後ろ足に、凍結乾燥加熱殺菌マイコバクテ
リウム・スメグマティス（Mycobacterium smegmatis）
0.6mg含有鉱物油0.1mlをi.c.注射する。関節炎モデルの
発症により、アジュバント（１−18日目）の注射直後に
処置を開始する：確立された関節炎モデルの処置は14日
目に開始し、その時には２回目の炎症が十分発生してい
る（14−20日目）。実験の最後に、関節の腫張をミクロ
カリパスにより測定する。ED₅₀は対照の半分に腫張（１
回目および２回目）を減少させる経口用量（mg/kg）で
ある。

8.抗癌およびMDR活性 式Ｉの化合物の抗癌活性および多剤耐性を軽減するこ
とによる抗癌剤の効能を増大させる能力を、例えば、抗
癌剤、例えばコルヒチンまたはエトポシドを、インビト
ロでは多剤耐性細胞および細胞感受性細胞に、または多
剤耐性または医薬感受性癌または感染を有する動物に、
試験すべき式Ｉの化合物との共投与有りまたは無しで投
与することにより、および式Ｉの化合物単独を投与する
ことにより証明する。

このようなインビトロ試験は、任意の医薬耐性細胞系
および対照（親）細胞系を使用して、一般に、例えばLi
ngら、J.Cell.Physiol.83,103−116（1974）およびBech
−Hansenら、J.Cell.Physiol.88,23−32（1976）に記載
のように行う。選択する特定のクローンは、多剤耐性
（例えば、コルヒチン耐性）系CHR（サブクローンC5S3.
2）および親、感受性系AUX B1（サブクローンAB1 S1
1）である。

インビボ抗癌および抗MDR活性は、例えば、多剤耐性
および医薬感受性癌細胞を注射したマウスにおいて示さ
れる。医薬物質DR、VC、AM、ET、TEまたはCCに耐性のエ
ールリッヒ腹水癌（EA）サブラインを、Slaterら、J.Cl
in.Invest,70,1131（1982）に記載の方法に従って、EA
細胞をBALB/c宿主マウスの連続した世代に連続移植する
ことにより発展させる。

同等な結果が、例えばインビトロで、同様の計画の新
規化合物試験モデルを用いて、または医薬耐性および医
薬感受性、抗生物質（例えばペニシリン）耐性および感
受性細菌株、抗真菌耐性および感受性細菌株および医薬
耐性原虫株、例えばプラスモディアル株、例えば後天的
化学療法、抗マラリア剤耐性を示す、天然発生プラスモ
ディウス・ファルシパラム（Plasmodium falciparum）
のサブストレインウイルス株に感染させた試験動物を使
用して得られ得る。

9.MipおよびMip様因子阻害 加えて、式Ｉの化合物は、構造的にマクロフィリンに
類似の種々のMip（マクロファージ感染性増強剤）およ
びMip様因子に結合し、阻害する。MipおよびMip様因子
は、例えば、クラミジア・トラコマティス（Chlamidia
trachomatis）のようなクラミジア属（genera Chlamidi
a）；ナイセリア（Neisseria）、例えばナイセリア・メ
ニンギティディス（Neisseria meningitidis）；および
レジオネラ（Legionella）、例えばレジオネラ・ニュー
モフィラ（Legionella pneumophila）を含む広範囲の病
原体およびまたリケッチア目（order Rickettsiales）
の偏性寄生虫群により産生される毒性因子である。これ
らの因子は細胞内感染の確立において重要な役割を担
う。式Ｉの化合物の、MipまたはMip様因子を産生する病
原体の感染を減少させる作用は、例えば、Lundemose
ら、Mol.Microbiol.（1993）7:777に記載の方法を使用
して、マクロライドの存在下および非存在下の細胞培養
における病原体の感染を比較することにより示すことが
できる。

10.慢性移植片拒絶反応 雌DA（RT1^a）ラットの腎臓を、雌Lewis（RT1¹）レシ
ピエントに正常位置で移植する。全24匹の動物に移植す
る。全動物を7.5mg/kg/日／経口のシクロスポリンＡ
で、移植の日に開始して14日間処置し、急性細胞性拒絶
反応を予防する。反対側の腎臓摘出は行わない。式Ｉの
化合物の別の用量またはプラセボで処置する各実験群は
６匹の動物から成る。

移植後53−64日に開始して、レシピエント動物を経口
で、更に69−72日、式Ｉの化合物で処理するかまたはプ
ラセボを投与する。移植後14日目、動物を、腎臓の環流
測定と共に磁気共鳴造影（MRI）により移植片評価する
（移植腎臓および動物自体の腎臓の比較）。これを移植
後53−64日および実験の最後に繰り返す。次いで動物を
剖見する。MRIスコア、移植腎臓の相対的環流速度およ
び腎臓移植片の細胞性拒絶反応に関する組織学的スコア
および血管変化のような拒絶反応パラメーターを測定
し、統計的に分析する。このラット腎臓移植モデルにお
ける式Ｉの化合物、例えば、実施例１および２の化合物
の0.5から2.5mg/kgの量での投与は、上記の全ての拒絶
パラメーターの減少をさせる。

11.血管形成 バルーンカテーテル挿入を、本質的にPowell et al.
（1989）に記載のように行う。イソフルオラン麻酔下
で、Fogarty 2Fカテーテルを外部頚動脈を通して左総頚
動脈に挿入し、膨らませる（膨張≒10μｌ H₂O）。膨
らんだ風船を総頚動脈に沿って３回引き抜き、後の２回
は、穏やかにひねり、均一なデエンドセリアリゼーショ
ン（de−endotherializaiton）を得る。次いで、カテー
テルを除去し、結紮を外部頚動脈の回りに置き、出血を
防止し、次いで動物を回復させる。

２つの群の12匹のRoRoラット（400g、約24週令）を研
究に使用する：一つの対照群および一つの試験化合物投
与群。ラットは全ての操作、実験工程および分析に際し
て、完全に無作為化された。

試験化合物をp.o.（胃ゾンデで）でバルーン注入３日
前（−３日）から実験の最後、バルーン注入14日（＋14
日）まで投与する。ラットを個別のケージに入れ、食物
および水を自由に摂取させる。

次いでラットをイソフルオランで麻酔し、環流カテー
テルを左心室に入れ、大動脈弓を確保し、吸入カニュー
レを右心室に入れる。動物を環流圧150mmHgで、0.1Mリ
ン酸緩衝食塩溶液（PBS、pH7.4）で最初の１分および次
いで15分、リン酸緩衝液（pH7.4）中の2.5％グルタール
アルデヒドで環流する。環流圧は、カニューレのチップ
で150mmHgである（外部頚動脈内の圧トランスデューサ
ーに結合したカニューレに挿入することにより先の実験
で測定して、頚動脈で≒100mmHg）。次いで、頚動脈を
切除し、回りの組織から分離し、７％サッカロース含有
0.1Mカコジレート緩衝液（pH7.4）に浸し、一晩４動脈
でインキュベートする。翌日、頚動脈を1Mカコジレート
中の0.05％KMnO₄に浸し、室温で１時間振る。次いで、
組織を勾配エタノールシリーズ;75％エタノールで２×1
0分、85％エタノールで２×10分、95％エタノールで３
×10分および100％エタノールで３×10分で脱水する。
脱水頚動脈を次いで製造者の推奨に従い、Technovit 71
00に封埋する。封埋培地は、酸素がブロックの適当な効
果を阻害することが判明したため、アルゴン下、乾燥機
に一晩放置し、重合化させる。

１−２μｍ厚の切片を各頚動脈の中切片から硬金属ナ
イフで回転マイクロトーム上で切り、ギムザ染色で２分
染色する。各頚動脈の約５切片をこのように調製し、血
管中膜、新血管内膜の横断面領域および管腔形態測定
を、造影分析システム（MCID,Toronto,Canada）の手段
で測定する。この検定において、式Ｉの化合物、例え
ば、実施例１または２の化合物は、経口で一日0.5から
2.5mg/kgの量投与した時、血管内膜筋増殖を阻害する。

式Ｉの化合物は、また、例えば、診断またはスクリー
ニング目的の競合検定において、マクロフィリン結合化
合物の存在または量を検出するための検定に有用であ
る。従って、他の態様において、本発明は、スクリーニ
ングすべき試験溶液、例えば、血液、血清または試験ブ
ロスにおけるマクロフィリン−結合化合物の存在を試験
するスクリーニングツールとしての式Ｉの化合物の使用
を提供する。好ましくは、式Ｉの化合物をマイクロタイ
ターウェルに非動化し、次いで、試験溶液の存在下また
は非存在下で、標識マクロフィリン−12（FKBP−12）に
結合させる。別法として、FKBP−12をマイクロタイター
ウェルに非動化し、試験溶液の存在下または非存在下
で、蛍光、酵素または放射標識された式Ｉの化合物、例
えば、R₁が標識基を含む式Ｉの化合物に結合させる。プ
レートを洗浄し、結合標識化合物の量を測定する。試験
溶液中のマクロフィリン結合物質の量が、大まかには、
結合標識化合物の量と逆比例している。定量分析のため
に、既知の濃度のマクロフィリン結合化合物を使用し
て、標準結合曲線を作成する。

新規化合物は、特に以下の病気に有用である： ａ）慢性または急性の器官または組織移植拒絶反応の予
防または処置、例えば、心臓、肺、複合心臓−肺、肝
臓、腎臓、膵臓、皮膚または角膜移植の受容者の処置。
それらはまた骨髄移植の後のような移植片対宿主病の処
置および予防にも処方される。

ｂ）移植血管疾患、例えば、粥状硬化症の処置および予
防。

ｃ）血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠状動脈粥状硬化
症、再狭窄をもたらす血管平滑筋細胞増殖および移動。

ｄ）自己免疫疾患および炎症性疾患、特に関節炎（例え
ば、慢性関節リューマチ、慢性進行性関節炎および変形
関節炎）およびリューマチのような自己免疫疾患を含む
病因による炎症性疾患の処置および予防。式Ｉの化合物
を用い得る特定の自己免疫疾患は、自己免疫血液学的疾
患（例えば、溶血性貧血、再生不良性貧血、赤芽球癆お
よび特発性血小板減少症を含む）、全身性エリテマトー
デス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、皮
膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スチー
ブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫
炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病
を含む）、内分泌性眼病、甲状腺機能亢進症、サルコイ
ドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、若年性
糖尿病（Ｉ型糖尿病）、ぶどう膜炎（前部および後
部）、乾性角結膜炎および春季カタル、間質性肺線維
症、乾癬性関節炎、糸球体腎炎（ネフローゼ症候群あり
およびなし、例えば特発性ネフローゼ症候群または微少
変化ネフローゼ症候群）および若干性皮膚筋炎を含む。

ｅ）喘息の処置および予防。

ｆ）多剤耐性（MDR）の処置。式Ｉの化合物は、MDRに関
連する膜輸送分子であるＰ−糖タンパク質（Pgp）を抑
制する。MDRは、薬物がPgpにより細胞外に排出されてし
まうため慣用化学療法に反応しなくなる。癌患者および
AIDS患者にとって特に問題である。式Ｉの化合物は、従
って、多剤耐性癌または多剤耐性AIDSのような多剤耐性
状態の処置および制御において他の化学療法剤の作用を
増大させるのに有用である。

ｇ）増殖性疾患、例えば癌、過増殖性皮膚疾患等の処
置。

ｈ）真菌感染の処置。

ｉ）特にステロイドの活性との相乗作用における、炎症
の処置および予防。

ｊ）感染、特にMipまたはMip様因子を有する病原体によ
る感染の処置および予防。

上記処方のための必要な量は、もちろん、例えば処置
すべき状態（例えば、病気のタイプまたは耐性の特
性）、所望の作用および投与形態に依存して変化する。
しかしながら、一般に、0.05から５または10mg/kg/日ま
での量の経口投与、例えば、0.1から２または7.5mg/kg/
日、一回投与、または１日当たり２から４×、または0.
01から2.5または5mg/kg/日までの量、例えば0.05または
0.1から1.0mg/kg/日までの量の非経口投与、例えば静脈
内、例えばi.v.点滴または注射により、充分な結果が得
られる。患者への好適な一日量は、従って500mg p.o.、
例えば５から100mg p.o.、または0.5から125から250mg
i.v.まで、例えば2.5から50mg i.v.である。

あるいは、そして好ましくは、投与量は患者特異的方
法で設定し、例えばRIA技術で測定されるような血中濃
度により予備決定を提供するようにする。従って、患者
投与量は、RIAにより測定した血中濃度が50または150か
ら500または1000ng/mlまでの範囲の定常進行を達成する
ように、即ち、現在シクロスポリン（Ciclosporin）免
疫抑制治療で使用されているのと同じ方法で、調整し得
る。

式Ｉの化合物は、単一活性成分として、または他の医
薬と組み合わせて投与し得る。例えば、移植片対宿主
病、移植拒絶反応または自己免疫疾患の予防および処置
のような免疫抑制適用において、式Ｉの化合物はサイク
ロスポリン類（cyclosporins）またはアクチノマイシン
類、またはそれらの免疫抑制類似体、例えばサイクロス
ポリンＡ、サイクロスポリンＧ、FK−506等；コルチコ
ステロイド；シクロホスファミド；アザチオプレン；メ
トトレキサート；ブレキナール；レフルノミド；ミゾリ
ビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェティ
ル；免疫抑制モノクローナル抗体、例えば白血球受容体
に対するモノクローナル抗体、例えばMHC、CD2、CD3、C
D4、CD7、CD25、CD28、CTLA4、B7、CD45またはCD58もし
くはそれらの配位子；または他の免疫調節性化合物と組
み合わせて使用し得る。抗炎症適用において、式Ｉの化
合物は、抗炎症剤、例えばコルチコステロイドと共に使
用し得る。抗感染適用において、式Ｉの化合物は他の抗
感染剤、例えば抗ウイルス剤または抗生物質と共に使用
できる。

新規化合物は、既知の経路により、特に、例えば飲料
用溶液、錠剤またはカプセルの形で腸内、例えば経口
で、または例えば注射可能溶液または懸濁液の形で非経
口で投与する。経口投与用の好適な単位用量形態は、例
えば、１から50mg、通常１から10mgの本発明の化合物を
含む。新規化合物を含む医薬組成物は、例えば、EPA第0
041795号に記載のように、ラパマイシン含有医薬組成物
と同様にして調剤し得る。

好ましくは、医薬組成物は式Ｉの化合物および担体媒
体を含み、媒体は親水性相、親油性相および界面活性剤
を含む。それらは、エマルジョンまたはマイクロエマル
ジョン前濃縮物の形であり得る。このようなエマルジョ
ンまたはマイクロエマルジョン前濃縮物は、例えば、英
国特許第2278780A号に記載されている。好ましくは、親
油性相は、10から85重量％の担体媒体を含む；界面活性
剤は５から80重量％の担体媒体を含む；親水性相は10か
ら50重量％の担体媒体を含む。式Ｉの化合物は、好まし
くは２から15重量％の量で存在する。

特に好ましい医薬組成物は ｉ）ヒマシ油とエチレンオキサイドの反応生産物、 ii）植物油および主にリノレン酸またはオレイン酸を含
むグリセロール、モノ−、ジ−およびトリグリセリドの
エステル交換生産物またはポリオキシアルキル化植物
油、 iii）1,2−プロピレングリコール、および iv）エタノール を含む、マイクロエマルジョン前濃縮担体媒体を含む。

上記に従って、本発明はまた： A.例えば、上記疾患の予防または処置における、医薬と
して使用する式Ｉの化合物。

B.式Ｉの化合物を薬学的に許容される希釈剤または担体
と共に含む、医薬組成物。

C.処置を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物を投
与することを含む、上記の疾患の予防または処置法。

D.式Ｉの化合物を含む医薬組成物を含み、医薬組成物は
免疫抑制剤または免疫調節剤または抗炎症剤または抗感
染剤を含む、上記の免疫抑制、炎症または感染に使用す
るためのキットまたはパッケージ。

を提供する。

例えば、下記試験に付した時、ＸがOHである式Ｉの化
合物、すなわち、32（Ｓ）−ジヒドロ化合物は、例え
ば、上記検定において改善された活性を有し、対応する
エナンチオマー、すなわち32（Ｒ）よりも安定であるこ
とが、驚くべきことに判明した： 試験化合物をラット血清中でインキュベートし、FKBP
12に対するその結合親和性を、異なるインキュベーショ
ン時間後にMBA検定で測定する。親和性の減少につれ、
見かけのIC₅₀が増加する。親和性の減少は、一般に、ラ
ット血清中の化合物の不安定性に起因する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 29/00 Ａ６１Ｐ 29/00 31/00 31/00 37/02 37/02 37/06 37/06 43/00 １０５ 43/00 １０５ (56)参考文献 特開 平５−117279（ＪＰ，Ａ) 国際公開94／4540（ＷＯ，Ａ１) 国際公開95／14023（ＷＯ，Ａ１) 国際公開95／4738（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07D 498/18 A61K 31/436 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (5)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式I: 〔式中、 R₁は、C_1-10アルキル、C_3-10アルキニルまたはC_3-10ヒ
   ドロキシアルキニル； R₂は、式II: （式中、R₃は、Ｈ、C_1-6アルキル、ヒドロキシC_1-6アル
   キルまたはC_1-6アルコキシC_1-6アルキルから選択される
   基； R₄は、Ｈまたはメチル；および ＸはOHまたはH: ただし、ＸがOHおよびR₁がC_1-6アルキルである場合、R₃
   はＨ以外である。〕 で示される化合物。
2. 【請求項２】16−ペンチ−２−イニルオキシ−32（Ｓ）
   −ジヒドロ−ラパマイシンまたは16−ペンチ−２−イニ
   ルオキシ−32（Ｓ）−ジヒドロ−40−Ｏ−（２−ヒドロ
   キシエチル）−ラパマイシンである、請求項１記載の化
   合物。
3. 【請求項３】32−デオキソラパマイシンまたは16−Ｏ−
   ペンチ−２−イニル−32−デオキソ−ラパマイシンであ
   る、請求項１記載の化合物。
4. 【請求項４】請求項１〜３の何れかに記載の化合物を薬
   学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、免疫抑
   制活性または抗炎症活性もしくは移植血管障害、血管内
   膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠状動脈粥状硬化症または再
   狭窄の抑制活性を有する医薬組成物。
5. 【請求項５】請求項１〜３の何れかに記載の化合物を含
   む医薬組成物と、免疫抑制剤または免疫調節剤または抗
   炎症剤または抗感染剤を含む医薬組成物を含む、免疫抑
   制、炎症または感染に使用するためのキットまたはパッ
   ケージ。