JP2020520911A - 細菌株を含む組成物 - Google Patents
細菌株を含む組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020520911A JP2020520911A JP2019563398A JP2019563398A JP2020520911A JP 2020520911 A JP2020520911 A JP 2020520911A JP 2019563398 A JP2019563398 A JP 2019563398A JP 2019563398 A JP2019563398 A JP 2019563398A JP 2020520911 A JP2020520911 A JP 2020520911A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- composition
- disorder
- bacterial strain
- compositions
- treating
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0031—Rectum, anus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/22—Anxiolytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本発明は、中枢神経系障害及び状態を処置及び予防するための細菌株を含む組成物を提供する。【選択図】なし
Description
この発明は、哺乳動物の消化管から単離された細菌株を含む組成物、及び疾患の処置におけるかかる組成物の使用の分野にある。
ヒトの腸は、子宮内では無菌と考えられているが、出生直後に様々な母体及び環境微生物に曝される。その後、微生物の定着及び遷移の動的期間が生じ、これは、分娩様式、環境、食事及び宿主遺伝子型などの因子によって影響され、これらの因子の全てが、特に若年期において、腸内微生物叢の組成に影響を及ぼす。その後、微生物叢は安定して成人様になる［１］。ヒト腸内微生物叢は、２つの主要な細菌分類：Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ及びＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ；に本質的に属する５００〜１０００を超える種々のファイロタイプを含有する［２］。ヒト腸の細菌定着から生じる成功裏の共生関係は、広範な代謝的、構造的、保護的及び他の有益な機能を生じさせてきた。定着した腸の代謝活性の向上は、さもなければ難消化性の食事成分が副生成物の放出と共に分解されて宿主に重要な栄養源をもたらすということを確実にする。同様に、腸内微生物叢の免疫学的重要性は、よく認識されており、共生細菌の導入後に機能的に再構成される損なわれた免疫系を有する無菌動物において実証されている［３〜５］。
ヒト微生物叢の大きさ及び複雑さの発見は、現在進行中の多くの健康及び疾患の概念の評価を結果として生じている。確実には、微生物叢組成の劇的な変化は、胃腸障害、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）において記録されてきた［６〜９］。より最近では、ヒト脳疾患において病態生理的役割を果し得る腸内微生物叢における変化に関しての当該分野での関心が高まっている［１０］。前臨床的及び臨床的証拠により、脳の発達と微生物叢との間の関連が強く示唆されている［１１］。
複数の神経分泌及び内分泌シグナル伝達系を含めた、脳と腸内微生物叢との間の双方向のシグナル伝達を実証している前臨床的文献が増えている。実際、微生物叢におけるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種のレベルの増加は、脳障害と関連しており［１２］、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ及びＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門の不均衡もまた、脳の発達障害に関与している［１３］。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ及びＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属のもの、ならびにＡｌｃａｌｉｇｅｎａｃｅａｅ科のものを含めた、腸内の共生生物のレベルの変化が、免疫介在性の中枢神経系（ＣＮＳ）障害に関与しているという示唆は、患者と健常者との間の微生物叢の変化の欠失を示唆している研究によって疑問視されている［１４］。このことは、現在のところ、微生物叢とヒト脳疾患との間の関連性の実際の効果があまり特徴付けられていないということを示している。したがって、より直接的な分析的研究は、ＣＮＳ障害に対する微生物叢の変化の治療的影響を同定することが必要とされている。
ある特定の細菌株が動物の腸において有し得る潜在的なプラス効果の認識において、種々の株が、種々の疾患の処置における使用のために提案されてきた（例えば、［１４〜１７］を参照されたい）。また、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ株を含めたある特定の株が、腸に直接関連しない種々の炎症性疾患及び自己免疫疾患を処置する際の使用のために提案されてきた（レビューには［１８］及び［１９］を参照されたい）。また、広範なプロバイオティクスが、感情的挙動を調節する際の腸内微生物叢の役割を決定するために動物モデルにおいて調査されており、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓは、有益な効果を示す主な属であり、不安及び反復行動を低減し、社会的相互作用を増加させる［２０］〜［２２］。しかし、種々の疾患と種々の細菌株との間の関係、ならびに、特定の細菌株の、全身レベルでの腸に対しての、及びいずれか特定のタイプの疾患に対しての正確な効果は、特に中枢神経系疾患について、あまり特徴付けられていない。
微生物叢−腸−脳軸が自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）ならびに他の神経発達障害及び精神神経障害において影響されることを示唆する証拠が増えている。動物モデルにより、微生物叢がＡＳＤにどのように関与し得るかについてのかなりの見識が付与されている。さらに、前臨床的研究は、有益な生存生物学的製剤の投与を通して腸内微生物叢を標的とすることが、母体免疫活性化（ＭＩＡ）マウスモデルならびに黒及び褐色のＢＲａｃｈｙｕｒｉｃ（ＢＴＢＲ）マウスを含めた動物モデルにおいて自閉症関連行動を改善する際に効能を示すことを実証している。ＢＴＢＲマウスは、社交性の欠失、反復行動及び不安の増加などの多数のＡＳＤ関連行動を示す、遺伝子組み換えされた同系交配マウス株である。さらに、これらのマウスはまた、腸内微生物叢の組成の変化に併せて胃腸機能障害も示す。結果として、ＡＳＤにおける微生物叢−腸−脳軸の役割を調査する適切な動物モデルを表している。
したがって、中枢神経系障害を処置する新規の方法が当該分野において必要とされている。腸細菌を使用した新規の治療を開発することができるように特徴付けられる腸細菌の潜在的効果も必要とされている。
本発明者らは、中枢神経系障害を処置及び予防するための新規の治療を開発した。特に、本発明者らは、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置及び予防するための新規の治療を開発した。特に、本発明者らは、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株が、微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患及び状態を処置及び予防するのに有効であり得るということを確認した。実施例において記載されているように、Ｂｌａｕｔｉａ株を含む組成物の経口投与は、自閉症スペクトラム障害のマウスモデルにおいて微生物叢−腸−脳軸の機能障害に関連する症状を低減し得る。また、実施例において記載されているように、Ｂｌａｕｔｉａ株を含む組成物の経口投与は、微生物叢−腸−脳軸の機能、神経発達障害及び精神神経障害に関連するシグナル伝達分子のレベルを調節し得る。
そのため、第１実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、中枢神経系障害または状態を処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。特定の実施形態において、中枢神経系障害または状態は、微生物叢−腸−脳軸によって介在される。さらなる実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、神経発達障害または精神神経状態を処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。本発明者らは、この属からの細菌株による処置が、中枢神経系障害、特に微生物叢−腸−脳軸によって介在される障害のマウスモデルにおいて、臨床的利益を提供することができるということを確認した。本発明者らは、この属からの細菌株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；視床下部−下垂体−副腎系（ＨＰＡ）軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ／あるいは対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得るということを確認した。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し；視床下部−下垂体−副腎系（ＨＰＡ）軸経路の活性を調節し；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し；かつ／あるいは対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節する際に特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅを使用する組成物もまた有効であり得る。
特定の実施形態において、本発明は：自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；及び／または慢性疼痛；からなる群から選択される疾患または状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、多発性硬化症；運動ニューロン疾患；ハンチントン病、ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎を処置または予防するのに有用であり得る。微生物叢−腸−脳軸に対する及び微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患に対する、Ｂｌａｕｔｉａ属由来の細菌株について示される効果は、他の微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患及び状態、例えば、上記において列挙されているものに関する治療的利益を提供し得る。他の実施形態において、本発明は、微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患及び状態に関連する共存疾患、例えば、上記において列挙されているものを処置する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患及び状態に関連する胃腸共存疾患、例えば、上記において列挙されているものを処置する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。自閉症スペクトラム障害の症状のアセスメントのためにこの用途で使用されるマウスモデル実験は、上記において列挙されているものを含めた他の中枢神経系障害の症状のアセスメントに適用可能であることが当該分野において公知である［２３〜２５］。
特に好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害、例えば、自閉症を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。本発明者らは、Ｂｌａｕｔｉａ株による処置が、自閉症スペクトラム障害のマウスモデルにおいて症状の重篤度を低減し得、常同、反復、強迫及び不安行動を予防または低減し得るということを確認した。好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害の処置における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａを使用する組成物は、自閉症スペクトラム障害を処置するのに特に有効であり得る。好ましい実施形態において、本発明は、特に、自閉症スペクトラム障害の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する際の使用のための組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害の行動上の症状の処置における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害の胃腸症状の処置における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害の行動上の症状及び胃腸症状の処置における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ／あるいは、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、自閉症スペクトラム障害の神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、自閉症スペクトラム障害を処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。
さらに好ましい実施形態において、本発明は、強迫神経症（ＯＣＤ）を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、ＯＣＤの処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する際の使用のための組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ／あるいは、対象の共生代謝産物及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、ＯＣＤの神経病理学に関係している。好ましい実施形態において、本発明は、ＯＣＤを処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、ＯＣＤを処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、ＯＣＤを処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。
さらに好ましい実施形態において、本発明は、大うつ病性障害（ＭＤＤ）を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、うつ病のマウスモデルにおいて臨床的利益を提供し得る。好ましい実施形態において、本発明は、うつ病の処置における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ株を使用する組成物は、うつ病を処置するのに特に有効であり得る。好ましい実施形態において、本発明は、うつ病の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する際の使用のための組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、ＭＤＤの神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。好ましい実施形態において、本発明は、ＭＤＤを処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、ＭＤＤを処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、ＭＤＤを処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。
さらに好ましい実施形態において、本発明は、不安障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、この用途の例において、不安のマウスモデルにおいて疾患の発生及び疾患の重篤度を低減する。好ましい実施形態において、本発明は、不安障害の処置における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ株を使用する組成物は、不安障害を処置するのに特に有効であり得る。好ましい実施形態において、本発明は、不安の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する際の使用のための組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、不安障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、不安障害を処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、不安障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。
さらに好ましい実施形態において、本発明は、ストレス障害、例えば、心的外傷後ストレス障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物は、ストレス障害のマウスモデルにおいてストレスを低減し得る。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、ストレス障害の神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。好ましい実施形態において、本発明は、ストレス障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、ストレス障害を処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、ストレス障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。
さらに好ましい実施形態において、本発明は、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害、例えば、統合失調症を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物は、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害のマウスモデルにおいて陽性及び陰性症状を改善し得る。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害の神経病理学に関係している。好ましい実施形態において、本発明は、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害を処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。
さらに好ましい実施形態において、本発明は、双極性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物は、双極性障害のマウスモデルにおいて躁病及び／またはうつ病の事象を低減し得る。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、双極性障害の神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。好ましい実施形態において、本発明は、双極性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、双極性障害を処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、双極性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。
さらに好ましい実施形態において、本発明は、神経認知障害、例えば、アルツハイマー病を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ属の種の細菌株を含む組成物は、神経認知障害のマウスモデルにおいて認知及び行動の機能を改善し得る。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、神経認知障害の神経病理学に関係している。好ましい実施形態において、本発明は、神経認知障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、神経認知障害を処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、神経認知障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。
さらに好ましい実施形態において、本発明は、パーキンソン病を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物は、パーキンソン病のマウスモデルにおいて運動及び認知機能を改善し得る。Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、パーキンソン病の神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。好ましい実施形態において、本発明は、パーキンソン病を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓを使用する組成物は、パーキンソン病を処置するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、本発明は、パーキンソン病を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、中枢神経系障害または状態を処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、神経発達障害または精神神経状態を処置するのに特に有効であり得る。
Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し；視床下部−下垂体−副腎系（ＨＰＡ）軸経路の活性を調節し；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し；かつ／あるいは対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節する際に特に有効であり得る。特に好ましい実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａは、ブチレートのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、ブチレートのレベルの調節は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する。
ある特定の実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、自閉症スペクトラム障害を処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、ＯＣＤを処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、ＯＣＤを処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、ＭＤＤを処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、ＭＤＤを処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、不安障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、不安障害を処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、ストレス障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、ストレス障害を処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害を処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、双極性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、双極性障害を処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、神経認知障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、神経認知障害を処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、パーキンソン病を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを使用する組成物は、パーキンソン病を処置するのに特に有効であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患または状態の処置または予防において微生物叢−腸−脳軸を調節する方法における使用のためのものである。特に、本発明の組成物は、自閉症スペクトラム障害；強迫神経症；大うつ病性障害；不安障害；ストレス障害；統合失調症スペクトラム障害；双極性障害；神経認知障害及びパーキンソン病の処置または予防において微生物叢−腸−脳軸を調節する際に使用され得る。
本発明の好ましい実施形態において、組成物における細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓのものである。近縁の株、例えば、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する細菌株が使用されてもよい。好ましくは、細菌株は、配列番号１または２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号２とのものである。好ましくは、本発明における使用のための細菌株は、配列番号２によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。
本発明の好ましい実施形態において、組成物における細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅのものである。近縁の株、例えば、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する細菌株が使用されてもよい。好ましくは、細菌株は、配列番号３または４と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号４とのものである。好ましくは、本発明における使用のための細菌株は、配列番号４によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。
本発明の好ましい実施形態において、組成物における細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａのものである。近縁の株、例えば、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する細菌株が使用されてもよい。好ましくは、細菌株は、配列番号７と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。最も好ましくは、組成物における細菌株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株である。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、経口投与用である。本発明の株の経口投与は、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在されるものを処置するのに有効であり得る。また、経口投与は、患者及び施術者にとって便利であり、腸への送達及び／または腸への部分もしくは全体定着を可能にする。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、１または２以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌株を含む。凍結乾燥は、細菌の送達を可能にする安定な組成物を調製するのに有効かつ便利な技術である。
ある特定の実施形態において、本発明は、上記に記載されている組成物を含む食品を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、上記に記載されている組成物を含むワクチン組成物を提供する。
さらに、本発明は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害によって介在される疾患または状態を処置または予防する方法であって、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を投与することを含む上記方法を提供する。
上記発明の開発において、本発明者らは、治療に特に有用である細菌株を確認及び特徴付けした。本発明のＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株は、本明細書に記載されている疾患、例えば、自閉症スペクトラム障害を処置するのに有効であることが示される。そのため、別の態様において、本発明は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株、またはその派生物（derivative）の細胞を提供する。本発明はまた、かかる細胞、またはかかる細胞の生物学的に純粋な培養物を含む組成物も提供する。本発明はまた、特に本明細書に記載されている疾患の治療における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株、またはその派生物の細胞も提供する。
特に好ましい実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害、または好ましくは自閉症を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、特に、自閉症の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されている株を含む組成物を提供する。
上記発明の開発において、本発明者らは、治療において特に有用であるさらなる細菌株を確認及び特徴付けした。本発明のＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株は、本明細書に記載されている疾患、例えば、自閉症スペクトラム障害を処置するのに有効であることが示される。そのため、別の態様において、本発明は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株、またはその派生物の細胞を提供する。本発明はまた、かかる細胞、またはかかる細胞の生物学的に純粋な培養物を含む組成物も提供する。本発明はまた、特に本明細書に記載されている疾患の治療における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株、またはその派生物の細胞も提供する。
特に好ましい実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害、または好ましくは自閉症を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、特に、自閉症の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株を含む組成物を提供する。
上記発明の開発において、本発明者らは、治療に特に有用である細菌株を確認及び特徴付けした。本発明のＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株は、本明細書に記載されている疾患、例えば、自閉症スペクトラム障害を処置するのに有効であることが示される。そのため、別の態様において、本発明は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株、またはその派生物の細胞を提供する。本発明はまた、かかる細胞、またはかかる細胞の生物学的に純粋な培養物を含む組成物も提供する。本発明はまた、特に本明細書に記載されている疾患の治療における使用のための、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株、またはその派生物の細胞も提供する。
特に好ましい実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害、または好ましくは自閉症を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、特に、自閉症の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する方法における使用のための、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株を含む組成物を提供する。
細菌株
本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む。実施例は、この種の細菌が、微生物叢−腸−脳軸によって介在される自閉症スペクトラム障害及び中枢神経系障害を処置または予防するのに有用であることを実証している。自閉症スペクトラム障害の症状のアセスメントのためにこの用途で使用されるマウスモデル実験は、上記において列挙されているものを含めた他の中枢神経系障害の症状のアセスメントに適用可能であることが当該分野において公知である。
本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む。実施例は、この種の細菌が、微生物叢−腸−脳軸によって介在される自閉症スペクトラム障害及び中枢神経系障害を処置または予防するのに有用であることを実証している。自閉症スペクトラム障害の症状のアセスメントのためにこの用途で使用されるマウスモデル実験は、上記において列挙されているものを含めた他の中枢神経系障害の症状のアセスメントに適用可能であることが当該分野において公知である。
本発明は、治療における使用のための、例えば、中枢神経系障害または状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を処置または予防する際における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ属の株を含み、いずれの他の細菌属も含有しない。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ属の単一株を含み、いずれの他の細菌株、属または種も含有しない。
本発明における使用のためのＢｌａｕｔｉａ株の例として、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ、Ｂ．ｆａｅｃｉｓ、Ｂ．ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ、Ｂ．ｇｌｕｃｅｒａｓｅａ、Ｂ．ｈａｎｓｅｎｉｉ、Ｂ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ、Ｂ．ｌｕｔｉ、Ｂ．ｐｒｏｄｕｃｔａ、Ｂ．ｓｃｈｉｎｋｉｉ及びＢ．ｗｅｘｌｅｒａｅが挙げられる。好ましい種は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ、Ｂ．ｗｅｘｌｅｒａｅ及びＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａである。Ｂｌａｕｔｉａ種は、球形または楕円形のいずれであってもよいグラム反応陽性の非運動性細菌であり、全てが、グルコース発酵の主な最終産物として酢酸を産生する偏性嫌気性菌である［２６］。Ｂｌａｕｔｉａは、ヒト腸から単離されてよいが、Ｂ．ｐｒｏｄｕｃｔａは、敗血症サンプルから単離されたものである。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株ＧＡＭ６−１Ｔの１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列のＧｅｎＢａｎｋ受託番号は、ＨＭ６２６１７７である（配列番号１として本明細書に開示されている）。例示的なＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株は、［２７］に記載されている。Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅのタイプの株は、ＷＡＬ１４５０７＝ＡＴＣＣ ＢＡＡ−１５６４＝ＤＳＭ１９８５０である［２８］。Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株ＷＡＬ１４５０７Ｔの１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列のＧｅｎＢａｎｋ受託番号は、ＥＦ０３６４６７である（配列番号３として本明細書に開示されている）。この例示的なＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株は、［２８］に記載されている。
受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ細菌を実施例において試験した。該細菌は、本明細書においてＭＲＸ００６（株８３０）とも称される。用語「ＭＲＸ００６」、「ＭＲｘ０００６」、「Ｍｒｘ００６」、「Ｍｒｘ０００６」及び株８３０は、本明細書において互換可能に使用される。試験したＭＲＸ００６（８３０株）の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列は、配列番号２において付与されている。ＭＲＸ００６（株８３０）を、「Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ８３０」として２０１５年３月１２日にＧＴ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｌｔｄ．（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２５ ２ＺＳ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）によって国際寄託当局ＮＣＩＭＢ，Ｌｔｄ．（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２１ ９ＹＡ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）に寄託し、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１が割り当てられた。ＧＴ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｌｔｄ．は、その後、その名称を４Ｄ Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌｉｍｉｔｅｄに変更した。
ＭＲＸ００６（株８３０）のゲノムは、染色体及びプラスミドを含む。ＭＲＸ００６（株８３０）の染色体配列は、配列番号５において付与されている。ＭＲＸ００６（株８３０）のプラスミド配列は、配列番号６において付与されている。これらの配列を、ＰａｃＢｉｏ ＲＳ ＩＩプラットフォームを使用して生じさせた。
受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ細菌を実施例において試験した。該細菌は、本明細書において株ＭＲＸ００８とも称される。用語「ＭＲＸ００８」、「ＭＲｘ０００８」、「Ｍｒｘ００８」及び「Ｍｒｘ０００８」は、本明細書において互換可能に使用される。試験したＭＲＸ００８株の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列は、配列番号４において付与されている。株ＭＲＸ００８を「Ｂｌａｕｔｉａ／Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ」として２０１５年１１月１６日に４Ｄ Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌｔｄ．（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２５ ２ＺＳ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）によって国際寄託当局ＮＣＩＭＢ，Ｌｔｄ．（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２１ ９ＹＡ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）に寄託し、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６が割り当てられた。
本発明のさらに好ましい株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ細菌である。この株を、２００１年５月１０日に受託番号ＤＳＭ１４２９４で「Ｓ５ａ３３」として、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ［Ｇｅｒｍａｎ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ］（Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ １ｂ，３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に寄託した。寄託者は、ＩＮＲＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅ ｄｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ ＣＲ ｄｅ Ｃｌｅｒｍｏｎｔ−Ｆｅｒｒａｎｄ／Ｔｈｅｉｘ ６３１２２ Ｓａｉｎｔ Ｇｅｎｅｓ Ｃｈａｍｐａｎｅｌｌｅ，Ｆｒａｎｃｅであった。寄託物の所有権は、譲渡により、４Ｄ Ｐｈａｒｍａ Ｐｉｃに渡った。４Ｄ Ｐｈａｒｍａ Ｐｉｃは、合意により、４Ｄ Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌｉｍｉｔｅｄが、適用において、当該寄託した生物材料に関わることを許可しており、また、公衆が利用できるようになっている当該寄託した材料に対してその無条件かつ取消不能な承認を付与している。受託番号ＤＳＭ１４２９４の寄託物は、２０００年５月１１日に公開されたものであった。
受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ細菌を実施例において試験した。該細菌は、本発明の好ましい株である。
実施例において試験されている株と近縁の細菌株もまた、自閉症スペクトラム障害及び中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効であると期待される。ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、本発明における使用のための細菌株は、配列番号１または２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号２とのものである。好ましくは、本発明における使用のための細菌株は、配列番号２によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、本発明における使用のための細菌株は、配列番号３または４と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号４とのものである。好ましくは、本発明における使用のための細菌株は、配列番号４によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号５と配列同一性を有する染色体を有する。好ましい実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号５の少なくとも６０％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）にわたって配列番号５と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性）を有する染色体を有する。例えば、本発明における使用のための細菌株は、配列番号５の７０％にわたって配列番号５と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号５の８０％にわたって配列番号５と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号５の９０％にわたって配列番号５と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号５の１００％にわたって配列番号５と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号５の７０％にわたって配列番号５と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号５の８０％にわたって配列番号５と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号５の９０％にわたって配列番号５と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号５の１００％にわたって配列番号５と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号５の７０％にわたって配列番号５と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号５の８０％にわたって配列番号５と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号５の９０％にわたって配列番号５と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号５の１００％にわたって配列番号５と少なくとも９８％の配列同一性を有する染色体を有していてよい。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号６と配列同一性を有するプラスミドを有する。好ましい実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号６の少なくとも６０％（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）にわたって配列番号６と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性）を有するプラスミドを有する。例えば、本発明における使用のための細菌株は、配列番号６の７０％にわたって配列番号６と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号６の８０％にわたって配列番号６と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号６の９０％にわたって配列番号６と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号６の１００％にわたって配列番号６と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号６の７０％にわたって配列番号６と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号６の８０％にわたって配列番号６と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号６の９０％にわたって配列番号６と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号６の１００％にわたって配列番号６と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号６の７０％にわたって配列番号６と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号６の８０％にわたって配列番号６と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号６の９０％にわたって配列番号６と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号６の１００％にわたって配列番号６と少なくとも９８％の配列同一性を有するプラスミドを有し得る。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号５と配列同一性を有する染色体及び配列番号６と配列同一性を有するプラスミドを有する。
受託番号４２３８１で寄託されている細菌のバイオタイプである細菌株もまた、自閉症スペクトラム障害及び中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効であると期待される。受託番号４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプである細菌株もまた、自閉症スペクトラム障害及び中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効であると期待される。バイオタイプは、同じまたは非常に類似する生理的及び生化学的特徴を有する近縁の株である。
受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明における使用に好適である株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌の他のヌクレオチド配列をシークエンスすることによって同定されてよい。例えば、実質的に全ゲノムがシークエンスされてよく、本発明における使用のためのバイオタイプ株は、その全ゲノムの少なくとも８０％にわたって（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％もしくは９９％にわたって、またはその全ゲノムにわたって）少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有していてよい。例えば、いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、そのゲノムの少なくとも９８％にわたって少なくとも９８％の配列同一性、またはそのゲノムの９９％にわたって少なくとも９９％の配列同一性を有する。バイオタイプ株を同定するのに使用される他の好適な配列は、ｈｓｐ６０または反復配列、例えば、ＢＯＸ、ＥＲＩＣ、（ＧＴＧ）５、もしくはＲＥＰまたは［２９］を含んでいてよい。バイオタイプ株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有していてよい。
いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、ＮＣＩＭＢ４２３８１として寄託されている株ＭＲＸ００６の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有しており、配列番号２と少なくとも９９％同一である（例えば、少なくとも９９．５％または少なくとも９９．９％同一である）１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、ＮＣＩＭＢ４２３８１として寄託されている株ＭＲＸ００６の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有しており、配列番号２の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。
いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、ＮＣＩＭＢ４２４８６として寄託されている株ＭＲＸ００８の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有しており、配列番号４と少なくとも９９％同一である（例えば、少なくとも９９．５％または少なくとも９９．９％同一である）１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、ＮＣＩＭＢ４２４８６として寄託されている株ＭＲＸ００８の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有しており、配列番号４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。
代替的には、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明における使用に好適である株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１の寄託物または受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６の寄託物、ならびに制限断片分析及び／またはＰＣＲ分析を使用することによって、例えば、蛍光増幅断片長多型分析（ＦＡＦＬＰ）及び反復ＤＮＡ要素（ｒｅｐ）−ＰＣＲ指紋検査、またはタンパク質プロファイリング、または部分１６Ｓもしくは２３ｓ ｒＤＮＡシークエンシングを使用することによって同定されてよい。好ましい実施形態において、かかる技術は、他のＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓまたはＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株を同定するのに使用されてよい。
ある特定の実施形態において、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明における使用に好適である株は、増幅リボソームＤＮＡ制限分析（ＡＲＤＲＡ）によって分析されるとき、例えば、Ｓａｕ３ＡＩ制限酵素（例示的な方法及びガイダンスについては、例えば［３０］を参照されたい）を使用するとき、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌と同じパターンを付与する株である。代替的には、バイオタイプ株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌と同じ炭水化物発酵パターンを有する株として同定される。
本発明の組成物及び方法において有用である他のＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株、例えば、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプは、実施例において記載されているアッセイを含め、いずれの適切な方法またはストラテジーを使用して同定されてもよい。例えば、本発明で使用される株は、嫌気性ＹＣＦＡにおいて培養し、及び／または当該細菌を自閉症スペクトラム障害マウスモデルに投与し、次いでサイトカインレベルを評価することによって同定されてよい。特に、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌と同様の成長パターン、代謝型及び／または表面抗原を有する細菌株は、本発明において有用であり得る。有用な株は、ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６株に匹敵する免疫調節活性を有する。特に、バイオタイプ株は、実施例において示されている効果に匹敵する、自閉症スペクトラム障害モデルに対する効果を引き出し、これは、実施例において記載されている培養及び投与プロトコルを使用することによって同定されてよい。
本発明の特に好ましい株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株である。これは、実施例において試験されて、疾患を処置するのに効果的であることが示される例示的なＭＲＸ００６株である。そのため、本発明は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株、またはその派生物の細胞、例えば単離細胞を提供する。本発明はまた、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株、またはその派生物の細胞を含む組成物も提供する。本発明はまた、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株の生物学的に純粋な培養物も提供する。本発明はまた、特に本明細書に記載されている疾患の治療における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株またはその派生物の細胞も提供する。
本発明の特に好ましい株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株である。これは、実施例において試験されて、疾患を処置するのに効果的であることが示される例示的なＭＲＸ００８株である。そのため、本発明は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株、またはその派生物の細胞、例えば単離細胞を提供する。本発明はまた、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株、またはその派生物の細胞を含む組成物も提供する。本発明はまた、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株の生物学的に純粋な培養物も提供する。本発明はまた、特に本明細書に記載されている疾患の治療における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株、またはその派生物の細胞も提供する。
受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている株の派生物は、娘株（後代）、またはオリジナルから培養された（サブクローニングされた）株であってよい。受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている株の派生物は、娘株（子孫）、またはオリジナルから培養された（サブクローニングされた）株であってよい。本発明の株の派生物は、生物活性を取り除くことなく、例えば、遺伝子レベルで修飾されてよい。特に、本発明の派生株は、治療的に活性である。派生株は、オリジナルのＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６株と匹敵する免疫調節活性を有する。特に、派生株は、実施例において示されている効果に匹敵する、中枢神経系障害または状態モデル、及びサイトカインレベルに対する効果を引き出し、これは、実施例において記載されている培養及び投与プロトコルを使用することによって同定されてよい。ＮＣＩＭＢ４２３８１株の派生物は、概して、ＮＣＩＭＢ４２３８１株のバイオタイプである。ＮＣＩＭＢ４２４８６株の派生物は、概して、ＮＣＩＭＢ４２４８６株のバイオタイプである。
受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株の細胞への言及は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するいずれの細胞も包含し、かかる細胞は本発明によって包含される。そのため、いくつかの実施形態において、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株の細胞への言及は、ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＭＲＸ００６株のみを称し、ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されていない細菌株を称さない。いくつかの実施形態において、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株の細胞への言及は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するが、ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されている株ではない細胞を称する。
受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株の細胞への言及は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するいずれの細胞も包含し、かかる細胞は本発明によって包含される。そのため、いくつかの実施形態において、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株の細胞への言及は、ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株のみを称し、ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されていない細菌株を称さない。いくつかの実施形態において、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株の細胞への言及は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するが、ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている株ではない細胞を称する。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号５と配列同一性を有する染色体、及び、例えば上記に記載されているように、配列番号１、２、３または４と配列同一性を有する１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を有し、好ましくは、配列番号２または４と少なくとも９９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有し、より好ましくは、配列番号２または４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号５と配列同一性を有する染色体を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号５と配列同一性を有する染色体、及び、例えば上記に記載されているように、配列番号１、２、３または４と配列同一性を有する１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号２または４によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列（例えば、配列番号２または４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む）、及び配列番号５の少なくとも９０％にわたって配列番号５と少なくとも９５％の配列同一性を有する染色体を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓであり、配列番号２または４によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列（例えば、配列番号２または４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む）、及び配列番号５の少なくとも９８％にわたって（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％にわたって）配列番号５と少なくとも９８％の配列同一性（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％の配列同一性）を有する染色体を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号６と配列同一性を有するプラスミド、及び、例えば上記に記載されているように、配列番号１、２、３または４と配列同一性を有する１６Ｓ ｒＲＮＡ配列、好ましくは、配列番号２または４と少なくとも９９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列、より好ましくは配列番号２または４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含むものを有する。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号６と配列同一性を有するプラスミドを有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号６と配列同一性を有するプラスミド、及び、例えば上記に記載されているように、配列番号１、２、３または４と配列同一性を有する１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号２または４によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列（例えば、配列番号２または４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む）、及び配列番号６の少なくとも９０％にわたって配列番号６と少なくとも９５％の配列同一性を有するプラスミドを有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓであり、配列番号２または４によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列（例えば、配列番号２または４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む）、及び配列番号６の少なくとも９８％にわたって（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％にわたって）配列番号６と少なくとも９８％の配列同一性（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％の配列同一性）を有するプラスミドを有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号５と配列同一性を有する染色体、例えば上記に記載されているように、配列番号６と配列同一性を有するプラスミド、及び、例えば上記に記載されているように、配列番号１、２、３または４と配列同一性を有する１６Ｓ ｒＲＮＡ配列、好ましくは、配列番号２または４と少なくとも９９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列、より好ましくは配列番号２または４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含むものを有する。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号５と配列同一性を有する染色体、及び、例えば上記に記載されているように、配列番号６と配列同一性を有するプラスミドを有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号５と配列同一性を有する染色体、例えば上記に記載されているように、配列番号６と配列同一性を有するプラスミド、及び、例えば上記に記載されているように、配列番号１、２、３または４と配列同一性を有する１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号２または４によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列（例えば、配列番号２または４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む）、配列番号５の少なくとも９０％にわたって配列番号５と少なくとも９５％の配列同一性を有する染色体、及び配列番号６の少なくとも９０％にわたって配列番号６と少なくとも９５％の配列同一性を有するプラスミドを有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓであり、配列番号２または４によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列（例えば、配列番号２または４の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む）、配列番号５の少なくとも９８％にわたって（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％にわたって）配列番号５と少なくとも９８％の配列同一性（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％の配列同一性）を有する染色体、及び、配列番号６の少なくとも９８％にわたって（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％にわたって）配列番号６と少なくとも９８％の配列同一性（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％の配列同一性）を有するプラスミドを有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
好ましい実施形態において、本発明の組成物における細菌株は生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。
Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓとしてこれまでに知られている）は、哺乳動物の腸から単離されており、偏性嫌気性であり、また、Ｈ２／ＣＯ２を、ヒトの栄養及び健康に重要であり得る酢酸塩に代謝する。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａのタイプの株は、Ｓ５ａ３３＝ＪＣＭ１４６５６である。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株Ｓ５ａ３６の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列のＧｅｎＢａｎｋ受託番号は、Ｘ９５６２４．１である（配列番号７として本明細書に開示されている）。この例示的なＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株は、［２８］及び［３１］に記載されている。Ｓ５ａ３３株及びＳ５ａ３６株は、健常な対象の糞便サンプルから単離した株の２つのサブクローンに相当する。これらは、同一の形態、生理機能及び代謝を示し、同一の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を有している。そのため、いくつかの実施形態において、本発明における使用のためのＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａは、配列番号７の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、本発明における使用のための細菌株は、配列番号７と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、本発明における使用のための細菌株は、配列番号７によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。
受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている細菌のバイオタイプである細菌株もまた、自閉症スペクトラム障害及び中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効であると期待される。
受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明における使用に好適である株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている細菌の他のヌクレオチド配列をシークエンスすることによって同定されてよい。例えば、実質的に全ゲノムがシークエンスされてよく、本発明における使用のためのバイオタイプ株は、その全ゲノムの少なくとも８０％にわたって（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％もしくは９９％にわたって、またはその全ゲノムにわたって）少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有していてよい。例えば、いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、そのゲノムの少なくとも９８％にわたって少なくとも９８％の配列同一性、またはそのゲノムの９９％にわたって少なくとも９９％の配列同一性を有する。バイオタイプ株を同定するのに使用される他の好適な配列は、ｈｓｐ６０または反復配列、例えば、ＢＯＸ、ＥＲＩＣ、（ＧＴＧ）５、もしくはＲＥＰまたは［２９］を含んでいてよい。バイオタイプ株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている細菌の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有していてよい。
いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４として寄託されている株の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有し、配列番号７と少なくとも９９％同一である（例えば、少なくとも９９．５％または少なくとも９９．９％同一である）１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４として寄託されている株の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有し、配列番号７の１６Ｓ ｒＲＮＡ配列を有する。
代替的には、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明における使用に好適である株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４の寄託物、ならびに制限断片分析及び／またはＰＣＲ分析を使用することによって、例えば、蛍光増幅断片長多型分析（ＦＡＦＬＰ）及び反復ＤＮＡ要素（ｒｅｐ）−ＰＣＲ指紋検査、またはタンパク質プロファイリング、または部分１６Ｓもしくは２３ｓ ｒＤＮＡシークエンシングを使用することによって同定されてよい。好ましい実施形態において、かかる技術は、他のＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株を同定するのに使用されてよい。
ある特定の実施形態において、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１または４２４８６で寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明における使用に好適である株は、増幅リボソームＤＮＡ制限分析（ＡＲＤＲＡ）によって分析されるとき、例えば、Ｓａｕ３ＡＩ制限酵素（例示的な方法及びガイダンスについては、例えば［３０］を参照されたい）を使用するとき、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている細菌と同じパターンを付与する株である。代替的には、バイオタイプ株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている細菌と同じ炭水化物発酵パターンを有する株として同定される。
本発明の組成物及び方法において有用である他のＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株、例えば、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている細菌のバイオタイプは、実施例において記載されているアッセイを含め、いずれの適切な方法またはストラテジーを使用して同定されてもよい。例えば、本発明で使用される株は、嫌気性ＹＣＦＡにおいて培養し、及び／または当該細菌を自閉症スペクトラム障害マウスモデルに投与し、次いでサイトカインレベルを評価することによって同定されてよい。特に、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている細菌と同様の成長パターン、代謝型及び／または表面抗原を有する細菌株は、本発明において有用であり得る。有用な株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４株に匹敵する免疫調節活性を有する。特に、バイオタイプ株は、実施例において示されている効果に匹敵する、自閉症スペクトラム障害モデルに対する効果を引き出し、これは、実施例において記載されている培養及び投与プロトコルを使用することによって同定されてよい。
本発明の特に好ましい株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株である。これは、実施例において試験されて、疾患を処置するのに効果的であることが示される例示的な株である。そのため、本発明は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株、またはその派生物の細胞、例えば、単離細胞を提供する。本発明はまた、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株、またはその派生物の細胞を含む組成物も提供する。本発明はまた、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株の生物学的に純粋な培養物も提供する。本発明はまた、特に本明細書に記載されている疾患の治療における使用のための、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株、またはその誘導体の細胞も提供する。
受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株の派生物は、娘株（後代）、またはオリジナルから培養された（サブクローニングされた）株であってよい。受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株の派生物は、娘株（後代）、またはオリジナルから培養された（サブクローニングされた）株であってよい。本発明の株の派生物は、生物活性を取り除くことなく、例えば、遺伝子レベルで修飾されてよい。特に、本発明の派生株は、治療的に活性である。派生株は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているオリジナルの株と匹敵する免疫調節活性を有する。特に、誘導体株は、実施例において示されている効果に匹敵する、中枢神経系障害または状態モデル及びサイトカインレベルに対する効果を引き出し、これは、実施例において記載されている培養及び投与プロトコルを使用することによって同定されてよい。ＤＳＭ１４２９４株の派生物は、概して、ＤＳＭ１４２９４株のバイオタイプである。
受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株の細胞への言及は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するいずれの細胞も包含し、かかる細胞は本発明によって包含される。そのため、いくつかの実施形態において、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株の細胞への言及は、ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株のみを称し、ＤＳＭ１４２９４で寄託されていない細菌株を称さない。いくつかの実施形態において、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株の細胞への言及は、受託番号ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するが、ＤＳＭ１４２９４で寄託されている株ではない細胞を称する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物における細菌株は生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。
治療的使用
微生物叢−腸−脳軸の調節
腸と脳との間の連通（微生物叢−腸−脳軸）は、双方向の神経液性連通系を介して起こる。最近の証拠により、腸に住む微生物叢が、脳の発達を調節し得、また、微生物叢−腸−脳軸を介して行動的表現型を生じさせ得ることが示されている。実際、多数のレビューが、中枢神経系の機能を維持する際の微生物叢−腸−脳軸の役割を示唆し、また、中枢神経系障害及び状態の発生の際の微生物叢−腸−脳軸の機能障害を暗示している［１０］，［１３］，［１４］，［３２］。
微生物叢−腸−脳軸の調節
腸と脳との間の連通（微生物叢−腸−脳軸）は、双方向の神経液性連通系を介して起こる。最近の証拠により、腸に住む微生物叢が、脳の発達を調節し得、また、微生物叢−腸−脳軸を介して行動的表現型を生じさせ得ることが示されている。実際、多数のレビューが、中枢神経系の機能を維持する際の微生物叢−腸−脳軸の役割を示唆し、また、中枢神経系障害及び状態の発生の際の微生物叢−腸−脳軸の機能障害を暗示している［１０］，［１３］，［１４］，［３２］。
腸と脳との間の双方向の連通（すなわち、腸−脳軸）には、視床下部−下垂体−副腎系（ＨＰＡ）軸を含めた中枢神経系、神経内分泌及び神経免疫系、腸神経系（ＥＮＳ）及び迷走神経を含めた、自律神経系（ＡＮＳ）の交感神経及び副交感神経部門、ならびに腸内微生物叢が含まれる。
実施例において実証されているように、本発明の組成物は、微生物叢−腸−脳軸を調節し、ＣＮＳ障害に関連する行動上の症状を低減することができる。したがって、本発明の組成物は、中枢神経系（ＣＮＳ）の障害、特に、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に関連する障害及び状態を処置または予防するのに有用であり得る。
本発明の組成物はまた、神経発達障害及び／または精神神経状態を処置または予防するのにも有用であり得る。神経発達疾患及び精神神経状態は、多くの場合、微生物叢−腸−脳軸に関連する。本発明の組成物は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害によって介在される神経発達疾患及び／または精神神経状態を処置または予防するのに有用であり得る。さらに好ましい実施形態において、本発明の組成物は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する際の使用のためのものである。
特定の実施形態において、本発明の組成物は：自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；及び／または慢性疼痛；からなる群から選択される疾患または状態を処置または予防するのに有用であり得る。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎を処置または予防するのに有用であり得る。
本発明の組成物は、慢性疾患を処置または予防する、他の治療（例えば、抗精神病薬及び／もしくは抗うつ薬による処置）に応答しなかった患者において疾患を処置または予防する、ならびに／あるいは微生物叢−腸−脳軸の機能障害に関連する組織損傷及び症状を処置または予防するのに特に有用であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＣＮＳを調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、自律神経系（ＡＮＳ）を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、腸神経系（ＥＮＳ）を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、視床下部、下垂体、副腎系（ＨＰＡ）軸を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経内分泌経路を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経免疫経路を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＣＮＳ、ＡＮＳ、ＥＮＳ、ＨＰＡ軸ならびに／または神経内分泌及び神経免疫経路を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象の共生代謝産物のレベル及び／または胃腸透過性を調節する。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、神経系によって調節される。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経系におけるシグナル伝達を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、中枢神経系のシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、感覚神経におけるシグナル伝達を調節する。他の実施形態において、本発明の組成物は、運動神経におけるシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＮＳにおけるシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態において、ＡＮＳは、副交感神経系である。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、迷走神経のシグナル伝達を調節する。他の実施形態において、ＡＮＳは、交感神経系である。他の実施形態において、本発明の組成物は、腸神経系におけるシグナル伝達を調節する。ある特定の実施形態において、ＡＮＳ及びＥＮＳ神経のシグナル伝達は、胃腸管の管腔内容物に直接応答する。他の実施形態において、ＡＮＳ及びＥＮＳ神経のシグナル伝達は、管腔細菌によって産生される神経化学物質に間接的に応答する。他の実施形態において、ＡＮＳ及びＥＮＳ神経のシグナル伝達は、管腔細菌または腸内分泌細胞によって産生される神経化学物質に応答する。ある特定の好ましい実施形態において、ＥＮＳの神経は、ＣＮＳの機能に影響する迷走神経求心性を活性化する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、クロム親和性細胞の活性を調節する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、動物モデルにおける恐怖条件付けを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、恐怖及び／もしくは不安の発生を調節し、ならびに／または、恐怖及び／もしくは不安が対象において消滅するようになる程度まで調節するのに使用され得る。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、動物モデルにおいてストレス−誘発の異常高熱の程度を調節するのに使用され得る。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるストレス及び／または不安を調節する。
自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）
自閉症スペクトラム障害は、社会的相互作用、コミュニケーション、ならびに異常に制限された反復行動及び関心における早発性の困難を特徴とする一連の不均一な神経発達状態である。症状は、幼少期から認められ得るが、ＡＳＤは、多くの場合、普通クラスの教育を開始するより有能な子供において診断され得る。自閉症は、原発型のＡＳＤを表す。
自閉症スペクトラム障害は、社会的相互作用、コミュニケーション、ならびに異常に制限された反復行動及び関心における早発性の困難を特徴とする一連の不均一な神経発達状態である。症状は、幼少期から認められ得るが、ＡＳＤは、多くの場合、普通クラスの教育を開始するより有能な子供において診断され得る。自閉症は、原発型のＡＳＤを表す。
歴史的に、自閉症は、３つの中核領域：社会的相互作用の低下、異常なコミュニケーション、ならびに制限されかつ反復する行動及び関心；に基づいて診断されてきた。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（ＩＣＤ−１０Ｒ、ＷＨＯ １９９３）及びＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍａｎｕａｌ（ＤＳＭ−ＩＶ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、２０００）において、自閉症は、他に特定のない限り、４つの可能性のある診断的サブタイプ：アスペルガー症候群、小児自閉症／自閉症、非定型自閉症、及びＰＤＤを有する広汎性発達障害（ＰＤＤ）の総称下に入る。ＤＭＳ−５において、これらの診断的サブタイプは、合わされて、単一の自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）カテゴリーとなり、機能障害の３つの中核領域の以前の使用は、２つの主な領域、すなわち、感覚の統合失調を含めた、社会的コミュニケーション及び相互作用、ならびに反復行動に低減された。
ＡＳＤは、各人に様々な異なる様式で影響して、非常に穏やかなものから重度のものまで及び得るため、「スペクトラム障害」である。影響された個人の機能は、言語能力、知能程度、共存疾患、症状の構成、及びサービスへのアクセスに応じて実質的に変動する。認知機能、学習、注意及び感覚処理が通常低下する。
ＤＳＭ−ＩＶには、自閉症の診断には、社会的相互作用における質的な機能障害の、最低２つの尺度、コミュニケーションにおける質的な機能障害のうちの１つの症状、ならびに、制限されかつ反復する行動のうちの１つの症状を含めた少なくとも６つの症状の存在を必要とすることが記述されている。ＤＭＳ−５は、ＡＳＤの診断を２つの症状領域：（ｉ）社会的相互作用及び社会的コミュニケーションの欠損；ならびに（ｉｉ）行動、関心または活動の制限された反復パターン；に再定義している。
併発する医学的状態は、ＡＳＤにおいて高度に蔓延している。併発には、不安及びうつ病、発作、注意欠陥、攻撃的行動、睡眠障害、胃腸障害、てんかん、精神遅滞、知的障害ならびに摂取困難が含まれる。
実施例において、本発明の組成物が、自閉症スペクトラム障害の動物モデルにおいて疾患の発生及び疾患の重篤度の低減を達成すること、ならびに、そのため、自閉症スペクトラム障害の処置または予防において有用であり得ることが実証されている。
ＡＳＤは、環境因子によって部分的に誘発される中枢神経系障害である。そのため、微生物叢−腸−脳軸の機能障害は、ＡＳＤの発症及び持続の原因となり得る。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、自閉症スペクトラム障害を処置または予防する際の使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、自閉症を処置または予防する際の使用のためのものである。いくつかの実施形態において、自閉症は、広汎性発達障害（ＰＤＤ）である。別の実施形態において、ＰＤＤは、他に特定のない限り、アスペルガー症候群、小児自閉症／自閉症、非定型自閉症及び／またはＰＤＤである。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、他に特定のない限り、自閉症スペクトラム障害、自閉症、広汎性発達障害；アスペルガー症候群；小児自閉症／自閉症、非定型自閉症及び／またはＰＤＤを処置または予防する際の使用のためのものである。
本発明の組成物は、対象の微生物叢−腸−脳軸を調節するのに有用であり得る。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、小児において及び／または成人において、ＡＳＤの危険性があると確認された、または出生前もしくは早期の発症段階でＡＳＤと診断された患者におけるＡＳＤを予防する際の使用のためのものである。本発明の組成物は、ＡＳＤの発症を予防するのに有用であり得る。
本発明の組成物は、ＡＳＤを管理または軽減するのに有用であり得る。ＡＳＤの処置または予防とは、例えば、症状の重篤度の軽減、または患者にとって問題である憎悪の頻度もしくは誘因の範囲の低減を称してよい。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤの少なくとも１つの中核症状を予防、低減または軽減する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＤＭＳ−５において分類されたＡＳＤの２つの症状領域のうち少なくとも１つを予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、社会的相互作用及び／または社会的コミュニケーション欠損を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、行動、関心または活動の制限的反復パターンを予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、社会的相互作用、社会的コミュニケーションの欠損、及び／または行動、関心もしくは活動の制限的反復パターンを予防、低減または軽減する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、反復行動、常同行動、強迫行動、習慣的行動、同一行動及び制限された行動を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象における、社会意識、社会情報処理、社会的コミュニケーションの能力、社会不安／回避、ならびに自閉症の先入観及び形質を改善する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤの中核症状に関連するさらなる症状を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象における興奮性（攻撃、意図的な自傷及びかんしゃくを含む）、興奮、号泣、無気力、社会的離脱、常同行為、過活動、不服従、適切でない会話、不安、うつ病、ならびに／または制限を超えたもしくは制限下での行動を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象における認知機能、学習、注意及び／または感覚処理を改善する。
他の実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象における二次的な効果指標を改善する。いくつかの実施形態において、二次的な効果指標には、対象のさらなる症状及び／または機能評価尺度、行動尺度、ならびに様々な指標が含まれる。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象の中核症状のアセスメントのための診断及び／または症状尺度の陽性変化を引き起こす。いくつかの実施形態において、診断及び／または症状尺度は、自閉症診断面接−改訂版（ＡＳＩ−Ｒ）である。いくつかの実施形態において、診断または症状尺度は、自閉症診断観察スケジュール汎用版（ＡＤＯＳ−Ｇ）、現在はＡＤＯＳ−２である。他の実施形態において、診断または症状尺度は、自閉症診断面接−改訂版（ＡＤＩ−Ｒ）である。他の実施形態において、診断または症状尺度は、ソーシャルコミュニケーション障害診断面接（ＤＩＳＣＯ）である。さらに他の実施形態において、診断または症状尺度は、小児自閉症評定尺度（ＣＡＲＳ及びＣＡＲＳ２）である。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤの有効性エンドポイントの包括的指標の陽性変化を引き起こす。ある特定の実施形態において、包括的指標には、限定されないが、異常行動チェックリスト（ＡＢＣ）、児童行動チェックリスト（ＣＢＣＬ）、Ｖｉｎｅｌａｎｄ−ＩＩ適応行動尺度（ＶＡＢＳ）、対人応答性尺度（ＳＲＳ）、及び／または反復行動尺度−改訂版（ＲＢＳ−Ｒ）が含まれる。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象の全般的機能において陽性結果を示す。
さらなる尺度は、当業者に公知である。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、当業者に公知である診断及び／または症状尺度の結果を改善する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤの共存疾患の発生を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、不安及びうつ病、発作、注意欠陥、攻撃的行動、睡眠障害、胃腸障害（過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を含む）、てんかん、精神遅滞、知的障害ならびに／または摂取困難の発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸共存疾患、例えば、腹痛、下痢及び鼓腸を予防、低減または軽減する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、自閉症との類似点を有して臨床的に提示され得るある特定の精神及び行動障害の症状を予防、低減または軽減する。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、注意欠陥障害（ＡＤＨＤ）；感情／不安障害；愛着障害；反抗的行為障害（ＯＤＤ）；強迫神経症（ＯＣＤ）、及び／または統合失調症（認知機能障害）を含めた精神病を予防、低減または軽減する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを処置するための別の治療と併用されるときにＡＳＤを予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、抗精神病、抗不安及び抗うつ薬が含まれる。かかる薬物には、リスペリドン（Ｒｉｓｐｅｒｄａｌ（登録商標））；オランザピン（Ｚｙｐｒｅｘａ（登録商標））；フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ（登録商標））；セルトラリン（Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標））；フルボキサミン（Ｌｕｖｏｘ（登録商標））；クロミプラミン（Ａｎａｆｒａｎｉｌ（登録商標））；ハロペリドール（Ｈａｌｄｏｌ（登録商標））；チオリダジン；フルフェナジン；クロルプロマジン；ジプラシドン（Ｇｅｏｇｏｎ（登録商標））；カルバマゼピン（Ｔｅｇｒｅｔｏｌ（登録商標））；ラモトリギン（Ｌａｍｉｃｔａｌ（登録商標））；トピラマート（Ｔｏｐｏｍａｘ（登録商標））；バルプロ酸（Ｄｅｐａｋｏｔｅ（登録商標））；メチルフェニデート（Ｒｉｔａｌｉｎ（登録商標））；ジアゼパム（Ｖａｌｉｕｍ（登録商標））及びロラゼパム（Ａｔｉｖａｎ（登録商標））が含まれる。
自閉症スペクトラム障害の処置の医薬品の臨床開発におけるＥＭＡガイドラインは、疾患の異質性に起因して、単一の化合物によって全ての中核症状に有意な効果を達成することができない場合があること、そのため、少なくとも１つの中核症状において短期間の効能が実証されなければならないことを記述している。実施例において使用される生存生物学的製剤株は、自閉症スペクトラム障害の少なくとも１つの中核症状の有効な処置を示しており、そのため、これらの株及び関連するＢｌａｕｔｉａ株は、ヒト疾患に対して有効であることが予期される。
強迫神経症（ＯＣＤ）
ＯＣＤは、不安障害に属する不均一な慢性及び無力化障害である。ＤＳＭ−ＩＶ定義によると、ＯＣＤの本質的な特徴は、重度かつ時間がかかる（１日１時間超）反復性の強迫観念及び／または衝動強迫であり（基準Ａ）、あるいは、著しい苦悩を引き起こす、または、対象の通常の日常、職業的機能、通常の社会的活動もしくは関係をかなり妨げる（基準Ｃ）。障害の過程におけるあるポイントとして、当人は、強迫観念または衝動強迫が過剰であるまたは気まぐれであることを認識している（基準Ｂ）。
ＯＣＤは、不安障害に属する不均一な慢性及び無力化障害である。ＤＳＭ−ＩＶ定義によると、ＯＣＤの本質的な特徴は、重度かつ時間がかかる（１日１時間超）反復性の強迫観念及び／または衝動強迫であり（基準Ａ）、あるいは、著しい苦悩を引き起こす、または、対象の通常の日常、職業的機能、通常の社会的活動もしくは関係をかなり妨げる（基準Ｃ）。障害の過程におけるあるポイントとして、当人は、強迫観念または衝動強迫が過剰であるまたは気まぐれであることを認識している（基準Ｂ）。
強迫観念は、煩わしいかつ適切でないものとして経験され、また、著しい不安または苦悩を引き起こす、反復性かつ持続性の思考、衝動または想像として定義される。かかる思考、衝動または想像は、現実の問題についての単なる過度の心労ではなく、患者によって自身の心の産物（例えば、汚染の恐怖、対称強迫観念）として認識されている。当人は、ある他の思考または行為によって強迫観念を無視、抑制または中和しようとする。
衝動強迫は、当人が、強迫観念に反応して、または堅く適用されなければならない規則に従って、せざるを得ないと感じている反復行動（例えば、手洗い、秩序化、溜め込み、チェック）または精神的行為（例えば、祈り、数を数えること、無言での単語の反復）として定義される。
ＯＣＤは、多くの場合、大うつ病性障害、他の不安障害（全般性不安障害、社会不安障害、パニック障害）、薬物乱用ならびに摂食障害（拒食症及び過食症）を含めた他の精神疾患の共存症の比率と関連する。
ＯＣＤは、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるＯＣＤを処置または予防する際の使用のためのものである。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＯＣＤの本質的な症状特徴を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における反復性の強迫観念及び／または衝動強迫を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、強迫観念は、煩わしいかつ適切でないものとして経験され、また、著しい不安または苦悩を引き起こす、反復性または持続性の思考、衝動または想像である。ある特定の実施形態において、衝動強迫は、対象が、強迫観念に反応して、または堅く適用されなければならない規則に従って、せざるを得ないと感じている反復行動である。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｙ−ＢＯＣＳ及び／またはＮＩＭＨ−ＯＣ診断及び／または症状尺度に従って対象におけるＯＣＤの症状を改善する。いくつかの実施形態において、Ｙ−ＢＯＣＳ尺度は、一次エンドポイントの改善をモニタリングするのに使用される。いくつかの実施形態において、ＮＩＭＨ−ＯＣ尺度は、二次的パラメータの改善をモニタリングするのに使用される。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象の全般的な社会的機能（関係、仕事など）において陽性結果を示す。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、シーハン障害尺度である。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＯＣＤの少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ＯＣＤの共存疾患には、大うつ病性障害、他の不安障害（全般性不安障害、社会不安障害、パニック障害）、薬物乱用ならびに摂食障害（拒食症及び過食症）ジル・ドゥ・ラ・トゥレット症候群、ＡＤＨＤ（注意−欠陥／多活性障害）及び発達障害が含まれる。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＯＣＤを処置するための別の治療と併用されるときにＯＣＤを予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、セロトニン及びドーパミン再取り込み阻害薬；クロミプラミン及び抗精神病薬が含まれる。
大うつ病性障害（ＭＤＤ）
ＭＤＤは、実質的な心理社会的機能障害及び高度の個々の精神的緊張、ならびに過剰な罹患率及び死亡率（自殺の危険性が考慮されるべきである）と関連する。大うつ病性障害という用語は、臨床的うつ病、大うつ病、単極性うつ病、単極性障害、反復性うつ病及び単にうつ病を包含する。大うつ病性障害という用語は、気分障害；気分変調；慢性うつ病；季節性情動障害及び境界性パーソナリティ障害をカバーする。
ＭＤＤは、実質的な心理社会的機能障害及び高度の個々の精神的緊張、ならびに過剰な罹患率及び死亡率（自殺の危険性が考慮されるべきである）と関連する。大うつ病性障害という用語は、臨床的うつ病、大うつ病、単極性うつ病、単極性障害、反復性うつ病及び単にうつ病を包含する。大うつ病性障害という用語は、気分障害；気分変調；慢性うつ病；季節性情動障害及び境界性パーソナリティ障害をカバーする。
ＤＭＳ−５基準によると、ＭＤＤ症状には、２週間を超えての日常生活活動での、憂うつな気分、または関心もしくは喜びの損失；ならびに社会的、職業的及び教育的機能の低下が含まれる。具体的な症状、以下の９つのうち少なくとも５つが、ほぼ毎日見られる：ほぼ終日、憂うつまたは怒りっぽい気分；毎日の大部分で、大部分の活動における関心または喜びの減少；有意な体重変化または食欲の変化；睡眠の変化（不眠症または過眠症）；活動の変化（精神運動性激越または遅延）；疲労またはエネルギー損失；罪悪感または無価値（無価値の感覚または過度もしくは適切でない罪悪感）；集中の低下（思考もしくは集中する能力の低下、またはさらなる優柔不断；及び自殺傾向（死もしくは自殺の思考、または対象が自殺計画を有している）。また、ＭＤＤは、非合理的な心配；不愉快な心配による先入観；トラブル緩和及び／または緊張感を含めた不安症状に関連する。ＭＤＤエピソードは、穏やか、中程度、または重度であり得る。
ＭＤＤエピソードは、多くの場合、他の精神疾患、またはパーキンソン病、アルツハイマー病、脳血管障害、がん及び慢性疼痛症候群のような身体疾患との共存疾患に関連する。ＭＤＤは、全般性不安障害；不安障害；物質使用障害；心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）；パーソナリティ障害；疼痛；ストレス；過敏性腸症候群；不眠症；頭痛及び対人関係の問題を含めた共存疾患としての広範囲の他の精神障害と頻繁に関連する。
大うつ病性障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるＭＤＤを処置または予防する際の使用のためのものである。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、急性大うつ病エピソードの処置もしくは予防及び／または新しいエピソードの予防（再発予防）の際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、穏やかな、中程度のまたは重度のＭＤＤエピソードの発生を予防、低減または軽減する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているＤＭＳ−５基準によって分類されているＭＤＤの症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における憂うつな気分を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における大部分の活動における関心または喜びの減少を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、２週間の期間以内のＭＤＤの症状の発生を低減する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従ってＭＤＤの症状を改善する。症状改善を評価するためのかかる尺度には、ハミルトンうつ病評価尺度（ＨＡＭＤ）及びＭｏｎｔｇｏｍｅｒｙ Ａｓｂｅｒｇうつ病評価尺度が含まれる。また、Ｚｕｎｇ自己評価うつ病尺度（ＳＤＳ）及びＺｕｎｇ自己評価不安尺度（ＳＡＳ）もまた、好適な症状改善尺度である。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＭＤＤを有する対象の全般的な社会的及び職業的機能において陽性結果を示す。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、処置耐性ＭＤＤを処置または予防する際の使用のためのものである。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＭＤＤの少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ＭＤＤの共存疾患には、全般性不安障害；不安障害；物質使用障害；心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）；パーソナリティ障害；疼痛；ストレス；ＩＢＳ；不眠症；頭痛及び対人関係の問題が含まれる。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＭＤＤを処置するための別の治療と併用されるときにＭＤＤを予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、抗うつ薬、増強ストラテジー（例えば、組み合わせ療法、リチウム及び他の気分安定剤、甲状腺ホルモンならびに非定型抗精神病薬）またはさらには第二世代抗精神病薬が含まれる。
不安障害
不安障害は、不安及び恐怖の感覚によって特徴付けられる精神障害の一群である。全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び選択的無言症を含めた多くの不安障害がある。
不安障害は、不安及び恐怖の感覚によって特徴付けられる精神障害の一群である。全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び選択的無言症を含めた多くの不安障害がある。
ＧＡＤは、６基準においてＤＭＳ−５に従って診断される。第１基準は、６ヶ月を超えての過度の不安または心配であり、当該不安または心配が多くの活動に関して大抵の場合に存在する。第２基準は、対象が第１基準の症状を管理できないことである。第３基準は、以下：情動不安；疲れやすい；集中の問題；興奮性；筋肉の緊張及び睡眠による問題；のうちの少なくとも３つ（子供においては１つ）が起こることである。最後の３基準は、症状が、かなりの社会的、職業的及び機能的障害を結果として生じる；症状が投薬、薬物、または他の身体的健康問題に起因しない；ならびに、症状が、別の精神的問題、例えばパニック障害に、より一致していない；ということである。全ての他の不安障害は、ＧＡＤの鑑別診断としてみなされ得る。
ＧＡＤは、うつ病；物質使用障害；ストレス；ＩＢＳ；不眠症；頭痛；疼痛；心臓事象；対人関係の問題及びＡＤＨＤを含む共存疾患としての広範囲の他の精神障害に頻繁に関連する。
不安障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における不安障害を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、不安障害は、全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び選択的無言症である。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているＤＭＳ−５基準によって分類されている、対象におけるＧＡＤの症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。ＤＭＳ−５によると、同じ症状が、他の不安障害に関連している。そのため、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における不安障害の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象の不安または心配を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、６ヶ月の期間内で症状の発生を低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、情動不安；疲労；集中の損失；興奮性；筋肉の緊張；及び／または睡眠による問題を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、不安障害に関連する社会的、職業的及び機能的障害を予防、低減または軽減する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従って不安障害の症状を改善する。ある特定の実施形態において、症状改善を評価するための尺度には、ハミルトン不安評価尺度（ＨＡＭ−Ａ）が含まれる。いくつかの実施形態において、ＨＡＭ−Ａ合計尺度は、一次エンドポイントを評価するのに使用される。他の実施形態において、ＨＡＭ−Ａ心的不安因子は、二次エンドポイントとして有用であり得る。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、不安障害を有する対象の全般的な社会的、職業的及び機能的障害において陽性結果を示す。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、シーハン障害尺度である。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＤ及び不安障害の少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ＧＡＤの共存疾患には、うつ病；物質使用障害；ストレス；ＩＢＳ；不眠症；頭痛；疼痛；心臓事象；対人関係の問題及びＡＤＨＤが含まれる。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、不安障害を処置するための別の治療と併用されるときに不安障害を予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ベンラファキシン、デュロキセチン、エスシタロプラム及びパロキセチン）；ベンゾジアゼピン類（アルプラゾラム、ロラゼパム及びクロナゼパム）；プレガバリン（Ｌｙｒｉｃａ（登録商標））及びガバペンチン（Ｎｅｕｒｏｎｔｉｎ（登録商標））；セロトニン受容体部分アゴニスト（ブスピロン及びタンドスピロン）；非定型セロトニン作動性抗うつ薬（例えば、イミプラミン及びクロミプラミン）；モノアミン酸化酵素阻害薬（ＭＡＯＩ）（例えば、モクロベミド及びフェネルジン）；ヒドロキシジン；プロプラノロール；クロニジン；グアンファシン及びプラゾシンが含まれる。
心的外傷性ストレス障害（ＰＴＳＤ）
ＰＴＳＤは、重度の無力化障害であり、その本質的な特徴は、この障害の憎悪因子としての衝撃的な出来事の包含である。
ＰＴＳＤは、重度の無力化障害であり、その本質的な特徴は、この障害の憎悪因子としての衝撃的な出来事の包含である。
ＰＴＳＤの症状は、ＤＭＳ−Ｖ基準に従って４つの主な集団にグループ化される：（ｉ）侵入：例として、悪夢、衝撃的な出来事の望ましくない思考、フラッシュバック、及び感情的苦悩または生理的反応による衝撃的な思い出させるものへの反応が挙げられる；（ｉｉ）回避：例として、場所、会話、または他の思い出させるものを含めた衝撃的な思い出の誘因の回避が挙げられる；（ｉｉｉ）認知及び気分の陰性変化：例として、衝撃的な出来事についての自身または他人の歪められた非難、自身または世界についての否定的信念、持続性の否定的感情（例えば、恐怖、罪悪感、恥）、疎外された感情、及び抑制された情動（例えば、肯定的感情を経験できない）が挙げられる；（ｉｖ）覚醒及び反応の変化：例として、立腹、無謀または自己破壊的行動、睡眠障害、集中力欠如、驚愕反応の増加、及び過覚醒が挙げられる。
衝撃的な出来事の４週以内に解消する症状は、急性ストレス障害の基準を満たす。ＤＳＭは、急性（３ヶ月未満の症状持続期間）及び慢性ＰＴＳＤ（３ヶ月を超える症状持続期間）間で区別される。症状がストレス要因の後６ヶ月を超えて開始すると、障害は遅発性ＰＴＳＤとして定義される。
ＰＴＳＤは、大うつ病性障害及び物質使用障害との高度の共存疾患を持つ。
ＰＴＳＤは、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるＰＴＳＤを処置または予防する際の使用のためのものである。同様の病因によると、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ストレス障害を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、急性ストレス障害を処置する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、急性及び／または慢性ＰＴＳＤを処置する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、遅発性ＰＴＳＤを処置する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているＤＭＳ−５基準によって分類されている、対象におけるＰＴＳＤ（またはストレス障害）の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象における煩わしい思考を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象における回避行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象における認知及び気分の陰性変化を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象における覚醒及び反応の変化を予防する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従ってＰＴＳＤの症状及びストレス障害を改善する。ある特定の実施形態において、症状改善を評価するための尺度は、臨床診断面接ＰＴＳＤ（ＣＡＰＳ）尺度である。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象の全般的な社会的、職業的及び機能的障害、ならびにストレス障害において陽性結果を示す。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、シーハン障害尺度である。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤ及びストレス障害の少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ＰＴＳＤ及びストレス障害の共存疾患には、ＭＤＤ、物質使用障害；ストレス及び不安が含まれる。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤ及びストレス障害を処置するための別の治療と併用されるときにＰＴＳＤ及びストレス障害を予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、セロトニン作動薬、三環系抗うつ薬、気分安定剤、アドレナリン阻害薬、抗精神病薬、ベンゾジアゼピン類、セルトラリン（Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標））、フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ（登録商標））及び／またはパロキセチン（Ｐａｘｉｌ（登録商標））が含まれる。
統合失調症スペクトラム及び精神病性障害
これらの疾患は、対象が、明確に考える、良好な判断をする、感情的に対応する、効果的にコミュニケーションを図る、現実を理解する、及び相応に振る舞う能力に影響する。精神病性疾患には、統合失調症（以下に列挙されている症状）；統合失調性感情障害（対象が、統合失調症、及び、うつ病または双極性障害などの気分障害の両方の症状を有している）；統合失調症様障害（統合失調症の症状を示すが、症状が、１〜６ヶ月の間のより短期間で継続する）；短い精神病性障害（対象が、多くの場合、非常にストレスフルな事象、例えば、家族の死亡への応答において、突然の短期間の精神病的行動を示す（回復が通常１ヶ月未満である））；妄想性障害（妄想が少なくとも１ヶ月にわたって続く）；共有精神病性障害；物質誘導性精神病性障害；別の医学的状態に起因する精神病性障害；パラフレニー（人々が高齢になったとき、統合失調症に類似する症状を示し、熟年において開始される）が含まれる。最も周知されている精神病性障害は統合失調症であり、精神病性障害の大部分が統合失調症と類似する症状を示す。
これらの疾患は、対象が、明確に考える、良好な判断をする、感情的に対応する、効果的にコミュニケーションを図る、現実を理解する、及び相応に振る舞う能力に影響する。精神病性疾患には、統合失調症（以下に列挙されている症状）；統合失調性感情障害（対象が、統合失調症、及び、うつ病または双極性障害などの気分障害の両方の症状を有している）；統合失調症様障害（統合失調症の症状を示すが、症状が、１〜６ヶ月の間のより短期間で継続する）；短い精神病性障害（対象が、多くの場合、非常にストレスフルな事象、例えば、家族の死亡への応答において、突然の短期間の精神病的行動を示す（回復が通常１ヶ月未満である））；妄想性障害（妄想が少なくとも１ヶ月にわたって続く）；共有精神病性障害；物質誘導性精神病性障害；別の医学的状態に起因する精神病性障害；パラフレニー（人々が高齢になったとき、統合失調症に類似する症状を示し、熟年において開始される）が含まれる。最も周知されている精神病性障害は統合失調症であり、精神病性障害の大部分が統合失調症と類似する症状を示す。
統合失調症は、不均一な過程及び症状プロファイルによる重度の精神疾患である。統合失調症は、いわゆる陽性及び陰性症状により臨床的に見つかる。陽性症状には、妄想、幻覚、解体した会話、及び解体したまたは緊張病性行動が含まれる。陰性症状には、感情の平坦化、思考及び会話の堪能さ及び生産性ならびに目標指向行動の開始の制限が含まれる。陽性症状は、正常な機能の過剰または歪みを反映するようである一方で、陰性症状は、正常な機能の減少または損失を反映するようである。また、認知障害（作業記憶、情報処理、注意／警戒、学習、論理的思考及び社会的認知の欠陥）が一般的である。認知障害は、概して、現状の抗精神病処置によって不十分な改善を示す。統合失調症患者はまた、気分症状にも悩まされる。これらの主症状の他にも、統合失調症は、他の精神科的症状、例えば、躁及びうつ症状、不安または強迫症状、薬物乱用及び依存、ならびにパーソナリティ障害による共存疾患と関連する。
ＤＭＳ−５によると、統合失調症の診断について、対象は、以下の症状：妄想；幻覚；解体した会話；解体したまたは緊張病性行動及び陰性症状；のうち少なくとも２つを有さなければならない。症状のうちの少なくとも１つは、妄想、幻覚または解体した会話の存在でなければならない。連続的な撹乱兆候が、少なくとも６ヶ月間持続されなければならず、この間、対象は、社会的または職業的低下の問題が有意な時間量にわたって起こりつつも、少なくとも１ヶ月の活発な症状を経験しなければならない。
統合失調症スペクトラム及び精神病性障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。そのため、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における統合失調症スペクトラム及び／または精神病性障害を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害は、統合失調症；統合失調性感情障害；統合失調症様障害；短い精神病性障害；妄想性障害；共有精神病性障害；物質誘発性精神病性障害；別の医学的状態に起因する精神病性障害及びパラフレニーから選択される。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、統合失調症は、妄想型、解体型、緊張型、未分化型及び残遺統合失調症から選択される。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているＤＭＳ−５基準によって分類されている、対象における統合失調症の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。これらの実施形態は、他の統合失調症スペクトラム及び精神病性障害の症状の予防、低減または軽減に適用される。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症の陰性症状を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症の陽性症状を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症の陰性及び陽性症状を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症を有する対象における妄想、幻覚、解体した会話、及び解体したまたは緊張病性行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症を有する対象における感情の平坦化、思考及び会話の堪能さ及び生産性ならびに目標指向行動の開始の制限を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症を有する対象における認知欠陥及び／または気分障害を予防、低減または軽減する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、６ヶ月の期間内での対象における統合失調症の陽性及び／または陰性症状の発生を低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害を有する対象における社会的及び／または職業的機能を改善する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従って統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害の症状を改善する。ある特定の実施形態において、症状改善を評価するための尺度は、陽性及び陰性症状尺度（ＰＡＮＳＳ）ならびに簡易精神病症状評価尺度（ＢＰＲＳ）である。ある特定の実施形態において、陰性症状のアセスメントのための尺度（ＳＡＮＳ）が使用される。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害を有する対象の全般的な社会的及び職業的機能障害において陽性結果を示す。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害の少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、共存疾患は、躁及びうつ症状、不安または強迫症状、薬物乱用及び依存、ならびにパーソナリティ障害としてのものである。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、難治性統合失調症の処置耐性を処置または予防する際の使用のためのものである。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤ及びストレス障害を処置するための別の治療と併用されるときに統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害を予防、低減または軽減するのに特に有効である。ある特定の実施形態において、かかる治療には、クロルプロマジン、フルフェナジン、ハロペリドール及び／またはパーフェナジンを含めた第一世代抗精神病薬が含まれる。ある特定の実施形態において、かかる治療には、アリピプラゾール（Ａｂｉｌｉｆｙ（登録商標））；アセナピン（Ｓａｐｈｒｉｓ（登録商標））；ブレクスピプラゾール（Ｒｅｘｕｌｔｉ（登録商標））；カリプラジン（Ｖｒａｙｌａｒ（登録商標））；クロザピン（Ｃｌｏｚａｒｉｌ（登録商標））；イロペリドン（Ｆａｎａｐｔ（登録商標））；ルラシドン（Ｌａｔｕｄａ（登録商標））；オランザピン（Ｚｙｐｒｅｘａ（登録商標））；パリペリドン（Ｉｎｖｅｇａ）；クエチアピン（Ｓｅｒｏｑｕｅｌ（登録商標））；リスペリドン（Ｒｉｓｐｅｒｄａｌ（登録商標））；ジプラシドン（Ｇｅｏｄｏｎ（登録商標））を含めた第二世代治療が含まれる。
双極性障害
双極性障害は、概して、慢性疾患である。躁病は、双極性障害の主症状である。具体的な持続期間ならびに躁及びうつエピソードのパターンに基づいていくつかのタイプの双極性障害がある。ＤＭＳ−５において、区別は、Ｉ型双極性障害、ＩＩ型双極性障害、気分循環性障害、急速交代型双極性障害及び双極性障害ＮＯＳの間でなされる。
双極性障害は、概して、慢性疾患である。躁病は、双極性障害の主症状である。具体的な持続期間ならびに躁及びうつエピソードのパターンに基づいていくつかのタイプの双極性障害がある。ＤＭＳ−５において、区別は、Ｉ型双極性障害、ＩＩ型双極性障害、気分循環性障害、急速交代型双極性障害及び双極性障害ＮＯＳの間でなされる。
ＤＳＭによると、躁病は、異常に持続的に上昇する、誇大なまたは怒りっぽい気分の区別できる期間である。エピソードは、１週間継続しなければならず、気分は、以下の症状：高い自尊心；低減した睡眠欲求；会話速度の増加；発想の迅速な跳躍；気が散りやすい；目標または活動への関心の増加；精神運動性激越；高い危険性を伴う活動の追求の増加；のうちの少なくとも３つを有さなければならない。
Ｉ型双極性障害は、１または２以上の躁病または混合（躁病及びうつ病）エピソードならびに少なくとも１つの大うつ病性エピソード（ＭＤＤエピソードの症状についての上記を参照されたい）を含む。ＩＩ型双極性障害は、少なくとも１つの軽躁病エピソードが伴う１または２以上の大うつ病エピソードを有する。躁病または混合エピソードは存在しない。軽躁病は、より軽い躁病である。上記の症状は、かなりの社会的、職業的及び機能的障害の原因となる。気分循環症は、軽躁病の期間に併せて低いレベルのうつ病を変化させることを特徴とする。上記の症状は、診断がなされ得る前に成人において少なくとも２年、または小児において１年間存在しなければならない。成人及び小児における症状のない期間は、それぞれ、もはや２ヶ月または１ヶ月を超えては継続しない。急速交代型双極性障害は、双極性障害の重度の形態である。これは、人が１年以内に大うつ病、躁病、軽躁病、または混合状態のうちの少なくとも４つのエピソードを有するときに起こる。他に指定がない（ＮＯＳ）双極性障害は、他のタイプに明確に適合しない双極性症状に分類される。ＮＯＳは複数の双極性症状が存在するが他のサブタイプのいずれについてもラベルを満たすのに十分でないときに診断される。
双極性障害は、以下の共存疾患：ＡＤＨＤ；不安障害；物質障害；肥満及びメタボリックシンドロームに関連する。
双極性障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。そのため、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における双極性障害を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、双極性障害は、Ｉ型双極性障害である。ある特定の実施形態において、双極性障害は、ＩＩ型双極性障害である。ある特定の実施形態において、双極性障害は、気分循環性障害である。ある特定の実施形態において、双極性障害は、急速交代型双極性障害である。ある特定の実施形態において、双極性障害は、双極性障害ＮＯＳである。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における双極性障害の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における躁病エピソードの発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、異常に持続的に上昇する、誇大なまたは怒りっぽい気分の発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、以下の症状：高い自尊心；低減した睡眠欲求；会話速度の増加；発想の迅速な跳躍；気が散りやすい；目標または活動への関心の増加；精神運動性激越；高い危険性を伴う活動の追求の増加；のうちの１または２以上を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における１または２以上の躁病または混合エピソードの発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における少なくとも１つの大うつ病性エピソードの発生を低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１つの軽躁病エピソードを伴う少なくとも１つの大うつ病性エピソードの発生を予防、低減または軽減する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害の急性期を処置する及び／またはさらなるエピソードの発生を予防する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害を有する対象における躁病／うつ病エピソードの急性期を処置し、また、さらなる躁病／うつ病エピソードの発生を予防する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従って双極性障害の症状を改善する。ある特定の実施形態において、躁病エピソードの症状改善を評価するための尺度は、躁状態評価尺度及びヤング躁病評価尺度である。ある特定の実施形態において、尺度は、ベック・ラファエルソン躁病尺度（ＢＲＭＡＳ）である。ある特定の実施形態において、躁病からうつ病へのエピソードの切り替えの症状改善を評価するための尺度には、ハミルトンうつ病評価尺度、モンゴメリ・アスベルグ評価尺度、及びベック・ラファエルソンうつ病尺度が含まれる。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害を有する対象の全般的な社会的、職業的及び機能的障害において陽性結果を示す。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害の少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、共存疾患は、ＡＤＨＤ、不安障害、物質障害、肥満及びメタボリックシンドロームから選択される。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、リチウム及びジバルプロエクスに非応答性の躁うつ病の疾患及び双極性障害を処置または予防する際の使用のためのものである。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害を処置するための別の治療と併用されるときに双極性障害を予防、低減または軽減する際に特に有効である。ある特定の実施形態において、かかる治療には、炭酸リチウム、抗けいれん薬（バルプロエート、ジバルプロエクス、カルバマゼピン及びラモトリギンを含む）ならびに抗精神病薬（アリピプラゾール、オランザピン、クエチアピン及びリスペリドンを含む）が含まれる。
神経認知障害及びアルツハイマー病
ＤＳＭ−５において、認知症という用語は、大神経認知障害及び軽度神経認知障害という用語によって置き換えられた。神経認知障害は、不均一な精神疾患分類である。最も一般的な神経認知障害は、アルツハイマー病であり、続いて、血管性認知症またはこれら２つの混合形態である。他の神経変性障害形態（例えば、レビー小体病、前頭側頭認知症、パーキンソン認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、及びウェルニッケ・コルサコフ症候群）は、認知症に付随して起こる。
ＤＳＭ−５において、認知症という用語は、大神経認知障害及び軽度神経認知障害という用語によって置き換えられた。神経認知障害は、不均一な精神疾患分類である。最も一般的な神経認知障害は、アルツハイマー病であり、続いて、血管性認知症またはこれら２つの混合形態である。他の神経変性障害形態（例えば、レビー小体病、前頭側頭認知症、パーキンソン認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、及びウェルニッケ・コルサコフ症候群）は、認知症に付随して起こる。
ＤＳＭ−５下での認知症についての症状の基準は、学習及び記憶；言語；実行機能；複合注意；知覚−運動ならびに社会的認知から選択される１または２以上の認知領域における以前の性能レベルからの有意な認知低下の証拠である。認知障害は、毎日の活動における自立を妨げなければならない。また、認知障害は、せん妄に関連して排他的に起こるのではなく、また、別の精神障害（例えばＭＤＤまたは統合失調症）によってより説明されるものでもない。
一次症状に加えて、神経認知障害を有する対象は、興奮、攻撃、うつ病、不安、無気力、精神病及び睡眠覚醒サイクルの乱れを含めた行動及び精神科的症状を示す。
神経認知障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。そのため、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における神経認知障害を処置または予防する際の使用のためのものである。好ましい実施形態において、神経認知障害は、アルツハイマー病である。他の実施形態において、神経認知障害は、血管性認知症；アルツハイマー病及び血管性認知症の混合形態；レビー小体病；前頭側頭認知症；パーキンソン認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；ハンチントン病；及びウェルニッケ・コルサコフ症候群から選択される。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における神経認知障害の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における認知低下の発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、学習及び記憶；言語；実行機能；複合注意；知覚−運動ならびに社会的認知から選択される１または２以上の認知領域において神経認知障害を有する対象の性能レベルを改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、興奮、攻撃、うつ病、不安、無気力、精神病及び睡眠覚醒サイクルの乱れから選択される神経認知障害に関連する１または２以上の行動及び精神科的症状の発生を予防、低減または軽減する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、前臨床段階での疑わしい病原性機序における介在によって症候性疾患を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、症状の進行の遅延または阻止によって疾患の修飾を改善する。いくつかの実施形態において、症状の進行の遅延または阻止は、原因となっている神経病理学的プロセスの遅延における証拠と相関する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、認知の向上及び機能改善を含めて、神経認知障害の症状を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、認知症（ＢＰＳＤ）の行動及び精神科的症状を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、神経認知障害を有する対象が毎日の活動に取り組む能力を改善する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における認知及び機能の両方を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における認知エンドポイントを改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における機能的エンドポイントを改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における認知及び機能的エンドポイントを改善する。なおさらに好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における臨床応答全体（全般的エンドポイント）を改善する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断検査に従って神経認知障害の症状を改善する。ある特定の実施形態において、アルツハイマー病（及び他の神経認知障害）の症状改善を評価するための試験は、客観的認知、日常生活動作、変化の包括的評価、健康関連ＱＯＬ試験、ならびに神経認知障害の行動及び精神科的症状を評価する試験から選択される。
ある特定の実施形態において、症状改善のアセスメントに関する客観的認知試験は、アルツハイマー病評価尺度−認知サブスケール（ＡＤＡＳ−ｃｏｇ）及び伝統的なＡＤＡＳ尺度を使用する。ある特定の実施形態において、認知の症状改善は、アルツハイマー病において使用される神経心理学検査バッテリー（ＮＴＢ）を使用して評価される。
いくつかの実施形態において、変化の包括的評価試験は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を使用する。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、臨床医の面接に基づく変化の印象プラス（ＣＩＢＩＣ−ｐｌｕｓ）である。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、アルツハイマー病共同研究ユニット−変化に対する臨床医の包括的印象（ＡＤＣＳ−ＣＧＩＣ）である。
ある特定の実施形態において、健康関連ＱＯＬの評価基準は、アルツハイマー病関連ＱＯＬ（ＡＤＲＱＬ）及びＱＯＬ−アルツハイマー病（ＱＯＬ−ＡＤ）である。
ある特定の実施形態において、神経認知障害の行動及び精神科的症状を評価する試験は、アルツハイマー病評価尺度における行動病理学（ＢＥＨＡＶＥ−ＡＤ）；認知症に関する行動評価尺度（ＢＲＳＤ）；Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ（ＮＰＩ）；及びコーエン・マンスフィールドａｇｉｔａｔｉｏｎ評価票（ＣＭＡＩ）から選択される。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経認知障害を処置するための別の治療と併用されるときに神経認知障害を予防、低減または軽減するのに特に有効である。ある特定の実施形態において、かかる治療には、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬、例えば、ドネペジル（Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標））、ガランタミン（Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標））及びリバスチグミン（Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標））、ならびにメマンチンが含まれる。
パーキンソン病
パーキンソン病は、不均一な神経細胞集団（ドーパミン−産生細胞）の変性によって神経病理学的に特徴付けられる一般的な神経変性疾患である。パーキンソン病の臨床的診断は、動作緩慢、ならびに以下の中核症状：静止振戦；筋肉の硬直及び姿勢反射障害の少なくとも１つを必要とする。病気の進行の際に存在し得または発生し得る他の兆候及び症状は、自律神経障害（唾液分泌過多症、脂漏症、便秘、尿意の混乱、性機能、起立性低血圧、起立性低血圧）、睡眠障害及び嗅覚または温度覚の混乱である。うつ病症状及び認知機能障害共存疾患は、多くのパーキンソン病患者、ならびにレビー小体関連の神経認知障害において発症する。
パーキンソン病は、不均一な神経細胞集団（ドーパミン−産生細胞）の変性によって神経病理学的に特徴付けられる一般的な神経変性疾患である。パーキンソン病の臨床的診断は、動作緩慢、ならびに以下の中核症状：静止振戦；筋肉の硬直及び姿勢反射障害の少なくとも１つを必要とする。病気の進行の際に存在し得または発生し得る他の兆候及び症状は、自律神経障害（唾液分泌過多症、脂漏症、便秘、尿意の混乱、性機能、起立性低血圧、起立性低血圧）、睡眠障害及び嗅覚または温度覚の混乱である。うつ病症状及び認知機能障害共存疾患は、多くのパーキンソン病患者、ならびにレビー小体関連の神経認知障害において発症する。
パーキンソン病は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。そのため、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるパーキンソン病を処置または予防する際の使用のためのものである。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるパーキンソン病の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるパーキンソン病の１または２以上の中核症状を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における動作緩慢を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における静止振戦；筋肉の硬直及び／または姿勢反射障害を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、自律神経障害（唾液分泌過多症、脂漏症、便秘、尿意の混乱、性機能、起立性低血圧、起立性低血圧）、睡眠障害及び嗅覚または温度覚の混乱から選択されるパーキンソン病の進行に関連する１または２以上の症状を予防、低減または軽減する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病と合併しているうつ病症状を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、言語記憶及び／または実行機能を改善する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、注意、作業記憶、言語の堪能さ及び／または不安を改善する。
他の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病と合併している認知機能障害を予防、低減または軽減する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病の進行を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、後の運動合併症を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、後の運動症状の変動を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ニューロン脱落を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）の症状を改善する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、実行機能、注意及び／または作業記憶の損失を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ドーパミン作動性神経伝達を改善する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ドーパミン作動性神経伝達の損失を予防、低減または軽減する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従ってパーキンソン病の症状を改善する。ある特定の実施形態において、パーキンソン病における運動機能の症状改善を評価するための試験は、パーキンソン病統一スケールである。特に、ＵＰＤＲＳ ＩＩは、日常生活動作を考慮しており、ＵＰＤＲＳ ＩＩＩは、運動検査を考慮している。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断検査及び／または尺度に従ってＰＤＤに関連する症状を改善する。ある特定の実施形態において、試験または尺度は、ホプキンス言語学習試験−改訂版（ＨＶＬＴ−Ｒ）；デリスカプラン実行機能システム（Ｄ−ＫＥＦＳ）色単語緩衝試験；ハミルトンうつ病評価尺度（ＨＡＭ−Ｄ１７；うつ病）；ハミルトン不安評価尺度（ＨＡＭ−Ａ；不安）及びパーキンソン病統一スケール（ＵＰＤＲＳ；ＰＤ症状の重篤度）から選択される。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病を有する対象の全般的な社会的及び職業的機能障害において陽性結果を示す。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経認知障害を処置するための別の治療と併用されるときに神経認知障害を予防、低減または軽減する際に特に有効である。ある特定の実施形態において、かかる治療には、ドーパミンアゴニスト（Ｌ−Ｄｏｐａ＋を含む）；モノアミン酸化酵素阻害薬、カテコールアミン−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ阻害薬；抗コリン薬及びグルタミン酸調節剤が含まれる。
他の中枢神経系障害
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に関連する中枢神経系障害を処置または予防する際の使用のためのものである。上記実施形態に加えて、本発明の組成物は、精神病；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）及び／または慢性疼痛を処置または予防する際の使用のためのものである。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎を処置または予防するのに有用であり得る。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に関連する中枢神経系障害を処置または予防する際の使用のためのものである。上記実施形態に加えて、本発明の組成物は、精神病；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）及び／または慢性疼痛を処置または予防する際の使用のためのものである。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎を処置または予防するのに有用であり得る。
ハンチントン病
ハンチントン病は、脳においてある特定の神経細胞を損傷させる、遺伝性の欠陥遺伝子によって引き起こされる、遺伝性の脳状態である。この脳損傷は、経時的に次第に悪化し、動作、認知（知覚、意識、思考、判断）及び行動に影響し得る。この疾患の初期の特徴には、人格変化、気分変動、落ち着きのない動作、興奮性及び変容行動が含まれ得る。
ハンチントン病は、脳においてある特定の神経細胞を損傷させる、遺伝性の欠陥遺伝子によって引き起こされる、遺伝性の脳状態である。この脳損傷は、経時的に次第に悪化し、動作、認知（知覚、意識、思考、判断）及び行動に影響し得る。この疾患の初期の特徴には、人格変化、気分変動、落ち着きのない動作、興奮性及び変容行動が含まれ得る。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ハンチントン病を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ハンチントン病の症状、例えば、興奮性または過剰な動作を管理する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ハンチントン病に関連するうつ病を処置し、ならびに／または症状、例えば、社会的離脱、欠乏もしくは関心及び睡眠障害を改善する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、記憶、及び仕事に集中する能力を改善する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、無力な異常な動作を処置する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ハンチントン病に関連する行動上の問題、反社会的行動、興奮性及び精神病を処置する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、神経保護を誘導し、神経損傷を予防する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ドーパミンのレベル及び／またはドーパミン含有細胞のレベルを増加させる。
神経化学因子、神経ペプチド及び神経伝達物質ならびに微生物叢−腸−脳軸
上記で概説しているように、微生物叢−腸−脳軸は、多数の異なる生理系によって調節される。微生物叢−腸−脳軸は、多数のシグナル伝達分子によって調節される。これらのシグナル伝達分子のレベルの変化は、結果として、中枢神経系の発達及び／または機能性の欠陥を生じさせる。実際、このセクションにおいて開示されている多くの分子は、微生物叢−腸−脳軸の機能性及び中枢神経系障害または状態の病因に関与している（［１４］、［３２］、［１０］、［３３］）。本発明者らによって実施された実験は、行動変化が、Ｂｌａｕｔｉａ株の投与によって誘発され得ることを示している。この効果は、シグナル伝達分子、特にこのセクションにおいて列挙されているもののレベルに対する効果によって介在され得る。これらの変化は、Ｂｌａｕｔｉａ株に関連する治療的利益の原因となり得る。したがって、本明細書に開示されている中枢神経系障害及び状態が同様の根本的な生化学的及び生理的病因（すなわち、微生物叢−腸−脳軸を介して）を示すという事実に起因して、Ｂｌａｕｔｉａ株の同様の治療的利益もまたこれらの障害及び状態に関して達成され得る。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓの投与は、中枢神経系障害または状態に関連する行動変化を誘発するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅの投与は、中枢神経系障害または状態に関連する行動変化を誘発するのに特に有効であり得る。
上記で概説しているように、微生物叢−腸−脳軸は、多数の異なる生理系によって調節される。微生物叢−腸−脳軸は、多数のシグナル伝達分子によって調節される。これらのシグナル伝達分子のレベルの変化は、結果として、中枢神経系の発達及び／または機能性の欠陥を生じさせる。実際、このセクションにおいて開示されている多くの分子は、微生物叢−腸−脳軸の機能性及び中枢神経系障害または状態の病因に関与している（［１４］、［３２］、［１０］、［３３］）。本発明者らによって実施された実験は、行動変化が、Ｂｌａｕｔｉａ株の投与によって誘発され得ることを示している。この効果は、シグナル伝達分子、特にこのセクションにおいて列挙されているもののレベルに対する効果によって介在され得る。これらの変化は、Ｂｌａｕｔｉａ株に関連する治療的利益の原因となり得る。したがって、本明細書に開示されている中枢神経系障害及び状態が同様の根本的な生化学的及び生理的病因（すなわち、微生物叢−腸−脳軸を介して）を示すという事実に起因して、Ｂｌａｕｔｉａ株の同様の治療的利益もまたこれらの障害及び状態に関して達成され得る。Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓの投与は、中枢神経系障害または状態に関連する行動変化を誘発するのに特に有効であり得る。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅの投与は、中枢神経系障害または状態に関連する行動変化を誘発するのに特に有効であり得る。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、神経化学因子、神経ペプチド及び神経伝達物質のレベルによって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、神経化学因子、神経ペプチド及び神経伝達物質のレベルを調節する。したがって、ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＣＮＳ生化学を直接変化させる。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、モノアミンのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、モノアミンは、セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ））、ドーパミン、ノルエピネフリン及び／またはエピネフリンである。ある特定の実施形態において、モノアミンは、カテコールアミンである。ある特定の実施形態において、カテコールアミンは、ドーパミン、ノルエピネフリン及びエピネフリンである。ある特定の実施形態において、モノアミンは、トリプタミンである。ある特定の実施形態において、トリプタミンは、セロトニン及びメラトニンである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、アセチルコリンのレベルを調節する。
ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンのレベルを調節する。オキシトシンは、感情的、社会的、認知及び神経内分泌生理学ならびに自己調節能に関連する。特に、オキシトシン放出は、抗不安；前向きな気分；母体行動、つがいの絆；性的行動；社会的記憶；嗅覚記憶；食欲抑制効果；ストレスへのＨＰＡ軸応答の減衰；誕生及び乳児の間の自己励起、ならびに他の生理的及び心理的プロセスが関与している。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンのレベルを増加させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンのレベルを減少させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンシグナル伝達を増加または減少させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシン受容体のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、神経、筋肉及び胃腸細胞に入るまたは該細胞から出るカルシウムイオン束を調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンのレベルを調節することによって、微生物叢−腸−脳軸に関連する神経発達及び精神神経障害及び疾患を処置及び予防する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、脳モノアミン及びその代謝産物のレベルを調節する。好ましい実施形態において、モノアミンは、セロトニンである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、セロトニン作動性及び／またはトリプトファン代謝のキヌレニン経路を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、セロトニン代謝産物、例えば、５−ヒドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ドーパミン代謝産物、例えば、ホモバニリン酸（ＨＶＡ）のレベルを調節する。これらの神経伝達物質及び神経化学因子の調節は、ストレス、うつ病及び不安関連障害を処置するのに有用である。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）のレベルによって調節される。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＢＡのレベルを調節する。ＧＡＢＡは、神経興奮性を低減する抑制性神経伝達物質である。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＢＡのレベルを増加させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＢＡのレベルを減少させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＢＡ性神経伝達を変化させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、中枢神経系の異なる領域におけるＧＡＢＡ転写のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、共生生物由来のＧＡＢＡは、血液脳関門を渡り、神経伝達に直接影響する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、海馬、扁桃体及び／または青斑核におけるＧＡＢＡの低減を引き起こす。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、皮質領域におけるＧＡＢＡの増加を引き起こす。
神経活性分子、例えば、セロトニン、メラトニン、ＧＡＢＡ、ヒスタミン及びアセチルコリンのレベルは、中枢神経系疾患、例えば、認知症、アルツハイマー病及びハンチントン病の病態生理と連結している。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、ヒスタミンのレベルによって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ヒスタミンのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、ヒスタミンは、免疫調節効果を有する。ある特定の実施形態において、ヒスタミンレベルは、内腔から体循環への細菌の転移を可能にする。そのため、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管透過性及び／または関門機能を変化させる。ある特定の他の実施形態において、ヒスタミンは、中心のプロセスと関係している神経伝達物質として作用する。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、ＨＰＡ軸によって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＨＰＡ活性を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＨＰＡストレス反応を減衰する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＨＰＡ活性に関連する炎症反応を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、糖質コルチコイドのレベルを調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、コルチコステロン及びアドレナリンのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、副腎皮質刺激ホルモン放出因子及び／またはバソプレシンのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、バソプレシン及び／または他の脳下垂体もしくは抗利尿ホルモンのレベルを調節する。ＨＰＡ軸活性の変化は、不安及びストレス障害に関連する。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、免疫反応ならびに炎症性因子及びマーカーの変化によって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、免疫反応を調節し得る。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、循環する神経免疫シグナル伝達分子の全身レベルを調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、前炎症性サイトカイン産生及び炎症を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、炎症状態を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、脾細胞増殖反応を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｃ−反応性タンパク質；ＩＬ−１ファミリーサイトカイン；ＩＬ−１β；ＩＬ−２；ＩＬ−４；ＩＬ−６；ＩＬ−８；ＩＬ−１０；ＩＬ−１２ｐ４０；ＩＬ−１７；ＩＬ−１７Ａ；ＩＬ−２１；ＩＬ−２３；ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γ；の全身及び／または血漿中濃度を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、抗炎症性サイトカイン、例えば、ＩＬ−１０のレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＩＬ−１０のレベルを増加させる。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＴＮＦ−αのレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＩＦＮ−γのレベルを調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＩＦＮ−γ：ＩＬ−１０比を調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＩＦＮ−γ：ＩＬ−１０比を減少させる。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、前炎症性サイトカインＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γのレベルを減少させる。サイトカインの循環レベルの増加は、うつ病、不安、統合失調症及びＡＳＤを含めた種々の精神神経障害に密接に関連する。炎症状態の変化の証拠は、障害、例えば、統合失調症、大うつ病性障害及び双極性障害において強調されている。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、耐性媒介樹状細胞のレベルを調節し、また、前及び抗炎症性サイトカイン反応を相互に調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ミエロペルオキシダーゼ（炎症及び酸化のマーカー）の全身レベルを減少させる。免疫系及び炎症反応の治療調節剤は、自閉症スペクトラム障害及び気分障害を処置するのに有用である。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、感染またはワクチン接種への免疫反応を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、感染またはワクチン接種に反応する炎症のレベルを調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、妊娠中の感染またはワクチン接種に反応する母体免疫活性化を調節する。したがって、本発明の組成物は、子孫における中枢神経系障害を処置または予防するために妊娠中に投与され得る。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、共生代謝産物のレベルによって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、微生物叢代謝産物の全身レベルを調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、ＳＣＦＡのレベルが増加または減少する。いくつかの実施形態において、ＳＣＦＡは、酪酸（ＢＡ）（またはブチレート）である。いくつかの実施形態において、ＳＣＦＡは、プロピオン酸（ＰＰＡ）である。いくつかの実施形態において、ＳＣＦＡは、酢酸である。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＳＣＦＡが血液脳関門を渡る能力を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、多糖Ａ（ＰＳＡ）のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、強力な前炎症性エンドトキシンリポ多糖体（ＬＰＳ）のレベルを調節する。ＬＰＳは、生理的脳活動を変化させかつ神経ペプチド合成を調節する炎症性サイトカインの産生を引き起こす。ＬＰＳは、ＣＮＳの調節に重要な影響を及ぼし、感情の制御に当てられる領域（例えば、扁桃体）の活動を増加させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、トリプトファン及び／またはその代謝産物のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、４−エチルフェニルサルフェート（４ＥＰＳ；ＡＳＤ関連行動異常に関連する尿毒性毒素）のレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における４−エチルフェニルサルフェートのレベルを減少させる。管腔内の腸刺激によって引き起こされる神経シグナル伝達経路の刺激によって発生するシグナルは、疼痛知覚、免疫反応調節、感情コントロール及び他の恒常性維持機能を含めた脳活動を強く調節する。したがって、これらの因子のレベルを調節することができる組成物は、ＣＮＳ障害を処置または予防するための広範な治療的適用を有する。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、胃腸透過性レベルによって調節される。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管上皮の完全性を変化させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管の透過性を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、関門機能、及び胃腸管の完全性を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管の運動性を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、共生代謝産物及び炎症性シグナル伝達分子の、胃腸管内腔から血流への転移を調節する。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、胃腸管における微生物叢組成によって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管の微生物叢組成を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、微生物叢腸内毒素症及び関連する毒性代謝産物増加（例えば、ＬＰＳ）を予防する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管におけるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍのレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管におけるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍのレベルを低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉのレベルを低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、有害な嫌気性細菌の増殖及びこれらの細菌によって産生される神経毒の産生を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及び／またはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの微生物叢レベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ、Ｒｕｍｉｎｏｃｃｕｃｓ属及び／またはＡｌｃａｌｉｇｅｎａｃｅａｅ科の微生物叢レベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ及び／またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉのレベルを増加する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、抗生物質の大量使用による微生物叢の組成の異常調節を予防する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、妊娠中の抗生物質の投与の際に機能的な母体微生物叢組成を維持する。したがって、本発明の組成物は、子孫における中枢神経系障害を処置または予防するために妊娠中に投与され得る。
微生物叢の調節は、不安、うつ病、自閉症スペクトラム障害、強迫神経症及び記憶力（空間及び非空間記憶を含む）を含めた精神疾患関連行動、ならびに、パーキンソン病を含めた他のＣＮＳ関連障害を改善する際に有効であることが示されている。ある特定の研究は、プロバイオティクスは、心理的ストレス、身体化、うつ病及び怒り−敵対心を低減し得ることを示唆している。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓのレベルは、うつ病に関連しており、胃腸不快感に関連する疼痛シグナル伝達に関与している。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されている中枢神経系障害に関連する行動上の症状の少なくとも１つを予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における臨床応答全体を改善する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における常同、反復行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、異常に制限的な行動及び／または関心の発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における反復性の強迫観念及び／または衝動強迫を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における社会的行動の欠損を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における回避行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるコミュニケーション行動の欠損を予防、低減または軽減する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における認知及び気分の陰性変化を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における不安関連行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるストレス関連行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるうつ病関連行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における攻撃的行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、異常に持続的に上昇する、誇大なまたは怒りっぽい気分の発生を予防、低減または軽減する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における煩わしい思考を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における覚醒及び反応の変化を予防する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における妄想、幻覚、解体した会話、及び解体したまたは緊張病性行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における感情の平坦化、思考及び会話の堪能さ及び生産性ならびに目標指向行動の開始の制限を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、以下の症状：高い自尊心；低減した睡眠欲求；会話速度の増加；発想の迅速な跳躍；気が散りやすい；目標または活動への関心の増加；精神運動性激越；高い危険性を伴う活動の追求の増加；のうちの１または２以上を予防、低減または軽減する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における空間及び／または非空間記憶欠損を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における認知及び機能の両方を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における自発運動を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における動作緩慢を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における静止振戦；筋肉の硬直及び／または姿勢反射障害を予防、低減または軽減する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に開示されているＣＮＳ障害に関連する少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されているＣＮＳ障害に関する症状及び／または診断尺度のうちの少なくとも１つにおける対象のスコアを改善する。ある特定の他の実施形態において、症状及び／または診断尺度は、全体的な健康に関するアンケート（ＧＨＱ）；うつ病不安及びストレス尺度（ＤＡＳＳ）；改訂版Ｌｅｉｄｅｎ抑うつ感受性尺度（ＬＥＩＤＳ−ｒ）；陽性及び陰性症状尺度（ＰＡＮＳＳ）；状態−特性不安尺度（ＳＴＡＩ）；発達行動チェックリスト（ＤＢＣ）；ベックうつ病調査票（ＢＤＩ）；ベック不安調査票（ＢＡＩ）；ホプキンス症状チェックリスト（ＨＳＣＬ−９０）；病院不安及びうつ尺度（ＨＡＤＳ）；知覚されたストレス尺度（ＰＳＳ）；コーピングチェックリスト（ＣＣＬ）（日常生活のストレスに対抗するのにも使用される）；ならびに気分状態のアンケートに基づくプロファイル（ＰＯＭＳ）から選択される。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、当業者に公知であるＣＮＳ障害の他の動物モデルにおける治療効能を評価するとき、症状及び／または診断尺度を改善し得る。例に開示されている行動アッセイに加えて、本発明の組成物は、相互の社会的相互作用；嗅覚によるコミュニケーション；超音波発声；運動性常同行動（例えば、周回及び垂直跳躍）、反復行動、例えば、セルフグルーミング及びディフィング（ｄｉｆｆｉｎｇ）；ならびに空間作業における忍耐力を改善し得る。
また、本発明の組成物は、ＣＮＳ障害の他の動物モデルにおけるＣＮＳ障害を処置及び／または予防する際に有用である。他のマウスモデルには、同系交配マウス株（ＢＡＬＢ／ｃＪ及びＣ５８／Ｊを含む）ならびに遺伝子組み換えされたマウス株（ＮＥＵＲＥＸＩＮ１、ＮＥＵＲＯＬＩＧＩＮ３、ＮＥＵＲＯＬＩＧＩＮ４、ＳＨＡＮＫ２、ＳＨＡＮＫ３、ＣＮＴＮＡＰ２、Ｔｓｃ１／２及びＦｍｒ１遺伝子変異マウス株を含む）も含まれる。
ブチレートは、ヒストン脱アセチル化酵素阻害薬として作用し、Ｇ−タンパク質共役受容体を通してシグナル伝達が可能であり、代謝経路の調節に関与する短鎖脂肪酸である。
実施例は、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａが、経口組成物で投与されたときにブチレートの腸内レベルを増加させることを実証している。実施例はまた、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａが中枢神経系障害及び状態を処置するのに有用であることも実証している。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａのこの効果は、ブチレートによって介在され得る。
ブチレートは、脳の海馬及び前頭葉前部皮質におけるヒストン脱アセチル化に関係しており［３４］、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病及び自閉症に関与している［３５］。
ある特定の実施形態において、本発明における使用のためのＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株は、ブチレート産生体である。ある特定の実施形態において、本発明における使用のためのＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株は、アセチル−ＣｏＡ、グルタル酸、４−アミノブチレート及び／またはリシン経路によってブチレートを合成する。ある特定の実施形態において、本発明における使用のためのＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株は、複合多糖（例えば、デンプン及びキシラン）を代謝してアセチル−ＣｏＡを産生し、これは、ブチレートを合成するために後に使用され得る。ある特定の実施形態において、本発明における使用のためのＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株は、結腸における細菌発酵によってブチレートを産生する。
ある特定の好ましい実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ブチレートのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ブチレートのレベルを増加させる。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害薬である。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、脳の海馬及び前頭葉前部皮質におけるヒストン脱アセチル化を阻害する。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ヒストンアセチル化を増加させ、生存促進、再生促進及び可塑性促進遺伝子の発現を促進する。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ヒストンアセチル化をレスキューし（ｒｅｓｃｕｅ）、神経細胞死を予防し、生存期間を延長する（例えばハンチントン病において）。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、細胞死から神経細胞を保護する（例えばパーキンソン病において）。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ヒストンアセチル化を回復させ、学習関連遺伝子の発現を増加させる（例えば、アルツハイマー病を処置または予防するため）。ある特定の実施形態において、これらの後成的修飾は、可能性のある精神科的処置であり得る。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物のＨＤＡＣ阻害薬活性は、神経細胞の生存、可塑性及び再生に関与する多くの遺伝子の転写に影響する。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、神経栄養因子のプロモータの周囲のアセチル化を増加させる。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ＢＤＮＦ、ＧＤＮＦ及びＮＧＦのプロモータの周囲のアセチル化を増加させる。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ＢＤＮＦ、ＧＤＮＦ及びＮＧＦの発現を増加させる。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ｃ−Ｆｏｓ及びＨｏｍｅｒｌａを含めた、可塑性に関与する前初期遺伝子の発現を増加させる。ある特定の実施形態において、これらの因子の発現は、脳において変化する。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物の脱アセチル化酵素阻害活性は、非ヒストンタンパク質のアセチル化を維持する。ある特定の実施形態において、アセチル化は、多くのタンパク質の酵素及び代謝活性に影響する。例えば、ＨＤＡＣ阻害薬は、酸化ストレスの際に転写因子Ｓｐｌのアセチル化及び活性化を維持して、保護的適応反応を向上させて細胞生存を促進することが示されている。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏでの酸化ストレスを予防する。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、前頭葉前部皮質、海馬及び線条体における血液脳関門（ＢＢＢ）完全性ならびに／またはタイトジャンクションタンパク質発現（例えば、クラウディン５及び／もしくは閉塞）を回復させる。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ＢＢＢ完全性を回復させ及び／または維持する。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、タイトジャンクション発現を促進及び／または維持する。そのため、ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、中枢神経系障害、特に、神経発達障害及び／または精神神経状態に関連する炎症性メディエータ、神経化学因子、神経ペプチド及び神経伝達物質への関門を確立及び／または維持する。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、神経炎症を阻害する。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ＩＬ−１ＲＡ（前炎症性ＩＬ−１βの阻害薬）のレベルを増加させる。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、前炎症性ＩＬ−１β及び／またはＴＮＦαのレベルを減少させる。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ＩＬ−１ＲＡのレベルを増加させるＩＬ−４発現を増加させる。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、抗炎症薬である。ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）活性化を阻害する。したがって、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ＩＬ−１Ｂ、ＴＮＦα、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、誘導的硝酸合成酵素、シクロオキシゲナーゼ−２、細胞間接着分子−１、Ｔ細胞受容体α及びＭＨＣクラスＩＩ分子を含めた初期免疫炎症反応遺伝子の発現を調節し得る。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ミトコンドリア活性に影響する。したがって、ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ミトコンドリア脳症及び／または副腎白質ジストロフィーを処置及び／または予防する。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ＧＰＣＲを通したシグナル伝達に影響する。したがって、ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、パーキンソン病を処置及び／または予防する。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、ヒストンアセチル化に影響する。したがって、ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、アルツハイマー病、パーキンソン病，及び／またはハンチントン病を処置及び／または予防する。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、微生物叢恒常性に影響する。したがって、ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、中枢神経系障害及び状態を処置及び／または予防する。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む本発明の組成物は、中枢神経系障害または状態に関連する行動変化における改善を誘発し得る。
ある特定の実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの効果は、ブチレートと無関係であり得る。例えば、実施例は、ブチレート単独ではないが、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与が、マウスの水平垂直活動、及びオープンフィールドモデルの中心で費やされる時間を有意に増加させ、不安を低減する役割を示唆することを実証している。具体的には、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａは、不安様行動及び常同行動を低減する効能を示す一方で、ブチレートの効能は、常同行動を低減することに限定される。
投与の形態
好ましくは、本発明の組成物は、本発明の細菌株による腸への送達及び／または腸への部分もしくは全体定着を可能にするために胃腸管に投与されるべきである。概して、本発明の組成物は、経口で投与されるが、これらは、経直腸的に、鼻腔内に、または頬側もしくは舌下経路を介して投与されてよい。
好ましくは、本発明の組成物は、本発明の細菌株による腸への送達及び／または腸への部分もしくは全体定着を可能にするために胃腸管に投与されるべきである。概して、本発明の組成物は、経口で投与されるが、これらは、経直腸的に、鼻腔内に、または頬側もしくは舌下経路を介して投与されてよい。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、フォームとして、スプレーまたはゲルとして投与されてよい。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、坐薬、例えば肛門坐薬として、例えば、カカオ脂（ココアバター）、合成硬質脂肪（例えば、坐剤用基材、ウィテップゾール）、グリセロ−ゼラチン、ポリエチレングリコール、または石鹸グリセリン組成物の形態で投与されてよい。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、チューブ、例えば、鼻腔栄養チューブ、経口胃チューブ、胃チューブ、経空腸チューブ（Ｊチューブ）、経皮的内視鏡下胃瘻造設術（ＰＥＧ）、またはポート、例えば胃、空腸及び他の好適なアクセスポートへのアクセスを付与する胸壁ポートを介して胃腸管に投与される。
本発明の組成物は、一度で投与されてよく、または処置レジメンの部分として逐次的に投与されてよい。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、連日投与されるべきである。
本発明のある特定の実施形態において、本発明による処置は、患者の腸内微生物叢のアセスメントによって達成される。処置は、本発明の株の送達及び／またはそれによる部分的もしくは全体的定着が達成されず、その結果、効能が観察されないことになるとき、繰り返されてよく、あるいは、処置は、送達及び／または部分的もしくは全体的定着が成功裏でありかつ効能が観察されるときに中止されてよい。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、妊娠した動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトに、その子宮内の胎児及び／または生まれた後の小児において発症する炎症性または自己免疫疾患を予防するために投与されてよい。
本発明の組成物は、中枢神経系障害もしくは状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害もしくは状態を有すると診断されている、または中枢神経系障害もしくは状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害もしくは状態の危険性があると確認されている患者に投与され得る。上記組成物はまた、健常な患者における、中枢神経系障害または状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態の発症を予防するための予防対策として投与されてもよい。
本発明の組成物は、異常な腸内微生物叢を有すると同定されている患者に投与されてよい。例えば、患者は、Ｂｌａｕｔｉａ、特に、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓまたはＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅによる定着が低減されているか、または該定着がないかであり得る。例えば、患者は、Ｂｌａｕｔｉａ、特に、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ，Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅまたはＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａによる定着が低減されているか、または該定着がないかであり得る。
本発明の組成物は、食品、例えば栄養補助食品として投与されてよい。
概して、本発明の組成物は、ヒトの処置のためのものであるが、単胃哺乳動物、例えば、家禽、ブタ、ネコ、イヌ、ウマまたはウサギを含めた動物を処置するのに使用されてよい。本発明の組成物は、動物の成長及びパフォーマンスを向上させるのに有用である場合がある。動物に投与されるとき、経口胃管栄養法が使用されてよい。
組成物
概して、本発明の組成物は、細菌を含む。本発明の好ましい実施形態において、組成物は、凍結乾燥形態で調合される。例えば、本発明の組成物は、本発明の細菌株を含む顆粒またはゼラチンカプセル、例えば、硬質ゼラチンカプセルを含んでいてよい。
概して、本発明の組成物は、細菌を含む。本発明の好ましい実施形態において、組成物は、凍結乾燥形態で調合される。例えば、本発明の組成物は、本発明の細菌株を含む顆粒またはゼラチンカプセル、例えば、硬質ゼラチンカプセルを含んでいてよい。
好ましくは，本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌を含む。細菌の凍結乾燥は、確立された手順であり、関連のガイダンスは、例えば、参照文献［３６］、［］、及び［３８］において入手可能である。
代替的には、本発明の組成物は、生きている、活性な細菌培養物を含んでいてよい。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、不活性化されていない、例えば、熱不活性化されていない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、殺傷されていない、例えば、熱殺傷されていない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、弱毒化されていない、例えば、熱弱毒化されていない。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、殺傷されていない、不活性化されていない及び／または弱毒化されていない。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、生きている。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、生きている。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。
いくつかの実施形態において、組成物は、生きている細菌株と殺傷されている細菌株との混合物を含む。
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、腸への細菌株の送達を可能にするようにカプセル化されている。カプセル化は、目標箇所に送達するまで、例えばｐＨの変化によって引き起こされる場合がある化学的または物理的刺激、例えば圧力、酵素活性または物理的崩壊による破断を通しての劣化から組成物を保護する。いずれの適切なカプセル化方法が使用されてもよい。例示的なカプセル化技術として、多孔質マトリクス内への取り込み、固体担体表面への付着または吸着、凝集によるまたは架橋剤を用いた自己会合、及び微多孔膜またはマイクロカプセルの後の機械的拘束が挙げられる。本発明の組成物を調製するのに有用であり得るカプセル化についてのガイダンスは、例えば、参照文献［３９］及び［４０］において入手可能である。
組成物は、経口で投与されてよく、錠剤、カプセルまたは粉末の形態であってよい。カプセル化された製品が好ましい、なぜなら、Ｂｌａｕｔｉａが嫌気性生物であるからである。他の成分（例えばビタミンＣなど）が、生体内での送達及び／または部分的もしくは全体的定着ならびに生存を改善するように脱酸素剤及びプレバイオティック基質として含まれていてよい。代替的には、本発明のプロバイオティック組成物は、食品もしくは栄養製品、例えばミルクもしくはホエイベースの発酵乳製品として、または医薬製品として経口で投与されてよい。
組成物は、プロバイオティックとして調合されてよい。
本発明の組成物は、治療有効量の本発明の細菌株を含む。治療有効量の細菌株は、患者への有益な効果を発揮するのに十分である。治療有効量の細菌株は、患者の腸への送達及び／または部分的もしくは全体的定着を結果として生じさせるのに十分であり得る。
例えばヒト成人への細菌の好適な１日量は、約１×１０３〜約１×１０１１個のコロニー形成単位（ＣＦＵ）；例えば、約１×１０７〜約１×１０１０ＣＦＵ；別の例において、約１×１０６〜約１×１０１０ＣＦＵであってよい。
ある特定の実施形態において、組成物は、組成物の重量に対して約１×１０６〜約１×１０１１ＣＦＵ／ｇ；例えば、約１×１０８〜約１×１０１０ＣＦＵ／ｇの量で細菌株を含有する。用量は、例えば、１ｇ、３ｇ、５ｇ、及び１０ｇであってよい。
典型的には、プロバイオティック、例えば本発明の組成物は、少なくとも１の好適なプレバイオティック化合物と任意選択的に組み合わされる。プレバイオティック化合物は、通常、上部消化管において分解または吸収されない、非消化性炭水化物、例えば、オリゴ−もしくは多糖、または糖アルコールである。公知のプレバイオティクスとして、市販品、例えば、インスリン及びトランスガラクト−オリゴ糖が挙げられる。
ある特定の実施形態において、本発明のプロバイオティック組成物は、組成物の合計重量に対して約１〜約３０重量％（例えば、５〜２０重量％）の量でプレバイオティック化合物を含む。炭水化物は：フラクト−オリゴ糖（またはＦＯＳ）、短鎖フラクト−オリゴ糖、インスリン、イソマルト−オリゴ糖、ペクチン、キシロ−オリゴ糖（またはＸＯＳ）、キトサン−オリゴ糖（またはＣＯＳ）、β−グルカン、アラビアガム変性及び耐性デンプン、ポリデキストロース、Ｄ−タガトース、アカシアファイバ、イナゴマメ、オート麦、ならびにシトラスファイバ；からなる群から選択されてよい。一態様において、プレバイオティクスは短鎖フラクト−オリゴ糖（簡潔のために、以下本明細書においてＦＯＳｓ−ｃ．ｃと示す）であり；該ＦＯＳｓ−ｃ．ｃ．は、テンサイ糖の転換によって一般に得られ、３のグルコース分子が結合しているサッカロース分子を含んでいる消化性炭水化物ではない。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、中枢神経系障害を処置または予防する別の治療化合物と併用される。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、中枢神経伝達物質及び神経ペプチドを調節する栄養補助食品と共に投与される。好ましい実施形態において、栄養補助食品は、栄養ビタミンを含むまたはこれからなる。ある特定の実施形態において、ビタミンは、ビタミンＢ６、マグネシウム、ジメチルグリシン（ビタミンＢ１６）及びビタミンＣである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、別のプロバイオティクスと組み合わせて投与される。ある特定の好ましい実施形態において、プロバイオティクスは、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｓｕｉｓ ｏｖａを含むまたはこれからなる。
本発明の組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含んでいてよい。かかる好適な賦形剤の例は、参照文献［４１］において見出され得る。治療的使用のための許容される担体または希釈剤は、薬剤分野において周知されており、例えば参照文献［４２］において記載されている。好適な担体の例として、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが挙げられる。好適な希釈剤の例として、エタノール、グリセロール及び水が挙げられる。医薬担体、賦形剤または希釈剤の選択は、意図する投与経路及び標準の薬務に関して選択され得る。医薬組成物は、上記担体、賦形剤または希釈剤として、またはこれに加えて、いずれの好適な結合剤（複数可）、潤滑剤（複数可）、懸濁剤（複数可）、コーティング剤（複数可）、可溶化剤（複数可）を含んでいてもよい。好適な結合剤の例として、デンプン、ゼラチン、天然糖、例えば、グルコース、無水ラクトース、自由流動ラクトース、β−ラクトース、コーンシロップ、天然及び合成ガム、例えば、アカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースならびにポリエチレングリコールが挙げられる。好適な潤滑剤の例として、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。防腐剤、安定剤、染料、及びさらなる香味剤が医薬組成物において付与されていてよい。防腐剤の例として、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが挙げられる。酸化防止剤及び懸濁剤が使用されてもよい。
本発明の組成物は、食品として調合されてよい。例えば、食品は、例えば栄養補助食品において、本発明の治療効果に加えて、栄養的利益を付与してよい。同様に、食品は、本発明の組成物の風味を向上するように、または組成物を、医薬組成物よりもむしろ、一般食料とより類似することによって、消費するのにより魅力的であるようにするように調合されてよい。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ミルクベースの製品として調合される。用語「ミルクベースの製品」は、変動する脂肪分を有する、いずれの液体または半固体のミルク−またはホエイベースの製品も意味する。ミルクベースの製品は、例えば、ウシのミルク、ヤギのミルク、ヒツジのミルク、スキムミルク、ホールミルク、いずれの処理もしていない粉ミルク及びホエイからの還元ミルク、または加工品、例えばヨーグルト、凝固したミルク、カード、酸乳、酸全乳、バターミルク及び他の酸乳製品であり得る。別の重要な群として、ミルク飲料、例えばホエイ飲料、発酵乳、コンデンスミルク、乳幼児ミルク；フレーバーミルク、アイスクリーム；ミルク含有食品、例えば、スイーツが挙げられる。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ属の１または２以上の細菌株を含み、いずれの他の種からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別の種からの細菌を含む。そのため、いくつかの実施形態において、本発明は、Ｂｌａｕｔｉａ属の１または２以上の細菌株を含む組成物であって、いずれの他の種からの細菌も含有せず、または、治療における使用のための、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別の種からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓまたはＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の１または２以上の細菌株を含み、いずれの他の種からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別の種からの細菌を含む。そのため、いくつかの実施形態において、本発明は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓまたはＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の１または２以上の細菌株を含む組成物であって、いずれの他の種からの細菌も含有せず、または、治療における使用のための、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別の種からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の１または２以上の細菌株を含み、いずれの他の種からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別の種からの細菌を含む。そのため、いくつかの実施形態において、本発明は、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の１または２以上の細菌株を含む組成物であって、いずれの他の種からの細菌も含有せず、または、治療における使用のための、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別の種からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓまたはＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の１または２以上の細菌株を含み、いずれの他のＢｌａｕｔｉａ種からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別のＢｌａｕｔｉａ種からの細菌を含む。そのため、いくつかの実施形態において、本発明は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓまたはＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の１または２以上の細菌株を含む組成物であって、いずれの他のＢｌａｕｔｉａ種からの細菌も含有せず、または、治療における使用のための、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別のＢｌａｕｔｉａ種からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の１または２以上の細菌株を含み、いずれの他のＢｌａｕｔｉａ種からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別のＢｌａｕｔｉａ種からの細菌を含む。そのため、いくつかの実施形態において、本発明は、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の１または２以上の細菌株を含む組成物であって、いずれの他のＢｌａｕｔｉａ種からの細菌も含有せず、または、治療における使用のための、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別のＢｌａｕｔｉａ種からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、単一の細菌株または種を含有し、いずれの他の細菌株または種も含有しない。かかる組成物は、ほんの僅少なまたは生物学的に関連のない量の他の細菌株または種を含んでいてよい。かかる組成物は、他の種の生物を実質的に含まない培養物であってよい。
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｂｌａｕｔｉａ属の単一の細菌株を含む組成物であって、いずれの他の株からの細菌も含有せず、または、治療における使用のための、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別の株からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓまたはＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の単一の細菌株を含む組成物であって、いずれの他の株からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、治療における使用のための別の株からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の単一の細菌株を含む組成物であって、いずれの他の株からの細菌も含有せず、または、治療における使用のための、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の、別の株からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１を超える細菌株を含む。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同種内からの１を超える株（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０または４５を超える株）を含み、任意選択的に、いずれの他の種からの細菌も含有しない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同種内からの５０未満の株（例えば、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１２、１０、９、８、７、６、５、４または３未満の株）を含み、任意選択的に、いずれの他の種からの細菌も含有しない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同種内からの１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１９、１〜１８、１〜１５、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、１〜２、２〜５０、２〜４０、２〜３０、２〜２０、２〜１５、２〜１０、２〜５、６〜３０、６〜１５、１６〜２５、または３１〜５０株を含み、任意選択的に、いずれの他の種からの細菌も含有しない。本発明は、上記のいずれの組み合わせも含む。
いくつかの実施形態において、組成物は、微生物コンソーシアム（consortium）を含む。例えば、いくつかの実施形態において、組成物は、微生物コンソーシアムの一部としてＢｌａｕｔｉａ細菌株を含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｂｌａｕｔｉａ細菌株は、腸において生体内で共生的に生きることができる、他の属からの１または２以上の（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０、１５または２０の）他の細菌株において存在する。例えば、いくつかの実施形態において、組成物は、異なる属からの細菌株と組み合わせたＢｌａｕｔｉａの細菌株を含む。いくつかの実施形態において、微生物コンソーシアムは、単一の生物、例えば、ヒトの糞便サンプルから得られた２以上の細菌株を含む。いくつかの実施形態において、微生物コンソーシアムは、本来は一緒には見られない。例えば、いくつかの実施形態において、微生物コンソーシアムは、少なくとも２の異なる生物の糞便サンプルから得られた細菌株を含む。いくつかの実施形態において、該２の異なる生物は、同種、例えば、２の異なるヒトからのものである。いくつかの実施形態において、該２の異なる生物はヒト乳児及びヒト成人である。いくつかの実施形態において、該２の異なる生物は、ヒト及び非ヒト哺乳動物である。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、株ＭＲＸ００６と同じ安全及び治療効能特性を有するが、ＮＣＩＭＢ４２３８１として寄託されているＭＲＸ００６ではない、またはＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓでもない細菌株をさらに含む。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、株ＭＲＸ００８と同じ安全及び治療効能特性を有するが、ＮＣＩＭＢ４２４８６として寄託されているＭＲＸ００８ではない、またはＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅでもない細菌株をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＤＳＭ１４２９４として寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株と同じ安全及び治療効能特性を有するが、ＤＳＭ１４２９４として寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株ではない、またはＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａではない細菌株をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の細菌株を含まない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓを含まず、及び／またはＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓを含まない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物によって処置されるＣＮＳ障害は、双極性障害ではない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物によって処置される患者は、真菌感染症を有さない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物によって処置される患者は、カンジダ症に罹患していない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物によって処置される患者は、真菌感染症を有すると診断されていない、及び／またはカンジダ症に罹患していると診断されていない。好ましいかかる実施形態において、本発明の組成物によって処置される患者は、真菌感染症を有すると診断されていない、及び／またはカンジダ症に罹患していると診断されていない。
本発明の組成物が１を超える細菌株、種または属を含むいくつかの実施形態において、個々の細菌株、種または属は、別々、同時または逐次投与用であってよい。例えば、組成物は、１を超える細菌株、種もしくは属の全てを含んでいてよく、または細菌株、種もしくは属は、別々に貯蔵されてよく、また、別々に、同時にもしくは逐次的に投与されてよい。いくつかの実施形態において、１を超える細菌株、種または属は、別々に貯蔵されているが、使用前に一緒に混合される。
いくつかの実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、ヒト成人の糞便から得られる。本発明の組成物が１を超える細菌株を含むいくつかの実施形態において、細菌株の全てがヒト成人の糞便から得られ、または、他の細菌株が存在するとき、ほんの僅少な量で存在する。細菌は、ヒト成人の糞便から得られ本発明の組成物において使用された後に培養されてよい。
上記のように、いくつかの実施形態において、１または２以上のＢｌａｕｔｉａ細菌株は、本発明の組成物において唯一の治療的活性剤（複数可）である。いくつかの実施形態において、組成物における細菌株（複数可）は、本発明の組成物において唯一の治療的活性剤（複数可）である。
本発明による使用のための組成物は、販売承認を必要としてもしなくてもよい。
ある特定の実施形態において、本発明は、上記細菌株が凍結乾燥されている、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、上記細菌株が噴霧乾燥されている、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、生きている、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、生存している、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、腸に部分的または全体的に定着することが可能である、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、生存しており、かつ腸に部分的または全体的に定着することが可能である、上記医薬組成物を提供する。
いくつかの場合において、凍結乾燥または噴霧乾燥されている細菌株は、投与前に再構成される。いくつかの場合において、再構成は、本明細書に記載されている希釈剤の使用による。
本発明の組成物は、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体を含んでいてよい。
ある特定の実施形態において、本発明は、本発明において使用される細菌株と；薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤とを含む医薬組成物であって；細菌株が、それを必要とする対象に投与されるとき、障害を処置するのに十分な量であり、当該障害が：自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；及び／または慢性疼痛；運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎；からなる群から選択される、上記医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、本発明において使用される細菌株と；薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤とを含む医薬組成物であって；細菌株が、中枢神経系障害または状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を処置または予防するのに十分な量である、上記医薬組成物を提供する。好ましい実施形態において、上記疾患または状態は：自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）、小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；及び／または慢性疼痛；からなる群から選択される。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎を処置または予防するのに有用であり得る。
ある特定の実施形態において、本発明は、上記医薬組成物であって、細菌株の量が、組成物の重量に対してグラム当たり約１×１０３〜約１×１０１１個のコロニー形成単位である、上記医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、１ｇ、３ｇ、５ｇまたは１０ｇの用量で投与される、上記医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、経口、直腸、皮下、鼻、頬側、及び舌下からなる群から選択される方法によって投与される、上記医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール及びソルビトールからなる群から選択される担体を含む上記医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、エタノール、グリセロール及び水からなる群から選択される希釈剤を含む上記医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、デンプン、ゼラチン、グルコース、無水ラクトース、自由流動ラクトース、β−ラクトース、コーンシロップ、アカシア、トラガカント、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及び塩化ナトリウムからなる群から選択される賦形剤を含む、上記医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、防腐剤、酸化防止剤及び安定剤の少なくとも１つをさらに含む、上記医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルからなる群から選択される防腐剤を含む、上記医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、組成物が約４℃または約２５℃で密閉容器に貯蔵されて容器が５０％の相対湿度を有する雰囲気に置かれているとき、コロニー形成単位で測定される細菌株の少なくとも８０％が、少なくとも約１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年または３年の期間の後に残存している、上記医薬組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されている組成物を含む密閉容器において付与される。いくつかの実施形態において、密閉容器は、サチェまたはボトルである。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されている組成物を含むシリンジにおいて付与される。
本発明の組成物は、いくつかの実施形態において、医薬製剤として付与されてよい。例えば、組成物は、錠剤またはカプセルとして提供されてよい。いくつかの実施形態において、カプセルは、ゼラチンカプセル（「ｇｅｌ−ｃａｐ」）である。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、経口投与される。経口投与は、嚥下を含んでいてよく、その結果、化合物が、胃腸管に入ることになり、かつ／または頬側、舌側、もしくは舌下投与によって化合物が口から直接血流に入ることになる。
経口投与に好適な医薬製剤として、固体プラグ、固体微粒子状物、半固体及び液体（多相及び分散系を含む）、例えば錠剤；多−またはナノ−粒子状物を含有する軟質または硬質カプセル、液体（例えば、水溶液）、エマルジョンまたは粉末；ロゼンジ（液体が充填されたものを含む）；咀嚼剤；ゲル；急速分散剤形；フィルム；膣坐剤；スプレー；ならびに頬側／粘膜接着パッチが挙げられる。
いくつかの実施形態において、医薬製剤は、腸溶性製剤、すなわち、経口投与による腸への本発明の組成物の送達に好適である胃耐性製剤（例えば、胃のｐＨに耐性）である。腸溶性製剤は、組成物の細菌または別の成分が酸感受性である、例えば、胃条件下で分解しやすいとき、特に有用であり得る。
いくつかの実施形態において、腸溶性製剤は、腸溶性コーティングを含む。いくつかの実施形態において、該製剤は、腸溶性コーティングされた剤形である。例えば、該製剤は、腸溶性コーティングされた錠剤または腸溶性コーティングされたカプセルなどであってよい。腸溶性コーティングは、経口送達のための従来の腸溶性コーティング、例えば、錠剤、カプセルなどのための従来のコーティングであってよい。該製剤は、フィルムコーティング、例えば、腸溶性ポリマー、例えば酸不溶性ポリマーの薄膜層を含んでいてよい。
いくつかの実施形態において、腸溶性製剤は、本質的に腸溶性であり、例えば、腸溶性コーティングを必要とすることない胃耐性である。そのため、いくつかの実施形態において、該製剤は、腸溶性コーティングを含まない腸溶性製剤である。いくつかの実施形態において、該製剤は、熱ゲル化材料から作製されたカプセルである。いくつかの実施形態において、熱ゲル化材料は、セルロース系材料、例えばメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。いくつかの実施形態において、カプセルは、いずれのフィルム形成ポリマーも含有しないシェルを含む。いくつかの実施形態において、カプセルは、シェルを含み、該シェルは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含み、いずれのフィルム形成ポリマーも含まない（例えば、［４３］を参照されたい）。いくつかの実施形態において、該製剤は、本質的に腸溶性のカプセル（例えば、Ｃａｐｓｕｇｅｌ製Ｖｃａｐｓ（登録商標））である。
いくつかの実施形態において、該製剤は、軟質カプセルである。軟質カプセルは、カプセルシェルに存在する軟化剤、例えば、グリセロール、ソルビトール、マルチトール及びポリエチレングリコールなどの添加のおかげで、ある特定の弾性及び柔軟性を有し得るカプセルである。軟質カプセルは、例えば、ゼラチンまたはデンプンベースで製造され得る。ゼラチンベースの軟質カプセルは、種々の供給者から市販されている。例えば経口または経直腸などの投与方法に応じて、軟質カプセルは、種々の形状を有することができ、例えば、円形、楕円形、長方形または魚雷型であり得る。軟質カプセルは、従来のプロセス、例えば、Ｓｃｈｅｒｅｒプロセス、Ａｃｃｏｇｅｌプロセスまたは液滴もしくは発泡プロセスなどによって製造され得る。
培養方法
本発明における使用のための細菌株は、例えば、参照文献［４４］、［］及び［４６］に詳述されている標準の微生物学的技術を使用して培養され得る。
本発明における使用のための細菌株は、例えば、参照文献［４４］、［］及び［４６］に詳述されている標準の微生物学的技術を使用して培養され得る。
培養に使用される固体または液体培地は、ＹＣＦＡ寒天またはＹＣＦＡ培地であってよい。ＹＣＦＡ培地として（１００ｍｌ当たりの近似値）：Ｃａｓｉｔｏｎｅ（１．０ｇ）、酵母エキス（０．２５ｇ）、ＮａＨＣＯ３（０．４ｇ）、システイン（０．１ｇ）、Ｋ２ＨＰＯ４（０．０４５ｇ）、ＫＨ２ＰＯ４（０．０４５ｇ）、ＮａＣｌ（０．０９ｇ）、（ＮＨ４）２ＳＯ４（０．０９ｇ）、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（０．００９ｇ）、ＣａＣｌ２（０．００９ｇ）、レザズリン（０．１ｍｇ）、ヘミン（１ｍｇ）、ビオチン（１μｇ）、コバラミン（１μｇ）、ｐ−アミノ安息香酸（３μｇ）、葉酸（５μｇ）、及びピリドキサミン（１５μｇ）を挙げることができる。
ワクチン組成物における使用のための細菌株
本発明者らは、本発明の細菌株が、中枢神経系障害または状態、特に微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を処置または予防するのに有用であることを確認した。このことは、本発明の細菌株が、宿主の中枢自律神経及び／または腸神経系；ＨＰＡ経路の活性；神経免疫及び神経内分泌経路；ならびに宿主の胃腸管における共生代謝産物のレベル及び／または宿主の胃腸透過性に及ぼす効果の結果である可能性がある。そのため、本発明の組成物は、ワクチン組成物として投与されるとき、中枢神経系障害または状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を予防するのにも有用であり得る。ある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、生存している。ある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。ある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。他のある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、殺傷されていても、不活性化されていても、弱毒化されていてもよい。ある特定のかかる実施形態において、組成物は、ワクチンアジュバントを含んでいてよい。ある特定の実施形態において、組成物は、注射を介して、例えば皮下注射を介しての投与用である。
本発明者らは、本発明の細菌株が、中枢神経系障害または状態、特に微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を処置または予防するのに有用であることを確認した。このことは、本発明の細菌株が、宿主の中枢自律神経及び／または腸神経系；ＨＰＡ経路の活性；神経免疫及び神経内分泌経路；ならびに宿主の胃腸管における共生代謝産物のレベル及び／または宿主の胃腸透過性に及ぼす効果の結果である可能性がある。そのため、本発明の組成物は、ワクチン組成物として投与されるとき、中枢神経系障害または状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を予防するのにも有用であり得る。ある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、生存している。ある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。ある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。他のある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、殺傷されていても、不活性化されていても、弱毒化されていてもよい。ある特定のかかる実施形態において、組成物は、ワクチンアジュバントを含んでいてよい。ある特定の実施形態において、組成物は、注射を介して、例えば皮下注射を介しての投与用である。
総則
本発明の実施は、別途示さない限り、当業者の範囲内の、化学、生化学、分子生物、免疫学及び薬理学の従来の方法を用いる。かかる技術は、文献において完全に説明されている。例えば、参照文献［４７］及び［４８］〜［５４］などを参照されたい。
本発明の実施は、別途示さない限り、当業者の範囲内の、化学、生化学、分子生物、免疫学及び薬理学の従来の方法を用いる。かかる技術は、文献において完全に説明されている。例えば、参照文献［４７］及び［４８］〜［５４］などを参照されたい。
用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」は、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」及び「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ（からなる）」を包含し、例えば、組成物がＸを「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」は、Ｘから排他的になってもよく、またはさらなる何か、例えば、Ｘ＋Ｙを含んでいてもよい。
数値ｘに関係する用語「約」は、任意選択的であり、例えば、ｘ±１０％を意味する。
ある特定の実施形態において、用語「調節する」は、増加または活性化することを意味する。代替の実施形態において、用語「調節する」は、減少または抑制することを意味する。
語「実質的に」は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてよい。必要に応じて、語「実質的に」は、本発明の定義から省略されてよい。
２つのヌクレオチド配列間の百分率の配列同一性への言及は、整列しているとき、ヌクレオチドの百分率が、２つの配列を比較したときに同じであることを意味する。このアラインメント及びパーセント相同性または配列同一性は、当該分野において公知のソフトウエアプログラム、例えば、参照文献［５５］のセクション７．７．１８に記載されているものを使用して決定され得る。好ましいアラインメントは、１２のギャップオープンペナルティ及び２のギャップエクステンションペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスによるアフィンギャップ検索を使用してＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参照文献［５６］に開示されている。
特に記述されていない限り、多数のステップを含むプロセスまたは方法は、方法の開始及び終了時にさらなるステップを含んでいてよく、またはさらなる介在するステップを含んでいてよい。また、ステップは、適切な場合、代替の順序で、組み合わされ、省略され、または実施されてよい。
本発明の種々の実施形態は本明細書に記載されている。各実施形態において特定されている特徴は、他の特定されている特徴と組み合わされて、さらなる実施形態を付与してよいことが認識される。特に、好適な、典型的なまたは好ましいとして本明細書において強調されている実施形態は、互いに組み合わされてよい（これらが互いに排他的であるときを除く）。
本発明を実施するための形態
本研究は、神経発達及び精神疾患に関連する行動特性を示す２の異なるマウスモデルにおいて精神及び神経学的障害の処置に対する生存生物学的製剤の効果を評価することを試みた。特に、本研究は、（ｉ）Ｃ５７ＢＬ／６ｗｔマウスモデル、（ｉｉ）ＢＴＢＲ近交系遺伝子組み換えマウスモデル及び（ｉｉｉ）母体免疫活性化（ＭＩＡ）マウスモデルにおける自閉症関連行動に焦点を当てる。３のマウスモデルにおける不安、うつ病、ならびに行動の認知及び社会的領域にわたっての慢性ＭＲＸ００６対ビヒクル処置の効果を調査した。また、生理学的及び解剖学的分析を、循環サイトカイン及びオキシトシンレベルの検出と併せて実施した。
本研究は、神経発達及び精神疾患に関連する行動特性を示す２の異なるマウスモデルにおいて精神及び神経学的障害の処置に対する生存生物学的製剤の効果を評価することを試みた。特に、本研究は、（ｉ）Ｃ５７ＢＬ／６ｗｔマウスモデル、（ｉｉ）ＢＴＢＲ近交系遺伝子組み換えマウスモデル及び（ｉｉｉ）母体免疫活性化（ＭＩＡ）マウスモデルにおける自閉症関連行動に焦点を当てる。３のマウスモデルにおける不安、うつ病、ならびに行動の認知及び社会的領域にわたっての慢性ＭＲＸ００６対ビヒクル処置の効果を調査した。また、生理学的及び解剖学的分析を、循環サイトカイン及びオキシトシンレベルの検出と併せて実施した。
自閉症スペクトラム障害の処置の医薬品の臨床開発におけるＥＭＡガイドラインは、疾患の異質性に起因して、単一の化合物によって全ての中核症状に有意な効果を達成することができない場合があること、そのため、少なくとも１つの中核症状において短期間の効能が実証されなければならないことを記述している。実施例において試験される生存生物学的製剤は、自閉症スペクトラム障害の少なくとも１つの中核症状の有効な処置を示しており、そのため、これらの株及び関連するＢｌａｕｔｉａ株は、ヒト疾患に対して有効であることが予期される。同様に、他の中枢神経系障害または状態は、複数の異なる症状を有する複合的な病状を示しており、承認された処置がほとんどない。そのため、有効な処置が、中枢神経系障害または状態の全ての症状を処置する必要はないことが理解される。処置は、中枢神経系障害または状態に関連する症状のうちの１つを処置すれば、治療的に有用であるとされる。
実施例１−Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける不安、うつ病、ならびに行動の認知及び社会的領域を評価する
実施例１ａ−Ｃ５７ＢＬ／６マウス実験における材料及び方法
マウス
雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＨａｒｌａｎ ＵＫから購入した。該動物を、１２時間暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で温度及び湿度が制御された部屋に入れた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。
実施例１ａ−Ｃ５７ＢＬ／６マウス実験における材料及び方法
マウス
雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＨａｒｌａｎ ＵＫから購入した。該動物を、１２時間暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で温度及び湿度が制御された部屋に入れた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。
株
受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＭＲＸ００６：Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ細菌。
生物学的製剤をグリセロールストックに付与した。生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＭＲＸ００６：Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ細菌。
生物学的製剤をグリセロールストックに付与した。生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
生存生物学的製剤投与
マウスが７週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクル（対照）による投薬。これらのマウスを、行動バッテリーの開始の前に、ＭＲＸ００６またはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）によって４週間、毎日１回処置した。マウスを、行動バッテリーの間、毎日１回さらに処置した。ＭＲＸ００６（１×１０９ＣＦＵ経口投与）を投与の前にＰＢＳに溶解した。
マウスが７週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクル（対照）による投薬。これらのマウスを、行動バッテリーの開始の前に、ＭＲＸ００６またはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）によって４週間、毎日１回処置した。マウスを、行動バッテリーの間、毎日１回さらに処置した。ＭＲＸ００６（１×１０９ＣＦＵ経口投与）を投与の前にＰＢＳに溶解した。
投与スケジュール
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
ナイーブ群を行動バッテリーの開始まで取り扱わなかった。
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
ナイーブ群を行動バッテリーの開始まで取り扱わなかった。
糞便収集
新たな糞便サンプルを研究の終了まで毎週個々のマウスから収集した。少なくとも２０ｍｇの新たな糞便を微量遠心分離管に置き、直後に氷上に置き、次いで−８０℃で保存した。
新たな糞便サンプルを研究の終了まで毎週個々のマウスから収集した。少なくとも２０ｍｇの新たな糞便を微量遠心分離管に置き、直後に氷上に置き、次いで−８０℃で保存した。
実験設計及び方法
上記で概説している、マウスが７週齢であったときに開始したＭＲＸ００６による投薬。最初の投薬は、行動実験の前に４週間行った。行動バッテリーを以下の順序で行った：５週目に大理石埋め込み及び３チャンバー試験；６週目に高架式十字迷路及び尾懸垂試験；８週目にオープンフィールド及び新規対象認識試験；９週目にストレス−誘発の異常高熱試験；１０週目に恐怖条件付け試験；ならびに１１週目に強制水泳試験。フルオレセイン腸透過性アッセイを９週目に実施した。最後に、１２週目で、マウスを処分し、血漿サンプルと併せて、脳、近位及び遠位結腸、副腎系及び脾臓領域を切断した。
上記で概説している、マウスが７週齢であったときに開始したＭＲＸ００６による投薬。最初の投薬は、行動実験の前に４週間行った。行動バッテリーを以下の順序で行った：５週目に大理石埋め込み及び３チャンバー試験；６週目に高架式十字迷路及び尾懸垂試験；８週目にオープンフィールド及び新規対象認識試験；９週目にストレス−誘発の異常高熱試験；１０週目に恐怖条件付け試験；ならびに１１週目に強制水泳試験。フルオレセイン腸透過性アッセイを９週目に実施した。最後に、１２週目で、マウスを処分し、血漿サンプルと併せて、脳、近位及び遠位結腸、副腎系及び脾臓領域を切断した。
グラフ設計及び統計的分析
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００６群を比較するデータを、二元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ビヒクル群対ナイーブマウスを比較するデータを、対応のないスチューデントｔ検定によって分析した。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００６群を比較するデータを、二元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ビヒクル群対ナイーブマウスを比較するデータを、対応のないスチューデントｔ検定によって分析した。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
実施例１ｂ−社会的相互作用行動のアセスメント−３チャンバー試験
論拠
３チャンバー社会的相互作用試験（３−ＣＳＩＴ）は、性別一致の同種間での社会的相互作用を評価し、マウスにおける社会的新規性及び社会的嗜好の読み出しを可能にするかなり有効な動物行動学的に関連するモデルである。当該試験を使用して、この行動の読み取りにおける変化を特徴付けかつ実証する。試験は、マウスに、無生物対象または性別一致の同種マウス間で自由に探索させる。
論拠
３チャンバー社会的相互作用試験（３−ＣＳＩＴ）は、性別一致の同種間での社会的相互作用を評価し、マウスにおける社会的新規性及び社会的嗜好の読み出しを可能にするかなり有効な動物行動学的に関連するモデルである。当該試験を使用して、この行動の読み取りにおける変化を特徴付けかつ実証する。試験は、マウスに、無生物対象または性別一致の同種マウス間で自由に探索させる。
また、３チャンバー試験（３−ＣＨＴ）は、齧歯動物モデルにおける社会的新規性において全般的な社交性及び関心の形態で認知を評価するのに使用される試験である。齧歯動物は、通常、対象物とよりも別の齧歯動物とより多くの時間を過ごすことを好む（社交性）。また、齧歯動物は、新規マウス対ファミリアーマウスを調査することを好む（社会的新規性）。これらの傾向に基づき、３−ＣＨＴは、社交性及び／または社会的新規性の欠損を有する齧歯動物を同定することを助け得る。
方法
動物を、全ての区画に容易にアクセスすることを可能にする小さい円形の開口部を有する隔壁によって３つのチャンバー（左及び右ならびにより小さい中央チャンバー）に分割した矩形装置に入れる。試験は、３つの逐次的な１０分間の試行から構成される：（１）馴化（試験動物に３つの空チャンバーを探索させる）；（２）社交性（アンファミリアー動物を左または右のいずれかのチャンバーにおける内部のメッシュワイヤケージに入れる）；（３）社会的新規性の嗜好（新規動物を、ここでのファミリアー動物とは反対側の、チャンバー内の事前に空にした内部ケージ内に入れる）。ナイーブ動物は、馴化期においていずれのチャンバーにも嗜好を有さず、社交性の期にはマウスへの嗜好、社会的新規性の期には新規マウスへの嗜好を有するはずである。識別比の増加は、社会的行動の増加を示唆している。全ての動物は週齢及び性別一致であり、それぞれのチャンバーは、それぞれ３０分間の試行後にきれいにして新たな寝具で覆った。３段階のそれぞれについて、行動を装置の上に取り付けたビデオカメラによって記録する。
動物を、全ての区画に容易にアクセスすることを可能にする小さい円形の開口部を有する隔壁によって３つのチャンバー（左及び右ならびにより小さい中央チャンバー）に分割した矩形装置に入れる。試験は、３つの逐次的な１０分間の試行から構成される：（１）馴化（試験動物に３つの空チャンバーを探索させる）；（２）社交性（アンファミリアー動物を左または右のいずれかのチャンバーにおける内部のメッシュワイヤケージに入れる）；（３）社会的新規性の嗜好（新規動物を、ここでのファミリアー動物とは反対側の、チャンバー内の事前に空にした内部ケージ内に入れる）。ナイーブ動物は、馴化期においていずれのチャンバーにも嗜好を有さず、社交性の期にはマウスへの嗜好、社会的新規性の期には新規マウスへの嗜好を有するはずである。識別比の増加は、社会的行動の増加を示唆している。全ての動物は週齢及び性別一致であり、それぞれのチャンバーは、それぞれ３０分間の試行後にきれいにして新たな寝具で覆った。３段階のそれぞれについて、行動を装置の上に取り付けたビデオカメラによって記録する。
結果
群内でのスチューデントｔ検定は、全ての群が、マウス対対象物を調査するのにより多くの時間を費やしたことを明らかにし（＊＊ｐ＜０．０１）、社交性の欠損がないことを示唆した（図１）。毎日の栄養補給は社交性に影響しなかった。興味深いことに、ＭＲＸ００６は、新規対ファミリアーマウスを調査するのに費やされる時間を増大させ、社会的新規性の増加を示唆した（ｐ＜０．０５；図１）。
群内でのスチューデントｔ検定は、全ての群が、マウス対対象物を調査するのにより多くの時間を費やしたことを明らかにし（＊＊ｐ＜０．０１）、社交性の欠損がないことを示唆した（図１）。毎日の栄養補給は社交性に影響しなかった。興味深いことに、ＭＲＸ００６は、新規対ファミリアーマウスを調査するのに費やされる時間を増大させ、社会的新規性の増加を示唆した（ｐ＜０．０５；図１）。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、３チャンバー試験においてＣ５７ＢＬ／６マウスにおける社会的新規性の嗜好を向上させた。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、３チャンバー試験においてＣ５７ＢＬ／６マウスにおける社会的新規性の嗜好を向上させた。
実施例１ｃ−うつ病様行動を評価する−強制水泳試験（ＦＳＴ）
論拠
強制水泳試験（ＦＳＴ）は、抗うつ活動を評価するために最も広く使用されている実験的パラダイムである。ナイーブ動物は、不動の浮遊姿勢に適応する前に水泳、上昇及び飛び込みの形態で逃避行動を示すであろう。不動の持続時間は、行動の断念を示している。抗うつ薬は、この試験において、不動で費やした時間を減少させる。
論拠
強制水泳試験（ＦＳＴ）は、抗うつ活動を評価するために最も広く使用されている実験的パラダイムである。ナイーブ動物は、不動の浮遊姿勢に適応する前に水泳、上昇及び飛び込みの形態で逃避行動を示すであろう。不動の持続時間は、行動の断念を示している。抗うつ薬は、この試験において、不動で費やした時間を減少させる。
方法
マウスに、１７ｃｍの深さまで２３〜２５℃の水道水で満たしたガラスシリンダ（２４×２１ｃｍ）において６分間強制して水泳させた。ＦＳＴを天井カメラからテープに録画した。スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。
マウスに、１７ｃｍの深さまで２３〜２５℃の水道水で満たしたガラスシリンダ（２４×２１ｃｍ）において６分間強制して水泳させた。ＦＳＴを天井カメラからテープに録画した。スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。
結果
毎日の栄養補給は不動時間を増加させ、ナイーブマウスと比較してうつ病様行動を示唆した（スチューデントｔ検定、ｔ（１９０＝４．５６５；ｐ＜０．０１；図２）。ＭＲＸ００６による慢性処置は不動を有意に低減し、ビヒクル群と比較して抗う病様効果を示唆した（Ｆ（２．２９）＝１４．９９２；＊＊ｐ＜０．０１）。
毎日の栄養補給は不動時間を増加させ、ナイーブマウスと比較してうつ病様行動を示唆した（スチューデントｔ検定、ｔ（１９０＝４．５６５；ｐ＜０．０１；図２）。ＭＲＸ００６による慢性処置は不動を有意に低減し、ビヒクル群と比較して抗う病様効果を示唆した（Ｆ（２．２９）＝１４．９９２；＊＊ｐ＜０．０１）。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験において抗うつ病様行動を誘発させた。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験において抗うつ病様行動を誘発させた。
実施例１ｄ−うつ病様行動を評価する−尾懸垂試験
論拠
尾懸垂試験は、抗うつ病様行動を評価するのに使用されるよく特徴付けられた試験である。不動で費やした時間は、うつ病様行動の指標である。抗うつ薬による処置は、不動で費やした時間を減少させる。
論拠
尾懸垂試験は、抗うつ病様行動を評価するのに使用されるよく特徴付けられた試験である。不動で費やした時間は、うつ病様行動の指標である。抗うつ薬による処置は、不動で費やした時間を減少させる。
方法
マウスを、尾部の先端の前で１ｃｍ付着した接着剤テープの一部により、上昇棒（６０ｃｍ）に６分間つるす。マウスを、隣接表面に逃げるまたはつかまることができないようにつるす。この試験の間、６分の持続時間で、得られる逃避指向の行動を定量化する。スコアリングした行動パラメータは、不動で費やした時間である。試験を三脚カメラによって映像記録し、不動の時間を実験条件が分からない調査者によって手動でスコアリングした。
マウスを、尾部の先端の前で１ｃｍ付着した接着剤テープの一部により、上昇棒（６０ｃｍ）に６分間つるす。マウスを、隣接表面に逃げるまたはつかまることができないようにつるす。この試験の間、６分の持続時間で、得られる逃避指向の行動を定量化する。スコアリングした行動パラメータは、不動で費やした時間である。試験を三脚カメラによって映像記録し、不動の時間を実験条件が分からない調査者によって手動でスコアリングした。
結果
栄養補給のための毎日の取り扱い（スチューデントｔ検定、ｔ（２０）＝０．９４０５；ｐ＝０．３５８２）及びＭＲＸ００６による慢性処置（一元ＡＮＯＶＡ、Ｆ（２．３０）＝２．０１４；ｐ＝０．１５２）は、尾懸垂試験において何ら有意な効果を誘発しなかった（図３）。
栄養補給のための毎日の取り扱い（スチューデントｔ検定、ｔ（２０）＝０．９４０５；ｐ＝０．３５８２）及びＭＲＸ００６による慢性処置（一元ＡＮＯＶＡ、Ｆ（２．３０）＝２．０１４；ｐ＝０．１５２）は、尾懸垂試験において何ら有意な効果を誘発しなかった（図３）。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、尾懸垂試験においてＣ５７ＢＬ／６マウスで何ら観察可能な抗うつ病様行動も誘発しなかった。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、尾懸垂試験においてＣ５７ＢＬ／６マウスで何ら観察可能な抗うつ病様行動も誘発しなかった。
実施例１ｅ−認知を評価する−恐怖条件付け試験
論拠
状況恐怖条件付けを海馬依存記憶の尺度として使用する。恐怖条件付けは、無条件刺激（ＵＳ）、例えば、条件刺激（ＣＳ）、特定の音調または光または匂いによるショックに対して動物によって示される凍結反応を測定する連想的学習の形態である。凍結レベルの測定を使用して、ＵＳ及びＣＳ刺激への動物の反応を評価した。この試験は、マウスが習得日に習得したことをマウスがどのように効率的に忘れるかを測定する。当該試験は、無条件刺激に関連する条件刺激に対するマウスの不安、ならびに、マウスが、対になる無条件刺激の繰り返しの非存在下での条件刺激の存在下で低減された不安及び／またはストレス（凍結レベル）を示す速度を評価する。
論拠
状況恐怖条件付けを海馬依存記憶の尺度として使用する。恐怖条件付けは、無条件刺激（ＵＳ）、例えば、条件刺激（ＣＳ）、特定の音調または光または匂いによるショックに対して動物によって示される凍結反応を測定する連想的学習の形態である。凍結レベルの測定を使用して、ＵＳ及びＣＳ刺激への動物の反応を評価した。この試験は、マウスが習得日に習得したことをマウスがどのように効率的に忘れるかを測定する。当該試験は、無条件刺激に関連する条件刺激に対するマウスの不安、ならびに、マウスが、対になる無条件刺激の繰り返しの非存在下での条件刺激の存在下で低減された不安及び／またはストレス（凍結レベル）を示す速度を評価する。
方法
この試験の装置は、上方にライトを備えたチャンバーからなった。各チャンバーは、外側の光及び音から保護する、より大きなチャンバー内にある。最初の日に（トレーニングまたは習得段階）、マウスをチャンバー内に入れ、凍結行動を、３分間（ベースライン）、続いて、最大２分の間隔を有する、最大で６ライト／音調［条件刺激（ＣＳ−３０秒）］及びフットショック［無条件刺激（ＵＳ−２秒）］ペアについて記録した。ペアは、２０秒間の手掛かり［例えば組み合わせライト（約２６０ｌｘ）及び音調暴露（８０ｄＢ）］及び手掛かりの最後の２秒間での電気フットショックからなった。フットショックは凍結行動を増加させる。電流の強度は０．６ｍＡであった。凍結反応を誘発する最小電流を使用した。最後のペアの後、２分で、マウスを通常の住居条件に戻した。条件付け後２４及び４８時間（それぞれ２日（回復段階）ならびに３日（消滅段階））で、同じ実験手順をフットショックの非存在下で繰り返し、条件付けされた恐怖記憶の記憶保持及び消滅について試験した（消滅期）。状況記憶の保持は、動物をフットショックの非存在下で上記の状況（すなわち、フットショックチャンバー）に置いたときの凍結行動によって特徴付けられる。
この試験の装置は、上方にライトを備えたチャンバーからなった。各チャンバーは、外側の光及び音から保護する、より大きなチャンバー内にある。最初の日に（トレーニングまたは習得段階）、マウスをチャンバー内に入れ、凍結行動を、３分間（ベースライン）、続いて、最大２分の間隔を有する、最大で６ライト／音調［条件刺激（ＣＳ−３０秒）］及びフットショック［無条件刺激（ＵＳ−２秒）］ペアについて記録した。ペアは、２０秒間の手掛かり［例えば組み合わせライト（約２６０ｌｘ）及び音調暴露（８０ｄＢ）］及び手掛かりの最後の２秒間での電気フットショックからなった。フットショックは凍結行動を増加させる。電流の強度は０．６ｍＡであった。凍結反応を誘発する最小電流を使用した。最後のペアの後、２分で、マウスを通常の住居条件に戻した。条件付け後２４及び４８時間（それぞれ２日（回復段階）ならびに３日（消滅段階））で、同じ実験手順をフットショックの非存在下で繰り返し、条件付けされた恐怖記憶の記憶保持及び消滅について試験した（消滅期）。状況記憶の保持は、動物をフットショックの非存在下で上記の状況（すなわち、フットショックチャンバー）に置いたときの凍結行動によって特徴付けられる。
結果
凍結レベルを習得期（一緒に連結させたＣＳ及びＵＳの両方に暴露）、回復及び消滅期（ＵＳと連結させていないＣＳ）において測定した（図４を参照されたい）。この研究において、毎日の栄養補給は、ナイーブ動物と比較して習得期における凍結レベル（フェーズ１＃ｐ＜０．０５；フェーズ２＃＃＃ｐ＜０．００１；フェーズ３〜４＃＃ｐ＜０．０１）の有意な増加を誘発した。ＭＲＸ００６慢性処置は、習得期の間にビヒクル群と比較したときに凍結レベルを変化させなかった。習得期の後には、トレーニングセッション（ＵＳが後続しないＣＳ）後に２４時間を要した回復期が続いた。データは、データは、ナイーブ群（ｐ＜０．０５）と比較してビヒクル群においてフェーズ１（最初の音調への暴露）で凍結レベルの有意な増加を示した。興味深いことに、凍結レベルの有意な低減は、ビヒクル群と比較したときＭＲＸ００６処置マウス（＊ｐ＜０．０５）においてフェーズ１で観察された。全体に、回復期において、ＭＲＸ００６処置のものは、ビヒクル群と比較したとき凍結レベルの減少の傾向を示しており、ＭＲＸ００６による慢性処置が学習を向上させ得ることを示唆した。回復期の後には、消滅期（２４時間後、ＣＳ、及びＵＳなし）が続いた。この試験は、マウスが習得日に習得したことをマウスがどのように効率的に忘れるかを測定する。消滅期のフェーズ３において、ビヒクル群は、ナイーブ群（ｐ＜０．０５）と比較したとき凍結レベルの増加を示した。ＭＲＸ００６による慢性処置は、消滅期において何ら有意な変化を誘発しなかった。
凍結レベルを習得期（一緒に連結させたＣＳ及びＵＳの両方に暴露）、回復及び消滅期（ＵＳと連結させていないＣＳ）において測定した（図４を参照されたい）。この研究において、毎日の栄養補給は、ナイーブ動物と比較して習得期における凍結レベル（フェーズ１＃ｐ＜０．０５；フェーズ２＃＃＃ｐ＜０．００１；フェーズ３〜４＃＃ｐ＜０．０１）の有意な増加を誘発した。ＭＲＸ００６慢性処置は、習得期の間にビヒクル群と比較したときに凍結レベルを変化させなかった。習得期の後には、トレーニングセッション（ＵＳが後続しないＣＳ）後に２４時間を要した回復期が続いた。データは、データは、ナイーブ群（ｐ＜０．０５）と比較してビヒクル群においてフェーズ１（最初の音調への暴露）で凍結レベルの有意な増加を示した。興味深いことに、凍結レベルの有意な低減は、ビヒクル群と比較したときＭＲＸ００６処置マウス（＊ｐ＜０．０５）においてフェーズ１で観察された。全体に、回復期において、ＭＲＸ００６処置のものは、ビヒクル群と比較したとき凍結レベルの減少の傾向を示しており、ＭＲＸ００６による慢性処置が学習を向上させ得ることを示唆した。回復期の後には、消滅期（２４時間後、ＣＳ、及びＵＳなし）が続いた。この試験は、マウスが習得日に習得したことをマウスがどのように効率的に忘れるかを測定する。消滅期のフェーズ３において、ビヒクル群は、ナイーブ群（ｐ＜０．０５）と比較したとき凍結レベルの増加を示した。ＭＲＸ００６による慢性処置は、消滅期において何ら有意な変化を誘発しなかった。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、回復期における凍結レベルを低減し、ＭＲＸ００６が学習を向上させ得ることを示唆した。全体に、ＭＲＸ００６による慢性処置は、恐怖条件付け行動を観察可能に有意に変化させなかった。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、回復期における凍結レベルを低減し、ＭＲＸ００６が学習を向上させ得ることを示唆した。全体に、ＭＲＸ００６による慢性処置は、恐怖条件付け行動を観察可能に有意に変化させなかった。
実施例１ｆ−認知を評価する−新規対象認識（ＮＯＲ）試験
論拠
使用したプロトコルは、Ｂｅｖｉｎｓ ａｎｄ Ｂｅｓｈｅｅｒ（２００６）の出典であり、これを使用して認知、特に認識記憶を試験した。この試験は、ファミリアー対象よりも新規対象を探索するのにより多くの時間を費やす齧歯動物の自発的傾向に基づいている。新規対象を探索する選択は、学習及び認識記憶の使用を反映している。また、記憶の改善は、うつ病様行動の低減の反映である。
論拠
使用したプロトコルは、Ｂｅｖｉｎｓ ａｎｄ Ｂｅｓｈｅｅｒ（２００６）の出典であり、これを使用して認知、特に認識記憶を試験した。この試験は、ファミリアー対象よりも新規対象を探索するのにより多くの時間を費やす齧歯動物の自発的傾向に基づいている。新規対象を探索する選択は、学習及び認識記憶の使用を反映している。また、記憶の改善は、うつ病様行動の低減の反映である。
方法
使用したプロトコルは、Ｂｅｖｉｎｓ ａｎｄ Ｂｅｓｈｅｅｒ（２００６）の出典であった。これを３日にわたって行った。１日目に、動物を、頭上にカメラを備えた大きな容器である試験環境に１０分間慣れさせた。寝具を使用せず、容器を各動物間で７０％エタノールによって拭いた。２日目に、動物を試験装置に１０分間慣れさせた。この期間の後、動物を容器から取り出し、２の同一の対象を環境に導入した。動物を容器に戻し、さらに１０分間探索させた。対象を各試行の前に７０％エタノール溶液によって清潔にした。トレーニング期間後、齧歯動物を２４時間の遅延期間の後に環境から取り出した。３日目に、齧歯動物を容器に戻し、このとき、その前の日からの１のファミリアー対象、及び１の新規対象のみを収容していた。２の対象と共に動物の活動を５分間記録した。齧歯動物が各対象を探索するのに費やした時間の量を手動観察により記録し、相互作用時間全体にわたって新規対象と相互作用するのに費やした時間に相当する識別指数（ＤＩ）値を生じた。対照ラットと比較してのＤＩの減少は、このタイプの記憶の欠失を示す。
使用したプロトコルは、Ｂｅｖｉｎｓ ａｎｄ Ｂｅｓｈｅｅｒ（２００６）の出典であった。これを３日にわたって行った。１日目に、動物を、頭上にカメラを備えた大きな容器である試験環境に１０分間慣れさせた。寝具を使用せず、容器を各動物間で７０％エタノールによって拭いた。２日目に、動物を試験装置に１０分間慣れさせた。この期間の後、動物を容器から取り出し、２の同一の対象を環境に導入した。動物を容器に戻し、さらに１０分間探索させた。対象を各試行の前に７０％エタノール溶液によって清潔にした。トレーニング期間後、齧歯動物を２４時間の遅延期間の後に環境から取り出した。３日目に、齧歯動物を容器に戻し、このとき、その前の日からの１のファミリアー対象、及び１の新規対象のみを収容していた。２の対象と共に動物の活動を５分間記録した。齧歯動物が各対象を探索するのに費やした時間の量を手動観察により記録し、相互作用時間全体にわたって新規対象と相互作用するのに費やした時間に相当する識別指数（ＤＩ）値を生じた。対照ラットと比較してのＤＩの減少は、このタイプの記憶の欠失を示す。
結果
栄養補給のための毎日の取り扱いは、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおける認識記憶に影響しなかった（図５）。実際、両方の群が、（統計的有意性には達しなかったが）ファミリアー対象と対比して新規対象を探索する嗜好のパターンを示す。ＭＲＸ００６で慢性処置したマウスは、ファミリアー対象と対比して新規対象を探索する嗜好の有意な増加を示す（ｐ＜０．０５）（図５）。
栄養補給のための毎日の取り扱いは、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおける認識記憶に影響しなかった（図５）。実際、両方の群が、（統計的有意性には達しなかったが）ファミリアー対象と対比して新規対象を探索する嗜好のパターンを示す。ＭＲＸ００６で慢性処置したマウスは、ファミリアー対象と対比して新規対象を探索する嗜好の有意な増加を示す（ｐ＜０．０５）（図５）。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ファミリアー対象と対比して新規対象を調査するのに有為により多くの時間を費やすＣ５７Ｂｌ／６マウスを結果として生じさせ、認識記憶の向上を示唆した。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ファミリアー対象と対比して新規対象を調査するのに有為により多くの時間を費やすＣ５７Ｂｌ／６マウスを結果として生じさせ、認識記憶の向上を示唆した。
実施例１ｇ−不安様行動を評価する−大理石埋め込み試験
論拠
大理石埋め込み試験は、新奇性恐怖、不安及び強迫的行動の有用なモデルである。これは、新規の抗うつ薬、抗不安薬及び抗精神病薬を試験するのにも使用する。薬理学的剤、例えば、抗不安薬によって前処置したマウスは、対照マウスと比較して減少した大理石埋め込み行動を示す。
論拠
大理石埋め込み試験は、新奇性恐怖、不安及び強迫的行動の有用なモデルである。これは、新規の抗うつ薬、抗不安薬及び抗精神病薬を試験するのにも使用する。薬理学的剤、例えば、抗不安薬によって前処置したマウスは、対照マウスと比較して減少した大理石埋め込み行動を示す。
方法
マウスを、標準の齧歯動物用（硬材）寝具（５ｃｍ）及びその頂部に２０個の大理石（壁から２ｃｍ離れかつ２ｃｍ離れて規則的間隔にある５列の大理石）を含む新規のポリプロピレンケージ（３５×２８×１８．５ｃｍ、Ｌ×Ｗ×Ｈ）内に個々に置いた。実験を１０００ｌｕｘの光強度下で行った。３０分後、マウスをこれらのケージから除去し、表面の２／３を超えて埋め込まれた大理石の数をスコアリングした。
マウスを、標準の齧歯動物用（硬材）寝具（５ｃｍ）及びその頂部に２０個の大理石（壁から２ｃｍ離れかつ２ｃｍ離れて規則的間隔にある５列の大理石）を含む新規のポリプロピレンケージ（３５×２８×１８．５ｃｍ、Ｌ×Ｗ×Ｈ）内に個々に置いた。実験を１０００ｌｕｘの光強度下で行った。３０分後、マウスをこれらのケージから除去し、表面の２／３を超えて埋め込まれた大理石の数をスコアリングした。
結果
スチューデントｔ検定（ビヒクル対ナイーブ；ｔ（２０）＝０．１３０８；ｐ＝０．８９７３）及び一元ＡＮＯＶＡ分析（Ｆ（２．３８）＝０．９９２；ｐ＝０．３８４）は、ＭＲＸ００６による慢性処置も毎日の栄養補給も埋め込まれた大理石の数を変化させなかったことを明らかにし、不安様のベースラインの変化がないことを示唆した（図６）。
スチューデントｔ検定（ビヒクル対ナイーブ；ｔ（２０）＝０．１３０８；ｐ＝０．８９７３）及び一元ＡＮＯＶＡ分析（Ｆ（２．３８）＝０．９９２；ｐ＝０．３８４）は、ＭＲＸ００６による慢性処置も毎日の栄養補給も埋め込まれた大理石の数を変化させなかったことを明らかにし、不安様のベースラインの変化がないことを示唆した（図６）。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、大理石埋め込み試験におけるＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける不安様行動を観察可能に変化させなかった。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、大理石埋め込み試験におけるＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける不安様行動を観察可能に変化させなかった。
実施例１ｈ−不安様行動を評価する−高架式十字迷路試験
論拠
高架式十字迷路（ＥＰＭ）は、齧歯動物における不安様行動を評価するための広く使用されている試験である。ＥＰＭは、一般の不安行動を評価しており、迷路の開放アームにおいてより多くの時間を費やしている不安マウスは少ない。開放アーム活動（持続期間）の増加は、抗不安行動を反映している。
論拠
高架式十字迷路（ＥＰＭ）は、齧歯動物における不安様行動を評価するための広く使用されている試験である。ＥＰＭは、一般の不安行動を評価しており、迷路の開放アームにおいてより多くの時間を費やしている不安マウスは少ない。開放アーム活動（持続期間）の増加は、抗不安行動を反映している。
方法
セットアップは、２つの開放（嫌悪）アーム及び２つの閉鎖（安全）アームを含み、床から１メートル高い灰色のプラスチック十字迷路からなった（５０×５×１５ｃｍ壁）。実験は赤色光下で行った（７ｌｕｘ）。マウスを、開放アームを向いた迷路の中心に置き（閉鎖アーム内への直接侵入を回避するため）、６分の持続時間にわたって活動領域を探索させた。いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。装置を各対象後に７０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）エタノールできれいにし、前のマウスからの嗅覚手掛かりを予防した。開放／閉鎖アームにおいて過ごした時間、中心において過ごした時間、及び移行の回数を手動で分析した。費やした時間の百分率及び各アームでの侵入回数を不安様行動及び自発運動について丁重に測定した。アームへの侵入をアーム内での全四足動物として定義した。開放アーム活動（持続期間）の増加は、抗不安行動を反映している。
セットアップは、２つの開放（嫌悪）アーム及び２つの閉鎖（安全）アームを含み、床から１メートル高い灰色のプラスチック十字迷路からなった（５０×５×１５ｃｍ壁）。実験は赤色光下で行った（７ｌｕｘ）。マウスを、開放アームを向いた迷路の中心に置き（閉鎖アーム内への直接侵入を回避するため）、６分の持続時間にわたって活動領域を探索させた。いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。装置を各対象後に７０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）エタノールできれいにし、前のマウスからの嗅覚手掛かりを予防した。開放／閉鎖アームにおいて過ごした時間、中心において過ごした時間、及び移行の回数を手動で分析した。費やした時間の百分率及び各アームでの侵入回数を不安様行動及び自発運動について丁重に測定した。アームへの侵入をアーム内での全四足動物として定義した。開放アーム活動（持続期間）の増加は、抗不安行動を反映している。
結果
スチューデントｔ検定分析は、毎日の栄養補給が開放アームにおいて費やした時間に影響しなかったことを明らかにした（図７）。一元ＡＮＯＶＡ分析は、ＭＲＸ００６による慢性処置が、対照群と比較したとき高架式十字迷路における行動を変化させなかったことを明らかにした（図７）。具体的には、ＭＲＸ００６による慢性処置は、開放アーム及び閉鎖アームにおいて費やした時間を変化させなかった。
スチューデントｔ検定分析は、毎日の栄養補給が開放アームにおいて費やした時間に影響しなかったことを明らかにした（図７）。一元ＡＮＯＶＡ分析は、ＭＲＸ００６による慢性処置が、対照群と比較したとき高架式十字迷路における行動を変化させなかったことを明らかにした（図７）。具体的には、ＭＲＸ００６による慢性処置は、開放アーム及び閉鎖アームにおいて費やした時間を変化させなかった。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、高架式十字迷路におけるＣ５７Ｂｌ／６マウスの行動を観察可能に変化させなかった。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、高架式十字迷路におけるＣ５７Ｂｌ／６マウスの行動を観察可能に変化させなかった。
実施例１ｉ−ストレス−誘発の異常高熱（ＳＩＨ）試験において不安レベルを評価する
論拠
ＳＩＨパラダイムは、不安のよく特徴付けられた指数である。この試験において、ストレスを直腸温の測定によって簡単に誘発する。
論拠
ＳＩＨパラダイムは、不安のよく特徴付けられた指数である。この試験において、ストレスを直腸温の測定によって簡単に誘発する。
方法
簡潔には、動物を試験の前に１日単独で部屋に入れた。潤沢した感温プローブを使用して直腸温を１５分間隔で２回測定した。１回目の温度測定の際に経験したストレスに起因して、２回目の測定の温度（Ｔ２）は、１回目のもの（Ｔ１）よりも高い。この温度差（△Ｔ＝Ｔ２−Ｔ１）をＳＩＨ反応と定義する。ＳＩＨ反応は種々のクラスの抗不安薬によって低減する。
簡潔には、動物を試験の前に１日単独で部屋に入れた。潤沢した感温プローブを使用して直腸温を１５分間隔で２回測定した。１回目の温度測定の際に経験したストレスに起因して、２回目の測定の温度（Ｔ２）は、１回目のもの（Ｔ１）よりも高い。この温度差（△Ｔ＝Ｔ２−Ｔ１）をＳＩＨ反応と定義する。ＳＩＨ反応は種々のクラスの抗不安薬によって低減する。
結果
栄養補給のための毎日の取り扱いは△Ｔを増加させ、不安様行動を示唆した（スチューデントｔ検定、ｔ（１９）＝２．１２１，ｐ＝０．０４７）。ＭＲＸ００６による慢性処置は、ビヒクル群と比較したとき△Ｔの変化を誘発しなかった（一元ＡＮＯＶＡ、Ｆ（２．２９）＝１．２１５；ｐ＝０．３１２）（図８）。
栄養補給のための毎日の取り扱いは△Ｔを増加させ、不安様行動を示唆した（スチューデントｔ検定、ｔ（１９）＝２．１２１，ｐ＝０．０４７）。ＭＲＸ００６による慢性処置は、ビヒクル群と比較したとき△Ｔの変化を誘発しなかった（一元ＡＮＯＶＡ、Ｆ（２．２９）＝１．２１５；ｐ＝０．３１２）（図８）。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおけるストレス−誘発の異常高熱試験においてストレス誘発の温度変化を観察可能に変化させなかった。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおけるストレス−誘発の異常高熱試験においてストレス誘発の温度変化を観察可能に変化させなかった。
実施例１ｊ−生理分析−血漿オキシトシンレベル
方法及び結果
オキシトシンレベルを、ナイーブ、ビヒクル及びＭＲＸ００６処置マウスにおいて測定した（図９）。オキシトシンペプチドは、雄及び雌の中枢神経系において作用して、親和、性的行動、社会認識、攻撃及び信頼を含めた種々の複雑な社会的行動に重要である。放射免疫測定（ＲＩＡ）は、血液中の非常に少量のペプチド及び代謝産物を測定するための高感度法である。サンプルをＲＩＡ用に調製し、ＲＩＡ技術（ＲＩＡｇｎｏｓｉｓ，Ｓｉｎｚｉｎｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を通してのオキシトシン測定のために発送した。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＭＲＸ００６による慢性処置は、オキシトシンレベルの低減を示した（ｐ＜０．０５）。
方法及び結果
オキシトシンレベルを、ナイーブ、ビヒクル及びＭＲＸ００６処置マウスにおいて測定した（図９）。オキシトシンペプチドは、雄及び雌の中枢神経系において作用して、親和、性的行動、社会認識、攻撃及び信頼を含めた種々の複雑な社会的行動に重要である。放射免疫測定（ＲＩＡ）は、血液中の非常に少量のペプチド及び代謝産物を測定するための高感度法である。サンプルをＲＩＡ用に調製し、ＲＩＡ技術（ＲＩＡｇｎｏｓｉｓ，Ｓｉｎｚｉｎｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を通してのオキシトシン測定のために発送した。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＭＲＸ００６による慢性処置は、オキシトシンレベルの低減を示した（ｐ＜０．０５）。
実施例１ｋ−生理分析−ストレス−誘発のコルチコステロン血漿中濃度
方法及び結果
コルチコステロンは、ストレスに応答して放出される主な齧歯動物ホルモンである。この研究において、コルチコステロンレベルの変化を、ナイーブ、ビヒクル及びＭＲＸ００６処置マウスにおいて、ベースライン及び続いての強制水泳試験（急性ストレス暴露）で測定した（図１０）。コルチコステロン測定を異なる時点において、すなわち、Ｔ０（強制水泳試験前）、ならびに強制水泳試験への暴露後３０分（Ｔ３０）、９０分（Ｔ９０）及び１２０分（Ｔ１２０）において実施した。データは、Ｔ３０においてナイーブ群と比較してビヒクル群においてストレス−誘発のコルチコステロンレベルの有意な増加を示した（ｐ＜０．０５）。興味深いことに、ストレス−誘発のコルチコステロンレベルの有意な増加は、対照群と比較したときＭＲＸ００６処置マウスにおいてＴ３０で観察された。有意な変化は他の時点では観察されなかった。これらの結果は、ビヒクル群及びＭＲＸ００６処置群の両方においてストレスへの感度の増加を示唆し得る。
方法及び結果
コルチコステロンは、ストレスに応答して放出される主な齧歯動物ホルモンである。この研究において、コルチコステロンレベルの変化を、ナイーブ、ビヒクル及びＭＲＸ００６処置マウスにおいて、ベースライン及び続いての強制水泳試験（急性ストレス暴露）で測定した（図１０）。コルチコステロン測定を異なる時点において、すなわち、Ｔ０（強制水泳試験前）、ならびに強制水泳試験への暴露後３０分（Ｔ３０）、９０分（Ｔ９０）及び１２０分（Ｔ１２０）において実施した。データは、Ｔ３０においてナイーブ群と比較してビヒクル群においてストレス−誘発のコルチコステロンレベルの有意な増加を示した（ｐ＜０．０５）。興味深いことに、ストレス−誘発のコルチコステロンレベルの有意な増加は、対照群と比較したときＭＲＸ００６処置マウスにおいてＴ３０で観察された。有意な変化は他の時点では観察されなかった。これらの結果は、ビヒクル群及びＭＲＸ００６処置群の両方においてストレスへの感度の増加を示唆し得る。
実施例１ｌ−生理分析−ｉｎ ｖｉｖｏ胃腸透過性アッセイ
論拠
この手順を使用してｉｎ ｖｉｖｏ腸運動を評価する。腸透過性を、フルオレセイン誘導体の経口投与後の血液中のフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）の定量化を通して異なる慢性処置間で定量化した。これは、経口投与したフルオレセイン誘導体の、腸を通しての末梢系への漏出の原理に基づいて、腸透過性を定量化する確立された方法である。
論拠
この手順を使用してｉｎ ｖｉｖｏ腸運動を評価する。腸透過性を、フルオレセイン誘導体の経口投与後の血液中のフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）の定量化を通して異なる慢性処置間で定量化した。これは、経口投与したフルオレセイン誘導体の、腸を通しての末梢系への漏出の原理に基づいて、腸透過性を定量化する確立された方法である。
方法
試験マウスを単独で部屋に入れ、一晩絶食させた。翌朝（およそ９ａｍ）、マウスにＦＩＴＣデキストラン（（６００ｍｇ／ｋｇ）を経口胃管栄養法によって投与した。２時間後、１００μｌの血液サンプルをヘパリンコーティングした毛細管において収集し、暗いエッペンドルフに移し、氷上に置いた。サンプルを３５００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿を吸引し、サンプルを−８０℃において長期保存で保存した。
試験マウスを単独で部屋に入れ、一晩絶食させた。翌朝（およそ９ａｍ）、マウスにＦＩＴＣデキストラン（（６００ｍｇ／ｋｇ）を経口胃管栄養法によって投与した。２時間後、１００μｌの血液サンプルをヘパリンコーティングした毛細管において収集し、暗いエッペンドルフに移し、氷上に置いた。サンプルを３５００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿を吸引し、サンプルを−８０℃において長期保存で保存した。
希釈されていない血漿を使用してＦＩＴＣ濃度を定量化した。２５μｌのＦＩＴＣを３８４ウェルプレートにおいて２部ピペッティングした（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ ｏｎｅ）。ＦＩＴＣを４９０ｎｍ〜５２０ｎｍの範囲の間でＶｉｃｔｏｒ分光計によって測定した。標準曲線では、段階希釈のＦＩＴＣをＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で調製した。吸光度の増加は、障壁の完全性の減少を示す。
結果
データは、毎日の栄養補給による腸透過性の増加の傾向を示した（ｐ＝０．０５１）が、有意性には達しなかった（図１１）。ＭＲＸ００６群間の全体としての腸透過性は変化しないままであった。
データは、毎日の栄養補給による腸透過性の増加の傾向を示した（ｐ＝０．０５１）が、有意性には達しなかった（図１１）。ＭＲＸ００６群間の全体としての腸透過性は変化しないままであった。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、腸透過性に対する観察可能な効果を示さなかった。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、腸透過性に対する観察可能な効果を示さなかった。
実施例１ｍ−生理分析−器官重量及び結腸長
栄養補給のための毎日の取り扱い及びＭＲＸ００６による慢性処置は、盲腸重量、脾臓重量、及び副腎重量の変化を誘発しなかった（図１２）。
栄養補給のための毎日の取り扱い及びＭＲＸ００６による慢性処置は、盲腸重量、脾臓重量、及び副腎重量の変化を誘発しなかった（図１２）。
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスモデルからの結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、抗うつ病様活動をスクリーニングするための広く使用されている試験である強制水泳試験での抗うつ病様効果を誘発した。また、ＭＲＸ００６による慢性処置は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおける社会的行動を向上させ、これは３チャンバー試験においてにファミリアーマウス対して新規マウスと相互作用するのにより多くの時間を費やし、ＭＲＸ００６が自閉症スペクトラム障害の中核症状である社会的障害を反転させたことを示した。さらに、ＭＲＸ００６による慢性処置は、恐怖条件付け試験における凍結レベルを低減する傾向があり、この株の投与が、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、記憶の認知機能を改善しかつ不安を低減することを示した。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、抗うつ病様活動をスクリーニングするための広く使用されている試験である強制水泳試験での抗うつ病様効果を誘発した。また、ＭＲＸ００６による慢性処置は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおける社会的行動を向上させ、これは３チャンバー試験においてにファミリアーマウス対して新規マウスと相互作用するのにより多くの時間を費やし、ＭＲＸ００６が自閉症スペクトラム障害の中核症状である社会的障害を反転させたことを示した。さらに、ＭＲＸ００６による慢性処置は、恐怖条件付け試験における凍結レベルを低減する傾向があり、この株の投与が、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて、記憶の認知機能を改善しかつ不安を低減することを示した。
オキシトシンレベル及びコルチコステロンレベルにおいて急性または亜慢性的に投与されるときのＭＲＸ００６の効果を特徴付けるためにはさらなる研究が必要とされる。証拠は、ＭＲＸ００６が視床下部下垂体軸（ＨＰＡ）のシグナル伝達を調節することを示している。
そのため、ＭＲＸ００６の投与は、抗うつ効果を引き起こし、社会的新規性及び認知向上効果を向上させる。
実施例２−ＢＴＢＲマウスモデル
ＢＴＢＲマウスモデルは、頑強な自閉症様表現型を示す近交系遺伝子組み換えマウスを使用する。社会的行動の欠如、反復行動の増加、及び不安に関係する行動の増加がこの株において報告されている（Ｍｅｙｚａ ａｎｄ Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，２０１７）。この頑強な行動的表現型に起因して、ＢＴＢＲマウスは、自閉症関係行動の処置のための新規の治療剤の効能を評価するのに理想的な動物モデルである。生存生物学的製剤によるかかる症状の軽減もまた、他の精神疾患または神経疾患の処置における生物学的製剤の効能を示し得る。
ＢＴＢＲマウスモデルは、頑強な自閉症様表現型を示す近交系遺伝子組み換えマウスを使用する。社会的行動の欠如、反復行動の増加、及び不安に関係する行動の増加がこの株において報告されている（Ｍｅｙｚａ ａｎｄ Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，２０１７）。この頑強な行動的表現型に起因して、ＢＴＢＲマウスは、自閉症関係行動の処置のための新規の治療剤の効能を評価するのに理想的な動物モデルである。生存生物学的製剤によるかかる症状の軽減もまた、他の精神疾患または神経疾患の処置における生物学的製剤の効能を示し得る。
実施例２ａ−ＢＴＢＲマウスモデルにおける材料及び方法
マウス
雄性ＢＴＢＲマウスを室内で飼育した。該動物を、１２時間暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で温度及び湿度が制御された部屋に入れた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。
マウス
雄性ＢＴＢＲマウスを室内で飼育した。該動物を、１２時間暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で温度及び湿度が制御された部屋に入れた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。
株
ＭＲＸ００６：受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ細菌。
生物学的製剤をグリセロールストックに付与した。生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
ＭＲＸ００６：受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ細菌。
生物学的製剤をグリセロールストックに付与した。生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
生存生物学的製剤投与
マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクルによる投薬。これらのマウスを、行動バッテリーの開始の前に、ＭＲＸ００６またはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）によって３週間、毎日１回処置した。マウスを、行動バッテリーの間、毎日１回さらに処置した。ＭＲＸ００６（１×１０７〜１×１０９ＣＦＵ経口投与）を投与の前にＰＢＳに溶解した。
マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクルによる投薬。これらのマウスを、行動バッテリーの開始の前に、ＭＲＸ００６またはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）によって３週間、毎日１回処置した。マウスを、行動バッテリーの間、毎日１回さらに処置した。ＭＲＸ００６（１×１０７〜１×１０９ＣＦＵ経口投与）を投与の前にＰＢＳに溶解した。
投与スケジュール
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
糞便収集
新たな糞便サンプルを研究の終了まで毎週個々のマウスから収集した。少なくとも２０ｍｇの新たな糞便を微量遠心分離管に置き、直後に氷上に置き、次いで−８０℃で保存した。
新たな糞便サンプルを研究の終了まで毎週個々のマウスから収集した。少なくとも２０ｍｇの新たな糞便を微量遠心分離管に置き、直後に氷上に置き、次いで−８０℃で保存した。
実験設計及び方法
上記で概説している、マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６による投薬。最初の投薬は、行動実験の前に３週間行った。行動バッテリーを以下の順序で行った：４週目に大理石埋め込み試験；５週目に高架式十字迷路；６週目にオープンフィールド及び新規対象認識試験、ならびに食べ物の嗜好の社会的伝達試験；７週目で雌の尿への嗅覚行為及び社会的相互作用試験、ならびに９週目で強制水泳試験。カーマインレッドの胃腸運動アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、８週目及び９週目の間に尾部出血が起こった。最後に、１０〜１１週目で、マウスを殺処分して脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ ｖｉｖｏ測定をした。
上記で概説している、マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６による投薬。最初の投薬は、行動実験の前に３週間行った。行動バッテリーを以下の順序で行った：４週目に大理石埋め込み試験；５週目に高架式十字迷路；６週目にオープンフィールド及び新規対象認識試験、ならびに食べ物の嗜好の社会的伝達試験；７週目で雌の尿への嗅覚行為及び社会的相互作用試験、ならびに９週目で強制水泳試験。カーマインレッドの胃腸運動アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、８週目及び９週目の間に尾部出血が起こった。最後に、１０〜１１週目で、マウスを殺処分して脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ ｖｉｖｏ測定をした。
ＢＴＢＲモデルにおける生存生物学的製剤処置の、常同、社会的及びうつ病様行動への影響を、胃腸パラメータ（透過性及び運動性）と併せて、以下の実施例において概説する。
上記の表において列挙されている群１は、自閉症スペクトラム障害に関連する表現型を示すことが予期される対照ＢＴＢＲマウスを表している。自閉症スペクトラム障害の行動上の症状への処置の任意の効果が、群１及び群２の間の差によって確認され得た。
グラフ設計及び統計的分析
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００６群を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００６群を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
実施例２ｂ−社会的行動のアセスメント−３チャンバー社会的相互作用試験
論拠
３チャンバー社会的相互作用試験（３−ＣＳＩＴ）は、性別一致の同種間での社会的相互作用を評価し、マウスにおける社会的新規性及び社会的嗜好の読み出しを可能にするかなり有効な動物行動学的に関連するモデルである。試験は、マウスに、無生物対象または性別一致の同種マウス間で自由に探索させる。
論拠
３チャンバー社会的相互作用試験（３−ＣＳＩＴ）は、性別一致の同種間での社会的相互作用を評価し、マウスにおける社会的新規性及び社会的嗜好の読み出しを可能にするかなり有効な動物行動学的に関連するモデルである。試験は、マウスに、無生物対象または性別一致の同種マウス間で自由に探索させる。
方法
動物を、全ての区画に容易にアクセスすることを可能にする小さい円形の開口部を有する隔壁によって３つのチャンバー（左及び右ならびにより小さい中央チャンバー）に分割した矩形装置に入れる。試験は、３つの逐次的な１０分間の試行から構成される：（１）馴化（試験動物に３つの空チャンバーを探索させる）；（２）社交性（アンファミリアー動物を左または右のいずれかのチャンバーにおける内部のメッシュワイヤケージに入れる）；（３）社会的新規性の嗜好（新規動物を、ここでのファミリアー動物とは反対側の、チャンバー内の事前に空にした内部ケージ内に入れる）。ナイーブ動物は、馴化期においていずれのチャンバーにも嗜好を有さず、社交性の期にはマウスへの嗜好、社会的新規性の期には新規マウスへの嗜好を有するはずである。識別比の増加は、社会的行動の増加を示唆している。全ての動物は週齢及び性別一致であり、それぞれのチャンバーは、それぞれ３０分間の試行後にきれいにして新たな寝具で覆った。３段階のそれぞれについて、行動を装置の上に取り付けたビデオカメラによって記録する。
動物を、全ての区画に容易にアクセスすることを可能にする小さい円形の開口部を有する隔壁によって３つのチャンバー（左及び右ならびにより小さい中央チャンバー）に分割した矩形装置に入れる。試験は、３つの逐次的な１０分間の試行から構成される：（１）馴化（試験動物に３つの空チャンバーを探索させる）；（２）社交性（アンファミリアー動物を左または右のいずれかのチャンバーにおける内部のメッシュワイヤケージに入れる）；（３）社会的新規性の嗜好（新規動物を、ここでのファミリアー動物とは反対側の、チャンバー内の事前に空にした内部ケージ内に入れる）。ナイーブ動物は、馴化期においていずれのチャンバーにも嗜好を有さず、社交性の期にはマウスへの嗜好、社会的新規性の期には新規マウスへの嗜好を有するはずである。識別比の増加は、社会的行動の増加を示唆している。全ての動物は週齢及び性別一致であり、それぞれのチャンバーは、それぞれ３０分間の試行後にきれいにして新たな寝具で覆った。３段階のそれぞれについて、行動を装置の上に取り付けたビデオカメラによって記録する。
結果
社交性を評価するために、群内でのスチューデントｔ検定により、ＭＲＸ００６群について対象と比較して新規の同種（ＣＳ）マウスへの嗜好の増加を明らかにした［ｔ（２２）＝５．２８１；Ｐ＜０．０００１］（図１３Ａ）。社会的新規性を評価するために、群内でのスチューデントｔ検定により、ビヒクル群のみで新規の同種への嗜好の増加を明らかにした［ｔ（２２）＝３．４５２；Ｐ＜０．００１］。新規の同種との相互作用時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４７）＝２．４９２；Ｐ＝０．４３；図１３Ｂ］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６による処置（ｔ（２２）＝０．７４９７；Ｐ＝０．４６１４）が、ビヒクル群と比較したとき新規の同種との相互作用時間を減少させたことを明らかにした。新規の同種を調査するのに費やした時間の百分率のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにした［Ｆ（３，４７）＝２．９４２；Ｐ＝０．０４３３；図１３Ｃ］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ＭＲＸ００６による処置が、新規の同種を調査するのに費やした時間の百分率を減少させたことを明らかにした（ｐ＜０．０５）。
社交性を評価するために、群内でのスチューデントｔ検定により、ＭＲＸ００６群について対象と比較して新規の同種（ＣＳ）マウスへの嗜好の増加を明らかにした［ｔ（２２）＝５．２８１；Ｐ＜０．０００１］（図１３Ａ）。社会的新規性を評価するために、群内でのスチューデントｔ検定により、ビヒクル群のみで新規の同種への嗜好の増加を明らかにした［ｔ（２２）＝３．４５２；Ｐ＜０．００１］。新規の同種との相互作用時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４７）＝２．４９２；Ｐ＝０．４３；図１３Ｂ］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６による処置（ｔ（２２）＝０．７４９７；Ｐ＝０．４６１４）が、ビヒクル群と比較したとき新規の同種との相互作用時間を減少させたことを明らかにした。新規の同種を調査するのに費やした時間の百分率のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにした［Ｆ（３，４７）＝２．９４２；Ｐ＝０．０４３３；図１３Ｃ］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ＭＲＸ００６による処置が、新規の同種を調査するのに費やした時間の百分率を減少させたことを明らかにした（ｐ＜０．０５）。
二元ＡＮＯＶＡ分析［対象／同種（ＣＳ）：［Ｆ（１，４７）＝２１．１６４；Ｐ＜０．０００１；処置：Ｆ（１，４７）＝０．５６；Ｐ＝０．８１５；対象／ＣＳ×処置：Ｆ（１，４７）＝５．４１４；Ｐ＝０．０２５］、続くｐｏｓｔ ｈｏｃ分析は、ＭＲＸ００６処置マウスが、対象と対比して同種を調査するのにより多くの時間を費やしたことを明らかにした（ｐ＜０．０１；図１３Ｄ）。二元ＡＮＯＶＡ分析［ファミリアー対新規：Ｆ（１，４７）＝３．４５４；Ｐ＝０．０７０；処置：Ｆ（１，４７）＝０．３６０；Ｐ＝０．５５２；Ｆ／Ｎ×処置：Ｆ（１，４７）＝８．６２７；Ｐ＝０．００５］、続くｐｏｓｔ ｈｏｃ比較は、ＭＲＸ００６で処置したマウスが、ファミリアーマウスと対比して新規マウスを調査するのに有意により少ない時間を費やしたことを明らかにした（ｐ＜０．０５；図１３Ｅ）。対照的に、ビヒクルマウスは、ファミリアーの同種に対比して新規を調査するのにより多くの時間を費やした（ｐ＜０．０５；図１３Ｅ）。百分率分析は、ＭＲＸ００６処置マウスが、ビヒクル群と比較したときに新規の同種との相互作用により少ない時間を費やしたことを明らかにした（ｔ＝２．４８０ ｄｆ＝２２；Ｐ＝０．０２１３；図１３Ｆ）。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、３チャンバー試験において、社会的新規性を低減しＢＴＢＲマウスの社会的認知を減少させる。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、３チャンバー試験において、社会的新規性を低減しＢＴＢＲマウスの社会的認知を減少させる。
実施例２ｃ−社会的行動のアセスメント−強制的な侵入者試験
論拠
この手順は、齧歯動物間の社会的相互作用行動を評価する。侵入者マウスを居住者マウスのホームケージ内に置くことにより、社会的相互作用及び攻撃的行動を評価することができる。
論拠
この手順は、齧歯動物間の社会的相互作用行動を評価する。侵入者マウスを居住者マウスのホームケージ内に置くことにより、社会的相互作用及び攻撃的行動を評価することができる。
方法
各セッションは、侵入者マウスを居住者マウスのホームケージ内に１０分間の期間にわたって置くことからなった。いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。動物が相互作用に費やした時間量を記録した。
各セッションは、侵入者マウスを居住者マウスのホームケージ内に１０分間の期間にわたって置くことからなった。いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。動物が相互作用に費やした時間量を記録した。
結果
相互作用時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４５）＝２．３２７；Ｐ＝０．０８８；図１４］。同様に，推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６による処置（ｔ＝１．４２５ ｄｆ＝２２；Ｐ＝０．１６８２）が、ビヒクル群と比較したとき社会的相互作用行動に影響しなかったことを明らかにした。
相互作用時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４５）＝２．３２７；Ｐ＝０．０８８；図１４］。同様に，推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６による処置（ｔ＝１．４２５ ｄｆ＝２２；Ｐ＝０．１６８２）が、ビヒクル群と比較したとき社会的相互作用行動に影響しなかったことを明らかにした。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、社会的相互作用試験においてＢＴＢＲマウスの社会的行動に影響しなかった。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、社会的相互作用試験においてＢＴＢＲマウスの社会的行動に影響しなかった。
実施例２ｄ−常同行動のアセスメント−大理石埋め込み試験
論拠
この試験は、反復、強迫及び不安行動について評価する。埋め込まれた大理石の数が多いほど、不安または常同行動が大きいことを示す。実際、薬理学的剤、例えば、抗不安薬によって処置したマウスは、対照マウスと比較して減少した大理石埋め込み行動を示す。
論拠
この試験は、反復、強迫及び不安行動について評価する。埋め込まれた大理石の数が多いほど、不安または常同行動が大きいことを示す。実際、薬理学的剤、例えば、抗不安薬によって処置したマウスは、対照マウスと比較して減少した大理石埋め込み行動を示す。
方法
マウスを、標準の齧歯動物用（硬材）寝具（５ｃｍ）及びその頂部に２０個の大理石（壁から２ｃｍ離れかつ２ｃｍ離れて規則的間隔にある５列の大理石）を含む新規のポリプロピレンケージ（３５×２８×１８．５ｃｍ、Ｌ×Ｗ×Ｈ）内に個々に置いた。実験を１０００ｌｕｘの光強度下で行った。３０分後、マウスをこれらのケージから除去し、表面の２／３を超えて埋め込まれた大理石の数をスコアリングした。
マウスを、標準の齧歯動物用（硬材）寝具（５ｃｍ）及びその頂部に２０個の大理石（壁から２ｃｍ離れかつ２ｃｍ離れて規則的間隔にある５列の大理石）を含む新規のポリプロピレンケージ（３５×２８×１８．５ｃｍ、Ｌ×Ｗ×Ｈ）内に個々に置いた。実験を１０００ｌｕｘの光強度下で行った。３０分後、マウスをこれらのケージから除去し、表面の２／３を超えて埋め込まれた大理石の数をスコアリングした。
結果
埋め込まれた大理石の数に対してのＡＮＯＶＡによって決定される処置の効果はなかった［Ｆ（３，４５）＝１．６４；Ｐ＝０．１９３］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６（ｔ＝２．２７６ ｄｆ＝２１、ｐ＜０．０５）が、埋め込まれた大理石の数を減少させたことを明らかにした（図１５）。
埋め込まれた大理石の数に対してのＡＮＯＶＡによって決定される処置の効果はなかった［Ｆ（３，４５）＝１．６４；Ｐ＝０．１９３］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６（ｔ＝２．２７６ ｄｆ＝２１、ｐ＜０．０５）が、埋め込まれた大理石の数を減少させたことを明らかにした（図１５）。
結論
ＭＲＸ００６による処置は、大理石埋め込み試験においてＢＴＢＲマウスにおける反復行動を低減する。
ＭＲＸ００６による処置は、大理石埋め込み試験においてＢＴＢＲマウスにおける反復行動を低減する。
実施例２ｅ−常同行動のアセスメント−グルーミング試験
論拠
この試験を常同及び反復行動の指標として使用する。グルーミングに費やされた時間の増加は、増加した常同または反復行動を示す。
論拠
この試験を常同及び反復行動の指標として使用する。グルーミングに費やされた時間の増加は、増加した常同または反復行動を示す。
方法
マウスをプレキシグラストップで覆った新しいガラスビーカー（５００ｍＬ）に内に個々に置いた。実験は、６０ｌｕｘの光強度下で行った。実験を、三脚に取り付けた小型カメラを使用してテープに録画した。グルーミング行動を２０分間記録した。
マウスをプレキシグラストップで覆った新しいガラスビーカー（５００ｍＬ）に内に個々に置いた。実験は、６０ｌｕｘの光強度下で行った。実験を、三脚に取り付けた小型カメラを使用してテープに録画した。グルーミング行動を２０分間記録した。
結果
グルーミング活動に対する、ＡＮＯＶＡによって決定される生存生物学的製剤の有意な効果があった［Ｆ（３，４７）＝４．１７４；Ｐ＝０．０１１］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ＭＲＸ００６による処置が、ビヒクル群に対してグルーミングに費やされた時間の量を有意に低減したことを明らかにした（ｐ＜０．０５）（図１６）。同様に，推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６（ｔ＝２．８９５ ｄｆ＝２２、ｐ＜０．０１）が、ビヒクル群と比較してグルーミングに費やされた時間を減少させたことを明らかにした。
グルーミング活動に対する、ＡＮＯＶＡによって決定される生存生物学的製剤の有意な効果があった［Ｆ（３，４７）＝４．１７４；Ｐ＝０．０１１］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ＭＲＸ００６による処置が、ビヒクル群に対してグルーミングに費やされた時間の量を有意に低減したことを明らかにした（ｐ＜０．０５）（図１６）。同様に，推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６（ｔ＝２．８９５ ｄｆ＝２２、ｐ＜０．０１）が、ビヒクル群と比較してグルーミングに費やされた時間を減少させたことを明らかにした。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、グルーミング試験でのＢＴＢＲマウスにおける反復行動を低減する。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、グルーミング試験でのＢＴＢＲマウスにおける反復行動を低減する。
実施例２ｆ−不安様行動のアセスメント−高架式十字迷路
論拠
高架式十字迷路（ＥＰＭ）は、齧歯動物における不安様行動を評価するための広く使用されている試験である。ＥＰＭは、一般の不安行動を評価しており、迷路の開放アームにおいてより多くの時間を費やしている不安マウスは少ない。開放アーム活動（持続期間）の増加は、抗不安行動を反映している。
論拠
高架式十字迷路（ＥＰＭ）は、齧歯動物における不安様行動を評価するための広く使用されている試験である。ＥＰＭは、一般の不安行動を評価しており、迷路の開放アームにおいてより多くの時間を費やしている不安マウスは少ない。開放アーム活動（持続期間）の増加は、抗不安行動を反映している。
方法
セットアップは、２つの開放（嫌悪）アーム及び２つの閉鎖（安全）アームを含み、床から１メートル高い灰色のプラスチック十字迷路からなった（５０×５×１５ｃｍ壁）。実験は赤色光下で行った（７ｌｕｘ）。マウスを、開放アームを向いた迷路の中心に置き（閉鎖アーム内への直接侵入を回避するため）、５分の持続時間にわたって活動領域を探索させた。いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。費やした時間の百分率及び各アームでの侵入回数を不安様行動及び自発運動について丁重に測定した。アームへの侵入をアーム内での全四足動物として定義した。
セットアップは、２つの開放（嫌悪）アーム及び２つの閉鎖（安全）アームを含み、床から１メートル高い灰色のプラスチック十字迷路からなった（５０×５×１５ｃｍ壁）。実験は赤色光下で行った（７ｌｕｘ）。マウスを、開放アームを向いた迷路の中心に置き（閉鎖アーム内への直接侵入を回避するため）、５分の持続時間にわたって活動領域を探索させた。いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。費やした時間の百分率及び各アームでの侵入回数を不安様行動及び自発運動について丁重に測定した。アームへの侵入をアーム内での全四足動物として定義した。
結果
ＡＮＯＶＡ分析は、閉鎖アームにおいて費やした時間の百分率に対する生存生物学的製剤処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３．４７）＝０．８８５；Ｐ＝０．４５７；図１７Ａ）。開放アームにおいて費やした時間の百分率のクラスカルワリス非パラメータ分析は、処置の効果がないことを明らかにした［カイ二乗＝１．２２０；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．７４８；図１７Ｂ］。閉鎖アームへの侵入回数のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４４）＝１．８２；Ｐ＝０．１５９；図１７Ｃ］。開放アームへの侵入回数のクラスカルワリス非パラメータ分析は、処置の効果がないことを明らかにした［カイ二乗＝２．０４５；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．５６３；図１７Ｄ］。
ＡＮＯＶＡ分析は、閉鎖アームにおいて費やした時間の百分率に対する生存生物学的製剤処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３．４７）＝０．８８５；Ｐ＝０．４５７；図１７Ａ）。開放アームにおいて費やした時間の百分率のクラスカルワリス非パラメータ分析は、処置の効果がないことを明らかにした［カイ二乗＝１．２２０；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．７４８；図１７Ｂ］。閉鎖アームへの侵入回数のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４４）＝１．８２；Ｐ＝０．１５９；図１７Ｃ］。開放アームへの侵入回数のクラスカルワリス非パラメータ分析は、処置の効果がないことを明らかにした［カイ二乗＝２．０４５；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．５６３；図１７Ｄ］。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、高架式十字迷路でのＢＴＢＲマウスにおける不安様行動に対して効果を有さない。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、高架式十字迷路でのＢＴＢＲマウスにおける不安様行動に対して効果を有さない。
実施例２ｇ−不安様行動のアセスメント−オープンフィールドアリーナ
論拠
オープンフィールドアリーナを使用して、新規のストレスフルな環境への暴露の応答及び自発運動を評価する。ナイーブマウスは、活動領域の中心よりも少なく暴露されているため、活動領域の壁沿いで大部分の時間を必然的に過ごす。中心において過ごす時間の持続期間の増加は、不安様行動の減少を表す。
論拠
オープンフィールドアリーナを使用して、新規のストレスフルな環境への暴露の応答及び自発運動を評価する。ナイーブマウスは、活動領域の中心よりも少なく暴露されているため、活動領域の壁沿いで大部分の時間を必然的に過ごす。中心において過ごす時間の持続期間の増加は、不安様行動の減少を表す。
方法
マウスを、個々に、オープンフィールドアリーナに置き（４３×３５×２５、Ｌ×ｗ×ｈ）、１０分間探索させた。実験は、６０ｌｕｘの光強度下で行った。Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェアを使用して、いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。移動した距離を自発運動についてスコアリングした。
マウスを、個々に、オープンフィールドアリーナに置き（４３×３５×２５、Ｌ×ｗ×ｈ）、１０分間探索させた。実験は、６０ｌｕｘの光強度下で行った。Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェアを使用して、いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。移動した距離を自発運動についてスコアリングした。
結果
移動した距離のＡＮＯＶＡは、オープンフィールドアリーナにおける自発運動に対する処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４７）＝０．３１７；Ｐ＝０．８１３；図１８Ａ及び図１８Ｄ］。外側ゾーンにおいて費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝２．２１７；Ｐ＝０．１００；図１８Ｂ］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６処置（ｔ＝２．７９１ ｄｆ＝２１；ｐ＜０．０５；図１８Ｅ）がオープンフィールドアリーナの外側ゾーンにおいて費やした時間を減少させたことを明らかにした。内側ゾーンにおいて費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝２．２１７；Ｐ＝０．１００；図１８Ｃ］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６処置（ｔ＝２．７９１ ｄｆ＝２１；ｐ＜０．０５；図１８Ｆ）が、オープンフィールドアリーナの内側ゾーンにおいて費やした時間を増加させたことを明らかにした。
移動した距離のＡＮＯＶＡは、オープンフィールドアリーナにおける自発運動に対する処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４７）＝０．３１７；Ｐ＝０．８１３；図１８Ａ及び図１８Ｄ］。外側ゾーンにおいて費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝２．２１７；Ｐ＝０．１００；図１８Ｂ］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６処置（ｔ＝２．７９１ ｄｆ＝２１；ｐ＜０．０５；図１８Ｅ）がオープンフィールドアリーナの外側ゾーンにおいて費やした時間を減少させたことを明らかにした。内側ゾーンにおいて費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝２．２１７；Ｐ＝０．１００；図１８Ｃ］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６処置（ｔ＝２．７９１ ｄｆ＝２１；ｐ＜０．０５；図１８Ｆ）が、オープンフィールドアリーナの内側ゾーンにおいて費やした時間を増加させたことを明らかにした。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、オープンフィールドアリーナ試験でのＢＴＢＲマウスにおける不安様行動を低減する。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、オープンフィールドアリーナ試験でのＢＴＢＲマウスにおける不安様行動を低減する。
実施例２ｈ−うつ病様行動のアセスメント−強制水泳試験
論拠
強制水泳試験（ＦＳＴ）は、抗うつ活動を評価するために最も広く使用されている実験的パラダイムである。ナイーブ動物は、不動の浮遊姿勢に適応する前に水泳、上昇及び飛び込みの形態で逃避行動を示すであろう。不動の持続時間は、行動の断念を示している。抗うつ薬は、この試験において、不動で費やした時間を減少させる。
論拠
強制水泳試験（ＦＳＴ）は、抗うつ活動を評価するために最も広く使用されている実験的パラダイムである。ナイーブ動物は、不動の浮遊姿勢に適応する前に水泳、上昇及び飛び込みの形態で逃避行動を示すであろう。不動の持続時間は、行動の断念を示している。抗うつ薬は、この試験において、不動で費やした時間を減少させる。
方法
マウスに、１７ｃｍの深さまで２３〜２５℃の水道水で満たしたガラスシリンダ（２４×２１ｃｍ）において６分間強制して水泳させた。ＦＳＴを天井カメラからテープに録画した。スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。
マウスに、１７ｃｍの深さまで２３〜２５℃の水道水で満たしたガラスシリンダ（２４×２１ｃｍ）において６分間強制して水泳させた。ＦＳＴを天井カメラからテープに録画した。スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。
結果
不動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝１．３０９；Ｐ＝０．２８４；図１９］。
不動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝１．３０９；Ｐ＝０．２８４；図１９］。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験でのＢＴＢＲマウスの不動時間に影響しない。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験でのＢＴＢＲマウスの不動時間に影響しない。
実施例２ｉ−うつ病様行動のアセスメント−雌の尿への嗅覚行為試験
論拠
雌の尿への嗅覚行為試験（ＦＵＳＴ）を使用して齧歯動物における無快感症様行動を評価する。嗅覚行為時間の低減が社会的回避／無快感症を示唆する一方で、増加は、社会的行動／快楽的行動の増加を表す。
論拠
雌の尿への嗅覚行為試験（ＦＵＳＴ）を使用して齧歯動物における無快感症様行動を評価する。嗅覚行為時間の低減が社会的回避／無快感症を示唆する一方で、増加は、社会的行動／快楽的行動の増加を表す。
方法
実験マウスを試験の前に１週間、単独で部屋に入れる。試験の際、無菌水に浸漬した綿先端アプリケータをホームケージに置き、マウスを３分間嗅覚行為／調査させる。この３分試験の後、綿先端アプリケータを除去する。４５分後、新しい綿先端アプリケータを（このサイクルの発情期にあるものと同じ株の雌性マウスから収集した）雌の尿に浸漬し、ケージに置く。マウスをさらに３分間これを嗅覚行為／調査させる。水及び尿への嗅覚行為に費やした時間を記録する。
実験マウスを試験の前に１週間、単独で部屋に入れる。試験の際、無菌水に浸漬した綿先端アプリケータをホームケージに置き、マウスを３分間嗅覚行為／調査させる。この３分試験の後、綿先端アプリケータを除去する。４５分後、新しい綿先端アプリケータを（このサイクルの発情期にあるものと同じ株の雌性マウスから収集した）雌の尿に浸漬し、ケージに置く。マウスをさらに３分間これを嗅覚行為／調査させる。水及び尿への嗅覚行為に費やした時間を記録する。
結果
ビヒクル群では、スチューデントｔ検定は、水の嗅覚行為で費やした時間と比較して尿への嗅覚行為に費やした時間の有意な増加を明らかにした［ｔ（ｌ６）＝２．６１１；Ｐ＝０．０１８９；図２０Ａ］。水への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のＡＮＯＶＡは、水の群における処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３５）＝０．８７５；Ｐ＝０．４６４］。尿への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３４）＝２．１５３；Ｐ＝０．１１４］。しかし、推測的な比較は、ＭＲＸ００６による慢性処置（ｔ＝３．６０２ ｄｆ＝１６；Ｐ＝０．００２４）が、ビヒクル群と比較したとき尿への嗅覚行為に費やした時間を増加させたことを明らかにした。
ビヒクル群では、スチューデントｔ検定は、水の嗅覚行為で費やした時間と比較して尿への嗅覚行為に費やした時間の有意な増加を明らかにした［ｔ（ｌ６）＝２．６１１；Ｐ＝０．０１８９；図２０Ａ］。水への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のＡＮＯＶＡは、水の群における処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３５）＝０．８７５；Ｐ＝０．４６４］。尿への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３４）＝２．１５３；Ｐ＝０．１１４］。しかし、推測的な比較は、ＭＲＸ００６による慢性処置（ｔ＝３．６０２ ｄｆ＝１６；Ｐ＝０．００２４）が、ビヒクル群と比較したとき尿への嗅覚行為に費やした時間を増加させたことを明らかにした。
二元ＡＮＯＶＡ分析［尿：［Ｆ（１，３６）＝４４．１１８；Ｐ＝０．０００１］；処置：［Ｆ（１，３６）＝１２．３３５；Ｐ＝０．００１］；尿×処置：［Ｆ（１，３６）＝９．２３６；Ｐ＝０．００５］、それに続くｐｏｓｔ ｈｏｃ試験は、ＭＲＸ００６で処置したマウスが、ビヒクル群と比較して、尿への嗅覚行為により多くの時間を費やしたことを明らかにした（＊ｐ＜０．０１；図２０Ｂ）。重要なことに、ビヒクルマウスは、予期されたように水よりも尿への嗅覚行為により多くの時間を費やした（＃ｐ＜０．０５）。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、雌の尿への嗅覚行為試験でのＢＴＢＲマウスにおける雌の尿への嗅覚行為に費やした時間を有意に増加させる。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、雌の尿への嗅覚行為試験でのＢＴＢＲマウスにおける雌の尿への嗅覚行為に費やした時間を有意に増加させる。
実施例２ｊ−うつ病様行動のアセスメント−新規対象認識試験
論拠
使用したプロトコルは、Ｂｅｖｉｎｓ ａｎｄ Ｂｅｓｈｅｅｒ（２００６）の出典であり、これを使用して認識記憶を試験した。記憶の改善は、うつ病様行動の低減の反映である。
論拠
使用したプロトコルは、Ｂｅｖｉｎｓ ａｎｄ Ｂｅｓｈｅｅｒ（２００６）の出典であり、これを使用して認識記憶を試験した。記憶の改善は、うつ病様行動の低減の反映である。
方法
使用したプロトコルは、Ｂｅｖｉｎｓ ａｎｄ Ｂｅｓｈｅｅｒ（２００６）の出典であった。これを３日にわたって行った。１日目に、動物を、頭上にカメラを備えた大きな容器である試験環境に１０分間慣れさせた。寝具を使用せず、容器を各動物間で７０％エタノールによって拭いた。２日目に、動物を試験装置に１０分間慣れさせた。この期間の後、動物を容器から取り出し、２の同一の対象を環境に導入した。動物を容器に戻し、さらに１０分間探索させた。対象を各試行の前に７０％エタノール溶液によって清潔にした。トレーニング期間後、齧歯動物を２４時間の遅延期間の後に環境から取り出した。３日目に、齧歯動物を容器に戻し、このとき、その前の日からの１のファミリアー対象、及び１の新規対象のみを収容していた。２の対象と共に動物の活動を５分間記録した。２の対象と共に動物の活動を５分間記録した。齧歯動物が各対象を探索するのに費やした時間の量を手動観察により記録し、相互作用時間全体にわたって新規対象と相互作用するのに費やした時間に相当する識別指数（ＤＩ）値を生じた。対照ラットと比較してのＤＩの減少は、このタイプの記憶の欠失を示す。
使用したプロトコルは、Ｂｅｖｉｎｓ ａｎｄ Ｂｅｓｈｅｅｒ（２００６）の出典であった。これを３日にわたって行った。１日目に、動物を、頭上にカメラを備えた大きな容器である試験環境に１０分間慣れさせた。寝具を使用せず、容器を各動物間で７０％エタノールによって拭いた。２日目に、動物を試験装置に１０分間慣れさせた。この期間の後、動物を容器から取り出し、２の同一の対象を環境に導入した。動物を容器に戻し、さらに１０分間探索させた。対象を各試行の前に７０％エタノール溶液によって清潔にした。トレーニング期間後、齧歯動物を２４時間の遅延期間の後に環境から取り出した。３日目に、齧歯動物を容器に戻し、このとき、その前の日からの１のファミリアー対象、及び１の新規対象のみを収容していた。２の対象と共に動物の活動を５分間記録した。２の対象と共に動物の活動を５分間記録した。齧歯動物が各対象を探索するのに費やした時間の量を手動観察により記録し、相互作用時間全体にわたって新規対象と相互作用するのに費やした時間に相当する識別指数（ＤＩ）値を生じた。対照ラットと比較してのＤＩの減少は、このタイプの記憶の欠失を示す。
結果
群内でのスチューデントｔ検定は、新規対象認識試験の初日に、対象ＡまたはＢのいずれかへの嗜好側を明らかにしなかった（図２１Ａ）。群内でのスチューデントｔ検定は、ファミリアー対象と比較して新規対象への嗜好を明らかにしなかった。新規対象では、相互作用時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝０．１２２；Ｐ＝０．９４６；図２１Ｂ］。また、識別指数に対する処置の効果がないことがＡＮＯＶＡ分析によって明らかにされた［Ｆ（３，４７）＝０．５３５；Ｐ＝０．６６１；図２１Ｃ］。
群内でのスチューデントｔ検定は、新規対象認識試験の初日に、対象ＡまたはＢのいずれかへの嗜好側を明らかにしなかった（図２１Ａ）。群内でのスチューデントｔ検定は、ファミリアー対象と比較して新規対象への嗜好を明らかにしなかった。新規対象では、相互作用時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝０．１２２；Ｐ＝０．９４６；図２１Ｂ］。また、識別指数に対する処置の効果がないことがＡＮＯＶＡ分析によって明らかにされた［Ｆ（３，４７）＝０．５３５；Ｐ＝０．６６１；図２１Ｃ］。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、新規対象認識試験におけるＢＴＢＲマウスにおいて認知行動に対して効果を有さない。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、新規対象認識試験におけるＢＴＢＲマウスにおいて認知行動に対して効果を有さない。
実施例２ｋ−ｉｎ ｖｉｖｏ胃腸透過性アッセイ
論拠
この手順を使用してｉｎ ｖｉｖｏ腸運動を評価する。
論拠
この手順を使用してｉｎ ｖｉｖｏ腸運動を評価する。
方法
試験マウスを単独で部屋に入れ、一晩絶食させた。翌朝（およそ９ａｍ）、マウスにＦＩＴＣデキストラン（（６００ｍｇ／ｋｇ）を経口胃管栄養法によって投与した。２時間後、１００μｌの血液サンプルをヘパリンコーティングした毛細管において収集し、暗いエッペンドルフに移し、氷上に置いた。サンプルを３５００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿を吸引し、サンプルを−８０℃において長期保存で保存した。
試験マウスを単独で部屋に入れ、一晩絶食させた。翌朝（およそ９ａｍ）、マウスにＦＩＴＣデキストラン（（６００ｍｇ／ｋｇ）を経口胃管栄養法によって投与した。２時間後、１００μｌの血液サンプルをヘパリンコーティングした毛細管において収集し、暗いエッペンドルフに移し、氷上に置いた。サンプルを３５００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿を吸引し、サンプルを−８０℃において長期保存で保存した。
希釈されていない血漿を使用してＦＩＴＣ濃度を定量化した。２５μｌのＦＩＴＣを３８４ウェルプレートにおいて２部ピペッティングした（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ ｏｎｅ）。ＦＩＴＣを４９０ｎｍ〜５２０ｎｍの範囲の間でＶｉｃｔｏｒ分光計によって測定した。標準曲線では、段階希釈のＦＩＴＣをＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で調製した。吸光度の増加は、障壁の完全性の減少を示す。
結果
腸バリア機能を蛍光化合物フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）の経口投与を通して評価し、続いての後の尾部出血により血漿中のＦＩＴＣの濃度を評価した。ＦＩＴＣ濃度のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４７）＝１．３６６；Ｐ＝０．２６６；図２３］。
腸バリア機能を蛍光化合物フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）の経口投与を通して評価し、続いての後の尾部出血により血漿中のＦＩＴＣの濃度を評価した。ＦＩＴＣ濃度のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４７）＝１．３６６；Ｐ＝０．２６６；図２３］。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける腸透過性に影響しなかった。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける腸透過性に影響しなかった。
実施例２ｌ−ｅｘ ｖｉｖｏ胃腸透過性アッセイ
論拠及び方法
回腸及び結腸の透過性を、Ｕｓｓｉｎｇチャンバーを使用してｅｘ ｖｉｖｏ評価した。結腸及び回腸をマウスから切除し、Ｋｒｅｂ’ｓ緩衝液を含有する５ｍＬチューブ内に収集した。結腸及び回腸の両方を腸間膜線に沿って切断し、Ｕｓｓｉｎｇチャンバー装置上に取り付けた。結腸では、Ｄ−グルコースを含有する４ｍＬのＫｒｅｂｓ溶液をＵｓｓｉｎｇチャンバー装置の両側に添加した。回腸では、Ｄ−マンニトールを含有する４ｍＬのＫｒｅｂｓ溶液を粘膜側に添加した一方で、Ｄ−グルコースを含有する等量のＫｒｅｂｓを漿膜側に添加した。チャンバーをカルボゲンガス（９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２）で酸素化し、３７℃で保って組織完全性を維持した。２．５ｍｇ／ｍＬ ＦＩＴＣ−デキストランを粘膜のチャンバーに添加した。サンプルを０分（ベースライン）、６０分、９０分及び１２０分の時点で漿膜のチャンバーから採取した。２５μｌのＦＩＴＣを３８４ウェルプレートにおいて２部ピペッティングした（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ ｏｎｅ）。ＦＩＴＣを４９０ｎｍ〜５２０ｎｍの範囲の間でＶｉｃｔｏｒ分光計によって測定した。標準曲線では、段階希釈のＦＩＴＣをＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で調製した。
論拠及び方法
回腸及び結腸の透過性を、Ｕｓｓｉｎｇチャンバーを使用してｅｘ ｖｉｖｏ評価した。結腸及び回腸をマウスから切除し、Ｋｒｅｂ’ｓ緩衝液を含有する５ｍＬチューブ内に収集した。結腸及び回腸の両方を腸間膜線に沿って切断し、Ｕｓｓｉｎｇチャンバー装置上に取り付けた。結腸では、Ｄ−グルコースを含有する４ｍＬのＫｒｅｂｓ溶液をＵｓｓｉｎｇチャンバー装置の両側に添加した。回腸では、Ｄ−マンニトールを含有する４ｍＬのＫｒｅｂｓ溶液を粘膜側に添加した一方で、Ｄ−グルコースを含有する等量のＫｒｅｂｓを漿膜側に添加した。チャンバーをカルボゲンガス（９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２）で酸素化し、３７℃で保って組織完全性を維持した。２．５ｍｇ／ｍＬ ＦＩＴＣ−デキストランを粘膜のチャンバーに添加した。サンプルを０分（ベースライン）、６０分、９０分及び１２０分の時点で漿膜のチャンバーから採取した。２５μｌのＦＩＴＣを３８４ウェルプレートにおいて２部ピペッティングした（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ ｏｎｅ）。ＦＩＴＣを４９０ｎｍ〜５２０ｎｍの範囲の間でＶｉｃｔｏｒ分光計によって測定した。標準曲線では、段階希釈のＦＩＴＣをＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で調製した。
結果
ｅｘ ｖｉｖｏ腸透過性アッセイにおいて、繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、結腸［Ｆ（３，８７）＝６４．１９７；Ｐ＜０．０００１］及び回腸［Ｆ（３，８７）＝３４．５７２；Ｐ＜０．０００１］の両方について時間の効果を明らかにした。繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、結腸［Ｆ（９，８７）＝１．１８４；Ｐ＝０．３１６；図２３Ａ］または回腸［Ｆ（９，８７）＝０．８１０；Ｐ＝０．６０９；図２２Ｂ］のいずれにも時間に関しての処置の効果を明らかにしなかった。
ｅｘ ｖｉｖｏ腸透過性アッセイにおいて、繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、結腸［Ｆ（３，８７）＝６４．１９７；Ｐ＜０．０００１］及び回腸［Ｆ（３，８７）＝３４．５７２；Ｐ＜０．０００１］の両方について時間の効果を明らかにした。繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、結腸［Ｆ（９，８７）＝１．１８４；Ｐ＝０．３１６；図２３Ａ］または回腸［Ｆ（９，８７）＝０．８１０；Ｐ＝０．６０９；図２２Ｂ］のいずれにも時間に関しての処置の効果を明らかにしなかった。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、結腸または回腸の透過性に影響しなかった。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、結腸または回腸の透過性に影響しなかった。
実施例２ｍ−ｉｎ ｖｉｖｏ胃腸運動アッセイ
論拠
この手順を使用してｉｎ ｖｉｖｏ腸運動を評価する。
論拠
この手順を使用してｉｎ ｖｉｖｏ腸運動を評価する。
方法
マウスを試験の開始の前に単独で部屋に入れた。マウスに非吸収性着色染料（カーマインレッド）で経口強制飼養した。最初に着色された糞便ボーラスの排泄時間を記録し、腸全体の蠕動運動の指標として使用した。
マウスを試験の開始の前に単独で部屋に入れた。マウスに非吸収性着色染料（カーマインレッド）で経口強制飼養した。最初に着色された糞便ボーラスの排泄時間を記録し、腸全体の蠕動運動の指標として使用した。
結果
マウスに非吸収性着色染料（カーマインレッド）を経口胃管栄養法によって投与した。最初に着色された糞便ボーラスの排泄時間を記録し、腸全体の蠕動運動の指標として使用した。運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４７）＝２．０９７；Ｐ＝０．１１４］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６で処置したマウス（ｔ＝２．２７０ ｄｆ＝２２、ｐ＜０．０５；図２４）が、ビヒクル群と比較したとき変化した腸運動を示すことを明らかにした。
マウスに非吸収性着色染料（カーマインレッド）を経口胃管栄養法によって投与した。最初に着色された糞便ボーラスの排泄時間を記録し、腸全体の蠕動運動の指標として使用した。運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４７）＝２．０９７；Ｐ＝０．１１４］。しかし、推測的な一対比較試験は、ＭＲＸ００６で処置したマウス（ｔ＝２．２７０ ｄｆ＝２２、ｐ＜０．０５；図２４）が、ビヒクル群と比較したとき変化した腸運動を示すことを明らかにした。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける腸運動の低減を示した。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける腸運動の低減を示した。
実施例２ｎ−ストレス−誘発の循環コルチコステロンの決定
論拠
ＦＳＴへの暴露は、ストレスホルモン、コルチコステロンのレベルの増加を伴って、ＨＰＡ軸の頑強な活性化を結果として引き起こす。ＦＳＴへの暴露の前及び後に採取した血漿コルチコステロン濃度を、視床下部下垂体副腎系（ＨＰＡ）軸のストレス−誘発の活性化の指標として使用した。
論拠
ＦＳＴへの暴露は、ストレスホルモン、コルチコステロンのレベルの増加を伴って、ＨＰＡ軸の頑強な活性化を結果として引き起こす。ＦＳＴへの暴露の前及び後に採取した血漿コルチコステロン濃度を、視床下部下垂体副腎系（ＨＰＡ）軸のストレス−誘発の活性化の指標として使用した。
方法
ＦＳＴの日に、マウスをホームケージから取り出し、ベースの血液サンプルを採取する手術室に移動させた。外科用メスの刃を使用して尾部のまさに先端（１ｍｍ）を取り出した。血液をヘパリン処理した毛細管を使用して収集し、次いで、微量遠心分離管に移した。血液サンプルもまたＦＳＴへの暴露後３０、６０、９０及び１２０分で採取し、ピーク及び回復コルチコステロンレベルについて評価した。血液を氷上で保ち、次いで４℃にて２，５００×ｇで１５分間遠心分離した。血漿コルチコステロンをメーカーの取扱説明書に従ってＥＬＩＳＡによって評価した（ＥＮＺＯ Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ ＥＬＩＳＡ，ＡＤＩ−９００−０９７，Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。
ＦＳＴの日に、マウスをホームケージから取り出し、ベースの血液サンプルを採取する手術室に移動させた。外科用メスの刃を使用して尾部のまさに先端（１ｍｍ）を取り出した。血液をヘパリン処理した毛細管を使用して収集し、次いで、微量遠心分離管に移した。血液サンプルもまたＦＳＴへの暴露後３０、６０、９０及び１２０分で採取し、ピーク及び回復コルチコステロンレベルについて評価した。血液を氷上で保ち、次いで４℃にて２，５００×ｇで１５分間遠心分離した。血漿コルチコステロンをメーカーの取扱説明書に従ってＥＬＩＳＡによって評価した（ＥＮＺＯ Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ ＥＬＩＳＡ，ＡＤＩ−９００−０９７，Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。
結果
繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、時間の有意な効果を明らかにした［Ｆ（４，１６４）＝１２７．１２７；Ｐ＜０．０００１；図２５］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、全ての群について３０分の時点での循環コルチコステロンの有意な増加を明らかにした。繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、時間に関しての処置の有意な効果を明らかにしなかった［Ｆ（１２，１６４）＝０．５６１；Ｐ＝０．８７１］。
繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、時間の有意な効果を明らかにした［Ｆ（４，１６４）＝１２７．１２７；Ｐ＜０．０００１；図２５］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、全ての群について３０分の時点での循環コルチコステロンの有意な増加を明らかにした。繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、時間に関しての処置の有意な効果を明らかにしなかった［Ｆ（１２，１６４）＝０．５６１；Ｐ＝０．８７１］。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験に暴露したＢＴＢＲマウスにおけるストレス−誘発のコルチコステロンレベルに影響しない。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験に暴露したＢＴＢＲマウスにおけるストレス−誘発のコルチコステロンレベルに影響しない。
実施例２ｏ−器官重量及び結腸長
体重の百分率としての器官重量のＡＮＯＶＡは、副腎系［Ｆ（３，４４）＝１．４８０；Ｐ＝０．２３４；図２６Ａ｝、脾臓［Ｆ（３，４３）＝０．７７９；Ｐ＝０．５１３；図２６Ｂ］または盲腸［Ｆ（３，４４）＝０．４４１；Ｐ＝０．７２５；図２６Ｃ］について処置の効果を明らかにしなかった。結腸長のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝０．８２６；Ｐ＝０．４８７；図２６Ｄ］。
体重の百分率としての器官重量のＡＮＯＶＡは、副腎系［Ｆ（３，４４）＝１．４８０；Ｐ＝０．２３４；図２６Ａ｝、脾臓［Ｆ（３，４３）＝０．７７９；Ｐ＝０．５１３；図２６Ｂ］または盲腸［Ｆ（３，４４）＝０．４４１；Ｐ＝０．７２５；図２６Ｃ］について処置の効果を明らかにしなかった。結腸長のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４６）＝０．８２６；Ｐ＝０．４８７；図２６Ｄ］。
結論
ＭＲＸ００６による処置は、選択的解剖学的マーカーに影響しない。
ＭＲＸ００６による処置は、選択的解剖学的マーカーに影響しない。
実施例２ｐ−体重管理
動物の体重を実験の継続期間にわたって１週間に１回評価し、細菌株のいずれが、この特定のパラメータに影響しているかを決定した。繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、時間の有意な効果を明らかにした［Ｆ（１１，４８４）＝１１１．２１７；Ｐ＜０．０００１；図２７］。繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、時間に関しての処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３３，４８４）＝０．５８１；Ｐ＝０．９７１］。
動物の体重を実験の継続期間にわたって１週間に１回評価し、細菌株のいずれが、この特定のパラメータに影響しているかを決定した。繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、時間の有意な効果を明らかにした［Ｆ（１１，４８４）＝１１１．２１７；Ｐ＜０．０００１；図２７］。繰り返しの測定のＡＮＯＶＡは、時間に関しての処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３３，４８４）＝０．５８１；Ｐ＝０．９７１］。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける体重に影響しない。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける体重に影響しない。
ＢＴＢＲマウスモデルからの結論
この研究の主な所見は、ＭＲＸ００６による処置が常同及び不安関連行動を減衰するということであった。具体的には、ＭＲＸ００６が、大理石埋め込み試験において埋め込まれる大理石の数を低減し、また、動物がグルーミングに費やした時間の量を低減した。また、生存生物学的製剤による処置は、周囲において過ごした時間の量の減少に対応して、オープンフィールドの中心において過ごした時間の量を増加させ、これは、抗不安様効果を示している。しかし、不安様行動に対する効果は、高架式十字迷路試験において観察されなかった。ＭＲＸ００６がＢＴＢＲマウスにおける常同及び不安関連行動を改善する能力は、有望であり、効果的な治療法であり得ることを示している。
この研究の主な所見は、ＭＲＸ００６による処置が常同及び不安関連行動を減衰するということであった。具体的には、ＭＲＸ００６が、大理石埋め込み試験において埋め込まれる大理石の数を低減し、また、動物がグルーミングに費やした時間の量を低減した。また、生存生物学的製剤による処置は、周囲において過ごした時間の量の減少に対応して、オープンフィールドの中心において過ごした時間の量を増加させ、これは、抗不安様効果を示している。しかし、不安様行動に対する効果は、高架式十字迷路試験において観察されなかった。ＭＲＸ００６がＢＴＢＲマウスにおける常同及び不安関連行動を改善する能力は、有望であり、効果的な治療法であり得ることを示している。
ＭＲＸ００６はまた、雌性マウス尿への嗅覚行為に費やした時間も増加させた。雌の尿への嗅覚行為試験は、齧歯動物における快楽様行動を評価するための試験として元々は設計されており、尿への嗅覚行為に費やした時間の増加が、褒美の探求行動の増加と解釈されている（Ｍａｌｋｅｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。ＢＴＢＲマウスが、うつ病様表現型を示すことが報告されていないことを前提として、ＭＲＸ００６による処置の後の現実験において尿への嗅覚行為に費やされた時間の増加が観察されたことが、快楽的行動の改善を反映しているとは考えにくい。むしろ、ＭＲＸ００６は、これらのマウスが社会的情報（すなわち、雌性フェロモン）を認識及び処理する能力を増加させているとされ得る。しかし、群間での社会的行動の差がないことが、３チャンバー試験及び社会的相互作用試験において観察された。ＭＲＸ００６による処置は、マウスがファミリアー同種と比較して新規同種マウスを調査するのに費やした時間の量を低減した。
腸運動を除いて、現研究において評価されている生存生物学的製剤は、測定したいくつかの生理学的パラメータに影響しなかった。例えば、生存生物学的製剤の効果がないことが、ストレス−誘発のコルチコステロン分泌、解剖学的重量、腸透過性または合計体重において観察された。腸運動アッセイでは、ＭＲＸ００６による処置は、カーマインレッド染料による経口胃管栄養法の後に現れる最初の赤色ペレットに要した時間を延長した。かかる結果は、ＭＲＸ００６が腸運動を長くすることを示唆している。
実施例３−母体免疫活性化（ＭＩＡ）マウスモデル
ＭＩＡマウスモデルは、子孫において自閉症スペクトラム障害の中核症状を誘発するために、妊娠したマウスにおいて、環境的な免疫チャレンジを使用する。ＭＩＡマウスは、常同行動（グルーミング試験及び大理石埋め込み試験によって示される）ならびに社会的コミュニケーションの欠損（社会的遊び、３−チャンバー社会的相互作用、及び食べ物の嗜好の社会的伝達試験によって示される）を典型的には示す。子孫は、自閉症の３つの中核症状（コミュニケーションの低減；社交性の低下；及び反復または常同行動の増加）を示し、そのため、治療の投与が自閉症スペクトラム障害及び実際には多くの他の神経学的障害に関連する行動的表現型を軽減し得るか否かを決定するために好適なモデルを付与する。動物モデルにおける行動的表現型の変化が、原因となっている生物学的または生理学的機序の理解に関係なく、潜在的に臨床的に関係のある介入を示すことが確立されている（Ｃｒａｗｌｅｙ ２０１２）。
ＭＩＡマウスモデルは、子孫において自閉症スペクトラム障害の中核症状を誘発するために、妊娠したマウスにおいて、環境的な免疫チャレンジを使用する。ＭＩＡマウスは、常同行動（グルーミング試験及び大理石埋め込み試験によって示される）ならびに社会的コミュニケーションの欠損（社会的遊び、３−チャンバー社会的相互作用、及び食べ物の嗜好の社会的伝達試験によって示される）を典型的には示す。子孫は、自閉症の３つの中核症状（コミュニケーションの低減；社交性の低下；及び反復または常同行動の増加）を示し、そのため、治療の投与が自閉症スペクトラム障害及び実際には多くの他の神経学的障害に関連する行動的表現型を軽減し得るか否かを決定するために好適なモデルを付与する。動物モデルにおける行動的表現型の変化が、原因となっている生物学的または生理学的機序の理解に関係なく、潜在的に臨床的に関係のある介入を示すことが確立されている（Ｃｒａｗｌｅｙ ２０１２）。
実施例３ａ−ＭＩＡマウスモデルにおける材料及び方法
マウス
母体免疫活性化（環境ＡＳＤマウスモデル）プロトコルを、先に記載されているように行った（Ｈｓｉａｏ，ＭｃＢｒｉｄｅ ｅｔ ａｌ．２０１３）。簡潔には、妊娠したＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（ＥＮＶＩＧＯ、ＵＫ）に、（Ｈｓｉａｏ，ＭｃＢｒｉｄｅ ｅｔ ａｌ．２０１３）に記載されている方法に従って生理食塩水または２０ｍｇ／ｋｇのポリ（Ｉ：Ｃ）をＥ１２．５において腹腔内注射した。これらのマウスを以下の実験においてＭＩＡマウスとして列挙する。雄性マウスは、８週齢で行動を開始した。該動物を、１２時間暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で温度及び湿度が制御された部屋に入れた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。
マウス
母体免疫活性化（環境ＡＳＤマウスモデル）プロトコルを、先に記載されているように行った（Ｈｓｉａｏ，ＭｃＢｒｉｄｅ ｅｔ ａｌ．２０１３）。簡潔には、妊娠したＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（ＥＮＶＩＧＯ、ＵＫ）に、（Ｈｓｉａｏ，ＭｃＢｒｉｄｅ ｅｔ ａｌ．２０１３）に記載されている方法に従って生理食塩水または２０ｍｇ／ｋｇのポリ（Ｉ：Ｃ）をＥ１２．５において腹腔内注射した。これらのマウスを以下の実験においてＭＩＡマウスとして列挙する。雄性マウスは、８週齢で行動を開始した。該動物を、１２時間暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で温度及び湿度が制御された部屋に入れた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。
株
受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＭＲＸ００６：Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ細菌。
生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＭＲＸ００６：Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ細菌。
生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
生存生物学的製剤投与
マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクルによる投薬。これらのマウスを、行動バッテリーの開始の前に、ＭＲＸ００６またはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）によって３週間、毎日１回処置した。マウスを、行動バッテリーの間、５週間、毎日１回さらに処置した。ＭＲＸ００６（１×１０７〜１×１０９ＣＦＵ経口投与）を投与の前にＰＢＳに溶解した。
マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクルによる投薬。これらのマウスを、行動バッテリーの開始の前に、ＭＲＸ００６またはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）によって３週間、毎日１回処置した。マウスを、行動バッテリーの間、５週間、毎日１回さらに処置した。ＭＲＸ００６（１×１０７〜１×１０９ＣＦＵ経口投与）を投与の前にＰＢＳに溶解した。
投与スケジュール
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
糞便収集
新たな糞便サンプルを研究の終了まで毎週個々のマウスから収集した。少なくとも２０ｍｇの新たな糞便を微量遠心分離管に置き、直後に氷上に置き、次いで−８０℃で保存した。
新たな糞便サンプルを研究の終了まで毎週個々のマウスから収集した。少なくとも２０ｍｇの新たな糞便を微量遠心分離管に置き、直後に氷上に置き、次いで−８０℃で保存した。
実験設計及び方法
上記で概説している、マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクルによる投薬。行動バッテリーを以下の順序で行った：４週目にオープンフィールドアリーナ、５週目に大理石埋め込み試験；６週目に食べ物の嗜好の社会的伝達試験、及び７週目に雌の尿への嗅覚行為試験。カーマインレッドの胃腸運動アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、７週目及び８週目の間に尾部出血が起こった。最後に、９週目で、脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ ｖｉｖｏ測定のために、マウスを殺処分した。
上記で概説している、マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクルによる投薬。行動バッテリーを以下の順序で行った：４週目にオープンフィールドアリーナ、５週目に大理石埋め込み試験；６週目に食べ物の嗜好の社会的伝達試験、及び７週目に雌の尿への嗅覚行為試験。カーマインレッドの胃腸運動アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、７週目及び８週目の間に尾部出血が起こった。最後に、９週目で、脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ ｖｉｖｏ測定のために、マウスを殺処分した。
ＭＩＡモデルにおける生存生物学的製剤処置の、常同、社会的及びうつ病様行動への影響を、胃腸パラメータ（透過性及び運動性）と併せて、以下の実施例において概説する。
上記の表において列挙されている群２は、母体免疫活性化マウスを表し、母親を妊娠の間にポリ（Ｉ：Ｃ）によって処置した。これらのマウスは、対照マウス（群１）（この対照では、確実に、ポリ（Ｉ：Ｃ）投与により、母親マウス子孫において予期される行動上の症状が引き起こされた）と比較して自閉症スペクトラム障害に関連する表現型を示すことが予期され得た。自閉症スペクトラム障害の行動上の症状への処置の任意の効果が、群２及び群３の間の差によって確認され得た。
グラフ設計及び統計的分析
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００６群を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００６群を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
実施例３ｂ−常同行動のアセスメント−大理石埋め込み試験
論拠
この試験は、反復、強迫及び不安行動について評価する。埋め込まれた大理石の数が多いほど、不安または常同行動が大きいことを示す。実際、薬理学的剤、例えば、抗不安薬によって処置したマウスは、対照マウスと比較して減少した大理石埋め込み行動を示す。
論拠
この試験は、反復、強迫及び不安行動について評価する。埋め込まれた大理石の数が多いほど、不安または常同行動が大きいことを示す。実際、薬理学的剤、例えば、抗不安薬によって処置したマウスは、対照マウスと比較して減少した大理石埋め込み行動を示す。
方法
マウスを、標準の齧歯動物用（硬材）寝具（５ｃｍ）及びその頂部に２０個の大理石（壁から２ｃｍ離れかつ２ｃｍ離れて規則的間隔にある５列の大理石）を含む新規のポリプロピレンケージ（３５×２８×１８．５ｃｍ、Ｌ×Ｗ×Ｈ）内に個々に置いた。実験を１０００ｌｕｘの光強度下で行った。３０分後、マウスをこれらのケージから除去し、表面の２／３を超えて埋め込まれた大理石の数をスコアリングした。
マウスを、標準の齧歯動物用（硬材）寝具（５ｃｍ）及びその頂部に２０個の大理石（壁から２ｃｍ離れかつ２ｃｍ離れて規則的間隔にある５列の大理石）を含む新規のポリプロピレンケージ（３５×２８×１８．５ｃｍ、Ｌ×Ｗ×Ｈ）内に個々に置いた。実験を１０００ｌｕｘの光強度下で行った。３０分後、マウスをこれらのケージから除去し、表面の２／３を超えて埋め込まれた大理石の数をスコアリングした。
結果
対照群とビヒクルＭＩＡ群との間のスチューデントｔ検定分析により、ビヒクルＭＩＡマウスでは、対照群と比較して、より多くの大理石が埋め込まれたことを明らかにした（ｔ（２１）＝２．７５１，Ｐ＝０．０１１；図２８）。埋め込まれた大理石の数のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにした［Ｆ（３，４８）＝１８．３９；Ｐ＜０．００１］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ＭＲＸ００６による慢性処置が、埋め込まれた大理石の数を減少させることを明らかにした（ｐ＜０．０１；図２８）。
対照群とビヒクルＭＩＡ群との間のスチューデントｔ検定分析により、ビヒクルＭＩＡマウスでは、対照群と比較して、より多くの大理石が埋め込まれたことを明らかにした（ｔ（２１）＝２．７５１，Ｐ＝０．０１１；図２８）。埋め込まれた大理石の数のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにした［Ｆ（３，４８）＝１８．３９；Ｐ＜０．００１］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ＭＲＸ００６による慢性処置が、埋め込まれた大理石の数を減少させることを明らかにした（ｐ＜０．０１；図２８）。
結論
ビヒクルＭＩＡ群では、対照群よりも有意に多くの大理石が埋め込まれたことを示し、これは、ＭＩＡモデルが、マウスにおいて自閉症スペクトラム障害様症状を成功裏に誘発したことを示している。ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける反復、強迫及び不安行動を低減する。
ビヒクルＭＩＡ群では、対照群よりも有意に多くの大理石が埋め込まれたことを示し、これは、ＭＩＡモデルが、マウスにおいて自閉症スペクトラム障害様症状を成功裏に誘発したことを示している。ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける反復、強迫及び不安行動を低減する。
実施例３ｃ−社会的行動のアセスメント−食べ物の嗜好の社会的伝達
論拠
社会的伝達の食べ物の嗜好は、社会的行動を評価するためにマウスにおいて使用される嗅覚記憶の関連試験である。この試験において、オブザーバーマウスは、新規の食餌を最近採ったデモンストレーターマウスと相互作用する。オブザーバーマウスが、デモンストレーターによって採られた食餌と何らかの他の新規の食餌との間での選択肢を提示されるとき、オブザーバーマウスは、デモンストレーターによって採られた食餌をより好むはずである。食餌の嗜好の低減は、社交性の低下を示す。
論拠
社会的伝達の食べ物の嗜好は、社会的行動を評価するためにマウスにおいて使用される嗅覚記憶の関連試験である。この試験において、オブザーバーマウスは、新規の食餌を最近採ったデモンストレーターマウスと相互作用する。オブザーバーマウスが、デモンストレーターによって採られた食餌と何らかの他の新規の食餌との間での選択肢を提示されるとき、オブザーバーマウスは、デモンストレーターによって採られた食餌をより好むはずである。食餌の嗜好の低減は、社交性の低下を示す。
方法
この試験を先に記載されているように実施した（Ｄｅｓｂｏｎｎｅｔ，Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．２０１５）。簡潔には、試験前の１８時間、マウスは食餌を奪われていたが、水は自由に得られた。食餌の選択肢は、接地されたマウス食によって作製された１％の粉砕シナモンまたは２％粉末ココアのいずれかからなった。デモンストレーターマウスは、各ケージからランダムに選択され、尾部には、後の社会的相互作用の際の同定を可能にするために青色マーカーでマーキングした。デモンストレーターの食餌容器を１時間のサンプリングセッションの前後に秤量した。上記試験に含めるには最低限０．２ｇの食餌の消費が必要であった。デモンストレーターマウスを、ケージメイトとの３０分の相互作用期間の間、それぞれのホームケージに戻した。その後、手掛かりの食餌または新規の食餌の嗜好に関してケージメイトを個々に試験した。容器を各選択肢セッションの直前直後に秤量した。観察したマウスを次いでそれぞれのホームケージに戻し、選択肢セッションを２４時間後に繰り返した。試験マウスは、社会的手掛かりとしてのデモンストレーターマウスのシナモンまたはココアの匂いをかぐはずであり、２つの間の選択肢が与えられたとき同じ食餌を優先的に選択する。
この試験を先に記載されているように実施した（Ｄｅｓｂｏｎｎｅｔ，Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．２０１５）。簡潔には、試験前の１８時間、マウスは食餌を奪われていたが、水は自由に得られた。食餌の選択肢は、接地されたマウス食によって作製された１％の粉砕シナモンまたは２％粉末ココアのいずれかからなった。デモンストレーターマウスは、各ケージからランダムに選択され、尾部には、後の社会的相互作用の際の同定を可能にするために青色マーカーでマーキングした。デモンストレーターの食餌容器を１時間のサンプリングセッションの前後に秤量した。上記試験に含めるには最低限０．２ｇの食餌の消費が必要であった。デモンストレーターマウスを、ケージメイトとの３０分の相互作用期間の間、それぞれのホームケージに戻した。その後、手掛かりの食餌または新規の食餌の嗜好に関してケージメイトを個々に試験した。容器を各選択肢セッションの直前直後に秤量した。観察したマウスを次いでそれぞれのホームケージに戻し、選択肢セッションを２４時間後に繰り返した。試験マウスは、社会的手掛かりとしてのデモンストレーターマウスのシナモンまたはココアの匂いをかぐはずであり、２つの間の選択肢が与えられたとき同じ食餌を優先的に選択する。
結果
百分率の食べ物の嗜好のスチューデントｔ検定は、０時間（ｔ（２２）＝０．３３２５，Ｐ＝０．７４２７）または２４時間（ｔ（２１）＝０．２８７８，Ｐ＝０．７７６３）のいずれかのアセスメントで対照群とビヒクルＭＩＡ群との間に差がないことを明らかにした。デモンストレーターの手掛かりの食餌の嗜好のＡＮＯＶＡにより、オブザーバーが、０時間［Ｆ（３，４８）＝１．４９，Ｐ＝０．２２８；図２９Ａ］または２４時間［Ｆ（３，４７）＝２．６６，Ｐ＝０．０５９；図２９Ｂ］のアセスメントにおいて、食餌の選択肢に曝されたときに有意差がないことを明らかにした。ＭＲＸ００６による処置は、食べ物の嗜好の社会的伝達試験での手掛かりの食餌への嗜好を変化させなかった。
百分率の食べ物の嗜好のスチューデントｔ検定は、０時間（ｔ（２２）＝０．３３２５，Ｐ＝０．７４２７）または２４時間（ｔ（２１）＝０．２８７８，Ｐ＝０．７７６３）のいずれかのアセスメントで対照群とビヒクルＭＩＡ群との間に差がないことを明らかにした。デモンストレーターの手掛かりの食餌の嗜好のＡＮＯＶＡにより、オブザーバーが、０時間［Ｆ（３，４８）＝１．４９，Ｐ＝０．２２８；図２９Ａ］または２４時間［Ｆ（３，４７）＝２．６６，Ｐ＝０．０５９；図２９Ｂ］のアセスメントにおいて、食餌の選択肢に曝されたときに有意差がないことを明らかにした。ＭＲＸ００６による処置は、食べ物の嗜好の社会的伝達試験での手掛かりの食餌への嗜好を変化させなかった。
結論
ビヒクルＭＩＡ群は、社会的伝達の食べ物の嗜好の低減を示さず（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して食餌の嗜好の変化を示さなかった）、ＭＩＡモデルが社交性の低下の表現型を誘発しないことを示唆した。ＭＲＸ００６による慢性処置は、食べ物の嗜好に効果を有さなかった。しかし、ＭＩＡモデルは、この試験において社交性の低下の表現型を引き起したようではなかったため、食べ物の嗜好の社会的伝達試験での社交性に対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果を決定することはできない。
ビヒクルＭＩＡ群は、社会的伝達の食べ物の嗜好の低減を示さず（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して食餌の嗜好の変化を示さなかった）、ＭＩＡモデルが社交性の低下の表現型を誘発しないことを示唆した。ＭＲＸ００６による慢性処置は、食べ物の嗜好に効果を有さなかった。しかし、ＭＩＡモデルは、この試験において社交性の低下の表現型を引き起したようではなかったため、食べ物の嗜好の社会的伝達試験での社交性に対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果を決定することはできない。
実施例３ｄ−不安様行動のアセスメント−オープンフィールドアリーナ
論拠
オープンフィールドアリーナを使用して、新規のストレスフルな環境への暴露の応答及び自発運動を評価する。ナイーブマウスは、活動領域の中心よりも少なく暴露されているため、活動領域の壁沿いで大部分の時間を必然的に過ごす。中心において過ごす時間の持続期間の増加は、不安様行動の減少を表す。
論拠
オープンフィールドアリーナを使用して、新規のストレスフルな環境への暴露の応答及び自発運動を評価する。ナイーブマウスは、活動領域の中心よりも少なく暴露されているため、活動領域の壁沿いで大部分の時間を必然的に過ごす。中心において過ごす時間の持続期間の増加は、不安様行動の減少を表す。
方法
マウスを、個々に、オープンフィールドアリーナに置き（４３×３５×２５、Ｌ×ｗ×ｈ）、１０分間探索させた。実験は、６０ｌｕｘの光強度下で行った。Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェアを使用して、いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。移動した距離を自発運動についてスコアリングした。
マウスを、個々に、オープンフィールドアリーナに置き（４３×３５×２５、Ｌ×ｗ×ｈ）、１０分間探索させた。実験は、６０ｌｕｘの光強度下で行った。Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェアを使用して、いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。移動した距離を自発運動についてスコアリングした。
結果
スチューデントｔ検定は、対照群とビヒクルＭＩＡ群との間での合計移動距離の有意な差がないことを明らかにした（ｔ（２２）＝０．９３５７，Ｐ＝０．３５９６）。合計移動距離のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにした［Ｆ（３，４７）＝４．３６，Ｐ＝０．００３、図３０Ａ］。Ｐｏｓｔ ｈｏｃ比較は、ＭＲＸ００６による処置が、ビヒクル処置動物と比較して合計移動距離を低減したことを明らかにした（ｐ＜０．０５）。スチューデントｔ検定は、対照群と比較してビヒクルＭＩＡ群によってオープンフィールドの外側ゾーンにおいて費やされた時間の有意な増加を明らかにした（ｔ（２１）＝３．３３７，Ｐ＝０．００３）。オープンフィールドの外側ゾーンにおいて費やされた時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４７）＝０．０９３、図３０Ｂ］。スチューデントｔ検定は、対照マウスと比較してビヒクルＭＩＡ群によって内側ゾーンにおいて費やされた時間の有意な減少を明らかにした（ｔ（２１）＝３．３３７，Ｐ＝０．００３）。内側ゾーンにおいて費やされた時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４７）＝０．９３，Ｐ＝０．９６、図３０Ｃ］。
スチューデントｔ検定は、対照群とビヒクルＭＩＡ群との間での合計移動距離の有意な差がないことを明らかにした（ｔ（２２）＝０．９３５７，Ｐ＝０．３５９６）。合計移動距離のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにした［Ｆ（３，４７）＝４．３６，Ｐ＝０．００３、図３０Ａ］。Ｐｏｓｔ ｈｏｃ比較は、ＭＲＸ００６による処置が、ビヒクル処置動物と比較して合計移動距離を低減したことを明らかにした（ｐ＜０．０５）。スチューデントｔ検定は、対照群と比較してビヒクルＭＩＡ群によってオープンフィールドの外側ゾーンにおいて費やされた時間の有意な増加を明らかにした（ｔ（２１）＝３．３３７，Ｐ＝０．００３）。オープンフィールドの外側ゾーンにおいて費やされた時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４７）＝０．０９３、図３０Ｂ］。スチューデントｔ検定は、対照マウスと比較してビヒクルＭＩＡ群によって内側ゾーンにおいて費やされた時間の有意な減少を明らかにした（ｔ（２１）＝３．３３７，Ｐ＝０．００３）。内側ゾーンにおいて費やされた時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４７）＝０．９３，Ｐ＝０．９６、図３０Ｃ］。
結論
ＭＲＸ００６による処置は、オープンフィールドアリーナにおいてＭＩＡマウスが移動する距離を減少する。そのため、ＭＲＸ００６は、オープンフィールドアリーナへの暴露によって引き起こされるストレス−誘発の自発運動を減衰し得る。
ＭＲＸ００６による処置は、オープンフィールドアリーナにおいてＭＩＡマウスが移動する距離を減少する。そのため、ＭＲＸ００６は、オープンフィールドアリーナへの暴露によって引き起こされるストレス−誘発の自発運動を減衰し得る。
実施例３ｅ−うつ病様行動のアセスメント−雌の尿への嗅覚行為試験
論拠
雌の尿への嗅覚行為試験（ＦＵＳＴ）を使用して齧歯動物における無快感症様行動を評価する。嗅覚行為時間の低減が社会的回避／無快感症を示唆する一方で、増加は、社会的行動／快楽的行動の増加を表す。
論拠
雌の尿への嗅覚行為試験（ＦＵＳＴ）を使用して齧歯動物における無快感症様行動を評価する。嗅覚行為時間の低減が社会的回避／無快感症を示唆する一方で、増加は、社会的行動／快楽的行動の増加を表す。
方法
実験マウスを試験の前に１週間、単独で部屋に入れる。試験の際、無菌水に浸漬した綿先端アプリケータをホームケージに置き、マウスを３分間嗅覚行為／調査させる。この３分試験の後、綿先端アプリケータを除去する。４５分後、新しい綿先端アプリケータを（このサイクルの発情期にあるものと同じ株の雌性マウスから収集した）雌の尿に浸漬し、ケージに置く。マウスをさらに３分間これを嗅覚行為／調査させる。水及び尿への嗅覚行為に費やした時間を記録する。
実験マウスを試験の前に１週間、単独で部屋に入れる。試験の際、無菌水に浸漬した綿先端アプリケータをホームケージに置き、マウスを３分間嗅覚行為／調査させる。この３分試験の後、綿先端アプリケータを除去する。４５分後、新しい綿先端アプリケータを（このサイクルの発情期にあるものと同じ株の雌性マウスから収集した）雌の尿に浸漬し、ケージに置く。マウスをさらに３分間これを嗅覚行為／調査させる。水及び尿への嗅覚行為に費やした時間を記録する。
結果
マンホイットニーのＵ検定は、対照［マンホイットニーＵ値＝７，Ｐ＝０．０１２３］及びビヒクルＭＩＡ［マンホイットニーＵ値＝５７；Ｐ＝０．０２０１］群の両方が、水よりも尿への嗅覚行為により多くの時間を費やしたことを明らかにした（図３１）。尿への嗅覚行為に費やした時間について、クラスカルワリス非パラメータ分析は、処置の効果を明らかにしなかった［ｄｆ＝４，Ｐ＝０．３２９３］。
マンホイットニーのＵ検定は、対照［マンホイットニーＵ値＝７，Ｐ＝０．０１２３］及びビヒクルＭＩＡ［マンホイットニーＵ値＝５７；Ｐ＝０．０２０１］群の両方が、水よりも尿への嗅覚行為により多くの時間を費やしたことを明らかにした（図３１）。尿への嗅覚行為に費やした時間について、クラスカルワリス非パラメータ分析は、処置の効果を明らかにしなかった［ｄｆ＝４，Ｐ＝０．３２９３］。
結論
ＭＲＸ００６による慢性処置は、雌の尿への嗅覚行為試験でのＭＩＡマウスにおけるうつ病様行動に影響しない。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、雌の尿への嗅覚行為試験でのＭＩＡマウスにおけるうつ病様行動に影響しない。
実施例３ｆ−ｉｎ ｖｉｖｏ腸運動アッセイ
論拠
ＭＩＡモデルは、腸バリア機能の変化をもたらすことが報告されている。そのため、生物学的製剤による慢性処置が腸運動を変化させるか否かを確定することが重要であった。
論拠
ＭＩＡモデルは、腸バリア機能の変化をもたらすことが報告されている。そのため、生物学的製剤による慢性処置が腸運動を変化させるか否かを確定することが重要であった。
方法
マウスを試験の開始の前に単独で部屋に入れた。マウスに非吸収性着色染料（カーマインレッド）で経口強制飼養した。最初に着色された糞便ボーラスの排泄時間を記録し、腸全体の蠕動運動の指標として使用した。
マウスを試験の開始の前に単独で部屋に入れた。マウスに非吸収性着色染料（カーマインレッド）で経口強制飼養した。最初に着色された糞便ボーラスの排泄時間を記録し、腸全体の蠕動運動の指標として使用した。
結果
スチューデントｔ検定分析は、ビヒクルＭＩＡ群が、対照群（ｔ（２２）＝０．００６，Ｐ＝０．９９５０）と比較したとき変化した腸運動（より少ない時間で検出された赤色ペレット）を示さなかったことを明らかにした。運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，５０）＝０．９９；Ｐ＝０．４０４、図３２］。
スチューデントｔ検定分析は、ビヒクルＭＩＡ群が、対照群（ｔ（２２）＝０．００６，Ｐ＝０．９９５０）と比較したとき変化した腸運動（より少ない時間で検出された赤色ペレット）を示さなかったことを明らかにした。運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，５０）＝０．９９；Ｐ＝０．４０４、図３２］。
結論
この実験において、ビヒクルＭＩＡ群は、対照と比較して変化した腸運動を示さなかった。ＭＲＸ００６による慢性処置は、対照またはビヒクルＭＩＡ群と比較して腸運動に影響しなかった。
この実験において、ビヒクルＭＩＡ群は、対照と比較して変化した腸運動を示さなかった。ＭＲＸ００６による慢性処置は、対照またはビヒクルＭＩＡ群と比較して腸運動に影響しなかった。
実施例３ｇ−器官重量及び結腸長
結腸長では、スチューデントｔ検定は、ビヒクルＭＩＡ群及び対照群間の有意差を何ら明らかにしなかった（ｔ（２１）＝１．２６，Ｐ＝０．２６）。結腸長のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４９）＝０．６９，Ｐ＝０．５７；図３３Ａ］。体重の百分率としての盲腸重量では、スチューデントｔ検定は、ビヒクルＭＩＡ群及び対照群間の有意差を明らかにしなかった（ｔ（２２）＝０．５６，Ｐ＝０．５８）。ＡＮＯＶＡは、盲腸重量に対して処置の有意な効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４８）＝０．８４，Ｐ＝０．４８、図３３Ｂ］。体重の百分率としての脾臓重量では、スチューデントｔ検定は、ビヒクルＭＩＡ群及び対照群間の有意差を明らかにしなかった（ｔ（２２）＝０．６４，Ｐ＝０．５３）。ＡＮＯＶＡは、脾臓重量に対して処置の有意な効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４８）＝２．２５，Ｐ＝０．０９、図３３Ｃ）。
結腸長では、スチューデントｔ検定は、ビヒクルＭＩＡ群及び対照群間の有意差を何ら明らかにしなかった（ｔ（２１）＝１．２６，Ｐ＝０．２６）。結腸長のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４９）＝０．６９，Ｐ＝０．５７；図３３Ａ］。体重の百分率としての盲腸重量では、スチューデントｔ検定は、ビヒクルＭＩＡ群及び対照群間の有意差を明らかにしなかった（ｔ（２２）＝０．５６，Ｐ＝０．５８）。ＡＮＯＶＡは、盲腸重量に対して処置の有意な効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４８）＝０．８４，Ｐ＝０．４８、図３３Ｂ］。体重の百分率としての脾臓重量では、スチューデントｔ検定は、ビヒクルＭＩＡ群及び対照群間の有意差を明らかにしなかった（ｔ（２２）＝０．６４，Ｐ＝０．５３）。ＡＮＯＶＡは、脾臓重量に対して処置の有意な効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，４８）＝２．２５，Ｐ＝０．０９、図３３Ｃ）。
結論
ＭＲＸ００６による処置は、自閉症のＭＩＡマウスモデルにおける結腸長または器官重量に影響しない。
ＭＲＸ００６による処置は、自閉症のＭＩＡマウスモデルにおける結腸長または器官重量に影響しない。
ＭＩＡマウスモデルからの結果の考察
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける大理石埋め込み試験において観察された表現型を反転することができた。ＭＲＸ００６による慢性処置は、埋め込まれた大理石の数を低減することができ、常同行動の低減を示唆した。さらに、ＭＲＸ００６による慢性処置は、オープンフィールドアリーナにおける内側及び外側ゾーンにおいて費やされた時間に対して何ら効果を有することなく、移動した距離を減少させた。結果として、ＭＲＸ００６による処置は、オープンフィールドアリーナへの暴露によって引き起こされるストレス−誘発の自発運動を減衰し得る。食べ物の社会的伝達試験及び雌の尿への嗅覚行為試験において処置の有意な効果が観察されず、ＭＩＡマウスモデルにおける社会的及びうつ病様行動での直接観察可能な効果がないことを示唆した。試験した生存生物学的製剤は、腸運動または透過性に影響しなかった。そのため、ＭＩＡモデルは、常同様、反復及び不安行動を評価するのに有用であることを証明したが、自閉症スペクトラム障害に関連する多数の他の症状を再現しなかった。にもかかわらず、結果は、ＭＲＸ００６による慢性処置が、自閉症スペクトラム障害の症状に良い影響を及ぼし得ることを示す。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける大理石埋め込み試験において観察された表現型を反転することができた。ＭＲＸ００６による慢性処置は、埋め込まれた大理石の数を低減することができ、常同行動の低減を示唆した。さらに、ＭＲＸ００６による慢性処置は、オープンフィールドアリーナにおける内側及び外側ゾーンにおいて費やされた時間に対して何ら効果を有することなく、移動した距離を減少させた。結果として、ＭＲＸ００６による処置は、オープンフィールドアリーナへの暴露によって引き起こされるストレス−誘発の自発運動を減衰し得る。食べ物の社会的伝達試験及び雌の尿への嗅覚行為試験において処置の有意な効果が観察されず、ＭＩＡマウスモデルにおける社会的及びうつ病様行動での直接観察可能な効果がないことを示唆した。試験した生存生物学的製剤は、腸運動または透過性に影響しなかった。そのため、ＭＩＡモデルは、常同様、反復及び不安行動を評価するのに有用であることを証明したが、自閉症スペクトラム障害に関連する多数の他の症状を再現しなかった。にもかかわらず、結果は、ＭＲＸ００６による慢性処置が、自閉症スペクトラム障害の症状に良い影響を及ぼし得ることを示す。
自閉症スペクトラム障害の処置におけるＭＲＸ００６についての全体的な結論
ＭＲＸ００６は、ＢＴＢＲ及びＭＩＡの両方のマウスモデルにおける常同及び不安様行動の処置において有効であることが示された。自閉症のマウスモデルにおける行動的及び生物学的表現型を反転する治療が、ヒト疾患に対して有効であることが予期される。
ＭＲＸ００６は、ＢＴＢＲ及びＭＩＡの両方のマウスモデルにおける常同及び不安様行動の処置において有効であることが示された。自閉症のマウスモデルにおける行動的及び生物学的表現型を反転する治療が、ヒト疾患に対して有効であることが予期される。
自閉症スペクトラム障害の処置の医薬品の臨床開発におけるＥＭＡガイドラインは、疾患の異質性に起因して、単一の化合物によって全ての中核症状に有意な効果を達成することができない場合があること、そのため、少なくとも１つの中核症状において短期間の効能が実証されなければならないことを記述している。ＭＲＸ００６生存生物学的製剤は、自閉症スペクトラム障害の少なくとも１つの中核症状の有効な処置を示しており、そのため、当該製剤及び関連するＢｌａｕｔｉａ及びＢ．ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株は、ヒト疾患に対して有効であることが予期される。同様に、他の中枢神経系障害または状態は、複数の異なる症状を有する複合的な病状を示し、承認された処置がほとんどない。そのため、有効な処置が、中枢神経系障害または状態の全ての症状を処置する必要はないことが理解される。処置は、中枢神経系障害または状態に関連する症状のうちの１つを処置すれば、治療的に有用であるとされる。
実施例４−ＢＴＢＲマウスにおける循環サイトカインの測定
方法及び結果
血漿を実験の最後に各動物から選択日に体幹血液から収集した。循環サイトカインを、市販の電気化学発光多重システム（ＭＳＤ，Ｇａｌｔｈｅｒｓｂｅｒｇ，ＭＳＤ，ＵＳＡ）を使用してビヒクル及びＭＲＸ００６群からの血漿サンプルにおいて評価した。以下のサイトカイン：ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γについてアッセイした。多重分析は、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２１及びＩＬ−２３のレベルが、ビヒクル処置動物及びＭＲＸ００６処置動物の両方において検出限界を下回ったことを明らかにした。循環ＴＮＦ−αでは、スチューデントｔ検定は、ＭＲＸ００６による処置の有意な効果を明らかにしなかった（ｔ（２１）＝０．４２６４，Ｐ＝０．６７４２、図３４Ａ）。循環ＩＦＮ−では、スチューデント検定は、ＭＲＸ００６による処置の有意な効果を明らかにしなかった（ｔ（１７）＝０．４１０３，Ｐ＝０．６８６７、図３４Ｂ）。循環ＩＬ−６では、スチューデントｔ検定は、ＭＲＸ００６による処置の有意な効果を明らかにしなかった（ｔ（１１）＝０．０２０，Ｐ＝０．９８、図３４Ｃ）。循環ＩＬ−１０では、ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＩＬ−１０レベルの有意でない増加を引き起こす（ｔ（１３）＝１．３９６，Ｐ＝０．１８６１、図３４Ｄ）。
方法及び結果
血漿を実験の最後に各動物から選択日に体幹血液から収集した。循環サイトカインを、市販の電気化学発光多重システム（ＭＳＤ，Ｇａｌｔｈｅｒｓｂｅｒｇ，ＭＳＤ，ＵＳＡ）を使用してビヒクル及びＭＲＸ００６群からの血漿サンプルにおいて評価した。以下のサイトカイン：ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γについてアッセイした。多重分析は、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２１及びＩＬ−２３のレベルが、ビヒクル処置動物及びＭＲＸ００６処置動物の両方において検出限界を下回ったことを明らかにした。循環ＴＮＦ−αでは、スチューデントｔ検定は、ＭＲＸ００６による処置の有意な効果を明らかにしなかった（ｔ（２１）＝０．４２６４，Ｐ＝０．６７４２、図３４Ａ）。循環ＩＦＮ−では、スチューデント検定は、ＭＲＸ００６による処置の有意な効果を明らかにしなかった（ｔ（１７）＝０．４１０３，Ｐ＝０．６８６７、図３４Ｂ）。循環ＩＬ−６では、スチューデントｔ検定は、ＭＲＸ００６による処置の有意な効果を明らかにしなかった（ｔ（１１）＝０．０２０，Ｐ＝０．９８、図３４Ｃ）。循環ＩＬ−１０では、ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＩＬ−１０レベルの有意でない増加を引き起こす（ｔ（１３）＝１．３９６，Ｐ＝０．１８６１、図３４Ｄ）。
結論
循環サイトカイン濃度を制御する観点ではＭＲＸ００６の有意な効果はなかったが、生存生物学的製剤による処置後に循環ＩＬ−１０の増加について明らかな有意でない傾向があった。かかる結果は、ＭＲＸ００６が免疫制御性を保有し、抗炎症性サイトカインの産生を増加させ得ることを示唆している。多重アッセイをベースの非刺激サイトカイン濃度を有する血漿サンプルにおいて実施したが、ＭＲＸ００６が刺激条件下でＩＬ−１０及び他のサイトカインを調節することが可能であるか否かを評価することは興味深いことである。
循環サイトカイン濃度を制御する観点ではＭＲＸ００６の有意な効果はなかったが、生存生物学的製剤による処置後に循環ＩＬ−１０の増加について明らかな有意でない傾向があった。かかる結果は、ＭＲＸ００６が免疫制御性を保有し、抗炎症性サイトカインの産生を増加させ得ることを示唆している。多重アッセイをベースの非刺激サイトカイン濃度を有する血漿サンプルにおいて実施したが、ＭＲＸ００６が刺激条件下でＩＬ−１０及び他のサイトカインを調節することが可能であるか否かを評価することは興味深いことである。
実施例５−Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける中心及び周辺オキシトシンレベルへのＭＲＸ００６による亜慢性処置の効果を評価する
細菌株を上記実施例に概説されているように調製及び投与した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、それぞれ１０〜１２マウスを有する７つの実験処置群において６日間生存生物学的製剤で処置した。その後、視床下部をマウスから切断し、視床下部におけるオキシトシンのレベルを放射免疫測定（ＲＩＡ）によって検出し、また、血漿におけるオキシトシンのレベルをＲＩＡによって検出した。さらに、オキシトシン受容体、インターロイキン及び他の炎症マーカー、ならびにバソプレシンホルモンのレベルをＲＩＡ及び他の分析方法によって検出した。
細菌株を上記実施例に概説されているように調製及び投与した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、それぞれ１０〜１２マウスを有する７つの実験処置群において６日間生存生物学的製剤で処置した。その後、視床下部をマウスから切断し、視床下部におけるオキシトシンのレベルを放射免疫測定（ＲＩＡ）によって検出し、また、血漿におけるオキシトシンのレベルをＲＩＡによって検出した。さらに、オキシトシン受容体、インターロイキン及び他の炎症マーカー、ならびにバソプレシンホルモンのレベルをＲＩＡ及び他の分析方法によって検出した。
実施例６−安定性試験
本明細書に記載されている少なくとも１つの細菌株を含有する本明細書に記載されている組成物を２５℃または４℃で密閉容器に保存し、当該容器を３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％または９５％の相対湿度を有する雰囲気に置く。１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年または３年後、細菌株の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％が、標準プロトコルによって決定されるコロニー形成単位で測定されるように残存する。
本明細書に記載されている少なくとも１つの細菌株を含有する本明細書に記載されている組成物を２５℃または４℃で密閉容器に保存し、当該容器を３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％または９５％の相対湿度を有する雰囲気に置く。１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年または３年後、細菌株の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％が、標準プロトコルによって決定されるコロニー形成単位で測定されるように残存する。
実施例７−ＭＩＡマウスモデルにおける別の生存生物学的製剤の投与
実施例７ａ−ＭＩＡマウスモデルにおける材料及び方法
この実施例において使用されるマウス、生存生物学的製剤投与及び糞便収集は、上記の実施例３において使用したものと同一である。
実施例７ａ−ＭＩＡマウスモデルにおける材料及び方法
この実施例において使用されるマウス、生存生物学的製剤投与及び糞便収集は、上記の実施例３において使用したものと同一である。
株
ＭＲＸ００８：受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ。
ＭＲＸ００８：受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ。
投与スケジュール
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
実験設計及び方法
マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００８またはビヒクルによる投薬。行動バッテリーを以下の順序で行った：５週目に大理石埋め込み試験；６週目に食べ物の嗜好の社会的伝達試験及び８週目に強制水泳試験。カーマインレッドの胃腸運動アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、７週目及び８週目の間に尾部出血が起こった。最後に、９週目で、マウスを殺処分して脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ ｖｉｖｏ測定をした。
マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００８またはビヒクルによる投薬。行動バッテリーを以下の順序で行った：５週目に大理石埋め込み試験；６週目に食べ物の嗜好の社会的伝達試験及び８週目に強制水泳試験。カーマインレッドの胃腸運動アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、７週目及び８週目の間に尾部出血が起こった。最後に、９週目で、マウスを殺処分して脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ ｖｉｖｏ測定をした。
ＭＩＡモデルにおける生存生物学的製剤処置の、常同、社会的及びうつ病様行動への影響を、胃腸パラメータ（透過性及び運動性）と併せて、以下の実施例において概説する。
上記の表において列挙されている群２は、母体免疫活性化マウスを表し、母親を妊娠の間にポリ（Ｉ：Ｃ）によって処置した。これらのマウスは、対照マウス（群１）（この対照では、確実に、ポリ（Ｉ：Ｃ）投与により、母親マウス子孫において予期される行動上の症状が引き起こされた）と比較して自閉症スペクトラム障害に関連する表現型を示すことが予期され得た。自閉症スペクトラム障害の行動上の症状への処置の任意の効果が、群２及び群３の間の差によって確認され得た。
グラフ設計及び統計的分析
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００８を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００８を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
実施例７ｂ−常同行動のアセスメント−大理石埋め込み試験
論拠及び方法
上記の実施例３ｂを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例３ｂを参照されたい。
結果
対照群とビヒクルＭＩＡ群との間のスチューデントｔ検定分析により、ビヒクルＭＩＡマウスでは、対照群と比較して、より多くの大理石が埋め込まれたことを明らかにした（ｔ（１９）＝３．００，Ｐ＝０．００７；図３５）。埋め込まれた大理石の数のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにした［Ｆ（３，４２）＝６．３７，Ｐ＝０．００１］。ＭＲＸ００８による慢性処置は、ビヒクルＭＩＡ群と比較して埋め込まれた大理石の数の低減を示した。
対照群とビヒクルＭＩＡ群との間のスチューデントｔ検定分析により、ビヒクルＭＩＡマウスでは、対照群と比較して、より多くの大理石が埋め込まれたことを明らかにした（ｔ（１９）＝３．００，Ｐ＝０．００７；図３５）。埋め込まれた大理石の数のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにした［Ｆ（３，４２）＝６．３７，Ｐ＝０．００１］。ＭＲＸ００８による慢性処置は、ビヒクルＭＩＡ群と比較して埋め込まれた大理石の数の低減を示した。
結論
ビヒクルＭＩＡ群では、対照群よりも有意に多くの大理石が埋め込まれたことを示し、これは、ＭＩＡモデルが、マウスにおいて自閉症スペクトラム障害様症状を成功裏に誘発したことを示している。ＭＲＸ００８による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける反復、強迫及び不安行動の低減の傾向がある。
ビヒクルＭＩＡ群では、対照群よりも有意に多くの大理石が埋め込まれたことを示し、これは、ＭＩＡモデルが、マウスにおいて自閉症スペクトラム障害様症状を成功裏に誘発したことを示している。ＭＲＸ００８による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける反復、強迫及び不安行動の低減の傾向がある。
実施例７ｃ−社会的行動のアセスメント−食べ物の嗜好の社会的伝達
論拠及び方法
上記の実施例３ｃを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例３ｃを参照されたい。
結果
デモンストレーターの手掛かりの食餌の嗜好のＡＮＯＶＡにより、オブザーバーが、ビヒクルまたはＭＲＸ００８の投与に関係なく、デモンストレーターの相互作用の直後（Ｔ０）（Ｆ（３，３４）＝０．３８，Ｐ＝０．７７；図３６Ａ）または２４時間後（Ｆ（３，３４）＝０．８５，Ｐ＝０．４８；図３６Ｂ）、食餌の選択肢に曝されたときに有意差がないことを明らかにした。
デモンストレーターの手掛かりの食餌の嗜好のＡＮＯＶＡにより、オブザーバーが、ビヒクルまたはＭＲＸ００８の投与に関係なく、デモンストレーターの相互作用の直後（Ｔ０）（Ｆ（３，３４）＝０．３８，Ｐ＝０．７７；図３６Ａ）または２４時間後（Ｆ（３，３４）＝０．８５，Ｐ＝０．４８；図３６Ｂ）、食餌の選択肢に曝されたときに有意差がないことを明らかにした。
結論
ビヒクルＭＩＡ群は、社会的伝達の食べ物の嗜好の低減を示さず（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して食餌の嗜好の変化を示さなかった）、ＭＩＡモデルが社交性の低下の表現型を誘発しないことを示唆した。したがって、ＭＩＡマウスモデルを使用して社交性に対するＭＲＸ００８による慢性処置の効果を決定することはできない。
ビヒクルＭＩＡ群は、社会的伝達の食べ物の嗜好の低減を示さず（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して食餌の嗜好の変化を示さなかった）、ＭＩＡモデルが社交性の低下の表現型を誘発しないことを示唆した。したがって、ＭＩＡマウスモデルを使用して社交性に対するＭＲＸ００８による慢性処置の効果を決定することはできない。
実施例７ｄ−うつ病様行動のアセスメント−強制水泳試験
論拠
強制水泳試験（ＦＳＴ）は、抗うつ活動を評価するために最も広く使用されている実験的パラダイムである（［５７］）。この試験において、マウスに６分間強制して水泳させ、スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。ナイーブ動物は、不動の浮遊姿勢に適応する前に水泳、上昇及び飛び込みの形態で逃避行動を示すであろう。不動の持続時間は、行動の断念を示している。抗うつ薬は、この試験において、不動で費やした時間を減少させる。
論拠
強制水泳試験（ＦＳＴ）は、抗うつ活動を評価するために最も広く使用されている実験的パラダイムである（［５７］）。この試験において、マウスに６分間強制して水泳させ、スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。ナイーブ動物は、不動の浮遊姿勢に適応する前に水泳、上昇及び飛び込みの形態で逃避行動を示すであろう。不動の持続時間は、行動の断念を示している。抗うつ薬は、この試験において、不動で費やした時間を減少させる。
方法
マウスに、１７ｃｍの深さまで２３〜２５℃の水道水で満たしたガラスシリンダ（２４×２１ｃｍ）において６分間強制して水泳させた。ＦＳＴを天井カメラからテープに録画した。スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。
マウスに、１７ｃｍの深さまで２３〜２５℃の水道水で満たしたガラスシリンダ（２４×２１ｃｍ）において６分間強制して水泳させた。ＦＳＴを天井カメラからテープに録画した。スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。
結果
スチューデントｔ検定分析は、対照群及びビヒクルＭＩＡ群間の不動時間の有意差がないことを明らかにした（ｔ＝０．８９６８ ｄｆ＝２０；０．３８０５）。不動時間のＡＮＯＶＡは、ＭＲＸ００８による処置の効果を明らかにしなかったが、ＭＲＸ００８の投与後に不動で費やした時間の低減の僅かな傾向があるようである［Ｆ（３，４２）＝１．８０３；Ｐ＝０．１６２５；図３７］。
スチューデントｔ検定分析は、対照群及びビヒクルＭＩＡ群間の不動時間の有意差がないことを明らかにした（ｔ＝０．８９６８ ｄｆ＝２０；０．３８０５）。不動時間のＡＮＯＶＡは、ＭＲＸ００８による処置の効果を明らかにしなかったが、ＭＲＸ００８の投与後に不動で費やした時間の低減の僅かな傾向があるようである［Ｆ（３，４２）＝１．８０３；Ｐ＝０．１６２５；図３７］。
結論
ビヒクルＭＩＡ群は、強制水泳試験における不動時間の増加を示さず（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して不動時間の変化を示さなかった）、ＭＩＡモデルはうつ病様症状を増加させなかったことを示唆した。したがって、ＭＩＡマウスモデルを使用してうつ病様行動に対するＭＲＸ００８による慢性処置の効果を決定することはできない。
ビヒクルＭＩＡ群は、強制水泳試験における不動時間の増加を示さず（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して不動時間の変化を示さなかった）、ＭＩＡモデルはうつ病様症状を増加させなかったことを示唆した。したがって、ＭＩＡマウスモデルを使用してうつ病様行動に対するＭＲＸ００８による慢性処置の効果を決定することはできない。
実施例７ｅ−ｉｎ ｖｉｖｏ腸透過性アッセイ
論拠
ＭＩＡモデルは、腸バリア機能の変化をもたらすことが報告されている。そのため、生物学的製剤による慢性処置が腸透過性に影響するか否かを確定することが重要であった。
論拠
ＭＩＡモデルは、腸バリア機能の変化をもたらすことが報告されている。そのため、生物学的製剤による慢性処置が腸透過性に影響するか否かを確定することが重要であった。
方法
試験マウスを単一のケージに入れ、食餌を一晩除去した。翌日（９ａｍ頃）、マウスにＦＩＴＣデキストラン（フルオレセイン−イソチオシアネート；ＭＷ：４ｋＤａ、Ｓｉｇｍａ；濃度：ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、６００ｍｇ／動物（ｋｇ）の８０ｍｇ／ｍｌ ＦＩＴＣ）を経口胃管栄養法によって投与した。ＦＩＴＣ投与の２時間後、尾部血液からの１００μｌの血液サンプルをヘパリンコーティングした毛細管において収集し、琥珀色のエッペンドルフに移し、氷上に置いた。サンプルを３５００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿を吸引し、サンプルを−８０℃において長期保存で保存した。
試験マウスを単一のケージに入れ、食餌を一晩除去した。翌日（９ａｍ頃）、マウスにＦＩＴＣデキストラン（フルオレセイン−イソチオシアネート；ＭＷ：４ｋＤａ、Ｓｉｇｍａ；濃度：ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、６００ｍｇ／動物（ｋｇ）の８０ｍｇ／ｍｌ ＦＩＴＣ）を経口胃管栄養法によって投与した。ＦＩＴＣ投与の２時間後、尾部血液からの１００μｌの血液サンプルをヘパリンコーティングした毛細管において収集し、琥珀色のエッペンドルフに移し、氷上に置いた。サンプルを３５００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿を吸引し、サンプルを−８０℃において長期保存で保存した。
希釈されていない血漿を使用してＦＩＴＣ濃度を定量化した。２５μｌのＦＩＴＣを３８４ウェルプレートにおいて２部ピペッティングした（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ ｏｎｅ）。ＦＩＴＣを４９０ｎｍ〜５２０ｎｍの範囲の間でＶｉｃｔｏｒ分光計によって測定した。標準曲線では、段階希釈のＦＩＴＣをＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で調製した。
また、９週目でのマウスの選択後、回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ ｖｉｖｏ測定を実施する。
結果
スチューデントｔ検定の分析は、対照群とＭＩＡビヒクル群との間に差がないことを明らかにした（ｔ（２０）＝０．５６，Ｐ＝０．５８；図３８）。ＦＩＴＣ濃度のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３９）＝２．２３，Ｐ＝０．０８］。
スチューデントｔ検定の分析は、対照群とＭＩＡビヒクル群との間に差がないことを明らかにした（ｔ（２０）＝０．５６，Ｐ＝０．５８；図３８）。ＦＩＴＣ濃度のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３９）＝２．２３，Ｐ＝０．０８］。
結論
この実験において、ビヒクルＭＩＡ群は、変化した腸透過性を示さなかった（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して透過性の変化を示さなかった）。さらに、ＭＲＸ００８による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける腸透過性に影響しなかった。
この実験において、ビヒクルＭＩＡ群は、変化した腸透過性を示さなかった（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して透過性の変化を示さなかった）。さらに、ＭＲＸ００８による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける腸透過性に影響しなかった。
実施例７ｆ−ｉｎ ｖｉｖｏ腸運動アッセイ
論拠及び方法
上記の実施例３ｆを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例３ｆを参照されたい。
結果
スチューデントｔ検定の分析は、ビヒクルＭＩＡ群が、対照群と比較したとき増加した腸運動（より少ない時間で検出された赤色ペレット）を示したことを明らかにした（ｔ（１９）＝３．００，Ｐ＝０．００７）。運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，３８）＝０．７４，Ｐ＝０．５４；図３９］。
スチューデントｔ検定の分析は、ビヒクルＭＩＡ群が、対照群と比較したとき増加した腸運動（より少ない時間で検出された赤色ペレット）を示したことを明らかにした（ｔ（１９）＝３．００，Ｐ＝０．００７）。運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，３８）＝０．７４，Ｐ＝０．５４；図３９］。
結論
この実験において、ビヒクルＭＩＡ群は、対照と比較して増加した腸運動を示した。ＭＲＸ００８による慢性処置は、対照と比較して腸運動に影響しなかった。
この実験において、ビヒクルＭＩＡ群は、対照と比較して増加した腸運動を示した。ＭＲＸ００８による慢性処置は、対照と比較して腸運動に影響しなかった。
実施例８−ＢＴＢＲマウスモデルにおける別の生存生物学的製剤の投与
実施例８ａ−ＢＴＢＲマウスモデルにおける材料及び方法
この実施例において使用されるマウス、生存生物学的製剤投与及び糞便収集は、上記の実施例２において使用したものと同一である。
実施例８ａ−ＢＴＢＲマウスモデルにおける材料及び方法
この実施例において使用されるマウス、生存生物学的製剤投与及び糞便収集は、上記の実施例２において使用したものと同一である。
株
ＭＲＸ００８：Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌。
ＭＲＸ００８：Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されている細菌。
投与スケジュール
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
実験設計及び方法
上記で概説している、マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００８による投薬。最初の投薬は、社交性、不安、常同思考及び認知の試験を包含する行動実験の前に３週間行った。行動バッテリーを以下の順序で行った：４週目に大理石埋め込み試験；５週目に高架式十字迷路；６週目にオープンフィールド及び新規対象認識試験、ならびに食べ物の嗜好の社会的伝達試験；７週目で雌の尿への嗅覚行為及び社会的相互作用試験、ならびに９週目で強制水泳試験。カーマインレッドの胃腸運動アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、８週目及び９週目の間に尾部出血が起こった。最後に、１０〜１１週目で、マウスを殺処分して脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ ｖｉｖｏ測定をした。
上記で概説している、マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００８による投薬。最初の投薬は、社交性、不安、常同思考及び認知の試験を包含する行動実験の前に３週間行った。行動バッテリーを以下の順序で行った：４週目に大理石埋め込み試験；５週目に高架式十字迷路；６週目にオープンフィールド及び新規対象認識試験、ならびに食べ物の嗜好の社会的伝達試験；７週目で雌の尿への嗅覚行為及び社会的相互作用試験、ならびに９週目で強制水泳試験。カーマインレッドの胃腸運動アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、８週目及び９週目の間に尾部出血が起こった。最後に、１０〜１１週目で、マウスを殺処分して脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ ｖｉｖｏ測定をした。
ＢＴＢＲモデルにおける生存生物学的製剤処置の、常同、社会的及びうつ病様行動への影響を、胃腸パラメータ（透過性及び運動性）と併せて、以下の実施例において概説する。
上記の表において列挙されている群１は、自閉症スペクトラム障害に関連する表現型を示すことが予期される対照ＢＴＢＲマウスを表している。自閉症スペクトラム障害の行動上の症状への処置の任意の効果が、群１及び群２の間の差によって確認され得た。
グラフ設計及び統計的分析
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００８群を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ００８群を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
実施例８ｂ−社会的行動のアセスメント−食べ物の嗜好の社会的伝達
論拠
社会的伝達の食べ物の嗜好は、社会的行動を評価するためにマウスにおいて使用される嗅覚記憶の関連試験である。この試験において、オブザーバーマウスは、新規の食餌を最近採ったデモンストレーターマウスと相互作用する。オブザーバーマウスが、デモンストレーターによって採られた食餌と何らかの他の新規の食餌との間での選択肢を提示されるとき、オブザーバーマウスは、デモンストレーターによって採られた食餌をより好むはずである。食餌の嗜好の低減は、社交性の低下を示す。
論拠
社会的伝達の食べ物の嗜好は、社会的行動を評価するためにマウスにおいて使用される嗅覚記憶の関連試験である。この試験において、オブザーバーマウスは、新規の食餌を最近採ったデモンストレーターマウスと相互作用する。オブザーバーマウスが、デモンストレーターによって採られた食餌と何らかの他の新規の食餌との間での選択肢を提示されるとき、オブザーバーマウスは、デモンストレーターによって採られた食餌をより好むはずである。食餌の嗜好の低減は、社交性の低下を示す。
方法
この試験を先に記載されているように実施した（Ｄｅｓｂｏｎｎｅｔ，Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．２０１５）。簡潔には、試験前の１８時間、マウスは食餌を奪われていたが、水は自由に得られた。食餌の選択肢は、接地されたマウス食によって作製された１％の粉砕シナモンまたは２％粉末ココアのいずれかからなった。デモンストレーターマウスは、各ケージからランダムに選択され、尾部には、後の社会的相互作用の際の同定を可能にするために青色マーカーでマーキングした。デモンストレーターの食餌容器を１時間のサンプリングセッションの前後に秤量した。上記試験に含めるには最低限０．２ｇの食餌の消費が必要であった。デモンストレーターマウスを、ケージメイトとの３０分の相互作用期間の間、それぞれのホームケージに戻した。その後、手掛かりの食餌または新規の食餌の嗜好に関してケージメイトを個々に試験した。容器を各選択肢セッションの直前直後に秤量した。観察したマウスを次いでそれぞれのホームケージに戻し、選択肢セッションを２４時間後に繰り返した。試験マウスは、社会的手掛かりとしてのデモンストレーターマウスのシナモンまたはココアの匂いをかぐはずであり、２つの間の選択肢が与えられたとき同じ食餌を優先的に選択する。
この試験を先に記載されているように実施した（Ｄｅｓｂｏｎｎｅｔ，Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．２０１５）。簡潔には、試験前の１８時間、マウスは食餌を奪われていたが、水は自由に得られた。食餌の選択肢は、接地されたマウス食によって作製された１％の粉砕シナモンまたは２％粉末ココアのいずれかからなった。デモンストレーターマウスは、各ケージからランダムに選択され、尾部には、後の社会的相互作用の際の同定を可能にするために青色マーカーでマーキングした。デモンストレーターの食餌容器を１時間のサンプリングセッションの前後に秤量した。上記試験に含めるには最低限０．２ｇの食餌の消費が必要であった。デモンストレーターマウスを、ケージメイトとの３０分の相互作用期間の間、それぞれのホームケージに戻した。その後、手掛かりの食餌または新規の食餌の嗜好に関してケージメイトを個々に試験した。容器を各選択肢セッションの直前直後に秤量した。観察したマウスを次いでそれぞれのホームケージに戻し、選択肢セッションを２４時間後に繰り返した。試験マウスは、社会的手掛かりとしてのデモンストレーターマウスのシナモンまたはココアの匂いをかぐはずであり、２つの間の選択肢が与えられたとき同じ食餌を優先的に選択する。
結果
デモンストレーターの手掛かりの食餌の嗜好のＡＮＯＶＡにより、オブザーバーが、デモンストレーターの相互作用の直後（Ｔ０）（Ｆ（３，３６）＝１．１２３；Ｐ＝０．３５４；図４０Ａ）または２４時間後（Ｆ（３，３８）＝０．１３８；Ｐ＝０．９３６；図４０Ｂ）、食餌の選択肢に曝されたときに有意差がないことを明らかにした。
デモンストレーターの手掛かりの食餌の嗜好のＡＮＯＶＡにより、オブザーバーが、デモンストレーターの相互作用の直後（Ｔ０）（Ｆ（３，３６）＝１．１２３；Ｐ＝０．３５４；図４０Ａ）または２４時間後（Ｆ（３，３８）＝０．１３８；Ｐ＝０．９３６；図４０Ｂ）、食餌の選択肢に曝されたときに有意差がないことを明らかにした。
結論
ＭＲＸ００８による処置は、社会的伝達の食べ物の嗜好試験においてＢＴＢＲマウスの社交性に影響しなかった。
ＭＲＸ００８による処置は、社会的伝達の食べ物の嗜好試験においてＢＴＢＲマウスの社交性に影響しなかった。
実施例８ｃ−社会的行動のアセスメント−強制的な侵入者試験
論拠及び方法
上記の実施例２ｃを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例２ｃを参照されたい。
結果
相互作用時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３６）＝１．９０５；Ｐ＝０．１４６２；図４１］。
相互作用時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３６）＝１．９０５；Ｐ＝０．１４６２；図４１］。
結論
ＭＲＸ００８による処置は、社会的相互作用試験におけるＢＴＢＲマウスの社会的行動に影響しなかった。
ＭＲＸ００８による処置は、社会的相互作用試験におけるＢＴＢＲマウスの社会的行動に影響しなかった。
実施例８ｄ−常同行動のアセスメント−大理石埋め込み試験
論拠及び方法
上記の実施例２ｄを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例２ｄを参照されたい。
結果
埋め込まれた大理石の数のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３９）＝０．８３５；Ｐ＝０．４８３；図４２］が、ＭＲＸ００８による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスによって埋め込まれた大理石の数の低減の傾向を示さない。
埋め込まれた大理石の数のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３９）＝０．８３５；Ｐ＝０．４８３；図４２］が、ＭＲＸ００８による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスによって埋め込まれた大理石の数の低減の傾向を示さない。
結論
ＭＲＸ００８による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける反復、強迫及び不安行動に有意に影響しなかったが、この行動のレベルの低減の傾向を示す。
ＭＲＸ００８による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける反復、強迫及び不安行動に有意に影響しなかったが、この行動のレベルの低減の傾向を示す。
実施例８ｅ−不安様行動のアセスメント−高架式十字迷路
論拠及び方法
上記の実施例２ｆを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例２ｆを参照されたい。
結果
閉鎖アームにおいて費やした時間の百分率のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，３９）＝０．５５６；Ｐ＝０．６４７；図４３Ａ］。ＭＲＸ００８によって処置したマウスは、ビヒクル群と比較して開放アームにおいてより多くの時間を費やしたようである（図４３Ｂ）。これと合致して、ＭＲＸ００８による慢性処置は、ビヒクル群と比較して開放アームへの侵入回数を増加させたようである（図４３Ｄ）。閉鎖アームへの侵入回数のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，３９）＝０．５５６；Ｐ＝０．６４７；図４３Ｃ］。
閉鎖アームにおいて費やした時間の百分率のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，３９）＝０．５５６；Ｐ＝０．６４７；図４３Ａ］。ＭＲＸ００８によって処置したマウスは、ビヒクル群と比較して開放アームにおいてより多くの時間を費やしたようである（図４３Ｂ）。これと合致して、ＭＲＸ００８による慢性処置は、ビヒクル群と比較して開放アームへの侵入回数を増加させたようである（図４３Ｄ）。閉鎖アームへの侵入回数のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，３９）＝０．５５６；Ｐ＝０．６４７；図４３Ｃ］。
結論
ＭＲＸ００８による慢性処置は、高架式十字迷路におけるＢＴＢＲマウスにおける抗不安行動に向かう有意でない傾向を示す。
ＭＲＸ００８による慢性処置は、高架式十字迷路におけるＢＴＢＲマウスにおける抗不安行動に向かう有意でない傾向を示す。
実施例８ｆ−不安様行動のアセスメント−オープンフィールドアリーナ
論拠及び方法
上記の実施例２ｇを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例２ｇを参照されたい。
結果
移動した距離のＡＮＯＶＡは、オープンフィールドアリーナにおける自発運動に対する処置の有意な効果を明らかにしなかったが［Ｆ（３，３７）＝１．３２５；Ｐ＝０．２８２、図４４Ａ］、ＭＲＸ００８は、移動した距離を低減するようであり、ストレス−誘発の自発運動の低減を示唆した。外側ゾーンにおいて費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３７）＝１．５９８；Ｐ＝０．２０８；図４４Ｂ］。推測的な一対比較は、Ｍｒｘ００８による処置が、内側ゾーンにおいて費やした時間を減少させたことを明らかにした［ｔ＝２．３８８ ｄｆ＝１７；Ｐ＝０．０２８８：図４４Ｃ］。
移動した距離のＡＮＯＶＡは、オープンフィールドアリーナにおける自発運動に対する処置の有意な効果を明らかにしなかったが［Ｆ（３，３７）＝１．３２５；Ｐ＝０．２８２、図４４Ａ］、ＭＲＸ００８は、移動した距離を低減するようであり、ストレス−誘発の自発運動の低減を示唆した。外側ゾーンにおいて費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３７）＝１．５９８；Ｐ＝０．２０８；図４４Ｂ］。推測的な一対比較は、Ｍｒｘ００８による処置が、内側ゾーンにおいて費やした時間を減少させたことを明らかにした［ｔ＝２．３８８ ｄｆ＝１７；Ｐ＝０．０２８８：図４４Ｃ］。
結論
ＭＲＸ００８による慢性処置は、ストレス−誘発の自発運動の低減の傾向を示すが、不安様行動に関与する内側ゾーンでの時間の低減を示した。
ＭＲＸ００８による慢性処置は、ストレス−誘発の自発運動の低減の傾向を示すが、不安様行動に関与する内側ゾーンでの時間の低減を示した。
実施例８ｇ−うつ病様行動のアセスメント−強制水泳試験
論拠及び方法
上記の実施例２ｈを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例２ｈを参照されたい。
結果
不動時間のＡＮＯＶＡは、ＦＳＴにおけるＢＴＢＲマウスの不動時間に対する処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３８）＝１．８７９；Ｐ＝０．１５１；図４５］が、ＭＲＸ００８による慢性処置は、不動で費やした時間の低減の傾向を引き起こしており、抗うつ行動を示唆している。
不動時間のＡＮＯＶＡは、ＦＳＴにおけるＢＴＢＲマウスの不動時間に対する処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３８）＝１．８７９；Ｐ＝０．１５１；図４５］が、ＭＲＸ００８による慢性処置は、不動で費やした時間の低減の傾向を引き起こしており、抗うつ行動を示唆している。
結論
ＭＲＸ００８による処置は、処置の抗うつ効果に関与する、強制水泳試験でのＢＴＢＲマウスの不動時間を非有意に低減する。
ＭＲＸ００８による処置は、処置の抗うつ効果に関与する、強制水泳試験でのＢＴＢＲマウスの不動時間を非有意に低減する。
実施例８ｈ−うつ病様行動のアセスメント−雌の尿への嗅覚行為試験
論拠及び方法
上記の実施例２ｉを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例２ｉを参照されたい。
結果
ビヒクル群では、マンホイットニーＵ試験は、水の嗅覚行為で費やした時間と比較して尿への嗅覚行為に費やした時間の有意な増加を明らかにした［ｔ＝２．９７６ ｄｆ＝１８，Ｐ＝０．００８１］。水への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のクラスカルワリス非パラメータ分析は、水の群における処置の効果を明らかにしなかった［カイ二乗：６．３５２；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．０９６］。尿への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のクラスカルワリス非パラメータ分析は、処置の効果を明らかにしなかった［カイ二乗：３．６３９；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．３０３、図４６］。
ビヒクル群では、マンホイットニーＵ試験は、水の嗅覚行為で費やした時間と比較して尿への嗅覚行為に費やした時間の有意な増加を明らかにした［ｔ＝２．９７６ ｄｆ＝１８，Ｐ＝０．００８１］。水への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のクラスカルワリス非パラメータ分析は、水の群における処置の効果を明らかにしなかった［カイ二乗：６．３５２；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．０９６］。尿への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のクラスカルワリス非パラメータ分析は、処置の効果を明らかにしなかった［カイ二乗：３．６３９；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．３０３、図４６］。
結論
ＭＲＸ００８による処置は、ＢＴＢＲマウスにおける尿への嗅覚行為に費やした時間に対する効果を有さなかった。
ＭＲＸ００８による処置は、ＢＴＢＲマウスにおける尿への嗅覚行為に費やした時間に対する効果を有さなかった。
実施例８ｉ−ｉｎ ｖｉｖｏ胃腸運動アッセイ
論拠及び方法
上記の実施例２ｍを参照されたい。
論拠及び方法
上記の実施例２ｍを参照されたい。
結果
運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，３９）＝２．０７２；Ｐ＝０．１２１；図４７］。
運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果がないことを明らかにした［Ｆ（３，３９）＝２．０７２；Ｐ＝０．１２１；図４７］。
結論
ＭＲＸ００８による処置は、腸運動に影響しなかった。
ＭＲＸ００８による処置は、腸運動に影響しなかった。
実施例８ｊ−器官重量及び結腸長
体重の百分率としての器官重量のＡＮＯＶＡは、副腎系［Ｆ（３，３７）＝０．２０８；Ｐ＝０．８９０；図４８Ａ］、脾臓Ｆ（３，３５）＝０．６２９；Ｐ＝０．６０１；図４８Ｂ］または盲腸［Ｆ（３，３７）＝０．８８３；Ｐ＝０．４６０；図４８Ｃ］について処置の効果を明らかにしなかった。結腸長のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３７）＝５．６３５；Ｐ＝０．００３；図４８Ｄ］。
体重の百分率としての器官重量のＡＮＯＶＡは、副腎系［Ｆ（３，３７）＝０．２０８；Ｐ＝０．８９０；図４８Ａ］、脾臓Ｆ（３，３５）＝０．６２９；Ｐ＝０．６０１；図４８Ｂ］または盲腸［Ｆ（３，３７）＝０．８８３；Ｐ＝０．４６０；図４８Ｃ］について処置の効果を明らかにしなかった。結腸長のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３７）＝５．６３５；Ｐ＝０．００３；図４８Ｄ］。
自閉症スペクトラム障害の処置におけるＭＲＸ００８についての全体的な結論
本明細書に開示されている実験は、別のＢｌａｕｔｉａ種（すなわち、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅＭＲＸ００８）の投与が、マウスモデルにおける神経発達障害及び精神神経障害の処置に適用可能であり得るという証拠を示す。特に、ＭＲＸ００８による処置は、潜在的な抗不安効果、ならびに、ＢＴＢＲマウスモデルにおけるそれぞれ高架式十字迷路及び強制水泳試験において抗うつ効果の傾向を示したが、オープンフィールドアリーナアッセイは、ＭＲＸ００８が不安様行動に影響しなかったことを示唆した。また、ＭＲＸ００８は、ＭＩＡ及びＢＴＢＲの両方のマウスモデルにおける大理石埋め込み試験によって示されるように常同、反復及び不安行動を低減し得る。ＭＲＸ００８生物学的製剤による処置は、これらの研究において測定されるいくつかの生理学的パラメータを変化させなかった。
本明細書に開示されている実験は、別のＢｌａｕｔｉａ種（すなわち、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅＭＲＸ００８）の投与が、マウスモデルにおける神経発達障害及び精神神経障害の処置に適用可能であり得るという証拠を示す。特に、ＭＲＸ００８による処置は、潜在的な抗不安効果、ならびに、ＢＴＢＲマウスモデルにおけるそれぞれ高架式十字迷路及び強制水泳試験において抗うつ効果の傾向を示したが、オープンフィールドアリーナアッセイは、ＭＲＸ００８が不安様行動に影響しなかったことを示唆した。また、ＭＲＸ００８は、ＭＩＡ及びＢＴＢＲの両方のマウスモデルにおける大理石埋め込み試験によって示されるように常同、反復及び不安行動を低減し得る。ＭＲＸ００８生物学的製剤による処置は、これらの研究において測定されるいくつかの生理学的パラメータを変化させなかった。
自閉症スペクトラム障害の処置の医薬品の臨床開発におけるＥＭＡガイドラインは、疾患の異質性に起因して、単一の化合物によって全ての中核症状に有意な効果を達成することができない場合があること、そのため、少なくとも１つの中核症状において短期間の効能が実証されなければならないことを記述している。ＭＲＸ００８生存生物学的製剤は、自閉症スペクトラム障害の少なくとも１つの中核症状の有効な処置を示しており、そのため、当該製剤及び関連するＢｌａｕｔｉａ及びＢ．ｗｅｘｌｅｒａｅ株は、ヒト疾患に対して有効であることが予期される。同様に，他の中枢神経系障害または状態は、複数の異なる症状を有する複合的な病状を示し、承認された処置がほとんどない。そのため、有効な処置が、中枢神経系障害または状態の全ての症状を処置する必要はないことが理解される。処置は、中枢神経系障害または状態に関連する症状のうちの１つを処置すれば、治療的に有用であるとされる。
実施例９−Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける中心及び周辺オキシトシンレベルへのＭＲＸ００８による亜慢性処置の効果を評価する
細菌株を上記実施例に概説されているように調製及び投与した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、それぞれ１０〜１２マウスを有する７つの実験処置群において６日間生存生物学的製剤で処置した。その後、視床下部をマウスから切断し、視床下部におけるオキシトシンのレベルを放射免疫測定（ＲＩＡ）によって検出した。また、血漿におけるオキシトシンのレベルをＲＩＡによって検出した。さらに、オキシトシン受容体、インターロイキン及び他の炎症マーカー、ならびにバソプレシンホルモンのレベルをＲＩＡ及び他の分析方法によって検出した。
細菌株を上記実施例に概説されているように調製及び投与した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、それぞれ１０〜１２マウスを有する７つの実験処置群において６日間生存生物学的製剤で処置した。その後、視床下部をマウスから切断し、視床下部におけるオキシトシンのレベルを放射免疫測定（ＲＩＡ）によって検出した。また、血漿におけるオキシトシンのレベルをＲＩＡによって検出した。さらに、オキシトシン受容体、インターロイキン及び他の炎症マーカー、ならびにバソプレシンホルモンのレベルをＲＩＡ及び他の分析方法によって検出した。
実施例１０−ＢＴＢＲマウスの視床下部及び扁桃体におけるオキシトシン、バソプレシン及びこれらのそれぞれの受容体の遺伝子発現レベルに対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果の評価
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスの視床下部におけるオキシトシン及びバソプレシンの遺伝子発現のレベルを増加させる（図４９Ｃ及びＤを参照されたい）。この組織におけるオキシトシン及びバソプレシン受容体のレベルへの効果を図４９Ａ及びＢに示す。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスの視床下部におけるオキシトシン及びバソプレシンの遺伝子発現のレベルを増加させる（図４９Ｃ及びＤを参照されたい）。この組織におけるオキシトシン及びバソプレシン受容体のレベルへの効果を図４９Ａ及びＢに示す。
ＢＴＢＲマウスの扁桃体におけるオキシトシン、バソプレシンまたはこれらのそれぞれの受容体の遺伝子発現のレベルに対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果を図５０に示す。
そのため、ＭＲＸ００６による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスの視床下部におけるバソプレシン及びオキシトシンの発現を増加させる。この印象的な結果は、生存生物学的製剤の投与における脳の化学的変化及び行動変化間の相関を付与する。これは、生存生物学的製剤が、胃腸機能の改善と共に、社会的な、不安様行動及び常同行動の同時変化を伴って、中枢のオキシトシン/バソプレシン系を変化させることが可能であるということを報告した初めての研究である。
実施例１１−Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＴＢＲマウスモデルにおけるＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｓｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与
自閉症スペクトラム障害及び他の神経学的障害のモデルとしてＢＴＢＲマウスを使用した行動実験において、ＰＢＳ及びＬＹＯの両方を投与したＣ５７ＢＬ／６マウスを対照として使用して、ＢＴＢＲマウスモデルが、不安の増加、社会嫌悪の低減、及び常同行動の増加を効果的に実証したことを確認した。このことは、ＡＳＤ関連行動の欠損に対する細菌処置の効果のアセスメントを可能にした。
自閉症スペクトラム障害及び他の神経学的障害のモデルとしてＢＴＢＲマウスを使用した行動実験において、ＰＢＳ及びＬＹＯの両方を投与したＣ５７ＢＬ／６マウスを対照として使用して、ＢＴＢＲマウスモデルが、不安の増加、社会嫌悪の低減、及び常同行動の増加を効果的に実証したことを確認した。このことは、ＡＳＤ関連行動の欠損に対する細菌処置の効果のアセスメントを可能にした。
実施例１１ａ−不安様行動のアセスメント−オープンフィールドアリーナ
論拠及び方法
上記の実施例２ｇを参照されたい。水平活動は、オープンフィールドアリーナにおいてマウスが移動する距離である。垂直活動は、マウスが後肢で立つ事象の数である。これらの行動の頻度が高いほど、運動及び探索の増加すること、及び／または不安レベルが低いことを示す。活動領域の中心エリアにおけるこれらの行動の頻度の増加は、高い探索行動及び低い不安レベルを示す。
論拠及び方法
上記の実施例２ｇを参照されたい。水平活動は、オープンフィールドアリーナにおいてマウスが移動する距離である。垂直活動は、マウスが後肢で立つ事象の数である。これらの行動の頻度が高いほど、運動及び探索の増加すること、及び／または不安レベルが低いことを示す。活動領域の中心エリアにおけるこれらの行動の頻度の増加は、高い探索行動及び低い不安レベルを示す。
ＰＢＳは、ブチレートがＰＢＳに投与されたときのブチレート投与の陰性対照である。ＬＹＯは、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与の陰性対照である。第１分析（図５１Ａ、Ｃ及びＥ）後、Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＴＢＲの両方のモデルにおけるＰＢＳ及びＬＹＯの陰性対照の値を合わせて平均し、第２分析（図５１Ｂ、Ｄ及びＦ）における比較の簡素化を付与する。
結果
水平活動
不安及び／または自閉症関連モデルから予期されるように、ＢＴＢＲマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較して有意に低減した水平活動を示す。ＬＹＯ陰性対照は、ＰＢＳ対照と比較してＣ５７ＢＬ／６マウスにおける水平活動に対する効果を示した。最初の３０分以内でＰＢＳ対照と比較して、ＬＹＯ対照またはブチレートのみで処置したＢＴＢＲマウスは、移動した距離に有意な差がないことを示したが、次の３０分では、ＬＹＯ対照は、ＢＴＢＲマウスが移動した距離を低減した。しかし、細菌株によって処置したマウスは、ＢＴＢＲ対照マウスと比較して移動した距離の有意な増加を示した（図５１Ａ）。
水平活動
不安及び／または自閉症関連モデルから予期されるように、ＢＴＢＲマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較して有意に低減した水平活動を示す。ＬＹＯ陰性対照は、ＰＢＳ対照と比較してＣ５７ＢＬ／６マウスにおける水平活動に対する効果を示した。最初の３０分以内でＰＢＳ対照と比較して、ＬＹＯ対照またはブチレートのみで処置したＢＴＢＲマウスは、移動した距離に有意な差がないことを示したが、次の３０分では、ＬＹＯ対照は、ＢＴＢＲマウスが移動した距離を低減した。しかし、細菌株によって処置したマウスは、ＢＴＢＲ対照マウスと比較して移動した距離の有意な増加を示した（図５１Ａ）。
対照及び実験値間のさらなる比較を付与するために、上記で概説しているように、ＰＢＳ及びＬＹＯ対照の値を第２分析において合わせた。第１分析と同様に、ブチレートの投与は、水平活動に影響しなかった。しかし、細菌株の投与は、ＢＴＢＲモデル対照と比較して水平活動を有意に増加させた（図５１Ｂ）。
垂直活動
ＢＴＢＲマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較して有意に低減した垂直活動（後ろ脚立ち）を示す。ＬＹＯ陰性対照は、ＰＢＳ対照と比較してＣ５７ＢＬ／６マウスにおける垂直活動に対する効果がないことを示した。ＢＴＢＲと比較して、ＰＢＳ対照マウス、ブチレートのみで処置したＢＴＢＲマウスは、後ろ脚立ちの差がないことを示したが、ＬＹＯ対照は、ＢＴＢＲマウスの垂直活動を低減した。しかし、細菌株によって処置したマウスは、ＢＴＢＲ ＬＹＯ対照マウスと比較して垂直活動の有意な増加を示した（図５１Ｃ）。
ＢＴＢＲマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較して有意に低減した垂直活動（後ろ脚立ち）を示す。ＬＹＯ陰性対照は、ＰＢＳ対照と比較してＣ５７ＢＬ／６マウスにおける垂直活動に対する効果がないことを示した。ＢＴＢＲと比較して、ＰＢＳ対照マウス、ブチレートのみで処置したＢＴＢＲマウスは、後ろ脚立ちの差がないことを示したが、ＬＹＯ対照は、ＢＴＢＲマウスの垂直活動を低減した。しかし、細菌株によって処置したマウスは、ＢＴＢＲ ＬＹＯ対照マウスと比較して垂直活動の有意な増加を示した（図５１Ｃ）。
対照及び実験値間のさらなる比較を付与するために、上記で概説しているように、ＰＢＳ及びＬＹＯ対照の値を第２分析において合わせた。第１分析と同様に、ブチレートの投与は、ＢＴＢＲマウスの垂直活動に影響しなかった。しかし、細菌株の投与は、ＢＴＢＲ対照と比較して垂直活動を有意に増加させた（図５１Ｄ）。
最初の５分でオープンフィールドの中心において移動した距離（％）
予期されるように、分析の最初の５分で、ＢＴＢＲマウスが、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較してオープンフィールドアリーナの中心において移動した距離の百分率の増加を示した。これは、ＢＴＢＲマウスが移動した全体距離の低減を反映しており、これは、不安行動の増加、及び、アッセイの最初の５分以内では、不安がより多いほど、ＢＴＢＲマウスが探索期に入るよりもむしろ最初の環境により慣れ親しみ易いという事実を示している（図５１Ｅ）。
予期されるように、分析の最初の５分で、ＢＴＢＲマウスが、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較してオープンフィールドアリーナの中心において移動した距離の百分率の増加を示した。これは、ＢＴＢＲマウスが移動した全体距離の低減を反映しており、これは、不安行動の増加、及び、アッセイの最初の５分以内では、不安がより多いほど、ＢＴＢＲマウスが探索期に入るよりもむしろ最初の環境により慣れ親しみ易いという事実を示している（図５１Ｅ）。
対照及び実験値間のさらなる比較を付与するために、上記で概説しているように、ＰＢＳ及びＬＹＯ対照の値を第２分析において合わせた（図５１Ｆ）。
オープンフィールドアリーナの中心において過ごした時間（％）
分析の全体時間を考慮すると、ＢＴＢＲマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較して活動領域の中心においてに費やした時間の百分率の低減を示す。これは、不安の増加及びＢＴＢＲマウスの水平活動の低減を反映している。ＬＹＯ対照も、ブチレートのみでも、いずれも、活動領域の中心において過ごした時間に影響しなかった。しかし、細菌株の投与は、ＢＴＢＲマウスにおいてＬＹＯ対照と比較して活動領域の中心において過ごした時間の量を有意に増加させた（図５１Ｇ）。
分析の全体時間を考慮すると、ＢＴＢＲマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較して活動領域の中心においてに費やした時間の百分率の低減を示す。これは、不安の増加及びＢＴＢＲマウスの水平活動の低減を反映している。ＬＹＯ対照も、ブチレートのみでも、いずれも、活動領域の中心において過ごした時間に影響しなかった。しかし、細菌株の投与は、ＢＴＢＲマウスにおいてＬＹＯ対照と比較して活動領域の中心において過ごした時間の量を有意に増加させた（図５１Ｇ）。
対照及び実験値間のさらなる比較を付与するために、上記で概説しているように、ＰＢＳ及びＬＹＯ対照の値を第２分析において合わせた。第１のものと同様に、ブチレートの投与は、ＢＴＢＲ対照と比較してフィールドの中心において過ごした時間に影響しなかった。細菌株の投与は、オープンフィールドの中心において過ごした時間の量を増加させた。
結論
Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの組成物による慢性処置は、オープンフィールドアリーナ試験におけるＢＴＢＲマウスモデルにおいて探索活動を増加し不安様行動を低減する。厳密には、ＢＴＢＲマウスモデルへの細菌株の投与は、ＢＴＢＲ対照と比較して、水平垂直活動を増加させ、活動領域の中心において過ごした時間の合計量を増加させた。したがって、この細菌株は、抗不安効果を有し、中枢神経系障害（例えば、自閉症スペクトラム障害）の代表的な、マウスモデルにおける探索行動を改善する。
Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの組成物による慢性処置は、オープンフィールドアリーナ試験におけるＢＴＢＲマウスモデルにおいて探索活動を増加し不安様行動を低減する。厳密には、ＢＴＢＲマウスモデルへの細菌株の投与は、ＢＴＢＲ対照と比較して、水平垂直活動を増加させ、活動領域の中心において過ごした時間の合計量を増加させた。したがって、この細菌株は、抗不安効果を有し、中枢神経系障害（例えば、自閉症スペクトラム障害）の代表的な、マウスモデルにおける探索行動を改善する。
実施例１１ｂ−常同行動のアセスメント−大理石埋め込み試験
論拠及び方法
上記の実施例２ｄを参照されたい。ＰＢＳは、ブチレートの投与の陰性対照である。ＬＹＯは、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株の投与の陰性対照である。第１分析（図５２Ａ）後、Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＴＢＲの両方のモデルにおけるＰＢＳ及びＬＹＯの陰性対照の値を合わせて平均し、第２分析（図５２Ｂ）における比較の簡素化を付与する。
論拠及び方法
上記の実施例２ｄを参照されたい。ＰＢＳは、ブチレートの投与の陰性対照である。ＬＹＯは、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株の投与の陰性対照である。第１分析（図５２Ａ）後、Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＴＢＲの両方のモデルにおけるＰＢＳ及びＬＹＯの陰性対照の値を合わせて平均し、第２分析（図５２Ｂ）における比較の簡素化を付与する。
結果
予期されるように、ＢＴＢＲモデルマウスでは、Ｃ５７ＢＬ／６モデル対照と比較して有意により多くの埋め込まれた大理石を示す反復行動の増加を示した（図５２Ｂ）。ブチレート及び細菌株の投与は、埋め込まれた大理石の数を低減した（図５２Ａ及びＢ）。
予期されるように、ＢＴＢＲモデルマウスでは、Ｃ５７ＢＬ／６モデル対照と比較して有意により多くの埋め込まれた大理石を示す反復行動の増加を示した（図５２Ｂ）。ブチレート及び細菌株の投与は、埋め込まれた大理石の数を低減した（図５２Ａ及びＢ）。
結論
ブチレート及び／または細菌株の投与は、埋め込まれた大理石の数を低減し、不安または常同行動の低減を示している。
ブチレート及び／または細菌株の投与は、埋め込まれた大理石の数を低減し、不安または常同行動の低減を示している。
実施例１１ｃ−常同行動のアセスメント−掘削試験
論拠及び方法
大理石埋め込み試験の論拠と同様に、掘削行動の増加は、反復及び常同行動の増加に相当する。
論拠及び方法
大理石埋め込み試験の論拠と同様に、掘削行動の増加は、反復及び常同行動の増加に相当する。
結果
予期されるように、Ｃ５７ＢＬ／６対照株と比較してＢＴＢＲモデルにおいて掘削に費やされた時間の有意な増加があった（図５３Ａ）。しかし、掘削発作の数は、Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＴＢＲ株間で有意に異ならなかった（図５３Ｂ）。そのため、この分析において反復行動を予防する際の細菌株またはブチレートの役割を評価することはできない。
予期されるように、Ｃ５７ＢＬ／６対照株と比較してＢＴＢＲモデルにおいて掘削に費やされた時間の有意な増加があった（図５３Ａ）。しかし、掘削発作の数は、Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＴＢＲ株間で有意に異ならなかった（図５３Ｂ）。そのため、この分析において反復行動を予防する際の細菌株またはブチレートの役割を評価することはできない。
実施例１１ｄ−常同行動のアセスメント−セルフグルーミング試験
論拠及び方法
上記の実施例２ｅを参照されたい。ＰＢＳは、ブチレートの投与の陰性対照である。ＬＹＯは、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与の陰性対照である。第１分析（図５４Ａ、Ｃ及びＥ）後、Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＴＢＲの両方のモデルにおけるＰＢＳ及びＬＹＯの陰性対照の値を合わせて平均し、第２分析（図５４Ｂ、Ｄ及びＦ）における比較の簡素化を付与する。
論拠及び方法
上記の実施例２ｅを参照されたい。ＰＢＳは、ブチレートの投与の陰性対照である。ＬＹＯは、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与の陰性対照である。第１分析（図５４Ａ、Ｃ及びＥ）後、Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＴＢＲの両方のモデルにおけるＰＢＳ及びＬＹＯの陰性対照の値を合わせて平均し、第２分析（図５４Ｂ、Ｄ及びＦ）における比較の簡素化を付与する。
結果
常同行動についてのＢＴＢＲモデルと合致して、ＢＴＢＲマウスは、ＰＢＳ及びＬＹＯの両方の対照において、Ｃ５７ＢＬ／６マウスモデルと比較して、グルーミングに費やされた時間の増加及びグルーミング発作の数の増加を示した。ブチレートのみの投与は、ＰＢＳ対照と比較して、グルーミングに費やされた時間、グルーミング発作の数、及び発作当たりのグルーミングに費やされた時間の低減を示した。細菌株の投与は、グルーミング発作当たりのグルーミングに費やされた時間を低減した（図５４Ａ、Ｃ及びＥ）。
常同行動についてのＢＴＢＲモデルと合致して、ＢＴＢＲマウスは、ＰＢＳ及びＬＹＯの両方の対照において、Ｃ５７ＢＬ／６マウスモデルと比較して、グルーミングに費やされた時間の増加及びグルーミング発作の数の増加を示した。ブチレートのみの投与は、ＰＢＳ対照と比較して、グルーミングに費やされた時間、グルーミング発作の数、及び発作当たりのグルーミングに費やされた時間の低減を示した。細菌株の投与は、グルーミング発作当たりのグルーミングに費やされた時間を低減した（図５４Ａ、Ｃ及びＥ）。
対照及び実験値間のさらなる比較を付与するために、上記で概説しているように、ＰＢＳ及びＬＹＯ対照の値を第２分析において合わせた。この第２分析は、第１分析の結果と同等の結果を与えた（図５４Ｂ、Ｄ及びＦ）。
結論
ブチレートまたはＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与は、グルーミングの発作当たりのグルーミングに費やされた時間の量を低減する。
ブチレートまたはＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与は、グルーミングの発作当たりのグルーミングに費やされた時間の量を低減する。
実施例１１ｅ−Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ実験の全体的な結論
オープンフィールドアリーナ試験において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａは、ＢＴＢＲマウスの探索行動を有意に改善した。さらに、この細菌株は、これらのマウスの不安様行動を低減した。したがって、この細菌の投与が、自閉症様特徴を示すＢＴＢＲマウスの行動を調節することが明らかである。そのため、これらの細菌が、神経発達及び／または精神神経障害または状態を含めた中枢神経系障害または状態の処置及び／または予防に有用であることが予期される。
オープンフィールドアリーナ試験において、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａは、ＢＴＢＲマウスの探索行動を有意に改善した。さらに、この細菌株は、これらのマウスの不安様行動を低減した。したがって、この細菌の投与が、自閉症様特徴を示すＢＴＢＲマウスの行動を調節することが明らかである。そのため、これらの細菌が、神経発達及び／または精神神経障害または状態を含めた中枢神経系障害または状態の処置及び／または予防に有用であることが予期される。
この細菌株の投与もまた、セルフグルーミング試験におけるグルーミング発作当たりの常同行動を行う時間の量も低減するようである。
実施例１１ｆ−ブチレート実験の全体的な結論
常同行動アッセイからのデータは、中枢神経系障害におけるブチレートについての治療的役割に向けたものである。
常同行動アッセイからのデータは、中枢神経系障害におけるブチレートについての治療的役割に向けたものである。
ブチレートの投与は、ＢＴＢＲ対照と比較して埋め込まれた大理石の数を低減し、平均数をＣ５７ＢＬ／６野生型対照マウスにおいて観察されたものと同様のレベルに戻した。また、ブチレートのみの投与は、ＢＴＢＲ対照と比較して、グルーミングに費やした時間全体及びグルーミング発作の数も低減した。
これらの結果は、動物モデルにおける反復及び常同行動を低減する際にブチレートに関する役割に関して効き目のある兆候を付与する。
実施例１２−ＳＣＦＡ産生健常ラットに対する細菌凍結乾燥物の効果
健常なＨＩＭラットにおけるＳＣＦＡ産生に対するＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株ＤＳＭ１４２９４の凍結乾燥物の慢性投与の効果を研究した。結果を図５５において報告する。実験に関するさらなる詳細は、図の詳細な説明において上記に提供されている。図５５は、ＢＨの投与が、アセテートの有意な増加ならびにブチレート産生を誘発することを示している。
健常なＨＩＭラットにおけるＳＣＦＡ産生に対するＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株ＤＳＭ１４２９４の凍結乾燥物の慢性投与の効果を研究した。結果を図５５において報告する。実験に関するさらなる詳細は、図の詳細な説明において上記に提供されている。図５５は、ＢＨの投与が、アセテートの有意な増加ならびにブチレート産生を誘発することを示している。
実施例１３−ヒト微生物叢関連ラット（ＨＭＡラット）モデルにおいて研究したＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの効能
概要
１６匹の無菌ラット群（対照群における８匹のラット及び処置群における８匹のラットを含む）にヒトＩＢＳ対象からの糞便微生物叢を接種した（ＩＢＳ−ＨＭＡラット）。３つの一連の実験を、３の異なるＩＢＳ患者からの糞便サンプルを使用して実施した。２の他のラット群（ｎ＝１０）に、内臓感受性対照として、健常な対象の糞便サンプルを接種した（ｎ＝２対象、２群の健常−ＨＭＡラット）。これにより、２４匹のＩＢＳ−微生物叢関連ラット（対照）、２４匹のＢｌａｕｔｉｘ処置ＩＢＳ微生物叢関連ラット及び２０匹の健常−微生物叢関連ラットが存在した。次いでＩＢＳ−ＨＭＡラットの半分に本発明によるＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株を含む組成物を２８日間投与した一方で、他の半分の動物には対照溶液を与えた。
概要
１６匹の無菌ラット群（対照群における８匹のラット及び処置群における８匹のラットを含む）にヒトＩＢＳ対象からの糞便微生物叢を接種した（ＩＢＳ−ＨＭＡラット）。３つの一連の実験を、３の異なるＩＢＳ患者からの糞便サンプルを使用して実施した。２の他のラット群（ｎ＝１０）に、内臓感受性対照として、健常な対象の糞便サンプルを接種した（ｎ＝２対象、２群の健常−ＨＭＡラット）。これにより、２４匹のＩＢＳ−微生物叢関連ラット（対照）、２４匹のＢｌａｕｔｉｘ処置ＩＢＳ微生物叢関連ラット及び２０匹の健常−微生物叢関連ラットが存在した。次いでＩＢＳ−ＨＭＡラットの半分に本発明によるＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株を含む組成物を２８日間投与した一方で、他の半分の動物には対照溶液を与えた。
株
Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢＨ）株ＤＳＭ１４２９４。
Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＢＨ）株ＤＳＭ１４２９４。
組成物及び投与
ＢＨ凍結乾燥物を無菌の鉱物溶液中で１０１０細菌／ｍｌの濃度に懸濁した。２ｍｌのこの懸濁液を経口胃管栄養法によってＩＢＳ−ＨＭＡラットにつき毎日２８日間投与した。
ＢＨ凍結乾燥物を無菌の鉱物溶液中で１０１０細菌／ｍｌの濃度に懸濁した。２ｍｌのこの懸濁液を経口胃管栄養法によってＩＢＳ−ＨＭＡラットにつき毎日２８日間投与した。
対照溶液は、ＩＢＳ−ＨＭＡラットの対照群に経口胃管栄養法によって毎日（２ｍｌ／ラット）投与した無菌の鉱物溶液であった。
ラット
無菌雄性Ｆｉｓｈｅｒラット（１０週齢）に、ＩＢＳ対象からのヒト糞便微生物叢を接種した（ＩＢＳ−ＨＭＡラット）。１６匹のラットに同じヒト糞便接種材料を接種した。３つの一連の実験を、３の異なるＩＢＳ対象からの糞便サンプルを用いて実施した。２の他の群の１０匹のラットに、２の健常な対象（正常感受性対照群）からの糞便サンプルを接種した。
無菌雄性Ｆｉｓｈｅｒラット（１０週齢）に、ＩＢＳ対象からのヒト糞便微生物叢を接種した（ＩＢＳ−ＨＭＡラット）。１６匹のラットに同じヒト糞便接種材料を接種した。３つの一連の実験を、３の異なるＩＢＳ対象からの糞便サンプルを用いて実施した。２の他の群の１０匹のラットに、２の健常な対象（正常感受性対照群）からの糞便サンプルを接種した。
研究設計
−１４日目−無菌ラットにヒト糞便微生物叢を接種。
０〜２８日目−経口胃管栄養法による、１日用量のＢＨ凍結乾燥物（アッセイ群）または対照溶液（対照群）
１４〜２２日目の間−電極を腹部内に埋め込む手術（膨張アッセイ用）
２２〜２８日目−膨張試験に関連するストレスを回避するためのラットの適応。
２８日目−膨張アッセイ、ならびに動物を安楽死させてスルフィド及び短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）分析用の盲腸サンプルを収集。
０、１４及び２８日目−微生物分析用の糞便サンプルの収集：ＢＨ集団及び他の共生微生物群の評価のためのｑＰＣＲ、ならびに選択培地及び偏性嫌気性方法を使用した微生物の機能群の計数。
−１４日目−無菌ラットにヒト糞便微生物叢を接種。
０〜２８日目−経口胃管栄養法による、１日用量のＢＨ凍結乾燥物（アッセイ群）または対照溶液（対照群）
１４〜２２日目の間−電極を腹部内に埋め込む手術（膨張アッセイ用）
２２〜２８日目−膨張試験に関連するストレスを回避するためのラットの適応。
２８日目−膨張アッセイ、ならびに動物を安楽死させてスルフィド及び短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）分析用の盲腸サンプルを収集。
０、１４及び２８日目−微生物分析用の糞便サンプルの収集：ＢＨ集団及び他の共生微生物群の評価のためのｑＰＣＲ、ならびに選択培地及び偏性嫌気性方法を使用した微生物の機能群の計数。
結果
図５６は、対照溶液またはＢＨ凍結乾燥物が与えられたＩＢＳ−ＨＭＡラットからの糞便サンプルのＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ集団のｑＰＣＲ分析の結果を表す。ＢＨ凍結乾燥物が与えられたラットにおいて投与期間の最後（２８日目）にＢＨ集団の有意な増加が観察され、結腸におけるＢＨの成功裏の送達が確認される。
図５６は、対照溶液またはＢＨ凍結乾燥物が与えられたＩＢＳ−ＨＭＡラットからの糞便サンプルのＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ集団のｑＰＣＲ分析の結果を表す。ＢＨ凍結乾燥物が与えられたラットにおいて投与期間の最後（２８日目）にＢＨ集団の有意な増加が観察され、結腸におけるＢＨの成功裏の送達が確認される。
図５７は、ＩＢＳ−ＨＭＡラットの盲腸サンプルにおける主な発酵代謝産物である短鎖脂肪酸に対するＢＨの投与の影響について報告する。ＢＨの投与は、アセテート濃度の有意な増加及びブチレート濃度の有意な増加を結果として生じさせた（図５７Ｂ）。
実施例１４−３チャンバー試験における社会的相互作用行動のアセスメント
論拠及び方法
上記の実施例１ｂを参照されたい。この実験において、記録したデータは、最初の５分期間の際及び１０分セッションの際のシリンダの嗅覚行為時間（対象、同属を含む）によって定義される探索時間である。
論拠及び方法
上記の実施例１ｂを参照されたい。この実験において、記録したデータは、最初の５分期間の際及び１０分セッションの際のシリンダの嗅覚行為時間（対象、同属を含む）によって定義される探索時間である。
読み出し：
・試験１、社交性（同属対対象物）：
○社交性の指標：同属の嗅覚行為時間（％）（＞５０％であると：社交性、すなわち、対象と対比して同属に嗜好）
○他の読み出し、探索行動の指標：同属、対象、合計の探索時間
・試験２、社会的新規性の嗜好（新規同属対ファミリアー同属）：
○社会的新規性の嗜好(または嫌悪)の指標:新規同属の嗅覚行為時間（％）
○他の読み出し、探索行動の指標：新規及びファミリアー同属、合計の探索時間
・試験１、社交性（同属対対象物）：
○社交性の指標：同属の嗅覚行為時間（％）（＞５０％であると：社交性、すなわち、対象と対比して同属に嗜好）
○他の読み出し、探索行動の指標：同属、対象、合計の探索時間
・試験２、社会的新規性の嗜好（新規同属対ファミリアー同属）：
○社会的新規性の嗜好(または嫌悪)の指標:新規同属の嗅覚行為時間（％）
○他の読み出し、探索行動の指標：新規及びファミリアー同属、合計の探索時間
結果
試験１：社交性（図５８Ａ）：
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、社交性は、ＰＢＳ及びＬＹＯ処置マウスにおいて異ならなかった。予期されるように、ＢＴＢＲマウスは、ＰＢＳ対照において社交性の低減を示した。予想外に、ＢＴＢＲマウスは、ＬＹＯで処置したとき社交性の改善を示した。しかし、ＢＴＢＲ−ＰＢＳ対Ｃ５７−ＰＢＳ、ＢＴＢＲ−ＬＹＯ対Ｃ５７−ＬＹＯ及びＢＴＢＲ−ＰＢＳ対ＢＴＢＲ−ＬＹＯ間の差は、有意ではない。興味深いことに、ブチレートの投与は、ＢＴＢＲマウスにおける社交性を改善した（ＢＴＢＲ−ＰＢＳ対ＢＴＢＲ−ＢＵＴ間で有意に異なる。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与は、細菌ＰＢＳ対照と比較して社交性を増加させた。
試験１：社交性（図５８Ａ）：
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、社交性は、ＰＢＳ及びＬＹＯ処置マウスにおいて異ならなかった。予期されるように、ＢＴＢＲマウスは、ＰＢＳ対照において社交性の低減を示した。予想外に、ＢＴＢＲマウスは、ＬＹＯで処置したとき社交性の改善を示した。しかし、ＢＴＢＲ−ＰＢＳ対Ｃ５７−ＰＢＳ、ＢＴＢＲ−ＬＹＯ対Ｃ５７−ＬＹＯ及びＢＴＢＲ−ＰＢＳ対ＢＴＢＲ−ＬＹＯ間の差は、有意ではない。興味深いことに、ブチレートの投与は、ＢＴＢＲマウスにおける社交性を改善した（ＢＴＢＲ−ＰＢＳ対ＢＴＢＲ−ＢＵＴ間で有意に異なる。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの投与は、細菌ＰＢＳ対照と比較して社交性を増加させた。
試験２：社会的新規性（図５８Ｂ）：
ＰＢＳで処置したＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて社会的新規性の嗜好があるが、この嗜好は、ＬＹＯ投与Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて低減する（これらの差は有意ではない）。１０分セッションにおいて、ＢＴＢＲマウスは、ＰＢＳまたはＬＹＯのいずれかで処置したときにＣ５７ＢＬ／６マウスと比較して社会的新規性の嗜好の低減を示した。差ＢＴＢＲ−ＰＢＳ対Ｃ５７−ＰＢＳ、ＢＴＢＲ−ＬＹＯ対Ｃ５７ＬＹＯ及びＢＴＢＲ−ＰＢＳ対ＢＴＢＲ−ＬＹＯ間の差は、有意ではない。図５８Ｂに示される結果は、そのため、解釈するのが困難である。
ＰＢＳで処置したＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて社会的新規性の嗜好があるが、この嗜好は、ＬＹＯ投与Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて低減する（これらの差は有意ではない）。１０分セッションにおいて、ＢＴＢＲマウスは、ＰＢＳまたはＬＹＯのいずれかで処置したときにＣ５７ＢＬ／６マウスと比較して社会的新規性の嗜好の低減を示した。差ＢＴＢＲ−ＰＢＳ対Ｃ５７−ＰＢＳ、ＢＴＢＲ−ＬＹＯ対Ｃ５７ＬＹＯ及びＢＴＢＲ−ＰＢＳ対ＢＴＢＲ−ＬＹＯ間の差は、有意ではない。図５８Ｂに示される結果は、そのため、解釈するのが困難である。
自閉症スペクトラム障害の処置におけるＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａについての全体的な結論
本明細書に開示されている実験は、別のＢｌａｕｔｉａ種（すなわち、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ）の投与が、マウスモデルにおける神経発達障害及び精神神経障害の処置に適用可能であり得るという証拠を示す。特に、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａによる処置は、不安様、常同及び反復行動を低減し、マウスにおける社交性を増加させた。
本明細書に開示されている実験は、別のＢｌａｕｔｉａ種（すなわち、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ）の投与が、マウスモデルにおける神経発達障害及び精神神経障害の処置に適用可能であり得るという証拠を示す。特に、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａによる処置は、不安様、常同及び反復行動を低減し、マウスにおける社交性を増加させた。
自閉症スペクトラム障害の処置の医薬品の臨床開発におけるＥＭＡガイドラインは、疾患の異質性に起因して、単一の化合物によって全ての中核症状に有意な効果を達成することができない場合があること、そのため、少なくとも１つの中核症状において短期間の効能が実証されなければならないことを記述している。Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ生存生物学的製剤は、自閉症スペクトラム障害の少なくとも１つの中核症状の有効な処置を示したため、当該製剤及び関連するＢｌａｕｔｉａ及びＢ．ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株は、ヒト疾患に対して有効であることが予期される。同様に,他の中枢神経系障害または状態は、複数の異なる症状を有する複合的な病状を示し、承認された処置がほとんどない。そのため、有効な処置が、中枢神経系障害または状態の全ての症状を処置する必要はないことが理解される。処置は、中枢神経系障害または状態に関連する症状のうちの１つを処置すれば、治療的に有用であるとされる。
実施例１５−視床下部細胞株におけるオキシトシン及びそれぞれの受容体の遺伝子発現レベルに対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果の評価
ＭＲＸ００６による慢性処置は、視床下部細胞株におけるオキシトシン及びその受容体のｍＲＮＡ発現のレベルを有意に増加させる（図５９Ａ及びＢ）。
ＭＲＸ００６による慢性処置は、視床下部細胞株におけるオキシトシン及びその受容体のｍＲＮＡ発現のレベルを有意に増加させる（図５９Ａ及びＢ）。
この印象的な結果は、ＭＲＸ００６の投与における脳の化学的変化及び行動変化間の相関を付与する。これは、生存生物学的製剤が、胃腸機能の改善と共に、社会的な、不安様行動及び常同行動の同時変化を伴って、中枢のオキシトシン系を変化させることが可能であるということを報告した初めての研究である。
実施例１６−ＢＡＬＢｃマウスモデル
実施例１６ａ−ＢＡＬＢｃマウスモデルにおける材料及び方法
マウス
ＢＡＬＢｃ（Ｅｎｖｉｇｏ，ＵＫ）成体雄性マウスを１２時間明暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で群居飼育した；標準の齧歯動物用食餌及び水を自由に得られた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。動物は実験の開始時に８週齢であった。
実施例１６ａ−ＢＡＬＢｃマウスモデルにおける材料及び方法
マウス
ＢＡＬＢｃ（Ｅｎｖｉｇｏ，ＵＫ）成体雄性マウスを１２時間明暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で群居飼育した；標準の齧歯動物用食餌及び水を自由に得られた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。動物は実験の開始時に８週齢であった。
株
ＭＲＸ００６：受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ細菌。
ＭＲＸ００６：受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ細菌。
細菌をグリセロールストックに付与し、嫌気性条件で設備において成長させた。
ＭＲＸ００６投与
動物を動物ユニット内で到着後１週間、保持室に馴化させた。マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクルによる投薬。ＭＲＸ００６（１×１０７〜１×１０９ＣＦＵ）を投与の前にＰＢＳに溶解した。マウスに、６日連続で１５：００から１７：００の間１×１０９ＣＦＵの用量にて経口胃管栄養法（２００μＬ用量）でＭＲＸ００６を投与した。７日目に、動物の頭部を切除し、組織を実験用に採取した。
動物を動物ユニット内で到着後１週間、保持室に馴化させた。マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ００６またはビヒクルによる投薬。ＭＲＸ００６（１×１０７〜１×１０９ＣＦＵ）を投与の前にＰＢＳに溶解した。マウスに、６日連続で１５：００から１７：００の間１×１０９ＣＦＵの用量にて経口胃管栄養法（２００μＬ用量）でＭＲＸ００６を投与した。７日目に、動物の頭部を切除し、組織を実験用に採取した。
組織収集
動物を処置及び試験条件に関してランダムに犠牲にした;サンプリングを午前９時と午後２時３０分との間に行った。体幹血液をカリウムＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）チューブにおいて収集し、４０００ｇで１５分間スピンした。血漿を単離し、−８０℃で保存してさらに分析した。脳を迅速に切除し、切断し、各脳領域を乾燥氷上で急速凍結し、−８０℃で保存してさらに分析した。脾臓を除去し、５ｍＬ ＲＰＭＩ培地（Ｌ−グルタミン及び重炭酸ナトリウムを含む、Ｒ８７５８ Ｓｉｇｍａ＋１０％ ＦＢＳ（Ｆ７５２４、Ｓｉｇｍａ）＋１％ Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｐ４３３３、Ｓｉｇｍａ））において収集し、ｅｘ−ｖｉｖｏ免疫刺激について選択した直後に処理した。腸組織（盲腸に最も近い回腸及び結腸の２ｃｍセグメントを切除し、盲腸から最も遠い１ｃｍの組織を使用した）を腸透過性アッセイ用のＵｓｓｉｎｇチャンバーに設置した。さらなる１ｃｍの回腸及び結腸の組織をタイトジャンクション遺伝子発現分析用に採取した。盲腸を除去し、秤量し、−８０℃で保存してＳＣＦＡ分析した。
動物を処置及び試験条件に関してランダムに犠牲にした;サンプリングを午前９時と午後２時３０分との間に行った。体幹血液をカリウムＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）チューブにおいて収集し、４０００ｇで１５分間スピンした。血漿を単離し、−８０℃で保存してさらに分析した。脳を迅速に切除し、切断し、各脳領域を乾燥氷上で急速凍結し、−８０℃で保存してさらに分析した。脾臓を除去し、５ｍＬ ＲＰＭＩ培地（Ｌ−グルタミン及び重炭酸ナトリウムを含む、Ｒ８７５８ Ｓｉｇｍａ＋１０％ ＦＢＳ（Ｆ７５２４、Ｓｉｇｍａ）＋１％ Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｐ４３３３、Ｓｉｇｍａ））において収集し、ｅｘ−ｖｉｖｏ免疫刺激について選択した直後に処理した。腸組織（盲腸に最も近い回腸及び結腸の２ｃｍセグメントを切除し、盲腸から最も遠い１ｃｍの組織を使用した）を腸透過性アッセイ用のＵｓｓｉｎｇチャンバーに設置した。さらなる１ｃｍの回腸及び結腸の組織をタイトジャンクション遺伝子発現分析用に採取した。盲腸を除去し、秤量し、−８０℃で保存してＳＣＦＡ分析した。
統計的分析
正規分布データを平均±ＳＥＭとして提示し；非パラメータデータセットを四分位範囲でメジアンとして提示する。非対両側ｔ−検定を適用してパラメータデータを分析し、マンホイットニー試験を非パラメータに使用した。スピアマンの順位相関係数を、プールしたデータセットにおいて相関関係分析に用いた。ｐ値＜０．０５を全ての場合において有意であるとみなした。
正規分布データを平均±ＳＥＭとして提示し；非パラメータデータセットを四分位範囲でメジアンとして提示する。非対両側ｔ−検定を適用してパラメータデータを分析し、マンホイットニー試験を非パラメータに使用した。スピアマンの順位相関係数を、プールしたデータセットにおいて相関関係分析に用いた。ｐ値＜０．０５を全ての場合において有意であるとみなした。
実施例１６ｂ−ｅｘ ｖｉｖｏ胃腸透過性及びタイトジャンクション発現に対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果の評価
方法
マウスを頸椎脱臼によって安楽死させ、遠位回腸及び結腸を除去し、冷蔵Ｋｒｅｂｓ溶液中に置き、腸間膜線に沿って開き、注意深く濯いだ。調製物を、次いで、先に記載されているように（Ｈｙｌａｎｄ ａｎｄ Ｃｏｘ、２００５［５８］）３７℃で維持した含酸素（９５％Ｏ２、５％ＣＯ２）Ｋｒｅｂｓ緩衝液を含むＵｓｓｉｎｇチャンバー（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｋｅｎｔ，ＵＫ、露出面積０．１２ｃｍ２）に置いた。４ｋＤａ ＦＩＴＣ−デキストランを２．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度で粘膜のチャンバーに添加し；２００μＬのサンプルを次の３時間で３０分毎に漿膜のチャンバーから収集した。
方法
マウスを頸椎脱臼によって安楽死させ、遠位回腸及び結腸を除去し、冷蔵Ｋｒｅｂｓ溶液中に置き、腸間膜線に沿って開き、注意深く濯いだ。調製物を、次いで、先に記載されているように（Ｈｙｌａｎｄ ａｎｄ Ｃｏｘ、２００５［５８］）３７℃で維持した含酸素（９５％Ｏ２、５％ＣＯ２）Ｋｒｅｂｓ緩衝液を含むＵｓｓｉｎｇチャンバー（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｋｅｎｔ，ＵＫ、露出面積０．１２ｃｍ２）に置いた。４ｋＤａ ＦＩＴＣ−デキストランを２．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度で粘膜のチャンバーに添加し；２００μＬのサンプルを次の３時間で３０分毎に漿膜のチャンバーから収集した。
結果
（実施例２１に記載されている）腸透過性の指標としての、Ｕｓｓｉｎｇチャンバーの、管腔から漿膜側へのＦＩＴＣの通路を使用して、ＭＲＸ００６が、回腸または結腸組織透過性に対して効果を有さなかったことが決定された。図６０Ａ及び６１Ａは、ＭＲＸ００６による慢性処置が、結腸または回腸の透過性に影響しなかったことを実証している。
（実施例２１に記載されている）腸透過性の指標としての、Ｕｓｓｉｎｇチャンバーの、管腔から漿膜側へのＦＩＴＣの通路を使用して、ＭＲＸ００６が、回腸または結腸組織透過性に対して効果を有さなかったことが決定された。図６０Ａ及び６１Ａは、ＭＲＸ００６による慢性処置が、結腸または回腸の透過性に影響しなかったことを実証している。
ＭＲＸ００６は、回腸または結腸組織において、タイトジャンクションタンパク質（腸バリアの完全性の維持に関与した）閉塞、酵素ＩＤＯ−１（インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ−１、トリプトファン／キヌレニン経路における第１及び律速の酵素）、またはＴＰＨ１（トリプトファン水酸化酵素１、セロトニンの合成の原因となる、酵素トリプトファン水酸化酵素のイソ型）のいずれのｍＲＮＡ発現に対しても効果を有さなかった（図６０及び６１Ｂ、Ｃ及びＥ）。ＭＲＸ００６は、しかし、ＴＪＰ−１（タイトジャンクションタンパク質１、タイトジャンクションタンパク質）のｍＲＮＡ発現を回腸においては増加させたが、結腸においては増加させなかった（図６０Ｄ及び６１Ｄ）。
考察
ＭＲＸ００６は、回腸または結腸透過性に対して効果を有さなかったが、ＴＪＰ１発現を増加させた。ＴＪＰ１は、腸完全性の維持と関連する多くのタイトジャンクションタンパク質の１つであるが、本発明者らがｍＲＮＡ発現のこの増加を見出したが、これは、必ずしも、このタイトジャンクションのタンパク質発現も、その内皮への包含も反映しないことがある。ＭＲＸ００６による６日の処置が透過性を変化させないという所見は、腸透過性及び完全性に負に影響しないことを示唆している。ＭＲＸ００６はまた、ＩＤＯ−１もＴＰＨ１も変化させず、セロトニン産生も、腸におけるトリプトファン／キヌニレン経路も変化させないことを示唆している。
ＭＲＸ００６は、回腸または結腸透過性に対して効果を有さなかったが、ＴＪＰ１発現を増加させた。ＴＪＰ１は、腸完全性の維持と関連する多くのタイトジャンクションタンパク質の１つであるが、本発明者らがｍＲＮＡ発現のこの増加を見出したが、これは、必ずしも、このタイトジャンクションのタンパク質発現も、その内皮への包含も反映しないことがある。ＭＲＸ００６による６日の処置が透過性を変化させないという所見は、腸透過性及び完全性に負に影響しないことを示唆している。ＭＲＸ００６はまた、ＩＤＯ−１もＴＰＨ１も変化させず、セロトニン産生も、腸におけるトリプトファン／キヌニレン経路も変化させないことを示唆している。
これらのデータは、ＭＲＸ００６による慢性処置が、腸透過性を変化させないこと、及び腸バリアの完全性に影響しないことを実証している。これは、ＭＲＸ００６が常同及び不安関連行動を減衰する能力が、腸バリア完全性の欠失を引き起こさないことを示している。
実施例１６ｃ−盲腸の短鎖脂肪酸産生に対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果を評価する
方法
盲腸内容物を混合し、ＭｉｌｌｉＱ水でボルテックスし、室温で１０分間インキュベートした。上清を遠心分離（１００００ｇ、５分、４℃）によって得、細菌及び他の固体をペレット化し、０．２μｍで濾過した。これをきれいなＧＣバイアルに移し、２−エチル酪酸（Ｓｉｇｍａ）を内部標準として使用した。ＳＣＦＡの濃度を、ＺＢ−ＦＦＡＰカラム（３０ｍ×０．３２ｍｍ×０．２５ｍｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を装備したＶａｒｉａｎ３５００ＧＣ水素炎イオン化システムを使用して分析した。標準曲線を、アセテート、プロピオネート、イソブチレート、ｎ−ブチレート、イソバレレート及びバレレート（Ｓｉｇｍａ）を含有する異なる濃度の標準混合物によって構築した。ピークをＶａｒｉａｎ Ｓｔａｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎバージョン６．０ソフトウェアの使用によって積分した。全てのＳＣＦＡデータをμｍｏｌ／ｇとして表す。
方法
盲腸内容物を混合し、ＭｉｌｌｉＱ水でボルテックスし、室温で１０分間インキュベートした。上清を遠心分離（１００００ｇ、５分、４℃）によって得、細菌及び他の固体をペレット化し、０．２μｍで濾過した。これをきれいなＧＣバイアルに移し、２−エチル酪酸（Ｓｉｇｍａ）を内部標準として使用した。ＳＣＦＡの濃度を、ＺＢ−ＦＦＡＰカラム（３０ｍ×０．３２ｍｍ×０．２５ｍｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を装備したＶａｒｉａｎ３５００ＧＣ水素炎イオン化システムを使用して分析した。標準曲線を、アセテート、プロピオネート、イソブチレート、ｎ−ブチレート、イソバレレート及びバレレート（Ｓｉｇｍａ）を含有する異なる濃度の標準混合物によって構築した。ピークをＶａｒｉａｎ Ｓｔａｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎバージョン６．０ソフトウェアの使用によって積分した。全てのＳＣＦＡデータをμｍｏｌ／ｇとして表す。
結果
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、食事からの消化されない繊維を腸内の細菌によって発酵させるときに生成される。ＭＲＸ００６の６日投与は、ビヒクルＰＢＳ投与と比較したとき、アセテート（ｔ１２＝０．９５９、ｐ＝０．３５７）、プロピオネート（ｔ１２＝１．０３３、ｐ＝０．３２２）、イソブチレート（ｔ１２＝１．８５９、ｐ＝０．０９０）、ブチレート（ｔ１２＝０．８５７、ｐ＝０．４０８）、イソバレレート（ｔ１２＝１．７５７、ｐ＝０．１０７）またはバレレート（ｔ１２＝０．４３４、ｐ＝０．６７２）に対して効果を有さなかった（図６２）。
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、食事からの消化されない繊維を腸内の細菌によって発酵させるときに生成される。ＭＲＸ００６の６日投与は、ビヒクルＰＢＳ投与と比較したとき、アセテート（ｔ１２＝０．９５９、ｐ＝０．３５７）、プロピオネート（ｔ１２＝１．０３３、ｐ＝０．３２２）、イソブチレート（ｔ１２＝１．８５９、ｐ＝０．０９０）、ブチレート（ｔ１２＝０．８５７、ｐ＝０．４０８）、イソバレレート（ｔ１２＝１．７５７、ｐ＝０．１０７）またはバレレート（ｔ１２＝０．４３４、ｐ＝０．６７２）に対して効果を有さなかった（図６２）。
考察
ＭＲＸ００６の投与は、盲腸のＳＣＦＡ産生に対して効果を有さなかった。このことは、ＭＲＸ００６の６日レジメが、発酵、または食事からの消化されない繊維の発酵の原因となる細菌を変化させなかったことを示唆している。
ＭＲＸ００６の投与は、盲腸のＳＣＦＡ産生に対して効果を有さなかった。このことは、ＭＲＸ００６の６日レジメが、発酵、または食事からの消化されない繊維の発酵の原因となる細菌を変化させなかったことを示唆している。
実施例１６ｄ−脾細胞からのサイトカイン発現に対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果を評価する
論拠／方法
ｅｘ−ｖｉｖｏ脾細胞アッセイは、細菌模倣物またはウイルス模倣物の攻撃により、脾細胞（脾臓−免疫防御に関与する主な器官−から単離された細胞）を攻撃することを含む。
論拠／方法
ｅｘ−ｖｉｖｏ脾細胞アッセイは、細菌模倣物またはウイルス模倣物の攻撃により、脾細胞（脾臓−免疫防御に関与する主な器官−から単離された細胞）を攻撃することを含む。
脾臓を、犠牲の後に５ｍＬ ＲＰＭＩ培地中で直ちに収集し、直ちに培養した。脾臓細胞をＲＰＭＩ培地においてまずホモジナイズした。ホモジネートステップに、細胞を１ｍｌのＲＢＣ溶解緩衝液（１１８１４３８９００１ ＲＯＣＨＥ、Ｓｉｇｍａ）中で５分間インキュベートするＲＢＣ溶解ステップが続いた。１０ｍｌの培地を添加して溶解を停止し、続いて、５分間２００ｇで遠心分離した。これに、細胞に４０ｕｍ濾過器を通過させる最終ステップが続いた。ホモジネートを次いで４０ｕｍ濾過器上で濾過し、２００ｇで５分間遠心分離し、培地において再懸濁した。細胞をカウントし、播種した（４，０００，０００／ｍＬ培地）。２．５時間の順応後、細胞をリポ多糖体（ＬＰＳ−２μｇ／ｍｌ）またはコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ−２．５μｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。刺激後、上清を採取して、Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ １（マウス）Ｖ−ＰＬＥＸ Ｋｉｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、ＵＳＡ）を使用してＴＮＦα、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、インターフェロンγ、ＣＸＣＬ２及びＩＬ６についてサイトカイン放出を評価した。分析をＭＥＳＯ ＱｕｉｃｋＰｌｅｘ ＳＱ １２０、ＳＥＣＴＯＲ Ｉｍａｇｅｒ ２４００、ＳＥＣＴＯＲ Ｉｍａｇｅｒ ６０００、ＳＥＣＴＯＲ Ｓ ６００を使用して実施した。
結果
ＭＲＸ００６は、ＬＰＳ（細菌感染を模倣する）もしくはコンカナバリンＡ（ウイルス感染を模倣する）刺激に応答して、前炎症（ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β）もしくは抗炎症（ＩＬ−１０、ＩＬ−６）またはＣＸＣＬ１（免疫反応活性化のマーカー）の脾細胞放出に対して効果を有さなかった（図６３）。
ＭＲＸ００６は、ＬＰＳ（細菌感染を模倣する）もしくはコンカナバリンＡ（ウイルス感染を模倣する）刺激に応答して、前炎症（ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β）もしくは抗炎症（ＩＬ−１０、ＩＬ−６）またはＣＸＣＬ１（免疫反応活性化のマーカー）の脾細胞放出に対して効果を有さなかった（図６３）。
考察
ＭＲＸ００６もまた、ＬＰＳまたはコンカナバリンＡによる攻撃の後の脾細胞からのサイトカイン発現に対して効果を有さなかった。このことは、ＭＲＸ００６の６日投与が、先天性周辺免疫反応に負に影響しなかったことを実証している。このことは、ＭＲＸ００６処置が、全身の免疫活性化を活性化しないことを示している。
ＭＲＸ００６もまた、ＬＰＳまたはコンカナバリンＡによる攻撃の後の脾細胞からのサイトカイン発現に対して効果を有さなかった。このことは、ＭＲＸ００６の６日投与が、先天性周辺免疫反応に負に影響しなかったことを実証している。このことは、ＭＲＸ００６処置が、全身の免疫活性化を活性化しないことを示している。
実施例１６ｅ−アミノ酸の血漿中濃度に対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果を評価する
論拠及び方法
実験の最後に、体幹血液を血漿中のアミノ酸分析のために収集した。これにより、微生物叢の変化による必須アミノ酸の生合成及び異化の指標が付与される。
論拠及び方法
実験の最後に、体幹血液を血漿中のアミノ酸分析のために収集した。これにより、微生物叢の変化による必須アミノ酸の生合成及び異化の指標が付与される。
動物を処置及び試験条件に関してランダムに犠牲にした;サンプリングを午前９時と午後２時３０分との間に行った。体幹血液をカリウムＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）チューブにおいて収集し、４０００ｇで１５分間スピンした。血漿を単離し、−８０℃で保存してさらに分析した。血漿を０．２ｍｏｌ／Ｌクエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ２．２で希釈して２５０ｎｍｏｌの各アミノ酸残基を得た。サンプルを内部標準ノルロイシンで希釈して、１２５ｎｍ／ｍＬの最終濃度を得た。アミノ酸を、Ｊｅｏｌ Ｎａ＋高速カチオン交換カラムを装着したＪｅｏｌ ＪＬＣ−５００／Ｖアミノ酸分析器（Ｊｅｏｌ Ｌｔｄ，Ｇａｒｄｅｎ Ｃｉｔｙ，Ｈｅｒｔｓ，ＵＫ）を使用して定量化した。
結果
ＭＲＸ００６は、血漿中のプロリン及びフェニルアラニン濃度を減少させた。
ＭＲＸ００６は、血漿中のプロリン及びフェニルアラニン濃度を減少させた。
考察
アミノ酸の血漿中濃度は、ＭＲＸ００６の６日投与後に大きくは変化しなかった。新たに合成され得ず、食事において直接または食事の分解によって供給されなければならない９つの必須アミノ酸がある。これらには、バリン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、リジン、及びヒスチジンが含まれる。６つの他のアミノ酸は、ヒトの食事において条件付きで必須とみなされ、これらの合成が、特別な病態生理的条件下、例えば、幼児における低体重児、または重度の異化作用の苦悩にある個体において限定され得ることを意味している。これらの６のアミノ酸には、アルギニン、システイン、グリシン、グルタミン、プロリン、及びチロシンが含まれる。５つのアミノ酸は、ヒトにおいては不可欠ではなく、これらのアミノ酸が、体内において十分量で合成され得ることを意味している。これらの５つは、アラニン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸及びセリンである。
アミノ酸の血漿中濃度は、ＭＲＸ００６の６日投与後に大きくは変化しなかった。新たに合成され得ず、食事において直接または食事の分解によって供給されなければならない９つの必須アミノ酸がある。これらには、バリン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、リジン、及びヒスチジンが含まれる。６つの他のアミノ酸は、ヒトの食事において条件付きで必須とみなされ、これらの合成が、特別な病態生理的条件下、例えば、幼児における低体重児、または重度の異化作用の苦悩にある個体において限定され得ることを意味している。これらの６のアミノ酸には、アルギニン、システイン、グリシン、グルタミン、プロリン、及びチロシンが含まれる。５つのアミノ酸は、ヒトにおいては不可欠ではなく、これらのアミノ酸が、体内において十分量で合成され得ることを意味している。これらの５つは、アラニン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸及びセリンである。
この研究において、必須アミノ酸フェニルアラニン及びプロリン、別の重要なアミノ酸は、ＭＲＸ００６投与後に減少しており、このプロバイオティクスが、食事からの重要なアミノ酸の代謝において役割を果たし得ることを示唆している。
実施例１６ｆ−脳幹における神経伝達物質レベルに対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果を評価する
方法
神経伝達物質濃度を脳幹からのサンプルにおいてＨＰＬＣによって分析した。簡潔には、脳幹組織を、内部標準として４ｎｇ／４０μｌのＮ−メチル５−ＨＴ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＫ）を混ぜた５００μｌの冷蔵移動相において超音波処理した。移動相は、０．１Ｍクエン酸、５．６ｍＭオクタン−１−スルホン酸（Ｓｉｇｍａ）、０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム、０．０１ｍＭ ＥＤＴＡ（Ａｌｋｅｍ／Ｒｅａｇｅｃｏｎ、Ｃｏｒｋ）及び９％（ｖ／ｖ）メタノール（Ａｌｋｅｍ／Ｒｅａｇｅｃｏｎ）を含有し、４Ｎ水酸化ナトリウム（Ａｌｋｅｍ／Ｒｅａｇｅｃｏｎ）を使用してｐＨ２．８に調整した。ホモジネートを次いで２２，０００×ｇで４℃において１５分間遠心分離し、４０μｌの上清を、ＳＣＬ１０−Ａｖｐシステムコントローラ、ＬＥＣＤ６Ａ電気化学検出器（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、ＬＣ−１０ＡＳポンプ、ＣＴＯ−１０Ａオーブン、ＳＩＬ−１０Ａ自己注入器（４０℃で維持されたサンプル冷却器を有する）及びオンラインのＧａｓｔｏｒｒ Ｄｅｇａｓｓｅｒ（ＩＳＳ，ＵＫ）からなるＨＰＬＣシステム上に注入した。３０℃で維持した逆相カラム（Ｋｉｎｅｔｅｘ ２．６ｕ Ｃ１８ １００×４．６ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を分離において用いた（流速０．９ｍｌ／分）。Ａｇ／ＡｇＣｌ参照電極（Ｓｈｉｍｄａｚｕ）と組み合わせたガラス状炭素作用電極を＋０．８Ｖで作動させ、生じたクロマトグラフクロマトグラムを、Ｃｌａｓｓ−ＶＰ ５ソフトウェア（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）を使用して分析した。神経伝達物質は、サンプル分析の間に規則的間隔でランニングする、標準注入物によって求められる特徴的な保持時間によって同定した。分析物対内部標準のピーク高さの比を測定し、標準注入物と比較した。結果を神経伝達物質（ｎｇ）／新たな組織重量（ｇ）として表した。
方法
神経伝達物質濃度を脳幹からのサンプルにおいてＨＰＬＣによって分析した。簡潔には、脳幹組織を、内部標準として４ｎｇ／４０μｌのＮ−メチル５−ＨＴ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＫ）を混ぜた５００μｌの冷蔵移動相において超音波処理した。移動相は、０．１Ｍクエン酸、５．６ｍＭオクタン−１−スルホン酸（Ｓｉｇｍａ）、０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム、０．０１ｍＭ ＥＤＴＡ（Ａｌｋｅｍ／Ｒｅａｇｅｃｏｎ、Ｃｏｒｋ）及び９％（ｖ／ｖ）メタノール（Ａｌｋｅｍ／Ｒｅａｇｅｃｏｎ）を含有し、４Ｎ水酸化ナトリウム（Ａｌｋｅｍ／Ｒｅａｇｅｃｏｎ）を使用してｐＨ２．８に調整した。ホモジネートを次いで２２，０００×ｇで４℃において１５分間遠心分離し、４０μｌの上清を、ＳＣＬ１０−Ａｖｐシステムコントローラ、ＬＥＣＤ６Ａ電気化学検出器（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、ＬＣ−１０ＡＳポンプ、ＣＴＯ−１０Ａオーブン、ＳＩＬ−１０Ａ自己注入器（４０℃で維持されたサンプル冷却器を有する）及びオンラインのＧａｓｔｏｒｒ Ｄｅｇａｓｓｅｒ（ＩＳＳ，ＵＫ）からなるＨＰＬＣシステム上に注入した。３０℃で維持した逆相カラム（Ｋｉｎｅｔｅｘ ２．６ｕ Ｃ１８ １００×４．６ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を分離において用いた（流速０．９ｍｌ／分）。Ａｇ／ＡｇＣｌ参照電極（Ｓｈｉｍｄａｚｕ）と組み合わせたガラス状炭素作用電極を＋０．８Ｖで作動させ、生じたクロマトグラフクロマトグラムを、Ｃｌａｓｓ−ＶＰ ５ソフトウェア（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）を使用して分析した。神経伝達物質は、サンプル分析の間に規則的間隔でランニングする、標準注入物によって求められる特徴的な保持時間によって同定した。分析物対内部標準のピーク高さの比を測定し、標準注入物と比較した。結果を神経伝達物質（ｎｇ）／新たな組織重量（ｇ）として表した。
結果
ＭＲＸ００６の６日投与は、非対両側ｔ−検定によって求められる、ノルアドレナリン、ドーパミン、セロトニン、５−ＨＩＡＡ（５−ヒドロキシ−インドール−酢酸；５−ＨＴの代謝産物（５−ヒドロキシ−トリプタミン（セロトニン））、またはセロトニンターンオーバー（５−ＨＩＡＡ：５−ＨＴの比）のレベルに対して効果を有さなかった（図６５）。ノルアドレナリン（ｔ１２＝０．３０７、ｐ＝０．７６４）、ドーパミン（ｔ１２＝０．９５７、ｐ＝０．３５７）、セロトニン（ｔ１２＝０．７４５、ｐ＝０．０７４）、５−ＨＩＡＡ（ｔ１２＝０．３７９、ｐ＝０．７１１）レベル、または脳幹におけるセロトニンターンオーバー（ｔ１２＝０．６８３、ｐ＝０．５０７）。
ＭＲＸ００６の６日投与は、非対両側ｔ−検定によって求められる、ノルアドレナリン、ドーパミン、セロトニン、５−ＨＩＡＡ（５−ヒドロキシ−インドール−酢酸；５−ＨＴの代謝産物（５−ヒドロキシ−トリプタミン（セロトニン））、またはセロトニンターンオーバー（５−ＨＩＡＡ：５−ＨＴの比）のレベルに対して効果を有さなかった（図６５）。ノルアドレナリン（ｔ１２＝０．３０７、ｐ＝０．７６４）、ドーパミン（ｔ１２＝０．９５７、ｐ＝０．３５７）、セロトニン（ｔ１２＝０．７４５、ｐ＝０．０７４）、５−ＨＩＡＡ（ｔ１２＝０．３７９、ｐ＝０．７１１）レベル、または脳幹におけるセロトニンターンオーバー（ｔ１２＝０．６８３、ｐ＝０．５０７）。
考察
脳幹における神経伝達物質レベルは、６日ＭＲＸ００６投与後に変化しなかった。これらのデータは、ＭＲＸ００６が、脳幹のレベルでモノアミンレベルによって支配される行動に負に影響しないことを示唆している。
脳幹における神経伝達物質レベルは、６日ＭＲＸ００６投与後に変化しなかった。これらのデータは、ＭＲＸ００６が、脳幹のレベルでモノアミンレベルによって支配される行動に負に影響しないことを示唆している。
実施例１６ｇ−中心及び胃腸遺伝子発現に対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果を評価する
論拠
神経伝達物質受容体［セロトニン受容体１ａ（５−ＨＴ１ａ）、ドーパミンＤＩ受容体、ＧＡＢＡＢ受容体サブユニットＢ１、ＧＡＢＡＡ受容体、ＮＭＤＡ２Ａ及びＮＭＤＡ２Ｂ受容体］、炎症マーカー［ＩＬ−１β、ＩＬ６、ＣＤ１１ｂ、ＴＮＦα及びＴＬＲ４］、ならびに内分泌マーカー［コルチコステロン放出因子（ＣＲＦ）、コルチコステロン放出因子受容体１及び２（ＣＲＦＲ１、ＣＲＦＲ２）、脳由来のニューロトロフィン因子（ＢＤＮＦ）、バソプレシン受容体、オキシトシン受容体、糖質コルチコイド受容体及び鉱質コルチコイド受容体］についての遺伝子発現を、扁桃体、前頭葉前部皮質及び海馬からの脳組織において分析した。
論拠
神経伝達物質受容体［セロトニン受容体１ａ（５−ＨＴ１ａ）、ドーパミンＤＩ受容体、ＧＡＢＡＢ受容体サブユニットＢ１、ＧＡＢＡＡ受容体、ＮＭＤＡ２Ａ及びＮＭＤＡ２Ｂ受容体］、炎症マーカー［ＩＬ−１β、ＩＬ６、ＣＤ１１ｂ、ＴＮＦα及びＴＬＲ４］、ならびに内分泌マーカー［コルチコステロン放出因子（ＣＲＦ）、コルチコステロン放出因子受容体１及び２（ＣＲＦＲ１、ＣＲＦＲ２）、脳由来のニューロトロフィン因子（ＢＤＮＦ）、バソプレシン受容体、オキシトシン受容体、糖質コルチコイド受容体及び鉱質コルチコイド受容体］についての遺伝子発現を、扁桃体、前頭葉前部皮質及び海馬からの脳組織において分析した。
方法
全ＲＮＡを、製造者の推奨に従ってｍｉｒＶａｎａ（商標）ｍｉＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット（Ａｍｂｉｏｎ／Ｌｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）及び処理ＤＮａｓｅ（Ｔｕｒｂｏ ＤＮＡ不含，Ａｍｂｉｏｎ／ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して抽出した。ＲＮＡを、製造者の指示に従ってＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌａｗａｒｅ，ＵＳＡ）を使用して定量化した。ＲＮＡの質を製造者の手順に従ってＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓｔｏｃｋｐｏｒｔ，ＵＫ）を使用して評価し、ＲＮＡ完全性数（ＲＩＮ）を算出した。ＲＩＮ値＞７を有するＲＮＡを後の実験に使用した。ＲＮＡを、製造者の指示に従ってＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。簡潔には、Ｍｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅ逆転写酵素（５０Ｕ／μＬ）（１）（２）（１）（１０）をＲＴマスター混合物の部分として添加し、２５℃で１０分間、３７℃で２時間、８５℃で５分間インキュベートし、４℃で保存した。定量的ＰＣＲを、β−アクチンを内在性対照として使用しつつ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによってマウス特異的標的化遺伝子に設計されたプローブ（６カルボキシフルオレセイン−ＦＡＭ）を使用して実施した。増幅反応には、１μｌ ｃＤＮＡ、５μｌの２Ｘ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ｒｏｃｈｅ）、９００ｎＭの各プライマーが含まれ、ＲＮａｓｅ不含水の添加によって合計１０μｌとした。全ての反応をＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）４８０Ｓｙｓｔｅｍにおいて９６ウェルプレートを使用して３重に実施した。熱サイクル条件は、製造者（Ｒｏｃｈｅ）によって推奨されるように５５サイクルのものであった。アンプリコン汚染についてチェックするために、各ランは、使用した各プローブについて３重のテンプレート対照を含まなかった。サイクル閾（Ｃｔ）値を記録した。データを、β−アクチンを使用して正規化し、２−ΔΔＣＴ法を使用して変換し、倍数変化対対照群として提示した。
全ＲＮＡを、製造者の推奨に従ってｍｉｒＶａｎａ（商標）ｍｉＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット（Ａｍｂｉｏｎ／Ｌｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）及び処理ＤＮａｓｅ（Ｔｕｒｂｏ ＤＮＡ不含，Ａｍｂｉｏｎ／ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して抽出した。ＲＮＡを、製造者の指示に従ってＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌａｗａｒｅ，ＵＳＡ）を使用して定量化した。ＲＮＡの質を製造者の手順に従ってＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓｔｏｃｋｐｏｒｔ，ＵＫ）を使用して評価し、ＲＮＡ完全性数（ＲＩＮ）を算出した。ＲＩＮ値＞７を有するＲＮＡを後の実験に使用した。ＲＮＡを、製造者の指示に従ってＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。簡潔には、Ｍｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅ逆転写酵素（５０Ｕ／μＬ）（１）（２）（１）（１０）をＲＴマスター混合物の部分として添加し、２５℃で１０分間、３７℃で２時間、８５℃で５分間インキュベートし、４℃で保存した。定量的ＰＣＲを、β−アクチンを内在性対照として使用しつつ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによってマウス特異的標的化遺伝子に設計されたプローブ（６カルボキシフルオレセイン−ＦＡＭ）を使用して実施した。増幅反応には、１μｌ ｃＤＮＡ、５μｌの２Ｘ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ｒｏｃｈｅ）、９００ｎＭの各プライマーが含まれ、ＲＮａｓｅ不含水の添加によって合計１０μｌとした。全ての反応をＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）４８０Ｓｙｓｔｅｍにおいて９６ウェルプレートを使用して３重に実施した。熱サイクル条件は、製造者（Ｒｏｃｈｅ）によって推奨されるように５５サイクルのものであった。アンプリコン汚染についてチェックするために、各ランは、使用した各プローブについて３重のテンプレート対照を含まなかった。サイクル閾（Ｃｔ）値を記録した。データを、β−アクチンを使用して正規化し、２−ΔΔＣＴ法を使用して変換し、倍数変化対対照群として提示した。
結果
図６６は、ＭＲＸ００６が、神経伝達物質受容体セロトニン１ａ（５−ＨＴ１ａ）（ｔ１１＝０．７４２、ｐ＝０．４７４）、ドーパミンＤＩ受容体（ｔ１０＝１．４２６、ｐ＝０．１８４）、ＧＡＢＡＢ受容体Ｂ１サブユニット（ｔ１２＝１．８７１、ｐ＝０．０８６）、ＧＡＢＡＡ受容体（ｔ１２＝０．０１７、ｐ＝０．９８７）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ａ（ｔ１１＝１．２７５、ｐ＝０．２２９）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ｂ（ｔ１１＝１．３９、ｐ＝０．１９２）の海馬遺伝子発現に対して効果を有さなかったことを示している。
図６６は、ＭＲＸ００６が、神経伝達物質受容体セロトニン１ａ（５−ＨＴ１ａ）（ｔ１１＝０．７４２、ｐ＝０．４７４）、ドーパミンＤＩ受容体（ｔ１０＝１．４２６、ｐ＝０．１８４）、ＧＡＢＡＢ受容体Ｂ１サブユニット（ｔ１２＝１．８７１、ｐ＝０．０８６）、ＧＡＢＡＡ受容体（ｔ１２＝０．０１７、ｐ＝０．９８７）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ａ（ｔ１１＝１．２７５、ｐ＝０．２２９）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ｂ（ｔ１１＝１．３９、ｐ＝０．１９２）の海馬遺伝子発現に対して効果を有さなかったことを示している。
図６７は、ＭＲＸ００６が、神経伝達物質受容体ドーパミンＤＩ受容体（ｔ１１＝０．４２９、ｐ＝０．６７７）、ＧＡＢＡｂ受容体Ｂ１サブユニット（ｔ１１＝０．９９８、ｐ＝０．３４４）、ＧＡＢＡＡ受容体（ｔ１１＝１．１４５、ｐ＝０．２７７）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ａ（ｔ１２＝０．８５２、ｐ＝０．４１１）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ｂ（ｔ１２＝０．３９５、ｐ＝０．７０７）の扁桃体遺伝子発現に対して効果を有さなかったことを示している。
図６８は、ＭＲＸ００６が、神経伝達物質受容体ドーパミンＤＩ受容体（ｔ１１＝０．５８３、ｐ＝０．５７１）、ＧＡＢＡｂ受容体Ｂ１サブユニット（ｔ１２＝１．３０４、ｐ＝０．２１７）、ＧＡＢＡＡ受容体（ｔ１０＝２．０４３、ｐ＝０．０６８）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ａ（ｔ１１＝０．１７７、ｐ＝０．１０４）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ｂ（ｔ１１＝１．２３５、ｐ＝０．２４３）の前頭葉前部皮質遺伝子発現に対して効果を有さなかったことを示している。
調査した脳領域のいずれにおいても神経伝達物質受容体のｍＲＮＡ発現に対するＭＲＸ００６の効果がなかった（図６６〜６８）。
海馬及び扁桃体において（図６９及び７０）、種々の炎症マーカーのｍＲＮＡ発現に効果がなかった。ＭＲＸ００６は、炎症マーカーＩＬ−１β（ｔ１０＝１．３４６、ｐ＝０．２０８）、ＩＬ−６（ｔ１２＝１．０４１、ｐ＝０．３０８）、ＣＤ１１ｂ（ｔ１２＝１．１９５、ｐ＝０．２５５）、ＴＮＦα（ｔ１１＝０．８１６、ｐ＝０．３４２）、ＴＬＲ４（ｔ１２＝０．５２１、ｐ＝０．６１２）の海馬遺伝子発現に対して効果を有さなかった。ＭＲＸ００６は、炎症マーカーＩＬ−１β（ｔ１１＝１５３、ｐ＝０．９８８）、ＩＬ−６（ｔ１１＝１．１４５、ｐ＝０．２１７）、ＣＤ１１ｂ（ｔ１１＝１．１４３、ｐ＝０．２７５）、ＴＬＲ４（ｔ１１＝０．９７１、ｐ＝０．５３２）の扁桃体遺伝子発現に対して効果を有さなかった。
前頭葉前部皮質において、ＭＲＸ００６は、他の炎症マーカーのいずれの変化もなくＴＬＲ４のｍＲＮＡ発現を減少させた（図７１）。ＭＲＸ００６は、前頭葉前部皮質におけるＴＬＲ４のｍＲＮＡ発現（ｔ１２＝２．６３９、ｐ＝０．０２１６）を有意に減少させたが、ＩＬ−６（ｔ１１＝１．１４５、ｐ＝０．２１７）またはＣＤ１１ｂ（ｔ１１＝２．１７５、ｐ＝０．５２３）について前頭葉前部皮質遺伝子発現に対してさらなる効果を有さなかった。
ＭＲＸ００６は、海馬（ｔ１２＝２．３８９、ｐ＝０．０３４２）におけるバソプレシン受容体ｍＲＮＡ発現を有意に減少させたが、内分泌マーカーＣＲＦ（ｔ１２＝０．７６７、ｐ＝０．４５８）、ＣＲＦＲ１（ｔ１２＝０．１７４、ｐ＝０．８６５）、ＣＲＦＲ２（ｔ１１＝０．２３８、ｐ＝０．８１６）、ＢＤＮＦ（ｔ１２＝１．５４８、ｐ＝０．１４８）、オキシトシン受容体（ｔ１２＝０．７６２、ｐ＝０．４６１）、糖質コルチコイド受容体（ｔ１２＝０．６０７、ｐ＝０．５５６）、鉱質コルチコイド受容体（ｔ１２＝０．６７、ｐ＝０．５１６）のｍＲＮＡ発現に対してさらなる効果を有さなかった（図７２）。
ＭＲＸ００６は、扁桃体内分泌マーカーＣＲＦＲ１（ｔ１２＝０．２２６、ｐ＝０．８２５）、ＣＲＦＲ２（ｔ１１＝０．７８、ｐ＝０．４５１）、ＢＤＮＦ（ｔ１２＝０．２０１、ｐ＝０．８４４）、バソプレシン受容体（ｔ１２＝０．７５６、ｐ＝０．４６５）、オキシトシン受容体（ｔ１１＝０．１６７、ｐ＝０．８７）、糖質コルチコイド受容体（ｔ１１＝１．０２７、ｐ＝０．３２７）、鉱質コルチコイド受容体（ｔ１１＝１．４４８、ｐ＝０．１７５）のｍＲＮＡ発現に対して効果を有さなかった（図７３）。
ＭＲＸ００６は、前頭葉前部皮質内分泌マーカーＣＲＦＲ１（ｔ１２＝１．６６６、ｐ＝０．１２２）、ＣＲＦＲ２（ｔ１１＝１．１７９、ｐ＝０．２６１）、ＢＤＮＦ（ｔ１１＝１．０６５、ｐ＝０．３１０）、オキシトシン受容体（ｔ１１＝１．０３７、ｐ＝０．３２２）、糖質コルチコイド受容体（ｔ１２＝１．１８５、ｐ＝０．２５９）、鉱質コルチコイド受容体（ｔ１１＝１．９１０、ｐ＝０．０８３）のｍＲＮＡ発現に対して効果を有さなかった（図７４）。
扁桃体及び前頭葉前部皮質においては（図７３及び７４）、いずれの内分泌マーカーのｍＲＮＡ発現の変化もなかったが、海馬においては（図７２）、分析した他の内分泌マーカーに対して何の効果も及ぼさずバソプレシン受容体のｍＲＮＡ発現が減少した。
考察
炎症、内分泌及び神経伝達物質受容体の中心遺伝子発現は、大部分が、６日ＭＲＸ００６投与後に変化しなかった。
炎症、内分泌及び神経伝達物質受容体の中心遺伝子発現は、大部分が、６日ＭＲＸ００６投与後に変化しなかった。
生理学的パラメータにおけるＭＲＸ００６投与についての全体的な結論
全てのこれらのデータにより、ＭＲＸ００６投与は、全身及び中枢の生理的事象に負の影響を及ぼさないことが確認される。これらのデータは、ＭＲＸ００６が、最小の望ましくない副作用で高い寛容性プロファイルを有し得ることを示唆している。
全てのこれらのデータにより、ＭＲＸ００６投与は、全身及び中枢の生理的事象に負の影響を及ぼさないことが確認される。これらのデータは、ＭＲＸ００６が、最小の望ましくない副作用で高い寛容性プロファイルを有し得ることを示唆している。
実施例１７−母体免疫活性化（ＭＩＡ）マウスモデル
使用したＭＩＡマウスは、実施例３ａに記載されているものと同じである。
使用したＭＩＡマウスは、実施例３ａに記載されているものと同じである。
実施例１７ａ−ＭＩＡモデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ胃腸透過性に対するＭＲＸ００６による慢性処置の効果を評価する
回腸及び結腸の透過性を、実施例２ｋに記載されているように、Ｕｓｓｉｎｇチャンバーを使用してｅｘ ｖｉｖｏ評価した。図７５は、ＭＲＸ００６による慢性処置が、ＭＩＡモデルにおける結腸または回腸の透過性に影響しなかったことを実証している。
回腸及び結腸の透過性を、実施例２ｋに記載されているように、Ｕｓｓｉｎｇチャンバーを使用してｅｘ ｖｉｖｏ評価した。図７５は、ＭＲＸ００６による慢性処置が、ＭＩＡモデルにおける結腸または回腸の透過性に影響しなかったことを実証している。
これは、ＭＲＸ００６による慢性処置が腸透過性を変化させないことが確認しており、有益な社会的行動、不安様行動の低減、ＭＲＸ００６の常同行動の効果が腸の完全性の欠損を引き起こさないことを示している。
実施例１７ｂ−社会的行動のアセスメント−３チャンバー社会的相互作用試験
３チャンバー社会的相互作用試験（３−ＣＳＩＴ）を実施例１ａに記載されているように行ったが、このデータを処置が見えない調査者によって手動でスコアリングした。実施例１ａにおけるデータを、マウスとの相互作用とマウスと同じチャンバーにいることとの間の区別ができないコンピュータ追跡ソフトウェアによって自動的に生じさせた。
３チャンバー社会的相互作用試験（３−ＣＳＩＴ）を実施例１ａに記載されているように行ったが、このデータを処置が見えない調査者によって手動でスコアリングした。実施例１ａにおけるデータを、マウスとの相互作用とマウスと同じチャンバーにいることとの間の区別ができないコンピュータ追跡ソフトウェアによって自動的に生じさせた。
社会的新規性試験において（図７６）、社会的差別のＭＩＡ−誘発の欠失がなく、ＭＲＸ００６は、社会的新規性に対してさらなる効果を有さなかった。
図７７は、社交性試験において、ＭＲＸ００６が社会的行動のＭＩＡ−誘発の欠損を反転させることができることを示している。このことは、ＭＲＸ００６が社交性の欠損を反転させることができたＢＴＢＲモデルにおいて見られるデータと同様である。
実施例１７ｃ−社会的行動のアセスメント−グルーミング試験
グルーミング試験を実施例２ｅにおいて記載されているように行った。ＭＲＸ００６による慢性処置は、グルーミング試験でのＭＩＡマウスにおける反復行動の変化を引き起こさなかった（図７８）。
グルーミング試験を実施例２ｅにおいて記載されているように行った。ＭＲＸ００６による慢性処置は、グルーミング試験でのＭＩＡマウスにおける反復行動の変化を引き起こさなかった（図７８）。
実施例１７ｄ−社会的行動のアセスメント−高架式十字迷路
高架式十字迷路試験を実施例２ｆに記載されているように行った。ＭＲＸ００６による処置は、高架式十字迷路でのＭＩＡマウスにおける不安様行動に対して効果を有さない（図７９）。
高架式十字迷路試験を実施例２ｆに記載されているように行った。ＭＲＸ００６による処置は、高架式十字迷路でのＭＩＡマウスにおける不安様行動に対して効果を有さない（図７９）。
実施例１７ｅ−社会的行動のアセスメント−強制水泳試験
強制水泳試験を実施例２ｈに記載されているように行った。ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験でのＭＩＡマウスの不動時間を低減した（図８０）。
強制水泳試験を実施例２ｈに記載されているように行った。ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験でのＭＩＡマウスの不動時間を低減した（図８０）。
実施例１７ｆ−ストレス−誘発の循環コルチコステロンの決定
コルチコステロンのレベルを実施例２ｎに記載されているように測定した。ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験に暴露したＭＩＡマウスにおけるストレス−誘発のコルチコステロンレベルに影響しない（図８１）。
コルチコステロンのレベルを実施例２ｎに記載されているように測定した。ＭＲＸ００６による慢性処置は、強制水泳試験に暴露したＭＩＡマウスにおけるストレス−誘発のコルチコステロンレベルに影響しない（図８１）。
結論
ＭＲＸ００６による処置は、社会的行動のＭＩＡ−誘発の欠損を反転させ、強制水泳試験での不動時間を低減した。このことは、ＭＲＸ００６が社交性及び抗うつ行動を改善する能力を実証している。
ＭＲＸ００６による処置は、社会的行動のＭＩＡ−誘発の欠損を反転させ、強制水泳試験での不動時間を低減した。このことは、ＭＲＸ００６が社交性及び抗うつ行動を改善する能力を実証している。
実施例３において上記に記載されている結果に加えて、ＭＲＸ００６は、自閉症スペクトラム障害の症状に良い影響を及ぼすことを実証した。
配列
配列番号１（Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株ＧＡＭ６−１ １６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、部分配列−ＨＭ６２６１７７）
配列番号１（Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株ＧＡＭ６−１ １６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、部分配列−ＨＭ６２６１７７）
配列番号２（Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ ＭＲＸ００６（株８３０）のコンセンサス１６Ｓ ｒＲＮＡ配列）
配列番号３（Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株ＷＡＬ１４５０７ １６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、部分配列−ＥＦ０３６４６７）
配列番号４（Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株ＭＲＸ００８のコンセンサス１６Ｓ ｒＲＮＡ配列）
配列番号５（ＭＲＸ００６（株８３０）染色体配列）−電子配列表を参照されたい。
配列番号６（ＭＲＸ００６（株８３０）プラスミド配列）−電子配列表を参照されたい。
配列番号７（Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ株Ｓ５ａ３６ １６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、部分配列−Ｘ９５６２４．１）
参照文献
［１］ Ｓｐｏｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１） Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．９（４）：２７９−９０．
［２］ Ｅｃｋｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ．（２００５） Ｓｃｉｅｎｃｅ．１０；３０８（５７２８）：１６３５−８．
［３］ Ｍａｃｐｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００１） Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．３（１２）：１０２１−３５
［４］ Ｍａｃｐｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．５９（１２）２０８８−９６．
［５］ Ｍａｚｍａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．（２００５） Ｃｅｌｌ １５；１２２（１）：１０７−１８．
［６］ Ｆｒａｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００７） ＰＮＡＳ １０４（３４）：１３７８０−５．
［７］ Ｓｃａｎｌａｎ ｅｔ ａｌ．（２００６） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４４（１１）：３９８０−８．
［８］ Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１０） Ｉｎｆｌａｍｍ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ．１６（１２）２０３４−４２．
［９］ Ｍａｃｈｉｅｌｓ ｅｔａｌ．（２０１３） Ｇｕｔ．６３（８）：１２７５−８３．
［１０］ Ｍａｙｅｒ ｅｔ ａｌ（２０１４） Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ３４（４６）：１５４９０ −１５４９６
［１１］ Ｃｒｙａｎ ａｎｄ Ｄｉｎａｎ（２０１５） Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４０：２４１−２．
［１２］ Ｚｈｏｕ ａｎｄ Ｆｏｓｔｅｒ（２０１５） Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ １１：７１５−７２３．
［１３］ Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｋａｓｐｅｒ（２０１４） Ｂｒａｉｎ Ｂｅｈａｖ Ｉｍｍｕｎ．３８：１−１２．
［１４］ ＷＯ ２０１３／０５０７９２
［１５］ ＷＯ ０３／０４６５８０
［１６］ ＷＯ ２０１３／００８０３９
［１７］ ＷＯ ２０１４／１６７３３８
［１８］ Ｇｏｌｄｉｎ ａｎｄ Ｇｏｒｂａｃｈ（２００８） Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．４６ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ９６−１００．
［１９］ Ａｚａｄ ｅｔａｌ．（２０１３） ＢＡ／Ｊ．３４７：ｆ６４７１．
［２０］ Ｂｒａｖｏ ｅｔａｌ．（２０１１） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０８：１６０５０−５．
［２１］ Ｋａｎｔａｋ ｅｔ ａｌ．（２０１４） ＢｅｈａｖＰｈａｒｍａｃｏｌ．２５：７１−９．
［２２］ Ｓａｖｉｇｎａｃ ｅｔ ａｌ．（２０１４） ＮｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＭｏｔｉｌ．２６：１６１５−２７．
［２３］ ｄｅ Ｔｈｅｉｊｅ ｅｔ ａｌ．（２０１４） Ｂｒａｉｎ Ｂｅｈａｖ Ｉｍｍｕｎ．３７：１９７−２０６．
［２４］ Ｈｓｉａｏ ｅｔａｌ．（２０１３） Ｃｅｌｌ，１５５：１４５１−６３．
［２５］ Ｍｅｙｚａ ａｎｄ Ｂｌａｎｃｈａｒｄ（２０１７） Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｂｉｏｂｅｈａｖ Ｒｅｖ．
［２６］ Ｌｉｕ ｅｔａｌ．（２００８） Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ５８，１８９６−１９０２．
［２７］ Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．（２０１２） Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２（Ｐｔ ４）：７７６−９．
［２８］ Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（２００８） Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５８（Ｐｔ ８）：１８９６−９０２．
［２９］ Ｍａｓｃｏ ｅｔａｌ．（２００３） Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２６：５５７−５６３．
［３０］ Ｓｒｕｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．（２０１１） Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，８７（１）：１０−６．
［３１］ Ｂｅｍａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６） Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１６６（３），１７６−１８３．
［３２］ Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１６） ＪＮｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＭｏｔｉｌ ＩＴ．５８９−６０５．
［３３］ Ｌｉ ａｎｄ Ｚｈｏｕ（２０１６） Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ３２４：１３１−１３９．
［３４］ Ｈｙｌａｎｄ ａｎｄ Ｓｔａｎｔｏｎ（２０１６） Ｔｈｅ Ｇｕｔ−Ｂｒａｉｎ Ａｘｉｓ：Ｄｉｅｔａｒｙ，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ａｎｄ Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｛Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）．
［３５］ Ｂｏｕｒａｓｓａ ｅｔ ａｌ．（２０１６） Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ ６２５，５６−６３
［３６］ Ｍｉｙａｍｏｔｏ−Ｓｈｉｎｏｈａｒａ ｅｔ ａｌ．（２００８）７ Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，５４，９−２４．
［３７］ Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｅｄ．ｂｙ Ｄａｙ ａｎｄ ＭｃＬｅｌｌａｎ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ．
［３８］ Ｌｅｓｌｉｅ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６１，３５９２−３５９７．
［３９］ Ｍｉｔｒｏｐｏｕｌｏｕ ｅｔ ａｌ．（２０１３） ＪＮｕｔｒ Ｍｅｔａｂ．（２０１３） ７１６８６１．
［４０］ Ｋａｉｌａｓａｐａｔｈｙ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ｃｕｒｒ Ｉｓｓｕｅｓ Ｉｎｔｅｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３（２）：３９−４８．
［４１］ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９９４），Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ａ Ｗａｄｅ ａｎｄ ＰＪ Ｗｅｌｌｅｒ
［４２］ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｉｔ．１９８５）
［４３］ ＵＳ ２０１６／００６７１８８
［４４］ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｄｉａ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１０） Ｒｏｎａｌｄ Ａｔｌａｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ．
［４５］ Ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（１９９６） Ｊｅｎｎｉｅ Ｃ．Ｈｕｎｔｅｒ−Ｃｅｖｅｒａ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
［４６］ Ｓｔｒｏｂｅｌ（２００９） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．５８１：２４７−６１．
［４７］ Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００） Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２．
［４８］ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ａｎ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ，（Ｒｅａｍ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９８，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）．
［４９］ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）
［５０］ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ，１９８６，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）
［５１］ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）．
［５２］ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７）
［５３］Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）（２００２） Ｓｈｏｒｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）．
［５４］ ＰＣＲ（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｓｅｒｉｅｓ），２ｎｄ ｅｄ．（Ｎｅｗｔｏｎ ＆ Ｇｒａｈａｍ ｅｄｓ．，１９９７，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ）
［５５］ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７） Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ３０
[56] Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１） Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９．
［５７］ Ｃｒｙａｎ ａｎｄ Ｍｏｍｂｅｒｅａｕ（２００４） Ｍｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ９：３２６−５７．
［５８］ Ｈｙｌａｎｄ ａｎｄ Ｃｏｘ（２００６） Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１４６（５）：７１２−７２２
参照文献
［１］ Ｓｐｏｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１） Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．９（４）：２７９−９０．
［２］ Ｅｃｋｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ．（２００５） Ｓｃｉｅｎｃｅ．１０；３０８（５７２８）：１６３５−８．
［３］ Ｍａｃｐｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００１） Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．３（１２）：１０２１−３５
［４］ Ｍａｃｐｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．５９（１２）２０８８−９６．
［５］ Ｍａｚｍａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．（２００５） Ｃｅｌｌ １５；１２２（１）：１０７−１８．
［６］ Ｆｒａｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００７） ＰＮＡＳ １０４（３４）：１３７８０−５．
［７］ Ｓｃａｎｌａｎ ｅｔ ａｌ．（２００６） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４４（１１）：３９８０−８．
［８］ Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１０） Ｉｎｆｌａｍｍ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ．１６（１２）２０３４−４２．
［９］ Ｍａｃｈｉｅｌｓ ｅｔａｌ．（２０１３） Ｇｕｔ．６３（８）：１２７５−８３．
［１０］ Ｍａｙｅｒ ｅｔ ａｌ（２０１４） Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ３４（４６）：１５４９０ −１５４９６
［１１］ Ｃｒｙａｎ ａｎｄ Ｄｉｎａｎ（２０１５） Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４０：２４１−２．
［１２］ Ｚｈｏｕ ａｎｄ Ｆｏｓｔｅｒ（２０１５） Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ １１：７１５−７２３．
［１３］ Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｋａｓｐｅｒ（２０１４） Ｂｒａｉｎ Ｂｅｈａｖ Ｉｍｍｕｎ．３８：１−１２．
［１４］ ＷＯ ２０１３／０５０７９２
［１５］ ＷＯ ０３／０４６５８０
［１６］ ＷＯ ２０１３／００８０３９
［１７］ ＷＯ ２０１４／１６７３３８
［１８］ Ｇｏｌｄｉｎ ａｎｄ Ｇｏｒｂａｃｈ（２００８） Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．４６ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ９６−１００．
［１９］ Ａｚａｄ ｅｔａｌ．（２０１３） ＢＡ／Ｊ．３４７：ｆ６４７１．
［２０］ Ｂｒａｖｏ ｅｔａｌ．（２０１１） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０８：１６０５０−５．
［２１］ Ｋａｎｔａｋ ｅｔ ａｌ．（２０１４） ＢｅｈａｖＰｈａｒｍａｃｏｌ．２５：７１−９．
［２２］ Ｓａｖｉｇｎａｃ ｅｔ ａｌ．（２０１４） ＮｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＭｏｔｉｌ．２６：１６１５−２７．
［２３］ ｄｅ Ｔｈｅｉｊｅ ｅｔ ａｌ．（２０１４） Ｂｒａｉｎ Ｂｅｈａｖ Ｉｍｍｕｎ．３７：１９７−２０６．
［２４］ Ｈｓｉａｏ ｅｔａｌ．（２０１３） Ｃｅｌｌ，１５５：１４５１−６３．
［２５］ Ｍｅｙｚａ ａｎｄ Ｂｌａｎｃｈａｒｄ（２０１７） Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｂｉｏｂｅｈａｖ Ｒｅｖ．
［２６］ Ｌｉｕ ｅｔａｌ．（２００８） Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ５８，１８９６−１９０２．
［２７］ Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．（２０１２） Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２（Ｐｔ ４）：７７６−９．
［２８］ Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（２００８） Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５８（Ｐｔ ８）：１８９６−９０２．
［２９］ Ｍａｓｃｏ ｅｔａｌ．（２００３） Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２６：５５７−５６３．
［３０］ Ｓｒｕｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．（２０１１） Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，８７（１）：１０−６．
［３１］ Ｂｅｍａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６） Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１６６（３），１７６−１８３．
［３２］ Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１６） ＪＮｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＭｏｔｉｌ ＩＴ．５８９−６０５．
［３３］ Ｌｉ ａｎｄ Ｚｈｏｕ（２０１６） Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ３２４：１３１−１３９．
［３４］ Ｈｙｌａｎｄ ａｎｄ Ｓｔａｎｔｏｎ（２０１６） Ｔｈｅ Ｇｕｔ−Ｂｒａｉｎ Ａｘｉｓ：Ｄｉｅｔａｒｙ，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ａｎｄ Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｛Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）．
［３５］ Ｂｏｕｒａｓｓａ ｅｔ ａｌ．（２０１６） Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ ６２５，５６−６３
［３６］ Ｍｉｙａｍｏｔｏ−Ｓｈｉｎｏｈａｒａ ｅｔ ａｌ．（２００８）７ Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，５４，９−２４．
［３７］ Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｅｄ．ｂｙ Ｄａｙ ａｎｄ ＭｃＬｅｌｌａｎ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ．
［３８］ Ｌｅｓｌｉｅ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６１，３５９２−３５９７．
［３９］ Ｍｉｔｒｏｐｏｕｌｏｕ ｅｔ ａｌ．（２０１３） ＪＮｕｔｒ Ｍｅｔａｂ．（２０１３） ７１６８６１．
［４０］ Ｋａｉｌａｓａｐａｔｈｙ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ｃｕｒｒ Ｉｓｓｕｅｓ Ｉｎｔｅｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３（２）：３９−４８．
［４１］ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９９４），Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ａ Ｗａｄｅ ａｎｄ ＰＪ Ｗｅｌｌｅｒ
［４２］ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｉｔ．１９８５）
［４３］ ＵＳ ２０１６／００６７１８８
［４４］ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｄｉａ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１０） Ｒｏｎａｌｄ Ａｔｌａｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ．
［４５］ Ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（１９９６） Ｊｅｎｎｉｅ Ｃ．Ｈｕｎｔｅｒ−Ｃｅｖｅｒａ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
［４６］ Ｓｔｒｏｂｅｌ（２００９） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．５８１：２４７−６１．
［４７］ Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００） Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２．
［４８］ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ａｎ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ，（Ｒｅａｍ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９８，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）．
［４９］ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）
［５０］ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ，１９８６，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）
［５１］ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）．
［５２］ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７）
［５３］Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）（２００２） Ｓｈｏｒｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）．
［５４］ ＰＣＲ（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｓｅｒｉｅｓ），２ｎｄ ｅｄ．（Ｎｅｗｔｏｎ ＆ Ｇｒａｈａｍ ｅｄｓ．，１９９７，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ）
［５５］ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７） Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ３０
[56] Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１） Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９．
［５７］ Ｃｒｙａｎ ａｎｄ Ｍｏｍｂｅｒｅａｕ（２００４） Ｍｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ９：３２６−５７．
［５８］ Ｈｙｌａｎｄ ａｎｄ Ｃｏｘ（２００６） Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１４６（５）：７１２−７２２
Claims (81)
- 中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ属の細菌株を含む組成物。
- 中枢神経系障害または状態が、微生物叢−腸−脳軸によって介在される、請求項１に記載の組成物。
- 神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、請求項１または２に記載の組成物。
- 自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；慢性疼痛；運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群；及び髄膜炎；からなる群から選択される障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、請求項１または２に記載の組成物。
- 自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
- 自閉症を低減または予防する方法における使用のための、請求項５に記載の組成物。
- 常同、反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減または軽減する、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
- 強迫神経症を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
- 反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減または軽減する、請求項８に記載の組成物。
- 大うつ病性障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
- 急性大うつ病エピソード及び／または新しいエピソードの予防（再発予防）を処置または予防する、請求項１０に記載の組成物。
- 穏やかな、中程度のまたは重度のＭＤＤエピソードの発生を予防、低減または軽減する、請求項１０または１１に記載の組成物。
- 不安障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
- 不安障害が、全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び／または選択的無言症；である、請求項１３に記載の組成物。
- 神経認知障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
- 神経認知障害が、血管性認知症；アルツハイマー病及び血管性認知症の混合形態；レビー小体病；前頭側頭認知症；パーキンソン認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；ハンチントン病；ならびにウェルニッケ・コルサコフ症候群；である、請求項１５に記載の組成物。
- 微生物叢−腸−脳軸を調節する方法における使用のための、請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓのものである、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅのものである、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａのものである、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、配列番号１または２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、配列番号２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％もしくは９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する、または、前記細菌株が、配列番号２によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する、請求項２２に記載の組成物。
- 細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１７及び１９のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、配列番号３または４と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１７及び１９のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、配列番号４と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％もしくは９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有するか、あるいは、配列番号４によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する、請求項２５に記載の組成物。
- 細菌株が、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１７及び２０のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、配列番号７と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１７及び２０のいずれかに記載の組成物。
- 自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 自閉症を低減または予防する方法における使用のための、請求項２９に記載の組成物。
- 常同、反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減または軽減するＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項２９または３０に記載の組成物。
- 強迫神経症を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減または軽減するＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項３２に記載の組成物。
- 大うつ病性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 急性大うつ病エピソード及び／または新しいエピソードの予防（再発予防）を処置または予防するＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項３４に記載の組成物。
- 穏やかな、中程度のまたは重度のＭＤＤエピソードの発生を予防、低減または軽減する、請求項３４または３５に記載の組成物。
- 不安障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 不安障害が、全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び／または選択的無言症；である、請求項３７に記載の組成物。
- 神経認知障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 神経認知障害が、血管性認知症；アルツハイマー病及び血管性認知症の混合形態；レビー小体病；前頭側頭認知症；パーキンソン認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；ハンチントン病；ならびにウェルニッケ・コルサコフ症候群；である、請求項３９に記載の組成物。
- 自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 自閉症を低減または予防する方法における使用のための、請求項４１に記載の組成物。
- 常同、反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減または軽減するＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項４１または４２に記載の組成物。
- 強迫神経症を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減または軽減するＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項４４に記載の組成物。
- 大うつ病性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 急性大うつ病エピソード及び／または新しいエピソードの予防（再発予防）を処置または予防するＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項４６に記載の組成物。
- 穏やかな、中程度のまたは重度のＭＤＤエピソードの発生を予防、低減または軽減する、請求項４６または４７に記載の組成物。
- 不安障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 不安障害が、全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び／または選択的無言症；である、請求項４９に記載の組成物。
- 神経認知障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 神経認知障害が、血管性認知症；アルツハイマー病及び血管性認知症の混合形態；レビー小体病；前頭側頭認知症；パーキンソン認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；ハンチントン病；ならびにウェルニッケ・コルサコフ症候群；である、請求項５１に記載の組成物。
- 自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 自閉症を低減または予防する方法における使用のための、請求項５３に記載の組成物。
- 常同、反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減または軽減するＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項５３または５４に記載の組成物。
- 強迫神経症を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減または軽減するＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項５６に記載の組成物。
- 大うつ病性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 急性大うつ病エピソード及び／または新しいエピソードの予防（再発予防）を処置または予防するＢｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項５８に記載の組成物。
- 穏やかな、中程度のまたは重度のＭＤＤエピソードの発生を予防、低減または軽減する、請求項５８または５９に記載の組成物。
- 不安障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 不安障害が、全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び／または選択的無言症；である、請求項６１に記載の組成物。
- 神経認知障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む、請求項１に記載の組成物。
- 神経認知障害が、血管性認知症；アルツハイマー病及び血管性認知症の混合形態；レビー小体病；前頭側頭認知症；パーキンソン認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；ハンチントン病；ならびにウェルニッケ・コルサコフ症候群；である、請求項６３に記載の組成物。
- 細菌株がブチレートのレベルを増加させる、請求項２０、２７及び２８のいずれか一項に記載の組成物。
- 経口投与用である、請求項１〜６５のいずれかに記載の組成物。
- １または２以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、請求項１〜６６のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、凍結乾燥されている、請求項１〜６７のいずれかに記載の組成物。
- 細菌株が、生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である、請求項１〜６８のいずれかに記載の組成物。
- Ｂｌａｕｔｉａの単一株を含む、請求項１〜６９のいずれかに記載の組成物。
- 微生物コンソーシアムの一部としてＢｌａｕｔｉａ細菌株を含む、請求項１〜７０のいずれかに記載の組成物。
- 請求項１〜６、８、１０、１３〜１７、２９、３０、３２、３４、３７〜４２、４４、４６、４９〜５４、５６、５８、及び６１〜６４のいずれかに記載の使用のための、請求項１〜７１のいずれかに記載の組成物を含む食品。
- 請求項１〜６、８、１０、１３〜１７、２９、３０、３２、３４、３７〜４２、４４、４６、４９〜５４、５６、５８、及び６１〜６４のいずれかに記載の使用のための、請求項１〜７１のいずれかに記載の組成物を含むワクチン組成物。
- 中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法であって、Ｂｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ種の細菌株を含む組成物を、前記組成物を必要とする患者に投与することを含む、前記方法。
- 中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法であって、Ｂｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ種の細菌株を含む組成物を、前記組成物を必要とする患者に投与することを含む、前記方法。
- 中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法であって、Ｂｌａｕｔｉａ ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ種の細菌株を含む組成物を、前記組成物を必要とする患者に投与することを含む、前記方法。
- 請求項１〜１８、２０〜２２、２６〜３７及び５０〜５５のいずれかに記載の使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２３８１で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｓｔｅｒｃｏｒｉｓ株、またはその派生物の細胞。
- 請求項１〜１７、１９、２３〜２５、及び３８〜５５のいずれかに記載の使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８６で寄託されているＢｌａｕｔｉａ ｗｅｘｌｅｒａｅ株、またはその派生物の細胞。
- 請求項１〜１８、２０〜２２、２６〜３７及び５０〜５５のいずれかに記載の使用のための、請求項７７のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。
- 請求項１〜１７、１９、２３〜２５、及び３８〜５５のいずれかに記載の使用のための、請求項７８のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。
- 薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、請求項７９または８０に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (13)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB1708176.1 | 2017-05-22 | ||
| GBGB1708176.1A GB201708176D0 (en) | 2017-05-22 | 2017-05-22 | Compositions comprising bacterial strains |
| GBGB1714309.0A GB201714309D0 (en) | 2017-09-06 | 2017-09-06 | Compositions comprising bacterial strains |
| GB1714305.8 | 2017-09-06 | ||
| GB1714298.5 | 2017-09-06 | ||
| GB1714309.0 | 2017-09-06 | ||
| GBGB1714298.5A GB201714298D0 (en) | 2017-09-06 | 2017-09-06 | Compositions comprising bacterial strains |
| GBGB1714305.8A GB201714305D0 (en) | 2017-09-06 | 2017-09-06 | Compositions comprising bacterial strains |
| GB1716493.0 | 2017-10-09 | ||
| GBGB1716493.0A GB201716493D0 (en) | 2017-10-09 | 2017-10-09 | Compositions comprising baterial strains |
| GBGB1718551.3A GB201718551D0 (en) | 2017-11-09 | 2017-11-09 | Compositions comprising bacterial strains |
| GB1718551.3 | 2017-11-09 | ||
| PCT/GB2018/051389 WO2018215758A1 (en) | 2017-05-22 | 2018-05-22 | Compositions comprising bacterial strains |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2020520911A true JP2020520911A (ja) | 2020-07-16 |
| JP2020520911A5 JP2020520911A5 (ja) | 2021-07-26 |
Family
ID=62245356
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019563457A Active JP7221538B2 (ja) | 2017-05-22 | 2018-05-22 | 細菌株を含む組成物 |
| JP2019563363A Active JP7212945B2 (ja) | 2017-05-22 | 2018-05-22 | 細菌株を含む組成物 |
| JP2019563398A Pending JP2020520911A (ja) | 2017-05-22 | 2018-05-22 | 細菌株を含む組成物 |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019563457A Active JP7221538B2 (ja) | 2017-05-22 | 2018-05-22 | 細菌株を含む組成物 |
| JP2019563363A Active JP7212945B2 (ja) | 2017-05-22 | 2018-05-22 | 細菌株を含む組成物 |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US11382936B2 (ja) |
| EP (3) | EP3630136B1 (ja) |
| JP (3) | JP7221538B2 (ja) |
| KR (1) | KR20200019882A (ja) |
| CN (1) | CN110913878A (ja) |
| AU (1) | AU2018272291A1 (ja) |
| CA (1) | CA3064171A1 (ja) |
| CY (1) | CY1124286T1 (ja) |
| DK (1) | DK3630136T3 (ja) |
| ES (2) | ES2955870T3 (ja) |
| HR (1) | HRP20210780T1 (ja) |
| HU (1) | HUE054164T2 (ja) |
| LT (1) | LT3630136T (ja) |
| MA (3) | MA48941A (ja) |
| MD (1) | MD3630136T2 (ja) |
| PL (1) | PL3630136T3 (ja) |
| PT (1) | PT3630136T (ja) |
| RS (1) | RS61872B1 (ja) |
| SI (1) | SI3630136T1 (ja) |
| SM (1) | SMT202100420T1 (ja) |
| TW (3) | TW201907928A (ja) |
| WO (3) | WO2018215758A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7705633B2 (ja) | 2021-06-01 | 2025-07-10 | 花王株式会社 | 内臓脂肪低減剤 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MA48941A (fr) * | 2017-05-22 | 2020-04-08 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| GB202001336D0 (en) * | 2020-01-31 | 2020-03-18 | Imp College Innovations Ltd | Methods for measuring gut permeability and gastric emptying rate |
| TWI770487B (zh) * | 2020-03-26 | 2022-07-11 | 益福生醫股份有限公司 | 減少行為異常的方法 |
| CN113832069B (zh) * | 2020-11-30 | 2024-01-30 | 河南农业大学 | 丁酸梭菌及其应用 |
| CN119546318A (zh) * | 2022-05-20 | 2025-02-28 | 巴斯德研究院 | 用于治疗和预防阿尔茨海默病和衰老的毛螺菌种菌株和酸奶瘤胃球菌菌株 |
| WO2024145743A1 (zh) * | 2023-01-03 | 2024-07-11 | 哈尔滨工业大学 | 一类rna引导的内切酶系统及其基因编辑应用 |
| EP4527396A1 (en) | 2023-09-22 | 2025-03-26 | Igen Biolab Group AG | Therapeutic use of a postbiotic composition for psychiatric disorders |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013119546A (ja) * | 2011-12-09 | 2013-06-17 | Meiji Co Ltd | 不安及び／又は多動性の改善剤 |
| JP2016529309A (ja) * | 2013-09-06 | 2016-09-23 | ソファル ソチエタ ペル アツィオニ | 酪酸、葉酸、又はナイアシンの腸内産生を増加させるための、及び／又はコハク酸の腸内産生を低下させるための、微生物を含む組成物の使用 |
| WO2016203218A1 (en) * | 2015-06-15 | 2016-12-22 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strains |
Family Cites Families (365)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
| US3817837A (en) | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
| US3939350A (en) | 1974-04-29 | 1976-02-17 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation |
| US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
| US4275149A (en) | 1978-11-24 | 1981-06-23 | Syva Company | Macromolecular environment control in specific receptor assays |
| US4277437A (en) | 1978-04-05 | 1981-07-07 | Syva Company | Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay |
| US4366241A (en) | 1980-08-07 | 1982-12-28 | Syva Company | Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays |
| NL8300698A (nl) | 1983-02-24 | 1984-09-17 | Univ Leiden | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten. |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| DK122686D0 (da) | 1986-03-17 | 1986-03-17 | Novo Industri As | Fremstilling af proteiner |
| FR2613624B1 (fr) | 1987-04-10 | 1990-11-23 | Roussy Inst Gustave | Composition pharmaceutique, administrable par voie orale, destinee a reduire les effets des b-lactamines |
| EP0433299B1 (en) | 1988-08-02 | 1998-05-06 | Gastro Services Pty. Limited (ACN 002 994 890) | Treatment of gastro-intestinal disorders |
| US5443826A (en) | 1988-08-02 | 1995-08-22 | Borody; Thomas J. | Treatment of gastro-intestinal disorders with a fecal composition or a composition of bacteroides and E. Coli |
| KR100225087B1 (ko) | 1990-03-23 | 1999-10-15 | 한스 발터라벤 | 피타아제의 식물내 발현 |
| CA2082279C (en) | 1990-05-09 | 2007-09-04 | Grethe Rasmussen | Cellulase preparation comprising an endoglucanase enzyme |
| GB9107305D0 (en) | 1991-04-08 | 1991-05-22 | Unilever Plc | Probiotic |
| CA2100919A1 (en) | 1992-07-20 | 1994-01-21 | Takaharu Yamamoto | Species-specific oligonucleotides for bifidobacteria and a method of detection using the same |
| CA2151154C (en) | 1992-12-10 | 1999-01-26 | William E. Hintz | Production of heterologous proteins in filamentous fungi |
| US5741665A (en) | 1994-05-10 | 1998-04-21 | University Of Hawaii | Light-regulated promoters for production of heterologous proteins in filamentous fungi |
| US5599795A (en) | 1994-08-19 | 1997-02-04 | Mccann; Michael | Method for treatment of idiopathic inflammatory bowel disease (IIBD) |
| AUPM823094A0 (en) | 1994-09-16 | 1994-10-13 | Goodman Fielder Limited | Probiotic compositions |
| AUPM864894A0 (en) | 1994-10-07 | 1994-11-03 | Borody, Thomas Julius | Treatment of bowel-dependent neurological disorders |
| RU2078815C1 (ru) | 1995-01-17 | 1997-05-10 | Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского | Штамм бактерий bifidobacterium breve, используемый для получения бактерийных лечебно-профилактических бифидосодержащих препаратов |
| JPH08259450A (ja) | 1995-03-17 | 1996-10-08 | Nichinichi Seiyaku Kk | インターフェロン産生増強剤 |
| US6861053B1 (en) | 1999-08-11 | 2005-03-01 | Cedars-Sinai Medical Center | Methods of diagnosing or treating irritable bowel syndrome and other disorders caused by small intestinal bacterial overgrowth |
| AUPN698495A0 (en) | 1995-12-06 | 1996-01-04 | Pharma Pacific Pty Ltd | Improved therapeutic formulation and method |
| SE508045C2 (sv) | 1996-02-26 | 1998-08-17 | Arla Ekonomisk Foerening | Adhesionsinhibitorer, preparat innehållande desamma och förfarande för framställning därav |
| AUPN881396A0 (en) | 1996-03-20 | 1996-04-18 | Arnott's Biscuits Limited | Enhancement of microbial colonization of the gastrointestinal tract |
| DE69738975D1 (de) | 1996-03-20 | 2008-10-23 | Univ New South Wales Kensingto | Veränderung der mikrobenflora im verdauungstrakt |
| ES2257774T3 (es) | 1996-03-27 | 2006-08-01 | Novozymes A/S | Hongos filamentosos carentes de proteasa alcalina. |
| US6033864A (en) | 1996-04-12 | 2000-03-07 | The Regents Of The University Of California | Diagnosis, prevention and treatment of ulcerative colitis, and clinical subtypes thereof, using microbial UC pANCA antigens |
| WO1998043081A1 (en) | 1997-03-26 | 1998-10-01 | Ligand Pharmaceuticals Incorporated | Treatment of gastrointestinal disease with ppar modulators |
| SE511524C2 (sv) | 1997-06-02 | 1999-10-11 | Essum Ab | Lactobacillus casei rhamnosus-stam samt farmaceutisk beredning för bekämpning av patogena tarmbakterier |
| US5925657A (en) | 1997-06-18 | 1999-07-20 | The General Hospital Corporation | Use of PPARγ agonists for inhibition of inflammatory cytokine production |
| AUPO758297A0 (en) | 1997-06-27 | 1997-07-24 | Rowe, James Baber | Control of acidic gut syndrome |
| US5951977A (en) | 1997-10-14 | 1999-09-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Competitive exclusion culture for swine |
| IT1298918B1 (it) | 1998-02-20 | 2000-02-07 | Mendes Srl | Uso di batteri dotati di arginina deiminasi per indurre apoptosi e/o ridurre una reazione infiammatoria e composizioni farmaceutiche |
| DE19826928A1 (de) | 1998-06-17 | 1999-12-23 | Novartis Consumer Health Gmbh | Arzneimittel, lebensfähige anaerobe Bakterien enthaltend, die die Sulfatreduktion sulfatreduzierender Bakterien hemmen |
| ID29150A (id) | 1999-01-15 | 2001-08-02 | Entpr Ireland Cs | Penggunaan lactobacillus salivarius |
| US7090973B1 (en) | 1999-04-09 | 2006-08-15 | Oscient Pharmaceuticals Corporation | Nucleic acid sequences relating to Bacteroides fragilis for diagnostics and therapeutics |
| ES2204684T3 (es) | 1999-08-27 | 2004-05-01 | Eli Lilly And Company | Derivados de biaril-oxa(tia)zol y su uso como modulares de ppar. |
| CN101238853A (zh) | 2000-02-08 | 2008-08-13 | Dsmip资产公司 | 酸-稳定性蛋白酶在动物饲料中的用途 |
| FR2808689B1 (fr) | 2000-05-11 | 2004-09-03 | Agronomique Inst Nat Rech | Utilisation de souches acetogenes hydrogenotrophes pour la prevention ou le traitement de troubles digestifs |
| US20020013270A1 (en) | 2000-06-05 | 2002-01-31 | Bolte Ellen R. | Method for treating a mental disorder |
| AUPQ899700A0 (en) | 2000-07-25 | 2000-08-17 | Borody, Thomas Julius | Probiotic recolonisation therapy |
| EP1414853A2 (en) | 2000-11-27 | 2004-05-06 | Washington University | Method for studying the effects of commensal microflora on mammalian intestine and treatments of gastrointestinal-associated disease based thereon |
| DE10101793A1 (de) | 2001-01-17 | 2002-08-01 | Manfred Nilius | Verwendung von SLPI zur Behandlung chronisch-entzündlicher Darmerkrankungen |
| EP1227152A1 (en) | 2001-01-30 | 2002-07-31 | Société des Produits Nestlé S.A. | Bacterial strain and genome of bifidobacterium |
| CN1133810C (zh) | 2001-02-16 | 2004-01-07 | 郗大光 | 电动燃油喷射装置 |
| KR100437497B1 (ko) | 2001-03-07 | 2004-06-25 | 주식회사 프로바이오닉 | 로타바이러스 및 유해 미생물 억제 활성을 가지는 신규내산성 락토바실러스 루테리 프로바이오-16 및 이를함유하는 생균활성제 |
| EP1243273A1 (en) | 2001-03-22 | 2002-09-25 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Composition comprising a prebiotic for decreasing infammatory process and abnormal activation of non-specific immune parameters |
| WO2002085933A1 (en) | 2001-04-20 | 2002-10-31 | The Institute For Systems Biology | Toll-like receptor 5 ligands and methods of use |
| EP1260227A1 (en) | 2001-05-23 | 2002-11-27 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Lipoteichoic acid from lactic acid bacteria and its use to modulate immune responses mediated by gram-negative bacteria, potential pathogenic gram-positive bacteria |
| US20030092163A1 (en) | 2001-07-26 | 2003-05-15 | Collins John Kevin | Probiotic bifidobacterium strains |
| EP1432426A2 (en) | 2001-09-05 | 2004-06-30 | ACTIAL Farmaceutica Lda. | USE OF UNMETHYLATED CpG |
| GB0127916D0 (en) | 2001-11-21 | 2002-01-16 | Rowett Res Inst | Method |
| US20050037955A1 (en) | 2001-11-27 | 2005-02-17 | Hooper Laura Virginia | Therapeutic protein and treatments |
| CA2476755C (en) | 2001-12-17 | 2014-08-26 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of inflammatory bowel disease |
| US7101565B2 (en) | 2002-02-05 | 2006-09-05 | Corpak Medsystems, Inc. | Probiotic/prebiotic composition and delivery method |
| DE10206995B4 (de) | 2002-02-19 | 2014-01-02 | Orthomol Pharmazeutische Vertriebs Gmbh | Mikronährstoffkombinationsprodukt mit Pro- und Prebiotika |
| JP2003261453A (ja) | 2002-03-11 | 2003-09-16 | Nippon Berumu Kk | Ｅ．フェカリスからなる抗腫瘍剤及び放射線防護剤 |
| AU2003242763B2 (en) | 2002-06-28 | 2008-02-21 | Biosearch, S.A. | Probiotic strains, a process for the selection of them, compositions thereof, and their use |
| US20040005304A1 (en) | 2002-07-08 | 2004-01-08 | Mak Wood, Inc. | Novel compositions and methods for treating neurological disorders and associated gastrointestinal conditions |
| GB0307026D0 (en) | 2003-03-27 | 2003-04-30 | Rowett Res Inst | Bacterial supplement |
| EP1481681A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-01 | Claudio De Simone | Lactic acid bacteria combination and compositions thereof |
| GB0316915D0 (en) | 2003-07-18 | 2003-08-20 | Glaxo Group Ltd | Compounds |
| WO2005007834A1 (en) | 2003-07-23 | 2005-01-27 | Probionic Corp. | Acid tolerant probiotic lactobacillus plantarum probio-38 that can suppress the growth of pathogenic microorganism and tge coronavirus |
| US7485325B2 (en) | 2003-08-06 | 2009-02-03 | Gayle Dorothy Swain | Animal food supplement compositions and methods of use |
| JP4683881B2 (ja) | 2003-08-27 | 2011-05-18 | 有限会社アーク技研 | 抗腫瘍活性剤 |
| US8192733B2 (en) | 2003-08-29 | 2012-06-05 | Cobb & Associates | Probiotic composition useful for dietary augmentation and/or combating disease states and adverse physiological conditions |
| US20050163764A1 (en) | 2003-09-22 | 2005-07-28 | Yale University | Treatment with agonists of toll-like receptors |
| GB0323039D0 (en) | 2003-10-01 | 2003-11-05 | Danisco | Method |
| AU2004283626B2 (en) | 2003-10-24 | 2010-07-15 | N.V. Nutricia | Synbiotic composition for infants |
| US20050239706A1 (en) | 2003-10-31 | 2005-10-27 | Washington University In St. Louis | Modulation of fiaf and the gastrointestinal microbiota as a means to control energy storage in a subject |
| CA2550106A1 (en) | 2003-12-17 | 2005-06-30 | N.V. Nutricia | Lactic acid producing bacteria and lung function |
| ES2235642B2 (es) | 2003-12-18 | 2006-03-01 | Gat Formulation Gmbh | Proceso de multi-microencapsulacion continuo para la mejora de la estabilidad y almacenamiento de ingredientes biologicamente activos. |
| CN1954066A (zh) | 2004-03-22 | 2007-04-25 | 美国政府健康及人类服务部 | 细胞和病毒灭活 |
| EP1755668A2 (en) | 2004-05-07 | 2007-02-28 | Hans-Gustaf Ljunggren | Adjuvants |
| US7638513B2 (en) | 2004-06-02 | 2009-12-29 | Schering Corporation | Compounds for the treatment of inflammatory disorders |
| PE20060426A1 (es) | 2004-06-02 | 2006-06-28 | Schering Corp | DERIVADOS DE ACIDO TARTARICO COMO INHIBIDORES DE MMPs, ADAMs, TACE Y TNF-alfa |
| CN101022826A (zh) | 2004-06-07 | 2007-08-22 | 哈罗尔·戴维·贡 | 用于癌症治疗的细菌组合物 |
| ES2286558T5 (es) | 2004-08-24 | 2013-10-15 | N.V. Nutricia | Composición nutritiva que comprende transgalactooligosacáridos indigeribles y sacáridos de galactosa digeribles |
| US20060062773A1 (en) | 2004-09-21 | 2006-03-23 | The Procter & Gamble Company | Compositions for maintaining and restoring normal gastrointestinal flora |
| KR100468522B1 (ko) | 2004-10-12 | 2005-01-31 | 주식회사 프로바이오닉 | 코로나바이러스와 돼지 써코바이러스 2형의 생육을 억제하는 신규한 내산성 프로바이오틱 엔테로코커스훼시움 프로바이오-63 |
| US20060115465A1 (en) | 2004-10-29 | 2006-06-01 | Macfarlane George | Treatment of gastrointestinal disorders |
| ITMI20042189A1 (it) | 2004-11-16 | 2005-02-16 | Anidral Srl | Composizione a base di batteri probiotici e suo uso nella prevenzione e-o nel trattamento di patologie e-o infezioni respiratorie e nel miglioramento della funzionalita' intestinale |
| PL2805625T5 (pl) | 2005-02-28 | 2023-03-13 | N.V. Nutricia | Kompozycja odżywcza z prebiotykami i probiotykami |
| US20090233888A1 (en) | 2005-03-23 | 2009-09-17 | Usc Stevens, University Of Southern California | Treatment of disease conditions through modulation of hydrogen sulfide produced by small intestinal bacterial overgrowth |
| US20100048595A1 (en) | 2005-03-23 | 2010-02-25 | Washington University In St. Louis | Use of archaea to modulate the nutrient harvesting functions of the gastrointestinal microbiota |
| JP2006265212A (ja) | 2005-03-25 | 2006-10-05 | Institute Of Physical & Chemical Research | Ｉｌ−２１産生誘導剤 |
| US20100233312A9 (en) | 2005-04-11 | 2010-09-16 | The Procter & Gamble Company | Compositions comprising probiotic and sweetener components |
| EP1714660A1 (en) | 2005-04-21 | 2006-10-25 | N.V. Nutricia | Uronic acid and probiotics |
| DK1874917T3 (da) | 2005-04-26 | 2012-05-14 | Teagasc Agric Food Dev Authori | Probiotisk sammensætning, der er egnet til dyr |
| PT2161336E (pt) | 2005-05-09 | 2013-10-03 | Ono Pharmaceutical Co | Anticorpos monoclonais humanos para morte programada 1 (pd-1) e métodos de tratamento do cancro utilizando anticorpos anti- pd-1 sozinhos ou em combinação com outros agentes imunoterapêuticos¿ |
| US7572474B2 (en) | 2005-06-01 | 2009-08-11 | Mead Johnson Nutrition Company | Method for simulating the functional attributes of human milk oligosaccharides in formula-fed infants |
| US8075934B2 (en) | 2008-10-24 | 2011-12-13 | Mead Johnson Nutrition Company | Nutritional composition with improved digestibility |
| JP2007084533A (ja) | 2005-08-24 | 2007-04-05 | Prima Meat Packers Ltd | 免疫応答調節組成物及び該組成物を有効成分とする食品 |
| US7625704B2 (en) | 2005-08-31 | 2009-12-01 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Methods and compositions for identifying bacteria associated with bacteria vaginosis |
| RS51142B (sr) | 2005-09-01 | 2010-10-31 | Schering Corporation | Primena antagonista il-23 i il-17 za lečenje autoimunog okularnog zapaljenskog oboljenja |
| US20090028840A1 (en) | 2005-09-23 | 2009-01-29 | Gwangju Institute Of Sciecne And Technology | Compositions For Preventing Or Treating Arthritis Comprising Lactic Acid Bacteria and Collangen As Active Ingredients |
| EP1776877A1 (en) | 2005-10-21 | 2007-04-25 | N.V. Nutricia | Method for stimulating the intestinal flora |
| CA2626398C (en) | 2005-10-24 | 2011-04-19 | Nestec S.A. | Dietary fiber formulation and method of administration |
| JP2007116991A (ja) | 2005-10-28 | 2007-05-17 | Eternal Light General Institute Inc | 機能性食品 |
| US7767420B2 (en) | 2005-11-03 | 2010-08-03 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Heparan sulfate glycosaminoglycan lyase and uses thereof |
| US7553864B2 (en) | 2005-12-01 | 2009-06-30 | Schering Corporation | Compounds for the treatment of inflammatory disorders and microbial diseases |
| US8889149B2 (en) | 2006-02-16 | 2014-11-18 | Wayne State University | Use of flagellin to prevent and treat gram negative bacterial infection |
| US20080260898A1 (en) | 2006-03-17 | 2008-10-23 | Marko Stojanovic | Compositions comprising probiotic and sweetener components |
| JP5031249B2 (ja) | 2006-03-22 | 2012-09-19 | 学校法人北里研究所 | 炎症抑制作用のある菌体含有組成物 |
| JP2009537547A (ja) | 2006-05-18 | 2009-10-29 | バイオバランス エルエルシー | 生物学的治療組成物およびその使用 |
| BRPI0712087A2 (pt) | 2006-05-26 | 2012-07-17 | Nestec Ag | métodos de uso e composições nutricionais de extrato de rouchi |
| US20100028449A1 (en) | 2006-06-06 | 2010-02-04 | Satya Prakash | Fermented milk product and use thereof |
| TW200819540A (en) | 2006-07-11 | 2008-05-01 | Genelux Corp | Methods and compositions for detection of microorganisms and cells and treatment of diseases and disorders |
| MX2010000172A (es) | 2006-08-04 | 2012-09-25 | Shs Int Ltd | Formula libre de proteina. |
| WO2008031438A2 (en) | 2006-09-13 | 2008-03-20 | Region Hovedstaden V/Gentofte Hospital | Treatment of asthma, eczema and/or allergy using non-pathogenic organisms |
| US20080069861A1 (en) | 2006-09-19 | 2008-03-20 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Probiotic/Non-Probiotic Combinations |
| KR20120038021A (ko) | 2006-10-27 | 2012-04-20 | 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 | 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스 경질 캡슐 및 이의 제조 방법 |
| US20080118473A1 (en) | 2006-11-01 | 2008-05-22 | The Procter & Gamble Company | Methods of treating a respiratory condition comprising probiotic treatment |
| EP1920782A1 (en) | 2006-11-10 | 2008-05-14 | Glycotope Gmbh | Carboyhdrate specific cellular immunity inducing microorganisms and fractions thereof |
| WO2008064489A1 (en) | 2006-12-01 | 2008-06-05 | Mcmaster University | Probiotics to inhibit inflammation |
| WO2008076696A2 (en) | 2006-12-18 | 2008-06-26 | Washington University In St. Louis | The gut microbiome as a biomarker and therapeutic target for treating obesity or an obesity related disorder |
| DE102006062250A1 (de) | 2006-12-22 | 2008-06-26 | Roland Saur-Brosch | Verwendung einer Zusammensetzung aus Mineralstoffen und/oder Vitaminen und gegebenenfalls acetogenen und/oder butyrogenen Bakterien zur oralen oder rektalen Verabreichung für die Behandlung und Vorbeugung von abdominalen Beschwerden |
| WO2008083157A2 (en) | 2006-12-29 | 2008-07-10 | Washington University In St. Louis | Altering pgc-1alapha, ampk, fiaf, or the gastrointestinal microbiota as a means to modulate body fat and/or weight loss in a subject |
| JP2008195635A (ja) | 2007-02-09 | 2008-08-28 | Crossfield Bio Inc | 馬用乳酸菌製剤 |
| RU2468808C2 (ru) | 2007-02-28 | 2012-12-10 | Мид Джонсон Нутришен Компани | Способ лечения или предотвращения системного воспаления |
| GB2460781B (en) | 2007-03-28 | 2012-01-25 | Alimentary Health Ltd | Probiotic bifidobacterium strains |
| BRPI0810087A2 (pt) | 2007-03-28 | 2014-10-21 | Alimentary Health Ltd | Cepas de bifidobacterium probióticas |
| US20080299098A1 (en) | 2007-04-24 | 2008-12-04 | Chea-Yun Se | Broad-Spectrum Antibacterial and Antifungal Activity of Lactobacillus Johnsonii D115 |
| EP1997499A1 (en) | 2007-05-31 | 2008-12-03 | Puleva Biotech, S.A. | Mammalian milk microorganisms, compositions containing them and their use for the treatment of mastitis |
| EP1997907A1 (en) | 2007-06-01 | 2008-12-03 | Friesland Brands B.V. | Bifidobacteria |
| EP1997906A1 (en) | 2007-06-01 | 2008-12-03 | Friesland Brands B.V. | Lactobacillus |
| EP1997905A1 (en) | 2007-06-01 | 2008-12-03 | Friesland Brands B.V. | Nucleic acid amplification |
| WO2008153377A1 (en) | 2007-06-15 | 2008-12-18 | N.V. Nutricia | Nutrition with non-viable bifidobacterium and non-digestible oligosaccharide |
| ES2523575T3 (es) | 2007-06-27 | 2014-11-27 | Laboratorios Ordesa, S.L. | Una nueva cepa de bifidobacterium y peptidos acitvos contra infecciones por rotavirus |
| HUP0700552A2 (en) | 2007-08-27 | 2009-03-30 | Janos Dr Feher | Method and composition inhibiting inflammation |
| WO2009030254A1 (en) | 2007-09-04 | 2009-03-12 | Curevac Gmbh | Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation |
| EP2192909A2 (en) | 2007-10-01 | 2010-06-09 | University College Cork-National University of Ireland, Cork | Modulation of tissue fatty acid composition of a host by human gut bacteria |
| WO2009049932A1 (en) | 2007-10-20 | 2009-04-23 | Universite De Liege | Bifidobacterial species |
| DK2211879T3 (da) | 2007-10-26 | 2014-07-21 | Brenda E Moore | Probiotiske sammensætninger samt fremgangsmåder til at indlede og understøtte vægttab |
| WO2009059284A2 (en) | 2007-11-02 | 2009-05-07 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Non-anticoagulant polysaccharide compositions |
| EP2065048A1 (en) | 2007-11-30 | 2009-06-03 | Institut Pasteur | Use of a L. casei strain, for the preparation of a composition for inhibiting mast cell activation |
| EP2898889B1 (en) | 2007-12-07 | 2017-03-22 | N.V. Nutricia | Bifidobacterium for dust mite allergy |
| WO2009079564A2 (en) | 2007-12-17 | 2009-06-25 | Emory University | Immunogenic compositions and methods of use thereof |
| ES2343499B1 (es) | 2007-12-24 | 2011-06-10 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Microorganismos para mejorar el estado de salud de individuos con desordenes relacionados con la ingesta de gluten. |
| BRPI0908348A2 (pt) | 2008-02-06 | 2015-07-28 | Procter & Gamble | Métodos e kits de composições para acentuar a resposta imunológica a uma condição respiratória |
| EP2103226A1 (en) | 2008-03-18 | 2009-09-23 | Friesland Brands B.V. | Long-life probiotic food product |
| JP2011519828A (ja) | 2008-04-18 | 2011-07-14 | バクシネート コーポレーション | フラジェリンの欠失変異体と使用方法 |
| AR071787A1 (es) | 2008-05-13 | 2010-07-14 | Glycotope Gmbh | Procedimiento de fermentacion, alimento fermentado producido por dicho procedimiento y auxiliar de procesamiento |
| MX2008006546A (es) | 2008-05-21 | 2009-11-23 | Sigma Alimentos Sa De Cv | Bifidobacteria productora de ácido fólico, composición alimenticia y uso de la bifidobacteria. |
| CN101590081A (zh) | 2008-05-28 | 2009-12-02 | 青岛东海药业有限公司 | 凸腹真杆菌和两形真杆菌制剂及其应用 |
| CN102940652B (zh) | 2008-05-28 | 2015-03-25 | 青岛东海药业有限公司 | 两形真杆菌制剂及其应用 |
| WO2009149149A1 (en) | 2008-06-04 | 2009-12-10 | Trustees Of Dartmouth College | Prevention or treatment of immune-relevant disease by modification of microfloral populations |
| EP2133088A3 (en) | 2008-06-09 | 2010-01-27 | Nestec S.A. | Rooibos and inflammation |
| WO2009151315A1 (en) | 2008-06-13 | 2009-12-17 | N.V. Nutricia | Nutritional composition for infants delivered via caesarean section |
| WO2009154463A2 (en) | 2008-06-20 | 2009-12-23 | Stichting Top Institute Food And Nutrition | Butyrate as a medicament to improve visceral perception in humans |
| EP2138186A1 (en) | 2008-06-24 | 2009-12-30 | Nestec S.A. | Probiotics, secretory IgA and inflammation |
| WO2010002241A1 (en) | 2008-06-30 | 2010-01-07 | N.V. Nutricia | Nutritional composition for infants delivered via caesarean section |
| KR101017448B1 (ko) | 2008-09-18 | 2011-02-23 | 주식회사한국야쿠르트 | 대장의 건강 증진 효능을 갖는 비피도박테리움 롱검 에이취와이8004 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 |
| US20100074870A1 (en) | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Probiotic infant products |
| US8137718B2 (en) | 2008-09-19 | 2012-03-20 | Mead Johnson Nutrition Company | Probiotic infant products |
| KR101057357B1 (ko) | 2008-09-22 | 2011-08-17 | 광주과학기술원 | 유산균 및 콜라겐을 유효성분으로 포함하는 관절염 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 식품 조성물 |
| US9603876B2 (en) | 2008-09-25 | 2017-03-28 | New York University | Compositions and methods for restoring gastrointestinal microbiota following antibiotic treatment |
| WO2010037408A1 (en) | 2008-09-30 | 2010-04-08 | Curevac Gmbh | Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof |
| US10369204B2 (en) | 2008-10-02 | 2019-08-06 | Dako Denmark A/S | Molecular vaccines for infectious disease |
| RU2509478C2 (ru) | 2008-12-05 | 2014-03-20 | Нестек С.А. | Пробиотическая композиция, предназначенная для младенцев с низкой массой тела при рождении |
| CA2746805A1 (en) | 2008-12-19 | 2010-06-24 | Nestec S.A. | Prevention and treatment of rotavirus diarrhoea |
| IT1392672B1 (it) | 2009-01-12 | 2012-03-16 | Wyeth Consumer Healthcare S P A | Composizioni comprendenti componenti probiotici e prebiotici e sali minerali, con lactoferrina |
| BRPI1013688A8 (pt) | 2009-03-05 | 2017-02-14 | Abbott Lab | Proteínas de ligação de il-17. |
| JP5710876B2 (ja) | 2009-03-26 | 2015-04-30 | クロスフィールドバイオ株式会社 | 新規ビフィドバクテリウム属微生物およびその利用 |
| KR101783383B1 (ko) | 2009-05-07 | 2017-09-29 | 테이트 ＆ 라일 인그레디언츠 프랑스 에스에이에스 | 알파-(1,2)-분지형 알파-(1,6) 올리고덱스트란을 제조하기 위한 조성물 및 방법 |
| EP2251020A1 (en) | 2009-05-11 | 2010-11-17 | Nestec S.A. | Short-time high temperature treatment generates microbial preparations with anti-inflammatory profiles |
| MY165388A (en) | 2009-05-11 | 2018-03-21 | Nestec Sa | Lactobacillus johnsonii la1 ncc533 (cncm i-1225) and immune disorders |
| EP2251022A1 (en) | 2009-05-11 | 2010-11-17 | Nestec S.A. | Non-replicating micro-organisms and their immune boosting effect |
| KR20100128168A (ko) | 2009-05-27 | 2010-12-07 | 중앙대학교 산학협력단 | 공액 리놀레산 생산능이 우수한 신규한 균주 |
| US20100311686A1 (en) | 2009-06-03 | 2010-12-09 | Kasper Lloyd H | Nutraceutical composition and methods for preventing or treating multiple sclerosis |
| WO2010143940A1 (en) | 2009-06-12 | 2010-12-16 | N.V. Nutricia | Synergistic mixture of beta-galacto-oligosaccharides with beta-1,3 and beta-1,4/1,6 linkages |
| EP2443259A4 (en) | 2009-06-16 | 2012-10-10 | Univ Columbia | BIOMARKERS ASSOCIATED WITH AUTISM AND USES THEREOF |
| WO2011005756A1 (en) | 2009-07-06 | 2011-01-13 | Puretech Ventures, Llc | Delivery of agents targeted to microbiota niches |
| US20120129794A1 (en) | 2009-07-24 | 2012-05-24 | Dowd Scot E | Apparati, methods, and compositions for universal microbial diagnosis, detection, quantification, and specimen-targeted therapy |
| PT2467032T (pt) | 2009-08-18 | 2018-04-04 | Nestec Sa | Composição nutricional compreendendo estirpes de bifidobacterium longum e que reduz os sintomas de alergia alimentar, especialmente em lactentes e crianças |
| US20110053829A1 (en) | 2009-09-03 | 2011-03-03 | Curevac Gmbh | Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids |
| PL2480255T3 (pl) | 2009-09-23 | 2018-07-31 | Thomas Julius Borody | Terapia przewlekłych zakażeń jelitowych |
| EP2308498A1 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-13 | Nestec S.A. | Administration of Bifidobacterium breve during infancy to prevent inflammation later in life |
| CA2776420A1 (en) | 2009-10-05 | 2011-04-14 | Aak Patent B.V. | Methods for diagnosing irritable bowel syndrome |
| EP3144004A1 (en) | 2009-10-06 | 2017-03-22 | Scott Dorfner | Antibiotic formulations providing reduced gastrointestinal side effects and clostridium difficile infection relapse, and related methods |
| ES2595444T3 (es) | 2009-11-11 | 2016-12-30 | Alimentary Health Limited | Cepa de Bifidobacterium probiótica |
| CA2780649C (en) | 2009-12-18 | 2014-09-30 | Hill's Pet Nutrition, Inc. | Pet food compositions including probiotics and methods of manufacture and use thereof |
| US20150104418A1 (en) | 2014-12-18 | 2015-04-16 | Microbios, Inc. | Bacterial composition |
| FR2955774A1 (fr) | 2010-02-02 | 2011-08-05 | Aragan | Preparation destinee a traiter l'exces ponderal et les desordres associes et applications de ladite preparation |
| NL2004200C2 (en) | 2010-02-05 | 2011-08-08 | Friesland Brands Bv | Use of sialyl oligosaccharides in weight management. |
| NL2004201C2 (en) | 2010-02-05 | 2011-08-08 | Friesland Brands Bv | Use of sialyl oligosaccharides to modulate the immune system. |
| IT1398553B1 (it) | 2010-03-08 | 2013-03-01 | Probiotical Spa | Composizione comprendente batteri probiotici per il trattamento di patologie associate con le alterazioni del sistema immunitario. |
| JP5737646B2 (ja) | 2010-03-24 | 2015-06-17 | 森下仁丹株式会社 | 抗アレルギー剤 |
| EP2552464B1 (en) | 2010-03-30 | 2018-02-28 | Assistance Publique - Hôpitaux de Paris | Use of bifidobacteria for preventing allergy in breastfed infants |
| US8951512B2 (en) | 2010-05-04 | 2015-02-10 | New York University | Methods for treating bone disorders by characterizing and restoring mammalian bacterial microbiota |
| WO2011149335A1 (en) | 2010-05-25 | 2011-12-01 | N.V. Nutricia | Immune imprinting nutritional composition |
| EP2585583A4 (en) | 2010-06-01 | 2014-01-15 | Moore Res Entpr Llc | CELLULAR CONSTITUENTS FROM BACTEROID GENE BACTERIA, COMPOSITIONS CONTAINING SAME, AND THERAPEUTIC METHODS USING BACTEROID BACTERIA OR CELLULAR COMPONENTS THEREOF |
| WO2011151941A1 (ja) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | 国立大学法人東京大学 | 制御性ｔ細胞の増殖または集積を誘導する作用を有する組成物 |
| TWI417054B (zh) | 2010-06-15 | 2013-12-01 | Jen Shine Biotechnology Co Ltd | 新穎糞腸球菌ｌｊｓ－０１及其益生用途 |
| EP2397145A1 (en) | 2010-06-18 | 2011-12-21 | Nestec S.A. | L. johnsonii La1, B. longum NCC2705 and immune disorders |
| FR2962045B1 (fr) | 2010-07-05 | 2012-08-17 | Bifinove | Complexe macromoleculaire d'origine bacterienne et utilisation dudit complexe moleculaire pour prevenir et traiter les rhumatismes inflammatoires |
| TWI401086B (zh) | 2010-07-20 | 2013-07-11 | Univ China Medical | 胚芽乳酸桿菌及其用途 |
| CN103140238B (zh) | 2010-07-26 | 2016-03-16 | Qu生物制药公司 | 免疫原性抗炎组合物 |
| NZ618935A (en) | 2010-08-04 | 2014-03-28 | Karma Medical Prod Co Ltd | Compositions for fecal floral transplantation and methods for making and using them and devices for delivering them |
| US9386793B2 (en) | 2010-08-20 | 2016-07-12 | New York University | Compositions and methods for treating obesity and related disorders by characterizing and restoring mammalian bacterial microbiota |
| KR101250463B1 (ko) | 2010-10-12 | 2013-04-15 | 대한민국 | 신생아 분변에서 분리한 내산소성 비피도박테리움 롱검 비피더스 유산균 및 이를 이용한 프로바이오틱 조성물 |
| WO2012055408A1 (en) | 2010-10-27 | 2012-05-03 | Quantibact A/S | Capture of target dna and rna by probes comprising intercalator molecules |
| CN102031235B (zh) | 2010-11-09 | 2012-07-25 | 中国农业大学 | 一种粪肠球菌anse228及其应用 |
| EP2455092A1 (en) | 2010-11-11 | 2012-05-23 | Nestec S.A. | Non-replicating probiotic micro-organisms protect against upper respiratory tract infections |
| WO2012071380A1 (en) | 2010-11-24 | 2012-05-31 | Oragenics, Inc. | Use of bacteria to treat and prevent respiratory infections |
| CN102093967B (zh) | 2010-12-02 | 2013-01-30 | 中国农业科学院特产研究所 | 一株水貂源屎肠球菌及其应用 |
| ES2389547B1 (es) | 2010-12-07 | 2013-08-08 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Bifidobacterium cect 7765 y su uso en la prevención y/o tratamiento del sobrepeso, la obesidad y patologías asociadas. |
| US9376473B2 (en) | 2011-01-10 | 2016-06-28 | Cleveland Biolabs, Inc. | Use of Toll-Like Receptor agonist for treating cancer |
| PT2481299T (pt) | 2011-01-31 | 2017-03-08 | Synformulas Gmbh | Estirpes de bifidobacterium bifidum para aplicação em doenças gastrointestinais |
| JP5840368B2 (ja) | 2011-02-02 | 2016-01-06 | カルピス株式会社 | 関節炎予防改善用物質 |
| BR112013020312B1 (pt) | 2011-02-09 | 2021-03-23 | Synbiotics Ab | Composições simbióticas para restauração e reconstituição da microbiota intestinal |
| AU2012225305B2 (en) | 2011-03-09 | 2017-06-08 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods for transplantation of colon microbiota |
| BRPI1100857A2 (pt) | 2011-03-18 | 2013-05-21 | Alexandre Eduardo Nowill | agente imunomodulador e suas combinaÇÕes, seu uso e mÉtodo imunoterÁpico para a recontextualizaÇço, reprogramaÇço e reconduÇço do sistema imune em tempo real |
| WO2012140636A1 (en) | 2011-04-11 | 2012-10-18 | Alimentary Health Limited | A probiotic formulation |
| WO2012142605A1 (en) | 2011-04-15 | 2012-10-18 | Samaritan Health Services | Rapid recolonization deployment agent |
| KR20140053887A (ko) | 2011-04-20 | 2014-05-08 | 미코 바이오, 인크. | 면역 반응을 증진시키는 조성물 및 방법 |
| US9567361B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-02-14 | Glycosyn LLC | Use of purified 2′-fucosyllactose, 3-fucosyllactose and lactodifucotetraose as prebiotics |
| KR20120133133A (ko) | 2011-05-30 | 2012-12-10 | 한국 한의학 연구원 | 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| WO2012170478A2 (en) | 2011-06-06 | 2012-12-13 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and kits for detecting adenomas, colorectal cancer, and uses thereof |
| GB201110095D0 (en) | 2011-06-15 | 2011-07-27 | Danisco | Method of treatment |
| JP2013005759A (ja) | 2011-06-24 | 2013-01-10 | Kyodo Milk Industry Co Ltd | マウス腸内菌叢の推測方法 |
| JP6222626B2 (ja) | 2011-07-07 | 2017-11-01 | 長岡香料株式会社 | フルクトース吸収阻害剤 |
| US20130017999A1 (en) | 2011-07-14 | 2013-01-17 | Marc Fremont | Methods and Compositions for Evaluating and/or Treating Chronic Immune Diseases |
| GB201112091D0 (en) | 2011-07-14 | 2011-08-31 | Gt Biolog Ltd | Bacterial strains isolated from pigs |
| US20130022575A1 (en) | 2011-07-19 | 2013-01-24 | Microbial Rx | Systems and methods of replacing intestinal flora |
| CN102304483A (zh) | 2011-08-12 | 2012-01-04 | 北京金泰得生物科技股份有限公司 | 一株饲用屎肠球菌及其应用 |
| KR101261872B1 (ko) | 2011-08-23 | 2013-05-14 | 대한민국 (식품의약품안전처장) | 장내 미생물 효소복합체 및 이의 제조방법 |
| CA2848757C (en) | 2011-09-14 | 2021-11-09 | University Of Guelph | Methods to culture human gastrointestinal microorganisms |
| GB201117313D0 (en) | 2011-10-07 | 2011-11-16 | Gt Biolog Ltd | Bacterium for use in medicine |
| EP2750682B1 (en) | 2011-10-11 | 2016-05-18 | Achim Biotherapeutics AB | Composition comprising anaerobically cultivated human intestinal microbiota |
| CN103082292B (zh) | 2011-11-02 | 2015-03-04 | 深圳华大基因研究院 | 罗斯氏菌(Roseburia)在治疗和预防肥胖相关疾病中的应用 |
| CN102373172B (zh) | 2011-11-03 | 2013-03-20 | 北京龙科方舟生物工程技术有限公司 | 一株屎肠球菌及其应用 |
| CN104160014A (zh) | 2011-12-01 | 2014-11-19 | 国立大学法人东京大学 | 诱导调节性t细胞的增殖或积累的人源细菌 |
| ES2408279B1 (es) | 2011-12-15 | 2014-09-09 | Universidad De Las Palmas De Gran Canaria | Bacteria acido láctica probiótica |
| ITBG20120010A1 (it) | 2012-02-24 | 2013-08-25 | Milano Politecnico | Dispositivo per l'addestramento chirurgico |
| ITMI20120471A1 (it) | 2012-03-26 | 2013-09-27 | Giovanni Mogna | Composizione a base di ceppi di batteri bifidobacterium longum in grado di aiutare il prolungamento della vita |
| JP5792105B2 (ja) | 2012-03-27 | 2015-10-07 | 森永乳業株式会社 | ラクト−ｎ−ビオースｉの製造方法 |
| JP6201982B2 (ja) | 2012-03-30 | 2017-09-27 | 味の素株式会社 | 糖尿病誘起細菌 |
| WO2013154826A2 (en) | 2012-04-11 | 2013-10-17 | Nestec Sa | Methods for diagnosing impending diarrhea |
| GB201206599D0 (en) | 2012-04-13 | 2012-05-30 | Univ Manchester | Probiotic bacteria |
| EP2836218A4 (en) | 2012-04-13 | 2015-10-21 | Trustees Boston College | PROBIOTIC COMPOSITIONS AND METHODS OF USE |
| ES2792106T3 (es) | 2012-05-18 | 2020-11-10 | Genome Res Ltd | Métodos y grupos |
| ES2436251B1 (es) | 2012-05-25 | 2014-10-08 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas. |
| JP6436580B2 (ja) | 2012-06-04 | 2018-12-12 | ガウラブ アグラーワル， | クローン病および関連する状態および感染症を処置するための組成物および方法 |
| CN106620189B (zh) | 2012-06-06 | 2021-11-19 | 上海交通大学 | 改善肠道菌群结构的方法及应用 |
| EP2864355B1 (en) | 2012-06-25 | 2016-10-12 | Orega Biotech | Il-17 antagonist antibodies |
| JP6368306B2 (ja) | 2012-07-31 | 2018-08-01 | ネステク ソシエテ アノニム | 炎症性腸疾患（ｉｂｄ）患者の筋骨格の健康を促進させるための栄養組成物 |
| WO2014019271A1 (en) | 2012-08-01 | 2014-02-06 | Bgi Shenzhen | Biomarkers for diabetes and usages thereof |
| HK1212222A1 (en) | 2012-08-29 | 2016-06-10 | Salix Pharmaceuticals, Inc. | Laxative compositions and methods for treating constipation and related gastrointestinal diseases and conditions |
| CA2881656C (en) | 2012-08-29 | 2023-07-11 | California Institute Of Technology | Diagnosis and treatment of autism spectrum disorder |
| CA2884816A1 (en) | 2012-09-13 | 2014-03-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Programmable drug delivery profiles of tumor-targeted bacteria |
| KR101473058B1 (ko) | 2012-09-19 | 2014-12-16 | 주식회사 쎌바이오텍 | 과민성 대장 증후군 예방 또는 치료용 조성물 |
| CN103652322B (zh) | 2012-09-21 | 2016-02-10 | 临沂思科生物科技有限公司 | 一种含乳酸菌的复合益生菌饲料添加剂的制备方法 |
| US20150299776A1 (en) | 2012-10-03 | 2015-10-22 | Metabogen Ab | Identification of a Person having Risk for Atherosclerosis and Associated Disease by the Person's Gut Microbiome and the Prevention of such Diseases |
| FR2997091B1 (fr) | 2012-10-22 | 2016-05-06 | Fond Mediterranee Infection | Utilisation d'un compose antioxydant pour la culture de bacteries sensibles a la tension en oxygene |
| US20150290140A1 (en) | 2012-10-30 | 2015-10-15 | Nestec S.A. | Compositions comprising microparticles and probiotics to deliver a synergistic immune effect |
| US9839657B2 (en) | 2012-10-30 | 2017-12-12 | Deerland Enzymes, Inc. | Prebiotic compositions comprising one or more types of bacteriophage |
| AU2013338774B2 (en) | 2012-11-01 | 2017-03-02 | Academisch Ziekenhuis Groningen | Methods and compositions for stimulating beneficial bacteria in the gastrointestinal tract |
| WO2014075745A1 (en) | 2012-11-19 | 2014-05-22 | Université Catholique de Louvain | Use of akkermansia for treating metabolic disorders |
| NZ709392A (en) | 2012-11-23 | 2016-10-28 | Seres Therapeutics Inc | Synergistic bacterial compositions and methods of production and use thereof |
| US8906668B2 (en) | 2012-11-23 | 2014-12-09 | Seres Health, Inc. | Synergistic bacterial compositions and methods of production and use thereof |
| JP2016501852A (ja) | 2012-11-26 | 2016-01-21 | トーマス・ジュリアス・ボロディ | 糞便微生物叢の回復のための組成物、ならびにそれらを作製および使用する方法 |
| PT2931898E (pt) | 2012-12-12 | 2016-06-16 | Harvard College | Manipulação e otimização de sistemas, métodos e composições para manipulação de sequências com domínios funcionais |
| ES2786193T3 (es) | 2012-12-12 | 2020-10-09 | Broad Inst Inc | Modificación por tecnología genética y optimización de sistemas, métodos y composiciones enzimáticas mejorados para la manipulación de secuencias |
| CN105164264B (zh) | 2012-12-12 | 2021-05-07 | 布罗德研究所有限公司 | 用于序列操纵和治疗应用的系统、方法和组合物的递送、工程化和优化 |
| US20140193464A1 (en) | 2013-01-08 | 2014-07-10 | Imagilin Technology, Llc | Effects of probiotics on humans and animals under environmental or biological changes |
| HK1218559A1 (zh) | 2013-02-04 | 2017-02-24 | Seres Therapeutics, Inc. | 抑制致病細菌生長的配方和方法 |
| HK1218560A1 (zh) | 2013-02-04 | 2017-02-24 | Seres Therapeutics, Inc. | 組成與方法 |
| CA2940226A1 (en) | 2013-02-22 | 2014-08-28 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for promoting growth of beneficial microbes to treat or prevent disease or prolong life |
| WO2014137211A1 (en) | 2013-03-05 | 2014-09-12 | Rijksuniversiteit Groningen | Use of faecali bacterium prausnitzii htf-f (dsm 26943) to suppress inflammation. |
| NZ711298A (en) | 2013-03-14 | 2021-07-30 | Therabiome Llc | Targeted gastrointestinal tract delivery of probiotic organisms and/or therapeutic agents |
| US20160040215A1 (en) | 2013-03-14 | 2016-02-11 | Seres Therapeutics, Inc. | Methods for Pathogen Detection and Enrichment from Materials and Compositions |
| US9669059B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-06-06 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Butyrogenic bacteria as probiotics to treat clostridium difficile |
| EP2967077A4 (en) | 2013-03-15 | 2016-09-14 | Seres Therapeutics Inc | NETWORK-BASED MICROBIAL COMPOSITIONS AND METHOD |
| CN103156888A (zh) | 2013-03-18 | 2013-06-19 | 广州知光生物科技有限公司 | 脆弱拟杆菌在制备治疗炎症性肠病组合物中的应用 |
| CN103142656A (zh) | 2013-03-18 | 2013-06-12 | 广州知光生物科技有限公司 | 脆弱拟杆菌在制备防治结肠癌组合物中的应用 |
| CN103146620A (zh) | 2013-03-25 | 2013-06-12 | 广州知光生物科技有限公司 | 具有益生菌特性的脆弱拟杆菌 |
| JP2014196260A (ja) | 2013-03-29 | 2014-10-16 | 公立大学法人奈良県立医科大学 | 慢性閉塞性肺疾患の予防又は治療用組成物 |
| GB201306536D0 (en) | 2013-04-10 | 2013-05-22 | Gt Biolog Ltd | Polypeptide and immune modulation |
| WO2014182966A1 (en) | 2013-05-10 | 2014-11-13 | California Institute Of Technology | Probiotic prevention and treatment of colon cancer |
| CA2914636C (en) | 2013-06-05 | 2021-04-06 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (mrt), compositions and methods of manufacture |
| US9511099B2 (en) | 2013-06-05 | 2016-12-06 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (MRT), compositions and methods of manufacture |
| US20160120915A1 (en) | 2013-06-10 | 2016-05-05 | New York University | Methods for manipulating immune responses by altering microbiota |
| WO2014200334A1 (en) | 2013-06-14 | 2014-12-18 | N.V. Nutricia | Synbiotic composition for treatment of infections in allergic patients |
| WO2015003001A1 (en) | 2013-07-01 | 2015-01-08 | The Washington University | Methods for identifying supplements that increase gut colonization by an isolated bacterial species, and compositions derived therefrom |
| WO2015003305A1 (zh) | 2013-07-08 | 2015-01-15 | 吉瑞高新科技股份有限公司 | 电子烟盒 |
| WO2015006355A2 (en) | 2013-07-09 | 2015-01-15 | Puretech Ventures, Llc | Compositions containing combinations of bioactive molecules derived from microbiota for treatment of disease |
| CN105407728A (zh) | 2013-07-21 | 2016-03-16 | 霍勒拜欧姆公司 | 用于微生物组表征、监测和治疗的方法和系统 |
| US20160192689A1 (en) | 2013-07-31 | 2016-07-07 | Wikifoods, Inc. | Encapsulated functional food compositions |
| CN105658226B (zh) | 2013-08-16 | 2019-05-14 | 港大科桥有限公司 | 使用益生菌治疗癌症的方法和组合物 |
| CN103509741B (zh) | 2013-08-22 | 2015-02-18 | 河北农业大学 | 布劳特菌auh-jld56及其在牛蒡苷元转化中的应用 |
| WO2015038731A1 (en) | 2013-09-12 | 2015-03-19 | The Johns Hopkins University | Biofilm formation to define risk for colon cancer |
| DK3071052T3 (da) | 2013-10-18 | 2020-04-27 | Innovachildfood Ab | Ernæringsmæssigt afbalanceret sammensat måltid til spædbørn og småbørn og fremgangsmåde til fremstilling af måltidet |
| PL229020B1 (pl) | 2013-11-13 | 2018-05-30 | Inst Biotechnologii Surowic I Szczepionek Biomed Spolka Akcyjna | Nowy szczep Bifidobacterium breve |
| WO2015077794A1 (en) | 2013-11-25 | 2015-05-28 | Seres Health, Inc. | Synergistic bacterial compositions and methods of production and use thereof |
| EP3082431A4 (en) | 2013-12-16 | 2017-11-15 | Seres Therapeutics, Inc. | Bacterial compositions and methods of use thereof for treatment of immune system disorders |
| CN103981115B (zh) | 2013-12-24 | 2018-10-26 | 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 | 一株高抗逆性屎肠球菌及其应用 |
| CN103981117B (zh) | 2013-12-24 | 2018-10-26 | 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 | 一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用 |
| CN103820363B (zh) | 2014-01-27 | 2016-02-24 | 福建省农业科学院生物技术研究所 | 一种屎肠球菌菌粉的制备与应用 |
| CN103865846B (zh) | 2014-02-27 | 2016-03-30 | 扬州绿保生物科技有限公司 | 一种屎肠球菌及其制备方法 |
| CN103849590B (zh) | 2014-03-25 | 2016-07-06 | 上海交通大学 | 一株耐酸短双歧杆菌BB8dpH及其应用 |
| KR101683474B1 (ko) | 2014-03-26 | 2016-12-08 | 주식회사 쎌바이오텍 | 과민성 대장 증후군 예방 또는 치료용 조성물 |
| US9783858B2 (en) | 2014-04-02 | 2017-10-10 | Northwestern University | Altered microbiome of chronic pelvic pain |
| KR101583546B1 (ko) | 2014-04-09 | 2016-01-11 | 국립암센터 | 유전자 다형성을 이용한 소라페닙 치료에 대한 반응성 예측방법 |
| EP3129035B1 (en) | 2014-04-10 | 2024-09-18 | Riken | Compositions and methods for induction of th17 cells |
| CN104195075B (zh) | 2014-08-14 | 2017-04-19 | 生合生物科技股份有限公司 | 一种屎肠球菌ef08及包含它的饲料添加物和饲料 |
| WO2015168534A1 (en) | 2014-05-02 | 2015-11-05 | Novogy, Inc. | Therapeutic treatment of gastrointestinal microbial imbalances through competitive microbe displacement |
| CN106572968A (zh) | 2014-05-08 | 2017-04-19 | 帕诺泰斯制药有限公司 | 用于治疗眼科疾病和障碍的化合物 |
| WO2016019506A1 (en) | 2014-08-05 | 2016-02-11 | BGI Shenzhen Co.,Limited | Use of eubacterium in the prevention and treatment for colorectal cancer related diseases |
| US10925953B2 (en) | 2014-08-28 | 2021-02-23 | Yale University | Compositions and methods for treating an inflammatory disease or disorder |
| PL3194567T3 (pl) * | 2014-08-29 | 2020-06-15 | Chr. Hansen A/S | Probiotyczne szczepy bifidobacterium adolescentis |
| US20160058808A1 (en) | 2014-09-03 | 2016-03-03 | California Institute Of Technology | Microbe-based modulation of serotonin biosynthesis |
| CN104546934B (zh) | 2014-09-30 | 2019-04-09 | 深圳华大基因科技有限公司 | 粪副拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用 |
| CN104546935A (zh) | 2014-09-30 | 2015-04-29 | 深圳华大基因科技有限公司 | 多形拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用 |
| CN104546940A (zh) | 2014-09-30 | 2015-04-29 | 深圳华大基因科技有限公司 | 平常拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用 |
| CN104546932A (zh) | 2014-09-30 | 2015-04-29 | 深圳华大基因科技有限公司 | 卵形拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用 |
| CN104546933A (zh) | 2014-09-30 | 2015-04-29 | 深圳华大基因科技有限公司 | 粪拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用 |
| CN104546942A (zh) | 2014-09-30 | 2015-04-29 | 深圳华大基因科技有限公司 | 多氏拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用 |
| WO2016057671A1 (en) | 2014-10-07 | 2016-04-14 | University Of Virginia Patent Foundation | Compositions and methods for preventing and treating infection |
| CN114376234A (zh) | 2014-10-24 | 2022-04-22 | 进化生物系统股份有限公司 | 活化的双歧杆菌及其应用方法 |
| AU2015339290B8 (en) | 2014-10-30 | 2021-08-26 | California Institute Of Technology | Compositions and methods comprising bacteria for improving behavior in neurodevelopmental disorders |
| CN107106616A (zh) | 2014-10-30 | 2017-08-29 | 加利福尼亚技术学院 | 包括改善神经发育障碍行为的细菌的组合物和方法 |
| WO2016070151A1 (en) | 2014-10-31 | 2016-05-06 | Whole Biome. Inc. | Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders |
| CN104435000A (zh) | 2014-11-12 | 2015-03-25 | 江南大学 | 乳酸菌对支气管哮喘治疗中的应用 |
| DK3223835T3 (en) | 2014-11-25 | 2025-02-17 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Intestinal microbiota and gvhd |
| MA41020A (fr) * | 2014-11-25 | 2017-10-03 | Evelo Biosciences Inc | Compositions probiotiques et prébiotiques, et leurs procédés d'utilisation pour la modulation du microbiome |
| HUE035569T2 (en) | 2014-12-23 | 2018-05-28 | 4D Pharma Res Ltd | Bacteroides thetaiotaomicron strain and its use in reducing inflammation |
| KR20170091157A (ko) | 2014-12-23 | 2017-08-08 | 4디 파마 리서치 리미티드 | 피린 폴리펩티드 및 면역 조정 |
| CN104560820B (zh) | 2014-12-30 | 2017-10-20 | 杭州师范大学 | 屎肠球菌kq2.6及应用 |
| SG11201705953XA (en) | 2015-01-23 | 2017-08-30 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Use of short chain fatty acids in cancer prevention |
| CN105982919A (zh) | 2015-02-26 | 2016-10-05 | 王汉成 | 生物减速剂抗癌技术 |
| WO2016139217A1 (en) | 2015-03-04 | 2016-09-09 | Ab-Biotics, S.A. | Composition comprising anaerobically cultivated human intestinal microbiota |
| US20180078587A1 (en) | 2015-03-18 | 2018-03-22 | Trustees Of Tufts College | Compositions and methods for preventing colorectal cancer |
| WO2016149687A1 (en) | 2015-03-18 | 2016-09-22 | Whole Biome, Inc. | Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of skin disorders |
| RU2017134547A (ru) * | 2015-04-23 | 2019-04-09 | Калейдо Байосайенсиз, Инк. | Регуляторы микробиома и соответствующие варианты их применения |
| HUE058209T2 (hu) * | 2015-05-22 | 2022-07-28 | Univ Arizona State | Módszerek az autizmus spektrum zavar és azzal összefüggõ tünetek kezelésére |
| RU2017141448A (ru) | 2015-06-01 | 2019-07-15 | Зэ Юниверсити Оф Чикаго | Лечение рака путем манипуляций с комменсальной микрофлорой |
| KR102616152B1 (ko) | 2015-06-15 | 2023-12-19 | 씨제이바이오사이언스 주식회사 | 박테리아성 균주를 함유한 조성물 |
| MA41010B1 (fr) | 2015-06-15 | 2020-01-31 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| TW202222339A (zh) | 2015-06-15 | 2022-06-16 | 英商4D製藥研究有限公司 | 包含細菌菌株之組合物 |
| MA41060B1 (fr) | 2015-06-15 | 2019-11-29 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| CN105012350B (zh) * | 2015-08-06 | 2018-09-25 | 温州医科大学 | 益生菌丁酸梭菌菌株 |
| CN105112333A (zh) | 2015-08-31 | 2015-12-02 | 江南大学 | 一种具有良好肠道定殖能力的长双歧杆菌及筛选方法和应用 |
| GB201520497D0 (en) | 2015-11-20 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
| MA41013A (fr) | 2015-11-20 | 2017-08-30 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| GB201520631D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
| GB201520638D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
| AU2016361583B2 (en) | 2015-11-25 | 2021-05-13 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Methods and compositions for reducing vancomycin-resistant enterococci infection or colonization |
| JP6675752B2 (ja) | 2016-02-23 | 2020-04-01 | 国立大学法人佐賀大学 | 腸内Ｂｌａｕｔｉａ ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ増殖刺激剤 |
| TW201733601A (zh) * | 2016-03-04 | 2017-10-01 | ４Ｄ製藥有限公司 | 包含細菌菌株之組合物 |
| AU2017234120B2 (en) | 2016-03-14 | 2024-06-20 | Holobiome, Inc. | Modulation of the gut microbiome to treat mental disorders or diseases of the central nervous system |
| TW201821093A (zh) | 2016-07-13 | 2018-06-16 | 英商４Ｄ製藥有限公司 | 包含細菌菌株之組合物 |
| GB201621123D0 (en) | 2016-12-12 | 2017-01-25 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
| WO2018112365A2 (en) | 2016-12-16 | 2018-06-21 | Evelo Biosciences, Inc. | Methods of treating colorectal cancer and melanoma using parabacteroides goldsteinii |
| WO2018112363A1 (en) | 2016-12-16 | 2018-06-21 | Evelo Biosciences, Inc. | Methods of treating cancer using parabacteroides |
| WO2018187272A1 (en) * | 2017-04-03 | 2018-10-11 | Gusto Global, Llc | Rational design of microbial-based biotherapeutics |
| MA48941A (fr) * | 2017-05-22 | 2020-04-08 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| WO2018215782A1 (en) | 2017-05-24 | 2018-11-29 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strain |
| EP3648780A1 (en) | 2017-07-05 | 2020-05-13 | Evelo Biosciences, Inc. | Compositions and methods of treating cancer using bifidobacterium animalis ssp. lactis |
| EP3823649A1 (en) * | 2018-07-16 | 2021-05-26 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strains |
-
2018
- 2018-05-22 MA MA048941A patent/MA48941A/fr unknown
- 2018-05-22 WO PCT/GB2018/051389 patent/WO2018215758A1/en unknown
- 2018-05-22 KR KR1020197037538A patent/KR20200019882A/ko not_active Ceased
- 2018-05-22 DK DK18727408.9T patent/DK3630136T3/da active
- 2018-05-22 LT LTEP18727408.9T patent/LT3630136T/lt unknown
- 2018-05-22 RS RS20210627A patent/RS61872B1/sr unknown
- 2018-05-22 JP JP2019563457A patent/JP7221538B2/ja active Active
- 2018-05-22 EP EP18727408.9A patent/EP3630136B1/en active Active
- 2018-05-22 PL PL18727408T patent/PL3630136T3/pl unknown
- 2018-05-22 JP JP2019563363A patent/JP7212945B2/ja active Active
- 2018-05-22 SI SI201830283T patent/SI3630136T1/sl unknown
- 2018-05-22 MA MA48939A patent/MA48939B1/fr unknown
- 2018-05-22 ES ES18727411T patent/ES2955870T3/es active Active
- 2018-05-22 AU AU2018272291A patent/AU2018272291A1/en not_active Abandoned
- 2018-05-22 HR HRP20210780TT patent/HRP20210780T1/hr unknown
- 2018-05-22 CN CN201880046299.0A patent/CN110913878A/zh active Pending
- 2018-05-22 WO PCT/GB2018/051386 patent/WO2018215757A1/en active Search and Examination
- 2018-05-22 SM SM20210420T patent/SMT202100420T1/it unknown
- 2018-05-22 MD MDE20200313T patent/MD3630136T2/ro not_active IP Right Cessation
- 2018-05-22 WO PCT/GB2018/051391 patent/WO2018215760A1/en unknown
- 2018-05-22 JP JP2019563398A patent/JP2020520911A/ja active Pending
- 2018-05-22 HU HUE18727408A patent/HUE054164T2/hu unknown
- 2018-05-22 EP EP18727413.9A patent/EP3630139A1/en active Pending
- 2018-05-22 TW TW107117436A patent/TW201907928A/zh unknown
- 2018-05-22 TW TW107117437A patent/TW201907929A/zh unknown
- 2018-05-22 TW TW107117439A patent/TWI787272B/zh not_active IP Right Cessation
- 2018-05-22 EP EP18727411.3A patent/EP3630137B1/en active Active
- 2018-05-22 PT PT187274089T patent/PT3630136T/pt unknown
- 2018-05-22 MA MA048940A patent/MA48940A/fr unknown
- 2018-05-22 CA CA3064171A patent/CA3064171A1/en active Pending
- 2018-05-22 ES ES18727408T patent/ES2877726T3/es active Active
-
2019
- 2019-11-21 US US16/691,439 patent/US11382936B2/en active Active
- 2019-11-21 US US16/691,169 patent/US11123378B2/en active Active
- 2019-11-22 US US16/692,667 patent/US11376284B2/en active Active
-
2021
- 2021-06-14 CY CY20211100527T patent/CY1124286T1/el unknown
- 2021-07-22 US US17/382,426 patent/US20220016184A1/en not_active Abandoned
- 2021-11-19 US US17/530,517 patent/US20220184145A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013119546A (ja) * | 2011-12-09 | 2013-06-17 | Meiji Co Ltd | 不安及び／又は多動性の改善剤 |
| JP2016529309A (ja) * | 2013-09-06 | 2016-09-23 | ソファル ソチエタ ペル アツィオニ | 酪酸、葉酸、又はナイアシンの腸内産生を増加させるための、及び／又はコハク酸の腸内産生を低下させるための、微生物を含む組成物の使用 |
| WO2016203218A1 (en) * | 2015-06-15 | 2016-12-22 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strains |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7705633B2 (ja) | 2021-06-01 | 2025-07-10 | 花王株式会社 | 内臓脂肪低減剤 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20220184145A1 (en) | Compositions comprising bacterial strains | |
| JP2020523313A (ja) | Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ属の細菌株を含む組成物及びその使用 | |
| JP2021080269A (ja) | 細菌株を含む組成物 | |
| US20200121756A1 (en) | Compositions comprising bacterial strains | |
| JP6884889B2 (ja) | 細菌株を含む組成物 | |
| WO2021151946A1 (en) | Compositions comprising bacterial strains | |
| KR20220034816A (ko) | 박테리아 균주를 포함하는 조성물 | |
| EP3838281A1 (en) | Compositions comprising bacterial strains | |
| US20230135434A1 (en) | Compositions comprising bacterial strains | |
| TW202135842A (zh) | 包含細菌品系之組合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210514 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210514 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220530 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220802 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221027 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230130 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230329 |
|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20230522 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230609 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20230725 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230928 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231010 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20240430 |