ES2877726T3 - Composiciones que comprenden cepas bacterianas - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende una cepa bacteriana del género Blautia, para su uso en un método de tratamiento de lesiones cerebrales.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones que comprenden cepas bacterianas

Campo técnico

Esta invención pertenece al campo de las composiciones que comprenden cepas bacterianas aisladas del tracto digestivo de mamíferos y el uso de tales composiciones en el tratamiento de enfermedades.

Antecedentes de la invención

Se cree que el intestino humano es estéril en el útero, pero está expuesto a una gran variedad de microbios maternos y ambientales inmediatamente después del nacimiento. A partir de entonces, se produce un período dinámico de colonización y sucesión microbiana, que está influenciado por factores tales como el modo de administración, el medio ambiente, la dieta y el genotipo del huésped, todos los cuales afectan la composición de la microbiota intestinal, particularmente durante la vida temprana. Posteriormente, la microbiota se estabiliza y se convierte en adulta. [1]. La microbiota intestinal humana contiene más de 1500 filotipos diferentes, dominados en niveles de abundancia por dos divisiones bacterianas principales (phyla), Bacteroidetes y Firmicutes [2-3]. Las relaciones simbióticas exitosas que surgen de la colonización bacteriana del intestino humano han producido una amplia variedad de funciones metabólicas, estructurales, protectoras y otras funciones beneficiosas. Las actividades metabólicas mejoradas del intestino colonizado aseguran que los componentes de la dieta que de otro modo no digeribles se degraden con la liberación de subproductos que proporcionan una importante fuente de nutrientes para el huésped y beneficios adicionales para la salud. De manera similar, la importancia inmunológica de la microbiota intestinal está bien reconocida y se ejemplifica en animales libres de gérmenes que tienen un sistema inmunológico deteriorado que se reconstituye funcionalmente después de la introducción de bacterias comensales [4-6].

Se han documentado cambios drásticos en la composición de la microbiota en trastornos gastrointestinales como la enfermedad inflamatoria intestinal (IBD). Por ejemplo, los niveles de bacteria Clostridium cluster XIVa y Clostridium cluster XI (F. prausnitzii) se reducen en pacientes con IBD, mientras que el número de E. coli aumenta, lo que sugiere un cambio en el equilibrio de simbiontes y patobiontes dentro del intestino [7-11].

En reconocimiento del posible efecto positivo que pueden tener ciertas cepas bacterianas en el intestino del animal, se han propuesto varias cepas para su uso en el tratamiento de diversas enfermedades (véase, por ejemplo, [12-15]). Se conoce que las bacterias intestinales humanas producen ácidos grasos de cadena corta (SCFA) que se han propuesto para tratar enfermedades autoinmunes y/o trastornos inflamatorios [16]. Se han propuesto varias cepas, que incluyen principalmente cepas de Lactobacillus y Bifidobacterium, para su uso en el tratamiento de diversos trastornos intestinales (véase [17] para una revisión). Se han propuesto cepas bacterianas, en particular bacterias butirogénicas, para tratar y/o prevenir la infección por Clostridium difficile [18].

Se ha demostrado que Clostridium butyricum atenúa la isquemia/reperfusión en modelos de ratones ([19] y [20]). La administración de C. butyricum condujo a la modulación de la microbiota intestinal, que se correlacionó con cambios en los niveles de varias neurotrofinas y transmisores de monoaminas que están involucrados en la función cerebral. Debido a la complejidad de las moléculas implicadas, los autores concluyen que el mecanismo por el cual C. butyricum produjo estos efectos neuroprotectores era imposible de identificar. El tratamiento con C. butyricum condujo a una reducción de la apoptosis a través de disminuir los niveles de capasa-3 en respuesta a la activación de PI3K/Akt. Se ha informado ampliamente que la ruta de PI3K/Akt que participa en la protección contra los trastornos psiquiátricos.

También se han propuesto cepas del género Blautia para su uso en la modulación del equilibrio microbiano del ecosistema digestivo [21] y se han propuesto especies particulares para su uso en el tratamiento de enfermedades sistémicas alejadas del intestino [22]. Sin embargo, la relación entre diferentes cepas bacterianas y diferentes enfermedades, y los efectos precisos de cepas bacterianas particulares sobre el intestino y a nivel sistémico y sobre cualquier tipo particular de enfermedad, están mal caracterizados.

Es necesario caracterizar los efectos potenciales de las bacterias intestinales para que se puedan desarrollar nuevas terapias que utilicen bacterias intestinales.

El documento WO2016/203218 describe composiciones que comprenden cepas bacterianas para tratar y prevenir enfermedades inflamatorias y autoinmunes. El documento US2016/143961 describe composiciones probióticas y prebióticas, y su uso en el tratamiento y prevención de injerto frente a la enfermedad de huésped. El documento WO2015/033305 describe el uso de una composición que comprende microorganismos para aumentar la producción intestinal de ácido butírico, ácido fólico o niacina y/o disminuir la producción intestinal de ácido succínico. El documento WO2017/148596 describe composiciones que comprenden cepas bacterianas de Blautia para tratar la hipersensibilidad visceralJi et al. discuten un análisis de comunidades microbianas intestinales de pacientes con infarto cerebral e isquemia basado en tecnología de secuenciación de alto rendimiento y metabolismo de glucosa y lípidos. Paven et al. discuten el microbioma intestinal y la esclerosis múltiple, Liu et al discuten la reclasificación de Clostridium coccoides, Ruminococcus hansenii, Ruminococcus hidrogenotrophicus, Ruminococcus luti, Ruminococcus productus y Ruminococcus schinkii como gen de Blautia coccoides. nov., peine. nov., Blautia hansenii comb. nov., Blautia hydrogenotrophica comb. nov., Blautia luti comb. nov., Blautia producta comb. nov., Blautia schinkii comb. nov. y descripción de Blautia wexlerae sp. nov., aislado de heces humanas.

Sumario de la invención

Los inventores han desarrollado nuevas terapias para tratar lesiones cerebrales. En particular, los inventores han identificado que las cepas bacterianas del género Blautia pueden ser eficaces para tratar lesiones cerebrales. Como se describe en los ejemplos, la administración oral de composiciones que comprenden Blautia hydrogenotrophica puede tratar la lesión cerebral, ayudando a la recuperación y mejorando la función neurológica, las capacidades motoras y el reconocimiento social en un modelo de oclusión de ratón de lesión cerebral en pacientes. Por tanto, en una primera realización, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana del género Blautia, para su uso en un método de tratamiento de lesiones cerebrales.

En realizaciones preferidas, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana del género Blautia, para su uso en un método de tratamiento o prevención de lesiones cerebrales. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de accidentes cerebrovasculares. En realizaciones particularmente preferidas, el accidente cerebrovascular es isquemia cerebral. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral es un accidente cerebrovascular isquémico. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular es un accidente cerebrovascular hemorrágico.

En realizaciones preferidas de la invención, la cepa bacteriana en la composición es de Blautia hydrogenotrophica. También se pueden usar cepas estrechamente relacionadas, tales como cepas bacterianas que tienen una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a la secuencia de rRNA 16s de una cepa bacteriana de Blautia hydrogenotrophica. Preferiblemente, la cepa bacteriana tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a SEQ ID NO:5. Lo más preferiblemente, la cepa bacteriana en la composición es la cepa Blautia hydrogenotrophica depositada con el número de acceso DSM 14294. En realizaciones adicionales de la invención, la cepa bacteriana en la composición es de Blautia stercoris. También se pueden utilizar cepas estrechamente relacionadas, tales como las cepas bacterianas que tienen una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntica a la secuencia de rRNA 16s de una cepa bacteriana de Blautia stercoris. Preferiblemente, la cepa bacteriana tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a SEQ ID NO:1 o 3. Preferiblemente, la identidad de secuencia es la SEQ ID NO:3. Preferiblemente, la cepa bacteriana para usar en la invención tiene la secuencia de rRNA 16s representada por SEQ ID NO:3.

En realizaciones adicionales de la invención, la cepa bacteriana en la composición es de Blautia wexlerae. También se pueden usar cepas estrechamente relacionadas, tales como las cepas bacterianas que tienen una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntica a la secuencia de rRNA 16s de una cepa bacteriana de Blautia wexlerae. Preferiblemente, la cepa bacteriana tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntica a SEQ ID NO: 2 o 4. Preferiblemente, la identidad de secuencia es a SEQ ID NO: 4. Preferiblemente, la cepa bacteriana para usar en la invención tiene la secuencia de rRNA 16s representada por SEQ ID NO: 4.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención es para administración oral. La administración oral de las cepas de la invención puede ser eficaz para tratar lesiones cerebrales. También, la administración oral es conveniente para los pacientes y los médicos y permite la adminitración a y/o la colonización parcial o total del intestino.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden uno o más excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención comprende una cepa bacteriana que ha sido liofilizada. La liofilización es una técnica eficaz y conveniente para preparar composiciones estables que permitan la administración de bacterias.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona un producto alimenticio que comprende la composición descrita anteriormente.

En determinados casos, la divulgación proporciona una composición de vacuna que comprende la composición descrita anteriormente.

Además, los casos proporcionan un método para tratar una lesión cerebral, que comprende administrar una composición que comprende una cepa bacteriana del género Blautia.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1: Análisis de la función neurológica y las habilidades motoras en un modelo de isquemia cerebral-reperfusión I/R de ratón usando la prueba de pantalla invertida, en ratones con o sin tratamiento con Blautia hydrogenotrophica.

Figura 2: Análisis de la función neurológica y el reconocimiento social en un modelo de isquemia cerebral-reperfusión I/R de ratón usando la prueba de Reconocimiento Social, en ratones con o sin tratamiento con Blautia hydrogenotrophica.

Figura 3: Efecto de Blautia hydrogenotrophica (1010 / día durante 14 días) sobre la producción de ácidos grasos de cadena corta (RMN 1H) en el contenido cecal de ratas HIM sanas.

Figura 4: Evaluación de qPCR de la población de B. hidrogenotrophica en muestras fecales de ratas IBS-HMA tratadas o no con una composición que comprende B. hidrogenotrophica (BlautiX) durante 28 días.

Figura 5: Concentraciones de ácidos grasos de cadena corta (SCFA) en muestras cecales de ratas IBS-HMA tratadas o no con B. hidrogenotrophica (Blautix) durante 28 días. Figura 5A muestra la concentración de SCFA total. Figura 5B muestra la concentración de ácido acético, ácido propiónico y ácido butírico.

Figura 6: La evaluación histológica de las muestras de tejido de ratones tratados con que comprende composición bacteriana B. hydrogenotrophica (Blautix). La figura 6A muestra la puntuación de picnosis semicuantitativa de muestras de tejido teñidas histológicas H& E. Los ratones administrados con la composición de la invención (5M) presentan una puntuación de picnosis significativamente reducida en comparación con los ratones de control negativo (2M).

(p<0.0001). Figura 6B muestra la puntuación de vacuolización semicuantitativa de muestras de tejido teñidas histológicas H&E. Los ratones administrados con la composición de la invención (5M) muestran una puntuación de vacuolización significativamente reducida en comparación con el control negativo (2M). (p=0.098). Figura 6C muestra fotografías representativas de portaobjetos teñidos H&E: núcleos de neuronas picnóticas oscuras y algunas vacuolas pálidas e hinchadas en el citoplasma de algunas neuronas afectadas.

Descripción de la invención

Cepas bacterianas

Las composiciones de la invención comprenden una cepa bacteriana del género Blautia. Los ejemplos demuestran que las bacterias de este género son útiles para tratar lesiones cerebrales. Las cepas bacterianas preferidas son de las especies Blautia hydrogenotrophica, Blautia stercoris y Blautia wexlerae. Otras cepas bacterianas preferidas para usar en la invención son Blautia producta, Blautia coccoides y Blautia hansenii.

Los ejemplos de cepas de Blautia para usar en la invención incluyen Blautia hydrogenotrophica, B. stercoris, B. faecis, B. coccoides, B. glucerasea, B. hansenii, B. luti, B. producta, B. schinkii y B. wexlerae. Las especies Blautia son bacterias grampositivas, inmóviles, que pueden ser cocoides u ovaladas y todas son anaerobios obligados que producen ácido acético como el principal producto final de la fermentación de glucosa [23]. Blautia puede aislarse del intestino humano, aunque B. producta se aisló de una muestra de septicemia.

Blautia hydrogenotrophica (anteriormente conocida como Ruminococcusrogenotrophicus) se ha aislado de los intestinos de mamíferos, es estrictamente anaeróbica y metaboliza H2/CO2 al acetato, que puede ser importante para la nutrición humana. La cepa tipo de Blautia hydrogenotrophica es S5a33 = DSM 14294 = JCM 14656. El número de acceso de GenBank para la secuencia del gen de rRNA 16S de la cepa S5a36 de Blautia hydrogenotrophica es X95624.1 (descrito en el presente documento como SEQ ID NO:5). Esta cepa de Blautia hydrogenotrophica ejemplar se describe en [19] y [24]. La cepa S5a33 y la cepa S5a36 corresponden a dos subclones de una cepa aislada de una muestra fecal de un sujeto sano. Muestran morfología, fisiología y metabolismo idénticos y tienen secuencias de rRNA 16S idénticas. Por lo tanto, en algunas realizaciones, Blautia hydrogenotrophica para uso en la invención tiene la secuencia de rRNA 16S de SEQ ID NO:5.

La bacteria Blautia hydrogenotrophica depositada con el número de acceso DSM 14294 se ensayó en los ejemplos y también se denomina en el presente documento como cepa BH y Blautix. La cepa BH es la cepa preferida de la invención. La cepa BH fue depositada en Deutsche Sammlung von Mikroorganismen [Colección de microorganismos Alemana] (Mascheroder Weg 1b, 38124 Braunschweig, Alemania) con el número de acceso DSM 14294 como "S5a33" el 10 de mayo de 2001. El depositante fue INRA Laboratoire de Microbiologie CR de Clermont-Ferrand/Theix 63122 Saint Genes Champanelle, Francia. La propiedad de los depósitos ha pasado a 4D Pharma Plc mediante cesión. 4D Pharma Plc ha autorizado, mediante un acuerdo, 4D Pharma Research Limited a hacer referencia al material biológico depositado en la solicitud y ha dado su consentimiento sin reservas e irrevocable para que el material depositado se ponga a disposición del público.

El número de acceso GenBank para la secuencia del gen 16S rRNA de Blautia stercoris cepa GAM6-1 T es HM626177 (descrita en el presente documento como ID SEQ NO:1). Una cepa de Blautia stercoris ejemplar se describe en [25]. La cepa tipo de Blautia wexlerae es WAL 14507 = ATCC BAA-1564 = DSM 19850 [19]. El número de acceso GenBank para la secuencia del gen 16S rRNA de Blautia wexlerae cepa WAL 14507 T es EF036467 (divulgada en el presente documento como ID SEQ NO:2). Esta cepa ejemplar de Blautia wexlerae se describe en [19].

Una cepa de Blautia stercoris preferida es la cepa depositada con el número de acceso NCIMB 42381, que también se denomina en el presente documento cepa 830. Se proporciona una secuencia de rRNA 16S para la cepa 830 en SEQ ID NO:3. La cepa 830 se depositó en la autoridad de depósito internacional NCIMB, Ltd. (Edificio Ferguson, Aberdeen, AB21 9YA, Escocia) por GT Biologics Ltd. (Edificio de Innovación en Ciencias de la Vida, Aberdeen, AB25 2ZS, Escocia) el 12 de marzo de 2015 como "Blautia stercoris 830" y se le asignó el número de acceso NCIMB 42381. GT Biologics Ltd. posteriormente cambió su nombre a 4D Pharma Research Limited

Una cepa de Blautia wexlerae preferida es la cepa depositada con el número de acceso NCIMB 42486, que también se denomina en el presente documento cepa MRX008. Se proporciona una secuencia de rRNA 16S para la cepa MRX008 en SEQ ID NO:4. La cepa MRX008 se depositó en la autoridad de depósito internacional NCIMB, Ltd. (Edificio Ferguson, Aberdeen, AB21 9YA, Escocia) por 4D Pharma Research Ltd. (Edificio de Innovación en Ciencias de la Vida, Aberdeen, AB252ZS, Escocia) el 16 de noviembre de 2015 como "Blaqutia/Ruminococcus MRx0008 " y se le asignó el número de acceso NCIMB 42486.

También se espera que las cepas bacterianas estrechamente relacionadas con la cepa probada en los ejemplos sean eficaces para el tratamiento de lesiones cerebrales. En determinadas realizaciones, la cepa bacteriana para su uso en la invención tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a la secuencia de rRNA 16s de una cepa bacteriana de Blautia hydrogenotrophica. Preferiblemente, la cepa bacteriana para usar en la invención tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a SEQ ID NO:5.

En determinadas realizaciones, la cepa bacteriana para su uso en la invención tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntica a la secuencia de rRNA 16s de una cepa bacteriana de Blautia stercoris. Preferiblemente, la cepa bacteriana para usar en la invención tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3. Preferiblemente, la identidad de secuencia es la SEQ ID NO:3. Preferiblemente, la cepa bacteriana para usar en la invención tiene la secuencia de rRNA 16s representada por SEQ ID NO:3. En determinadas realizaciones, la cepa bacteriana para su uso en la invención tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntica a la secuencia de rRNA 16s de una cepa bacteriana de Blautia wexlerae. Preferiblemente, la cepa bacteriana para usar en la invención tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntica a SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 4. Preferiblemente, la identidad de secuencia es la SEQ ID NO: 4. Preferiblemente, la cepa bacteriana para usar en la invención tiene la secuencia de rRNA 16s representada por SEQ ID NO: 4.

También se espera que las cepas bacterianas que son biotipos de la bacteria depositada con el número de acceso DSM 14294 o biotipos de la bacteria depositada con los números de acceso NCIMB 42381 y NCIMB 42486 sean eficaces para tratar la lesión cerebral. Un biotipo es una cepa estrechamente relacionada que tiene las mismas características fisiológicas y bioquímicas o muy similares.

Las cepas que son biotipos de una bacteria depositada con el número de acceso DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486 y que son adecuadas para su uso en la invención pueden identificarse secuenciando otras secuencias de nucleótidos de una bacteria depositada con el número de acceso DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB. 42486. Por ejemplo, se puede secuenciar sustancialmente todo el genoma y una cepa de biotipo para su uso en la invención puede tener al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% de identidad de secuencia en al menos el 80% de todo su genoma (p. ej., en al menos 85%, 90%, 95% o 99%, o en todo su genoma). Por ejemplo, en algunas realizaciones, una cepa de biotipo tiene al menos 98% de identidad de secuencia en al menos 98% de su genoma o al menos 99% de identidad de secuencia en 99% de su genoma. Otras secuencias adecuadas para su uso en la identificación de cepas de biotipo pueden incluir hsp60 o secuencias repetitivas como BOX, ERIC, (GTG)5 o REP o [26]. Las cepas de biotipo pueden tener secuencias con al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% de identidad de secuencia con la secuencia correspondiente de una bacteria depositada con el número de acceso DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486. En algunas realizaciones, una cepa de biotipo tiene una secuencia con al menos 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% de identidad de secuencia con la secuencia correspondiente de la cepa Blautia hydrogenotrophica depositada como DSM 14294 y comprende una secuencia de rRNA 16S que es al menos 99% idéntica (p. ej., al menos 99,5% o al menos 99,9% idéntica) a la SEQ ID NO:5. En algunas realizaciones, una cepa de biotipo tiene una secuencia con al menos 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% de identidad de secuencia con la secuencia correspondiente de la cepa Blautia hydrogenotrophica depositada como DSM 14294 y tiene la secuencia de rRNA 16S de SEQ ID NO:5.

Alternativamente, las cepas que son biotipos de una bacteria depositada con el número de acceso DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486 y que son adecuadas para su uso en la invención pueden identificarse utilizando el número de acceso DSM 14294 depósito, el número de acceso NCIMB 42381 depósito, o el número de acceso NCIMB 42486 depósito y análisis de fragmentos de restricción y/o análisis de PCR, por ejemplo mediante el uso de polimorfismo de longitud de fragmento amplificado fluorescente (FAFLP) y huella digital repetitiva de elementos de ADN (rep) -PCR, o perfiles de proteínas, o secuenciación parcial de rDNAr 16S o 23s. En realizaciones preferidas, tales técnicas pueden usarse para identificar otras cepas de hydrogenotrophica Blautia, Blautia stercoris o Blautia wexlerae.

En determinadas realizaciones, las cepas que son biotipos de una bacteria depositada con el número de acceso DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486 y que son adecuadas para su uso en la invención son cepas que proporcionan el mismo patrón que una bacteria depositada con el número de acceso DSM 14294 , NCIMB 42381 o nCiMB 42486 cuando se analizan mediante análisis de restricción de ADN ribosómico amplificado (ARDRA), por ejemplo, cuando se usa la enzima de restricción Sau3AI (para métodos ejemplares y orientación, véase, por ejemplo, [27]). Alternativamente, las cepas de biotipo se identifican como cepas que tienen los mismos patrones de fermentación de carbohidratos que una bacteria depositada con el número de acceso DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486.

Otras cepas de Blautia que son útiles en las composiciones y métodos de la invención, tales como los biotipos de una bacteria depositada con el número de acceso DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486, pueden identificarse utilizando cualquier método o estrategia apropiados, incluyendo los ensayos descritos en el ejemplos. Por ejemplo, las cepas para su uso en la invención pueden identificarse cultivando bacterias y administrando a ratones para probar en el ensayo de oclusión. En particular, las cepas bacterianas que tienen patrones de crecimiento similares, antígenos de tipo metabólico y/o los de superficie de una bacteria depositados con el número de acceso DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486 pueden ser útiles en la invención. Una cepa útil tendrá una actividad moduladora de microbiota comparable a la cepa DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486. En particular, una cepa de biotipo provocará efectos comparables sobre la lesión cerebral a los efectos mostrados en los Ejemplos, que pueden identificarse utilizando los protocolos de cultivo y administración descritos en los Ejemplos.

Una cepa particularmente preferida de la invención es la cepa Blautia hydrogenotrophica depositada con el número de acceso DSM 14294. Esta es la cepa de BH ejemplar probada en los ejemplos y que se ha demostrado que es eficaz para tratar enfermedades. Por tanto, la invención proporciona una célula, tal como una célula aislada, de la cepa Blautia hydrogenotrophica depositada con el número de acceso DSM 14294, o un derivado de la misma, para uso en terapia, en particular para las enfermedades descritas en el presente documento.

Un derivado de la cepa depositada con el número de acceso DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486 puede ser una cepa hija (progenie) o una cepa cultivada (subclonada) del original. Un derivado de una cepa de la invención puede modificarse, por ejemplo, a nivel genético, sin eliminar la actividad biológica. En particular, una cepa derivada de la invención es terapéuticamente activa. Una cepa útil tendrá una actividad moduladora de microbiota comparable a la cepa DSM 14294, NCIMB 42381 o NCIMB 42486. En particular, una cepa derivativa provocará efectos comparables sobre la lesión cerebral a los efectos mostrados en los Ejemplos, que pueden identificarse utilizando los protocolos de cultivo y administración descritos en los Ejemplos. Un derivado de la cepa DSM 14294 será generalmente un biotipo de la cepa DSM 14294. Un derivado de la cepa NCIMB 42381 será generalmente un biotipo de la cepa NCIMB 42381. Un derivado de la cepa NCIMB 42486 será generalmente un biotipo de la cepa NCIMB 42486.

Las referencias a células de la cepa Blautia hydrootrophica depositadas con el número de acceso DSM 14294 abarcan cualquier célula que tenga las mismas características de seguridad y eficacia terapéutica que las cepas depositadas con el número de acceso DSM 14294, y tales células están abarcadas en la invención. Las referencias a células de la cepa de Blautia stercoris depositadas con el número de acceso NCIMB 42381 abarcan cualquier célula que tenga las mismas características de seguridad y eficacia terapéutica que las cepas depositadas con el número de acceso NCIMB 42381, y tales células están abarcadas en la invención. Las referencias a células de la cepa Blautia wexlerae depositadas con el número de acceso NCIMB 42486 abarcan cualquier célula que tenga las mismas características de seguridad y eficacia terapéutica que las cepas depositadas con el número de acceso NCIMB 42486, y tales células están abarcadas en la invención.

En realizaciones preferidas, las cepas bacterianas en las composiciones de la invención son viables y capaces de colonizar parcial o totalmente el intestino.

Usos terapéuticos

Las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales. Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención ayudan a la recuperación y mejoran la función neurológica, las habilidades motoras y el reconocimiento social en un modelo de lesión cerebral por oclusión de ratón, por lo que pueden ser útiles para tratar lesiones cerebrales.

En algunas realizaciones, la lesión cerebral es una lesión cerebral traumática. En algunas realizaciones, la lesión cerebral es una lesión cerebral adquirida. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de traumatismos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrovasculares resultantes de un tumor. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrovasculares resultantes de un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrovasculares resultantes de una hemorragia cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrovasculares resultantes de una encefalitis. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de hipoxia cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de anoxia cerebral.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular. Los efectos que se muestran en los ejemplos son particularmente relevantes para el tratamiento del accidente cerebrovascular. El accidente cerebrovascular ocurre cuando se interrumpe el flujo de sangre a al menos una parte del cerebro. Sin un suministro adecuado de sangre para proporcionar oxígeno y nutrientes al tejido cerebral y eliminar los productos de desecho del tejido cerebral, las células cerebrales comienzan a morir rápidamente. Los síntomas del accidente cerebrovascular dependen de la región del cerebro afectada por el flujo sanguíneo inadecuado.

Los síntomas incluyen parálisis, entumecimiento o debilidad de los músculos, pérdida del equilibrio, mareos, dolores de cabeza repentinos e intensos, problemas del habla, pérdida de la memoria, pérdida de la capacidad de razonamiento, confusión repentina, deterioro de la visión, coma o incluso la muerte. Un accidente cerebrovascular cerebral también se refiere como ataque cerebral o accidente cerebrovascular (ACV). Los síntomas del accidente cerebrovascular pueden ser breves si se restablece el flujo sanguíneo adecuado en un período corto de tiempo. Sin embargo, si el flujo sanguíneo inadecuado continúa durante un período de tiempo significativo, los síntomas pueden ser permanentes.

En realizaciones particularmente preferidas, la composición de la invención comprende una cepa de la especie Blautia hydrogenotrophica y es para uso en el tratamiento de accidentes cerebrovasculares.

En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular es isquemia cerebral. La isquemia cerebral se produce cuando hay un flujo sanguíneo insuficiente a los tejidos del cerebro para satisfacer la demanda metabólica. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral es una isquemia cerebral focal, es decir, confinada a una región específica del cerebro. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral es una isquemia cerebral global, es decir, que abarca un área amplia del tejido cerebral. La isquemia cerebral focal ocurre comúnmente cuando un vaso cerebral se ha bloqueado, ya sea parcial o completamente, reduciendo el flujo de sangre a una región específica del cerebro. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral focal es un accidente cerebrovascular isquémico. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular isquémico es trombótico, es decir, causado por un trombo o coágulo de sangre, que se desarrolla en un vaso cerebral y restringe o bloquea el flujo sanguíneo. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular isquémico es un accidente cerebrovascular trombótico. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular isquémico es embólico, es decir, causado por un émbolo o una masa no adherida que viaja a través del torrente sanguíneo y restringe o bloquea el flujo sanguíneo en un sitio distante de su punto de origen. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular isquémico es un accidente cerebrovascular embólico. La isquemia cerebral global ocurre comúnmente cuando el flujo sanguíneo al cerebro en su conjunto se bloquea o se reduce. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral global está causada por hipoperfusión, es decir, debido a un choque. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral global es el resultado de un paro cardíaco.

En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido isquemia cerebral. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido isquemia cerebral focal. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un accidente cerebrovascular isquémico. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un accidente cerebrovascular trombótico. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un accidente cerebrovascular embólico. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido isquemia cerebral global. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido hipoperfusión. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un paro cardíaco. Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para ayudar a la recuperación después de tales lesiones cerebrales. En realizaciones particularmente preferidas, la composición de la invención comprende una cepa de la especie Blautia hydrootrophica y es para uso en el tratamiento de un paciente que ha sufrido isquemia cerebral.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan en el tratamiento de la isquemia cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de isquemia cerebral focal. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso tratando el accidente cerebrovascular isquémico. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de accidentes cerebrovasculares trombóticos. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de accidentes cerebrovasculares embólicos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de isquemia cerebral global. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de hipoperfusión.

En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular es un accidente cerebrovascular hemorrágico. El accidente cerebrovascular hemorrágico es causado por una hemorragia en el cerebro o alrededor de él, lo que provoca hinchazón, presión y daño a las células y tejidos del cerebro. El accidente cerebrovascular hemorrágico es comúnmente el resultado de un vaso sanguíneo debilitado que se rompe y sangra en el cerebro circundante. En algunas realizaciones, la apoplejía hemorrágica es una hemorragia intracerebral, es decir, causada por hemorragia dentro del propio tejido cerebral. En algunas realizaciones, la hemorragia intracerebral es causada por una hemorragia intraparenquimatosa. En algunas realizaciones, la hemorragia intracerebral es causada por una hemorragia intraventricular. En alguna realizaciones, el accidente cerebrovascular hemorrágico es una hemorragia subaracnoidea, es decir, una hemorragia que ocurre fuera del tejido cerebral pero todavía dentro del cráneo. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular hemorrágico es el resultado de una angiopatía amiloide cerebral. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular hemorrágico es el resultado de un aneurisma cerebral. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular hemorrágico es el resultado de una malformación arteriovenosa cerebral (MAV).

En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un accidente cerebrovascular hemorrágico. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una hemorragia intracerebral. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una hemorragia intraparenquimatosa. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una hemorragia intraventricular. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una hemorragia subaracnoidea. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido angiopatía amiloide cerebral. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un aneurisma cerebral. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido MAV cerebral.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de accidentes cerebrovasculares hemorrágicos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una hemorragia intracerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una hemorragia intraparenquimatosa. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una hemorragia intraventricular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una hemorragia subaracnoidea. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una angiopatía amiloide cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un aneurisma cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de MAV cerebral.

La restauración del flujo sanguíneo adecuado al cerebro después de un período de interrupción, aunque es eficaz para aliviar los síntomas asociados con el accidente cerebrovascular, paradójicamente puede resultar en más daño al tejido cerebral. Durante el período de interrupción, el tejido afectado sufre de falta de oxígeno y nutrientes, y la restauración repentina del flujo sanguíneo puede resultar en inflamación y daño oxidativo a través de la inducción de estrés oxidativo. Esto se conoce como lesión por reperfusión y está bien documentado no solo después de un accidente cerebrovascular, sino también después de un ataque cardíaco u otro daño tisular cuando el suministro de sangre vuelve al tejido después de un período de isquemia o falta de oxígeno. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una lesión por reperfusión como resultado de un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan en el tratamiento de la lesión por reperfusión como resultado de un accidente cerebrovascular.

Un ataque isquémico transitorio (AIT), a menudo denominado mini accidente cerebrovascular, es una señal de advertencia reconocida de un accidente cerebrovascular más grave. Los sujetos que han sufrido uno o más AIT tienen, por tanto, un mayor riesgo de sufrir un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un AIT. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método para tratar un AIT. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan en el tratamiento de una lesión cerebral en un sujeto que ha sufrido un AIT.

Presión arterial alta, colesterol alto en sangre, antecedentes familiares de accidente cerebrovascular, enfermedad cardíaca, diabetes, aneurismas cerebrales, malformaciones arteriovenosas, enfermedad de células falciformes, vasculitis, trastornos hemorrágicos, uso de antiinflamatorios no esteroideos (AINE), fumar tabaco, el consumo de grandes cantidades de alcohol, el consumo de drogas ilegales, la obesidad, la falta de actividad física y una dieta poco saludable se consideran factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En particular, se ha demostrado de manera concluyente que la disminución de la presión arterial previene los accidentes cerebrovasculares isquémicos y hemorrágicos [28, 29]. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una lesión cerebral en un sujeto que tiene al menos un factor de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene dos factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene tres factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene cuatro factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene más de cuatro factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene presión arterial alta. En algunas realizaciones, el sujeto tiene colesterol en sangre alto. En algunas realizaciones, el sujeto tiene antecedentes familiares de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene una enfermedad del corazón. En algunas realizaciones, el sujeto tiene diabetes. En algunas realizaciones, el sujeto tiene un aneurisma cerebral. En algunas realizaciones, el sujeto tiene malformaciones arteriovenosas. En algunas realizaciones, el sujeto tiene vasculitis. En algunas realizaciones, el sujeto tiene enfermedad de células falciformes. En algunas realizaciones, el sujeto tiene un trastorno hemorrágico. En algunas realizaciones, el sujeto tiene un historial de uso de fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE). En algunas realizaciones, el sujeto fuma tabaco. En algunas realizaciones, el sujeto bebe grandes cantidades de alcohol. En algunas realizaciones, el sujeto usa drogas ilegales. En algunas modalidades, el sujeto es obeso. En algunas modalidades, el sujeto tiene sobrepeso. En algunas realizaciones, el sujeto carece de actividad física. En algunas realizaciones, el sujeto tiene una dieta poco saludable.

Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar lesiones cerebrales y ayudar a la recuperación cuando se administran antes de que ocurra la lesión. Por lo tanto, las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para tratar lesiones cerebrales cuando se administran a sujetos con riesgo de lesión cerebral, tal como accidente cerebrovascular. En realizaciones preferidas, la composición de la invención comprende una cepa de la especie Blautia hydrootrophica y es para uso en el tratamiento de un paciente identificado con riesgo de sufrir un accidente cerebrovascular.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan para reducir el daño causado por una posible lesión cerebral, preferiblemente un accidente cerebrovascular. Las composiciones pueden reducir el daño causado cuando se administran antes de que se produzca la posible lesión cerebral, en particular cuando se administran a un paciente identificado como con riesgo de lesión cerebral.

Los ejemplos muestran que el tratamiento con una composición de la invención reduce el daño motor después de un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral reduciendo la lesión motora. Los ejemplos muestran que el tratamiento con una composición de la invención mejora la función motora después de un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando la función motora. Los ejemplos muestran que el tratamiento con una composición de la invención mejora la fuerza muscular después del accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando la fuerza muscular. Los ejemplos muestran que el tratamiento con una composición de la invención mejora la memoria después de un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando la memoria. Los ejemplos muestran que el tratamiento con una composición de la invención mejora la función motora después de un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando el reconocimiento social. Los ejemplos demuestran que el tratamiento con una composición de la invención mejora la función neurológica después de un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando la función neurológica.

Como se demuestra en los ejemplos, las composiciones bacterianas de la invención pueden ser eficaces para tratar lesiones cerebrales. En determinadas realizaciones, la composición puede estar en forma de cultivo bacteriano. En algunas realizaciones, la composición puede ser preferiblemente un liofilizado.

El tratamiento de la lesión cerebral puede referirse, por ejemplo, al alivio de la gravedad de los síntomas. El tratamiento de la lesión cerebral también puede referirse a la reducción de las deficiencias neurológicas que siguen a un accidente cerebrovascular. Las composiciones de la invención para su uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar al sujeto antes del inicio del accidente cerebrovascular, por ejemplo, en un paciente identificado como con riesgo de accidente cerebrovascular. Las composiciones de la invención para su uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar después de que ha ocurrido un accidente cerebrovascular, por ejemplo, durante la recuperación. Las composiciones de la invención para su uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar durante la fase aguda de recuperación (es decir, hasta una semana después del accidente cerebrovascular). Las composiciones de la invención para su uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar durante la fase subaguda de recuperación (es decir, desde una semana hasta tres meses después del accidente cerebrovascular). Las composiciones de la invención para su uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar durante la fase crónica de recuperación (es decir, desde una semana hasta tres meses después del accidente cerebrovascular).

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en combinación con un agente activo secundario. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en combinación con aspirina o activador de plasminógeno tisular (tPA). Otros agentes secundarios incluyen otros antiagregantes plaquetarios (tales como clopidogrel), anticoagulantes (tales como heparinas, warfarina, apixabán, dabigatrán, edoxabán o rivaroxabán), antihipertensivos (como diuréticos, inhibidores de ECA, antagonistas del calcio, betabloqueantes o alfabloqueantes). o estatinas. Las composiciones de la invención pueden mejorar la respuesta del paciente al agente activo secundario.

Aunque existen muchos mecanismos asociados con la patogenia del accidente cerebrovascular, numerosos estudios han demostrado que el estrés oxidativo, la inflamación y la apoptosis son factores clave para su progresión patogénica [30, 31]. Se entiende que un rápido aumento de las especies reactivas de oxígeno (ROS) inmediatamente después del accidente cerebrovascular abruma las defensas antioxidantes existentes y causa daño tisular. Tales ROS también estimulan la liberación de citocinas inflamatorias y metaloproteinasas de matriz que aumentan la permeabilidad de la barrera hematoencefálica y el tráfico de leucocitos. La superóxido dismutasa (SOD) es un antioxidante endógeno que juega un papel en la prevención de la lesión oxidativa. Por lo tanto, la mejora de las actividades antioxidantes en el cerebro, como las de la SOD, es beneficiosa para aliviar el daño neuronal. Además, las reacciones inflamatorias también agravan el daño cerebral durante y después del accidente cerebrovascular. El estrés oxidativo y la inflamación pueden resultar en apoptosis neuronal, que puede ser responsable de la muerte de las células neuronales después de un accidente cerebrovascular.

El butirato es un ácido graso de cadena corta (SCFA), sintetizado a través de la fermentación de fibras que de otro modo no serían digeribles por bacterias en el colon. Se ha sugerido que el butirato es neuroprotector, reduce la permeabilidad de la barrera hematoencefálica después de un accidente cerebrovascular, reduce el estrés oxidativo, tiene efectos antiinflamatorios, inhibe la apoptosis neuronal y promueve la supervivencia celular general, la reparación de tejidos y la recuperación después del accidente cerebrovascular [32, 33, 34, 35, 36].

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la picnosis y/o puntuación de vacuolización de un tejido. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la picnosis y/o puntuación de vacuolización de un tejido que ha estado sujeto a isquemia. Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención reducen el daño tisular medido por picnosis y vacuolización. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen el efecto de la isquemia en los tejidos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen la cantidad de daño a los tejidos causado por la isquemia. En determinadas realizaciones, los tejidos dañados por isquemia son los tejidos cerebrales. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen la necrosis o el número de células necróticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen la apoptosis o el número de células apoptóticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen el número de células necróticas y células apoptóticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen la muerte celular por necrosis y/o apoptosis. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen la muerte celular por necrosis y/o apoptosis causada por isquemia. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la recuperación del tejido dañado por isquemia. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la velocidad de aclaramiento de las células necróticas y/o células apoptóticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la eficacia de aclaramiento de las células necróticas y/o células apoptóticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la sustitución y/o regeneración de células dentro de los tejidos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la sustitución y/o regeneración de células dentro de los tejidos dañados por isquemia. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la histología global del tejido (por ejemplo, tras una biopsia).

Modos de administración

Preferiblemente, las composiciones de la invención deben administrarse al tracto gastrointestinal para permitir la administración a y/o colonización parcial o total del intestino con la cepa bacteriana de la invención. Generalmente, las composiciones de la invención se administran por vía oral, pero pueden administrarse por vía rectal, intranasal o por vía bucal o sublingual.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se pueden administrar como espuma, spray o gel. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se pueden administrar como un supositorio, como un supositorio rectal, por ejemplo, en forma de aceite de teobroma (manteca de cacao), grasa dura sintética (p. ej., suppocire, witepsol), glicerogelatina, polietilenglicol o composición de glicerina de jabón.

En ciertas realizaciones, la composición de la invención se administra al tracto gastrointestinal a través de un tubo, tal como un tubo nasogástrico, tubo orogástrico, tubo gástrico, tubo de yeyunostomía (tubo en J), gastrostomía endoscópica percutánea (PEG), o un puerto, tal como un puerto de la pared torácica que proporciona acceso al estómago, yeyuno y otros puertos de acceso adecuados.

Las composiciones de la invención pueden administrarse una vez o pueden administrarse secuencialmente como parte de un régimen de tratamiento. En determinadas formas de realización, las composiciones de la invención deben administrarse diariamente. Los ejemplos demuestran que la administración proporciona colonización satisfactoria y beneficios clínicos en el tratamiento de la lesión cerebral.

En ciertas realizaciones, las composiciones de la invención se administran regularmente, como diariamente, cada dos días o semanalmente, durante un período de tiempo prolongado, como durante al menos una semana, dos semanas, un mes, dos meses, seis meses o un año. Los ejemplos demuestran que la administración de BH puede no dar como resultado una colonización permanente de los intestinos, por lo que la administración regular durante períodos de tiempo prolongados puede proporcionar mayores beneficios terapéuticos.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención se administran durante 7 días, 14 días, 16 días, 21 días o 28 días o no más de 7 días, 14 días, 16 días, 21 días o 28 días. Por ejemplo, en algunas realizaciones, las composiciones de la invención se administran durante 16 días. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención se administran durante 1, 2, 3, 4, 5 o 6 meses, durante 6 meses o durante 1 año.

En determinadas formas de realización de la invención, el tratamiento según la invención se acompaña de la evaluación de la microbiota intestinal del paciente. El tratamiento puede repetirse si se administra y / o la colonización parcial o total con la cepa de la invención no se logra de manera que no se observe eficacia, o el tratamiento puede interrumpirse si / o la colonización parcial o total tiene éxito y se observa eficacia.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención se puede administrar a un animal preñado, por ejemplo, un mamífero como un ser humano para tratar lesiones cerebrales que se desarrollan en su hijo en el útero y / o después de que nazca.

Las composiciones de la invención se pueden administrar a un paciente al que se le ha diagnosticado una lesión cerebral o una enfermedad o afección asociada con una lesión cerebral, o que se ha identificado como con riesgo de lesión cerebral.

Las composiciones de la invención se pueden administrar a un paciente que se ha identificado que tiene una microbiota intestinal anormal. Por ejemplo, el paciente puede tener una colonización reducida o ausente por Blautia, y en particular Blautia hydrogenotrophica, Blautia stercoris o Blautia wexlerae.

Las composiciones de la invención se pueden administrar como un producto alimenticio, tal como un suplemento nutricional.

Generalmente, las composiciones de la invención son para el tratamiento de seres humanos, aunque pueden usarse para tratar animales, incluyendo mamíferos monogástricos como aves de corral, cerdos, gatos, perros, caballos o conejos. Las composiciones de la invención pueden ser útiles para mejorar el crecimiento y el rendimiento de los animales. Si se administra a animales, se puede usar sonda oral.

En algunas realizaciones, el sujeto al que se va a administrar la composición es un humano adulto. En algunas realizaciones, el sujeto al que se va a administrar la composición es un ser humano infantil.

Composiciones

Generalmente, la composición de la invención comprende bacterias. En realizaciones preferidas de la invención, la composición se formula en forma congelada-seca. Por ejemplo, la composición de la invención puede comprender gránulos o cápsulas de gelatina, por ejemplo cápsulas de gelatina dura, que comprenden una cepa bacteriana de la invención.

Preferiblemente, la composición de la invención comprende bacterias liofilizadas. La liofilización de bacterias es un procedimiento bien establecido y la orientación pertinente está disponible, por ejemplo, en las referencias [37-39]. Las composiciones liofilizadas pueden ser particularmente eficaces. En realizaciones preferidas, la composición de la invención comprende bacterias liofilizadas y es para el tratamiento de lesiones cerebrales.

Alternativamente, la composición de la invención puede comprender un cultivo bacteriano activo vivo. En algunas realizaciones, la cepa bacteriana en la composición de la invención no ha sido inactivada, por ejemplo, no ha sido inactivada por calor. En algunas realizaciones, la cepa bacteriana en la composición de la invención no ha sido destruida, por ejemplo, no ha sido destruida por calor. En algunas realizaciones, la cepa bacteriana en la composición de la invención no ha sido atenuada, por ejemplo atenuada por calor. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la cepa bacteriana en la composición de la invención no ha sido destruida, inactivada y/o atenuada. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la cepa bacteriana en la composición de la invención está viva. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la cepa bacteriana en la composición de la invención es viable. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la cepa bacteriana en la composición de la invención es capaz de colonizar parcial o totalmente el intestino. Por ejemplo, en realizaciones preferidas, la cepa bacteriana en la composición de la invención es viable y capaz de colonizar parcial o totalmente el intestino.

En algunas realizaciones, la composición comprende una mezcla de cepas bacterianas vivas y cepas bacterianas que han sido destruidas.

En realizaciones preferidas, la composición de la invención se encapsula para permitir el suministro de la cepa bacteriana al intestino. La encapsulación protege la composición de la degradación hasta la administración en la ubicación objetivo mediante, por ejemplo, la ruptura con estímulos químicos o físicos como presión, actividad enzimática o desintegración física, que pueden desencadenarse por cambios en el pH. Puede usarse cualquier método de encapsulación apropiado. Las técnicas de encapsulación ejemplares incluyen atrapamiento dentro de una matriz porosa, unión o adsorción sobre superficies sólidas del portador, autoagregación por floculación o con agentes reticulantes y contención mecánica detrás de una membrana microporosa o microcápsula. La orientación sobre encapsulación que puede ser útil para preparar composiciones de la invención está disponible en, por ejemplo, referencias [40-41].

La composición se puede administrar por vía oral y puede estar en forma de tableta, cápsula o polvo. Se prefieren los productos encapsulados porque Blautia son anaerobios. Se pueden incluir otros principios (como la vitamina C, por ejemplo) como captadores de oxígeno y sustratos prebióticos para mejorar la administración y/o colonización y supervivencia parcial o total in vivo. Alternativamente, la composición probiótica de la invención puede administrarse por vía oral como alimento o producto nutricional, tal como leche o producto lácteo fermentado a base de suero, o como producto farmacéutico.

La composición se puede formular como probiótico.

Una composición de la invención incluye una cantidad terapéuticamente eficaz de una cepa bacteriana de la invención. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una cepa bacteriana es suficiente para ejercer un efecto beneficioso sobre un paciente. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una cepa bacteriana puede ser suficiente para dar como resultado la administración a y/o colonización parcial o total del intestino del paciente.

Una dosis diaria adecuada de la bacteria, por ejemplo para un ser humano adulto, puede ser de aproximadamente 1 x 103 a aproximadamente 1 x 1011 unidades formadoras de colonias (CFU); por ejemplo, de aproximadamente 1 x 107 a aproximadamente 1 x 1010 CFU; en otro ejemplo, de aproximadamente 1 x 106 a aproximadamente 1 x 1010 CFU; en otro ejemplo, de aproximadamente 1 x 107 a aproximadamente 1 x 1011 CFU; en otro ejemplo, de aproximadamente 1 x 108 a aproximadamente 1 x 1010 CFU; en otro ejemplo, de aproximadamente 1 x 108 a aproximadamente 1 x 1011 CFU.

En determinadas realizaciones, la dosis de la bacteria es de al menos 109 células por día, tal como al menos 1010, al menos 1011 o al menos 1012 células por día.

En determinadas realizaciones, la composición contiene la cepa bacteriana en una cantidad de aproximadamente 1 x 106 a aproximadamente 1 x 1011 CFU/g, con respecto al peso de la composición; por ejemplo, de aproximadamente 1 x 108 a aproximadamente 1 x 1010 CFU/g. La dosis puede ser, por ejemplo, 1 g, 3 g, 5 g y 10 g.

Normalmente, un probiótico, tal como la composición de la invención, se combina opcionalmente con al menos un compuesto prebiótico adecuado. Un compuesto prebiótico suele ser un carbohidrato no digerible, como un oligo o polisacárido, o un alcohol de azúcar, que no se degrada ni se absorbe en el tracto digestivo superior. Los prebióticos conocidos incluyen productos comerciales tales como inulina y transgalactooligosacáridos.

En determinadas realizaciones, la composición probiótica de la presente invención incluye un compuesto prebiótico en una cantidad de aproximadamente 1 a aproximadamente 30% en peso, con respecto al peso total de la composición (p. ej., de 5 a 20% en peso). Los carbohidratos se pueden seleccionar del grupo que consiste en: fructo-oligosacáridos (o FOS), fructo-oligosacáridos de cadena corta, inulina, isomalt-oligosacáridos, pectinas, xilo-oligosacáridos (o XOS), quitosano-oligosacáridos (o COS), beta -glucanos, almidones resistentes y modificados con goma de cultivo, polidextrosa, D-tagatosa, fibras de acacia, algarroba, avena y fibras de cítricos. En un aspecto, los prebióticos son los fructooligosacáridos de cadena corta (por simplicidad mostrados a continuación en el presente documento como FOSscc); dichos FOSs-cc no son carbohidratos digeribles, generalmente obtenidos por conversión del azúcar de remolacha y que incluyen una molécula de sacarosa a la que se unen tres moléculas de glucosa.

Las composiciones de la invención pueden comprender excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables. Se pueden encontrar ejemplos de tales excipientes adecuados en la referencia [42]. Se conocen en la técnica farmacéutica vehículos o diluyentes aceptables para uso terapéutico y se describen, por ejemplo, en la referencia [43]. Ejemplos de vehículos adecuados incluyen lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, manitol, sorbitol y similares. Ejemplos de diluyentes adecuados incluyen etanol, glicerol y agua. La elección del vehículo, excipiente o diluyente farmacéutico se puede seleccionar conforme a la vía de administración deseada y la práctica farmacéutica estándar. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender como, o además de, el vehículo, excipiente o diluyente cualquier aglutinante (s), lubricante (s), agente (s) de suspensión, agente (s) de revestimiento, agente (s) solubilizantes adecuados. Ejemplos de aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa, lactosa anhidra, lactosa en flujo libre, beta-lactosa, endulzantes de maíz, gomas naturales y sintéticas, tales como acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa y polietilenglicol. Ejemplos de lubricantes adecuados incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. En la composición farmacéutica se pueden proporcionar conservantes, estabilizadores, colorantes e incluso agentes aromatizantes. Los ejemplos de conservantes incluyen benzoato de sodio, ácido sórbico, cisteína y ésteres de ácido p-hidroxibenzoico, por ejemplo, en algunas realizaciones el conservante se selecciona de benzoato de sodio, ácido sórbico y ésteres de ácido p-hidroxibenzoico. También se pueden usar antioxidantes y agentes de suspensión. Un ejemplo adicional de un vehículo adecuado es la sacarosa. Un ejemplo adicional de un conservante es la cisteína.

Las composiciones de la invención se pueden formular como un producto alimenticio. Por ejemplo, un producto alimenticio puede proporcionar un beneficio nutricional además del efecto terapéutico de la invención, tal como en un suplemento nutricional. De manera similar, se puede formular un producto alimenticio para mejorar el sabor de la composición de la invención o para hacer que la composición sea más atractiva para consumir al ser más similar a un artículo alimenticio común, en lugar de a una composición farmacéutica. En determinadas realizaciones, la composición de la invención se formula como un producto a base de leche. El término "producto a base de leche" significa cualquier producto a base de leche o suero líquido o semisólido que tenga un contenido de grasa variable. El producto a base de leche puede ser, por ejemplo, leche de vaca, leche de cabra, leche de oveja, leche desnatada, leche entera, leche recombinada de leche en polvo y suero sin ningún procesamiento, o un producto procesado, tal como yogur, leche cuajada, cuajada, leche agria, leche entera agria, leche de mantequilla y otros productos lácteos agrios. Otro grupo importante incluye las bebidas lácteas, tales como las bebidas de suero, leches fermentadas, leches condensadas, leches para lactantes o bebés; leches aromatizadas, helados; alimentos que contienen leche, tales como dulces.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden una o más cepas bacterianas del género Blautia y no contienen bacterias de ningún otro género, o que comprenden sólo cantidades de minimis o biológicamente irrelevantes de bacterias de otro género.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención contienen una única cepa o especie bacteriana y no contienen ninguna otra cepa o especie bacteriana. Tales composiciones pueden comprender sólo cantidades de minimis o biológicamente irrelevantes de otras cepas o especies bacterianas. Tales composiciones pueden ser un cultivo sustancialmente exento de otras especies de organismos. En algunas realizaciones, tales composiciones pueden ser un liofilizado que está sustancialmente libre de otras especies de organismos.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden una o más cepas bacterianas del género Blautia, por ejemplo, Blautia hydrootrophica, y no contienen ningún otro género bacteriano, o que comprenden sólo cantidades de minimis o biológicamente irrelevantes de bacterias de otro género. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden una única especie de Blautia, por ejemplo, una Blautia hydrootrophica, y no contienen ninguna otra especie bacteriana, o que comprenden únicamente cantidades de minimis o biológicamente irrelevantes de bacterias de otra especie. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden una única cepa bacteriana de Blautia por ejemplo, una Blautia hydrootrophica, y no contienen ninguna otra especie bacteriana, o que comprenden únicamente cantidades de minimis o biológicamente irrelevantes de bacterias de otra cepa o especie.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden más de una cepa o especie bacteriana. Por ejemplo, en algunas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden más de una cepa de la misma especie (por ejemplo, más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 o 45 cepas) y, opcionalmente, no contienen bacterias de ninguna otra especie. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden menos de 50 cepas de la misma especie (por ejemplo, menos de 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 o 3 cepas) y, opcionalmente, no contienen bacterias de ninguna otra especie. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden 1-40, 1-30, 1-20, 1-19, 1-18, 1-15, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-50, 2-40, 2­ 30, 2-20, 2-15, 2-10, 2-5, 6-30, 6-15, 16-25 o 31-50 cepas de la misma especie y, opcionalmente, no contienen bacterias de ninguna otra especie. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden más de una especie del mismo género (p. ej., más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17, 20, 23, 25, 30, 35 o 40 especies) y, opcionalmente, no contienen bacterias de ninguna otra especie. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden menos de 50 especies del mismo género (p. ej., menos de 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 12, 10, 8, 7, 6, 5, 4 o 3 especies) y, opcionalmente, no contienen bacterias de ningún otro género. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención comprenden 1-50, 1-40, 1-30, 1-20, 1-15, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-50, 2-40, 2-30, 2-20, 2-15, 2-10, 2-5, 6-30, 6-15, 16-25 o 31-50 especies del mismo género y, opcionalmente, no contienen bacterias de ningún otro género. La invención comprende cualquier combinación de los anteriores.

En algunas realizaciones, la composición comprende un consorcio microbiano. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la composición comprende la cepa bacteriana Blautia como parte de un consorcio microbiano. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la cepa bacteriana Blautia está presente en combinación con una o más (p. ej., al menos 2, 3, 4, 5, 10, 15 o 20) otras cepas bacterianas de otros géneros con las que puede vivir simbióticamente in vivo en el intestino. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la composición comprende una cepa bacteriana de Blautia hydrogenotrophica en combinación con una cepa bacteriana de un género diferente. En algunas realizaciones, el consorcio microbiano comprende dos o más cepas bacterianas obtenidas de una muestra de heces de un solo organismo, p. ej., un humano. En algunas realizaciones, el consorcio microbiano no se encuentra junto en la naturaleza. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el consorcio microbiano comprende cepas bacterianas obtenidas de muestras de heces de al menos dos organismos diferentes. En algunas realizaciones, los dos organismos diferentes son de la misma especie, p. ej., dos humanos diferentes. En algunas realizaciones, los dos organismos diferentes son un humano infantil y un humano adulto. En algunas realizaciones, los dos organismos diferentes son un mamífero humano y uno no humano.

En algunas realizaciones, la composición de la invención comprende adicionalmente una cepa bacteriana que tiene las mismas características de seguridad y eficacia terapéutica que la cepa Blautia hydrogenotrophica depositada con el número de acceso DSM 14294, pero que no es la cepa Blautia hydrogenotrophica depositada con el número de acceso DSM 14294, o que no es una Blautia hydrootrophica o que no es una Blautia.

En algunas realizaciones en las que la composición de la invención comprende más de una cepa, especie o género bacteriano, las cepas, especies o géneros bacterianos individuales pueden ser para administración separada, simultánea o secuencial. Por ejemplo, la composición puede comprender todas las más de una cepa, especie o género bacteriano, o las cepas, especies o géneros bacterianos pueden almacenarse por separado y administrarse por separado, simultáneamente o secuencialmente. En algunas realizaciones, las más de una cepa, especie o género bacteriano se almacenan por separado pero se mezclan antes de su uso.

En algunas realizaciones, la cepa bacteriana para usar en la invención se obtiene a partir de heces de adultos humanos. En algunas realizaciones en las que la composición de la invención comprende más de una cepa bacteriana, todas las cepas bacterianas se obtienen a partir de heces humanas adultas o, si están presentes otras cepas bacterianas, están presentes sólo en cantidades de minimis. Las bacterias pueden haberse cultivado después de haberlas obtenido de las heces de adultos humanos y haberlas utilizado en una composición de la invención.

En algunas realizaciones, una o más cepas bacterianas de Blautia es/son el único agente o agentes terapéuticamente activos en una composición de la invención. En algunas realizaciones, la(s) cepa(s) bacteriana(s) en la composición es/son el único agente o agentes terapéuticamente activos en una composición de la invención.

Las composiciones para su uso según la invención pueden requerir o no aprobación de comercialización.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde dicha cepa bacteriana está liofilizada. En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde dicha cepa bacteriana está seca pulverizada. En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en la que la cepa bacteriana está liofilizada o seca pulverizada y en donde está viva. En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde dicha cepa bacteriana está liofilizada o seca pulverizada y en donde es viable. En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde la cepa bacteriana está liofilizada o seca pulverizada y en donde es capaz de colonizar parcialmente o totalmente el intestino. En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde la cepa bacteriana está liofilizada o seca pulverizada y en donde es viable y capaz de colonizar parcialmente o totalmente el intestino.

En algunos casos, la cepa bacteriana liofilizada o seca pulverizada se reconstituye antes de la administración. En algunos casos, la reconstitución se realiza mediante el uso de un diluyente descrito en el presente documento.

Las composiciones de la invención pueden comprender excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende: una cepa bacteriana de la invención; y un excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable; en donde la cepa bacteriana está en una cantidad suficiente para tratar un trastorno cuando se administra a un sujeto que lo necesita; y en donde el trastorno es una lesión cerebral.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde la cantidad de cepa bacteriana es de aproximadamente 1 x 103 a aproximadamente 1 x 1011 unidades formadoras de colonias por gramo con respecto al peso de la composición.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde la composición se administra en una dosis de 1 g, 3 g, 5 g o 10 g.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde e la composición se administra mediante un método seleccionado del grupo que consiste en oral, rectal, subcutáneo, nasal, bucal y sublingual.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende un vehículo seleccionado del grupo que consiste en lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, manitol y sorbitol.

En ciertas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende un diluyente seleccionado del grupo que consiste en etanol, glicerol y agua.

En ciertas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende un excipiente seleccionado del grupo que consiste en almidón, gelatina, glucosa, lactosa anhidra, lactosa de flujo libre, beta-lactosa, edulcorante de maíz, goma arábiga, tragacanto, alginato de sodio, carboximetilo. celulosa, polietilenglicol, oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio y cloruro de sodio.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende además al menos uno de entre un conservante, un antioxidante y un estabilizador.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende un conservante seleccionado del grupo que consiste en benzoato de sodio, ácido sórbico y ésteres de ácido phidroxibenzoico.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde dicha cepa bacteriana está liofilizada.

En ciertas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en donde cuando la composición se almacena en un recipiente sellado a aproximadamente 4 °C o aproximadamente 25 °C y el recipiente se coloca en una atmósfera que tiene 50% de humedad relativa, al menos 80% de la cepa bacteriana medida en unidades formadoras de colonias, permanece después de un período de al menos aproximadamente: 1 mes, 3 meses, 6 meses, 1 año, 1,5 años, 2 años, 2,5 años o 3 años.

En algunas realizaciones, la composición de la invención se proporciona en un recipiente sellado que comprende una composición como se describe en el presente documento. En algunas realizaciones, el recipiente sellado es una bolsita o una botella. En algunas realizaciones, la composición de la invención se proporciona en una jeringa que comprende una composición como se describe en el presente documento.

La composición de la presente invención puede, en algunas realizaciones, proporcionarse como una formulación farmacéutica. Por ejemplo, la composición se puede proporcionar como una tableta o cápsula. En algunas realizaciones, la cápsula es una cápsula de gelatina ("cápsula de gel").

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención se administran por vía oral. La administración oral puede implicar la deglución, de modo que el compuesto ingrese al tracto gastrointestinal, y/o administración bucal, lingual o sublingual mediante la cual el compuesto ingresa al torrente sanguíneo directamente desde la boca.

Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para la administración oral incluyen tapones sólidos, micropartículas sólidas, semisólidas y líquidas (incluyendo múltiples fases o sistemas dispersos) tales como tabletas; cápsulas blandas o duras que contienen partículas múltiples o nanopartículas, líquidos (p. ej., soluciones acuosas), emulsiones o polvos; pastillas para chupar (incluyendo rellenas de líquido); chicles, geles formas de dosificación de rápida dispersión; películas; óvulos; aerosoles y parches bucales/mucoadhesivos.

En algunas realizaciones, la formulación farmacéutica es una formulación entérica, es decir, una formulación gastrorresistente (por ejemplo, resistente al pH gástrico) que es adecuada para la administración de la composición de la invención al intestino por administración oral. Las formulaciones entéricas pueden ser particularmente útiles cuando las bacterias u otro componente de la composición son sensibles a los ácidos, p. ej., propensos a la degradación bajo condiciones gástricas.

En algunas realizaciones, la formulación entérica comprende un recubrimiento entérico. En algunas realizaciones, la formulación es una forma de dosificación con recubrimiento entérico. Por ejemplo, la formulación puede ser una tableta con recubrimiento entérico o una cápsula con recubrimiento entérico, o similares. El recubrimiento entérico puede ser un recubrimiento entérico convencional, por ejemplo, un recubrimiento convencional para una tableta, cápsula o similar para administración oral. La formulación puede comprender un revestimiento de película, por ejemplo, una capa de película delgada de un polímero entérico, p. ej., un polímero insoluble en ácido.

En algunas realizaciones, la formulación entérica es intrínsecamente entérica, por ejemplo, gastrorresistente sin la necesidad de un recubrimiento entérico. Por tanto, en algunas realizaciones, la formulación es una formulación entérica que no comprende un recubrimiento entérico. En algunas realizaciones, la formulación es una cápsula hecha de un material termogelificante. En algunas realizaciones, el material termogelificante es un material celulósico, tal como metilcelulosa, hidroximetilcelulosa o hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC). En algunas realizaciones, la cápsula comprende una cubierta que no contiene ningún polímero formador de película. En algunas realizaciones, la cápsula comprende una cubierta y la cubierta comprende hidroxipropilmetilcelulosa y no comprende ningún polímero formador de película (p. ej., véase [44]). En algunas realizaciones, la formulación es una cápsula intrínsecamente entérica (por ejemplo, Vcaps® de Capsugel).

En algunas realizaciones, la formulación es una cápsula blanda. Las cápsulas blandas son cápsulas que pueden, debido a la adición de suavizantes, tales como, por ejemplo, glicerol, sorbitol, maltitol y polietilenglicoles, presentes en la cubierta de la cápsula, tener una cierta elasticidad y suavidad. Las cápsulas blandas se pueden producir, por ejemplo, a base de gelatina o almidón. Las cápsulas blandas a base de gelatina están disponibles comercialmente de varios proveedores. Dependiendo del método de administración, tal como, por ejemplo por vía oral o rectal, las cápsulas blandas pueden tener varias formas, pueden ser, por ejemplo, redondas, ovaladas, oblongas o en forma de torpedo. Las cápsulas blandas se pueden producir mediante procesos convencionales, tales como, por ejemplo, mediante el proceso de Scherer, el proceso de Accogel o el proceso de gotitas o soplado.

Métodos de cultivo

Las cepas bacterianas para su uso en la presente invención se pueden cultivar usando técnicas de microbiología estándar como se detalla, por ejemplo, en las referencias [45-47].

El medio sólido o líquido usado para el cultivo puede ser, por ejemplo, agar YCFA o medio YCFA. El medio YCFA puede incluir (por 100 ml, valores aproximados): Casitone (1,0 g), extracto de levadura (0,25 g), NaHCO3 (0,4 g), cisteína (0,1 g), K2HPO4 (0,045 g), KH2PO4 (0,045 g), NaCl (0,09 g), (NH4)2SO4 (0,09 g), MgSO4 ■ 7H2O (0,009 g), CaCh (0,009 g), resazurina (0,1 mg), hemina ( 1 mg), biotina (1 |jg), cobalamina (1 |jg), ácido p-aminobenzoico (3 jg), ácido fólico (5 jg) y piridoxamina (15 jg).

General

La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique lo contrario, métodos convencionales de química, bioquímica, biología molecular, inmunología y farmacología, dentro de los conocimientos de la técnica. Estas técnicas se explican completamente en la literatura. Véase, p. ej., referencias [48-55], etc.

El término "que comprende" abarca "que incluye" así como "que consiste", p. ej., una composición "que comprende" X puede consistir exclusivamente en X o puede incluir algo adicional, p. ej., X Y.

El término "aproximadamente" en relación con un valor numérico x es opcional y significa, por ejemplo, x ±10%.

La palabra "sustancialmente" no excluye "completamente", p. ej., una composición que está "sustancialmente libre" de Y puede estar completamente libre de Y. Cuando sea necesario, la palabra "sustancialmente" puede omitirse de la definición de la invención.

Las referencias a un porcentaje de identidad de secuencia entre dos secuencias de nucleótidos significan que, cuando se alinean, ese porcentaje de nucleótidos es el mismo al comparar las dos secuencias. Este alineamiento y el porcentaje de homología o identidad de secuencia se pueden determinar usando programas de software conocidos en la técnica, por ejemplo los descritos en la sección 7.7.18 de la ref. [56]. Una alineación preferida se determina mediante el algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman usando una búsqueda de huecos afines con una penalización por apertura de huecos de 12 y una penalización por extensión de huecos de 2, matriz BLOSUM de 62. El algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman se describe en la ref. [57].

A menos que se indique específicamente, un proceso o método que comprende numerosas etapas puede comprender etapas adicionales al principio o al final del método, o puede comprender etapas intermedias adicionales. También, las etapas se pueden combinar, omitir o realizar en un orden alternativo, si es apropiado.

En el presente documento se describen varias realizaciones de la invención. Se apreciará que las características especificadas en cada realización pueden combinarse con otras características especificadas, para proporcionar realizaciones adicionales. En particular, las realizaciones destacadas en el presente documento como adecuadas, típicas o preferidas pueden combinarse entre sí (excepto cuando son mutuamente excluyentes).

Modos de llevar a cabo la invención

Ejemplo 1- prueba de estabilidad

Una composición descrita en el presente documento que contiene al menos una cepa bacteriana descrita en este documento se almacena en un recipiente sellado a 25 °C o 4 °C y el recipiente se coloca en una atmósfera que tenga 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% o 95% de humedad relativa. Después de 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 1 año, 1,5 años, 2 años, 2,5 años o 3 años, al menos 50%, 60%, 70%, El 80% o el 90% de la cepa bacteriana permanecerá medido en unidades formadoras de colonias determinadas por protocolos estándar.

Ejemplo 2 - Efectos protectores sobre la isquemia cerebral en ratones

Sumario

Se probaron cinco grupos (1M, 2M, 3M, 4M y 5M) de 15-20 ratones. En el estudio solo se incluyeron animales que se comportaban normalmente. El primer día de dosificación fue el día -14. Los grupos 1M y 2M recibieron una solución de control de PBS diariamente desde el primer día de dosificación hasta la finalización. El grupo 4M recibió un control de polvo congelado seco diariamente desde el primer día de dosificación hasta la finalización. El grupo 5M recibió bacterias congeladas secas diariamente desde el primer día de dosificación hasta la terminación. Todos los tratamientos se administraron en la segunda mitad de la jornada laboral. El orden de tratamiento de los grupos se alteró aleatoriamente en cada día de estudio. El día 1, todos los ratones fueron anestesiados. Se realizó una incisión en la línea media en el lado ventral del cuello para exponer las arterias carótidas comunes derecha e izquierda. Un modelo de isquemia cerebral-reperfusión I/R, se indujo después en los grupos 2M, 3M, 4M y 5M mediante oclusión bilateral de la arteria carótida común (BCCAO) usando clips vasculares durante 15 minutos. Al final de cada oclusión, se retiraron los clips. El grupo 1M, el grupo de control con operación simulada, se sometió al mismo procedimiento quirúrgico, pero sin oclusión de las arterias carótidas. El grupo de 3M recibió una inyección de MK-801 como control positivo inmediatamente después de la cirugía. Para mantener el tratamiento lo más similar posible, los grupos 1M, 2M, 4M y 5M también se inyectaron con solución salina estéril inmediatamente después de la cirugía. La mitad de cada grupo terminó el día 15 y la otra mitad el día 29.

Cepa

Bacteria Blautia hydrogenotrophica depositada con el número de acceso DSM 14294.

Programa de administración

Diseño del estudio

Días -14 a 14: Dosis diaria de control de PBS (grupos 1M y 2M), control de polvo congelado seco (grupo 4M) o bacterias congeladas secas (grupo 5M).

Día 1: Modelo Isquemia cerebral-reperfusión I/R en los grupos 2M, 3M, 4M y 5M mediante cirugía; el grupo 1M (control operado de forma simulada) fue operado, pero sin oclusión de las arterias carótidas. El grupo 3M recibió MK-801, y los grupos 1M, 2M, 3M y 5M recibieron solución salina estéril, inmediatamente después de la cirugía.

Día 15: Se eliminó a la mitad de los ratones de cada grupo.

Días 15 a 28: Dosis diaria de control de PBS (grupos 1M y 2M), control de polvo congelado-seco (grupo 4M) o bacterias congeladas-secas (grupo 5M) para los ratones restantes de cada grupo.

Día 29: Terminación de los ratones restantes.

Otras variables de estudio

Se comprobó la mortalidad y la morbilidad de todos los ratones dos veces al día.

Se tomaron las mediciones del peso corporal de todos los ratones dos veces por semana.

Se recolectaron muestras de sangre (100 pL cada una) durante 2-3 horas en un orden aleatorio en tubos de heparina de litio de cada ratón desde antes del tratamiento hasta el Día -14. El día 15, se tomaron muestras de sangre de 150 pl de todos los ratones, la mitad de la cantidad se introdujo en tubos de heparina de litio y la otra mitad en tubos con EDTA. Después de sangrar, se interrumpió a la mitad de los ratones. El día 29 se aplicó el mismo procedimiento de sangrado a la segunda mitad de los ratones.

También se recolectaron gránulos fecales en tres momentos: Día -14, Día 15 y Día 29. Cada toma se llevó a cabo en un ambiente estéril (totalmente aséptico = limpiado entre animales), y cada ratón se saca de la jaula y se coloca por separado en una nueva caja estéril para la recolección individual de gránulos. Se recogieron tantos gránulos como fue posible para alcanzar un mínimo de 8o mg y preferiblemente 100 mg de material por ratón.

Prueba de pantalla invertida

Se realizó una prueba de pantalla invertida el día -2/-1 (línea de base), día 14 y día 28. En una prueba de pantalla invertida ejemplar ([58], [59]), los ratones no entrenados se colocan individualmente sobre una pantalla de malla de alambre que está montada horizontalmente sobre una varilla de metal sobre una superficie acolchada. Luego, la varilla se gira 180° para que los ratones estén en la parte inferior de la pantalla. Se registra el tiempo que tarda el ratón en caer desde la parte inferior de la pantalla a la superficie acolchada.

Una prueba de pantalla invertida puede medir el tiempo transcurrido en segundos o puede utilizar la puntuación de déficit neurológico: caída entre 1-10 seg= 1; caída entre 11-25 segundos = 2; caída entre 26-60 segundos = 3; caída entre 61-90 segundos = 4; caída después de 90 segundos = 5.

Prueba de reconocimiento social

Se realizó una prueba de Reconocimiento Social el día -2/-1 (línea de base), día 14 y día 28. En una prueba de reconocimiento social ejemplar (60), cada ratón de prueba se coloca individualmente en una jaula que es de un tamaño similar a la jaula de su casa y se deja aclimatar a la jaula durante aproximadamente 30 minutos. A continuación, se coloca un segundo ratón objetivo en la jaula con el ratón de prueba. La duración total de la investigación social, definida como olfatear y seguir de cerca ( < 2 cm de distancia de la base de la cola) del ratón objetivo se registran durante un período de 2 minutos. El tiempo dedicado a investigar el ratón objetivo en la primera prueba se denomina T1. Después, la prueba se repite una hora más tarde utilizando el mismo ratón objetivo. El tiempo dedicado a investigar el ratón objetivo en la primera prueba se denomina T2. Un ratón de prueba con un T2 menor que su T1 está demostrando reconocimiento social (es decir, el reconocimiento de un ratón objetivo familiar en la prueba repetida conduce a menos investigación y un T2 menor que T1).

Resultados

Los resultados de la prueba de pantalla invertida se muestran en la Figura 1. El eje y de la Figura 1 representa el valor de la línea de base en segundos menos el valor posterior en segundos (día 14 o 28 dependiendo del eje x). Por lo tanto, el eje y representa el cambio en el tiempo antes de caer, en relación con la línea de base. Como el eje y está restando el valor posterior del valor de la línea de base, un valor positivo del eje y es representativo de una reducción en el tiempo antes de caer (es decir, un rendimiento más bajo en la prueba) y un valor negativo del eje y es representativo de un aumento. en el tiempo antes de caer (es decir, un rendimiento mejorado en la prueba). El grupo tratado (5M) mostró una clara mejora con respecto al grupo de control con vehículo 2M, demostrando que la composición de la invención ayudó a recuperar y mejorar la función neurológica y las capacidades motoras después de la lesión cerebral inducida. Los resultados de la prueba de reconocimiento social se muestran en la Figura 2. El eje y de la Figura 2 representa T1-T2. Por lo tanto, cuanto menor sea el valor de T2 (que demuestra un mayor reconocimiento social), mayor será el valor del eje y. El día 14 y el día 28, el grupo tratado (5M) mostró el mayor reconocimiento social, demostrando que la composición de la invención ayudó a recuperar y mejoró la función neurológica y el reconocimiento social después de la lesión cerebral inducida.

Ejemplo 3 - Efectos del liofilizado bacteriano en ratas sanas productoras de SCFA

Se estudiaron los efectos de la administración crónica de un liofilizado de la cepa Blautia hydrootrophica DSM 14294 sobre la producción de SCFA en ratas HIM sanas y los resultados se muestran en la Figura 3. Se proporcionan más detalles sobre los experimentos en las descripciones de la figura. La Figura 3 muestra que la administración de BH induce un aumento significativo en acetato así como en la producción de butirato.

Ejemplo 4 - Eficacia de B. rogenotrophica estudiada en el modelo de rata humana asociada a la microbiota (rata HMA)

Compendio

Se inocularon grupos de 16 ratas libres de gérmenes (que comprendían 8 ratas en el grupo de control y 8 ratas en el grupo de tratamiento) con la microbiota fecal de un sujeto con IBS humano (ratas IBS-HM^a ). Se llevaron a cabo tres experimentos sucesivos utilizando muestras fecales de 3 pacientes con IBS diferentes. Otros dos grupos de ratas (n = 10) se inocularon con muestras fecales de sujetos sanos (n=2 asignaturas; 2 grupos de ratas HMA sanas) como control de la sensibilidad visceral. Por lo tanto, hubo 24 ratas asociadas con microbiota IBS (control), 24 ratas asociadas con microbiota IBS tratadas con Blautix y 20 ratas asociadas con microbiota sana. A continuación, se administró a la mitad de las ratas IBS-HMA durante 28 días una composición que comprendía la cepa bacteriana de B. hidrogenotrophica según la invención, mientras que la otra mitad de los animales recibió una solución de control.

Cepa

Cepa Blautia hydrogenotrophica (BH) DSM 14294.

Composición y administración

El liofilizado de BH se suspendió en una solución mineral estéril hasta una concentración de 1010 bacterias por ml. Se administraron dos ml de esta suspensión diariamente por rata IBS-HMA, mediante sonda oral, durante un período de 28 días.

La solución de control fue la solución mineral estéril que se administró diariamente (2 ml por rata) por sonda oral al grupo de control de ratas IBS-HMA.

Ratas

Se inocularon ratas Fisher macho libres de gérmenes (de 10 semanas de edad) con microbiota fecal humana de un sujeto con IBS (ratas IBS-HMA). Se inocularon dieciséis ratas con el mismo inóculo fecal humano. Se realizaron tres experimentos sucesivos con muestras fecales de tres sujetos con IBS diferentes. Se inocularon otros dos grupos de diez ratas con muestra fecal de 2 sujetos sanos (grupos de control de normo-sensibilidad).

Diseño del estudio

Día -14 - Inoculación de ratas libres de gérmenes con microbiota fecal humana.

Días 0 a 28 - Dosis diaria de liofilizado de BH (grupo de ensayo) o solución de control (grupo de control) por sonda oral Entre los días 14 y 22 - operación para implantar el electrodo en el abdomen (para ensayo de distensión) Días 22-28 -Adaptación de las ratas para evitar el estrés asociado a la prueba de distensión.

Día 28 - Ensayo de distensión y eutanasia de animales para recolectar las muestras cecales para análisis de sulfuros y ácidos grasos de cadena corta (SCFA).

Días 0, 14 y 28 - Recolección de muestras fecales para análisis microbiano: qPCR para evaluación de población de BH y otros grupos comensales de microorganismos y enumeración de grupos funcionales de microorganismos mediante medios selectivos y método estrictamente anaeróbico.

Resultados

La Figura 4 presenta los resultados del análisis de qPCR de la población B. hydrogenotrophica en muestras fecales de ratas IBS-HMA que reciben solución de control o liofilizado BH. Se observó un aumento significativo en la población de BH al final del período de administración (D 28) en ratas que recibieron el liofilizado de BH, lo que confirma la administración exitosa de BH en el colon.

La Figura 5 informa sobre el impacto de la administración de BH sobre los principales metabolitos fermentativos, ácidos grasos de cadena corta, en muestras cecales de ratas IBS-HMA. La administración de BH resultó en un aumento significativo en la concentración de acetato así como en un aumento significativo en la concentración de butirato (Figura 5B).

Ejemplo 5 - Evaluación histológica del efecto de B. hydrorogenotrophica sobre tejidos cerebrales en el modelo isquemia cerebral-reperfusión I/R en ratones

Sumario

Varios ratones fueron sometidos al modelo isquemia cerebral-reperfusión I/R como se destaca en el Ejemplo 2 anterior. Al finalizar el experimento, tanto el día 15 o el día 29, los tejidos cerebrales de los ratones se sometieron a exámenes histopatológicos. El modelo de isquemia provoca una restricción del suministro de sangre a los tejidos cerebrales lo que provoca una escasez de oxígeno y glucosa necesarios para el metabolismo celular y, por tanto, para mantener vivo el tejido. Por lo tanto, este modelo imita la patología del accidente cerebrovascular.

Con el fin de determinar si las composiciones de la invención redujeron el efecto del modelo de isquemia-reperfusión en los tejidos cerebrales, se estudió la histología de los tejidos tras la terminación del modelo de isquemia-reperfusión. Los tejidos se estudiaron para la puntuación picnótica (que evalúa el grado de necrosis y muerte celular) y para la vacuolización (que evalúa el grado de degeneración similar a la apoptosis). En consecuencia, estos son marcadores clave del número de células que han entrado en procesos de apoptosis o necrosis, es decir, el número de células que están muriendo. Esto ocurre después de un accidente cerebrovascular y un accidente cerebrovascular experimental, debido al daño celular, después de la falta de sangre/oxígeno. Cuanto más elevados son estos parámetros, más daño induce el accidente cerebrovascular. Cuanto más se reducen estos parámetros, mejor es la composición de la invención para prevenir daños durante el accidente cerebrovascular o ayudar a la recuperación de un accidente cerebrovascular.

Cepa

Bacteria Blautia hydrogenotrophica depositada con el número de acceso DSM 14294.

Diseño y protocolo del estudio

El modelo de isquemia-reperfusión se realizó como en el Ejemplo 2. A continuación se muestra el número de animales llevados al examen histológico en cada grupo de estudio.

Preparación de tejidos para análisis histológico

Al finalizar, los animales fueron sacrificados por asfixia con CO2. Cuando fue posible, la mitad de los animales se sacrificó el día 15 y la otra mitad se sacrificó el día 29. Después de la perfusión sólo con solución salina, se recogieron íleon, ciego y colon de cada ratón, se transfirieron a tubos estériles marcados separados y se almacenaron a -80 °C. También se extrajeron cerebros después de la perfusión de solución salina. El hemisferio derecho de cada cerebro se fijó con paraformaldehído al 2,5% y se almacenó a 2-8°C. El hemisferio izquierdo de cada cerebro se almacenó a -80 °C.

Las secciones del hemisferio derecho de todos los animales por grupo se cargaron en portaobjetos seguido de un examen histológico. Los tejidos se recortaron, se incluyeron en parafina, se seccionaron con un grosor de aproximadamente 5 micrones y se tiñeron con hematoxilina & Eosina (H & E) (así como con reactivos TUNEL) utilizando protocolos estandarizados. Los portaobjetos se examinaron con un microscopio óptico. Las fotografías se tomaron con un microscopio (Olympus BX60) con aumentos de X10, X20 y X40. La cámara utilizada fue la Olympus DP-73.

Protocolo de evaluación histológica

Se contaron los números de cariopy-knosis y células apoptóticas, y se calcularon los valores medios. El recuento de neuronas se realizó manualmente en el hemisferio derecho del hipocampo de los ratones. Se evaluaron diez campos de aumentos X20 para la puntuación de picnosis y vacuolización como sigue.

Picnosis y vacuolización, puntuaciones semicuantitativas:

1. Grado 0 = sin células afectadas

2. Grado 1 = hasta 10 células afectadas

3. Grado 2 = >10 y < 20 células afectadas

4. Grado 3 = >20 y < 30 células afectadas

5. Grado 4 = >30 y < 40 células afectadas

6. Grado 5 = >40 y < 50 células afectadas

7. Grado 6 = > 50 células afectadas

Se determinó una puntuación para cada campo de aumento X20 para cada ratón en un grupo de muestra dado. A continuación, se promediaron las puntuaciones de cada grupo de muestra para obtener el valor medio mostrado en los gráficos de los resultados (Figuras 6A y 6B).

Resultados

Picnosis

La Figura 6A muestra la puntuación de picnosis semicuantativa después de la tinción H & E histológica. Como era de esperar, los ratones de control negativo PBS (2M) sometidos a la prueba de isquemia-reperfusión mostraron un aumento significativo en el número de celulas necróticas y/o muertas en comparación con el control negativo simulado (1 M, es decir, ratones no sometidos a la prueba de isquemia-reperfusión y que mostraron una puntuación por debajo de Grado 1). Además, los ratones a los que se administró el control positivo MK-801 (3M) mostraron una puntuación de picnosis reducida, indicativa de un número reducido de células necróticas. Sorprendentemente, los ratones a los que se les administró la composición de la invención (5M) mostraron una puntuación de picnosis aún más reducida, que también se redujo significativamente en comparación con el grupo de control negativo de PBS (2M) y se redujo en relación con los ratones a los que se les administró el polvo congelado-seco (4M). Por consiguiente, los ratones a los que se administró la composición de la invención muestran una tendencia significativa en la reducción de la necrosis tisular causada por la isquemia.

Vacuolización

La Figura 6B demuestra la puntuación semicuantativa de vacuolización después de la tinción H & E histológica. Nuevamente, como se esperaba, los ratones de control negativo PBS (2M) sometidos a la prueba de isquemiareperfusión mostraron un aumento significativo en el número de células necróticas y/o células muertas en comparación con el control negativo simulado (1M), que mostró una puntuación justo por encima de Grado 0. Contrariamente a las observaciones para la puntuación de picnosis, la administración del control positivo (3M) no redujo la puntuación de vacuolización, lo que indica que MK-801 no logra reducir la cantidad de muerte celular provocada por la apoptosis. Sin embargo, los ratones a los que se administró la composición de la invención (5M) demostraron una reducción significativa en la puntuación de vacuolización, más baja que todos los demás grupos. Por consiguiente, las composiciones de la presente invención reducen la cantidad de muerte celular apoptótica causada por isquemia.

Histología representativa

La Figura 6C proporciona fotografías representativas de los portaobjetos teñidos H & E de cada uno de los animales de ensayo. Estas imágenes se usaron para preparar las puntuaciones semicuantitativas discutidas anteriormente. El grupo 5M (al que se administró la composición de la presente invención) muestra una mayor densidad y número de células, y vacuolización reducida, en comparación con el grupo 4M (control de polvo congelado-seco) y son más similares al control positivo MK-801. De hecho, los ratones a los que se administró la composición bacteriana de la presente invención muestran una histología tisular muy mejorada en comparación con el control negativo del modelo de ratones con isquemia (2M).

Conclusiones

La cepa B. hydrogenotrophica de la presente invención mejora significativamente la histología de tejido cerebral de ratones sometidos a la prueba de isquemia-reperfusión en comparación con los dos controles negativos. En consonancia con esto, la composición bacteriana redujo el número de células necróticas y muertas, además de reducir el número de células en apoptosis (vacuolización). Aunque el polvo congelado-seco también provocó una ligera reducción en las puntuaciones de picnosis y vacuolización, esta reducción no se observó en el mismo grado en este grupo experimental que en el grupo al que se administró la composición bacteriana de la invención. Una posible razón de la mejor histología en el control liofilizado es que el polcongelado-seco contiene azúcares que podrían tener un efecto sobre la recuperación de células sometidas a un nivel reducido de oxígeno y metabolitos (debido a la prueba de isquemia-reperfusión). No obstante, la cepa bacteriana de la presente invención muestra una histología claramente mejorada tanto en las puntuaciones de picnosis como de vacuolización en comparación con el control negativo de polvo congelado-seco. En consecuencia, esta cepa bacteriana demuestra una capacidad para prevenir la muerte celular en los tejidos cerebrales (por necrosis o apoptosis) y/o ayuda en la recuperación del tejido cerebral después de un daño inducido por isquemia.

Secuencias

SEQ ID NO: 1 (gen ARN ribosomal 16S GAM6-1 cepa Blautia stercoris, secuencia parcial - HM626177)

1 tgcaagtcga gcgaagcgct tacgacagaa ccttcggggg aagatgtaag ggactgagcg

61 gcggacgggt gagtaacgcg tgggtaacct gcctcataca gggggataac agttggaaac

121 ggctgctaat accgcataag cgcacggtat cgcatgatac agtgtgaaaa actccggtgg

181 tatgagatgg acccgcgtct gattagetag ttggaggggt aacggcccac caaggcgacg

241 ateagtagee ggcctgagag ggtgaacggc cacattggga ctgagacacg gcccagactc

301 ctacgggagg cagcagtggg gaatattgca caatggggga aaccctgatg cagcgacgcc

361 gcgtgaagga agaagtatct cggtatgtaa acttctatca gcagggaaga aaatgacggt

421 acctgactaa gaagccccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggggca

481 agcgttatcc ggatttactg ggtgtaaagg gagcgtagac ggaagagcaa gtctgatgtg

541 aaaggctggg gcttaacccc aggactgcat tggaaactgt ttttcttgag tgccggagag

601 gtaagcggaa ttcctagtgt agcggtgaaa tgcgtagata ttaggaggaa caccagtggc

661 gaaggcggct tactggacgg taactgacgt tgaggctcga aagcgtgggg agcaaacagg

721 attagatacc ctggtagtcc acgccgtaaa cgatgaatac taggtgttgg ggagcaaagc

781 tcttcggtgc cgcagcaaac gcaataagta ttccacctgg ggagtacgtt cgcaagaatg

841 aaactcaaag gaattgacgg ggacccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag

901 caacgcgaag aaccttacca agtcttgaca tcgatctgac cggttcgtaa tggaaccttt

961 ccttcgggac agagaagaca ggtggtgcat ggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt

1021 gggttaagtc ccgcaacgag cgcaacccct atcctcagta gccagcaggt gaagctgggc

1081 actctgtgga gactgccagggataacctgg aggaaggcgg ggacgacgtcaaatcatcat

1141 gccccttatg atttgggcta cacacgtgct acaatggcgt aaacaaagggaagcgagccc

1201 gcgagggggagcaaatcccaaaaataacgtcccagttcgg actgcagtct gcaactcgac

1261 tgcacgaagctggaatcgct agtaatcgcg aatcagaatg tcgcggtgaa tacgttcccg

1321 ggtcttgtac acaccgcccgtcacaccatg ggagtcagta acgcccgaagte

SEQ ID NO: 2 (gen ARN ribosomal 16S WAL 14507 cepa Blautia wexlerae, secuencia parcial - EF036467)

1 caagtcgaac gggaattant ttattgaaac ttcggtcgat ttaatttaat tctagtggcg 61 gacgggtgag taacgcgtgg gtaacctgcc ttatacaggg ggataacagt cagaaatggc 121 tgctaatacc gcataagcgc acagagctgc atggctcagt gtgaaaaact ccggtggtat 181 aagatggacc cgcgttggat tagcttgttg gtggggtaac ggcccaccaa ggcgacgatc 241 catagccggc ctgagagggt gaacggccac attgggactg agacacggcc cagactccta 301 cgggaggcag cagtggggaa tattgcacaa tgggggaaac cctgatgcag cgacgccgcg 361 tgaaggaaga agtatctcgg tatgtaaact tctatcagca gggaagatag tgacggtacc 421 tgactaagaa gccccggcta actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta gggggcaagc 481 gttatccgga tttactgggt gtaaagggag cgtagacggt gtggcaagtc tgatgtgaaa 541 ggcatgggct caacctgtgg actgcattgg aaactgtcat acttgagtgc cggaggggta 601 agcggaattc ctagtgtagc ggtgaaatgc gtagatatta ggaggaacac cagtggcgaa 661 ggcggcttac tggacggtaa ctgacgttga ggctcgaaag cgtggggagc aaacaggatt 721 agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgaataacta ggtgtcgggt ggcaaagcca 781 ttcggtgccg tcgcaaacgc agtaagtatt ccacctgggg agtacgttcg caagaatgaa 841 actcaaagga attgacgggg acccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca 901 acgcgaagaa ccttaccaag tcttgacatc cgcctgaccg atccttaacc ggatctttcc 961 ttcgggacag gcgagacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 1021 gttaagtccc gcaacgagcg caacccctat cctcagtagc cagcatttaa ggtgggcact 1081 ctggggagac tgccagggat aacctggagg aaggcgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc 1141 ccttatgatt tgggctacac acgtgctaca atggcgtaaa caaagggaag cgagattgtg 1201 agatggagca aatcccaaaa ataacgtccc agttcggact gtagtctgca acccgactac 1261 acgaagctgg aatcgctagt aatcgcggat cagaatgccg cggtgaatac gttcccgggt 1321 cttgtacaca ccgcccgtca caccatggga gtcagtaacg cccgaagtca gtgacctaac 1381 tgcaaagaag gagctgccga aggcgggacc gatgactggg gtgaagtcgt aacaaggt

SEQ ID NO:3 (secuencia rRNA 16S consenso para Blautia stercoris cepa 830)

TTTKGTCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGAAGCGCTTACGACAGAACCTT CGGGGGAAGATGTAAGGGACTGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGTAACCTGCCTCATACAGGGGGATAACA GTTGGAAACGGCTGCTAATACCGCATAAGCGCACAGTATCGCATGATACAGTGTGAAAAACTCCGGTGGTATGAGAT GGACCCGCGTCTGATTAGCTAGTTGGAGGGGTAACGGCCCACCAAGGCGACGATCAGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGA ACGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGGGAAA CCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAAGGAAGAAGTATCTCGGTATGTAAACTTCTATCAGCAGGGAAGAAAATGACGG TACCTGACTAAGAAGCCCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGGGCAAGCGTTATCCGGATTT ACTGGGTGTAAAGGGAGCGTAGACGGAAGAGCAAGTCTGATGTGAAAGGCTGGGGCTTAACCCCAGGACTGCATTGG AAACTGTTTTTCTTGAGTGCCGGAGAGGTAAGCGGAATTCCTAGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATTAGGAGGAA CACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGACGGTAACTGACGTTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGAT ACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATACTAGGTGTTGGGGAGCAAAGCTCTTCGGTGCCGCAGCAAACGCAA TAAGTATTCCACCTGGGGAGTACGTTCGCAAGAATGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAG CATGTGGTTTATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGTCTTGACATCGATCTGACCGGTTCGTAATGGAACCTT TCCTTCGGGACAGAGAAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAA CGAGCGCAACCCCTATCGTCAGTAGCCAGCAGGTAAAGCTGGGCACTCTGAGGAGACTGCCAGGGATAACCTGGAGG AAGGCGGGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGATTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGTAAACAAAGGG AAGCGAGCCCGCGAGGGGGAGCAAATCCCAAAAATAACGTCCCAGTTCGGACTGCAGTCTGCAACTCGACTGCACGA AGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGAATCAGAATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCAC ACCATGGGAGTCAGTAACGCCCGAAGTCAGTGACCCAACCTTAGGGAGGGAGCTGCCGAAGGCGGGATTGATAACTG GGGTGAAGTCTAGGGGGT

SEQ ID NO:4 (secuencia rRNA 16S consenso para Blautia wexlerae cepa MRX008) TTCATTGAGACTTCGGTGGATTTAGATTCTATTTCTAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGTAACCTGCCTTAT ACAGGGGGATAACAGTCAGAAATGGCTGCTAATACCGCATAAGCGCACAGAGCTGCATGGCTCAGTGTGAAAAACTC CGGTGGTATAAGATGGACCCGCGTTGGATTAGCTTGTTGGTGGGGTAACGGCCCACCAAGGCGACGATCCATAGCCG GCCTGAGAGGGTGAACGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTG CACAATGGGGGAAACCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAAGGAAGAAGTATCTCGGTATGTAAACTTCTATCAGCAGG GAAGATAGTGACGGTACCTGACTAAGAAGCCCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGGGCAAG CGTTATCCGGATTTACTGGGTGTAAAGGGAGCGTAGACGGTGTGGCAAGTCTGATGTGAAAGGCATGGGCTCAACCT GTGGACTGCATTGGAAACTGTCATACTTGAGTGCCGGAGGGGTAAGCGGAATTCCTAGTGTAGCGGTGAAATGCGTA GATATTAGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGACGGTAACTGACGTTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGC AAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATACTAGGTGTCNGGGGAGCATGGCTCTTCGGTG CCGTCGCAAACGCAGTAAGTATTCCACCTGGGGAGTACGTTCGCAAGAATGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCC GCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGTCTTGACATCCGCCTGACCGA TCCTTAACCGGATCTTTCCTTCGGGACAGGCGAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTT GGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATCCTCAGTAGCCAGCATTTAAGGTGGGCACTCTGGGGAGACTGCCA GGGATAACCTGGAGGAAGGCGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGATTTGGGCTACACACGTGCTACAAT GGCGTAAACAAAGGGAAGCGAGATCGTGAGATGGAGCAAATCCCAAAAATAACGTCCCAGTTCGGACTGTAGTCTGC AACCCGACTACACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGAATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTA CACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTCAGTAACGCCCGAAGTCAGTGACCTAACTGCAAAGAAGGAGCTGCCGAA

SEQ ID NO:5 (gen ARN ribosomal 16S S5a36 cepa Blautia hydrogenotrophica, secuencia parcial -X95624.1)

1 gatgaacgct ggcggcgtgc ttaacacatg caagtcgaac gaagcgatag agaacggaga

61 tttcggttga agttttctat tgactgagtg gcggacgggt gagtaacgcg tgggtaacct

121 gccctataca gggggataac agttagaaat gactgctaat accgcataag cgcacagctt

181 cgcatgaagc ggtgtgaaaa actgaggtgg tataggatgg acccgcgttg gattagctag

241 ttggtgaggt aacggcccac caaggcgacg atccatagcc ggcctgagag ggtgaacggc

301 cacattggga ctgagacacg gcccaaactc ctacgggagg cagcagtggg gaatattgca

361 caatggggga aaccctgatg cagcgacgcc gcgtgaagga agaagtatct cggtatgtaa

421 acttctatca gcagggaaga aagtgacggt acctgactaa gaagccccgg ctaattacgt

481 gccagcagcc gcggtaatac gtaaggggca agcgttatcc ggatttactg ggtgtaaagg

541 gagcgtagac ggtttggcaa gtctgatgtg aaaggcatgg gctcaacctg tggactgcat

601 tggaaactgt cagacttgag tgccggagag gcaagcggaa ttcctagtgt agcggtgaaa

661 tgcgtagata ttaggaggaa caccagtggc gaaggcggcc tgctggacgg taactgacgt

721 tgaggctcga aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc acgctgtaaa

781 cgatgaatac taggtgtcgg gtggcaaagc cattcggtgc cgcagcaaac gcaataagta

841 ttcccacctg gggagtacgt tcgcaagaat gaaactcaaa ggaattgacg gggacccgca

901 caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aaatcttgac

961 atccctctga ccgggaagta atgttccctt ttcttcggaa cagaggagac aggtggtgca

1021 tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct

1081 tattcttagt agccagcagg tagagctggg cactctaggg agactgccag ggataacctg

1141 gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat gatttgggct acacacgtgc

1201 tacaatggcg taaacaaagg gaagcgaagg ggtgacctgg agcaaatctc aaaaataacg

1261 tctcagttcg gattgtagtc tgcaactcga ctacatgaag ctggaatcgc tagtaatcgc

1321 gaatcagaat gtcgcggtga atacgttccc gggtcttgta cacaccgccc gtcacaccat

1381 gggagtcagt aacgcccgaa gtcagtgacc caaccnaaag gagggagctg ccgaaggtgg

1441 gactgataac tggggtga

REFERENCIAS

[1] Spor et al. (2011) Nat Rev Microbiol. 9(4):279-90.

[2] Eckburg et al. (2005) Science. 10;308(5728):1635-8.

[3] Tap et al. (2009) Environ Microbiol, 11(10):2574-84

[4] Macpherson et al. (2001) Microbes Infect. 3(12):1021-35

[5] Macpherson et al. (2002) Cell Mol Life Sci. 59(12):2088-96.

[6] Mazmanian et al. (2005) Cell 15;122(1):107-18.

[7] Frank et al. (2007) PNAS 104(34): 13780-5.

[8] Scanlan et al. (2006) J Clin Microbiol. 44(11):3980-8.

[9] Kang et al. (2010) Inflamm Bowel Dis. 16(12):2034-42.

[10] Machiels et al. (2013) Gut. 63(8):1275-83.

[11] Lopetuso et al. (2013), Gut Pathogens, 5: 23

[12] WO 2013/050792

[13] WO 03/046580

[14] WO 2013/008039

[15] WO 2014/167338

[16] US2016/143961

[17] Lee y Lee (2014) World J Gastroenterol. 20 (27): 8886-8897.

[18] WO2014/150094

[19] Sun et al. 2015 Neuroscience letters 613, 30-35

[20] Sun et al. 2016 Brain research 1642, 180-188

[21] WO 01/85187

[22] WO 2016/203218

[23] Liu et al. (2008) Int J Syst Evol Microbiol 58, 1896-1902.

[24] Bernalier et al. (1996) Arch. Microbiol. 166 (3), 176-183.

[25] Park et al. (2012) Int J Syst Evol Microbiol. 62(Pt 4):776-9.

[26] Masco et al. (2003) Systematic and Applied Microbiology, 26:557-563.

[27] Srutková et al. (2011) J. Microbiol. Methods, 87(1): 10-6.

[28] Psaty et al. (2003) JAMA, 289(19):2534-44.

[29] Lancet. (1995) 346(8991-8992): 1647-53.

[30] Li et al. (2013) Neuroscience, 252:346-358.

[31] Zhao et al. (2008) Brain Research 1229:224-232.

[32] Park et al. (2016) J. Neuroinflammation 13:300.

[33] Sun et al. (2015) BioMed Res. Int. Article ID.

[34] Bourassa et al. (2016) Neurosci. Lett. 625:56-63.

[35] Chuang et al. (2009) Trends Neurosci. 32 (11):591-601

[36] Fischer et al. (2007) Nature 447(7141):178-182

[37] Miyamoto-Shinohara et al. (2008) J. Gen. Appl. Microbiol., 54, 9-24.

[38] Cryopreservation and Freeze-Drying Protocols, ed. by Day and McLellan, Humana Press.

[39] Leslie et al. (1995) Appl. Environ. Microbiol. 61, 3592-3597.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende una cepa bacteriana del género Blautia, para su uso en un método de tratamiento de lesiones cerebrales.

2. La composición para su uso según la reivindicación 1, en donde la lesión cerebral es un accidente cerebrovascular.

3. La composición para su uso según la reivindicación 2, en donde el accidente cerebrovascular es:

(a) isquemia cerebral;

(b) isquemia cerebral focal;

(c) accidente cerebrovascular isquémico; o

(d) accidente cerebrovascular hemorrágico.

4. La composición para su uso según cualquier reivindicación precedente, en donde la composición es para su uso en el tratamiento de una lesión cerebral en un sujeto diagnosticado con riesgo de accidente cerebrovascular.

5. La composición para su uso según la reivindicación 4, en donde el sujeto tiene al menos un factor de riesgo de accidente cerebrovascular.

6. La composición para su uso según la reivindicación 5, en donde el al menos un factor de riesgo es hipertensión arterial o diabetes.

7. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en donde el sujeto ha sufrido al menos un ataque isquémico transitorio.

8. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la cepa bacteriana es:

(a) de Blautia hydrogenotrophica;

(b) de Blautia stercoris; o

(c) de Blautia wexlerae.

9. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde la cepa bacteriana tiene una secuencia de rRNA 16s que es:

(a) al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntica a la secuencia de rRNA 16s de una cepa bacteriana de Blautia hydrogenotrophica, opcionalmente en donde la cepa bacteriana tiene una secuencia de rRNA 16s que es al menos 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a SEQ ID NO:5 o que tiene la secuencia de rRNA 16s de SEQ ID NO:5;

(b) al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a la secuencia de rRNA 16s de una cepa bacteriana de Blautia stercoris; o

(c) at least 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% or 99,9% identical to the 16s rRNA sequence of a bacterial strain of Blautia wexlerae.

10. La composición para su uso según la reivindicación 1, donde la composición comprende:

(a) una cepa bacteriana de la especie Blautia hydrogenotrophica, para su uso en un método de tratamiento de lesiones cerebrales;

(b) una cepa bacteriana de la especie Blautia stercoris, para su uso en un método de tratamiento de lesiones cerebrales; o

(c) una cepa bacteriana de la especie Blautia wexlerae, para su uso en un método de tratamiento de lesiones cerebrales.

11. La composición para su uso según cualquier reivindicación anterior, en donde:

(a) la composición es para administración oral;

(b) la composición comprende uno o más excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables;

(c) la cepa bacteriana se liofiliza; y/o

(d) la cepa bacteriana es viable.

12. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición comprende una única cepa del género Blautia.

13. La composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende la cepa bacteriana Blautia como parte de un consorcio microbiano.

14. Un producto alimenticio que comprende la composición de cualquier reivindicación anterior, para el uso de cualquier reivindicación anterior.