JP2018503388A5 - - Google Patents
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Claims (43)
- （ａ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコースおよび１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’のベータ１，２グリコシル化が可能な第１のポリペプチドをコードする第１の遺伝子、ここで、当該第１のポリペプチドは、配列番号１１に示されたアミノ酸配列に対して９０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）キメラポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該キメラポリペプチドは、配列番号１７または１８に示されたアミノ酸配列に対して７０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ステビオールまたはステビオールグリコシドをそのＣ−１３ヒドロキシル基でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号７に示されたアミノ酸配列に対して５５％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；および／または
（ｄ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコースおよび１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’のベータ１，３グリコシル化が可能なポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号９に示されたアミノ酸配列に対して５０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
を含む、細胞培養物においてステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を生産することが可能な組み換え宿主細胞であって、
ここで、少なくとも１つの遺伝子は組み換え遺伝子である、
前記組み換え宿主細胞。 - ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコースおよび１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’のベータ１，２グリコシル化が可能な第１のポリペプチドが、配列番号１１の残基９３、９９、１１４、１４４、１４８、１５２、１９５、１９６、１９９、２１１、２１３、２２１、２８６、３８４、４２６、４３８、または４６６の１以上のアミノ酸置換、または、Ｐ９３Ｖ、Ｓ９９Ｉ、Ｓ１１４Ｆ、Ｔ１４４Ｋ、Ｔ１４４Ｌ、Ｔ１４４Ｍ、Ａ１４８Ｋ、Ｍ１５２Ｔ、Ｌ１９５Ｇ、Ｌ１９５Ｃ、Ｌ１９５Ｓ、Ｌ１９５Ｎ、Ｌ１９５Ｖ、Ｖ１９６Ｐ、Ｋ１９９Ｃ、Ｌ２１１Ｈ、Ｌ２１１Ｍ、Ｌ２１１Ｉ、Ｌ２１１Ｃ、Ｌ２１１Ｔ、Ｌ２１３Ｅ、Ｓ２２１Ｉ、Ｖ２８６Ｃ、Ｖ２８６Ｎ、Ｖ２８６Ｓ、Ｇ３８４Ｗ、Ｇ３８４Ｋ、Ｇ３８４Ｙ、Ｅ４２６Ｇ、Ｅ４３８Ｈ、３４３８Ｍ、またはＡ４６６Ｖである配列番号１１の少なくとも１つのアミノ酸置換を有するポリペプチドを含む、請求項１に記載の組み換え宿主細胞。
- ステビオールまたはステビオールグリコシドをそのＣ−１３ヒドロキシル基でグリコシル化することが可能なポリペプチドが、配列番号７の残基２１、４８、４９、８４、８６、８７、９１、９２、９５、１２２、または３３４の１以上のアミノ酸置換、または、Ｑ２１Ｌ、Ｑ２１Ｔ、Ｑ２１Ｖ、Ｆ４８Ｓ、Ｆ４８Ｈ、Ｆ４８Ｙ、Ｆ４８Ｒ、Ｆ４８Ｑ、Ｆ４８Ｗ、Ｆ４８Ｔ、Ｉ４９Ｖ、Ｓ８４Ｇ、Ｓ８４Ａ、Ｓ８４Ｔ、Ｓ８４Ｃ、Ｓ８４Ｐ、Ｓ８４Ｎ、Ｓ８４Ｖ、Ｐ８６Ｒ、Ｐ８６Ｇ、Ｉ８７Ｈ、Ｉ８７Ｐ、Ｉ８７Ｍ、Ｉ８７Ｙ、Ｌ９１Ｋ、Ｌ９１Ｒ、Ｌ９１Ｔ、Ｌ９２Ｆ、Ｌ９２Ｉ、Ｌ９２Ｍ、Ｉ９５Ｋ、Ｆ１２２Ｓ、Ｌ３３４Ｓ、またはＬ３３４Ｍである配列番号７の少なくとも１つのアミノ酸置換を有するポリペプチドを含む、請求項１または２に記載の組み換え宿主細胞。
- ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコースおよび１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’のベータ１，３グリコシル化が可能なポリペプチドが、配列番号９の残基２３、２６、５５、１４６、２５７、２８３、および３３７の１以上のアミノ酸置換、または、Ｑ２３Ｈ、Ｉ２６Ｗ、Ｔ１４６Ｇ、Ｈ１５５Ｌ、Ｌ２５７Ｇ、Ｓ２５３Ｗ、Ｔ２８４Ｇ、Ｓ２８３Ｎ、Ｋ３３７Ｐ、またはＴ５５Ｋである配列番号９の少なくとも１つのアミノ酸置換を有するポリペプチドを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。
- （ａ）ファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）およびイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）からゲラニルゲラニルピロリン酸（ＧＧＰＰ）を合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、または１１６のいずれか１つに示されたアミノ酸配列に対して７０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）ＧＧＰＰからｅｎｔ−コパリル二リン酸を合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号３４、３６、３８、４０、または４２のいずれか１つに示されたアミノ酸配列に対して７０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ｅｎｔ−コパリル二リン酸からｅｎｔ−カウレンを合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号４４、４６、４８、５０、または５２のいずれか１つに示されたアミノ酸配列に対して７０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｄ）ｅｎｔ−カウレンからｅｎｔ−カウレン酸を合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号６０、６２、６６、６８、７０、７２、７４、７６、または１１７のいずれか１つに示されたアミノ酸配列に対して７０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｅ）チトクロムＰ４５０複合体を還元することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２のいずれか１つに示されたアミノ酸配列に対して７０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；および
（ｆ）ｅｎｔ−カウレン酸からステビオールを合成することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号９４、９７、１００−１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、または１１４のいずれか１つに示されたアミノ酸配列に対して７０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；および／または
（ｇ）ステビオールまたはステビオールグリコシドをそのＣ−１９カルボキシル基でグリコシル化することが可能なポリペプチドをコードする遺伝子、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号４に示されたアミノ酸配列に対して５５％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；および／または
（ｈ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコースおよび１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’のベータ１，２グリコシル化が可能な第２のポリペプチドをコードする第２の遺伝子、ここで、当該第２のポリペプチドは、配列番号１６に示されたアミノ酸配列に対して６５％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
ここで、少なくとも１つの遺伝子が組み換え遺伝子である、
をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。 - 細胞培養物が、
（ａ）組み換え宿主細胞によって生産された、ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物、
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、および／またはＮ−アセチルグルコサミン；および
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、酵母窒素原礎培地（ＹＮＢ）、および／またはアミノ酸を含む補助栄養
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。 - 組み換え宿主が、植物細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、真菌細胞、藻類細胞、または細菌細胞である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。
- 細菌細胞が、エスケリキア（Escherichia）細菌細胞、ラクトバシラス（Lactobacillus）細菌細胞、ラクトコッカス（Lactococcus）細菌細胞、コルネバクテリウム（Cornebacterium）細菌細胞、アセトバクター（Acetobacter）細菌細胞、アシネトバクター（Acinetobacter）細菌細胞、またはシュードモナス（Pseudomonas）細菌細胞である、請求項７に記載の組み換え宿主細胞。
- 真菌細胞が酵母細胞を含む、請求項７に記載の組み換え宿主細胞。
- 酵母細胞が、サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、ヤロウイア・リポリティカ（Yarrowia lipolytica）、カンジダ・グラブラタ（Candida glabrata）、アシュビア・ゴシピ（Ashbya gossypii）、シバリンドネラ・ジャディニ（Cyberlindnera jadinii）、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、クルイヴェロミセス・ラクティス（Kluyveromyces lactis）、ハンセヌラ・ポリモルファ（Hansenula polymorpha）、カンジダ・ボイジニ（Candida boidinii）、アークスラ・アデニニボランス（Arxula adeninivorans）、キサントフィロミセス・デンドロラス（Xanthophyllomyces dendrorhous）、またはカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）種からの細胞である、請求項９に記載の組み換え宿主細胞。
- 酵母細胞がサッカロミセス属（Saccharomycete）である、請求項１０に記載の組み換え宿主細胞。
- 酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエ種からの細胞である、請求項１１に記載の組み換え宿主細胞。
- 組み換え宿主細胞がヤロウイア・リポリティカ細胞である、請求項１に記載の組み換え宿主細胞。
- 遺伝子が発現される条件下で請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞を細胞培養物において培養することを含む、ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を細胞培養物において生産する方法であって、ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物が組み換え宿主細胞によって生産される、前記方法。
- 遺伝子が恒常的に発現される、請求項１４に記載の方法。
- 遺伝子の発現が誘導される、請求項１４に記載の方法。
- （ａ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコースおよび１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’のベータ１，２グリコシル化が可能な第１のポリペプチド、ここで、当該第１のポリペプチドは、配列番号１１に示されたアミノ酸配列に対して９０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）キメラポリペプチド、ここで、当該キメラポリペプチドは、配列番号１７または１８に示されたアミノ酸配列に対して７０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ステビオールまたはステビオールグリコシドをそのＣ−１３ヒドロキシル基でグリコシル化することが可能なポリペプチド、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号７に示されたアミノ酸配列に対して５５％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；および／または
（ｄ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコースおよび１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’のベータ１，３グリコシル化が可能なポリペプチド、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号９に示されたアミノ酸配列に対して５０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
ここで、少なくとも１つのポリペプチドが組み換えポリペプチドである；
の１以上を使用する、組み換え宿主細胞の細胞培養物における植物由来または合成ステビオールまたはステビオールグリコシドの全細胞生物変換；および
それによって、ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を生産すること
を含む、ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を生産するための方法。 - 全細胞が請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞である、請求項１７に記載の方法。
- 全細胞方法において使用される全細胞がヤロウイア・リポリティカ細胞である、請求項１７に記載の方法。
- 組み換え宿主細胞が、ある温度で一定期間、発酵槽において成長され、ここで、当該温度および期間は、ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物の生産を促進する、請求項１４〜１９のいずれか一項に記載の方法。
- （ａ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコースおよび１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ２’のベータ１，２グリコシル化が可能な第１のポリペプチド、ここで、当該第１のポリペプチドは、配列番号１１に示されたアミノ酸配列に対して９０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｂ）キメラポリペプチド、ここで、当該キメラポリペプチドは、配列番号１７または１８に示されたアミノ酸配列に対して７０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
（ｃ）ステビオールまたはステビオールグリコシドをそのＣ−１３ヒドロキシル基でグリコシル化することが可能なポリペプチド、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号７に示されたアミノ酸配列に対して５５％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；および／または
（ｄ）ステビオールグリコシドの１３−Ｏ−グルコース、１９−Ｏ−グルコース、または１３−Ｏ−グルコースおよび１９−Ｏ−グルコースの両方のＣ３’のベータ１，３グリコシル化が可能なポリペプチド、ここで、当該ポリペプチドは、配列番号９に示されたアミノ酸配列に対して５０％以上の配列同一性を有するポリペプチドを含む；
および植物由来または合成ステビオールまたはステビオールグリコシド
を反応混合物に添加すること；
ここで、少なくとも１つのポリペプチドが組み換えポリペプチドである；および
反応混合物においてステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を生産すること
を含む、ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を生産するためのin vitroの方法。 - ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を単独または組み合わせて細胞培養物または反応混合物から単離することをさらに含む、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の方法。
- 単離工程が、
細胞培養物または反応混合物の固相から細胞培養物または反応混合物の液相を分離して、生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を含む上清を得ること、および
（ａ）上清を１以上の吸着樹脂と接触させて、少なくとも一部の生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を得ること；または
（ｂ）上清を１以上のイオン交換または逆相クロマトグラフィーカラムと接触させて、少なくとも一部の生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を得ること；または
（ｃ）生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を結晶化または抽出すること；
それによって生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を単離すること
を含む、請求項２２に記載の方法。 - ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を単独または組み合わせて細胞培養物または反応混合物から回収することをさらに含む、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の方法。
- 回収されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物またはその組み合わせが、ステビア植物のステビオールグリコシド組成物に対して、ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物について濃縮され、および、植物由来のステビア抽出物から得られたステビオールグリコシド組成物に対して低減されたレベルのステビア植物由来成分を有する、請求項２４に記載の方法。
- 細胞培養物が、
（ａ）組み換え宿主細胞によって生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物、
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、および／またはＮ−アセチルグルコサミン；および
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、ＹＮＢ、および／またはアミノ酸を含む補助栄養
を含む、請求項１４〜２０のいずれか一項に記載の方法。 - 反応混合物が、
（ａ）反応混合物において生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物；
（ｂ）ポリペプチド；
（ｃ）ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、および／またはＮ−アセチルグルコサミン；および／または
（ｄ）反応バッファーおよび／または塩
を含む請求項２１に記載の方法。 - 組み換え宿主細胞が、植物細胞、哺乳動物細胞、昆虫細胞、真菌細胞、藻類細胞、または細菌細胞である、請求項１４〜２０のいずれか一項に記載の方法。
- 細菌細胞が、エスケリキア細菌細胞、ラクトバシラス細菌細胞、ラクトコッカス細菌細胞、コルネバクテリウム細菌細胞、アセトバクター細菌細胞、アシネトバクター細菌細胞、またはシュードモナス細菌細胞を含む、請求項２８に記載の方法。
- 真菌細胞が酵母細胞を含む、請求項２８に記載の方法。
- 酵母細胞が、サッカロミセス・セレビシエ、シゾサッカロミセス・ポンベ、ヤロウイア・リポリティカ、カンジダ・グラブラタ、アシュビア・ゴシピ、シバリンドネラ・ジャディニ、ピキア・パストリス、クルイヴェロミセス・ラクティス、ハンセヌラ・ポリモルファ、カンジダ・ボイジニ、アークスラ・アデニニボランス、キサントフィロミセス・デンドロラス、またはカンジダ・アルビカンス種からの細胞である、請求項３０に記載の方法。
- 酵母細胞がサッカロミセス属である、請求項３０に記載の方法。
- 酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエ種からの細胞である、請求項３２に記載の方法。
- 組み換え宿主細胞がヤロウイア・リポリティカ細胞である、請求項１４に記載の方法。
- 請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞であって、
（ａ）ステビオールグリコシドが、ステビオール−１３−Ｏ−グルコシド（１３−ＳＭＧ）、ステビオール−１９−Ｏ−グルコシド（１９−ＳＭＧ）、ステビオール−１，２−ビオシド、ステビオール−１，３−ビオシド、１，２−ステビオシド、１，３−ステビオシド、ルブソシド、レバウジオシドＡ（ＲｅｂＡ）、レバウジオシドＢ（ＲｅｂＢ）、レバウジオシドＤ（ＲｅｂＤ）、レバウジオシドＥ（ＲｅｂＥ）、レバウジオシドＭ（ＲｅｂＭ）、ジグリコシル化ステビオール、トリグリコシル化ステビオール、テトラグリコシル化ステビオール、ペンタグリコシル化ステビオール、ヘキサグリコシル化ステビオール、ヘプタグリコシル化ステビオール、および／またはその異性体を含む；
（ｂ）グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物が、ジグリコシル化ｅｎｔ−カウレノール、トリグリコシル化ｅｎｔ−カウレノール、および／またはその異性体を含む；および／または
（ｃ）グリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物が、ジグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸、トリグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸、および／またはその異性体を含む、
前記組み換え宿主細胞。 - 請求項３５に記載の組み換え宿主細胞であって、
（ａ）ジグリコシル化ステビオールが、表１の化合物２．２３を含む；
（ｂ）トリグリコシル化ステビオールが、表１の化合物３．１および／または化合物３．３４を含む；
（ｃ）テトラグリコシル化ステビオールが、表１の化合物４．２６および／または化合物４．３３を含む；
（ｄ）ペンタグリコシル化ステビオールが、表１の化合物５．２２、化合物５．２４、および／または化合物５．２５を含む；
（ｅ）ヘキサグリコシル化ステビオールが、表１の化合物６．１および／または化合物６．２３を含む；
（ｆ）ヘプタグリコシル化ステビオールが、表１の化合物７．２、化合物７．５、および／または化合物７．１３を含む；
（ｇ）グリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物が、表１の化合物ＫＡ３．１、化合物ＫＡ３．２、および／または化合物ＫＡ２．７を含む；および／または
（ｈ）グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物が、表１の化合物ＫＬ３．６とともに共溶出される化合物ＫＬ２．８および／または化合物ＫＬ３．１を含む、
前記組み換え宿主細胞。 - 請求項３６に記載の組み換え宿主細胞であって、
（ａ）化合物４．２６が、構造：
（ｂ）化合物５．２２が、構造：
（ｃ）化合物６．１が、構造：
（ｄ）化合物７．２が、構造：
（ｅ）化合物７．５が、構造：
（ｆ）化合物ＫＡ３．１が、構造：
（ｇ）化合物ＫＡ３．２が、構造：
（ｈ）化合物ＫＬ３．１が、構造：
前記組み換え宿主細胞。 - 組み換え宿主細胞によって生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物が、ステビア植物からのステビオールグリコシド組成物とは異なる相対量で存在し、および、植物由来のステビア抽出物に対して低減されたレベルのステビア植物由来成分を有する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞によって生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物。
- 細胞培養物が、
（ａ）組み換え宿主細胞によって生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物；
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、および／またはＮ−アセチルグルコサミン；および
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、ＹＮＢ、および／またはアミノ酸を含む補助栄養；
をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞を含む、細胞培養物であって、
ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物が、細胞培養物の少なくとも１ｍｇ／リットルの濃度で存在する；
細胞培養物が、ステビア植物からのステビオールグリコシド組成物に対して、ステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物について濃縮され、および、植物由来のステビア抽出物に対して低減されたレベルのステビア植物由来成分を有する、
前記細胞培養物。 - （ａ）組み換え宿主細胞によって生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物；
（ｂ）グルコース、フルクトース、スクロース、キシロース、ラムノース、ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−ラムノース、ＵＤＰ−キシロース、および／またはＮ−アセチルグルコサミン；および
（ｃ）微量金属、ビタミン、塩、酵母窒素原礎培地、ＹＮＢ、および／またはアミノ酸を含む補助栄養；
を含む、細胞培養物において成長させた請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞からの細胞ライセートであって、
組み換え宿主細胞によって生産されたステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物が、細胞培養物の少なくとも１ｍｇ／リットルの濃度で存在する、
前記細胞ライセート。 - 請求項３８に記載のステビオールグリコシド、グリコシル化ｅｎｔ−カウレノール化合物、および／またはグリコシル化ｅｎｔ−カウレン酸化合物を含む、甘味料組成物。
- 請求項４１に記載の甘味料組成物を含む、食品。
- 請求項４１に記載の甘味料組成物を含む、飲料または飲料濃縮物。
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