CN112367854A - 高纯度甜菊醇糖苷 - Google Patents

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克里斯蒂娜·查汗
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Abstract

本发明描述了制备高度纯化的甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4的方法。所述方法包括利用酶制剂和重组微生物将各种起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷。所述高度纯化的甜菊醇糖苷可用作可食用和可咀嚼组合物诸如任何饮料、糖食、烘焙产品、曲奇饼和口香糖中的无热量甜味剂、风味增强剂、甜味增强剂和抑泡剂。

Description

高纯度甜菊醇糖苷
技术领域
本发明涉及用于制备包含甜菊醇糖苷的组合物(包括高度纯化的甜菊醇糖苷组合物)的方法。
序列表
创建于2018年6月8日、具有19千字节数据并与本文同时提交的标题为“PC_78PROV.txt”的文本文件据此全文以引用方式并入本申请。
背景技术
高强度甜味剂具有比蔗糖的甜味水平大很多倍的甜味水平。它们基本上是无热量的并且通常用于饮食和低卡路里产品，包括食品和饮料。高强度甜味剂不引发升糖反应，从而使得它们适合用于针对糖尿病患者和有兴趣控制其碳水化合物摄入量的其他人的产品。
甜菊醇糖苷是一类在甜叶菊(Stevia rebaudiana Bertoni)(原产于南美某些地区的菊科(Asteraceae(Compositae))的多年生灌木)叶中发现的化合物。它们的结构特征在于有单个碱，即甜菊醇，差异在于位置C13和C19处存在碳水化合物残基。它们在甜菊属(Stevia)叶中积累，构成大约10％-20％的总干重。基于干重，在甜菊属叶中发现的四种主要糖苷通常包括甜菊苷(9.1％)、莱苞迪苷A(3.8％)、莱苞迪苷C(0.6-1.0％)和杜尔可苷A(0.3％)。其他已知的甜菊醇糖苷包括莱苞迪苷B、C、D、E、F和M、甜菊双糖苷和甜茶苷。
虽然已知用于从甜叶菊制备甜菊醇糖苷的方法，但这些方法大多不适合于商业使用。
因此，仍然需要用于制备包含甜菊醇糖苷的组合物(包括高度纯化的甜菊醇糖苷组合物)的简单、高效且经济的方法。
发明内容
本发明提供了用于通过以下方式制备包含目标甜菊醇糖苷的组合物的方法：使包含有机底物的起始组合物与微生物细胞和/或酶制剂接触，从而产生包含目标甜菊醇糖苷的组合物。
起始组合物可为包含至少一个碳原子的任何有机化合物。在一个实施方案中，起始组合物选自甜菊醇糖苷、多元醇或糖醇、各种碳水化合物。
目标甜菊醇糖苷可为任何甜菊醇糖苷。在一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、莱苞迪苷O4或合成甜菊醇糖苷。
在一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N2。
在一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷O4。
在一些优选的实施方案中，使用包含一种或多种酶的酶制剂或包含一种或多种酶的微生物细胞，该一种或多种酶能够将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷。酶可位于表面上和/或细胞内。酶制剂可以以全细胞悬浮液、粗裂解物的形式或作为纯化酶提供。酶制剂可呈游离形式或者固定到由无机或有机材料制成的固相载体。
在一些实施方案中，微生物细胞包含用于将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的必要酶及其编码基因。因此，本发明还提供了用于通过以下方式制备包含目标甜菊醇糖苷的组合物的方法：使包含有机底物的起始组合物与包含能够将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的至少一种酶的微生物细胞接触，从而产生包含至少一种目标甜菊醇糖苷的介质。
将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷所需的酶包括甜菊醇生物合成酶、UDP-葡糖基转移酶(UGT)、UDP-糖基转移酶(下文称为UGlyT)和/或UDP-再循环酶。
在一个实施方案中，甜菊醇生物合成酶包括甲羟戊酸(MVA)途径酶。
在另一个实施方案中，甜菊醇生物合成酶包括非甲羟戊酸2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径(MEP/DOXP)酶。
在一个实施方案中，甜菊醇生物合成酶选自牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶、柯巴基焦磷酸合酶、贝壳杉烯合酶、贝壳杉烯氧化酶、贝壳杉烯酸13-羟化酶(KAH)、甜菊醇合成酶、脱氧木酮糖5-磷酸合酶(DXS)、D-1-脱氧木酮糖5-磷酸还原异构酶(DXR)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇合酶(CMS)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇激酶(CMK)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇2，4-环焦磷酸合酶(MCS)、l-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-焦磷酸合酶(HDS)、1-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-焦磷酸还原酶(HDR)、乙酰乙酰辅酶A硫解酶、截短HMG辅酶A还原酶、甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶、焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶、细胞色素P450还原酶等。
UDP-葡糖基转移酶可为任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇和/或甜菊醇糖苷底物以提供目标甜菊醇糖苷。
UDP-糖基转移酶可为任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊醇和/或甜菊醇糖苷底物以提供目标甜菊醇糖苷。
如下文所用，除非另外指明，否则术语“SuSy_AT”是指具有如实施例1中所述的氨基酸序列“SEQ ID 1”的蔗糖合酶，或与SEQ ID 1多肽具有实质(＞85％、＞86％、＞87％、＞88％、＞89％、＞90％、＞91％、＞92％、＞93％、＞94％、＞95％、＞96％，＞97％、＞98％、＞99％)氨基酸序列同一性的多肽，以及编码这些多肽的分离的核酸分子。
如下文所用，除非另外指明，否则术语“UGTSl2”是指具有如实施例1中所述的氨基酸序列“SEQ ID 2”的UDP-葡糖基转移酶，或与SEQ ID 2多肽具有实质(＞85％、＞86％、＞87％、＞88％、＞89％、＞90％、＞91％、＞92％、＞93％、＞94％、＞95％、＞96％，＞97％、＞98％、＞99％)氨基酸序列同一性的多肽，以及编码这些多肽的分离的核酸分子。
如下文所用，除非另外指明，否则术语“UGT76G1”是指具有如实施例1中所述的氨基酸序列“SEQ ID 3”的UDP-葡糖基转移酶，或与SEQ ID 3多肽具有实质(＞85％、＞86％、＞87％、＞88％、＞89％、＞90％、＞91％、＞92％、＞93％、＞94％、＞95％、＞96％，＞97％、＞98％、＞99％)氨基酸序列同一性的多肽，以及编码这些多肽的分离的核酸分子。
如下文所用，除非另外指明，否则术语“UGlyT91C1”是指具有如实施例1中所述的氨基酸序列“SEQ ID 4”的UDP-糖基转移酶，或与SEQ ID 4多肽具有实质(＞85％、＞86％、＞87％、＞88％、＞89％、＞90％、＞91％、＞92％、＞93％、＞94％、＞95％、＞96％，＞97％、＞98％、＞99％)氨基酸序列同一性的多肽，以及编码这些多肽的分离的核酸分子。
在一个实施方案中，在微生物细胞中产生甜菊醇生物合成酶、UDP-葡糖基转移酶和UDP-糖基转移酶。微生物细胞可为例如大肠杆菌(E.coli)、酵母菌属(Saccharomycessp.)、曲霉菌属(Aspergillus sp.)、毕赤酵母属(Pichia sp.)、芽孢杆菌属(Bacillussp.)、耶氏酵母属(Yarrowia sp.)等。在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是合成的。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶选自与这些多肽具有实质(＞85％、＞86％、＞87％、＞88％、＞89％、＞90％、＞91％、＞92％、＞93％、＞94％、＞95％、＞96％、＞97％、＞98％、＞99％)氨基酸序列同一性的UGT74G1、UGT85C2、UGT76G1、UGT91D2、UGTSl2、EUGT11和UGT，以及编码这些UGT的分离的核酸分子。
在一个实施方案中，UDP-糖基转移酶选自与这些多肽具有实质(＞85％、＞86％、＞87％、＞88％、＞89％、＞90％、＞91％、＞92％、＞93％、＞94％、＞95％、＞96％、＞97％、＞98％、＞99％)氨基酸序列同一性的UGlyT91C1和UGlyT，以及编码这些UGlyT的分离的核酸分子。
在一个实施方案中，甜菊醇生物合成酶、UGT、UGlyT、UDP-葡萄糖再循环系统和UDP-鼠李糖再循环系统存在于一种微生物(微生物细胞)中。微生物可为例如大肠杆菌、酵母菌属、曲霉菌属、毕赤酵母属、芽孢杆菌属、耶氏酵母属。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇或在C13处带有-OH官能团的任何起始甜菊醇糖苷以得到在C13处具有-O-葡萄糖β吡喃葡萄糖苷糖苷键的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇或在C19处带有-COOH官能团的任何起始甜菊醇糖苷以得到在C19处具有-COO-葡萄糖β-吡喃葡萄糖苷糖苷键的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C19处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个β1→2吡喃葡萄糖苷糖苷键的至少一个附加葡萄糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C19处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个β1→3吡喃葡萄糖苷糖苷键的至少一个附加葡萄糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C13处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个α1→2吡喃鼠李糖苷糖苷键的至少一个附加鼠李糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C13处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个β1→3吡喃葡萄糖苷糖苷键的至少一个附加葡萄糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C13处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个β1→6吡喃葡萄糖苷糖苷键的至少一个附加葡萄糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇以形成甜菊单糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇以形成甜菊单糖苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊单糖苷以形成甜菊双糖苷C。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷以形成甜菊双糖苷D。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷以形成甜菊双糖苷E。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷以形成甜茶苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷A以形成甜茶苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷A以形成甜菊双糖苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷A以形成甜菊双糖苷B。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷C以形成杜尔可苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷C以形成杜尔可苷D。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷C以形成杜尔可苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊双糖苷D以形成杜尔可苷C。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷D以形成莱苞迪苷B2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷D以形成甜菊苷G。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊双糖苷E以形成杜尔可苷D。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷E以形成莱苞迪苷B2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷E以形成甜菊苷H。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜茶苷以形成杜尔可苷A。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜茶苷以形成甜菊苷G。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜茶苷以形成甜菊苷H。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜茶苷以形成甜菊苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜茶苷以形成甜菊苷B。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷A以形成甜菊苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷A以形成甜菊苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷B以形成甜菊苷B。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷B以形成甜菊苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷C以形成莱苞迪苷C3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷C以形成莱苞迪苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷D以形成莱苞迪苷C3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷D以形成莱苞迪苷C4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷B2以形成莱苞迪苷C3。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷B2以形成莱苞迪苷A4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷A以形成莱苞迪苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷A以形成莱苞迪苷C4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷A以形成莱苞迪苷C5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷A以形成莱苞迪苷C6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊苷G以形成莱苞迪苷C。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷G以形成莱苞迪苷A4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷G以形成莱苞迪苷E4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷G以形成莱苞迪苷E6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊苷H以形成莱苞迪苷C4。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷H以形成莱苞迪苷A4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷H以形成莱苞迪苷E5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷H以形成莱苞迪苷E7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷C5。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊苷B以形成莱苞迪苷C6。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷B以形成莱苞迪苷E3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷C以形成莱苞迪苷E3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C3以形成莱苞迪苷H2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C以形成莱苞迪苷H2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C以形成莱苞迪苷K。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C以形成莱苞迪苷H4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C4以形成莱苞迪苷H2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C4以形成莱苞迪苷H3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C4以形成莱苞迪苷H5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷A4以形成莱苞迪苷H2。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷A4以形成莱苞迪苷D5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷A4以形成莱苞迪苷D6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C5以形成莱苞迪苷K。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C5以形成莱苞迪苷H3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C5以形成莱苞迪苷H6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E4以形成莱苞迪苷K。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E4以形成莱苞迪苷D5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E4以形成莱苞迪苷D7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E5以形成莱苞迪苷H3。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E5以形成莱苞迪苷D5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E5以形成莱苞迪苷D8。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C6以形成莱苞迪苷H4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C6以形成莱苞迪苷H5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C6以形成莱苞迪苷H6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E6以形成莱苞迪苷H4。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E6以形成莱苞迪苷D6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E6以形成莱苞迪苷D7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E7以形成莱苞迪苷H5。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E7以形成莱苞迪苷D6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E7以形成莱苞迪苷D8。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E3以形成莱苞迪苷H6。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E3以形成莱苞迪苷D7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E3以形成莱苞迪苷D8。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H2以形成莱苞迪苷H3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H2以形成莱苞迪苷N4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷K以形成莱苞迪苷H3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷K以形成莱苞迪苷N2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H3以形成莱苞迪苷N3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H3以形成莱苞迪苷N5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷D5以形成莱苞迪苷N3。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷D5以形成莱苞迪苷M3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H4以形成莱苞迪苷N4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H4以形成莱苞迪苷N2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H5以形成莱苞迪苷N4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H5以形成莱苞迪苷N5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷D6以形成莱苞迪苷N4。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷D6以形成莱苞迪苷M3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H6以形成莱苞迪苷N2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H6以形成莱苞迪苷N5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷D7以形成莱苞迪苷N2。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷D7以形成莱苞迪苷M3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷D8以形成莱苞迪苷N5。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷D8以形成莱苞迪苷M3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷N3以形成莱苞迪苷O4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷N4以形成莱苞迪苷O4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷N2以形成莱苞迪苷O4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷N5以形成莱苞迪苷K4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷M3以形成莱苞迪苷O4。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
任选地，本发明的方法还包括再循环UDP以提供UDP-葡萄糖。在一个实施方案中，该方法包括通过提供再循环催化剂和再循环底物来再循环UDP，使得使用催化量的UDP-葡糖基转移酶和UDP-葡萄糖进行甜菊醇和/或甜菊醇糖苷底物至目标甜菊醇糖苷的生物转换。
任选地，本发明的方法还包括再循环UDP以提供UDP-鼠李糖。在一个实施方案中，该方法包括通过提供再循环催化剂和再循环底物来再循环UDP，使得使用催化量的UDP-糖基转移酶和UDP-鼠李糖进行甜菊醇和/或甜菊醇糖苷底物至目标甜菊醇糖苷的生物转换。
在一个实施方案中，再循环催化剂是蔗糖合酶SuSy_At或与SuSy_At具有＞85％氨基酸序列同一性的蔗糖合酶。
在一个实施方案中，UDP-葡萄糖再循环催化剂的再循环底物是蔗糖。
在一个实施方案中，UDP-鼠李糖再循环催化剂的再循环底物是包含鼠李糖基残基的分子。
任选地，本发明的方法还包括使用将低聚糖或多糖用作糖供体的转糖苷酶来修饰受体目标甜菊醇糖苷分子。非限制性示例包括环糊精糖基转移酶(CGT酶)、呋喃果糖苷酶、淀粉酶、蔗糖酶、葡蔗糖酶(glucosucrase)、β-h-果糖苷酶、β-果糖苷酶、蔗糖酶、果糖转化酶、碱性转化酶、酸性转化酶、呋喃果糖苷酶。在一些实施方案中，将葡萄糖和除葡萄糖之外的糖(包括但不限于果糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖、脱氧葡萄糖、半乳糖)转移至受体目标甜菊醇糖苷。在一个实施方案中，受体甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N2。在另一个实施方案中，受体甜菊醇糖苷是莱苞迪苷O4。
任选地，本发明的方法还包括将目标甜菊醇糖苷从介质分离以提供高度纯化的目标甜菊醇糖苷组合物。可通过至少一种合适的方法诸如例如结晶、通过膜的分离、离心、提取、色谱分离或此类方法的组合来分离目标甜菊醇糖苷。
在一个实施方案中，可在微生物内产生目标甜菊醇糖苷。在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷可向外分泌到介质中。在另一个实施方案中，可连续地从介质移除释放的甜菊醇糖苷。在又一个实施方案中，在转化反应完成之后分离目标甜菊醇糖苷。
在一个实施方案中，分离产生包含基于无水大于约80重量％的目标甜菊醇糖苷的组合物，即高度纯化的甜菊醇糖苷组合物。在另一个实施方案中，分离产生包含大于约90重量％的目标甜菊醇糖苷的组合物。在具体实施方案中，该组合物包含大于约95重量％的目标甜菊醇糖苷。在其他实施方案中，该组合物包含大于约99重量％的目标甜菊醇糖苷。
目标甜菊醇糖苷可呈任何多晶型形式或无定形形式，包括水合物、溶剂化物、无水形式或它们的组合。
纯化的目标甜菊醇糖苷可以作为甜味剂、风味改良剂、具有改良特性的风味料和/或抑泡剂的用于可消费产品中。合适的消费产品包括但不限于食品、饮料、药物组合物、烟草产品、营养保健组合物、口腔卫生组合物和化妆品组合物。
上文已经相当广泛地概述了本发明的特征和技术优点，以便可以更好地理解下面对本发明的详细描述。下文将描述形成本发明的权利要求的主题的本发明的附加特征和优点。本领域的技术人员应当理解，所公开的概念和特定实施方案可容易地用作修改或设计用于实施本发明的相同目的的其他结构的基础。本领域的技术人员还应当认识到，此类等同构造并未脱离所附权利要求中阐述的本发明的实质和范围。当结合附图考虑时，从下面的描述中将更好地理解就其组织和操作方法而言被认为是本发明的特性的新颖特征以及进一步的目标和优点。然而，应当清楚地理解，提供每个附图仅是为了说明和描述的目的，并不旨在作为对本发明的限制的定义。
附图说明
图1a和图1b示出了莱苞迪苷N2的化学结构。图1c和图1d示出了莱苞迪苷O4的化学结构。图1e示出了具有糖苷配基结构的甜菊醇糖苷的化学结构。
图2a至图2l示出了从甜菊醇和各种中间甜菊醇糖苷产生莱苞迪苷N2、莱苞迪苷O4和各种甜菊醇糖苷的途径。
图3a示出了使用酶UGTSl2和UGT76G1从莱苞迪苷C生物催化产生莱苞迪苷N2以及伴随经由蔗糖合酶SuSy_At将UDP再循环至UDP-葡萄糖。图3b示出了使用酶UGTSl2和UGT76G1从莱苞迪苷C生物催化产生莱苞迪苷O4以及伴随经由蔗糖合酶SuSy_At将UDP再循环至UDP-葡萄糖。
图4示出了莱苞迪苷C的HPLC色谱图。保留时间为24.535分钟的峰对应于莱苞迪苷C。
图5示出了从莱苞迪苷C生物催化产生莱苞迪苷N2和莱苞迪苷O4的产物的HPLC色谱图。保留时间为11.317分钟和8.603分钟的峰分别对应于莱苞迪苷N2和莱苞迪苷O4。12.567分钟处的峰对应于莱苞迪苷K。
图6a示出了在通过HPLC纯化之后莱苞迪苷N2的HPLC色谱图。保留时间为10.745分钟的峰对应于莱苞迪苷N2。图6b示出了在通过HPLC纯化之后莱苞迪苷O4的HPLC色谱图。保留时间为8.185分钟的峰对应于莱苞迪苷O4。
图7a和图7b分别示出了莱苞迪苷N2和莱苞迪苷O4的1H NMR谱(500MHz，吡啶-d5)。
图8a和图8b分别示出了莱苞迪苷N2和莱苞迪苷O4的HSQC谱(500MHz，吡啶-d5)。
图9a和图9b分别示出了莱苞迪苷N2和莱苞迪苷O4的H，H COSY谱(500MHz，吡啶-d5)。
图10a和图10b分别示出了莱苞迪苷N2和莱苞迪苷O4的HMBC谱(500MHz，吡啶-d5)。
图11a和图11b分别示出了莱苞迪苷N2和莱苞迪苷O4的HSQC-TOCSY谱(500MHz，吡啶-d5)。
图12a和图12b分别示出了莱苞迪苷N2的LC色谱图和质谱。
图13a和图13b分别示出了莱苞迪苷O4的LC色谱图和质谱。
具体实施方式
本发明提供了用于通过以下方式制备包含目标甜菊醇糖苷的组合物的方法：使包含有机底物的起始组合物与微生物细胞和/或酶制剂接触，从而产生包含目标甜菊醇糖苷的组合物。
本发明的一个目标是提供用于从各种起始组合物制备目标甜菊醇糖苷的有效生物催化方法，所述目标甜菊醇糖苷具体地是甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、莱苞迪苷O4或合成甜菊醇糖苷。
如本文所用，缩写术语“reb”是指“莱苞迪苷”。这两个术语具有相同含义并且可互换使用。
如本文所用，“生物催化”或“生物催化的”是指天然或经基因工程改造的生物催化剂，诸如酶或包含一种或多种酶的细胞的使用，所述酶能够对有机化合物进行单步或多步化学转换。生物催化方法包括发酵、生物合成、生物转化和生物转换方法。分离的酶生物催化方法和全细胞生物催化方法都是本领域已知的。生物催化剂蛋白质酶可为天然存在的或重组的蛋白质。
如本文所用，术语“甜菊醇糖苷”是指甜菊醇的糖苷，包括但不限于天然存在的甜菊醇糖苷，例如甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、莱苞迪苷O4、合成甜菊醇糖苷例如酶促葡萄糖基化的甜菊醇糖苷以及它们的组合。
起始组合物
如本文所用，“起始组合物”是指含有含有至少一个碳原子的一种或多种有机化合物的任何组合物(通常为水溶液)。
在一个实施方案中，起始组合物选自甜菊醇、甜菊醇糖苷、多元醇和各种碳水化合物。
起始组合物甜菊醇糖苷选自甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3或存在于甜叶菊植物中的甜菊醇的其他糖苷、合成甜菊醇糖苷例如酶促葡萄糖基化的甜菊醇糖苷以及它们的组合。
在一个实施方案中，起始组合物是甜菊醇。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊单糖苷。
在又一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊单糖苷A。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊双糖苷B。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊双糖苷C。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊双糖苷D。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊双糖苷E。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜茶苷。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是杜尔可苷A。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是杜尔可苷C。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是杜尔可苷D。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊苷A。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊苷B。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊苷C。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊苷G。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是甜菊苷H。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷B2。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷B2。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷A4。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C3。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C4。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C5。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C6。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E3。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E4。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E5。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E6。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E7。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷D5。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷D6。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷D7。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷D8。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H2。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H3。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H4。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H5。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H6。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷K。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N2。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N3。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N4。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N5。
在另一个实施方案中，起始组合物甜菊醇糖苷是莱苞迪苷M3。
术语“多元醇”是指含有多于一个羟基基团的分子。多元醇可为分别含有2、3和4个羟基基团的二醇、三醇或四醇。多元醇还可含有多于四个羟基基团，诸如分别含有5、6或7个羟基基团的戊醇、己醇、庚醇等。另外，多元醇还可为糖醇、多元醇或聚合醇，它们是碳水化合物的还原形式，其中羰基基团(醛或酮、还原糖)已被还原为伯醇羟基或仲醇羟基。多元醇的示例包括但不限于赤藓糖醇、麦芽糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖醇、木糖醇、肌醇、异麦芽酮糖醇、丙二醇、丙三醇、苏糖醇、半乳糖醇、氢化异麦芽酮糖、还原的异麦芽低聚糖、还原的低聚木糖、还原的低聚龙胆糖、还原的麦芽糖浆、还原的葡萄糖浆、氢化淀粉水解物、聚葡糖醇和糖醇或能够被还原的任何其他碳水化合物。
术语“碳水化合物”是指被多个羟基基团取代的醛或酮化合物，具有通式(CH2O)n，其中n为3-30，以及它们的低聚物和聚合物。另外，本发明的碳水化合物可在一个或多个位置被取代或脱氧。如本文所用，碳水化合物包括未修饰的碳水化合物、碳水化合物衍生物、取代的碳水化合物和修饰的碳水化合物。如本文所用，短语“碳水化合物衍生物”、“取代的碳水化合物”和“修饰的碳水化合物”是同义的。修饰的碳水化合物意指其中至少一个原子已被添加、去除或取代或它们的组合的任何碳水化合物。因此，碳水化合物衍生物或取代的碳水化合物包括取代和未取代的单糖、二糖、低聚糖和多糖。碳水化合物衍生物或取代的碳水化合物任选地可在任何对应C-位置处脱氧，和/或可被一个或多个部分取代，所述部分诸如为氢、卤素、卤代烷基、羧基、酰基、酰氧基、氨基、酰胺基、羧基衍生物、烷氨基、二烷氨基、芳氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺基、巯基、亚胺基、磺酰基、亚氧硫基、亚磺酰基、氨磺酰基、烷氧羰基、甲酰胺基、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦基、硫酯、硫醚、肟基、肼基、氨甲酰基、二氧磷基(phospho)、膦酸基(phosphonato)或任何其他活性官能团，前提条件是该碳水化合物衍生物或取代的碳水化合物能起到改善甜味剂组合物的甜味道的作用。
可根据本发明使用的碳水化合物的示例包括但不限于塔格糖、海藻糖、半乳糖、鼠李糖、各种环糊精、环状低聚糖、各种类型的麦芽糖糊精、葡聚糖、蔗糖、葡萄糖、核酮糖、果糖、苏糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖、阿洛糖、阿卓糖、甘露糖、艾杜糖、乳糖、麦芽糖、转化糖、异海藻糖、新海藻糖、异麦芽酮糖、赤藓糖、脱氧核糖、古洛糖、艾杜糖、塔洛糖、赤藓酮糖、木酮糖、阿洛酮糖、松二糖、纤维二糖、支链淀粉、葡糖胺、甘露糖胺、岩藻糖、葡糖醛酸、葡糖酸、葡糖酸内酯、阿比可糖、半乳糖胺、甜菜低聚糖、异麦芽低聚糖(异麦芽糖、异麦芽三糖、潘糖等)、低聚木糖(木三糖、木二糖等)、木糖末端低聚糖、低聚龙胆糖(龙胆二糖、龙胆三糖、龙胆四糖等)、山梨糖、黑曲霉寡糖、帕拉金糖低聚糖、低聚果糖(蔗果三糖、蔗果四糖等)、麦芽四醇、麦芽三醇、麦芽低聚糖(麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖等)、淀粉、菊粉、菊粉低聚糖、乳果糖、蜜二糖、棉子糖、核糖、异构化液体糖诸如高果糖玉米糖浆、偶联糖和大豆低聚糖。另外，如本文所用，碳水化合物可为D或L构型。
起始组合物可为合成的或纯化的(部分或完全)、可商购获得的或制备的。
在一个实施方案中，起始组合物是丙三醇。
在另一个实施方案中，起始组合物是葡萄糖。
在另一个实施方案中，起始组合物是鼠李糖。
在再一个实施方案中，起始组合物是蔗糖。
在又一个实施方案中，起始组合物是淀粉。
在另一个实施方案中，起始组合物是麦芽糖糊精。
在又一个实施方案中，起始组合物是纤维素。
在再一个实施方案中，起始组合物是直链淀粉。
起始组合物的有机化合物用作用于产生目标甜菊醇糖苷的底物，如本文所述。
目标甜菊醇糖苷
本发明方法的目标甜菊醇糖苷可为可通过本文所公开的方法制备的任何甜菊醇糖苷。在一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷选自甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、莱苞迪苷O4或存在于甜叶菊植物中的甜菊醇的其他糖苷、合成甜菊醇糖苷例如酶促葡萄糖基化的甜菊醇糖苷以及它们的组合
在一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊单糖苷。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊单糖苷A。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊双糖苷A。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊双糖苷B。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊双糖苷C，
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊双糖苷D。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊双糖苷E。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜茶苷。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是杜尔可苷A。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是杜尔可苷C。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是杜尔可苷D。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊苷A。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊苷B。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊苷C。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊苷G。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是甜菊苷H。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷B2。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷A4。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C3。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C4。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C5。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷C6。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E3。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E4。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E5。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E6。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷E7。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷D5。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷D6。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷D7。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷D8。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H2。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H3。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H4。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H5。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷H6。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷K。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N2。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N3
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N4。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N5。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷M3。
在另一个实施方案中，目标甜菊醇糖苷是莱苞迪苷O4。
目标甜菊醇糖苷可呈任何多晶型形式或无定形形式，包括水合物、溶剂化物、无水形式或它们的组合。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊单糖苷的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊单糖苷A的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊双糖苷A的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊双糖苷B的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊双糖苷C的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊双糖苷D的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊双糖苷E的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜茶苷的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生杜尔可苷A的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生C的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生杜尔可苷D的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊苷A的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊苷B的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊苷C的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊苷G的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生甜菊苷H的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷B2的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷A4的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷C的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷C3的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷C4的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷C5的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷C6的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷E3的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷E4的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷E5的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷E6的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷E7的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷D5的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷D6的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷D7的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷D8的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷H2的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷H3的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷H4的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷H5的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷H6的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷K的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷N2的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷N3的生物催化方法
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷N4的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷N5的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷M3的生物催化方法。
在一个实施方案中，本发明是用于产生莱苞迪苷O4的生物催化方法。
在具体实施方案中，本发明提供了用于从包含莱苞迪苷C和UDP-葡萄糖的起始组合物产生莱苞迪苷N2的生物催化方法。
在另一个具体实施方案中，本发明提供了用于从包含莱苞迪苷C和UDP-葡萄糖的起始组合物产生莱苞迪苷O4的生物催化方法。
任选地，本发明的方法还包括将目标甜菊醇糖苷从介质分离以提供高度纯化的目标甜菊醇糖苷组合物。可通过任何合适的方法诸如例如结晶、通过膜的分离、离心、提取、色谱分离或此类方法的组合来分离目标甜菊醇糖苷。
在具体实施方案中，本文所述的方法产生高度纯化的目标甜菊醇糖苷组合物。如本文所用，术语“高度纯化的”是指具有基于无水(干重)大于约80重量％的目标甜菊醇糖苷的组合物。在一个实施方案中，高度纯化的目标甜菊醇糖苷组合物含有基于无水(干重)大于约90重量％的目标甜菊醇糖苷，诸如例如基于干重大于约91％、大于约92％、大于约93％、大于约94％、大于约95％、大于约96％、大于约97％、大于约98％或大于约99％目标甜菊醇糖苷含量。
在一个实施方案中，当目标甜菊醇糖苷是reb N2时，本文所述的方法提供具有基于干重大于约90重量％reb N2含量的组合物。在另一个具体实施方案中，当目标甜菊醇糖苷是reb N2时，本文所述的方法提供包含基于干重大于约95重量％reb N2含量的组合物。
在另一个实施方案中，当目标甜菊醇糖苷是reb O4时，本文所述的方法提供具有基于干重大于约90重量％reb O4含量的组合物。在另一个具体实施方案中，当目标甜菊醇糖苷是reb O4时，本文所述的方法提供包含基于干重大于约95重量％reb O4含量的组合物。
微生物和酶制剂
在本发明的一个实施方案中，微生物(微生物细胞)和/或酶制剂与含有起始组合物的介质接触以产生目标甜菊醇糖苷。
酶可以以全细胞悬浮液、粗裂解物、纯化酶或它们的组合的形式提供。在一个实施方案中，生物催化剂是能够将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的纯化酶。在另一个实施方案中，生物催化剂是包含能够将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的至少一种酶的粗裂解物。在另一个实施方案中，生物催化剂是包含能够将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的至少一种酶的全细胞悬浮液。
在另一个实施方案中，生物催化剂是包含能够将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的酶的一个或多个微生物细胞。酶可位于细胞表面上、细胞内或同时位于细胞表面上和细胞内。
用于将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的合适酶包括但不限于甜菊醇生物合成酶、UDP-葡糖基转移酶(UGT)和UDP糖基转移酶(UGlyT)。任选地，其可包括UDP再循环酶。
在一个实施方案中，甜菊醇生物合成酶包括甲羟戊酸(MVA)途径酶。
在另一个实施方案中，甜菊醇生物合成酶包括非甲羟戊酸2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径(MEP/DOXP)酶。
在一个实施方案中，甜菊醇生物合成酶选自牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶、柯巴基焦磷酸合酶、贝壳杉烯合酶、贝壳杉烯氧化酶、贝壳杉烯酸13-羟化酶(KAH)、甜菊醇合成酶、脱氧木酮糖5-磷酸合酶(DXS)、D-1-脱氧木酮糖5-磷酸还原异构酶(DXR)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇合酶(CMS)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇激酶(CMK)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇2，4-环焦磷酸合酶(MCS)、1-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-焦磷酸合酶(HDS)、1-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-焦磷酸还原酶(HDR)、乙酰乙酰辅酶A硫解酶、截短HMG辅酶A还原酶、甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶、焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶、细胞色素P450还原酶等。
UDP-葡糖基转移酶可为任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇和/或甜菊醇糖苷底物以提供目标甜菊醇糖苷。
UDP-糖基转移酶可为任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊醇和/或甜菊醇糖苷底物以提供目标甜菊醇糖苷。
在一个实施方案中，在微生物细胞中产生甜菊醇生物合成酶、UDP-葡糖基转移酶和UDP-糖基转移酶。微生物细胞可为例如大肠杆菌、酵母菌属、曲霉菌属、毕赤酵母属、芽孢杆菌属、耶氏酵母属等。在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是合成的。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶选自与这些多肽具有实质(＞85％、＞86％、＞87％、＞88％、＞89％、＞90％、＞91％、＞92％、＞93％、＞94％、＞95％、＞96％、＞97％、＞98％、＞99％)氨基酸序列同一性的UGT74G1、UGT85C2、UGT76G1、UGT91D2、UGTSl2、EUGT11和UGT，以及编码这些UGT的分离的核酸分子。
在一个实施方案中，UDP-糖基转移酶选自与这些多肽具有实质(＞85％、＞86％、＞87％、＞88％、＞89％、＞90％、＞91％、＞92％、＞93％、＞94％、＞95％、＞96％、＞97％、＞98％、＞99％)氨基酸序列同一性的UGlyT91C1和UGlyT，以及编码这些UGlyT的分离的核酸分子。
在一个实施方案中，甜菊醇生物合成酶、UGT、UGlyT、UDP-葡萄糖再循环系统和UDP-鼠李糖再循环系统存在于一种微生物(微生物细胞)中。微生物可为例如大肠杆菌、酵母菌属、曲霉菌属、毕赤酵母属、芽孢杆菌属、耶氏酵母属。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇或在C13处带有-OH官能团的任何起始甜菊醇糖苷以得到在C13处具有-O-葡萄糖β吡喃葡萄糖苷糖苷键的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇或在C19处带有-COOH官能团的任何起始甜菊醇糖苷以得到在C19处具有-COO-葡萄糖β-吡喃葡萄糖苷糖苷键的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C19处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个β1→2吡喃葡萄糖苷糖苷键的至少一个附加葡萄糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C19处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个β1→3吡喃葡萄糖苷糖苷键的至少一个附加葡萄糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C13处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个α1→2吡喃鼠李糖苷糖苷键的至少一个附加鼠李糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C13处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个β1→3吡喃葡萄糖苷糖苷键的至少一个附加葡萄糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至任何起始甜菊醇糖苷的C13处的现有葡萄糖以得到包含在新形成的糖苷键处带有至少一个β1→6吡喃葡萄糖苷糖苷键的至少一个附加葡萄糖的目标甜菊醇糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇以形成甜菊单糖苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊醇以形成甜菊单糖苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊单糖苷以形成甜菊双糖苷C。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷以形成甜菊双糖苷D。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷以形成甜菊双糖苷E。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷以形成甜茶苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷A以形成甜茶苷。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷A以形成甜菊双糖苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊单糖苷A以形成甜菊双糖苷B。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷C以形成杜尔可苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷C以形成杜尔可苷D。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷C以形成杜尔可苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊双糖苷D以形成杜尔可苷C。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷D以形成莱苞迪苷B2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷D以形成甜菊苷G。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊双糖苷E以形成杜尔可苷D。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷E以形成莱苞迪苷B2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷E以形成甜菊苷H。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜茶苷以形成杜尔可苷A。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜茶苷以形成甜菊苷G。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜茶苷以形成甜菊苷H。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜茶苷以形成甜菊苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜茶苷以形成甜菊苷B。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷A以形成甜菊苷A。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷A以形成甜菊苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷B以形成甜菊苷B。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊双糖苷B以形成甜菊苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷C以形成莱苞迪苷C3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷C以形成莱苞迪苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷D以形成莱苞迪苷C3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷D以形成莱苞迪苷C4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷B2以形成莱苞迪苷C3。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷B2以形成莱苞迪苷A4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷A以形成莱苞迪苷C。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷A以形成莱苞迪苷C4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷A以形成莱苞迪苷C5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至杜尔可苷A以形成莱苞迪苷C6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊苷G以形成莱苞迪苷C。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷G以形成莱苞迪苷A4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷G以形成莱苞迪苷E4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷G以形成莱苞迪苷E6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊苷H以形成莱苞迪苷C4。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷H以形成莱苞迪苷A4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷H以形成莱苞迪苷E5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷H以形成莱苞迪苷E7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷C5。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至甜菊苷B以形成莱苞迪苷C6。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷A以形成莱苞迪苷E7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷B以形成莱苞迪苷E3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜菊苷C以形成莱苞迪苷E3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT85C2或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT或与UGT85C2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C3以形成莱苞迪苷H2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT74G1或与UGT74G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C以形成莱苞迪苷H2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C以形成莱苞迪苷K。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C以形成莱苞迪苷H4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C4以形成莱苞迪苷H2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C4以形成莱苞迪苷H3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C4以形成莱苞迪苷H5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷A4以形成莱苞迪苷H2。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷A4以形成莱苞迪苷D5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷A4以形成莱苞迪苷D6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C5以形成莱苞迪苷K。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C5以形成莱苞迪苷H3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C5以形成莱苞迪苷H6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E4以形成莱苞迪苷K。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E4以形成莱苞迪苷D5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E4以形成莱苞迪苷D7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E5以形成莱苞迪苷H3。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E5以形成莱苞迪苷D5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E5以形成莱苞迪苷D8。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C6以形成莱苞迪苷H4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C6以形成莱苞迪苷H5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷C6以形成莱苞迪苷H6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E6以形成莱苞迪苷H4。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E6以形成莱苞迪苷D6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E6以形成莱苞迪苷D7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E7以形成莱苞迪苷H5。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E7以形成莱苞迪苷D6。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E7以形成莱苞迪苷D8。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷E3以形成莱苞迪苷H6。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E3以形成莱苞迪苷D7。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷E3以形成莱苞迪苷D8。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H2以形成莱苞迪苷N3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H2以形成莱苞迪苷N4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷K以形成莱苞迪苷N3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷K以形成莱苞迪苷N2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H3以形成莱苞迪苷N3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H3以形成莱苞迪苷N5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷D5以形成莱苞迪苷N3。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷D5以形成莱苞迪苷M3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H4以形成莱苞迪苷N4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H4以形成莱苞迪苷N2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H5以形成莱苞迪苷N4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H5以形成莱苞迪苷N5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷D6以形成莱苞迪苷N4。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷D6以形成莱苞迪苷M3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H6以形成莱苞迪苷N2。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷H6以形成莱苞迪苷N5。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷D7以形成莱苞迪苷N2。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷D7以形成莱苞迪苷M3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷D8以形成莱苞迪苷N5。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷D8以形成莱苞迪苷M3。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷N3以形成莱苞迪苷O4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷N4以形成莱苞迪苷O4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷N2以形成莱苞迪苷O4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGTSl2或与UGTSl2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在另一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是EUGT11或与EUGT11具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。在又一个具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT91D2或与UGT91D2具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是任何这样的UDP-葡糖基转移酶，其能够将至少一个葡萄糖单元添加至莱苞迪苷N5以形成莱苞迪苷K4。在具体实施方案中，UDP-葡糖基转移酶是UGT76G1或与UGT76G1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGT。
在另一个实施方案中，UDP-糖基转移酶是任何这样的UDP-糖基转移酶，其能够将至少一个鼠李糖单元添加至莱苞迪苷M3以形成莱苞迪苷O4。在具体实施方案中，UDP-糖基转移酶是UGlyT91C1或与UGlyT91C1具有＞85％氨基酸序列同一性的UGlyT。
任选地，本发明的方法还包括再循环UDP以提供UDP-葡萄糖。在一个实施方案中，该方法包括通过提供再循环催化剂和再循环底物来再循环UDP，使得使用催化量的UDP-葡糖基转移酶和UDP-葡萄糖进行甜菊醇和/或甜菊醇糖苷底物至目标甜菊醇糖苷的生物转换。UDP再循环酶可为蔗糖合酶SuSy_At或与SuSy_At具有＞85％氨基酸序列同一性的蔗糖合酶，并且再循环底物可为蔗糖。
任选地，本发明的方法还包括再循环UDP以提供UDP-鼠李糖。在一个实施方案中，该方法包括通过提供再循环催化剂和再循环底物来再循环UDP，使得使用催化量的UDP-糖基转移酶和UDP-鼠李糖进行甜菊醇和/或甜菊醇糖苷底物至目标甜菊醇糖苷的生物转换。
任选地，本发明的方法还包括使用将低聚糖或多糖用作糖供体的转糖苷酶来修饰受体目标甜菊醇糖苷分子。非限制性示例包括环糊精糖基转移酶(CGT酶)、呋喃果糖苷酶、淀粉酶、蔗糖酶、葡蔗糖酶、β-h-果糖苷酶、β-果糖苷酶、蔗糖酶、果糖转化酶、碱性转化酶、酸性转化酶、呋喃果糖苷酶。在一些实施方案中，将葡萄糖和除葡萄糖之外的糖(包括但不限于果糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖、脱氧葡萄糖、半乳糖)转移至受体目标甜菊醇糖苷。在一个实施方案中，受体甜菊醇糖苷是莱苞迪苷N2。在另一个实施方案中，受体甜菊醇糖苷是莱苞迪苷O4。
在另一个实施方案中，能够将至少一个葡萄糖单元添加至起始组合物甜菊醇糖苷的UDP-葡糖基转移酶与选自以下GenInfo标识符编号列表、优选地选自表1和表2中给出的组的UGT具有＞85％氨基酸序列同一性。
Figure BDA0002847793280000581
Figure BDA0002847793280000591
Figure BDA0002847793280000601
Figure BDA0002847793280000611
表1
Figure BDA0002847793280000612
Figure BDA0002847793280000621
Figure BDA0002847793280000631
Figure BDA0002847793280000641
表2
GI编号 登记号 起源 内参
460409128 XP.004249992.1 番茄 UGTSl
460386018 XP.004238697.1 番茄 -
460409134 XP.004249995.1 番茄 -
460410132 XP.004250485.1 番茄 UGTSl2
460410130 XP.004250484.1 番茄 -
460410128 XP.004250483.1 番茄 -
460378310 XP.004234916.1 番茄 -
209954733 BAG80557.1 宁夏枸杞(Lycium barbarum) UGTLB
209954725 BAG80553.1 宁夏枸杞 -
本发明的一个实施方案是包含酶(即能够将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的酶)的微生物细胞。因此，本发明方法的一些实施方案包括使微生物与含有起始组合物的介质接触以提供包含至少一种目标甜菊醇糖苷的介质。
微生物可为具有用于将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的必要酶的任何微生物。这些酶在微生物的基因组内编码。
合适的微生物包括但不限于大肠杆菌、酵母菌属、曲霉菌属、毕赤酵母属、芽孢杆菌属、耶氏酵母属等。
在一个实施方案中，微生物在与起始组合物接触时是游离的。
在另一个实施方案中，微生物在与起始组合物接触时是固定的。例如，可将微生物固定到由无机或有机材料制成的固相载体。适合固定微生物的固相载体的非限制性示例包括衍生纤维素或玻璃、陶瓷、金属氧化物或膜。可例如通过共价结合、吸附、交联、包埋或包囊将微生物固定到固相载体。
在再一个实施方案中，能够将起始组合物转化为目标甜菊醇糖苷的酶从微生物中分泌出来并且进入反应介质中。
任选地纯化目标甜菊醇糖苷。可通过至少一种合适的方法实现从反应介质纯化目标甜菊醇糖苷以提供高度纯化的目标甜菊醇糖苷组合物。合适的方法包括结晶、通过膜的分离、离心、提取(液相或固相)、色谱分离、HPLC(制备型或分析型)或此类方法的组合。
用途
根据本发明获得的高度纯化的目标糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、莱苞迪苷O4可“按原样”使用或与其他甜味剂、风味料、食品成分以及它们的组合进行组合使用。
风味料的非限制性示例包括但不限于酸橙、柠檬、柑橘、水果、香蕉、葡萄、梨、菠萝、芒果、浆果、苦杏仁、可乐、肉桂、糖果、棉花糖、香草以及它们的组合。
其他食品成分的非限制性示例包括但不限于酸化剂、有机酸和氨基酸、着色剂、填充剂、改性淀粉、树胶、调质剂、防腐剂、咖啡因、抗氧化剂、乳化剂、稳定剂、增稠剂、胶凝剂以及它们的组合。
根据本发明获得的高度纯化的目标糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、莱苞迪苷O4可被制备为各种多晶型形式，包括但不限于水合物、溶剂化物、无水形式、无定形形式以及它们的组合。
可将根据本发明获得的高度纯化的目标糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、莱苞迪苷O4可作为高强度天然甜味剂掺入食料、饮料、药物组合物、化妆品、口香糖、餐桌产品、谷物、乳制品、牙膏和其他口腔组合物等中。
根据本发明获得的高度纯化的目标糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、莱苞迪苷O4可用作作为唯一甜味剂的增甜化合物，或其可与至少一种天然存在的高强度甜味剂一起使用，该至少一种天然存在的高强度甜味剂诸如为莱苞迪苷A、莱苞迪苷A2、莱苞迪苷A3、莱苞迪苷AM、莱苞迪苷B、莱苞迪苷C2、莱苞迪苷D、莱苞迪苷D2、莱苞迪苷D3、莱苞迪苷D4、莱苞迪苷E、莱苞迪苷E2、莱苞迪苷F、莱苞迪苷F2、莱苞迪苷F3、莱苞迪苷G、莱苞迪苷H、莱苞迪苷I、莱苞迪苷I2、莱苞迪苷I3、莱苞迪苷J、莱苞迪苷K2、莱苞迪苷L、莱苞迪苷M、莱苞迪苷M2、莱苞迪苷N、莱苞迪苷O、莱苞迪苷O2、莱苞迪苷O3、莱苞迪苷夕、莱苞迪苷夕2、莱苞迪苷夕3、莱苞迪苷R、莱苞迪苷S、莱苞迪苷T、莱苞迪苷T1、莱苞迪苷U、莱苞迪苷U2、莱苞迪苷V、莱苞迪苷V2、莱苞迪苷W、莱苞迪苷W2、莱苞迪苷W3、莱苞迪苷Y、莱苞迪苷Z1、莱苞迪苷Z2、甜菊双糖苷、甜菊苷、甜菊苷D、甜菊苷E、甜菊苷E2、甜菊苷F、罗汉果苷、巴西甜蛋白、新橙皮苷二氢查耳酮、甘草酸及其盐、索马甜、紫苏葶、皮尔南甘素(pernandulcin)、无患子倍半萜苷、白云参苷、假秦艽苷-I、二甲基-六氢芴-二羧酸、相思子三萜苷、巴西甘草甜素、肉质雪胆皂苷、青钱柳苷、蝶卡苷、多足蕨苷A、巴西木素、贺兰甜精、菲络杜辛、菝葜苷、根皮苷、三叶苷、二氢黄酮醇、二氢槲皮素-3-乙酸酯、新落新妇苷、反式肉桂醛、莫那甜及其盐、落蕨素A、苏木精、莫奈林、欧亚水龙骨甜素、蝶卡苷A、蝶卡苷B、马槟榔甜蛋白、倍他丁(pentadin)、神秘果蛋白、仙茅甜蛋白、新仙茅甜蛋白(neoculin)、绿原酸、洋蓟酸、罗汉果甜味剂、罗汉果苷V、赛门苷以及它们的组合。
在具体实施方案中，甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可用于包含选自以下的化合物的甜味剂组合物中：
莱苞迪苷A、莱苞迪苷A2、莱苞迪苷A3、莱苞迪苷AM、莱苞迪苷B、莱苞迪苷C2、莱苞迪苷D、莱苞迪苷D2、莱苞迪苷D3、莱苞迪苷D4、莱苞迪苷E、莱苞迪苷E2、莱苞迪苷F、莱苞迪苷F2、莱苞迪苷F3、莱苞迪苷G、莱苞迪苷H、莱苞迪苷I、莱苞迪苷I2、莱苞迪苷I3、莱苞迪苷J、莱苞迪苷K2、莱苞迪苷L、莱苞迪苷M、莱苞迪苷M2、莱苞迪苷N、莱苞迪苷O、莱苞迪苷O2、莱苞迪苷O3、莱苞迪苷Q、莱苞迪苷Q2、莱苞迪苷Q3、莱苞迪苷R、莱苞迪苷S、莱苞迪苷T、莱苞迪苷T1、莱苞迪苷U、莱苞迪苷U2、莱苞迪苷V、莱苞迪苷V2、莱苞迪苷W、莱苞迪苷W2、莱苞迪苷W3、莱苞迪苷Y、莱苞迪苷Z1、莱苞迪苷Z2、甜菊双糖苷、甜菊苷、甜菊苷D、甜菊苷E、甜菊苷E2、甜菊苷F、NSF-02、罗汉果苷V、罗汉果、阿洛酮糖、阿洛糖、D-塔格糖、赤藓糖醇以及它们的组合。
高度纯化的目标糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4还可与合成高强度甜味剂组合使用，这些合成高强度甜味剂诸如为三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾、阿斯巴甜、阿力甜、糖精、新橙皮苷二氢查耳酮、甜精、纽甜、甘素、对硝基苯基脲基丙酸钠(suosan)、爱德万甜(advantame)、它们的盐以及它们的组合。
此外，高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可与天然甜味剂抑制剂诸如匙羹藤酸、北枳椇糖苷(hodulcin)、大枣糖苷(ziziphin)、降甜剂(lactisole)等组合使用。甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4还可与各种鲜味增强剂组合。甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可与鲜味和甜味氨基酸诸如谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、脯氨酸、丝氨酸、谷氨酸、赖氨酸、色氨酸以及它们的组合相混合。
高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可与选自以下的一种或多种添加剂组合使用：碳水化合物、多元醇、氨基酸及其对应的盐、聚氨基酸及其对应的盐、糖酸及其对应的盐、核苷酸、有机酸、无机酸、有机盐(包括有机酸盐和有机碱盐)、无机盐、苦味化合物、调味剂和调味成分、涩味化合物、蛋白质或蛋白质水解物、表面活性剂、乳化剂、类黄酮、醇类、聚合物以及它们的组合。
高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可与多元醇或糖醇组合。术语“多元醇”是指含有多于一个羟基基团的分子。多元醇可为分别含有2、3和4个羟基基团的二醇、三醇或四醇。多元醇还可含有多于四个羟基基团，诸如分别含有5、6或7个羟基基团的戊醇、己醇、庚醇等。另外，多元醇还可为糖醇、多元醇或聚合醇，它们是碳水化合物的还原形式，其中羰基基团(醛或酮、还原糖)已被还原为伯醇羟基或仲醇羟基。多元醇的示例包括但不限于赤藓糖醇、麦芽糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖醇、木糖醇、肌醇、异麦芽酮糖醇、丙二醇、丙三醇、苏糖醇、半乳糖醇、氢化异麦芽酮糖、还原的异麦芽低聚糖、还原的低聚木糖、还原的低聚龙胆糖、还原的麦芽糖浆、还原的葡萄糖浆、氢化淀粉水解物、聚葡糖醇和糖醇或能够被还原的不会不利地影响甜味剂组合物的味道的任何其他碳水化合物。
高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可与低卡路里甜味剂组合，这些低卡路里甜味剂诸如例如为D-塔格糖、L-糖、L-山梨糖、L-阿拉伯糖以及它们的组合。
高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4还可与各种碳水化合物组合。术语“碳水化合物”通常是指被多个羟基基团取代的醛或酮化合物，具有通式(CH2O)n，其中n为3-30，以及它们的低聚物和聚合物。另外，本发明的碳水化合物可在一个或多个位置被取代或脱氧。如本文所用，碳水化合物包括未修饰的碳水化合物、碳水化合物衍生物、取代的碳水化合物和修饰的碳水化合物。如本文所用，短语“碳水化合物衍生物”、“取代的碳水化合物”和“修饰的碳水化合物”是同义的。修饰的碳水化合物意指其中至少一个原子已被添加、去除或取代或它们的组合的任何碳水化合物。因此，碳水化合物衍生物或取代的碳水化合物包括取代和未取代的单糖、二糖、低聚糖和多糖。碳水化合物衍生物或取代的碳水化合物任选地可在任何对应C-位置处脱氧，和/或可被一个或多个部分取代，所述部分诸如为氢、卤素、卤代烷基、羧基、酰基、酰氧基、氨基、酰胺基、羧基衍生物、烷氨基、二烷氨基、芳氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺基、巯基、亚胺基、磺酰基、亚氧硫基、亚磺酰基、氨磺酰基、烷氧羰基、甲酰胺基、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦基、硫酯、硫醚、肟基、肼基、氨甲酰基、二氧磷基、膦酸基或任何其他活性官能团，前提条件是该碳水化合物衍生物或取代的碳水化合物能起到改善甜味剂组合物的甜味道的作用。
可根据本发明使用的碳水化合物的示例包括但不限于阿洛酮糖、松二糖、阿洛糖、塔格糖、海藻糖、半乳糖、鼠李糖、各种环糊精、环状低聚糖、各种类型的麦芽糖糊精、葡聚糖、蔗糖、葡萄糖、核酮糖、果糖、苏糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖、阿洛糖、阿卓糖、甘露糖、艾杜糖、乳糖、麦芽糖、转化糖、异海藻糖、新海藻糖、异麦芽酮糖、赤藓糖、脱氧核糖、古洛糖、艾杜糖、塔洛糖、赤藓酮糖、木酮糖、阿洛酮糖、松二糖、纤维二糖、支链淀粉、葡糖胺、甘露糖胺、岩藻糖、葡糖醛酸、葡糖酸、葡糖酸内酯、阿比可糖、半乳糖胺、甜菜低聚糖、异麦芽低聚糖(异麦芽糖、异麦芽三糖、潘糖等)、低聚木糖(木三糖、木二糖等)、木糖末端低聚糖、低聚龙胆糖(龙胆二糖、龙胆三糖、龙胆四糖等)、山梨糖、黑曲霉寡糖、帕拉金糖低聚糖、低聚果糖(蔗果三糖、蔗果四糖等)、麦芽四醇、麦芽三醇、麦芽低聚糖(麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖等)、淀粉、菊粉、菊粉低聚糖、乳果糖、蜜二糖、棉子糖、核糖、异构化液体糖诸如高果糖玉米糖浆、偶联糖和大豆低聚糖。另外，如本文所用，碳水化合物可为D或L构型。
根据本发明获得的高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可与各种生理活性物质或功能性成分组合使用。功能性成分通常被分成多个种类，诸如类胡萝卜素、膳食纤维、脂肪酸、皂苷、抗氧化剂、营养保健品、类黄酮、异硫氰酸盐、酚类、植物甾醇和甾烷醇(植物甾醇和植物甾烷醇)；多元醇；益生元、益生菌；植物雌激素；大豆蛋白质；硫化物/硫醇；氨基酸；蛋白质；维生素；和矿物质。功能性成分还可基于它们的健康益处诸如在心血管、降胆固醇和抗炎方面的益处而分类。示例性功能性成分提供于WO2013/096420中，该专利的内容据此以引用方式并入。
根据本发明获得的高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可用作高强度甜味剂以生产具有改善的味道特性的零卡路里、低卡路里或糖尿病饮料和食物产品。其还可用于饮料、食料、药物以及其中不能使用糖的其他产品。另外，高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可作为甜味剂，不仅用于饮料、食料和专供人消费的其他产品，而且还用于具有改善的特性的动物饲料和草料。
根据本发明获得的高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可用作抑泡剂以生产零卡路里、低卡路里或糖尿病饮料和食物产品。
其中高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可用作增甜化合物的可消费产品的示例包括但不限于酒精饮料诸如伏特加酒、葡萄酒、啤酒、烈性酒和清酒等；天然汁；提神饮料；碳酸软饮料；低糖饮料；零卡路里饮料；低卡路里饮料和食品；酸奶饮料；速溶汁液；速溶咖啡；粉末型速溶饮料；罐头产品；糖浆；发酵豆酱；酱油；醋；调味品；蛋黄酱；番茄酱；咖喱；汤；速溶汤料；粉末酱油；粉末醋；各种类型的饼干；米饼；薄脆饼干；面包；巧克力；焦糖；糖果；口香糖；果冻；布丁；腌制水果和蔬菜；鲜奶油；果酱；橘子酱；糖花膏；奶粉；冰淇淋；冰糕；包装在瓶中的蔬菜和水果；罐装和水煮豆类；甜酱中煮的肉类和食品；农业蔬菜食物产品；海鲜；火腿；香肠；鱼火腿；鱼香肠；鱼酱；炸鱼产品；干制海鲜产品；冷冻食物产品；腌制海藻；腌肉；烟草；医药产品；等等。原则上其可具有不受限制的应用。
其中高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可用作风味改良剂或具有改良特性的风味料的可消费产品的示例包括但不限于酒精饮料诸如伏特加酒、葡萄酒、啤酒、烈性酒和清酒等；天然汁；提神饮料；碳酸软饮料；低糖饮料；零卡路里饮料；低卡路里饮料和食品；酸奶饮料；速溶汁液；速溶咖啡；粉末型速溶饮料；罐头产品；糖浆；发酵豆酱；酱油；醋；调味品；蛋黄酱；番茄酱；咖喱；汤；速溶汤料；粉末酱油；粉末醋；各种类型的饼干；米饼；薄脆饼干；面包；巧克力；焦糖；糖果；口香糖；果冻；布丁；腌制水果和蔬菜；鲜奶油；果酱；橘子酱；糖花膏；奶粉；冰淇淋；冰糕；包装在瓶中的蔬菜和水果；罐装和水煮豆类；甜酱中煮的肉类和食品；农业蔬菜食物产品；海鲜；火腿；香肠；鱼火腿；鱼香肠；鱼酱；炸鱼产品；干制海鲜产品；冷冻食物产品；腌制海藻；腌肉；烟草；医药产品；等等。原则上其可具有不受限制的应用。
在产品诸如食料、饮料、药物、化妆品、餐桌产品和口香糖的制造期间，可使用常规方法诸如混合、捏和、溶出、浸酸、渗透、渗滤、喷洒、雾化、灌注和其他方法。
此外，在本发明中获得的高度纯化的目标甜菊醇糖苷、甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4可以以干燥形式或液体形式使用。
可在食物产品的热处理之前或之后添加高度纯化的目标甜菊醇糖苷。高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4的量取决于使用目的。如上所讨论，其可单独地添加，或与其他化合物组合地添加。
本发明还涉及使用甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4作为甜味增强剂来在饮料中进行甜味增强，其中甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4以处于或低于其相应甜味识别阈值的浓度存在。
如本文所用，术语“甜味增强剂”是指能够增强或强化组合物诸如饮料中的甜味道的感知的化合物。术语“甜味增强剂”与术语“甜味道增效剂”、“甜味增效剂”、“甜味放大剂”和“甜味扩大剂”是同义的。
如本文通常所用，术语“甜味识别阈值浓度”是可被人类味觉感知到的甜化合物的最低已知浓度，典型地约1.0％蔗糖当量(1.0％SE)。通常，当以给定甜味增强剂的甜味识别阈值浓度或低于该甜味识别阈值浓度存在时，甜味增强剂可增强或加强甜味剂的甜味道而它们自身并不提供任何显著的甜味；然而，甜味增强剂在高于它们的甜味识别阈值浓度的浓度下自身可提供甜味道。甜味识别阈值浓度对于特定的增强剂是特异性的并且可基于饮料基质而变化。通过增加给定增强剂的浓度直至在给定饮料基质中检测到大于1.0％蔗糖当量的味道测试，可以容易地确定甜味识别阈值浓度。提供约1.0％蔗糖当量的浓度被视为甜味识别阈值。
在一些实施方案中，甜味剂以约0.5重量％至约12重量％诸如例如约1.0重量％、约1.5重量％、约2.0重量％、约2.5重量％、约3.0重量％、约3.5重量％、约4.0重量％、约4.5重量％、约5.0重量％、约5.5重量％、约6.0重量％、约6.5重量％、约7.0重量％、约7.5重量％、约8.0重量％、约8.5重量％、约9.0重量％、约9.5重量％、约10.0重量％、约10.5重量％、约11.0重量％、约11.5重量％或约12.0重量％的量存在于饮料中。
在具体实施方案中，甜味剂以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％、约3重量％至约7重量％或约4重量％至约6重量％的量存在于饮料中。在具体实施方案中，甜味剂以约0.5重量％至约8重量％的量存在于饮料中。在另一个具体实施方案中，甜味剂以约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
在一个实施方案中，甜味剂是传统热量甜味剂。合适的甜味剂包括但不限于蔗糖、果糖、葡萄糖、高果糖玉米糖浆和高果糖淀粉糖浆。
在另一个实施方案中，甜味剂是赤藓糖醇。
在再一个实施方案中，甜味剂是稀有糖。合适的稀有糖包括但不限于D-阿洛糖、D-阿洛酮糖、D-核糖、D-塔格糖、L-葡萄糖、L-岩藻糖、L-阿拉伯糖、D-松二糖、D-明串珠菌二糖以及它们的组合。
可以设想甜味剂可单独使用或与其他甜味剂组合使用。
在一个实施方案中，稀有糖是D-阿洛糖。在更具体的实施方案中，D-阿洛糖以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
在另一个实施方案中，稀有糖是D-阿洛酮糖。在更具体的实施方案中，D-阿洛酮糖以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
在再一个实施方案中，稀有糖是D-核糖。在更具体的实施方案中，D-核糖以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
在又一个实施方案中，稀有糖是D-塔格糖。在更具体的实施方案中，D-塔格糖以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
在另外一个实施方案中，稀有糖是L-葡萄糖。在更具体的实施方案中，L-葡萄糖以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
在一个实施方案中，稀有糖是L-岩藻糖。在更具体的实施方案中，L-岩藻糖以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
在另一个实施方案中，稀有糖是L-阿拉伯糖。在更具体的实施方案中，L-阿拉伯糖以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
在又一个实施方案中，稀有糖是D-松二糖。在更具体的实施方案中，D-松二糖以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
在又一个实施方案中，稀有糖是D-明串珠菌二糖。在更具体的实施方案中，D-明串珠菌二糖以约0.5重量％至约10重量％诸如例如约2重量％至约8重量％的量存在于饮料中。
与不存在甜味增强剂的对应饮料相比，以处于或低于其甜味识别阈值的浓度添加甜味增强剂增加了包含甜味剂和甜味增强剂的饮料的检测的蔗糖当量。此外，在不存在任何甜味剂的情况下，甜味增加的量可大于含有相同浓度的至少一种甜味增强剂的溶液的可检测甜味。
因此，本发明还提供了用于增强包含甜味剂的饮料的甜味的方法，该方法包括提供包含甜味剂的饮料并且添加选自以下的甜味增强剂：甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4或它们的组合，其中甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4以处于或低于其甜味识别阈值的浓度存在。
将甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4以处于或低于甜味识别阈值的浓度添加到含有甜味剂的饮料可使检测的蔗糖当量增加约1.0％至约5.0％诸如例如约1.0％、约1.5％、约2.0％、约2.5％、约3.0％、约3.5％、约4-0％、约4.5％或约5.0％。
以下实施例示出了用于制备高度纯化的目标甜菊醇糖苷、具体地甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3和/或莱苞迪苷O4的本发明的优选实施方案。应当理解，本发明并不限于这些实施例中阐述的材料、比例、条件和程序，它们仅仅是示例性的。
实施例
实施例1
生物催化方法中使用的经工程改造的酶的蛋白质序列
SEQ ID 1：
＞SuSy_At，变体PM1-54-2-E05(经工程改造的蔗糖合酶；野生型基因源：拟南芥)
Figure BDA0002847793280000801
SEQ ID 2：
＞UGTSl2变体0234(经工程改造的葡糖基转移酶；野生型基因源：番茄)
Figure BDA0002847793280000802
SEQ ID 3：
＞UGT76G1变体0042(经工程改造的葡糖基转移酶；野生型基因源：甜叶菊)
Figure BDA0002847793280000811
SEQ ID 4：
＞UDP-糖基转移酶91C1(UGlyT91C1；野生型基因源：粳型水稻；NCBI参考序列：XP_015629141.1)
Figure BDA0002847793280000812
实施例2
SEQ ID 1的SuSy At变体的表达和配制
将编码SEQ ID 1的SuSy_At变体(实施例1)的基因克隆到表达载体pLE1A17(pRSF-1b的衍生物，Novagen公司)中。所得质粒用于转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞。
于37℃下在补充有卡那霉素(50mg/l)的ZYM505培养基(F.William Studier，Protein Expression and Purification(《蛋白质表达与纯化》)，第41卷，2005年，第207-234页)中培养细胞。在对数期通过IPTG(0.2mM)诱导基因的表达，并且在30℃和200rpm下进行16-18小时的表达。
通过离心(3220×g，20min，4℃)收获细胞并且用细胞裂解缓冲液(100mM Tris-HCl pH 7.0；2mM MgCl2，DNA核酸酶20U/mL，溶菌酶0.5mg/mL)重悬细胞，达到200光密度(在600nm下测量(OD600))。然后通过超声处理破坏细胞并且通过离心(18000×g 40min，4℃)将粗提物与细胞碎片分离。通过经0.2μm过滤器过滤来对上清液进行灭菌并且用蒸馏水按50：50稀释上清液，从而得到酶活性制剂。
对于SuSy_At的酶活性制剂而言，以单位计的活性按如下定义：1mU的SuSy_At在1分钟内将1nmol的蔗糖转换为果糖。该测定法的反应条件是30℃、50mM磷酸钾缓冲液pH7.0、t0时的400mM蔗糖、3mM MgCl2和15mM尿苷二磷酸(UDP)。
实施例3
SEQ ID 2的UGTSl2变体的表达和配制
将编码SEQ ID 2的UGTSl2变体(实施例1)的基因克隆到表达载体pLE1A17(pRSF-1b的衍生物，Novagen公司)中。所得质粒用于转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞。
于37℃下在补充有卡那霉素(50mg/l)的ZYM505培养基(F.William Studier，Protein Expression and Purification(《蛋白质表达与纯化》)，第41卷，2005年，第207-234页)中培养细胞。在对数期通过IPTG(0.1mM)诱导基因的表达，并且在30℃和200rpm下进行16-18小时的表达。
通过离心(3220×g，20min，4℃)收获细胞并且用细胞裂解缓冲液(100mM Tris-HCl pH 7.0；2mM MgCl2，DNA核酸酶20U/mL，溶菌酶0.5mg/mL)重悬细胞，达到200光密度(在600nm下测量(OD600))。然后通过超声处理破坏细胞并且通过离心(18000×g 40min，4℃)将粗提物与细胞碎片分离。通过经0.2μm过滤器过滤来对上清液进行灭菌并且用1M蔗糖溶液按50∶50稀释上清液，从而得到酶活性制剂。
对于UGTSl2的酶活性制剂而言，以单位计的活性按如下定义：1mU的UGTSl2在1分钟内将1nmol的莱苞迪苷A(Reb A)转换为莱苞迪苷D(Reb D)。该测定法的反应条件是30℃、50mM磷酸钾缓冲液pH 7.0、t0时的10mM Reb A、500mM蔗糖、3mM MgCl2、0.25mM尿苷二磷酸(UDP)和3U/mL的SuSy_At。
实施例4
SEQ ID 3的UGT76G1变体的表达和配制
将编码SEQ ID 3的UGT76G1变体(实施例1)的基因克隆到表达载体pLEIA17(pRSF-1b的衍生物，Novagen公司)中。所得质粒用于转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞。
于37℃下在补充有卡那霉素(50mg/l)的ZYM505培养基(F.William Studier，Protein Expression and Purification(《蛋白质表达与纯化》)，第41卷，2005年，第207-234页)中培养细胞。在对数期通过IPTG(0.1mM)诱导基因的表达，并且在30℃和200rpm下进行16-18小时的表达。
通过离心(3220×g，20min，4℃)收获细胞并且用细胞裂解缓冲液(100mM Tris-HCl pH 7.0；2mM MgCl2，DNA核酸酶20U/mL，溶菌酶0.5mg/mL)重悬细胞，达到200光密度(在600nm下测量(OD600))。然后通过超声处理破坏细胞并且通过离心(18000×g 40min，4℃)将粗提物与细胞碎片分离。通过经0.2μm过滤器过滤来对上清液进行灭菌并且用1M蔗糖溶液按50∶50稀释上清液，从而得到酶活性制剂。
对于UGT76G1的酶活性制剂而言，以单位计的活性按如下定义：1mU的UGT76G1在1分钟内将1nmol的莱苞迪苷D(Reb D)转换为莱苞迪苷M(Reb M)。该测定法的反应条件是30℃、50mM磷酸钾缓冲液pH7.0、t0时的10mM Reb D、500mM蔗糖、3mM MgCl2、0.25mM尿苷二磷酸(UDP)和3U/mL的SuSy_At。
实施例5
同时添加UGTSl2、SuSy_At和UGT76G1，在一锅反应中从莱苞迪苷C合成莱苞迪苷N2 和莱苞迪苷O4。
在一锅反应中直接从莱苞迪苷C合成莱苞迪苷N2(reb N2)和莱苞迪苷O4(reb O4)(参见图3a和图3b)，该反应利用如下三种酶(参见实施例1、2、3和4)：UGTSl2(SEQ ID 2的变体)、SuSy_At(SEQ ID 1的变体)和UGT76G1(SEQ ID 3的变体)。最终反应溶液含有105U/LUGTSl2、405U/L SuSy_At、3U/L UGT76G1、5mM莱苞迪苷C、0.25mM尿苷二磷酸(UDP)、1M蔗糖、4mM MgCl2和磷酸钾缓冲液(pH 6.6)。首先，将207mL的蒸馏水与0.24g MgCl2.6H2O、103g蔗糖、9.9mL的1.5M磷酸钾缓冲液(pH 6.6)和15g莱苞迪苷C混合。在溶解这些组分之后，将温度调节至45℃并且添加UGTSl2、SuSy_At、UGT76G1和39mg UDP。将反应混合物在45℃摇床上温育24小时。在8小时和18小时再添加39mg UDP。通过HPLC分析若干时间点的reb O4、rebN2、reb K和reb C的含量。
为进行分析，通过以下方式灭活生物转换样品：使用17％H3PO4将反应混合物调节至pH5.5，然后煮10分钟。将所得样品过滤，将滤液稀释10倍并且用作HPLC分析用样品。可在Agilent HP 1200 HPLC系统上进行HPLC测定法，该系统由泵、柱温箱、自动进样器、能够进行背景校正的UV检测器和数据采集系统构成。使用Agilent Poroshell 120 SB-C18(4.6mm×150mm，2.7μm)在40℃下分离分析物。流动相由两种预混物组成：
-含有75％10mM磷酸盐缓冲液(pH2.6)和25％乙腈的预混物1，和
-含有68％10mM磷酸盐缓冲液(pH2.6)和32％乙腈的预混物2。
洗脱梯度从预混物1开始，在12.5分钟时变为预混物2达50％，在13分钟时变为预混物2达100％。总运行时间为45分钟。柱温保持在40℃。进样体积为5μL。通过210nm下的UV检测莱苞迪苷种类。
表3示出了每个时间点Reb C向所鉴定的莱苞迪苷种类的转化率(面积百分比)。96小时的莱苞迪苷C和反应混合物的色谱图分别示于图4和图5中。本领域的技术人员应当理解，保留时间有时可因溶剂和/或设备变化而变化。
表3
reb C向reb N2知reb O4的生物转换
Figure BDA0002847793280000841
实施例6
莱苞迪苷N2和O4的纯化
通过以下方式灭活实施例5的40mL反应混合物(96小时后)：使用H3PO4将pH调节至pH 5.5，然后煮10分钟并且过滤。将滤液上样到含有用水预平衡的30mL YWD03(中国沧州远威化工有限公司(Cangzhou Yuanwei，China))树脂的柱中。用150mL温水(35℃)洗涤该树脂并且丢弃该步骤中流出的水。
通过用200mL 70％v/v乙醇/水洗脱来从YWD03树脂柱中洗脱甜菊醇糖苷。收集该步骤中的流出物并且使之在旋转蒸发仪上进行蒸发直到样品的体积为大约25mL。使用下表4中所列的条件通过制备型HPLC对该浓缩的样品进行进一步纯化。
根据保留时间来合并与来自多个运行的单独化合物相对应的制备型HPLC级分。将样品冻干，得到60mg莱苞迪苷N2和10mg莱苞迪苷O4。
表4
制备型HPLC的条件
Figure BDA0002847793280000851
纯化的reb N2和reb O4的色谱图分别示于图6a和图6b中。本领域的技术人员应当理解，保留时间有时可因溶剂和/或设备变化而变化。
实施例7
莱苞迪苷N2的结构解析
在Bruker 500MHz分光光度计上使用溶于吡啶-d5中的样品进行NMR实验。除了来自样品的信号之外，还观察到来自δC 123.5、135.5、149.9ppm及δH 7.19、7.55、8.71ppm下的吡啶-d5的信号。吡啶-d5中记录的莱苞迪苷N2的1H-NMR谱确认了样品的优异质量(参见图7a)。HSQC(参见图8a)示出了糖区域中存在与C-15具有远程偶合的环外亚甲基，这可在H，H-COSY(图9a)中观察到。通过HMBC(图10a)检测到季碳(C-13、C-16和C-19)的其他深场信号(deep-fielded signal)。HSQC、HMBC和H，H-COSY中的信号的相关性揭示了存在具有以下糖苷配基结构的甜菊醇糖苷(参见图1e)：
Figure BDA0002847793280000861
莱苞迪苷N2的HSQC谱还示出了存在与糖区域中的信号具有H，H-COSY相关性的甲基双峰(J＝6.3Hz)。HSQC还示出了存在六个异头信号，这些异头信号中的五个具有约8Hz的偶合常数并且其糖键的宽信号允许将这六个糖鉴定为β-D-葡糖苷。第六异头信号是宽单峰并且H，H-COSY与甲基双重峰的相关性允许将该糖鉴定为α-L-鼠李糖。
异头质子的观察与HSQC和HMBC相组合揭示了糖键及与糖苷配基的相关性。通过使用HSQC-TOCSY(图11a)和HSQC的组合来确认糖序列的归属。
上述NMR实验的结果一起用于归属莱苞迪苷N2的结构的质子和碳的化学位移(参见表5)。
表5
莱苞迪苷N2的化学位移
Figure BDA0002847793280000862
Figure BDA0002847793280000871
表5(续)
莱苞迪苷N2的化学位移
Figure BDA0002847793280000872
Figure BDA0002847793280000881
表5(续)
莱苞迪苷N2的化学位移
Figure BDA0002847793280000882
所有NMR结果的相关性指示了具有附接到甜菊醇糖苷配基的五个β-D-葡萄糖和一个α-L-鼠李糖的莱苞迪苷N2，如用以下化学结构(参见图1a和图1b)描绘的：
Figure BDA0002847793280000891
莱苞迪苷N2的LCMS(图12a和图12b)分析示出了m/z为1273.0的[M-H]-离子，这与C56H90O32的预期分子式很好地相符(对[C56H89O32]-离子计算得出：1273.5，误差＜0.05％)。MS数据确认莱苞迪苷N2具有C56H90O32的分子式。在表6中所列的以下条件中进行LCMS分析。
表6
LCMS分析的条件
Figure BDA0002847793280000892
Figure BDA0002847793280000901
实施例8
莱苞迪苷O4的结构解析
在Bruker 500MHz分光光度计上使用溶于吡啶-d5中的样品进行NMR实验。除了来自样品的信号之外，还观察到来自δC 123.5、135.5、149.9ppm及δH 7.19、7.55、8.71ppm下的吡啶-d5的信号。吡啶-d5中记录的莱苞迪苷O4的1H-NMR谱确认了样品的优异质量(参见图7b)。HSQC(参见图8b)示出了糖区域中存在与C-15具有远程偶合的环外亚甲基，这可在H，H-COSY(图9b)中观察到。通过HMBC(图10b)检测到季碳(C-13、C-16和C-19)的其他深场信号。HSQC、HMBC和H，H-COSY中的信号的相关性揭示了存在具有以下糖苷配基结构的甜菊醇糖苷(参见图1e)：
Figure BDA0002847793280000902
莱苞迪苷O4的HSQC谱还示出了存在与糖区域中的信号具有H，H-COSY相关性的甲基双峰(J＝6.3Hz)。HSQC还示出了存在七个异头信号，这些异头信号中的六个具有约8Hz的偶合常数并且其糖键的宽信号允许将这六个糖鉴定为β-D-葡糖苷。第七异头信号是宽单峰并且H，H-COSY与甲基双重峰的相关性允许将该糖鉴定为α-L-鼠李糖。
异头质子的观察与HSQC和HMBC相组合揭示了糖键及与糖苷配基的相关性。通过使用HSQC-TOCSY(图11b)和HSQC的组合来确认糖序列的归属。
上述NMR实验的结果用于归属莱苞迪苷O4的结构的质子和碳的化学位移(参见表7)。
表7
莱苞迪苷O4的化学位移
Figure BDA0002847793280000911
Figure BDA0002847793280000921
表7(续)
莱苞迪苷O4的化学位移
Figure BDA0002847793280000922
Figure BDA0002847793280000931
表7(续)
莱苞迪苷O4的化学位移
Figure BDA0002847793280000932
所有NMR结果的相关性指示了具有附接到甜菊醇糖苷配基的六个β-D-葡萄糖和一个α-L-鼠李糖的莱苞迪苷O4，如用以下化学结构(参见图1c和图1d)描绘的：
Figure BDA0002847793280000941
莱苞迪苷O4的LCMS(图13a和图13b)分析示出了m/z为1435.0的[M-H]-离子，这与C62H100O37的预期分子式很好地相符(对[C62H99O37]-离子计算得出：1435.6，误差＜0.05％)。MS数据确认莱苞迪苷O4具有C62H100O37的分子式。使用表6中所列的条件进行LCMS分析。
尽管已经详细描述了本发明及其优点，但是应当理解，在不脱离由所附权利要求限定的本发明的实质和范围的情况下，可以在本文中进行各种改变、替换和更改。此外，本申请的范围不旨在限于本说明书中描述的过程、机器、制造、物质组成、装置、方法和步骤的具体实施方案。如本领域普通技术人员将从本发明的公开内容容易理解的，根据本发明可以利用目前存在的或以后开发的执行与本文所述的对应实施方案基本上相同的功能或实现基本上相同的结果的过程、机器、制造、物质组成、装置、方法或步骤。因此，所附权利要求书旨在将此类过程、机器、制造、物质组成、装置、方法或步骤包括在其范围内。
序列表
<110> 谱赛科美国股份有限公司（PureCircle USA Inc.）
<120> 高纯度甜菊醇糖苷
<130> 39227-78PROV
<160> 4
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 808
<212> PRT
<213> 拟南芥（Arabidopsis thaliana）
<400> 1
Met Ala Asn Ala Glu Arg Met Ile Thr Arg Val His Ser Gln Arg Glu
1 5 10 15
Arg Leu Asn Glu Thr Leu Val Ser Glu Arg Asn Glu Val Leu Ala Leu
20 25 30
Leu Ser Arg Val Glu Ala Lys Gly Lys Gly Ile Leu Gln Gln Asn Gln
35 40 45
Ile Ile Ala Glu Phe Glu Ala Leu Pro Glu Gln Thr Arg Lys Lys Leu
50 55 60
Glu Gly Gly Pro Phe Phe Asp Leu Leu Lys Ser Thr Gln Glu Ala Ile
65 70 75 80
Val Leu Pro Pro Trp Val Ala Leu Ala Val Arg Pro Arg Pro Gly Val
85 90 95
Trp Glu Tyr Leu Arg Val Asn Leu His Ala Leu Val Val Glu Glu Leu
100 105 110
Gln Pro Ala Glu Phe Leu His Phe Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Val
115 120 125
Lys Asn Gly Asn Phe Thr Leu Glu Leu Asp Phe Glu Pro Phe Asn Ala
130 135 140
Ser Ile Pro Arg Pro Thr Leu His Lys Tyr Ile Gly Asn Gly Val Asp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe His Asp Lys Glu Ser
165 170 175
Leu Leu Pro Leu Leu Asp Phe Leu Arg Leu His Ser His Gln Gly Lys
180 185 190
Asn Leu Met Leu Ser Glu Lys Ile Gln Asn Leu Asn Thr Leu Gln His
195 200 205
Thr Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Ala Glu Leu Lys Ser Glu Thr
210 215 220
Leu Tyr Glu Glu Phe Glu Ala Lys Phe Glu Glu Ile Gly Leu Glu Arg
225 230 235 240
Gly Trp Gly Asp Asn Ala Glu Arg Val Leu Asp Met Ile Arg Leu Leu
245 250 255
Leu Asp Leu Leu Glu Ala Pro Asp Pro Ser Thr Leu Glu Thr Phe Leu
260 265 270
Gly Arg Val Pro Met Val Phe Asn Val Val Ile Leu Ser Pro His Gly
275 280 285
Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln
290 295 300
Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu Glu Ile Glu Met Leu
305 310 315 320
Gln Arg Ile Lys Gln Gln Gly Leu Asn Ile Lys Pro Arg Ile Leu Ile
325 330 335
Leu Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Glu Arg
340 345 350
Leu Glu Arg Val Tyr Asp Ser Glu Tyr Cys Asp Ile Leu Arg Val Pro
355 360 365
Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Lys Trp Ile Ser Arg Phe Glu
370 375 380
Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Glu Asp Ala Ala Val Glu Leu
385 390 395 400
Ser Lys Glu Leu Asn Gly Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser
405 410 415
Asp Gly Asn Leu Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Leu Gly Val Thr
420 425 430
Gln Cys Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser
435 440 445
Asp Ile Tyr Trp Lys Lys Leu Asp Asp Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln
450 455 460
Phe Thr Ala Asp Ile Phe Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr
465 470 475 480
Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Glu Thr Val Gly Gln Tyr
485 490 495
Glu Ser His Thr Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His
500 505 510
Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala
515 520 525
Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu Lys Arg Arg Leu Thr
530 535 540
Lys Phe His Ser Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Val Glu Asn
545 550 555 560
Asp Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Lys Lys Lys Pro Ile Leu Phe
565 570 575
Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Ser Gly Leu Val Glu
580 585 590
Trp Tyr Gly Lys Asn Thr Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val
595 600 605
Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Asn Glu Glu Lys Ala
610 615 620
Glu Met Lys Lys Met Tyr Asp Leu Ile Glu Glu Tyr Lys Leu Asn Gly
625 630 635 640
Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asp Arg Val Arg Asn Gly Glu
645 650 655
Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala
660 665 670
Leu Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly
675 680 685
Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Lys Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val
690 695 700
His Gly Lys Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr His Gly Asp Gln Ala
705 710 715 720
Ala Asp Leu Leu Ala Asp Phe Phe Thr Lys Cys Lys Glu Asp Pro Ser
725 730 735
His Trp Asp Glu Ile Ser Lys Gly Gly Leu Gln Arg Ile Glu Glu Lys
740 745 750
Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Gln Arg Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val
755 760 765
Tyr Gly Phe Trp Lys His Val Ser Asn Leu Asp Arg Leu Glu His Arg
770 775 780
Arg Tyr Leu Glu Met Phe Tyr Ala Leu Lys Tyr Arg Pro Leu Ala Gln
785 790 795 800
Ala Val Pro Leu Ala Gln Asp Asp
805
<210> 2
<211> 442
<212> PRT
<213> 番茄（Solanum lycopersicum）
<400> 2
Met Ala Thr Asn Leu Arg Val Leu Met Phe Pro Trp Leu Ala Tyr Gly
1 5 10 15
His Ile Ser Pro Phe Leu Asn Ile Ala Lys Gln Leu Ala Asp Arg Gly
20 25 30
Phe Leu Ile Tyr Leu Cys Ser Thr Arg Ile Asn Leu Glu Ser Ile Ile
35 40 45
Lys Lys Ile Pro Glu Lys Tyr Ala Asp Ser Ile His Leu Ile Glu Leu
50 55 60
Gln Leu Pro Glu Leu Pro Glu Leu Pro Pro His Tyr His Thr Thr Asn
65 70 75 80
Gly Leu Pro Pro His Leu Asn Pro Thr Leu His Lys Ala Leu Lys Met
85 90 95
Ser Lys Pro Asn Phe Ser Arg Ile Leu Gln Asn Leu Lys Pro Asp Leu
100 105 110
Leu Ile Tyr Asp Val Leu Gln Pro Trp Ala Glu His Val Ala Asn Glu
115 120 125
Gln Gly Ile Pro Ala Gly Lys Leu Leu Val Ser Cys Ala Ala Val Phe
130 135 140
Ser Tyr Phe Phe Ser Phe Arg Lys Asn Pro Gly Val Glu Phe Pro Phe
145 150 155 160
Pro Ala Ile His Leu Pro Glu Val Glu Lys Val Lys Ile Arg Glu Ile
165 170 175
Leu Ala Lys Glu Pro Glu Glu Gly Gly Arg Leu Asp Glu Gly Asn Lys
180 185 190
Gln Met Met Leu Met Cys Thr Ser Arg Thr Ile Glu Ala Lys Tyr Ile
195 200 205
Asp Tyr Cys Thr Glu Leu Cys Asn Trp Lys Val Val Pro Val Gly Pro
210 215 220
Pro Phe Gln Asp Leu Ile Thr Asn Asp Ala Asp Asn Lys Glu Leu Ile
225 230 235 240
Asp Trp Leu Gly Thr Lys Pro Glu Asn Ser Thr Val Phe Val Ser Phe
245 250 255
Gly Ser Glu Tyr Phe Leu Ser Lys Glu Asp Met Glu Glu Ile Ala Phe
260 265 270
Ala Leu Glu Ala Ser Asn Val Asn Phe Ile Trp Val Val Arg Phe Pro
275 280 285
Lys Gly Glu Glu Arg Asn Leu Glu Asp Ala Leu Pro Glu Gly Phe Leu
290 295 300
Glu Arg Ile Gly Glu Arg Gly Arg Val Leu Asp Lys Phe Ala Pro Gln
305 310 315 320
Pro Arg Ile Leu Asn His Pro Ser Thr Gly Gly Phe Ile Ser His Cys
325 330 335
Gly Trp Asn Ser Val Met Glu Ser Ile Asp Phe Gly Val Pro Ile Ile
340 345 350
Ala Met Pro Ile His Asn Asp Gln Pro Ile Asn Ala Lys Leu Met Val
355 360 365
Glu Leu Gly Val Ala Val Glu Ile Val Arg Asp Asp Asp Gly Lys Ile
370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
Lys Ser Ile Arg Asp Glu Glu Met Asp Ala Val Ala Glu Glu Leu Ile
420 425 430
Gln Leu Cys Arg Asn Ser Asn Lys Ser Lys
435 440
<210> 3
<211> 458
<212> PRT
<213> 甜叶菊（Stevia rebaudiana）
<400> 3
Met Glu Asn Lys Thr Glu Thr Thr Val Arg Arg Arg Arg Arg Ile Ile
1 5 10 15
Leu Phe Pro Val Pro Phe Gln Gly His Ile Asn Pro Ile Leu Gln Leu
20 25 30
Ala Asn Val Leu Tyr Ser Lys Gly Phe Ala Ile Thr Ile Leu His Thr
35 40 45
Asn Phe Asn Lys Pro Lys Thr Ser Asn Tyr Pro His Phe Thr Phe Arg
50 55 60
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65 70 75 80
Thr His Gly Pro Leu Ala Gly Met Arg Ile Pro Ile Ile Asn Glu His
85 90 95
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Glu Glu Asp Glu Glu Val Ser Cys Leu Ile Thr Asp Ala Leu Trp Tyr
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Phe Ala Gln Asp Val Ala Asp Ser Leu Asn Leu Arg Arg Leu Val Leu
130 135 140
Met Thr Ser Ser Leu Phe Asn Phe His Ala His Val Ser Leu Pro Gln
145 150 155 160
Phe Asp Glu Leu Gly Tyr Leu Asp Pro Asp Asp Lys Thr Arg Leu Glu
165 170 175
Glu Gln Ala Ser Gly Phe Pro Met Leu Lys Val Lys Asp Ile Lys Ser
180 185 190
Ala Tyr Ser Asn Trp Gln Ile Gly Lys Glu Ile Leu Gly Lys Met Ile
195 200 205
Lys Gln Thr Lys Ala Ser Ser Gly Val Ile Trp Asn Ser Phe Lys Glu
210 215 220
Leu Glu Glu Ser Glu Leu Glu Thr Val Ile Arg Glu Ile Pro Ala Pro
225 230 235 240
Ser Phe Leu Ile Pro Leu Pro Lys His Leu Thr Ala Ser Ser Ser Ser
245 250 255
Leu Leu Asp His Asp Arg Thr Val Phe Glu Trp Leu Asp Gln Gln Ala
260 265 270
Pro Ser Ser Val Leu Tyr Val Ser Phe Gly Ser Thr Ser Glu Val Asp
275 280 285
Glu Lys Asp Phe Leu Glu Ile Ala Arg Gly Leu Val Asp Ser Gly Gln
290 295 300
Ser Phe Leu Trp Val Val Arg Pro Gly Phe Val Lys Gly Ser Thr Trp
305 310 315 320
Val Glu Pro Leu Pro Asp Gly Phe Leu Gly Glu Arg Gly Lys Ile Val
325 330 335
Lys Trp Val Pro Gln Gln Glu Val Leu Ala His Pro Ala Ile Gly Ala
340 345 350
Phe Trp Thr His Ser Gly Trp Asn Ser Thr Leu Glu Ser Val Cys Glu
355 360 365
Gly Val Pro Met Ile Phe Ser Ser Phe Gly Gly Asp Gln Pro Leu Asn
370 375 380
Ala Arg Tyr Met Ser Asp Val Leu Arg Val Gly Val Tyr Leu Glu Asn
385 390 395 400
Gly Trp Glu Arg Gly Glu Val Val Asn Ala Ile Arg Arg Val Met Val
405 410 415
Asp Glu Glu Gly Glu Tyr Ile Arg Gln Asn Ala Arg Val Leu Lys Gln
420 425 430
Lys Ala Asp Val Ser Leu Met Lys Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Ser Leu
435 440 445
Glu Ser Leu Val Ser Tyr Ile Ser Ser Leu
450 455
<210> 4
<211> 462
<212> PRT
<213> 水稻（Oryza sativa）
<400> 4
Met Asp Ser Gly Tyr Ser Ser Ser Tyr Ala Ala Ala Ala Gly Met His
1 5 10 15
Val Val Ile Cys Pro Trp Leu Ala Phe Gly His Leu Leu Pro Cys Leu
20 25 30
Asp Leu Ala Gln Arg Leu Ala Ser Arg Gly His Arg Val Ser Phe Val
35 40 45
Ser Thr Pro Arg Asn Ile Ser Arg Leu Pro Pro Val Arg Pro Ala Leu
50 55 60
Ala Pro Leu Val Ala Phe Val Ala Leu Pro Leu Pro Arg Val Glu Gly
65 70 75 80
Leu Pro Asp Gly Ala Glu Ser Thr Asn Asp Val Pro His Asp Arg Pro
85 90 95
Asp Met Val Glu Leu His Arg Arg Ala Phe Asp Gly Leu Ala Ala Pro
100 105 110
Phe Ser Glu Phe Leu Gly Thr Ala Cys Ala Asp Trp Val Ile Val Asp
115 120 125
Val Phe His His Trp Ala Ala Ala Ala Ala Leu Glu His Lys Val Pro
130 135 140
Cys Ala Met Met Leu Leu Gly Ser Ala His Met Ile Ala Ser Ile Ala
145 150 155 160
Asp Arg Arg Leu Glu Arg Ala Glu Thr Glu Ser Pro Ala Ala Ala Gly
165 170 175
Gln Gly Arg Pro Ala Ala Ala Pro Thr Phe Glu Val Ala Arg Met Lys
180 185 190
Leu Ile Arg Thr Lys Gly Ser Ser Gly Met Ser Leu Ala Glu Arg Phe
195 200 205
Ser Leu Thr Leu Ser Arg Ser Ser Leu Val Val Gly Arg Ser Cys Val
210 215 220
Glu Phe Glu Pro Glu Thr Val Pro Leu Leu Ser Thr Leu Arg Gly Lys
225 230 235 240
Pro Ile Thr Phe Leu Gly Leu Met Pro Pro Leu His Glu Gly Arg Arg
245 250 255
Glu Asp Gly Glu Asp Ala Thr Val Arg Trp Leu Asp Ala Gln Pro Ala
260 265 270
Lys Ser Val Val Tyr Val Ala Leu Gly Ser Glu Val Pro Leu Gly Val
275 280 285
Glu Lys Val His Glu Leu Ala Leu Gly Leu Glu Leu Ala Gly Thr Arg
290 295 300
Phe Leu Trp Ala Leu Arg Lys Pro Thr Gly Val Ser Asp Ala Asp Leu
305 310 315 320
Leu Pro Ala Gly Phe Glu Glu Arg Thr Arg Gly Arg Gly Val Val Ala
325 330 335
Thr Arg Trp Val Pro Gln Met Ser Ile Leu Ala His Ala Ala Val Gly
340 345 350
Ala Phe Leu Thr His Cys Gly Trp Asn Ser Thr Ile Glu Gly Leu Met
355 360 365
Phe Gly His Pro Leu Ile Met Leu Pro Ile Phe Gly Asp Gln Gly Pro
370 375 380
Asn Ala Arg Leu Ile Glu Ala Lys Asn Ala Gly Leu Gln Val Ala Arg
385 390 395 400
Asn Asp Gly Asp Gly Ser Phe Asp Arg Glu Gly Val Ala Ala Ala Ile
405 410 415
Arg Ala Val Ala Val Glu Glu Glu Ser Ser Lys Val Phe Gln Ala Lys
420 425 430
Ala Lys Lys Leu Gln Glu Ile Val Ala Asp Met Ala Cys His Glu Arg
435 440 445
Tyr Ile Asp Gly Phe Ile Gln Gln Leu Arg Ser Tyr Lys Asp
450 455 460

Claims (27)

1.具有下式的莱苞迪苷N2：
Figure FDA0002847793270000011
2.具有下式的莱苞迪苷O4：
Figure FDA0002847793270000012
3.一种用于产生根据权利要求1所述的高度纯化的莱苞迪苷N2的方法，所述方法包括以下步骤：
a.提供包含具有至少一个碳原子的有机化合物的起始组合物；
b.提供含有至少一种酶的酶制剂或微生物，所述至少一种酶选自甜菊醇生物合成酶、UDP-葡糖基转移酶、UDP-糖基转移酶以及任选UDP-葡萄糖和UDP-鼠李糖再循环酶；
c.使所述酶制剂或微生物与含有所述起始组合物的介质接触以产生包含莱苞迪苷N2的介质。
4.一种用于产生根据权利要求2所述的高度纯化的莱苞迪苷O4的方法，所述方法包括以下步骤：
a.提供包含具有至少一个碳原子的有机化合物的起始组合物；
b.提供含有至少一种酶的酶制剂或微生物，所述至少一种酶选自甜菊醇生物合成酶、UDP-葡糖基转移酶、UDP-糖基转移酶以及任选UDP-葡萄糖和UDP-鼠李糖再循环酶；
c.使所述酶制剂或微生物与含有所述起始组合物的介质接触以产生包含莱苞迪苷O4的介质。
5.一种用于产生根据权利要求1所述的高度纯化的莱苞迪苷N2的方法，所述方法包括以下步骤：
a.提供包含具有至少一个碳原子的有机化合物的起始组合物；
b.提供包含至少一种酶的生物催化剂，所述至少一种酶选自甜菊醇生物合成酶、UDP-葡糖基转移酶、UDP-糖基转移酶以及任选UDP-葡萄糖和UDP-鼠李糖再循环酶；
c.使所述生物催化剂与含有所述起始组合物的介质接触以产生包含莱苞迪苷N2的介质。
6.一种用于产生根据权利要求2所述的高度纯化的莱苞迪苷O4的方法，所述方法包括以下步骤：
a.提供包含具有至少一个碳原子的有机化合物的起始组合物；
b.提供包含至少一种酶的生物催化剂，所述至少一种酶选自甜菊醇生物合成酶、UDP-葡糖基转移酶、UDP-糖基转移酶以及任选UDP-葡萄糖和UDP-鼠李糖再循环酶；
c.使所述生物催化剂与含有所述起始组合物的介质接触以产生包含莱苞迪苷O4的介质。
7.根据权利要求3或5所述的方法，所述方法还包括以下步骤：
d.将所述莱苞迪苷N2从所述介质分离以提供高度纯化的莱苞迪苷N2组合物。
8.根据权利要求4或6所述的方法，所述方法还包括以下步骤：
d.将所述莱苞迪苷O4从所述介质分离以提供高度纯化的莱苞迪苷O4组合物。
9.根据权利要求3、4、5或6所述的方法，其中所述起始组合物选自甜菊醇、甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、其他甜菊醇糖苷、多元醇、碳水化合物以及它们的组合。
10.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述微生物选自大肠杆菌、酵母菌属、曲霉菌属、毕赤酵母属、芽孢杆菌属和耶氏酵母属。
11.根据权利要求5所述的方法，其中所述生物催化剂是酶或者包含一种或多种酶的细胞，所述酶能够将所述起始组合物转化为莱苞迪苷N2。
12.根据权利要求6所述的方法，其中所述生物催化剂是酶或者包含一种或多种酶的细胞，所述酶能够将所述起始组合物转化为莱苞迪苷O4。
13.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述酶选自甲羟戊酸(MVA)途径酶、2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径(MEP/DOXP)酶、牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶、柯巴基焦磷酸合酶、贝壳杉烯合酶、贝壳杉烯氧化酶、贝壳杉烯酸13-羟化酶(KAH)、甜菊醇合成酶、脱氧木酮糖5-磷酸合酶(DXS)、D-1-脱氧木酮糖5-磷酸还原异构酶(DXR)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇合酶(CMS)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇激酶(CMK)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇2，4-环焦磷酸合酶(MCS)、l-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-焦磷酸合酶(HDS)、1-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-焦磷酸还原酶(HDR)、乙酰乙酰辅酶A硫解酶、截短HMG辅酶A还原酶、甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶、焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶、细胞色素P450还原酶、UGT74G1、UGT85C2、UGT91D2、EUGT11、UGTSl2、UGT76G1、UGlyT91C1或者具有＞85％氨基酸序列同一性、＞86％氨基酸序列同一性、＞87％氨基酸序列同一性、＞88％氨基酸序列同一性、＞89％氨基酸序列同一性、＞90％氨基酸序列同一性、＞91％氨基酸序列同一性、＞92％氨基酸序列同一性、＞93％氨基酸序列同一性、＞94％氨基酸序列同一性、＞95％氨基酸序列同一性、＞96％氨基酸序列同一性、＞97％氨基酸序列同一性、＞98％氨基酸序列同一性、＞99％氨基酸序列同一性的它们的突变型变体。
14.根据权利要求7所述的方法，其中基于干重，高度纯化的莱苞迪苷N2组合物中的所述莱苞迪苷N2含量大于约95重量％。
15.根据权利要求8所述的方法，其中基于干重，高度纯化的莱苞迪苷O4组合物中的所述莱苞迪苷O4含量大于约95重量％。
16.一种包含根据权利要求1所述的莱苞迪苷N2的可消费产品，其中所述产品选自食品、饮料、药物组合物、烟草产品、营养保健组合物、口腔卫生组合物和化妆品组合物。
17.一种包含根据权利要求2所述的莱苞迪苷O4的可消费产品，其中所述产品选自食品、饮料、药物组合物、烟草产品、营养保健组合物、口腔卫生组合物和化妆品组合物。
18.根据权利要求16或17所述的可消费产品，其中所述产品选自饮料；天然汁；提神饮料；碳酸软饮料；低糖饮料；零卡路里饮料；低卡路里饮料和食品；酸奶饮料；速溶汁液；速溶咖啡；粉末型速溶饮料；罐头产品；糖浆；发酵豆酱；酱油；醋；调味品；蛋黄酱；番茄酱；咖喱；汤；速溶汤料；粉末酱油；粉末醋；各种类型的饼干；米饼；薄脆饼干；面包；巧克力；焦糖；糖果；口香糖；果冻；布丁；腌制水果和蔬菜；鲜奶油；果酱；橘子酱；糖花膏；奶粉；冰淇淋；冰糕；包装在瓶中的蔬菜和水果；罐装和水煮豆类；甜酱中煮的肉类和食品；农业蔬菜食物产品；海鲜；火腿；香肠；鱼火腿；鱼香肠；鱼酱；炸鱼产品；干制海鲜产品；冷冻食物产品；腌制海藻；腌肉；烟草和医药产品。
19.根据权利要求16或17所述的可消费产品，所述可消费产品还包含选自以下的至少一种添加剂：碳水化合物、多元醇、氨基酸及其对应的盐、聚氨基酸及其对应的盐、糖酸及其对应的盐、核苷酸、有机酸、无机酸、包括有机酸盐和有机碱盐的有机盐、无机盐、苦味化合物、咖啡因、调味剂和调味成分、涩味化合物、蛋白质或蛋白质水解物、表面活性剂、乳化剂、类黄酮、醇类、聚合物以及它们的组合。
20.根据权利要求16或17所述的可消费产品，所述可消费产品还包含选自以下的至少一种功能性成分：皂苷、抗氧化剂、膳食纤维源、脂肪酸、维生素、葡糖胺、矿物质、防腐剂、水化剂、益生菌、益生元、体重管理剂、骨质疏松管理剂、植物雌激素、长链脂族饱和伯醇、植物甾醇以及它们的组合。
21.根据权利要求16或17所述的可消费产品，所述可消费产品还包含选自以下的化合物：甜菊单糖苷、甜菊单糖苷A、甜菊双糖苷A、甜菊双糖苷B、甜菊双糖苷C、甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷E、甜茶苷、杜尔可苷A、杜尔可苷C、杜尔可苷D、甜菊苷A、甜菊苷B、甜菊苷C、甜菊苷G、甜菊苷H、莱苞迪苷B2、莱苞迪苷A4、莱苞迪苷C、莱苞迪苷C3、莱苞迪苷C4、莱苞迪苷C5、莱苞迪苷C6、莱苞迪苷E3、莱苞迪苷E4、莱苞迪苷E5、莱苞迪苷E6、莱苞迪苷E7、莱苞迪苷D5、莱苞迪苷D6、莱苞迪苷D7、莱苞迪苷D8、莱苞迪苷H2、莱苞迪苷H3、莱苞迪苷H4、莱苞迪苷H5、莱苞迪苷H6、莱苞迪苷K、莱苞迪苷N2、莱苞迪苷N3、莱苞迪苷N4、莱苞迪苷N5、莱苞迪苷M3、莱苞迪苷A、莱苞迪苷A2、莱苞迪苷A3、莱苞迪苷AM、莱苞迪苷B、莱苞迪苷C2、莱苞迪苷D、莱苞迪苷D2、莱苞迪苷D3、莱苞迪苷D4、莱苞迪苷E、莱苞迪苷E2、莱苞迪苷F、莱苞迪苷F2、莱苞迪苷F3、莱苞迪苷G、莱苞迪苷H、莱苞迪苷I、莱苞迪苷I2、莱苞迪苷I3、莱苞迪苷J、莱苞迪苷K2、莱苞迪苷L、莱苞迪苷M、莱苞迪苷M2、莱苞迪苷N、莱苞迪苷O、莱苞迪苷O2、莱苞迪苷O3、莱苞迪苷夕、莱苞迪苷夕2、莱苞迪苷夕3、莱苞迪苷R、莱苞迪苷S、莱苞迪苷T、莱苞迪苷T1、莱苞迪苷U、莱苞迪苷U2、莱苞迪苷V、莱苞迪苷V2、莱苞迪苷W、莱苞迪苷W2、莱苞迪苷W3、莱苞迪苷Y、莱苞迪苷Z1、莱苞迪苷Z2、甜菊双糖苷、甜菊苷、甜菊苷D、甜菊苷E、甜菊苷E2、甜菊苷F、NSF-02、罗汉果苷V、罗汉果、阿洛酮糖、D-阿洛糖、D-塔格糖、赤藓糖醇、巴西甜蛋白、新橙皮苷二氢查耳酮、甘草酸及其盐、索马甜、紫苏葶、皮尔南甘素、无患子倍半萜苷、白云参苷、假秦艽苷-I、二甲基-六氢芴-二羧酸、相思子三萜苷、巴西甘草甜素、肉质雪胆皂苷、青钱柳苷、蝶卡苷、多足蕨苷A、巴西木素、贺兰甜精、菲络杜辛、菝葜苷、根皮苷、三叶苷、二氢黄酮醇、二氢槲皮素-3-乙酸酯、新落新妇苷、反式肉桂醛、莫那甜及其盐、落蕨素A、苏木精、莫奈林、欧亚水龙骨甜素、蝶卡苷A、蝶卡苷B、马槟榔甜蛋白、倍他丁、神秘果蛋白、仙茅甜蛋白、新仙茅甜蛋白、绿原酸、洋蓟酸、赛门苷、三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾、阿斯巴甜、阿力甜、糖精、甜精、纽甜、甘素、对硝基苯基脲基丙酸钠、爱德万甜、匙羹藤酸、北枳椇糖苷、大枣糖苷、降甜剂、谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、脯氨酸、丝氨酸、赖氨酸、色氨酸、麦芽糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖醇、木糖醇、肌醇、异麦芽酮糖醇、丙二醇、丙三醇、苏糖醇、半乳糖醇、氢化异麦芽酮糖、还原的异麦芽低聚糖、还原的低聚木糖、还原的低聚龙胆糖、还原的麦芽糖浆、还原的葡萄糖浆、氢化淀粉水解物、聚葡糖醇、糖醇、L-糖、L-山梨糖、L-阿拉伯糖、海藻糖、半乳糖、鼠李糖、各种环糊精、环状低聚糖、各种类型的麦芽糖糊精、葡聚糖、蔗糖、葡萄糖、核酮糖、果糖、苏糖、木糖、来苏糖、阿卓糖、甘露糖、艾杜糖、乳糖、麦芽糖、转化糖、异海藻糖、新海藻糖、异麦芽酮糖、赤藓糖、脱氧核糖、古洛糖、塔洛糖、赤藓酮糖、木酮糖、纤维二糖、支链淀粉、葡糖胺、甘露糖胺、葡糖醛酸、葡糖酸、葡糖酸内酯、阿比可糖、半乳糖胺、甜菜低聚糖、异麦芽低聚糖(异麦芽糖、异麦芽三糖、潘糖等)、低聚木糖(木三糖、木二糖等)、木糖末端低聚糖、低聚龙胆糖(龙胆二糖、龙胆三糖、龙胆四糖等)、黑曲霉寡糖、帕拉金糖低聚糖、低聚果糖(蔗果三糖、蔗果四糖等)、麦芽四醇、麦芽三醇、麦芽低聚糖(麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖等)、淀粉、菊粉、菊粉低聚糖、乳果糖、蜜二糖、棉子糖、异构化液体糖诸如高果糖玉米糖浆、偶联糖、大豆低聚糖、D-阿洛酮糖、D-核糖、L-葡萄糖、L-岩藻糖、D-松二糖、D-明串珠菌二糖。
22.一种用于增强包含甜味剂的饮料或食物产品的甜味的方法，所述方法包括：
a.提供包含甜味剂的饮料或食物产品；以及
b.添加包含根据权利要求1所述的莱苞迪苷N2的甜味增强剂，
其中莱苞迪苷N2以处于或低于甜味识别阈值的浓度存在。
23.一种用于增强包含甜味剂的饮料或食物产品的甜味的方法，所述方法包括：
a.提供包含甜味剂的饮料或食物产品；以及
b.添加包含根据权利要求2所述的莱苞迪苷O4的甜味增强剂，
其中莱苞迪苷O4以处于或低于甜味识别阈值的浓度存在。
24.一种用于改良饮料或食物产品的风味的方法，所述方法包括：
a.提供饮料或食物产品，以及
b.添加包含根据权利要求1所述的莱苞迪苷N2的组合物。
25.一种用于改良饮料或食物产品的风味的方法，所述方法包括：
a.提供饮料或食物产品，以及
b.添加包含根据权利要求2所述的莱苞迪苷O4的组合物。
26.一种用于抑制饮料或食物产品的发泡的方法，所述方法包括：
a.提供饮料或食物产品，以及
b.添加包含根据权利要求1所述的莱苞迪苷N2的抑泡剂。
27.一种用于抑制饮料或食物产品的发泡的方法，所述方法包括：
a.提供饮料或食物产品，以及
b.添加包含根据权利要求2所述的莱苞迪苷O4的抑泡剂。
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