JP2016104751A - Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用 - Google Patents

Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2016104751A
JP2016104751A JP2015240754A JP2015240754A JP2016104751A JP 2016104751 A JP2016104751 A JP 2016104751A JP 2015240754 A JP2015240754 A JP 2015240754A JP 2015240754 A JP2015240754 A JP 2015240754A JP 2016104751 A JP2016104751 A JP 2016104751A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
seq
trop
sequence
region
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2015240754A
Other languages
English (en)
Other versions
JP6157575B2 (ja
Inventor
リュー シュ−ホイ
Shu-Hui Liu
リュー シュ−ホイ
ホー ウェイ−フシェン
Wei-Hsien Ho
ホー ウェイ−フシェン
ストラップ パヴェル
Strop Pavel
ストラップ パヴェル
グラズィーナ ドリュウォルスカ マグダレーナ
Grazyna Dorywalska Magdalena
グラズィーナ ドリュウォルスカ マグダレーナ
ラジュパル アーヴィンド
Rajpal Arvind
ラジュパル アーヴィンド
ルイス シェルトン デイヴッド
Louis Shelton David
ルイス シェルトン デイヴッド
トラン トーマス−トアン
Tran Thomas-Toan
トラン トーマス−トアン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Rinat Neuroscience Corp
Original Assignee
Rinat Neuroscience Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rinat Neuroscience Corp filed Critical Rinat Neuroscience Corp
Publication of JP2016104751A publication Critical patent/JP2016104751A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6157575B2 publication Critical patent/JP6157575B2/ja
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6859—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from liver or pancreas cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6863—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from stomach or intestines cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3015—Breast
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3023—Lung
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/303—Liver or Pancreas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3046—Stomach, Intestines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

【課題】高親和性、高特異性、および強力な細胞傷害活性または殺腫瘍／腫瘍阻止／腫瘍退縮活性を有する栄養膜細胞表面抗原−２（Ｔｒｏｐ−２）モノクローナル抗体。
【解決手段】Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する抗体、抗体コンジュゲート、抗体コード核酸、およびこのような抗体を得る方法、さらに、大腸、食道、胃、頭頸部、肺、卵巣、または膵臓のがんなどを治療するためのこれらの抗体およびＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを使用するための治療法の提供。
【選択図】なし

Description

関連出願
本願は、２０１１年１１月１１日に出願された米国仮出願第６１／５５９，０１５号、２０１２年４月３０日に出願された米国仮出願第６１／６４０，６４１号、および２０１２年１０月２３日に出願された米国仮出願第６１／７１７，２８８号の利益を主張するものである。これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
本発明は、栄養膜細胞表面抗原（Ｔｒｏｐ−２）に特異的に結合する抗体、例えば、全長抗体またはこれらの抗原結合断片に関する。本発明はさらに、Ｔｒｏｐ−２抗体を含む抗体コンジュゲート（例えば、抗体−薬剤−コンジュゲート）、Ｔｒｏｐ−２抗体を含む組成物、ならびにＴｒｏｐ−２発現に関連する状態（例えば、がん）を治療するためにＴｒｏｐ−２抗体およびこれらのコンジュゲートを使用する方法に関する。
栄養膜細胞表面抗原（Ｔｒｏｐ−２）は、Ｍ１Ｓ１、ＧＡ７３３−１（胃抗原７３３−１）、ＥＧＰ−１（上皮糖タンパク質−１）、またはＴＡＣＳＴＤ２（腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー）とも呼ばれ、ヒト胎盤栄養膜内で最初に同定され、引き続いて、ほとんどのヒト癌において高度に発現されることが判明したが、正常な成人組織内で制限または限定された発現のみを示した細胞表面糖タンパク質である。例えば、Ｖａｒｕｇｈｅｓｅら、Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１２２：１７１〜１７７、２０１１を参照。Ｔｒｏｐ−２は、種間で高度に保存されている。例えば、ヒトＴｒｏｐ−２タンパク質は、マウスＴｒｏｐ−２タンパク質と７９％の同一性を共有する。Ｃｕｂａｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ、９：２５３、２０１０を参照。Ｔｒｏｐ−２の生物学的役割は、依然として不明確であるが、様々な研究により、Ｔｒｏｐ−２の過剰発現は、様々なヒト癌、例えば、大腸がん、卵巣がん、および膵がんなどにおける腫瘍の悪性度の増大、転移、および予後不良と相関することが示されている。例えば、Ｆａｎｇら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｄｉｓ、２４：８７５〜８８４、２００９；Ｂｉｇｎｏｔｔｉら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、４６：９４４〜９５３、２０１０；およびＦｏｎｇら、Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ、９９：１２９０〜１２９５、２００８を参照。諸研究により、Ｔｒｏｐ−２は、がん細胞の増殖、遊走、浸潤、および生存における重要な意義を有するＥＲＫ１／２ ＭＡＰＫ経路を活性化することによって、少なくとも部分的に腫瘍病因に寄与することも示されている。Ｃｕｂａｓら、２０１０、上記を参照。
上皮腫瘍細胞によるＴｒｏｐ−２の過剰発現、およびその膜貫通位置のため、Ｔｒｏｐ−２はがん免疫療法の魅力的な標的である。したがって、Ｔｒｏｐ−２、特にヒトＴｒｏｐ−２に対する高親和性抗体は、ヒト患者におけるがん治療の優れた治療剤を築くはずである。様々なＴｒｏｐ−２抗体が開示されているが（例えば、米国特許第７，４２０，０４１号（抗体ＡＲ４７Ａ６．４．２）、米国特許第５，８４０，８５４号（抗体ＢＲ１１０）、米国特許第６，６５３，１０４号（抗体ＲＳ７）、米国特許第７，５１７，９６４号（抗体ＲＳ７）、ＵＳ２０１２／０２３７５１８を参照）、高親和性、高特異性、および強力な細胞傷害活性または殺腫瘍／腫瘍阻止／腫瘍退縮活性を有するモノクローナル抗体を同定することが非常に困難であった。改善された効力および安全性プロファイルを有し、ヒト患者に使用するのに適した、Ｔｒｏｐ−２に向けられた抗体および他の免疫療法剤（抗体−薬剤コンジュゲートなど）が依然として必要である。
本明細書に開示の発明は、Ｔｒｏｐ−２に結合する抗体および抗体コンジュゲート（例えば、抗体−薬剤コンジュゲート）を対象とする。一態様では、本発明は、表面プラズモン共鳴によって測定して約６．５ｎＭ以下の一価抗体結合親和性（ＫＤ）でヒトＴｒｏｐ−２（配列番号２７）のドメイン３（例えば、アミノ酸残基１５３〜２０６）およびドメイン４（例えば、アミノ酸残基２０９〜２７４）に特異的に結合する抗体または抗体コンジュゲートを提供する。
別の態様では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、ａ）（ｉ）配列ＳＹＧＶＨ（配列番号３０）、ＧＧＳＩＳＳＹ（配列番号３６）、もしくはＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨ（配列番号３７）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列ＶＩＷＴＸ１ＧＸ２ＴＤＹＮＳＡＬＭＸ３（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＳもしくはＶであり、Ｘ３は、ＳもしくはＧである）（配列番号４９）、もしくはＷＴＸ１ＧＸ２（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＳもしくはＶである）（配列番号５０）を含むＶＨ ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列ＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹ（配列番号３５）、ＤＹＤＲＹＴＸ１ＤＹ（式中、Ｘ１は、ＥもしくはＭである）（配列番号８２）、またはＤＹＤＲＹＴＸ１ＤＹ（式中、Ｘ１は、任意の天然に存在するアミノ酸、例えば、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、もしくはＶである）（配列番号８３）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域相補性決定領域、ならびに／またはｂ）（ｉ）配列ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＸ１ＹＳＹＭＨ（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｌ、もしくはＮである）（配列番号６３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号５５）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＶＬＱＨＳＲＥＬＰＹＴ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域相補性決定領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列ＱＶＱＬＫＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＨＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＴＧＧＳＴＤＹＮＳＡＬＭＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号２）の重鎖可変領域、および配列ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＴＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１）の軽鎖可変領域を含まない。
別の態様では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号５、８４、もしくは８５に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／または配列番号３もしくは６に示したＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、（ｉ）配列ＳＹＧＶＨ（配列番号３０）、ＧＧＳＩＳＳＹ（配列番号３６）、またはＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨ（配列番号３７）を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＶＩＷＴＳＧＶＴＤＹＮＳＡＬＭＧ（配列番号３８）、またはＷＴＳＧＶ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹ（配列番号３５）、またはＤＹＤＲＹＴＸ１ＤＹ（式中、Ｘ１は、ＥもしくはＭである）（配列番号８２）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、（ｉ）配列ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨ（配列番号５４）またはＲＡＳＫＳＶＳＴＳＬＹＳＹＭＨ（配列番号５７）を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号５５）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＨＳＲＥＬＰＹＴ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）（ｉ）配列ＳＹＧＶＨ（配列番号３０）、ＧＧＳＩＳＳＹ（配列番号３６）、またはＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨ（配列番号３７）を含むＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＶＩＷＴＳＧＶＴＤＹＮＳＡＬＭＧ（配列番号３８）またはＷＴＳＧＶ（配列番号３９）を含むＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹ（配列番号３５）、ＤＹＤＲＹＴＭＤＹ（配列番号９９）、またはＤＹＤＲＹＴＥＤＹ（配列番号１００）を含むＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ、ならびにｂ）（ｉ）配列ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨ（配列番号５４）またはＲＡＳＫＳＶＳＴＳＬＹＳＹＭＨ（配列番号５７）を含むＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号５５）を含むＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＨＳＲＥＬＰＹＴ（配列番号５６）を含むＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号５、８４、もしくは８５に示した配列、またはＣＤＲ内にない残基中に１つもしくはいくつかの保存的アミノ酸置換を有するバリアントを含み、かつ／またはＶＬ領域は、配列番号３、６に示したアミノ酸配列、またはＣＤＲ内にないアミノ酸中に１つもしくはいくつかのアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６６に示した配列を含む軽鎖および／または配列番号６５に示した配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８７２を有する発現ベクターによって生成されるＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８７１を有する発現ベクターによって生成されるＶＬ領域を含む。
別の態様では、本発明は、表面プラズモン共鳴によって測定して約３５ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）でヒトＴｒｏｐ−２（配列番号２７）のドメイン１（例えば、アミノ酸残基２７〜７１）に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、ａ）（ｉ）配列ＳＹＷＩＮ（配列番号４０）、ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４１）、もしくはＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮ（配列番号４２）を含む重鎖可変（ＶＨ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＮＩＸ１ＰＳＤＳＹＳＮＹＮＸ２ＫＦＫＤ（式中、Ｘ１は、ＹもしくはＦであり、Ｘ２は、ＱもしくはＫである）（配列番号５１）、もしくはＸ１ＰＳＤＳＹ（式中、Ｘ１は、ＹもしくはＦである）（配列番号５２）を含む、ＶＨ ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列ＧＳＸ１ＦＤＹ（式中、Ｘ１は、ＳもしくはＧである）（配列番号５３）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域相補性決定領域、ならびに／またはｂ）（ｉ）配列ＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨ（配列番号５９）を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号６０）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列Ｘ１ＱＳＸ２ＳＷＰＦＴ（Ｘ１は、ＱもしくはＳであり、Ｘ２は、ＮもしくはＦである）（配列番号６４）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域相補性決定領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号１３に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／または配列番号１２に示したＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、（ｉ）配列ＳＹＷＩＮ（配列番号４０）、ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４１）、またはＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮ（配列番号４２）を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＮＩＦＰＳＤＳＹＳＮＹＮＫＫＦＫＤ（配列番号４６）、またはＦＰＳＤＳＹ（配列番号４７）を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＧＳＧＦＤＹ（配列番号４８）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、（ｉ）配列ＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨ（配列番号５９）を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号６０）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＳＱＳＦＳＷＰＦＴ（配列番号６２）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）（ｉ）配列ＳＹＷＩＮ（配列番号４０）、ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４１）、またはＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮ（配列番号４２）を含むＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＮＩＦＰＳＤＳＹＳＮＹＮＫＫＦＫＤ（配列番号４６）またはＦＰＳＤＳＹ（配列番号４７）を含むＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＧＳＧＦＤＹ（配列番号４８）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ、ならびにｂ）（ｉ）配列ＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨ（配列番号５９）を含むＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号６０）を含むＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＳＱＳＦＳＷＰＦＴ（配列番号６２）を含むＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１３に示した配列、またはＣＤＲ内にない残基中に１つもしくはいくつかの保存的アミノ酸置換を有するバリアントを含み、かつ／またはＶＬ領域は、配列番号１２に示したアミノ酸配列、またはＣＤＲ内にないアミノ酸中に１つもしくはいくつかのアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６８に示した配列を含む軽鎖、および配列番号６７に示した配列を含む重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。
いくつかの実施形態では、抗体は定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスのものである。いくつかの実施形態では、抗体は、グリコシル化された定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、１つまたは複数のヒトＦｃγ受容体への結合親和性が増大した定常領域を含む。
別の態様では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合し、本明細書に記載の抗体（例えば、ｍ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＮ、ｍ６Ｇ１１、ｈ６Ｇ１１、またはｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦ）と競合する単離抗体を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧと競合し、表面プラズモン共鳴によって測定して約６．５ｎＭ以下の一価抗体結合親和性（ＫＤ）を有する。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、抗体または抗原結合断片が、細胞毒性剤、免疫調節剤、造影剤、治療用タンパク質、バイオポリマー、およびオリゴヌクレオチドからなる群から選択される作用物質にコンジュゲートしている、コンジュゲートを提供する。いくつかの実施形態では、作用物質は、細胞毒性剤（例えば、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）または他のオーリスタチン）である。
別の態様では、本発明は、抗体の特定の部位で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグを含む単離抗体を提供する。いくつかの実施形態では、タグは、アミノ酸グルタミン（Ｑ）、またはアミノ酸配列ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号８１）、ＬＬＱ、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｇ、Ｋであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号８８）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、特定の部位で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグ、例えば、Ｇ、ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号８１）、ＬＬＱ、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｇ、Ｋであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号８８）などを含む。
一変形形態では、本発明は、アシルドナーグルタミン含有タグ、および、アミノ酸欠失、挿入、置換、突然変異、またはこれらの任意の組合せである、抗体の２２２位、３４０位、または３７０位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）のアミノ酸修飾を含む単離抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、Ｔｒｏｐ−２抗体の特定の部位（例えば、重鎖もしくは軽鎖のカルボキシル末端、または別の部位）で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、Ｑ、ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号８１）、ＬＬＱ、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｇ、Ｋであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号８８））、および抗体の２２２位、３４０位、または３７０位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸修飾は、リシンからアルギニンへの置換である。
別の態様では、本発明は、式：抗体−（アシルドナーグルタミン含有タグ）−（リンカー）−（細胞毒性剤）を有する、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、アシルドナーグルタミン含有タグが、抗体または抗原結合断片の特定の部位（例えば、重鎖もしくは軽鎖のカルボキシル末端または別の部位）で遺伝子工学的に改変されており、リンカー（例えば、１種または複数の反応性アミン（例えば、第一級アミンＮＨ２）を含有するリンカー）にコンジュゲートしており、リンカーが、細胞毒性剤（例えば、ＭＭＡＤまたは他のオーリスタチン）にコンジュゲートしている、コンジュゲートを提供する。
いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、１）抗体−ＬＬＱＧＡ−（アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル）−０１０１（式中、アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニルは、ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣであり、０１０１は、２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドである）、２）抗体−ＬＬＱＧＡ−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ、３）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−０１０１、４）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ、５）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−０１０１、および６）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、２２２位でリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、抗体の重鎖のＣ末端でアミノ酸リシン（Ｋ）欠失を含む。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、Ｎ２９７Ｑ位およびＫ２２２Ｒ位におけるアミノ酸置換、アミノ−ＰＥＧ６−プロピオニルを含むリンカー、および細胞毒性剤（例えば、ＭＭＡＤまたは他のオーリスタチン）を含む、コンジュゲートを提供する。
別の態様では、本発明は、治療有効量の本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲート、および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体をコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体を組換え産生する単離宿主細胞を提供する。
別の態様では、本発明は、対象におけるＴｒｏｐ−２発現と関連した状態を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、状態は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、膀胱、乳房、子宮頸部、絨毛癌、大腸、食道、胃、グリア芽細胞腫、頭頸部、腎臓、肺、口腔、卵巣、膵臓、前立腺のがん、および皮膚がんからなる群から選択される。
別の態様では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍を有する対象における腫瘍増殖または進行を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
別の態様では、本発明は、対象におけるＴｒｏｐ−２発現がん細胞の転移を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
別の態様では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍を有する対象における腫瘍退縮を誘導する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはコンジュゲートは、個体において非経口投与することができる。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、配列ＱＶＱＬＫＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＨＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＴＧＧＳＴＤＹＮＳＡＬＭＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号２）の重鎖可変領域、および配列ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＴＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１）の軽鎖可変領域を含まない。
標的発現Ｃｏｌｏ２０５異種移植片モデルにおける様々なＴｒｏｐ−２マウス抗体（７Ｅ６、１５Ｅ２、および１８Ｂ１）のｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を表す図である。 図２Ａは、標的発現Ａ４３１異種移植片モデルにおける様々なＴｒｏｐ−２マウス抗体（７Ｅ６、１５Ｅ２、および１８Ｂ１）のｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を表す図である。 図２Ｂは、用量−応答試験における、Ｔｒｏｐ−２抗体７Ｅ６によるＡ４３１異種移植片腫瘍増殖の阻害を表す図である。 図２Ｃは、Ａ４３１異種移植片モデルにおける、Ｔｒｏｐ−２抗体６Ｇ１１、７Ｅ６、および１８Ｂ１によるＡ４３１異種移植片腫瘍増殖の阻害を表す図である。 Ａ４３１細胞内のキメラおよびヒト化Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６抗体のＡＤＣＣ活性を表す図である。７Ｅ６は、キメラＴｒｏｐ−２ ７Ｅ６抗体（例えば、配列番号２および３を含む抗体）に対応し、ｈ７Ｅ６−ＷＴは、配列番号４および３を含む抗体に対応し、ｈ７Ｅ６−ＳＶＧは、配列番号５および３を含む抗体に対応し、ｈ７Ｅ６−Ｌは、配列番号４および６を含む抗体に対応し、ｈ７Ｅ６−ＳＶＧＬは、配列番号５および６を含む抗体に対応し、抗ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）は、陽性対照抗体に対応する。 ヒトＴｒｏｐ−１（配列番号２９）とヒトＴｒｏｐ−２（配列番号２７）との間のアミノ酸配列のアラインメント、およびコンセンサス配列（配列番号６９）を表す図である。 ヒトＴｒｏｐ−２（配列番号２７）とマウスＴｒｏｐ−２（配列番号２８）との間のアミノ酸配列のアラインメント、およびコンセンサス配列（配列番号７０）を表す図である。 図６Ａは、Ｔｒｏｐ−２抗体ｈ７Ｅ６（配列番号４）、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ（配列番号５）、およびｍ７Ｅ６（配列番号２）の重鎖可変領域のアミノ酸配列のアラインメント、ならびにこれらのコンセンサス配列（配列番号７１）を表す図である。 図６Ｂは、Ｔｒｏｐ−２抗体ｈ７Ｅ６＿ＶＬ（配列番号３）、ｈ７Ｅ６＿ＶＬ＿Ｌ（配列番号６）、ｈ７Ｅ６＿ＶＬ＿Ｎ（配列番号７）、およびｍ７Ｅ６＿ＶＬ（配列番号１）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列のアラインメント、ならびにこれらのコンセンサス配列（配列番号７２）を表す図である。 図７Ａは、Ｔｒｏｐ−２抗体ｈ６Ｇ１１（配列番号１１）、ｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦ（配列番号１３）、およびｍ６Ｇ１１（配列番号９）の重鎖可変領域のアミノ酸配列のアラインメント、ならびにこれらのコンセンサス配列（配列番号７３）を表す図である。 図７Ｂは、Ｔｒｏｐ−２抗体ｈ６Ｇ１１（配列番号１０）、ｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦ（配列番号１２）、およびｍ６Ｇ１１（配列番号８）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列のアラインメント、ならびにこれらのコンセンサス配列（配列番号７４）を表す図である。 ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤにコンジュゲートしたキメラ（７Ｅ６）Ｔｒｏｐ−２抗体が、ＢｘＰＣ３異種移植片モデルにおいて、長期間の腫瘍退縮を誘導したことを表す図である。ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤは、アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル−モノメチルオーリスタチンＤに対応する。ＬＣＱ０３およびＴＧ６はそれぞれ、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ、配列番号７８および７９に対応する。ＮＮＣ−ＴＧ１−ｖｃＭＭＡＤは、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ（配列番号７５）およびｖｃＭＭＡＤにコンジュゲートした対照抗体を表す。 図９Ａは、ｖｃ０１０１にコンジュゲートしたヒト化（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）Ｔｒｏｐ−２抗体が、膵臓腫瘍ＢｘＰＣ３異種移植片モデルにおいて、腫瘍退縮を誘導したことを表す図である。ｖｃ０１０１は、ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１（アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル−（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）に対応する。ＴＧ６は、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ、配列番号７９に対応する。 図９Ｂは、２９７位および２２２位でアミノ酸置換を有し、ＰＥＧ６−ＭＭＡＤにコンジュゲートしたヒト化（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）Ｔｒｏｐ−２抗体が、膵臓腫瘍ＢｘＰＣ３異種移植片モデルにおいて、腫瘍退縮を誘導したことを表す図である。ＰＥＧ６−ＭＭＡＤは、（プロピレングリコール）６−プロピオニル−ＭＭＡＤに対応する。 図９Ｃは、２２２位でアミノ酸置換を有し、ｖｃ０１０１にコンジュゲートしたヒト化（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）Ｔｒｏｐ−２抗体が、膵臓腫瘍ＢｘＰＣ３異種移植片モデルにおいて、腫瘍退縮を誘導したことを表す図である。ＬＣＱ０４は、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ、配列番号７９に対応する。ｖｃ０１０１は、ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１に対応する。 ｖｃ０１０１にコンジュゲートしたヒト化（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）Ｔｒｏｐ−２抗体が、大腸腫瘍Ｃｏｌｏ２０５異種移植片モデルにおいて、腫瘍退縮を誘導したことを表す図である。ＴＧ６およびＬＣＱ０３はそれぞれ、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ、配列番号７９および７８に対応する。 ｖｃ０１０１にコンジュゲートしたヒト化（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）Ｔｒｏｐ−２抗体が、卵巣ＰＤＸ Ｏｖａ１９６７５６異種移植片モデルにおいて、腫瘍退縮を誘導したことを表す図である。ＴＧ６は、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ、配列番号７９に対応する。 図１２Ａは、ｖｃ０１０１にコンジュゲートしたヒト化（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）Ｔｒｏｐ−２抗体が、Ｐａｎ０１４６膵臓ＰＤＸモデルにおいて、腫瘍退縮を誘導するのにゲムシタビンより優れた効力を有することを示す図である。ＴＧ６は、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグ、配列番号７９に対応する（図１２Ｂと同じ）。 図１２Ｂは、ｖｃ０１０１にコンジュゲートしたヒト化（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）Ｔｒｏｐ−２抗体の継続した投薬が、膵臓ＰＤＸ Ｐａｎ０１４６異種移植片モデルにおいて、持続的腫瘍退縮をもたらしたことを示す図である。 単回投与の、ＰＥＧ６−ＭＭＡＤとコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ２抗体が、膵臓Ｐａｎ１４４６０７ ＰＤＸモデルにおいて、腫瘍退縮を誘導したことを示す図である。 単回投与の、ＰＥＧ６−ＭＭＡＤとコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ２抗体が、膵臓Ｐａｎ０１３５ ＰＤＸモデルにおいて、腫瘍退縮を誘導したことを示す図である。
本明細書に開示の発明は、Ｔｒｏｐ−２（例えば、ヒトＴｒｏｐ−２）に特異的に結合する抗体および抗体コンジュゲート（例えば、抗体−薬剤コンジュゲート）を提供する。本発明は、これらの抗体をコードするポリヌクレオチド、これらの抗体を含む組成物、ならびにこれらの抗体を作製および使用する方法も提供する。本発明は、対象におけるＴｒｏｐ−２発現に関連する状態、例えば、がん（例えば、大腸、胃、頭頸部、肺、卵巣、および膵臓のがん）などを治療するための方法も提供する。
一般的な技法
本発明の実施では、別段の指定のない限り、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の慣例的な技法を使用し、これらは、当技術分野の技術内である。このような技法は、文献、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ． ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などで完全に説明されている。
定義
「抗体」は、自己の可変領域に位置した少なくとも１つの抗原認識部位によって、標的、例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどに特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書において、この用語は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、これらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、ならびにドメイン抗体（例えば、サメおよびラクダ科の動物の抗体を含む）、ならびに抗体を含む融合タンパク質、ならびに抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾構成も包含する。抗体には、任意のクラスの抗体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＭ（またはこれらのサブクラス）などが含まれ、抗体は、任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンの５つの主要クラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分類することができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および３次元構成は、周知である。
用語の抗体の「抗原結合断片」または「抗原結合部分」は、本明細書において、所与の抗原（例えば、Ｔｒｏｐ−２）に特異的に結合する能力を保持するインタクト抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、インタクト抗体の断片によって実施することができる。用語の抗体の「抗原結合断片」の中に包含される結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：５４４〜５４６、１９８９）、ならびに単離相補性決定領域（ＣＤＲ）がある。
標的（例えば、Ｔｒｏｐ−２タンパク質）に「選択的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書で互換的に使用する）抗体、抗体コンジュゲート、またはポリペプチドは、当技術分野で十分理解された用語であり、このような特異的または選択的な結合を決定する方法も当技術分野で周知である。分子は、これが、特定の細胞または物質と、代替の細胞または物質と反応または会合するより長い持続時間および／またはより大きい親和性を伴って、より頻繁に、より急速に反応または会合する場合、「特異的結合」または「選択的結合」を呈すると言われる。抗体は、これが、他の物質に結合するより、大きい親和性、結合活性を伴って、より容易に、かつ／またはより長い持続時間を伴って結合する場合、標的に「特異的に結合し」または「選択的に結合する」。例えば、あるＴｒｏｐ−２エピトープに特異的または選択的に結合する抗体は、これが、他のＴｒｏｐ−２エピトープまたは非Ｔｒｏｐ−２エピトープに結合するより、大きい親和性、結合活性を伴って、より容易に、かつ／またはより長い持続時間を伴ってこのエピトープ結合する抗体である。この定義を読むことによって、例えば、第１標的に特異的または選択的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２標的に特異的または選択的に結合しても、しなくてもよいことも理解される。したがって、「特異的結合」または「選択的結合」は、必ずしも排他的結合を必要としない（しかし、これは、排他的結合を含むことができる）。必ずではないが一般に、結合への言及は、選択的結合を意味する。
抗体の「可変領域」は、単独または組合せで、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。当技術分野で公知であるように、重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても公知である３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲによって近接して一緒に保持され、他の鎖からのＣＤＲは、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの技法、すなわち、（１）異種間配列変異性に基づく手法（すなわち、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、（５版、１９９１、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ））、および（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づく手法（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら、１９９７、Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２７３：９２７〜９４８）がある。本明細書において、ＣＤＲは、いずれかの手法または両手法の組合せによって定義されるＣＤＲを指すことができる。
可変ドメインの「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方の蓄積、ＡｂＭ、接触、および／もしくはコンホメーション定義、または当技術分野で周知のＣＤＲの決定の任意の方法に従って同定される可変領域内のアミノ酸残基である。抗体ＣＤＲは、Ｋａｂａｔらによって最初に定義された超可変領域として同定することができる。例えば、Ｋａｂａｔら、１９９２、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、ＮＩＨ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．を参照。ＣＤＲの位置は、Ｃｈｏｔｈｉａらによって最初に記載された構造的ループ構造として同定することもできる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７〜８８３、１９８９を参照。ＣＤＲ同定の他の手法としては、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの間の妥協案であり、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェア（現在ではＡｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用して導出される「ＡｂＭ定義」、またはＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２〜７４５、１９９６に示された、観察される抗原接触に基づくＣＤＲの「接触定義」がある。ＣＤＲの「コンホメーション定義」と本明細書で呼ぶ別の手法では、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基として同定することができる。例えば、Ｍａｋａｂｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６〜１１６６、２００８を参照。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記手法の１つに厳密に従わない場合があるが、それにもかかわらず、Ｋａｂａｔ ＣＤＲの少なくとも一部と重なることになり、しかしこれらは、特定の残基もしくは残基の群、またはさらにはＣＤＲ全体が抗原結合に有意にインパクトを与えないという予測または実験的知見を踏まえて短くし、または長くすることができる。本明細書において、ＣＤＲは、手法の組合せを含めて、当技術分野で公知の任意の手法によって定義されるＣＤＲを指すことができる。本明細書で使用される方法は、これらの手法のいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができる。複数のＣＤＲを含む任意の所与の実施形態について、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、拡張、ＡｂＭ、接触、および／またはコンホメーション定義のいずれかに従って定義することができる。
本明細書において、「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、軽微な量で存在し得る可能な天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一抗原部位に向けられている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に向けられた異なる抗体を一般に含むポリクローナル抗体配合物と対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一決定基に向けられている。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とすると解釈されるべきでない。例えば、本発明によって使用されるモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５、１９７５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができ、または米国特許第４，８１６，５６７号に記載されたものなどの組換えＤＮＡ法によって作製することができる。モノクローナル抗体は、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５４、１９９０に記載の技法を使用して生成されるファージライブラリーから単離することもできる。
本明細書において、「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはこれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、もしくは抗体の他の抗原結合部分配列など）である、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する、非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、またはウサギなどのＣＤＲに由来する残基と置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲもしくはフレームワーク配列にも見つからないが、抗体性能をさらに洗練および最適化するために含められる残基を含むことができる。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つ、および一般に２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むことになる。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、一般にヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含むことになる。ＷＯ９９／５８５７２に記載されたように修飾されたＦｃ領域を有する抗体が好適である。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体に対して変更され、元の抗体からの１つまたは複数のＣＤＲ「に由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる、１つまたは複数のＣＤＲ（ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、またはＣＤＲ Ｈ３）を有する。
本明細書において、「ヒト抗体」は、ヒトによって産生され、かつ／または当業者に公知もしくは本明細書に開示のヒト抗体を作製するための技法のいずれかを使用して作製された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義には、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体が含まれる。１つのこのような例は、マウス軽鎖ポリペプチドおよびヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、様々な当技術分野で公知の技法を使用して生成することができる。一実施形態では、ヒト抗体は、ファージライブラリーから選択され、この場合そのファージライブラリーは、ヒト抗体を発現する（Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：３０９〜３１４、１９９６；Ｓｈｅｅｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）、９５：６１５７〜６１６２、１９９８；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１、１９９１；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１、１９９１）。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座が内因性遺伝子座の代わりに遺伝子導入で導入された動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活化されたマウスの免疫化によっても作製することができる。この手法は、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、および同第５，６６１，０１６号に記載されている。代わりに、ヒト抗体は、標的抗原に対する抗体を生成するヒトＢリンパ球（このようなＢリンパ球は、個体から、もしくはｃＤＮＡの単細胞クローニングから回収することができ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫化されている場合がある）を不死化することによって調製することができる。例えば、Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁、１９８５；Ｂｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６〜９５、１９９１；および米国特許第５，７５０，３７３号を参照。
用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体などを指すように意図されている。
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、任意の長さの、好ましくは比較的短いアミノ酸（例えば、１０〜１００アミノ酸）の鎖を指すのに本明細書で互換的に使用される。鎖は、直鎖状であっても分枝状であってもよく、修飾アミノ酸を含むことができ、かつ／または非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語は、天然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識コンポーネントとのコンジュゲーションなどの任意の他の操作もしくは修飾によって修飾されたアミノ酸鎖も包含する。例えば、アミノ酸の１つまたは複数の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、および当技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドもこの定義の中に含まれる。ポリペプチドは、単鎖または会合鎖として存在し得ることが理解される。
「一価抗体」は、１分子当たり１つの抗原結合部位を含む（例えば、ＩｇＧまたはＦａｂ）。場合によっては、一価抗体は、複数の抗原結合部位を有し得るが、結合部位は、異なる抗原からのものである。
「二価抗体」は、１分子当たり２つの抗原結合部位を含む（例えば、ＩｇＧ）。場合によっては、２つの結合部位は、同じ抗原特異性を有する。しかし、二価抗体は、二重特異性であり得る。
「二重特異性」、「デュアル特異性」、または「二機能性」抗体は、２つの異なる抗原結合部位を有するハイブリッド抗体である。二重特異性抗体の２つの抗原結合部位は、同じまたは異なるタンパク質標的上に存在し得る２つの異なるエピトープに結合する。
本発明の抗体は、当技術分野で周知の技法、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、またはこのような技術もしくは当技術分野で直ちに分かる他の技術の組合せを使用して生成することができる。（例えば、Ｊａｙａｓｅｎａ，Ｓ．Ｄ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、４５：１６２８〜５０、１９９９、およびＦｅｌｌｏｕｓｅ，Ｆ．Ａ．ら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．、３７３（４）：９２４〜４０、２００７を参照）。
当技術分野で公知であるように、本明細書で互換的に使用する「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドの鎖を指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、および／またはこれらの類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって鎖中に組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチド、およびこれらの類似体などを含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、鎖をアセンブリーする前または後に付与することができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチドコンポーネントによって中断される場合がある。ポリヌクレオチドは、標識コンポーネントとのコンジュゲーションなどによって、重合後にさらに修飾することができる。他のタイプの修飾としては、例えば、「キャップ」、天然に存在するヌクレオチドのうちの１つまたは複数の類似体との置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電連結（例えば、ホスホン酸メチル、ホスホトリエステル、ホスホロアミダート、カルバメートなど）を有するもの、および荷電した連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を有するもの、ペンダント部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リシンなど）などを含有するもの、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレンなど）を有するもの、キレーター（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾連結を有するもの（例えば、αアノマー核酸など）など、ならびにポリヌクレオチド（複数可）の無修飾形態がある。さらに、糖内に通常存在するヒドロキシル基のいずれも、例えば、ホスホネート基、リン酸基によって置き換え、標準的な保護基によって保護し、または活性化して追加のヌクレオチドへの追加の連結を準備することができ、または固体支持体にコンジュゲートすることができる。５’および３’末端ＯＨを、リン酸化し、またはアミンもしくは１〜２０炭素原子の有機キャッピング基部分で置換することができる。他のヒドロキシルも、誘導体化して標準的な保護基にすることができる。ポリヌクレオチドは、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−、または２’−アジド−リボース、炭素環糖類似体、α−またはβ−アノマー糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロース、またはリキソースなど、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体、およびメチルリボシドなどの脱塩基ヌクレオシド類似体を含めた、当技術分野で一般に公知であるリボースまたはデオキシリボース糖の類似形態も含有し得る。１つまたは複数のホスホジエステル連結を、代替の連結基によって置き換えることができる。これらの代替の連結基としては、それだけに限らないが、ホスフェートが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ、またはＣＨ２（「ホルムアセタール」）（式中、各ＲまたはＲ’は、独立して、Ｈ、またはエーテル（−Ｏ−）連結、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、もしくはアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）を含有してもよい置換もしくは非置換のアルキルである（１〜２０Ｃ））によって置き換えられている実施形態がある。ポリヌクレオチド中のすべての連結が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含めた、本明細書で参照されるすべてのポリヌクレオチドに当てはまる。
当技術分野で公知であるように、抗体の「定常領域」は、単独または組合せで、抗体軽鎖の定常領域、または抗体重鎖の定常領域を指す。
本明細書において、「実質的に純粋な」は、少なくとも５０％純粋な（すなわち、混入物を含まない）、より好ましくは、少なくとも９０％純粋な、より好ましくは、少なくとも９５％純粋な、さらにより好ましくは、少なくとも９８％純粋な、最も好ましくは、少なくとも９９％純粋な材料を指す。
「宿主細胞」には、ポリヌクレオチドインサートを取り込むためのベクター（複数可）のレシピエントであり得る、またはそれであった個々の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には、単一宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、天然の、偶発的な、または意図的な突然変異に起因して、必ずしも元の親細胞と完全に同一（形態において、またはゲノムＤＮＡ相補性において）でない場合がある。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチド（複数可）で、ｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞が含まれる。
当技術分野で公知であるように、用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を画定するのに使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域であっても、バリアントＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は、様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端まで伸びるように定義される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９９１。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般に、２つの定常領域、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。
当技術分野で使用される場合、「Ｆｃ受容体」および「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述する。好適なＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好適なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）に結合するものであり、好適なＦｃＲとしては、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体があり、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的にスプライスされた形態を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体としては、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）があり、これらは、これらの細胞質ドメインにおいて主に異なる同様のアミノ酸配列を有する。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９：４５７〜９２、１９９１；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４：２５〜３４、１９９４；ならびにｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．、１２６：３３０〜４１、１９９５に総説されている。「ＦｃＲ」には、新生児受容体、ＦｃＲｎも含まれ、これは、母系性ＩｇＧの胎児への移動に関与する（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１７：５８７、１９７６；およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：２４９、１９９４）。
用語「競合する」は、抗体に関して本明細書で使用する場合、第１抗体またはその抗原結合断片（もしくは一部）が、第２抗体またはその抗原結合部分の結合と十分に同様の様式でエピトープに結合し、その結果、第１抗体のその同族エピトープとの結合の結果が、第２抗体の非存在下での第１抗体の結合と比較して、第２抗体の存在下で検出可能な程度に減少することを意味する。第２抗体のそのエピトープへの結合も第１抗体の存在下で検出可能な程度に減少する代替案は、当てはまる場合があるが、その必要はない。すなわち、第１抗体は、第１抗体のそのそれぞれのエピトープへの結合を第２抗体が阻害することなく、第２抗体のそのエピトープへの結合を阻害することができる。しかし、各抗体が、同じ程度であっても、より大きい程度であっても、またはより小さい程度であっても、他の抗体のその同族エピトープまたはリガンドへの結合を検出可能な程度に阻害する場合、抗体は、これらのそれぞれのエピトープ（複数可）の結合を互いに「交差競合する」と言われる。競合および交差競合抗体はともに、本発明によって包含されている。このような競合または交差競合が起こる機構（例えば、立体障害、コンホメーション変化、または共通エピトープもしくはその一部への結合）にかかわらず、当業者は、本明細書に提供される教示に基づいて、このような競合および／または交差競合抗体は、包含され、本明細書に開示の方法にとって有用であり得ることを理解するはずである。
「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を有する。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、食作用、細胞表面受容体の下方制御（例えば、Ｂ細胞受容体）などがある。このようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と結合されることを必要とし、このような抗体エフェクター機能を評価するための当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して評価することができる。
「天然配列Ｆｃ領域」は、自然において見つかるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列と異なるが、それでも、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域内、または親ポリペプチドのＦｃ領域内に、約１〜約１０のアミノ酸置換、好ましくは、約１〜約５のアミノ酸置換を有する。本明細書のバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列同一性、最も好ましくは、これらと少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくは、これらと少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を有する。
用語「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、それだけに限らないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、Ｆｃ受容体結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、食作用、Ｃ１ｑ結合、および細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方制御がある。例えば、米国特許第６，７３７，０５６号を参照。このようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と結合されることを必要とし、このような抗体エフェクター機能を評価するための当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して評価することができる。エフェクター機能の例示的な測定法は、Ｆｃγ３および／またはＣ１ｑ結合によるものである。
本明細書で使用する場合、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合抗体を認識し、引き続いて標的細胞を溶解させる細胞媒介反応を指す。対象とする分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイ、例えば、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されたものなどを使用して評価することができる。このようなアッセイに有用な効果細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびＮＫ細胞がある。代替としてまたは追加的に、対象とする分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、１９９８、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）、９５：６５２〜６５６に開示されたものなどの動物モデルで評価することができる。
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的の溶解を指す。補体活性化経路は、補体系の第１コンポーネント（Ｃ１ｑ）の同族抗原と複合体化した分子（例えば、抗体）への結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２：１６３（１９９６）に記載されたＣＤＣアッセイを実施することができる。
本明細書において、「治療」は、有益な、または所望の臨床結果を得るための手段である。本発明の目的に関して、有益な、または所望の臨床結果としては、それだけに限らないが、以下のうちの１つまたは複数がある：新生細胞もしくはがん性細胞の増殖の低減（もしくは破壊）、新生細胞の転移の阻害、Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍のサイズの縮小もしくは減少、Ｔｒｏｐ−２関連疾患（例えば、がん）の緩解、Ｔｒｏｐ−２関連疾患（例えば、がん）から生じる症状の減少、Ｔｒｏｐ−２関連疾患（例えば、がん）を罹患している者の生活の質の増大、Ｔｒｏｐ−２関連疾患（例えば、がん）を治療するのに必要とされる他の薬物療法の用量の減少、Ｔｒｏｐ−２関連疾患（例えば、がん）の進行の遅延、Ｔｒｏｐ−２関連疾患（例えば、がん）の治癒、および／またはＴｒｏｐ−２関連疾患（例えば、がん）を有する患者の生存時間の延長。
「緩和すること」は、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを投与しないことと比較して、１つまたは複数の症状の軽減または改善を意味する。「緩和すること」には、症状の持続時間の短縮または低減も含まれる。
本明細書において、薬剤、化合物、または医薬組成物の「有効投与量」または「有効量」は、任意の１つまたは複数の有益な、または所望の結果をもたらすのに十分な量である。予防的使用に関して、有益な、または所望の結果としては、疾患、疾患の発達中に呈する、その合併症、および中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的、および／または行動的症状を含めた、疾患のリスクの排除もしくは低減、重症度の軽減、または発生の遅延がある。治療的使用に関して、有益な、または所望の結果としては、様々なＴｒｏｐ−２関連疾患もしくは状態（胃、頭頸部、肺、卵巣、および膵臓のがんなど）の１つもしくは複数の症状の発生率の低減もしくはこれらの症状の緩和、疾患を治療するのに要求される他の薬物療法の用量の減少、別の薬物療法の効果の増強、および／または患者のＴｒｏｐ−２関連疾患の進行の遅延などの臨床結果がある。有効投与量は、１回または複数の投与で投与することができる。本発明の目的に関して、薬剤、化合物、または医薬組成物の有効投与量は、直接または間接的に予防的処置または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床状況において理解されるように、薬剤、化合物、または医薬組成物の有効投与量は、別の薬剤、化合物、または医薬組成物と併せて実現しても、しなくてもよい。したがって、「有効投与量」は、１種または複数の治療剤の投与に照らして考慮することができ、１種または複数の他の作用物質と併せて、望ましい結果が実現され得る、または実現される場合、単剤は、有効量で投与されるとみなすことができる。
「個体」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物には、それだけに限らないが、家畜、競技動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、およびラットも含まれる。
本明細書において、「ベクター」は、宿主細胞内で、対象とする１種または複数の遺伝子または配列を送達、および好ましくは発現することができるコンストラクトを意味する。ベクターの例としては、それだけに限らないが、ウイルスベクター、裸のＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に付随したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に被包されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、および産生細胞などのある特定の真核細胞がある。
本明細書において、「発現制御配列」は、核酸の転写を指示する核酸配列を意味する。発現制御配列は、プロモーター、例えば、構成的プロモーターもしくは誘導プロモーター、またはエンハンサーなどであり得る。発現制御配列は、転写される核酸配列に作動可能に連結される。
本明細書において、「薬学的に許容できる担体」または「薬学的に許容できる賦形剤」には、活性成分と合わせたとき、成分に生物活性を保持させ、対象の免疫系と非反応性である任意の材料が含まれる。例としては、それだけに限らないが、標準的な薬学的担体、例えば、リン酸緩衝溶液、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、および様々なタイプの湿潤剤などのいずれかがある。エアロゾルまたは非経口投与用の好適な希釈剤は、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）または通常の（０．９％）生理食塩水である。このような担体を含む組成物は、周知の従来法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５を参照）。
用語「アシルドナーグルタミン含有タグ」または「グルタミンタグ」は、本明細書において、トランスグルタミナーゼアミン受容体として作用する１つまたは複数のＧｌｎ残基を含有するポリペプチドまたはタンパク質を指す。例えば、ＷＯ２０１２０５９８８２を参照。
用語「ｋｏｎ」は、本明細書において、抗体の抗原への会合の速度定数を指す。具体的には、速度定数（ｋｏｎおよびｋｏｆｆ）ならびに平衡解離定数は、Ｆａｂ抗体断片（すなわち、一価）ならびにＴｒｏｐ−２タンパク質（例えば、Ｔｒｏｐ−２−Ｆｃ融合タンパク質）を使用して測定される。
用語「ｋｏｆｆ」は、本明細書において、抗体／抗原複合体からの抗体の解離の速度定数を指す。
用語「ＫＤ」は、本明細書において、抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指す。
本明細書で「約」のついた値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象としている実施形態を含む（かつ記述する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。数値範囲は、その範囲を画定する数値を含む。
実施形態が「含む」という言葉を用いて本明細書に記載されている場合は必ず、「からなる」および／または「から本質的になる」の観点から記載される別段の類似の実施形態も提供されることが理解される。
本発明の態様または実施形態が選択肢のマーカッシュ群または他の分類の観点から記載される場合、本発明は、全体として列挙された群全体だけでなく、群の各メンバーを個々に、および主群のすべての可能な亜群、また群メンバーの１つまたは複数を欠く主群を包含する。本発明は、請求項に係る発明における群メンバーのいずれかの１つまたは複数を明確に除外することも想定する。
別段の定義のない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含めて本明細書が支配する。本明細書および特許請求の範囲全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと」などの変形は、述べた整数または整数の群を含めることを暗示するが、任意の他の整数または整数の群の除外を暗示しないことが理解されるであろう。脈絡による別段の要求のない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
例示的な方法および材料を本明細書に記載するが、本明細書に記載のものと同様または等価な方法および材料も、本発明の実施または試験において使用することができる。材料、方法、および例は、例示的であるだけであり、限定的であるように意図していない。
Ｔｒｏｐ−２抗体およびこれらを作製する方法
本発明は、Ｔｒｏｐ−２に結合する抗体を提供する。一態様では、本発明は、表面プラズモン共鳴によって測定して６．５ｎＭ以下の一価抗体結合親和性（ＫＤ）でヒトＴｒｏｐ−２（例えば、配列番号２７）のドメイン３（例えば、アミノ酸残基１５３〜２０６）およびドメイン４（例えば、アミノ酸残基２０９〜２７４）に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。別の態様では、本発明は、表面プラズモン共鳴によって測定して約３５ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）でヒトＴｒｏｐ−２（例えば、配列番号２７）のドメイン１（例えば、アミノ酸残基２７〜７１）に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
本発明の抗体および抗体コンジュゲートは、以下の特性のうちの任意の１つまたは複数を特徴とする：（ａ）Ｔｒｏｐ−２への結合、（ｂ）Ｔｒｏｐ−２のタンパク質発現の減少または下方制御、（ｃ）対象におけるＴｒｏｐ−２発現に関連した状態（例えば、がん、例えば、胃、頭頸部、肺、卵巣、または膵臓のがんなど）の１つまたは複数の症状の治療、予防、緩和、（ｄ）対象（Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍を有する）における腫瘍増殖または進行の阻害、（ｅ）対象（１つまたは複数のＴｒｏｐ−２発現がん細胞を有する）におけるＴｒｏｐ−２発現がん細胞の転移の阻害、（ｆ）Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍の退縮（例えば、長期間退縮）の誘導、（ｇ）Ｔｒｏｐ−２発現細胞内での細胞傷害活性の発揮、（ｈ）ＥＲＫ１／２ ＭＡＰＫ経路の不活化または下方制御、および（ｉ）他のまだ同定されていない因子とのＴｒｏｐ−２相互作用の遮断。
本発明で有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、これらの突然変異体、抗体部分（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合的に修飾された抗体を含めた、要求された特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構成を包含することができる。抗体は、マウス、ラット、ヒト、または任意の他の起源（キメラ抗体もしくはヒト化抗体を含む）であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体は、モノクローナル抗体である。例えば、Ｔｒｏｐ−２抗体は、ヒト化モノクローナル抗体またはキメラモノクローナル抗体である。
いくつかの実施形態では、抗体は、修飾定常領域、例えば、限定することなく、免疫応答を誘発する潜在性が増大した定常領域などを含む。例えば、定常領域は、Ｆｃγ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、またはＦｃγＩＩＩなどに対して増大した親和性を有するように修飾することができる。
いくつかの実施形態では、抗体は、修飾定常領域、例えば、免疫学的に不活性な、すなわち、免疫応答を誘発する潜在性が低減した定常領域などを含む。いくつかの実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９：２６１３〜２６２４、１９９９、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、および／または英国特許出願第９８０９９５１８号に記載されているように修飾される。Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、またはヒトＩｇＧ４であり得る。Ｆｃは、アミノ酸残基が野生型ＩｇＧ２配列を参照して番号付けられている、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への突然変異（ＩｇＧ２Δａ）を含有するヒトＩｇＧ２とすることができる。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９：２６１３〜２６２４、１９９９。いくつかの実施形態では、抗体は、以下の突然変異を含むＩｇＧ４の定常領域を含む（Ａｒｍｏｕｒら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４０、５８５〜５９３、２００３）：番号付けが野生型ＩｇＧ４を参照している、Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５（ＩｇＧ４Δｃ）。さらに別の実施形態では、Ｆｃは、欠失Ｇ２３６を伴ったＥ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５への突然変異（ＩｇＧ４Δｂ）を含有するヒトＩｇＧ４である。別の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８からＰ２２８へのヒンジ安定化突然変異を含有する任意のヒトＩｇＧ４ Ｆｃ（ＩｇＧ４、ＩｇＧ４Δｂ、またはＩｇＧ４Δｃ）である。（Ａａｌｂｅｒｓｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０５、９〜１９、２００２）。別の実施形態では、Ｆｃは、非グリコシル化Ｆｃであり得る。
いくつかの実施形態では、定常領域は、オリゴ糖付着残基（Ａｓｎ２９７など）および／または定常領域中のグリコシル化認識配列の一部であるフランキング残基を突然変異させることによって非グリコシル化されている。いくつかの実施形態では、定常領域は、酵素的にＮ結合型グリコシル化について非グリコシル化されている。定常領域は、酵素的に、またはグリコシル化欠損宿主細胞内の発現によって、Ｎ結合型グリコシル化について非グリコシル化されていてもよい。
Ｔｒｏｐ−２に対する抗体の結合親和性を決定する一方法は、抗体の単機能Ｆａｂ断片の結合親和性を測定することによるものである。単機能Ｆａｂ断片を得るために、抗体（例えば、ＩｇＧ）をパパインで切断し、または組換えで発現させることができる。抗体のＴｒｏｐ−２ Ｆａｂ断片の親和性は、事前固定化ストレプトアビジンセンサーチップ（ＳＡ）を備えた表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ ＮＪ）、またはＨＢＳ−ＥＰランニング緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５のＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％ ｖ／ｖの界面活性剤Ｐ２０）を使用する抗マウスＦｃもしくは抗ヒトＦｃによって決定することができる。ビオチン化またはＦｃ融合ヒトＴｒｏｐ−２を、０．５μｇ／ｍＬ未満の濃度までＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中に希釈し、多様な接触時間を使用して個々のチップチャネルにわたって注入して、２つの範囲の抗原密度、すなわち、詳細な動的試験用の５０〜２００反応単位（ＲＵ）、またはスクリーニングアッセイ用の８００〜１，０００ＲＵを実現することができる。再生試験は、２５％ ｖ／ｖのエタノール中の２５ｍＭのＮａＯＨにより、２００超の注入について、チップ上にＴｒｏｐ−２の活性を保持しながら結合Ｆａｂが有効に取り出されることを示した。一般に、精製Ｆａｂ試料の連続希釈液（０．１〜１０倍の推定ＫＤの濃度に及ぶ）を、１００μＬ／分で１分間注入し、最大２時間の解離時間が与えられる。Ｆａｂタンパク質の濃度は、標準として既知の濃度（アミノ酸分析によって求めた）のＦａｂを使用して、ＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によって決定される。動的会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを使用して、１：１のラングミュア結合モデル（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．、Ｒｏｏｓ，Ｈ．、Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．、Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．（１９９４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、６、９９〜１１０）にデータを包括的にフィッティングすることによって同時に得られる。平衡解離定数（ＫＤ）値は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。このプロトコールは、ヒトＴｒｏｐ−２、別の哺乳動物のＴｒｏｐ−２（マウスＴｒｏｐ−２、ラットＴｒｏｐ−２、または霊長類Ｔｒｏｐ−２など）、および異なる形態のＴｒｏｐ−２（例えば、グリコシル化Ｔｒｏｐ−２）を含めた、任意のＴｒｏｐ−２に対する抗体の結合親和性の決定において使用するのに適している。抗体の結合親和性は一般に、２５℃で測定されるが、３７℃でも測定され得る。
本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体は、当技術分野で公知の任意の方法によって作製することができる。ハイブリドーマ細胞株を生成するために、宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは一般に、本明細書でさらに記載するように、抗体を刺激および生成するための確立された技法および慣例的な技法を踏まえている。ヒトおよびマウス抗体を生成するための一般的な技法は、当技術分野で公知であり、かつ／または本明細書に記載されている。
ヒトを含めた任意の哺乳動物対象またはそれに由来する抗体産生細胞を、ヒトを含めた哺乳動物およびハイブリドーマ細胞株を生成するための基盤として機能を果たすように操作することができることが企図されている。一般に、宿主動物は、本明細書に記載するように、腹腔内、筋肉内、経口的、皮下、足底内、および／または皮内に、ある量の免疫原を接種される。
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９７、１９７５の、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．ら、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ、１８：３７７〜３８１、１９８２によって改良された一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技法を使用して、リンパ球および不死化骨髄腫細胞から調製することができる。それだけに限らないが、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、およびｔｈｅ Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡからのものを含めた利用可能な骨髄腫株を、ハイブリダイゼーションで使用することができる。一般に、この技法では、ポリエチレングリコールなどの融合剤を使用して、または当業者に周知の電気的手段によって、骨髄腫細胞およびリンパ系細胞を融合する。融合後、細胞は、融合培地から分離され、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択的増殖培地内で増殖されて未ハイブリダイズ親細胞が排除される。血清の有無にかかわらず補充された、本明細書に記載の培地のいずれも、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するのに使用することができる。細胞融合技法の別の選択肢として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を使用して、対象発明のＴｒｏｐ−２モノクローナル抗体を生成することができる。ハイブリドーマは、必要に応じて、展開およびサブクローニングされ、慣例的なイムノアッセイ手順（例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素免疫アッセイ、または蛍光イムノアッセイ）によって抗免疫原活性について上清がアッセイされる。
抗体源として使用され得るハイブリドーマは、Ｔｒｏｐ−２に特異的なモノクローナル抗体、またはこれらの一部を産生するすべての誘導体、親ハイブリドーマの子孫細胞を包含する。
このような抗体を産生するハイブリドーマは、公知の手順を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで増殖させることができる。モノクローナル抗体は、必要に応じて、慣例的な免疫グロブリン精製手順、例えば、硫安分画、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過などによって、培地または体液から単離することができる。望まれない活性は、存在する場合、例えば、固相に付着した免疫原でできた吸着剤上に配合物を流し、免疫原から所望の抗体を溶出または放出することによって除去することができる。ヒトＴｒｏｐ−２、または免疫される種内で免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、もしくはダイズトリプシン阻害剤にコンジュゲートした標的アミノ酸配列を含有する断片を用いて、二機能性剤または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基によるコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基による）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ１は、異なるアルキル基である）を使用して、宿主動物を免疫化すると、抗体（例えば、モノクローナル抗体）の集団を生じさせることができる。
必要に応じて、対象とするＴｒｏｐ−２抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）を配列決定し、次いで、ポリヌクレオチド配列をベクター中にクローン化し、発現または増殖させることができる。対象とする抗体をコードする配列を、宿主細胞内のベクター中に維持することができ、次いで宿主細胞を展開し、将来使用するために凍結することができる。細胞培養物内での組換えモノクローナル抗体の生成は、当技術分野で公知の手段によって、Ｂ細胞から抗体遺伝子をクローニングすることによって実施することができる。例えば、Ｔｉｌｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、３２９、１１２、２００８、米国特許第７，３１４，６２２号を参照。
代替案では、ポリヌクレオチド配列を遺伝子操作に使用して、抗体を「ヒト化」し、または抗体の親和性もしくは他の特性を改善することができる。例えば、抗体がヒトにおける臨床試験および治療で使用される場合、定常領域をヒト定常領域により近く類似しているように遺伝子工学的に改変して、免疫応答を回避することができる。Ｔｒｏｐ−２に対するより大きい親和性、およびＴｒｏｐ−２阻害のより大きい効力を得るために、抗体配列を遺伝子操作することが望ましい場合がある。
モノクローナル抗体をヒト化するのに４つの一般的なステップがある。これらは、（１）出発抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインのヌクレオチドおよび予測アミノ酸配列の決定、（２）ヒト化抗体の設計、すなわち、どの抗体フレームワーク領域をヒト化プロセスの間に使用するかの決定（３）実際のヒト化方法／技法、および（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、同第５，８０７，７１５号、同第５，８６６，６９２号、同第６，３３１，４１５号、同第５，５３０，１０１号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５８５，０８９号、および同第６，１８０，３７０号を参照。
げっ歯類または修飾げっ歯類Ｖ領域、およびヒト定常領域に融合したこれらの関連ＣＤＲを有するキメラ抗体を含めた、非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含むいくつかの「ヒト化」抗体分子が記載されている。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、３４９：２９３〜２９９、１９９１、Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６：４２２０〜４２２４、１９８９、Ｓｈａｗら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３８：４５３４〜４５３８、１９８７、およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４７：３５７７〜３５８３、１９８７を参照。他の参考文献には、適切なヒト抗体定常領域と融合する前に、ヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）中に移植されたげっ歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２７、１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４〜１５３６、１９８８、およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２〜５２５、１９８６を参照。別の参考文献には、組換え遺伝子工学的に改変されたげっ歯類フレームワーク領域によって支持されたげっ歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、欧州特許公開第０５１９５９６号を参照。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエントにおけるこれらの部分の治療用途の持続時間および有効性を制限する、げっ歯類抗ヒト抗体分子に対する望まれない免疫応答を最小限にするように設計される。例えば、抗体定常領域を、免疫学的に不活性である（例えば、補体溶解を誘発しない）ように遺伝子工学的に改変することができる。例えば、ＰＣＴ公開第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、英国特許出願第９８０９９５１．８号を参照。やはり利用することができる、抗体をヒト化する他の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９：２４７１〜２４７６、１９９１によって、米国特許第６，１８０，３７７号、同第６，０５４，２９７号、同第５，９９７，８６７号、同第５，８６６，６９２号、同第６，２１０，６７１号、および同第６，３５０，８６１号に、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ０１／２７１６０号に開示されている。
上記に論じたヒト化抗体に関する一般的原理はまた、例えば、イヌ、ネコ、霊長類、ウマ、およびウシにおいて使用するために抗体をカスタマイズするのに適用可能である。さらに、本明細書に記載の抗体をヒト化する１つまたは複数の態様、例えば、ＣＤＲ移植、フレームワーク突然変異、およびＣＤＲ突然変異を組み合わせることができる。
一変形形態では、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように遺伝子工学的に改変された市販のマウスを使用することによって、完全ヒト抗体を得ることができる。より望ましい（例えば、完全ヒト抗体）、またはよりロバストな免疫応答を生じるように設計されたトランスジェニック動物も、ヒト化抗体またはヒト抗体を生成するのに使用することができる。このような技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）製のＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）、ならびにＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）製のＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ Ｍｏｕｓｅ（商標）である。
代替案では、抗体を組換えで作製し、当技術分野で公知の任意の方法を使用して発現させることができる。別の代替案では、抗体をファージディスプレイ技術によって組換えで作製することができる。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、同第５，５８０，７１７号、同第５，７３３，７４３号、および同第６，２６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３〜４５５、１９９４を参照。代わりに、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５３、１９９０）を使用して、非免疫化ドナーに由来する免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト抗体および抗体断片を生成することができる。この技法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子が、糸状バクテリオファージのメジャーまたはマイナーコートタンパク質遺伝子、例えば、Ｍ１３またはｆｄなどの中にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上に機能的な抗体断片としてディスプレイされる。糸状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体を機能的性質に基づいて選択すると、これらの性質を呈する抗体をコードする遺伝子も選択される。したがって、ファージは、Ｂ細胞の性質の一部を模倣する。ファージディスプレイは、様々な形式で実施することができる。総説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ｊ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、３：５６４〜５７１、１９９３を参照。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの源を、ファージディスプレイに使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４〜６２８、１９９１は、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小ランダムコンビナトリアルライブラリーから、抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。Ｍａｒｋら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１〜５９７、１９９１、またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１２：７２５〜７３４、１９９３によって記載された技法に本質的に従って、非免疫化ヒトドナーに由来するＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、抗原（自己抗原を含む）の多様なアレイに対する抗体を単離することができる。天然の免疫応答では、抗体遺伝子は、高い割合で突然変異を蓄積する（体細胞超変異）。導入された変化のいくつかが、より高い親和性を付与することになり、高親和性表面免疫グロブリンをディスプレイするＢ細胞が、後続の抗原チャレンジの間に選択的に複製および分化される。この自然過程は、「鎖シャッフリング」として公知の技法を使用することによって模倣することができる（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．、１０：７７９〜７８３、１９９２）。この方法では、ファージディスプレイによって得られる「一次」ヒト抗体の親和性は、非免疫化ドナーから得られるＶドメイン遺伝子の天然に存在するバリアントのレパートリー（レパートリー）で、重鎖および軽鎖Ｖ領域遺伝子を順次置き換えることによって改善することができる。この技法により、ｐＭ〜ｎＭ範囲の親和性を有する抗体および抗体断片の生成が可能になる。非常に大きいファージ抗体レパートリー（「マザーオブオールライブラリー」としても公知）を作製するためのストラテジーが、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２１：２２６５〜２２６６、１９９３によって記載されている。げっ歯類抗体からヒト抗体を導出するのに遺伝子シャフリングも使用することができ、この場合、ヒト抗体は、出発げっ歯類抗体と同様の親和性および特異性を有する。「エピトープ刷り込み」とも呼ばれるこの方法によれば、ファージディスプレイ技法によって得られるげっ歯類抗体の重鎖または軽鎖Ｖドメイン遺伝子がヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置き換えられ、げっ歯類−ヒトキメラが作り出される。抗原の選択により、機能的抗原結合部位を回復することができるヒト可変領域が単離され、すなわち、エピトープがパートナーの選択を支配する（刷り込む）。残りのげっ歯類Ｖドメインを置き換えるためにこのプロセスが繰り返されると、ヒト抗体が得られる（ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／０６２１３を参照）。ＣＤＲ移植によるげっ歯類抗体の伝統的なヒト化と異なり、この技法は、げっ歯類起源のフレームワークまたはＣＤＲ残基をまったく有さない完全ヒト抗体をもたらす。
抗体は、宿主動物から抗体および抗体産生細胞を最初に単離し、遺伝子配列を得、遺伝子配列を使用して、宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）内で抗体を組換えで発現させることによって組換えで作製することができる。使用することができる別の方法は、植物（例えば、タバコ）またはトランスジェニック乳内で抗体配列を発現させることである。植物または乳内で、組換えで抗体を発現させるための方法は、開示されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９：２７５６、２００１、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．およびＤ．Ｈｕｓｚａｒ、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３：６５、１９９５、ならびにＰｏｌｌｏｃｋら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２３１：１４７、１９９９を参照。抗体の誘導体、例えば、ヒト化、単鎖などを作製するための方法は、当技術分野で公知である。
イムノアッセイ、および蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーソーティング技法も、Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体を単離するのに使用することができる。
本明細書に記載の抗体は、多くの異なる担体に結合することができる。担体は、活性および／または不活性であり得る。周知の担体の例としては、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然および変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびに磁鉄鉱がある。担体の性質は、本発明の目的に関して可溶性または不溶性であり得る。当業者は、結合抗体用の他の適当な担体が分かり、または日常の実験を使用してこのようなものを確認することができるであろう。いくつかの実施形態では、担体は、心筋を標的にする部分を含む。
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、慣例的な手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離および配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡなどの好適な源として機能を果たす。単離した後、発現ベクター（ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示された発現ベクターなど）内にＤＮＡを配置することができ、次いでこれらは、宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または免疫グロブリンタンパク質を他の方法で産生しない骨髄腫細胞などの中にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成が得られる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号を参照。ＤＮＡは、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常領域のコード配列を置換することによって、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８１：６８５１、１９８４、または免疫グロブリンコード配列に、非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列のすべてもしくは一部を共有結合的に接合することによって、修飾することもできる。その様式で、本明細書のＴｒｏｐ−２モノクローナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体が調製される。
本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体は、Ｔｒｏｐ−２発現レベルの低減が検出および／または測定される、当技術分野で公知の方法を使用して同定し、または特徴付けることができる。いくつかの実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体は、候補剤をＴｒｏｐ−２とともにインキュベートし、Ｔｒｏｐ−２発現レベルの結合および／または付随的低減を監視することによって同定される。結合アッセイは、精製Ｔｒｏｐ−２ポリペプチド（複数可）を用いて、またはＴｒｏｐ−２ポリペプチド（複数可）を天然に発現し、もしくはこれらを発現するようにトランスフェクトされた細胞を用いて実施することができる。一実施形態では、結合アッセイは、競合的結合アッセイであり、この場合、候補抗体がＴｒｏｐ−２結合を公知のＴｒｏｐ−２抗体と競合する能力が評価される。アッセイは、ＥＬＩＳＡ形式を含めて様々な形式で実施することができる。
最初に同定した後、候補Ｔｒｏｐ−２抗体の活性を、標的にされる生物活性を試験することが知られているバイオアッセイによってさらに確認および洗練することができる。代わりに、バイオアッセイを使用して、候補を直接スクリーニングすることができる。Ｔｒｏｐ−２抗体を同定し、特徴づけるための方法のいくつかを、実施例で詳細に記載する。
Ｔｒｏｐ−２抗体は、当技術分野で周知の方法を使用して特徴付けることができる。例えば、一方法は、これが結合するエピトープを同定すること、または「エピトープマッピング」である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９の１１章に記載されている、抗体−抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチドベースアッセイを含めて、タンパク質上のエピトープの位置をマッピングおよび特徴付けるための多くの当技術分野で公知の方法がある。追加の例では、エピトープマッピングを使用して、Ｔｒｏｐ−２抗体が結合する配列を求めることができる。エピトープマッピングは、様々な源、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ １５、８２１９ ＰＨ Ｌｅｌｙｓｔａｄ、オランダ）から商業的に利用可能である。エピトープは、線状エピトープであり得、すなわち、アミノ酸の単一ストレッチ内に含有され得、または必ずしも単一ストレッチ内に含有されていない場合がある、アミノ酸の３次元相互作用によって形成される立体構造エピトープであり得る。様々な長さ（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸の長さ）のペプチドを、単離または合成し（例えば、組換えで）、Ｔｒｏｐ−２抗体を用いた結合アッセイに使用することができる。別の例では、Ｔｒｏｐ−２抗体が結合するエピトープは、Ｔｒｏｐ−２配列に由来する重複ペプチドを使用し、Ｔｒｏｐ−２抗体による結合を決定することによって、系統的なスクリーニングで決定することができる。遺伝子断片発現アッセイによれば、Ｔｒｏｐ−２をコードするオープンリーディングフレームがランダムに、または特定の遺伝子構築によって断片化され、Ｔｒｏｐ−２の発現断片の試験される抗体との反応性が決定される。遺伝子断片は、例えば、放射性アミノ酸の存在下で、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＰＣＲによって生成され、次いで転写され、およびタンパク質に翻訳され得る。次いで放射性標識Ｔｒｏｐ−２断片への抗体の結合が、免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定される。ある特定のエピトープは、ファージ粒子の表面上にディスプレイされたランダムペプチド配列の大きいライブラリー（ファージライブラリー）を使用することによっても同定することができる。代わりに重複ペプチド断片の定義されたライブラリーを、単純な結合アッセイで試験抗体への結合について試験することができる。追加の例では、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメイン交換実験、およびアラニンスキャニング突然変異誘発を実施して、エピトープ結合に要求され、十分な、かつ／または必要な残基を同定することができる。例えば、ドメイン交換実験は、Ｔｒｏｐ−２タンパク質の様々な断片が、別の種（例えば、マウス）に由来するＴｒｏｐ−２からの配列、または密接に関係するが抗原性の異なるタンパク質（例えば、Ｔｒｏｐ−１）で置き換えられた（交換された）突然変異体Ｔｒｏｐ−２を使用して実施することができる。突然変異体Ｔｒｏｐ−２への抗体の結合を評価することによって、抗体結合に対する特定のＴｒｏｐ−２断片の重要性を評価することができる。
Ｔｒｏｐ−２抗体を特徴付けるのに使用することができるさらに別の方法は、同じ抗原、すなわち、Ｔｒｏｐ−２上の様々な断片に結合することが知られている他の抗体との競合アッセイを使用して、Ｔｒｏｐ−２抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するか否かを決定することである。競合アッセイは、当業者に周知である。
発現ベクターをＴｒｏｐ−２抗体の直接発現に使用することができる。当業者は、ｉｎ ｖｉｖｏで外因性タンパク質の発現を得るための発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号、同第６，４１３，９４２号、および同第６，３７６，４７１号を参照。発現ベクターの投与としては、注入、経口投与、粒子銃もしくはカテーテル挿入投与、および局部投与を含めた局所投与または全身投与がある。別の実施形態では、発現ベクターは、交感神経幹もしくは神経節に、または冠動脈、心房、心室、もしくは心膜内に直接投与される。
発現ベクターまたはサブゲノムポリヌクレオチドを含有する治療用組成物の標的化送達も使用することができる。受容体媒介ＤＮＡ送達技法は、例えば、Ｆｉｎｄｅｉｓら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１９９３、１１：２０２、Ｃｈｉｏｕら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｏｆ Ｄｉｒｅｃｔ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ、Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ編、１９９４、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３：６２１、１９８８、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６９：５４２、１９９４、Ｚｅｎｋｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８７：３６５５、１９９０、およびＷｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６６：３３８、１９９１に記載されている。ポリヌクレオチドを含有する治療用組成物は、遺伝子療法プロトコールの局所投与に関して、約１００ｎｇ〜約２００ｍｇのＤＮＡの範囲内で投与される。約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、および約２０μｇ〜約１００μｇのＤＮＡの濃度範囲も、遺伝子療法プロトコールの間に使用することができる。治療用ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルを使用して送達することができる。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源であっても、非ウイルス起源であってもよい（一般に、Ｊｏｌｌｙ、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１：５１、１９９４、Ｋｉｍｕｒａ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、５：８４５、１９９４、Ｃｏｎｎｅｌｌｙ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９５、１：１８５、およびＫａｐｌｉｔｔ、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、６：１４８、１９９４を参照）。このようなコード配列の発現は、内因性哺乳動物プロモーターまたは異種プロモーターを使用して誘導され得る。コード配列の発現は、構成的であってもよく、または制御されてもよい。
所望のポリヌクレオチドを送達し、所望の細胞内で発現させるためのウイルス系ベクターは、当技術分野で周知である。例示的なウイルス系ビヒクルとしては、それだけに限らないが、組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０７９３６号、同第ＷＯ９４／０３６２２号、同第ＷＯ９３／２５６９８号、同第ＷＯ９３／２５２３４号、同第ＷＯ９３／１１２３０号、同第ＷＯ９３／１０２１８号、同第ＷＯ９１／０２８０５号、米国特許第５，２１９，７４０号および同第４，７７７，１２７号、英国特許第２，２００，６５１号、ならびに欧州特許第０３４５２４２号を参照）、アルファウイルス系ベクター（例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−６７、ＡＴＣＣ ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−３７３、ＡＴＣＣ ＶＲ−１２４６）、ならびにベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−９２３、ＡＴＣＣ ＶＲ−１２５０、ＡＴＣＣ ＶＲ１２４９、ＡＴＣＣ ＶＲ−５３２））、ならびにアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号、同第ＷＯ９３／０３７６９号、同第ＷＯ９３／１９１９１号、同第ＷＯ９４／２８９３８号、同第ＷＯ９５／１１９８４号、および同第ＷＯ９５／００６５５を参照）がある。Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．、１９９２、３：１４７に記載された死滅アデノウイルスに連結したＤＮＡの投与も使用することができる。
それだけに限らないが、死滅アデノウイルス単独に連結した、または連結していないポリカチオン凝縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．、３：１４７、１９９２を参照）、リガンド連結ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６４：１６９８５、１９８９を参照）、真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／０７９９４号、同第ＷＯ９６／１７０７２号、同第ＷＯ９５／３０７６３号、および同第ＷＯ９７／４２３３８号を参照）、ならびに核電荷中和または細胞膜との融合を含めた、非ウイルス送達ビヒクルならびに方法も使用することができる。裸のＤＮＡも使用することができる。例示的な裸のＤＮＡ導入方法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／１１０９２号、および米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用することができるリポソームは、米国特許第５，４２２，１２０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１３７９６号、同第ＷＯ９４／２３６９７号、同第ＷＯ９１／１４４４５号、およびＥＰ０５２４９６８に記載されている。追加の手法は、Ｐｈｉｌｉｐ、Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．、１４：２４１１、１９９４、およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９１：１５８１、１９９４に記載されている。
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗体を含み、または本方法によって作製され、本明細書に記載の特性を有する、医薬組成物を含めた組成物を包含する。本明細書において、組成物は、Ｔｒｏｐ−２に結合する１種もしくは複数の抗体および／または１つもしくは複数のこれらの抗体をコードする配列を含む１つもしくは複数のポリヌクレオチドを含む。これらの組成物は、当技術分野で周知である、緩衝液を含めた薬学的に許容できる賦形剤などの適当な賦形剤をさらに含むことができる。
したがって、本発明は、以下のうちのいずれか、または以下のうちのいずれかを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する：（ａ）下記の部分軽鎖配列を有する抗体
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＴＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１）、
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３）、
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＬＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩ Ｋ（配列番号６）、ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＮＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７）、
ＤＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳＦＳＣＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨＷＹＱＱＲＴＮＧＳＰＲＬＬＩＫＹＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８）、
ＧＶＨＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＹＡＳＥＳＩＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１０）、もしくは
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＹＡＳＥＳＩＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＳＱＳＦＳＷＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１２）

および／または（ｂ）下記の部分重鎖配列を有する抗体
ＱＶＱＬＫＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＨＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＴＧＧＳＴＤＹＮＳＡＬＭＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号２）、
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＷＴＧＧＳＴＤＹＮＳＡＬＭＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４）、
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＷＴＳＧＶＴＤＹＮＳＡＬＭＧＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５）、
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＮＩＹＰＳＤＳＹＳＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＶＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＹＧＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号９）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＹＰＳＤＳＹＳＮＹＮＱＫＦＫＤＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１）、もしくは
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＦＰＳＤＳＹＳＮＹＮＫＫＦＫＤＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）。
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
 表１中、下線を引いた配列は、ＫａｂａｔによるＣＤＲ配列であり、太字は、ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ配列である
本発明は、Ｔｒｏｐ−２に対する抗体のＣＤＲ部分（Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、およびＣＤＲ接触領域を含む）も提供する。ＣＤＲ領域の決定は、当技術分野の技術の十分範囲内である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組合せであり得る（「組合せＣＤＲ」または「拡張ＣＤＲ」とも呼ばれる）ことが理解される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲである。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。言い換えれば、複数のＣＤＲを有する実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、組合せＣＤＲ、またはこれらの組合せのいずれかであり得る。表２は、本明細書に提供されるＣＤＲ配列の例を提供する。
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
Figure 2016104751
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２に結合し、本明細書に記載の抗体、例えば、ｍ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＮ、ｍ６Ｇ１１、ｈ６Ｇ１１、またはｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦなどと競合する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＮ、またはｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦと、Ｔｒｏｐ−２の結合を競合する。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧとＴｒｏｐ−２の結合を競合し、表面プラズモン共鳴によって測定して、約６．５ｎＭ、約６．０ｎＭ、約５．５ｎＭ、約５．０ｎＭ、約４．５ｎＭ、約４．０ｎＭ、約３．５ｎＭ、約３．０ｎＭ、約２．５ｎＭ、約２．０ｎＭ、約１．５ｎＭ、約１．０ｎＭ、約０．５ｎＭ、または約０．２５ｎＭのいずれか、またはこれらのいずれか未満の一価抗体結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体ｈ７Ｅ６とＴｒｏｐ−２の結合を競合し、約３０ｎＭ、約２５ｎＭ、約２２ｎＭ、約２０ｎＭ、約１５ｎＭ、または約１０ｎＭのいずれか、またはこれらのいずれか未満の一価抗体結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、競合抗体は、配列ＱＶＱＬＫＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＨＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＴＧＧＳＴＤＹＮＳＡＬＭＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号２）の重鎖可変領域、および配列ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＴＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１）の軽鎖可変領域を含まない。いくつかの実施形態では、競合抗体は、抗体ＡＲ４７Ａ６．４．２でも、ＡＲ５２Ａ３０１．５でも、ＡＲ３６Ａ３６．１１．１でも、ＢＲ１１０でも、またはＲＳ７でもない。
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する抗体または抗原結合断片であって、配列番号５、８４、もしくは８５に示される配列を含むＶＨ領域、および／または配列番号３に示される配列を含むＶＬ領域を含む、抗体または抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号６６）を含む軽鎖、および配列ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＷＴＳＧＶＴＤＹＮＳＡＬＭＧＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６５）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６６の配列を含む軽鎖、および配列番号１０１または１０２の配列を含む重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する抗体または抗原結合断片であって、配列番号１３に示される配列を含むＶＨ領域、および／または配列番号１２に示される配列を含むＶＬ領域を含む、抗体または抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＹＡＳＥＳＩＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＳＱＳＦＳＷＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号６８）を含む軽鎖、および配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＦＰＳＤＳＹＳＮＹＮＫＫＦＫＤＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６７）を含む重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤＲ接触領域に基づくＴｒｏｐ−２抗体に対する抗体のＣＤＲ部分も提供する。ＣＤＲ接触領域は、抗原に対する抗体に特異性をもたらす、抗体の領域である。一般に、ＣＤＲ接触領域は、ＣＤＲ、および抗体が特異的抗原に結合するための適切なループ構造を維持するために束縛されているバーニアゾーン内に残基位置を含む。例えば、Ｍａｋａｂｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３：１１５６〜１１６６、２００７を参照。ＣＤＲ接触領域の決定は、当技術分野の技術の十分範囲内である。
Ｔｒｏｐ−２（ヒトＴｒｏｐ−２など）への本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体の結合親和性（ＫＤ）は、約０．００２〜約２００ｎＭであり得る。いくつかの実施形態では、結合親和性は、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約４５ｎＭ、約４０ｎＭ、約３５ｎＭ、約３０ｎＭ、約２５ｎＭ、約２０ｎＭ、約１５ｎＭ、約１０ｎＭ、約８ｎＭ、約７．５ｎＭ、約７ｎＭ、約６．５ｎＭ、約６ｎＭ、約５．５ｎＭ、約５ｎＭ、約４ｎＭ、約３ｎＭ、約２ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、約６０ｐＭ、約５０ｐＭ、約２０ｐＭ、約１５ｐＭ、約１０ｐＭ、約５ｐＭ、または約２ｐＭのいずれかである。いくつかの実施形態では、結合親和性は、約２５０ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭ、約１０ｎＭ、約７．５ｎＭ、約７ｎＭ、約６．５ｎＭ、約６ｎＭ、約５ｎＭ、約４．５ｎＭ、約４ｎＭ、約３．５ｎＭ、約３ｎＭ、約２．５ｎＭ、約２ｎＭ、約１．５ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、約５０ｐＭ、約２０ｐＭ、約１０ｐＭ、約５ｐＭ、または約２ｐＭのいずれか未満である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体の結合親和性（例えば、一価抗体結合）は、表面プラズモン共鳴によって測定して約３５ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体の結合親和性（例えば、一価抗体結合）は、表面プラズモン共鳴によって測定して約６．５ｎＭ以下である。
本発明は、これらの抗体のいずれかを作製する方法も提供する。本発明の抗体は、当技術分野で公知の手順によって作製することができる。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解もしくは他の分解によって、上述した組換え法（すなわち、単一もしくは融合ポリペプチド）によって、または化学合成によって生成することができる。抗体のポリペプチド、特に最大約５０アミノ酸のより短いポリペプチドは、化学合成によって好都合に作製される。化学合成の方法は、当技術分野で公知であり、商業的に利用可能である。例えば、抗体は、固相法を使用する自動ポリペプチドシンセサイザーによって生成することができる。米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、および同第６，３３１，４１５号も参照。
別の代替案では、抗体は、当技術分野で周知である手順を使用して組換えで作製することができる。一実施形態では、ポリヌクレオチドは、抗体ｍ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＮ、ｍ６Ｇ１１、ｈ６Ｇ１１、またはｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦの重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする配列を含む。対象とする抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクター中に維持することができ、次いで宿主細胞を展開し、将来使用するために凍結させることができる。ベクター（発現ベクターを含む）および宿主細胞は、本明細書でさらに記載されている。
本発明は、本発明の抗体のｓｃＦｖも包含する。単鎖可変領域断片は、短い連結ペプチドを使用することによって、軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を連結することによって作製される（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３〜４２６、１９８８）。連結ペプチドの例は、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号８０）であり、これは、一方の可変領域のカルボキシ末端と他方の可変領域のアミノ末端との間のおよそ３．５ｎｍを架橋する。他の配列のリンカーも設計および使用されている（Ｂｉｒｄら、１９８８、上記）。リンカーは、短い柔軟なポリペプチドであるべきであり、好ましくは約２０アミノ酸残基未満で構成されるべきである。リンカーは、次に、追加の機能、例えば、薬剤の結合または固体支持体への結合などのために修飾することができる。単鎖バリアントは、組換えで、または合成的に生成することができる。ｓｃＦｖの合成生成のために、自動シンセサイザーを使用することができる。ｓｃＦｖの組換え生産のために、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含有する適当なプラスミドを、酵母、植物、昆虫、もしくは哺乳動物細胞などの真核生物、または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの原核生物の適当な宿主細胞内に導入することができる。対象とするｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションなどの慣例的な操作によって作製することができる。結果として生じるｓｃＦｖは、当技術分野で公知の標準的なタンパク質精製技法を使用して単離することができる。
単鎖抗体の他の形態、例えば、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）またはミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）なども包含される。ダイアボディは、重鎖可変（ＶＨ）および軽鎖可変（ＶＬ）ドメインが、単一ポリペプチド鎖上であるが、短すぎて同じ鎖上の２つのドメイン間で対形成させることができず、それによって前記ドメインを別の鎖の相補的ドメインと強制的に対形成させ、２つの抗原結合部位を作り出すリンカーを使用して発現される、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４〜６４４８、１９９３；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２：１１２１〜１１２３、１９９４を参照）。ミニボディは、免疫グロブリン分子のヒンジ領域およびＣＨ３ドメインに融合した自然抗体のＶＬおよびＶＨドメインを含む。例えば、ＵＳ５，８３７，８２１を参照。
例えば、二重特異性抗体、すなわち、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体を、本明細書に開示の抗体を使用して調製することができる。二重特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０、１９８６を参照）。伝統的に、二重特異性抗体の組換え生産は、２本の重鎖が異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいていた（ＭｉｌｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５、５３７〜５３９、１９８３）。
二重特異性抗体を作製するための一手法によれば、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常領域配列に融合される。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常領域とのものである。融合物の少なくとも１つの中に存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有する第１重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好適である。免疫グロブリン重鎖融合物および必要に応じて、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別個の発現ベクター内に挿入され、適当な宿主生物体内にコトランスフェクトされる。これは、構築物内で不等比の３本のポリペプチド鎖が使用されると収率が最適になる実施形態において、３つのポリペプチド断片の相互の比率の調整に大きな柔軟性をもたらす。しかし、少なくとも２本のポリペプチド鎖が等比で発現されると収率が高くなる場合、または比が特に重要でない場合、２本、または３本すべてのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクター内に挿入することが可能である。
一手法では、二重特異性抗体は、一方のアーム内の第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方のアーム内のハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性をもたらす）から構成される。二重特異性分子の半分のみに免疫グロブリン軽鎖を有する非対称構造は、望まれない免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を促進する。この手法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／０４６９０号内に記載されている。
別の手法では、二重特異性抗体は、一方のアーム内の第１ヒンジ領域内のアミノ酸修飾から構成され、第１ヒンジ領域中の置換された／置き換えられたアミノ酸は、別のアーム内の第２ヒンジ領域中の対応するアミノ酸と反対電荷を有する。この手法は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３６４１９号（ＷＯ２０１１／１４３５４５）に記載されている。
別の手法では、二重特異性抗体は、トランスグルタミナーゼの存在下で、一方のアーム内において、ひとつのエピトープ（例えば、Ｔｒｏｐ−２）に対する抗体に合わせて遺伝子工学的に改変されたグルタミン含有ペプチドタグ、および別のアーム内において、第２エピトープに対する第２抗体に合わせて遺伝子工学的に改変された別のペプチドタグ（例えば、Ｌｙｓ含有ペプチドタグまたは反応性内因性Ｌｙｓ）を使用して生成することができる。この手法は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４８９９（ＷＯ２０１２／０５９８８２）に記載されている。
２つの共有結合的に接合された抗体を含むヘテロコンジュゲート抗体も、本発明の範囲内である。このような抗体は、免疫系細胞を望まれない細胞に向けるのに（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染を治療するために（ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／００３６０号および同第ＷＯ９２／２００３７３、ＥＰ０３０８９）使用されている。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の好都合な架橋法を使用して作製することができる。適当な架橋剤および架橋技法は、当技術分野で周知であり、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
キメラまたはハイブリッド抗体も、架橋剤を伴うものを含めて、合成タンパク質化学の公知の方法を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで調製することができる。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって構築することができる。この目的用の適当な試薬の例としては、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデート（ｍｅｒｃａｐｔｏｂｕｔｙｒｉｍｉｄａｔｅ）がある。
組換えヒト化抗体では、Ｆｃγ受容体ならびに補体系および免疫系との相互作用を回避するためにＦｃγ部分を修飾することができる。このような抗体を調製するための技法は、ＷＯ９９／５８５７２に記載されている。例えば、抗体がヒトにおける臨床試験および治療で使用される場合、定常領域をヒト定常領域により近く類似しているように遺伝子工学的に改変して、免疫応答を回避することができる。例えば、米国特許第５，９９７，８６７号および同第５，８６６，６９２号を参照。
本発明は、本発明のバリアントの性質に有意に影響しない機能的に等価な抗体、ならびに活性および／または親和性が増強され、もしくは減少したバリアントを含めた、表１に示した本発明のバリアントの抗体およびポリペプチドに対する修飾を包含する。例えば、Ｔｒｏｐ−２に対する所望の結合親和性を有する抗体を得るために、アミノ酸配列を変異導入することができる。ポリペプチドの修飾は、当技術分野で日常の行為であり、本明細書で詳細に説明する必要はない。修飾ポリペプチドの例としては、機能活性を著しく有害に変更しない、もしくはそのリガンドに対するポリペプチドの親和性を成熟させる（増強する）、アミノ酸残基の保存的置換、アミノ酸の１つもしくは複数の欠失もしくは付加を用いた、または化学的類似体を使用したポリペプチドがある。
アミノ酸配列挿入としては、１つの残基から、１００以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入がある。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体、またはエピトープタグに融合した抗体がある。抗体分子の他の挿入バリアントには、血液循環中で抗体の半減期を増大させる酵素またはポリペプチドの、抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。
置換バリアントは、除去された抗体分子内の少なくとも１つのアミノ酸残基、およびその場所内に挿入された異なる残基を有する。置換突然変異誘発の最も大きな関心のある部位には超可変領域が含まれるが、ＦＲ変化も企図されている。保存的置換を、「保存的置換」の表題で表３に示す。このような置換が生物活性を変化させる場合、表３で「例示的な置換」と命名した、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載する、より実質的な変化を導入することができ、生成物をスクリーニングすることができる。
Figure 2016104751
抗体の生物学的性質の実質的な修飾は、（ａ）例えば、シートもしくはヘリックスコンホメーションとしての置換範囲内のポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のバルクを維持することに対する置換の効果が有意に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在するアミノ酸残基は、共通の側鎖の性質に基づいて群に分類される：
（１）非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）電荷を有さない極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性（負に荷電した）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性（正に荷電した）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
非保存的置換は、これらのクラスの１つのクラスのメンバーを別のクラスと交換することによって行われる。
抗体の適切なコンホメーションの維持に関与していない任意のシステイン残基も、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止するために、一般にセリンと置換することができる。反対に、システイン結合（複数可）を、特に抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合、抗体の安定性を改善するために抗体に付加することができる。
アミノ酸修飾は、１つまたは複数のアミノ酸の変更または修飾から、可変領域などの領域の完全な再設計まで及び得る。可変領域を変更すると、結合親和性および／または特異性が変化し得る。いくつかの実施形態では、１〜５個以下の保存的アミノ酸置換がＣＤＲドメイン内で行われる。他の実施形態では、１〜３個以下の保存的アミノ酸置換がＣＤＲドメイン内で行われる。さらに他の実施形態では、ＣＤＲドメインは、ＣＤＲ Ｈ３および／またはＣＤＲ Ｌ３である。
修飾には、グリコシル化および非グリコシル化ポリペプチド、ならびに他の翻訳後修飾、例えば、異なる糖でのグリコシル化、アセチル化、およびリン酸化などを有するポリペプチドも含まれる。抗体は、これらの定常領域内の保存位置でグリコシル化される（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６５：１１１〜１２８、１９９７；ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ、ＴｉｂＴＥＣＨ、１５：２６〜３２、１９９７）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３２：１３１１〜１３１８、１９９６；ＷｉｔｔｗｅおよびＨｏｗａｒｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２９：４１７５〜４１８０、１９９０）、ならびにコンホメーションに影響し得る糖タンパク質の部分と、糖タンパク質の提示された三次元表面との分子内相互作用（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、上記；ＷｙｓｓおよびＷａｇｎｅｒ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、７：４０９〜４１６、１９９６）に影響する。オリゴ糖は、特異的な認識構造に基づいて、ある特定の分子を所与の糖タンパク質のターゲットとする機能を果たすこともできる。抗体のグリコシル化は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響することも報告されている。特に、バイセクティングＧｌｃＮＡｃのの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）がテトラサイクリンにより発現制御されるＣＨＯ細胞は、改善されたＡＤＣＣ活性を有することが報告された（Ｕｍａｎａら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１７：１７６〜１８０、１９９９）。
抗体のグリコシル化は、一般に、Ｎ結合型またはＯ結合型である。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−セリン、アスパラギン−Ｘ−トレオニン、およびアスパラギン−Ｘ−システイン（式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分がアスパラギン側鎖に酵素的結合するための認識配列である。したがって、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在すると、潜在的なグリコシル化部位が作り出される。Ｏ結合型グリコシル化は、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１種の、ヒドロキシアミノ酸、最も一般にはセリンまたはトレオニンへの結合を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも使用することができる。
グリコシル化部位の抗体への付加は、アミノ酸配列を、これが上述したトリペプチド配列の１つまたは複数を含有するように変更することによって好都合には達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位に関して）。変更は、元の抗体の配列への、１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加、またはこれらによる置換によっても行うことができる（Ｏ結合型グリコシル化部位に関して）。
抗体のグリコシル化パターンも、基本的なヌクレオチド配列を変更することなく変更することができる。グリコシル化は、抗体を発現させるのに使用される宿主細胞に大部分は依存する。潜在的な治療剤としての組換え糖タンパク質、例えば、抗体の発現に使用される細胞型は、まれにネイティブ細胞であるので、抗体のグリコシル化パターンのバリエーションが予期され得る（例えば、Ｈｓｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７２：９０６２〜９０７０、１９９７を参照）。
宿主細胞の選択に加えて、抗体を組換え生産する間にグリコシル化に影響する要因としては、増殖モード、培地配合、培養密度、酸素供給、ｐＨ、精製スキームなどがある。オリゴ糖生成に関与するある特定の酵素の導入または過剰発現を含めて、特定の宿主生物体内で実現されるグリコシル化パターンを変更するための様々な方法が提案されている（米国特許第５，０４７，３３５号、同第５，５１０，２６１号、および同第５，２７８，２９９号）。グリコシル化、またはある特定のタイプのグリコシル化は、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ Ｈ）、Ｎ−グリコシダーゼＦ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３を使用して、糖タンパク質から酵素的に除去することができる。さらに、組換え宿主細胞は、ある特定のタイプの多糖のプロセシングにおいて欠陥のあるように遺伝子工学的に改変することができる。これらの技法および同様の技法は、当技術分野で周知である。
修飾の他の方法には、それだけに限らないが、酵素的手段、酸化的置換、およびキレート化を含めた、当技術分野で公知のカップリング技法の使用が含まれる。修飾は、例えば、イムノアッセイ用標識の結合に使用することができる。修飾ポリペプチドは、当技術分野で確立した手順を使用して作製され、当技術分野で公知の標準アッセイを使用してスクリーニングすることができる。これらのアッセイのいくつかを以下および実施例で記載する。
本発明のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＦｃγ受容体に対する親和性が増大した定常領域などの修飾定常領域を含み、免疫学的に不活性もしくは部分的に不活性であり、例えば、補体媒介溶解を誘発せず、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激せず、もしくはマクロファージを活性化せず、または以下、すなわち、補体媒介溶解の誘発、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の刺激、もしくはミクログリアの活性化のうちの任意の１つもしくは複数において活性が低減している（無修飾抗体と比較して）。エフェクター機能の最適レベルおよび／または組合せを実現するために、定常領域の異なる修飾を使用することができる。例えば、Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、８６：３１９〜３２４、１９９５、Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１５７：４９６３〜９、１５７：４９６３〜４９６９、１９９６、Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６４：４１７８〜４１８４、２０００、Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５〜２６０１、１９８９、およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９〜７６、１９９８を参照。いくつかの実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３〜２６２４、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、および／または英国特許出願第９８０９９５１．８．号に記載されているように修飾される。他の実施形態では、抗体は、以下の突然変異、すなわち、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１（野生型ＩｇＧ２配列を参照したアミノ酸番号付け）を含むヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域を含む。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３〜２６２４。さらに他の実施形態では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化されている。いくつかの実施形態では、定常領域は、グリコシル化アミノ酸残基または定常領域内のＮ−グリコシル化認識配列の一部であるフランキング残基を突然変異させることによって、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化されている。例えば、Ｎ−グリコシル化部位Ｎ２９７は、Ａ、Ｑ、Ｋ、またはＨに突然変異され得る。Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５〜２６０１、１９８９、およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９〜７６、１９９８を参照。いくつかの実施形態では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化されている。定常領域は、酵素的に（酵素ＰＮＧａｓｅによる炭水化物の除去など）、またはグリコシル化欠損宿主細胞内の発現によって、Ｎ結合型グリコシル化の代わりに非グリコシル化することができる。
他の抗体修飾には、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５８５７２号に記載されたように修飾された抗体が含まれる。これらの抗体は、標的分子に向けられた結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域のすべてまたは一部に実質的に相同のアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、標的の著しい補体依存性溶解または細胞媒介性破壊を誘発することなく、標的分子に結合することができる。いくつかの実施形態では、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合することができる。これらは一般に、２つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づく。このようにして修飾された抗体は、慣例的な抗体療法に対する炎症反応および他の拒絶反応を回避するための長期抗体療法で使用するのに特に適している。
本発明は、親和性成熟した実施形態を含む。例えば、親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の手順によって生成することができる（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９〜７８３、１９９２、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ、９１：３８０９〜３８１３、１９９４、Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７〜１５５、１９９５、Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４〜２００４、１９９５、Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０〜９、１９９５、Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９〜８９６、１９９２、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／０５８１８４号）。
以下の方法は、抗体の親和性を調整し、ＣＤＲを特徴付けるのに使用することができる。抗体のＣＤＲを特徴付け、かつ／または抗体などのポリペプチドの結合親和性を変更する（改善するなど）一方法は、「ライブラリースキャンニング突然変異誘発」と呼ばれた。一般に、ライブラリースキャンニング突然変異誘発は、以下のように働く。ＣＤＲ内の１つまたは複数のアミノ酸位置が、当技術分野で承認されている方法を使用して、２つ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０など）のアミノ酸と置き換えられる。これにより、クローンの小ライブラリーが生成され（いくつかの実施形態では、分析されるアミノ酸位置毎に１つ）、それぞれは、２つ以上のメンバーの複雑性を有する（位置毎に２つ以上のアミノ酸が置換される場合）。一般に、ライブラリーは、天然（非置換）アミノ酸を含むクローンも含む。各ライブラリーから少数のクローン、例えば、約２０〜８０クローン（ライブラリーの複雑性に応じて）が、標的ポリペプチド（または他の結合標的）に対する結合親和性についてスクリーニングされ、結合性が増大した、同じ、減少した、またはまったくない候補が同定される。結合親和性を決定するための方法は、当技術分野で周知である。結合親和性は、約２倍以上の結合親和性の差異を検出するＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴分析を使用して求めることができる。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）は、出発抗体が比較的高い親和性、例えば、約１０ｎＭ以下のＫＤで既に結合する場合、特に有用である。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴を使用するスクリーニングは、本明細書の実施例で記載する。
結合親和性は、Ｋｉｎｅｘａ Ｂｉｏｃｅｎｓｏｒ、シンチレーション近接アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＯＲＩＧＥＮイムノアッセイ（ＩＧＥＮ）、蛍光消光、蛍光移動、および／または酵母ディスプレイを使用して求めることができる。結合親和性は、適当なバイオアッセイを使用してスクリーニングすることもできる。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ内のすべてのアミノ酸位置が、当技術分野で承認されている突然変異誘発法（これらのいくつかを本明細書に記載する）を使用して、２０すべての天然アミノ酸で置き換えられる（いくつかの実施形態では、一つずつ）。これにより、クローンの小ライブラリーが生成され（いくつかの実施形態では、分析されるアミノ酸位置毎に１つ）、それぞれは、２０のメンバーの複雑性を有する（位置毎に２０すべてのアミノ酸が置換される場合）。
いくつかの実施形態では、スクリーニングされるライブラリーは、２つ以上の位置に置換を含み、これらは、同じＣＤＲ内にあっても、２つ以上のＣＤＲ内にあってもよい。したがって、ライブラリーは、１つのＣＤＲ内の２つ以上の位置に置換を含み得る。ライブラリーは、２つ以上のＣＤＲ内の２つ以上の位置に置換を含み得る。ライブラリーは、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ内に見つかる、３、４、５、またはそれ以上の位置に置換を含み得る。置換は、低冗長性コドンを使用して調製することができる。例えば、Ｂａｌｉｎｔら、Ｇｅｎｅ１３７（１）：１０９〜１８、１９９３の表２を参照。
ＣＤＲは、ＣＤＲＨ３および／またはＣＤＲＬ３であり得る。ＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、および／またはＣＤＲＨ３の１つまたは複数であり得る。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、または拡張ＣＤＲであってもよい。
結合性が改善された候補を配列決定し、それによって、親和性を改善するＣＤＲ置換突然変異体（「改善された」置換とも呼ばれる）を同定することができる。結合する候補を配列決定し、それによって、結合性を保持するＣＤＲ置換を同定することもできる。
複数ラウンドのスクリーニングを行うことができる。例えば、結合性が改善された候補（それぞれは、１つまたは複数のＣＤＲの１つまたは複数の位置でアミノ酸置換を含む）は、それぞれの改善されたＣＤＲ位置（すなわち、置換突然変異体が結合性の改善を示したＣＤＲ内のアミノ酸位置）で少なくとも元のアミノ酸および置換されたアミノ酸を含有する第２ライブラリーの設計にも有用である。このライブラリーの調製、スクリーニング、または選択を以下でさらに論じる。
改善された結合性、同じ結合性、減少した結合性を有し、または結合性をまったく有さないクローンの頻度も、抗体−抗原複合体の安定性について各アミノ酸位置の重要性に関する情報を提供する限り、ライブラリースキャンニング突然変異誘発も、ＣＤＲを特徴付けるための手段を提供する。例えば、ＣＤＲの位置が、２０すべてのアミノ酸に変更されたとき結合性を保持する場合、その位置は、抗原結合に必要とされそうにない位置として同定される。反対に、ＣＤＲの位置が、置換の小パーセンテージのみにおいて結合性を保持する場合、その位置は、ＣＤＲ機能に重要である位置として同定される。したがって、ライブラリースキャンニング突然変異誘発法により、多くの異なるアミノ酸（２０すべてのアミノ酸を含む）に変更することができるＣＤＲ内の位置、および変更することができないか、または数種のアミノ酸に変更することができるだけであるＣＤＲ内の位置に関する情報が生成される。
親和性が改善された候補は、第２ライブラリー内で組み合わせることができ、このライブラリーは、改善されたアミノ酸、その位置における元のアミノ酸を含み、望まれる、または所望のスクリーニングもしくは選択法を使用して許容されるライブラリーの複雑性に応じて、その位置で追加の置換をさらに含むことができる。さらに、必要に応じて、隣接するアミノ酸位置は、少なくとも２つ以上のアミノ酸に対してランダム化することができる。隣接するアミノ酸をランダム化すると、突然変異体ＣＤＲ内の追加の立体構造的柔軟性を可能にすることができ、それはさらには、より多数の改善突然変異の導入を可能にし、または促進することができる。このライブラリーはまた、スクリーニングの第１ラウンドで親和性の改善を示さなかった位置で置換を含むことができる。
第２ライブラリーは、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴分析を使用するスクリーニング、ならびにファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、およびリボソームディスプレイを含む、選択のための当技術分野で公知の任意の方法を使用する選択を含めて、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、結合親和性が改善および／または変更されたライブラリーメンバーについてスクリーニングまたは選択される。
本発明は、本発明の抗体に由来する１つまたは複数の断片または領域を含む融合タンパク質も包含する。一実施形態では、配列番号１、３、６、７、８、１０、および１２に示した可変軽鎖領域の少なくとも１０の連続したアミノ酸、ならびに／または配列番号２、４、５、９、１１、および１３に示した可変重鎖領域の少なくとも１０のアミノ酸を含む融合ポリペプチドが提供される。他の実施形態では、可変軽鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、もしくは少なくとも約３０の連続したアミノ酸、および／または可変重鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、もしくは少なくとも約３０の連続したアミノ酸を含む融合ポリペプチドが提供される。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１と２、３と４、３と５、６と５、７と５、８と９、１０と１１、および１２と１３の中から選択される配列対のいずれかに示した軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、１つまたは複数のＣＤＲを含む。さらに他の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤＲ Ｈ３（ＶＨ ＣＤＲ３）および／またはＣＤＲ Ｌ３（ＶＬ ＣＤＲ３）を含む。本発明の目的に関して、融合タンパク質は、１種または複数の抗体、および天然分子内に結合されていない別のアミノ酸配列、例えば、異種配列、または別の領域からの相同配列を含有する。例示的な異種配列としては、それだけに限らないが、ＦＬＡＧタグまたは６Ｈｉｓタグなどの「タグ」がある。タグは、当技術分野で周知である。
融合ポリペプチドは、当技術分野で公知の方法によって、例えば、合成的に、または組換えで作り出すことができる。一般に、本発明の融合タンパク質は、本明細書に記載の組換え法を使用して、これらをコードするポリヌクレオチドを調製し、発現させることによって作製されるが、これらは、例えば、化学合成を含めた当技術分野で公知の他の手段によっても調製することができる。
本発明は、固体支持体へのカップリングを促進する作用物質（ビオチンまたはアビジンなど）にコンジュゲートした（例えば、連結した）抗体を含む組成物も提供する。単純性のために、これらの方法が本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体の実施形態のいずれかに適用されるという理解で、一般に、抗体に言及する。コンジュゲーションは一般に、本明細書に記載のこれらのコンポーネントを連結することを指す。連結（これは一般に、少なくとも投与のために、近接会合でこれらのコンポーネントを固定することである）は、任意の数の方法で実現され得る。例えば、作用物質と抗体との直接反応は、それぞれが他方の置換基と反応することができる置換基を有する場合、可能である。例えば、一方上の求核基、例えば、アミノ基またはスルフヒドリル基などは、他方上のカルボニル含有基、例えば、無水物もしくは酸ハロゲン化物など、または良好な脱離基（例えば、ハロゲン化物）を含有するアルキル基と反応することができる。
本発明は、本発明の抗体をコードする単離ポリヌクレオチド、ならびにこのポリヌクレオチドを含むベクターおよび宿主細胞も提供する。
したがって、本発明は、以下、すなわち、ｍ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＮ、ｍ６Ｇ１１、ｈ６Ｇ１１、ｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦのうちのいずれか、またはＴｒｏｐ−２に結合する能力を有するこれらの任意の断片もしくは部分をコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド（または医薬組成物を含めた組成物）を提供する。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体（抗体断片を含む）およびポリペプチド、例えば、エフェクター機能を損なった抗体およびポリペプチドなどのいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の手順によって作製し、発現させることができる。
別の態様では、本発明は、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物（医薬組成物など）を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。さらに他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号１５および配列番号１４、すなわち、
ｍ７Ｅ６重鎖可変領域
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＧＣＡＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＡＧＣＴＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＣＣＡＴＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＡＣＣＧＧＴＧＧＴＡＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＴＡＡＣＡＧＣＧＣＡＣＴＧＡＴＧＡＧＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＧＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＧＡＡＡＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＴＡＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＡＣＧＣＧＡＣＧＧＧＧＡＴＴＡＴＧＡＴＣＧＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１５）
ｍ７Ｅ６軽鎖可変領域
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＴＴＣＣＴＴＡＧＣＴＧＴＡＴＣＴＣＴＧＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＡＡＡＡＧＴＧＴＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＧＧＣＴＡＴＡＧＴＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＣＴＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＡＣＡＴＣＣＡＴＣＣＴＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＧＣＴＧＣＡＡＣＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＣＡＧＴＡＧＧＧＡＧＣＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ（配列番号１４）
に示したポリヌクレオチドのいずれか、または両方を含む。
他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号１７および配列番号１６、すなわち、
ｈ７Ｅ６重鎖可変領域
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＧＣＡＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＡＧＣＴＣＴＴＡＣＧＧＣＧＴＣＣＡＴＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＡＣＣＧＧＴＧＧＴＡＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＴＡＡＣＡＧＣＧＣＡＣＴＧＡＴＧＡＧＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＧＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＧＡＡＡＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＴＡＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＡＣＧＣＧＡＣＧＧＧＧＡＴＴＡＴＧＡＴＣＧＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１７）
ｈ７Ｅ６軽鎖可変領域
ＧＡＴＡＴＣＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＧＧＡＴＴＣＧＣＴＧＧＣＧＧＴＡＴＣＡＣＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＣＣＡＣＧＡＴＴＡＡＣＴＧＣＣＧＴＧＣＡＡＧＣＡＡＡＴＣＡＧＴＧＴＣＧＡＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＣＣＡＧＣＣＧＣＣＧＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＣＴＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＴＡＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＧＴＡＴＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＡＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ（配列番号１６）
に示したポリヌクレオチドのいずれか、または両方を含む。
さらに他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号１８および配列番号１６、すなわち、
ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ重鎖可変領域
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＧＣＡＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＡＧＣＴＣＴＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡＴＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＡＣＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＡＣＣＧＡＣＴＡＴＡＡＣＡＧＣＧＣＡＣＴＧＡＴＧＧＧＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＧＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＧＡＡＡＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＴＡＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＡＣＧＣＧＡＣＧＧＧＧＡＴＴＡＴＧＡＴＣＧＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１８）
ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ軽鎖可変領域
ＧＡＴＡＴＣＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＧＧＡＴＴＣＧＣＴＧＧＣＧＧＴＡＴＣＡＣＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＣＣＡＣＧＡＴＴＡＡＣＴＧＣＣＧＴＧＣＡＡＧＣＡＡＡＴＣＡＧＴＧＴＣＧＡＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＣＣＡＧＣＣＧＣＣＧＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＣＴＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＴＡＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＧＴＡＴＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＡＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ（配列番号１６）
に示したポリヌクレオチドのいずれか、または両方を含む。
他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号１８および配列番号１９、すなわち、
ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ重鎖可変領域
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＧＣＡＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＡＧＣＴＣＴＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡＴＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＡＣＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＡＣＣＧＡＣＴＡＴＡＡＣＡＧＣＧＣＡＣＴＧＡＴＧＧＧＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＧＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＧＡＡＡＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＴＡＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＡＣＧＣＧＡＣＧＧＧＧＡＴＴＡＴＧＡＴＣＧＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１８）
ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ軽鎖可変領域
ＧＡＴＡＴＣＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＧＧＡＴＴＣＧＣＴＧＧＣＧＧＴＡＴＣＡＣＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＣＣＡＣＧＡＴＴＡＡＣＴＧＣＣＧＴＧＣＡＡＧＣＡＡＡＴＣＡＧＴＧＴＣＧＡＣＣＴＣＣＴＴＧＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＣＣＡＧＣＣＧＣＣＧＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＣＴＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＴＡＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＧＴＡＴＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＡＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ（配列番号１９）。
に示したポリヌクレオチドのいずれか、または両方を含む。
さらに他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号１８および配列番号２０、すなわち、
ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＮ重鎖可変領域
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＡＴＣＡＧＧＴＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＧＣＡＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＡＧＣＴＣＴＴＡＣＧＣＧＴＣＣＡＴＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＡＣＣＧＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＡＣＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＡＣＣＧＡＣＴＡＴＡＡＣＡＧＣＧＣＡＣＴＧＡＴＧＧＧＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＧＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＧＡＡＡＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＴＡＣＣＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＡＣＧＣＧＡＣＧＧＧＧＡＴＴＡＴＧＡＴＣＧＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号１８）
ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＮ軽鎖可変領域
ＧＡＴＡＴＣＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＧＧＡＴＴＣＧＣＴＧＧＣＧＧＴＡＴＣＡＣＴＧＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＣＣＡＣＧＡＴＴＡＡＣＴＧＣＣＧＴＧＣＡＡＧＣＡＡＡＴＣＡＧＴＧＴＣＧＡＣＣＴＣＣＡＡＴＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＣＣＡＧＣＣＧＣＣＧＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＴＧＧＣＴＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＴＡＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＡＧＣＴＧＣＣＧＴＡＴＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＡＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ（配列番号２０）
に示したポリヌクレオチドのいずれか、または両方を含む。
他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号２５および配列番号２０、すなわち、
ｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦ重鎖可変領域
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＧＴＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＧＡＡＧＴＣＡＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＧＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＴＴＡＴＴＧＧＡＴＴＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＡＧＧＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＴＣＴＧＡＣＴＣＴＴＡＣＡＧＣＡＡＣＴＡＴＡＡＴＡＡＧＡＡＡＴＴＴＡＡＧＧＡＴＣＧＣＧＴＡＡＣＡＡＴＧＡＣＣＣＧＴＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＴＴＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＴＴＣＴＣＴＧＣＧＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＡＣＧＣＧＧＴＴＣＣＧＧＧＴＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号２５）
ｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦ軽鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＴＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＧＡＡＣＧＣＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＧＣＴＧＣＣＧＣＧＣＴＴＣＴＣＡＧＡＣＣＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＣＣＡＴＴＣＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＡＧＣＣＣＣＧＣＧＴＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＡＣＧＣＣＴＣＡＧＡＡＡＧＴＡＴＴＴＣＡＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＴＣＧＣＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＡＣＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＴＡＧＴＴＴＧＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＴＣＧＣＡＧＴＣＴＴＴＴＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＴＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ（配列番号２６）
に示したポリヌクレオチドのいずれか、または両方を含む。
他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号２２および配列番号２１、すなわち、
ｍ６Ｇ１１重鎖可変領域
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＴＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＡＴＡＴＴＴＡＴＣＣＴＴＣＴＧＡＴＡＧＴＴＡＴＴＣＴＡＡＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＧＴＣＡＧＣＡＧＣＣＣＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＴＡＧＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号２２）
ｍ６Ｇ１１軽鎖可変領域
ＧＡＣＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＴＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＧＴＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＴＣＡＧＴＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＣＣＡＴＴＧＧＣＡＣＡＡＧＣＡＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＧＡＡＣＡＡＡＴＧＧＴＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＣＡＴＡＡＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＴＧＡＧＴＣＴＡＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＣＣＣＴＴＣＣＡＧＧＴＴＴＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＴＡＧＣＡＴＣＡＡＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＡＧＴＡＡＴＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ（配列番号２１）
に示したポリヌクレオチドのいずれか、または両方を含む。
他の実施形態では、組成物は、以下の配列番号２４および配列番号２３、すなわち、
ｈ６Ｇ１１重鎖可変領域
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＧＴＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＧＡＡＧＴＣＡＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＧＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＴＴＡＴＴＧＧＡＴＴＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＡＧＧＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＴＣＴＡＣＣＣＡＴＣＴＧＡＣＴＣＴＴＡＣＡＧＣＡＡＣＴＡＴＡＡＴＣＡＧＡＡＡＴＴＴＡＡＧＧＡＴＣＧＣＧＴＡＡＣＡＡＴＧＡＣＣＣＧＴＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＧＴＴＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＴＴＣＴＣＴＧＣＧＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＡＣＧＣＧＧＴＴＣＣＡＧＴＴＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号２４）
ｈ６Ｇ１１軽鎖可変領域
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＴＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＧＡＡＣＧＣＧＣＡＡＣＣＣＴＧＡＧＣＴＧＣＣＧＣＧＣＴＴＣＴＣＡＧＡＣＣＡＴＴＧＧＴＡＣＣＴＣＣＡＴＴＣＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＡＧＣＣＣＣＧＣＧＴＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＡＣＧＣＣＴＣＡＧＡＡＡＧＴＡＴＴＴＣＡＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＴＣＧＣＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＡＣＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＴＡＧＴＴＴＧＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＡＡＣＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＴＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ（配列番号２３）
に示したポリヌクレオチドのいずれか、または両方を含む。
発現ベクター、およびポリヌクレオチド組成物の投与は、本明細書にさらに記載されている。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法を提供する。
任意のこのような配列に相補的なポリヌクレオチドも本発明によって包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードまたはアンチセンス）であっても、二本鎖であってもよく、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡ、または合成）であっても、ＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ分子には、イントロンを含有し、１対１の様式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子が含まれる。追加のコード配列または非コード配列が本発明のポリヌクレオチド内に存在してもよいが、その必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持材に連結されていてもよいが、その必要はない。
ポリヌクレオチドは、天然配列（すなわち、抗体またはその部分をコードする内因性配列）を含むことができ、またはこのような配列のバリアントを含むことができる。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされるポリペプチドの免疫反応性が天然の免疫反応性分子と比べて減少しないように、１つまたは複数の置換、付加、欠失、および／または挿入を含有する。コードされるポリペプチドの免疫反応性に対する効果は、一般に、本明細書に記載するように評価することができる。バリアントは、好ましくは、自然抗体またはその部分をコードするポリヌクレオチド配列と、少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも約８０％の同一性、さらにより好ましくは、少なくとも約９０％の同一性、最も好ましくは、少なくとも約９５％の同一性を呈する。
２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載するように、最大対応に関してアラインメントされたとき同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、一般に、比較ウィンドウにわたって配列を比較して、配列類似性の局所領域を同定および比較することによって実施される。「比較ウィンドウ」は、本明細書において、少なくとも約２０の連続した位置、通常３０〜約７５、または４０〜約５０のセグメントを指し、この中で１つの配列を同じ数の連続した位置の参照配列と、２つの配列を最適にアラインメントさせた後に比較することができる。
比較するための配列の最適なアラインメントは、バイオインフォマティクスソフトウェアのＬａｓｅｒｇｅｎｅ一式内のＭｅｇａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して、デフォルトのパラメータを使用して行うことができる。このプログラムは、以下の参考文献に記載されたいくつかのアラインメントスキームを具現する：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、１９７８、Ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ − Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ． Ｉｎ Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）、Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ、５巻、増補３、３４５〜３５８頁；Ｈｅｉｎ Ｊ．、１９９０、Ｕｎｉｆｉｅｄ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ、６２６〜６４５頁、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．、１９８９、ＣＡＢＩＯＳ、５：１５１〜１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ Ｗ．、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ、４：１１〜１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．、１９７１、Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．、１１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．、Ｎｅｓ，Ｍ．、１９８７、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．、４：４０６〜４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．、１９７３、Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ ８０：７２６〜７３０。
好ましくは、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０の位置の比較のウィンドウにわたって２つの最適にアラインメントされた配列を比較することによって求められ、ここで、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントのための参照配列（これは、付加または欠失を含まない）と比較して、２０パーセント以下、通常５〜１５パーセント、または１０〜１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。パーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両配列内で起こる位置の数を求めてマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を参照配列（すなわち、ウィンドウサイズ）内の位置の総数で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
バリアントは、加えて、または代わりに、天然遺伝子またはその部分もしくは相補鎖に実質的に相同である。このようなポリヌクレオチドバリアントは、自然抗体（または相補配列）をコードする天然に存在するＤＮＡ配列に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる。
適当な「中程度にストリンジェントな条件」は、５×ＳＳＣ、０．５％のＳＤＳ、１．０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中での予洗、５０℃〜６５℃、５×ＳＳＣで一晩のハイブリダイゼーション、その後の０．１％のＳＤＳを含有する２×、０．５×、および０．２×ＳＳＣのそれぞれを用いた６５℃で２０分間の２回の洗浄を含む。
本明細書において、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」は、（１）洗浄のために低イオン強度および高温、例えば、５０℃で、０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウムを使用し、（２）ハイブリダイゼーションの間に、４２℃で、ホルムアミド、例えば、０．１％のウシ血清アルブミンを含む５０％（ｖ／ｖ）のホルムアミド／０．１％のフィコール／０．１％のポリビニルピロリドン／７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭのクエン酸ナトリウムを含むｐＨ６．５の５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液などの変性剤を使用し、または（３）４２℃で０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）および５５℃で５０％のホルムアミド中での洗浄、その後の５５℃でＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄を伴った、４２℃で、５０％のホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％のＳＤＳ、および１０％のデキストラン硫酸を使用するものである。当業者は、プローブ長などの要因に対応するために、必要に応じてどのように温度、イオン強度などを調整するかを認識するであろう。
遺伝子コードの縮退の結果として、本明細書に記載のポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することを、当業者が理解することになる。これらのポリヌクレオチドのいくつかは、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列に対して最小の相同性を持つ。それにもかかわらず、コドン使用頻度の差異に起因して変化するポリヌクレオチドは、本発明によって具体的に企図されている。さらに、本明細書に提供するポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本発明の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの１つまたは複数の突然変異、例えば、欠失、付加、および／または置換などの結果として変更されている内因性遺伝子である。得られるｍＲＮＡおよびタンパク質は、変更された構造または機能を有し得るが、その必要はない。対立遺伝子は、標準技法（ハイブリダイゼーション、増幅、および／またはデータベース配列比較など）を使用して同定することができる。
本発明のポリヌクレオチドは、化学合成、組換え法、またはＰＣＲを使用して得ることができる。化学的なポリヌクレオチド合成の方法は、当技術分野で周知であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。当業者は、所望のＤＮＡ配列を生成するために、本明細書に提供する配列、および市販のＤＮＡシンセサイザーを使用することができる。
組換え法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、本明細書でさらに論じるように、所望の配列を含むポリヌクレオチドを適当なベクター中に挿入することができ、ベクターを次に、複製および増幅のために適当な宿主細胞内に導入することができる。ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の任意の手段によって宿主細胞内に挿入することができる。細胞は、直接取込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ−接合、または電気穿孔により、外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。導入された後、外因性ポリヌクレオチドは、非組込みベクター（プラスミドなど）として細胞内で維持し、または宿主細胞ゲノム中に組み込むことができる。このように増幅されたポリヌクレオチドは、当技術分野で周知の方法によって宿主細胞から単離することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照。
代わりに、ＰＣＲにより、ＤＮＡ配列の複製が可能になる。ＰＣＲ技術は、当技術分野で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号、および同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
ＲＮＡは、適切なベクター中で単離ＤＮＡを使用し、適当な宿主細胞内にこれを挿入することによって得ることができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡに転写される場合、次いで、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、上記に示されているように、当業者に周知の方法を使用してＲＮＡを単離することができる。
適当なクローニングベクターを標準技法によって構築することができ、または当技術分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは、使用されるように意図された宿主細胞によって変更することができるが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有することになり、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一標的を有することができ、かつ／またはベクターを含有するクローンの選択に使用することができるマーカー用遺伝子を担持することができる。適当な例としては、プラスミドならびに細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターがある。これらの、および多くの他のクローニングベクターは、市販供給業者、例えば、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能である。
発現ベクターは一般に、本発明によるポリヌクレオチドを含有する複製可能ポリヌクレオチドコンストラクトである。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの一体部分として宿主細胞内で複製可能でなければならないことが暗示されている。適当な発現ベクターとしては、それだけに限らないが、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含めたウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示された発現ベクター（複数可）がある。ベクターコンポーネントとして一般に、それだけに限らないが、以下、すなわちシグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、適当な転写制御エレメント（プロモーター、エンハンサー、およびターミネーターなど）の１つまたは複数を挙げることができる。発現（すなわち、翻訳）のために、１つまたは複数の翻訳制御エレメント、例えば、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、および終止コドンなども通常必要とされる。
対象とするポリヌクレオチドを含有するベクターは、電気穿孔、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、この場合、ベクターは、ワクシニアウイルスなどの感染性病原体である）を含めたいくつかの適切な手段のいずれかによって宿主細胞内に導入することができる。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は、宿主細胞の特徴に依存することになることが多い。
本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞も提供する。異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を、対象とする抗体、ポリペプチド、またはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的に使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定例としては、それだけに限らないが、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、およびＣＨＯ細胞がある。ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号も参照。適当な非哺乳動物宿主細胞としては、原核生物（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはＢ．サチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）など）、および酵母（Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、Ｓ．ポンベ（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）、またはＫ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）など）がある。好ましくは、宿主細胞は、存在する場合、宿主細胞中の対象とする、対応する内因性抗体またはタンパク質のレベルより、約５倍高い、より好ましくは１０倍高い、さらにより好ましくは２０倍高いレベルでｃＤＮＡを発現する。Ｔｒｏｐ−２またはＴｒｏｐ−２ドメイン（例えば、ドメイン１〜４）への特異的結合のための宿主細胞のスクリーニングは、イムノアッセイまたはＦＡＣＳによって行われる。対象とする抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞を同定することができる。
Ｔｒｏｐ−２抗体コンジュゲート
本発明は、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはその抗原結合断片のコンジュゲート（または免疫複合体）であって、抗体または抗原結合断片は、直接に、またはリンカーを介して間接的に、標的免疫療法用作用物質（例えば、細胞毒性剤）にコンジュゲートしている（例えば、抗体−薬剤コンジュゲート）、コンジュゲートも提供する。例えば、腫瘍（例えば、Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍）への細胞毒性剤部分の標的化局所送達のために、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはその抗原結合断片に細胞毒性剤を連結またはコンジュゲートすることができる。
細胞毒性剤または他の治療剤を抗体にコンジュゲートするための方法は、様々な刊行物に記載されている。例えば、リシン側鎖アミンによって、またはコンジュゲーション反応が起こるように鎖間ジスルフィド結合を低減することにより活性化されたシステインスルフヒドリル基によって、抗体中に化学修飾を行うことができる。例えば、Ｔａｎａｋａら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、５７９：２０９２〜２０９６、２００５、およびＧｅｎｔｌｅら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、１５：６５８〜６６３、２００４を参照。規定された化学量論比を有する特定の薬剤コンジュゲーションのために抗体の特定の部位で遺伝子工学的に改変された反応性システイン残基も記載されている。例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２６：９２５〜９３２、２００８を参照。アシルドナーグルタミン含有タグ、またはトランスグルタミナーゼおよびアミンの存在下でポリペプチドの遺伝子工学的な改変によって反応性にされた（すなわち、アシルドナーとして共有結合を形成する能力）内因性グルタミンを使用するコンジュゲーション（例えば、反応性アミンを含み、またはこれに結合した細胞毒性剤）も、国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４８９９号（ＷＯ２０１２／０５９８８２）に記載されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、抗体の特定の部位（例えば、カルボキシル末端、アミノ末端、またはＴｒｏｐ−２抗体中の別の部位）で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグを含む。いくつかの実施形態では、タグは、アミノ酸グルタミン（Ｑ）またはアミノ酸配列ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号８１）、ＬＬＱ、ＬＬＱＧＰＧＫ（配列番号９０）、ＬＬＱＧＰＧ（配列番号９１）、ＬＬＱＧＰＡ（配列番号９２）、ＬＬＱＧＰ（配列番号９３）、ＬＬＱＰ（配列番号９４）、ＬＬＱＰＧＫ（配列番号９５）、ＬＬＱＧＡＰＧＫ（配列番号９６）、ＬＬＱＧＡＰＧ（配列番号９７）、ＬＬＱＧＡＰ（配列番号９８）、ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｋ、Ｇであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号８８）、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、任意の天然に存在するアミノ酸であり、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、任意の天然に存在するアミノ酸であるかもしくは存在しない）（配列番号８９）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、抗体の特定の部位で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグであって、Ｔｒｏｐ−２抗体の軽鎖カルボキシル末端で遺伝子工学的に改変されたアミノ酸配列ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）を含む、タグを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、抗体の特定の部位で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグであって、Ｔｒｏｐ−２抗体の軽鎖カルボキシル末端で遺伝子工学的に改変されたアミノ酸配列ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号８１）を含む、タグを含む。他の実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、抗体の特定の部位で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグであって、Ｔｒｏｐ−２抗体の重鎖カルボキシル末端で遺伝子工学的に改変されたアミノ酸配列ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）を含み、重鎖カルボキシル末端のリシン残基は、欠失している、タグを含む。他の実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、抗体の特定の部位で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグであって、Ｔｒｏｐ−２抗体の重鎖カルボキシル末端で遺伝子工学的に改変されたアミノ酸配列ＬＬＱを含み、重鎖カルボキシル末端のリシン残基は、欠失している、タグを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、Ｔｒｏｐ−２抗体の２９７位でアスパラギン（Ｎ）からグルタミン（Ｑ）へのアミノ酸置換を含む。
アシルドナーグルタミン含有タグ、および、アミノ酸欠失、挿入、置換、突然変異、またはこれらの任意の組合せである、抗体の２２２位、３４０位、または３７０位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）でのアミノ酸修飾を含む単離抗体も提供される。したがって、いくつかの実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体の特定の部位で（例えば、重鎖もしくは軽鎖のカルボキシル末端で、または別の部位で）コンジュゲートされたアシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、Ｑ、ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号８１）、ＬＬＱ、ＬＬＱＧＰＧＫ（配列番号９０）、ＬＬＱＧＰＧ（配列番号９１）、ＬＬＱＧＰＡ（配列番号９２）、ＬＬＱＧＰ（配列番号９３）、ＬＬＱＰ（配列番号９４）、ＬＬＱＰＧＫ（配列番号９５）、ＬＬＱＧＡＰＧＫ（配列番号９６）、ＬＬＱＧＡＰＧ（配列番号９７）、ＬＬＱＧＡＰ（配列番号９８）、ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｋ、Ｇであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号８８）、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、任意の天然に存在するアミノ酸であり、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、任意の天然に存在するアミノ酸であるかもしくは存在しない）（配列番号８９）、ならびに抗体の２２２位、３４０位、または３７０位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）でのアミノ酸修飾を含む本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、アミノ酸修飾は、リシンからアルギニンへの置換（例えば、Ｋ２２２Ｒ、Ｋ３４０Ｒ、またはＫ３７０Ｒ）である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、Ｔｒｏｐ−２抗体軽鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変された配列ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、および抗体の２２２位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）でのリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む、アシルドナーグルタミン含有タグを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、Ｔｒｏｐ−２抗体軽鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変された配列ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号８１）、および抗体の２２２位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）でのリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む、アシルドナーグルタミン含有タグを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、Ｔｒｏｐ−２抗体重鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変された配列ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、および抗体の２２２位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）でのリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含み、重鎖カルボキシル末端のリシン残基は、欠失している、アシルドナーグルタミン含有タグを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、Ｔｒｏｐ−２抗体重鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変された配列ＬＬＱ、および抗体の２２２位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）でのリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含み、重鎖カルボキシル末端のリシン残基は、欠失している、アシルドナーグルタミン含有タグを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはコンジュゲートは、Ｔｒｏｐ−２抗体の２９７位で遺伝子工学的に改変されたグルタミン、および抗体の２２２位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）でのリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む、アシルドナーグルタミン含有タグを含む。
本発明のＴｒｏｐ−２抗体または抗原結合断片にコンジュゲートされ得る作用物質としては、それだけに限らないが、細胞毒性剤、免疫調節剤、造影剤、治療用タンパク質、バイオポリマー、またはオリゴヌクレオチドがある。
細胞毒性剤の例としては、それだけに限らないが、アントラサイクリン、オーリスタチン、ドラスタチン、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン、エンジイン、ゲルダナマイシン、メイタンシン、ピューロマイシン、タキサン、ビンカアルカロイド、ＳＮ−３８、ツブリシン、ヘミアステルリン、およびこれらの立体異性体、アイソスター、類似体、または誘導体がある。
アントラサイクリンは、細菌ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）に由来し、広範囲のがん、例えば、白血病、リンパ腫、乳房、子宮、卵巣、および肺のがんなどを治療するのに使用されている。例示的なアントラサイクリンとしては、それだけに限らないが、ダウノルビシン、ドキソルビシン（すなわち、アドリアマイシン）、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、およびミトキサントロンがある。
ドラスタチン、ならびにこれらのペプチド類似体および誘導体、オーリスタチンは、抗がん活性および抗真菌活性を有することが示されている高度に強力な抗有糸分裂剤である。例えば、米国特許第５，６６３，１４９号、およびＰｅｔｔｉｔら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、４２：２９６１〜２９６５、１９９８を参照。例示的なドラスタチンおよびオーリスタチンとしては、それだけに限らないが、ドラスタチン１０、オーリスタチンＥ、オーリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、オーリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）、ＭＭＡＤ（モノメチルオーリスタチンＤまたはモノメチルドラスタチン１０）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦまたはＮ−メチルバリン−バリン−ドライソロイイン−ドラプロイン−フェニルアラニン）、ＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥまたはＮ−メチルバリン−バリン−ドライソロイイン−ドラプロイン−ノルエフェドリン）、５−ベンゾイル吉草酸−ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）、および他の新規オーリスタチン（米国出願第６１／５６１，２５５号、および同第６１／６７６，４２３号に記載されたものなど）がある。いくつかの実施形態では、オーリスタチンは、以下の構造を有する、０１０１（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）である：
Figure 2016104751
デュオカルマイシンおよびＣＣ−１０６５は、細胞傷害性効力を有するＤＮＡアルキル化剤である。ＢｏｇｅｒおよびＪｏｈｎｓｏｎ、ＰＮＡＳ、９２：３６４２〜３６４９、１９９５を参照。例示的なドラスタチンおよびオーリスタチンとしては、それだけに限らないが、（＋）−デュオカルマイシンＡおよび（＋）−デュオカルマイシンＳＡ、ならびに（＋）−ＣＣ−１０６５がある。
エンジインは、９員環および１０員環、または共役三重−二重−三重結合の環系の存在のいずれかを特徴とする、一クラスの抗腫瘍細菌産物である。例示的なエンジインとしては、それだけに限らないが、カリケアマイシン、エスペラマイシン、およびジネマイシンがある。
ゲルダナマイシンは、Ｈｓｐ９０（熱ショックタンパク質９０）に結合し、抗腫瘍薬として使用されているベンゾキノンアンサマイシン抗生物質である。例示的なゲルダナマイシンとしては、それだけに限らないが、１７−ＡＡＧ（１７−Ｎ−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）および１７−ＤＭＡＧ（１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）がある。
メイタンシンまたはこれらの誘導体メイタンシノイドは、チューブリン重合の阻害により有糸分裂の間に微小管形成を阻害することによって、細胞増殖を阻害する。Ｒｅｍｉｌｌａｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１８９：１００２〜１００５、１９７５を参照。例示的なメイタンシンおよびメイタンシノイドとしては、それだけに限らないが、メルタンシン（ＤＭ１）およびその誘導体、ならびにアンサミトシンがある。
タキサンは、抗チューブリン剤または有糸分裂阻害剤として作用するジテルペンである。例示的なタキサンとしては、それだけに限らないが、パクリタキセル（例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標））およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））がある。
ビンカアルカロイドも抗チューブリン剤である。例示的なビンカアルカロイドとしては、それだけに限らないが、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビンがある。
いくつかの実施形態では、作用物質は、免疫調節剤である。免疫調節剤の例としては、それだけに限らないが、ガンシクロビル、エタネルセプト、タクロリムス、シロリムス、ボクロスポリン、シクロスポリン、ラパマイシン、シクロホスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、糖質コルチコイドおよびその類似体、サイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、造血因子、インターロイキン（例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１）、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））、インターフェロン（例えば、インターフェロン−α、−β、および−γ）、「Ｓ１因子」と呼ばれる幹細胞増殖因子、エリスロポエチン、ならびにトロンボポエチン、またはこれらの組合せがある。
いくつかの実施形態では、作用物質は、造影剤（例えば、フルオロフォア、もしくはＰＥＴ（ポジトロン放出断層撮影）標識、ＳＰＥＣＴ（単一光子放射型コンピュータ断層撮影）標識）、またはＭＲＩ（磁気共鳴画像法）標識である。
フルオロフォアの例としては、それだけに限らないが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（例えば、５−ＦＩＴＣ）、フルオレセインアミダイト（ＦＡＭ）（例えば、５−ＦＡＭ）、エオシン、カルボキシフルオレセイン、エリトロシン、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）（例えば、Ａｌｅｘａ３５０、４０５、４３０、４８８、５００、５１４、５３２、５４６、５５５、５６８、５９４、６１０、６３３、６４７、６６０、６８０、７００、または７５０）、カルボキシテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）（例えば、５−ＴＡＭＲＡ）、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）、およびスルホローダミン（ＳＲ）（例えば、ＳＲ１０１）がある。
いくつかの実施形態では、治療用もしくは診断用放射性同位体または他の標識（例えば、ＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴ標識）は、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体または抗原結合断片へのコンジュゲーションのために作用物質中に組み込むことができる。放射性同位体または他の標識の例としては、それだけに限らないが、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｎ、１４Ｃ、１５Ｎ、１５Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｓｅ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９４Ｔｃ、９５Ｒｕ、９７Ｒｕ、９９Ｔｃ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１０５Ｒｕ、１０７Ｈｇ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１２１Ｔｅ、１２２Ｔｅ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２５Ｔｅ、１２６Ｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、１３３Ｉ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１５３Ｐｂ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６５Ｔｍ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈ、１６７Ｔｍ、１６８Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９７Ｐｔ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２０１Ｔｌ、２０３Ｈｇ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２４Ａｃ、および２２５Ａｃがある。
いくつかの実施形態では、作用物質は、それだけに限らないが、毒素、ホルモン、酵素、および増殖因子を含めた治療用タンパク質である。
毒素タンパク質（またはポリペプチド）の例としては、それだけに限らないが、ジフテリア（例えば、ジフテリアＡ鎖）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素およびエンドトキシン、リシン（例えば、リシンＡ鎖）、アブリン（例えば、アブリンＡ鎖）、モデッシン（例えば、モデッシンＡ鎖）、α−サルシン、アレウリテス・フォルジ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルス剤タンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、フィトラカ・アメリカナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、トリコテセン、阻害剤シスチンノット（ＩＣＫ）ペプチド（例えば、セラトトキシン）、ならびにコノトキシン（例えば、ＫＩＩＩＡまたはＳｍＩＩＩａ）がある。
いくつかの実施形態では、作用物質は、生体適合性ポリマーである。本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体または抗原結合断片を生体適合性ポリマーにコンジュゲートさせて、血清半減期および生物活性を増大させ、かつ／またはｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延長することができる。生体適合性ポリマーの例としては、水溶性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはその誘導体など、および双性イオン含有生体適合性ポリマー（例えば、ホスホリルコリン含有ポリマー）がある。
いくつかの実施形態では、作用物質は、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドである。
別の態様では、本発明は、式：抗体−（アシルドナーグルタミン含有タグ）−（リンカー）−（細胞毒性剤）を有する、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、アシルドナーグルタミン含有タグが、抗体または抗原結合断片の特定の部位（例えば、重鎖もしくは軽鎖のカルボキシル末端または別の部位）で遺伝子工学的に改変されており、リンカー（例えば、１種または複数の反応性アミン（例えば、第一級アミンＮＨ２）を含有するリンカー）にコンジュゲートしており、リンカーが、細胞毒性剤（例えば、ＭＭＡＤまたは０１０１などの他のオーリスタチン）にコンジュゲートしている、コンジュゲートを提供する。
１種または複数の反応性アミンを含有するリンカーの例としては、それだけに限らないが、アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）、またはアミノＰＥＧ６−プロピオニルがある。例えば、ＷＯ２０１２／０５９８８２を参照。
いくつかの実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグは、ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号８１）、ＬＬＱ、ＬＬＱＧＰＧＫ（配列番号９０）、ＬＬＱＧＰＧ（配列番号９１）、ＬＬＱＧＰＡ（配列番号９２）、ＬＬＱＧＰ（配列番号９３）、ＬＬＱＰ（配列番号９４）、ＬＬＱＰＧＫ（配列番号９５）、ＬＬＱＧＡＰＧＫ（配列番号９６）、ＬＬＱＧＡＰＧ（配列番号９７）、ＬＬＱＧＡＰ（配列番号９８）、ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｋ、Ｇであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号８８）、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、任意の天然に存在するアミノ酸であり、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、任意の天然に存在するアミノ酸であるかもしくは存在しない）（配列番号８９）を含む。
いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、１）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−０１０１、２）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ、３）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−０１０１、４）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ、５）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−０１０１、および６）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤである。いくつかの実施形態では、例えば、ＬＬＱ、配列番号７９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、または９８を含むアシルドナーグルタミン含有タグは、抗体の重鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変されており、Ｃ末端のリシン残基は、欠失している。他の実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８））は、抗体の軽鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変されている。抗体の例としては、それだけに限らないが、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３、およびｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ７Ｅ６ＳＶＧＮ、ｈ６Ｇ１１、またはｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦがある。
一変形形態では、コンジュゲートは、２２２位でリシンからアルギニンへのアミノ酸置換をさらに含む。したがって、例えば、コンジュゲートは、１）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤであり、Ｋ２２２Ｒを含み、２）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−０１０１であり、Ｋ２２２Ｒを含み、３）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−０１０１であり、Ｋ２２２Ｒを含み、４）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤであり、Ｋ２２２Ｒを含み、５）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤであり、Ｋ２２２Ｒを含む。いくつかの実施形態では、例えば、ＬＬＱ、配列番号７９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、または９８を含むアシルドナーグルタミン含有タグは、抗体の重鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変されており、Ｃ末端のリシン残基は、欠失している。他の実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８））は、抗体の軽鎖のＣ末端で遺伝子工学的に改変されている。抗体の例としては、それだけに限らないが、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３、およびｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ６Ｇ１１、またはｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦがある。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、Ｎ２９７Ｑ位およびＫ２２２Ｒ位のアミノ酸置換、アミノ−ＰＥＧ６−プロピオニルを含むリンカー、および細胞毒性剤（例えば、ＭＭＡＤまたは他のオーリスタチン）を含む、コンジュゲートを提供する。例えば、コンジュゲートは、アミノ−ＰＥＧ６−プロピオニルおよびＭＭＡＤにコンジュゲートしているｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ６Ｇ１１、またはｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦ、またはアミノ−ＰＥＧ６−プロピオニルおよび０１０１にコンジュゲートしているｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２７、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ６Ｇ１１、またはｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦである。
Ｔｒｏｐ−２抗体およびこれらの抗体コンジュゲートを使用する方法
本発明の抗体および抗体コンジュゲートは、それだけに限らないが、治療的処置方法および診断的処置方法を含めた、様々な用途で有用である。
一態様では、本発明は、対象におけるＴｒｏｐ−２発現に関連した状態を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象におけるＴｒｏｐ−２発現に関連した状態を治療する方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物（例えば、医薬組成物）を投与するステップを含む。Ｔｒｏｐ−２発現に関連した状態としては、それだけに限らないが、異常なＴｒｏｐ−２発現、変化した、もしくは異所性のＴｒｏｐ−２発現、Ｔｒｏｐ−２過剰発現、および増殖性障害（例えば、がん）がある。
したがって、いくつかの実施形態では、対象におけるがんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。本明細書において、がんとしては、それだけに限らないが、膀胱、乳房、子宮頸部、絨毛癌、大腸、食道、胃、グリア芽細胞腫、頭頸部、腎臓、肺、口腔、卵巣、膵臓、前立腺、および皮膚のがんがある。いくつかの実施形態では、Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍を有する対象における腫瘍増殖または進行を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。他の実施形態では、対象におけるＴｒｏｐ−２発現がん細胞の転移を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。他の実施形態では、対象におけるＴｒｏｐ−２発現腫瘍退縮を誘導する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを含む有効量の組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。
別の態様では、Ｔｒｏｐ−２発現に関連する状態を検出、診断、および／または監視する方法が提供される。例えば、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体は、造影剤および酵素−基質標識などの検出可能部分で標識することができる。本明細書に記載の抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏイメージング（例えば、ＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴ）などのｉｎ ｖｉｖｏ診断アッセイ、または染色試薬に使用することもできる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、追加の形態の療法で対象を治療するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の形態の療法は、それだけに限らないが、化学療法、放射線、手術、ホルモン療法、および／または追加の免疫療法を含めた追加の抗がん療法である。
いくつかの実施形態では、追加の形態の療法は、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートに加えて、１種または複数の治療剤を投与するステップを含む。治療剤としては、それだけに限らないが、第２抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ２５抗体、および／または抗ＣＤ２０抗体）、血管新生阻害剤、細胞毒性剤、抗炎症剤（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、ドキソルビシン、プレドニゾン、マイトマイシン、プロゲステロン、タモキシフェン、またはフルオロウラシル）がある。
Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートは、任意の適当な経路を介して個体に投与することができる。本明細書に記載の例は、利用可能な技法を限定するように意図されておらず、例示するものであるように意図されていることが当業者によって理解されるべきである。したがって、いくつかの実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートは、公知の方法、例えば、ボーラスのような静脈内投与、またはある時間にわたる持続注入によるもの、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、頭蓋内、経皮、皮下、関節内、舌下、滑液包内や、ガス注入を介した、クモ膜下、経口、吸入、または局部的の経路によるものなどに合わせて個体に投与される。投与は、全身的、例えば、静脈内投与であっても、局在的であってもよい。ジェット噴霧器および超音波噴霧器を含めた液体製剤用市販噴霧器は、投与に有用である。液体製剤を直接噴霧することができ、凍結乾燥粉末を再構成後に噴霧することができる。代わりに、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートは、フルオロカーボン製剤および定量吸入器を使用してエアロゾル化することができ、凍結乾燥し、粉砕した粉末として吸入することができる。
一実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートは、部位特異的、または標的化局所的送達技法を介して投与される。部位特異的、または標的化局所的送達技法の例としては、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの様々な移植可能なデポー源、または局所的送達カテーテル、例えば、注入カテーテル、留置カテーテル、もしくはニードルカテーテルなど、合成移植片、外膜ラップ、シャントおよびステントもしくは他の埋め込み型デバイス、部位特異的担体、直接注入、または直接塗布がある。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／５３２１１号および米国特許第５，９８１，５６８号を参照。
Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの様々な製剤を投与に使用することができる。いくつかの実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートは、そのまま投与してもよい。いくつかの実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体（またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲート）および薬学的に許容できる賦形剤は、様々な製剤でのものであり得る。薬学的に許容できる賦形剤は、当技術分野で公知であり、薬理学的に有効な物質の投与を促進する相対的に不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形態もしくは粘稠度を与え、または希釈剤として作用することができる。適当な賦形剤としては、それだけに限らないが、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、モル浸透圧濃度を変更するための塩、封入剤、緩衝剤、および皮膚浸透エンハンサーがある。非経口および非経口ではない（ｎｏｎｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）薬物送達用賦形剤および製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００に示されている。
いくつかの実施形態では、これらの作用物質は、注入（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与用に製剤化される。したがって、これらの作用物質は、薬学的に許容できるビヒクル、例えば、生理食塩水、リンガー液、デキストロース溶液などと組み合わせることができる。特定の投薬レジメン、すなわち、用量、タイミング、および繰り返しは、特定の個体およびその個体の病歴に依存する。
本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートは、注入（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）によるものを含めた、任意の適当な方法を使用して投与することができる。Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートは、本明細書に記載するように、吸入を介して投与することもできる。一般に、Ｔｒｏｐ−２抗体およびＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを投与するために、最初の候補投与量を約２ｍｇ／ｋｇとすることができる。本発明の目的に関して、一般的な１日投与量は、上述した要因に応じて、約３μｇ／ｋｇ〜約３０μｇ／ｋｇ〜約３００μｇ／ｋｇ、〜約３ｍｇ／ｋｇ、〜約３０ｍｇ／ｋｇ、〜約１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上のいずれかの範囲となり得る。例えば、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、および約２５ｍｇ／ｋｇの投与量を使用することができる。状態に応じて数日間またはそれ以上にわたって投与を繰り返すことに関して、治療は、症状の所望の抑制が起こるまで、または例えば、腫瘍増殖／進行もしくはがん細胞の転移を阻害し、もしくは遅延させるのに十分な治療レベルが実現されるまで持続される。例示的な投薬レジメンは、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの約２ｍｇ／ｋｇの初期用量、その後の約１ｍｇ／ｋｇの毎週の維持用量、またはその後の１週間おきの約１ｍｇ／ｋｇの維持用量の投与を含む。他の例示的な投薬レジメンは、漸増用量（例えば、１ｍｇ／ｋｇの初期用量、および１週間またはそれより長い時間おきに１回または複数のより高い用量への段階的増加）の投与を含む。他の投薬レジメンも、開業医が実現するように望む薬物動態学的減衰のパターンに応じて有用であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、１週間に１〜４回の投薬が企図されている。他の実施形態では、１カ月に１回、または隔月もしくは３ヶ月毎に１回の投薬が企図されている。この療法の進行は、慣例的な技法およびアッセイによって容易に監視される。投薬レジメン（使用されるＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを含む）は、経時的に変更することができる。
本発明の目的に関して、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの適切な投与量は、使用されるＴｒｏｐ−２抗体もしくはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲート（またはその組成物）、治療される症状のタイプおよび重症度、作用物質が治療目的に投与されるか否か、以前の療法、患者の病歴および作用物質に対する応答、投与される作用物質の患者のクリアランス速度、ならびに主治医の自由裁量に依存する。一般に、臨床医は、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを、投与量が所望の結果を実現するものに到達するまで投与する。用量および／または頻度は、治療の過程にわたって変更することができる。半減期などの経験的な考慮事項は一般に、投与量の決定に寄与する。例えば、ヒト免疫系と適合した抗体、例えば、ヒト化抗体または完全ヒト抗体などを、抗体の半減期を延ばし、抗体が宿主の免疫系によって攻撃されるのを防止するために使用することができる。投与の頻度は、療法の過程にわたって決定および調整することができ、症状の治療および／または抑制および／または緩和および／または遅延、例えば、腫瘍増殖阻害または遅延などに必ずではないが一般に基づく。代わりに、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの持続的連続的放出製剤が適切となり得る。徐放を実現するための様々な製剤およびデバイスが当技術分野で公知である。
一実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの投与量は、Ｔｒｏｐ−２抗体またはそのＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの１回または複数の投与を受けている個体において経験的に求めることができる。個体は、漸増投与量のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２アンタゴニストを投与される。効力を評価するために、疾患のインジケータを追跡することができる。
本発明の方法によるＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの投与は、例えば、レシピエントの生理的条件、投与の目的が治療的であるか、または予防的であるか、および熟練した開業医に公知の他の要因に応じて、連続的であっても、断続的であってもよい。Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの投与は、予め選択された時間にわたって本質的に連続的であってもよく、または間隔を置いた一連の投薬におけるものであってもよい。
いくつかの実施形態では、複数種のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートが存在し得る。少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、少なくとも５種、またはそれ以上のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートが存在し得る。一般に、これらのＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートは、互いに悪影響しない相補的な活性を有することができる。例えば、以下のＴｒｏｐ−２抗体、すなわち、Ｔｒｏｐ−２上の１つのエピトープに向けられた第１Ｔｒｏｐ−２抗体およびＴｒｏｐ−２上の異なるエピトープに向けられた第２Ｔｒｏｐ−２抗体の１種または複数を使用することができる。
本発明によって使用されるＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの治療製剤は、凍結乾燥製剤または水性液剤の形態で、所望の程度の純度を有する抗体を、任意選択の薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５）と混合することによって、貯蔵用に調製することができる。許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに無毒性であり、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸など；塩化ナトリウムなどの塩；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベンなど；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなど；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなど；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などを含むことができる。
Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：３６８８、１９８５；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４０３０、１９８０；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号、および同第４，５４４，５４５号に記載されたものなどの、当技術分野で公知の方法によって調製される。循環時間が増強されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ−誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いて、逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは、所望の直径を有するリポソームを生じるように、規定孔サイズのフィルターを通して押し出される。
活性成分は、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）内で、またはマクロエマルジョン内で、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン−マイクロカプセル、およびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入することもできる。このような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５に開示されている。
徐放配合物を調製することができる。徐放配合物の適当な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは、造形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態にある。徐放マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸と７エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェア）など、スクロースアセテートイソブチレート、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸がある。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、滅菌されていなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。治療用Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲート組成物は一般に、滅菌したアクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針で穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアル内に入れられる。
本発明による組成物は、経口、非経口もしくは直腸投与、または吸入もしくはガス注入による投与のための単位剤形、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤もしくは懸濁剤、または坐剤などであり得る。
錠剤などの固体組成物を調製するために、主な活性成分は、薬学的担体、例えば、慣例的な錠剤化成分、例えば、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、またはガムなど、および他の薬学的希釈剤、例えば、水と混合されて、本発明の化合物、または無毒性の薬学的に許容できるその塩の均質な混合物を含有する固体予備製剤組成物が形成される。これらの予備製剤組成物が均質であるという場合、活性成分が組成物全体にわたって均等に分散されており、その結果、組成物が同様に有効な単位剤形、例えば、錠剤、丸剤、およびカプセル剤などに容易にさらに分割され得ることを意味する。次いで、この固体予備製剤組成物は、０．１〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上述したタイプの単位剤形にさらに分割される。新規組成物の錠剤または丸剤は、持続性作用の利点をもたらす剤形を提供するために、被覆または他の方法で調合することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内側投与および外側投与コンポーネントを含むことができ、後者は、前者の上の外被の形態である。２つのコンポーネントは、胃内での崩壊に耐える機能を果たし、内側コンポーネントがインタクトで十二指腸内に入り、または放出が遅延されることを可能にする腸溶性層によって分離することができる。様々な材料を、このような腸溶性層または被覆に使用することができ、このような材料には、多数のポリマー酸ならびにシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースのような材料とのポリマー酸の混合物が含まれる。
適当な表面活性剤としては、特に、非イオン性剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）、および他のソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）などがある。表面活性剤を含む組成物は、好都合には、０．０５〜５％の間の表面活性剤を含むことになり、０．１〜２．５％の間であり得る。必要であれば、他の成分、例えば、マンニトールまたは他の薬学的に許容できるビヒクルを添加することができることが理解されるであろう。
適当なエマルジョンは、市販の脂肪エマルジョン、例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）、およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）などを使用して調製することができる。活性成分を、予備混合エマルジョン組成物中に溶解させることができ、または代わりに、活性成分を、油（例えば、ダイズ油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油、または扁桃油）、ならびにリン脂質（例えば、卵リン脂質、ダイズリン脂質、またはダイズレシチン）および水と混合して形成されたエマルジョン中に溶解させることができる。エマルジョンの張性を調整するために、他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコースを添加してもよいことが理解されるであろう。適当なエマルジョンは一般に、最大２０％の油、例えば、５〜２０％の間の油を含有することになる。脂肪エマルジョンは、０．１〜１．０μｍ、特に０．１〜０．５μｍの間の脂肪滴を含み、５．５〜８．０の範囲内のｐＨを有することができる。
エマルジョン組成物は、Ｔｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートをＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはそのコンポーネント（ダイズ油、卵リン脂質、グリセロール、および水）と混合することによって調製されるものであり得る。
吸入またはガス注入用組成物は、薬学的に許容できる水性溶媒もしくは有機溶媒、またはこれらの混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末を含む。液体または固体組成物は、上記に示した適当な薬学的に許容できる賦形剤を含有し得る。いくつかの実施形態では、組成物は、局所的または全身的効果のために、経口呼吸経路または鼻呼吸経路によって投与される。好ましくは滅菌した薬学的に許容できる溶媒中の組成物は、ガスを使用して霧状化することができる。霧状化溶液は、噴霧器から直接吸い込むことができ、または噴霧器をフェイスマスク、テント、もしくは間欠的陽圧呼吸機に取り付けてもよい。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、適切な様式で製剤を送達するデバイスから、好ましくは経口的または経鼻的に投与することができる。
組成物
本発明の方法で使用される組成物は、有効量の本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを含む。このような組成物の例および製剤方法も、先のセクションおよび以下に記載されている。いくつかの実施形態では、組成物は、１種または複数のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを含む。例えば、Ｔｒｏｐ−２抗体は、ヒトＴｒｏｐ−２を認識する。いくつかの実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体は、所望の免疫応答、例えば、抗体媒介溶解またはＡＤＣＣなどを誘発することができる定常領域を含む。他の実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体は、望まれない、または望ましくない免疫応答、例えば、抗体媒介溶解またはＡＤＣＣなどを誘発しない定常領域を含む。他の実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体は、抗体の１つまたは複数のＣＤＲ（１つ，２つ、３つ、４つ、５つ、またはいくつかの実施形態では、６つすべてなどのＣＤＲ）を含む。
組成物は、複数種のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲート（例えば、Ｔｒｏｐ−２の異なるエピトープを認識するＴｒｏｐ−２抗体の混合物）を含み得ることが理解される。他の例示的な組成物は、同じエピトープ（複数可）を認識する複数種のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲート、またはＴｒｏｐ−２（例えば、ヒトＴｒｏｐ−２）の異なるエピトープに結合するＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの異なる種を含む。
本発明で使用される組成物は、凍結乾燥製剤または水性液剤の形態で、薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１版、２００５、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）をさらに含むことができる。許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、投与量および濃度でレシピエントに無毒性であり、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸など；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベンなど；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなど；グルコース、マンノース、もしくはデキストランを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなど；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などを含むことができる。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書でさらに記載されている。
キット
本発明は、本方法で使用するためのキットも提供する。本発明のキットは、本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲート、および本明細書に記載の本発明の方法のいずれかによって使用するための指示書を含む、１つまたは複数の容器を含む。一般に、これらの指示書は、上述した治療的処置のためにＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートを投与する説明を含む。
本明細書に記載のＴｒｏｐ−２抗体またはＴｒｏｐ−２抗体コンジュゲートの使用に関する指示書は、一般に、意図される治療のための投与量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、マルチドーズパッケージ）、またはサブユニット用量のものであり得る。本発明のキット内に供給される指示書は、一般に、ラベルまたは添付文書（例えば、キット内に含まれる紙シート）での書面による指示書であるが、機械可読な指示書（例えば、磁気または光記憶ディスクで携帯される指示書）も許容できる。
本発明のキットは、適当な包装内にある。適当な包装としては、それだけに限らないが、バイアル、ボトル、広口瓶、フレキシブル包装（例えば、密封されたマイラーバッグまたはビニール袋）などがある。特定のデバイス、例えば、吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザ）、またはミニポンプなどの注入デバイスなどと組み合わせて使用するためのパッケージも企図されている。キットは、滅菌したアクセスポートを有することができる（例えば、容器は皮下注射針で穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであり得る）。容器も、滅菌したアクセスポートを有することができる（例えば、容器は皮下注射針で穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１種の活性剤は、Ｔｒｏｐ−２抗体である。容器は、第２医薬活性剤をさらに含むことができる。
キットは、追加のコンポーネント、例えば、緩衝液および解釈情報などを任意選択により提供することができる。通常、キットは、容器、および容器上の、またはこれに付随したラベルまたは添付文書（複数可）を含む。
突然変異および修飾
本発明のＴｒｏｐ−２抗体を発現させるために、ＶＨおよびＶＬ領域をコードするＤＮＡ断片を、上述した方法のいずれかを使用して最初に得ることができる。様々な修飾、例えば、突然変異、置換、欠失、および／または付加も、当業者に公知の標準方法を使用して、ＤＮＡ配列中に導入することができる。例えば、突然変異誘発は、ＰＣＲ媒介突然変異誘発などの標準方法を使用して実施することができ、ＰＣＲ媒介突然変異誘発では、突然変異したヌクレオチドがＰＣＲプライマー中に組み込まれ、その結果、ＰＣＲ産物が所望の突然変異または部位特異的突然変異誘発を含有する。
行うことができる１つのタイプの置換は、例えば、別の残基、例えば、限定することなく、アラニンまたはセリンなどに化学反応性であり得る、抗体中の１つまたは複数のシステインを変更することである。例えば、非カノニカルシステインの置換が存在し得る。置換は、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域内、または抗体の定常領域内で行うことができる。いくつかの実施形態では、システインは、カノニカルである。
抗体は、例えば、抗体の結合性を変更するために、例えば、重鎖および／または軽鎖の可変ドメイン内で修飾することもできる。例えば、Ｔｒｏｐ−２に対する抗体のＫＤを増減し、ｋｏｆｆを増減し、または抗体の結合特異性を変更するために、ＣＤＲ領域の１つまたは複数内で突然変異を行うことができる。部位特異的突然変異誘発における技法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、およびＡｕｓｕｂｅｌら、上記を参照。
修飾または突然変異をフレームワーク領域または定常領域内で行って、Ｔｒｏｐ−２抗体の半減期を延ばすこともできる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０９５６０号を参照。フレームワーク領域または定常領域内での突然変異を行って、抗体の免疫原性を変更し、別の分子への共有結合性もしくは非共有結合性結合のための部位を提供し、または補体結合、ＦｃＲ結合、および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害などの性質を変更することもできる。本発明によれば、単一抗体は、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域の任意の１つまたは複数内、または定常領域内に突然変異を有することができる。
「生殖系列化（ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）」として公知のプロセスでは、ＶＨおよびＶＬ配列中のある特定のアミノ酸を突然変異させて、生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列中に天然に見つかるものとマッチさせることができる。特に、抗体が投与されるときの免疫原性のリスクを低減するために、ＶＨおよびＶＬ配列中のフレームワーク領域のアミノ酸配列を突然変異させて、生殖系列配列とマッチさせることができる。ヒトＶＨおよびＶＬ遺伝子についての生殖系列ＤＮＡ配列は、当技術分野で公知である（例えば、「Ｖｂａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベースを参照；Ｋａｂａｔ、Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：７７６〜７９８、１９９２；およびＣｏｘら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：８２７〜８３６、１９９４も参照）。
行うことができる別のタイプのアミノ酸置換は、抗体中の潜在的なタンパク質分解部位を除去することである。このような部位は、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域内または抗体の定常領域内に存在し得る。システイン残基を置換し、タンパク質分解部位を除去すると、抗体生成物中の不均質性のリスクを減少させ、したがってその均質性を増大させることができる。別のタイプのアミノ酸置換は、潜在的なアミド分解部位を形成するアスパラギン−グリシン対を、これらの残基の一方または両方を変更することによって排除することである。別の例では、本発明のＴｒｏｐ−２抗体の重鎖のＣ末端リシンを切断することができる。本発明の様々な実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体の重鎖および軽鎖は、シグナル配列を任意選択により含む場合がある。
本発明のＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られた後、これらのＤＮＡ断片を、標準的な組換えＤＮＡ技法によってさらに操作して、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換することができる。これらの操作では、ＶＬまたはＶＨコードＤＮＡ断片は、抗体定常領域などの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片、または可動性リンカーに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結した」は、本脈絡において使用する場合、２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように２つのＤＮＡ断片が接合されていることを意味するように意図されている。
ＶＨ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＨコードＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常領域とすることができるが、最も好ましくはＩｇＧ１またはＩｇＧ２定常領域である。ＩｇＧ定常領域配列は、異なる個体の中で存在することが知られている様々な対立遺伝子またはアロタイプ、例えば、Ｇｍ（１）、Ｇｍ（２）、Ｇｍ（３）、およびＧｍ（１７）などのいずれかであり得る。これらのアロタイプは、ＩｇＧ１定常領域中の天然に存在するアミノ酸置換を代表する。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子に関して、ＶＨコードＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することができる。ＣＨ１重鎖定常領域は、重鎖遺伝子のいずれかに由来し得る。
ＶＬ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＬコードＤＮＡを軽鎖定常領域、ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子（およびＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、κまたはλ定常領域とすることができる。κ定常領域は、異なる個体の中で存在することが知られている様々な対立遺伝子、例えば、Ｉｎｖ（１）、Ｉｎｖ（２）、およびＩｎｖ（３）のいずれかであり得る。λ定常領域は、３種のλ遺伝子のいずれかに由来し得る。
ｓｃＦｖ遺伝子を作り出すために、ＶＨおよびＶＬコードＤＮＡ断片は、可動性リンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３、（配列番号８０）をコードする別の断片に、ＶＨおよびＶＬ配列が、ＶＬおよびＶＨ領域が可動性リンカーによって接合された連続した単鎖タンパク質として発現され得るように作動可能に連結される（例えば、Ｂｉｒｄら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６；Ｈｕｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：５８７９〜５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９０、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２〜５５４を参照）。単鎖抗体は、単一のＶＨおよびＶＬのみが使用される場合、一価であり得、２つのＶＨおよびＶＬが使用される場合、二価であり得、または２つを超えるＶＨおよびＶＬが使用される場合、多価であり得る。Ｔｒｏｐ−２および別の分子に特異的に結合する二重特異性抗体または多価抗体を生成することができる。
別の実施形態では、別のポリペプチドに連結した本発明のＴｒｏｐ−２抗体のすべてまたは一部を含む融合抗体またはイムノアドヘシンを作製することができる。別の実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体の可変ドメインのみがポリペプチドに連結される。別の実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体のＶＨドメインは、第１ポリペプチドに連結され、一方、Ｔｒｏｐ−２抗体のＶＬドメインは、ＶＨおよびＶＬドメインが互いに相互作用して抗原結合部位を形成することができる様式で第１ポリペプチドと会合する第２ポリペプチドに連結される。別の好適な実施形態では、ＶＨドメインは、ＶＨおよびＶＬドメインが互いに相互作用することができるように、リンカーによってＶＬドメインから分離される。次いで、ＶＨ−リンカー−ＶＬ抗体は、対象とするポリペプチドに連結される。さらに、２つ（またはそれ以上）の単鎖抗体が互いに連結された融合抗体を作り出すことができる。これは、単一ポリペプチド鎖上に二価もしくは多価抗体を作り出したい場合、または二重特異性抗体を作り出したい場合、有用である。
他の実施形態では、Ｔｒｏｐ−２抗体コード核酸分子を使用して他の修飾抗体を調製することができる。例えば、「カッパボディ」（Ｉｌｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、１０：９４９〜５７、１９９７）、「ミニボディ」（Ｍａｒｔｉｎら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１３：５３０３〜９、１９９４）、「ダイアボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４〜６４４８、１９９３）、または「ジャヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎ）」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１０：３６５５〜３６５９、１９９１およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（補遺）、７：５１〜５２、１９９２）を、本明細書の教示に従って、標準的な分子生物学的技法を使用して調製することができる。
二重特異性抗体または抗原結合断片は、ハイブリドーマの融合、またはＦａｂ’断片の連結を含めた様々な方法によって生成することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ＆Ｌａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７９：３１５〜３２１、１９９０、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８：１５４７〜１５５３、１９９２を参照。さらに、二重特異性抗体を「ダイアボディ」または「ジャヌシン」として形成することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｔｒｏｐ−２の２つの異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、上述した修飾抗体は、本明細書に提供されるＴｒｏｐ−２抗体に由来する可変ドメインまたはＣＤＲ領域の１つまたは複数を使用して調製される。
本発明の代表的な材料は、２０１２年４月２６日にアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に寄託した。ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８７２を有するベクターは、ヒト化Ｔｒｏｐ−２抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドであり、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８７１を有するベクターは、ヒト化Ｔｒｏｐ−２抗体軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドである。寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約およびその下の規定（ブダペスト条約）の条項下で行った。これにより、寄託日から３０年間、寄託物の生存培養が保証される。寄託物は、ブダペスト条約の条項、ならびにＰｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの契約の対象であって、関係する米国特許の発行の後、または米国もしくは外国特許出願の公共への公開の後のいずれか早い方に、公共に寄託物の培養の子孫の永続的および非制限的利用可能性を保証し、米国特許法第１２２条およびこれに準じた長官規則（８８６ＯＧ６３８を特に参照して連邦規則法典第３７巻第１．１４条を含む）によって、米国特許商標庁長官が権利を有すると決定したものへの子孫の利用可能性を保証する、契約の対象の下でＡＴＣＣによって利用可能にされることになる。
本願の代理人は、寄託した材料の培養物が、適当な条件下で培養されたとき、死滅し、または失われ、もしくは破壊された場合、通知された後、材料を別の同じものに即座に置き換えることに同意している。寄託した材料の利用可能性は、任意の政府の権限下でその特許法に従って付与された権利に違反した本発明の実施のライセンスと解釈されるべきでない。
以下の実施例は、例示的な目的だけのために提供されており、本発明の範囲を決して限定するように意図されていない。実際に、本明細書に示し、記載したものに加えて、本発明の様々な修正形態が、前述の説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲内に入る。
（実施例１）
組換え抗Ｔｒｏｐ−２マウス抗体の抗体結合親和性決定
ハイブリドーマから生成される抗Ｔｒｏｐ−２マウス抗体の親和性を、研究グレードＣＭ５センサーチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン−現在、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を備えた表面プラズモン共鳴Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２０００または３０００バイオセンサーで測定した。抗マウスＩｇＧをＣＭ５センサー表面に最初にアミンカップリングさせた。次いで、様々な抗Ｔｒｏｐ−２マウスＩｇＧを抗マウスＩｇＧによって捕捉させた。Ｔｒｏｐ−２−Ｆｃ融合タンパク質のパパイン消化から調製した単量体Ｔｒｏｐ−２細胞外ドメインを、３倍希釈系列で分析物として注入した。抗Ｔｒｏｐ−２マウス抗体の親和性は、７．５〜３１．８ｎＭの範囲である。表４。
Figure 2016104751
（実施例２）
組換え抗Ｔｒｏｐ−２マウス抗体のドメインマッピング
ドメインマッピングを、Ｔｒｏｐ−２細胞外ドメインをＴｒｏｐ−１（ＥｐＣＡＭ）またはマウスＴｒｏｐ−２等価領域と交換することによって行った。図４〜５を参照。抗Ｔｒｏｐ−２抗体３Ｅ９、６Ｇ１１、７Ｅ６、および１８Ｂ１（組換えマウスＩｇＧ２ａとして発現された）は、ヒトＴｒｏｐ−１にもマウスＴｒｏｐ−２にも結合せず、一方、１５Ｅ２は、マウスＴｒｏｐ−２に結合するがヒトＴｒｏｐ−１に結合しない。これらのハイブリッドタンパク質を、２９３Ｆ細胞内でヒトＦｃ融合タンパク質として発現させた。抗Ｔｒｏｐ−２抗体のこれらのドメインハイブリッドへの結合を、Ｂｉａｃｏｒｅによって決定した。抗Ｔｒｏｐ−２抗体によるある特定のヒトＴｒｏｐ−２ドメインの認識は、ドメイン交換により結合が喪失または低減するとき、定義した。抗Ｔｒｏｐ−２抗体クローン３Ｅ９、７Ｅ６、および１５Ｅ２は、ドメイン３および４に結合し、一方、クローン６Ｇ１１および１８Ｂ１は、ドメイン１に結合する。表５。Ｔｒｏｐ−２の異なるドメインの定義は、例えば、Ｃｈｏｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７６（８）：５８０４〜１３、２００１に見つけることができる。
Figure 2016104751
（実施例３）
Ｃｏｌｏ２０５異種移植片モデルを用いたＩｎ Ｖｉｖｏ効力試験
抗Ｔｒｏｐ−２マウスＩｇＧのｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を、標的発現ｃｏｌｏ２０５異種移植片モデルを用いて実施した。１００万のｃｏｌｏ２０５大腸がん細胞を、生後５〜８週のｎｕ／ｎｕマウスの皮下に移植した（０日目）。翌日（１日目）に体重によって動物をランダム化して、異なる処置コホート（対照ＩｇＧ、７Ｅ６、１５Ｅ２、または１８Ｂ１群；ｎ＝１０／群）にした。異なる処置コホートおよび対照ｍＩｇＧからの２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｔｒｏｐ−２抗体を、ボーラス尾静脈注射によって週３回、合計１２回にわたって投与した。すべての実験動物を体重変化について毎日監視した。腫瘍体積をキャリパーデバイスで週２回測定し、以下の式、すなわち、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２で計算した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達する前に試験を終わらせた。ＴＧＩ（％腫瘍増殖阻害）を［１−腫瘍サイズ（処置群）／腫瘍サイズ（対照群）］×１００として求めた。表６および図１は、抗Ｔｒｏｐ−２抗体７Ｅ６、１５Ｅ２、および１８Ｂ１が、Ｃｏｌｏ２０５異種移植片腫瘍増殖をｉｎ ｖｉｖｏで阻害することを示す。
Figure 2016104751
（実施例４）
Ａ４３１異種移植片モデルを用いたＩｎ Ｖｉｖｏ効力試験
ａ）抗Ｔｒｏｐ−２抗体７Ｅ６、１５Ｅ２、および１８Ｂ１によるＡ４３１異種移植片腫瘍増殖の阻害
抗Ｔｒｏｐ−２マウスＩｇＧのｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を、標的発現Ａ４３１異種移植片モデルを用いて実施した。２００万のＡ４３１類表皮がん細胞を、生後５〜８週のｎｕ／ｎｕマウスの皮下に、腫瘍サイズが約１００ｍｍ３に到達するまで移植した。動物を腫瘍サイズによってランダム化し、投薬をボーラス尾静脈注射によって行った。抗Ｔｒｏｐ−２抗体は、２９３Ｆの一過性発現から組換えマウスＩｇＧ２ａ抗体として発現させた。２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｔｒｏｐ−２抗体（１８Ｂ１、１５Ｅ２、および７Ｅ６組換えｍＩｇＧ２ａ）、または対照ＩｇＧを、ボーラス尾静脈注射によって週２回、合計６回にわたって投与した。腫瘍体積をキャリパーデバイスで週２回測定し、以下の式、すなわち、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２で計算した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達する前に試験を終わらせた。ＴＧＩ（％腫瘍増殖阻害）を［１−腫瘍サイズ（処置群）／腫瘍サイズ（対照群）］×１００として求めた。表７Ａおよび図２Ａは、抗Ｔｒｏｐ２抗体７Ｅ６、１５Ｅ２、および１８Ｂ１が、Ａ４３１異種移植片腫瘍増殖をｉｎ ｖｉｖｏで阻害することを示す。
Figure 2016104751
ｂ）用量応答試験における抗Ｔｒｏｐ−２抗体７Ｅ６によるＡ４３１異種移植片腫瘍増殖の阻害

上記実施例４ａに記載の同じ異種移植片モデルを使用して、様々な用量の抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６抗体（５、１０、および２０ｍｇ／ｋｇ）、または２０ｍｇ／ｋｇの対照ＩｇＧを、ボーラス尾静脈注射によって週２回、合計６回にわたって投与した。表７Ｂおよび図２Ｂは、様々な用量の７Ｅ６によるｉｎ ｖｉｖｏでのＡ４３１異種移植片腫瘍増殖の阻害を示す。
Figure 2016104751
ｃ）抗Ｔｒｏｐ−２抗体６Ｇ１１、７Ｅ６、および１８Ｂ１によるＡ４３１異種移植片腫瘍増殖の阻害
同様に、実施例４ａ）に記載したＡ４３１異種移植片モデルにおいて、すべてｍＩｇＧ２として組換えで発現させた２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｔｒｏｐ−２抗体（６Ｇ１１、７Ｅ６、および１８Ｂ１、ならびに対照ＩｇＧ）を、ボーラス尾静脈注射によって週１回、合計３回にわたって投与した。表７Ｃおよび図２Ｃは、抗Ｔｒｏｐ２抗体６Ｇ１１、７Ｅ６、および１８Ｂ１が、Ａ４３１異種移植片腫瘍増殖をｉｎ ｖｉｖｏで阻害することを示す。
Figure 2016104751
（実施例５）
ヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体−７Ｅ６の抗体結合親和性決定
キメラおよびヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６抗体の親和性を、研究グレードＣＭ４センサーチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン−現在、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を備えた表面プラズモン共鳴Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００バイオセンサーで測定した。ヒトＴｒｏｐ−２−ｈＦｃまたはカニクイザルＴｒｏｐ−２−ｈＦｃタンパク質を、抗ヒトＦｃとカップリングしたＣＭ５ ＥＤＡチップ３７センサー表面上で捕捉した。キメラおよびヒト化７Ｅ６組換えＦａｂ断片を、３倍希釈系列として注射した。表８Ａおよび表８Ｂは、ヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６抗体の、それぞれヒトＴｒｏｐ−２タンパク質およびカニクイザルＴｒｏｐ−２タンパク質への親和性測定値を示す。
Figure 2016104751
Figure 2016104751
（実施例６）
ヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体−６Ｇ１１の抗体結合親和性決定
ヒト化６Ｇ１１抗体の親和性を、研究グレードＣＭ５センサーチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン−現在、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を備えた表面プラズモン共鳴Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２０００バイオセンサーで測定した。ヒトＴｒｏｐ−２−ｍＦｃタンパク質を、抗マウスＦｃとカップリングしたＣＭ５チップ上で捕捉した。ヒト６Ｇ１１＿ＷＴまたはヒト６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦキメラＦａｂ断片を、３倍希釈系列として注射した。表９は、ヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ６Ｇ１１抗体のヒトＴｒｏｐ−２タンパク質への親和性測定値を示す。
Figure 2016104751
（実施例７）
Ｔｒｏｐ−２陽性および陰性腫瘍細胞に対するマウスおよびヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体のフローサイトメトリー
ａ）７Ｅ６
マウスキメラおよびヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６抗体（ヒトＩｇＧ１サブタイプ内で発現させた）の結合を、Ｔｒｏｐ−２発現（Ａ４３１およびＣｏｌｏ２０５）ならびに非発現（ＳＷ６２０）細胞について、フローサイトメトリーによって評価した。Ａ４３１細胞染色に関して、２００，０００細胞を、結合緩衝液（ＰＢＳ（リン酸緩衝溶液）＋０．５％のＢＳＡ（ウシ血清アルブミン））１００μＬ中で、抗体０．５μｇとともにインキュベートし、その後Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）製Ｄｙｌｉｇｈｔ４８８コンジュゲートヤギ抗ヒト（Ｆａｂ’）２−特異的二次抗体とともにインキュベートした。Ｃｏｌｏ２０５およびＳＷ６２０細胞に関して、３００，０００細胞を、一次抗体１μｇとともに、その後Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）製ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７抗ヒト（Ｆａｂ’）２−特異的二次抗体とともに使用した。表１０は、マウス７Ｅ６およびヒト化７Ｅ６抗体によるＴｒｏｐ−２陽性腫瘍細胞に対する少なくとも約９３％の結合を示す。
Figure 2016104751
ｂ）６Ｇ１１
実施例７ａ）と同様に、キメラマウスおよびヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ６Ｇ１１抗体（ヒトＩｇＧ１サブタイプ内で発現させた）の結合を、Ｔｒｏｐ−２発現（Ａ４３１およびＣｏｌｏ２０５）ならびに非発現（ＳＷ６２０）細胞について、フローサイトメトリーによって評価した。３００，０００細胞を、一次抗体１μｇ、その後ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７抗ヒト（Ｆａｂ’）２−特異的二次抗体とともに使用した。表１１は、マウス６Ｇ１１およびヒト化６Ｇ１１抗体によるＴｒｏｐ−２陽性腫瘍細胞に対する少なくとも約９９％の結合を示す。
Figure 2016104751
（実施例８）
Ａ４３１細胞に対するキメラおよびヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６ ｈＩｇＧ１抗体のＡＤＣＣ活性
キメラマウス（ｈ７Ｅ６−ＷＴ）ならびにヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６ヒトＩｇＧ１抗体（ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ（ＶＨ領域）、ｈ７Ｅ６＿Ｌ（ＶＬ領域）、ならびにｈ７Ｅ６−ＳＶＧＬ（ＶＨおよびＶＬ領域の両方））のＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）活性を、ｃｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞傷害性アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）を用いて求めた。標的発現Ａ４３１細胞を、アッセイの前日に１０，０００細胞／ウェルで播種した。ドナーＰＢＭＣ（凍結保存した末梢血単核細胞）を、フィコール勾配によって単離し、Ｘ−ＶＩＶＯ培地（Ｌｏｎｚａ、Ｗａｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＯ）中で、３７℃で一晩培養した。翌日、抗体を図３に示した濃度でウェルに添加し、その後ＲＰＭＩ＋５％のＦＢＳ（ウシ胎児血清）中の５００，０００ＰＢＭＣ細胞（Ｅ：Ｔ＝５０：１）を添加した。抗ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）抗体（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ、Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ）をアッセイの陽性対照として使用した。次いでプレートを３７℃で４時間インキュベートした。３時間半の時点で、溶解液２０μＬを、標的細胞単独のウェルに添加した。プレートを８０００ｒｐｍで３分間回転させた後、上清５０μＬを別のプレートに移した。次いで基質５０μｌを各ウェルに添加し、プレートを、暗所で、室温で３０分間インキュベートした。Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）製停止液５０μＬを各ウェル添加することによって、反応を停止した。次いで、分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を用いて４９０ｎｍでプレートを読み取った。特異的溶解のパーセンテージ（％）を以下の式で計算した：
％特異的溶解＝（処置ＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）放出−標的細胞自発的ＬＤＨ放出−効果細胞自発的ＬＤＨ放出）／（標的細胞最大ＬＤＨ放出−標的細胞自発的ＬＤＨ放出）×１００
図３は、キメラマウスおよびヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６ ＩｇＧ１抗体がともに、Ａ４３１細胞内でＡＤＣＣ殺傷を誘導したことを示す。
（実施例９）
Ｔｒｏｐ−２陽性細胞内の抗Ｔｒｏｐ−２ＡＤＣの細胞傷害性
表１２に示したように、キメラマウス（６Ｇ１１および７Ｅ６）ならびにヒト化抗Ｔｒｏｐ−２（ｈ７Ｅ６−ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６−ＳＶＧＬ、およびｈ７Ｅ６−ＳＶＧＮ）抗体を、グルタミン含有トランスグルタミナーゼ（「Ｑ」）タグ（例えば、ＴＧ１、ＬＣＱ０３、およびＴＧ６は、それぞれ、配列番号７５，（ＬＬＱＧＧ）、７８（ＧＧＬＬＱＧＡ）、および７９（ＬＬＱＧＡ）に対応する）で遺伝子工学的に改変され、ＡｃＬｙｓ−ｖｃＭＭＡＤ（アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ＭＭＡＤ）、アミノカプロイル−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ（アミノカプロイル−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル−ＭＭＡＤ）、またはＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ（アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル−ＭＭＡＤ）とコンジュゲートしたヒトＩｇＧ１サブタイプとして発現させた。一例では、トランスグルタミナーゼタグは、抗体の軽鎖または重鎖Ｃ末端で遺伝子工学的に改変することができ、他の例では、トランスグルタミナーゼタグ（例えば、Ｑ）は、ヒトＩｇＧの２９７位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）などの抗体の別の部位で遺伝子工学的に改変される。例えば、野生型アミノ酸アスパラギン（Ｎ）は、Ｔｒｏｐ−２抗体の２９７位でグルタミンと置換される（Ｎ２９７Ｑ）。次いで、ＭＭＡＤへの抗Ｔｒｏｐ−２抗体コンジュゲーションを、特定の部位（例えば、抗体の重鎖もしくは軽鎖のカルボキシル末端もしくはアミノ末端、２９７位、または別の部位）でグルタミン含有タグを担持する抗Ｔｒｏｐ−２抗体と、ペイロード（例えば、ＭＭＡＤ）のアミン含有誘導体との間の微生物トランスグルタミナーゼ触媒アミド基転移反応を介して実現した。場合によっては、カルボキシル末端（Ｋａｂａｔ番号付けスキームによる４４７位）の野生型アミノ酸リシンを欠失させ、Ｑ−タグと置き換えた。他の例では、２２２位、３４０位、または３７０位（Ｋａｂａｔ番号付けスキームによる）の野生型アミノ酸リシンを、アミノ酸アルギニンと置き換えた（「Ｋ２２２Ｒ」、「Ｋ３４０Ｒ」、または「Ｋ３７０Ｒ」）。例えば、Ｋ２２２Ｒ置換は、より均質な抗体とペイロードのコンジュゲート、抗体とペイロードとのより良好な分子間架橋、および／または抗体軽鎖のＣ末端上のグルタミンタグとの鎖間架橋の著しい減少をもたらすという意外な効果を有することが判明した。アミド基転移反応では、抗体上のグルタミンは、アシルドナーとして作用し、アミン含有化合物は、アシルアクセプター（アミンドナー）として作用した。１．６７〜４．０４μＭの濃度の精製抗Ｔｒｏｐ−２抗体を、６．２〜８．８のｐＨ範囲の、１５０〜９００ｍＭのＮａＣｌ、および２５ｍＭのＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸］、またはＴｒｉｓ ＨＣｌ緩衝液中で、０．２２５〜０．５４５％（ｗ／ｖ）のストレプトベルチシリウム・モバラエンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍｏｂａｒａｅｎｓｅ）トランスグルタミナーゼ（ＡＣＴＩＶＡ（商標）、Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ、日本）の存在下で、１６７〜４０４μＭの間の範囲で、２０〜１００Ｍ過剰のアシルアクセプターとともにインキュベートした。反応条件を個々のアシルアクセプター誘導体について調整し、最適な効率および特異性は一般に、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ８．８中の２．８７μＭの抗体、２８７μＭの誘導体、および０．３７８％（ｗ／ｖ）のトランスグルタミナーゼで観察された。室温で２．５時間インキュベートした後、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから市販されている親和性クロマトグラフィーなどの当業者に公知の標準的な親和性クロマトグラフィー法を使用して、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｗａｕｋｅｓｈａ、ＷＩ）上で抗体を精製した。
標的発現（Ａ４３１、ＢｘＰＣ３、ＣＡＰＡＮ−２、およびＣｏｌｏ２０５）または非発現（ＳＷ６２０）細胞を、処置の２４時間前に、２０００細胞／ウェルで白色壁透明底プレート上に播種した。４倍連続希釈した抗体−薬剤コンジュゲートを用いて三つ組で細胞を処置した。処置して９６時間後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ９６（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）によって細胞生存能を求めた。相対的な細胞生存能を、未処置対照のパーセンテージとして求めた。ＩＣ５０をＰｒｉｓｍソフトウェアによって計算した。表１２は、トランスグルタミナーゼタグによってＭＭＡＤにコンジュゲートしたキメラマウスおよびヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６抗体が、Ｔｒｏｐ−２発現細胞内で強力な細胞殺傷活性を発揮することを示す。
Figure 2016104751
Figure 2016104751
（実施例１０）
抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６オーリスタチンコンジュゲートは、ＢｘＰＣ３異種移植片モデルにおいて長期間の腫瘍退縮を誘導した
対照抗体ｈＩｇＧ１−ＴＧ１−ｖｃＭＭＡＤ（「ＮＮＣＴＧ１−ｖｃＭＭＡＤ」）、およびトランスグルタミナーゼを介して１）ＬＣＱ０３−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ Ｋ２２２Ｒバリアントまたは２）ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤとコンジュゲートされたキメラ抗Ｔｒｏｐ−２抗体７Ｅ６のｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を、標的発現ＢｘＰＣ３異種移植片モデルを用いて実施した。ｈ７Ｅ６−Ｋ２２２Ｒ−ＬＣＱ０３−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤバリアントコンジュゲートに関して、抗Ｔｒｏｐ−２抗体中の野生型アミノ酸リシンが、Ｋａｂａｔ番号付けスキームによる２２２位でアミノ酸アルギニンと置換されている（すなわちＫ２２２Ｒ）。ＬＣＱ０３は、配列番号７８（ＧＧＬＬＱＧＧ）に対応し、ＴＧ６は、配列番号７９（ＬＬＱＧＡ）に対応する。トランスグルタミナーゼタグＬＣＱ０３およびＴＧ６を使用してＴｒｏｐ−２抗体をコンジュゲートする一般的な方法は、実施例９に記載されている。２００万のＢｘＰＣ３がん細胞を、生後５〜８週のＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスの皮下に、腫瘍サイズが約２５０ｍｍ３に到達するまで移植した。動物を腫瘍サイズによってランダム化し、投薬をボーラス尾静脈注射によって行った。３ｍｇ／ｋｇの対照ｈＩｇＧ１、キメラｈ７Ｅ６−Ｋ２２２Ｒ−ＬＣＱ０３−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤバリアント、またはキメラ７Ｅ６−ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤを、ボーラス尾静脈注射によって１回、合計１回にわたって投与した。腫瘍体積をキャリパーデバイスで週１回測定し、以下の式、すなわち、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２で計算した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達する前に試験を終わらせた。単回投与のＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤとコンジュゲートしたキメラ抗Ｔｒｏｐ−２抗体７Ｅ６は、長期間の腫瘍退縮をもたらした。図８を参照。
（実施例１１）
Ｔｒｏｐ−２陽性細胞内の抗Ｔｒｏｐ−２−ＡＤＣの細胞傷害性
陰性対照（ＮＮＣ）およびヒト化抗Ｔｒｏｐ−２（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）抗体を、指定されたように、重鎖（ＴＧ６（配列番号７９））、軽鎖（ＬＣＱ０３（配列番号７８）およびＬＣＱ０４（配列番号７９））のＣ末端で、グルタミン含有トランスグルタミナーゼタグで、または重鎖のＣＨ２／ヒンジドメイン内のＮ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ突然変異で遺伝子工学的に改変され、ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１（「ｖｃ０１０１」またはアセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル−（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド））またはアミノカプロイル−ＰＥＧ６（プロピレングリコール）６−プロピオニル）−ＭＭＡＤとコンジュゲートしたヒトＩｇＧ１サブタイプとして発現させた。２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミドは、米国出願第６１／５６１，２５５号および同第６１／６７６，４２３号に記載された新規オーリスタチンである。トランスグルタミナーゼタグを使用してＴｒｏｐ−２抗体をコンジュゲートする方法は、実施例９に記載されている。標的発現または非発現（ＳＷ６２０）細胞を、処置の２４時間前に、１ウェル当たり２０００（Ａ４３１、ＢｘＰＣ３、ＮＣＩ−Ｈ２９２、ＮＣＩ−Ｈ１６５０、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、およびＳＷ６２０）、２５００（Ｃａｌｕ−３）、または３０００（ＯＶＣＡＲ３およびＳＫＢＲ３）細胞で白色壁透明底プレート上に播種した。４倍連続希釈した抗体−薬剤コンジュゲートを用いて三つ組で細胞を処置した。処置して９６時間後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ９６（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）によって細胞生存能を求めた。相対的な細胞生存能を、未処置対照のパーセンテージとして求めた。ＩＣ５０をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアによって計算し、総Ａｂの濃度（ｎＭ）として表現した。表１３は、トランスグルタミナーゼタグによってｖｃ０１０１またはＰＥＧ６−ＭＭＡＤにコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６抗体が、Ｔｒｏｐ−２発現細胞内で強力な細胞殺傷活性を発揮することを示す。
Figure 2016104751
（実施例１２）
抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６オーリスタチンコンジュゲートは、膵臓腫瘍ＢｘＰＣ３異種移植片モデルにおいて腫瘍退縮を誘導した
Ｔｒｏｐ−２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を、標的発現ＢｘＰＣ３異種移植片モデルを用いて実施した。２００万のＢｘＰＣ３膵がん細胞を、生後５〜８週のＣＢ１７／ＳＣＩＤマウスの皮下に、腫瘍サイズが３００〜４００ｍｍ３に到達するまで移植した。動物を腫瘍サイズによってランダム化し、単回投与の１）ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１（図９Ａに表したＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−０１０１に等しい）、２）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ−ＰＥＧ６−ＭＭＡＤ（（プロピレングリコール）６−プロピオニル−ＭＭＡＤ）、および３）ＬＣＱ０４−Ｋ２２２Ｒ−ｖｃ−ＰＡＢＣ０１０１（図９Ｃに表したＬＣＱ０４／Ｋ２２２Ｒ−ｖｃ０１０１に等しい）、ＬＣＱ０４は、配列番号７９（ＬＬＱＧＡ）に対応する）とコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体、ならびに対照コンジュゲートを、ボーラス尾静脈注射によって投与した。腫瘍体積をキャリパーデバイスで週１回測定し、以下の式、すなわち、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２で計算した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達する前に試験を終わらせた。図９Ａ〜９Ｃは、単回投与の１）ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１、２）Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ−ＰＥＧ６−ＭＭＡＤ、および３）ＬＣＱ０４−Ｋ２２２Ｒ−ｖｃ−ＰＡＢＣ０１０１とコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体が、膵臓腫瘍ＢｘＰＣ３異種移植片モデルにおいて腫瘍退縮をもたらすことを示す。
（実施例１３）
抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６オーリスタチンコンジュゲートは、大腸腫瘍Ｃｏｌｏ２０５異種移植片モデルにおいて腫瘍退縮を誘導した
Ｔｒｏｐ−２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を、標的発現ｃｏｌｏ２０５異種移植片モデルを用いて実施した。３００万のｃｏｌｏ２０５大腸がん細胞を、生後５〜８週のｎｕ／ｎｕマウスの皮下に、腫瘍サイズが約３００ｍｍ３に到達するまで移植した。動物を腫瘍サイズによってランダム化し、単回投与の６ｍｇ／ｋｇの１）ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１（図１０に表したＴＧ６−ｖｃ−０１０１に等しい）、および２）重鎖のヒンジ／ＣＨ２ドメイン内にＫ２２２Ｒ置換を有するＬＣＱ０３−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１（図１０に表したＬＣＱ０３／Ｋ２２２Ｒ−ｖｃ０１０１に等しく、ＬＣＱ０３は、配列番号７８（ＧＧＬＬＱＧＧ）に対応する）とコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体、ならびに対照コンジュゲート（ＩｇＧ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１）を、ボーラス尾静脈注射によって投与した。腫瘍体積をキャリパーデバイスで週１回測定し、以下の式、すなわち、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２で計算した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達する前に試験を終わらせた。図１０は、単回投与の１）ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１、および２）重鎖のヒンジ／ＣＨ２ドメイン内にＫ２２２Ｒ置換を有するＬＣＱ０３−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１とコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体が、大腸腫瘍Ｃｏｌｏ２０５異種移植片モデルにおいて腫瘍退縮をもたらしたことを示す。
（実施例１４）
抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６オーリスタチンコンジュゲートは、卵巣ＰＤＸ Ｏｖａ１９６７５６異種移植片モデルにおいて腫瘍退縮を誘導した
ＴＧ６−ｖｃ−０１０１とコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ２抗体（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）を使用するＴｒｏｐ−２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を、標的発現卵巣がん患者由来異種移植片モデル（ＰＤＸ Ｏｖａ１９６７５６）を用いて実施した。この腫瘍試料を外科標本から得、ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ）内で増殖させた。効力試験のために、およそ１〜２ｍｍ３の腫瘍断片を、ＣＢ１７／ＳＣＩＤマウスの外側側腹部の皮下に移植した。腫瘍サイズが約４００ｍｍ３に到達した際、動物を腫瘍サイズによってランダム化し、単回投与のｈ７Ｅ６ＳＶＧ−ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１（０．７５ｍｇ／ｋｇおよび１．５ｍｇ／ｋｇ；図１１に表したＴＧ６−ｖｃ０１０１に等しい）、ならびに対照コンジュゲート（１．５ｍｇ／ｋｇ；図１１に表したＩｇＧ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１またはＩｇＧ−ｖｃ０１０１）を、ボーラス尾静脈注射によって投与した。腫瘍体積をキャリパーデバイスで週１回測定し、以下の式、すなわち、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２で計算した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達する前に試験を終わらせた。図１１は、単回投与のＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１とコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体が、卵巣ＰＤＸ Ｏｖａ１９６７５６異種移植片モデルにおいて腫瘍退縮をもたらしたことを示す。
（実施例１５）
抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６オーリスタチンコンジュゲートは、Ｐａｎ０１４６膵臓ＰＤＸモデルにおいて腫瘍退縮を誘導するのにゲムシタビンより優れた効力を示す
ＴＧ６−ｖｃ０１０１とコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）を使用するＴｒｏｐ−２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ）製の標的発現膵がん患者由来異種移植片モデル（ＰＤＸ Ｐａｎ０１４６）を用いて実施した。効力試験のために、１〜２ｍｍ３の腫瘍断片を、動物の外側側腹部の皮下に移植した。腫瘍サイズが約３００ｍｍ３に到達した際、動物を腫瘍サイズによってランダム化し、ｈ７Ｅ６ＳＶＧ−ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１および対照コンジュゲートを、ボーラス尾静脈注射によって投与した。図１２Ａ：単回投与のｈ７Ｅ６ＳＶＧ−ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１（図でｈ７Ｅ６ＳＶＧ−ＴＧ６−ｖｃ０１０１と示されている）および対照コンジュゲートを指定した用量で投与した。ゲムシタビンは、毎週２回、合計６回にわたって７５ｍｇ／ｋｇで投与した。図１２Ｂ：ｈ７Ｅ６ＳＶＧ−ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１を、０．７５ｍｇ／ｋｇを毎週１回で４回にわたって、１．５ｍｇ／ｋｇを隔週で２回にわたって、または３．０ｍｇ／ｋｇの単回投与で投与した。ゲムシタビンは、毎週１回、７５ｍｇ／ｋｇで４回にわたって投与した。腫瘍体積をキャリパーデバイスで週１回測定し、以下の式、すなわち、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２で計算した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達する前に試験を終わらせた。データは、ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１とコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ２抗体が、Ｐａｎ０１４６膵臓ＰＤＸモデルにおいて腫瘍退縮を誘導するのに、ゲムシタビンより優れた効力を有し、ｈ７Ｅ６ＳＶＧ−ＴＧ６−ＡｃＬｙｓ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−０１０１を連続的に投薬すると、膵臓ＰＤＸ Ｐａｎ０１４６異種移植片モデルにおいて腫瘍退縮が持続したことを示す。
（実施例１６）
抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６オーリスタチンコンジュゲートは、膵臓Ｐａｎ１４４６０７ ＰＤＸモデルにおいて腫瘍退縮を誘導する
ｖｃ０１０１またはＰＥＧ６ＭＭＡＤとコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）を使用するＴｒｏｐ−２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を、標的発現膵がん患者由来異種移植片モデル（ＰＤＸ Ｐａｎ１４４６０７）を用いて実施した。この腫瘍試料を外科標本から得、ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ）内で増殖させた。効力試験のために、およそ１〜２ｍｍ３の腫瘍断片を、ＣＢ１７／ＳＣＩＤマウスの外側側腹部の皮下に移植した。腫瘍サイズが約３００ｍｍ３に到達した際、動物を腫瘍サイズによってランダム化し、１．５、３．０、および６．０ｍｇ／ｋｇの単回投与のｈ７Ｅ６ＳＶＧ−Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ−ＰＥＧ６ＭＭＡＤ、ならびに対照コンジュゲートを、ボーラス尾静脈注射によって投与した。腫瘍体積をキャリパーデバイスで週１回測定し、以下の式、すなわち、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２で計算した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達する前に試験を終わらせた。図１３は、単回投与のＰＥＧ６−ＭＭＡＤとコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ２抗体が膵臓Ｐａｎ１４４６０７ ＰＤＸモデルにおいて腫瘍退縮をもたらしたことを示す。
（実施例１７）
抗Ｔｒｏｐ−２ ７Ｅ６オーリスタチンコンジュゲートは、膵臓Ｐａｎ０１３５ ＰＤＸモデルにおいて腫瘍退縮を誘導する
ＰＥＧ６ＭＭＡＤとコンジュゲートしたヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体（ｈ７Ｅ６ＳＶＧ）を使用するＴｒｏｐ−２ ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ効力試験を、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製の標的発現膵がん患者由来異種移植片モデル（ＰＤＸ Ｐａｎ０１３５）を用いて実施した。効力試験のために、およそ１〜２ｍｍ３の腫瘍断片を、動物の外側側腹部の皮下に移植した。腫瘍サイズが約３００ｍｍ３に到達した際、動物を腫瘍サイズによってランダム化し、６ｍｇ／ｋｇのｈ７Ｅ６ＳＶＧ−Ｎ２９７Ｑ／Ｋ２２２Ｒ−ＰＥＧ６ＭＭＡＤ、および対照コンジュゲートを、単回投与でボーラス尾静脈注射によって投与した。腫瘍体積をキャリパーデバイスで週１回測定し、以下の式、すなわち、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２で計算した。腫瘍体積が２０００ｍｍ３に到達する前に試験を終わらせた。図１４は、単回投与のＰＥＧ６−ＭＭＡＤとコンジュゲートしたヒト化抗−Ｔｒｏｐ２抗体が、膵臓Ｐａｎ０１３５ ＰＤＸモデルにおいて腫瘍退縮をもたらしたことを示す。
（実施例１８）
ヒト化抗Ｔｒｏｐ−２抗体の抗体結合親和性決定
Ｆａｂ／ヒトＴｒｏｐ２−ＥＣＤ（細胞外ドメイン）相互作用の分析を、ＧＬＣセンサーチップを備えたＢｉｏ−Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅｏｎ ＸＰＲ３６表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を使用して実施した。アッセイ温度は２５℃であり、アッセイ緩衝液は、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４であった。アミンカップリングしたＦａｂのアレイを、Ａｂｄｉｃｈｅら（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、４１１：１３９〜１５１（２０１１））に記載の方法を使用して調製した。各分析サイクルにおいて、一価ヒトＴｒｏｐ２−ＥＣＤ抗原を、固定化されたＦａｂ上に３０μＬ／分で３分間流し、その後１５分間緩衝液で洗浄してＦａｂ／Ｔｒｏｐ２複合体の解離を監視した。Ｐｉｅｒｃｅ ＩｇＧ溶出緩衝液：４ＭのＮａＣｌ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）の２：１混合物（体積による）の１８秒の注入を３回使用して、センサー表面を分析サイクル間で再生させた。結合および再生サイクルを、６、３０、および１５０ｎＭのヒトＴｒｏｐ２−ＥＣＤ濃度で繰り返した。得られたデータを、Ｐｒｏｔｅｏｎ評価ソフトウェアを使用して、１：１のラングミュア結合モデルにフィッティングした。結果を以下の表に表す。
Figure 2016104751
開示される教示を、様々な用途、方法、キット、および組成物を参照して説明してきたが、本明細書の教示および以下の請求項に係る発明から逸脱することなく、様々な変更および改変を行うことができることが理解されるであろう。前述の例は、開示される教示をより良好に例示するために提供されており、本明細書に提示した教示の範囲を限定するように意図されていない。本教示を、これらの例示的な実施形態の観点から説明してきたが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数の変形形態および修正形態が過度の実験を伴うことなく可能であることを容易に理解するであろう。すべてのこのような変形形態および修正形態は、本教示の範囲内にある。
特許、特許出願、論文、教科書などを含めた本明細書に引用されたすべての参考文献、およびこれらに引用された参考文献は、これらがまだ組み込まれていない程度まで、これらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。それだけに限らないが、定義された用語、用語の使用法、記載した技法などを含めて、組み込まれた文献および同様の資料の１つはまた複数が本願と異なり、または矛盾する場合、本願が支配する。
前述の記述および実施例は、本発明のある特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らが企図した最良の形態を記載するものである。前述のことが本文内でいかに詳述されているようであっても、本発明は、多くの方法で実行することができ、本発明は、添付の特許請求の範囲およびこれらの任意の均等物に従って解釈されるべきであることが理解されるであろう。

Claims (40)

  1. 栄養膜細胞表面抗原−２（Ｔｒｏｐ−２）に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
    （ａ）（ｉ）配列ＳＹＧＶＨ（配列番号３０）、ＧＧＳＩＳＳＹ（配列番号３６）、もしくはＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨ（配列番号３７）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列ＶＩＷＴＸ１ＧＸ２ＴＤＹＮＳＡＬＭＸ３（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＳもしくはＶであり、Ｘ３は、ＳもしくはＧである）（配列番号４９）、もしくはＷＴＸ１ＧＸ２（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＳであり、Ｘ２は、ＳもしくはＶである）（配列番号５０）を含むＶＨ ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列ＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹ（配列番号３５）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域相補性決定領域、ならびに
    （ｂ）（ｉ）配列ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＸ１ＹＳＹＭＨ（式中、Ｘ１は、Ｇ、Ｌ、もしくはＮである）（配列番号６３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号５５）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＨＳＲＥＬＰＹＴ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域相補性決定領域
    を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
  2. Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
    配列番号４もしくは５に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに
    配列番号３、６もしくは７に示したＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域
    を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
  3. ＶＨ領域が、（ｉ）配列ＳＹＧＶＨ（配列番号３０）、ＧＧＳＩＳＳＹ（配列番号３６）、またはＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨ（配列番号３７）を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＶＩＷＴＳＧＶＴＤＹＮＳＡＬＭＧ（配列番号３８）またはＷＴＳＧＶ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹ（配列番号３５）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含み、かつ、ＶＬ領域が、（ｉ）配列ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨ（配列番号５４）を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号５５）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＨＳＲＥＬＰＹＴ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む、請求項２に記載の抗体または抗原結合断片。
  4. ＶＨ領域が、配列番号５に示した配列、またはＣＤＲ内にない残基中に１つもしくはいくつかの保存的アミノ酸置換を有するバリアントを含み、かつＶＬ領域が、配列番号３に示したアミノ酸配列、またはＣＤＲ内にないアミノ酸中に１つもしくはいくつかのアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む、請求項３に記載の抗体または抗原結合断片。
  5. 配列番号６６に示した配列を含む軽鎖、および配列番号６５に示した配列を含む重鎖を含む、請求項４に記載の抗体または抗原結合断片。
  6. ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８７２を有する発現ベクターによって生成されるＶＨ領域を含む、請求項３に記載の抗体または抗原結合断片。
  7. ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２８７１を有する発現ベクターによって生成されるＶＬ領域を含む、請求項３に記載の抗体または抗原結合断片。
  8. 表面プラズモン共鳴によって測定して０．２５ｎＭ以下の一価抗体結合親和性（ＫＤ）でヒトＴｒｏｐ−２（配列番号２７）のドメイン３およびドメイン４に特異的に結合する、請求項１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
  9. Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
    （ａ）（ｉ）配列ＳＹＷＩＮ（配列番号４０）、ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４１）、もしくはＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮ（配列番号４２）を含む重鎖可変（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列ＮＩＸ１ＰＳＤＳＹＳＮＹＮＸ２ＫＦＫＤ（式中、Ｘ１は、ＹもしくはＦであり、Ｘ２は、ＱもしくはＫである）（配列番号５１）、もしくはＸ１ＰＳＤＳＹ（式中、Ｘ１は、ＹもしくはＦである）（配列番号５２）を含むＶＨ ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列ＧＳＸ１ＦＤＹ（式中、Ｘ１は、ＳもしくはＧである）（配列番号５３）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域相補性決定領域、ならびに
    （ｂ）（ｉ）配列ＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨ（配列番号５９）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号６０）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列Ｘ１ＱＳＸ２ＳＷＰＦＴ（Ｘ１は、ＱもしくはＳであり、Ｘ２は、ＮもしくＦである）（配列番号６４）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域相補性決定領域
    を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
  10. Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、
    配列番号１３に示したＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに
    配列番号１２に示したＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ領域
    を含む、単離抗体またはその抗原結合断片。
  11. ＶＨ領域が、（ｉ）配列ＳＹＷＩＮ（配列番号４０）、ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４１）、またはＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮ（配列番号４２）を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＮＩＦＰＳＤＳＹＳＮＹＮＫＫＦＫＤ（配列番号４６）またはＦＰＳＤＳＹ（配列番号４７）を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＧＳＧＦＤＹ（配列番号４８）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含み、かつＶＬ領域が、（ｉ）配列ＲＡＳＱＴＩＧＴＳＩＨ（配列番号５９）を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＹＡＳＥＳＩＳ（配列番号６０）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＳＱＳＦＳＷＰＦＴ（配列番号６２）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む、請求項１０に記載の抗体または抗原結合断片。
  12. ＶＨ領域が、配列番号１３に示した配列、またはＣＤＲ内にない残基中に１つもしくはいくつかの保存的アミノ酸置換を有するバリアントを含み、かつＶＬ領域が、配列番号１２に示したアミノ酸配列、またはＣＤＲ内にないアミノ酸中に１つもしくはいくつかのアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む、請求項１１に記載の抗体または抗原結合断片。
  13. 配列番号６８に示した配列を含む軽鎖、および配列番号６７に示した配列を含む重鎖を含む、請求項１２に記載の抗体または抗原結合断片。
  14. 表面プラズモン共鳴によって測定して、０．６ｎＭ以下の一価抗体結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項９に記載の抗体。
  15. 特定の部位で遺伝子工学的に改変されたアシルドナーグルタミン含有タグを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の抗体。
  16. タグが、アミノ酸配列ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、またはＬＬＱを含む、請求項１５に記載の抗体。
  17. ２２２位のリシン、３４０位のリシン、または３７０位のリシンでアミノ酸修飾をさらに含む、請求項１６に記載の抗体。
  18. アミノ酸修飾が、リシンからアルギニンへの置換である、請求項１７に記載の抗体。
  19. 請求項１から１８のいずれか一項に記載の、抗体または抗原結合断片のコンジュゲートであって、抗体または抗原結合断片が、細胞毒性剤、免疫調節剤、造影剤、治療用タンパク質、バイオポリマー、およびオリゴヌクレオチドからなる群から選択される作用物質にコンジュゲートしている、コンジュゲート。
  20. 作用物質が細胞毒性剤である、請求項１９に記載のコンジュゲート。
  21. 細胞毒性剤が、ＭＭＡＤ（モノメチルオーリスタチンＤ）、または０１０１（２−メチルアラニル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−｛［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アミノ｝プロピル］ピロリジン−１−イル｝−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミド）である、請求項２０に記載のコンジュゲート。
  22. 式：抗体−（アシルドナーグルタミン含有タグ）−（リンカー）−（細胞毒性剤）を有する、請求項２１に記載のコンジュゲート。
  23. アシルドナーグルタミン含有タグが、アミノ酸配列ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）、ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）、ＬＬＱ、またはＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（式中、Ｘ１は、ＧもしくはＰであり、Ｘ２は、Ａ、Ｇ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ３は、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｐであるかもしくは存在せず、Ｘ４は、Ｇ、Ｋであるかもしくは存在せず、Ｘ５は、Ｋであるかもしくは存在しない）（配列番号８８）を含み、リンカーが、アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル、またはアミノ−ＰＥＧ６−プロピオニルを含む、請求項２２に記載のコンジュゲート。
  24. １）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（アセチル−リシン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ））−０１０１、２）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ、３）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、４）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ、５）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、および６）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤからなる群から選択される、請求項２３に記載のコンジュゲート。
  25. コンジュゲート１）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、２）抗体−ＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号７８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ、３）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、４）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤ、５）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、または６）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤが、該抗体の２２２位でリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含む、請求項２４に記載のコンジュゲート。
  26. コンジュゲートが、１）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、２）抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＤ、３）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１、または４）抗体−ＬＬＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５（配列番号８８）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−ＭＭＡＤであって、かつ、抗体の重鎖のＣ末端におけるアミノ酸リシンが欠失している、請求項２４に記載のコンジュゲート。
  27. 前記抗体のＮ２９７Ｑ位およびＫ２２２Ｒ位におけるアミノ酸置換、アミノ−ＰＥＧ６−プロピオニルを含むリンカー、ならびにＭＭＡＤを含む細胞毒性剤を含む、請求項２１に記載のコンジュゲート。
  28. コンジュゲートが、抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１であって、該抗体の２２２位でリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含み、該抗体の重鎖のＣ末端におけるアミノ酸リシンが欠失している、請求項２１に記載のコンジュゲート。
  29. 治療有効量の請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または請求項１９から２８のいずれか一項に記載のコンジュゲート、および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
  30. 請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
  31. 請求項３０に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  32. 請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体を組換え産生する単離宿主細胞。
  33. 抗体を生成する方法であって、抗体の産生をもたらす条件下で請求項３２に記載の宿主細胞を培養するステップと、宿主細胞または培養物から抗体を単離するステップとを含む、方法。
  34. 対象におけるＴｒｏｐ−２発現に関連する状態を治療するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  35. 状態ががんである、請求項３４に記載の医薬組成物。
  36. がんが、膀胱、乳房、子宮頸部、絨毛癌、大腸、食道、胃、グリア芽細胞腫、頭頸部、腎臓、肺、口腔、卵巣、膵臓、前立腺、および皮膚のがんからなる群から選択される、請求項３５に記載の医薬組成物。
  37. Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍を有する対象における腫瘍増殖または進行を阻害するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  38. 対象におけるＴｒｏｐ−２発現がん細胞の転移を阻害するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  39. Ｔｒｏｐ−２発現腫瘍を有する対象における腫瘍退縮を誘導するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  40. Ｔｒｏｐ−２に特異的に結合する抗体―薬剤コンジュゲートであって、ここで該コンジュゲートが抗体−ＬＬＱＧＡ（配列番号７９）−（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）−０１０１であり、ここで該抗体が、ＶＨ領域として（ｉ）配列ＳＹＧＶＨ（配列番号３０）、ＧＧＳＩＳＳＹ（配列番号３６）、またはＧＧＳＩＳＳＹＧＶＨ（配列番号３７）を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＶＩＷＴＳＧＶＴＤＹＮＳＡＬＭＧ（配列番号３８）またはＷＴＳＧＶ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＤＧＤＹＤＲＹＴＭＤＹ（配列番号３５）を含むＶＨ ＣＤＲ３を含み、かつＶＬ領域として（ｉ）配列ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨ（配列番号５４）を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号５５）を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列ＱＨＳＲＥＬＰＹＴ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む抗体であり、該コンジュゲートが、前記抗体の２２２位のリシンからアルギニンへのアミノ酸置換を含み、さらに該抗体の重鎖のＣ末端におけるアミノ酸リシンが欠失している、抗体―薬剤コンジュゲート。
JP2015240754A 2011-11-11 2015-12-10 Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用 Expired - Fee Related JP6157575B2 (ja)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161559015P 2011-11-11 2011-11-11
US61/559,015 2011-11-11
US201261640641P 2012-04-30 2012-04-30
US61/640,641 2012-04-30
US201261717288P 2012-10-23 2012-10-23
US61/717,288 2012-10-23

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2014540611A Division JP5936702B2 (ja) 2011-11-11 2012-11-07 Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017049125A Division JP6475277B2 (ja) 2011-11-11 2017-03-14 Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2016104751A true JP2016104751A (ja) 2016-06-09
JP6157575B2 JP6157575B2 (ja) 2017-07-05

Family

ID=47216378

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2014540611A Expired - Fee Related JP5936702B2 (ja) 2011-11-11 2012-11-07 Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用
JP2015240754A Expired - Fee Related JP6157575B2 (ja) 2011-11-11 2015-12-10 Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用
JP2017049125A Expired - Fee Related JP6475277B2 (ja) 2011-11-11 2017-03-14 Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2014540611A Expired - Fee Related JP5936702B2 (ja) 2011-11-11 2012-11-07 Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017049125A Expired - Fee Related JP6475277B2 (ja) 2011-11-11 2017-03-14 Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用

Country Status (20)

Country Link
US (4) US8871908B2 (ja)
EP (1) EP2776470A2 (ja)
JP (3) JP5936702B2 (ja)
KR (1) KR20140091040A (ja)
CN (1) CN104053672A (ja)
AR (1) AR088693A1 (ja)
AU (1) AU2012335205A1 (ja)
BR (1) BR112014011331A2 (ja)
CA (2) CA2954166A1 (ja)
CO (1) CO7010785A2 (ja)
HK (1) HK1201851A1 (ja)
IL (1) IL232426A0 (ja)
MX (1) MX2014005728A (ja)
PH (1) PH12014500932A1 (ja)
RU (1) RU2014116406A (ja)
SA (1) SA112330988B1 (ja)
SG (1) SG11201401699WA (ja)
TW (1) TWI495644B (ja)
WO (1) WO2013068946A2 (ja)
ZA (1) ZA201403492B (ja)

Families Citing this family (159)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8435529B2 (en) 2002-06-14 2013-05-07 Immunomedics, Inc. Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy
CA2478047C (en) 2002-03-01 2014-01-21 Immunomedics, Inc. Rs7 antibodies
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
US9745380B2 (en) 2002-03-01 2017-08-29 Immunomedics, Inc. RS7 antibodies
CA2508831C (en) 2002-12-13 2012-05-01 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
CA2813411C (en) * 2010-11-05 2016-08-02 Rinat Neuroscience Corporation Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase
EP3252076B1 (en) 2011-01-14 2019-09-04 The Regents Of The University Of California Diagnostic use of antibodies against ror-1 protein
AR088693A1 (es) * 2011-11-11 2014-06-25 Rinat Neuroscience Corp Anticuerpos especificos para trop-2 y sus usos
EP2793947B1 (en) 2011-12-23 2021-02-03 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
US10132799B2 (en) 2012-07-13 2018-11-20 Innate Pharma Screening of conjugated antibodies
IL294622B2 (en) 2012-10-11 2023-10-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Antibody-drug conjugates and methods for their preparation
CA2890569C (en) 2012-11-05 2019-03-05 Pfizer Inc. Spliceostatin analogs
US10036010B2 (en) 2012-11-09 2018-07-31 Innate Pharma Recognition tags for TGase-mediated conjugation
US20240139324A1 (en) 2012-12-13 2024-05-02 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
AU2013360335B2 (en) 2012-12-13 2017-12-07 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US12310958B2 (en) 2012-12-13 2025-05-27 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
EP2968582B1 (en) 2013-03-15 2020-07-01 Innate Pharma Solid phase tgase-mediated conjugation of antibodies
BR112015030514A2 (pt) 2013-06-04 2017-08-29 Cytomx Therapeutics Inc Composições e métodos para conjugação de anticorpos ativáveis
EP3010547B1 (en) 2013-06-20 2021-04-21 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
CN105517577A (zh) * 2013-06-21 2016-04-20 先天制药公司 多肽的酶促偶联
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
WO2015015448A2 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Rinat Neuroscience Corp. Engineered polypeptide conjugates
DK3424955T3 (da) 2013-12-25 2025-06-16 Daiichi Sankyo Co Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af anti-trop2 antistof-lægemiddelkonjugat
AU2015209131B2 (en) 2014-01-24 2020-06-25 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Binding proteins and methods of use thereof
KR101871088B1 (ko) 2014-01-27 2018-06-25 화이자 인코포레이티드 이관능성 세포독성제
EP4212552B1 (en) 2014-01-31 2024-11-13 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-her2 antibody-drug conjugate
EP3107577B1 (en) 2014-02-21 2024-03-20 IBC Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to trop-2 expressing cells
US11602525B2 (en) * 2014-04-25 2023-03-14 Rinat Neuroscience Corp. Antibody-drug conjugates with high drug loading
HRP20210292T1 (hr) * 2014-04-30 2021-04-16 Pfizer Inc. Anti-ptk7 protutijelo-lijek konjugati
WO2015191883A1 (en) * 2014-06-12 2015-12-17 Dophen Biomedical Homogenous antibody drug conjugates via enzymatic methods
SI3185908T1 (sl) 2014-08-28 2020-08-31 Pfizer Inc. Linkerji za modulacijo stabilnosti, ki se uporabljajo s konjugati zdravil s protitelesi
JP2018500930A (ja) 2014-12-04 2018-01-18 アブルッツォ・セラノスティックス・エッセ・エッレ・エッレ ヒト化抗ｔｒｏｐ−２モノクローナル抗体及びその使用
BR112017018706B1 (pt) 2015-03-20 2023-01-24 Pfizer Inc Agentes citotóxicos bifuncionais contendo o farmacoforo cti, composição farmacêutica e uso dos mesmos
US9797907B2 (en) 2015-04-22 2017-10-24 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating Trop-2-positive cancer cells
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
AU2016286898B2 (en) 2015-06-29 2022-12-08 Daiichi Sankyo Company, Limited Method for selectively manufacturing antibody-drug conjugate
NZ739830A (en) 2015-07-12 2021-12-24 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Bridge linkers for conjugation of cell-binding molecules
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
WO2017019957A2 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Binding proteins and methods of use thereof
CN106554420A (zh) * 2015-09-30 2017-04-05 上海众合医药科技股份有限公司 Pcsk9抗体、其抗原结合片段及其医药用途
TWI726942B (zh) 2015-11-30 2021-05-11 美商輝瑞股份有限公司 位點專一性ｈｅｒ２抗體藥物共軛體
TWI703160B (zh) * 2015-11-30 2020-09-01 美商輝瑞股份有限公司 用於部位專一性接合之抗體和抗體片段
CN108601841A (zh) 2016-02-10 2018-09-28 免疫医疗公司 Abcg2抑制剂与sacituzumab govitecan(immu-132)的组合克服表达trop-2的癌中对sn-38的抗性
EP3419670A2 (en) 2016-02-26 2019-01-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimized transglutaminase site-specific antibody conjugation
KR102726248B1 (ko) 2016-07-07 2024-11-05 더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티 항체-애쥬번트 접합체
JP2018058822A (ja) 2016-08-03 2018-04-12 ファイザー・インク ヘテロアリールスルホンをベースとするコンジュゲーションハンドル、これらの調製のための方法、および抗体薬物コンジュゲートの合成におけるこれらの使用
WO2018036438A1 (zh) * 2016-08-23 2018-03-01 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一种抗体-药物偶联物及其制备方法和应用
CN116143678A (zh) 2016-11-14 2023-05-23 杭州多禧生物科技有限公司 偶联连接体，含有此连接体的细胞结合分子-药物偶联物及其制备和应用
JPWO2018110515A1 (ja) 2016-12-12 2019-10-24 第一三共株式会社 抗体−薬物コンジュゲートと免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせ
BR112019012847A2 (pt) 2017-01-17 2019-12-10 Daiichi Sankyo Co Ltd anticorpo ou fragmento funcional do anticorpo, polinucleotídeo, vetor de expressão, células hospedeiras, método para produção de um anticorpo de interesse ou de um fragmento funcional do anticorpo e para produção de um conjugado de anticorpo-fármaco, conjugado de anticorpo-fármaco, composição farmacêutica, fármaco antitumoral, e, método de tratamento de um tumor.
BR112019015069A2 (pt) 2017-01-24 2020-03-03 Pfizer Inc. Derivados de caliqueamicina e conjugados de anticorpo-fármaco dos mesmos
EP3600283A4 (en) 2017-03-27 2020-12-16 Immunomedics, Inc. TREATMENT OF TROP-2 EXPRESSIVE TRIPLE NEGATIVE BREAST CANCER WITH SACITUZUMAB GOVITECAN AND A RAD51 INHIBITOR
CA3058966A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Tollnine, Inc. Immunomodulating polynucleotides, antibody conjugates thereof, and methods of their use
IL270415B2 (en) 2017-05-12 2024-08-01 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for cell engineering and their uses in immuno-oncology
US11166985B2 (en) 2017-05-12 2021-11-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology
TW202542161A (zh) 2017-05-15 2025-11-01 日商第一三共股份有限公司 抗體－藥物結合物及其用途
EP3625253A4 (en) 2017-05-16 2021-03-24 Scalmibio, Inc. ACTIVABLE ANTIBODIES AND THEIR METHODS OF USE
CN107446050A (zh) * 2017-08-11 2017-12-08 百奥泰生物科技(广州)有限公司 Trop2阳性疾病治疗的化合物及方法
AU2018327171B2 (en) 2017-08-31 2023-03-09 Daiichi Sankyo Company, Limited Improved method for producing antibody-drug conjugate
JP7248578B2 (ja) 2017-08-31 2023-03-29 第一三共株式会社 抗体－薬物コンジュゲートの新規製造方法
WO2019215500A1 (en) 2018-05-11 2019-11-14 Crispr Therapeutics Ag Methods and compositions for treating cancer
HUE067382T2 (hu) 2018-05-18 2024-10-28 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-MUC1-exatecan antitest-hatóanyag konjugátum
AU2019304175A1 (en) * 2018-07-09 2021-03-04 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. Antibodies specific to trophoblast antigen 2 (TROP2)
EP3831853A4 (en) 2018-07-27 2022-06-01 Daiichi Sankyo Company, Limited ANTIBODY-DRUG CONJUGATE PROTEIN-RECOGNIZING DRUG UNIT
KR20250172902A (ko) 2018-07-31 2025-12-09 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항체-약물 콘주게이트 투여에 의한 전이성 뇌종양의 치료
EP3842546A4 (en) 2018-08-23 2022-06-29 Daiichi Sankyo Company, Limited Sensitivity marker for antibody-drug conjugate
CN113365663B (zh) 2018-08-30 2025-11-21 免疫生物公司 单链嵌合多肽和其用途
KR20250160211A (ko) 2018-08-30 2025-11-11 이뮤니티바이오, 인크. 다중-사슬 키메라 폴리펩타이드 및 이의 용도
WO2020047473A1 (en) 2018-08-30 2020-03-05 HCW Biologics, Inc. Single-chain and multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof
WO2020094670A1 (en) 2018-11-05 2020-05-14 Synaffix B.V. Antibody-conjugates for targeting of tumours expressing trop-2
CA3130794A1 (en) 2019-03-15 2020-09-24 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates targeting her2
US12458818B2 (en) 2019-03-19 2025-11-04 CSPC Megalith Biopharmaceutical Co., Ltd. Anti-trophoblast cell surface antigen 2 (TROP2) antibodies and antibody drug conjugates comprising same
US20220249558A1 (en) 2019-04-30 2022-08-11 Crispr Therapeutics Ag Allogeneic cell therapy of b cell malignancies using genetically engineered t cells targeting cd19
CN112243443B (zh) * 2019-05-10 2023-03-17 江苏豪森药业集团有限公司 抗trop-2抗体、其抗原结合片段及其医药用途
TW202108180A (zh) 2019-05-29 2021-03-01 日商第一三共股份有限公司 抗體-藥物結合物的調劑
AU2020294797B2 (en) 2019-06-21 2025-12-18 Immunitybio, Inc. Multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof
CN114040778A (zh) 2019-06-29 2022-02-11 杭州多禧生物科技有限公司 一种细胞结合分子-Tubulysin衍生物偶联物及其制备方法
WO2021027851A1 (zh) * 2019-08-12 2021-02-18 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种trop2抗体及其制备方法、其偶联物和应用
CN112646038B (zh) * 2019-10-11 2025-06-03 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗人Trop-2抗体及其应用
US20230101266A1 (en) * 2019-12-31 2023-03-30 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. Anti-trop2 antibodies, antibody-drug conjugates, and application of the same
CA3169243A1 (en) 2020-02-11 2021-08-19 HCW Biologics, Inc. Methods of activating regulatory t cells
AU2021219720B2 (en) 2020-02-11 2025-10-02 Immunitybio, Inc. Chromatography resin and uses thereof
JP2023513573A (ja) 2020-02-11 2023-03-31 エイチシーダブリュー バイオロジックス インコーポレイテッド 加齢性および炎症性疾患を治療する方法
CA3176095A1 (en) 2020-03-20 2021-09-23 Immunomedics, Inc. Biomarkers for sacituzumab govitecan therapy
CN113527496B (zh) * 2020-04-16 2022-03-04 上海洛启生物医药技术有限公司 抗Trop2纳米抗体及其应用
US12497462B2 (en) 2020-04-29 2025-12-16 Immunitybio, Inc. Anti-CD26 proteins and uses thereof
CA3176626A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 David Dornan Elastase-substrate, peptide linker immunoconjugates, and uses thereof
WO2021247604A1 (en) 2020-06-01 2021-12-09 HCW Biologics, Inc. Methods of treating aging-related disorders
US12024545B2 (en) 2020-06-01 2024-07-02 HCW Biologics, Inc. Methods of treating aging-related disorders
WO2021247003A1 (en) 2020-06-01 2021-12-09 HCW Biologics, Inc. Methods of treating aging-related disorders
WO2021247908A1 (en) * 2020-06-03 2021-12-09 Bionecure Therapeutics, Inc. Trophoblast cell-surface antigen-2 (trop-2) antibodies
BR112022025947A2 (pt) * 2020-06-22 2023-03-14 Baili Bio Chengdu Pharmaceutical Co Ltd Anticorpo anti-trop2, sequência de ácidos nucleicos, rna, vetor de expressão, hospedeiro, conjugado imune e usos do anticorpo
US20230263903A1 (en) 2020-08-13 2023-08-24 Bolt Biotherapeutics, Inc. Pyrazoloazepine immunoconjugates, and uses thereof
US20230374149A1 (en) * 2020-10-14 2023-11-23 Shanghai Hansoh Biomedical Co., Ltd. Anti-trop-2 antibody, antigen-binding fragment thereof or mutant thereof, and medical use thereof
CN112321715B (zh) * 2020-11-03 2022-05-10 博奥信生物技术（南京）有限公司 抗trop2纳米抗体及其制备方法和应用
IT202000031838A1 (it) * 2020-12-22 2022-06-22 Saverio Alberti Piattaforma per ottenere anticorpi monoclonali diretti contro antigeni processati tumore-specifici
CN114685669A (zh) * 2020-12-30 2022-07-01 和铂医药(苏州)有限公司 结合trop2的抗体及其用途
JP2024511088A (ja) 2021-03-26 2024-03-12 ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド ２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン免疫複合体、及びその使用
IL306114A (en) 2021-03-26 2023-11-01 Bolt Biotherapeutics Inc 2-amino-4-carboxamide-benzazepine immunoconjugates and uses thereof
EP4349371A4 (en) 2021-06-02 2025-06-25 Bio-Thera Solutions, Ltd. DRUG CONJUGATE AND USE THEREOF
CA3222752A1 (en) 2021-06-11 2022-12-15 Gilead Sciences, Inc. Combination mcl-1 inhibitors with anti-body drug conjugates
EP4351564A1 (en) 2021-06-11 2024-04-17 Gilead Sciences, Inc. Combination mcl-1 inhibitors with anti-cancer agents
US12227574B2 (en) 2021-06-17 2025-02-18 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-CD3 constructs and uses thereof
CN115536747B (zh) * 2021-06-30 2024-08-27 益科思特(北京)医药科技发展有限公司 一种结合trop2的抗体及靶向trop2和cd3的双特异性抗体及其制备方法与应用
CN115558026A (zh) * 2021-07-02 2023-01-03 和迈生物科技有限公司 抗trop2单域抗体及其应用
WO2023046003A1 (zh) * 2021-09-23 2023-03-30 上海翰森生物医药科技有限公司 抗体药物偶联物及其制备方法和医药用途
CN118541392A (zh) * 2021-09-28 2024-08-23 准星生物医药有限公司 多种形式的分子复合物
JP2024539252A (ja) 2021-10-28 2024-10-28 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ピリジジン－３（２ｈ）－オン誘導体
WO2023076599A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bolt Biotherapeutics, Inc. Tlr agonist immunoconjugates with cysteine-mutant antibodies, and uses thereof
CA3235986A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Gilead Science, Inc. Cd73 compounds
WO2022078524A2 (en) 2021-11-03 2022-04-21 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Specific conjugation of an antibody
IL312728A (en) 2021-11-30 2024-07-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Protease-cleavable masked antibodies
CN120795159A (zh) * 2021-12-02 2025-10-17 浙江博锐生物制药有限公司 抗Trop-2抗体及其用途
US20250034275A1 (en) * 2021-12-07 2025-01-30 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Anti-trop-2 antibody or antigen-binding fragment thereof
EP4452414A2 (en) 2021-12-22 2024-10-30 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
EP4667056A1 (en) 2021-12-22 2025-12-24 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
EP4477674A1 (en) 2022-02-09 2024-12-18 Daiichi Sankyo Company, Limited Environmentally responsive masked antibody and use thereof
EP4479042A1 (en) 2022-02-18 2024-12-25 Massachusetts Institute Of Technology Cancer treatment by combined inhibition of polo-like kinase and microtubule polymerization
EP4486368A1 (en) 2022-03-02 2025-01-08 ImmunityBio, Inc. Method of treating pancreatic cancer
LT4245756T (lt) 2022-03-17 2024-11-25 Gilead Sciences, Inc. Ikaros cinko pirštų šeimos skaidymo medžiagos ir jų panaudojimas
JP2025510700A (ja) 2022-03-23 2025-04-15 シンアフィックス ビー．ブイ． Ｔｒｏｐ－２を発現する腫瘍を標的化するための抗体コンジュゲート
CA3256048A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Arcus Biosciences, Inc. POLYTHERAPY FOR THE TREATMENT OF CANCERS EXPRESSING A TUMOR ANTIGEN
AU2023252914A1 (en) 2022-04-13 2024-10-17 Arcus Biosciences, Inc. Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers
US20230374036A1 (en) 2022-04-21 2023-11-23 Gilead Sciences, Inc. Kras g12d modulating compounds
WO2024002042A1 (zh) 2022-06-27 2024-01-04 百奥泰生物制药股份有限公司 治疗实体瘤的方法
IL317958A (en) 2022-07-01 2025-02-01 Gilead Sciences Inc CD73 compounds
CN117430710B (zh) * 2022-07-21 2025-07-04 中国医学科学院医药生物技术研究所 一种针对Trop2的单克隆抗体及其应用
WO2024097812A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Gilead Sciences, Inc. Therapy for treating bladder cancer
EP4638436A1 (en) 2022-12-22 2025-10-29 Gilead Sciences, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
JP2026502860A (ja) 2022-12-23 2026-01-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド セレブロン分解剤コンジュゲートおよびその使用
TW202434307A (zh) 2023-01-18 2024-09-01 大陸商泰勵生物科技（上海）有限公司 抗體偶聯藥物及其用途
JP2026506037A (ja) 2023-02-14 2026-02-20 ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド アザベンズアゼピンイムノコンジュゲート及びその使用
WO2024186626A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aza-bicyclic sting agonist immunoconjugates, and uses thereof
EP4695260A1 (en) 2023-04-11 2026-02-18 Gilead Sciences, Inc. Kras modulating compounds
KR20250175331A (ko) 2023-04-21 2025-12-16 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Prmt5 억제제 및 이의 용도
AU2024261810A1 (en) 2023-04-24 2025-11-13 Merck Sharp & Dohme Llc Trop2 binders and conjugates thereof
AU2024306338A1 (en) 2023-06-30 2026-01-08 Gilead Sciences, Inc. Kras modulating compounds
AU2024289598A1 (en) * 2023-07-05 2026-01-22 Agency For Science, Technology And Research Anti-trop2 antibodies
AU2024292473A1 (en) 2023-07-19 2026-01-29 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with trop-2 targeting adc
AU2024300557A1 (en) 2023-07-26 2026-02-05 Gilead Sciences, Inc. Parp7 inhibitors
AU2024297978A1 (en) 2023-07-26 2026-02-05 Gilead Sciences, Inc. Parp7 inhibitors
WO2025054530A1 (en) 2023-09-08 2025-03-13 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine-containing polycyclic derivatives as kras g12d modulating compounds
US20250101042A1 (en) 2023-09-08 2025-03-27 Gilead Sciences, Inc. Kras g12d modulating compounds
US20250154172A1 (en) 2023-11-03 2025-05-15 Gilead Sciences, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
WO2025111445A1 (en) * 2023-11-21 2025-05-30 Convergent Therapeutics, Inc. Trop-2 radiopharmaceutical conjugate and uses thereof
WO2025137640A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 Gilead Sciences, Inc. Azaspiro wrn inhibitors
WO2025245003A1 (en) 2024-05-21 2025-11-27 Gilead Sciences, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
WO2025250825A1 (en) * 2024-05-30 2025-12-04 Sutro Biopharma, Inc. Anti-trop2 antibodies, compositions comprising anti-trop2 antibodies and methods of making and using anti-trop2 antibodies
WO2026019374A1 (en) 2024-07-19 2026-01-22 Hummingbird Bioscience Pte. Ltd. Trop2-binding molecules
WO2026039365A1 (en) 2024-08-12 2026-02-19 Gilead Sciences, Inc. Kras modulating compounds
US20260049118A1 (en) 2024-08-19 2026-02-19 HCW Biologics, Inc. Single-chain chimeric polypeptides and uses thereof
WO2026043906A1 (en) 2024-08-19 2026-02-26 HCW Biologics, Inc. Multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof
WO2026055185A1 (en) 2024-09-04 2026-03-12 Bolt Biotherapeutics, Inc. Sting agonist immunoconjugates and uses thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003527561A (ja) * 1999-01-22 2003-09-16 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 蛋白の部位特異的標識化方法およびそのための使用
JP2009527230A (ja) * 2006-02-24 2009-07-30 アリアス リサーチ、インコーポレイテッド Ｔｒｏｐ−２の表面発現を証明する細胞の細胞傷害性媒介
JP2010528056A (ja) * 2007-05-30 2010-08-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー がん細胞の細胞殺作用を媒介するヒト化抗ｔｒｏｐ−２抗体とキメラ抗ｔｒｏｐ−２抗体
JP2014534233A (ja) * 2011-11-11 2014-12-18 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用

Family Cites Families (95)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US4754065A (en) 1984-12-18 1988-06-28 Cetus Corporation Precursor to nucleic acid probe
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4777127A (en) 1985-09-30 1988-10-11 Labsystems Oy Human retrovirus-related products and methods of diagnosing and treating conditions associated with said retrovirus
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
GB8702816D0 (en) 1987-02-07 1987-03-11 Al Sumidaie A M K Obtaining retrovirus-containing fraction
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
US5422120A (en) 1988-05-30 1995-06-06 Depotech Corporation Heterovesicular liposomes
AP129A (en) 1988-06-03 1991-04-17 Smithkline Biologicals S A Expression of retrovirus gag protein eukaryotic cells
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
WO1990007936A1 (en) 1989-01-23 1990-07-26 Chiron Corporation Recombinant therapies for infection and hyperproliferative disorders
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US6673776B1 (en) 1989-03-21 2004-01-06 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate, mammal, fish, bird or human
ATE240401T1 (de) 1989-03-21 2003-05-15 Vical Inc Expression von exogenen polynukleotidsequenzen in wirbeltieren
ES2096590T3 (es) 1989-06-29 1997-03-16 Medarex Inc Reactivos biespecificos para la terapia del sida.
EP0487587A1 (en) 1989-08-18 1992-06-03 Chiron Corporation Recombinant retroviruses delivering vector constructs to target cells
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
NZ237464A (en) 1990-03-21 1995-02-24 Depotech Corp Liposomes with at least two separate chambers encapsulating two separate biologically active substances
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5278299A (en) 1991-03-18 1994-01-11 Scripps Clinic And Research Foundation Method and composition for synthesizing sialylated glycosyl compounds
JPH06507398A (ja) 1991-05-14 1994-08-25 リプリジェン　コーポレーション Ｈｉｖ感染治療のための異種複合抗体
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
AU663725B2 (en) 1991-08-20 1995-10-19 United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, The Adenovirus mediated transfer of genes to the gastrointestinal tract
CA2078539C (en) 1991-09-18 2005-08-02 Kenya Shitara Process for producing humanized chimera antibody
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
ATE181571T1 (de) 1991-09-23 1999-07-15 Medical Res Council Methoden zur herstellung humanisierter antikörper
WO1993010218A1 (en) 1991-11-14 1993-05-27 The United States Government As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Vectors including foreign genes and negative selective markers
AU3144193A (en) 1991-11-21 1993-06-15 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Controlling degradation of glycoprotein oligosaccharides by extracellular glycosisases
GB9125623D0 (en) 1991-12-02 1992-01-29 Dynal As Cell modification
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
FR2688514A1 (fr) 1992-03-16 1993-09-17 Centre Nat Rech Scient Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant.
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
JPH07507689A (ja) 1992-06-08 1995-08-31 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 特定組織のターゲティング方法及び組成物
JPH09507741A (ja) 1992-06-10 1997-08-12 アメリカ合衆国 ヒト血清による不活性化に耐性のあるベクター粒子
GB2269175A (en) 1992-07-31 1994-02-02 Imperial College Retroviral vectors
DE69308573T2 (de) 1992-08-17 1997-08-07 Genentech Inc Bispezifische immunoadhesine
US5837821A (en) 1992-11-04 1998-11-17 City Of Hope Antibody construct
US6210671B1 (en) 1992-12-01 2001-04-03 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with L-selectin
JPH08503855A (ja) 1992-12-03 1996-04-30 ジェンザイム・コーポレイション 嚢胞性線維症に対する遺伝子治療
US5981568A (en) 1993-01-28 1999-11-09 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
ATE227979T1 (de) 1993-04-22 2002-12-15 Skyepharma Inc Multivesikuläre liposomen mit verkapseltem cyclodextrin und pharmakologisch wirksamen verbindungen sowie verfahren zu deren verwendung
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
ES2249761T3 (es) 1993-06-24 2006-04-01 Advec Inc. Vectores de adenovirus para terapia genica.
US6015686A (en) 1993-09-15 2000-01-18 Chiron Viagene, Inc. Eukaryotic layered vector initiation systems
EP0694070B1 (en) 1993-09-15 2002-04-10 Chiron Corporation Recombinant alphavirus vectors
SK283703B6 (sk) 1993-10-25 2003-12-02 Canji, Inc. Rekombinantný adenovírusový vektor a jeho použitie
DK0729351T3 (da) 1993-11-16 2000-10-16 Skyepharma Inc Vesikler med reguleret afgivelse af aktivstoffer
US6436908B1 (en) 1995-05-30 2002-08-20 Duke University Use of exogenous β-adrenergic receptor and β-adrenergic receptor kinase gene constructs to enhance myocardial function
JP4303315B2 (ja) 1994-05-09 2009-07-29 オックスフォード バイオメディカ（ユーケー）リミテッド 非交差性レトロウイルスベクター
AU4594996A (en) 1994-11-30 1996-06-19 Chiron Viagene, Inc. Recombinant alphavirus vectors
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
JP2001501801A (ja) 1995-10-19 2001-02-13 ブリストル−マイヤーズ スクイッブ カンパニー モノクローナル抗体ｂｒ１１０およびその使用
DE69739286D1 (de) 1996-05-06 2009-04-16 Oxford Biomedica Ltd Rekombinationsunfähige retrovirale vektoren
US6653104B2 (en) 1996-10-17 2003-11-25 Immunomedics, Inc. Immunotoxins, comprising an internalizing antibody, directed against malignant and normal cells
US5850854A (en) 1997-10-02 1998-12-22 Carroll; Norman Lee Pipe closure
US6376471B1 (en) 1997-10-10 2002-04-23 Johns Hopkins University Gene delivery compositions and methods
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US20020142374A1 (en) 1998-08-17 2002-10-03 Michael Gallo Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CA2364484A1 (en) 1999-03-09 2000-09-14 University Of Southern California Method of promoting myocyte proliferation and myocardial tissue repair
US6849425B1 (en) 1999-10-14 2005-02-01 Ixsys, Inc. Methods of optimizing antibody variable region binding affinity
AU2002220265A1 (en) * 2000-11-03 2002-05-15 University Of Vermont And State Agricultural College Compositions for inhibiting grb7
CA2478047C (en) 2002-03-01 2014-01-21 Immunomedics, Inc. Rs7 antibodies
US9745380B2 (en) 2002-03-01 2017-08-29 Immunomedics, Inc. RS7 antibodies
CN102746399B (zh) 2002-12-24 2016-03-02 里纳特神经系统学公司 抗ngf抗体及其使用方法
US20080025977A1 (en) 2003-04-14 2008-01-31 Arius Research, Inc. Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD59
CA2604238C (en) 2005-04-15 2015-07-07 Neogenix Oncology, Inc. Recombinant monoclonal antibodies and corresponding antigens for colon and pancreatic cancers
US20080213267A1 (en) 2006-02-24 2008-09-04 Arius Research, Inc. Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of TROP-2
WO2008101957A1 (en) * 2007-02-22 2008-08-28 Novo Nordisk Health Care Ag Modulating enzymatic processes by addition of diolcontaining substances
CA2797981C (en) 2010-05-14 2019-04-23 Rinat Neuroscience Corporation Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
WO2011155579A1 (ja) 2010-06-10 2011-12-15 北海道公立大学法人札幌医科大学 抗Ｔｒｏｐ－２抗体
CA2813411C (en) 2010-11-05 2016-08-02 Rinat Neuroscience Corporation Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase
CN104185477B (zh) 2011-11-17 2017-05-24 辉瑞公司 细胞毒性肽及其抗体‑药物缀合物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003527561A (ja) * 1999-01-22 2003-09-16 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 蛋白の部位特異的標識化方法およびそのための使用
JP2009527230A (ja) * 2006-02-24 2009-07-30 アリアス リサーチ、インコーポレイテッド Ｔｒｏｐ−２の表面発現を証明する細胞の細胞傷害性媒介
JP2010528056A (ja) * 2007-05-30 2010-08-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー がん細胞の細胞殺作用を媒介するヒト化抗ｔｒｏｐ−２抗体とキメラ抗ｔｒｏｐ−２抗体
JP2014534233A (ja) * 2011-11-11 2014-12-18 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AMERICAN JOURNAL OF OBSTETRICS & GYNECOLOGY, vol. 205, JPN6015005083, 13 July 2011 (2011-07-13), pages 1 - 7, ISSN: 0003414755 *
BIOCONJUGATE CHEMISTRY, vol. Vo.19, No.1, JPN5014001220, 2008, pages 271 - 278, ISSN: 0003414758 *
CLINICAL CANCER RESEARCH, vol. 17, no. 10, JPN6015005085, 3 March 2011 (2011-03-03), pages 3157 - 3169, ISSN: 0003414756 *
METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, vol. 283, JPN5014001221, 2004, pages 109 - 123, ISSN: 0003414759 *
胆と膵, vol. 32, no. 2, JPN6015005087, 15 February 2011 (2011-02-15), pages 129 - 133, ISSN: 0003414757 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP6475277B2 (ja) 2019-02-27
US9399074B2 (en) 2016-07-26
JP2017141249A (ja) 2017-08-17
JP2014534233A (ja) 2014-12-18
US20130122020A1 (en) 2013-05-16
US8871908B2 (en) 2014-10-28
CO7010785A2 (es) 2014-07-31
JP6157575B2 (ja) 2017-07-05
US20140357844A1 (en) 2014-12-04
SA112330988B1 (ar) 2015-07-22
ZA201403492B (en) 2017-04-26
AR088693A1 (es) 2014-06-25
SG11201401699WA (en) 2014-09-26
CA2854720A1 (en) 2013-05-16
BR112014011331A2 (pt) 2017-04-25
WO2013068946A2 (en) 2013-05-16
US11091544B2 (en) 2021-08-17
AU2012335205A1 (en) 2014-05-29
PH12014500932A1 (en) 2014-06-09
MX2014005728A (es) 2014-05-30
TWI495644B (zh) 2015-08-11
KR20140091040A (ko) 2014-07-18
EP2776470A2 (en) 2014-09-17
IL232426A0 (en) 2014-06-30
CA2954166A1 (en) 2013-05-16
CA2854720C (en) 2018-12-18
CN104053672A (zh) 2014-09-17
US10100114B2 (en) 2018-10-16
WO2013068946A3 (en) 2013-07-25
JP5936702B2 (ja) 2016-06-22
US20190002559A1 (en) 2019-01-03
RU2014116406A (ru) 2015-12-20
TW201333036A (zh) 2013-08-16
HK1201851A1 (en) 2015-09-11
US20160257746A1 (en) 2016-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6475277B2 (ja) Ｔｒｏｐ−２に対して特異的な抗体およびこれらの使用
US10927178B2 (en) Anti-CXCR4 antibodies and antibody-drug conjugates
US11279764B2 (en) Antibodies specific for epidermal growth factor receptor variant III and their uses
US20180094075A1 (en) Anti-ptk7 antibody-drug conjugates
AU2014298040A9 (en) Anti-CXCR4 antibodies and antibody-drug conjugates
HK40000515B (en) Mono and bispecific antibodies for epidermal growth factor receptor variant iii and cd3 and their uses

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20161011

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20161222

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20170309

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20170314

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20170605

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20170606

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6157575

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees