CN113631577A - 抗滋养细胞表面抗原2(trop2)的抗体及包含其的抗体-药物偶联物 - Google Patents

抗滋养细胞表面抗原2(trop2)的抗体及包含其的抗体-药物偶联物 Download PDF

Info

Publication number
CN113631577A
CN113631577A CN202080022854.3A CN202080022854A CN113631577A CN 113631577 A CN113631577 A CN 113631577A CN 202080022854 A CN202080022854 A CN 202080022854A CN 113631577 A CN113631577 A CN 113631577A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
amino acid
antibody
acid sequence
sequence shown
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080022854.3A
Other languages
English (en)
Inventor
善玉喜
冯立新
R·J·布劳德
丽莎·艾伦
杨汝斌
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jushi Biopharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Jushi Biopharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jushi Biopharmaceutical Co ltd filed Critical Jushi Biopharmaceutical Co ltd
Publication of CN113631577A publication Critical patent/CN113631577A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6859—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from liver or pancreas cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6863—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from stomach or intestines cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)

Abstract

本发明提供了抗滋养细胞表面抗原2(TROP2)抗体及其片段。还提供了编码抗TROP2抗体的分离核酸分子、包括此类核酸的载体和包括此类载体或核酸的宿主细胞。提供了抗TROP2抗体的制备方法。还提供了包括抗‑TROP2抗体和活性部分(例如，治疗性部分，如毒素)的抗体药物偶联物(ADC)以及制备抗‑TROP2ADC的方法。还提供了相关的药物组合物和使用此类药物组合物治疗与TROP2异常表达相关的病症(例如，癌症)的方法。

Description

抗滋养细胞表面抗原2(TROP2)的抗体及包含其的抗体-药物 偶联物
相关专利的交叉引用
本申请要求于2019年3月19日提交的美国临时申请62/820,831的优先权，其内容整体通过引用并入本文。
在ASCII文本文件中提交序列表
以下提交的关于ASCII文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：720692000340SEQLIST.TXT，记录日期：2020年3月18日，大小：106KB)。
背景技术
滋养细胞表面抗原2(TROP2)是一种36kDa的跨膜糖蛋白，主要在上皮细胞中表达，并首先在人滋养细胞中被鉴定。TROP2有几个结合伴侣，包括Claudin 1、Claudin 7、细胞周期蛋白D1、蛋白激酶C(PKC)、PIP2和胰岛素样生长因子1(IGF-1)(Cubas et al.(2009)Biochimica et Biophysica Acta.1796:309–314；Vidmar et al.(2013)Protein Exp andPur.91:69–76；and Huang et al.(2005)Clin Cancer Res.11:4357–4364).By bindingto these targets,Trop2 affects tight junctions at the epithelial barrier(Shvartsur et al.(2015)Genes Cancer.6:84–105)increases tumor proliferation(Guerra et al.(2008)Cancer Res.68:8113–8121)and Raf and NF-kappa activation(Cubas et al.(2009)Biochimica et Biophysica Acta.1796:309–314；Shvartsur etal.(2015)Genes Cancer.6:84–105)and suppresses IGF-1R signaling(Lin et al.(2012)EMBO Mol Med.4:472–485)。
成年体细胞组织显示很少或没有Trop2表达(Cubas et al.(2009)Biochimica etBiophysica Acta.1796:309–314；Zhang et al.(1997)Science.276:1268–1272)。相比之下，TROP2在各种癌症中过表达(Tsujikawa et al.(1999)Nat Genet.21:420–423；Fong etal.(2008)Mod path.21:186–191；Muhlmann et al.(2009)J Clin Path.62:152–158；andWu et al.(2013)Head&Neck.35:1373–1378)，其表达与侵袭性肿瘤行为(Wang(2011)MolCancer Res.9:1686–1695)、癌症进展和不良预后(Wang et al.(2008)Mol Cancer Ther7:280-285)相关。因此，尚需一种针对表达TROP2的癌细胞的抗体疗法。本发明满足了这种需要和其他需求。
本文引用的所有专利和科学文献的公开内容均通过引用明确地整体并入本文。
发明简述
本发明提供了一种抗滋养细胞表面抗原2(TROP2)的抗体或其抗原结合片段，其异性地结合TROP2。在根据(或应用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体特异性地结合表达于细胞表面的TROP2。
在根据(或应用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞为癌细胞，并且其中所述癌细胞为乳腺癌细胞，宫颈癌细胞，结肠癌细胞，结直肠癌细胞，子宫内膜癌(EEC)细胞，食道癌细胞，胃部的癌细胞，胶质瘤细胞，肺癌细胞，肝胆管癌细胞，口腔鳞状细胞癌细胞，小型肺腺癌细胞，卵巢癌细胞，胰腺癌细胞，肾癌细胞，前列腺癌细胞，结外NK/T细胞淋巴瘤细胞、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌细胞，甲状腺癌细胞，膀胱癌细胞或子宫癌细胞。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包含：(i)包含GX1X2X3TX4YX5X6X7(SEQ ID NO:32)的CDR-H1，其中X1为Y或F；X2为T或S；X3为F或L；X4为D或R；X5为S或G；X6为I、M或V；X7为H或N；(ii)包含WX1GX2IX3X4X5X6GX7X8X9YX10X11X12F(SEQ ID NO:33)的CDR-H2，其中X1为I、L或M，X2为V或L，X3为S或W，X4为S或T，X5为Y、F或G，X6为Y或无氨基酸，X7为D或N，X8为A或T，X9为T、S、N或D，X10为N或T，X11为Q或A，X12为K或A；或包含X1X2X3X4IX5X6X7X8GX9X10X11YX12X13X14FX15X16(SEQ ID NO:103)的CDR-H2，其中X1为W或无氨基酸，X2为L、M、I或无氨基酸，X3为G或无氨基酸，X4为V或L，X5为S或W，X6为S或T，X7为Y、F或G，X8为Y或无氨基酸，X9为D或N，X10为A或T，X11为T、S、N或D，X12为N或T，X13为Q或A，X14为K或A，X15为K、I或无氨基酸，X16为G、S或无氨基酸；(iii)包含AX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10Y(SEQ ID NO:34)的CDR-H3，其中X1为L或R，X2为L、Y、R或E，X3为G或D，X4为D、R或无氨基酸，X5为A、G、N或Y，X6为Y或V，X7为N、D或G，X8为Y、Q、S或E，X9为F或M，X10为D或A；(iv)包含ESVDSYGNX1FX2H(SEQ ID NO:35)的CDR-L1，其中X1为N或S，X2为M或I；或包含X1X2X3ESVDSYGNX4FX5H(SEQ ID NO:104)的CDR-L1，其中X1为R或无氨基酸，X2为A、V或无氨基酸，X3为S或无氨基酸，X4为N或S，X5为M或I；(v)包含X1LX2YRASNLES(SEQ ID NO:36)的CDR-L2，其中X1为L或R，X2为I或V；或包含X1X2X3X4RASNLES(SEQ ID NO:105)的CDR-L2，其中X1为L、R或无氨基酸，X2为L或无氨基酸，X3为I、V或无氨基酸，X4为Y或无氨基酸；(vi)包含QQSX1EDPX2T(SEQ ID NO:37)的CDR-L3，其中X1为N或Y，X2为P、R或Y。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含SEQ ID NO:1-4中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:5-9、39、87-91、95和96-101中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:14-16和92-94中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17、18、38和102中所示任一氨基酸序列或其包含至多约3个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含SEQ ID NO:1-4中所示任一氨基酸序列的CDR-H1；ii)包含SEQID NO:5-9、39、87-91、95和96-101中所示任一氨基酸序列的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:14-16和92-94中所示任一氨基酸序列的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17、18、38和102中所示任一氨基酸序列的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列的CDR-L3。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:5、87或96中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:10所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:14或92所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:19所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:6、88或97中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:11所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:15或93所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:20所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:7、89或98中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:12所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:16或94所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:18或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:21所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:8、90或99中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:12所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:16或94所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:18或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:21所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含SEQ ID NO:4所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:9、91或100中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:13示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:16或94所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:21所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:39、95或101中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:10所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:14或92所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:19所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:39、95或101中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:10所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:14或92所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:38或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:19所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，i)包含如SEQ ID NO1:1所示序列，SEQ ID NO:5、87或96所示序列，和如SEQ ID NO:10所示序列的重链可变域(VH)；以及包含如SEQ ID NO:14或92，如SEQ ID NO:17或102所示序列，和如SEQ ID NO:19所示序列的轻链可变域(VL)；ii)包含如SEQ ID NO:2所示序列，SEQ ID NO:6、88或97所示序列，和如SEQ ID NO:11所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:15或93所示序列，如SEQ ID NO:17或102所示序列，和如SEQ ID NO:20所示序列的VL；iii)包含如SEQ ID NO:3所示序列，如SEQ ID NO:7、89或98所示序列，和如SEQ ID NO:12所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:16或94所示序列，如SEQ ID NO:18或102所示序列，和如SEQ ID NO:21所示序列的VL；iv)包含如SEQ ID NO:3所示序列，如SEQ ID NO:8、90或99所示序列，和如SEQ ID NO:12所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:16或94所示序列，如SEQ ID NO:18或102所示序列，和如SEQID NO:21所示序列的VL；v)包含如SEQ ID NO:4所示序列，如SEQ ID NO:9、91或100所示序列，和如SEQ ID NO:13所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:16或94所示序列，如SEQ IDNO:17或102所述序列，和如SEQ ID NO:21所示序列的VL；vi)包含如SEQ ID NO:1所示序列，如SEQ ID NO:39、95或101所示序列，和如SEQ ID NO:10所示序列的VH；以及包含如SEQ IDNO:14或92所示序列，如SEQ ID NO:17或102所示序列，和如SEQ ID NO:19所示序列的VL；vi)包含如SEQ ID NO:1所示序列，如SEQ ID NO:39、95或101所示序列，和如SEQ ID NO:10所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:14或92所示序列，如SEQ ID NO:38或102所示序列，和如SEQ ID NO:19所示序列的VL。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含选自如SEQ ID NO:22-26和40-45中所示任一序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH和ii)包含选自SEQ ID NO:27-31和46-51中所示任一序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含与SEQ ID NO:22-26和40-45中所示任一序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列的VH，和ii)包含与SEQ ID NO:27-31和46-51中所示任一序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列的VL。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含如SEQ ID NO:22-26和40-45中所示任一氨基酸序列的VH，和ii)包含如SEQ ID NO:27-31和46-51中所示任一氨基酸序列的VL。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列的VL。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列的VL。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的VL。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的VL。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列的VL。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的VL。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段包括：i)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的VL；ii)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ IDNO:47所示的氨基酸序列的VL；iii)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；iv)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；v)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL；vi)包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的VL；vii)包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VL；viii)包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；ix)包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；x)包含如SEQ IDNO:41所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL；xi)包含如SEQID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的VL；xii)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VL；xiii)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；xiv)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；xv)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL；xvi)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ IDNO:56所示的氨基酸序列的VL；xvii)包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VL；xviii)包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；xix)包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；xx)包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL；xxi)包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的VL；xxii)包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VL；xxiii)包含如SEQID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；xxiv)包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；xxv)包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL。
本发明还提供了一种抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其与如本文公开的抗TROP2抗体或其抗原结合片段竞争结合TROP2。本发明还提供一种抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其与如本文公开的抗TROP2抗体或其抗原结合片段特异性结合相同的TROP2表位。
在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体包括Fc结构域，其中所述抗体是全长抗体。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述Fc结构域为人IgG Fc结构域。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述人IgG Fc结构域为IgGl、IgG2、IgG3或IgG4 Fc结构域。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述人IgG Fc结构域为IgG1 Fc结构域。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述人IgGl Fc结构域包含如SEQ ID NO:64或65所示的氨基酸序列。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗-TROP2抗体为嵌合的、人源的或人源化的。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗原结合片段选自以下组：Fab、Fab'、F(ab)'2、Fab'-SH、单链Fv(scFv)、Fv片段和线性抗体。
本发明提供了一种编码如本文公开的分离的抗TROP2抗体或其抗原结合片段的核酸。本发明还提供一种包括根据(或适用于)本文任何实施方案的核酸的载体。本发明还提供一种包含根据(或适用于)本文任何实施方案的核酸或根据(或适用于)本文任何实施方案的载体的宿主细胞。本发明还提供一种产生抗TROP2抗体或其抗原结合片段的方法，其包括：a)在有效表达抗TROP2抗体或其抗原结合片段的条件下培养根据(或适用于)本文任何实施方案的宿主细胞；和b)回收所述宿主细胞表达的抗TROP2抗体或其抗原结合片段。
本发明提供了一种抗体-药物偶联物，其包含与偶联物部分特异性偶联的如(或适用于)本文任何实施方案所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述偶联物部分包括选自下组的活性部分：改善抗TROP2抗体或其抗原结合片段的药代动力学特性的部分、治疗性部分和诊断部分，或标记物。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述活性部分为包括毒素的治疗性部分。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述毒素选自以下构成的组：澳瑞他汀、白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链(modeccin A chain)、α-八叠球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、苦瓜抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、白树毒素、迈托毒素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素、单端孢霉烯族化合物(tricothecenes)、半胱氨酸结模体抑制(ICK)肽和芋螺毒素。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述活性部分为标记物，并且其中所述标记物选自以下组：放射性同位素、荧光染料和酶。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段和所述偶联物部分通过接头偶联。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述接头是可降解的接头。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述接头是不可降解的接头。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段通过抗体上内源性受体谷氨酰胺残基偶联到所述偶联物部分。
本发明提供了一种药物组合物，其包含如(或适用于)本文任何技术方案所述的抗体-药物偶联物和药学上可接受的载体。本发明还提供了一种治疗个体癌症的方法，包括向所述个体施用有效量的如(或适用于)本文任何技术方案所述的抗体-药物偶联物，或如(或适用于)本文任何技术方案所述的药物组合物。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述癌症选自实体瘤，乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述个体进一步被施用选自下组的治疗剂：抗肿瘤剂、化学治疗剂、生长抑制剂和细胞毒剂。
本发明提供了一种检测个体源样品中TROP2蛋白的方法，包括将如(或适用于)本文任何技术方案所述的抗TROP抗体或其抗原结合片段或如(或适用于)本文任何技术方案所述的抗体-药物偶联物与所述样品接触并检测与TROP2蛋白结合的所述抗TROP2抗体。在根据(或适用于)本文任何实施方案的一些实施方案中，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段用于免疫组化分析(IHC)或ELISA分析。
附图说明
本专利或申请文件包含至少一幅彩色附图。专利局可在请求和支付必要费用后，提供本专利或专利申请出版物的带有彩色附图的副本。
图1A是流式细胞术(FACS)图像，显示人IgG没有被表达TROP2的SKBR3细胞内化。
图1B显示了进行流式细胞术实验的结果，该实验用于验证抗TROP2抗体1B3被表达TROP2的SKBR3细胞内化。
图1C显示了进行流式细胞术实验的结果，该实验用于验证抗TROP2抗体15A10被表达TROP2的SKBR3细胞内化。
图1D显示了进行流式细胞术实验的结果，该实验用于验证抗TROP2抗体15D9被表达TROP2的SKBR3细胞内化。
图1E显示了进行流式细胞术实验的结果，该实验用于验证抗TROP2抗体17B6被表达TROP2的SKBR3细胞内化。
图1F显示了进行流式细胞术实验的结果，该实验用于验证抗TROP2抗体17D1被表达TROP2的SKBR3细胞内化。
图2和3显示了为评估DP002-HC1LC5-ADC和DP002-HC4LC5-ADC抑制异种移植人肿瘤MDA-MB-468荷瘤小鼠的肿瘤生长的功效而进行的实验的结果。图2显示了使用DP002-HC1LC5-ADC、DP002-HC4LC5-ADC、空白载体对照、抗体对照或ADC对照治疗期间，相对于时间的平均肿瘤体积。图3显示了使用DP002-HC1LC5-ADC、DP002-HC4LC5-ADC、空白载体对照、抗体对照或ADC对照治疗期间，相对于时间的肿瘤生长抑制百分比。
图4显示了在时治疗开始后不同时间点，治疗组1-7中小鼠平均体重的变化。
图5A显示了使用DP002-HC4LC5-ADC以不同剂量和/或不同给药方案、空白载体对照或抗体对照治疗期间，相对于时间的所有异种移植小鼠的平均肿瘤体积。
图5B显示了使用DP002-HC4LC5-ADC以不同剂量和/或不同给药方案、空白载体对照或抗体对照治疗期间，除第5组中的异常动物之外，相对于时间的所有异种移植小鼠的平均肿瘤体积。
发明详述
本公开提供了抗滋养细胞表面抗原2(TROP2)抗体。还提供了免疫偶联物、编码本文所述的新型抗TROP2抗体的核酸和组合物(例如药物组合物)。本公开还提供了使用新型抗TROP2抗体检测样品(例如体内或离体样品)中TROP2的方法、包含此类抗体的组合物在治疗癌症中的应用以及此类抗体在制备治疗癌症的药物中的应用。
定义
在详细描述所公开的实施方案之前，应当理解，本公开不限于特定的组合物或生物系统，其理所当然可以变化。还应理解，本文中使用的术语仅用于描述特定实施例，并不起到限制性作用。
如本申请文件和所附权利要求书中所用，除非内容另有明确规定，否则单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括所指对象的复数形式。因此，例如，关于“一个分子”，任选地包括两个或更多个这样的分子的组合，等等。
如本文所用，术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的各个值的通常误差范围。本文有关“大约”的值或参数的使用，包括(并描述)涉及该值或参数本身的实施例。
应当理解，本公开的各方面和各实施方案包括“包括各方面和实施方案”、“由各方面和实施方案组成”和“基本上由各方面和实施方案组成”。
术语“滋养细胞表面抗原2”或“TROP2”(也称为肿瘤相关钙离子信号转导子2(TACSTD12)、EGP1、GA7331/GA733-1、胶滴状角膜营养不良(GDLD)、TTD2、GP50和M1S1)优选指人TROP2，特别是指包含以下氨基酸序列的蛋白质或所述氨基酸序列的变体：
Figure BDA0003271223300000111
术语“TROP2”还指任何翻译后修饰的变体和构型变体。
如本文所用，术语“抗体”可指完整(全长)抗体；抗体片段(包括但不限于Fab、F(ab')2、Fab'-SH、Fv、双抗体、scFv、scFv-Fc、单域抗体、单重链抗体和单轻链抗体)，只要它们表现出所需的生物活性(例如表位结合活性)；单克隆抗体；多克隆抗体；单特异性抗体；多特异性抗体(例如，双特异性抗体)；和抗体样蛋白，包括但不限于例如融合蛋白、半胱氨酸工程抗体、共价修饰的抗体和抗体偶联物(例如抗体-药物偶联物或偶联至可检测标记的抗体)。
“分离的”抗体可以指已经从其自然环境的组分例如宿主细胞或生物体中分离和/或回收的抗体。在一些实施方案中，将抗体纯化至所需的质量纯度(例如，至少95％)；和/或通过SDS-PAGE使用例如银染色、考马斯染色等纯化至均一。在一些实施方案中，在一个或多个纯化步骤之后获得分离的抗体。
本领域已知，“天然”抗体通常是指包括两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)的异四聚体复合物。除了链内二硫键之外，两条重链通过不同数量的二硫键相连接，每条轻链通过一个二硫键连接到一条重链。重链包括一个可变域(VH)，后跟(N端到C端)三个或四个恒定域。轻链包括可变域(VL)，后跟恒定域(CL)。通常，哺乳动物轻链根据氨基酸序列分为κ和λ这两类。
“恒定域”可以指抗体或片段的更保守的部分，例如，在可变域之外的区域。该术语可包括CL结构域以及重链恒定结构域CH1、CH2、CH3以及可选地CH4。
重链的恒定结构域可分为以下5种主要类型之一：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。这些主要分类下又存在多种亚型。不同类型免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的，例如Abbas et al.,Cellular and Mol.Immunology,4th ed.(W.B.Saunders,Co.,2000)中所述。
如本文所用，术语“抗体可变域”是指抗体的轻链和重链部分序列，包括互补决定区(CDR，例如CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3)和框架区(FR)。
术语“可变”是指以下事实：抗体之间可变域的子序列在序列上显著不同，并且这对于特定抗体对其抗原的结合特异性至关重要。可变性集中在VH和VL结构域中的三个“高变区”(HVR)或“互补决定区”(CDR)中。(术语“HVR”和“CDR”在本文中可互换使用。)可变域中相对保守的部分称为框架区(FR)，其中散布有CDR。天然重链和轻链的可变域均包含由三个形成环状(loop)的CDR连接的四个FR区(参见Kabat et al.,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Edition,National Institute of Health,Bethesda,Md.(1991))。
术语“高变区(HVR)”或“互补决定区(CDR)”可以指VH和VL结构域的亚区，其特点是高度序列可变性和/或形成了被界定的环状。其中包括VH结构域中的三个CDR(H1、H2和H3)和VL结构域中的三个CDR(L1、L2和L3)。H3被认为是赋予抗体精细结合特异性的关键，L3和H3具有最高的多样性。参见Johnson and Wu,in Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo,ed.,Human Press,Totowa,N.J.,2003。
许多CDR/HVR规则是已知的。Kabat互补决定区(CDR)基于序列可变性并且是最常用的(Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5thEd.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。Chothia基于结构环的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbMHVR属于Kabat HVR和Chothia结构环的折衷，并在Oxford Molecular的AbM抗体建模软件中使用。contact HVR基于对可用复杂晶体结构的分析。这些HVR/CDR定义的残基分别如下所述。“框架”或“FR”残基是除HVR/CDR残基之外的那些可变域残基。
Figure BDA0003271223300000121
Figure BDA0003271223300000131
“扩展的”HVR也是已知的：Kabat编号下，VL的24-36或24-34位(L1)、46-56或50-56位(L2)和89-97或89-96位(L3)，和VH的26-35位(H1)、50-65或49-65位(H2)和93-102、94-102或95-102位(H3)。
“根据Kabat编号”可以指使用如上的由Kabat等制定的编译抗体重链可变域或轻链可变域的编号系统。实际的线性氨基酸序列可以包含更少或更多的氨基酸，对应于可变域中FR或HVR的缩短或插入。可以通过将抗体序列的同源区域与“标准”Kabat编号序列进行比对来确定给定抗体对应的Kabat编号下残基。通常，Kabat编号用于编译可变域中的残基(大约为轻链的第1-107位残基和重链的第1-113位残基)，而EU编号系统或索引(例如，EU索引类似Kabat编号，根据EU IgG1编号)通常用于编译重链恒定区中的残基。
“全长”或“完整”抗体通常包括具有Fc区的重链，例如，与抗体片段相反。具有单个抗原结合位点的抗原结合“Fab”片段可以通过木瓜蛋白酶消化从残留的Fc片段中释放出来。F(ab’)2片段包括由胃蛋白酶处理抗体产生的两个抗原结合位点。相反地，抗体片段将包括一个或多个抗体可变区。
“Fv”片段含有完整的抗原结合位点。例如在抗体或Fab片段中，单链Fv(scFv)可以包括通过肽接头连接的VH和VL结构域，使得VH和VL结构域结合，从而HVR可形成抗原结合位点。参见Pluckthün,in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,(Springer-Verlag,New York,1994),pp.269-315。在一些实施方案中，scFv与抗体Fc结构域(例如，scFv-Fc)融合。六个HVR通常包含一个抗原结合位点，但具有三个HVR的单个可变域仍然能够结合抗原，尽管其亲和力较低。参见Hamers-Casterman et al.,Nature 363:446-448(1993)；Sheriff et al.,NatureStruct.Biol.3:733-736(1996)。单域抗体(例如骆驼抗体)通常包括用于抗原结合的单个单体可变域。单重链(VHH)和单轻链抗体也是已知的。Fab'片段通常比Fab片段在C端包含更多的残基。Fab’-SH包括带有游离硫醇的半胱氨酸残基。抗体片段的各种化学偶联是本领域已知的。
“双抗体”包括具有两个抗原结合位点的抗体片段。这些结构包括由接头连接的VH和VL结构域，接头通常太短而不会促进同一链中的结构域配对。双抗体可以是二价的或双特异性的。三抗体和四抗体，或其他数量的VH/VL结构域均是已知的。见Hudson et al.,Nat.Med.9:129-134(2003)。
如本文所用，“单克隆”抗体是指从基本上同质的抗体群中获得的抗体，例如，基本上相同但允许有较小水平的背景突变和/或修饰。“单克隆”表示抗体基本同质的特性，这不需要关联任何特定方法来生产抗体。在一些实施方案中，通过其HVR、VH和/或VL序列和/或结合特性来选择单克隆抗体，例如选自克隆库(例如重组、杂交瘤或噬菌体衍生的)。单克隆抗体可以被改造为包括一个或多个突变，例如，影响抗体的结合亲和力或其他特性、产生人源化或嵌合抗体、改善抗体的生产和/或同质性、改造多特异性抗体，由此产生的抗体仍然被认为是单克隆的。单克隆抗体群体可以与多克隆抗体区分开来，因为群体中的各个单克隆抗体识别相同的抗原位点。生产单克隆抗体的多种技术是已知的；参见，例如，杂交瘤方法(例如Kohler and Milstein,Nature,256:495-97(1975)；Hongo et al.,Hybridoma,14(3):253-260(1995),Harlow et al.,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold SpringHarbor Laboratory Press,2nd ed.1988)；Hammerling et al.,in:MonoclonalAntibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA法(参见，例如，美国专利第4,816,567号)、噬菌体展示技术(Clackson et al.,Nature,352:624-628(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu et al.,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee et al.,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；以及Lee et al.,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004))以及在具有部分或全部人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列基因的动物中产生人或类人抗体的技术(WO 1998/24893；WO1996/34096；WO 1996/33735；WO1991/10741；Jakobovits et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits et al.,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann et al.,Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利第5,545,807号、第5,545,806号、第5,569,825号、第5,625,126号、第5,633,425号；以及5,661,016；Marks etal.,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg et al.,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild et al.,Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996)；以及Lonberg and Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。
“嵌合”抗体可以指具有来自特定亚型、类别或生物体的重链和/或轻链的一部分和来自另一亚型、类别或生物体的另一部分的抗体。在一些实施方案中，可变区来自一个来源或生物体，而恒定区来自另一个。
“人源化抗体”可以指主要具有人序列和最少量非人(例如，小鼠或鸡)序列的抗体。在一些实施方案中，人源化抗体具有来自移植到人受体抗体框架区(FR)上的非人(例如小鼠或鸡)生物体源抗体的一个或多个HVR序列(携带目标结合特异性)。在一些实施方案中，将非人残基进一步移植到人源框架上(不存在于来源或受体抗体中)，例如，以改善抗体特性。一般而言，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个可变域，通常为两个，其中所有或基本上所有的高可变环对应于非人免疫球蛋白的那些环，以及所有或基本上所有的FR为人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选地还将包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。参见Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature 332:323-329(1988)；and Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。
“人”抗体可以指具有与人产生的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列和/或使用如本文公开的任何用于制备人抗体的技术制备的抗体。可以使用本领域已知的各种技术产生人抗体，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.,222:581(1991))；如Cole等人(Cole et al.,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)；Boerner etal.,J.Immunol.,147(1):86-95(1991))所述的方法制备人单克隆抗体；以及通过向转基因动物注射抗原，该转基因动物已经被修饰以产生这类抗体以响应抗原反应，同时其内源基因座已经被敲除，例如免疫的异种基因移植小鼠(参见，例如，关于XENOMOUSETM技术的美国专利第6,075,181号和6,150,584号)或具有人免疫球蛋白序列的鸡(参见例如WO2012162422、WO2011019844和WO2013059159)。
如本文所用，术语“细胞毒剂”可指抑制细胞增殖或诱导细胞死亡的任何试剂。细胞毒剂包括但不限于化疗剂、放射性同位素、生长抑制剂和毒素，例如小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体。示例性的细胞毒剂包括但不限于代谢抑制剂、抗微管剂、含铂化合物、烷化剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢剂、拓扑异构酶I抑制剂、信号传导途径抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、激素和激素类似物、促凋亡剂、LDH-A抑制剂、细胞周期抑制剂、HDAC抑制剂和抗生素。
如本文所用，“标签”可包括作为检测剂的任何分子，例如，本公开的标记抗体与大分子或细胞之间的结合。示例性的标签包括但不限于荧光(如化合物或蛋白质)、放射性或酶性分子，以及亲和纯化标签。
术语“检测”旨在包含确定是否存在某种物质或量化某种物质(如TROP2)的数量。因此，该术语指的是使用本发明的材料、组合物和方法进行定性和定量测定。一般来说，用于检测的特定技术属于本发明实施的非关键特征。
例如，本发明所述的“检测”可包括：观察TROP2基因产物或TROP2多肽是否存在；TROP2多肽水平的变化或其与目标结合的数量；生物功能/活性的变化等。在一些实施方案中，“检测”可包括检测野生型TROP2的水平(例如多肽水平)。与对照组相比，检测可包括量化10％至90％之间的任何数值的变化(增加或减少)，或30％至60％之间的任何数值，或超过100％的变化。检测可以包括量化2倍到10倍(包括10倍)之间的任何数值的变化，或者更多，例如100倍。
如本文所用的，一种抗体可以说是“结合”了一种抗原，其亲和力足以使该抗体在体外和体内发挥作用。
如本文所用，术语或“结合亲和力”是指两个分子之间结合作用的强度。一般来说，结合亲和力是指一个分子与其结合对象之间的非共价相互作用的总强度，如高亲和力的SIRP-αD1变体和CD47。除非另有说明，结合亲和力是指内在的结合亲和力，它反映了结合对的结合对象之间1:1的相互作用。两个分子之间的结合亲和力通常由解离常数(Kd)或结合常数(Ka)描述。当两个分子之间的结合亲和力低时，一般结合缓慢，容易解离，并表现出较大的Kd。两个相互间有高亲和力的分子通常很容易结合，倾向于保持较长时间的结合，并表现出较小的Kd。在一些实施方案中，用已知的方法和技术确定两个相互作用的分子间的Kd，例如表面等离子体共振(SPR)。Kd可以被计算为koff/kon的比率
如本文所用，术语“Kd小于”是指相对于所述Kd值而言，数字上较小的Kd值和更强的结合亲和力。如本文所用，术语“Kd大于”是指相对于所述Kd值而言，数字上较大的Kd值和更弱的结合亲和力。
如本文所用，“治疗”可指分子、化合物、制剂、组合物等治疗性给药，以获得例如有益或期望的治疗结果，包括临床结果。就本发明的目的而言，有益的或期望的临床结果包括但不限于以下一项或多项：减轻疾病导致的一个或多个症状、减轻疾病的程度、稳定疾病(例如防止或推迟疾病的恶化)、防止或推迟疾病的扩散(例如转移)、防止或推迟疾病的复发、推迟或减缓疾病的发展、改善疾病状态、缓解疾病(部分或全部地)、减少治疗疾病所需的一种或多种其他药物的剂量、缓解病理症状或疾病状态、增加或改善生活质量、防止过度减肥、改善预后、实现疾病的缓解和治疗。“治疗”还包括减少癌症的病理后果(例如肿瘤体积)。本文提供的方法考虑了这些方面中的任何一个或多个治疗。
如本文所用，疾病的“延迟进展”可指减缓、延缓、推迟、推延疾病的发展，稳定或以其他方式阻止疾病的病理过程。在一些实施方案中，该术语可指足以有效包含预防的延迟，例如，在防止该疾病在个体上发展。在一些实施方案中，例如晚期癌症，延迟进展可包括延迟转移。本领域技术人员可以理解，延迟的确切长度可能取决于，例如具体的疾病、个人的状况等。
术语“再发生”、“复发”或“复发的”是指以TROP2表达异常或TROP2活性异常为特征的疾病或紊乱(例如肿瘤，如实体瘤，或癌症，如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，大肠癌，子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，胶质瘤、肺癌、肝胆管癌、口腔鳞状细胞癌、小尺寸肺腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、前列腺癌、结外NK/T细胞淋巴瘤细胞、淋巴瘤鼻型(ENKTL)、胃癌、甲状腺癌、膀胱癌或子宫癌)在经临床评估该疾病消失后的重现
术语“难治性”或“抗性”是指以TROP2表达异常或TROP2活性异常为特征的疾病或紊乱(例如肿瘤，如实体瘤，或癌症，如：乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，大肠癌，子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小尺寸肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌细胞，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌)对特定药物或药物组合的治疗没有反应。
如本文所用，术语“有效量”可以指本公开所述的抗体或含有本公开所述抗体的药物组合物的量，其足以达到治疗或延缓患有疾病的病人的预期治疗乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，大肠癌，子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小尺寸肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等。在一些实施方案中，治疗有效量将避免不良副作用，和/或这些副作用将被有益效果所抵消。有效量取决于被治疗的个体，例如年龄、体重、性别、疾病状态以及药剂产生所需反应的能力。有效量可以在一次或多次给药中施用。如在临床上，一种药物、化合物或药物组合物的有效量可以或不可以与另一种药物、化合物或药物组合物，如另一种治疗剂一起实现。因此，“有效量”也可以用于施用一种或多种额外的治疗剂的情况下，如果与一种或多种其他药剂一起使用，可预期或已经达到了理想的结果，则也可以认为单一药剂是以有效量施用的。
术语“治疗有效量”是指本文所述的抗TROP2抗体药物偶联物(“抗TROP2 ADC”，或简称“ADC”)或包含这种抗TROP2 ADC的组合物的量，它能有效地“治疗”哺乳动物(又称病人或对象)的疾病或紊乱。在癌症的情况下，本文公开的抗TROP2 ADC的治疗有效量是足以治疗例如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，大肠癌，子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小尺寸肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等。用本文公开的抗TROP2 ADC或组合物治疗可以减少癌细胞的数量、减少肿瘤的大小或重量、抑制(即在一定程度上减缓并优选停止)癌细胞浸润到外周器官、抑制(即在一定程度上减缓并优选停止)肿瘤转移、在一定程度上抑制肿瘤生长和/或在一定程度上缓解与所述癌症相关的一种或多种症状。就本文公开的抗TROP2 ADC或组合物可以防止现有癌细胞生长和/或杀灭其的程度而言，它可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。在一个实施方案中，治疗有效量是生长抑制量。在另一个实施方案中，治疗有效量是延长患者存活的量。在另一个实施方案中，治疗有效量是改善患者无进展存活的量。
如本文所用，术语“药物组合物”可指包括活性成分以及赋形剂或稀释剂(或赋形剂和稀释剂)并使活性成分能够通过适当的给药方法给药的药物或药品配方。在一些实施方案中，本文公开的药物组合物包括与本公开的一种或多种抗TROP2抗体或抗TROP2ADC兼容的药学可接受成分。在一些实施方案中，所述药物组合物为口服的片剂或胶囊形式，或为静脉注射或皮下注射的水溶液形式，例如通过注射。
本文所用的“药学上可接受的”或“药学上兼容的”是指不会在生物学上或其他方面不理想的材料，例如所述材料可被纳入给病人服用的药物组合物中，而不会造成任何明显的不理想生物效应或以有害的方式与包含该组合物的任何其他成分发生作用。药学上可接受的载体或赋形剂优选为满足毒理学和生产测试的要求标准和/或包含在美国食品和药物管理局编制的非活性成分指南中。
如本文所用，术语“对象”、“个体”和“患者”可互换使用以指代脊椎动物，例如哺乳动物。哺乳动物包括但不限于鼠类、猿猴、人类、农场动物、运动动物和宠物。
与本文鉴定的多肽和抗体序列相关的“氨基酸序列同一性的百分比”或“同源性”定义为候选序列中与被比较多肽中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比，在比对序列后考虑任何保守替换作为序列同一性的一部分。确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以通过本领域内的各种方式实现，例如，使用公开的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域的技术人员可以确定测量比对的适当参数，包括在被比较的序列全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，为了本文的目的，％的氨基酸序列同一性是用序列比较计算机程序ALIGN-2产生的。ALIGN-2序列比较计算机程序是由Genentech,Inc.编写的，其源代码已与用户文件一起提交给美国版权局(华盛顿特区，20559)，其于美国版权局的美国版权注册号为TXU510087。可从加利福尼亚州南旧金山的Genentech公司公开获得ALIGN-2程序。ALIGN-2程序应在UNIX操作系统上编译使用，较佳的系统版本是数字UNIX V4.0D。所有的序列比较参数都是由ALIGN-2程序设定的，无设定差异。
本文引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物，通过引用全部纳入本文。
概述
本公开内容基于对结合滋养层细胞表面抗原2(TROP2)的抗体的鉴定。本文提供的抗TROP2抗体可用于制备抗TROP2抗体-药物偶联物(抗TROP2 ADC，或简称“ADC”)。这种抗TROP2的ADC可以用于各种治疗方法。例如，抗TROP2 ADC可单独使用或与其他药剂组合用于治疗以TROP2异常表达或TROP2活性异常为特征的疾病或病症，包括但不限于实体瘤或癌症，例如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，大肠癌，子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小尺寸肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等。本文提供的抗体也可用于诊断方法，例如，通过例如向患者施用所述抗-TROP2抗体并检测与TROP2结合的抗-TROP2抗体(例如使用体内或离体方法)来检测患者或患者样品中的TROP2，或例如通过将来自患者的样品(例如离体样品)与所述抗-TROP2抗体接触并定性或定量检测与样品中的TROP2蛋白结合的抗-TROP2抗体。
抗滋养层细胞表面抗原2(TROP2)抗体
抗TROP2抗体是一种与TROP2有足够亲和力和特异性结合的抗体。例如，本文提供的抗TROP2抗体(或其生物活性片段)可作为治疗剂，用于靶向和干扰与TROP2非常规/异常表达和/或活性相关的疾病或病症。在一些情况下，所述抗TROP2抗体是嵌合单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体包含本文公开的所述抗体的至少一个CDR、重链可变域(VH)和/或轻链可变域(VL)。
在某些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括一个、两个、三个、四个、五个或六个互补性决定区(CDR)序列，所述序列选自：(i)包含GX1X2X3TX4YX5X6X7(SEQ ID NO:32)的CDR-H1，其中X1为Y或F；X2为T或S；X3为F或L；X4为D或R；X5为S或G；X6为I、M或V；X7为H或N；(ii)包含WX1GX2IX3X4X5X6GX7X8X9YX10X11X12F(SEQ ID NO:33)的CDR-H2，其中其中X1为I、L或M，X2为V或L，X3为S或W，X4为S或T，X5为Y、F或G，X6为Y或无氨基酸，X7为D或N，X8为A或T，X9为T、S、N或D，X10为N或T，X11为Q或A，X12为K或A；(iii)包含AX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10Y(SEQ ID NO:34)的CDR-H3，其中X1为L或R，X2为L、Y、R或E，X3为G或D，X4为D、R或无氨基酸，X5为A、G、N或Y，X6为Y或V，X7为N、D或G，X8为Y、Q、S或E，X9为F或M，X10为D或A；(iv)包含ESVDSYGNX1FX2H(SEQ ID NO:35)的CDR-L1，其中X1为N或S，X2为M或I；(v)包含X1LX2YRASNLES(SEQ ID NO:36)的CDR-L2，其中X1为L或R，X2为I或V；(vi)包含QQSX1EDPX2T(SEQ ID NO:37)的CDR-L3，其中X1为N或Y，X2为P、R或Y。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GX1X2X3TX4YX5X6X7(SEQ ID NO:32)的CDR-H1，其中X1为Y或F；X2为T或S；X3为F或L；X4为D或R；X5为S或G；X6为I、M或V；X7为H或N；(ii)包含WX1GX2IX3X4X5X6GX7X8X9YX10X11X12F(SEQ ID NO:33)的CDR-H2，其中其中X1为I、L或M，X2为V或L，X3为S或W，X4为S或T，X5为Y、F或G，X6为Y或无氨基酸，X7为D或N，X8为A或T，X9为T、S、N或D，X10为N或T，X11为Q或A，X12为K或A；(iii)包含AX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10Y(SEQ ID NO:34)的CDR-H3，其中X1为L或R，X2为L、Y、R或E，X3为G或D，X4为D、R或无氨基酸，X5为A、G、N或Y，X6为Y或V，X7为N、D或G，X8为Y、Q、S或E，X9为F或M，X10为D或A；(iv)包含ESVDSYGNX1FX2H(SEQ ID NO:35)的CDR-L1，其中X1为N或S，X2为M或I；(v)包含X1LX2YRASNLES(SEQ ID NO:36)的CDR-L2，其中X1为L或R，X2为I或V；(vi)包含QQSX1EDPX2T(SEQ ID NO:37)的CDR-L3，其中X1为N或Y，X2为P、R或Y。
在某些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括一个、两个、三个、四个、五个或六个互补性决定区(CDR)序列，所述序列选自：(i)包含GX1X2X3TX4YX5X6X7(SEQ ID NO:32)的CDR-H1，其中X1为Y或F；X2为T或S；X3为F或L；X4为D或R；X5为S或G；X6为I、M或V；X7为H或N；(ii)包含X1X2X3X4IX5X6X7X8GX9X10X11YX12X13X14FX15X16(SEQID NO:103)的CDR-H2，其中X1为W或无氨基酸，X2为L、M、I或无氨基酸，X3为G或无氨基酸，X4为V或L，X5为S或W，X6为S或T，X7为Y、F或G，X8为Y或无氨基酸，X9为D或N，X10为A或T，X11为T、S、N或D，X12为N或T，X13为Q或A，X14为K或A，X15为K、I或无氨基酸，X16为G、S或无氨基酸；(iii)包含AX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10Y(SEQ ID NO:34)的CDR-H3，其中X1为L或R，X2为L、Y、R或E，X3为G或D，X4为D、R或无氨基酸，X5为A、G、N或Y，X6为Y或V，X7为N、D或G，X8为Y、Q、S或E，X9为F或M，X10为D或A；(iv)包含X1X2X3ESVDSYGNX4FX5H(SEQ ID NO:104)的CDR-L1，其中X1为R或无氨基酸，X2为A、V或无氨基酸，X3为S或无氨基酸，X4为N或S，X5为M或I；(v)包含X1X2X3X4RASNLES(SEQ IDNO:105)的CDR-L2，其中X1为L、R或无氨基酸，X2为L或无氨基酸，X3为I、V或无氨基酸，X4为Y或无氨基酸；(vi)包含QQSX1EDPX2T(SEQ ID NO:37)的CDR-L3，其中X1为N或Y，X2为P、R或Y。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GX1X2X3TX4YX5X6X7(SEQ ID NO:32)的CDR-H1，其中X1为Y或F；X2为T或S；X3为F或L；X4为D或R；X5为S或G；X6为I、M或V；X7为H或N；(ii)包含X1X2X3X4IX5X6X7X8GX9X10X11YX12X13X14FX15X16(SEQID NO:103)的CDR-H2，其中X1为W或无氨基酸，X2为L、M、I或无氨基酸，X3为G或无氨基酸，X4为V或L，X5为S或W，X6为S或T，X7为Y、F或G，X8为Y或无氨基酸，X9为D或N，X10为A或T，X11为T、S、N或D，X12为N或T，X13为Q或A，X14为K或A，X15为K、I或无氨基酸，X16为G、S或无氨基酸；(iii)包含AX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10Y(SEQ ID NO:34)的CDR-H3，其中X1为L或R，X2为L、Y、R或E，X3为G或D，X4为D、R或无氨基酸，X5为A、G、N或Y，X6为Y或V，X7为N、D或G，X8为Y、Q、S或E，X9为F或M，X10为D或A；(iv)包含X1X2X3ESVDSYGNX4FX5H(SEQ ID NO:104)的CDR-L1，其中X1为R或无氨基酸，X2为A、V或无氨基酸，X3为S或无氨基酸，X4为N或S，X5为M或I；(v)包含X1X2X3X4RASNLES(SEQ IDNO:105)的CDR-L2，其中X1为L、R或无氨基酸，X2为L或无氨基酸，X3为I、V或无氨基酸，X4为Y或无氨基酸；(vi)包含QQSX1EDPX2T(SEQ ID NO:37)的CDR-L3，其中X1为N或Y，X2为P、R或Y。
在某些实施方案中，提供了一种抗-TROP2抗体(或其抗原结合片段)，其特异性结合抗-TROP2并与第二抗-TROP2抗体竞争结合抗-TROP2，其包括：(i)包含SEQ ID NOs:1-4中所示任一氨基酸序列的CDR-H1；(ii)包含SEQ ID NO:5-9、39、87-91、95和96-101中所示任一氨基酸序列的CDR-H2；(iii)包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列的CDR-H3；(iv)包含SEQ ID NO:14-16和92-94中所示任一氨基酸序列的CDR-L1；(v)包含SEQ ID NO:17、18、38和102中所示任一氨基酸序列的CDR-L2；(vi)包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施方案中，提供了一种抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)，其与第二抗TROP2抗体特异性结合相同的TROP2表位，其包含：(i)包含SEQ ID NOs:1-4中所示任一氨基酸序列的CDR-H1；(ii)包含SEQ ID NO:5-9、39、87-91、95和96-101中所示任一氨基酸序列的CDR-H2；(iii)包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列的CDR-H3；(iv)包含SEQ IDNO:14-16和92-94中所示任一氨基酸序列的CDR-L1；(v)包含SEQ ID NO:17、18、38和102中所示任一氨基酸序列的CDR-L2；(vi)包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施方案中，所述抗-TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括一个、两个、三个、四个、五个或六个互补性决定区(CDR)序列，所述序列选自：(i)包含SEQ ID NO:1-4中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H1；(ii)包含SEQ ID NO:5-9、39、87-91、95和96-101中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H2；(iii)包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H3；(iv)包含SEQ ID NO:14-16和92-94中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L1；(v)包含SEQ ID NO:17、18、38和102中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L2；和(vi)包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L3。
在某些实施方案中，所述抗-TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列的CDR-H3和/或包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施方案中，所述抗-TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括一个、两个、三个、四个、五个或六个互补性决定区(CDR)序列，所述序列选自：(i)包含SEQ ID NO:1-4中所示任一氨基酸序列的CDR-H1；(ii)包含SEQ ID NO:5-9、39、87-91、95和96-101中所示任一氨基酸序列的CDR-H2；(iii)包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列的CDR-H3；(iv)包含SEQ ID NO:14-16和92-94中所示任一氨基酸序列的CDR-L1；(v)包含SEQ ID NO:17、18、38和102中所示任一氨基酸序列的CDR-L2；和(vi)包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施方案中，所述抗-TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含SEQ IDNO:1-4中所示任一氨基酸序列的CDR-H1；(ii)包含SEQ ID NO:5-9、39、87-91、95和96-101中所示任一氨基酸序列的CDR-H2；(iii)包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列的CDR-H3；(iv)包含SEQ ID NO:14-16和92-94中所示任一氨基酸序列的CDR-L1；(v)包含SEQID NO:17、18、38和102中所示任一氨基酸序列的CDR-L2；和(vi)包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列的CDR-L3。
SEQ ID NOs:1-21、38-39和87-95所示的氨基酸序列见下表1：
表1
Figure BDA0003271223300000231
在一些实施方案中，所述抗-TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ IDNO:22-26和40-45中所示任一序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:27-31和46-51中所示任一序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VL。SEQ ID NO:22-31和40-51所示的氨基酸序列见下表2：
表2
Figure BDA0003271223300000232
Figure BDA0003271223300000241
在一些实施方案中，所述抗-TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括重链可变域(VH)的一个、两个或三个CDR和轻链可变域(VL)的一个、两个或三个CDR，所述重链可变域包含与SEQ ID NO:22-26和40-45中所示任一氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变域包含与SEQ ID NO:27-31和46-51中所示任一氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体是全长抗体，其包括包含SEQ ID NO:52-57中所示任一氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:58-63中所示任一氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:57所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:63所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:52并且所述轻链包含SEQ ID NO:58。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:52所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:59所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:52所示序列并且所述轻链包含SEQID NO:60所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:52所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:61所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:52所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:62所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:53所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:58所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:53所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:59所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:53所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:60所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:53所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:61所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:53所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:62所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:54所示序列并且所述轻链包含SEQID NO:58所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:54所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:59所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:54所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:60所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:54所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:61所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:54所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:62所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:55所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:58所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:55所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:59所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:55所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:60所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:55所示序列并且所述轻链包含SEQID NO:61所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:55所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:62所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:56所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:58所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:56所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:59所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:56所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:60所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:56所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:61所示序列。在一些实施方案中，所述重链包含SEQ ID NO:56所示序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:62所示序列。SEQ ID NO:52-63所述氨基酸序列见下表4：
表4
Figure BDA0003271223300000261
Figure BDA0003271223300000271
在某些实施方案中，提供了一种抗-TROP2抗体(或其抗原结合片段)，其特异性结合抗-TROP2并与第二抗-TROP2抗体竞争结合抗-TROP2，其包括：包括包含如SEQ ID NO:22-26和40-45中所示任一项的VH的重链和包含如SEQ ID NO:27-31和46-52中所示任一项的VL的轻链。
在某些实施方案中，提供了一种抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)，其与第二抗TROP2抗体特异性结合相同的TROP2表位，其包括：包含如SEQ ID NO:22-26和40-45中所示任一项的VH的重链和包含如SEQ ID NO:27-31和46-52中所示任一项的VL的轻链。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ ID NO:1)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-Hl；(ii)包含WIGVISTYYGDASYNQKF(SEQ ID NO:5)、WIGVISTYYGDASYNQKFKG(SEQ IDNO:87)或VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:96)，或SEQ ID NO:5、87和96中所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:14)或RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)，或SEQ IDNO:24或92所示序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)，或SEQ ID NO:17或102所示序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3和/或包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包含：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ IDNO:1)的CDR-Hl；(ii)包含WIGVISTYYGDASYNQKF(SEQ ID NO:5)、WIGVISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:87)或VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:96)的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:14)或RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:22所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:27所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:22所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:27所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:22所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:27所示的VL结构域。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GFSLTRYGVH(SEQ ID NO:2)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-Hl；(ii)包含WLGVIWSGGNTDYNAAF(SEQ ID NO:6)、WLGVIWSGGNTDYNAAFIS(SEQ IDNO:88)或VIWSGGNTDYNAAFIS(SEQ ID NO:97)，或SEQ ID NO:6、88和97中所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H2；(iii)包含AREDRYVGEFAY(SEQID NO:11)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNSFIH(SEQ ID NO:15)或RASESVDSYGNSFIH(SEQ ID NO:93)，或SEQ ID NO:15或93所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)，或SEQ ID NO:17或102所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L2；以及(vi)包含QQSNEDPRT(SEQ ID NO:20)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：包含AREDRYVGEFAY(SEQ ID NO:11)的CDR-H3和/或包含QQSNEDPRT(SEQ ID NO:20)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GFSLTRYGVH(SEQ IDNO:2)的CDR-Hl；(ii)包含WLGVIWSGGNTDYNAAF(SEQ ID NO:6)、WLGVIWSGGNTDYNAAFIS(SEQID NO:88)或VIWSGGNTDYNAAFIS(SEQ ID NO:97)的CDR-H2；(iii)包含AREDRYVGEFAY(SEQID NO:11)的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNSFIH(SEQ ID NO:15)或RASESVDSYGNSFIH(SEQ IDNO:93)的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSNEDPRT(SEQ ID NO:20)的CDR-L3。在某些实施方案中，抗-TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GFSLTRYGVH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(ii)包含VIWSGGNTDYNAAFIS(SEQ ID NO:97)的CDR-H2)(iii)包含AREDRYVGEFAY(SEQ ID NO:11)的CDR-H3；(iv)包含RASESVDSYGNSFIH(SEQ ID NO:93)的CDR-L1；(v)包含RASNLES(SEQ IDNO:102)的CDR-L2，和(vi)包含QQSNEDPRT(SEQ ID NO:20)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:23所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ IDNO:28所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ IDNO:23所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:28所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:23所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:28所示的VL结构域。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIH(SEQ ID NO:3)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-Hl；(ii)包含WIGVISSYYGDATYNQKF(SEQ ID NO:7)、WIGVISSYYGDATYNQKFKG(SEQ IDNO:89)或VISSYYGDATYNQKFKG(SEQ ID NO:98)的CDR-H2，或SEQ ID NO:7、89和98中所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体；(iii)包含ALLGAYNYFDY(SEQ ID NO:12)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:16)或RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:94)，或SEQ IDNO:16或94所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L1；(v)包含LLVYRASNLES(SEQ ID NO:18)或RASNLES(SEQ ID NO:102)，或SEQ ID NO:18或102所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L2；(vi)包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：包含ALLGAYNYFDY(SEQ ID NO:12)的CDR-H3和/或包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIH(SEQ IDNO:3)的CDR-Hl；(ii)包含WIGVISSYYGDATYNQKF(SEQ ID NO:7)、WIGVISSYYGDATYNQKFKG(SEQ ID NO:89)或VISSYYGDATYNQKFKG(SEQ ID NO:98)的CDR-H2；(iii)包含ALLGAYNYFDY(SEQ ID NO:12)的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:16)或RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:94)的CDR-L1；(v)包含LLVYRASNLES(SEQ ID NO:18)或RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIH(SEQ ID NO:3)的CDR-Hl；(ii)包含VISSYYGDATYNQKFKG(SEQ ID NO:98)的CDR-H2；(iii)包含ALLGAYNYFDY(SEQ IDNO:12)的CDR-H3；(iv)包含RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:94)的CDR-L1；(v)包含RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:24所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:29所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:24所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:29所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:24所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:29所示的VL结构域。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIH(SEQ ID NO:3)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-Hl；(ii)包含WIGLISTYYGDATYTQKF(SEQ ID NO:8)、WIGLISTYYGDATYTQKFKG(SEQ IDNO:90)或LISTYYGDATYTQKFKG(SEQ ID NO:99)，或SEQ ID NO:8、90和99中所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H2；(iii)包含ALLGAYNYFDY(SEQ ID NO:12)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:16)或RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:94)，或SEQ IDNO:16或94所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L1；(v)包含LLVYRASNLES(SEQ ID NO:18)或RASNLES(SEQ ID NO:102)，或SEQ ID NO:18或102所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L2；(vi)包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：包含ALLGAYNYFDY(SEQ ID NO:12)的CDR-H3和/或包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIH(SEQ IDNO:3)的CDR-Hl；(ii)包含WIGLISTYYGDATYTQKF(SEQ ID NO:8)、WIGLISTYYGDATYTQKFKG(SEQ ID NO:90)或LISTYYGDATYTQKFKG(SEQ ID NO:99)的CDR-H2；(iii)包含ALLGAYNYFDY(SEQ ID NO:12)的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:16)或RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:94)的CDR-L1；(v)包含LLVYRASNLES(SEQ ID NO:18)或RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIH(SEQ ID NO:3)的CDR-Hl；(ii)包含LISTYYGDATYTQKFKG(SEQ ID NO:99)的CDR-H2；(iii)包含ALLGAYNYFDY(SEQ IDNO:12)的CDR-H3；(iv)包含RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:94)的CDR-L1；(v)包含RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:25所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:30所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:25所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:30所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:25所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:30所示的VL结构域。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYGMN(SEQ ID NO:4)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-Hl；(ii)包含WIGVISTFYGDANYNQKF(SEQ ID NO:9)、WIGVISTFYGDANYNQKFKG(SEQ IDNO:91)或VISTFYGDANYNQKFKG(SEQ ID NO:100)，或SEQ ID NO:9、91和100中所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H2；(iii)包含ARRGNYDSMDY(SEQ ID NO:13)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:16)或RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:94)，或SEQ IDNO:16或94所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)，或SEQ ID NO:17或102所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L2；(vi)包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：包含ARRGNYDSMDY(SEQ ID NO:13)的CDR-H3和/或包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包含：(i)包含GYTFTDYGMN(SEQ IDNO:4)的CDR-Hl；(ii)包含WIGVISTFYGDANYNQKF(SEQ ID NO:9)、WIGVISTFYGDANYNQKFKG(SEQ ID NO:91)或VISTFYGDANYNQKFKG(SEQ ID NO:100)的CDR-H2；(iii)包含ARRGNYDSMDY(SEQ ID NO:13)的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:16)或RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:94)的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYGMN(SEQ ID NO:4)的CDR-Hl；(ii)包含VISTFYGDANYNQKFKG(SEQ ID NO:100)的CDR-H2；(iii)包含ARRGNYDSMDY(SEQ IDNO:13)的CDR-H3；(iv)包含RASESVDSYGNSFMH(SEQ ID NO:94)的CDR-L1；(v)包含RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPPT(SEQ ID NO:21)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:26所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:31所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:26所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:31所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:26所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:31所示的VL结构域。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ ID NO:1)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-Hl；(ii)包含WIGVISTYYGDASYNQKF(SEQ ID NO:5)、WIGVISTYYGDASYNQKFKG(SEQ IDNO:87)或VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:96)，或SEQ ID NO:5、87和96中所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:14)或RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)，或SEQ IDNO:14或92所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)，或SEQ ID NO:17或102所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3和/或包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ IDNO:1)的CDR-Hl；(ii)包含WIGVISTYYGDASYNQKF(SEQ ID NO:5)、WIGVISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:87)或VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:96)的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:14)或RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ ID NO:1)的CDR-Hl；(ii)包含VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:96)的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ IDNO:10)的CDR-H3；(iv)包含RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)的CDR-L1；(v)包含RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:45所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:51所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:45所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:51所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:45所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:51所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:57所示的重链和包含SEQ ID NO:63所示的轻链。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ ID NO:1)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-Hl；(ii)包含WMGVISTYYGDASYNQKF(SEQ ID NO:39)、WMGVISTYYGDASYNQKFKG(SEQ IDNO:95)或VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:101)，或SEQ ID NO:39、95和101中所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:14)或RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)，或SEQ IDNO:14或92所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)，或SEQ ID NO:17或102所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L2；(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3和/或包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ IDNO:1)的CDR-Hl；(ii)包含WMGVISTYYGDASYNQKF(SEQ ID NO:39)、WMGVISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:95)或VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:101)的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:14)或RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)的CDR-L1；(v)包含LLIYRASNLES(SEQ ID NO:17)或RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ IDNO:1)的CDR-Hl；(ii)包含VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:101)的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3；(iv)包含RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)的CDR-L1；(v)包含RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQID NO:40所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:46所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:40所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:46所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:40所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:46所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:52所示的重链和/或包含SEQ ID NO:58所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:40所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:48所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:40所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:48所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:40所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:48所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ IDNO:52所示的重链和/或包含SEQ ID NO:60所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:40所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:49所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:40所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:49所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:40所示的VH结构域和包含SEQID NO:49所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:52所示的重链和/或包含SEQ ID NO:61所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:40所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ IDNO:50所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ IDNO:40所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:50所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:40所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:50所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:52所示的重链和/或包含SEQ ID NO:62所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:41所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:46所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:46所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:46所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:53所示的重链和/或包含SEQ ID NO:58所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:41所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:48所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:48所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:48所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:53所示的重链和/或包含SEQ ID NO:60所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:41所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:49所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:49所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:49所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:53所示的重链和/或包含SEQ ID NO:61所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:41所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:50所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:50所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:50所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ IDNO:53所示的重链和/或包含SEQ ID NO:62所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:42所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:46所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:42所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:46所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:42所示的VH结构域和包含SEQID NO:46所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:54所示的重链和/或包含SEQ ID NO:58所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:42所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ IDNO:48所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ IDNO:42所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:48所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:42所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:48所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:54所示的重链和/或包含SEQ ID NO:60所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:42所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:49所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:42所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:49所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:42所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:49所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:54所示的重链和/或包含SEQ ID NO:61所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:42所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:50所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:42所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:50所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:42所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:50所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:54所示的重链和/或包含SEQ ID NO:62所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:43所述序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:46所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:43所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:46所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:43所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:46所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:55所示的重链和/或包含SEQ ID NO:58所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:43所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:48所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:43所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:48所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:43所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:48所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ IDNO:55所示的重链和/或包含SEQ ID NO:60所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:43所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:49所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:43所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:49所示序列的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:43所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:49所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:55所示的重链和/或包含SEQ ID NO:61所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:43所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:50所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:43所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:50所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:43所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:50所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:55所示的重链和/或包含SEQ ID NO:62所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:44所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:46所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:44所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:46所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQID NO:44所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:46所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:56所示的重链和/或包含SEQ IDNO:58所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:44所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:48所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:44所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ IDNO:48所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:44所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:48所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:56所示的重链和/或包含SEQ ID NO:60所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:44所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:49所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:44所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:49所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:44所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:49所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ IDNO:56所示的重链和/或包含SEQ ID NO:61所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:44所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:50所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:44所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:50所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:44所示的VH结构域和包含SEQID NO:50所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:56所示的重链和/或包含SEQ ID NO:62所示的轻链。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ ID NO:1)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-Hl；(ii)包含WMGVISTYYGDASYNQKF(SEQ ID NO:39)、WMGVISTYYGDASYNQKFKG(SEQ IDNO:95)或VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:101)，或SEQ ID NO:39、95和101中所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:14)或RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)，或SEQ IDNO:14或92所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L1；(v)包含RLIYRASNLES(SEQ ID NO:38)或RASNLES(SEQ ID NO:102)，或SEQ ID NO:38或102所示任一序列包含至多5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)或其包含至多约5个(例如约1、2、3、4或5个)氨基酸取代的变体的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括：包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3和/或包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包含：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ IDNO:1)的CDR-Hl；(ii)包含WMGVISTYYGDASYNQKF(SEQ ID NO:39)、WMGVISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:95)或VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:101)的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3；(iv)包含ESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:14)或RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)的CDR-L1；(v)包含RLIYRASNLES(SEQ ID NO:38)或RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包含：(i)包含GYTFTDYSIN(SEQ IDNO:1)的CDR-Hl；(ii)包含VISTYYGDASYNQKFKG(SEQ ID NO:101)的CDR-H2；(iii)包含ARYGDGYNQFDY(SEQ ID NO:10)的CDR-H3；(iv)包含RVSESVDSYGNNFMH(SEQ ID NO:92)的CDR-L1；(v)包含RASNLES(SEQ ID NO:102)的CDR-L2；以及(vi)包含QQSYEDPYT(SEQ ID NO:19)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQID NO:40所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:47所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:40所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:47所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:40所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:47所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:52所示的重链和/或包含SEQ ID NO:59所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:41所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:47所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:47所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:41所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:47所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ IDNO:53所示的重链和/或包含SEQ ID NO:59所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:42所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:47所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:42所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:47所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:42所示的VH结构域和包含SEQID NO:47所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:54所示的重链和/或包含SEQ ID NO:59所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:43所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ IDNO:47所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ IDNO:43所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:47所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:43所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:47所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:55所示的重链和/或包含SEQ ID NO:59所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含与SEQ ID NO:44所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VH结构域和/或包含与SEQ ID NO:47所示序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:44所示的VH结构域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:47所示的VL结构域的3个CDR。在一些实施方案中，所述VH结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR和/或所述VL结构域的3个CDR是根据Kabat、Chothia、AbM或Contact编号规则的CDR。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:44所示的VH结构域和包含SEQ ID NO:47所示的VL结构域。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)包括包含SEQ ID NO:56所示的重链和/或包含SEQ ID NO:59所示的轻链。
在一些实施方案中，提供了本文所述的抗TROP2抗体的氨基酸序列变体("抗TROP2抗体变体")。例如，可能需要提高抗TROP2抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性。抗TROP2抗体的氨基酸序列变体可以通过在编码抗体剂的核苷酸序列中引入适当的修饰或肽的合成来制备。此类修饰包括如抗体剂的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或取代。只要最终的构建体具有所需的特性，如抗原结合，就可以进行任何的删除、插入和取代的组合来实现最终的构建体。
在一些实施方案中，提供了具有一个或多个氨基酸取代的抗TROP2抗体变体，例如，前文讨论的抗TROP2抗体变体。取代性诱变的目标位点包括HVRs和FRs。可以将氨基酸取代引入目标抗体剂中，并筛选具有所需活性的产物，例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或更好的ADCC或CDC。
示例性的取代变体是亲和力成熟抗体剂，其可以方便地产生，例如，使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术。简而言之，一个或多个CDR残基被突变，变异的抗体分子被展示在噬菌体上，并按特定的生物活性(如结合亲和力)进行筛选。可以对HVRs进行改变(例如，替换)以例如改善抗体亲和力。这种改变可能发生在HVR的"热点"，即在体细胞成熟过程中经历高频突变的密码子所编码的残基(见，例如，Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或特异性决定残基(SDR)，测试所得变体VH或VL的结合亲和力。通过构建和重新筛选二级抗体文库来进行亲和力成熟是本领域已知的，例如Hoogenboom et al.inMethods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al.,ed.,Human Press,Totowa,NJ,(2001)记载的。
在亲和力成熟的一些实施方案中，通过各种方法(如易错PCR、链替换或寡核苷酸定向诱变)将多样性引入选定用于成熟的可变基因。由此创建了一个二级抗体库。虽后筛选所述文库以鉴定具有所需亲和力的任何抗体试剂变体。另一种引入多样性的方法涉及CDR导向的方法，其中几个HVR残基(例如，一次4-6个残基)被随机化。参与抗原结合的CDR残基可以被特别确定，例如使用丙氨酸扫描诱变或建模。尤其是CDR-H3和CDR-L3经常被作为多样性靶标。
在一些实施方案中，只要这种改变不会大大降低抗体剂结合抗原的能力，就可以在一个或多个CDR内可以发生替换、插入或缺失。例如，可以在HVRs中进行不会大幅降低结合亲和力的保守改变(例如本文提供的保守取代)。这种改变可能是在CDR"热点"或SDR之外。在上述提供了变体VH和VL序列的一些实施方案中，每个CDR要么未发生改变，要么包含不超过一个、两个、三个、四个或五个氨基酸的取代。
Cunningham and Wells(1989)Science,244:1081-1085描述了一种有用的方法，用于识别抗体剂中可以作为诱变目标的残基或区域，称为"丙氨酸扫描诱变"。在该方法中，一个残基或一组目标残基(如带电的残基，如arg、asp、his、lys和glu)被识别并被一个中性或带负电的氨基酸(如丙氨酸或多丙氨酸)取代，以确定所述抗体剂与抗原的相互作用是否受到影响。在对初始取代表现出功能敏感性的氨基酸位置，可以引入进一步取代。另外或额外地，可以确定抗原-抗体剂复合物的晶体结构，以确定抗体剂和抗原之间的接触点。此类接触残基和邻近残基可以作为取代的候选对象或删除对象。可以筛选变体以确定它们是否包含所需的特性。
氨基酸序列的插入包括在氨基末端和/或羧基末端融合长度从一个残基到含有一百个或更多残基的多肽，以及在序列内插入单个或多个氨基酸残基。末端插入的实例包括具有N末端甲硫氨酰残基的抗体剂。抗体剂分子的其他插入性变体包括将抗体剂的N末端或C末端与一种酶(如用于ADEPT)或一种多肽融合，从而延长抗体剂的血清半衰期。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体变体中的氨基酸取代是保守的氨基酸取代。在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体变体中的氨基酸取代为非保守的氨基酸取代。在某些实施方案中，所述氨基酸的取代不会大幅降低抗体与抗原结合的能力。例如，可以进行不大幅降低TROP2结合亲和力的保守改变(如本文提供的保守取代)。抗TROP2抗体与TROP2的结合亲和力可以用本领域已知的方法进行评测，包括但不限于免疫组化(IHC)检测(如ELISAs)和表面等离子体共振(SPR)。
表4的"保守取代"标题下展示了保守取代。表4在"示例性取代"的标题下提供了更多的实质性变化，并在下文提到氨基酸侧链类别时将进一步描述。氨基酸取代可以被引入到目标抗体中，并对产物进行筛选以获得所需的活性，例如，保留/改善的TROP2结合能力。
表4氨基酸取代
原始残基 示例性取代 优选取代
Ala(A) Val；Leu；Ile Val
Arg(R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn(N) Gln；His；Asp,Lys；Arg Gln
Asp(D) Glu；Asn Glu
Cys(C) Ser；Ala Ser
Gln(Q) Asn；Glu Asn
Glu(E) Asp；Gln Asp
Gly(G) Ala Ala
His(H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile(I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；Norleucine Leu
Leu(L) Norleucine；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys(K) Arg；Gln；Asn Arg
Met(M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe(F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro(P) Ala Ala
Ser(S) Thr Thr
Thr(T) Val；Ser Ser
Trp(W) Tyr；Phe Tyr
Tyr(Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val(V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；Norleucine Leu
非保守取代需要将上述类别中的一类中的一个(残基)换为另一个类(的残基)。一个示例性的取代变体是亲和力成熟的抗体，其可以方便地产生，例如，使用如本文所述的基于噬菌体展示的亲和力成熟技术。简而言之，一个或多个CDR残基被突变，变异的抗体分子被展示在噬菌体上，并按特定的生物活性(如结合亲和力)进行筛选。可以对CDRs进行改变(例如，替换)以例如改善抗体亲和力。这种改变可能发生在CDR的"热点"，即在体细胞成熟过程中经历高频突变的密码子所编码的残基(见，例如，Chowdhury,MethodsMol.Biol.207:179-196(2008))和/或SDR，测试所得变体VH或VL的结合亲和力。通过构建和重新筛选二级抗体文库来进行亲和力成熟是本领域已知的，例如Hoogenboom et al.inMethods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al.,ed.,Human Press,Totowa,NJ,(2001)中所记载的。
在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体与TROP2蛋白(或其片段)的至少一个等位基因变体产生交叉反应。在一些实施方案中，与自然产生的TROP2(或其片段)相比，该等位基因变体具有最多约30个(如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30中的任何一个)氨基酸取代(如保守取代)。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体与TROP2蛋白(或其片段)的至少一个等位基因变体产生交叉反应。
在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体(或抗体变体)结合(例如，交叉反应)来自至少两种不同物种的TROP2蛋白。在一些实施方案中，例如，所述抗TROP2抗体(或抗体变体)与人类TROP2蛋白(或其片段)和来自小鼠、大鼠或非人类灵长类动物(如犬科动物或恒河猴)的TROP2蛋白(或其片段)结合。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体可能对人的TROP2完全特异，并且可能不表现出种属或其他类型的非人种交叉反应性。
在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体剂特异性地识别表达在癌细胞(如实体瘤)细胞表面的TROP2。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体剂特异性地识别在肿瘤细胞表面或癌组织(例如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等)上表达的TROP2。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体剂特异性地识别一个或多个癌细胞系的细胞表面表达的TROP2，包括但不限于例如MDA-MB-468和HCC38。
在一些实施方案中，本文提供的TROP2抗体与表达TROP2的细胞(如癌细胞)的表面的结合，可诱导抗TROP2抗体被该细胞内化。
在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体和非目标蛋白之间结合的Kd大于抗TROP2抗体和TROP2之间结合的Kd。在一些实施方案中，所述非目标蛋白不是TROP2。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体与非目标蛋白结合的Kd可以比抗TROP2抗体与TROP2之间结合的Kd大至少约10倍，如约10-100倍、约100-1000倍、约103-104倍、约104-105倍、约105-106倍、约106-107倍、约107-108倍、约108-109倍、约109-1010倍、约1010-1011倍或约1011-1012倍。
与TROP2特异性结合的TROP2抗体可以是任何一种上文定义的各种抗体，但在某些实施方案中是人源的、人源化的或嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体是人源抗体。在一些实施方案中，所述抗TROP2是人源化抗体或包括人抗体恒定结构域(如人Fc结构域，如人IgG Fc结构域、如人IgG1、人IgG2、人IgG3或人IgG4 Fc结构域)。非人源抗TROP2抗体，以及包含非人源恒定结构域的抗TROP2抗体也属于本文预期之列。在一些实施方案中，所述非人源抗TROP2抗体包括本文所述抗TROP2抗体的CDR序列和非人类框架序列。非人源框架序列包括，在一些实施方案中，任何可用于在如本文所述一个或多个CDR序列之上建构合成的重链和/或轻链可变区的序列，包括，例如哺乳动物，例如小鼠、大鼠、兔、猪、牛(例如，母牛、公牛、水牛)、鹿、绵羊、山羊、鸡、猫、狗、雪貂、灵长类动物(例如，狨猴、猕猴)等。在一些实施方案中，所述非人类抗-TROP2抗体包括通过将如本文所述的一个或多个CDR序列移植到非人源框架序列(例如，小鼠或鸡框架序列)上而产生的抗-TROP2抗体。
在某些实施方案中，所述抗TROP2抗体包含人IgG的Fc结构域，例如人IgGl、人IgG2、人IgG3或人IgG4。在一些实施方案中，所述抗TROP2抗体包含人IgGl的Fc结构域，如SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:65。(见下表5)
表5
Figure BDA0003271223300000491
在某些实施方案中，所述Fc序列已被改变或以其他方式改变，使其缺乏抗体依赖性细胞毒性(ADCC)效应功能，这通常与其和Fc受体(FcRs)的结合有关。有许多改变或突变Fc序列的示例，可改变抗体的效应功能，包括但不限于本文他出所述的内容。例如，WO00/42072和Shields et al.J Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)中描述了和FcRs结合程度增强或减弱的抗体变体。这些出版物的内容在此特别纳入引用。抗体的形式可以是Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段，双抗体和线性抗体。另外，所述抗体可以是一个多特异性抗体，其与TROP2结合，但也与一个或多个其他靶标结合并抑制其功能。所述抗体可与治疗剂(如细胞毒剂、放射性同位素和化疗剂)连接，或与标签(如放射性同位素、荧光染料和酶)相连接以在患者样本中或在体内通过成像检测TROP2。其他修饰包括将毒素与本文提供的抗TROP2抗体结合。
编码抗TROP2抗体的核酸
本文还涉及编码本文所述的抗TROP2抗体的核酸分子。在一些实施方案中，提供了一种编码抗TROP2抗体的核酸(或一组核酸)，包括本文所述的任何一种抗TROP2抗体。在一些实施方案中，编码本文所述的抗TROP2抗体的核酸(或一组核酸)可进一步包括编码肽标签(如蛋白质纯化标签，如His-tag、HA标签)的核酸序列。在一些实施方案中，编码所述抗TROP2抗体的核酸(或一组核酸)包括一个引导序列。表6中提供了示例性的核酸序列。
本文还涉及包含抗TROP2抗体(如本文所述的抗TROP2)的宿主细胞、编码抗TROP2抗体多肽成分(如本文所述的抗TROP2)的核酸，以及包含编码本文所述抗TROP2抗体多肽成分核酸的载体(如表达载体)。
本申请还包括这些核酸序列的变体。例如，所述变体包括在至少中等严格的杂交条件下与编码本文所述的抗TROP2抗体的核酸序列杂交的核苷酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的抗TROP抗体的重链由一个核酸编码，该核酸包括与SEQ ID No:66-71中所示的任一序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、995.％或100％同一性的序列。或者，在一些实施方案中，本文提供的抗TROP抗体的轻链由一个核酸编码，该核酸包括与SEQ ID No:72-76中所示的任一序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％同一性的序列。下表6中提供了SEQID NO:66-76的序列：
表6
Figure BDA0003271223300000501
Figure BDA0003271223300000511
Figure BDA0003271223300000521
Figure BDA0003271223300000531
Figure BDA0003271223300000541
本文还提供了一种载体，其中插入了本文所述的核酸。
简而言之，通过将编码抗TROP2抗体的天然或合成核酸插入合适的表达载体，可以实现抗TROP2抗体的表达，这需要将核酸可操作地连接到5’和3’的调节元件，包括例如启动子(例如淋巴细胞特异性启动子)和3’非翻译区(UTR)。载体可以适合在真核宿主细胞中复制和整合。典型的克隆和表达载体包含转录和翻译终止子、起始序列和用于调节所需核酸序列表达的启动子。
利用标准的基因递送方案，本发明所述的核酸也可以用于核酸免疫和基因治疗。基因递送的方法是本领域已知的。参见，例如，美国专利第5,399,346号、5,580,859号和5,589,466号，其通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，本发明提供了基因治疗载体。
所述核酸可以被克隆到多种类型的载体中。例如，所述核酸可以克隆到一个载体中，包括但不限于质粒、噬菌体、噬菌体衍生物、动物病毒和细胞质。特别的目标载体包括表达载体、复制载体、探针生成载体和测序载体。
此外，所述表达载体可以以病毒载体的形式用于细胞中。所述病毒载体技术是本领域公知的，并在例如Sambrook等人的著作(2001,Molecular Cloning:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)以及其他病毒学和分子生物学手册中有所描述。可作为载体的病毒包括但不限于逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和慢病毒。一般来说，一个合适的载体包括一个在至少一种生物体中起作用的复制原点、一个启动子序列、方便的限制性内切酶位点和一个或多个可选择的标记(例如，见WO 01/96584；WO 01/29058；和美国专利号第6,326,193号)。
目前许多基于病毒的系统已被开发用于将基因转移到哺乳动物细胞中。例如，逆转录病毒为基因传递系统提供了一个方便的平台。可以使用本领域已知的技术将选定的基因插入载体并包装在逆转录病毒颗粒中。随后，可以在体内或体外分离重组病毒并将其递送至对象的细胞。许多逆转录病毒系统是本领域已知的。在一些实施方案中，使用的是腺病毒载体。许多腺病毒载体是本领域已知的。在一些实施方案中，使用的是慢病毒载体。源自慢病毒等逆转录病毒的载体是实现长期基因转移的合适工具，因为它们使得转基因可以长期、稳定地整合并在子细胞中增殖。慢病毒载体比癌源逆转录病毒(例如鼠白血病病毒)载体具有额外的优势，因为其可以转导非增殖细胞，例的如肝细胞。并且其还具有低免疫原性的额外优势。
额外的启动子元件，例如增强子，用以调节转录起始的频率。尽管最近已经证明许多启动子也包含起始位点下游的功能元件，但这些位启动子元件通常位于起始位点上游30-110bp的区域中。启动子元件之间的间距通常是灵活的，因此当元件相互倒置或移动时，启动子功能仍得以保留。在胸苷激酶(tk)启动子中，在活性开始下降之前，启动子元件之间的间距可以增加到50bp。
一个合适的启动子案例是即刻早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。该启动子序列是强组成型启动子序列，能够驱动与其可操作连接的任何多核苷酸序列进行高水平表达。另一个合适的启动子案例是延伸生长因子-1α(EF-1α)。当然，其他组成型启动子序列亦可用，包括但不限于猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、人类免疫缺陷病毒(HIV)的长末端重复(LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽类白血病病毒启动子、EB病毒即刻早期启动子、劳斯肉瘤病毒启动子以及人类基因启动子，例如但不限于肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌酸激酶启动子。此外，本发明不应局限于使用组成型启动子。诱导型启动子也可作为本发明的一部分。诱导型启动子的使用提供了一种分子开关，当需要进行表达时，其能够开启与其可操作连接的多核苷酸序列的表达，或者当不需要表达时关闭表达。诱导型启动子的实例包括但不限于金属硫氨酸启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。
在一些实施方案中，编码抗TROP2抗体的核酸的表达是可诱导的。在一些实施方案中，编码抗TROP2抗体试剂的核酸可操作地连接至诱导型启动子，包括本文所述的任何诱导型启动子。
抗体生产方法
本公开的抗体可以通过本领域已知的任何方式产生。用于抗体生产的示例性技术如下所述；当然，提供的这些示例性技术仅用于说明目的而非限制性的。此外，本文进一步描述了预期与本文所述的抗体一起使用的示例性抗体特性。
为了制备抗原，抗原可以以纯化或其他方式从天然来源获得，或者可以使用重组技术表达得到。在一些实施方案中，抗原可用作可溶性蛋白质。在一些实施方案中，抗原可以与另一多肽或其他部分偶联，例如以增加其免疫原性。例如，本文所述的抗原可以与Fc区偶联。在一些实施方案中，细胞表面表达抗原的细胞可用作抗原。
多次皮下(sc)或腹腔(ip)注射抗原和佐剂，可以在动物体内产生多克隆抗体。例如，本文描述了鸡免疫的过程。在一些实施方案中，通过双功能或衍生剂将抗原与免疫原性蛋白质偶联，例如钥孔血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂。本文提供了用于免疫鸡的示例性方法。适用于多种其他生物体(如哺乳动物)的相关方法，在本领域是公知的。
如上所述，可以使用多种方法产生单克隆抗体。在一些实施方案中，本公开的单克隆抗体是使用由Kohler等(Nature,256:495(1975))首次描述的杂交瘤方法制备的，并在Hongo等(Hybridoma,14(3):253-260(1995)；Harlow et al.,Antibodies:A LaboratoryManual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.1988))和Hammerling等(Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))中进一步被描述。人类杂交瘤技术(Trioma技术)在Vollmers and Brandlein,Histology andHistopathology,20(3):927-937(2005)和Vollmers and Brandlein,Methods andFindings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)中被报道。可以例如通过体外结合测定、免疫沉淀、ELISA、RIA等筛选生长杂交瘤细胞的培养基中是否存在目标抗体；并且结合亲和力可以例如通过Scatchard分析来确定。产生具有所需结合特性的抗体的杂交瘤可以使用已知的培养技术进行亚克隆和培养、在动物体内作为腹水肿瘤生长等等。
在一些实施方案中，使用文库方法例如噬菌体展示文库制备单克隆抗体。参见，例如Hoogenboom et al.in Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien et al.,ed.,Human Press,Totowa,NJ,2001)。在一些实施方案中，VH和VL基因库通过聚合酶链反应(PCR)克隆并在噬菌体文库中随机重组，然后筛选抗原结合的噬菌体，例如Winter et al.,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)所述。噬菌体通常以单链Fv(scFv)片段或Fab片段的形式展示抗体片段。或如Griffiths et al.,EMBO J,12:725-734(1993)所述，可以克隆原始文库(例如，来自人类)以提供针对多种非自身和自身抗原的某种单一抗体源，而无需任何免疫接种。最后，如Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所述，还可以通过从干细胞中克隆未重排的V基因片段，并使用包含随机序列的PCR引物来编码高度可变的CDR3区域并在体外完成重排，合成原始文库。
在一些实施方案中，本公开的抗体是鸡抗体。可以使用本领域已知的各种技术来生产鸡抗体；参见，例如，美国专利第6,143,559号、8,592,644号和9,380,769号。
在一些实施方案中，本公开的抗体是嵌合抗体。参见，例如，美国专利第4,816,567号和Morrison et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)。在一些实施方案中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，源自鸡、小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物，例如猴的可变区)和人恒定区。在一些实施方案中，嵌合抗体是“类别转换”抗体，其中类别或亚类不同于亲本抗体的类别或亚类。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在一些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。非人抗体可以被人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中HVR，例如CDR(或其部分)源自非人抗体(例如，鸡抗体)而FR(或其部分)源自人抗体序列。人源化抗体任选地还将包含至少一部分人恒定区。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，HVR或CDR残基来源的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或提高抗体特异性或亲和力。例如，在Almagro and Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中综述了人源化抗体及其制备方法。人源化鸡抗体的方法也已在例如WO2005014653被描述。
可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合(bset-fit)”方法选择的框架区；源自特定亚组轻链或重链可变区的人抗体共有序列的框架区；人体内突变的框架区或人种系框架区；和筛选FR文库所得的框架区。参见，例如Sims et al.J.Immunol.151:2296(1993)；Carter et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；Presta etal.J.Immunol.,151:2623(1993)；Almagro and Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)以及Baca et al.,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)。
在一些实施方案中，本公开的抗体是人抗体。可以使用本领域已知的各种技术产生人抗体。在一些实施方案中，人抗体由非人动物产生，例如基因工程鸡(参见例如美国专利第8,592,644号和9,380,769号)和/或本文所述的小鼠。人抗体通常如Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)中所述。
在一些实施方案中，本公开的抗体是抗体片段，包括但不限于Fab、F(ab')2、Fab'-SH、Fv或scFv片段，或单域抗体、单重链抗体或单轻链抗体。可以例如通过酶消化或通过重组技术产生抗体片段。在一些实施方案中，通过蛋白水解消化完整抗体以产生抗体片段，例如，如Morimoto et al.,Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117(1992)和Brennan et al.,Science,229:81(1985)所述。在一些实施方案中，抗体片段由重组宿主细胞产生。例如，Fab、Fv和ScFv抗体片段由大肠杆菌表达和分泌。或者，可以从噬菌体抗体文库中分离抗体片段。
Fab'-SH片段可以直接从大肠杆菌中回收并化学偶联以形成F(ab')2片段。参见Carter et al.,Bio/Technology 10:163-167(1992)。F(ab')2片段也可以直接从重组宿主细胞的培养物中分离。包含替补受体结合表位残基的、体内半衰期延长的Fab和F(ab')2片段如美国专利第5,869,046号所述。
在一些实施方案中，抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185和美国专利第5,571,894号和5,587,458号。可以构建scFv融合蛋白以在scFv的氨基或羧基末端产生效应蛋白的融合物。抗体片段也可以是“线性抗体”，例如美国专利第5,641,870号所述。这种线性抗体可以是单特异性或双特异性的。
在一些实施方案中，本公开所述的抗体为多特异性抗体。多特异性抗体具有针对一种以上抗原的结合特异性(例如，具有两种、三种或更多种结合特异性)。在一些实施方案中，所述抗体为双特异性抗体。在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含针对相同抗原的两种不同结合特异性(例如，对相同抗原的有不同的结合亲和力和/或不同的特异性表位)。在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含对两种不同抗原的结合特异性。在一些实施方案中，所述双特异性抗体为全长或完整抗体。在一些实施方案中，所述双特异性抗体为本公开的抗体片段。
多种产生和纯化双特异性抗体的方法是本领域已知的。其中许多方法已被描述。一种方法是“旋钮入孔(knobs-into-holes)”或“突起入腔(protuberance-into-cavity)”方法(参见，例如，美国专利第5,731,168号)。在一些实施方案中，通过在两个Fc结构域单体中引入不同但相容的取代，如“旋钮入孔”残基对和电荷残基对，促进Fc结构域单体的异二聚化。旋钮-孔的相互作用有利于异二聚体的形成，而旋钮-旋钮和孔-孔的相互作用由于空间维族和利于相互作用的缺失而阻碍同二聚体的形成。孔指的是当蛋白质中的一个原始氨基酸被具有较小侧链体积的不同氨基酸取代时产生的空隙。旋钮指的是当蛋白质中的一个原始氨基酸被一个具有较大侧链体积的不同氨基酸取代时产生的一个凸起。例如，在一些实施方案中，被取代的氨基酸位于Fc结构域单体的CH3抗体恒定结构域中，并参与两个Fc结构域单体的二聚体化。在一些实施方案中，一个CH3抗体恒定结构域中生成一个孔以容纳另一个CH3抗体恒定结构域中的旋钮，这样旋钮和孔的氨基酸就会促进或利于两个Fc结构域单体的异二聚化。在一些实施方案中，一个CH3抗体恒定结构域中的孔是为了更好地容纳另一个CH3抗体恒定结构域中的一个原始氨基酸。在一些实施方案中，一个CH3抗体恒定结构域中生成一个旋钮以与另一个CH3抗体恒定结构域中的原始氨基酸形成额外的相互作用。
在一些实施方案中，通过将具有较大侧链的氨基酸如酪氨酸或色氨酸替换为具有较小侧链的氨基酸如丙氨酸、缬氨酸或苏氨酸来构建孔，例如CH3抗体恒定结构域中的Y407V突变。同样，在一些实施方案中，通过将具有较大侧链的氨基酸替换具有较小侧链的氨基酸，例如CH3抗体恒定结构域中的T366W突变来生成一个旋钮。在一些实施方案中，一个Fc结构域单体包括旋钮突变T366W，另一个Fc结构域单体包括孔突变T366S、L358A和Y407V。旋钮入孔氨基酸对的例子包括但不限于表5所示。
表5：旋钮入孔氨基酸突变
Figure BDA0003271223300000591
另一种方法将具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变结构域与免疫球蛋白恒定结构域序列融合，例如具有包括铰链、CH2和CH3区域在内的免疫球蛋白重链恒定结构域的至少一部分。在一些实施方案中，双特异性抗体在一个臂上有一个具有第一结合特异性的混合免疫球蛋白重链，在另一个臂上有一个杂交的免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)，见WO 94/04690。另一种方法是使用交联(例如，见美国专利第4,676,980号)来产生一个异构抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体的制备可以使用化学连接(例如，Brennan et al.,Science,229:81(1985))，将完整的抗体蛋白水解成F(ab')2片段，这些片段在二硫酚络合剂存在下被还原并转化为亚硝基苯甲酸盐(TNB)衍生物，其中一个通过还原重新转化为Fab'-硫醇并与其他Fab'-TNB衍生物混合以形成双特异性抗体。在一些实施方案中，Fab'-SH片段是化学偶联的。在一些实施方案中，双特异性抗体片段在细胞培养中通过亮氨酸拉链产生，如Kostelny et al.,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)。其他双特异性抗体的形式见例如Spiess,C.et al.(2015)Mol.Immunol.67:95-106。
在一些实施方案中，本公开的抗体是二抗体(diabody)。见例如Hollinger etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)。在二抗体中，一个片段的VH和VL结构与另一个片段的互补VL和VH结构配对，从而形成两个抗原结合位点。另一种通过使用单链Fv(sFv)二聚体制造双特异性抗体片段的策略也已被报道，见Gruber et al,J.Immunol,152:5368(1994)。
在一些实施方案中，本公开的抗体是单域抗体。单域抗体是指包括抗体的全部或部分重链可变结构域或全部或部分轻链可变结构域的单一多肽链。在某些实施方案中，单域抗体是一种人单域抗体(例如，见美国专利第6,248,516B1号)。在一个实施方案中，单域抗体包括抗体的全部或部分重链可变域。驼科抗体也是已知的。
可以用重组方法生产抗体。对于抗抗原抗体的重组生产，编码抗体的核酸被分离并插入到可复制的载体中以进一步克隆(DNA的扩增)或表达。编码抗体的DNA可以很容易地被分离出来并使用常规方法进行测序(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。其中，有许多可用的载体。载体成分一般包括但不限于以下一个或多个：信号序列、复制原点、一个或多个标记基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。
本公开的抗体可以与异源多肽重组生产为融合多肽，如和信号序列或其他在成熟蛋白或多肽的N端具有特定裂解位点的多肽。所选择的异源信号序列可为被宿主细胞识别和处理(如被信号肽酶裂解)的序列。对于不能识别和处理原生抗体信号序列的原核宿主细胞，信号序列由原核信号序列代替，所述原核信号序列选自例如碱性磷酸酶、青霉素酶、lpp或耐热肠毒素II先导物。对于酵母的分泌，原生信号序列可以被例如酵母转化酶先导物、因子先导物(包括酵母菌和克鲁维酵母菌α-因子首领)、或酸性磷酸酶先导物、白喉杆菌糖化酶先导物等取代。在哺乳动物细胞的表达中，可使用哺乳动物的信号序列以及病毒的分泌先导物，例如，单纯疱疹的gD信号。
表达载体和克隆载体都含有使载体在一个或多个选定的宿主细胞中复制的核酸序列，例如，使载体独立于宿主染色体DNA进行复制。这种序列可以包括复制或自主复制序列的起点。对于各种细菌、酵母和病毒来说，这种序列是公知的。一般来说，哺乳动物的表达载体不需要复制原点组件(可以使用SV40原点，因为其含有早期启动子)。
表达和克隆载体可以包含选择基因或可选择标记。典型的选择基因编码的蛋白质可(a)赋予宿主对抗生素或其他毒素的抗性，例如氨苄青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四环素，(b)补足营养缺陷的不足，或(c)提供从复杂培养基中无法获得的关键营养物质。显性选择的例子使用药物新霉素、霉菌素和透明霉素。适用于哺乳动物细胞的另一个例子是那些能够识别有能力吸收抗体编码核酸的细胞，如DHFR、谷氨酰胺合成酶(GS)、胸苷激酶、金属硫蛋白-I和-II，优选为灵长类金属硫蛋白基因、腺苷脱氨酶、鸟氨酸脱羧酶等。例如，用DHFR基因转化的内源DHFR活性缺乏的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系为通过将转化体培养在含有甲氨蝶呤(Mtx)(DHFR的竞争性拮抗剂)的培养基中而确定。
另外，转化或共转化了编码目的抗体DNA序列、野生型DHFR基因和另一种可选择标记如氨基糖苷3'-磷酸转移酶(APH)的宿主细胞(特别是含有内源性DHFR的野生型宿主)可通过在含有用作选择标记的选择剂的培养基中进行细胞培养以进行选择，所述选择剂如氨基糖苷类抗生素，例如卡那霉素、新霉素或G418。
表达和克隆载体通常包含一个被宿主生物体识别的启动子，并与编码抗体的核酸可操作地连接。适合用于原核生物宿主的启动子包括phoA启动子、β-内酰胺酶和乳糖启动子系统、碱性磷酸酶启动子、色氨酸(trp)启动子系统，以及混合启动子，如tac启动子。然而，其他已知的细菌启动子也是适合的。真核生物的启动子序列是已知的。酵母的启动子在本领域是公知的，可以包括由生长条件调节的诱导性启动子/增强子。几乎所有的真核生物基因都有一个富含AT的区域，位于启动转录位点上游约25至30个碱基。例子包括但不限于3-磷酸甘油酸激酶或其他糖酵素的启动子，如烯醇酶、甘油-3-磷酸脱氢酶、己糖酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸酶突变体、丙酮酸激酶、三糖磷酸异构酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡萄糖激酶。哺乳动物宿主细胞中载体的抗体转录可以通过例如从源于病毒基因组的启动子控制。SV40病毒的早期和晚期启动子可以方便地作为SV40限制性片段获得，该片段也包含SV40病毒的复制起点。人类巨细胞病毒的早期启动子可以方便地以HindIII E限制性酶切片段的形式获得。另外，劳斯肉瘤的长末端重复也可以作为启动子。
高等真核生物对编码本发明抗体DNA的转录，常常通过在载体中插入一个增强子序列而被增强。许多增强子序列在哺乳动物的基因(球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、α-胎儿蛋白和胰岛素)中是已知的。然而，通常情况下，技术人员会使用来自真核细胞病毒的增强子。
用于真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人或来自其他多细胞生物的有核细胞)的表达载体也将包含终止转录和稳定mRNA所需的序列。
用于克隆或表达本文载体中DNA的合适宿主细胞为上述的原核生物、酵母或高等真核生物细胞。适用于此目的的原核生物包括真菌，如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物，例如肠杆菌科(Escherichia)，如大肠杆菌(E.coli)、肠杆菌(Enterobacter)、埃尔文氏菌(Erwinia)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、变形杆菌(Proteus)；沙门氏菌(Salmonella)，如伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)；沙雷氏菌(Serratia)，如马氏沙雷氏菌(Serratiamarcescans)；以及志贺氏菌(Shigella)等。除了原核生物，真核微生物如丝状真菌或酵母也是抗体编码载体的合适克隆或表达宿主。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，或普通面包酵母，是低等真核微生物宿主中最常用的。可以选择某些真菌和酵母菌株，其中糖基化途径已被“人源化”，从而产生具有部分或全部人糖基化模式的抗体，见例如Li et al.,Nat.Biotech.24:210-215(2006).
棉花、玉米、马铃薯、大豆、牵牛花、番茄、浮萍(Leninaceae)、紫花苜蓿(M.truncatula)和烟草的植物细胞培养物也可用作宿主。
用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也可源于多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。许多杆状病毒菌株和变体以及相应的宽容性昆虫宿主细胞来自以下已被确认的宿主，如Spodoptera frugiperda(毛虫)、Aedesaegypti(蚊子)、Aedes albopictus(蚊子)、Drosophila melanogaster(果蝇)和Bombyxmori。
脊椎动物细胞可作为宿主，在培养(组织培养)中繁殖脊椎动物细胞属于本领域常规方法。可用的哺乳动物宿主细胞系的实例为SV40转化的猴肾CV1系(COS-7，ATCC CRL1651)、人胚肾系(在悬浮培养基中培养以亚克隆293或293细胞，Graham et al.,J.GenVirol.36:59(1977))、幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)、小鼠睾丸细胞(TM4，Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980))、猴肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)、非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)、人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)、犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)、水牛大鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)、人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)、人肝细胞(HepG2，HB 8065)、小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)、TRI细胞(Mather et al.,AnnalsN.Y.Acad.383:44-68(1982))、MRC 5细胞、FS4细胞和人肝癌系(Hep G2)。其他可用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，如NS0和Sp2/0。关于适于生产抗体的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，见，例如，Yazaki和Wu,Methods inMolecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,N.J.,2003),pp.255-268。
本公开的宿主细胞可以在各种培养基中进行培养。市售培养基如Ham's F10(Sigma)、最小必需培养基((MEM)，(Sigma)、RPMI-1640(Sigma)和Dulbecco's ModifiedEagle's Medium((DMEM)，Sigma)都适于培养所述宿主细胞。此外，Ham et al.,Meth.Enz.58:44(1979),Barnes et al.,Anal.Biochem.102:255(1980)、美国专利第4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655和5,122,469号、WO 90/03430、WO 87/00195和U.S.Pat.Re.30,985中描述的任何一种培养基都可以作为宿主细胞的培养基。这些培养基中的任何一种可根据需要补充激素和/或其他生长因子(如胰岛素、转铁蛋白或表皮生长因子)、盐类(如氯化钠、钙盐、镁盐和磷酸盐)、缓冲剂(如HEPES)、核苷酸(如腺苷和胸苷)、抗生素(如GENTAMYCINTM药物)、微量元素(定义为最终浓度通常在微摩尔范围内的无机化合物)以及葡萄糖或同等能量来源。可以以本领域技术人员已知的适当浓度加入任何其他必要的补充剂。培养条件如温度、pH值等属于先前用于选择表达的宿主细胞的条件，对本领域的技术人员来说是显而易见的。
当使用重组技术时，抗体可以在细胞内、周质空间中产生，或直接分泌到培养基中。如果抗体是在细胞内产生的，作为第一步，无论是宿主细胞还是裂解的片段，都要去除这些颗粒碎片，例如通过离心或超滤去除。Carter et al.,Bio/Technology 10:163-167(1992)描述了一种抗体被分泌到大肠杆菌的周质空间时分离抗体的程序。
可以使用例如羟基磷灰石色谱法、疏水相互作用色谱法、凝胶电泳法、透析法和亲和色谱法对从细胞中制备的抗体组合物进行纯化，其中亲和色谱法是典型的优选纯化步骤之一。
糖基化变体
在一些实施方案中，可对本文提供的抗TROP2抗体进行改变以增加或减少抗TROP2抗体的糖基化程度。可以通过改变抗TROP2抗体或其多肽部分的氨基酸序列，使增加或减少一个或多个糖基化位点，从而方便地添加或删除抗TROP2抗体的糖基化位点。
当抗TROP2抗体包括Fc区时，可以改变其上的碳水化合物。由哺乳动物细胞产生的原生抗体通常包括一个支链的双线寡糖，该寡糖通常通过N键连接到Fc区CH2结构域的Asn297上，例如见Wright et al.,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如甘露糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及连接到GlcNAc的双线寡糖结构“茎”中的岩藻糖。在一些实施方案中，可以对本发明的抗TROP2抗体中的寡糖进行修饰，以创造具有某些改进性质的抗TROP2抗体变体。
连接到Fc的CH2结构域的N-聚糖是异质的。在CHO细胞中产生的抗体或Fc融合蛋白通过岩藻糖基转移酶的活性进行岩藻糖基化，见Shoji-Hosaka et al.,J.Biochem.2006,140:777-83。正常情况下，在人类血清中可以检测到一小部分自然产生的岩藻糖基化IgG。Fc的N-糖基化对其与FcγR的结合很重要；而N-聚糖的岩藻糖基化增加了Fc与FcγRIIIa的结合能力。增加与FcγIIIa的结合可以增强ADCC，这有利于某些理想的细胞毒性抗体制剂在治疗中的应用。
在一些实施方案中，当Fc-介导的细胞毒性不理想时，增强的效应器功能可能是有害的。在一些实施方案中，Fc片段或CH2结构域不被糖基化。在一些实施方案中，CH2结构域中的N-糖基化位点被突变以防止被糖基化。
在一些实施方案中，提供了包括Fc区的抗TROP2抗体变体，其中连接到Fc区的碳水化合物结构具有较少的岩藻糖或缺乏岩藻糖，以改善ADCC功能。具体来说，就岩藻糖含量而言，此处讨论的抗TROP2抗体，其相对于野生型CHO细胞中产生的相同抗TROP2抗体含有更少的岩藻糖。亦即，其特点是比原生CHO细胞(例如，具有原生糖基化产生模式的CHO细胞，例如，含有原生FUT8基因的CHO细胞)产生的岩藻糖含量更低。在一些实施方案中，抗TROP2抗体是其上含岩藻糖的N-连接聚糖的含量少约50％、40％、30％、20％、10％或5％的抗TROP2抗体中的一种。例如，这种抗TROP2抗体中岩藻糖的含量可以是1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。在一些实施方案中，抗TROP2抗体是其上的N-连接聚糖均不含有岩藻糖的抗TROP2抗体，即抗TROP2抗体完全不含岩藻糖，或无岩藻糖或未被岩藻糖基化。岩藻糖的数量例如WO 2008/077546所述，通过MALDI-TOF质谱测量来计算Asn297的糖链内岩藻糖的平均数量，对比所有连接到Asn297的糖结构(如复杂结构、混合结构和高甘露糖结构)总数后确定。Asn297指的是位于Fc区约297位的天冬酰胺残基(按EU编号系统对Fc区残基的编号)；然而，由于抗体中的细微序列变化，Asn297也可能位于297位的上游或下游约±3个氨基酸的位置，即294和300位之间。这样的岩藻糖基化变体可能具有改善ADCC的功能。例如，见美国专利公开第US 2003/0157108号(Presta,L.)、第US 2004/0093621号(Kyowa HakkoKogyo Co.,Ltd)。与“脱岩藻糖基化”或“岩藻糖缺陷型”抗体剂变体有关的公开案例包括：US 2003/0157108、WO 2000/61739、WO 2001/29246、US 2003/0115614、US 2002/0164328、US 2004/0093621、US 2004/0132140、US 2004/0110704、US 2004/0110282、US 2004/0109865、WO 2003/085119、WO 2003/084570、WO 2005/035586、WO 2005/035778、WO2005/053742、WO2002/031140、Okazaki et al.J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)、Yamane-Ohnuki et al.Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够产生脱岩藻糖基化抗体的细胞系案例包括蛋白质岩藻糖基化缺陷型Lec13 CHO细胞(Ripka et al.Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)、美国专利申请第US 2003/0157108 A1号(Presta,L)和WO 2004/056312A1(Adams等)尤其如实施例11所示)，以及如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因、FUT8、基因敲除的CHO细胞(见，例如Yamane-Ohnuki et al.Biotech.Bioeng.87:614(2004)、Kanda,Y.etal.,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)和WO2003/085107)的基因敲除细胞系。
本发明还提供了具有双断寡糖的抗TROP2抗体变体，例如，连接到抗TROP2抗体Fc区的双线寡糖被GlcNAc一分为二。该抗TROP2抗体变体可以减少岩藻糖基化和/或改善ADCC功能。这种抗体制剂变体的例子例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等)、美国专利第6,602,684号(Umana等)、第US 2005/0123546号(Umana等)和Ferrara et al.,Biotechnology andBioengineering,93(5):851-861(2006)所述。还提供了一种抗TROP2抗体变体，其寡糖中至少有一个半乳糖残基连接到Fc区。这样的抗TROP2抗体变体可能具有改进的CDC功能。这样的抗体剂变体在例如WO 1997/30087(Patel等)、WO 1998/58964(Raju,S.)和WO 1999/22764(Raju,S.)中所述。
在一些实施方案中，包括Fc区的抗TROP2抗体变体能够与FcγRIII结合。在一些实施方案中，包含Fc区的抗TROP2抗体变体在人类效应细胞(例如T细胞)存在下具有ADCC活性，或者与包含人类野生型IgG1Fc区的其他相同的抗TROP2抗体相比，在人类效应细胞存在下具有更强的ADCC活性。
半胱氨酸改造变体
在一些实施方案中，设计半胱氨酸改造的抗TROP2抗体可能是合适的，其含有的一个或多个氨基酸残基被半胱氨酸残基取代。在一些实施方案中，被取代的残基位于抗TROP2抗体的可接触部位。通过用半胱氨酸取代这些残基，反应性硫醇基团被定位在抗TROP2抗体的可接触部位，并可用于将抗TROP2抗体与如药物分子或连接剂-药物分子的其他分子偶联，以形成抗TROP2免疫偶联物，见本文进一步描述。半胱氨酸改造的抗TROP2抗体可以按照例如美国专利第7,521,541号中的描述制备。
效应器功能改造
在效应器功能方面修改本文提供的抗TROP2抗体以提高例如该抗体治疗癌症的有效性可能是合适的。例如，半胱氨酸残基可以被引入到Fc区，从而在该区域可形成链内二硫键。如此产生的同源抗体可以有更好的内化能力和/或提升补体介导的细胞杀伤能力和抗体依赖的细胞毒性(ADCC)，见Caron et al.,J.Exp.Med.,176:1191-1195(1992)和Shapes,J.Immunol.,148:2918-2922(1992)。如Wolff et al.,Cancer Research,53:2560-2565(1993)所述，使用异双功能交联剂亦可制备抗肿瘤活性更强的同源抗体。另外，抗体可以被设计成包括常规Fc区域，从而增加补体裂解能力和ADCC能力，见Stevenson et al.,Anti-Cancer Drug Design3:219-230(1989)。
可以对Fc区序列进行突变或改变以改善对FcR的结合(例如，与FcγR、FcRn的结合)。在一些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体包括至少一种改变的效应器功能，例如与原生IgG或母体抗体相比，改变了ADCC、CDC和/或与FcRn的结合。在一些实施方案中，包含突变或改变的抗体的效应器功能相对于母体抗体有所增加。在一些实施方案中，包含突变或改变的抗体的效应器功能相对于母体抗体有所下降。几个有用的特异性突变的例子描述于例如Shields,RL et al.(2001)JBC 276(6)6591-6604；Presta,L.G.,(2002)BiochemicalSociety Transactions 30(4):487-490和WO 00/42072。
在一些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体包括Fc受体突变，例如，在Fc区域的至少一个位置的取代突变。可以在Fc区的下述氨基酸位点上进行这种取代突变，这些位点包括但不限于，例如238、239、246、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、332、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439位，其中Fc区的残基的编号是根据EU编号系统。在一些实施方案中，Fc受体的突变为D265A取代。在一些实施方案中，Fc受体突变为N297A取代。其他合适的突变亦是本领域内众所周知的。例如，美国专利第7,332,581号中所述的示范性突变。
多特异性抗体
多特异性抗体是对两个或多个不同的抗原具有结合特异性的单克隆抗体，优选人或人源化抗体(例如，双特异性抗体对至少两个抗原具有结合特异性)。例如，其中一个结合特异性可以是针对TROP2蛋白，另一个可以是针对任何其他抗原。根据一个优选的实施方案，其他抗原是细胞表面蛋白、细胞表面受体或细胞表面受体亚单位。因此，根据一个实施方案，本发明的双特异性抗体可以同时结合TROP2和例如第二细胞表面受体。
制备双特异性抗体的合适方法在本领域中是众所周知的。例如，双特异性抗体的重组生产是基于两个免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中两个重链具有不同的特异性，见Milstein and Cuello,Nature,305:537-539(1983)。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机混合，这些杂交瘤(quadromas)产生了包括10个不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一个具有正确的双特异性结构。正确分子的纯化通常是通过亲和层析步骤完成的。类似的程序在WO 93/08829和Traunecker et al.,EMBO,10:3655-3659(1991)中公开。
具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域可以与免疫球蛋白恒定域序列融合。优选为与免疫球蛋白重链恒定域融合，至少包括铰链、CH2和CH3区域的一部分。优选在至少一个融合蛋白中含有轻链结合所需位点的第一重链恒定区(CH1)。将编码免疫球蛋白重链融合蛋白的DNA以及编码免疫球蛋白轻链的DNA(若需)插入单独的表达载体，并被共转染到合适的宿主生物体。关于产生双特异性抗体的进一步细节，例如见Suresh etal.,Methods in Enzymology,121:210(1986)。
本文还描述了直接从重组细胞培养物中制备和分离双特异性抗体片段的各种技术。例如使用亮氨酸拉链制备的双特异性抗体，见Kostelny et al.,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)。其中来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两种不同抗体的Fab'部分相连。抗体同源二聚体在铰链区被还原形成单体，然后重新氧化形成抗体异二聚体。这种方法也可用于生产抗体同源二聚体。Hollinger et al.,PNAS USA,90:6444-6448(1993)描述了“二抗体”技术，其提供了一种制备双特异性抗体片段的替代机制。该片段包括一个通过接头连接到VL的VH，该接头太短以至于不允许同一链上的两个结构域之间配对。因此，一个片段的VH和VL结构域被迫与另一个片段的互补VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合点。另一种通过使用单链Fv(sFv)二聚体制备双特异性抗体片段的策略也已被报道，见Gruber et al.,J.Immunol.,152:5368(1994)。
关于两价以上的抗体，如可以按Tutt et al.J.Immunol.147:60(1991)制备三特异性抗体。
嵌合分子
本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)也可被修饰成嵌合分子，包括该抗体与另一异源多肽或氨基酸序列的融合体。
在一个实施方案中，该嵌合分子包括本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)与蛋白转运结构域的融合体，该蛋白转运结构域将所述多肽靶向递送至各种组织，尤其是穿过脑血屏障，例如使用人类免疫缺陷病毒TAT蛋白的蛋白转运结构域(Schwarze etal.,1999,Science 285:1569-72)。
在另一个实施方案中，该嵌合分子包括本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)与标签多肽的融合体，该标签多肽提供抗标签抗体可选择性结合的表位。该表位标签通常位于多肽的氨基或羧基末端。本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)若存在这种表位标签构型，可以用针对该标签多肽的抗体来检测。各种标签多肽和它们各自的抗体是本领域已知的，实例包括多组氨酸(poly-His)或多组氨酸-甘氨酸(poly-His-gly)标签、流感病毒HA标签多肽及其抗体12CA5[Field et al.,Mol.Cell.Biol.,8:2159-2165(1988)]、c-myc标签及其8F9，3C7，6E10，G4，B7和9E10抗体[Evan et al.,Molecular and CellularBiology,5:3610-3616(1985)]以及单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体[Paborsky etal.,Protein Engineering,3(6):547-553(1990)]。其他标签多肽包括Flag-肽[Hopp etal.,BioTechnology,6:1204-1210(1988)]、KT3表位肽[Martin et al.,Science,255:192-194(1992)]、α-微管蛋白表位肽[Skinner et al.,J.Biol.Chem.,266:15163-15166(1991)]和T7基因10蛋白肽标签[Lutz-Freyermuth et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:6393-6397(1990)]。
免疫偶联物和共价修饰
本发明还涉及免疫偶联物，如抗体药物偶联物或“ADC”，包括与第二分子或“活性部分”结合的本文所述抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)。在一些实施方案中，第二分子(例如，“活性部分”)是治疗剂(anget)。在一些实施方案中，所述治疗剂为或包括细胞毒剂，例如化疗剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，或其片段)，或放射性同位素(即，放射性偶联物)。
可用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链(modeccin A chain)A链、α-八叠球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素(dianthin)蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆素、肥皂草(Sapaonariaofficinalis)抑制剂、白树毒素、迈托毒素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素、单端孢霉烯族化合物(tricothecenes)、半胱氨酸结模体抑制(inhibitor cystine knot，ICK)肽和芋螺毒素。各种放射性核素可用于生产放射性偶联抗体。实例包括212Bi、131I、131In、90Y和186Re。用于产生这种免疫偶联物的示范性化学治疗剂描述于本文他处。
在某些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)与美登素(maytansine)、美登醇(maytansinoid)、澳瑞他汀(auristatin)或卡奇霉素(calicheamicin)偶联。在某些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)与美登醇DM1偶联。在某些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)与单甲基澳瑞他汀E(MMAE)偶联。在某些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)与单甲基澳瑞他汀F(MMAF)偶联。
抗体和细胞毒剂的偶联物可用各种双功能蛋白偶联剂制成，如N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫醇)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨基酯的双功能衍生物(如二甲基己二酸酯HCl)、活性酯(如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(如戊二醛)、双叠氮化合物(如双(对偶氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(如双(对偶氮苯甲酰基)乙二胺)、二异氰酸酯(如2，6-二异氰酸甲苯)和双活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，蓖麻毒素的抗毒素可以按照Vitetta et al.,Science,238:1098(1987)所述制备。碳-14标记的1-异硫氰酸苄-3-甲基二乙烯三胺五乙酸(MX-DTPA)是一种示例性的螯合剂，用于将放射性核苷酸与抗体结合，见WO 94/11026。
在另一个实施方案中，抗体可以与“受体”(如链霉菌素)偶联，用于肿瘤预靶向，其中将所述抗体-受体偶联物施用于患者，然后使用清洁剂将未结合的偶联物从循环系统中除去，再施用与细胞毒剂(如放射性核苷酸)偶联的“配体”(如阿维丁)。
还提供了由本文所述的抗TROP2抗体与至少一个其他抗体共价连接而成的异偶联抗体。例如，美国专利第4,676,980号已提出将免疫系统细胞靶向有害细胞，并用于治疗HIV感染。可以用蛋白质合成化学中的已知方法在体外制备包含本文所述抗TROP2抗体的异偶联抗体，包括使用交联剂的方法。例如，可以使用二硫交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于此目的的合适试剂的实例包括亚氨基硫酸盐和甲基-4-巯基丁酰亚胺以及例如在美国专利第4,676,980号中公开的试剂。
还提供了一种包含至少一种共价修饰的抗TROP2抗体。一种共价修饰的类型包括使抗TROP2抗体的目标氨基酸残基与能够和选定侧链或抗体的N或C端残基反应的有机衍生剂进行反应。常用的交联剂包括但不限于，例如1,1-双(重氮乙酰基)-2-苯基乙烷，戊二醛，N-羟基琥珀酰亚胺酯(例如含4-叠氮水杨酸的酯和同功能亚胺酯，所述同功能亚胺酯包括二琥珀酰亚胺酯，所述二琥珀酰亚胺酯例如3,3'-二硫代双(琥珀酰亚胺-丙酸))，如双-N-马来酰亚胺-1,8-辛烷的双功能马来酰亚胺，和例如3-[(p-叠氮苯基)-二硫]丙二酰亚胺甲酯的制剂。
其他修饰包括将谷氨酰胺基和天冬酰胺基残基分别脱酰胺为相应的谷氨酰和天冬酰残基，脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酸或苏氨酸残基中羟基的磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链中α-氨基的甲基化[T.E.Creighton,Proteins:Structure and MolecularProperties,W.H.Freeman&Co.,San Francisco,pp.79-86(1983)]，N-末端氨基的乙酰化和任何C-末端羧基的酰胺化。
另一种共价修饰包括将本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)与各种非蛋白性聚合物中的一种连接，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧乙烯，见美国专利第4,640,835号、第4,496,689号、第4,301,144号、第4,670,417号、第4,791,192号或第4,179,337号所示。
在一些实施方案中，本文提供的是抗TROP2抗体或其抗原结合片段(例如如本文他处所述)与偶联部分(例如改善抗TROP2抗体或其片段的药代动力学特性的部分、药物、毒素(如本文他处所述)治疗性部分、诊断性部分或标签)偶联。在一些实施方案中，抗TROP2抗体或其抗原结合片段通过连接剂与偶联部分结合。在一些实施方案中，该接头是可剪切的接头。在一些实施方案中，该接头是不可剪切的接头。在一些实施方案中，抗TROP2抗体或其片段通过抗体或其片段上的内源受体谷氨酰胺残基与偶联部分偶联。在一些实施方案中，抗TROP2抗体或其片段包括一个Fc区，而内源性受体谷氨酰胺残基在Fc区。WO2015/191882和US20170106096中提供了关于以这种方式与偶联部分偶联的抗体的进一步细节，其全部内容通过引用明确地并入本文中。
生产抗TROP2抗体药物偶联物的示例性方法
在一些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)按照WO2015/191883所述方法连接到偶联部分(例如，“活性部分”)，所述文献的内容通过引用全部并入本文。WO 2015/191883中所述方法允许以位点特异性和化学计量的方式将偶联部分(如药物)有效地连接到完整的、未修饰的抗TROP2抗体(例如，具有未改变的糖基化构型的抗TROP2抗体)。偶联是通过在特定的反应条件下使用野生型转谷氨酰胺酶将偶联部分(如药物)附着在抗TROP2抗体上而完成，和/或使用专门设计的转谷氨酰胺酶在抗TROP2抗体Fc区的内源性谷氨酰胺残基上进行位点特异性偶联而完成的。这样的方法允许生产均匀的位点特异性和化学计量的抗TROP2抗体药物偶联物，这将提供卓越的药代动力学特征、广泛的治疗指数和最佳效力。此外，这种方法允许药物与完整的抗TROP2抗体结合，而无需引入突变和/或使抗体去糖基化，从而最大限度地减少因在抗体Fc区引入突变而可能导致的免疫原性。由于完整的抗TROP2抗体上存在的聚糖可以保护抗体不被降解，按照WO 2015/191883所述的方法生产的抗TROP2抗体药物偶联物与使用其他方法生产的抗TROP2抗体药物偶联物相比，也可以表现出更强的稳定性(例如，更长的血清半衰期)。
治疗的方法
本文所述的抗TROP2抗体药物偶联物(即抗TROP2 ADC或简称“ADC”)可被施用于对象(如例如人类等哺乳动物)，以治疗或延缓涉及TROP2活性或表达异常的疾病或紊乱的进程，包括例如实体瘤或癌症，如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等。在某些实施方案中，提供了用于在对象(如例如人等哺乳动物)中制备治疗实体瘤或癌症的药物的本文所述的抗TROP2 ADC，所述实体瘤或癌症例如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等。在某些实施方案中，提供了用于在对象(如例如人等哺乳动物)中治疗实体瘤或癌症的本文所述的抗TROP2 ADC，所述实体瘤或癌症例如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等。在某些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含用于在对象(如例如人等哺乳动物)中治疗实体瘤或癌症的本文所述的抗TROP2 ADC，所述实体瘤或癌症例如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等。在一些实施方案中，治疗的是表达TROP2的肿瘤。
在某些实施方案中，待治疗的对象是哺乳动物(例如人、非人灵长类动物、大鼠、小鼠、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫等)。在某些实施方案中，对象是人。在某些实施方案中，对象是临床病人、临床试验志愿者、实验动物等。在某些实施方案中，对象被怀疑患有或有可能患有表达TROP2的肿瘤(如实体瘤)或癌症(如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等)。在某些实施方案中，对象已被诊断患有表达TROP2的肿瘤(如实体瘤)或癌症(如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等)和/或与TROP2表达或活性异常相关的疾病。
在某些实施方案中，本文所述的抗TROP2 ADC被施用的对象在接受赛妥珠单抗-格卫替康(sacituzumab govitecan，IMMU-132)或其生物类似物治疗后疾病复发。在某些实施方案中，本文所述的抗TROP2 ADC被施用的对象在接受赛妥珠单抗-格卫替康(sacituzumabgovitecan，IMMU-132)或其生物仿制药后出现恶化。在某些实施方案中，本文所述的抗TROP2 ADC被施用的对象对赛妥珠单抗-格卫替康(sacituzumab govitecan，IMMU-132)或其生物类似物具有耐药性。关赛妥珠单抗-格卫替康(sacituzumab govitecan，IMMU-132)的进一步细节，参见例如Cardillo et al.(2015)Bioconjug Chem.26(5):919-31的描述。在某些实施方案中，本文所述的抗TROP2 ADC被施用的对象在用DS-1062a或其生物类似物治疗后疾病复发。在某些实施方案中，本文所述的抗TROP2 ADC的对象在接受DS-1062a或其生物类似物治疗后出现恶化。在某些实施方案中，本文所述的抗TROP2 ADC被施用的对象对DS-1062a或其生物类似物具有耐药性。关于DS-1062a的进一步细节见US 2018/0094073。
许多针对表达TROP2的肿瘤(如实体瘤)或癌症(乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等)或其他与TROP2活性异常相关的疾病，以及这些疾病的临床鉴定是本领域已知的。这类鉴定方法包括但不限于，例如，免疫组化、PCR、荧光原位杂交(FISH)。
本文所述的抗TROP2 ADC可通过任何合适的途径施用，包括例如静脉注射、肌肉注射或皮下注射。在一些实施方案中，本文所述的抗TROP2 ADC与第二、第三或第四药剂(包括，例如抗肿瘤剂、生长抑制剂、细胞毒剂或化学治疗剂)联合施用，以治疗与TROP2活性异常相关的疾病或疾病。这类药剂包括但不限于，例如多西他赛、吉非替尼、FOLFIRI(伊立替康、5-氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸)、伊立替康、顺铂、卡铂、紫杉醇、贝伐单抗(抗VEGF抗体)、FOLFOX-4(输液氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸，和奥沙利铂、阿法替尼、吉西他滨、卡培他滨、培美曲塞、替万替尼、依维莫司、CpG-ODN、雷帕霉素、艾瑞林、长春瑞滨、来那度胺、维莫非尼、内皮抑素、拉帕替尼、PX-866、Imprime PGG和伊洛替尼。在一些实施方案中，本文提供的抗TROP2抗体(或其抗原结合片段)与抗肿瘤剂、生长抑制剂、细胞毒剂或化疗剂偶联。
在某些实施方案中，本文提供的抗TROP2 ADC与一种或多种其他疗法，如放疗、手术、化疗和/或靶向治疗联合施用。在某些实施方案中，本文提供的抗TROP2 ADC与化疗联合给药。
根据要治疗的适应症和本领域技术人员熟悉的与剂量有关的因素，本文提供的抗体将以对治疗该适应症有效的剂量给药，同时使毒性和副作用最小化。
可以通过对接受治疗的对象进行定期评估来监测治疗或预防的疗效。对于几天或更长时间的多次给药，根据病情多次治疗，直到疾病症状出现了理想的被抑制。当然，其他剂量方案亦可能是有用的且属于本发明的范围内。可以通过单次弹丸注射、多次弹丸注射或连续输液递送所需剂量的本文提供的抗TROP2 ADC进行所需剂量。
可以通过如下方式评估癌症的治疗，例如但不限于，肿瘤消退、肿瘤重量或尺寸的缩小、病程时间、缓解率、生存期、无进展生存期、总反应率、总生存期、反应持续时间、疾病控制率、临床获益率、生活质量、TROP2表达量或水平和/或TROP2活性水平。可以采用确定疗效的方法，包括例如通过RECIST(实体瘤的反应评价)标准(见，例如Eisenhauer et al.(2009)“New response evaluation in solid tumors:Revised RECIST guideline(version 1.1).”Eur J.Cancer.45:228-247).
药物制剂
本文提供的抗TROP2抗体药物结合物可与药学上可接受的载体或赋形剂配制，使其适合于向有需要的对象(如例如人类的哺乳动物)施用。抗体的合适配方是通过将具有所需纯度的抗体(或其片段)与可选的药学上可接受的载体、辅料或稳定剂(Remington'sPharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980))混合，以冻干制剂或水溶液的形式。药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所使用的剂量和浓度下对接受者无毒，包括的缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲基氯化铵；苯扎氯铵，苯扎氯铵；苯酚、丁基或苯甲醇；烷基苯甲酸酯，如甲基或丙基苯甲酸酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇。和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如烯丙基吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二双糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐的反离子，如钠；金属络合物(如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
本文提供的抗TROP2抗体药物偶联物也可以配制成免疫脂质体。可通过本领域已知的方法制备含有抗体的脂质体，如Epstein et al.,PNAS USA,82:3688(1985)；Hwang etal.,PNAS USA,77:4030(1980)和美国专利第4,485,045号和4,544,545号。美国专利第5,013,556号中公开了具有提升循环时间的脂质体。
特别有用的脂质体可以通过反相蒸发法产生，其脂质组合物包括磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG-衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)。通过规定孔径的过滤器压出脂质体，得到具有所需直径的脂质体。本发明的抗体的Fab'片段可以与脂质体结合，如Martinet al.,J.Biol.Chem.,257:286-288(1982)所述，其中通过二硫交换反应将本发明的抗体Fab'片段与脂质体结合。抗肿瘤剂、生长抑制剂或化学治疗剂(如多柔比星)也可任选地包含在脂质体中，见Gabizon et al.,J.National Cancer Inst.,81(19):1484(1989)。
还根据治疗的特定适应症的需要，含本文提供的抗TROP2 ADC的药物制剂可包含一种以上的活性化合物，优选为具有互补活性且不会相互产生不利影响的化合物。例如，除了本文提供的抗TROP2 ADC之外，还可提供抗肿瘤剂、生长抑制剂、细胞毒剂或化疗剂。此类分子适当地以对预期目的有效的量包含于组合中。此类其他制剂的有效量取决于制剂中存在的抗体量、疾病或紊乱或治疗的类型，以及上文探讨的其他因素。这种其他制剂的有效量取决于制剂中存在的抗体量、疾病或紊乱或治疗的类型，以及上文探讨的其他因素。这些活性化合物通常以相同的剂量和给药途径使用，如本文所述，或约为先前使用剂量的1-99％。
在一些实施方案中，本公开的抗体是冻干的。这样的冻干制剂可与合适的稀释剂复原至高蛋白浓度，并且复原制剂可被施用于哺乳动物(如人类)。
在某些实施方案中，用于体内给药的药物制剂是无菌的。这可容易地通过，例如使用无菌过滤膜过滤包含本文提供的抗TROP2 ADC的溶液来实现。
使用抗TROP2抗体进行诊断和成像的方法
与TROP2多肽特异性结合的标记的抗TROP2抗体、其片段及其衍生物和类似物可用于诊断目的，以检测、诊断或监测与TROP2的表达、异常表达和/或活性相关的疾病和/或紊乱。例如，本文提供的抗TROP2抗体(或其片段)可用于原位、体内、离体和体外诊断试验或成像试验。检测TROP多肽表达的方法，包括(a)使用本发明的一种或多种抗体检测个体的细胞(如组织)或体液中多肽的表达；以及(b)将基因表达水平与标准的基因表达水平进行比较。据此，与标准表达水平相比，检测的基因表达水平的增加或减少表明有异常表达。这样的检测可以在体内或体外进行，例如，使用从病人身上得到的样本。
本文还提供了诊断与动物(如例如人类的哺乳动物)中TROP2的表达或异常表达相关的疾病或紊乱的方法。在一些实施方案中，这些方法包括检测哺乳动物中的TROP2多肽。在某些实施方案中，诊断包括(a)向哺乳动物施用有效量的标记的抗TROP2抗体(或其片段)；(b)在施用步骤后等待一段时间，以使标记的抗TROP2抗体(或其片段)选择性地集中在对象中表达TROP2的部位(和/或使未结合的标记分子被去除至背景水平)；(d)检测对象体内标记的抗TROP2抗体的数量或水平；以及(e)将对象体内标记的抗TROP2抗体的数量或水平与健康对照对象体内抗TROP2抗体的水平或数量进行比较。如果对象体内标记的抗TROP2抗体的数量或水平超过健康对照对象体内抗TROP2抗体的数量或水平，这可能表明对象患有与TROP2的表达或异常表达有关的疾病或紊乱。
本文提供的抗TROP2抗体(或其片段)可用于使用本领域技术人员已知的经典免疫组织学方法检测生物样品中TROP2的数量或水平(例如，见Jalkanen,et al.,J.Cell.Biol.101:976-985(1985)；Jalkanen,et al.,J.Cell.Biol.105:3087-3096(1987))。其他基于抗体的可用于检测TROP2表达的方法包括免疫测定法，如酶联免疫吸附测定法(ELISA)和放射免疫测定法(RIA)。合适的抗体检测标签是本领域内已知的，包括酶标签，如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，如碘(131I、125I、123I、121I)、碳(14C)、硫35S)、氚(3H)、铟(115mIn、113mIn、112In、111In)、锝(99Tc、99mTc)、铊(201Ti)、镓(68Ga、67Ga)、钯(103Pd)、钼(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、鲁米诺；以及荧光标签，如荧光素和罗丹明，和生物素。
本领域中已知的技术可应用于本文提供的标记的抗体(或其片段)。此类技术包括但不限于使用双功能偶联剂(例如，见美国专利第5,756,065号、第5,714,631号、第5,696,239号、第5,652,361号、第5,505,931号、第5,489,425号、第5,435,990号、第5,428,139号、第5,342,604号、第5,274,119号、第4,994,560号和第5,808,003号)。
在一些实施方案中，TROP2的过表达是通过确定生物液体如血清中的脱落抗原的量来测定，例如，使用基于抗体的检测方法(还参见，例如，1990年6月12日公布的美国专利第4,933,294号；1991年4月18日公布的W091/05264；1995年3月28日公布的美国专利第5,401,638号；和Sias et al.,J.Immunol.Methods 132:73-80(1990))。除了上述检测方法，熟练的技术人员还可以使用各种体内和体外检测方法。例如，人们可以将哺乳动物体内的细胞暴露于抗体，该抗体可任选被可检测标签标记，例如放射性同位素，并且可以通过外部扫描放射性或分析从先前暴露于抗体的哺乳动物身上提取的样品(例如活检或其他生物样品)来评估抗体与之的结合。
制造品和试剂盒
提供了一种制造品，包括对治疗表达TROP2的肿瘤(如实体瘤)或癌症有用的材料，如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等。在某些实施方案中，制造品或试剂盒包括含有一种或多种抗TROP2抗体药物偶联物或本文所述组合物的容器。在某些实施方案中，制造品或试剂盒包括含有编码一种(或多种)抗TROP2抗体或本文所述组合物的核酸的容器。在一些实施方案中，该试剂盒包括产生本文所述抗TROP2抗体细胞系的细胞。在一些实施方案中，该试剂盒包括一个或多个阳性对照，例如TROP2(或其片段)或TROP2+细胞。在一些实施方案中，该试剂盒包括阴性对照，例如基本不含TROP2的表面或溶液。
在某些实施方案中，制造品或试剂盒包括容器和容器上或与容器相关的标签或包装说明书。合适的容器包括，例如瓶子、小瓶、注射器、静脉注射液袋等。容器可由各种材料制成，如玻璃或塑料。容器盛放组合物，该组合物本身或与另一种组合物共同可有效治疗、预防和/或诊断表达TROP2的肿瘤(如实体瘤)或癌症(如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等)，且所述容器可有一个无菌接入口(例如，该容器可以是一个静脉注射液袋或一个具有可被皮下注射针头刺穿塞子的小瓶)。该组合物中至少有一种药剂是本文所述的抗TROP2抗体药物偶联物。标签或包装说明书表明该组合物用于治疗表达TROP2的肿瘤(如实体瘤)或癌症(如乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌等)。
此外，制造品或试剂盒可包括(a)具有其中所含组合物的第一容器，其中所述组合物包括本文所述的抗TROP2抗体药物偶联物；以及(b)具有其中所含组合物的第二容器，其中该组合物包括跟多细胞毒剂或其他治疗剂。在一些实施方案中，该治疗剂是本文所述的免疫治疗剂。此外，该制造品可进一步包括一个额外的容器，其中包括药学上可接受的缓冲剂，如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。它还可以进一步包括从商业和用户的角度来看可取的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
还提供了对各种目的有用的试剂盒，例如，为分离或检测患者体内的TROP2，可选择与制造品结合使用。对于TROP2的分离和纯化，试剂盒可以包含本文提供的与珠子(例如琼脂糖凝胶珠)偶联的抗TROP2抗体(或其片段)。可以提供含有抗体(或其片段)的试剂盒，用于体外检测和定量TROP2，例如用于ELISA或Western blot。与制造品一样，试剂盒包括一个容器和容器上或与容器相关的标签或包装说明书。例如，该容器容纳包含至少一种本文提供的抗TROP2抗体的组合物。还可以包括含有例如稀释剂和缓冲剂、对照抗体的其他容器。标签或包装说明书可提供对该组合物的描述以及预期的体外或诊断用途的说明。
实施例
实施例1A：抗TROP2抗体的产生和表征。
小鼠抗人TROP2抗体通过用人TROP2免疫小鼠、从被免疫小鼠收集脾细胞并产生杂交瘤获得。从中选择对人TROP2表现出高亲和力和效力的克隆进行测序。下面提供了抗TROP2抗体1B3、15D9、15A10、7B6和17D1的重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)的氨基酸序列：
Figure BDA0003271223300000781
Figure BDA0003271223300000782
用FACS实验验证抗体1B3、15D9、15A10、17B6和17D1被SKBR3细胞内化。SKBR3是表达TROP2的人乳腺癌细胞系。简而言之，将1.2×105SKBR3细胞接种到每各12孔板中并培养过夜。将300μL 20nM对照抗体、1B3、15D9、15A10、17B6或17D1(置于DMEM-10中)与300μL60nM pHAb标记的二抗在室温下避光混合15分钟。将标记的抗体混合物加入SKBR3细胞中并孵育过夜。孵育过夜后，将SKBR3细胞用胰蛋白酶消化，后用1％BSA/PBS洗涤两次，并通过流式细胞术进行分析。参见图1A-1F。观察到人IgG对照和未标记细胞的重叠峰(图1A)，这表明对照IgG没有被SKBR3细胞内化。未观察到1B3、15D9、15A10、17B6或17D1的重叠峰，表明这些抗TROP2抗体均被SKBR3细胞内化。
实施例1B：人源化抗滋养细胞表面抗原2(TROP2)抗体的表征。
使用本领域已知的方法将实施例1A中描述的抗体人源化。下表7中提供了人源化抗TROP2抗体重链和轻链的氨基酸序列。
表7
Figure BDA0003271223300000791
Figure BDA0003271223300000801
包含基于表7中序列的HC/LC组合的抗TROP2抗体的理论等电点(pI)和理论分子量列于下表8A中：
表8A
重链/轻链* 理论等电点(pI) 理论分子量(MW)
HC1/LC1 6.95 146616.28
HC1/LC2 7.90 146576.33
HC1/LC3 6.95 146378.12
HC1/LC4 7.28 146446.13
HC1/LC5 7.90 146470.09
HC2/LC1 6.95 146636.32
HC2/LC2 7.90 146596.37
HC2/LC3 6.95 146398.16
HC2/LC4 7.28 146466.17
HC2/LC5 7.90 146490.23
HC3/LC1 7.28 146682.37
HC3/LC2 8.09 146642.41
HC3/LC3 7.28 146444.21
HC3/LC4 7.63 146512.21
HC3/LC5 8.08 146536.18
HC4/LC1 6.51 146461.95
HC4/LC2 7.28 146421.99
HC4/LC3 6.51 146223.79
HC4/LC4 6.70 146291.80
HC4/LC5 7.28 146315.76
HC5/LC1 6.95 146634.51
HC5/LC2 7.91 146594.56
HC5/LC3 6.96 146396.35
HC5/LC4 7.30 146464.36
HC5/LC5 7.90 146488.32
*各重链和轻链的氨基酸序列见表7
用表面等离子共振(SPR)实验确定表8A中所示的特定抗体的动力学和亲和力。各抗体的氨基酸序列见表7。结果见下表8B。
表8B抗人TROP2抗体的亲和力和动力学
抗体 被分析物 k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s) K<sub>D</sub>(M) Rmax Chi<sup>2</sup>(RU<sup>2</sup>)
DP002-HC1LC1 TROP2 1.97E+06 1.30E-04 6.62E-11 52.4 4.18E-02
DP002-HC1LC5 TROP2 1.81E+06 1.04E-04 5.77E-11 51.7 3.78E-02
DP002-HC4LC5 TROP2 2.20E+06 4.05E-05 1.84E-11 50.7 1.01E-01
对照* TROP2 5.11E+05 2.04E-04 4.00E-10 50.7 1.65E-02
*对照抗体是抗TROP2抗体赛妥珠单抗(sacituzumab)的生物仿制药。
进行进一步SPR实验以对表8A中列出的抗TROP2抗体的亲和力进行排序。结果如下表8C所示：
表8C针对人TROP2的人源化抗TROP2抗体的动力学数据
抗体 Ka(1/Ms) Kd(1/s) K<sub>D</sub>(M) Rmax(RU)
HC2+LC1 1.54×10<sup>6</sup> 5.78×10<sup>-5</sup> 3.75×10<sup>-11</sup> 65.3
HC4+LC1 1.69×10<sup>6</sup> 7.74×10<sup>-5</sup> 4.57×10<sup>-11</sup> 56.6
HC2+LC5 1.42×10<sup>6</sup> 7.38×10<sup>-5</sup> 5.20×10<sup>-11</sup> 65.6
HC4+LC4 1.71×10<sup>6</sup> 8.88×10<sup>-5</sup> 5.20×10<sup>-11</sup> 38.6
HC1+LC1 1.63×10<sup>6</sup> 1.05×10<sup>-4</sup> 6.45×10<sup>-11</sup> 48.4
HC3+LC1 1.65×10<sup>6</sup> 1.10×10<sup>-4</sup> 6.70×10<sup>-11</sup> 53.3
HC4+LC5 1.72×10<sup>6</sup> 1.38×10<sup>-4</sup> 8.01×10<sup>-11</sup> 49.9
HC1+LC4 1.38×10<sup>6</sup> 1.26×10<sup>-4</sup> 9.11×10<sup>-11</sup> 45
HC4+LC3 1.95×10<sup>6</sup> 1.78×10<sup>-4</sup> 9.16×10<sup>-11</sup> 29.6
HC2+LC4 1.46×10<sup>6</sup> 1.40×10<sup>-4</sup> 9.57×10<sup>-11</sup> 41.3
HC2+LC3 1.36×10<sup>6</sup> 1.41×10<sup>-4</sup> 1.04×10<sup>-10</sup> 35.4
HC1+LC5 1.39×10<sup>6</sup> 1.49×10<sup>-4</sup> 1.07×10<sup>-10</sup> 52.5
HC3+LC3 1.49×10<sup>6</sup> 1.59×10<sup>-4</sup> 1.07×10<sup>-10</sup> 35.2
HC3+LC5 1.32×10<sup>6</sup> 1.51×10<sup>-4</sup> 1.14×10<sup>-10</sup> 62.8
HC1+LC3 1.62×10<sup>6</sup> 1.96×10<sup>-4</sup> 1.21×10<sup>-10</sup> 35.1
HC3+LC4 1.37×10<sup>6</sup> 1.92×10<sup>-4</sup> 1.40×10<sup>-10</sup> 37.2
HC5+LC1 1.60×10<sup>6</sup> 2.35×10<sup>-4</sup> 1.47×10<sup>-10</sup> 44.2
HC5+LC3 1.46×10<sup>6</sup> 2.66×10<sup>-4</sup> 1.82×10<sup>-10</sup> 34.3
HC5+LC4 1.36×10<sup>6</sup> 2.99×10<sup>-4</sup> 2.20×10<sup>-10</sup> 32.5
HC5+LC5 1.42×10<sup>6</sup> 3.38×10<sup>-4</sup> 2.38×10<sup>-10</sup> 61.3
DP002-hm1 R 7.80×10<sup>5</sup> 2.14×10<sup>-4</sup> 2.75×10<sup>-10</sup> 91
HC5+LC2 2.61×10<sup>5</sup> 4.02×10<sup>-4</sup> 1.54×10<sup>-9</sup> 0.9
HC1+LC2 2.49×10<sup>5</sup> 1.02×10<sup>-3</sup> 4.09×10<sup>-9</sup> 2
HC4+LC2 1.84×10<sup>5</sup> 9.84×10<sup>-4</sup> 5.34×10<sup>-9</sup> 2.8
HC3+LC2 1.69×10<sup>5</sup> 1.77×10<sup>-3</sup> 1.04×10<sup>-8</sup> 3.5
HC2+LC2 2.49×10<sup>4</sup> 2.51×10<sup>-2</sup> 8.65×10<sup>-7</sup> 63.7
空白 9.24×10<sup>4</sup> 1.15×10<sup>-3</sup> 1.24×10<sup>-8</sup> 1.7
实施例2：使用抗TROP2 Ab-MMAE抗体-药物偶联物(ADC)进行的体外细胞毒性测定
DP002-HC1LC1-ADC是包括抗TROP抗体DP002-HC1LC1的抗体-药物偶联物，其包含与单甲基澳瑞他汀E(MMAE)偶联的HC1(SEQ ID NO:52)和LC1(SEQ ID NO:58)，药物抗体比(DAR)为2。使用WO2015/191883中描述的偶联方法制备DP002-HC1LC1-ADC。进行一系列体外细胞毒性试验以评估DP002-HC1LC1-ADC对以下表达TROP2的癌细胞系生长的抑制力：HCC1954(人乳腺癌细胞系)、BxPC-3(人胰腺腺癌细胞系)细胞系和NCI-N87(人胃癌细胞系)。平行进行使用星形螺环酮、阳性细胞凋亡对照和包括HC4(SEQ ID NO:55)和LC5(SEQID NO:62)的抗TROP2抗体DP002-HC4LC5的实验。
如表9A所示，星形螺环酮的治疗在所有三种细胞系中诱导了大于93％的细胞凋亡，而抗TROP2抗体HC4/LC5的治疗在任何细胞系中几乎没有或没有活性。DP002-HC1LC1-ADC在NCI-N87胃癌细胞中的最大生长抑制率约为46％，在BxPC-2胰腺癌细胞中的约为57％，在HCC1954乳腺癌细胞中的约为69％。
表9A ADC-1在表达TROP2的人癌细胞系中的细胞毒性
Figure BDA0003271223300000821
进行进一步的体外细胞毒性测定以测试DP002-HC1LC1-ADC对MDA-MB-468(一种TROP2+人乳腺癌细胞系)和HCC38(一种TROP2+人乳腺导管癌细胞系)生长的抑制能力。如表9B所示，DP002-HC1LC1-ADC抑制了约65％的TROP2+MDA-MB-468乳腺癌细胞的生长。
表9B ADC-1在癌细胞系中的细胞毒性
Figure BDA0003271223300000822
实施例3：抗TROP2-MMAE抗体药物偶联物在小鼠MDA-MB-468异种移植模型中的活性
测试了两种抗TROP2-MMAE抗体药物偶联物DP002-HC1LC5-ADC(DAR～2)和DP002-HC4LC5-ADC(DAR～1.6-2.3)对携带异种移植MDA-MB-468人乳腺腺癌肿瘤的小鼠中肿瘤生长的抑制。DP002-HC1LC5-ADC包括抗TROP抗体，其包含HC1(SEQ ID NO:52)和LC5(SEQ IDNO:62)；DP002-HC4LC5-ADC包括抗TROP抗体，该抗体包含HC4(SEQ ID NO:44)和LC5(SEQ IDNO:62)。简而言之，将0.1ml MDA-MB-468细胞(1x 107细胞/ml)植入48只NOD/SCID小鼠(雌性，6-8周龄)。当肿瘤大小达到181mm3以上时(肿瘤接种后34天)，将小鼠随机分为7组(6只小鼠/组)并根据下表10中提供的时间表进行治疗：
表10 MDA-MB-468异种移植小鼠中效用研究的剂量和给药时间表
Figure BDA0003271223300000831
*空白载体＝无菌1×PBS，pH＝7.4。
**抗体对照是未偶联的DP002-HC4LC5
***阳性对照是赛妥珠单抗-格卫替康(sacituzumab govitecan)的生物仿制药。
施用于第2组小鼠的抗体对照是DP002-HC4LC5。施用于第7组小鼠的阳性对照是IMMU-132(也称为赛妥珠单抗-格卫替康，sacituzumab govitecan)的生物仿制药。根据体重、存活率和总体观察，在任何组中均未观察到明显的副作用。
异种移植实验的结果显示在表11和图2和3中。
表11表10所示治疗的抗肿瘤活性
Figure BDA0003271223300000832
Figure BDA0003271223300000841
a.平均值±平均值的标准误(SEM)；
b.T/C＝(治疗结束时肿瘤体积/治疗开始时肿瘤体积)/(空白载体治疗结束时肿瘤体积/空白载体治疗开始时肿瘤体积)*100％；
c.TGI＝[1-(治疗结束时肿瘤体积/治疗开始时肿瘤体积)/(空白载体治疗结束时肿瘤体积/空白载体治疗开始时肿瘤体积)]*100％；
d.与空白载体相比，通过Tukeys多重比较测试；**P<0.01,***P<0.001,****P<0.0001,ns：不显著
如表11和图2和3所示，用空白载体(第1组)或抗体对照(第2组)治疗对肿瘤生长没有任何影响。类似地，用IgG-ADC对照治疗对肿瘤生长没有影响(数据未显示)。用阳性对照(第7组)治疗的小鼠表现出显著的肿瘤生长抑制(即69％)。在用1mg/kg DP002-HC1LC5-ADC(第3组)或1mg/kg DP002-HC4LC5-ADC(第5组)治疗的小鼠中，肿瘤生长分别被抑制了23％和18％。用4mg/kg DP002-HC1LC5-ADC(第4组)或4mg/kg DP002-HC4LC5-ADC(第6组)治疗的小鼠表现出完全的肿瘤缓解，即对肿瘤生长的抑制率为100％。
第2、3和5组在给药后第42天终止，第1、4、6和7组额外监测两周。第1组(空白载体对照)和第7组(阳性对照)小鼠的平均肿瘤体积分别达到1069mm3和437mm3。相比之下，第4组和第6组小鼠的肿瘤没有再生。在治疗开始后第56天，第4组(4mg/kg DP002-HC1LC5-ADC)小鼠的平均肿瘤体积为0mm3，第6组(4mg/kg DP002-HC4LC5-ADC)小鼠的平均肿瘤体积为3mm3。
基于体重、存活和总体观察的变化，在接受任一剂量的DP002-HC1LC5-ADC或DP002-HC4LC5-ADC的动物中，未观察到明显的副作用。
实施例4：抗TROP2-MMAE抗体药物偶联物DP002-HC4LC5-ADC在小鼠MDA-MB-468异种移植模型中的活性
DP002-HC4LC5-ADC的抗肿瘤活性在携带异种移植的MDA-MB-468人乳腺腺癌肿瘤的雌性裸鼠中作为单一药剂进行评估。
通过在无菌条件下皮下给药，每只小鼠的右侧接种5×106MDA-MB-468肿瘤细胞(0.1mL量，与基质胶1:1)。当肿瘤体积达到约150mm3时，将小鼠随机分配到7个治疗组之一(每组6只小鼠)，如表12所示，然后开始治疗。所有剂量的DP002-HC4LC5-ADC均通过尾静脉注射给药。
表12MDA-MB-468异种移植模型的治疗组
Figure BDA0003271223300000851
所有给药均通过尾静脉注射给药。依据最新测量的体重对小鼠给药。
每周两次测量肿瘤大小和动物体重。每天记录临床体征。使用卡尺在二维(即长度(a)和宽度(b))上测量肿瘤，并通过测量单个肿瘤的这两个参数来估计肿瘤体积，如下所示：肿瘤体积(mm3)＝(a×b2)/2。
以下标准(人道终点)用于确定是否将动物从研究中移除并实施安乐死：
1)体重减轻——如果动物体重相对于研究开始时减轻了20％，对其实施安乐死。
2)肿瘤大小——如果肿瘤体积达到动物体重的10％以上或2000mm3，对动物实施安乐死。
3)动物行为——如果动物表现出麻痹、脱水、体温过低、呼吸异常、活动水平低、明显疼痛、全身状况不佳、腹泻、皮肤损伤和/或对保守治疗没有反应，对其实施安乐死。
4)肿瘤外观——对出现大的或开放性肿瘤溃疡的动物实施安乐死。
在本研究中，所有动物在第84天被安乐死，除非动物在较早的时间点死亡或由于达到一个或多个人道终点而在较早的时间被安乐死。在第70天，根据研究方案，第1组(空白对照组)中的四只动物和第2组中的四只动物(DP002 4mg/kg)由于肿瘤中的开放性溃疡而被安乐死。在第77天，第3组中的两只动物(DP002-HC4LC5-ADC单次给药1mg/kg)、第4组中的一只动物(DP002-HC4LC5-ADC单次给药2mg/kg)和第5组中的一只动物(DP002-HC4LC5-ADC和DP002-HC4LC5-ADC在第0天给药2mg/kg，外加第7天和第14天的每天给药1mg/kg的DP002-HC4LC5-ADC)由于肿瘤中的开放性溃疡而被安乐死。
以观察时间(X轴)对相应肿瘤体积(Y轴，几何平均值)绘制每个治疗组的平均肿瘤生长曲线。用双侧t检验分析治疗组和对照组之间任何差异的统计显著性。在每次测量肿瘤体积后，根据以下公式计算肿瘤生长抑制率(TGI)：％TGI＝(TVcn-TVtn)/TVcn×100，其中TVtn和TVcn分别是治疗组和对照组的平均肿瘤体积。每次测量体重后按以下公式计算体重变化(CBW％)：CBW％＝(BWn－BW0)/BW0×100，其中BWn为第n天体重，BW0为第0天体重。
结果
向第1组中的小鼠施用空白载体对动物生长没有影响。在整个治疗期间，第1组小鼠的体重持续增加。在第70天，第1组小鼠的平均体重比第0天增加了7.08％(或1.37g)。在第84天，第1组小鼠的平均体重比第0天增加了10.69％(或1.77g)。类似地，与第0天相比，第2组小鼠的平均体重在第70天增加了9.31％(或1.78g)；与第0天相比，在第84天增加了17.79％(或3.65g)。
在整个治疗期间，第3、4、5、6和7组的动物也持续增重。在第70天，第3组小鼠的平均体重增加了15.09％(或2.87g)；第4组小鼠为11.00％(或2.14g)；第5组小鼠为10.87％(或2.13g)；第6组小鼠为8.89％(或1.72g)；与第0天的平均体重相比，第7组小鼠的平均体重增加了8.95％(或1.76g)。第84天，第3组小鼠的平均体重增加了12.37％(或2.92g，n＝4)；第4组小鼠为10.84％(或2.26g，n＝5)；第5组小鼠为6.99％(或1.37g)；第6组小鼠为10.24％(或1.85g，n＝5)；与第0天的平均体重相比，第7组小鼠为6.66％(或1.30)。对应于各种治疗的平均体重变化总结在表13和图4中。
表13 DP002-HC4LC5-ADC治疗对MDA-MB-468异种移植模型体重的影响
Figure BDA0003271223300000861
*BWC＝体重变化
DP002-HC4LC5-ADC的治疗使所有测试组中MDA-MB-468人乳腺肿瘤生长被显著抑制。在第70天，第3、4和5组小鼠的平均肿瘤体积分别为515.77mm3(TGI＝62.16％,P<0.001)、139.85mm3(TGI＝89.74％,P<0.001)和293.26mm3(TGI＝78.49％，P<0.01)。第5组由于出现异常动物，在排除异常后，第70天第5组小鼠肿瘤平均大小为4.89mm3，第5组小鼠第70天TGI值为99.64％(P<0.001)。第70天，第6组小鼠平均肿瘤体积为168.94mm3(TGI＝87.61％，P<0.001)，第7组小鼠平均肿瘤体积为191.51mm3(TGI＝85.88％，P<0.001)。各种治疗对MDA-MB-468肿瘤生长的影响总结在表14、图5A和5B中。表14、图5A和5B中的数据呈现为n只动物的均值±SEM。图5A中的数据包括第组5中的异常动物，而图5B中的数据排除异常动物。
表15 DP002-HC4LC5-ADC治疗对异种移植MDA-MB-468人乳腺癌肿瘤荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
Figure BDA0003271223300000871
Figure BDA0003271223300000872
与空白载体组相比，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001
在第4-7组中，每组中的一些小鼠均观察到完全反应(即，肿瘤完全消退或缓解)。第一次给药后第4周(第21天或之后)，首次观察到完全肿瘤消退。在第11周，第4组中2/6只小鼠、第5组的4/6只小鼠、第6组的5/6只小鼠和第7组的2/6小鼠中观察到完全消退。在研究终止时(第84天)，所有小鼠均保持完全消退，第3组中的一只小鼠除外。完全消退似乎与剂量水平有关。将DP002-HC4LC5-ADC以第0天2mg/kg、第7天和第14天各1mg/kg DP002-HC4LC5-ADC(即第6组治疗)的剂量给药小鼠的治疗效果，稍好于在第0天(即第5组治疗)对小鼠施用4mg/kg剂量的DP002-HC4LC5-ADC的治疗效果。在第0、7、14和21天(即第7组治疗)各向小鼠施用1mg/kg DP002-HC4LC5-ADC的治疗效果不如第5组治疗或第6组。关于不同治疗组中完全肿瘤消退的数据总结在表15中。
表15治疗组1-7中小鼠的完全肿瘤消退(除非另有说明，每组n＝6)
Figure BDA0003271223300000881
结论
DP002-HC4LC5-ADC的最大累积剂量为4mg/kg(第0天单次给药；第0天2mg/kg剂量、第7天和第14天每天1mg/kg给药；或第0、7、14和21天每天1mg/kg给药)时，在小鼠中具有良好的耐受性。在该剂量水平或在1mg/kg或2mg/kg的较低累积剂量下，未观察到毒性、体重的显著变化或总体观察标准的变化。DP002-HC4LC5-ADC的治疗在测试的所有组中剂量依赖地产生对MDA-MB-468肿瘤生长的抑制。研究结束时，2mg/kg DP002-HC4LC5-ADC给药的小鼠中，20％的小鼠观察到治疗性肿瘤消退；第0天以4mg/kg DP002-HC4LC5-ADC单次给药的小鼠中有66％；第0天以2mg/kg DP002-HC4LC5-ADC和第7天和第14天以1mg/kg给药的小鼠中为100％；第0、7、14和21天每天以1mg/kg DP002-HC4LC5-ADC给药的小鼠有30％。相比之下，抗体DP002本身在4mg/kg给药时不具有显著的肿瘤抑制作用。
前述提供的实施例仅用于说明目的，并不旨在以任何方式限制本发明的范围。除了在此示出和描述的内容之外，基于前述描述，对本发明的各种修改对于本领域技术人员来说将是显而易见的并且落入所附权利要求的范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 石药集团巨石生物制药有限公司
<120> 抗滋养细胞表面抗原2（TROP2）的抗体或其抗原结合片段
<130> P21116872WP
<150> US 62/820,831
<151> 2019-03-19
<160> 105
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 1
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn
1 5 10
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 2
Gly Phe Ser Leu Thr Arg Tyr Gly Val His
1 5 10
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 3
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Ile His
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 4
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Gly Met Asn
1 5 10
<210> 5
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 5
Trp Ile Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln
1 5 10 15
Lys Phe
<210> 6
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 6
Trp Leu Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ala Ala
1 5 10 15
Phe
<210> 7
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 7
Trp Ile Gly Val Ile Ser Ser Tyr Tyr Gly Asp Ala Thr Tyr Asn Gln
1 5 10 15
Lys Phe
<210> 8
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 8
Trp Ile Gly Leu Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Thr Tyr Thr Gln
1 5 10 15
Lys Phe
<210> 9
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 9
Trp Ile Gly Val Ile Ser Thr Phe Tyr Gly Asp Ala Asn Tyr Asn Gln
1 5 10 15
Lys Phe
<210> 10
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 10
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 11
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 11
Ala Arg Glu Asp Arg Tyr Val Gly Glu Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 12
Ala Leu Leu Gly Ala Tyr Asn Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 13
Ala Arg Arg Gly Asn Tyr Asp Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 14
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 14
Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Asn Phe Met His
1 5 10
<210> 15
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 15
Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Ile His
1 5 10
<210> 16
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 16
Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His
1 5 10
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 17
Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5 10
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 18
Leu Leu Val Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5 10
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 19
Gln Gln Ser Tyr Glu Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 20
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Arg Thr
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 21
Gln Gln Ser Tyr Glu Asp Pro Pro Thr
1 5
<210> 22
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 23
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 23
Glu Val Gln Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Arg Ser Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Pro Asn Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Asp Arg Tyr Val Gly Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 24
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Ser Ser Tyr Tyr Gly Asp Ala Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Leu Gly Ala Tyr Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 25
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 25
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Thr Tyr Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Leu Gly Ala Tyr Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 26
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Phe Tyr Gly Asp Ala Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Asn Tyr Asp Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 27
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 27
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Met Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 28
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 28
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Thr Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 29
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 29
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Val Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 30
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 30
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Val Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 31
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 31
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Phe Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Glu Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu
100 105 110
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa = Tyr 或 Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Thr 或 Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa = Phe 或 Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa = Asp 或 Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> Xaa = Ser 或 Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Ile, Met, 或 Val
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)..(10)
<223> Xaa = His 或 Asn
<400> 32
Gly Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 33
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa = Ile, Leu, 或 Met
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa = Val 或 Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa = Ser 或 Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> Xaa = Ser 或 Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> Xaa = Tyr, Phe, 或 Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Tyr 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (11)..(11)
<223> Xaa = Asp 或 Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)..(12)
<223> Xaa = Ala 或 Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> (13)..(13)
<223> Xaa = Thr, Ser, Asn, 或 Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> (15)..(15)
<223> Xaa = Asn 或 Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)..(16)
<223> Xaa = Gln 或 Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa = Lys 或 Ala
<400> 33
Trp Xaa Gly Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Phe
<210> 34
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa = Leu 或 Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Leu, Tyr, Arg, 或 Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa = Gly 或 Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> (5)..(5)
<223> Xaa = Asp, Arg, 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa = Ala, Gly, Asn, 或 Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> Xaa = Tyr 或 Val
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> Xaa = Asn, Asp, 或 Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Tyr, Gln, Ser, 或 Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)..(10)
<223> Xaa = Phe 或 Met
<220>
<221> VARIANT
<222> (11)..(11)
<223> Xaa = Asp 或 Ala
<400> 34
Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr
1 5 10
<210> 35
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Asn 或 Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> (11)..(11)
<223> Xaa = Met 或 Ile
<400> 35
Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Xaa Phe Xaa His
1 5 10
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = Leu 或 Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Ile 或 Val
<400> 36
Xaa Leu Xaa Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5 10
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa = Asn 或 Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> Xaa = Pro, Arg, 或 Tyr
<400> 37
Gln Gln Ser Xaa Glu Asp Pro Xaa Thr
1 5
<210> 38
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 38
Arg Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5 10
<210> 39
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 39
Trp Met Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln
1 5 10 15
Lys Phe
<210> 40
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 41
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 42
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 44
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 46
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 46
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 47
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 47
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Arg Arg Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 48
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 48
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 49
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 49
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 50
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 50
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 51
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 51
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Met Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 52
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 53
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 54
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 55
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 56
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 56
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 57
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 57
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gly Asp Gly Tyr Asn Gln Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 58
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 58
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 59
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 59
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Arg Arg Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 60
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 60
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 61
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 61
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 62
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 62
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 63
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Asn Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Met Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 64
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 64
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 65
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 65
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 66
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 66
caggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaagaagc caggagcaag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctctggcta caccttcaca gactatagca tcaactgggt gaggcaggca 120
cctggacagg gactggagtg gatgggcgtg atcagcacat actatggcga cgcctcctac 180
aatcagaagt ttaagggccg cgtgaccatg accacagata cctctacaag caccgcctat 240
atggagctgc ggtccctgag atctgacgat acagccgtgt actattgtgc ccggtacggc 300
gacggctata accagttcga ttactggggc cagggcacaa tggtgaccgt gagctccgct 360
agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1350
<210> 67
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 67
caggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaagaagc caggagcaag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctctggcta caccttcaca gactatagca tcaactgggt gcggcaggca 120
cctggacagg gactggagtg gatgggcgtg atcagcacat actatggcga cgcctcctac 180
aatcagaagt ttaagggccg ggtgaccatg acaagagata cctccacatc taccgtgtat 240
atggagctga gctccctgag gtccgaggat accgccgtgt actattgtgc ccgctacggc 300
gacggctata accagttcga ttactggggc cagggcacac tggtgaccgt gtctagcgct 360
agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1350
<210> 68
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 68
caggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaagaagc caggagcaag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctctggcta caccttcaca gactatagca tcaactgggt gaggcaggca 120
cctggacagc gcctggagtg gatgggcgtg atcagcacct actatggcga cgcctcctac 180
aatcagaagt ttaagggccg ggtgaccatc acaagagata cctccgcctc tacagcctat 240
atggagctga gctccctgcg gtccgaggat acagccgtgt actattgtgc cagatacggc 300
gacggctata accagttcga ttactggggc cagggcaccc tggtgacagt gtctagcgct 360
agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1350
<210> 69
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 69
caggtgcagc tggtgcagag cggagcagag gtgaagaagc caggaagctc cgtgaaggtg 60
tcttgcaagg ccagcggcta caccttcaca gactattcca tcaactgggt gaggcaggca 120
cctggacagg gactggagtg gatgggcgtg atctccacct actatggcga cgcctcttac 180
aatcagaagt ttaagggccg ggtgaccatc acagccgatg agagcacctc cacagcctat 240
atggagctgt ctagcctgcg gtctgaggat acagccgtgt actattgtgc cagatacggc 300
gacggctata accagttcga ttactggggc cagggcaccc tggtgacagt gtcctctgct 360
agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1350
<210> 70
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 70
gaggtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaagaagc caggcgagag cctgaagatc 60
tcctgcaagg gctctggcta caccttcaca gactattcta tcaactgggt gcggcagatg 120
cctggcaagg gactggagtg gatgggcgtg atcagcacct actatggcga cgcctcctac 180
aatcagaagt ttaagggcca ggtgaccatc tctgccgata agtccatctc tacagcctat 240
ctgcagtgga gctccctgaa ggccagcgat acagccatgt actattgtgc cagatacggc 300
gacggctata accagttcga ttactggggc cagggcaccc tggtgacagt gtctagcgct 360
agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1350
<210> 71
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 71
gacatcgtga tgacccagtc ccctgattct ctggccgtgt ctctgggaga gagggcaaca 60
atcaactgca gagtgtctga gagcgtggac agctacggca acaatttcat gcactggtat 120
cagcagaagc caggccagcc ccctaagctg ctgatctaca gggcaagcaa tctggagtcc 180
ggagtgccag accggttctc cggatctgga agcggaaccg acttcaccct gacaatcagc 240
tccctgcagg cagaggacgt ggccgtgtac tattgtcagc agtcctacga ggatccctat 300
acctttggcc agggcacaaa gctggagatc aagcgaacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657
<210> 72
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 72
gacgtggtca tgacccagtc ccccctgtct ctgcctgtga cactgggaca gccagcaagc 60
atctcctgca gggtgtctga gagcgtggat tcctacggca acaatttcat gcactggttt 120
cagcagaggc caggccagtc tccccggaga ctgatctata gggcaagcaa cctggagtcc 180
ggagtgcctg accggttctc cggatctgga agcggaaccg acttcaccct gaagatctct 240
agggtggagg cagaggacgt gggcgtgtac tattgtcagc agagctacga ggatccatat 300
accttcggcg gcggcacaaa ggtggagatc aagcgaacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657
<210> 73
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 73
gacatcgtga tgacccagtc ccctctgtct ctgccagtga cacctggaga gccagcaagc 60
atctcctgca gggtgtctga gagcgtggat tcctacggca acaatttcat gcactggtat 120
ctgcagaagc ccggccagtc tcctcagctg ctgatctaca gggcaagcaa cctggagtcc 180
ggagtgccag acagattctc cggatctgga agcggaaccg acttcaccct gaagatctct 240
agggtggagg cagaggacgt gggcgtgtac tattgtcagc agagctacga ggatccctat 300
acctttggcg gcggcacaaa ggtggagatc aagcgaacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657
<210> 74
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 74
gagatcgtgc tgacccagtc cccagccaca ctgtctctga gcccaggaga gagggccacc 60
ctgtcttgcc gcgtgtccga gtctgtggat agctacggca acaatttcat gcactggtat 120
cagcagaagc caggacaggc acctaggctg ctgatctaca gagcaagcaa cctggagtcc 180
ggaatcccag cacggttcag cggatccggc tctggcacag actttaccct gacaatcagc 240
tccctggagc ctgaggattt cgccgtgtac tattgtcagc agtcttacga ggacccatat 300
acctttggcg gcggcacaaa ggtggagatc aagcgaacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657
<210> 75
<211> 657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 75
gatatccaga tgacccagtc tcctagctcc ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtgacc 60
atcacatgca gagtgagcga gtccgtggac tcctacggca acaatttcat gcactggtat 120
cagcagaagc ccggcaaggc ccctaagctg ctgatctaca gggcctctaa cctggagagc 180
ggagtgccat cccggttttc tggaagcgga tccggaaccg acttcacctt tacaatctct 240
agcctgcagc cagaggatat cgccacatac tattgtcagc agagctacga ggacccctat 300
accttcggcg gcggcacaaa gctggagatc aagcgaacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657
<210> 76
<211> 1407
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 76
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aagaagccag gagcaagcgt gaaggtgtcc 120
tgcaaggcct ctggctacac cttcacagac tatagcatca actgggtgag gcaggcacct 180
ggacagggac tggagtggat gggcgtgatc agcacatact atggcgacgc ctcctacaat 240
cagaagttta agggccgcgt gaccatgacc acagatacct ctacaagcac cgcctatatg 300
gagctgcggt ccctgagatc tgacgataca gccgtgtact attgtgcccg gtacggcgac 360
ggctataacc agttcgatta ctggggccag ggcacaatgg tgaccgtgag ctccgctagc 420
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 720
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380
agcctctccc tgtctccggg taaatga 1407
<210> 77
<211> 1407
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 77
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aagaagccag gagcaagcgt gaaggtgtcc 120
tgcaaggcct ctggctacac cttcacagac tatagcatca actgggtgcg gcaggcacct 180
ggacagggac tggagtggat gggcgtgatc agcacatact atggcgacgc ctcctacaat 240
cagaagttta agggccgggt gaccatgaca agagatacct ccacatctac cgtgtatatg 300
gagctgagct ccctgaggtc cgaggatacc gccgtgtact attgtgcccg ctacggcgac 360
ggctataacc agttcgatta ctggggccag ggcacactgg tgaccgtgtc tagcgctagc 420
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 720
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380
agcctctccc tgtctccggg taaatga 1407
<210> 78
<211> 1407
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 78
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aagaagccag gagcaagcgt gaaggtgtcc 120
tgcaaggcct ctggctacac cttcacagac tatagcatca actgggtgag gcaggcacct 180
ggacagcgcc tggagtggat gggcgtgatc agcacctact atggcgacgc ctcctacaat 240
cagaagttta agggccgggt gaccatcaca agagatacct ccgcctctac agcctatatg 300
gagctgagct ccctgcggtc cgaggataca gccgtgtact attgtgccag atacggcgac 360
ggctataacc agttcgatta ctggggccag ggcaccctgg tgacagtgtc tagcgctagc 420
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 720
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380
agcctctccc tgtctccggg taaatga 1407
<210> 79
<211> 1407
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 79
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagccag 60
gtgcagctgg tgcagagcgg agcagaggtg aagaagccag gaagctccgt gaaggtgtct 120
tgcaaggcca gcggctacac cttcacagac tattccatca actgggtgag gcaggcacct 180
ggacagggac tggagtggat gggcgtgatc tccacctact atggcgacgc ctcttacaat 240
cagaagttta agggccgggt gaccatcaca gccgatgaga gcacctccac agcctatatg 300
gagctgtcta gcctgcggtc tgaggataca gccgtgtact attgtgccag atacggcgac 360
ggctataacc agttcgatta ctggggccag ggcaccctgg tgacagtgtc ctctgctagc 420
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 720
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380
agcctctccc tgtctccggg taaatga 1407
<210> 80
<211> 1407
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 80
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagcgag 60
gtgcagctgg tgcagtccgg agcagaggtg aagaagccag gcgagagcct gaagatctcc 120
tgcaagggct ctggctacac cttcacagac tattctatca actgggtgcg gcagatgcct 180
ggcaagggac tggagtggat gggcgtgatc agcacctact atggcgacgc ctcctacaat 240
cagaagttta agggccaggt gaccatctct gccgataagt ccatctctac agcctatctg 300
cagtggagct ccctgaaggc cagcgataca gccatgtact attgtgccag atacggcgac 360
ggctataacc agttcgatta ctggggccag ggcaccctgg tgacagtgtc tagcgctagc 420
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 720
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380
agcctctccc tgtctccggg taaatga 1407
<210> 81
<211> 714
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 81
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagcgac 60
atcgtgatga cccagtcccc tgattctctg gccgtgtctc tgggagagag ggcaacaatc 120
aactgcagag tgtctgagag cgtggacagc tacggcaaca atttcatgca ctggtatcag 180
cagaagccag gccagccccc taagctgctg atctacaggg caagcaatct ggagtccgga 240
gtgccagacc ggttctccgg atctggaagc ggaaccgact tcaccctgac aatcagctcc 300
ctgcaggcag aggacgtggc cgtgtactat tgtcagcagt cctacgagga tccctatacc 360
tttggccagg gcacaaagct ggagatcaag cgaacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 480
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg ttag 714
<210> 82
<211> 714
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 82
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagcgac 60
gtggtcatga cccagtcccc cctgtctctg cctgtgacac tgggacagcc agcaagcatc 120
tcctgcaggg tgtctgagag cgtggattcc tacggcaaca atttcatgca ctggtttcag 180
cagaggccag gccagtctcc ccggagactg atctataggg caagcaacct ggagtccgga 240
gtgcctgacc ggttctccgg atctggaagc ggaaccgact tcaccctgaa gatctctagg 300
gtggaggcag aggacgtggg cgtgtactat tgtcagcaga gctacgagga tccatatacc 360
ttcggcggcg gcacaaaggt ggagatcaag cgaacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 480
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg ttag 714
<210> 83
<211> 714
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 83
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagcgac 60
atcgtgatga cccagtcccc tctgtctctg ccagtgacac ctggagagcc agcaagcatc 120
tcctgcaggg tgtctgagag cgtggattcc tacggcaaca atttcatgca ctggtatctg 180
cagaagcccg gccagtctcc tcagctgctg atctacaggg caagcaacct ggagtccgga 240
gtgccagaca gattctccgg atctggaagc ggaaccgact tcaccctgaa gatctctagg 300
gtggaggcag aggacgtggg cgtgtactat tgtcagcaga gctacgagga tccctatacc 360
tttggcggcg gcacaaaggt ggagatcaag cgaacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 480
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg ttag 714
<210> 84
<211> 714
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 84
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagcgag 60
atcgtgctga cccagtcccc agccacactg tctctgagcc caggagagag ggccaccctg 120
tcttgccgcg tgtccgagtc tgtggatagc tacggcaaca atttcatgca ctggtatcag 180
cagaagccag gacaggcacc taggctgctg atctacagag caagcaacct ggagtccgga 240
atcccagcac ggttcagcgg atccggctct ggcacagact ttaccctgac aatcagctcc 300
ctggagcctg aggatttcgc cgtgtactat tgtcagcagt cttacgagga cccatatacc 360
tttggcggcg gcacaaaggt ggagatcaag cgaacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 480
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg ttag 714
<210> 85
<211> 714
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 85
atgggctgga gctggatcct gctgttcctc ctgagcgtga cagcaggagt gcacagcgat 60
atccagatga cccagtctcc tagctccctg tccgcctctg tgggcgatag ggtgaccatc 120
acatgcagag tgagcgagtc cgtggactcc tacggcaaca atttcatgca ctggtatcag 180
cagaagcccg gcaaggcccc taagctgctg atctacaggg cctctaacct ggagagcgga 240
gtgccatccc ggttttctgg aagcggatcc ggaaccgact tcacctttac aatctctagc 300
ctgcagccag aggatatcgc cacatactat tgtcagcaga gctacgagga cccctatacc 360
ttcggcggcg gcacaaagct ggagatcaag cgaacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420
ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 480
aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540
aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600
accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660
catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg ttag 714
<210> 86
<211> 323
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 86
Met Ala Arg Gly Pro Gly Leu Ala Pro Pro Pro Leu Arg Leu Pro Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Val Leu Ala Ala Val Thr Gly His Thr Ala Ala Gln Asp
20 25 30
Asn Cys Thr Cys Pro Thr Asn Lys Met Thr Val Cys Ser Pro Asp Gly
35 40 45
Pro Gly Gly Arg Cys Gln Cys Arg Ala Leu Gly Ser Gly Met Ala Val
50 55 60
Asp Cys Ser Thr Leu Thr Ser Lys Cys Leu Leu Leu Lys Ala Arg Met
65 70 75 80
Ser Ala Pro Lys Asn Ala Arg Thr Leu Val Arg Pro Ser Glu His Ala
85 90 95
Leu Val Asp Asn Asp Gly Leu Tyr Asp Pro Asp Cys Asp Pro Glu Gly
100 105 110
Arg Phe Lys Ala Arg Gln Cys Asn Gln Thr Ser Val Cys Trp Cys Val
115 120 125
Asn Ser Val Gly Val Arg Arg Thr Asp Lys Gly Asp Leu Ser Leu Arg
130 135 140
Cys Asp Glu Leu Val Arg Thr His His Ile Leu Ile Asp Leu Arg His
145 150 155 160
Arg Pro Thr Ala Gly Ala Phe Asn His Ser Asp Leu Asp Ala Glu Leu
165 170 175
Arg Arg Leu Phe Arg Glu Arg Tyr Arg Leu His Pro Lys Phe Val Ala
180 185 190
Ala Val His Tyr Glu Gln Pro Thr Ile Gln Ile Glu Leu Arg Gln Asn
195 200 205
Thr Ser Gln Lys Ala Ala Gly Asp Val Asp Ile Gly Asp Ala Ala Tyr
210 215 220
Tyr Phe Glu Arg Asp Ile Lys Gly Glu Ser Leu Phe Gln Gly Arg Gly
225 230 235 240
Gly Leu Asp Leu Arg Val Arg Gly Glu Pro Leu Gln Val Glu Arg Thr
245 250 255
Leu Ile Tyr Tyr Leu Asp Glu Ile Pro Pro Lys Phe Ser Met Lys Arg
260 265 270
Leu Thr Ala Gly Leu Ile Ala Val Ile Val Val Val Val Val Ala Leu
275 280 285
Val Ala Gly Met Ala Val Leu Val Ile Thr Asn Arg Arg Lys Ser Gly
290 295 300
Lys Tyr Lys Lys Val Glu Ile Lys Glu Leu Gly Glu Leu Arg Lys Glu
305 310 315 320
Pro Ser Leu
<210> 87
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 87
Trp Ile Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln
1 5 10 15
Lys Phe Lys Gly
20
<210> 88
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 88
Trp Leu Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ala Ala
1 5 10 15
Phe Ile Ser
<210> 89
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 89
Trp Ile Gly Val Ile Ser Ser Tyr Tyr Gly Asp Ala Thr Tyr Asn Gln
1 5 10 15
Lys Phe Lys Gly
20
<210> 90
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 90
Trp Ile Gly Leu Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Thr Tyr Thr Gln
1 5 10 15
Lys Phe Lys Gly
20
<210> 91
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 91
Trp Ile Gly Val Ile Ser Thr Phe Tyr Gly Asp Ala Asn Tyr Asn Gln
1 5 10 15
Lys Phe Lys Gly
20
<210> 92
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 92
Arg Val Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Asn Phe Met His
1 5 10 15
<210> 93
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 93
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Ile His
1 5 10 15
<210> 94
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 94
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 95
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 95
Trp Met Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln
1 5 10 15
Lys Phe Lys Gly
20
<210> 96
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 96
Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 97
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 97
Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile Ser
1 5 10 15
<210> 98
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 98
Val Ile Ser Ser Tyr Tyr Gly Asp Ala Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 99
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 99
Leu Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Thr Tyr Thr Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 100
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 100
Val Ile Ser Thr Phe Tyr Gly Asp Ala Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 101
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 101
Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 102
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<400> 102
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 103
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = Trp 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa = Leu, Met, Ile, 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Gly 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa = Val 或 Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> (6)..(6)
<223> Xaa = Ser 或 Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> (7)..(7)
<223> Xaa = Ser 或 Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> Xaa = Tyr, Phe, 或 Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> (9)..(9)
<223> Xaa = Tyr 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (11)..(11)
<223> Xaa = Asp 或 Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)..(12)
<223> Xaa = Ala 或 Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> (13)..(13)
<223> Xaa = Thr, Ser, Asn, 或 Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> (15)..(15)
<223> Xaa = Asn 或 Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> (16)..(16)
<223> Xaa = Gln 或 Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (17)..(17)
<223> Xaa = Lys 或 Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> (19)..(19)
<223> Xaa = Lys, Ile, 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (20)..(20)
<223> Xaa = Gly, Ser, 或无
<400> 103
Xaa Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Phe Xaa Xaa
20
<210> 104
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = Arg 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa = Ala, Val, 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Ser 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (12)..(12)
<223> Xaa = Asn 或 Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> (14)..(14)
<223> Xaa = Met 或 Ile
<400> 104
Xaa Xaa Xaa Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Xaa Phe Xaa His
1 5 10 15
<210> 105
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = Leu, Arg, 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (2)..(2)
<223> Xaa = Leu 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Xaa = Ile, Val, 或无
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)..(4)
<223> Xaa = Tyr 或无
<400> 105
Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5 10

Claims (52)

1.一种特异性结合TROP2的抗滋养细胞表面抗原2(TROP2)的抗体或其抗原结合片段。
2.如权利要求1所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其中所述抗体特异性地结合表达于细胞表面的TROP2。
3.如权利要求1或2所述的抗TROP抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述细胞为癌细胞，并且其中所述癌细胞为乳腺癌细胞，宫颈癌细胞，结肠癌细胞，结直肠癌细胞，子宫内膜癌(EEC)细胞，食道癌细胞，胃部的癌细胞，胶质瘤细胞，肺癌细胞，肝胆管癌细胞，口腔鳞状细胞癌细胞，小型肺腺癌细胞，卵巢癌细胞，胰腺癌细胞，肾癌细胞，前列腺癌细胞，结外NK/T细胞淋巴瘤细胞、结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌细胞，甲状腺癌细胞，膀胱癌细胞或子宫癌细胞。
4.如权利要求1-3任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：
(i)包含GX1X2X3TX4YX5X6X7(SEQ ID NO:32)的CDR-H1，其中X1为Y或F；X2为T或S；X3为F或L；X4为D或R；X5为S或G；X6为I、M或V；X7为H或N；
(ii)包含WX1GX2IX3X4X5X6GX7X8X9YX10X11X12F(SEQ ID NO:33)的CDR-H2，其中X1为I、L或M，X2为V或L，X3为S或W，X4为S或T，X5为Y、F或G，X6为Y或无氨基酸，X7为D或N，X8为A或T，X9为T、S、N或D，X10为N或T，X11为Q或A，X12为K或A；或包含X1X2X3X4IX5X6X7X8GX9X10X11YX12X13X14FX15X16(SEQ ID NO:103)的CDR-H2，其中X1为W或无氨基酸，X2为L、M、I或无氨基酸，X3为G或无氨基酸，X4为V或L，X5为S或W，X6为S或T，X7为Y、F或G，X8为Y或无氨基酸，X9为D或N，X10为A或T，X11为T、S、N或D，X12为N或T，X13为Q或A，X14为K或A，X15为K、I或无氨基酸，X16为G、S或无氨基酸；
(iii)包含AX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10Y(SEQ ID NO:34)的CDR-H3，其中X1为L或R，X2为L、Y、R或E，X3为G或D，X4为D、R或无氨基酸，X5为A、G、N或Y，X6为Y或V，X7为N、D或G，X8为Y、Q、S或E，X9为F或M，X10为D或A；
(iv)包含ESVDSYGNX1FX2H(SEQ ID NO:35)的CDR-L1，其中X1为N或S，X2为M或I；或包含X1X2X3ESVDSYGNX4FX5H(SEQ ID NO:104)的CDR-L1，其中X1为R或无氨基酸，X2为A、V或无氨基酸，X3为S或无氨基酸，X4为N或S，X5为M或I；
(v)包含X1LX2YRASNLES(SEQ ID NO:36)的CDR-L2，其中X1为L或R，X2为I或V；或包含X1X2X3X4RASNLES(SEQ ID NO:105)的CDR-L2，其中X1为L、R或无氨基酸，X2为L或无氨基酸，X3为I、V或无氨基酸，X4为Y或无氨基酸；和
(vi)包含QQSX1EDPX2T(SEQ ID NO:37)的CDR-L3，其中X1为N或Y，和X2为P、R或Y。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：
i)包含SEQ ID NO:1-4中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-H1；
ii)包含SEQ ID NO:5-9、39、87-91、95和96-101中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；
iii)包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；
iv)包含SEQ ID NO:14-16和92-94中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；
v)包含SEQ ID NO:17、18、38和102中所示任一氨基酸序列或其包含至多约3个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和
vi)包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列或其包含至多约5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
6.如权利要求1-5中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：
i)包含SEQ ID NO:1-4中所示任一氨基酸序列的CDR-H1；
ii)包含SEQ ID NO:5-9、39、87-91、95和96-101中所示任一氨基酸序列的CDR-H2；
iii)包含SEQ ID NO:10-13中所示任一氨基酸序列的CDR-H3；
iv)包含SEQ ID NO:14-16和92-94中所示任一氨基酸序列的CDR-L1；
v)包含SEQ ID NO:17、18、38和102中所示任一氨基酸序列的CDR-L2；和
vi)包含SEQ ID NO:19-21中所示任一氨基酸序列的CDR-L3。
7.如权利要求1-6中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：i)包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:5、87或96中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:10所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:14或92所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:19所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
8.如权利要求1-6中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：i)包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:6、88或97中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:11所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:15或93所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:20所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
9.如权利要求1-6中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：i)包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:7、89或98中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:12所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:16或94所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:18或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:21所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
10.如权利要求1-6中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：i)包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:8、90或99中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:12所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:16或94所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:18或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:21所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
11.如权利要求1-6中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：i)包含SEQ ID NO:4所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:9、91或100中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:13示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:16或94所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:21所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
12.如权利要求1-6中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：i)包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:39、95或101中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:10所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:14或92所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:17或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:19所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
13.如权利要求1-6中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：i)包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H1；ii)包含SEQ ID NO:39、95或101中所示任一氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H2；iii)包含SEQ ID NO:10所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-H3；iv)包含SEQ ID NO:14或92所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L1；v)包含SEQ ID NO:38或102所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L2；和vi)包含SEQ ID NO:19所示氨基酸序列或其包含至多5个氨基酸取代的变体的CDR-L3。
14.如权利要求1-13中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：
i)包含如SEQ ID NO1:1所示序列，SEQ ID NO:5、87或96所示序列，和如SEQ ID NO:10所示序列的重链可变域(VH)；以及包含如SEQ ID NO:14或92，如SEQ ID NO:17或102所示序列，和如SEQ ID NO:19所示序列的轻链可变域(VL)；
ii)包含如SEQ ID NO:2所示序列，SEQ ID NO:6、88或97所示序列，和如SEQ ID NO:11所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:15或93所示序列，如SEQ ID NO:17或102所示序列，和如SEQ ID NO:20所示序列的VL；
iii)包含如SEQ ID NO:3所示序列，如SEQ ID NO:7、89或98所示序列，和如SEQ ID NO:12所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:16或94所示序列，如SEQ ID NO:18或102所示序列，和如SEQ ID NO:21所示序列的VL；
iv)包含如SEQ ID NO:3所示序列，如SEQ ID NO:8、90或99所示序列和如SEQ ID NO:12所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:16或94所示序列，如SEQ ID NO:18或102所示序列，和如SEQ ID NO:21所示序列的VL；
v)包含如SEQ ID NO:4所示序列，如SEQ ID NO:9、91或100所示序列和如SEQ ID NO:13所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:16或94所示序列，如SEQ ID NO:17或102所述序列，和如SEQ ID NO:21所示序列的VL；
vi)包含如SEQ ID NO:1所示序列，如SEQ ID NO:39、95或101所示序列和如SEQ ID NO:10所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:14或92所示序列，如SEQ ID NO:17或102所示序列，和如SEQ ID NO:19所示序列的VL；
vi)包含如SEQ ID NO:1所示序列，如SEQ ID NO:39、95或101所示序列和如SEQ ID NO:10所示序列的VH；以及包含如SEQ ID NO:14或92所示序列，如SEQ ID NO:38或102所示序列，和如SEQ ID NO:19所示序列的VL。
15.如权利要求1-14中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：
i)包含选自如SEQ ID NO:22-26和40-45中所示任一序列的的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH和
ii)包含选自如SEQ ID NO:27-31和46-51中所示任一序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL。
16.如权利要求1-15中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：
i)包含与SEQ ID NO:22-26和40-45中所示任一序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列的VH，和
ii)包含与SEQ ID NO:27-31和46-51中所示任一序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列的VL。
17.如权利要求16所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：
i)包含SEQ ID NO:22-26和40-45中任一氨基酸序列的VH，和
ii)包含SEQ ID NO:27-31和46-51中任一氨基酸序列的VL。
18.如权利要求17所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其包括包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列的VL。
19.如权利要求17所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其包括包含氨基酸序列SEQID NO:23的VH和包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的VL。
20.如权利要求17所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其包括包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的VL。
21.如权利要求17所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其包括包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的VL。
22.如权利要求17所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其包括包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列的VL。
23.如权利要求17所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其包括包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的VL。
24.如权利要求17所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括：
i)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的VL；
ii)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VL；
iii)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；
iv)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；
v)包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL；
vi)包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的VL；
vii)包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VL；
viii)包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；
ix)包如SEQ ID NO:41所示的含氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；
x)包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL；
xi)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的VL；
xii)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VL；
xiii)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；
xiv)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；
xv)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL；
xvi)包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的VL；
xvii)包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VL；
xviii)包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；
xix)包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；
xx)包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL；
xxi)包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列的VL；
xxii)包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的VL；
xxiii)包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的VL；
xxiv)包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的VL；或
xxv)包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的VH和包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的VL。
25.一种抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其与如权利要求1-24中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段竞争结合TROP2。
26.一种抗TROP2抗体或其抗原结合片段，其与如权利要求1-24中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段特异性结合相同的TROP2表位。
27.如权利要求1-26中任一项所述的抗TROP2抗体，其特征在于，其包括Fc结构域，其中所述抗体是全长抗体。
28.如利要求27所述的抗原结合片段的抗TROP2抗体，其特征在于，其包括人IgG Fc结构域。
29.如利要求28所述的抗TROP2抗体，其特征在于，所述人IgG Fc结构域为IgGl、IgG2、IgG3或IgG4 Fc结构域。
30.如利要求29所述的抗TROP2抗体，其特征在于，所述人IgG Fc结构域为IgG1Fc结构域。
31.如利要求30所述的抗TRO2抗体，其特征在于，所述人IgGl Fc结构域包含如SEQ IDNO:64或65所示的氨基酸序列。
32.权利要求1-31中任一项所述的分离的抗-TROP2抗体，其特征在于，所述抗-TROP2抗体为嵌合的、人源的或人源化的。
33.如利要求1-26中任一项所述的分离的抗TROP2抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段选自由以下组成的组：Fab、Fab'、F(ab)'2、Fab'-SH、单链Fv(scFv)、Fv片段和线性抗体。
34.一种编码如权利要求1-33中任一项所述的分离的抗TROP2抗体或其抗原结合片段的核酸。
35.一种包括如权利要求34所述的核酸的载体。
36.一种包含如权利要求34所述的核酸或如权利要求35所述的载体的宿主细胞。
37.一种产生抗TROP2抗体或其抗原结合片段的方法，其包括：
a)在有效表达抗TROP2抗体或其抗原结合片段的条件下培养如权利要求36所述的宿主细胞；和
b)回收所述宿主细胞表达的抗TROP2抗体或其抗原结合片段。
38.一种抗体-药物偶联物，其包含与偶联物部分特异性偶联的如权利要求1-33中任一项所述的抗TROP2抗体或其抗原结合片段。
39.如权利要求38所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述偶联物部分包括选自下组中的活性部分：改善抗TROP2抗体或其抗原结合片段的药代动力学特性的部分、治疗性部分和诊断部分，或标记物。
40.如权利要求39所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述活性部分为包括毒素的治疗性部分。
41.如权利要求40所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述毒素选自以下组成的组：澳瑞他汀、白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-八叠球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、苦瓜抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、白树毒素、丝林霉素、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素、单端孢霉烯族化合物、半胱氨酸结模体抑制肽和芋螺毒素。
42.如权利要求39所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述活性部分为标记物，并且其中所述标记物选自由以下组成的组：放射性同位素、荧光染料和酶。
43.一种药物组合物，其包含如权利要求39-41中任一项所述的抗体-药物偶联物和药学上可接受的载体。
44.如权利要求39-42中任一项所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段和所述偶联物部分通过接头偶联。
45.如权利要求44所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述接头是可降解的接头。
46.如权利要求45所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述接头是不可降解的接头。
47.如权利要求39-46所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段通过抗体上内源性受体谷氨酰胺残基偶联到所述偶联物部分。
48.一种治疗个体癌症的方法，包括向所述个体施用有效量的如权利要求39-41和44-47任一项所述的抗体-药物偶联物，或如权利要求43所述的药物组合物。
49.如权利要求48所述的方法，其特征在于，所述癌症选自实体瘤，乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)，食道癌，胃部的癌，神经胶质瘤，肺癌，肝胆管癌，口腔鳞状细胞癌，小型肺腺癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌，前列腺癌，结外NK/T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞性淋巴瘤鼻型(ENKTL)，胃癌，甲状腺癌，膀胱癌或子宫癌。
50.如权利要求48或49所述的方法，其特征在于，所述个体进一步被施用选自下组中的治疗剂：抗肿瘤剂、化学治疗剂、生长抑制剂和细胞毒剂。
51.一种检测个体源样品中TROP2蛋白的方法，包括将如权利要求1-33中任一项所述的抗TROP抗体或其抗原结合片段或如权利要求43所述的抗体-药物偶联物与所述样品接触并检测与TROP2蛋白结合的所述抗TROP2抗体。
52.如权利要求51所述的方法，其特征在于，所述抗TROP2抗体或其抗原结合片段用于免疫组化分析(IHC)或ELISA分析。
CN202080022854.3A 2019-03-19 2020-03-18 抗滋养细胞表面抗原2(trop2)的抗体及包含其的抗体-药物偶联物 Pending CN113631577A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962820831P 2019-03-19 2019-03-19
US62/820,831 2019-03-19
PCT/US2020/023421 WO2020191092A1 (en) 2019-03-19 2020-03-18 Anti-trophoblast cell surface antigen 2 (trop2) antibodies and antibody drug conjugates comprising same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113631577A true CN113631577A (zh) 2021-11-09

Family

ID=72521176

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080022854.3A Pending CN113631577A (zh) 2019-03-19 2020-03-18 抗滋养细胞表面抗原2(trop2)的抗体及包含其的抗体-药物偶联物

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20220153862A1 (zh)
EP (1) EP3941945A4 (zh)
CN (1) CN113631577A (zh)
WO (1) WO2020191092A1 (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112321715B (zh) * 2020-11-03 2022-05-10 博奥信生物技术（南京）有限公司 抗trop2纳米抗体及其制备方法和应用
CN114685669A (zh) * 2020-12-30 2022-07-01 和铂医药(苏州)有限公司 结合trop2的抗体及其用途
CN116761824B (zh) * 2021-01-18 2024-06-21 上海药明合联生物技术有限公司 工程化抗-trop2抗体及其抗体-药物偶联物
US20240207432A1 (en) * 2021-04-21 2024-06-27 Biosion Inc. Antibodies binding trop2 and uses thereof
CN115558026A (zh) * 2021-07-02 2023-01-03 和迈生物科技有限公司 抗trop2单域抗体及其应用
WO2023164513A2 (en) * 2022-02-23 2023-08-31 Janux Therapeutics, Inc. Optimized antibodies targeting trop2 and uses thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016172427A1 (en) * 2015-04-22 2016-10-27 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells
EP3088419A1 (en) * 2013-12-25 2016-11-02 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-trop2 antibody-drug conjugate
CN107406508A (zh) * 2014-12-04 2017-11-28 阿布鲁佐治疗诊断有限公司 人源化的抗trop‑2单克隆抗体及其应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9707302B2 (en) * 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
EP2393512B1 (en) * 2009-02-05 2016-10-26 ONCOXX Biotech s.r.l. Anti-trop-2 monoclonal antibodies and uses thereof in the treatment and diagnosis of tumors
SG11201401699WA (en) * 2011-11-11 2014-09-26 Rinat Neuroscience Corp Antibodies specific for trop-2 and their uses
CN107446050A (zh) * 2017-08-11 2017-12-08 百奥泰生物科技(广州)有限公司 Trop2阳性疾病治疗的化合物及方法
CN110903395A (zh) * 2018-09-14 2020-03-24 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗体、偶联物及其制备方法和用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3088419A1 (en) * 2013-12-25 2016-11-02 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-trop2 antibody-drug conjugate
CN107406508A (zh) * 2014-12-04 2017-11-28 阿布鲁佐治疗诊断有限公司 人源化的抗trop‑2单克隆抗体及其应用
WO2016172427A1 (en) * 2015-04-22 2016-10-27 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020191092A1 (en) 2020-09-24
EP3941945A4 (en) 2023-03-29
EP3941945A1 (en) 2022-01-26
US20220153862A1 (en) 2022-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112166123B (zh) 抗紧密连接蛋白18.2抗体
JP7472056B2 (ja) ＦｃＲＨ５に対するヒト化親和性成熟抗体及び使用方法
KR102225178B1 (ko) 항-타우 항체 및 그의 용도
KR102665542B1 (ko) T 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자 CD3 ABD 엽산 수용체 1(FolR1) 및 PD-1 축 결합 길항물질의 조합 요법
CN113631577A (zh) 抗滋养细胞表面抗原2(trop2)的抗体及包含其的抗体-药物偶联物
KR102482710B1 (ko) 항-pd-1 항체, 이의 생산 방법 및 사용 방법
KR102344901B1 (ko) 항-FcRn 항체
DK2170389T3 (en) Humanized antibodies against amyloid beta
JP6093692B2 (ja) 抗ｌｒｐ６抗体
KR20100113589A (ko) 폰 빌레브란트 인자에 특이적인 인간화 항체
CN114981303B (zh) 人源化抗Claudin18.2（CLDN18.2）抗体
US20230183343A1 (en) Anti-cd96 antibodies and methods of use thereof
KR20230017841A (ko) Cd3 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 이의 용도
RU2787779C2 (ru) Антитела к тау и их применения
US12030947B2 (en) Humanized and affinity matured antibodies to FcRH5 and methods of use
US20230295310A1 (en) CD3 T-Cell Engagers and Methods of Use
NZ737942B2 (en) Humanized and affinity matured antibodies to fcrh5 and methods of use

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40063743

Country of ref document: HK

CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Shan Yuxi

Inventor after: Feng Lixin

Inventor after: R. J. Browder

Inventor after: Lisa Alan

Inventor after: Yang Rubin

Inventor before: Shan Yuxi

Inventor before: Feng Lixin

Inventor before: R. J. Browder

Inventor before: Lisa Alan

Inventor before: Yang Rubin