JP2015504679A5

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Publication number: JP2015504679A5
Application number: JP2014552353A
Authority: JP
Filing date: 2013-01-12
Publication date: 2016-03-03
Anticipated expiration: 2033-01-12

Description

別の態様では、本発明は、有効量のＶＷＦ断片、キメラタンパク質、ポリヌクレオチドまたは１組のポリヌクレオチドを投与することを含む、治療を必要とする対象の出血性疾患または障害を治療する方法に関し、出血性疾患または障害は、出血性血液凝固障害、関節血症、筋肉出血、口腔出血、出血、筋肉内への出血、口腔出血、外傷、頭部外傷、消化器系出血、脳内出血、腹腔内出血、胸腔内出血、骨折、中枢神経系出血、咽頭後隙内出血、腹膜後隙内出血および腸腰筋外筒（illiopsoassheath）内出血からなる群より選択される。他の実施形態では、治療は予防的か応需型である。さらに他の実施形態では、本発明は、２Ｎ型フォンウィルブランド病関連の疾患または障害を治療する方法であり、治療を必要とする患者に有効量のＶＷＦ断片、キメラタンパク質、ポリヌクレオチドまたは１組のポリヌクレオチドを投与することを含み、疾患や障害が治療される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
共有結合により連結された第ＶＩＩＩ因子（「ＦＶＩＩＩ」）タンパク質と付加部分（ＡＭ）を含むキメラタンパク質であって、前記付加部分は内因性ＶＷＦが前記ＦＶＩＩＩタンパク質に結合するのを阻害または防止する、キメラタンパク質。
（項目２）
前記共有結合により、前記付加部分が内因性ＶＷＦの存在下で前記ＦＶＩＩＩタンパク質から解離することが防止される、項目１に記載のキメラタンパク質。
（項目３）
前記共有結合がペプチド結合である、項目１または２に記載のキメラタンパク質。
（項目４）
前記共有結合がジスルフィド結合である、項目１から３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目５）
前記共有結合が、前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記付加部分の間のリンカーである、項目１から４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目６）
前記付加部分が、前記ＦＶＩＩＩタンパク質がＶＷＦクリアランス経路を通じて排除されるのを防止する、項目１から５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７）
前記付加部分が、前記ＦＶＩＩＩタンパク質上のＶＷＦ結合部位を遮蔽またはブロックすることで、内因性ＶＷＦが前記ＦＶＩＩＩタンパク質に結合するのを防止または阻害する、項目１から６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目８）
前記ＶＷＦ結合部位が、前記ＦＶＩＩＩタンパク質のＡ３ドメインまたはＣ２ドメイン、またはＡ３ドメインとＣ２ドメインの両方に位置する、項目７に記載のキメラタンパク質。
（項目９）
前記ＶＷＦ結合部位が、配列番号１６のアミノ酸１６６９〜１６８９と２３０３〜２３３２に対応するアミノ酸配列である、項目８に記載のキメラタンパク質。
（項目１０）
前記キメラタンパク質がＦＶＩＩＩ半減期制限因子を含まない、項目１から９のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１１）
前記ＦＶＩＩＩ半減期制限因子は全長ＶＷＦタンパク質または成熟ＶＷＦタンパク質を含む、項目１０に記載のキメラタンパク質。
（項目１２）
ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期が、内因性ＶＷＦの存在下で前記ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期限界を超えて延長される、項目１から１１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１３）
前記付加部分が少なくとも１つのＶＷＦ様ＦＶＩＩＩ保護特性を有する、項目１から１２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１４）
前記ＶＷＦ様ＦＶＩＩＩ保護特性が、前記ＦＶＩＩＩタンパク質を１または複数のプロテアーゼ切断から保護すること、前記ＦＶＩＩＩタンパク質を活性化から保護すること、前記ＦＶＩＩＩタンパク質の重鎖および／または軽鎖を安定させることまたは前記ＦＶＩＩＩタンパク質が１または複数のスカベンジャー受容体により排除されるのを防止することを含む、項目１３に記載のキメラタンパク質。
（項目１５）
前記付加部分がポリペプチド、非ポリペプチド部分またはその両方を含む、項目１から１４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１６）
前記ポリペプチドが、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、少なくとも約７０、少なくとも約８０、少なくとも約９０、少なくとも約１００、少なくとも約１１０、少なくとも約１２０、少なくとも約１３０、少なくとも約１４０、少なくとも約１５０、少なくとも約２００、少なくとも約２５０、少なくとも約３００、少なくとも約３５０、少なくとも約４００、少なくとも約４５０、少なくとも約５００、少なくとも約５５０、少なくとも約６００、少なくとも約６５０、少なくとも約７００、少なくとも約７５０、少なくとも約８００、少なくとも約８５０、少なくとも約９００、少なくとも約９５０または少なくとも約１０００アミノ酸長のアミノ酸配列を含む、項目１５に記載のキメラタンパク質。
（項目１７）
前記付加部分が、ＶＷＦ断片、イムノグロブリン定常領域またはその一部分、アルブミンまたはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンまたはその断片、またはそれらの任意の組合せを含む、項目１から１６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１８）
前記非ポリペプチド部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、それらの誘導体またはそれらの任意の組合せを含む、項目１７に記載のキメラタンパク質。
（項目１９）
前記付加部分が、ＶＷＦのＤ’ドメインとＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含み、前記ＶＷＦ断片は共有結合に加えて非共有結合により前記ＦＶＩＩＩタンパク質と結合している、項目１７に記載のキメラタンパク質。
（項目２０）
前記ＶＷＦ断片がモノマーである、項目１７または１９に記載のキメラタンパク質。
（項目２１）
前記ＶＷＦ断片が、互いの１または複数に連結した２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＶＷＦ断片を含む、項目１９または２０に記載のキメラタンパク質。
（項目２２）
前記ＶＷＦ断片が、少なくとも１つの異種部分（Ｈ１）と、随意のリンカーを前記ＶＷＦ断片と前記異種部分（Ｈ１）の間に含む、項目１から２１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目２３）
前記ＶＷＦ断片に連結した前記少なくとも１異種部分（Ｈ１）が、ポリペプチド、非ポリペプチド部分またはその両方を含む、項目２２に記載のキメラタンパク質。
（項目２４）
前記異種部分（Ｈ１）がＦＶＩＩＩタンパク質の半減期を延長する部分を含む、項目２２または２３に記載のキメラタンパク質。
（項目２５）
前記異種部分（Ｈ１）が、イムノグロブリン定常領域またはその一部分、アルブミンまたはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンまたはその断片、またはそれらの任意の組合せを含む、項目２４に記載のキメラタンパク質。
（項目２６）
前記非ポリペプチド部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、それらの誘導体、またはそれらの任意の組合せを含む、項目２４に記載のキメラタンパク質。
（項目２７）
前記異種部分（Ｈ１）が、第１Ｆｃ領域を含む、項目２５に記載のキメラタンパク質。
（項目２８）
前記異種部分（Ｈ１）が、少なくとも約５０アミノ酸、少なくとも約１００アミノ酸、少なくとも約１５０アミノ酸、少なくとも約２００アミノ酸、少なくとも約２５０アミノ酸、少なくとも約３００アミノ酸、少なくとも約３５０アミノ酸、少なくとも約４００アミノ酸、少なくとも約４５０アミノ酸、少なくとも約５００アミノ酸、少なくとも約５５０アミノ酸、少なくとも約６００アミノ酸、少なくとも約６５０アミノ酸、少なくとも約７００アミノ酸、少なくとも約７５０アミノ酸、少なくとも約８００アミノ酸、少なくとも約８５０アミノ酸、少なくとも約９００アミノ酸、少なくとも約９５０アミノ酸または少なくとも約１０００アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む、項目２４に記載のキメラタンパク質。
（項目２９）
前記キメラタンパク質が、前記ＶＷＦ断片と前記異種部分（Ｈ１）の間に切断可能リンカーであるリンカーを含む、項目２２に記載のキメラタンパク質。
（項目３０）
前記切断可能リンカーが、１または複数の切断可能部位を含む、項目２９に記載のキメラタンパク質。
（項目３１）
前記切断可能リンカーが、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、カリクレイン、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、第ＩＩａ因子（トロンビン）、エラスターゼ−２、グランザイム−Ｂ、ＴＥＶ、エンテロキナーゼ、プロテアーゼ３Ｃ、ソルターゼＡ、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１７、およびＭＭＰ−２０からなる群より選択されるプロテアーゼにより切断されることが可能である、項目29から30のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目３２）
前記切断可能リンカーが、ＴＬＤＰＲＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦＷＥＤＥＥＫ（配列番号５６）を含む、項目２９に記載のキメラタンパク質。
（項目３３）
前記切断可能リンカーが、ＲＲＲＲ（配列番号５２）、ＲＫＲＲＫＲ（配列番号５３）、ＲＲＲＲＳ（配列番号５４）、ＴＱＳＦＮＤＦＴＲ（配列番号４７）、ＳＶＳＱＴＳＫＬＴＲ（配列番号４８）、ＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲ（配列番号４９）、ＴＴＫＩＫＰＲ（配列番号５０）、ＬＶＰＲＧ（配列番号５５）、ＡＬＲＰＲＶＶＧＧＡ（配列番号５１）、ＫＬＴＲＡＥＴ（配列番号２９）、ＤＦＴＲＶＶＧ（配列番号３０）、ＴＭＴＲＩＶＧＧ（配列番号３１）、ＳＰＦＲＳＴＧＧ（配列番号３２）、ＬＱＶＲＩＶＧＧ（配列番号３３）、ＰＬＧＲＩＶＧＧ（配列番号３４）、ＩＥＧＲＴＶＧＧ（配列番号３５）、ＬＴＰＲＳＬＬＶ（配列番号３６）、ＬＧＰＶＳＧＶＰ（配列番号３７）、ＶＡＧＤＳＬＥＥ（配列番号３８）、ＧＰＡＧＬＧＧＡ（配列番号３９）、ＧＰＡＧＬＲＧＡ（配列番号４０）、ＡＰＬＧＬＲＬＲ（配列番号４１）、ＰＡＬＰＬＶＡＱ（配列番号４２）、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号４３）、ＤＤＤＫＩＶＧＧ（配列番号４４）、ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号４５）およびＬＰＫＴＧＳＥＳ（配列番号４６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または複数の切断部位を含む、項目２９から３２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目３４）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質がＦＶＩＩＩおよび少なくとも１つの異種部分（Ｈ２）を含む、項目１から３３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目３５）
前記異種部分（Ｈ２）が、前記ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期を延長できる、項目３４に記載のキメラタンパク質。
（項目３６）
前記異種部分（Ｈ２）が、ポリペプチド、非ポリペプチド部分またはその両方を含む、項目３４または３５に記載のキメラタンパク質。
（項目３７）
前記異種部分（Ｈ２）が、イムノグロブリン定常領域またはその一部分、アルブミンまたはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンまたはその断片、またはそれらの任意の組合せを含む、項目３４または３５に記載のキメラタンパク質。
（項目３８）
前記非ポリペプチド部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、その誘導体、またはそれらの任意の組合せを含む、項目３４または３５に記載のキメラタンパク質。
（項目３９）
前記異種部分（Ｈ２）が、第２Ｆｃ領域を含む、項目３４に記載のキメラタンパク質。
（項目４０）
前記ＶＷＦ断片、第１異種部分およびリンカーを含む第１ポリペプチド鎖と、前記ＦＶＩＩＩタンパク質と第２異種部分を含む第２ポリペプチド鎖を含み、前記第１ポリペプチド鎖と前記第２ポリペプチド鎖が互いに共有結合により連結している、項目１から３９のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目４１）
前記第１異種部分と前記第２異種部分が互いに共有結合により連結しており、前記共有結合は前記第１ポリペプチド鎖中の前記ＶＷＦ断片が内因性ＶＷＦインビボで置換されるのを防止する、項目４０に記載のキメラタンパク質。
（項目４２）
前記共有結合がジスルフィド結合である、項目４１に記載のキメラタンパク質。
（項目４３）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質がリンカーにより前記第２異種部分（Ｈ２）と連結している、項目３４から４２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目４４）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記第２異種部分の間の前記リンカーが切断可能リンカーである、項目４３に記載のキメラタンパク質。
（項目４５）
前記第１異種部分（Ｈ１）と前記第２異種部分（Ｈ２）がリンカーで連結されている、項目３４から４4に記載のキメラタンパク質。
（項目４６）
前記リンカーがｓｃＦｃリンカーである、項目４５に記載のキメラタンパク質。
（項目４７）
前記ｓｃＦｃリンカーがプロセス可能なリンカーである、項目４６に記載のキメラタンパク質。
（項目４８）
以下からなる群より選択される式を含む、項目１〜４７に記載のキメラタンパク質：（ａ）Ｖ−Ｌ１−Ｈ１−Ｌ３−Ｃ−Ｌ２−Ｈ２、
（ｂ）Ｈ２−Ｌ２−Ｃ−Ｌ３−Ｈ１−Ｌ１−Ｖ、
（ｃ）Ｃ−Ｌ２−Ｈ２−Ｌ３−Ｖ−Ｌ１−Ｈ１、
（ｄ）Ｈ１−Ｌ１−Ｖ−Ｌ３−Ｈ２−Ｌ２−Ｃ、
（ｅ）Ｈ１−Ｌ１−Ｖ−Ｌ３−Ｃ−Ｌ２−Ｈ２、
（ｆ）Ｈ２−Ｌ２−Ｃ−Ｌ３−Ｖ−Ｌ１−Ｈ１、
（ｇ）Ｖ−Ｌ１−Ｈ１−Ｌ３−Ｈ２−Ｌ２−Ｃ、
（ｈ）Ｃ−Ｌ２−Ｈ２−Ｌ３−Ｈ１−Ｌ１−Ｖ、
（ｉ）Ｈ２−Ｌ３−Ｈ１−Ｌ１−Ｖ−Ｌ２−Ｃ、
（ｊ）Ｃ−Ｌ２−Ｖ−Ｌ１−Ｈ１−Ｌ３−Ｈ２、
（ｋ）Ｖ−Ｌ２−Ｃ−Ｌ１−Ｈ１−Ｌ３−Ｈ２および
（ｌ）Ｈ２−Ｌ３−Ｈ１−Ｌ１−Ｃ−Ｌ２−Ｖ
（式中、
ＶはＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含み；
Ｌ１は随意のリンカーであり；
Ｌ２は随意のリンカーであり；
（ａ）〜（ｆ）のＬ３は随意のリンカーであり、
（ｇ）〜（ｌ）のＬ３は随意のｓｃＦｃリンカーであり、
Ｈ１とＨ２はそれぞれ随意の異種部分を含み；
ＣはＦＶＩＩＩタンパク質を含み、
（−）はペプチド結合または１または複数のアミノ酸である）。
（項目４９）
以下からなる群より選択される式を含む、項目１〜４７に記載のキメラタンパク質：（ｍ）Ｖ−Ｌ１−Ｈ１：Ｈ２−Ｌ２−Ｃ、
（ｎ）Ｖ−Ｌ１−Ｈ１：Ｃ−Ｌ２−Ｈ２；
（ｏ）Ｈ１−Ｌ１−Ｖ：Ｈ２−Ｌ２−Ｃ；
（ｐ）Ｈ１−Ｌ１−Ｖ：Ｃ−Ｌ２−Ｈ２；
（ｑ）Ｖ：Ｃ−Ｌ１−Ｈ１：Ｈ２；
（ｒ）Ｖ：Ｈ１−Ｌ１−Ｃ：Ｈ２；
（ｓ）Ｈ２：Ｈ１−Ｌ１−Ｃ：Ｖ、
（ｔ）Ｃ：Ｖ−Ｌ１−Ｈ１：Ｈ２、および
（ｕ）Ｃ：Ｈ１−Ｌ１−Ｖ：Ｈ２、
（式中、
ＶはＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片であり；
Ｌ１は随意のリンカーであり；
Ｌ２は随意のリンカーであり；
Ｈ１は第１異種部分であり；
Ｈ２は第２異種部分であり；
ＣはＦＶＩＩＩタンパク質であり；
（−）はペプチド結合または１または複数のアミノ酸であり、
（：）は前記Ｈ１と前記Ｈ２の間の共有結合である）。
（項目５０）
前記ＶＷＦ断片と前記ＦＶＩＩＩタンパク質が前記共有結合、前記ペプチド結合または前記１または複数のアミノ酸に加えて非共有結合により互いに結合している、項目４８および４９に記載のキメラタンパク質。
（項目５１）
前記ＶＷＦ断片が、内因性ＶＷＦが前記ＦＶＩＩＩタンパク質と結合するのを阻害または防止する、項目４８および４９に記載のキメラタンパク質。
（項目５２）
前記Ｈ１と前記Ｈ２の間の前記共有結合が、ジスルフィド結合である、項目４９から５１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目５３）
Ｈ１がポリペプチド、非ポリペプチド部分またはその両方を含む、項目４８から５２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目５４）
Ｈ１が、イムノグロブリン定常領域またはその一部分、アルブミンまたはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンまたはその断片、またはそれらの任意の組合せを含む、項目５３に記載のキメラタンパク質。
（項目５５）
Ｈ１が、第１Ｆｃ領域を含む、項目５３または５４に記載のキメラタンパク質。
（項目５６）
前記非ポリペプチド部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、その誘導体、またはそれらの任意の組合せを含む、項目５３に記載のキメラタンパク質。
（項目５７）
Ｈ２が、ポリペプチド、非ポリペプチド部分またはその両方を含む、項目４８から５6のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目５８）
Ｈ２が、イムノグロブリン定常領域またはその一部分、アルブミンまたはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンまたはその断片、またはそれらの任意の組合せを含む、項目５７に記載のキメラタンパク質。
（項目５９）
Ｈ２が第２Ｆｃ領域を含む、項目４８から５８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目６０）
前記非ポリペプチド部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、それらの誘導体、またはそれらの任意の組合せ．を含む、項目５９に記載のキメラタンパク質。
（項目６１）
前記共有結合はジスルフィド結合である、項目６０に記載のキメラタンパク質。
（項目６２）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が第３異種部分（Ｈ３）を含む、項目１から６１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目６３）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が第４異種部分（Ｈ４）を含む、項目１から６２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目６４）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が第５異種部分（Ｈ５）を含む、項目１から６３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目６５）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が第６異種部分（Ｈ６）を含む、項目１から６４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目６６）
前記第３異種部分（Ｈ３）、前記第４異種部分（Ｈ４）、前記第５異種部分（Ｈ５）、前記第６異種部分（Ｈ６）のうちの１または複数がＦＶＩＩＩタンパク質の半減期を延長できる、項目6１から６５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目６７）
前記第３異種部分（Ｈ３）、前記第４異種部分（Ｈ４）、前記第５異種部分（Ｈ５）、前記第６異種部分（Ｈ６）がＦＶＩＩＩのＣ末端またはにＮ末端に連結しているか、またはＦＶＩＩＩの２つのアミノ酸の間に挿入されている、項目１から６６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目６８）
前記第３異種部分（Ｈ３）、前記第４異種部分（Ｈ４）、前記第５異種部分（Ｈ５）、前記第６異種部分（Ｈ６）のうちの１または複数が、少なくとも約５０アミノ酸、少なくとも約１００アミノ酸、少なくとも約１５０アミノ酸、少なくとも約２００アミノ酸、少なくとも約２５０アミノ酸、少なくとも約３００アミノ酸、少なくとも約３５０アミノ酸、少なくとも約４００アミノ酸、少なくとも約４５０アミノ酸、少なくとも約５００アミノ酸、少なくとも約５５０アミノ酸、少なくとも約６００アミノ酸、少なくとも約６５０アミノ酸、少なくとも約７００アミノ酸、少なくとも約７５０アミノ酸、少なくとも約８００アミノ酸、少なくとも約８５０アミノ酸、少なくとも約９００アミノ酸、少なくとも約９５０アミノ酸または少なくとも約１０００アミノ酸を含むアミノ酸配列を含む、項目１から６７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目６９）
前記ＦＶＩＩＩの半減期が、野生型ＦＶＩＩＩよりも少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍または少なくとも約１２倍長く延長される、項目１から６８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７０）
ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期が、少なくとも約１０時間、少なくとも約１１時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１３時間、少なくとも約１４時間、少なくとも約１５時間、少なくとも約１６時間、少なくとも約１７時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約１９時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２１時間、少なくとも約２２時間、少なくとも約２３時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約３６時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間または少なくとも約１０８時間である、項目１から６９のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７１）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記第２異種部分の間の前記リンカーまたは前記ＶＷＦ断片と前記第１異種部分の間の前記リンカーが、前記リンカーのＮ末端領域に第１切断部位（Ｐ１）を、前記リンカーのＣ末端領域に第２切断部位（Ｐ２）を、またはその両方を含む、項目２２から７０のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７２）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記第２異種部分の間の前記リンカー、前記ＶＷＦ断片と前記第１異種部分の間の前記リンカーまたはその両方が、ＴＬＤＰＲＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦＷＥＤＥＥＫ（配列番号５６）を含む、項目２２から７１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７３）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記第２異種部分の間の前記リンカー、前記ＶＷＦ断片と前記第１異種部分の間の前記リンカーまたはその両方が、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、カリクレイン、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、第ＩＩａ因子（トロンビン）、エラスターゼ−２、グランザイム−Ｂ、ＴＥＶ、エンテロキナーゼ、プロテアーゼ３Ｃ、ソルターゼＡ、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１７およびＭＭＰ−２０からなる群より選択されるプロテアーゼにより切断される、項目２２から７１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７４）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記第２異種部分の間の前記リンカー、前記ＶＷＦ断片と前記第１異種部分の間の前記リンカーまたはその両方が、ＲＲＲＲ（配列番号５２）、ＲＫＲＲＫＲ（配列番号５３）、ＲＲＲＲＳ（配列番号５４）、ＴＱＳＦＮＤＦＴＲ（配列番号４７）、ＳＶＳＱＴＳＫＬＴＲ（配列番号４８）、ＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲ（配列番号４９）、ＴＴＫＩＫＰＲ（配列番号５０）、ＬＶＰＲＧ（配列番号５５）、ＡＬＲＰＲＶＶＧＧＡ（配列番号５１）、ＫＬＴＲＡＥＴ（配列番号２９）、ＤＦＴＲＶＶＧ（配列番号３０）、ＴＭＴＲＩＶＧＧ（配列番号３１）、ＳＰＦＲＳＴＧＧ（配列番号３２）、ＬＱＶＲＩＶＧＧ（配列番号３３）、ＰＬＧＲＩＶＧＧ（配列番号３４）、ＩＥＧＲＴＶＧＧ（配列番号３５）、ＬＴＰＲＳＬＬＶ（配列番号３６）、ＬＧＰＶＳＧＶＰ（配列番号３７）、ＶＡＧＤＳＬＥＥ（配列番号３８）、ＧＰＡＧＬＧＧＡ（配列番号３９）、ＧＰＡＧＬＲＧＡ（配列番号４０）、ＡＰＬＧＬＲＬＲ（配列番号４１）、ＰＡＬＰＬＶＡＱ（配列番号４２）、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号４３）、ＤＤＤＫＩＶＧＧ（配列番号４４）、ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号４５）およびＬＰＫＴＧＳＥＳ（配列番号４６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目２２から７３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７５）
前記第１酵素的切断部位と前記第２酵素的切断部位が同一であるかまたは異なる、項目７１から７４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７６）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記付加部分の間の前記リンカー、前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記第２異種部分の間の前記リンカー、および前記ＶＷＦ断片と前記第１異種部分の間の前記リンカーのうちの１または複数が、約１〜約２０００アミノ酸長である、項目５から７５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７７）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記付加部分の間の前記リンカー、前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記第２異種部分の間の前記リンカー、および前記ＶＷＦ断片と前記第１異種部分の間の前記リンカーのうちの１または複数が、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１２００、１４００、１６００、１８００または２０００アミノ酸である、項目５から７５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７８）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記付加部分の間の前記リンカー、前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記第２異種部分の間の前記リンカー、および前記ＶＷＦ断片と前記第１異種部分の間の前記リンカーのうちの１または複数が、ｇｌｙ／ｓｅｒペプチドを含む、項目５から７7のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目７９）
前記ｇｌｙ／ｓｅｒペプチドが、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎまたはＳ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎの式を有し、式中ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または１００からなる群より選択される製の整数である、項目７８に記載のキメラタンパク質。
（項目８０）
前記（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎリンカーが、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４である、項目７９に記載のキメラタンパク質。
（項目８１）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記付加部分前記リンカーが切断可能リンカーである、項目５から８０のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目８２）
前記切断可能リンカーが、１または複数のトロンビン切断部位を含む、項目８１に記載のキメラタンパク質。
（項目８３）
前記切断可能リンカーが、ＴＬＤＰＲＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦＷＥＤＥＥＫ（配列番号５６）を含む、項目８１または８２に記載のキメラタンパク質。
（項目８４）
切断可能リンカーが、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子、カリクレイン、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、第ＩＩａ因子（トロンビン）、エラスターゼ−２、グランザイム−Ｂ、ＴＥＶ、エンテロキナーゼ、プロテアーゼ３Ｃ、ソルターゼＡ、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１７およびＭＭＰ−２０からなる群より選択されるプロテアーゼにより切断される、項目81から８3のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目８５）
前記切断可能リンカーが、ＲＲＲＲ（配列番号５２）、ＲＫＲＲＫＲ（配列番号５３）、ＲＲＲＲＳ（配列番号５４）、ＴＱＳＦＮＤＦＴＲ（配列番号４７）、ＳＶＳＱＴＳＫＬＴＲ（配列番号４８）、ＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲ（配列番号４９）、ＴＴＫＩＫＰＲ（配列番号５０）、ＬＶＰＲＧ（配列番号５５）、ＡＬＲＰＲＶＶＧＧＡ（配列番号５１）、ＫＬＴＲＡＥＴ（配列番号２９）、ＤＦＴＲＶＶＧ（配列番号３０）、ＴＭＴＲＩＶＧＧ（配列番号３１）、ＳＰＦＲＳＴＧＧ（配列番号３２）、ＬＱＶＲＩＶＧＧ（配列番号３３）、ＰＬＧＲＩＶＧＧ（配列番号３４）、ＩＥＧＲＴＶＧＧ（配列番号３５）、ＬＴＰＲＳＬＬＶ（配列番号３６）、ＬＧＰＶＳＧＶＰ（配列番号３７）、ＶＡＧＤＳＬＥＥ（配列番号３８）、ＧＰＡＧＬＧＧＡ（配列番号３９）、ＧＰＡＧＬＲＧＡ（配列番号４０）、ＡＰＬＧＬＲＬＲ（配列番号４１）、ＰＡＬＰＬＶＡＱ（配列番号４２）、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号４３）、ＤＤＤＫＩＶＧＧ（配列番号４４）、ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号４５）およびＬＰＫＴＧＳＥＳ（配列番号４６）．からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目８１から８３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目８６）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記付加部分の間の前記リンカーが、ソルターゼ認識モチーフをさらに含む、項目5から８5のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目８７）
前記ソルターゼ認識モチーフが、ＬＰＸＴＧ（配列番号１０６）配列を含む、項目８６に記載のキメラタンパク質。
（項目８８）
前記ＶＷＦ断片がＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含む、項目１９から８７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目８９）
前記ＶＷＦ断片が、内因性ＶＷＦがＦＶＩＩＩタンパク質に結合するのを阻害または防止する、項目８８に記載のキメラタンパク質。
（項目９０）
前記ＶＷＦ断片の前記Ｄ’ドメインのアミノ酸配列が、配列番号２のアミノ酸７６４〜８６６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である、項目８８または８９に記載のキメラタンパク質。
（項目９１）
前記ＶＷＦ断片の前記Ｄ３ドメインのアミノ酸配列が、配列番号２のアミノ酸８６７〜１２４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である、項目８８から９０のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目９２）
前記ＶＷＦ断片が、配列番号２の残基１０９９、残基１１４２または残基１０９９と１１４２の両方に対応する残基で少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、項目８８から９１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目９３）
前記ＶＷＦ断片の配列中、システインではないアミノ酸が、配列番号２の残基１０９９、残基１１４２、または残基１０９９と１１４２の両方に対応する残基で置換されている、項目８８から９１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目９４）
前記ＶＷＦ断片の配列が、配列番号２のアミノ酸７６４〜１２４０を含む、項目８８から９３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目９５）
前記ＶＷＦ断片が、ＶＷＦのＤ１ドメイン、Ｄ２ドメイン、またはＤ１とＤ２ドメインをさらに含む、項目８８から９４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目９６）
前記ＶＷＦ断片が、Ａ１ドメイン、Ａ２ドメイン、Ａ３ドメイン、Ｄ４ドメイン、Ｂ１ドメイン、Ｂ２ドメイン、Ｂ３ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、ＣＫドメイン、それらの１または複数の断片、およびそれらの任意の組合せからなる群より選択されるＶＷＦドメインをさらに含む、項目８８から９５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目９７）
前記ＶＷＦ断片が、（１）ＶＷＦのＤ’およびＤ３ドメインまたはそれらの断片；（２）ＶＷＦのＤ１、Ｄ’、およびＤ３ドメインまたはそれらの断片；（３）ＶＷＦのＤ２、Ｄ’およびＤ３ドメインまたはそれらの断片；（４）ＶＷＦのＤ１、Ｄ２、Ｄ’およびＤ３ドメインまたはそれらの断片；または（５）ＶＷＦのＤ１、Ｄ２、Ｄ’、Ｄ３およびＡ１ドメインまたはそれらの断片から本質的になるか、またはそれらからなる、項目８８から９５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目９８）
機能的に連結されているＶＷＦのシグナルペプチドをさらに含む、項目８８から９7
のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目９９）
前記ＶＷＦ断片がペグ化、グリコシル化、ヘシル化（hesylated）またはポリシアル化
されている、項目１９から９８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１００）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が、Ａ１ドメイン、Ａ２ドメイン、Ｂドメイン、Ａ３ドメイン、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、それらの１または複数の断片、およびそれらの任意の組合せからなる群より選択されるＦＶＩＩＩの１または複数ドメインを含む、項目１から９９のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１０１）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が、Ａ１ドメイン、Ａ２ドメイン、Ａ３ドメインおよびＣ１ドメイン、ならびに随意のＣ２ドメインを含む、項目１００に記載のキメラタンパク質。
（項目１０２）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が、Ｂドメインまたはその一部分を含む、項目１００または１０１に記載のキメラタンパク質。
（項目１０３）
配列番号１６または配列番号１８と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を含む、項目１００から１０２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１０４）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が、ＳＱＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩである、項目１００から１０３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１０５）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が、一本鎖ＦＶＩＩＩを含む、項目１００から１０４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１０６）
前記一本鎖ＦＶＩＩＩが、全長成熟第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド（配列番号１６）の残基１６４８、残基１６４５またはその両方、またはＳＱＢＤＤ第ＶＩＩＩ因子（配列番号１８）の残基７５４、残基７５１またはその両方に`対応する残基で少なくとも１つのア
ミノ酸置換を含む、項目１０５に記載のキメラタンパク質。
（項目１０７）
前記アミノ酸置換がアルギニンではないアミノ酸である、項目１０６に記載のキメラタンパク質。
（項目１０８）
前記ＦＶＩＩＩタンパク質が、第１鎖と第２鎖を含み、前記第１鎖はＦＶＩＩＩの重鎖を含み、前記第２鎖は第ＶＩＩＩ因子の軽鎖を含み、前記重鎖と前記軽鎖は金属結合で結合している、項目１から１０７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（項目１０９）
項目１から１０８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
（項目１１０）
ＰＣ５、ＰＣ７またはフーリンをコードする追加のポリヌクレオチド配列をさらに含む、項目１１０に記載のポリヌクレオチド。
（項目１１１）
ＶＷＦのＤ１ドメインとＤ２ドメインをコードする追加のポリヌクレオチド配列をさらに含む、項目１０９または１１０に記載のポリヌクレオチド。
（項目１１２）
項目１０９から１１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドと前記ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組に機能的に連結した１または複数プロモーターを含むベクター（単数）またはベクター（複数）。
（項目１１３）
ＰＣ５、ＰＣ７またはフーリンをコードする第２ポリヌクレオチド鎖を含む追加のベクターをさらに含む、項目１１２のベクター（単数）またはベクター（複数）。
（項目１１４）
ＶＷＦのＤ１ドメインおよびＤ２ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む追加のベクターをさらに含む、項目１１２または１１３のベクター（単数）またはベクター（複数）。
（項目１１５）
項目１０９から１１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは項目１１２から１１４のいずれか一項に記載のベクターを含む、宿主細胞。
（項目１１６）
ＰＣ５、ＰＣ７またはフーリンをコードする追加のベクターを含む、項目１１５に記載の宿主細胞。
（項目１１７）
ＶＷＦのＤ１ドメインおよびＤ２ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含む追加のベクターをさらに含む、項目１１５または１１６に記載の宿主細胞。
（項目１１８）
哺乳動物細胞である、項目１１５または１１８に記載の宿主細胞。
（項目１１９）
前記哺乳動物細胞が、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞およびＢＨＫ細胞からなる群より選択される、項目１１８に記載の宿主細胞。
（項目１２０）
項目１から１０８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質、項目１０９または１１１に記載のポリヌクレオチド、項目１１２または１１４に記載のベクター、または項目１１５から１１８のいずれか一項に記載の宿主細胞と薬剤的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
（項目１２１）
ＦＶＩＩＩ／ＶＷＦダブルノックアウト（「ＤＫＯ」）マウスにおける前記キメラタンパク質のＦＶＩＩＩタンパク質の半減期が、ＶＷＦ断片なしのキメラタンパク質のＦＶＩＩＩタンパク質の半減期と比べて延長される、項目１２０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２２）
前記ＦＶＩＩＩの半減期が、野生型ＦＶＩＩＩと比べて少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍または少なくとも４０倍長く延長される、項目１２０または１２１に記載の組成物。
（項目１２３）
第ＶＩＩＩ因子の半減期が少なくとも６時間、少なくとも７時間少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１１時間、少なくとも１２時間、少なくとも１５時間、少なくとも約１７時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約１９時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２１時間、少なくとも約２２時間、少なくとも約２３時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約２５時間、少なくとも約２６時間、少なくとも約２７時間、少なくとも約２８時間、少なくとも約２９時間、少なくとも約３０時間、少なくとも約３１時間、少なくとも約３２時間、少なくとも約３３時間、少なくとも約３４時間、少なくとも約３５時間、少なくとも約３６時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間または少なくとも約１０８時間である、項目１２０または１２２に記載の組成物。
（項目１２４）
局所性投与、眼内投与、非経口投与、髄腔内投与、硬膜下投与および経口投与からなる群より選択される経路で投与される、項目１２０から１２３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２５）
前記非経口投与が静脈内または皮下投与である、項目１２４に記載の組成物。
（項目１２６）
治療を必要とする対象の出血性疾患または病状を治療するのに使用される、項目１２０から１２５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２７）
前記出血性疾患または病状が、出血性血液凝固障害、関節血症、筋肉出血、口腔出血、出血、筋肉内への出血、口腔出血、外傷、頭部外傷、消化器系出血、脳内出血、腹腔内出血、胸腔内出血、骨折、中枢神経系出血、咽頭後隙内出血、腹膜後隙内出血、腸腰筋外筒（illiopsoas sheath）内出血およびそれらの任意の組合せからなる群より選択される、
項目１２６に記載の組成物。
（項目１２８）
前記対象が、手術を受ける予定である、項目１２６または１２７に記載の組成物。
（項目１２９）
前記治療は予防的または応需的である、項目１２６または１２７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３０）
項目１から１０８のいずれか一項に記載の前記キメラタンパク質、項目１０９から１１１のいずれか一項に記載の前記ポリヌクレオチド、項目１１２から１１４のいずれか一項に記載の前記ベクター、項目１１５から１１９のいずれか一項に記載の前記宿主細胞または項目１２０から１２９のいずれか一項に記載の前記組成物の有効量を必要とする対象に加えることを含む、ＦＶＩＩＩタンパク質の内因性ＶＷＦとの相互作用を防止または阻害する方法であって、前記ＶＷＦ断片は前記ＦＶＩＩＩタンパク質の内因性ＶＷＦとの相互作用を防止または阻害する、方法。
（項目１３１）
ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期制限因子を除去または低減する方法であって、項目１から１０８のいずれか一項に記載の前記キメラタンパク質、項目１０９から１１１のいずれか一項に記載の前記ポリヌクレオチド、項目１１２から１１４のいずれか一項に記載の前記ベクター、項目１１５から１１９のいずれか一項に記載の前記宿主細胞または項目１２０から１２９のいずれか一項に記載の前記組成物の有効量を加えることを含み、前記キメラタンパク質または前記ポリヌクレオチド、前記ベクターにコードされるかまたは前記宿主細胞により発現される前記キメラタンパク質は、前記ＦＶＩＩＩタンパク質の内因性ＶＷＦとの相互作用を防止または阻害する、方法。
（項目１３２）
ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期を延長または増加する方法であって、項目１から１０８のいずれか一項に記載の前記キメラタンパク質、項目１０９から１１１のいずれか一項に記載の前記ポリヌクレオチド、項目１１２から１１４のいずれか一項に記載の前記ベクター、項目１１５から１１９のいずれか一項に記載の前記宿主細胞または項目１２０から１２９のいずれか一項に記載の前記組成物の有効量を加えることを含み、前記キメラタンパク質の前記ＶＷＦ断片は、前記ＦＶＩＩＩタンパク質の内因性ＶＷＦとの相互作用を防止または阻害する、方法。
（項目１３３）
ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期が、野生型ＦＶＩＩＩよりも、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍または少なくとも約１２倍長く延長される、項目１３２に記載の方法。
（項目１３４）
第ＶＩＩＩ因子の半減期が、少なくとも約１７時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約１９時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２１時間、少なくとも約２２時間、少なくとも約２３時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約２６時間、少なくとも約２７時間、少なくとも約２８時間、少なくとも約２９時間、少なくとも約３０時間、少なくとも約３１時間、少なくとも約３２時間、少なくとも約３３時間、少なくとも約３４時間、少なくとも約３５時間、少なくとも約３６時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間または少なくとも約１０８時間である、項目１３３に記載の方法。
（項目１３５）
治療を必要とする対象における出血性疾患または病状を治療する方法であって、項目１から１０８のいずれか一項に記載の前記キメラタンパク質、項目１０９から１１１のいずれか一項に記載の前記ポリヌクレオチド、項目１１２から１１４のいずれか一項に記載の前記ベクター、項目１１５から１１９のいずれか一項に記載の前記宿主細胞または項目１２０から１２９のいずれか一項に記載の前記組成物の有効量を前記対象に投与することを含み、前記出血性疾患または病状が、出血性血液凝固障害、関節血症、筋肉出血、口腔出血、出血、筋肉内への出血、口腔出血、外傷、頭部外傷、消化器系出血、脳内出血、腹腔内出血、胸腔内出血、骨折、中枢神経系出血、咽頭後隙内出血、腹膜後隙内出血、腸腰筋外筒（illiopsoas sheath）内出血、およびそれらの任意の組合せからなる群
より選択される、方法。
（項目１３６）
前記治療が、予防的またはオンデマンド（応需的）である、項目１３５に記載の方法。
（項目１３７）
前記有効量が、０．１μｇ／ｋｇから５００ｍｇ／ｋｇである、項目１３０から１３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３８）
前記キメラタンパク質、前記ポリヌクレオチド、前記宿主細胞または前記組成物が、局所性投与、眼内投与、非経口投与、髄腔内投与、硬膜下投与および経口投与からなる群より選択される経路で投与される、項目１３０から１３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３９）
前記非経口投与が、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与および皮内投与からなる群より選択される、項目１３８に記載の方法。
（項目１４０）
前記対象がヒトである、項目１３０から１３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４１）
前記対象が血友病Ａ患者である、項目１４０に記載の方法。
（項目１４２）
キメラタンパク質を作製する方法であって、１または複数の宿主細胞を項目１０９から１１１のいずれか一項に記載の前記ポリヌクレオチドまたは項目１１２から１１４のいずれか一項に記載の前記ベクターで形質移入し、前記宿主細胞内でＶＷＦ断片またはキメラタンパク質を発現させることを含む、方法。
（項目１４３）
前記ベクターが、プロセシング酵素をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、項目１４２に記載の方法。
（項目１４４）
前記プロセシング酵素がＰＡＣＥである、項目１４３に記載の方法。
（項目１４５）
ＰＡＣＥが、前記ＶＷＦ断片のＤ１Ｄ２ドメインを切断する、項目１４４に記載の方法。
（項目１４６）
１または複数の宿主細胞をＶＷＦのＤ１ドメインとＤ２ドメインを発現するポリヌクレオチド配列で形質移入することをさらに含む、請求１４２および１４３に記載の方法。
（項目１４７）
項目１から１０８のいずれか一項に記載の前記キメラタンパク質を構築する方法であって、ソルターゼ酵素の存在下で共有結合により付加部分を前記ＦＶＩＩＩタンパク質に連結することを含む、方法。

Claims

共有結合により連結された第ＶＩＩＩ因子（「ＦＶＩＩＩ」）タンパク質及び付加部分（ＡＭ）を含むキメラタンパク質であって、前記付加部分は、内因性ＶＷＦが前記ＦＶＩＩＩタンパク質に結合するのを阻害または防止する、キメラタンパク質。
前記共有結合は、内因性ＶＷＦの存在下において前記付加部分が前記ＦＶＩＩＩタンパク質から解離することを防止する、請求項１に記載のキメラタンパク質。
前記付加部分は、前記ＦＶＩＩＩタンパク質がＶＷＦクリアランス経路を通じて排除されるのを防止するか、あるいは前記付加部分は、前記ＦＶＩＩＩタンパク質上のＶＷＦ結合部位を遮蔽またはブロックすることによって、内因性ＶＷＦが前記ＦＶＩＩＩタンパク質に結合するのを防止または阻害する、請求項１または２に記載のキメラタンパク質。
前記ＶＷＦ結合部位は、配列番号１６のアミノ酸１６６９から１６８９及び２３０３から２３３２に対応するアミノ酸配列である、請求項３に記載のキメラタンパク質。
前記ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期が、内因性ＶＷＦの存在下において前記ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期限界を超えて延長される、請求項１から４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記付加部分は、ポリペプチド、非ポリペプチド部分またはその両方を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記付加部分は、ＶＷＦ断片、イムノグロブリン定常領域もしくはその一部分、アルブミンもしくはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンもしくはその断片、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、それらの誘導体またはそれらの任意の組合せを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記付加部分は、ＶＷＦのＤ’ドメイン及びＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含み、前記ＶＷＦ断片は、共有結合に加えて非共有結合により前記ＦＶＩＩＩタンパク質と結合している、請求項７に記載のキメラタンパク質。
前記ＶＷＦ断片は、少なくとも１つの異種部分（Ｈ１）及び随意のリンカーを前記ＶＷＦ断片と前記異種部分（Ｈ１）の間に含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記異種部分（Ｈ１）は、イムノグロブリン定常領域もしくはその一部分、アルブミンもしくはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンもしくはその断片、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、それらの誘導体、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項９に記載のキメラタンパク質。
前記異種部分（Ｈ１）は、第１Ｆｃ領域を含む、請求項１０に記載のキメラタンパク質。
前記キメラタンパク質は、前記ＶＷＦ断片と前記異種部分（Ｈ１）の間に切断可能リンカーであるリンカーを含む、請求項９に記載のキメラタンパク質。
前記ＦＶＩＩＩタンパク質は、ＦＶＩＩＩ及び少なくとも１つの異種部分（Ｈ２）を含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記異種部分（Ｈ２）は、前記ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期を延長することができる、請求項１３に記載のキメラタンパク質。
前記異種部分（Ｈ２）は、イムノグロブリン定常領域もしくはその一部分、アルブミンもしくはその断片、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、それらの誘導体、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンもしくはその断片、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項１３または１４に記載のキメラタンパク質。
前記異種部分（Ｈ２）は、第２Ｆｃ領域を含む、請求項１３に記載のキメラタンパク質。
前記ＶＷＦ断片、第１異種部分及びリンカーを含む第１ポリペプチドと、前記ＦＶＩＩＩタンパク質及び第２異種部分を含む第２ポリペプチドとを含み、前記第１ポリペプチドと前記第２ポリペプチドが互いに共有結合により連結している、請求項１から１６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記第１異種部分と前記第２異種部分は互いに共有結合により連結しており、前記共有結合は、前記第１ポリペプチド中の前記ＶＷＦ断片がインビボにおいて内因性ＶＷＦで置換されるのを防止する、請求項１７に記載のキメラタンパク質。
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記第２異種部分の間の前記リンカーは切断可能リンカーである、請求項１３から１８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
（ａ）Ｖ−Ｌ１−Ｈ１−Ｌ３−Ｃ−Ｌ２−Ｈ２、
（ｂ）Ｈ２−Ｌ２−Ｃ−Ｌ３−Ｈ１−Ｌ１−Ｖ、
（ｃ）Ｃ−Ｌ２−Ｈ２−Ｌ３−Ｖ−Ｌ１−Ｈ１、
（ｄ）Ｈ１−Ｌ１−Ｖ−Ｌ３−Ｈ２−Ｌ２−Ｃ、
（ｅ）Ｈ１−Ｌ１−Ｖ−Ｌ３−Ｃ−Ｌ２−Ｈ２、
（ｆ）Ｈ２−Ｌ２−Ｃ−Ｌ３−Ｖ−Ｌ１−Ｈ１、
（ｇ）Ｖ−Ｌ１−Ｈ１−Ｌ３−Ｈ２−Ｌ２−Ｃ、
（ｈ）Ｃ−Ｌ２−Ｈ２−Ｌ３−Ｈ１−Ｌ１−Ｖ、
（ｉ）Ｈ２−Ｌ３−Ｈ１−Ｌ１−Ｖ−Ｌ２−Ｃ、
（ｊ）Ｃ−Ｌ２−Ｖ−Ｌ１−Ｈ１−Ｌ３−Ｈ２、
（ｋ）Ｖ−Ｌ２−Ｃ−Ｌ１−Ｈ１−Ｌ３−Ｈ２及び
（ｌ）Ｈ２−Ｌ３−Ｈ１−Ｌ１−Ｃ−Ｌ２−Ｖ
から選択される式を含むキメラタンパク質であって、
式中、
ＶはＶＷＦのＤ’ドメイン及びＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含む付加部分であり；
Ｌ１は随意のリンカーであり；
Ｌ２は随意のリンカーであり；
（ａ）から（ｆ）のＬ３は随意のリンカーであり、
（ｇ）から（ｌ）のＬ３は随意のｓｃＦｃリンカーであり、
Ｈ１及びＨ２はそれぞれ随意の異種部分を含み；
ＣはＦＶＩＩＩタンパク質を含み、
（−）はペプチド結合または１もしくは複数のアミノ酸である、キメラタンパク質。
（ｍ）Ｖ−Ｌ１−Ｈ１：Ｈ２−Ｌ２−Ｃ、
（ｎ）Ｖ−Ｌ１−Ｈ１：Ｃ−Ｌ２−Ｈ２；
（ｏ）Ｈ１−Ｌ１−Ｖ：Ｈ２−Ｌ２−Ｃ；
（ｐ）Ｈ１−Ｌ１−Ｖ：Ｃ−Ｌ２−Ｈ２；
（ｑ）Ｖ：Ｃ−Ｌ１−Ｈ１：Ｈ２；
（ｒ）Ｖ：Ｈ１−Ｌ１−Ｃ：Ｈ２；
（ｓ）Ｈ２：Ｈ１−Ｌ１−Ｃ：Ｖ、
（ｔ）Ｃ：Ｖ−Ｌ１−Ｈ１：Ｈ２、及び
（ｕ）Ｃ：Ｈ１−Ｌ１−Ｖ：Ｈ２
から選択される式を含むキメラタンパク質であって、
式中、
ＶはＶＷＦのＤ’ドメイン及びＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含む付加部分であり；
Ｌ１は随意のリンカーであり；
Ｌ２は随意のリンカーであり；
Ｈ１は第１異種部分であり；
Ｈ２は第２異種部分であり；
ＣはＦＶＩＩＩタンパク質であり；
（−）はペプチド結合または１もしくは複数のアミノ酸であり、
（：）は前記Ｈ１と前記Ｈ２の間の共有結合である、キメラタンパク質。
前記ＶＷＦ断片は、内因性ＶＷＦが前記ＦＶＩＩＩタンパク質と結合するのを阻害または防止する、請求項２０または２１に記載のキメラタンパク質。
Ｈ１は、第１Ｆｃ領域を含む、請求項２０から２２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
Ｈ２は、第２Ｆｃ領域を含む、請求項２０から２３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記ＦＶＩＩＩタンパク質は、第３異種部分（Ｈ３）、第４異種部分（Ｈ４）、第５異種部分（Ｈ５）、または第６異種部分（Ｈ６）を含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記ＦＶＩＩＩタンパク質と前記付加部分の間にリンカーをさらに含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記リンカーは、ソルターゼ認識モチーフである、請求項２６に記載のキメラタンパク質。
前記ＶＷＦ断片は、実質的にＶＷＦのＤ’ドメイン及びＤ３ドメインからなる、請求項８から２７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記ＶＷＦ断片の前記Ｄ’ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２のアミノ酸７６４から８６６と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である、請求項２８に記載のキメラタンパク質。
前記ＶＷＦ断片の前記Ｄ３ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２のアミノ酸８６７から１２４０と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である、請求項２８または２９に記載のキメラタンパク質。
前記ＶＷＦ断片は、配列番号２の残基１０９９、残基１１４２、または残基１０９９及び１１４２の両方に対応する残基に少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、請求項２８から３０のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記ＶＷＦ断片の配列は、配列番号２のアミノ酸７６４から１２４０を含む、請求項２８から３１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記ＶＷＦ断片は、ＶＷＦのＤ１ドメイン、Ｄ２ドメイン、またはＤ１及びＤ２ドメインをさらに含む、請求項２８から３２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記ＦＶＩＩＩタンパク質は、Ｂドメインまたはその一部分を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
配列番号１６または配列番号１８と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１から３４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記ＦＶＩＩＩタンパク質は、ＳＱＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩである、請求項１から３５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記ＦＶＩＩＩタンパク質は、一本鎖ＦＶＩＩＩまたは二本鎖ＦＶＩＩＩを含む、請求項１から３６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
前記キメラタンパク質は、ＦＶＩＩＩ半減期制限因子を含まない、請求項１から請求項３７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。
請求項１から３８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質をコードする、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組。
請求項３９に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドの組と、前記ポリヌクレオチドもしくは前記ポリヌクレオチドの組に機能的に連結した１もしくは複数のプロモーターとを含む、ベクターまたはベクターの組。
請求項３９に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドの組または請求項４０に記載のベクターもしくはベクターの組を含む、宿主細胞。
哺乳動物細胞である、請求項４１に記載の宿主細胞。
前記哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞及びＢＨＫ細胞からなる群から選択される、請求項４２に記載の宿主細胞。
請求項１から３８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質及び薬剤的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
請求項３９に記載のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組及び薬剤的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
請求項４０に記載のベクターまたはベクターの組及び薬剤的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
請求項４１から４３のいずれか一項に記載の宿主細胞及び薬剤的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
ＦＶＩＩＩタンパク質の内因性ＶＷＦとの相互作用の防止または阻害を、それを必要とする対象において行うための医薬組成物であって、前記ＶＷＦ断片は、前記ＦＶＩＩＩタンパク質の内因性ＶＷＦとの相互作用を防止または阻害する、請求項４４から４７のいずれか一項に記載の前記医薬組成物。
ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期制限因子の除去または低減を、それを必要とする対象において行うための医薬組成物であって、前記キメラタンパク質または前記ポリヌクレオチド、前記ベクターにコードされるか、もしくは前記宿主細胞により発現される前記キメラタンパク質は、前記ＦＶＩＩＩタンパク質の内因性ＶＷＦとの相互作用を防止または阻害する、請求項４４から４７のいずれか一項に記載の前記医薬組成物。
ＦＶＩＩＩタンパク質の半減期の延長または増加を、それを必要とする対象において行うための医薬組成物であって、前記キメラタンパク質の前記ＶＷＦ断片は、前記ＦＶＩＩＩタンパク質の内因性ＶＷＦとの相互作用を防止または阻害する、請求項４４から４７のいずれか一項に記載の前記医薬組成物。
出血性疾患または病状の治療を、それを必要とする対象において行うための医薬組成物であって、前記出血性疾患または病状は、出血性血液凝固障害、関節血症、筋肉出血、口腔出血、出血、筋肉内への出血、口腔出血、外傷、頭部外傷、消化器系出血、脳内出血、腹腔内出血、胸腔内出血、骨折、中枢神経系出血、咽頭後隙内出血、腹膜後隙内出血、腸腰筋外筒（illiopsoas sheath）内出血、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項４４から４７のいずれか一項に記載の前記医薬組成物。
キメラタンパク質を作製する方法であって、１または複数の宿主細胞を請求項３９に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドの組または請求項４０に記載のベクターもしくはベクターの組により形質移入することと、前記宿主細胞内において前記ＶＷＦ断片または前記キメラタンパク質を発現させることとを含む、方法。
請求項１〜３８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質を構築する方法であって、ソルターゼ酵素の存在下において共有結合により前記付加部分を前記ＦＶＩＩＩタンパク質に連結することを含む、方法。