KR20150083600A - 혈뇌장벽 투과성 펩티드 및 이를 포함하는 컨쥬게이트 - Google Patents

Abstract

본 명세서에는 혈뇌장벽 투과성 펩티드 및 유효성분의 컨쥬게이트(conjugate) 및 그 용도가 개시된다. 특히, 혈뇌장벽 투과성 펩티드로서 서열 번호 1의 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 포함하는 컨쥬게이트 및 그것을 포함하는 조성물이 개시된다.

Description

혈뇌장벽 투과성 펩티드 및 이를 포함하는 컨쥬게이트{A Blood-Brain Barrier Penetrating Peptide, and the Conjugate Comprising The Same}

본 명세서에는 혈뇌장벽 투과성 펩티드 및 이를 포함하는 컨쥬게이트가 개시된다.

혈뇌장벽(血腦障壁, Blood-Brain Barrier)은 뇌척수액과 혈액을 분리시키는 장벽이다. 이는 높은 선택적 투과성을 갖고 있어 몸의 주요 조절중추를 세균 등과 같은 혈액으로 운반될 수 있는 병원체 및 혈액 내의 잠재적인 위험물질로부터 격리시키는 역할을 한다. 크기가 700돌턴을 초과하는 대부분의 분자는 혈뇌장벽을 통과할 수 없고 소형 분자는 간에서 접합될 수 있다. 이들 요소들은 알츠하이머 질환, 파킨슨 질환, 세균성 및 바이러스성 감염 및 암과 같은 뇌 및 중추신경계(CNS, Central Nervous System) 질환의 약리학적 치료에 주요 장애가 된다. 뇌 및 증추신경계(CNS) 질환 및 장애를 치료하기 위한 많은 치료제는 친수성이기 때문에 혈뇌장벽을 직접 통과하지 못한다. 아울러, 이들 치료제는 혈액 및 말초 조직에서 분해되기 쉽기 때문에 치료학적으로 유효한 혈청 농도를 성취하는데 필요한 양이 증가하는 경향이 있다.

한국특허공개 제10-2010-00011091호 한국특허공개 제10-2007-0024206호 유럽특허공개 제1362597호 유럽특허공개 제0841396호

이러한 배경하에서 본 발명자들은 혈뇌장벽을 투과하여 뇌에 전달될 수 있는 물질을 개발하고자 예의 노력한 결과 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명의 일측면에 따른 목적은 혈뇌장벽을 투과하는 성질을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 컨쥬게이트를 제공하는데 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 컨쥬게이트는, 혈뇌장벽 투과성 운반 펩티드(carrier peptide) 및 유효성분의 컨쥬게이트(conjugate)로서, 상기 운반 펩티드는, 서열번호 1을 포함하는 펩티드, 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드, 또는 그것의 단편이며, 상기 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 및 단편은 서열번호 1 펩티드의 혈뇌장벽 투과성을 보유한 것인 컨쥬게이트이다.

본 발명의 일 측면에 따른 컨쥬게이트에서, 상기 단편은 3개 이상의 아미노산으로 구성된 단편일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 컨쥬게이트에서, 상기 운반 펩티드는, 30개 이하의 아미노산으로 구성된 펩티드일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 컨쥬게이트에서, 상기 유효성분은, 단백질, 핵산, 펩티드, 지질, 당지질, 미네랄, 당, 나노 입자, 생물학적 제제, 조영물질, 약물(drugs) 및 화학 물질(compounds) 중 선택된 하나 이상인 컨쥬게이트일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 컨쥬게이트에서, 상기 운반 펩티드와 유효성분은 공유결합에 의해, 선택적으로 링커에 의해 매개됨으로써, 접합된 것일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 컨쥬게이트에서, 상기 운반 펩티드와 유효성분은 비공유결합에 의해 접합된 것일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 컨쥬게이트에서, 상기 유효성분은, 사이토카인, 항체, 항체 단편, 치료용 효소, 가용성 수용체, 또는 리간드일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 컨쥬게이트에서, 상기 유효성분은 그것의 효능 타겟이 암세포, 면역세포 또는 섬유아세포일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 컨쥬게이트에서, 상기 유효성분은 뇌 타겟팅 약물일 수 있다.

본 발명의 일 측면에서, 상기 암세포는 뇌암 세포 및 백혈병 세포로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 암세포이며, 상기 면역세포는 T 림프구, B 세포 및 단핵구로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 면역세포일 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 따른 조성물은, 상기에서 언급된 어느 한 컨쥬게이트를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 조성물에 있어서, 상기 유효성분은 질병의 치료 또는 예방을 위한 유효성분이며, 상기 조성물은 약학 조성물일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 조성물에 있어서, 상기 약학조성물은 뇌 타겟팅 약학조성물일 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 따른 유효성분의 뇌 타겟팅 약물 전달 방법은, 유효성분을 혈뇌장벽을 투과하여 뇌 안으로 전달하기 위한 방법으로서, 상기 언급된 컨쥬게이트들 중 어느 한 컨쥬게이트(conjugate)를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.

본 명세서에 개시된 펩티드, 또는 상기 펩티드와 유효성분이 결합된 컨쥬게이트 및 이를 포함하는 약학 조성물을 이용하면, 혈뇌장벽 내로 통과하기 어려운 유효성분들을 용이하게 혈뇌장벽을 투과하여 뇌 안으로 전달할 수 있다. 특히, 뇌로 국소 전달하는 것이 가능하여 뇌 관련 질병 또는 장애의 개선, 예방 또는 치료에 적절한 뇌 타겟팅 약물 전달 방법을 제공할 수 있다.

도 1은 FITC를 Pep1의 N-말단과 C-말단에 각 결합한 컨쥬게이트가 FITC(대조군)와 비교할 때 쥐의 뇌, 간, 비장, 부신, 림프절의 각 장기 조직에서 흡수되는 상대적인 정도를 측정하기 위하여, Pep1의 N-말단과 C-말단에 FITC를 각 결합한 컨쥬게이트와 FITC(대조군)를 쥐에 투여하여 24시간 후, 각 장기 조직을 적출하여 RIPA 버퍼를 넣어 용해시키고, 원심분리한 것을 각 488nm(들뜸, Excitation) 및 525nm(방출, Emission)에서 형광값을 측정한 결과 그래프이다.

혈뇌장벽(血腦障壁,Blood-Brain Barrier)은 뇌척수액과 혈액을 분리시키는 장벽으로 높은 선택적 투과성을 갖고 있어 몸의 주요 조절중추를 세균 등과 같은 혈액으로 운반될 수 있는 병원체 및 혈액 내의 잠재적인 위험물질로부터 격리시키는 역할을 한다. 뇌 및 CNS(중추 신경계) 질환 및 장애를 치료하기 위한 많은 치료제는 혈뇌장벽을 직접 통과하지 못할 정도로 친수성이다. 이로 인해 수용성 분자가 혈뇌장벽을 통과하기 위해서는 특별한 채널이나 운반체단백질을 필요로 한다. 추가로, 이들 치료제는 혈액 및 말초 조직에서 분해되기 쉽기 때문에 치료학적으로 유효한 혈청 농도를 성취하는데 필요한 양은 증가한다. 이에 본 발명자들은 지속적인 연구를 통해, 텔로머라제로부터 유래된 펩티드가 혈뇌장벽을 통과하는 운반 펩티드로서 우수한 효과를 가짐을 발견하였다.

텔로미어(telomere)는 염색체의 말단에 반복적으로 존재하는 유전물질로서, 해당 염색체의 손상이나 다른 염색체와의 결합을 방지한다고 알려져 있다. 세포가 분열할 때마다 텔로미어의 길이는 조금씩 짧아지는데, 일정한 횟수 이상의 세포 분열이 있게 되면 텔로미어는 매우 짧아지고, 그 세포는 분열을 멈추고 죽게 된다. 반면 텔로미어를 길게 하면 세포의 수명이 연장된다고 알려져 있으며, 그 예로 암세포에서는 텔로머라제(Telomerase)라는 효소가 분비되어 텔로미어가 짧아지는 것을 막기 때문에, 암세포가 죽지 않고 계속 증식할 수 있다고 알려져 있다.

서열번호 1 에 기재된 펩티드는 아래 표 1과 같다. 서열번호 2는 인간의 텔로머라제 전장 단백질의 서열이다. 서열번호 1 은 텔로머라제로부터 유래된 펩티드로서 16개 아미노산으로 구성된 펩티드이다. 아래 표 1의 "이름"은 펩티드를 구별하기 위해 명명한 것이다. 본 발명의 다른 일측면에서, 서열 번호 1에 기재된 펩티드 중 하나 이상의 펩티드는 텔로머라제에 포함된 펩티드 중 해당 위치의 펩티드를 선별해 합성한 "합성 펩티드"를 포함한다. 본 명세서에서 "pep"이라 함은 서열번호 1 의 서열을 갖는 펩티드, 또는 그 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드, 또는 상기 서열의 단편을 총칭하는 용어이다.

펩티드의 생물학적 특성에 있어서의 실재적인 변형은 (a) 치환 영역 내의 폴리펩티드 골격의 구조, 예를 들면 시트 또는 나선 입체 구조를 유지하는데 있어서 이들의 효과, (b) 표적 부위에서의 상기 분자의 전하 또는 소수성을 유지하는데 있어서 이들의 효과, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는데 있어서 이들의 효과가 상당히 상이한 치환부를 선택함으로써 수행된다. 천연 잔기는 통상의 측쇄 특성에 기준하여 다음 그룹으로 구분된다:

(1) 소수성: 노르루이신, met, ala, val, leu, ile;

(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;

(3) 산성: asp, glu;

(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및

(6) 방향족: trp, tyr, phe.

비-보존적 치환은 이들 부류 중의 하나의 구성원을 또다른 부류로 교환함으로써 이루어질 것이다. 펩티드의 적당한 입체 구조를 유지하는 것과 관련이 없는 어떠한 시스테인 잔기도 일반적으로 세린으로 치환되어 상기 분자의 산화적 안정성을 향상시키고 이상한 가교결합을 방지할 수 있다. 역으로 말하면, 시스테인 결합(들)을 상기 펩티드에 가하여 그의 안정성을 향상시킬 수 있다

펩티드의 다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 글리코실화 패턴이 변화된 것이다. 변화란 펩티드에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 잔기의 결실 및(또는) 펩티드 내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 부가를 나타낸다.

펩티드의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된 것이다. N-연결이란 탄수화물 잔기가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 말한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산)은 탄수화물 잔기를 아스파라긴 측쇄에 효소적으로 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 이들 트리펩티드 서열 중의 하나가 폴리펩티드에 존재함으로써, 잠재적인 글리코실화 부위가 생성된다. O-연결된 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중의 하나를 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착시키는 것을 의미하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신을 사용할 수도 있다.

펩티드로의 글리코실화 부위의 부가는 하나 이상의 상기 언급된 트리펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변화시킴으로써 편리하게 수행된다 (N-연결된 글리코실화 부위의 경우). 이러한 변화는 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 최초 항체의 서열에 부가하거나 이들 잔기로 치환함으로써 이루어질 수도 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우).

본 발명의 일측면은 혈뇌장벽 투과성 펩티드로서 서열번호 1, 또는 그 단편들인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 제공한다. 본 발명의 일측면은 하나 이상의 유효성분을 전달하기 위한 약물 전달체로서 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그의 단편들인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 서열번호 1을 포함하는 펩티드, 또는 그의 단편들인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드는 안전하면서도 우수한 혈뇌장벽 투과성 펩티드로 작용할 수 있으므로, 약물과 결합하여 약물을 뇌 안으로 효과적으로 전달할 수 있다.

본 발명의 일측면은 서열번호 1을 포함하는 펩티드, 또는 그의 단편들인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드와 이동 대상인 유효성분이 서로 컨쥬게이션된 컨쥬게이트를 제공한다. 본 발명의 일측면에서, 유효성분은 단백질, 핵산, 펩티드, 지질, 당지질, 미네랄, 당, 조영물질, 약물(drugs) 및 화학 물질(compounds) 중 선택된 하나 이상일 수 있다. 본 발명의 일측면에서, 상기 유효성분은 펩티드일 수 있다. 본 발명의 일측면에서, 상기 유효성분인 펩티드는, 사이토카인, 항체, 항체 단편, 치료용 효소, 가용성 수용체, 또는 리간드일 수 있다.

본 명세서에서, "혈뇌장벽 투과성 운반 펩티드(Carrier peptides across the blood-brain barrier)"는 인비트로(in vitro) 및/또는 인비보(in vivo)에서 이동 대상(cargo)을 혈뇌장벽 내로 이동시킬 수 있는 펩티드를 의미한다. 본 명세서에서, "이동 대상(cargo)"은 혈뇌장벽을 통과하는 운반 펩티드와 결합하여 혈뇌장벽 내로 이동할 수 있는 물질을 모두 포함하며, 예를 들어 혈뇌장벽 통과 효율을 높이길 원하는 모든 물질, 구체적으로 약물의 유효 물질, 더 구체적으로 일반적인 경로를 통해서는 혈뇌장벽을 통과하기 용이하지 않은 물질, 보다 더 구체적으로 단백질, 핵산, 펩티드, 미네랄, 포도당을 예로 들 수 있는 당, 나노 입자, 생물학적 제제, 바이러스, 조영물질 또는 기타 화학 물질을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 명세서에서, "약물"은 질병, 상처 또는 특정 증상을 완화, 예방, 치료 또는 진단하기 위한 물질을 포함하는 광범위한 개념이다.

본 발명의 일측면에서, 이동 대상으로서의 단백질 또는 펩티드는 호르몬, 호르몬 유사체, 효소, 효소 저해제, 신호 전달 단백질(또는 펩티드), 항체 및 백신 중 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일측면에서, 핵산은 자연발생적 또는 인공적 DNA 또는 RNA 분자일 수 있고, 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 핵산 분자는 하나 이상일 수 있는데, 동일한 유형의 (예컨대, 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는) 핵산 분자일 수도 있고, 다른 유형으로 핵산 분자들일 수 도 있다. DNA, cDNA, decoy DNA, RNA, siRNA, miRNA, shRNA, stRNA, snoRNA, snRNA, PNA, 안티센스 올리고머(antosense oligomer), 플라스미드(plasmid) 및 그 외 변형된 핵산 중 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일측면에서, 바이러스는 바이러스 전체 또는 바이러스의 핵산을 포함하는 바이러스 코어를 포함할 수 있다. 본 발명의 일측면에서, 화학 물질은 약물로서 기능할 수 있는 화학 물질을 포함하는 광범위한 개념으로, 천연 또는 합성 화학 물질을 포함한다.

본 발명의 일측면에서, 이동 대상인 유효성분은 그것의 효능 타겟이 암세포, 면역세포 또는 섬유아세포일 수 있다. 구체적으로, 상기 암세포는 뇌암 세포 및 백혈병 세포로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 암세포이며, 상기 면역세포는 T 림프구, B 세포 및 단핵구로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 면역세포일 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 상기 유효성분은 뇌로 국소화될 필요가 있는 것이며, 상기 운반 펩티드는 상기 유효성분의 뇌로의 국소 전달을 수행하는 것일 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 혈뇌장벽 투과성 펩티드에 의해 뇌 안으로 전달되는 약물은 리포좀, 미셀, 나노 입자, 자성 입자 또는 콴텀 도트와 같은 약물 전달체를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 일측면에서. 펩티드는 하나 이상의 검출가능한 표지(label)와 융합될 수 있다. 표지는 화학적, 물리적, 또는 효소적 반응에서 검출 가능한 화합물 또는 신호를 직접 또는 간접적으로 발생시키는 화합물일 수 있다. 표지 및 그 이후의 검출은 당업계에 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다(예컨대, Sambrook, J., and Russel, D.W.(2001); 및 Lottspeich, F., and Zorbas H. (1998) Bioanalytik, Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg/Berlin, Germany). 표지는 형광 표지, 효소 표지, 발색 (chromogenic) 표지, 발광 표지, 방사선 표지, 햅텐, 바이오틴, 금속 복합체, 금속 및 콜로이달 금을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이러한 모든 유형의 표지는 당업계에 잘 알려져 있고 다양한 공급업체로부터 상업적으로 입수할 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 펩티드에 이동 대상(cargo)을 직접 결합시킬 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 공유 결합 또는 비공유 결합을 예로 들 수 있는 여러 결합 방법을 통해, 펩티드에 이동 대상을 결합시킬 수 있다. 이동 대상은 예컨대, 본 발명의 일측면에 따른 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 결합할 수 있다. 예를 들어, 디설파이드(disulfide) 결합, 또는 펩티드 N-말단 글루타메이트(E)의 알파 아민(alpha-amine) 또는 C-말단 라이신(K) 잔기의 아민에 이동 대상을 결합시키는 공유 결합을 통해 펩티드에 이동 대상을 결합시킬 수 있다. 또는 펩티드와 이동 대상 중 어느 하나가 다른 하나를 캡슐 형태를 예로 들 수 있는 형태로 감싸는 비공유 결합을 통해 펩티드와 이동 대상을 결합시킬 수 있다.

본 발명의 다른 일측면에서, 링커(linker)를 통해 펩티드와 이동 대상을 결합시킬 수 있다. 예를 들어, 펩티드 N-말단 글루타메이트의 알파 아민(alpha-amine) 또는 C-말단 라이신 잔기의 아민에 Hynic(6-하이드라지노피리딘-3-카르복시산, 6-hydrazinopyridine-3-carboxylic acid) 링커와 같은 링커를 도입한 후, 링커에 이동 대상을 결합시킴으로써, 펩티드에 이동 대상을 결합시킬 수 있다.

본 발명의 또 다른 일측면에서, 이동 대상이 DNA 또는 RNA인 경우, 펩티드에는 SH 기(thiol 기)를 도입하고 DNA 또는 RNA에는 말레이미드 기(maleimide group)를 도입한 후, 펩티드의 SH 기와 DNA 또는 RNA의 말레이미드 기를 결합시킴으로써, 펩티드에 이동 대상을 결합시킬 수 있다.

본 발명의 또 다른 일측면에서, 이동 대상이 단백질 또는 펩티드인 경우, 이동 대상을 발현하는 DNA에 운반 펩티드를 발현하는 DNA를 결합시킨 후 이를 발현시킴으로써, 이동 대상과 펩티드의 융합 단백질 형태로 운반 펩티드와 이동 대상을 결합시킬 수 있다. 융합 단백질에 의한 결합의 구체적인 예는 다음과 같다: 융합 단백질을 생산하기 위한 프라이머(primer) 제작시, 이동 대상을 발현하는 뉴클레오티드 앞에 운반 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드를 붙인 다음, 수득한 뉴클레오티드를 제한 효소로 pET 벡터를 예로 들 수 있는 벡터에 삽입하고, BL-21(DE3)을 예로 들 수 있는 세포에 도입(transformation)하여 발현시킨다. 이때, IPTG(isopropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside)와 같은 발현 유도제를 처리하여 융합 단백질이 효과적으로 발현되도록 할 수 있다. 이후, His tag 정제(purification)와 같은 방법을 통해 발현시킨 융합 단백질을 정제한 후, PBS를 이용하여 투석하고, 키트에 넣어 예컨대, 2,000 내지 4,000 rpm에서 5 내지 20 여분간 원심 분리하여 농축시킬 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 운반 펩티드는 염색 물질 또는 형광 물질, 구체적으로 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC, fluorescein isothiocyanate) 또는 녹색 형광 단백질(Green Fluorescent Protein, GFP)과 결합할 수 있다. 본 발명의 일측면에서 FITC는 운반 펩티드의 N-말단 또는 C-말단 Lys의 아미노기(NH₃ ⁺)와 결합할 수 있다. 말단에 Lys가 존재하지 않는 펩티드인 경우 Lys를 포함하는 링커에 의해 펩티드와 FITC를 결합시킬 수 있다.

혈뇌장벽을 통과하여 뇌로 전달되는 운반 펩티드로 기능하는 본 명세서에 개시된 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그의 단편들인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드는 이동 대상(cargo)과 1:1의 몰비로 결합할 수 있지만, 그 외 다른 몰비로 결합하는 것도 가능하다. 예컨대, 운반 펩티드: 이동 대상의 몰비가 2:1 이상일 수 있다. 구체적으로, 2:1 이상, 3:1 이상, 4:1 이상, 5:1 이상, 6:1 이상, 7:1 이상, 8:1 이상, 9:1 이상 또는 10:1 이상일 수 있다. 이는 복수개 분자의 운반 펩티드가 하나의 이동 대상 분자와 결합할 수 있음을 의미한다. 복수개의 운반 펩티드 분자는 서로 직렬 또는 병렬로 연결될 수 있다. 직렬로 연결된다는 것은 운반 펩티드의 말단 아미노산 부위에서 서로 결합함을 의미하며, 병렬로 연결된다는 것은 운반 펩티드의 말단 아미노산 이외의 부분에서 서로 결합함을 의미한다. 반대로, 운반 펩티드 : 이동 대상의 몰비가 1:2 이상일 수 있다. 이는 하나의 운반 펩티드 분자에 복수개의 이동 대상 분자가 결합할 수 있음을 의미한다. 예컨대, 운반 펩티드 : 이동대상의 몰비가 1:2 일 수 있다. 구체적으로, 1:2 이상, 1:3 이상, 1:4 이상, 1:5 이상, 1:6 이상, 1:7 이상, 1:8 이상, 1:9 이상 또는 1:10 이상일 수 있다.

본 발명의 일측면은 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그의 단편들인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드의, 하나 이상의 유효성분을 전달하기 위한 약물 전달체로서의 용도를 제공한다. 상기 용도는 치료적 용도일 수도 있고, 비치료적 용도일 수도 있다.

본 발명의 일측면은 약물 및 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그의 단편들인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 포함하는 조성물을 대상에게 적용하는 것을 포함하는 대상의 혈뇌장벽을 통과하여 뇌로 약물을 전달하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일측면은 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그의 단편들인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 및 이동 대상인 약물의 컨쥬게이트를 포함하는 조성물 및 조성물의 투여량, 투여 경로, 투여 횟수 및 적응증 중 하나 이상을 개시한 지시서를 포함하는 대상의 혈뇌장벽 내 약물 전달용 키트를 제공한다.

본 명세서에서 "뇌 관련 질병"은 다음을 포함할 수 있지만 이에 제한되는 것은 아니다: 알츠하이머 질환, 파킨슨 질환, 세균성 및 바이러스성 감염 및 암(뇌종양)과 같은 뇌 및 중추신경계(CNS) 질환을 포함한다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그의 단편들인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 0.1 ㎍/㎎ 내지 1 ㎎/㎎, 구체적으로 1 ㎍/㎎ 내지 0.5 ㎎/㎎, 더 구체적으로 10 ㎍/㎎ 내지 0.1 ㎎/㎎ 함량으로 포함할 수 있다. 상기 범위로 포함하는 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 인간, 개, 닭, 돼지, 소, 양, 기니아피그 또는 원숭이를 포함하는 모든 동물에 적용될 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구, 직장, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 골수 내, 경막 내 또는 피하 등으로 투여될 수 있다.

경구 투여를 위한 제형은 정제, 환제, 연질 또는 경질 캅셀제, 과립제, 산제, 액제 또는 유탁제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여를 위한 제형은 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 필요에 따라 희석제, 부형제, 활택제, 결합제, 붕해제, 완충제, 분산제, 계면 활성제, 착색제, 향료 또는 감미제 등의 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 당업계의 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1 ㎍/kg/일 내지 1 g/kg/일, 구체적으로는 1 ㎍/kg/일 내지 10 mg/kg/일, 더 구체적으로는 10 ㎍/kg/일 내지 1 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 50 ㎍/kg/일 내지 100 ㎍/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 1일 1회 내지 3회 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용된 용어들은 특정 구체예들을 설명하기 위한 목적으로만 의도된 것이지 본 발명을 한정하고자 하는 의도가 아니다. 명사 앞에 개수가 생략된 용어는 수량을 제한하고자 하는 것이 아니라 언급된 명사 물품이 하나 이상 존재하는 것을 나타내는 것이다. 용어 "포함하는", "갖는", 및 "함유하는"은 열린 용어로 해석된다(즉, "포함하지만 이에 한정되지는 않는"의 의미).

수치의 범위를 언급하는 것은 단지 그 범위 내에 속하는 각각의 별개의 수치들을 개별적으로 언급하는 것을 대신하는 쉬운 방법이기 때문이며, 그것이 아님이 명시되어 있지 않는 한, 각 별개의 수치는 마치 개별적으로 명세서에 언급되어 있는 것처럼 본 명세서에 통합된다. 모든 범위의 끝 값들은 그 범위 내에 포함되며 독립적으로 조합 가능하다.

본 명세서에 언급된 모든 방법들은 달리 명시되어 있거나 문맥에 의해 명백히 모순되지 않는 한 적절한 순서로 수행될 수 있다. 어느 한 실시예 및 모든 실시예 또는 예시적 언어 (예컨대, "~과 같은")를 사용하는 것은, 청구범위에 포함되어 있지 않는 한, 단지 본 발명을 더 잘 기술하기 위함이지 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 명세서의 어떤 언어도 어떤 비청구된 구성요소를 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 해석되어져서는 아니된다. 다른 정의가 없는 한, 본 명세서에 사용되는 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 갖는 사람에 의해 통상 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다.

본 발명의 바람직한 구체예들은 본 발명을 수행하기 위해 발명자에게 알려진 가장 최적의 모드를 포함한다. 바람직한 구체예들의 변이들이 앞선 기재를 읽으면 당업자에게 명백하게 될 수 있다. 본 발명자들은 당업자들이 그러한 변이를 적절히 이용하길 기대하고, 발명자들은 본 명세서에 기재된 것과 다른 방식으로 본 발명이 실시되기를 기대한다. 따라서, 본 발명은, 특허법에 의해 허용되는 것과 같이, 첨부된 특허청구범위에서 언급된 발명의 요지의 균등물 및 모든 변형들을 포함한다. 더욱이, 모든 가능한 변이들 내에서 상기 언급된 구성요소들의 어떤 조합이라도 여기서 반대로 명시하거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 본 발명에 포함된다. 본 발명은 예시적인 구체예들을 참조하여 구체적으로 나타내어지고 기술되었지만, 당업자들은 하기 청구범위에 의해 정의되는 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않고서도 형태 및 디테일에서 다양한 변화가 행해질 수 있음을 잘 이해할 것이다.

이하, 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.

실시예 1: 펩티드의 합성

서열번호 1 의 펩티드를 종래에 알려진 고상 펩티드 합성법에 따라 제조하였다. 구체적으로, 펩티드들은 ASP48S(Peptron, Inc., 대한민국 대전)를 이용하여 Fmoc 고상 합성법(solid phase peptide synthesis, SPPS)을 통해 C-말단부터 아미노산 하나씩 커플링함으로써 합성하였다. 다음과 같이, 펩티드들의 C-말단의 첫번째 아미노산이 수지에 부착된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:

NH₂-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin

NH₂-Ala-2-chloro-Trityl Resin

*NH₂-Arg(Pbf)-2-chloro-Trityl Resin

펩티드 합성에 사용한 모든 아미노산 원료는 N-term이 Fmoc으로 보호(protection)되고, 잔기는 모두 산에서 제거되는 Trt, Boc, t-Bu (t-butylester), Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyl dihydro-benzofuran-5-sulfonyl) 등으로 보호된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:

Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ahx-OH, Trt-Mercaptoacetic acid.

커플링 시약(Coupling reagent)으로는 HBTU[2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt [N-Hydroxxybenzotriazole] /NMM [4-Methylmorpholine] 를 사용하였다. Fmoc 제거는 20%의 DMF 중 피페리딘(piperidine in DMF)을 이용하였다. 합성된 펩티드를 Resin에서 분리 및 잔기의 보호기 제거에는 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) [TFA (trifluoroacetic acid) /TIS (triisopropylsilane) / EDT (ethanedithiol) / H₂O=92.5/2.5/2.5/2.5] 를 사용하였다.

아미노산 보호기가 결합된 출발 아미노산이 고상 지지체에 결합되어 있는 상태를 이용하여 여기에 해당 아미노산들을 각각 반응시키고 용매로 세척한 후 탈보호하는 과정을 반복함으로써 각 펩티드를 합성하였다. 합성된 펩티드를 수지로부터 끊어낸 후 HPLC로 정제하고, 합성 여부를 MS로 확인하고 동결 건조하였다.

서열번호 1 의 Pep 1의 구체적인 과정을 설명하면 다음과 같다.

1) 커플링

NH₂-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin 에 보호된 아미노산(8당량)와 커플링 시약 HBTU(8당량)/HOBt(8당량)/NMM(16당량) 을 DMF에 녹여서 첨가한 후, 상온에서 2시간 동안 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.

2) Fmoc 탈보호

20%의 DMF 중의 피페리딘(piperidine in DMF) 을 가하고 상온에서 5분 간 2회 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.

3) 1과 2의 반응을 반복적으로 하여 펩티드 기본 골격 NH₂-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-chloro-Trityl Resin)을 만들었다.

4) 절단(Cleavagge) : 합성이 완료된 펩티드 Resin에 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) 을 가하여 펩티드를 Resin에서 분리하였다.

5) 얻어진 mixture에 Cooling diethyl ether를 가한 후, 원심 분리하여 얻어진 펩티드를 침전시킨다.

6) Prep-HPLC로 정제 후, LC/MS로 분자량을 확인하고 동결하여 powder로 제조하였다.

실시예 2: Pep1 과 FITC 컨쥬게이트의 생체 내 흡수 분포 측정

실험예 1: FITC 와 Pep1 의 컨쥬게이트의 제조

(1) FITC-Pep1 컨쥬게이트(FITC를 N-말단에 결합)의 제조

서열번호 1의 펩티드들을 FITC와 접합시킨 컨쥬게이트를 다음과 같이 제조하였다. 예를 들어 서열번호 1 의 pep1과 FITC의 컨쥬게이트, 즉 FITC-링커-pep1을 다음과 같이 제조하였다.

상기 실시예 1과 같이 하여 얻어진 펩티드 기본 골격 NH₂-링커-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-chloro-Trityl Resin)에 FITC를 반응시켰다. 구체적으로, 플루오레세인-5-이소씨오시아네이트(fluorescein-5-isothiocyanate, FITC) (8당량)과 N,N-디이소프로필에틸아민(N,N-Diisopropylethylamine, DIPEA)(16당량) 을 DMF에 녹여서 첨가한 후, 상온에서 2시간 동안 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다. 그 결과, FITC-링커-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-chloro-Trityl Resin를 얻었다. 여기서 링커는 6-아미노헥사노산 (6-aminohexanoic acid, Ahx)이다. 상기 합성이 완료된 펩티드 Resin에 TFA/TIS/H₂O=95/2.5/2.5 을 가하여 컨쥬게이트를 Resin에서 분리하였다. 얻어진 혼합물에 쿨링 디에틸 에테르(Cooling diethyl ether)를 가한 후, 원심 분리하여 얻어진 컨쥬게이트를 침전시켰다. 그 후 Prep-HPLC로 정제 후, 분석적(analytical) HPLC로 순도를 확인하고, LC/MS로 분자량을 확인하였다. 분자량 확인을 통해 얻어진 물질이 FITC-Pep1임이 입증되었다. 그 후 동결건조를 하였다.

(2) Pep1-FITC 컨쥬게이트(FITC를 C-말단에 결합)의 제조

상기 실시예 2의 1. (1)과 같이 펩티드 기본 골격(NH₂-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Dde)-2-chloro-Trityl Resin)을 제조하였다. 제조된 펩티드 기본 골격의 C-term에 FITC를 선택적으로 도입하기 위해서 N-term을 Boc으로 보호하였다. 그 후 Di-터트-부틸 디카보네이트(30당량)와 DIPEA(30당량) 을 DMF에 녹여서 첨가한 후, 상온에서 2시간 동안 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다. 그 결과, Boc-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Dde)-2-chloro-Trityl Resin을 얻었다. 그런 다음, C-term K의 잔기에 FITC를 붙이기 위하여 2% DMF 중의 히드라진(hydrazine in DMF)을 처리하여 C-term Lys의 잔기 보호기인 Dde를 제거하였다. 그 결과 Boc-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(NH2)-2-chloro-Trityl Resin를 얻었다. 그런 다음, FITC(8당량)과 DIPEA(16당량) 을 DMF에 녹여서 첨가한 후, 상온에서 2시간 동안 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다. 그 결과, Boc-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(FITC)-2-chloro-Trityl Resin를 얻었다. 상기 합성이 완료된 펩티드 Resin에 TFA/TIS/H₂O=95/2.5/2.5을 가하여 펩티드를 Resin에서 분리하였다. 얻어진 혼합물에 쿨링 디에틸 에테르를 가한 후, 원심 분리하여 얻어진 펩티드를 침전시켰다. 그런 다음 Prep-HPLC로 정제 후, 분석적(analytical) HPLC로 순도를 확인하고, LC/MS로 분자량을 확인하였다. 그 결과 얻어진 물질이 Pep1-FITC임이 입증되었다. 그 후 동결건조하였다.

실험예 2: FITC 와 결합된 Pep1 의 생체 내 흡수 분포 측정

FITC-Pep1 컨쥬게이트(FITC를 N-말단에 결합)와 Pep1-FITC 컨쥬게이트(FITC를 C-말단에 결합)를 각 2mg씩 식염(Saline) 200㎕l에 희석한 후, 31G(게이지) 인슐린 주사기 1 ml (BD, Cat#328820)를 이용하여 쥐(중앙실험동물, 6주령, C57BL/6)에게 정맥 주입(IV, intravenous injection) 하였다. 정맥 주입 24 시간 후에 쥐의 각 장기 조직(뇌, 간, 비장, 부신, 림프절)을 적출하여, 4% 파라포름알데하이드(Paraformaldehyde)를 넣고 액체질소(LN₂)에 보관하였다. 이를 막자와 막자사발을 이용하여 장기 조직을 잘게 부수어 e-tube(eppendorf tube)에 넣은 후, 무게를 측정하였다. 이후 각 장기마다 적당량의 RIPA 버퍼를 넣어서 용해시켰다(예를 들어, 뇌는 RIPA 버퍼 1 ml에 용해시켰다.). RIPA 버퍼로는 50mM Tris-HCl(pH 7.4), 1% NP-40, 0.25% 소듐 디옥시콜레이트(sodium deoxycholate), 150mM NaCl, 1mM EDTA, 단백질분해효소 저해제(protease inhibitor) 칵테일(cocktails)를 사용하였다. 이후 14,000rpm, 4℃의 조건으로 30분간 원심 분리 하였다. 원심 분리로 얻어진 침전물의 상층액을 96-웰 블랙 플레이트(NUNC, Denmark)에 100ul씩 넣고, FITC-Pep1 컨쥬게이트와 Pep1-FITC 컨쥬게이트 그리고 FITC(대조군)를 각 488nm(들뜸, Excitation) 및 525nm(방출, Emission) 파장에서 측정하였다.

실험 결과로부터 뇌(Brain)에서 Pep1-FITC 컨쥬게이트(Pep1의 C-말단에 FITC를 결합) 및 FITC-Pep1 컨쥬게이트(Pep1의 N-말단에 FITC 결합)가 대조군(FITC)과 유사한 정도 또는 더 많은 양이 검출되었음을 확인할 수 있다.(도 1 참조) 뇌뿐만 아니라 간(Liver), 비장(spleen), 부신(adrenal gland)에서도 Pep1-FITC 컨쥬게이트 및 FITC-Pep1 컨쥬게이트가 대조군(FITC)과 동등하거나 높은 정도의 형광 단위가 검출되었음을 확인할 수 있다(도 1 참조).

이와 같은 실험 결과는 pep 1이 간, 비장, 부신과 같은 다른 장기 뿐 아니라 일반적으로 통과가 어려운 혈뇌장벽을 통과하여 뇌 안으로까지 전달되었음을 보여준다고 할 수 있다.

<110> KAEL-GEMVAX CO., LTD. KIM, Sangjae <120> A Blood-Brain Barrier Penetrating Peptide, and the Conjugate Comprising The Same <130> 14P031/IND <160> 2 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile Pro Lys 1 5 10 15 <210> 2 <211> 1132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg Ser 1 5 10 15 His Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu Gly 20 25 30 Pro Gln Gly Trp Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe Arg 35 40 45 Ala Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg Pro 50 55 60 Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu Leu 65 70 75 80 Val Ala Arg Val Leu Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Lys Asn Val 85 90 95 Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro Pro 100 105 110 Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val Thr 115 120 125 Asp Ala Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg Val 130 135 140 Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Phe Val 145 150 155 160 Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu Tyr 165 170 175 Gln Leu Gly Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro Pro Pro His Ala Ser Gly 180 185 190 Pro Arg Arg Arg Leu Gly Cys Glu Arg Ala Trp Asn His Ser Val Arg 195 200 205 Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg Arg 210 215 220 Gly Gly Ser Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg Pro Arg Arg 225 230 235 240 Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser Trp 245 250 255 Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys Val 260 265 270 Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly Ala 275 280 285 Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His His 290 295 300 Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Arg Pro Trp Asp Thr Pro 305 310 315 320 Cys Pro Pro Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser Gly 325 330 335 Asp Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg Pro 340 345 350 Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly Ser 355 360 365 Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Leu Pro Arg Leu Pro Gln 370 375 380 Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn His 385 390 395 400 Ala Gln Cys Pro Tyr Gly Val Leu Leu Lys Thr His Cys Pro Leu Arg 405 410 415 Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro Gln 420 425 430 Gly Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg Leu 435 440 445 Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly Phe 450 455 460 Val Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly Ser 465 470 475 480 Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile Ser 485 490 495 Leu Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys Met 500 505 510 Ser Val Arg Asp Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly Cys 515 520 525 Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys Phe 530 535 540 Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser Phe 545 550 555 560 Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Arg Leu Phe Phe Tyr 565 570 575 Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln His 580 585 590 Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln 595 600 605 His Arg Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile 610 615 620 Pro Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val 625 630 635 640 Gly Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser 645 650 655 Arg Val Lys Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg 660 665 670 Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg 675 680 685 Ala Trp Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro 690 695 700 Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile 705 710 715 720 Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro Gln 725 730 735 Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala Ala His 740 745 750 Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr Leu Thr Asp 755 760 765 Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr Ser 770 775 780 Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn Glu 785 790 795 800 Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Met Cys His His 805 810 815 Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro 820 825 830 Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp 835 840 845 Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu 850 855 860 Arg Leu Val Asp Asp Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala 865 870 875 880 Lys Thr Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys 885 890 895 Val Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu 900 905 910 Ala Leu Gly Gly Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe 915 920 925 Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser 930 935 940 Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr Phe 945 950 955 960 Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly 965 970 975 Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Asp Leu Gln Val Asn 980 985 990 Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu Leu Leu Gln 995 1000 1005 Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe His Gln Gln 1010 1015 1020 Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp Thr Ala 1025 1030 1035 1040 Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Leu 1045 1050 1055 Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro Ser Glu Ala Val Gln Trp 1060 1065 1070 Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys Leu Thr Arg His Arg Val Thr 1075 1080 1085 Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ala Gln Thr Gln Leu Ser 1090 1095 1100 Arg Lys Leu Pro Gly Thr Thr Leu Thr Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn 1105 1110 1115 1120 Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys Thr Ile Leu Asp 1125 1130

Claims (14)

1. 혈뇌장벽 투과성 운반 펩티드(carrier peptide) 및 유효성분의 컨쥬게이트(conjugate)로서,
   상기 운반 펩티드는,
   서열번호 1을 포함하는 펩티드, 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드, 또는 그것의 단편이며,
   상기 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 및 단편은 서열번호 1 펩티드의 혈뇌장벽 투과성을 보유한 것인 컨쥬게이트.
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 단편은 3개 이상의 아미노산으로 구성된 단편인 컨쥬게이트.
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 운반 펩티드는, 30개 이하의 아미노산으로 구성된 컨쥬게이트.
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 유효성분은, 단백질, 핵산, 펩티드, 지질, 당지질, 미네랄, 당, 나노 입자, 생물학적 제제, 조영물질, 약물(drugs) 및 화학 물질(compounds) 중 선택된 하나 이상인 컨쥬게이트.
5. 제1항에 있어서, 상기 운반 펩티드와 유효성분은 공유결합에 의해, 선택적으로 링커에 의해 매개됨으로써, 접합된 것인 컨쥬게이트.
6. 제1항에 있어서, 상기 운반 펩티드와 유효성분은 비공유결합에 의해 접합된 것인 컨쥬게이트.
7. 제1항에 있어서, 상기 유효성분은, 사이토카인, 항체, 항체 단편, 치료용 효소, 가용성 수용체, 또는 리간드인, 컨쥬게이트.
8. 제 1 항에 있어서,
   상기 유효성분은 그것의 효능 타겟이 암세포, 면역세포 또는 섬유아세포인 컨쥬게이트.
9. 제 1 항에 있어서,
   상기 유효성분은 뇌 타겟팅 약물인 컨쥬게이트.
10. 제 8항에 있어서,
    상기 암세포는 뇌암 세포 및 백혈병 세포로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 암세포이며, 상기 면역세포는 T 림프구, B 세포 및 단핵구로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 면역세포인, 컨쥬게이트.
11. 유효성분으로서, 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 컨쥬게이트를 포함하는 조성물.
12. 제 11항에 있어서,
    상기 유효성분은 질병의 치료 또는 예방을 위한 유효성분이며, 상기 조성물은 약학 조성물인 조성물.
13. 제 12항에 있어서,
    상기 약학조성물은 뇌 타겟팅 약학조성물인 조성물.
14. 유효성분을 혈뇌장벽을 투과하여 뇌 안으로 전달하기 위한 방법으로서,
    제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 컨쥬게이트(conjugate)를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는,
    유효성분의 뇌 타겟팅 약물 전달 방법.

Images