JP2013195403A - イムノクロマトグラフィー検出方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明は、イムノクロマトグラフィー法により試料中の検出対象物を検出するイムノクロマトグラフィー装置であって、標識物質が分子量2000〜20000のメルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコールまたはその誘導体により保護され、アルギニン及びカゼインと共に標識物質保持部に乾燥保持されていることを特徴とするイムノクロマトグラフィー装置およびそれを用いる検出方法または検出キットである。本発明のイムノクロマトグラフィー装置を用いる検出方法にあっては、ブランク発色といった非特異的反応を消失することができるため、高性能、高感度な検査が可能である。
【選択図】なし
Description
さらに、試料を検体希釈液により測定に適した濃度に調整あるいは希釈した検体をこの検出キットの試料添加部に供給し、標識物質保持部に乾燥保持された標識物質と共に移動相として展開し、展開された移動相中の検出対象物を判定部で検出するにおいて、非特異的反応を抑制して、迅速、簡便、高精度に検査ができる検出キットを提供することにある。例えば、鼻汁または痰を検体希釈液により調整あるいは希釈したものをこの検出キットの試料添加部に供給することによって、迅速、簡便および高精度に病原体の感染検査ができる検出キットを提供することにある。
また、本発明は、非特異的反応を抑制して、試料中の検出対象物をイムノクロマトグラフィー法により検出する方法に関する。
(1)本発明の第1の特徴は、検体を含む展開液をイムノクロマトグラフ媒体中に添加する工程、標識物質保持部に乾燥保持されている金ナノ粒子により修飾された標識物質により検出対象物を認識させる工程、標識物質と検出対象物の複合体を移動相として展開させる工程、および展開された移動相中の検出対象物を判定部で検出する工程からなるイムノクロマトグラフィー検出方法において、標識物質をメルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体で保護し、次いでアルギニン及びカゼインと共に標識物質保持部に乾燥保持させることを特徴とするイムノクロマトグラフィー検出方法、にある。
(3)本発明の第3の特徴は、メルカプト基を1以上有するポリエチレングリコール及び/又はその誘導体により保護処理した後の溶液濃度が0.0001〜0.05重量%であることを特徴とする請求項1に記載のイムノクロマトグラフィー検出方法。
(4)本発明の第4の特徴は、クロマトグラフィー媒体(例えば、グラスファイバーパッド等)に湿潤させる前の標識物質溶液の終濃度として、アルギニンの濃度が液中0.01〜2重量%であり、カゼインの濃度が液中0.1〜10重量%であることを特徴とするイムノクロマトグラフィー検出方法、にある。
(5)本発明の第5の特徴は、金ナノ粒子の平均粒径が30〜100nmの赤色金ナノ粒子または平均粒径が20〜200nmの青色金ナノ粒子であることを特徴とするイムノクロマトグラフィー検出方法、にある。
(6)本発明の第6の特徴は、検体が、鼻汁、鼻腔拭い液、咽頭拭い液または痰であることを特徴とするイムノクロマトグラフィー検出方法、にある。
(8)本発明の第8の特徴は、試料添加部、標識物質保持部、クロマトグラフィー媒体部、検出部および吸収部から実質的に順次構成されており、且つ試料添加部の端部と検出部との間の領域部に、標識物質をメルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体により保護し、アルギニン及びカゼインと共に乾燥保持させた標識物質保持部が設けられていることを特徴とするイムノクロマトグラフィー装置、にある。
(9)本発明の第9の特徴は、試料添加部、標識物質保持部、クロマトグラフィー媒体部、検出部および吸収部から実質的に順次構成されており、且つ試料添加部の端部と検出部との間の領域部に標識物質をメルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体により保護し、アルギニン及びカゼインと共に乾燥保持させた標識物質保持部が設けられているイムノクロマトグラフィー装置からなることを特徴とする検出キット、にある。
本発明者等は、免疫クロマトグラフィー装置において、鋭意研究を重ねた結果、イムノクロマトグラフィー装置に標識物質保持部を設けるに際し、標識物質を分子量1000〜30000のメルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコールにより、好ましくは分子量2000〜20000のメルカプト基を1以上有するポリエチレングリコールにより保護し、アルギニン及びカゼインと共に乾燥保持させることにより、被検出物質に特異的に結合する物質(例えば、抗体、抗原、酵素、ペプチド等々の生体分子)で金属コロイド粒子を感作した感作金属コロイドを、乾燥処理から安定的に保護すると共に長期間に亘って乾燥状態で安定的に保持できるようにしたものである。その作用機序は不明ではあるが、分子量1000〜30000のメルカプト基を1以上有するポリエチレングリコール及び/又はその誘導体、アルギニン及びカゼインの三者は、共働して標識物質における金属粒子の自由表面に複合吸着することにより被覆飽和させて、非特異的反応を惹起するような吸着の可能性を顕著に消失させ、かつ、金属粒子の凝集を最低に保持する作用を果たし、さらに、移動相抗体と多孔質担体との疎水結合や移動相抗体と固定相担体との電気的相互作用を、アルギニン、メルカプト基を1以上有するポリエチレングリコール及び/又はその誘導体及びカゼインの相互作用によって高度に打ち消す作用をすることが想定される。さらに検出対象物や標識化した検出試薬の安定化、並びに検出対象物と標識抗体との反応による複合体の安定化が、メルカプト基を1以上有するポリエチレングリコール及び/又はその誘導体、アルギニン及びカゼインの相乗作用によってなされると同時にそれらの移動相としての移動をスムーズにする作用を果たすことにより、非特異反応を極めて顕著に抑制して、試料中の検出対象物を特異的に高感度かつ迅速に検出/測定が高精度に出来ることを初めて知見し、本発明の完成に至ったものである。
例えば、HS−PEG、HS−PEG−SH、HS−PPG、HS−PPG−SH
SH−PBG、HS−PBG−HS、HS−PEG−PPG、HS−PEG−PPG−HS、HS−PEG−PBG−HS、HS−PEG−PPG−PBG−HS などの各種EG,PG,BGなどをランダムに、またはブロックとして任意に含むポリマーが挙げられる。
ポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体部分の範疇に属する特に本発明の実施に有用な重合体は、ポリエチレングリコール(PEG)であり、その分子量としては、例えば、分子量1000〜30000の範囲のもの、具体的な分子量の例は、1500、5000、8000、15000、18000、25000というような任意の分子量のものが使用できる。実際には、その正確な数値の分子量を入手することが困難であるから、その分子量の前後のものを入手して使用すれば足りる。いずれにせよ、メルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体の範疇に属するものであることが必須の要件である。そして、メルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコールやその誘導体は、これらの混合物であっても使用可能である。
X−(CH2CH2O)n−CH2CH2−SH
(ここで、Xは、HS−、保護されていてもよいHO−、アルキル−O−を、nは、15〜540の整数を表わす。)で表わされ、その誘導体としては、末端基であるOH及びSHの保護基や誘導体をいう。例えば、OHの場合には、ペプチド合成の分野で汎用されている保護基、p−トルエンスルホニル基、カルボニル基等が含まれ、さらに、アルキル基、特に、メチル基が好ましく用いられる。
具体的なメルカプト基を1以上有するポリエチレングリコール及び/又はその誘導体としては、例えば、モノメルカプトポリエチレングリコール、ジメルカプトポリエチレングリコールが挙げられるが、分枝構造を採る場合には、トリメルカプトポリエチレングリコール及び/又はその誘導体などが挙げられる。
ブレンドポリマーにおける分子量が相違する二種類のメルカプト基含有ポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体の例としては、チオール−PEG−チオール3400とメトキシ−PEG−チオール5000の混合物からなる仕様のものを用いることが可能である。
このようなナノ金属粒子が分散状態にある、例えば、抗体、抗原による感作金属コロイド、感作金コロイド、感作白金−金コロイド、感作金−銀コロイド、鉄コロイドなど挙げられるが、金コロイドが取り扱いが容易であり、測定の精度などから推奨される。コロイド金標識増感剤の併用も診断の測定感度を向上させる為に推奨される。
診断の目的が、高感度、高精度が求められるような特殊な場合には、金コロイドの例で言えば、コロイドの粒子の形状を同じ形のもの、例えば真球状にしたものを多くするとか、コロイド粒子の粒径を均一にするということ、例えば、40nm、80nm、または120nmというような、特定な粒径の一点に集中させるという、いわゆる粒度分布曲線を狭くしたコロイドにするという工夫をすることも可能である。
さらには、金属コロイドの発色性を調和する為に、金の粒子状態およびその集まりにより色彩が異なるので、可視光線の領域における特有の色彩を有する、例えば、赤色金ナノ粒子コロイドと青色金ナノ粒子コロイドを任意の割合で配合することにより、所定の色彩を有する金ナノ粒子コロイドを調整することも可能である。判定の際には、色彩を調節することにより、より鮮明な色彩表示を工夫することにより、判定の精度を向上させることも可能であり、例えば赤(波長770〜640nm)緑(波長490〜430nm)青(490〜430nm)の光の三原色を適宜組み合わせる要領である。いずれの金属ナノ粒子コロイドも、製品として市場から容易に入手できる。
なお、平均粒径は、コロイドの粒度分布を動的光散乱法粒度分布計で測定した後の平均粒径を求めるという各種慣用の測定法に基づいて決めることができる。
含有させる緩衝剤としては、試料の添加や試料の蒸発や希釈による濃度の変化、外部からの多少の異物の混入によっても致命的な影響を生じない作用(緩衝作用)を持つものであれば特に制限はない。
本発明において、緩衝剤としては、酢酸緩衝液(酢酸+酢酸ナトリウム)、リン酸緩衝液(リン酸+リン酸ナトリウム)、クエン酸緩衝液(クエン酸+クエン酸ナトリウム)、ホウ酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液(トリス(ヒドロキシルメチル)アミノメタン+塩酸)、TE緩衝液(トリス+エチレンジアミン四酢酸)、TAE緩衝液(トリス+酢酸+エチレンジアミン四酢酸)、TBE緩衝液(トリス+ホウ酸+エチレンジアミン四酢酸)又はHEPES緩衝液(2−[4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジニル]エタンスルフォン酸)等が挙げられる。好ましくは、HEPES緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液などであり、より好ましくは、HEPES緩衝液である。また、悪影響を及ぼさない範囲内においてその他の緩衝剤を配合して使用することもできる。
従来のイムノクロマトグラフィー装置のサンプルパッド中へ生体試料を採取した本発明の検体希釈液を供給/滴下し、本発明のイムノクロマトグラフィー用標識物質溶液を担持させた、例えば、含浸後、乾燥させたイムノクロマトグラフィー装置を用いて、特異的に結合する反応、例えば、抗原抗体反応により試料中の検出対象物、例えば、咽頭拭い液中のインフルエンザウィルス等の同定・定量等の検査をすることができる。
イムノクロマトグラフィー装置は、試料添加部位(1)(「サンプルパッド」)、標識物質保持部位(2)、クロマトグラフィー媒体(3)、判定部位(4)、吸収部位(5)、およびバッキングシート(6)から構成されている。それらの各部位の構造、仕様および態様は以下のとおりである。
1)試料添加部位(1)(「サンプルパッド」)は、図1を参考にすると、試料が迅速に吸収されるが、保持力は弱く、速やかに反応部へと試料が移動していくような性質の多孔質シートで構成されている。多孔質シートとしては、セルロース濾紙、ガラスファイバー濾紙、ポリウレタン、ポリアセテート、酢酸セルロース、ナイロン、綿布等が挙げられる。本発明の多孔質シートとしては、ガラスファイバー濾紙が好ましく用いられる。本発明においては、非特異的反応を抑制するために、サンプルパッド(1)中に、緩衝液および非イオン界面活性剤等々を含むイムノクロマトグラフィー用試薬組成物を予め含浸させて後、乾燥させる等の手段により担持させる態様とすることができる。例えば、トリス塩酸緩衝液および片末端にアルキル基を持つポリオキシエチレン/ポリオキシプロピレンブロック共重合体の各成分を含有するイムノクロマトグラフィー用試薬組成物の成分を予め担持または保持させておく態様とすることが可能かつ有効であって、何ら妨げるものではない。
この判定部位(4)に用いる試薬成分(第一試薬)および標識試薬に用いる試薬成分(第二試薬)は、その一方又は両方がモノクローナル抗体であってもよいし、ポリクローナル抗体であってもよいが、特異性を保った上で製造コストや抗体の安定供給を考慮する場合は少なくとも一方がポリクローナル抗体であることが好ましい。更に、標識試薬に用いる試薬成分(第二試薬)は、測定感度等の点から特異性の高いモノクローナル抗体がより好ましい。インフルエンザウィルスといった病原性が高い検体の検査にあっては、両方がモノクローナル抗体であることが最も好ましい。
モノクローナル抗体は、常法に従って、抗原(インフルエンザウィルス等)で免疫したマウスの脾臓細胞と骨隋腫細胞をハイブリッドさせ、目的とする抗体を産生するハイブリドーマを選択し、このハイブリドーマから産生されてくるモノクローナル抗体を収得する。例えば、ケーラーとミルスタインの技法(Nature 256(1975)495−497)を参照。
ポリクローナル抗体は、常套手法により、抗原(インフルエンザウィルス等)を産生動物(例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ウマ等)に免疫して得た抗血清中から目的とする抗体を分離することにより得られる。
1.試料(例えば、咽頭拭い液などの検体)を、測定精度を低下させることなく、イムノクロマトグラフィー媒体中をスムーズに移動する程度の濃度に検体希釈液で調製あるいは希釈して検体試料とする。これをサンプルパッド(1)上に、所定量(通常、0.1〜2ml)滴下する。検体試料が滴下されると、サンプルパッド(1)中を検体試料は移動を開始する。
2.次いで検体試料は、標識物質保持部位(2)へと移動する。ここを検体試料が通過する際、標識物質保持部位(2)に保持されていた溶解補助物質がまず検体試料の水分に溶解し、次いで標識物質と共に保持されていた保護安定化物質並びに標識物質が、検体試料の水分に溶解し、検体試料と共に移動する。
このように、試料、例えば、検体試料中のインフルエンザウィルスの有無を検査することにより、インフルエンザウィルスの感染の有無を正確に判定することができる。
採取した試料である鼻汁、痰、鼻腔又は咽頭拭い液は、試料希釈液により約10〜100倍に希釈して、その150μLをサンプルパッド(1)上に滴下/供給して展開することにより、上記と同様の検査を行なうことができ、上記と同様な結果を達成することができる。
(1)クロマトグラフィー媒体上への判定部の作製
メンブレンとしてニトロセルロースからなるシート(ミリポア社製、商品名:HF12250mm×25mm)を用いた。5重量%のスクロースおよび5重量%のイソプロパノールを含む10mMのリン酸緩衝液(pH7.4)で1.0mg/mlの濃度になるように抗インフルエンザA型ウィルスモノクローナル抗体(第一抗体)を希釈し、その希釈された溶液150μLを抗体塗布機(BioDot社製)によりメンブラン上に1mmの幅で塗布し、50℃で30分間乾燥させ、室温で一晩乾燥させ、クロマトグラフィー媒体上に判定部を作製した。
金コロイド懸濁液(田中貴金属工業社製:平均粒子径40nm)0.5mLに、HEPES緩衝(pH7.5)で0.1mg/mLの濃度になるように希釈した抗インフルエンザAモノクローナル抗体0.1mL加え、室温で10分間静置した。次いで、0.01重量%のPEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−050SH、分子量5000)を含むHEPES緩衝液(pH7.5)を0.1ml加え(添加後のPEG−SH濃度:0.001重量%)、室温で10分間静置した。その後、十分撹拌した後、8000×gで15分間遠心分離を行い、上清を除去した後、1重量%の牛血清アルブミンを含むリン酸緩衝液(pH7.4)0.1mLを加え、標識物質溶液を作製した。
上記作製した標識物質溶液200μlに100μlの25重量%トレハロース水溶液と80μlの5重量%のカゼイン(終濃度:1重量%)を含むリン酸緩衝液(pH9.0)、5μlの10重量%のL−アルギニン水溶液(終濃度:0.1重量%)を加えたものを12mm×100mmのグラスファイバーパッド(ミリポア社製)に均一になるように添加した後、真空乾燥機にて乾燥させ、標識保持部材を作製した。次に、バッキングシートから成る基材に、上記作製した判定部を有するクロマトグラフィー媒体、標識物質保持部材、試料を添加する部分に用いるグラスファイバー製のサンプルパッド、展開した試料や標識物質を吸収するための吸収パッドを貼り合わせた。そして、裁断機で幅が5mmとなるように裁断し、イムノクロマトグラフィー用試験片とした。
1重量%の非イオン界面活性剤(日油株式会社製、商品名:MN811とナカライテスク社製、商品名NP−40の1:1混合物)、80mMの塩化カリウム、20mMのグアニジン塩酸塩、0.4重量%のポリビニルピロリドン(平均分子量36万)を含む50mMのHEPES緩衝液(pH7.5)を調製し、鼻汁・痰・咽頭ぬぐい液等の検体を希釈処理するための試薬とした。
上記作製したイムノクロマトグラフィー用試験片及び検体希釈液を用いて、以下の方法で検体中の抗原であるインフルエンザA型ウィルスの存在の有無を測定した。
即ち、吸引トラップの片方の管を吸引ポンプに、もう片方の管をインフルエンザに感染していない人の鼻腔の奥部まで挿入し、吸引ポンプを陰圧にして鼻汁を採取した。採取した鼻汁を上記検体希釈液で20倍に希釈し、これを陰性検体試料とした。また、陰性検体試料に、蛋白濃度が25ng/mLとなるように市販の不活化インフルエンザA型ウィルス抗原を加えたものを陽性検体試料とした。陰性検体試料、陽性検体試料とも120μLをイムノクロマトグラフィー用試験片のサンプルパッド上に添加し展開させ、15分後に目視判定をした。テストラインの赤い線を確認できるものを「+」、鮮明に確認できるものを「++」、より強く鮮明に確認できるものを「+++」、赤い線は確認できるが、非常に色が薄いものを「±」、赤い線を確認できないものを「−」とした。表1に結果を示す。
標識物質の保護剤として、実施例1の(2)標識物質溶液の作製の工程で、0.01重量%のPEG−SH(分子量2000)のものを使用して、実施例1と同じ手順態様で実施した。そして、同じ目視判定基準に従って判定した。その判定結果を表1に示す。
標識物質の保護剤として、実施例1の(2)標識物質溶液の作製の工程で、0.01重量%のPEG−SH(分子量20000)のものを使用して、実施例1と同じ手順態様で実施した。そして、同じ目視判定基準に従って判定した。その判定結果を表1に示す。
標識物質の保護剤として、実施例1の(2)標識物質溶液の作製の工程で、0.01重量%のPEG(分子量20000)という、メルカプト基を有しないポリエチレングリコールを使用して、実施例1と同じ手順態様で実施した。そして、同じ目視判定基準に従って判定した。その判定結果を表1に示す。
[比較例2]
標識物質の保護剤として、実施例1の(2)標識物質溶液の作製の工程で、0.01重量%のPEG(分子量5000)に代えて、同じ機能が予測されるポリビニルピロリドン(PVP K−90 分子量630000)を使用して、実施例1と同じ手順態様で実施した。そして、同じ目視判定基準に従って判定した。その判定結果を表1に示す。
標識物質の保護剤として、実施例1の(2)標識物質溶液の作製の工程で、0.01重量%のPEG−SH(分子量5000)のものを使用して、標識物質保持部のアミノ酸成分をL−アルギニンに代えて「L−グルタミン酸」を使用して実施例1と同じ態様で実施した。そして、同じ目視判定基準に従って判定した。その判定結果を表1に示す。
[比較例4]
標識物質の保護剤として、実施例1の(2)標識物質溶液の作製の工程で、0.01重量%のPEG−SH(分子量5000)のものを使用して、標識物質保持部のアミノ酸成分をL−アルギニンに代えて「L−グルタミン酸+グアニジン塩酸塩」を使用して実施例1と同じ態様で実施した。そして、同じ目視判定基準に従って判定した。その判定結果を表1に示す。
[比較例5]
標識物質の保護剤として、実施例1の(2)標識物質溶液の作製の工程で、PEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−050SH、分子量5000)を含むHEPES緩衝液(pH7.5)を用い、標識物質保持部のアミノ酸成分としてL−アルギニンを用いて、標識物質保持部のタンパク質成分であるカゼインに代えて「BSA」を使用して実施例1と同じ態様で実施した。そして、同じ目視判定基準に従って判定した。その判定結果を表1に示す。
1)表1の実施例1〜3の結果から、標識物質の保護剤としてPEG−SH(分子量2000〜20000)を含むHEPES緩衝液(pH7.5)を用い、これにカゼインを含むリン酸緩衝液(pH9.0)とL−アルギニン水溶液が配合される場合にのみ、抗原量が0ngでの「+」や「±」といった陽性、偽陽性を示さず、ブランク発色や非特異反応が抑制されることが解る。
3)また、比較例3、4に見るとおり、標識物質の保護剤としてPEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−050SH、分子量5000)を含むHEPES緩衝液(pH7.5)を用い、これにカゼインを含むリン酸緩衝液(pH9.0)を用いても、標識物質保持部のアミノ酸成分としてL−アルギニンを用いずにL−グルタミン酸あるいはL−グルタミン酸とグアニジン塩酸塩の混合物を用いた場合(即ち、比較例3、4の場合)には、抗原量が0ngで「+」といった陽性を示し、ブランク発色又は非特異反応が惹起していることが解る。
以下に、本発明を実施する場合には、上記実施例1〜3に準拠して実施することにより有意性を確認することができるが、その実施例の条件を若干変えて実施した場合でも同様に確認できることを、試験例または実施態様を挙げて詳細に説明するが、これらの試験例または実施態様に限定されるものではない。
別の実施態様として、上記実施例1における標識物質の保護剤であるPEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−050SH、分子量5000)に代えて、PEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−050SH、分子量5000)とPEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−020SH、分子量2000)との混合物を用いて同様にして測定を行なった。上記実施例1におけるPEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−050SH、分子量5000)のみの場合と略同様の目的を達成することが可能である。
また、上記実施例3におけるPEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−200SH、分子量20000)に代えて、PEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−050SH、分子量5000)との混合物を用いて同様にして測定を行なった。上記実施例3におけるPEG−SH(分子量20000)単独の場合と略同様の目的を達成することが可能であることが確認できる。
さらに、上記実施例1における標識物質の保護剤として、PEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−050SH、分子量5000)に代えて、PEG−SH(日本油脂株式会社製、商品名:SUNBRIGHT ME−100SH、分子量10000)を用いて同様にして測定を行なった。上記試験例1の場合と略同様の目的を達成することが可能であることが確認できる。
次に、保護剤のメルカプト基を1以上有するポリエチレングリコール誘導体により標識物質を保護処理した溶液中の該保護剤の濃度、保護処理した溶液へ混合されるアミノ酸成分のアルギニン及びタンパク質成分のカゼインの二成分の終濃度の仕様を示す(表2)。
・メルカプト基を1以上有するポリエチレングリコール誘導体(A)は、その保護処理後の溶液濃度(重量%)を0.0005、0.005、0.01、0.001、0.001という重量%濃度として標識物質を保護処理した以外は実施例1と同様に実施する。
・アルギニン溶液(B)は、その終濃度(重量%)を0.5、0.2、0.02、0、0.1という重量%濃度とした以外は実施例1と同様に実施する。
・カゼイン溶液(C)は、その終濃度(重量%)を0.2、5、2、1、0という重量%濃度とした以外は実施例1と同様に実施する。
(なお、各成分の重量部=各成分濃度×各成分の配合量×100で計算。)
[実施例5〜9]
実施例5〜9の各実施例における検体処理液中のグアニジン塩酸塩の濃度を、2,5,20,50,100mMとしたこと以外は実施例1と同様に実施し、それぞれ3回の繰り返し実験を行なった。その仕様と結果を表3に示す。
2 標識物質保持部
3 クロマトグラフィー媒体
4 判定部
5 吸収部
6 バッキングシート
Claims (10)
- 検体を含む展開液をイムノクロマトグラフ媒体中に添加する工程、標識物質保持部に乾燥保持されている金ナノ粒子により修飾された標識物質により検出対象物を認識させる工程、標識物質と検出対象物の複合体を移動相として展開させる工程、および展開された移動相中の検出対象物を判定部で検出する工程からなるイムノクロマトグラフィー検出方法において、標識物質をメルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体で保護し、次いでアルギニン及びカゼインと共に標識物質保持部に乾燥保持させることを特徴とするイムノクロマトグラフィー検出方法。
- メルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体が、メルカプト基を1以上有する分子量が1000〜30000のポリエチレングリコール及び/又はその誘導体であることを特徴とする請求項1に記載のイムノクロマトグラフィー検出方法。
- メルカプト基を1以上有するポリエチレングリコール及び/又はその誘導体により保護処理した後の溶液濃度が0.0001〜0.05重量%であることを特徴とする請求項1に記載のイムノクロマトグラフィー検出方法。
- クロマトグラフィー媒体に湿潤させる前の標識物質溶液の終濃度として、アルギニンの濃度が液中0.01〜2重量%であり、カゼインの濃度が液中0.1〜10重量%であることを特徴とする請求項1に記載のイムノクロマトグラフィー検出方法。
- 金ナノ粒子の平均粒径が30〜100nmの赤色金ナノ粒子または平均粒径が20〜200nmの青色金ナノ粒子であることを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載のイムノクロマトグラフィー検出方法。
- 検体が、鼻汁、鼻腔拭い液、咽頭拭い液または痰であることを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載のイムノクロマトグラフィー検出方法。
- 検体希釈液にグアニジンを含有させることを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載のイムノクロマトグラフィー検出方法。
- 含有させるグアニジンの濃度は、水又は緩衝液中1〜200mMであることを特徴とする請求項7に記載のイムノクロマトグラフィー検出方法。
- 試料添加部、標識物質保持部、クロマトグラフィー媒体部、検出部および吸収部から実質的に順次構成されており、且つ試料添加部の端部と検出部との間の領域部に、標識物質をメルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体により保護し、アルギニン及びカゼインと共に乾燥保持させた標識物質保持部が設けられていることを特徴とするイムノクロマトグラフィー装置。
- 試料添加部、標識物質保持部、クロマトグラフィー媒体部、検出部および吸収部から実質的に順次構成されており、且つ試料添加部の端部と検出部との間の領域部に標識物質をメルカプト基を1以上有するポリアルキレングリコール及び/又はその誘導体により保護し、アルギニン及びカゼインと共に乾燥保持させた標識物質保持部が設けられているイムノクロマトグラフィー装置からなることを特徴とする検出キット。
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