CN106290835A - 一种军团菌抗原乳胶法检测试剂盒 - Google Patents

一种军团菌抗原乳胶法检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及乳胶法免疫层析领域，具体公开了一种军团菌抗原乳胶法检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述衬底上，所述致敏乳胶聚酯膜上包被有彩色乳胶颗粒标记的抗军团菌单克隆抗体-1，免疫硝酸纤维素膜上设有包被了抗军团菌单克隆抗体-2的检测线和包被了羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。本发明的军团菌抗原乳胶法检测试剂盒反应灵敏，检测方便、检测结果稳定，节约成本。

Description

一种军团菌抗原乳胶法检测试剂盒
技术领域
本发明涉及免疫层析技术领域，具体涉及一种军团菌抗原检测试剂盒及其制备与应用。
背景技术
军团菌为需氧的多性革兰阴性菌，广泛存在于自然环境中，其传染源是水源和空调系统，通过空气传播。军团杆菌的菌体微小,悬浮在空气中,人在正常呼吸时,会将空气中含有军团杆菌的气溶胶吸入呼吸道内,致使军团杆菌有机会侵染肺泡组织和巨噬细胞,引发炎症,导致军团菌病，易爆发流行。
军团杆菌可以侵犯身体内许多器官,因此其临床表现常是多种多样。军团菌病根据临床特征,一般分为两种类型,一类为非肺炎型,病情较轻,潜伏期1～2d,似普通感冒或流感样起病,有发热、肌痛、咽喉疼痛、咳嗽等症状,约1～2周可自愈。另一类是肺炎型,潜伏期2～10d,其初发症状为全身不适、疲乏、肌肉酸痛、头痛、发热、咳嗽、胸痛、咳血、呼吸困难等,还能侵犯消化系统、中枢神经系统,重症病人可出现肝功能变化及肾功能衰竭,并可出现精神紊乱等脏器损害。
乳胶层析法是以彩色乳胶为标记物的免疫层析法，其检测原理与胶体金免疫层析法相类似，它不需要仪器，直接用肉眼判读结果，具有操作简单、快速，试剂稳定性好，易保存，单人份独立包装，试剂损耗少等优点，适合临床患者、健康体检者等标本的快速筛查。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术缺陷，从提高检测灵敏度出发，提供一种检测灵敏度高、特异性强、检测快速的军团菌抗原乳胶法检测试剂盒。
本发明的第一方面公开了一种军团菌抗原乳胶法检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述衬底上，所述致敏乳胶聚酯膜上包被有彩色乳胶颗粒标记的抗军团菌单克隆抗体-1，免疫硝酸纤维素膜上设有包被了抗军团菌单克隆抗体-2的检测线和包被了羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。
较优的，所述彩色乳胶颗粒为粒径290～300nm的聚苯乙烯颗粒。
较优的，所述彩色乳胶颗粒的颜色为红色。
本发明的另一方面，提供了一种军团菌抗原乳胶法检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
1)致敏乳胶颗粒的制备：用羧基化的聚苯乙烯标记抗军团菌单克隆抗体-1，获得致敏乳胶颗粒；
2)致敏乳胶聚酯膜的制备：用步骤1)获得的致敏乳胶颗粒包被聚酯膜，获得致敏乳胶聚酯膜；
3)将抗军团菌单克隆抗体-2和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别喷在硝酸纤维素膜检测线(T线)和质控线(C线)的位置上，烘干备用，制得免疫硝酸纤维素膜；
4)将滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC片上，切裁制得试剂条；
5)将试剂条装入塑料盒，获得军团菌抗原乳胶法检测试剂盒。
较优的，所述步骤1)致敏乳胶颗粒的制备为：
a.取一定体积的羧基化的聚苯乙烯，用2～3倍体积20mM pH 6.0的碳酸缓冲溶液多次冲洗、离心、弃上清，获得羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀；
b.用1～1.5倍体积20mM pH6.0的磷酸缓冲溶液悬浮上一步获得的羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀，并加入1～1.5倍体积的水溶性炭化二亚胺，室温下搅拌20～30分钟，最后用2～3倍体积0.01M pH 8.0的硼酸缓冲溶液多次冲洗、离心、弃上清，获得待标记物；
c.向步骤b获得的所述待标记物中加入2～3倍体积0.2M pH 7.0的硼酸缓冲液制成乳胶悬液，并向所述乳胶悬液中加入抗军团菌单克隆抗体-1；
d.充分反应过夜，加入终止剂终止反应，获得致敏乳胶颗粒。
在致敏乳胶颗粒的制备过程中，加入的水溶性炭化二亚胺、各缓冲溶液的体积均以初始所取的羧基化的聚苯乙烯的体积为基准，按本发明所述的体积倍数加入：如所取的羧基化的聚苯乙烯颗粒的体积为1ml，则需要加入的pH 6.0 20mM的磷酸缓冲溶液体积可以为1～1.5ml，pH 7.0 0.2M的硼酸缓冲液的体积为2～3ml。
更优的，所述步骤a中碳酸缓冲溶液为20mM pH 6.0含0.01％SDS的碳酸缓冲溶液。添加有SDS的碳酸缓冲溶液可以更好的洗去乳胶的表面活性物，清洗效果更好。
更优的，所述步骤a中羧基化的聚苯乙烯浓度为6～12w/v％。
更优的，所述步骤a中的离心条件为12000～14000rpm，离心10min。
更优的，所述步骤b中水溶性炭化二亚胺的浓度为9～10mg/ml。
更优的，所述步骤b中的离心条件为12000～14000rpm，离心10min。
更优的，所述步骤c乳胶悬液中羧基化的聚苯乙烯颗粒偶联抗军团菌单克隆抗体-1的量为：0.5mg抗军团菌单克隆抗体-1/10mg聚苯乙烯颗粒。
更优的，所述步骤d中终止剂为50mM pH 8.2的Tris-HCl。
本发明中，v％指体积百分比；w/v％指重量体积百分比，如1w/v％即为100ml溶液中含1g物质。
较优的，所述步骤2)中致敏乳胶聚酯膜的制备具体步骤为：
A.用乳胶缓冲液稀释致敏乳胶颗粒，获得0.3～0.5w/v％的致敏乳胶溶液；
B.用步骤A制备好的致敏乳胶溶液喷涂聚酯膜，干燥，制得致敏乳胶聚酯膜。
更优的，所述步骤A中的乳胶缓冲液配方如下：9～11v％1.0M Tris液，0.25～0.35w/v％聚乙二醇20000，0.18～0.20w/v％牛血清白蛋白，0.15～0.25w/v％脱脂牛奶，0.28～0.30w/v％酪蛋白，和0.04～0.06w/v％叠氮化钠，用盐酸调节pH至8.0±0.02，余量为水。
最优的，所述步骤A中的乳胶缓冲液配方如下：10v％1.0M Tris液、0.3w/v％聚乙二醇20000、0.2w/v％牛血清白蛋白，0.2w/v％脱脂牛奶、0.3w/v％酪蛋白，和0.05w/v％叠氮化钠，用盐酸调节pH至8.0±0.02，余量为水。
进一步较优的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明所述的乳胶缓冲液还包括下列组分：果糖、氯化钾和甘氨酸，且果糖、氯化钾和甘氨酸的总浓度为3.25～4.75g/L，缓冲液的pH值为7.3－7.5。
更优选的，各组分在乳胶缓冲液中的浓度为：
果糖1.0-2.0g/L；氯化钾0.25-0.5g/L；甘氨酸2.0-2.25g/L。
更优的，步骤B中用致敏乳胶溶液喷涂聚酯膜，每261mm×220mm聚酯膜上喷涂1.28ml致敏乳胶溶液，干燥，制得致敏乳胶聚酯膜。
较优的，所述步骤3)中，喷在硝酸纤维素膜质控线(C线)上的羊抗鼠IgG多克隆抗体的浓度为1.0～2.0mg/ml，喷在硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗军团菌单克隆抗体-2浓度为1.0～2.0mg/ml。较优的，每50m长硝酸纤维素膜分别包被有6ml的羊抗鼠IgG多克隆抗体和6ml的抗军团菌单克隆抗体-2溶液，检测线和质控线的间距为4.0～6.0mm。
本发明制备的军团菌抗原乳胶法检测试剂盒灵敏度高，特异性强此外本发明的试剂盒还具有操作简单，价格低，储存和运输方便等优点。
本发明军团菌抗原检测试剂盒的使用方法：
1.样品的检测：用吸管吸取样品液2-3滴加入到样品槽中，待检样品在毛细作用下向吸水纸端层析，依次通过聚酯膜、硝酸纤维素膜。到达聚酯膜后，被乳胶标记的抗体充分识别并结合，继续层析到硝酸纤维素膜上，与硝酸纤维素膜上包被的抗军团菌单克隆抗体-2发生免疫反应，显现出相应的红色线条。
2.结果的判读：在滴加样品后8-15分钟判读结果。
阳性：在检测试剂条的检测线和质控线位置各出现一条红色线条，表示样品中有军团菌抗原的存在。
阴性：只在质控线位置出现一条红色线条，表示样品中无军团菌抗原的存在。
无效：质控线位置无红线出现，表示结果无效，应重试。
本发明的有益效果在于：本发明的军团菌抗原乳胶法检测试剂盒灵敏度高，特异性强；此外本发明的试剂盒还具有操作简单，价格低，储存和运输方便等优点。
附图说明
图1：军团菌抗原乳胶法检测试剂盒试剂条示意图(1.滤样纸2.致敏乳胶聚酯膜3.免疫硝酸纤维素膜4.吸水纸5.检测线6.质控线)
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODSIN ENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。
实施例1军团菌抗原乳胶法检测试剂盒的制备
制备步骤：
方法1：
1.致敏乳胶颗粒的制备：
a.取0.4ml 10％羧基化的聚苯乙烯乳胶放入离心管中，加入1ml pH 6.0含0.01％SDS 20mM的碳酸缓冲液冲洗两次，14000g/min离心10min，弃上清，获得羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀。
b.用0.5ml pH 6.0 20mM的磷酸缓冲溶液悬浮上一步获得的羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀，并加入0.5ml 10％水溶性炭化二亚胺，室温下搅拌30分钟，最后用0.8ml 0.01M pH 8.0的硼酸缓冲溶液冲洗三次、离心、弃上清，获得待标记物。
c.向步骤b获得的待标记物中加入1ml 0.2M pH 7.0的硼酸缓冲液制成乳胶悬液，并向该乳胶悬液中加入2mg抗军团菌单克隆抗体-1。
d.充分反应12小时后，加入50mM pH8.2的Tris-HCl作为终止剂终止反应，获得致敏乳胶颗粒。
2.致敏乳胶聚酯膜的制备：
(1)乳胶缓冲液的制备：取800ml纯化水，往里加入100ml 1.0M Tris液，准确称取3.0g聚乙二醇20000、2.0g牛血清白蛋白，2.0g脱脂牛奶，3.0g酪蛋白溶液，0.5g叠氮化钠，1.5g果糖，0.4g氯化钾，2.20g甘氨酸，加入溶液中，充分溶解，混合均匀，用盐酸调节pH至8.0，加纯化水至总体积1000ml。
(2)用上一步的乳胶缓冲液稀释致敏乳胶颗粒，获得0.4w/v％的致敏乳胶溶液。
(3)取1.28ml致敏乳胶溶液用点乳胶机喷点在预处理后的聚酯膜上，置于37℃的温度下烘干2小时，密封4-30℃下避光保存，制得致敏乳胶聚酯膜。
3.免疫硝酸纤维素膜的制备：
将2.0mg/ml羊抗鼠IgG多克隆抗体和1.5mg/ml抗军团菌单克隆抗体-2分别喷在硝酸纤维素膜质控线和检测线的位置上，37℃下烘干2小时，密封4-30℃下避光保存，制得免疫硝酸纤维素膜。每50m长硝酸纤维素膜分别包被有6ml的羊抗鼠IgG多克隆抗体和抗军团菌单克隆抗体-2溶液，检测线和质控线的间距为5mm。
4.将滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC片上，切裁制得试剂条；将试剂条装入塑料盒制得检测试剂盒，获得军团菌乳胶法检测试剂盒。(如图1所示)。
方法2：
1.致敏乳胶颗粒的制备：
a.取1ml 6％羧基化的聚苯乙烯乳胶放入离心管中，加入2ml pH 6.0含0.01％SDS20mM的碳酸缓冲液冲洗三次，12000g/min离心10min，弃上清，获得羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀。
b.用1.5ml pH 6.0 20mM的磷酸缓冲溶液悬浮上一步获得的羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀，并加入1.5ml 9％水溶性炭化二亚胺，室温下搅拌20分钟，最后用3ml 0.01M pH 8.0的硼酸缓冲溶液冲洗三次、离心、弃上清，获得待标记物。
c.向步骤b获得的待标记物中加入2ml pH 7.0 0.2M的硼酸缓冲液制成乳胶悬液，并向该乳胶悬液中加入2.5mg抗军团菌单克隆抗体-1。
d.充分反应过夜后，加入终止剂终止反应，获得致敏乳胶颗粒。
2.致敏乳胶聚酯膜的制备：
(1)乳胶缓冲液的制备：取800ml纯化水，往里加入90ml 1.0M Tris液，准确称取3.5g聚乙二醇20000、1.8g牛血清白蛋白，1.5g脱脂牛奶，3.0g酪蛋白溶液，0.6g叠氮化钠1.0g果糖，0.25g氯化钾，2.00g甘氨酸，加入溶液中，充分溶解，混合均匀，用盐酸调节pH至8.0，加纯化水至总体积1000ml。
(2)用上一步的乳胶缓冲液稀释致敏乳胶颗粒，获得0.2w/v％的致敏乳胶溶液。
(3)取1.28ml致敏乳胶溶液用点乳胶机喷点在预处理后的聚酯膜上，置于37℃的温度下烘干2小时，密封4-30℃下避光保存，制得致敏乳胶聚酯膜。
3.免疫硝酸纤维素膜的制备：
将1.5mg/ml羊抗鼠IgG多克隆抗体和2.0mg/ml抗军团菌单克隆抗体-2分别喷在硝酸纤维素膜质控线和检测线的位置上，37℃下烘干2小时，密封4-30℃下避光保存，制得免疫硝酸纤维素膜。每50m长硝酸纤维素膜分别包被有6ml的羊抗鼠IgG多克隆抗体和抗军团菌单克隆抗体-2溶液，检测线和质控线的间距为5mm。
4.同方法1。
方法3：
1.致敏乳胶颗粒的制备：
a.取0.5ml 12％羧基化的聚苯乙烯乳胶放入离心管中，加入1.5ml pH 6.0含0.01％SDS20mM的碳酸缓冲液冲洗两次，13000g/min离心10min，弃上清，获得羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀。
b.用0.5ml pH 6.0 20mM的磷酸缓冲溶液悬浮上一步获得的羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀，并加入0.5ml 10％水溶性炭化二亚胺，室温下搅拌25分钟，最后用1.5ml 0.01M pH8.0的硼酸缓冲溶液冲洗两次、离心、弃上清，获得待标记物。
c.向步骤b获得的待标记物中加入1.5ml pH 7.0 0.2M的硼酸缓冲液制成乳胶悬液，并向该乳胶悬液中加入3.75mg抗军团菌单克隆抗体-1。
d.充分反应过夜后，加入终止剂终止反应，获得致敏乳胶颗粒。
2.致敏乳胶聚酯膜的制备：
(1)乳胶缓冲液的制备：取800ml纯化水，往里加入110ml 1.0M Tris液，准确称取2.5g聚乙二醇20000、1.9g牛血清白蛋白，2.5g脱脂牛奶，2.8g酪蛋白溶液和0.4g叠氮化钠2.0g果糖，0.5g氯化钾，2.25g甘氨酸加入溶液中，充分溶解，混合均匀，用盐酸调节pH至8.0，加纯化水至总体积1000ml。
(2)用上一步的乳胶缓冲液稀释致敏乳胶颗粒，获得0.6w/v％的致敏乳胶溶液。
(3)取1.28ml致敏乳胶溶液用点乳胶机喷点在预处理后的聚酯膜上，置于37℃的温度下烘干2小时，密封4-30℃下避光保存，制得致敏乳胶聚酯膜。
3.免疫硝酸纤维素膜的制备：
将1.0mg/ml羊抗鼠IgG多克隆抗体和1.0mg/ml抗军团菌单克隆抗体-2分别喷在硝酸纤维素膜质控线和检测线的位置上，37℃下烘干2小时，密封4-30℃下避光保存，制得免疫硝酸纤维素膜。每50m长硝酸纤维素膜分别包被有6ml的羊抗鼠IgG多克隆抗体和抗军团菌单克隆抗体-2溶液，检测线和质控线的间距为4mm。
4.同方法1。
实施例2对比试剂盒的制备
对比试剂盒的制备方法：乳胶缓冲液中不含果糖、氯化钾和甘氨酸，其他试剂及实验方法均同实施例1中方法1～3。
实施例4军团菌抗原乳胶法检测试剂盒的特异性实验
检测方法：
1.取实施例1制备的军团菌抗原乳胶法检测试剂盒和实施例2的对比试剂盒，将试剂盒放置在水平台面上。
2.待测样品的制备：按表1的四类实验对象，准备一个样品处理管，竖直放于处理管支架上，并在样品管里加入0.6ml蒸馏水；以人尿液作为样品，将等体积尿液倒入样品管中，充分搅拌均匀作为待测样品。
3.每类实验对象为100人，检测结果如表1：
表1军团菌抗原乳胶法检测试剂盒特异性试验结果
由上表可知，本发明的军团菌抗原乳胶法检测试剂盒对大肠杆菌及痢疾杆菌均无交叉反应，特异性良好。

Claims (10)

1.一种军团菌抗原检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述衬底上，其特征在于，所述致敏乳胶聚酯膜上包被有彩色乳胶颗粒标记的抗军团菌单克隆抗体-1，免疫硝酸纤维素膜上设有包被了抗军团菌单克隆抗体-2的检测线和包被了羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述彩色乳胶颗粒为粒径290～300nm的聚苯乙烯颗粒。
3.权利要求1-2任一权利要求所述的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
1)致敏乳胶颗粒的制备：用羧基化的聚苯乙烯标记抗军团菌单克隆抗体-1，获得致敏乳胶颗粒；
2)致敏乳胶聚酯膜的制备：用步骤1)获得的致敏乳胶颗粒包被聚酯膜，获得致敏乳胶聚酯膜；
3)将抗军团菌单克隆抗体-2和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别喷在硝酸纤维素膜检测线和质控线的位置上，烘干备用，制得免疫硝酸纤维素膜；
4)将滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC片上，切裁制得试剂条；
5)将试剂条装入塑料盒，获得军团菌抗原乳胶法检测试剂盒。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)致敏乳胶颗粒的制备为：
a.取一定体积的羧基化的聚苯乙烯，用2～3倍体积20mM pH 6.0的碳酸缓冲溶液多次冲洗、离心、弃上清，获得羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀；
b.用1～1.5倍体积20mM pH6.0的磷酸缓冲溶液悬浮上一步获得的羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀，并加入1～1.5倍体积的水溶性炭化二亚胺，室温下搅拌20～30分钟，最后用2～3倍体积0.01M pH 8.0的硼酸缓冲溶液多次冲洗、离心、弃上清，获得待标记物；
c.向步骤b获得的所述待标记物中加入2～3倍体积0.2M pH 7.0的硼酸缓冲液制成乳胶悬液，并向所述乳胶悬液中加入抗军团菌单克隆抗体-1；
d.充分反应过夜，加入终止剂终止反应，获得致敏乳胶颗粒。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a中碳酸缓冲溶液为20mM pH 6.0含0.01％SDS的碳酸缓冲溶液。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a中羧基化的聚苯乙烯浓度为6～12w/v％，所述步骤b中水溶性炭化二亚胺的浓度为9～10mg/ml。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤c乳胶悬液中羧基化的聚苯乙烯颗粒偶联抗军团菌单克隆抗体-1的量为：0.5mg抗军团菌单克隆抗体-1/10mg聚苯乙烯颗粒。
8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中致敏乳胶聚酯膜的制备具体步骤为：
A.用乳胶缓冲液稀释致敏乳胶颗粒，获得0.3～0.5w/v％的致敏乳胶溶液；
B.用步骤A制备好的致敏乳胶溶液喷涂聚酯膜，干燥，制得致敏乳胶聚酯膜。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤A中的乳胶缓冲液配方如下：9～11v％1.0M Tris液，0.25～0.35w/v％聚乙二醇20000，0.18～0.20w/v％牛血清白蛋白，0.15～0.25w/v％脱脂牛奶，0.28～0.30w/v％酪蛋白，和0.04～0.06w/v％叠氮化钠，用盐酸调节pH至8.0±0.02，余量为水。
10.权利要求1-2任一权利要求所述的试剂盒在制备军团菌检测试剂中的应用。
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