WO2022054821A1 - 偽陰性の抑制により特異性を改善した検査試薬 - Google Patents

偽陰性の抑制により特異性を改善した検査試薬 Download PDF

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友樹 篠原
亜衣 佐藤
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デンカ株式会社
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Definitions

  • the present invention is a virus / bacterium from a sample derived from a body fluid such as a nasal swab sample, a nasal suction sample, a nasal cleaning sample, a nasal bite nasal juice sample, a pharyngeal swab sample, a saliva sample, a stool sample, a serum sample, a plasma sample, and a urine sample.
  • a substance to be detected such as a protein to be detected
  • a detection reagent that utilizes an antigen-antibody reaction or a binding reaction between substances having an interaction
  • the present invention relates to a technique capable of strongly suppressing a false negative reaction that could not be suppressed by a conventional method by using a compound having a specific chemical structure in a member or the like that comes into contact with a sample in the above step.
  • test reagents and kits have been developed one after another to detect the presence or absence of pathogen infection such as viruses and bacteria, and the presence or absence of pregnancy, using the antigen-antibody reaction and the binding reaction between substances having an interaction.
  • Each test reagent includes a pretreatment step to create conditions suitable for the detection reaction after the sample is taken from the patient, and this step is important for obtaining accurate results.
  • many of the simple test reagents have the characteristics of being easy to operate and inexpensive without the need for special equipment, and are widely used in general hospitals and clinics in addition to large hospitals and medical testing centers. It is often used by users other than inspection specialists. Therefore, it is very important that the test accuracy of the reagent is high.
  • test reagents examples include simple test reagents for testing pathogen infections and simple test reagents for pregnancy diagnosis. These test reagents are often carried out at the medical institution that the patient first visits, and it is possible to determine the presence or absence of infection or pregnancy on the spot from the sample collected from the patient, and to take treatment measures at an early stage. Therefore, the importance of simple test reagents in medical treatment is increasing. With the increasing use of simple test reagents, users are demanding more reproducible test results and test accuracy as reagent performance.
  • an immunoassay method using an antigen-antibody reaction is generally known as a typical reagent for a simple test method.
  • a complex of a trapping substance (capturing substance) that specifically binds to the substance to be detected and a labeled substance that specifically binds to the substance to be detected is formed on the membrane, and the label is detected / quantified.
  • Detect (measure or quantify) the substance to be detected.
  • the immunochromatography method is widely used for detecting a wide variety of substances to be detected because the measuring device is simple and the cost is excellent.
  • a detection unit solidified with an antibody that specifically binds to a substance to be detected on a membrane strip such as nitrocellulose as a capture substance, and a labeled substance that specifically binds to the substance to be detected.
  • a sample sample containing a substance to be detected is dropped onto an inspection device provided with a labeled substance containing a substance, and the complex is developed while forming a substance-labeled complex to be detected, and the complex is captured by the detection unit. Detect or quantify the label with.
  • test reagent is a test reagent having high sensitivity and specificity and less likely to cause erroneous determination.
  • specificity there is always a technical issue of how reagent design can respond to the diversity of sample components derived from the different backgrounds of each patient, and more effective non-specificity. Eliminating the reaction is an extremely important issue in the simple test method.
  • Viruses, bacteria, and detection targets from body fluid-derived samples such as nasal swab samples, nasal suction samples, nasal lavage samples, nasal swab nasal juice samples, pharyngeal swab samples, saliva samples, stool samples, serum samples, plasma samples, and urine examinations.
  • body fluid-derived samples such as nasal swab samples, nasal suction samples, nasal lavage samples, nasal swab nasal juice samples, pharyngeal swab samples, saliva samples, stool samples, serum samples, plasma samples, and urine examinations.
  • a substance to be detected such as a protein to be detected with a detection reagent that utilizes an antigen-antibody reaction or a binding reaction between substances having an interaction
  • detection reagent that utilizes an antigen-antibody reaction or a binding reaction between substances having an interaction
  • there are still false positive reactions and false negative reactions that could not be suppressed by conventional methods.
  • the present invention provides a sample extract containing a component capable of suppressing
  • the present inventors test samples derived from body fluids such as nasal swab samples, nasal suction samples, nasal lavage samples, nasal swab nasal juice samples, pharyngeal swab samples, saliva samples, stool samples, serum samples, plasma samples, and urine samples.
  • body fluids such as nasal swab samples, nasal suction samples, nasal lavage samples, nasal swab nasal juice samples, pharyngeal swab samples, saliva samples, stool samples, serum samples, plasma samples, and urine samples.
  • a test kit for detecting a substance to be detected in a sample by utilizing an antigen-antibody reaction or a binding reaction between substances having an interaction which has a phenyl group, a benzyl group, a tolyl group or a hydroxyyl group.
  • a non-specific reaction inhibitory component that suppresses false negatives which is a compound having a carboxyl group, a methoxycarboxyl group, or an ethoxycarboxyl group, which may further have a hydroxyl group, is water-soluble, and has a molecular weight of 6000 Da or less.
  • An immunochromatographic test reagent which has a phenyl group, a benzyl group, a tolyl group or a xsilyl group, further has a carboxyl group, a methoxycarboxyl group or an ethoxycarboxyl group, and further has a hydroxyl group.
  • the test reagent according to [1] which comprises a sample extract containing a non-specific reaction inhibitory component that suppresses false negatives, which is a water-soluble compound having a molecular weight of 6000 Da or less.
  • sample extract contains a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives of 0.1 to 10 (w / v)%.
  • test reagent according to any one of [1] to [4], wherein the compound having a molecular weight of 6000 Da or less is a compound represented by any of the following general formulas (I) to (V) or tryptophan.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr, n is 0 or 1, and m is 0, 1, 2, 3 or 4.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr, and R3 is COOH, COOLi, COONa, COOK, COORb, COOCs, COOFr, COOCH 3 , COOC 2 H 5 , OCOH or CH 3 , with R3 and COOR2 located in the ortho, meta or para of the benzene ring.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr
  • R4 is H or CH 3
  • n is 0 or 1.
  • R5 is the side of glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, cysteine, methionine, asparagine, glutamine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, glutamic acid, aspartic acid, arginine, lysine or histidine. It is a chain.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr
  • R6 is NH or O, n0, 1, 2, 3 or 4.
  • It has a phenyl group, a benzyl group, a tolyl group or a xsilyl group, and further has a carboxyl group, a methoxycarboxyl group or an ethoxycarboxyl group, and may further have a hydroxyl group, and has water solubility.
  • Compounds with a molecular weight of 6000 Da or less are aspartame, phenylalanine, phenylalanine methyl ester, mandelic acid, 2-phenylpropionic acid, 3-phenylpropionic acid, phenylglycine, phenylglycine methyl ester, phenylglycine ethyl ester, phenyllactic acid, and phenylpyrvic acid.
  • test reagent according to any one of [1] to [5], which is a compound selected from the group consisting of isomers, geometric isomers, structural isomers, stereo isomers and positional isomers.
  • test reagent according to any one of [1] to [6], which comprises an amino acid or an amino acid derivative selected from the group consisting of.
  • the sample extract further contains a halide selected from the group consisting of lithium chloride, sodium chloride, potassium chloride, sodium bromide, potassium bromide, sodium iodide and potassium iodide, [1].
  • -A test reagent according to any one of [7].
  • the sample has a phenyl group, a benzyl group, a trill group or a xsilyl group in advance, and further has a carboxyl group, a methoxycarboxyl group or an ethoxycarboxyl group, and further has a hydroxyl group.
  • the method for detecting the substance to be detected is an immunochromatography method, which has a phenyl group, a benzyl group, a tolyl group or a xylyl group, and further has a carboxyl group, a methoxycarboxyl group or an ethoxycarboxyl group, and further has a hydroxyl group.
  • a sample is placed in a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives, which is a compound having a group, water solubility, and a molecular weight of 6000 Da or less, and the sample extract is tested for immunochromatography.
  • the method of [9] which is added to the device.
  • the method for detecting the substance to be detected is an immunochromatography method, wherein the sample has a phenyl group, a benzyl group, a tolyl group or a xsilyl group, and further has a carboxyl group, a methoxycarboxyl group or an ethoxycarboxyl group. Further, for an immunochromatographic test device containing a site impregnated with a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor component that suppresses false negatives, which is a compound having a hydroxyl group, water solubility, and a molecular weight of 6000 Da or less. The method of [9] to add. [12] The method according to any one of [9] to [11], wherein the sample extract contains a non-specific reaction inhibitor that suppresses a false negative of 0.1 to 10 (w / v)%.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr, n is 0 or 1, and m is 0, 1, 2, 3 or 4.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr, and R3 is COOH, COOLi, COONa, COOK, COORb, COOCs, COOFr, COOCH 3 , COOC 2 H 5 , OCOH or CH 3 , with R3 and COOR2 located in the ortho, meta or para of the benzene ring.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr
  • R4 is H or CH 3
  • n is 0 or 1.
  • R5 is the side of glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, cysteine, methionine, asparagine, glutamine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, glutamic acid, aspartic acid, arginine, lysine or histidine. It is a chain.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr
  • R6 is NH or O, n0, 1, 2, 3 or 4.
  • It has a phenyl group, a benzyl group, a tolyl group or a xsilyl group, and further has a carboxyl group, a methoxycarboxyl group or an ethoxycarboxyl group, and may further have a hydroxyl group, and has water solubility.
  • Compounds with a molecular weight of 6000 Da or less are aspartame, phenylalanine, phenylalanine methyl ester, mandelic acid, 2-phenylpropionic acid, 3-phenylpropionic acid, phenylglycine, phenylglycine methyl ester, phenylglycine ethyl ester, phenyllactic acid, and phenylpyrvic acid.
  • arginine, lysine, arginine ethyl ester, arginine methyl ester, glycine ethyl ester and glycine methyl ester, and optical isomers, geometric isomers, structural isomers and stereoisomers of these compounds are added.
  • the sample extract further contains a halide selected from the group consisting of lithium chloride, sodium chloride, potassium chloride, sodium bromide, potassium bromide, sodium iodide and potassium iodide.
  • a halide selected from the group consisting of lithium chloride, sodium chloride, potassium chloride, sodium bromide, potassium bromide, sodium iodide and potassium iodide.
  • a sample derived from body fluid such as a nasal swab sample, a nasal suction sample, a nasal cleaning sample, a nasal swab nasal juice sample, a pharyngeal swab sample, a saliva sample, a stool sample, a serum sample, a plasma sample, and a urine sample.
  • a detection reagent that detects a specific virus, bacterium, protein, low molecular weight compound, etc. by utilizing an antigen-antibody reaction or a binding reaction between substances having an interaction, the false negative reaction generated by contamination of a sample is more strongly suppressed.
  • false clinical diagnosis due to non-specific reaction can be further prevented, which is beneficial for both patients and users such as doctors, laboratory technicians, and nurses.
  • the present invention when detecting a substance to be detected in a sample with a detection reagent utilizing an antigen-antibody reaction or a binding reaction between substances having an interaction, the compound and the sample are brought into contact with each other to suppress a false negative reaction. It is a method of preventing a decrease in signal, that is, a decrease in sensitivity.
  • the antibody also includes an antigen-binding fragment of the antibody.
  • sample The sample used is not limited. Examples of the sample include pharyngeal swab, nasal swab, nasal suction, pharyngeal lavage, nasal lavage, nasal mucus, saliva, serum, plasma, whole blood, stool suspension, urine, culture solution and the like. .. These are pharyngeal swab samples, nasal swab samples, nasal suction samples, pharyngeal lavage samples, nasal lavage samples, nasal mucus samples, saliva samples, serum samples, plasma samples, whole blood samples, stool samples, stool suspension samples, and urine. It is called a sample, a culture solution sample, etc. It can be used by diluting it with a buffer solution, or it can be used as it is without diluting it.
  • the substance to be detected is not limited to any substance, and may be any substance to be detected. Specific examples include influenza virus, adenovirus, RS (respiratory syncytial) virus, human metapneumovirus (hMPV), hepatitis A virus (HAV), hepatitis B virus (HBV), human immunodeficiency virus (HIV), norovirus, Viral antigens such as coronaviruses such as SARS-CoV, MERS-CoV and SARS-CoV2; bacterial antigens such as methicillin-resistant yellow staphylococcus (MRSA), group A lytic bacillus, group B lytic bacterium, and Legionella spp.
  • influenza virus adenovirus
  • RS respiratory syncytial virus
  • HAV hepatitis A virus
  • HBV hepatitis B virus
  • HMV human immunodeficiency virus
  • norovirus Viral antigens such as coronaviruses such as SARS-Co
  • Toxins Mycoplasma antigens; Chlamydia antigens such as Chlamydia trachomatis; Protozoan antigens; Fungal antigens; Hormones such as human chorionic gonadotropin; C-reactive proteins, myoglobins, myocardial troponins, procalcitonin and other proteins; Various tumor markers ; Examples include antigens such as pesticides and environmental hormones, and further examples include antibodies against the above-mentioned bacteria, viruses and the like.
  • the method of collecting the sample is not limited, but the throat swab sample, the nasal swipe sample, the nasal suction sample, the pharyngeal lavage sample, the nasal nasal juice sample, the saliva sample, the serum sample, the plasma sample, the whole blood sample, the stool sample, and the stool suspension.
  • a method of collecting a sample derived from a body fluid such as a liquid sample, a urine sample, a culture solution sample, or an excrement using a sample collection device such as a cotton swab, a method of collecting using a suction device, a blood collection tube, etc.
  • a method of collecting using the above can be mentioned.
  • the sample is brought into contact with a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives.
  • a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives by contacting the sample with a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives, false negatives can be suppressed when the sample is measured.
  • the substance to be detected and the non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives come into contact with each other. It is also called contact with a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives.
  • contacting the sample with a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives may be treated with a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives.
  • the sample extract is a liquid that floats the substance to be detected in the sample and makes it easy to measure.
  • a sample treatment solution It can also be called a sample diluent, a sample suspension, or the like.
  • the term "before subjecting to a test” refers to before reacting with a substance to be detected in a sample and an antibody or antigen against the substance to be detected, or before the substance to be detected in a sample reacts with a substance having an interaction with the substance to be detected.
  • a reaction with an antibody or an antigen means a binding with an antibody or an antigen
  • a reaction with a substance having an interaction with a substance to be detected in a sample means a binding with a substance having an interaction.
  • a method of contacting the sample with the non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives of the present invention a method of putting the sample in a solution containing a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives, mixing them, and contacting them are used for measurement.
  • the test device is impregnated with a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives, and the sample is added to the test device used for the test to bring the sample into contact with the non-specific reaction suppressor that suppresses false negatives. There is a way to make it.
  • a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives is added to a sample extract that floats and disperses the collected sample.
  • a method of contacting the sample with a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives when the sample is added to the sample extract and mixed is a method of contacting the sample with a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives when the sample is added to the sample extract and mixed.
  • a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives if the sample is a nasal swab, use a cotton swab to collect the nasal swab and soak the collected sample. By putting a cotton swab in the sample extract to float, disperse and extract the sample, the sample can be brought into contact with the non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives.
  • the test device used for the measurement contains a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives, and the sample is added to the test device to bring the sample into contact with the non-specific reaction suppressor that suppresses false negatives.
  • a sample extract containing a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives is included in a fibrous or porous substrate such as a pad made of a non-woven fabric, a textile, a sponge, etc. or a filtration filter possessed by the inspection device.
  • examples of the inspection device include a device for the later-described immunochromatography method.
  • the material of the porous base material of the inspection device is not limited in any way, and examples thereof include pulp, cotton, wool, polyester, polypropylene, nylon, acrylic glass fiber, and nitrocellulose.
  • the test device used for the measurement contains a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives, and the sample is added to the test device to bring the sample into contact with the non-specific reaction suppressor that suppresses false negatives.
  • the porous substrate is impregnated with a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor component that suppresses false negatives and dried, and before the reaction for detecting the substance to be detected occurs on the inspection device.
  • the sample may be brought into contact with the porous substrate in the above step or the same step.
  • a sample when a sample is added to a test device, the sample expands on the test device, reaches a site where a reaction occurs on the device, and a reaction such as an antibody-antigen reaction occurs.
  • a porous substrate containing a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor component that suppresses false negatives at the site before the reaction on the test device, the sample will be false negative before the reaction.
  • a filtration filter may be used as a porous substrate, and a filtration filter containing a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor component that suppresses false negatives may be provided at a site to which a sample is added.
  • a cotton swab is used to collect the nasal swab, and the cotton swab impregnated with the collected sample does not contain a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives.
  • the sample is dispersed and dissolved in a sample extract of any composition, the above-mentioned sample extract is placed in a filtration filter containing a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives, which is a component of the test device.
  • a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives can be brought into contact with the sample.
  • the non-specific reaction inhibitory component that suppresses false negatives of the present invention has a phenyl group, a benzyl group, a tolyl group or a xsilyl group, further has a carboxyl group, a methoxycarboxyl group or an ethoxycarboxyl group, and further has a hydroxyl group.
  • a compound having a water solubility and having a molecular weight of 6000 Da or less Also included are optical isomers, geometric isomers, structural isomers, stereoisomers and positional isomers, including metal salts of these compounds.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr, n is 0 or 1, and m is 0, 1, 2, 3 or 4.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr, and R3 is COOH, COOLi, COONa, COOK, COORb, COOCs, COOFr, COOCH 3 , COOC 2 H 5 , OCOH or CH 3 , with R3 and COOR2 located in the ortho, meta or para of the benzene ring.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr
  • R4 is H or CH 3
  • n is 0 or 1. ..
  • R5 is the side of glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, cysteine, methionine, asparagine, glutamine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, glutamic acid, aspartic acid, arginine, lysine or histidine. It is a chain.
  • R2 is H, CH 3 , C 2 H 5 , Li, Na, K, Rb, Cs or Fr, R6 is NH or O, n0, 1, 2, 3 or 4. ]
  • esters phenyllactic acid, phenylpyrubic acid, benzoic acid, phthalic acid, acetylsalicylic acid, horse uric acid, N-toluoil glycine, N-carbobenzyloxy amino acids, N-phenylglycine, phenoxyacetic acid, tryptophan, and metal salts thereof.
  • Examples thereof include compounds selected from the group consisting of optical isomers, geometric isomers, structural isomers, steric isomers and positional isomers.
  • aspartame phenylalanine, phenylalanine methyl ester (including hydrochloride), mandelic acid, 2-phenylpropionic acid, 3-phenylpropionic acid, phenylglycine, phenylglycine methyl ester, phenylglycine ethyl ester, phenyllactic acid, phenyl.
  • Pyruvate benzoic acid, phthalic acid, acetylsalicylic acid, horse uric acid, N-toluole glycine, N-carbobenzyloxy amino acid, N-phenylglycine, phenoxyacetic acid, tryptophan include their metal salts and are also optical. Also included are isomers, geometric isomers, structural isomers, stereoisomers and positional isomers. Examples of the metal salt include Li salt, Na salt, K salt, Rb salt, Cs salt, Fr salt and the like.
  • Examples of the compound represented by the above general formula (I) include aspartame, phenylalanine, phenylalanine methyl ester, mandelic acid, 2-phenylpropionic acid, 3-phenylpropionic acid, phenylglycine, phenylglycine methyl ester, phenylglycine ethyl ester and phenyl. Examples include lactic acid, phenylpyrubic acid and benzoic acid. Examples of the compound represented by the general formula (II) include phthalic acid and acetylsalicylic acid. Examples of the compound represented by the general formula (III) include hippuric acid and N-toluylglycine. Examples of the compound represented by the general formula (IV) include N-carbobenzyloxyamino acid. Examples of the compound represented by the general formula (V) include N-phenylglycine and phenoxyacetic acid.
  • the non-specific reaction suppressing component that suppresses these false negatives is contained in a sample extract, a member such as a filtration filter that comes into contact with the sample in the step prior to the detection reaction, and the like.
  • the concentration is preferably 0.001 (w / v)% or more, more preferably 0.1 (w / v)% or more, and most preferably 1 (w / v)% or more.
  • a plurality of these non-specific reaction inhibitory components can be used at the same time, and the concentration in that case is preferably 0.001 (w / v)% or more, more preferably 0.1 (w / v)% or more, and 1 (w / w / v). v)% or more is most preferable.
  • the upper limit of the concentration does not need to be set, but is, for example, 10 (w / v)% or less, or 5 (w / v)% or less. Even when the porous substrate such as a filtration filter contains a sample extract containing a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives, the porous substrate contains a non-specific reaction inhibitor that suppresses false negatives at the above concentration. It should be included in.
  • the sample extract and the solution impregnated with a member such as a porous substrate that comes into contact with the sample in the step prior to the detection reaction in the present invention have a non-specific reaction. It may contain a known substance that can reduce the amount of water, a surfactant, a pH buffering component, various proteins, salts, and sugars.
  • examples of the component capable of reducing the non-specific reaction include arginine, arginine ethyl ester, arginine methyl ester, glycine ethyl ester, glycine methyl ester, lysine and various isomers of the above-mentioned compounds.
  • examples of the surfactant include nonionic surfactants such as polyethylene glycol mono-p-isooctylphenyl ether and polyoxyethylene sorbitan monolaurate, and amphoteric surfactants such as CHAPS and laurylamide sulfobetaine, and dodecyl.
  • the concentration of the surfactant in the sample extract is preferably 0.5 to 5 (w / v)%, more preferably 1 to 3 (w / v)%, still more preferably 1.5 to 2.5 (w / v)%.
  • buffering component examples include phosphate buffer, Tris buffer, Good's buffer and the like.
  • protein component examples include BSA (bovine serum albumin), casein, gelatin, IgG and the like.
  • salts include halides such as lithium chloride, sodium chloride, potassium chloride, sodium bromide, potassium bromide, sodium iodide, and potassium iodide.
  • detection is carried out by a method utilizing an antigen-antibody reaction or a binding reaction between substances having an interaction.
  • the combination of substances having an interaction include a combination of a ligand and a receptor, a combination of a receptor and a receptor, a combination of biotin and avidin, or a combination of streptavidin.
  • the detection method is not particularly limited as long as it is a detection method using an antigen-antibody reaction or a substance having an interaction with each other, but is not particularly limited, but is limited to an immunochromatography method, a latex aggregation method, an immunoturbidimetric method, an immunoassay method, a chemical luminescent enzyme immunoassay (CLEIA), and the like.
  • Enzyme immunoassay (EIA) Enzyme immunoassay adsorption method (ELISA) and the like can be mentioned.
  • the immunochromatography method is particularly preferable. Most of these are immunological methods and utilize the antigen-antibody reaction, but instead of the antigen-antibody reaction, the reaction between substances having an interaction can also be utilized.
  • the sandwich method is preferable.
  • a first substance that binds to a substance to be detected is immobilized on a specific carrier as a substance to capture the substance to be detected, the substance to be detected is bound to the substance, and the substance to be detected is further bound to the substance to be detected.
  • the second substance to be labeled which binds the labeled substance to the substance to be detected, and "the first substance to be bound to the substance to be detected-the substance to be detected-the second substance to be bound to the substance to be detected and labeled.
  • the substance to be detected is measured by forming a complex of "substances" (where "-" indicates a bond) and measuring the signal emitted from the labeling substance.
  • the first substance that binds to the substance to be detected and the second substance that binds to the substance to be detected may be the same substance.
  • the substance that binds to the substance to be detected and the substance to be detected may be an antigen and an antibody, an antibody and an antigen, or a substance that interacts with each other.
  • any substance such as a protein that can be immobilized by a known technique can be used.
  • a porous thin film (membrane) having a capillary action can be used.
  • Particulate matter, test tube, resin flat plate, etc. can be arbitrarily selected.
  • an enzyme, a radioisotope, a fluorescent substance, a luminescent substance, colored particles, colloidal particles and the like can be used.
  • the immunochromatography method which is a lateral flow type immunoassay method using a membrane, is particularly preferable from the viewpoint of simplicity and speed of clinical examination.
  • the general immunochromatographic method using the antigen-antibody reaction will be described below.
  • the inspection device for the immunochromatography method is shown in FIG.
  • a in FIG. 1 is a top view
  • B is a cut sectional view.
  • various parts are laminated on the nitrocellulose membrane 1 laminated on the plastic plate 6.
  • a nitrocellulose membrane 1 in which two detection portions 3 are formed on a plastic plate 6 with a substance that captures a substance to be detected such as an antibody, an absorption pad portion 5 formed of filter paper, and a labeled body portion. 2 and the sample addition portion 4 formed of the glass fiber filter are laminated.
  • one end region of the absorption pad portion 5 one end region of the nitrocellulose membrane 1, the other end region of the nitrocellulose membrane 1, and one end of the labeled body portion 2.
  • the region, the other end region of the labeled body portion 2 and the one end region of the sample addition portion 4 are overlapped with each other, thereby forming a continuous lateral flow flow path.
  • the labeled substance 2 contains a labeled substance in which the labeling substance is chemically or physically bound to the substance to be detected such as an antibody.
  • the labeling substance include gold colloidal particles, platinum colloidal particles, color latex particles, magnetic particles, enzymes, quantum dots, fluorescent dyes and phosphors.
  • the labeled body portion is made of a porous base material containing the above-mentioned labeled body, and the material of the base material can be glass fiber (glass fiber), non-woven fabric or the like which are generally used.
  • the porous substrate impregnated with the labeled body and dried is also referred to as a stabilized dried labeled body pad. That is, the labeled body portion is a site containing the stabilized dry labeled body pad, which is an antibody that binds to the substance to be detected by an antigen-antibody reaction and is labeled with colored latex particles.
  • the detection unit 3 is a site immobilized in a line shape using an antibody that binds to the substance to be detected by an antigen-antibody reaction as a capture substance.
  • Examples of the member that comes into contact with the sample in the step before the detection reaction of the substance to be detected or the step at the same time as the detection reaction include the above 124 and the like.
  • the step before the detection reaction of the substance to be detected and the detection reaction The member is not limited to this as long as it is a member that comes into contact with the sample in the same process as the above.
  • the sample is added to the sample addition section 4, the sample flows from the sample addition section 4 toward the absorption pad section 5.
  • the flow from the sample addition section 4 to the absorption pad section 5 is expressed as a flow from upstream to downstream, a member that comes into contact with the sample in a process prior to the detection reaction of the substance to be detected or in a process simultaneous with the detection reaction is detected. It can be said that it exists upstream from the site where the reaction occurs.
  • the sample is suspended in the sample extract to prepare a sample sample from which the substance to be detected is extracted.
  • the sample sample is dropped onto the sample addition section 4 of the inspection device.
  • the sample sample containing the substance to be detected is impregnated into the labeled body 2 while moving horizontally on the membrane to dissolve the labeled body and develop it. If the substance to be detected is present in the sample, a complex of the substance to be detected and the labeled substance is formed. When the complex reaches the detection unit 3, a capture antibody-detected substance-labeled complex is formed on the line.
  • the presence or absence of the substance to be detected in the sample can be determined by detecting the presence of the complex from the signal emitted from the labeling substance in the complex.
  • Other components and the like that did not participate in the reaction are absorbed by the absorption pad unit 5.
  • the sample extract for mixing with the sample and extracting the substance to be detected may contain a non-specific reaction inhibitory component that suppresses false negatives, or nitrocellulose of a test device for the immunochromatographic method.
  • the membrane 1, the labeled body 2, and / or the sample addition part 4 may contain a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives.
  • the present invention includes a test reagent utilizing an antigen-antibody reaction and a binding reaction between substances having an interaction.
  • the test reagent may refer to the test device itself, or may refer to a test kit containing the test device and other reagents.
  • the test reagent of the present invention includes, for example, a test kit containing a sample extract containing an immunochromatographic test device and a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives.
  • the test reagent of the present invention includes an immunochromatographic test device including a site containing a sample extract containing a non-specific reaction suppressing component that suppresses false negatives.
  • Anti-influenza virus NP nuclear protein
  • Type A influenza virus antigen is immunized in BALB / c mice, and the spleen is removed from the mice bred for a certain period of time. (Kohler et al., Nature, vol, 256, p495-497 (1975)) fused with mouse myeloma cells (P3 ⁇ 63).
  • the obtained fusion cells (hybridoma) were maintained in an incubator at 37 ° C., and the cells were purified (monocloned) while confirming the antibody activity of the supernatant by ELISA using a plate on which influenza A virus NP antigen was immobilized. ) was performed.
  • the obtained 2 strains of the cells were intraperitoneally administered to BALB / c mice treated with pristane, respectively, and about 2 weeks later, antibody-containing ascites was collected.
  • IgG was purified from the obtained ascites by affinity chromatography using a protein A column to obtain two types of purified anti-influenza virus NP antibodies.
  • Anti-B influenza virus NP antibody Two types of purified anti-B influenza virus NP antibodies were obtained by the same method as in (1) using the type B influenza virus antigen.
  • sample addition pad A glass fiber with a size of 2.0 cm x 20 cm was used.
  • inspection device a device having the same configuration as that shown in FIG. 1 was used. Nitrocellulose virus cut into 2 cm x 20 cm size and backed with a plastic plate with adhesive, and the amount of anti-influenza A virus antibody that becomes about 1 mm wide at positions 0.8 cm and 1.0 cm from the lower end (as above) Another antibody) solution and anti-influenza B virus antibody (antibody different from the above) solution were applied 20 cm each, and dried well under warm air to solidify the antibody (detection unit). Next, a filter paper having a size of 3 cm ⁇ 20 cm was placed on the upper end of the nitrocellulose membrane by 5 mm to provide an absorption pad portion.
  • the labeled body pad was overlapped with the lower end of the nitrocellulose membrane by 2 mm to provide the labeled body portion, and further, the sample addition pad was overlapped at a position 7 mm away from the upper end of the labeled body pad to provide the sample addition portion.
  • a strip with a width of 5 mm was cut with a cutter to produce an integrated inspection device.
  • RS virus, adenovirus, and mycoplasma pneumoniae antigen by immunochromatography 1.
  • Preparation of anti-RS virus, anti-adenovirus, anti-pneumonia mycoplasma monoclonal antibody RS virus antigen, adenovirus antigen, or pneumonia mycoplasma antigen was independently immunized in BALB / c mice, and the spleen was removed from the mice bred for a certain period of time.
  • Keller et al. Kelohler et al., Nature, vol, 256, p495-497 (1975) fused with mouse myeloma cells (P3 ⁇ 63).
  • the obtained fusion cells (hybridoma) were maintained in an incubator at 37 ° C., and the cells were purified (monoclonized) while confirming the antibody activity of the supernatant by ELISA using a plate on which each of the above antigens was immobilized. went.
  • the obtained 2 strains of the cells were intraperitoneally administered to BALB / c mice treated with pristane, respectively, and about 2 weeks later, antibody-containing ascites was collected.
  • IgG was purified from the obtained ascites by affinity chromatography using a protein A column to obtain two purified anti-immunogen antibodies for each immunogen.
  • Anti-RS virus latex suspension and anti-adenovirus latex suspension in which each purified anti-immunogen antibody was covalently bound to red latex particles, suspended in a suspension, and sufficiently dispersed and suspended by sonication.
  • Anti-pneumonia Mycoplasma Latex Floating Solution was prepared. These latex suspensions were applied to glass fibers having a size of 20 cm ⁇ 1 cm, respectively, and dried well under warm air to prepare a labeled pad having a dry mixture.
  • sample addition pad A glass fiber with a size of 2.0 cm x 20 cm was used.
  • inspection device a device having the same configuration as that shown in FIG. 1 was used. Nitrocellulose membrane was cut to a size of 2 cm x 20 cm and backed with a plastic plate with adhesive, and the amount of anti-RS virus antibody (different from the above) was about 1 mm wide at positions 0.8 cm and 1.0 cm from the lower end. An antibody) solution, an anti-adenovirus antibody (an antibody different from the above), or an anti-pneumonia mycoplasma antibody was applied 20 cm and dried well under warm air to solidify the antibody (detection unit). Next, a filter paper having a size of 3 cm ⁇ 20 cm was placed on the upper end of the nitrocellulose membrane by 5 mm to provide an absorption pad portion.
  • the labeled body pad was overlapped with the lower end of the nitrocellulose membrane by 2 mm to provide the labeled body portion, and further, the sample addition pad was overlapped at a position 7 mm away from the upper end of the labeled body pad to provide the sample addition portion.
  • a strip with a width of 5 mm was cut with a cutter to produce an integrated inspection device.
  • Test Example 1 Effect of suppressing false negative reaction of sample extract containing L-phenylalanine (L-Phe) 1-1.
  • sample extract A mixed solution containing 50 mM Tris buffer (pH 8.0), 2 (w / v)% polyoxyethylene octylphenyl ether, 5 (w / v)% L-arginine was prepared, and the control 1 was prepared. It was used as a sample extract.
  • Test method Saliva collected with a cotton swab was suspended and dispersed in the sample extract of control 1 and the sample extract of test 3, and filter filtration was performed. In addition, 6.8 x 10 2 PFU / mL inactivated influenza virus type A was added to these to prepare a mixed sample, which was dropped onto the inspection device prepared above, and the color development intensity of the detector was measured 5 minutes later. did. At the same time, prepare a sample in which saliva was not added to the sample extracts of Control 1 and Test 1, and a sample in which only 6.8 x 10 2 PFU / mL inactivated influenza virus type A was added and mixed, and the test was conducted. Carried out. The color development intensity was measured using a red color sample in which 10 levels of color development intensity were scored.
  • Test Example 2 False-negative suppression effect of sample extract containing L-Phe in detection of RS virus by immunochromatography 2-1.
  • Preparation of sample extract A mixed solution containing 50 mM Tris buffer (pH 8.0), 2 (w / v)% polyoxyethylene octylphenyl ether, 5 (w / v)% L-arginine was prepared, and the control 1 was prepared. It was used as a sample extract.
  • Test Example 3 Sensitivity comparison between L-Phe-containing sample extract and conventional sample extract
  • sample extract A mixed solution containing 50 mM Tris buffer (pH 8.0), 2 (w / v)% polyoxyethylene octylphenyl ether, 5 (w / v)% L-arginine was prepared, and the control 1 was prepared. It was used as a sample extract.
  • the sensitivity was the same between the sample extract of control 1 and the sample extract of test 1. Regarding the signal intensity, Test 1 was higher. From the above, if the sample extract used in the present invention is used, the specificity can be improved without lowering the sensitivity.
  • sample extract A mixed solution containing 50 mM Tris buffer (pH 8.0), 2 (w / v)% polyoxyethylene octylphenyl ether, 2 (w / v)% L-arginine was prepared and controlled (added). It was used as a sample extract (without agent). It then contains 50 mM Tris buffer (pH 8.0), 2 (w / v)% polyoxyethylene octylphenyl ether, 2 (w / v)% L-arginine, and in addition to these compositions, the compounds in Table 4 ( A sample extract containing one type (final concentration in parentheses) was prepared and used as a test sample extract.
  • Influenza virus and RS virus-negative saliva in which false negative reactions were observed in the control sample suspension, were collected with a cotton swab. These samples were suspended and dispersed in controls and sample extracts for each test to prepare samples for this test. In addition, influenza A virus with a final concentration of 6.8 x 10 2 PFU / mL, influenza B virus with a final concentration of 4.0 x 10 PFU / mL, or RS virus antigen with a final concentration of 3.5 x 10 4 TCID 50 / mL. Added and mixed. Next, these samples were dropped onto each of the inspection devices prepared above, and after 5 minutes, the color development intensity of the detection unit was measured. The color development intensity was measured using a color sample in which 10 levels of color development intensity were scored, and the degree of suppression of false negatives was confirmed.
  • the false negative inhibitory effect was confirmed with almost all the tested compounds, and with the influenza virus detection reagent, the false negative inhibitory effect was confirmed with multiple compounds.
  • the method of the present invention can be used for accurate detection of various substances.

Abstract

鼻腔ぬぐい検体、鼻腔吸引検体、鼻腔洗浄検体、鼻かみ鼻汁検体、咽頭ぬぐい検体、唾液検体、便検体、血清検体、血漿検体、尿検体等の体液に由来する検体からウイルス、細菌、検出対象とするタンパク質等の抗原を抗原抗体反応や相互作用を有する物質同士の反応を利用した検出試薬で検出するにあたり、従来の方法では抑制しきれなかった偽陰性反応を抑制できる成分を含む検体抽出液や検体抽出方法、およびこれらを使用した検査試薬に関するものである。　検体抽出液を構成に持つ検査試薬の検体抽出液や、検出対象の検出反応より前の工程や検出反応と同時の工程で検体と接触する部材等に、構造中にフェニル基もしくはベンジル基もしくはトリル基もしくはキシリル基をもち、これらに少なくともカルボキシル基もしくはそのメチル化・エチル化された原子団を含む官能基もしくはヒドロキシル基が結合している水溶性を有する化合物を含有させることによる。

Description

偽陰性の抑制により特異性を改善した検査試薬
　本発明は、鼻腔ぬぐい検体、鼻腔吸引検体、鼻腔洗浄検体、鼻かみ鼻汁検体、咽頭ぬぐい検体、唾液検体、便検体、血清検体、血漿検体、尿検体等の体液に由来する検体からウイルス・細菌、検出対象とするタンパク質等の被検出物質を抗原抗体反応や相互作用を有する物質同士の結合反応を利用した検出試薬で検出するにあたり、検体抽出液および検出反応より前の工程や検出反応と同時の工程で検体と接触する部材等に特定の化学構造をもつ化合物を使用することで、従来の方法では抑制しきれなかった偽陰性反応を強く抑制できる技術に関する。
　近年、抗原抗体反応や相互作用を有する物質同士の結合反応を利用した、ウイルスや細菌等の病原体感染の有無、妊娠の有無などを検出する様々な検査試薬やキットが次々と開発されている。いずれの検査試薬も患者から検体を採取した後、検出反応に適した条件を作り出すための前処理工程が含まれており、この工程は正確な結果を得るために重要である。特に簡易検査試薬の多くは、特別な設備を必要とせず操作も簡単で安価であるという特徴を有し、大病院や医療検査センター以外にも一般の病院や診療所で広く使用されており、検査の専門家以外のユーザーが使用することも多い。そのため、試薬の検査精度が高いことが非常に重要となっている。現在市場にある簡易検査試薬の例としては、病原体の感染を検査する簡易検査試薬や妊娠診断のための簡易検査試薬が挙げられる。これらの検査試薬は患者が最初に訪れる医療機関で実施される場合が多く、患者から採取した検体についてその場で感染の有無や妊娠の有無が判別でき、早い段階で治療措置等を施すことができるため、簡易検査試薬の医療における重要性は益々高まっている。そして簡易検査試薬の利用増に伴い、ユーザーからは試薬の性能として、より再現性の高い検査結果や検査精度が求められている。
　現在、簡易検査方法の代表的な試薬として、抗原抗体反応を利用した免疫測定法、特にイムノクロマト法が一般に知られている。イムノクロマト法は被検出物質に特異的に結合する捕捉体(捕捉物質)、および被検出物質に特異的に結合する標識体の複合体をメンブラン上に形成させて、標識を検出／定量することで、被検出物質の検出（測定あるいは定量）を行う。イムノクロマト法は測定装置が簡単で、またコストの点でも優れているため多種多様の被検出物質の検出に広く用いられている。
　イムノクロマト法の一つの形態においては、ニトロセルロース等のメンブランストリップ上に被検出物質に特異的に結合する抗体を捕捉物質として固相化した検出部、および被検出物質に特異的に結合する標識体を含む標識体部を備えた検査デバイスに、被検出物質を含む検体試料を滴下して、被検出物質－標識体の複合体を形成させながら展開して検出部でこの複合体を捕捉することで標識を検出あるいは定量する。
　近年、イムノクロマト法を含む臨床診断薬に関しては、診断結果がより信頼性の高いものとなることが臨床現場から望まれており、試薬の信頼性のさらなる向上が課題となっている。信頼性の高い検査試薬とは、感度と特異性が高く、誤判定を引き起こしにくい検査試薬である。特に特異性に関しては、患者それぞれのバックグラウンドの違いに由来する検体成分の多様性に、いかに試薬設計で対応することができるかという技術的課題が常に存在しており、より効果的な非特異反応の解消は簡易検査法において極めて重要な課題である。これらの課題を解決するためにアルギニンやリジンなどの塩基性アミノ酸や、無機塩類、グリシンエチルエステル、界面活性剤、動物由来免疫グロブリン、硫酸基をもつ界面活性剤や高分子、四級アンモニウムイオンをもつ界面活性剤などを検体に接触させることで、特異性の改善に一定の効果が見られることが報告されているが（特許文献１、２、３、４、および５を参照）、いずれも効果が限定的であり、抑制できない非特異反応が未だ存在する。そのためより強く特異性を改善し、感度も低下させない技術が望まれている。
特開２００３－２７９５７７号公報 特開２００５－２４３２３号公報 特開２００４－３０１６８４号公報 特許第６１１６２６８号公報 特許第６６０１９３２号公報
　鼻腔ぬぐい検体、鼻腔吸引検体、鼻腔洗浄検体、鼻かみ鼻汁検体、咽頭ぬぐい検体、唾液検体、便検体、血清検体、血漿検体、尿検討等の体液に由来する検体からウイルス、細菌、検出対象とするタンパク質等の被検出物質を抗原抗体反応や相互作用を有する物質同士の結合反応を利用した検出試薬で検出するにあたり、従来の方法では抑制しきれなかった偽陽性反応や偽陰性反応がいまだに存在し、正確な診断を妨げる一因となっている。本発明では、感度を低下させることなく、偽陰性反応を抑制できる成分を含む検体抽出液や検体抽出方法を使用した検査試薬を提供する。
　本発明者らは、鼻腔ぬぐい検体、鼻腔吸引検体、鼻腔洗浄検体、鼻かみ鼻汁検体、咽頭ぬぐい検体、唾液検体、便検体、血清検体、血漿検体、尿検体等の体液に由来する検体を試験試料とした際に発生する非特異反応をより強く抑制する方法を鋭意探索した結果、従来の方法よりも顕著に非特異反応を抑制しうる成分を見出し、さらにこれを検体抽出液や検出反応より前の工程や検出反応と同時の工程で検体と接触する部材等に添加することによって、従来法で検出されていた偽陰性反応を抑制できることを見出し、本発明を完成した。
　すなわち本発明は、以下の構成を有する。
[１]　抗原抗体反応または相互作用を有する物質同士の結合反応を利用して検体中の被検出物質を検出する検査キットであって、フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含有する検体抽出液を含む検査試薬。
[２]　イムノクロマト用検査試薬であり、イムノクロマト用検査デバイスフェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含有する検体抽出液を含む、[１]の検査試薬。
[３]　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含有する検体抽出液を含浸した部位を含むイムノクロマト用検査デバイスである、[１]または[２]の検査試薬。
[４]　検体抽出液が0.1～10(w/v)％の偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む、[１]～[３]のいずれかの検査試薬。
[５]　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物が、以下の一般式（I）～（V)のいずれかで表される化合物もしくはトリプトファンである、[１]～[４]のいずれかの検査試薬：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
 [一般式（I）中、R1はH、OH、=O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOHまたはCH3であり、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、nは０または１であり、mは０、１、２、３または４である。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 [一般式（II)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R3はCOOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOHまたはCH3であり、R3とCOOR2はベンゼン環のオルト、メタまたはパラに位置する。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
 [一般式（III)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R4はHまたはCH3であり、nは０または１である。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 [一般式（IV)中、R5はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジンまたはヒスチジンの側鎖である。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
 [一般式（V)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R6はNHまたはOであり、n０、１、２、３または４である。]。
[６]　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物が、アスパルテーム、フェニルアラニン、フェニルアラニンメチルエステル、マンデル酸、2‐フェニルプロピオン酸、3‐フェニルプロピオン酸、フェニルグリシン、フェニルグリシンメチルエステル、フェニルグリシンエチルエステル、フェニル乳酸、フェニルピルビン酸、安息香酸、フタル酸、アセチルサリチル酸、馬尿酸、N-トルオイルグリシン、N-カルボベンジルオキシアミノ酸、N-フェニルグリシン、フェノキシ酢酸、トリプトファン、およびそれらの化合物の金属塩、ならびにそれらの化合物の光学異性体、幾何異性体、構造異性体、立体異性体および位置異性体からなる群より選択される化合物である、[１]～[５]のいずれかの検査試薬。
[７]　検体抽出液に、さらに、アルギニン、リジン、アルギニンエチルエステル、アルギニンメチルエステル、グリシンエチルエステルおよびグリシンメチルエステル、ならびにこれらの化合物の光学異性体、幾何異性体、構造異性体および立体異性体からなる群より選択されるアミノ酸またはアミノ酸誘導体が含まれる、[１]～[６]のいずれかの検査試薬。
[８]　検体抽出液に、さらに、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、ヨウ化ナトリウムおよびヨウ化カリウムからなる群より選択されるハロゲン化物が含まれる、[１]～[７]のいずれかの検査試薬。
[９]　咽頭ぬぐい検体、鼻腔ぬぐい検体、鼻腔吸引検体、咽頭洗浄検体、鼻腔洗浄検体、鼻かみ鼻汁検体、唾液検体、血清検体、血漿検体、全血検体、便検体、便懸濁液検体および尿検体からなる群から選択される検体中のウイルス抗原、細菌抗原、およびタンパク質抗原からなる群から選択される被検出物質を、検体抽出液中に含まれる抗原抗体反応または相互作用を有する物質同士の反応を利用して検出する方法において、検体を予めフェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触させることによって、偽陰性反応を抑制して検出する方法。
[１０]　被検出物質を検出する方法が、イムノクロマト法であり、フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液に検体を入れ、該検体抽出液をイムノクロマト用検査デバイスに添加する、[９]の方法。
[１１]　被検出物質を検出する方法が、イムノクロマト法であり、検体をフェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含浸した部位を含むイムノクロマト用検査デバイスに添加する、[９]の方法。
[１２]　検体抽出液が0.1～10(w/v)％の偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む、[９]～[１１]のいずれかの方法。
[１３]　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物が、以下の一般式（I）～（V)のいずれかで表される化合物もしくはトリプトファンである、[９]～[１２]のいずれかの方法：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 [一般式（I）中、R1はH、OH、=O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOHまたはCH3であり、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、nは０または１であり、mは０、１、２、３または４である。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 [一般式（II)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R3はCOOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOHまたはCH3であり、R3とCOOR2はベンゼン環のオルト、メタまたはパラに位置する。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
 [一般式（III)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R4はHまたはCH3であり、nは０または１である。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
 [一般式（IV)中、R5はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジンまたはヒスチジンの側鎖である。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
 [一般式（V)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R6はNHまたはOであり、n０、１、２、３または４である。]。
[１４]　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物が、アスパルテーム、フェニルアラニン、フェニルアラニンメチルエステル、マンデル酸、2‐フェニルプロピオン酸、3‐フェニルプロピオン酸、フェニルグリシン、フェニルグリシンメチルエステル、フェニルグリシンエチルエステル、フェニル乳酸、フェニルピルビン酸、安息香酸、フタル酸、アセチルサリチル酸、馬尿酸、N-トルオイルグリシン、N-カルボベンジルオキシアミノ酸、N-フェニルグリシン、フェノキシ酢酸、トリプトファン、およびそれらの化合物の金属塩、ならびにそれらの化合物の光学異性体、幾何異性体、構造異性体、立体異性体および位置異性体からなる群より選択される化合物である、[９]～[１３]のいずれかの方法。
[１５]　検体抽出液に、さらに、アルギニン、リジン、アルギニンエチルエステル、アルギニンメチルエステル、グリシンエチルエステルおよびグリシンメチルエステル、ならびにこれらの化合物の光学異性体、幾何異性体、構造異性体および立体異性体からなる群より選択されるアミノ酸またはアミノ酸誘導体が含まれる、[９]～[１４]のいずれかの方法。
[１６]　検体抽出液に、さらに、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、ヨウ化ナトリウムおよびヨウ化カリウムからなる群より選択されるハロゲン化物が含まれる、[９]～[１５]のいずれかの方法。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2020-150525号の開示内容を包含する。
　本発明によれば、鼻腔ぬぐい検体、鼻腔吸引検体、鼻腔洗浄検体、鼻かみ鼻汁検体、咽頭ぬぐい検体、唾液検体、便検体、血清検体、血漿検体、尿検体等の体液に由来する検体などから抗原抗体反応や相互作用を有する物質同士の結合反応を利用して特定のウイルス、細菌、タンパク質、低分子化合物等を検出する検出試薬において、検体の混入により発生する偽陰性反応をより強く抑制し、再現性が高く検査精度の高い検査試薬を提供できる。また非特異反応による誤った臨床診断をより防ぐことができ、患者およびユーザーである医師・検査技師・看護師の双方にとって有益である。
本発明で用いる検査デバイスの構造を示す図である。
　以下、本発明を詳細に説明する。
　本発明は、検体中の被検出物質を抗原抗体反応や相互作用を有する物質同士の結合反応を利用した検出試薬で検出するにあたり、化合物と検体を接触させることにより、偽陰性反応を抑制し、シグナルの低下、すなわち感度の低下を防止する方法である。
　本発明において、抗体は抗体の抗原結合性断片も含む。
（検体）
　用いる検体は限定されない。例えば、検体として、咽頭ぬぐい液、鼻腔ぬぐい液、鼻腔吸引液、咽頭洗浄液、鼻腔洗浄液、鼻かみ鼻汁液、唾液、血清、血漿、全血、便懸濁液、尿、培養液等が挙げられる。これらを咽頭ぬぐい検体、鼻腔ぬぐい検体、鼻腔吸引検体、咽頭洗浄検体、鼻腔洗浄検体、鼻かみ鼻汁検体、唾液検体、血清検体、血漿検体、全血検体、便検体、便懸濁液検体、尿検体、培養液検体等と呼ぶ。緩衝液で希釈して用いることもでき、希釈せずにそのまま用いることもできる。
（検出対象物質）
　被検出物質も何ら限定されず、検出しようとするいかなる物質であってもよい。具体例として、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、RS(respiratory syncytial)ウイルス、ヒトメタニューモウイルス（hMPV）、A型肝炎ウイルス（HAV）B型肝炎ウイルス（HBV）、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）、ノロウイルス、SARS-CoVやMERS-CoVやSARS-CoV2などのコロナウイルス等のウイルス抗原；メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）、Ａ群溶連菌、Ｂ群溶連菌、レジオネラ属菌等の細菌抗原；細菌等が産生する毒素；マイコプラズマ抗原；クラミジア・トラコマティス等のクラミジア抗原；原生動物の抗原；真菌の抗原；ヒト絨毛性ゴナドトロピン等のホルモン；Ｃ反応性タンパク質、ミオグロビン、心筋トロポニン、プロカルシトニン等のタンパク質；各種腫瘍マーカー；農薬、環境ホルモン等の抗原を挙げることができ、さらに、上記細菌、ウイルス等に対する抗体を挙げることができる。
（検体の採取）
　検体の採取方法も何ら限定されないが、咽頭ぬぐい検体、鼻腔ぬぐい検体、鼻腔吸引検体、咽頭洗浄検体、鼻かみ鼻汁検体、唾液検体、血清検体、血漿検体、全血検体、便検体、便懸濁液検体、尿検体、培養液検体等の体液、排泄物に由来する検体を、綿棒等の検体採取器具を用いて採取する方法、吸引器による吸引等を利用して採取する方法、採血管等を利用して採取する方法等が挙げられる。
（偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と採取した検体の接触）
　本発明の方法においては、検体と偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分とを接触させる。ここで、検体を偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触させることにより、検体を測定した場合に、偽陰性を抑制することができる。なお、検体と偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触させるときに、被検出物質と偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分が接触するので、本発明の方法においては、被検出物質と偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分とを接触させるともいう。また、検体を偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触させることを、検体を偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分で処理するということもある。
　また、検体抽出液は、検体中の被検出物質を浮遊させ測定しやすくする液体をいうが、例えば、細胞等から特定の被検出物質を溶解等により抽出する必要はなく、単に検体処理液、検体希釈液、検体浮遊液等ということもできる。
　本発明において、検体と偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分とを試験に供する前に予め接触する必要がある。ここで、試験に供する前とは、検体中の被検出物質とそれに対する抗体または抗原と反応する前、または検体中の被検出物質が相互作用を有する物質を反応する前をさす。抗体または抗原との反応は、抗体または抗原との結合をいい、検体中の被検出物質と相互作用を有する物質との反応は、相互作用を有する物質との結合をいう。
　本発明の偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と検体との接触方法として、検体を偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む溶液に入れて混合して接触させる方法、および測定に用いる検査デバイスに偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含ませておき、検体を検査に用いる検査デバイスに添加することにより検体を偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触させる方法が挙げられる。
　検体を偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む溶液と混合して接触させる方法の具体例として、採取した検体を浮遊、分散させる検体抽出液に偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含ませておき、検体を検体抽出液に添加し混合するときに検体と偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分とを接触させる方法が挙げられる。例えば偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含有した検体抽出液を使用する場合、検体が鼻腔ぬぐい液の場合、綿棒を使用して鼻腔ぬぐい液を採取し、採取した検体を浸み込ませた綿棒を前記検体抽出液に入れて検体を浮遊、分散させ抽出することにより、検体と偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分とを接触させることができる。
　測定に用いる検査デバイスに偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含ませておき、検体を検査デバイスに添加することにより検体を偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触させる方法の具体例として、検査デバイスが有する不織布、織物、スポンジなどからなるパッドやろ過フィルターなどの繊維状または多孔性基材に偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含侵、塗布等により含ませておき、採取した検体を検査デバイスに添加したときに、検体を繊維状または多孔性基材に含ませておいた偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触させる方法が挙げられる。このように検査デバイスとして、後述のイムノクロマト法用デバイスが挙げられる。
　検査デバイスの多孔性基材の材質は、何ら限定されるものではないが、パルプ、綿、羊毛、ポリエステル、ポリプロピレン、ナイロン、アクリルガラス繊維、ニトロセルロース等が挙げられる。測定に用いる検査デバイスに偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含ませておき、検体を検査デバイスに添加することにより検体を偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触させる場合は、例えば、偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を多孔性基材に含浸させ乾燥させておき、検査デバイス上で被検出物質を検出するための反応が起こる前の工程または同時の工程で検体と該多孔性基材と接触させればよい。例えば、検査デバイスに検体を添加した場合、検体は検査デバイス上を展開し、デバイス上の反応が起こる部位に達して抗体抗原反応等の反応が起こる。検査デバイス上の反応が起こる部位より前の部位に偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含ませた多孔性基材を設けておくことにより、検体は反応前に偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触する。例えば、多孔性基材としてろ過フィルターを用い、検体を添加する部位に偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含むろ過フィルターを設ければよい。この場合においては、検体として鼻腔ぬぐい液を用いる場合、綿棒を使用して鼻腔ぬぐい液を採取し、採取した検体を浸み込ませた綿棒を偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含まない任意の組成の検体抽出液に入れて検体を分散、溶解させた後、検査デバイスの構成部材である、偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含ませたろ過フィルターに上述の検体抽出液を含浸させておくことにより検体と偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を接触させることができる。
（偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と濃度）
　本発明の偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分とは、フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物を指す。また、これらの化合物の金属塩を含む、光学異性体、幾何異性体、構造異性体、立体異性体および位置異性体も含まれる。
　これらの化合物は以下の一般式（I）～（V)のいずれかで表される化合物またはトリプトファンである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
 [一般式（I）中、R1はH、OH、=O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOHまたはCH3であり、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、nは０または１であり、ｍは０、１、２、３または４である。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
 [一般式（II)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R3はCOOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOHまたはCH3であり、R3とCOOR2はベンゼン環のオルト、メタまたはパラに位置する。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 [一般式（III)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R4はHまたはCH3であり、nは０または１である。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 [一般式（IV)中、R5はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジンまたはヒスチジンの側鎖である。]
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
 [一般式（V)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R6はNHまたはOであり、n０、１、２、３または４である。]
　限定されるものではないが、例えば、アスパルテーム、フェニルアラニン、フェニルアラニンメチルエステル（塩酸塩を含む）、マンデル酸、2‐フェニルプロピオン酸、3‐フェニルプロピオン酸、フェニルグリシン、フェニルグリシンメチルエステル、フェニルグリシンエチルエステル、フェニル乳酸、フェニルピルビン酸、安息香酸、フタル酸、アセチルサリチル酸、馬尿酸、N-トルオイルグリシン、N-カルボベンジルオキシアミノ酸、N-フェニルグリシン、フェノキシ酢酸、トリプトファン、およびこれらの金属塩を含む、光学異性体、幾何異性体、構造異性体、立体異性体および位置異性体からなる群より選ばれる化合物が挙げられる。本発明において、アスパルテーム、フェニルアラニン、フェニルアラニンメチルエステル（塩酸塩を含む）、マンデル酸、2‐フェニルプロピオン酸、3‐フェニルプロピオン酸、フェニルグリシン、フェニルグリシンメチルエステル、フェニルグリシンエチルエステル、フェニル乳酸、フェニルピルビン酸、安息香酸、フタル酸、アセチルサリチル酸、馬尿酸、N-トルオイルグリシン、N-カルボベンジルオキシアミノ酸、N-フェニルグリシン、フェノキシ酢酸、トリプトファンという場合、それらの金属塩が含まれ、さらに光学異性体、幾何異性体、構造異性体、立体異性体および位置異性体も含まれる。金属塩として、例えば、Li塩、Na塩、K塩、Rb塩、Cs塩、Fr塩等が挙げられる。
　上記一般式（I)で表される化合物として、アスパルテーム、フェニルアラニン、フェニルアラニンメチルエステル、マンデル酸、2‐フェニルプロピオン酸、3‐フェニルプロピオン酸、フェニルグリシン、フェニルグリシンメチルエステル、フェニルグリシンエチルエステル、フェニル乳酸、フェニルピルビン酸および安息香酸が挙げられる。
　一般式（II）で表される化合物として、フタル酸およびアセチルサリチル酸が挙げられる。
　一般式（III)で表される化合物として、馬尿酸、N-トルオイルグリシンが挙げられる。　一般式（IV)で表される化合物としてN-カルボベンジルオキシアミノ酸が挙げられる。　一般式（V)で表される化合物としてN-フェニルグリシン、フェノキシ酢酸が挙げられる。
　これらの偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分は、検体抽出液や検出反応より前の工程で検体と接触するろ過フィルター等の部材等に含有される。濃度は0.001(w/v)％以上が好ましく、0.1(w/v)％以上がさらに好ましく、1(w/v)％以上が最も好ましい。またこれらの非特異反応抑制成分を同時に複数種類使用することもでき、その場合の濃度も0.001(w/v)％以上が好ましく、0.1(w/v)％以上がさらに好ましく、1(w/v)％以上が最も好ましい。濃度の上限は定める必要はないが、例えば、10(w/v)％以下、または5(w/v)％以下である。なお、ろ過フィルター等の多孔性基材に偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含ませる場合も上記の濃度の偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を多孔性基材に含ませればよい。
（偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分以外のその他の成分）
　本発明における検体抽出液や検出反応より前の工程で検体と接触する多孔性基材等の部材等に含侵させる溶液には、偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分以外に、非特異反応を軽減できる既知の物質や、界面活性剤、pH緩衝性の成分、各種タンパク質、塩類、糖類を含んでもよい。例えば、非特異反応を軽減できる成分として、アルギニン、アルギニンエチルエステル、アルギニンメチルエステル、グリシンエチルエステル、グリシンメチルエステル、リジンおよび上述の化合物の各種異性体等が挙げられる。また界面活性剤としては、例えばポリエチレングリコールモノ‐p-イソオクチルフェニルエーテルやモノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどの非イオン性界面活性剤、CHAPSやラウリルアミドスルホベタインなどの両イオン性界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム等の陰イオン性界面活性剤、塩化ドデシルトリメチルアンモニウム等の陽イオン性界面活性剤が挙げられる。検体抽出液中の界面活性剤の濃度は0.5～５(w/v)％が好ましく、１～３(w/v)％がさらに好ましく、1.5～2.5(w/v)％がさらに好ましい。
　緩衝性成分としてはリン酸緩衝液、トリス緩衝液、グッド緩衝液などが挙げられる。タンパク質成分としては、BSA（ウシ血清アルブミン）、カゼイン、ゼラチン、IgG等が挙げられる。塩類としては塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウムなどのハロゲン化物が挙げられる。
（検出方法）
　本発明の方法においては、抗原抗体反応や相互作用を有する物質同士の結合反応を利用した方法により検出する。相互作用を有する物質同士の組合せとしては、リガンドとレセプターの組合せ、受容体とレセプターの組合せ、ビオチンとアビジン若しくはストレプトアビジンの組合せ等が挙げられる。
　抗原抗体反応や相互作用を有する物質同士を利用した検出方法であれば特に限定されないが、イムノクロマト法、ラテックス凝集法、免疫比濁法、免疫比ろう法、化学発光酵素免疫測定法（CLEIA）、酵素免疫測定法（EIA）酵素免疫測定吸着法（ELISA）等が挙げられる。イムノクロマト法が特に好ましい。これらの多くは免疫学的手法であり、抗原抗体反応を利用するが、抗原抗体反応の代わりに相互作用を有する物質同士の反応を利用することもできる。これらの方法の中でも、サンドイッチ法が好ましい。典型的なサンドイッチ法においては、被検出物質と結合する第１の物質を特定の担体に被検出物質捕捉物質として固相化しておき該物質に被検出物質を結合させ、さらに被検出物質に結合する第２の物質であって、標識した物質を被検出物質に結合させ、「被検出物質と結合する第１の物質-被検出物質-被検出物質と結合する第２の物質であって標識した物質」（「-」は結合を示す）の複合体を形成させ、標識物質から発せられるシグナルを測定することにより、被検出物質を測定する。被検出物質と結合する第１の物質と被検出物質と結合する第２の物質は同じ物質でもよい。被検出物質と被検出物質と結合する物質は抗原と抗体または抗体と抗原であってもよいし、互いに相互作用を有する物質であってもよい。被検出物質と結合する第１の物質が固定化される固相としては、タンパク質等の物質を公知技術により固定可能なものは全て用いることができ、例えば、毛細管作用を有する多孔性薄膜（メンブレン）、粒子状物質、試験管、樹脂平板など公知のものを任意に選択できる。また、被検出物質と結合する第２の物質を標識する物質としては、酵素、放射性同位体、蛍光物質、発光物質、有色粒子、コロイド粒子などを用いることができる。
　サンドイッチ法の中でも臨床検査の簡便性と迅速性の観点から、メンブレンを用いたラテラルフロー式の免疫測定法であるイムノクロマト法が特に好ましい。
　以下に、抗原抗体反応を利用した一般的なイムノクロマト法について説明する。イムノクロマト法用検査デバイスを図１に示す。
　図１のＡが上面図、Ｂが切断断面図である。検査デバイスは、プラスチック板６上に積層されたニトロセルロースメンブラン１上に種々の部位が積層されている。図の具体例では、プラスチック板６上に、抗体等の被検出物質捕捉物質等で２個の検出部３が形成されたニトロセルロースメンブラン１、濾紙で形成された吸収パッド部５、標識体部２、及びガラス繊維フィルターで形成された試料添加部４がそれぞれ積層されている。
　そして、図のように、吸収パッド部５の一方の端部領域と、ニトロセルロースメンブラン１の一方の端部領域、ニトロセルロースメンブラン１の他方の端部領域と標識体部２の一方の端部領域、標識体部２の他方の端部領域と試料添加部４の一方の端部領域がそれぞれ重ね合わされており、これにより、連続したラテラルフローの流路が形成されている。
　標識体部２には、抗体等の被検出物質捕捉物質に標識物質が化学的または物理的に結合した標識体が含まれている。標識物質としては、金コロイド粒子、白金コロイド粒子、カラーラテックス粒子、磁性粒子、酵素、量子ドット、蛍光色素や蛍光体などが挙げられる。標識体部は、上記標識体を含む多孔性基材から成り、基材の材質は一般的に用いられているガラス繊維（グラスファイバー）や不織布等を用いることができる。前記標識体を含浸させ乾燥させた多孔性基材を安定化乾燥標識体パッドとも呼ぶ。すなわち、標識体部は、被検出物質と抗原抗体反応により結合する抗体であって着色ラテックス粒子で標識した抗体を含む、上記の安定化乾燥標識体パッドを含む部位である。
　また、検出部３は、被検出物質と抗原抗体反応により結合する抗体を捕捉物質としてライン状に固相化された部位である。
　被検出物質の検出反応より前の工程や検出反応と同時の工程で検体と接触する部材等の例として、上記の１２４などが挙げられるが、被検出物質の検出反応より前の工程や検出反応と同時の工程で検体と接触する部材であればこれに限定されるものではない。検体を試料添加部４に添加すると、検体は試料添加部４から吸収パッド部５に向かって流れる。試料添加部４から吸収パッド部５への流れを上流から下流への流れと表現した場合、被検出物質の検出反応より前の工程や検出反応と同時の工程で検体と接触する部材は、検出反応が起こる部位よりも上流に存在するということができる。
　次にこの検査デバイスを用いた免疫測定法について説明する。先ず、検体を検体抽出液に浮遊し、被検出物質を抽出させた検体試料を調製する。次いで、検査デバイスの試料添加部４に前記検体試料を滴下する。被検出物質を含む検体試料は、メンブラン上を水平方向に移動しながら標識体部２に含浸されて標識体を溶解させ、展開する。検体試料中に被検出物質が存在すれば、被検出物質－標識体の複合体を形成する。該複合体が検出部３に到達するとそのライン上に、捕捉抗体－被検出物質－標識体の複合体が形成される。この複合体中の標識物質から発せられるシグナルにより、複合体の存在を検出することにより検体中の被検出物質の有無を判定することができる。反応に関与しなかった他の成分等は、吸収パッド部５に吸収される。なお、図１に示す例では、検出部３が２個存在するが、これは、例えばＡ型インフルエンザウイルスとＢ型インフルエンザウイルスのような２種類の被検出物質をそれぞれ捕捉するためのものである。このような検出部３を複数設けることにより、複数種類の被検出物質を同時に免疫測定することが可能である。
　上記のイムノクロマト法において、検体と混合し被検出物質を抽出するための検体抽出液に偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含ませておいてもよいし、イムノクロマト法用検査デバイスのニトロセルロースメンブラン１、標識体部２、および／または試料添加部４に偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含ませておいてもよい。
　本発明は、抗原抗体反応や相互作用を有する物質同士の結合反応を利用した検査試薬を含む。該検査試薬は検査デバイス自体をいうこともあり、検査デバイスとその他の試薬を含む検査キットをいうこともある。本発明の検査試薬は、例えば、イムノクロマト法検査デバイスと偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含む検査キットを含む。また、本発明の検査試薬は偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含む部位を備えたイムノクロマト法検査デバイスを含む。
　本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
　以下の実施例では、本発明の検体抽出液を用いた場合に、インフルエンザウイルス、RSウイルス、アデノウイルス、マイコプラズマを検出するイムノクロマト法キットにおいて検体での非特異反応が抑制された実施例について説明する。
イムノクロマト法によるインフルエンザウイルス抗原の検出
１．抗インフルエンザウイルスモノクローナル抗体の作製
（１）抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰ（核タンパク質）抗体
　Ａ型インフルエンザウイルス抗原をＢＡＬＢ／ｃマウスに免疫し、一定期間飼育したマウスから脾臓を摘出し、ケラーらの方法（Kohler et al., Nature, vol, 256, p495-497(1975)）によりマウスミエローマ細胞（Ｐ３×６３）と融合した。得られた融合細胞（ハイブリドーマ）を、３７℃インキュベーター中で維持し、Ａ型インフルエンザウイルスＮＰ抗原を固相したプレートを用いたＥＬＩＳＡにより上清の抗体活性を確認しながら細胞の純化（単クローン化）を行った。取得した該細胞２株をそれぞれプリスタン処理したＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔投与し、約２週間後、抗体含有腹水を採取した。得られた腹水からプロテインＡカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより、それぞれＩｇＧを精製し、２種類の精製抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰ抗体を得た。
（２）抗Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰ抗体
　Ｂ型インフルエンザウイルス抗原を用い、（１）と同様の方法で、２種類の精製抗Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰ抗体を得た。
２．標識体パッドの作製
　精製抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰ抗体及び精製抗Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰ抗体のうちそれぞれ1種類ずつを使用した。赤色ラテックス粒子に抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体を共有結合させ、浮遊液に懸濁し、ソニケーションを行って充分に分散浮遊させた抗Ａ型ラテックス浮遊液を調製した。また、同様に青色ラテックス粒子に抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体を共有結合させた抗Ｂ型ラテックス浮遊液を調製した。抗Ａ型ラテックス浮遊液と抗Ｂ型ラテックス浮遊液とを混合し、大きさが20cm×1cmのガラス繊維に塗布し、温風下で良く乾燥させて、乾燥混合物を形成した標識体パッドを作製した。
３．試料添加パッドの作製
　大きさが2.0cm×20cmのガラス繊維を使用した。
４．検査デバイスの作製
　検査デバイスは、図１に示すものと同様の構成のものを用いた。ニトロセルロースメンブランを2cm×20cmの大きさに裁断し接着剤がついたプラスチック板でバッキングした、下端から0.8cmと1.0cmの位置に約1mm幅になる量の抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体（上記と別の抗体）液、並びに抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体（上記と別の抗体）液を各々20cm塗布し、温風下で良く乾燥させて抗体を固相化した（検出部）。次に、3cm×20cmの大きさの濾紙をニトロセルロースメンブランの上端に5mm重ねて吸収パッド部を設けた。更に、標識体パッドをニトロセルロースメンブランの下端に2mm重ねて標識体部を設け、更に、試料添加パッドを標識体パッドの上端から7mm離れた位置に合わせて重ね、試料添加部を設けた。次いで、カッターで幅5mmの短冊に裁断して一体化された検査デバイスを作製した。
イムノクロマト法によるRSウイルス、アデノウイルス、肺炎マイコプラズマ抗原の検出
１．抗RSウイルス、抗アデノウイルス、抗肺炎マイコプラズマモノクローナル抗体の作製　RSウイルス抗原、またはアデノウイルス抗原、または肺炎マイコプラズマ抗原をそれぞれ独立にＢＡＬＢ／ｃマウスに免疫し、一定期間飼育したマウスから脾臓を摘出し、ケラーらの方法（Kohler et al., Nature, vol, 256, p495-497(1975)）によりマウスミエローマ細胞（Ｐ３×６３）と融合した。得られた融合細胞（ハイブリドーマ）を、３７℃インキュベーター中で維持し、上記の各抗原を固相したプレートを用いたＥＬＩＳＡにより上清の抗体活性を確認しながら細胞の純化（単クローン化）を行った。取得した該細胞２株をそれぞれプリスタン処理したＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔投与し、約２週間後、抗体含有腹水を採取した。得られた腹水からプロテインＡカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより、それぞれＩｇＧを精製し、各免疫原につき２種類ずつの精製抗免疫原抗体を得た。
２．標識体パッドの作製
　赤色ラテックス粒子に各精製抗免疫原抗体を共有結合させ、浮遊液に懸濁し、ソニケーションを行って充分に分散浮遊させた抗RSウイルスラテックス浮遊液、抗アデノウイルスラテックス浮遊液、抗肺炎マイコプラズマラテックス浮遊液を調製した。これらのラテックス浮遊液を大きさが20cm×1cmのガラス繊維にそれぞれ塗布し、温風下で良く乾燥させて、乾燥混合物を形成した標識体パッドを作製した。
３．試料添加パッドの作製
　大きさが2.0cm×20cmのガラス繊維を使用した。
４．検査デバイスの作製
　検査デバイスは、図１に示すものと同様の構成のものを用いた。ニトロセルロースメンブランを2cm×20cmの大きさに裁断し接着剤がついたプラスチック板でバッキングした、下端から0.8cmと1.0cmの位置に約1mm幅になる量の抗RSウイルス抗体（上記と別の抗体）液、または抗アデノウイルス抗体（上記とは別の抗体）、または抗肺炎マイコプラズマ抗体を20cm塗布し、温風下で良く乾燥させて抗体を固相化した（検出部）。次に、3cm×20cmの大きさの濾紙をニトロセルロースメンブランの上端に5mm重ねて吸収パッド部を設けた。更に、標識体パッドをニトロセルロースメンブランの下端に2mm重ねて標識体部を設け、更に、試料添加パッドを標識体パッドの上端から7mm離れた位置に合わせて重ね、試料添加部を設けた。次いで、カッターで幅5mmの短冊に裁断して一体化された検査デバイスを作製した。
５．検体抽出液の作製
　以下のそれぞれの試験例に記載する。
試験例１
L-フェニルアラニン（L-Phe）入り検体抽出液の偽陰性反応抑制効果
１－１．検体抽出液の調製
　50mM トリス緩衝液（pH8.0）, 2(w/v)％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル, 5(w/v)％ L-アルギニンを含む混合液を作製し、対照１の検体抽出液とした。次に50mM トリス緩衝液（pH8.0）, 1.25(w/v)％ポリオキシエチレンアルキルエーテル, 0.75(w/v)％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル, 4(w/v)％グリシンエチルエステル,  2.0(w/v)％ L-Phe, 400mM 臭化ナトリウムを含む混合液を作製し、試験用１の検体抽出液とした。
１－２．試験方法
　対照１の検体抽出液および試験用３の検体抽出液に綿棒で採取した唾液を浮遊・分散させ、フィルターろ過を行った。また、これらに6.8 x 102 PFU/mLの不活化インフルエンザウイルスA型を添加し混合したサンプルを作製し、これらを上記で作製した検査デバイスに滴下し、5分後に検出部の発色強度を測定した。同時に対照１および試験用１の検体抽出液に唾液を添加していないサンプルと、これに6.8 x 102 PFU/mLの不活化インフルエンザウイルスA型のみを加えて混合したサンプルも準備し、試験を実施した。発色強度の測定は、10段階の発色強度に点数を付けた赤色の色見本を使用して行った。
１－３．発色強度試験結果
　結果を表１に示す。なお発色強度の数値は0、1＋、2＋・・・・10＋の順に強くなり、0は発色が見られなかったことを示しており、数値が高いほど偽陰性反応が強く出ていることを示している。
　対照１の検体抽出液では、唾液なしとありを比較するとシグナル強度が2レベル低下していた。一方で試験用３の検体抽出液では、唾液なしとありでシグナル強度に差が見られなかったことから、本発明によって、偽陰性反応を抑制できることがわかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
試験例２
RSウイルスのイムノクロマト法での検出におけるL-Phe入り検体抽出液の偽陰性抑制効果２－１．検体抽出液の調製
　50mM トリス緩衝液（pH8.0）, 2(w/v)％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル, 5(w/v)％ L-アルギニンを含む混合液を作製し、対照１の検体抽出液とした。次に1.5(w/v)％ L-Phe,　50mM トリス緩衝液（pH8.0）, 1.25(w/v)％ポリオキシエチレンアルキルエーテル, 0.75(w/v)％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル, 4(w/v)％グリシンエチルエステル, 150mM臭化ナトリウムを含む混合液を作製し、試験用４の検体抽出液とした。
２－２．試験方法
　綿棒で口腔から唾液検体を採取し、唾液検体を対照および試験用４の検体抽出液に浮遊、分散させた。これらに不活化したRSウイルスを3.5 x 104 TCID50/mLとなるようにそれぞれに添加、混合し、本試験のサンプルとした。また、唾液を添加せずに不活化RSウイルスのみを3.5 x 104 TCID50/mLとなるように、対照および試験用４の検体抽出液に添加したサンプルも作製した。次に、これらのサンプルを上記で作製した検査デバイスに滴下し、5分後に検出部の発色強度を測定した。発色強度の測定は、赤および青それぞれにおいて、10段階の発色強度に点数を付けた色見本を使用して行った。
２－３．発色強度試験結果
　結果を表２に示す。なお発色強度の数値は0、1＋、2＋・・・・10＋の順に強くなり、0は発色が見られなかったことを示しており、数値が高いほどシグナルが強く出ていることを示している。
　対照の検体抽出液では唾液検体が添加されたことにより偽陰性反応によって発色強度が低下しているが、試験用４の検体抽出液では唾液が添加されても発色強度に全く変化はなく、唾液による偽陰性化が、本発明の成分を含む検体抽出液では抑制されていることがわかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
試験例３
L-Phe入り検体抽出液と従来検体抽出液の感度比較
３－１．検体抽出液の調製
　50mM トリス緩衝液（pH8.0）, 2(w/v)％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル, 5(w/v)％ L-アルギニンを含む混合液を作製し、対照１の検体抽出液とした。次に50mM トリス緩衝液（pH8.0）, 1.25(w/v)％ポリオキシエチレンアルキルエーテル, 0.75(w/v)％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル, 4(w/v)％グリシンエチルエステル,  1.5(w/v)％ L-Phe, 150mM 臭化ナトリウムを含む混合液を作製し、試験用１の検体抽出液とした。
３－２．試験方法
　対照１および試験用１の検体抽出液に、最終濃度が6.8 x 102PFU/mL、3.4 x 102 PFU/mL、 1.7ｘ102 PFU/mLの不活化インフルエンザウイルスA型をそれぞれ添加したサンプルを作製した。また同様に不活化インフルエンザウイルスB型についても、最終濃度が4.0 x 102 PFU/mL、2.0 x 102PFU/mL、1.0 x 102PFU/mLとなるようなサンプルを作製した。次に、これらのサンプルを上記で作製した検査デバイスに50μL滴下し、5分後に検出部の発色強度を測定した。発色強度の測定は、赤および青それぞれにおいて、10段階の発色強度に点数を付けた色見本を使用して行った。
３－３．発色強度試験結果
　結果を表３に示す。なお発色強度の数値は0、0.5＋、1＋、2＋・・・・10＋の順に強くなり、0は発色が見られなかったことを示しており、数値が高いほどシグナルが強く出ていることを示している。結果の表記は“A型の発色強度/B型の発色強度”で表示している。
　対照１の検体抽出液と試験用１の検体抽出液で、感度は同等だった。シグナル強度に関しては試験用１のほうが高かった。以上から、本発明で用いた検体抽出液を使用すれば、感度も低下させずに特異性を向上させることができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000028
試験例４
L-Phe類似物質入り検体抽出の偽陰性抑制効果
４－１．検体抽出液の調製
　50mM トリス緩衝液（pH8.0）, 2(w/v)％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル, 2(w/v)％ L-アルギニンを含む混合液を作製し、対照（添加剤なし）の検体抽出液とした。次に50mM トリス緩衝液（pH8.0）, 2(w/v)％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル, 2(w/v)％ L-アルギニンを含み、これらの組成に加えて表４の化合物（括弧内は終濃度）を1種類含む検体抽出液を作製し、試験用の検体抽出液とした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000029
４－２．試験方法
　対照の検体浮遊液で偽陰性反応が観察された、インフルエンザウイルスおよびRSウイルス陰性の唾液を綿棒で採取した。これらの検体を対照および、それぞれの試験用の検体抽出液に浮遊、分散させて本試験のサンプルとした。さらに最終濃度が6.8 x 102 PFU/mLのインフルエンザA型ウイルス、または最終濃度が4.0 x 10 PFU/mLのインフルエンザB型ウイルス、または最終濃度が3.5 x 104 TCID50/mLのRSウイルス抗原を添加し、混合した。ここに次に、これらのサンプルを上記で作製したそれぞれの検査デバイスに滴下し、5分後に検出部の発色強度を測定した。発色強度の測定は、10段階の発色強度に点数を付けた色見本を使用して行い、偽陰性化の抑制の程度を確認した。
４－３．発色強度試験結果
　結果を表５および表６に示す。結果の表記は「×」は効果がなかったことを、「△」は少し改善効果が見られたことを、「〇」はかなり改善効果が見られたことを、「◎」は強い改善効果が見られたことを示す。なおインフルエンザウイルス検出試薬では“インフルエンザA型 / インフルエンザB型”で表記した。
　RSウイルス検出試薬では試験したほぼすべての化合物で偽陰性の抑制効果が確認でき、インフルエンザウイルス検出試薬でも、複数の化合物で偽陰性の抑制効果が確認できた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000030
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000031
　本発明の方法は、種々の物質の正確な検出に利用することができる。
１　ニトロセルロースメンブラン
２　標識体部
３　検出部
４　試料添加部
５　吸収パッド部
６　プラスチック板
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims (16)

  1. 　抗原抗体反応または相互作用を有する物質同士の結合反応を利用して検体中の被検出物質を検出する検査キットであって、フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含有する検体抽出液を含む検査試薬。
  2. 　イムノクロマト用検査試薬であり、イムノクロマト用検査デバイスフェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含有する検体抽出液を含む、請求項１記載の検査試薬。
  3. 　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含有する検体抽出液を含浸した部位を含むイムノクロマト用検査デバイスである、請求項１または２に記載の検査試薬。
  4. 　検体抽出液が0.1～10(w/v)％の偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の検査試薬。
  5. 　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物が、以下の一般式（I）～（V)のいずれかで表される化合物もしくはトリプトファンである、請求項１～４のいずれか１項に記載の検査試薬：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     [一般式（I）中、R1はH、OH、=O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOHまたはCH3であり、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、nは０または１であり、mは０、１、２、３または４である。]
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     [一般式（II)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R3はCOOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOHまたはCH3であり、R3とCOOR2はベンゼン環のオルト、メタまたはパラに位置する。]
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     [一般式（III)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R4はHまたはCH3であり、nは０または１である。]
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     [一般式（IV)中、R5はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジンまたはヒスチジンの側鎖である。]
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     [一般式（V)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R6はNHまたはOであり、n０、１、２、３または４である。]。
  6. 　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物が、アスパルテーム、フェニルアラニン、フェニルアラニンメチルエステル、マンデル酸、2‐フェニルプロピオン酸、3‐フェニルプロピオン酸、フェニルグリシン、フェニルグリシンメチルエステル、フェニルグリシンエチルエステル、フェニル乳酸、フェニルピルビン酸、安息香酸、フタル酸、アセチルサリチル酸、馬尿酸、N-トルオイルグリシン、N-カルボベンジルオキシアミノ酸、N-フェニルグリシン、フェノキシ酢酸、トリプトファン、およびそれらの化合物の金属塩、ならびにそれらの化合物の光学異性体、幾何異性体、構造異性体、立体異性体および位置異性体からなる群より選択される化合物である、請求項１～５のいずれか１項に記載の検査試薬。
  7. 　検体抽出液に、さらに、アルギニン、リジン、アルギニンエチルエステル、アルギニンメチルエステル、グリシンエチルエステルおよびグリシンメチルエステル、ならびにこれらの化合物の光学異性体、幾何異性体、構造異性体および立体異性体からなる群より選択されるアミノ酸またはアミノ酸誘導体が含まれる、請求項１～６のいずれか１項に記載の検査試薬。
  8. 　検体抽出液に、さらに、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、ヨウ化ナトリウムおよびヨウ化カリウムからなる群より選択されるハロゲン化物が含まれる、請求項１～７のいずれか１項に記載の検査試薬。
  9. 　咽頭ぬぐい検体、鼻腔ぬぐい検体、鼻腔吸引検体、咽頭洗浄検体、鼻腔洗浄検体、鼻かみ鼻汁検体、唾液検体、血清検体、血漿検体、全血検体、便検体、便懸濁液検体および尿検体からなる群から選択される検体中のウイルス抗原、細菌抗原、およびタンパク質抗原からなる群から選択される被検出物質を、検体抽出液中に含まれる抗原抗体反応または相互作用を有する物質同士の反応を利用して検出する方法において、検体を予めフェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分と接触させることによって、偽陰性反応を抑制して検出する方法。
  10. 　被検出物質を検出する方法が、イムノクロマト法であり、フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液に検体を入れ、該検体抽出液をイムノクロマト用検査デバイスに添加する、請求項９記載の方法。
  11. 　被検出物質を検出する方法が、イムノクロマト法であり、検体をフェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物である偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む検体抽出液を含浸した部位を含むイムノクロマト用検査デバイスに添加する、請求項９記載の方法。
  12. 　検体抽出液が0.1～10(w/v)％の偽陰性を抑制する非特異反応抑制成分を含む、請求項９～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物が、以下の一般式（I）～（V)のいずれかで表される化合物もしくはトリプトファンである、請求項９～１２のいずれか１項に記載の方法：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     [一般式（I）中、R1はH、OH、=O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOHまたはCH3であり、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、nは０または１であり、mは０、１、２、３または４である。]
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     [一般式（II)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R3はCOOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOHまたはCH3であり、R3とCOOR2はベンゼン環のオルト、メタまたはパラに位置する。]
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     [一般式（III)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R4はHまたはCH3であり、nは０または１である。]
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
     [一般式（IV)中、R5はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジンまたはヒスチジンの側鎖である。]
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
     [一般式（V)中、R2はH、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、CsまたはFrであり、R6はNHまたはOであり、n０、１、２、３または４である。]。
  14. 　フェニル基、ベンジル基、トリル基またはキシリル基を有し、さらに、カルボキシル基、メトキシカルボキシル基またはエトキシカルボキシル基を有し、さらにヒドロキシル基を有していてもよい、水溶性を有する、分子量が6000Da以下の化合物が、アスパルテーム、フェニルアラニン、フェニルアラニンメチルエステル、マンデル酸、2‐フェニルプロピオン酸、3‐フェニルプロピオン酸、フェニルグリシン、フェニルグリシンメチルエステル、フェニルグリシンエチルエステル、フェニル乳酸、フェニルピルビン酸、安息香酸、フタル酸、アセチルサリチル酸、馬尿酸、N-トルオイルグリシン、N-カルボベンジルオキシアミノ酸、N-フェニルグリシン、フェノキシ酢酸、トリプトファン、およびそれらの化合物の金属塩、ならびにそれらの化合物の光学異性体、幾何異性体、構造異性体、立体異性体および位置異性体からなる群より選択される化合物である、請求項９～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 　検体抽出液に、さらに、アルギニン、リジン、アルギニンエチルエステル、アルギニンメチルエステル、グリシンエチルエステルおよびグリシンメチルエステル、ならびにこれらの化合物の光学異性体、幾何異性体、構造異性体および立体異性体からなる群より選択されるアミノ酸またはアミノ酸誘導体が含まれる、請求項９～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 　検体抽出液に、さらに、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、ヨウ化ナトリウムおよびヨウ化カリウムからなる群より選択されるハロゲン化物が含まれる、請求項９～１５のいずれか１項に記載の方法。
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