CN116194436A - 通过抑制假阴性而改善了特异性的检查试剂 - Google Patents

通过抑制假阴性而改善了特异性的检查试剂 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种标本提取液及标本提取方法、以及使用其的检查试剂，所述标本提取液包含在通过利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的反应的检测试剂来从鼻拭子标本、鼻吸出物标本、鼻腔冲洗标本、擤出的鼻涕标本、咽拭子标本、唾液标本、粪便标本、血清标本、血浆标本、尿液标本等来自体液的标本中检测病毒、细菌、待检测蛋白质等抗原时，能够抑制现有方法无法完全抑制的假阴性反应的成分。组成中具有标本提取液的检查试剂的标本提取液、或在检测对象的检测反应之前的工序或与检测反应同时进行的工序中与标本接触的部件等中含有如下具有水溶性的化合物，所述化合物在结构中具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基，且上述基团上至少键合有包含羧基或羧基经甲基化、乙基化的原子团的官能团或者羟基。

Description

通过抑制假阴性而改善了特异性的检查试剂
技术领域
本发明涉及一种技术，在通过利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的结合反应的检测试剂从鼻拭子标本、鼻吸出物标本、鼻腔冲洗标本、擤出的鼻涕标本、咽拭子标本、唾液标本、粪便标本、血清标本、血浆标本、尿液标本等来自体液的标本中检测病毒及细菌、待检测蛋白质等被检测物质时，该技术通过在标本提取液以及检测反应之前的工序或与检测反应同时进行的工序中与标本接触的部件等中使用具有特定化学结构的化合物，能够强效抑制现有方法无法完全抑制的假阴性反应。
背景技术
近年来，利用抗原抗体反应、具有相互作用的物质彼此的结合反应来检测有无病毒及细菌等病原体的感染或有无妊娠等的各种检查试剂及试剂盒被不断开发出来。所有的检查试剂均包括用于在从患者采集标本之后，创造适合检测反应的条件的预处理工序，该工序对于获得准确的结果至关重要。特别是简易检查试剂，它们大多具有不需要特殊设备，且操作简单，价格低廉的特点，不仅是大医院及医疗检查中心，普通医院及诊所中也广泛使用，除检查专业人员之外的用户也经常使用。因此，试剂的检查精度高这一点非常重要。作为目前市场上的简易检查试剂的示例，可列举检测病原体的感染的简易检查试剂及用于诊断妊娠的简易检查试剂。这些检查试剂多在患者最先访问的医疗机构中实施，能够针对从患者采集到的标本现场判断有无感染或有无妊娠，能够在早期阶段采取医疗措置等，因此，简易检查试剂在医疗中的重要性不断提升。并且，随着简易检查试剂的利用增加，用户方面对于试剂的性能也要求更高重现性的检查结果及更高的检查精度。
目前，作为简易检查方法的代表性试剂，通常已知有利于抗原抗体反应的免疫测定法、特别是免疫层析法。免疫层析法通过在膜上形成与被检测物质特异性结合的捕捉体(捕捉物质)、以及与被检测物质特异性结合的标记体的复合物，并检测/定量标记来检测(测定或者定量)被检测物质。免疫层析法的测定装置简单，且成本方面也较为优异，因此被广泛用于多种被检测物质的检测。
在免疫层析法的一种方式中，向检查器件滴加包含被检测物的标本样品，形成被检测物质-标记体的复合物，同时使其展开，通过检测部捕捉该复合物，从而检测或者定量标记，其中，所述检查器件具备：硝化纤维素等膜条上固相化有与被检测物质特异性结合的抗体作为捕捉物质而成的检测部；以及包含与被检测物质特异性结合的标记体的标记体部。
近年来，对于包括免疫层析法在内的临床诊断药物，临床实践希望诊断结果具有更高可靠性，从而使得进一步提高试剂的可靠性成为课题。可靠性高的检查试剂是指灵敏性和特异性高，不易引起误判的检查试剂。特别是关于特异性，一直以来都存在如何通过试剂设计来应对每个患者的背景差异所导致的标本成分的多样性这一技术问题，更有效地消除非特异反应是简易检查法中非常重要的课题。为了解决这些课题，报道了使精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸、及无机盐类、甘氨酸乙酯、表面活性剂、源自动物的免疫球蛋白、具有硫酸基的表面活性剂及高分子、具有季铵离子的表面活性剂等与标本接触对于改善特异性具有一定的效果(参见专利文献1、2、3、4及5)，但效果均有限，仍然存在无法抑制的非特异反应。因此，期待一种更强效改善特异性，同时不会降低灵敏性的技术。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2003-279577号公报
专利文献2：日本特开2005-24323号公报
专利文献3：日本特开2004-301684号公报
专利文献4：日本专利第6116268号公报
专利文献5：日本专利第6601932号公报
发明内容
在通过利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的结合反应的检测试剂来从鼻拭子标本、鼻吸出物标本、鼻腔冲洗标本、擤出的鼻涕标本、咽拭子标本、唾液标本、粪便标本、血清标本、血浆标本、尿液标本等来自体液的标本中检测病毒、细菌、待检测蛋白质等被检测物质时，仍然存在现有方法无法完全抑制的假阳性反应或假阴性反应，这是妨碍准确诊断的原因之一。在本发明中，提供一种使用包含能够抑制假阴性反应但不会降低灵敏性的成分的标本提取液以及标本提取方法的检查试剂。
本发明人等对更强效抑制在将鼻拭子标本、鼻吸出物标本、鼻腔冲洗标本、擤出的鼻涕标本、咽拭子标本、唾液标本、粪便标本、血清标本、血浆标本、尿液标本等来自体液的标本作为试验样品时产生的非特异反应的方法进行了潜心研究，结果发现了比现有方法能够更显著地抑制非特异反应的成分，并发现通过将该成分添加于标本提取液、在检测反应之前的工序或与检测反应同時进行的工序中与标本接触的部件等中，能够抑制现有方法无法检测到的假阴性反应，从而完成了本发明。
即，本发明具有以下的组成。
[1]一种检查试剂盒，所述检查试剂盒利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的结合反应来检测标本中的被检测物质，其特征在于，所述检查试剂包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液，所述非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
[2]根据[1]所述的检查试剂，其特征在于，所述检查试剂是免疫层析用检查试剂，包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液，所述非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
[3]根据[1]或[2]所述的检查试剂，其特征在于，所述检查试剂是免疫层析用检查器件，所述免疫层析用检查器件包括含浸有含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液的部位，所述非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
[4]根据[1]至[3]中任一项所述的检查试剂，其特征在于，标本提取液包含0.1～10(w/v)％的抑制假阴性的非特异反应抑制成分。
[5]根据[1]至[4]中任一项所述的检查试剂，其特征在于，具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物是由以下的通式(I)～(V)中的任一者表示的化合物或者色氨酸：
[化学式1]
Figure BDA0004112997130000041
通式(I)中，R1为H、OH、＝O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOH或CH3，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n为0或1，m为0、1、2、3或4；
[化学式2]
Figure BDA0004112997130000051
通式(II)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3为COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOH或CH3，R3和COOR2位于苯环的邻位、间位或对位；
[化学式3]
Figure BDA0004112997130000052
通式(III)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4为H或CH3，n为0或1；
[化学式4]
Figure BDA0004112997130000053
通式(IV)中，R5为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸或组氨酸的侧链；
[化学式5]
Figure BDA0004112997130000061
通式(V)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6为NH或O，n为0、1、2、3或4。
[6]根据[1]至[5]中任一项所述的检查试剂，其特征在于，具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物是选自由阿斯巴甜、苯丙氨酸、苯丙氨酸甲酯、扁桃酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘氨酸、苯基甘氨酸甲酯、苯基甘氨酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、邻苯二甲酸、乙酰水杨酸、马尿酸、N-甲苯酰甘氨酸、N-苄氧羰基氨基酸、N-苯基甘氨酸、苯氧乙酸、色氨酸及这些化合物的金属盐、以及这些化合物的光学异构体、几何异构体、结构异构体、立体异构体及位置异构体组成的组的化合物。
[7]根据[1]至[6]中任一项所述的检查试剂，其特征在于，标本提取液中进一步包含选自由精氨酸、赖氨酸、精氨酸乙酯、精氨酸甲酯、甘氨酸乙酯及甘氨酸甲酯、以及这些化合物的光学异构体、几何异构体、结构异构体及立体异构体组成的组的氨基酸或氨基酸衍生物。
[8]根据[1]至[7]中任一项所述的检查试剂，其特征在于，标本提取液中进一步包含选自由氯化锂、氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾、碘化钠以及碘化钾组成的组的卤化物。
[9]一种利用标本提取液中所含的抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的反应来检测选自由标本中的病毒抗原、细菌抗原、以及蛋白质抗原组成的组的被检测物质的方法，所述标本选自由咽拭子标本、鼻拭子标本、鼻吸出物标本、咽冲洗标本、鼻腔冲洗标本、擤出的鼻涕标本、唾液标本、血清标本、血浆标本、全血标本、粪便标本、粪便悬浮液标本以及尿液标本组成的组，其特征在于，所述方法通过使标本预先与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触来抑制假阴性反应以进行检测，所述非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
[10]根据[9]所述的方法，其特征在于，检测被检测物质的方法是免疫层析法，将标本放入包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液，并将该标本提取液添加于免疫层析用检查器件，所述非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
[11]根据[9]所述的方法，其特征在于，检测被检测物质的方法是免疫层析法，将标本添加于包括含浸有包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液的部位的免疫层析用检查器件，所述非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
[12]根据[9]至[11]中任一项所述的方法，其特征在于，标本提取液包含0.1～10(w/v)％的抑制假阴性的非特异反应抑制成分。
[13]根据[9]至[12]中任一项所述的方法，其中，具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物是由以下的通式(I)～(V)中的任一者表示的化合物或者色氨酸：
[化学式6]
Figure BDA0004112997130000081
通式(I)中，R1为H、OH、＝O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOH或CH3，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n为0或1，m为0、1、2、3或4；
[化学式7]
Figure BDA0004112997130000082
通式(II)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3为COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOH或CH3，R3和COOR2位于苯环的邻位、间位或对位；
[化学式8]
Figure BDA0004112997130000083
通式(III)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4为H或CH3，n为0或1；
[化学式9]
Figure BDA0004112997130000091
通式(IV)中，R5为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸或组氨酸的侧链；
[化学式10]
Figure BDA0004112997130000092
通式(V)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6为NH或O，n为0、1、2、3或4；
[14]根据[9]至[13]中任一项所述的方法，其特征在于，具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物是选自由阿斯巴甜、苯丙氨酸、苯丙氨酸甲酯、扁桃酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘氨酸、苯基甘氨酸甲酯、苯基甘氨酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、邻苯二甲酸、乙酰水杨酸、马尿酸、N-甲苯酰甘氨酸、N-苄氧羰基氨基酸、N-苯基甘氨酸、苯氧乙酸、色氨酸及这些化合物的金属盐、以及这些化合物的光学异构体、几何异构体、结构异构体、立体异构体及位置异构体组成的组的化合物。
[15]根据[9]至[14]中任一项所述的方法，其特征在于，标本提取液中进一步包含选自由精氨酸、赖氨酸、精氨酸乙酯、精氨酸甲酯、甘氨酸乙酯及甘氨酸甲酯、以及这些化合物的光学异构体、几何异构体、结构异构体及立体异构体组成的组的氨基酸或氨基酸衍生物。
[16]根据[9]至[15]中任一项所述的方法，其特征在于，标本提取液中进一步包含选自由氯化锂、氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾、碘化钠以及碘化钾组成的组的卤化物。
本说明书包括作为本申请的优先权的基础的日本专利申请第2020-150525号的公开内容。
发明效果
根据本发明，能够提供一种检测试剂，该检测试剂能够在利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的结合反应从鼻拭子标本、鼻吸出物标本、鼻腔冲洗标本、擤出的鼻涕标本、咽拭子标本、唾液标本、粪便标本、血清标本、血浆标本、尿液标本等来自体液的标本等中检测特定的病毒、细菌、蛋白质、低分子化合物等，其中，所述检测试剂能够更强效抑制因标本的混入所产生的假阴性反应，且重现性高、检查精度高。另外，还能够进一步防止非特异反应导致的错误临床诊断，对于患者以及作为用户的医生、检查技师及护士均是有益的。
附图说明
图1是示出本发明中使用的检查器件的结构的图。
具体实施方式
以下，对本发明进行详细说明。
本发明是一种在通过利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的结合反应的检测试剂来检测标本中的被检测物质时，通过使化合物和标本接触来抑制假阴性反应，防止信号降低、即防止灵敏性降低的方法。
在本发明中，抗体也包括抗体的抗原结合性片段。
(标本)
所使用的标本不受限制。例如，作为标本，可列举：咽拭子液、鼻拭子液、鼻吸出物液、咽冲洗液、鼻腔冲洗液、擤出的鼻涕液、唾液、血清、血浆、全血、粪便悬浮液、尿液、培养液等。将这些称为咽拭子标本、鼻拭子标本、鼻吸出物标本、咽冲洗标本、鼻腔冲洗标本、擤出的鼻涕标本、唾液标本、血清标本、血浆标本、全血标本、粪便标本、粪便悬浮液标本、尿液标本、培养液标本等。可以利用缓冲液稀释后使用，也可以不稀释直接使用。
(待检测物质)
被检测物质也不受任何限制，可以为想要检测的任意物质。作为具体例，能够列举：流感病毒、腺病毒、RS(respiratory syncytial，呼吸道呼吸道合胞病毒)病毒、人偏肺病毒(hMPV)、甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、诺如病毒、SARS-CoV、MERS-CoV以及SARS-CoV2等冠状病毒等病毒抗原；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、A群链球菌、B群链球菌、军团菌属菌等细菌抗原；细菌等所产生的毒素；支原体抗原；沙眼衣原体等衣原体抗原；原生动物的抗原；真菌的抗原；人绒毛膜促性腺激素等激素；C反应蛋白、肌红蛋白、心肌肌钙蛋白、降钙素原等蛋白质；各种肿瘤标志物；农药、环境激素等抗原，还可列举针对上述细菌、病毒等的抗体。
(标本的采集)
标本的采集方法也不受任何限制，可列举：使用棉签等标本采集器具采集咽拭子标本、鼻拭子标本、鼻吸出物标本、咽冲洗标本、擤出的鼻涕标本、唾液标本、血清标本、血浆标本、全血标本、粪便标本、粪便悬浮液标本、尿液标本、培养液标本等来自体液、排泄物的标本的方法、通过利用抽吸器进行吸出等来采集上述标本的方法、利用采血管等来采集上述标本的方法等。
(抑制假阴性的非特异反应抑制成分与所采集的标本接触)
在本发明的方法中，使标本与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触。其中，通过使标本与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触，在测定标本的情况下，能够抑制假阴性。需要说明的是，由于在使标本和抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触时，被检测物质与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触，因此，在本发明的方法中，也称为使被检测物质与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触。另外，也可以将使标本与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触称为将标本用抑制假阴性的非特异反应抑制成分处理。
另外，标本提取液是指使标本中的被检测物质浮游而容易测定的液体，例如无需通过溶解等从细胞等中提取特定的被检测物质，也可以简称为标本处理液、标本稀释液、标本浮游液等。
在本发明中，需要使标本和抑制假阴性的非特异反应抑制成分在供试验前预先接触。其中，供试验前是指，标本中的被检测物质与针对该物质的抗体或抗原进行反应前、或标本中的被检测物质与具有相互作用的物质进行反应前。与抗体或抗原的反应是指与抗体或抗原的结合，标本中的被检测物质与具有相互作用的物质的反应是指与具有相互作用的物质的结合。
作为使本发明的抑制假阴性的非特异反应抑制成分和标本的接触方法，可列举：将标本放入包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分的溶液中并混合以使其接触的方法、以及使用于测定的检查器件中预先包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液，并将标本添加于用于检查的检查器件，从而使标本与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触的方法。
作为使标本与包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分的溶液混合并使其接触的方法的具体例，可列举如下方法：使将所采集的标本浮游、分散而成的标本提取液中预先包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分，在将标本添加于标本提取液并混合时，使标本与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触。例如在使用含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液的情况下，当标本为鼻拭子液时，可以使用棉签采集鼻拭子液，将浸入有所采集的标本的棉签放入所述标本提取液中，使标本浮游、分散，以进行提取，从而使标本与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触。
作为使用于测定的检查器件中预先包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液，并将标本添加于检查器件，从而使标本与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触的方法的具体例，可列举如下方法：通过含浸、涂布等，使检查器件所具有的由无纺布、纺织品、海绵等组成的垫或过滤滤片等纤维状或多孔基材中预先包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液，在将所采集的标本添加于检查器件后，使标本与纤维状或多孔基材中预先包含的抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触。作为这样的检查器件，可列举后述的免疫层析法用器件。
检查器件的多孔基材的材质不受任何限制，可列举：纸浆、棉花、羊毛、聚酯、聚丙烯、尼龙、丙烯酸玻璃纤维、硝化纤维素等。在使用于测定的检查器件中预先包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液，并将标本添加于检查器件，从而使标本与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触的情况下，例如，预先将包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液含浸于多孔基材并干燥，在检查器件上产生用于检测被检测物质的反应之前的工序或与其同时进行的工序中使标本与该多孔基材接触即可。例如，在向检查器件添加标本的情况下，标本在检查器件上展开，到达器件上产生反应的部位，产生抗体抗原反应等反应。通过在检查器件上的产生反应的部位之前的部位上预先设置包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液的多孔基材，标本在反应前与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触。例如，使用过滤滤片作为多孔基材，并在添加标本的部位设置包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液的过滤滤片即可。在该情况下，在使用鼻拭子液作为标本时，使用棉签采集鼻拭子液，将浸入了所采集的标本的棉签放入不包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分的任意组成的标本提取液中，使标本分散、溶解之后，在作为检查器件的组成部件的包含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的过滤滤片中预先含浸上述标本提取液，由此能够使标本和抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触。
(抑制假阴性的非特异反应抑制成分及浓度)
本发明的抑制假阴性的非特异反应抑制成分是指具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基且具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。另外，也包括包含这些化合物的金属盐的、光学异构体、几何异构体、结构异构体、立体异构体以及位置异构体。
这些化合物是由以下的通式(I)～(V)中的任一者表示的化合物或色氨酸。
[化学式11]
Figure BDA0004112997130000141
通式(I)中，R1为H、OH、＝O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOH或CH3，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n为0或1，m为0、1、2、3或4。
[化学式12]
Figure BDA0004112997130000142
通式(II)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3为COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOH或CH3，R3和COOR2位于苯环的邻位、间位或对位。
[化学式13]
Figure BDA0004112997130000151
通式(III)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4为H或CH3，n为0或1。
[化学式14]
Figure BDA0004112997130000152
通式(IV)中，R5为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸或组氨酸的侧链。
[化学式15]
Figure BDA0004112997130000153
通式(V)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6为NH或O，n为0、1、2、3或4。
可列举由例如阿斯巴甜、苯丙氨酸、苯丙氨酸甲酯(包含盐酸盐)、扁桃酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘氨酸、苯基甘氨酸甲酯、苯基甘氨酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、邻苯二甲酸、乙酰水杨酸、马尿酸、N-甲苯酰甘氨酸、N-苄氧羰基氨基酸、N-苯基甘氨酸、苯氧乙酸、色氨酸、以及包含这些的金属盐的、光学异构体、几何异构体、结构异构体、立体异构体以及位置异构体组成的组的化合物，但不限定于此。在本发明中，在提及阿斯巴甜、苯丙氨酸、苯丙氨酸甲酯(包含盐酸盐)、扁桃酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘氨酸、苯基甘氨酸甲酯、苯基甘氨酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、邻苯二甲酸、乙酰水杨酸、马尿酸、N-甲苯酰甘氨酸、N-苄氧羰基氨基酸、N-苯基甘氨酸、苯氧乙酸、色氨酸的情况下，包括它们的金属盐，进一步包括光学异构体、几何异构体、结构异构体、立体异构体以及位置异构体。作为金属盐，可列举例如：Li盐、Na盐、K盐、Rb盐、Cs盐、Fr盐等。
作为由上述通式(I)表示的化合物，可列举：阿斯巴甜、苯丙氨酸、苯丙氨酸甲酯、扁桃酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘氨酸、苯基甘氨酸甲酯、苯基甘氨酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸以及苯甲酸。
作为由通式(II)表示的化合物，可列举：邻苯二甲酸以及乙酰水杨酸。
作为由通式(III)表示的化合物，可列举：马尿酸、N-甲苯酰甘氨酸。作为由通式(IV)表示的化合物，可列举N-苄氧羰基氨基酸。作为由通式(V)表示的化合物，可列举：N-苯基甘氨酸、苯氧乙酸。
以上抑制假阴性的非特异反应抑制成分包含在标本提取液或在检测反应前的工序中与标本接触的过滤滤片等部件等中。浓度优选0.001(w/v)％以上，进一步优选0.1(w/v)％以上，最优选1(w/v)％以上。另外，也可以同时使用多种这些非特异反应抑制成分，此时的浓度也优选0.001(w/v)％以上，进一步优选0.1(w/v)％以上，最优选1(w/v)％以上。浓度的上限无需限定，例如，10(w/v)％以下或5(w/v)％以下。需要说的是，在使过滤滤片等多孔基材中包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液的情况下，同样只要使多孔基材中包含上述浓度的抑制假阴性的非特异反应抑制成分即可。
(除抑制假阴性的非特异反应抑制成分之外的其它成分)
在本发明中的标本提取液或在检测反应之前的工序中与标本接触的多孔基材等部件等中所含浸的溶液中，除抑制假阴性的非特异反应抑制成分之外，还可以包含能够降低非特异反应的已知物质或表面活性剂、pH缓冲性成分、各种蛋白质、盐类、糖类。例如，作为能够降低非特异反应的成分，可列举：精氨酸、精氨酸乙酯、精氨酸甲酯、甘氨酸乙酯、甘氨酸甲酯、赖氨酸以及上述化合物的各种异构体等。另外，作为表面活性剂，可列举例如：聚乙二醇单对异辛基苯醚及聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯等非离子型表面活性剂、CHAPS及月桂基酰胺磺基甜菜碱等两性离子型表面活性剂、十二烷基硫酸钠等阴离子型表面活性剂、十二烷基三甲基氯化铵等阳离子型表面活性剂。标本提取液中的表面活性剂的浓度优选0.5～5(w/v)％，进一步优选1～3(w/v)％，进一步优选1.5～2.5(w/v)％。
作为缓冲性成分，可列举：磷酸缓冲液、Tris缓冲液、Good's缓冲液等。作为蛋白质成分，可列举：BSA(牛血清白蛋白)、酪蛋白、明胶、IgG等。作为盐类，可列举：氯化锂、氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾、碘化钠、碘化钾等。
(检测方法)
在本发明的方法中，通过利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的结合反应的方法进行检测。作为具有相互作用的物质彼此的组合，可列举：配体和受器(receptor)的组合、受体和受器的组合、生物素和亲和素或者链霉亲和素的组合等。
只要为利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的结合反应的检测方法，则不受特别限定，可列举：免疫层析法、乳胶凝集法、免疫比浊法、免疫比浊法、化学发光酶免疫测定法(CLEIA)、酶联免疫测定法(EIA)、酶联免疫测定吸附法(ELISA)等。特别优选免疫层析法。这些中大多数是免疫学方法，利用抗原抗体反应，但也可以利用具有相互作用的物质彼此的反应来代替抗原抗体反应。在这些方法中，优选夹层法。在典型的夹层法中，将与被检测物质结合的第一物质作为被检测物质捕捉物质预先固相化在特定的载体上，使被检测物质结合于该物质，再使与被检测物质结合的经标记的第二物质结合于被检测物质，形成“与被检测物质结合的第一物质-被检测物质-与被检测物质结合的经标记的第二物质”(“-”表示结合)的复合物，通过测定标记物质发出的信号来测定被检测物质。与被检测物质结合的第一物质和与被检测物质结合的第二物质可以为相同物质。被检测物质和与被检测物质结合的物质可以为抗原和抗体或抗体和抗原，也可以为彼此具有相互作用的物质。作为与被检测物质结合的第一物质所固定于的固相，可以使用所有可以通过公知技术固定蛋白质等物质的物品，可以任意选择例如具有毛细管作用的多孔薄膜(menbrane)、粒子状物质、试管、树脂平板等公知的物品。另外，作为标记与被检测物质结合的第二物质的物质，能够使用酶、放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色粒子、胶体粒子等。
在夹层法中，从临床检查的简便性和快速性的观点出发，也特别优选使用膜的横流式免疫测定法即免疫层析法。
以下，对利用抗原抗体反应的普通免疫层析法进行说明。免疫层析法用检查器件示于图1。
图1的A为俯视图，B为切割截面图。检查器件在层叠于塑料板6上的硝化纤维素膜1上层叠有各种部位。在图的具体例中，塑料板6上分别层叠有由抗体等被检测物质捕捉物质等形成有两个检测部3的硝化纤维素膜1、由滤纸形成的吸收垫部5、标记体部2、以及由玻璃纤维滤片形成的样品添加部4。
并且，如图所示，吸收垫部5的一个端部区域、硝化纤维素膜1的一个端部区域、硝化纤维素膜1的另一个端部区域和标记体部2的一个端部区域、标记体部2的另一个端部区域和样品添加部4的一个端部区域分别叠合，由此形成连续的横流的流道。
标记体部2中包含有标记物质与抗体等被检测物质捕捉物质化学或物理结合而成的标记体。作为标记物质，可列举：金胶体粒子、白金胶体粒子、彩色乳胶粒子、磁性粒子、酶、量子点、荧光色素及荧光体等。标记体部由包含上述标记体的多孔基材组成，基材的材质能够使用常用的玻璃纤维(gassfiber)及无纺布等。也将含浸并干燥所述标记体后的多孔基材称为稳定化干燥标记体垫。即，标记体部是包括包含通过抗原抗体反应与被检测物质结合且经着色乳胶粒子标记的抗体的、上述稳定化干燥标记体垫的部位。
另外，检测部3是以条带状固相化有通过抗原抗体反应与被检测物质结合的抗体来作为捕捉物质的部位。
作为在被检测物质的检测反应之前的工序或与检测反应同时进行的工序中与标本接触的部件等的示例，可列举上述124等，但只要为在被检测物质的检测反应之前或与检测反应同时进行的工序中与标本接触的部件即可，并不限定于此。将标本添加于样品添加部4之后，标本从样品添加部4向吸收垫部5流动。在将从样品添加部4向吸收垫部5的流动表述为从上游向下游的流动的情况下，在被检测物质的检测反应之前或与检测反应同时进行的工序中与标本接触的部件可以称为存在于产生检测反应的部位的上游。
接着，对使用该检查器件的免疫测定法进行说明。首先，将标本浮游于标本提取液，制备提取被检测物质后的标本样品。接下来，向检查器件的样品添加部4滴加所述标本样品。包含被检测物质的标本样品一边在膜上沿水平方向移动，一边含浸于标记体部2，溶解标记体并展开。如果标本样品中存在被检测物质，则会形成被检测物质-标记体的复合物。该复合物到达检测部3后，该条带上形成捕捉抗体-被检测物质-标记体的复合物。通过利用从该复合物中的标记物质发出的信号来检测复合物的存在，能够判断标本中有无被检测物质。不参与反应的其它成分等被吸收垫部5吸收。需要说的是，虽然在图1所示的示例中，存在两个检测部3，但这是为了分别捕捉例如甲型流感病毒和乙型流感病毒之类的两种被检测物质。通过设置多个这种检测部3，可以同时免疫检测多种被检测物质。
在上述免疫层析法中，可以在用于与标本混合以提取被检测物质的标本提取液中预先包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分，也可以在免疫层析法用检查器件的硝化纤维素膜1、标记体部2和/或样品添加部4中预先包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分。
本发明包括利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的结合反应的检查试剂。该检查试剂也可以称为检查器件本身，还可以称为包含检查器件和其它试剂的检查试剂盒。本发明的检查试剂包括例如检查试剂盒，该检查试剂盒包括免疫层析法检查器件和包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液。另外，本发明的检查试剂包括免疫层析法检查器件，该免疫层析法检查器件具备包含含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液的部位。
实施例
通过以下的实施例对本发明进行具体说明，但本发明并不限定于这些实施例。
在以下的实施例中，对在使用本发明的标本提取液的情况下，在检测流感病毒、RS病毒、腺病毒、支原体的免疫层析法试剂盒中抑制了标本中的非特异反应的实施例进行说明。
通过免疫层析法检测流感病毒抗原
1.抗流感病毒单克隆抗体的制作
(1)抗甲型流感病毒NP(核蛋白)抗体
用甲型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠，从饲养一段时间后的小鼠中切取脾脏，通过凯乐等人的方法(Kohler et al.,Nature,vol,256,p495-497(1975))与小鼠骨髓瘤细胞(P3×63)融合。将得到的融合细胞(杂交瘤)保持在37℃的培养箱中，通过使用固相化有甲型流感病毒NP抗原的板的ELISA确认上清的抗体活性，同时进行细胞的纯化(单克隆化)。将所获得的2株该细胞分别腹腔给药经降植烷处理的BALB/c小鼠，约两周后，采集含抗体腹水。通过使用蛋白A柱的亲和色谱法从得到的腹水中分别纯化IgG，得到两种纯化抗甲型流感病毒NP抗体。
(2)抗乙型流感病毒NP抗体
使用乙型流感病毒抗原，通过与(1)同样的方法，得到两种纯化抗乙型流感病毒NP抗体。
2.标记体垫的制作
纯化抗甲型流感病毒NP抗体及纯化抗乙型流感病毒NP抗体中各使用一种。在红色乳胶粒子上共价结合抗甲型流感病毒抗体，悬浮于浮游液，进行超声波处理，从而制备充分分散浮游的抗A型乳胶浮游液。另外，同样地制备在蓝色乳胶粒子上共价结合有抗乙型流感病毒抗体的抗B型乳胶浮游液。将抗A型乳胶浮游液与抗B型乳胶浮游液混合，涂布于大小为20cm×1cm的玻璃纤维，在温风下充分干燥，从而制作形成有干燥混合物的标记体垫。
3.样品添加垫的制作
使用大小为2.0cm×20cm的玻璃纤维。
4.检查器件的制作
检查器件使用与图1所示的器件具有相同组成的器件。将硝化纤维素膜裁剪为2cm×20cm的大小，并用带有粘结剂的塑料板支撑，在距下端0.8cm和1.0cm的位置分别涂布约达到1mm宽度的量的抗甲型流感病毒抗体(与上述不同的抗体)液以及抗乙型流感病毒抗体(与上述不同的抗体)液20cm，在温风下充分干燥，固相化抗体(检测部)。接着，将3cm×20cm大小的滤纸在硝化纤维素膜的上端叠放5mm，以设置吸收垫部。再将标记体垫在硝化纤维素膜的下端叠放2mm，以设置标记体部，再将样品添加垫与距标记体垫的上端7mm的位置对齐叠放，以设置样品添加部。接下来，用刀具裁剪为宽5mm的长条，从而制作一体化的检查器件。
通过免疫层析法检测RS病毒、腺病毒、肺炎支原体抗原
1.抗RS病毒、抗腺病毒、抗肺炎支原体单克隆抗体的制作
将RS病毒抗原、腺病毒抗原或肺炎支原体抗原分别独立地免疫BALB/c小鼠，从饲养一段时间后的小鼠中切取脾脏，通过凯乐等人的方法(Kohler et al.,Nature,vol,256,p495-497(1975))与小鼠骨髓瘤细胞(P3×63)融合。将得到的融合细胞(杂交瘤)保持在37℃的培养箱中，一边通过使用固相化有上述各抗原的板的ELISA确认上清的抗体活性，一边进行细胞纯化(单克隆化)。将2株所获得的该细胞分别腹腔给药经降植烷处理的BALB/c小鼠，约两周后，采集含抗体腹水。通过使用蛋白A柱的亲和色谱法分别从得到的腹水中纯化IgG，每种免疫原得到两种纯化抗免疫原抗体。
2.标记体垫的制作
在红色乳胶粒子上共价结合各个纯化抗免疫原抗体，悬浮于浮游液，进行超声波处理，从而制备充分分散浮游的抗RS病毒乳胶浮游液、抗腺病毒乳胶浮游液、抗肺炎支原体乳胶浮游液。将这些乳胶浮游液分别涂布于大小20cm×1cm的玻璃纤维，在温风下充分干燥，制作形成有干燥混合物的标记体垫。
3.样品添加垫的制作
使用大小为2.0cm×20cm的玻璃纤维。
4.检查器件的制作
检查器件使用与图1所示的器件具有相同组成的器件。将硝化纤维素膜裁剪为2cm×20cm的大小，并用带有粘结剂的塑料板支撑，在距下端0.8cm和1.0cm的位置分别涂布约达到1mm宽度的量的抗RS病毒抗体(与上述不同的抗体)液或抗腺病毒抗体(与上述不同的抗体)、或抗肺炎支原体抗体20cm，在温风下充分干燥，固相化抗体(检测部)。接着，将3cm×20cm大小的滤纸在硝化纤维素膜的上端叠放5mm，以设置吸收垫部。再将标记体垫在硝化纤维素膜的下端叠放2mm，以设置标记体部，再将样品添加垫与距标记体垫的上端7mm的位置对齐叠放，以设置样品添加部。接下来，用刀具裁剪成宽5mm的长条，从而制作一体化的检查器件。
5.标本提取液的制作
记载于以下的每个试验例。
试验例1
含L-苯丙氨酸(L-Phe)标本提取液的假阴性反应抑制效果
1-1.标本提取液的制备
制作包含50mM Tris缓冲液(pH8.0)、2(w/v)％聚氧乙烯辛基苯醚、5(w/v)％L-精氨酸的混合液，将其作为对照1的标本提取液。接着，制作包含50mM Tris缓冲液(pH8.0)、1.25(w/v)％聚氧乙烯烷醚、0.75(w/v)％聚氧乙烯辛基苯醚、4(w/v)％甘氨酸乙酯、2.0(w/v)％L-Phe、400mM溴化钠的混合液，将其作为试验用1的标本提取液。
1-2.试验方法
将用棉签采集的唾液浮遊、分散于对照1的标本提取液以及试验用3的标本提取液，进行滤片过滤。另外，向其中添加并混合6.8×102PFU/mL的灭活甲型流感病毒，从而制作样本，将上述样本滴加于上述制作的检查器件，5分钟后，测定检测部的显色强度。同时还准备对照1以及试验用1的标本提取液中未添加唾液的样本和仅在其中加入并混合6.8×102PFU/mL的灭活甲型流感病毒的样本，实施试验。在显色强度测定时，使用对10级显色强度打分后的红色色样进行测定。
1-3.显色强度试验结果
将结果示于表1。需要说明的是，显色强度的数值按照0、1+、2+····10+的顺序依次增强，0表示未见显色，数值越大，表示假阴性反应越强。
在对照1的标本提取液中，无唾液与有唾液比较后，信号强度降低2个水平。另一方面，在试验用3的标本提取液中，无唾液和有唾液时，信号强度未见差异，因此可知，通过本发明能够抑制假阴性反应。
[表1]
Figure BDA0004112997130000241
试验例2
通过免疫层析法检测RS病毒时含L-Phe标本提取液的假阴性抑制效果
2-1.标本提取液的制备
制作包含50mM Tris缓冲液(pH8.0)、2(w/v)％聚氧乙烯辛基苯醚、5(w/v)％L-精氨酸的混合液，将其作为对照1的标本提取液。接着，制作包含1.5(w/v)％L-Phe、50mM Tris缓冲液(pH8.0)、1.25(w/v)％聚氧乙烯烷醚、0.75(w/v)％聚氧乙烯辛基苯醚、4(w/v)％甘氨酸乙酯、150mM溴化钠的混合液，将其作为试验用4的标本提取液。
2-2.试验方法
用棉签从口腔中采集唾液标本，将唾液标本浮遊、分散于对照以及试验用4的标本提取液。以达到3.5×104TCID50/mL的方式，向其中分别添加并混合经灭活的RS病毒，将其作为本试验的样本。另外，仅以达到3.5×104TCID50/mL的方式向对照以及试验用4的标本提取液中添加灭活RS病毒，不添加唾液，从而制作样本。接着，将这些样本滴加于上述制作的检查器件，5分钟后，测定检测部的显色强度。在显色强度测定时，红色以及蓝色分别使用对10级显色强度打分后的色样进行测定。
2-3.显色强度试验结果
将结果示于表2。需要说明的是，显色强度的数值值按照0、1+、2+····10+的顺序依次增强，0表示未见显色，数值越高，表示信号显示越强。
在对照的标本提取液中，由于未添加唾液标本，因此假阴性反应导致显色强度降低，而在试验用4的标本提取液中，即使未添加唾液，显色强度也完全没有变化，由此可知，在包含本发明的成分的标本提取液中，抑制了唾液导致的假阴性化。
[表2]
RS病毒检测时含L-Phe标本提取液的假阴性抑制效果
Figure BDA0004112997130000251
试验例3
含L-Phe标本提取液和现有标本提取液的灵敏性比较
3-1.标本提取液的制备
制备包含50mM Tris缓冲液(pH8.0)、2(w/v)％聚氧乙烯辛基苯醚、5(w/v)％L-精氨酸的混合液，将其作为对照1的标本提取液。接着，制作包含50mM Tris缓冲液(pH8.0)、1.25(w/v)％聚氧乙烯烷醚、0.75(w/v)％聚氧乙烯辛基苯醚、4(w/v)％甘氨酸乙酯、1.5(w/v)％L-Phe、150mM溴化钠的混合液，将其作为试验用1的标本提取液。
3-2.试验方法
向对照1以及试验用1的标本提取液中分别添加最终浓度为6.8×102PFU/mL、3.4×102PFU/mL、1.7×102PFU/mL的灭活甲型流感病毒，从而制作样本。另外，针对灭活乙型流感病毒，同样地制作最终浓度达到4.0×102PFU/mL、2.0×102PFU/mL、1.0×102PFU/mL的样本。接着，将50μL这些样本滴加于上述制作的检查器件，5分钟后，测定检测部的显色强度。在显色强度测定时，红色以及蓝色分别使用对10级显色强度打分后的色样进行测定。
3-3.显色强度试验结果
将结果示于表3。需要说明的是，显色强度的数值按照0、0.5+、1+、2+····10+的顺序依次增强，0表示未见显色，数值越高，表示信号显示越强。结果的表述由“A型的显色强度/B型的显色强度”表示。
在对照1的标本提取液和试验用1的标本提取液中，灵敏性相同。信号强度则试验用1更高。综上所述，如果使用本发明中使用的标本提取液，则能够提高特异性，同时不会降低灵敏性。
[表3]
含L-Phe标本提取液和现有标本提取液的灵敏性比较
Figure BDA0004112997130000261
试验例4
含L-Phe类似物质的标本提取的假阴性抑制效果
4-1.标本提取液的制备
制作包含50mM Tris缓冲液(pH8.0)、2(w/v)％聚氧乙烯辛基苯醚、2(w/v)％L-精氨酸的混合液，将其作为对照(无添加剂)的标本提取液。接着，制作包含50mM Tris缓冲液(pH8.0)、2(w/v)％聚氧乙烯辛基苯醚、2(w/v)％L-精氨酸，除这些组成之外还包含一种表4中的化合物(括号内为最终浓度)的标本提取液，将其作为试验用的标本提取液。
[表4]
标本提取液中的添加剂的一览表
添加剂名(最终浓度) 简称
L-苯丙氨酸(2.0％) L-Phe
D-苯丙氨酸(2.0％) D-Phe
阿斯巴甜(1.0％) -
马尿酸(2.0％) -
±扁桃酸(2.0％) -
L-色氨酸(1.0％) L-Trp
L-苯丙氨酸甲酯(2.0％) L-PheME
N-苯基甘氨酸(2.0％) N-PG
DL-2-苯基甘氨酸(0.1％) 2-PG
苯甲酸钠(2.0％) -
3-苯基丙酸(1.5％) 3PPA
N-(间甲苯甲酰基)甘氨酸(1.5％) NmTG
乙酰水杨酸(1.5％) AcSA
4-2.试验方法
用棉签采集在对照的标本浮遊液中观察到假阴性反应的、流感病毒以及RS病毒陰性的唾液。使这些标本浮遊、分散于对照以及各试验用的标本提取液，将其作为本试验的样本。再添加并混合最终浓度为6.8×102PFU/mL的流感A型病毒或最终浓度为4.0×10PFU/mL的流感B型病毒、或最终浓度为3.5×104TCID50/mL的RS病毒抗原。接着，将这些滴加于上述制作的每个检查器件，5分钟后，测定检测部的显色强度。在显色强度测定时，使用对10级显色强度打分后的色样进行测定，从而确定抑制假阴性化的程度。
4-3.显色强度试验结果
将结果示于表5及表6。结果的表述中，“×”表示无效果，“△”表示可见少许改善效果，“〇”表示可见显著改善效果，“◎”表示可见强效改善效果。需要说明的是，在流感病毒检测试剂中，用“甲型流感/乙型流感”进行表述。
在RS病毒检测试剂中，几乎所有试验的化合物均确认到假阴性抑制效果，即使在流感病毒检测试剂中，多种化合物也确认到假阴性抑制效果。
[表5]
RS病毒检测试剂中含L-Phe类似物质的标本提取液对唾液导致的假阴性的抑制效果
条件 假阴性抑制效果
对照(无添加) -(产生假阴性化)
L-苯丙氨酸(2.0％) △
D-苯丙氨酸(2.0％) △
阿斯巴甜(1.0％) △
马尿酸(2.0％) 〇
±扁桃酸(2.0％) 〇
L-色氨酸(1.0％) △
L-PheME(2.0％) △
N-苯基甘氨酸(2.0％) ◎
DL-2-苯基甘氨酸(0.1％) 〇
苯甲酸钠(2.0％) 〇
3-PPA(1.5％) ◎
NmTG(1.5％) ◎
乙酰水杨酸(1.5％) △
“×”表示无效果，“△”表示可见少许改善效果，
“〇”表示可见显著改善效果，“◎”表示可见强效改善效果。
[表6]
流感病毒检测试剂中含L-Phe类似物质的标本提取液对唾液导致的假阴性的抑制效果
条件 假阴性抑制效果
对照(无添加) 产生假阴性化
L-苯丙氨酸(2.0％) 〇/〇
D-苯丙氨酸(2.0％) △/△
阿斯巴甜(1.0％) ×/×
马尿酸(2.0％) 〇/〇
±扁桃酸(2.0％) ◎/◎
L-色氨酸(1.0％) △/△
L-PheME(2.0％) ×/×
N-苯基甘氨酸(2.0％) ◎/◎
DL-2-苯基甘氨酸(0.1％) ×/×
苯甲酸钠(2.0％) ×/×
3-PPA(1.5％) 〇/◎
NmTG(1.5％) 〇/〇
乙酰水杨酸(1.5％) ×/×
表述用“甲型流感/乙型流感”表示，
“×”表示无效果，“△”表示可见少许改善效果，
“〇”表示可见显著改善效果，“◎”表示可见强效改善效果。
工业适用性
本发明的方法能够用于准确检测各种物质。
附图标记说明
1：硝化纤维素膜；2：标记体部；3：检测部；4：样品添加部；5：吸收垫部；6：塑料板。
本说明书中引用的全部刊物、专利及专利申请直接通过引用并入本说明书。

Claims (16)

1.一种检查试剂，是利用抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的结合反应来检测标本中的被检测物质的检查试剂盒，
所述检查试剂包含标本提取液，所述标本提取液含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分，所述抑制假阴性的非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
2.根据权利要求1所述的检查试剂，其中，
所述检查试剂是免疫层析用检查试剂或免疫层析用检查器件，包含标本提取液，所述标本提取液含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分，所述抑制假阴性的非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
3.根据权利要求1或2所述的检查试剂，其中，
所述检查试剂是免疫层析用检查器件，所述免疫层析用检查器件包括含浸有标本提取液的部位，所述标本提取液含有抑制假阴性的非特异反应抑制成分，所述抑制假阴性的非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的检查试剂，其中，
标本提取液包含0.1～10(w/v)％的抑制假阴性的非特异反应抑制成分。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的检查试剂，其中，
具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物是由以下的通式(I)～(V)中的任一者表示的化合物或者色氨酸：
Figure FDA0004112997120000021
通式(I)中，R1为H、OH、＝O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOH或CH3，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n为0或1，m为0、1、2、3或4；
Figure FDA0004112997120000022
通式(II)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3为COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOH或CH3，R3和COOR2位于苯环的邻位、间位或对位；
Figure FDA0004112997120000023
通式(III)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4为H或CH3，n为0或1；
Figure FDA0004112997120000031
通式(IV)中，R5为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸或组氨酸的侧链；
Figure FDA0004112997120000032
通式(V)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6为NH或O，n为0、1、2、3或4。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的检查试剂，其特征在于，
具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物是选自由阿斯巴甜、苯丙氨酸、苯丙氨酸甲酯、扁桃酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘氨酸、苯基甘氨酸甲酯、苯基甘氨酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、邻苯二甲酸、乙酰水杨酸、马尿酸、N-甲苯酰甘氨酸、N-苄氧羰基氨基酸、N-苯基甘氨酸、苯氧乙酸、色氨酸及这些化合物的金属盐、以及这些化合物的光学异构体、几何异构体、结构异构体、立体异构体及位置异构体组成的组的化合物。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的检查试剂，其中，
标本提取液中进一步包含选自由精氨酸、赖氨酸、精氨酸乙酯、精氨酸甲酯、甘氨酸乙酯及甘氨酸甲酯、以及这些化合物的光学异构体、几何异构体、结构异构体及立体异构体组成的组的氨基酸或氨基酸衍生物。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的检查试剂，其中，
标本提取液中进一步包含选自由氯化锂、氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾、碘化钠以及碘化钾组成的组的卤化物。
9.一种利用标本提取液中所含的抗原抗体反应或具有相互作用的物质彼此的反应来检测标本中的被检测物质的方法，所述被检测物质选自由病毒抗原、细菌抗原、以及蛋白质抗原组成的组，所述标本选自由咽拭子标本、鼻拭子标本、鼻吸出物标本、咽冲洗标本、鼻腔冲洗标本、擤出的鼻涕标本、唾液标本、血清标本、血浆标本、全血标本、粪便标本、粪便悬浮液标本以及尿液标本组成的组，
所述方法通过使标本预先与抑制假阴性的非特异反应抑制成分接触来抑制假阴性反应以进行检测，所述抑制假阴性的非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，
检测被检测物质的方法是免疫层析法，将标本放入包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分的标本提取液，并将该标本提取液添加于免疫层析用检查器件，所述抑制假阴性的非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
11.根据权利要求9所述的方法，其中，
检测被检测物质的方法是免疫层析法，将标本添加于包括含浸有标本提取液的部位的免疫层析用检查器件，所述标本提取液包含抑制假阴性的非特异反应抑制成分，所述抑制假阴性的非特异反应抑制成分是具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中，
标本提取液包含0.1～10(w/v)％的抑制假阴性的非特异反应抑制成分。
13.根据权利要求9至12中任一项所述的方法，其中，
具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物是由以下的通式(I)～(V)中的任一者表示的化合物或者色氨酸：
Figure FDA0004112997120000061
通式(I)中，R1为H、OH、＝O、NH2、COOH、NH-CO-CNH2-C-COOH或CH3，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n为0或1，m为0、1、2、3或4；
Figure FDA0004112997120000062
通式(II)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3为COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH3、COOC2H5、OCOH或CH3，R3和COOR2位于苯环的邻位、间位或对位；
Figure FDA0004112997120000063
通式(III)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4为H或CH3，n为0或1；
Figure FDA0004112997120000071
通式(IV)中，R5为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸或组氨酸的侧链；
Figure FDA0004112997120000072
通式(V)中，R2为H、CH3、C2H5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6为NH或O，n为0、1、2、3或4。
14.根据权利要求9至13中任一项所述的方法，其中，
具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、还具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、还任选地具有羟基、并具有水溶性的分子量为6000Da以下的化合物是选自由阿斯巴甜、苯丙氨酸、苯丙氨酸甲酯、扁桃酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘氨酸、苯基甘氨酸甲酯、苯基甘氨酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、邻苯二甲酸、乙酰水杨酸、马尿酸、N-甲苯酰甘氨酸、N-苄氧羰基氨基酸、N-苯基甘氨酸、苯氧乙酸、色氨酸及这些化合物的金属盐、以及这些化合物的光学异构体、几何异构体、结构异构体、立体异构体及位置异构体组成的组的化合物。
15.根据权利要求9至14中任一项所述的方法，其中，
标本提取液中进一步包含选自精氨酸、赖氨酸、精氨酸乙酯、精氨酸甲酯、甘氨酸乙酯以甘氨酸甲酯、以及这些化合物的光学异构体、几何异构体、结构异构体及立体异构体组成的组的氨基酸或氨基酸衍生物。
16.根据权利要求9至15中任一项所述的方法，其中，标本提取液中进一步包含选自由氯化锂、氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾、碘化钠以及碘化钾组成的组的卤化物。
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