TW202219510A - 藉由抑制偽陰性而改善特異性之檢查試劑 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種檢體提取液及檢體提取方法、以及使用該等之檢查試劑，該檢體提取液含有如下成分，該成分在藉由利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之反應之檢測試劑，自鼻腔拭子檢體、鼻腔抽吸檢體、鼻腔沖洗檢體、鼻溢液檢體、咽拭子檢體、唾液檢體、糞便檢體、血清檢體、血漿檢體、尿液檢體等來自體液之檢體中，檢測病毒、細菌、成為檢測對象之蛋白質等抗原時，能夠抑制憑藉先前方法未能完全抑制之偽陰性反應。 本發明係藉由使構成中具有檢體提取液之檢查試劑之檢體提取液、或在檢測對象之檢測反應之前之步驟或與檢測反應同時進行之步驟中與檢體接觸之構件等中含有具有水溶性之化合物而達成，該具有水溶性之化合物於結構中具有苯基或苄基或甲苯基或二甲苯基，且於該等基上至少鍵結有包含羧基或其經甲基化、乙基化之原子團之官能基或羥基。

Description

藉由抑制偽陰性而改善特異性之檢查試劑
本發明係關於一種技術，其在藉由利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之結合反應之檢測試劑，自鼻腔拭子檢體、鼻腔抽吸檢體、鼻腔沖洗檢體、鼻溢液檢體、咽拭子檢體、唾液檢體、糞便檢體、血清檢體、血漿檢體、尿液檢體等來自體液之檢體中，檢測病毒、細菌、成為檢測對象之蛋白質等被檢測物質時，將具有特定之化學結構之化合物用於檢體提取液及在檢測反應之前之步驟或與檢測反應同時進行之步驟中與檢體接觸之構件等，藉此能夠較強地抑制憑藉先前方法未能完全抑制之偽陰性反應。
近年來，業界接連開發出利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之結合反應，來檢測有無病毒或細菌等病原體感染、有無妊娠等之各種檢查試劑或套組。該等檢查試劑均要在從患者採集檢體後，包括用以創造出適於檢測反應之條件之預處理步驟，該步驟對於獲得準確結果而言至關重要。尤其是大多數簡易檢查試劑具有無需特殊設備而操作亦簡單且廉價之特徵，除用於大醫院或醫療檢查中心以外，於普通之醫院或診所中亦被廣泛使用，亦常被檢查專家以外之使用者使用。因此，試劑之高檢查精度變得非常重要。作為目前市場上之簡易檢查試劑之例，可例舉檢查病原體感染之簡易檢查試劑或用於妊娠診斷之簡易檢查試劑。該等檢查試劑多數情況下係於患者初訪之醫療機構實施，當場便可從患者採集之檢體辨別有無感染或有無妊娠，從而可於早期階段實施治療處理等，因此簡易檢查試劑於醫療中之重要性日益增高。並且，隨著簡易檢查試劑之利用不斷增加，就使用者而言，要求再現性更高之檢查結果或檢查精度作為試劑之性能。
目前，作為簡易檢查方法之代表試劑，通常已知有利用抗原抗體反應之免疫測定法、尤其是免疫層析法。免疫層析法係使與被檢測物質特異性地結合之捕捉體(捕捉物質)、及與被檢測物質特異性地結合之標記物之複合體形成於膜上，對標記進行檢測/定量，藉此進行被檢測物質之檢測(測定或定量)。免疫層析法因測定裝置簡單且成本方面亦優異而被廣泛地用於多種多樣之被檢測物質之檢測。
於免疫層析法之一形態中，向檢查器件滴加包含被檢測物質之檢體試樣，一面形成被檢測物質-標記物之複合體一面展開而於檢測部捕捉該複合體，藉此檢測或定量標記；上述檢查器件具備：檢測部，其使與被檢測物質特異性地結合之抗體作為捕捉物質於硝化纖維素等膜條上形成固相；及標記物部，其包含與被檢測物質特異性地結合之標記物。
近年來，關於包含免疫層析法之臨床診斷試劑，臨床上期望診斷結果之可靠性更高者，試劑可靠性之進一步提昇成為課題。所謂可靠性較高之檢查試劑，係指感度及特異性較高而不易引起誤診之檢查試劑。尤其是關於特異性，一直存在如何能夠藉由試劑設計來應對因患者各自背景之不同所致之檢體成分之多樣性這一技術課題，從而更有效地消除非特異反應於簡易檢查法中為極其重要之課題。據報告，為了解決該等課題，使精胺酸或離胺酸等鹼性胺基酸、或無機鹽類、甘胺酸乙酯、界面活性劑、來自動物之免疫球蛋白、具有硫酸基之界面活性劑或高分子、具有四級銨離子之界面活性劑等和檢體接觸，藉此在改善特異性方面可見一定效果(參照專利文獻1、2、3、4、及5)，但效果均有限，仍然存在無法抑制之非特異反應。因此，期望更強地改善特異性，且不會使感度降低之技術。 [先前技術文獻] [專利文獻]
專利文獻1：日本專利特開2003-279577號公報 專利文獻2：日本專利特開2005-24323號公報 專利文獻3：日本專利特開2004-301684號公報 專利文獻4：日本專利第6116268號公報 專利文獻5：日本專利第6601932號公報
[發明所欲解決之問題]
在藉由利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之結合反應之檢測試劑，自鼻腔拭子檢體、鼻腔抽吸檢體、鼻腔沖洗檢體、鼻溢液檢體、咽拭子檢體、唾液檢體、糞便檢體、血清檢體、血漿檢體、尿液檢體等來自體液之檢體中，檢測病毒、細菌、成為檢測對象之蛋白質等被檢測物質時，仍然存在憑藉先前方法未能完全抑制之偽陽性反應或偽陰性反應，成為妨礙準確診斷之一個原因。本發明提供一種檢查試劑，其使用含有能夠不使感度降低而抑制偽陰性反應之成分之檢體提取液或檢體提取方法。 [解決問題之技術手段]
本發明者等人努力探索更強地抑制將鼻腔拭子檢體、鼻腔抽吸檢體、鼻腔沖洗檢體、鼻溢液檢體、咽拭子檢體、唾液檢體、糞便檢體、血清檢體、血漿檢體、尿液檢體等來自體液之檢體作為試驗試樣時所產生之非特異反應之方法，結果發現能夠較先前方法更顯著地抑制非特異反應之成分，進而發現藉由將該成分添加至檢體提取液、或在檢測反應之前之步驟或與檢測反應同時進行之步驟中與檢體接觸之構件等中，能夠抑制先前方法中所檢測出之偽陰性反應，從而完成了本發明。
即，本發明具有以下之構成。 [1]一種檢查試劑，其係利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之結合反應而檢測檢體中之被檢測物質之檢查套組，且包含檢體提取液，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。 [2]如[1]之檢查試劑，其係免疫層析用檢查試劑，且免疫層析用檢查器件包含檢體提取液，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。 [3]如[1]或[2]之檢查試劑，其係包含含浸有檢體提取液之部位之免疫層析用檢查器件，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。 [4]如[1]至[3]中任一項之檢查試劑，其中檢體提取液含有0.1～10(w/v)%之抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
[5]如[1]至[4]中任一項之檢查試劑，其中具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物係以下之通式(I)～(V)中任一者所表示之化合物或色胺酸： [化1]
Figure 02_image001
[通式(I)中，R1為H、OH、=O、NH 2、COOH、NH-CO-CNH 2-C-COOH或CH 3，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n為0或1，m為0、1、2、3或4] [化2]
Figure 02_image003
[通式(II)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3為COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH 3、COOC 2H 5、OCOH或CH 3，R3與COOR2位於苯環之鄰位、間位或對位] [化3]
Figure 02_image005
[通式(III)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4為H或CH 3，n為0或1] [化4]
Figure 02_image007
[通式(IV)中，R5為甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺、麩醯胺、苯基丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、精胺酸、離胺酸或組胺酸之側鏈] [化5]
Figure 02_image009
[通式(V)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6為NH或O，n為0、1、2、3或4]。
[6]如[1]至[5]中任一項之檢查試劑，其中具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物係選自由阿斯巴甜、苯基丙胺酸、苯基丙胺酸甲酯、苦杏仁酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘胺酸、苯基甘胺酸甲酯、苯基甘胺酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、鄰苯二甲酸、乙醯水楊酸、馬尿酸、N-甲苯醯甘胺酸、N-苄氧羰基胺基酸、N-苯基甘胺酸、苯氧基乙酸、色胺酸、及該等化合物之金屬鹽、以及該等化合物之光學異構物、幾何異構物、結構異構物、立體異構物及位置異構物所組成之群中之化合物。 [7]如[1]至[6]中任一項之檢查試劑，其中檢體提取液中進而含有選自由精胺酸、離胺酸、精胺酸乙酯、精胺酸甲酯、甘胺酸乙酯及甘胺酸甲酯、以及該等化合物之光學異構物、幾何異構物、結構異構物及立體異構物所組成之群中之胺基酸或胺基酸衍生物。 [8]如[1]至[7]中任一項之檢查試劑，其中檢體提取液中進而含有選自由氯化鋰、氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉、溴化鉀、碘化鈉及碘化鉀所組成之群中之鹵化物。
[9]一種抑制偽陰性反應而進行檢測之方法，其係利用檢體提取液中所含之抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之反應而檢測選自由咽拭子檢體、鼻腔拭子檢體、鼻腔抽吸檢體、咽沖洗檢體、鼻腔沖洗檢體、鼻溢液檢體、唾液檢體、血清檢體、血漿檢體、全血檢體、糞便檢體、便懸浮液檢體及尿液檢體所組成之群中之檢體中的選自由病毒抗原、細菌抗原、及蛋白質抗原所組成之群中之被檢測物質，且藉由使檢體預先與具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸，來抑制偽陰性反應而進行檢測。 [10]如[9]之方法，其中檢測被檢測物質之方法係免疫層析法，且於檢體提取液中置入檢體，並將該檢體提取液添加至免疫層析用檢查器件，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。 [11]如[9]之方法，其中檢測被檢測物質之方法係免疫層析法，且將檢體添加至包含含浸有檢體提取液之部位之免疫層析用檢查器件，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。 [12]如[9]至[11]中任一項之方法，其中檢體提取液含有0.1～10(w/v)%之抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
[13]如[9]至[12]中任一項之方法，其中具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物係以下之通式(I)～(V)中任一者所表示之化合物或色胺酸： [化6]
Figure 02_image011
[通式(I)中，R1為H、OH、=O、NH 2、COOH、NH-CO-CNH 2-C-COOH或CH 3，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n為0或1，m為0、1、2、3或4] [化7]
Figure 02_image013
[通式(II)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3為COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH 3、COOC 2H 5、OCOH或CH 3，R3與COOR2位於苯環之鄰位、間位或對位] [化8]
Figure 02_image015
[通式(III)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4為H或CH 3，n為0或1] [化9]
Figure 02_image017
[通式(IV)中，R5為甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺、麩醯胺、苯基丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、精胺酸、離胺酸或組胺酸之側鏈] [化10]
Figure 02_image019
[通式(V)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6為NH或O，n為0、1、2、3或4]。
[14]如[9]至[13]中任一項之方法，其中具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物係選自由阿斯巴甜、苯基丙胺酸、苯基丙胺酸甲酯、苦杏仁酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘胺酸、苯基甘胺酸甲酯、苯基甘胺酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、鄰苯二甲酸、乙醯水楊酸、馬尿酸、N-甲苯醯甘胺酸、N-苄氧羰基胺基酸、N-苯基甘胺酸、苯氧基乙酸、色胺酸、及該等化合物之金屬鹽、以及該等化合物之光學異構物、幾何異構物、結構異構物、立體異構物及位置異構物所組成之群中之化合物。 [15]如[9]至[14]中任一項之方法，其中檢體提取液中進而含有選自由精胺酸、離胺酸、精胺酸乙酯、精胺酸甲酯、甘胺酸乙酯及甘胺酸甲酯、以及該等化合物之光學異構物、幾何異構物、結構異構物及立體異構物所組成之群中之胺基酸或胺基酸衍生物。 [16]如[9]至[15]中任一項之方法，其中檢體提取液中進而含有選自由氯化鋰、氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉、溴化鉀、碘化鈉及碘化鉀所組成之群中之鹵化物。 本說明書包含成為本申請案之優先權基礎之日本專利申請號2020-150525號之揭示內容。 [發明之效果]
根據本發明，可提供一種檢查試劑，其係利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之結合反應，自鼻腔拭子檢體、鼻腔抽吸檢體、鼻腔沖洗檢體、鼻溢液檢體、咽拭子檢體、唾液檢體、糞便檢體、血清檢體、血漿檢體、尿液檢體等來自體液之檢體等中，檢測特定之病毒、細菌、蛋白質、低分子化合物等，且更強地抑制因混入檢體所產生之偽陰性反應，再現性較高且檢查精度較高。又，能夠進一步防止因非特異反應所致之錯誤臨床診斷，對於患者及作為使用者之醫師、檢查技師、護師之雙方而言均有益。
以下，詳細地說明本發明。 本發明係一種方法，其在藉由利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之結合反應之檢測試劑而檢測檢體中之被檢測物質時，使化合物與檢體接觸，藉此抑制偽陰性反應，防止訊號之降低、即感度之降低。 於本發明中，抗體亦包括抗體之抗原結合性片段。
(檢體) 所使用之檢體並無限定。例如，作為檢體，可例舉：咽拭子液、鼻腔拭子液、鼻腔抽吸液、咽沖洗液、鼻腔沖洗液、鼻溢液、唾液、血清、血漿、全血、便懸浮液、尿液、培養液等。將該等稱為咽拭子檢體、鼻腔拭子檢體、鼻腔抽吸檢體、咽沖洗檢體、鼻腔沖洗檢體、鼻溢液檢體、唾液檢體、血清檢體、血漿檢體、全血檢體、糞便檢體、便懸浮液檢體、尿液檢體、培養液檢體等。可利用緩衝液進行稀釋而使用，亦可不稀釋而直接使用。
(檢測對象物質) 被檢測物質亦無任何限定，可為所欲檢測之任何物質。作為具體例，可例舉：流行性感冒病毒、腺病毒、RS(respiratory syncytial，呼吸道融合性)病毒、人類間質肺炎病毒(hMPV)、A型肝炎病毒(HAV)、B型肝炎病毒(HBV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、諾羅病毒、SARS-CoV或MERS-CoV或SARS-CoV2等冠狀病毒等病毒抗原；耐二甲氧苯青黴素性金黃色葡萄球菌(MRSA)、A群鏈球菌、B群鏈球菌、退伍軍人症嗜肺桿菌等細菌抗原；細菌等所產生之毒素；黴漿菌抗原；沙眼衣原體等披衣菌抗原；原生動物之抗原；真菌抗原；人絨毛膜促性腺激素等激素；C反應蛋白、肌血球素、心肌肌鈣蛋白、前降鈣素等蛋白質；各種腫瘤標記物；農藥、環境激素等抗原，進而可例舉：針對上述細菌、病毒等之抗體。
(檢體之採集) 檢體之採集方法亦無任何限定，可例舉：使用棉棒等檢體採集器具採集咽拭子檢體、鼻腔拭子檢體、鼻腔抽吸檢體、咽沖洗檢體、鼻溢液檢體、唾液檢體、血清檢體、血漿檢體、全血檢體、糞便檢體、便懸浮液檢體、尿液檢體、培養液檢體等來自體液、排泄物之檢體之方法；利用抽吸器之抽吸等進行採集之方法；利用採血管等進行採集之方法等。
(抑制偽陰性之非特異反應抑制成分與所採集之檢體之接觸) 於本發明之方法中，使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸。此處，於藉由使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸而測定檢體之情形時，能夠抑制偽陰性。再者，於使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸時，被檢測物質與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸，因此於本發明之方法中，亦稱為使被檢測物質與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸。又，有時亦將使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸稱為將檢體利用抑制偽陰性之非特異反應抑制成分進行處理。
又，檢體提取液係指使檢體中之被檢測物質浮游而容易測定之液體，例如無需藉由溶解等自細胞等提取特定之被檢測物質，亦可簡稱為檢體處理液、檢體稀釋液、檢體浮游液等。
於本發明中，必須使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分在供於試驗之前預先接觸。此處，所謂供於試驗之前，係指檢體中之被檢測物質與和其對應之抗體或抗原反應之前、或者檢體中之被檢測物質與具有相互作用之物質反應之前。與抗體或抗原之反應係指與抗體或抗原之結合，與和檢體中之被檢測物質具有相互作用之物質之反應係指與具有相互作用之物質之結合。
作為本發明之抑制偽陰性之非特異反應抑制成分與檢體之接觸方法，可例舉：將檢體加入至含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之溶液進行混合而使之接觸之方法；及使用於測定之檢查器件中預先包含含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液，並將檢體添加至用於檢查之檢查器件，藉此使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸之方法。
作為將檢體與含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之溶液混合而使之接觸之方法之具體例，可例舉：使浮游、分散有所採集之檢體之檢體提取液中預先含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分，將檢體添加至檢體提取液中進行混合，此時使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸之方法。例如於使用含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液之情形時，當檢體為鼻腔拭子液時，使用棉棒採集鼻腔拭子液，將浸入有所採集之檢體之棉棒放入至上述檢體提取液中使檢體浮游、分散而進行提取，藉此可使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸。
作為使用於測定之檢查器件中預先包含含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液，並將檢體添加至檢查器件，藉此使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸之方法之具體例，可例舉：藉由含浸、塗佈等，使檢查器件所具有之包含不織布、織物、海綿等之墊或過濾濾片等纖維狀或多孔性基材中預先包含含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液，將所採集之檢體添加至檢查器件時，使檢體與纖維狀或多孔性基材中所含之抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸之方法。如此，作為檢查器件，可例舉後述之免疫層析法用器件。
檢查器件之多孔性基材之材質並無任何限定，可例舉：紙漿、棉、羊毛、聚酯、聚丙烯、尼龍、丙烯酸樹脂玻璃纖維、硝化纖維素等。於使用於測定之檢查器件中預先包含含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液，並將檢體添加至檢查器件，藉此使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸之情形時，例如預先使含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液含浸於多孔性基材並乾燥，於在檢查器件上產生用以檢測被檢測物質之反應之前之步驟或與反應同時進行之步驟中，使檢體與該多孔性基材接觸即可。例如，於將檢體添加至檢查器件之情形時，檢體於檢查器件上展開，到達器件上之產生反應之部位而產生抗體抗原反應等反應。藉由於檢查器件上之較產生反應之部位之前之部位設置包含含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液之多孔性基材，使得檢體於反應前與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸。例如，使用過濾濾片作為多孔性基材，於添加檢體之部位設置包含含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液之過濾濾片即可。於該情形時，當使用鼻腔拭子液作為檢體時，使用棉棒採集鼻腔拭子液，將浸入有所採集之檢體之棉棒放入至不含抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之任意組成之檢體提取液而使檢體分散、溶解後，使檢查器件之構成構件即含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之過濾濾片中預先含浸上述檢體提取液，藉此可使檢體與抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸。
(抑制偽陰性之非特異反應抑制成分及濃度) 本發明之抑制偽陰性之非特異反應抑制成分係指具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物。又，包含該等化合物之金屬鹽，亦包含光學異構物、幾何異構物、結構異構物、立體異構物及位置異構物。
該等化合物係以下之通式(I)～(V)中任一者所表示之化合物或色胺酸。
[化11]
Figure 02_image021
[通式(I)中，R1為H、OH、=O、NH 2、COOH、NH-CO-CNH 2-C-COOH或CH 3，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n為0或1，m為0、1、2、3或4]
[化12]
Figure 02_image023
[通式(II)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3為COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH 3、COOC 2H 5、OCOH或CH 3，R3與COOR2位於苯環之鄰位、間位或對位] [化13]
Figure 02_image025
[通式(III)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4為H或CH 3，n為0或1]
[化14]
Figure 02_image027
[通式(IV)中，R5為甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺、麩醯胺、苯基丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、精胺酸、離胺酸或組胺酸之側鏈]
[化15]
Figure 02_image029
[通式(V)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6為NH或O，n為0、1、2、3或4]
例如可例舉：選自由阿斯巴甜、苯基丙胺酸、苯基丙胺酸甲酯(包含鹽酸鹽)、苦杏仁酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘胺酸、苯基甘胺酸甲酯、苯基甘胺酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、鄰苯二甲酸、乙醯水楊酸、馬尿酸、N-甲苯醯甘胺酸、N-苄氧羰基胺基酸、N-苯基甘胺酸、苯氧基乙酸、色胺酸、以及包含該等之金屬鹽在內之光學異構物、幾何異構物、結構異構物、立體異構物及位置異構物所組成之群中之化合物，但並無限定。於本發明中，於記載為阿斯巴甜、苯基丙胺酸、苯基丙胺酸甲酯(包含鹽酸鹽)、苦杏仁酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘胺酸、苯基甘胺酸甲酯、苯基甘胺酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、鄰苯二甲酸、乙醯水楊酸、馬尿酸、N-甲苯醯甘胺酸、N-苄氧羰基胺基酸、N-苯基甘胺酸、苯氧基乙酸、色胺酸之情形時，包含該等之金屬鹽，進而亦包含光學異構物、幾何異構物、結構異構物、立體異構物及位置異構物。作為金屬鹽，例如可例舉：Li鹽、Na鹽、K鹽、Rb鹽、Cs鹽、Fr鹽等。
作為上述通式(I)所表示之化合物，可例舉：阿斯巴甜、苯基丙胺酸、苯基丙胺酸甲酯、苦杏仁酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘胺酸、苯基甘胺酸甲酯、苯基甘胺酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸及苯甲酸。 作為通式(II)所表示之化合物，可例舉：鄰苯二甲酸及乙醯水楊酸。 作為通式(III)所表示之化合物，可例舉：馬尿酸、N-甲苯醯甘胺酸。作為通式(IV)所表示之化合物，可例舉：N-苄氧羰基胺基酸。作為通式(V)所表示之化合物，可例舉：N-苯基甘胺酸、苯氧基乙酸。
該等抑制偽陰性之非特異反應抑制成分含有於檢體提取液或在檢測反應之前之步驟中與檢體接觸之過濾濾片等構件等。濃度較佳為0.001(w/v)%以上，進而較佳為0.1(w/v)%以上，最佳為1(w/v)%以上。又，亦可同時使用複數種該等非特異反應抑制成分，此時之濃度亦較佳為0.001(w/v)%以上，進而較佳為0.1(w/v)%以上，最佳為1(w/v)%以上。濃度之上限無需限定，例如為10(w/v)%以下、或5(w/v)%以下。再者，於使過濾濾片等多孔性基材中包含含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液之情形時，使多孔性基材中包含上述濃度之抑制偽陰性之非特異反應抑制成分即可。
(抑制偽陰性之非特異反應抑制成分以外之其他成分) 於本發明中之檢體提取液或在檢測反應之前之步驟中與檢體接觸之多孔性基材等構件等中所含浸之溶液中，除抑制偽陰性之非特異反應抑制成分以外，亦可含有能夠減輕非特異反應之已知之物質、或界面活性劑、pH值緩衝性成分、各種蛋白質、鹽類、糖類。例如，作為能夠減輕非特異反應之成分，可例舉：精胺酸、精胺酸乙酯、精胺酸甲酯、甘胺酸乙酯、甘胺酸甲酯、離胺酸及上述化合物之各種異構物等。又，作為界面活性劑，例如可例舉：聚乙二醇單對異辛基苯基醚或聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯等非離子性界面活性劑、CHAPS(3- [3- (cholamidopropyl) dimethylammonio]propanesulfonate，3-[3- (膽醯胺丙基)二甲銨基]丙磺酸內鹽)或月桂醯胺磺基甜菜鹼等兩性界面活性劑、十二烷基硫酸鈉等陰離子性界面活性劑、氯化十二烷基三甲基銨等陽離子性界面活性劑。檢體提取液中之界面活性劑之濃度較佳為0.5～5(w/v)%，進而較佳為1～3(w/v)%，進而更佳為1.5～2.5(w/v)%。
作為緩衝性成分，可例舉：磷酸緩衝液、三羥甲基胺基甲烷緩衝液、古德緩衝液等。作為蛋白質成分，可例舉：BSA(牛血清白蛋白)、酪蛋白、明膠、IgG(Immunoglobulin G，免疫球蛋白G)等。作為鹽類，可例舉：氯化鋰、氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉、溴化鉀、碘化鈉、碘化鉀等鹵化物。
(檢測方法) 於本發明之方法中，藉由利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之結合反應之方法進行檢測。作為具有相互作用之物質彼此之組合，可例舉：配體與受體之組合、受體與受體之組合、生物素與抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白之組合等。
只要為利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之檢測方法，則無特別限定，可例舉：免疫層析法、乳膠凝集法、免疫比濁法、免疫比色法、化學發光酵素免疫測定法(CLEIA)、酵素免疫測定法(EIA)、酵素免疫測定吸附法(ELISA)等。尤佳為免疫層析法。該等中大多數為免疫學方法，利用抗原抗體反應，但亦可利用具有相互作用之物質彼此之反應代替抗原抗體反應。該等方法中，較佳為三明治法。於典型之三明治法中，使與被檢測物質結合之第1物質作為被檢測物質捕捉物質於特定載體預先形成固相而使該物質與被檢測物質結合，進而使與被檢測物質結合之第2物質中經標記之物質與被檢測物質結合，形成「與被檢測物質結合之第1物質-被檢測物質-與被檢測物質結合之第2物質中經標記之物質」(「-」表示結合)之複合體，測定自標記物質發出之訊號，藉此測定被檢測物質。與被檢測物質結合之第1物質及與被檢測物質結合之第2物質亦可為相同物質。被檢測物質及與被檢測物質結合之物質可為抗原與抗體或抗體與抗原，亦可為彼此具有相互作用之物質。作為與被檢測物質結合之第1物質經固定化之固相，可藉由公知技術將蛋白質等物質固定者均可使用，例如可任意地選擇具有毛細管作用之多孔性薄膜(膜)、粒子狀物質、試驗管、樹脂平板等公知者。又，作為標記與被檢測物質結合之第2物質之物質，可使用酵素、放射性同位素、螢光物質、發光物質、有色粒子、膠體粒子等。
於三明治法中，就臨床檢查之簡便性及迅速性之觀點而言，尤佳為作為使用膜之側流式免疫測定法之免疫層析法。
以下，對利用抗原抗體反應之通常之免疫層析法進行說明。將免疫層析法用檢查器件示於圖1。
圖1A為俯視圖，B為切斷剖視圖。檢查器件係於積層於塑膠板6上之硝化纖維素膜1上積層有各種部位。於圖之具體例中，於塑膠板6上分別積層有：硝化纖維素膜1，其由抗體等被檢測物質捕捉物質等形成有2個檢測部3；吸收墊部5，其由濾紙所形成；標記物部2；及試樣添加部4，其由玻璃纖維濾片所形成。
並且，如圖所示，吸收墊部5之一端部區域與硝化纖維素膜1之一端部區域重疊，硝化纖維素膜1之另一端部區域與標記物部2之一端部區域重疊，標記物部2之另一端部區域與試樣添加部4之一端部區域重疊，藉此形成有連續之側流之流路。
標記物部2中包含標記物，該標記物係標記物質以化學方式或物理方式與抗體等被檢測物質捕捉物質結合而成。作為標記物質，可例舉：金膠體粒子、鉑膠體粒子、彩色乳膠粒子、磁性粒子、酵素、量子點、螢光色素或螢光體等。標記物部包含含有上述標記物之多孔性基材，基材之材質可使用通常所使用之玻璃纖維(glass fiber)或不織布等。亦將含浸有上述標記物且經乾燥後之多孔性基材稱為穩定化乾燥標記物墊。即，標記物部係包含上述穩定化乾燥標記物墊之部位，上述穩定化乾燥標記物墊包含藉由抗原抗體反應與被檢測物質結合且經著色乳膠粒子標記之抗體。
又，檢測部3係使藉由抗原抗體反應與被檢測物質結合之抗體作為捕捉物質以線狀形成固相之部位。
作為於被檢測物質之檢測反應之前之步驟或與檢測反應同時進行之步驟中與檢體接觸之構件等之例，可例舉上述之124等，只要為於被檢測物質之檢測反應之前之步驟或與檢測反應同時進行之步驟中與檢體接觸之構件，則並不限定於此。若將檢體添加至試樣添加部4，則檢體自試樣添加部4流向吸收墊部5。於將自試樣添加部4向吸收墊部5之流動表述為自上游向下游之流動之情形時，可謂於被檢測物質之檢測反應之前之步驟或與檢測反應同時進行之步驟中與檢體接觸之構件存在於較產生檢測反應之部位更靠上游。
其次，對使用該檢查器件之免疫測定法進行說明。首先，使檢體浮游於檢體提取液中，製備提取有被檢測物質之檢體試樣。繼而，向檢查器件之試樣添加部4滴加上述檢體試樣。包含被檢測物質之檢體試樣一面沿水平方向於膜上移動一面含浸於標記物部2而使標記物溶解、展開。若於檢體試樣中存在被檢測物質，則形成被檢測物質-標記物之複合體。若該複合體到達至檢測部3，則於該線上形成捕捉抗體-被檢測物質-標記物之複合體。基於自該複合體中之標記物質發出之訊號檢測複合體之存在，藉此可判定檢體中有無被檢測物質。未參與反應之其他成分等被吸收墊部5吸收。再者，於圖1所示之例中，存在2個檢測部3，該2個檢測部3係例如用以分別捕捉如A型流行性感冒病毒及B型流行性感冒病毒之2種被檢測物質者。藉由設置複數個此種檢測部3，能夠對複數種被檢測物質同時進行免疫測定。
於上述免疫層析法中，可使與檢體混合而提取被檢測物質之檢體提取液中含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分，亦可使免疫層析法用檢查器件之硝化纖維素膜1、標記物部2、及/或試樣添加部4中含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
本發明包含利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之結合反應之檢查試劑。該檢查試劑有時指檢查器件本身，有時亦指包含檢查器件及其他試劑之檢查套組。本發明之檢查試劑例如包含檢查套組，該檢查套組包含免疫層析法檢查器件及含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液。又，本發明之檢查試劑包含免疫層析法檢查器件，該免疫層析法檢查器件具備包含含有抑制偽陰性之非特異反應抑制成分之檢體提取液之部位。 [實施例]
藉由以下之實施例具體地說明本發明，但本發明並不受該等實施例限定。
於以下之實施例中，對於使用本發明之檢體提取液之情形時，檢測流行性感冒病毒、RS病毒、腺病毒、黴漿菌之免疫層析法套組中，檢體中之非特異反應得到抑制之實施例進行說明。
利用免疫層析法之流行性感冒病毒抗原之檢測 1.抗流行性感冒病毒單株抗體之製作 (1)抗A型流行性感冒病毒NP(核蛋白)抗體 利用A型流行性感冒病毒抗原使BALB/c小鼠產生免疫，自飼養一定時間之小鼠摘除脾臟，藉由科勒等人之方法(Kohler et al., Nature, vol, 256, p495-497 (1975))與小鼠骨髓瘤細胞(P3×63)融合。於37℃培養箱中維持所獲得之融合細胞(融合瘤)，藉由使用固相化A型流行性感冒病毒NP抗原之培養板之ELISA，確認上清液之抗體活性，同時進行細胞之純化(單克隆化)。將所獲取之該細胞2株分別腹腔投予至經姥鮫烷處理之BALB/c小鼠，約2週後，採集含抗體之腹水。藉由使用蛋白A管柱之親和層析法，自所獲得之腹水分別純化出IgG，獲得2種純化抗A型流行性感冒病毒NP抗體。 (2)抗B型流行性感冒病毒NP抗體 使用B型流行性感冒病毒抗原，利用與(1)相同之方法，獲得2種純化抗B型流行性感冒病毒NP抗體。
2.標記物墊之製作 純化抗A型流行性感冒病毒NP抗體及純化抗B型流行性感冒病毒NP抗體中分別使用各1種。使抗A型流行性感冒病毒抗體與紅色乳膠粒子共價結合，於浮游液中懸浮，進行音波振動處理而製備充分地分散浮游之抗A型乳膠浮游液。又，同樣地使抗B型流行性感冒病毒抗體與藍色乳膠粒子共價結合而製備抗B型乳膠浮游液。將抗A型乳膠浮游液與抗B型乳膠浮游液混合，塗佈於大小為20 cm×1 cm之玻璃纖維，於熱風下充分地乾燥，製作形成有乾燥混合物之標記物墊。
3.試樣添加墊之製作 使用大小為2.0 cm×20 cm之玻璃纖維。
4.檢查器件之製作 檢查器件使用與圖1所示者相同之構成。將硝化纖維素膜裁斷成2 cm×20 cm之大小並利用附有接著劑之塑膠板作為背襯，於距離下端0.8 cm及1.0 cm之位置塗佈成為約1 mm寬度之量之抗A型流行性感冒病毒抗體(與上述不同之抗體)液、以及抗B型流行性感冒病毒抗體(與上述不同之抗體)液各20 cm，於熱風下充分地乾燥而使抗體形成固相(檢測部)。其次，將3 cm×20 cm之大小之濾紙與硝化纖維素膜之上端重疊5 mm而設置吸收墊部。進而，將標記物墊與硝化纖維素膜之下端重疊2 mm而設置標記物部，進而，將試樣添加墊對準距離標記物墊之上端7 mm之位置重疊而設置試樣添加部。繼而，利用切割器裁斷成寬度5 mm之短條並一體化而製作檢查器件。
利用免疫層析法之RS病毒、腺病毒、肺炎黴漿菌抗原之檢測 1.抗RS病毒、抗腺病毒、抗肺炎黴漿菌單株抗體之製作 利用RS病毒抗原、或腺病毒抗原、或肺炎黴漿菌抗原分別獨立地使BALB/c小鼠產生免疫，自飼養一定時間之小鼠摘除脾臟，藉由科勒等人之方法(Kohler et al., Nature, vol, 256, p495-497 (1975))與小鼠骨髓瘤細胞(P3×63)融合。於37℃培養箱中維持所獲得之融合細胞(融合瘤)，藉由使用固相化上述各抗原之培養板之ELISA，確認上清液之抗體活性，同時進行細胞之純化(單克隆化)。將所獲取之該細胞2株分別腹腔投予至經姥鮫烷處理之BALB/c小鼠，約2週後，採集含抗體之腹水。藉由使用蛋白A管柱之親和層析法，自所獲得之腹水分別純化出IgG，針對各免疫原獲得各2種純化抗免疫原抗體。
2.標記物墊之製作 使各純化抗免疫原抗體與紅色乳膠粒子共價結合，於浮游液中懸浮，進行音波振動處理而製備充分地分散浮游之抗RS病毒乳膠浮游液、抗腺病毒乳膠浮游液、抗肺炎黴漿菌乳膠浮游液。將該等乳膠浮游液分別塗佈於大小為20 cm×1 cm之玻璃纖維，於熱風下充分地乾燥，製作形成有乾燥混合物之標記物墊。
3.試樣添加墊之製作 使用大小為2.0 cm×20 cm之玻璃纖維。
4.檢查器件之製作 檢查器件使用與圖1所示者相同之構成。將硝化纖維素膜裁斷成2 cm×20 cm之大小並利用附有接著劑之塑膠板作為背襯，於距離下端0.8 cm及1.0 cm之位置塗佈成為約1 mm寬度之量之抗RS病毒抗體(與上述不同之抗體)液、或抗腺病毒抗體(與上述不同之抗體)、或抗肺炎黴漿菌抗體20 cm，於熱風下充分地乾燥而使抗體形成固相(檢測部)。其次，將3 cm×20 cm大小之濾紙與硝化纖維素膜之上端重疊5 mm而設置吸收墊部。進而，將標記物墊與硝化纖維素膜之下端重疊2 mm而設置標記物部，進而，將試樣添加墊對準距離標記物墊之上端7 mm之位置重疊而設置試樣添加部。繼而，利用切割器裁斷成寬度5 mm之短條並一體化而製作檢查器件。
5.檢體提取液之製作 以下記載各試驗例。
試驗例1 含L-苯基丙胺酸(L-Phe)之檢體提取液之偽陰性反應抑制效果 1-1.檢體提取液之製備 製作包含50 mM三羥甲基胺基甲烷緩衝液(pH值8.0)、2(w/v)%聚氧乙烯辛基苯基醚、5(w/v)% L-精胺酸之混合液，作為對照1之檢體提取液。其次，製作包含50 mM三羥甲基胺基甲烷緩衝液(pH值8.0)、1.25(w/v)%聚氧乙烯烷基醚、0.75(w/v)%聚氧乙烯辛基苯基醚、4(w/v)%甘胺酸乙酯、2.0(w/v)% L-Phe、400 mM溴化鈉之混合液，作為試驗用1之檢體提取液。
1-2.試驗方法 使利用棉棒採集之唾液浮游、分散於對照1之檢體提取液及試驗用3之檢體提取液中，利用過濾片進行過濾。又，於該等檢體提取液中添加6.8×10 2PFU/mL之滅活A型流行性感冒病毒進行混合，製成樣品，將該等樣品滴加至上述所製作之檢查器件，5分鐘後測定檢測部之顯色強度。同時，亦準備於對照1及試驗用1之檢體提取液中未添加唾液之樣品、以及於其中僅添加6.8×10 2PFU/mL之滅活A型流行性感冒病毒進行混合而成之樣品，以此來實施試驗。顯色強度係使用對10等級之顯色強度標註出分數之紅色之顏色樣本進行測定。
1-3.顯色強度試驗結果 將結果示於表1。再者，顯色強度之數值按照0、1＋、2＋・・・・10＋之順序增強，0表示未見顯色，數值越高，表示越強地產生偽陰性反應。
於對照1之檢體提取液中，若比較無唾液與有唾液，則訊號強度降低2級。另一方面，於試驗用3之檢體提取液中，無唾液與有唾液時訊號強度未見差異，據此可知藉由本發明能夠抑制偽陰性反應。
[表1]
檢體提取液 未添加抗原 添加FluA抗原
無唾液 有唾液 無唾液 有唾液
對照1 0 0 5+ 3+
試驗用1 0 0 6+ 6+
試驗例2 利用免疫層析法檢測RS病毒時含L-Phe之檢體提取液之偽陰性抑制效果 2-1.檢體提取液之製備 製作包含50 mM三羥甲基胺基甲烷緩衝液(pH值8.0)、2(w/v)%聚氧乙烯辛基苯基醚、5(w/v)% L-精胺酸之混合液，作為對照1之檢體提取液。其次，製作包含1.5(w/v)% L-Phe、50 mM三羥甲基胺基甲烷緩衝液(pH值8.0)、1.25(w/v)%聚氧乙烯烷基醚、0.75(w/v)%聚氧乙烯辛基苯基醚、4(w/v)%甘胺酸乙酯、150 mM溴化鈉之混合液，作為試驗用4之檢體提取液。
2-2.試驗方法 利用棉棒自口腔採集唾液檢體，使唾液檢體浮游、分散於對照及試驗用4之檢體提取液。於該等檢體提取液中以成為3.5×10 4TCID 50/mL之方式分別添加經滅活之RS病毒進行混合，作為本試驗之樣品。又，亦製作以下之樣品，該樣品係不添加唾液而僅將滅活RS病毒以成為3.5×10 4TCID 50/mL之方式添加至對照及試驗用4之檢體提取液而成。其次，將該等樣品滴加至上述所製作之檢查器件，5分鐘後測定檢測部之顯色強度。顯色強度係使用分別對10等級之顯色強度標註出分數之針對紅色及藍色之顏色樣本進行測定。
2-3.顯色強度試驗結果 將結果示於表2。再者，顯色強度之數值按照0、1＋、2＋・・・・10＋之順序增強，0表示未見顯色，數值越高，表示越強地產生訊號。
由於對照之檢體提取液中添加有唾液檢體，故導致顯色強度因偽陰性反應而降低，但於試驗用4之檢體提取液中即便添加唾液，顯色強度亦完全無變化，從而可知，唾液所致之偽陰性化於包含本發明之成分之檢體提取液中得到了抑制。
[表2] RS病毒檢測中含L-Phe之檢體提取液之偽陰性抑制效果
抗原量 3.5×10 4TCID 50/mL
唾液添加 無唾液 有唾液
對照1 4+ 1+
試驗用4 4+ 4+
試驗例3 含L-Phe之檢體提取液與先前檢體提取液之感度比較
3-1.檢體提取液之製備 製作包含50 mM三羥甲基胺基甲烷緩衝液(pH值8.0)、2(w/v)%聚氧乙烯辛基苯基醚、5(w/v)% L-精胺酸之混合液，作為對照1之檢體提取液。其次，製作包含50 mM三羥甲基胺基甲烷緩衝液(pH值8.0)、1.25(w/v)%聚氧乙烯烷基醚、0.75(w/v)%聚氧乙烯辛基苯基醚、4(w/v)%甘胺酸乙酯、1.5(w/v)% L-Phe、150 mM溴化鈉之混合液，作為試驗用1之檢體提取液。
3-2.試驗方法 製作於對照1及試驗用1之檢體提取液中分別添加有最終濃度為6.8×10 2PFU/mL、3.4×10 2PFU/mL、1.7×10 2PFU/mL之滅活A型流行性感冒病毒之樣品。又，同樣地，對於滅活B型流行性感冒病毒，亦製作最終濃度為4.0×10 2PFU/mL、2.0×10 2PFU/mL、1.0×10 2PFU/mL之樣品。其次，將該等樣品向上述所製作之檢查器件中滴加50 μL，5分鐘後測定檢測部之顯色強度。顯色強度係使用分別對10等級之顯色強度標註出分數之針對紅色及藍色之顏色樣本進行測定。
3-3.顯色強度試驗結果 將結果示於表3。再者，顯色強度之數值按照0、0.5＋、1＋、2＋・・・・10＋之順序增強，0表示未見顯色，數值越高，表示越強地產生訊號。結果之記法係以「A型之顯色強度/B型之顯色強度」表示。
於對照1之檢體提取液與試驗用1之檢體提取液中，感度同等。關於訊號強度，試驗用1較高。根據以上結果，若使用本發明中所使用之檢體提取液，則能夠於不使感度降低之情況下提昇特異性。
[表3] 含L-Phe之檢體提取液與先前檢體提取液之感度比較
抗原種類 A型流行性感冒病毒 B型流行性感冒病毒
抗原濃度PFU/mL 6.8×10 2 3.4×10 2 1.7×10 2 4.0×10 2.0×10 1.0×10
對照1 4+/0 1+/0 0.5+/0 0/3+ 0/1+ 0/0.5+
試驗用1 5+/0 2+/0 0.5+/0 0/5+ 0/2+ 0/1+
試驗例4 含L-Phe類似物質之檢體提取之偽陰性抑制效果
4-1.檢體提取液之製備 製作包含50 mM三羥甲基胺基甲烷緩衝液(pH值8.0)、2(w/v)%聚氧乙烯辛基苯基醚、2(w/v)% L-精胺酸之混合液，作為對照(無添加劑)之檢體提取液。其次，製作包含50 mM三羥甲基胺基甲烷緩衝液(pH值8.0)、2(w/v)%聚氧乙烯辛基苯基醚、2(w/v)% L-精胺酸，且除該等組成以外，還包含表4之化合物(括弧內表示終濃度)其中1種之檢體提取液，作為試驗用檢體提取液。
[表4] 檢體提取液中之添加劑一覽
添加劑名(終濃度) 簡稱
L-苯基丙胺酸 (2.0%) L-Phe
D-苯基丙胺酸 (2.0%) D-Phe
阿斯巴甜 (1.0%) -
馬尿酸 (2.0%) -
±苦杏仁酸 (2.0%) -
L-色胺酸 (1.0%) L-Trp
L-苯基丙胺酸甲酯 (2.0%) L-PheME
N-苯基甘胺酸 (2.0%) N-PG
DL-2-苯基甘胺酸 (0.1%) 2-PG
苯甲酸鈉 (2.0%) -
3-苯基丙酸 (1.5%) 3PPA
N-(間甲苯醯)甘胺酸 (1.5%) NmTG
乙醯水楊酸 (1.5%) AcSA
4-2.試驗方法 利用棉棒採集對照之檢體浮游液中觀察到偽陰性反應之流行性感冒病毒及RS病毒陰性之唾液。使該等檢體浮游、分散於對照及各試驗用檢體提取液中，作為本試驗之樣品。進而，添加最終濃度為6.8×10 2PFU/mL之A型流行性感冒病毒、或最終濃度為4.0×10 PFU/mL之B型流行性感冒病毒、或最終濃度為3.5×10 4TCID 50/mL之RS病毒抗原，進行混合。繼而，將該等樣品滴加至上述所製作之各檢查器件，5分鐘後測定檢測部之顯色強度。顯色強度係使用對10等級之顯色強度標註出分數之顏色樣本進行測定，確認偽陰性化之抑製程度。
4-3.顯色強度試驗結果 將結果示於表5及表6。關於結果之記法，「×」表示無效果，「△」表示可見略微之改善效果，「〇」表示可見相當之改善效果，「◎」表示可見較強之改善效果。再者，於流行性感冒病毒檢測試劑中，記作「A型流行性感冒/B型流行性感冒」。
於RS病毒檢測試劑中，試驗之幾乎所有化合物均可確認到偽陰性之抑制效果，於流行性感冒病毒檢測試劑中，確認到複數種化合物有偽陰性之抑制效果。
[表5] RS病毒檢測試劑中含L-Phe類似物質之檢體提取液之抑制唾液所致之偽陰性之效果
條件 偽陰性之抑制效果
對照 (無添加) - (產生偽陰性化)
L-苯基丙胺酸 (2.0%) △
D-苯基丙胺酸 (2.0%) △
阿斯巴甜 (1.0%) △
馬尿酸 (2.0%) 〇
±苦杏仁酸 (2.0%) 〇
L-色胺酸 (1.0%) △
L-PheME (2.0%) △
N-苯基甘胺酸 (2.0%) ◎
DL-2-苯基甘胺酸 (0.1%) 〇
苯甲酸鈉 (2.0%) 〇
3-PPA (1.5%) ◎
NmTG (1.5%) ◎
乙醯水楊酸 (1.5%) △
「×」表示無效果，「△」表示可見略微之改善效果， 「〇」表示可見相當之改善效果，「◎」表示可見較強之改善效果。
[表6] 流行性感冒病毒檢測試劑中含L-Phe類似物質之檢體提取液之抑制唾液所致之偽陰性之效果
條件 偽陰性之抑制效果
對照 (無添加) 產生偽陰性化
L-苯基丙胺酸 (2.0%) 〇/〇
D-苯基丙胺酸 (2.0%) △/△
阿斯巴甜 (1.0%) ×/×
馬尿酸 (2.0%) 〇/〇
±苦杏仁酸 (2.0%) ◎/◎
L-色胺酸 (1.0%) △/△
L-PheME (2.0%) ×/×
N-苯基甘胺酸 (2.0%) ◎/◎
DL-2-苯基甘胺酸 (0.1%) ×/×
苯甲酸鈉 (2.0%) ×/×
3-PPA (1.5%) 〇/◎
NmTG (1.5%) 〇/〇
乙醯水楊酸 (1.5%) ×/×
記載係以「A型流行性感冒/B型流行性感冒」表示， 「×」表示無效果，「△」表示可見略微之改善效果， 「〇」表示可見相當之改善效果，「◎」表示可見較強之改善效果。 [產業上之可利用性]
本發明之方法可利用於各種物質之準確檢測。 本說明書中所引用之所有刊物、專利及專利申請均直接藉由引用而併入至本說明書中。
1:硝化纖維素膜 2:標記物部 3:檢測部 4:試樣添加部 5:吸收墊部 6:塑膠板
圖1A、B係表示本發明中所使用之檢查器件之構造之圖。

Claims (16)

  1. 一種檢查試劑，其係利用抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之結合反應而檢測檢體中之被檢測物質之檢查套組，且包含檢體提取液，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
  2. 如請求項1之檢查試劑，其係免疫層析用檢查試劑，且免疫層析用檢查器件包含檢體提取液，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
  3. 如請求項1或2之檢查試劑，其係包含含浸有檢體提取液之部位之免疫層析用檢查器件，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
  4. 如請求項1至3中任一項之檢查試劑，其中檢體提取液含有0.1～10(w/v)%之抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
  5. 如請求項1至4中任一項之檢查試劑，其中具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物係以下之通式(I)～(V)中任一者所表示之化合物或色胺酸： [化1]
    Figure 03_image031
    [通式(I)中，R1為H、OH、=O、NH 2、COOH、NH-CO-CNH 2-C-COOH或CH 3，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n為0或1，m為0、1、2、3或4] [化2]
    Figure 03_image033
    [通式(II)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3為COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH 3、COOC 2H 5、OCOH或CH 3，R3與COOR2位於苯環之鄰位、間位或對位] [化3]
    Figure 03_image035
    [通式(III)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4為H或CH 3，n為0或1] [化4]
    Figure 03_image037
    [通式(IV)中，R5為甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺、麩醯胺、苯基丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、精胺酸、離胺酸或組胺酸之側鏈] [化5]
    Figure 03_image039
    [通式(V)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6為NH或O，n為0、1、2、3或4]。
  6. 如請求項1至5中任一項之檢查試劑，其中具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物係選自由阿斯巴甜、苯基丙胺酸、苯基丙胺酸甲酯、苦杏仁酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘胺酸、苯基甘胺酸甲酯、苯基甘胺酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、鄰苯二甲酸、乙醯水楊酸、馬尿酸、N-甲苯醯甘胺酸、N-苄氧羰基胺基酸、N-苯基甘胺酸、苯氧基乙酸、色胺酸、及該等化合物之金屬鹽、以及該等化合物之光學異構物、幾何異構物、結構異構物、立體異構物及位置異構物所組成之群中之化合物。
  7. 如請求項1至6中任一項之檢查試劑，其中檢體提取液中進而含有選自由精胺酸、離胺酸、精胺酸乙酯、精胺酸甲酯、甘胺酸乙酯及甘胺酸甲酯、以及該等化合物之光學異構物、幾何異構物、結構異構物及立體異構物所組成之群中之胺基酸或胺基酸衍生物。
  8. 如請求項1至7中任一項之檢查試劑，其中檢體提取液中進而含有選自由氯化鋰、氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉、溴化鉀、碘化鈉及碘化鉀所組成之群中之鹵化物。
  9. 一種抑制偽陰性反應而進行檢測之方法，其係利用檢體提取液中所含之抗原抗體反應或具有相互作用之物質彼此之反應而檢測選自由咽拭子檢體、鼻腔拭子檢體、鼻腔抽吸檢體、咽沖洗檢體、鼻腔沖洗檢體、鼻溢液檢體、唾液檢體、血清檢體、血漿檢體、全血檢體、糞便檢體、便懸浮液檢體及尿液檢體所組成之群中之檢體中的選自由病毒抗原、細菌抗原、及蛋白質抗原所組成之群中之被檢測物質，且藉由使檢體預先與具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分接觸，來抑制偽陰性反應而進行檢測。
  10. 如請求項9之方法，其中檢測被檢測物質之方法係免疫層析法，且於檢體提取液中置入檢體，並將該檢體提取液添加至免疫層析用檢查器件，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
  11. 如請求項9之方法，其中檢測被檢測物質之方法係免疫層析法，且將檢體添加至包含含浸有檢體提取液之部位之免疫層析用檢查器件，該檢體提取液含有具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物即抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
  12. 如請求項9至11中任一項之方法，其中檢體提取液含有0.1～10(w/v)%之抑制偽陰性之非特異反應抑制成分。
  13. 如請求項9至12中任一項之方法，其中具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物係以下之通式(I)～(V)中任一者所表示之化合物或色胺酸： [化6]
    Figure 03_image041
    [通式(I)中，R1為H、OH、=O、NH 2、COOH、NH-CO-CNH 2-C-COOH或CH 3，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，n為0或1，m為0、1、2、3或4] [化7]
    Figure 03_image043
    [通式(II)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R3為COOH、COOLi、COONa、COOK、COORb、COOCs、COOFr、COOCH 3、COOC 2H 5、OCOH或CH 3，R3與COOR2位於苯環之鄰位、間位或對位] [化8]
    Figure 03_image045
    [通式(III)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R4為H或CH 3，n為0或1] [化9]
    Figure 03_image047
    [通式(IV)中，R5為甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺、麩醯胺、苯基丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、精胺酸、離胺酸或組胺酸之側鏈] [化10]
    Figure 03_image049
    [通式(V)中，R2為H、CH 3、C 2H 5、Li、Na、K、Rb、Cs或Fr，R6為NH或O，n為0、1、2、3或4]。
  14. 如請求項9至13中任一項之方法，其中具有苯基、苄基、甲苯基或二甲苯基、進而可具有羧基、甲氧基羧基或乙氧基羧基、進而可具有羥基之具有水溶性且分子量為6000 Da以下之化合物係選自由阿斯巴甜、苯基丙胺酸、苯基丙胺酸甲酯、苦杏仁酸、2-苯基丙酸、3-苯基丙酸、苯基甘胺酸、苯基甘胺酸甲酯、苯基甘胺酸乙酯、苯基乳酸、苯基丙酮酸、苯甲酸、鄰苯二甲酸、乙醯水楊酸、馬尿酸、N-甲苯醯甘胺酸、N-苄氧羰基胺基酸、N-苯基甘胺酸、苯氧基乙酸、色胺酸、及該等化合物之金屬鹽、以及該等化合物之光學異構物、幾何異構物、結構異構物、立體異構物及位置異構物所組成之群中之化合物。
  15. 如請求項9至14中任一項之方法，其中檢體提取液中進而含有選自由精胺酸、離胺酸、精胺酸乙酯、精胺酸甲酯、甘胺酸乙酯及甘胺酸甲酯、以及該等化合物之光學異構物、幾何異構物、結構異構物及立體異構物所組成之群中之胺基酸或胺基酸衍生物。
  16. 如請求項9至15中任一項之方法，其中檢體提取液中進而含有選自由氯化鋰、氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉、溴化鉀、碘化鈉及碘化鉀所組成之群中之鹵化物。
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