JP2010529960A - MC−1R、MC−2R、およびμオピオイド受容体調節 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
・細胞恒常性を促進し、特にケラチノサイトの増殖を促進して、再上皮化を可能にする、
・直接的または間接的に、皮膚の神経支配を回復または維持して、表皮の神経ネットワークの維持を可能にし、満足感を得る、
・直接的または間接的に、血管新生を回復または維持して、十分な血液灌流を維持する、
・メラニン生成を調節する。
・活性物質を、MC−1R、MC−2R、および/またはμオピオイド受容体、および場合によってはPOMC遺伝子を発現できる少なくとも一種類の生細胞と接触させる。
・MC−1R、MC−2R、および/またはμ受容体の発現を調節、好ましくは刺激する活性物質を同定することを特に目的として、MC−1R、MC−2R、および/またはμオピオイド受容体の発現を分析する。
配列番号1:MC−1R NM_002386
配列番号2:MC−2R NM_000529
配列番号3:μオピオイド受容体 NM_000914
配列番号4:POMC NM_000939。
4つの特徴付けられた分子:
・フェニル酢酸3,6,9−トリメチル−2,7−ジオキソ−2,3,3a,4,5,7,9a,9b−オクタヒドロ−アズレノ[4,5−b]フラン−4−イル、
・Z−デカヒドロ−6,8a−ジヒドロキシ−l−イソプロピル−3a,6−ジメチルアズレン−5−イル−2メチルブト−2−エノエート、
・CAS番号352220−52−1で知られる2.6ジメチル−4(2−メチルブテノエート)5−6(1−イソプロピル−1ヒドロキシシクロペンタン))1,2エポキシシクロヘプタンならびにそのエステル、
・CAS番号86992−41−8、およびラピフェリンという一般名で知られる7−アセテート−2.6ジメチル−4(2−メチルブテノエート)5−6(1−イソプロピル−1ヒドロキシシクロペンタン))1,2エポキシシクロヘプタン
ならびにかかる特徴付けられた分子を含有する植物抽出物、
6つの植物抽出物:galeopsis ochroleuca(野生麻)、Achillea millefolium(セイヨウノコギリソウ)、Colocasia esculenta(野生タロ)、Prunus cerasus(サワーチェリー)、Prunus spinosa(ブラックソーン)、エブルナモニン(Eburnamonine)(Apocynacea Amsonia Abrenaemontan(キョウチクトウ科ヤナギバチョウジソウ))の抽出物、
微生物の存在下で植物抽出物の発酵を介して得られる4つのバイオテクノロジー加水分解物:乳酸菌、特にラクトバチルス、例えば、ラクトバチルス・プランタルムによって形質転換されたマンゴ、デーツ、またはパパイヤの抽出物、または乳酸菌、特にラクトバチルス、例えば、ラクトバチルス・パラカゼイによって形質転換されたバナナ抽出物、およびそれらの任意の混合物。
・皮膚神経の栄養価値を刺激する、および/または感覚皮膚神経を活性化する活性成分、例えば、特許出願第FR2825273号において引用されるもの、パプリカ抽出物(トウガラシ)、赤色色素(赤トウガラシ)、またはペッパー(コショウ)、あるいはグルタミルアミドエチルインドール(エクシモール)、
・皮膚のバリア機能を改善するための、βエンドルフィンの効果を模倣する活性成分、例えば、特許出願第US2006069032号において引用されるもの、ココア豆外皮の抽出物、
・満足感をもたらすための、βエンドルフィンの合成を刺激する活性成分、例えば、tephrosia purpurea(ソリアンス(Soliance))由来のテフロリン、
・以下の分子:NGF、α−MSH、βエンドルフィン、または誘導体等の老化防止活性を有することが意図される、細胞増殖および/または細胞分化を刺激する活性成分、例えば、特許出願第FR2857874に記載されるもの、P3−エンドルフィン、
・線維芽細胞成長因子、特にFGF2を分解から保護する活性成分、例えば、出願人により提出され、GB244036号として公開された特許出願に記載される植物抽出物、特にアオイ科トロロアオイ(Hibiscus Abelmoscus)抽出物、
・線維芽細胞の活性および/または増殖を刺激する活性成分、例えば、商品名PhytokineTMとして出願人によって市販されている製品等の大豆の発酵ペプチド、任意でアオイ科トロロアオイ(Hibiscus Abelmoscus)抽出物と組み合わせて、
・ヒアルロナーゼシンターゼ、特に特許第FR2893252号に記載されるようなヒアルロナーゼシンターゼ2を刺激する活性成分、
・LOXL等のリシルオキシダーゼの活性および/または合成を刺激する活性成分、例えば、特許第FR2855968号に記載される組成物、特に 弾性線維を刺激するためのディル抽出物、
・抗炎症特性を有する活性成分、例えば、PLA2を阻害するもの、特に、特許第FR2847267号に記載される成分、および特にクズ根の抽出物(Inhipase(登録商標))、
・皮膚の色の変化を可能にする活性物質、例えば、皮膚を明るくする、および/または美白のための活性成分、
・ラウリン酸ヘスペリチン(Flavagrum(登録商標))またはカプリル酸クエルシチン(Flavenger(登録商標))等の排水特性を有する活性物質。
・特徴付けられた分子:1メチルβカルボリン3カルボン酸、
・以下の植物抽出物:大豆粉(赤色)、サルサパリラ(Smilax ornata)、Achillea millefolium(セイヨウノコギリソウ)、Cecropia obtusa、Oenothera biennis(マツヨイグサ)、ニンジン、オシダ、Prunus cerasus(サワーチェリー)またはそれらの任意の組み合わせ、および
・以下の中から選択される、微生物の存在下、植物抽出物の発酵を介して得られるバイオテクノロジー加水分解物:特に乳酸菌、例えば、ラクトバチルス・プランタルムによる発酵酵母またはルピン、乳酸菌、特に例えば、ラクトバチルス・プランタルム等のラクトバチルスによって形質転換されたパパイヤ、デーツ、または大豆抽出物、ビフィズス菌、例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガムによって発酵されたレモン抽出物、およびこれらの任意の混合物。
・特徴付けられた分子:1メチルβカルボリン3カルボン酸、
・以下の植物抽出物:大豆粉、Oenothera biennis(マツヨイグサ)、サルサパリラ(Smilax ornata)、Cecropia obtusia、Achillea millefolium(セイヨウノコギリソウ)、ニンジン、Prunus cerasus(サワーチェリー)、
・以下の中から選択される、微生物の存在下での植物抽出物の発酵を介して得られるバイオテクノロジー加水分解物:乳酸菌、特に、例えば、ラクトバチルス・プランタルム等のラクトバチルスによって形質転換されたパパイヤ、ルピン、酵母、デーツ、または大豆抽出物。
本発明は、若い女性(40歳より下)および高齢の女性(50歳より上)から採取された生検における時間生物学的な老化過程におけるタンパク質レベルでのMC−1R、MC−2R、およびμオピオイド受容体の発現の変化を実証した(図1を参照されたい:30歳または60歳のヒト患者から採取したヒト生検における受容体発現−免疫組織化学結果)。
本発明は、ヒト生検から採取されたケラチノサイトにおける時間生物学的老化の過程での、受容体MC−1R、MC−2R、およびμオピオイドRの遺伝子の発現の変化、およびPOMC遺伝子の発現の変化についても扱う。対象となる4つの遺伝子ならびにアクチンの発現は、リアルタイムでRT−PCRにより分析した(逆転写ポリメラーゼ定量的連鎖反応)。本技術は、ある遺伝子の発現をアクチンの発現(一定であるとみなされる)と関連付けることによって、その遺伝子の発現の精密な定量を可能にする。したがって、この遺伝子の発現レベルの調節を定量することができる。
本発明は、特に、再構成された皮膚、ヒト皮膚の生検における老化したケラチノサイトにおいて認められる受容体の、例えば、若い皮膚のケラチノサイトにおいて見られるような生理的発現を回復させる目的で、3つの受容体MC−1R、MC−2R、および/またはμオピオイドRの合成を誘導できる新しい分子をスクリーニングする方法に関する。
実験は、前述の実施例において説明されるものと、細胞培養を除いて同一条件の下で行う。
電気泳動は、以下のそれぞれの市販ポリクローナル抗体によるタンパク質MC−1R、MC−2R、およびμオピオイド受容体の特徴付けを示す:OPA1−15013(Affinity bioreagents)、AB5128(Chemicon International)、およびAB5511(Chemicon International)。
本発明者らは、時間生物学的老化の過程におけるチューブリンβIIIおよびニューロフィラメント200の発現が、神経生物学的老化の過程において減少したことを、免疫蛍光によって示した(図2)。本発明者らは、皮膚における軸索伸長の存在の検出を可能にする、これら2つのマーカーを選択した。マーカーであるチューブリンβIIIは、細胞核の数および神経ネットワークの密度の定量を可能にし、マーカーであるニューロフィラメント200は、神経ネットワークの成熟についてさらに示す。17歳から75歳までの女性の80マンモグラフィ生検上で行われた免疫蛍光研究から、本発明者らは、チューブリンβIIIの発現が、38歳以降で3.7倍減少したこと、およびニューロフィラメント200の発現が、3.5倍減少したことを示すことができた。抗体は、以下の希釈で使用した:1:500(抗チューブリンβIII)および1:500(抗ニューロフィラメント200)。免疫複合体は、1:100に希釈された、ALEXA594結合マウス(ヤギ)抗IgGを用いて検出する。
高齢被験体におけるケラチノサイトを培養し、活性物質が細胞と接触する時間、例えば、24時間後に、環境を回収し、ELISA技術に供して、NGFまたはVEGFの分泌の検出を可能にする。使用方法は、NGFの場合は供給元であるR&D system(DY256)およびVEGFの場合はClinisciences(KHG0l12)によって行われるプロトコルに従う。試験される活性物質の中で、以下の活性物質、特にNGFが最強の調節を呈し、表Vの対象である。
成人整形手術の生検を、生存状態で4日間、DMEM培養環境で、NGFまたは活性成分の存在下または非存在下で維持する。次いで、生検を凍結し、神経マーカーを同定するための免疫蛍光研究、特に実施例6に示される研究に供する。
このモデルは、再構成された真皮の培養の集合体であって、再構成された表皮の補足的培養が次いで行われる。
・0.5〜1.106正常ヒト皮膚線維芽細胞を、通常はグリコサミノグリカンキトサンのコラーゲンベースの基質マトリクス上に播種し、次いで、栄養環境において、例えば、10%仔ウシ血清、アスコルビン酸を添加したDMEM−Glutamaxにおいて、好ましくは、最終濃度1mM EGF(上皮成長因子)、および好ましくは、最終濃度10ng/mL Normocin、また好ましくは、最終濃度100μg/mLで21日間培養する。
・0.5〜1.106正常ヒトケラチノサイトを、真皮相当物上に播種し、次いで、栄養環境において、例えば、仔ウシ血清、アスコルビン酸を添加したDMEM−Glutamax/Ham F−12(比率3/1 v/v)において、好ましくは、最終濃度1mM EGF(上皮成長因子)、および好ましくは、最終濃度10ng/mLヒドロコルチゾン、および好ましくは、最終濃度0.4μg/mLウムリン、および好ましくは、最終濃度0.12UI/mLイスプレル、および好ましくは、最終濃度0.4μg/mLトリヨードサイロニン、および好ましくは、最終濃度2.10−9Mアデニン、および好ましくは、最終濃度24.3μg/mL Normocin、および好ましくは、最終濃度100μg/mLで培養する。培養は、7日間、浸漬状態で行う。次いで、培養物を仔ウシ血清、ヒドロコルチゾン、イスプレル、トリヨードサイロニン、およびウムリン以外は、浸漬状態の培養物と同様の環境で、さらに14日間気液界面中に配置する。
本発明の生成物は、特に、感覚皮膚神経上で活性な皮膚神経の栄養価値を刺激する抽出物、例えば、パプリカ抽出物(トウガラシ)および/または赤色色素(赤トウガラシ)および/またはペッパー(コショウ)(L’OREAL FR2825273)、および/またはグルタミルアミドエチルインドール(エクシモール)等と組み合わせることができる。
Claims (16)
- 化粧用組成物中の活性成分として、または栄養補給用組成物の調製のための、または医薬組成物および特に皮膚科学的組成物の調製のための、メラノサイトにおいてMC−Rの発現を調節する少なくとも1つの物質の使用。
- α−MSHおよび/またはACTHの効果の脱制御に対抗しかつ/またはこれを予防するための、請求項1に記載の使用。
- 皮膚老化および/もしくは皮膚老化の過程中に認められる変化を誘導するストレスの影響を予防しかつ/またはこれに対抗するため、および/または表皮恒常性の低下を予防しかつ/またはこれに対抗するため、および/または上皮化を促進するため、および/または特に表皮レベルでの細胞増殖および分化を改善するため、および/または皮膚血管新生の減少を予防するかまたはこれに対抗するため、および/または皮膚血管新生を改善するため、および/または血管の過透過性を改善するため、および/または皮膚の瘢痕形成における血管新生を改善するため、および/または皮膚神経支配の減少を予防しかつ/またはこれに対抗するため、および/または皮膚神経支配を改善するため、または満足感をもたらすため、および/または皮膚の色を改善するため、および/または特に色素沈着が色素斑点等の局所的な欠陥を呈する場合に皮膚の色素沈着を変化させるための、請求項1または2に記載の使用。
- 前記物質が、MC−1Rの発現を刺激し、かつ場合によりPOMC発現を維持または刺激する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の使用。
- 日焼け効果のために皮膚の色素沈着を増加させるための、老化に関連するかまたは関連しない脱色素斑点を予防しかつ/またはこれに対抗するための、請求項4に記載の使用。
- 前記物質が、
・1メチルβカルボリン−3−カルボン酸、
・乳酸菌によって発酵された酵母、
・ビフィズス菌によって発酵されたレモン抽出物、
・乳酸菌によって発酵されたパパイヤ抽出物、
・乳酸菌によって発酵されたルピン抽出物、
・乳酸菌によって発酵された大豆抽出物、
・乳酸菌によって発酵されたデーツ抽出物、
・大豆粉の抽出物、
・サルサパリラ(Smilax ornata)抽出物、
・野生タロ(Cecropia obtusa)抽出物、
・ヨイマチグサ抽出物(Oenothera biennis)、
・セイヨウノコギリソウ(Achillea millefolium)抽出物、
・ヨイマチグサ(Oenothera biennis)抽出物、
・ニンジン抽出物、
・オシダ抽出物、
・サワーチェリー(Prunus cerasus)抽出物、および
・これらの任意の混合物
の中から選択される、請求項4または5に記載の使用。 - 前記物質が、MC−1Rの発現を減少させ、かつ場合によりPOMC発現を維持または減少させる、請求項1〜3のいずれか1項に記載の使用。
- 美白もしくはライトニング効果のために皮膚の色素沈着を減少させるため、色合いの明るさを高めるため、老化に関連するかまたは関連しない色素斑点を予防しかつ/またはこれに対抗するための、請求項7に記載の使用。
- 前記物質が、
・ジュニパーベリー(Juniperus communis)の水性または含水アルコール抽出物、
・野生麻(Galeopsis ochroleuca)抽出物、
・およびこれらの任意の混合物
の中から選択される、請求項7または8に記載の使用。 - 前記物質が、
・老化防止効果を有することが意図される、ケラチノサイトの増殖および/または分化を刺激する活性物質、
・皮膚のバリア機能を改善するために、βエンドルフィンの効果を模倣する活性物質、
・皮膚神経の栄養価値を刺激する活性物質、
・満足感を誘導する活性物質、
・皮膚の色の変化を可能にする活性物質、
・線維芽細胞の活性および/または増殖を刺激する活性物質、
・線維芽細胞成長因子、特にFGF2を分解から保護する活性物質、
・ヒアルロナーゼシンターゼ、特にヒアルロナーゼシンターゼ2を刺激する活性物質、
・LOXL等のリシルオキシダーゼの活性および/または合成を刺激する活性物質、
・抗炎症特性を有し、特にホスホリパーゼA2の酵素活性を阻害する活性物質、
・排水特性を有する活性物質、および
・これらの任意の組み合わせ、
からなる群より選択される別の活性成分と組み合わせて使用される、請求項1〜9のいずれか1項に記載の使用。 - 化粧用組成物中の活性成分としての、または栄養補給用組成物の調製のための、または皮膚の色素沈着を増加すること、日焼け効果を与えること、老化に関連するかまたは関連しない脱色素斑点を予防しかつ/またはこれに対抗することを意図する医薬組成物、特に皮膚科学的組成物の調製のための、以下のもの:
・1メチルβカルボリン−3−カルボン酸、
・(赤色)サルサパリラ(Smilax ornata)抽出物、
・セイヨウノコギリソウ(Achillea millefolium)抽出物、
・野生タロ(Cecropia obtuse)抽出物、
・ヨイマチグサ(Oenothera biennis)抽出物、
・ニンジン抽出物、
・オシダ抽出物、
・サワーチェリー(Prunus cerasus)抽出物、
・乳酸菌によって発酵された酵母、
・ビフィズス菌によって発酵されたレモン抽出物、
・乳酸菌によって発酵されたパパイヤ抽出物、
・乳酸菌によって発酵されたルピン抽出物、
・乳酸菌によって発酵された大豆抽出物、
・乳酸菌によって発酵されたデーツ抽出物、
・大豆粉の抽出物、および
・これらの任意の混合物
の中から選択される物質の使用。 - 化粧用組成物中の活性成分としての、または栄養補給用組成物の調製のための、または美白もしくはライトニング効果のために皮膚の色素沈着を減少させること、色合いの明るさを高めること、老化に関連するかまたは関連しない色素斑点を予防しかつ/またはこれに対抗することを意図する医薬組成物、特に皮膚科学的組成物の調製のための、Galeopsis ochroleuca(野生麻)またはJuniperus communis(ジュニパーベリー)の水性もしくは含水アルコール抽出物の中から選択される物質の使用。
- 皮膚老化および/もしくは皮膚老化の過程中に認められる変化を誘導するストレスの影響を予防しかつ/またはこれに対抗するため、または表皮恒常性の低下を予防しかつ/またはこれに対抗するため、または上皮化を促進するため、または特に表皮レベルでの細胞増殖および分化を改善するため、または皮膚血管新生の減少を予防するかまたはこれに対抗するため、または皮膚血管新生を改善するため、または血管の過透過性を改善するため、または皮膚の瘢痕形成における血管新生を改善するため、または皮膚神経支配の減少を予防しかつ/またはこれに対抗するため、または皮膚神経支配を改善するため、または満足感をもたらすため、または皮膚の色を改善するため、および/または特に色素沈着が色素斑点等の局所的な欠陥を呈する場合に皮膚の色素沈着を変化させるための化粧用または皮膚化粧用または栄養補給用組成物であって、活性成分として、請求項6、9、11、または12のいずれか1項に記載されるような活性物質を、場合により請求項10に記載されるような物質と組み合わせて含む、上記組成物。
- 好ましくは、皮膚老化および/もしくは皮膚老化の過程において認められる変化を誘導するストレスの影響を予防しかつ/またはこれに対抗すること、または表皮恒常性の低下を予防しかつ/またはこれに対抗すること、または上皮化を促進すること、または特に表皮レベルでの細胞増殖および分化を改善すること、または皮膚血管新生の減少を予防するかまたはこれに対抗すること、または皮膚血管新生を改善すること、または血管の過透過性を改善すること、または皮膚の瘢痕形成における血管新生を改善すること、または皮膚神経支配の減少を予防しかつ/またはこれに対抗すること、または皮膚神経支配を改善すること、または満足感をもたらすこと、または皮膚の色を改善すること、および/または特に色素沈着が色素斑点等の局所的な欠陥を呈する場合に皮膚の色素沈着を変化させることを意図する医薬組成物であって、活性成分として、請求項6、9、11、または12のいずれか1項に記載されるような活性物質を、場合により請求項10に記載される物質と組み合わせて含む、上記組成物。
- 審美効果を高めるために、請求項6、9、11、または12のいずれか1項に記載される物質を、場合により請求項10に記載される物質と組み合わせて、皮膚に投与するステップを含む、美容ケアの方法。
- 以下の配列のうちの1つを有するヌクレオチド配列:
GGGCTCTGAGAACGACTTTT(MC−1Rセンス−配列番号7)、
CCGGGCTCCTGTCTGGTTGG(MC−1Rアンチセンス−配列番号8)、
TCACGTCGCTGTTCCCGCTGAT(MC−2Rセンス−配列番号9)、
AAGAGAGACATGTAGCAGGCGCAGTA(MC−2Rアンチセンス−配列番号10)、
CTCAGCCAGGACTGGTTTCTGTAAGA(μオピオイド受容体センス−配列番号11)、
TCGGACAGGTTGCCATCTAAGTG(μオピオイド受容体アンチセンス−配列番号12)、
CGCCCAGTGAAGGTGTACCC(POMCセンス−配列番号13)、および
GGCGTCTGGCTCTTCTCGGAGGTC(POMCアンチセンス−配列番号14)。
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