FR2999931A1 - Utilisation de microorganismes probiotiques comme agent favorisant la synthese de melanine - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation, par voie topique, de Bifidobacterium longum, comme agent pro-pigmentant, notamment dans la prévention et/ou le traitement d'altérations de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux.

Description

Utilisation de microorganismes probiotiques comme agent favorisant la synthèse de mélanine La présente invention concerne le traitement cosmétique ou thérapeutique, par voie topique, par induction de la pigmentation, d'altérations de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux, résultant en particulier d'un déséquilibre de régulation de l'homéostasie des mélanocytes. La couleur des cheveux et de la peau humaine est fonction de différents facteurs, tels que les saisons de l'année, l'origine ethnique, le sexe et l'âge. Elle est principalement déterminée par la concentration et la distribution, dans les kératinocytes, de la mélanine produite par les mélanocytes. La mélanine, pigment naturel reconnu pour ses propriétés anti-radicalaires et absorbantes des rayonnements solaires, est un agent protecteur physiologique de la peau, existant sous deux formes majoritaires : l'eumélanine et la phéo-mélanine. Les mélanocytes sont les cellules spécialisées qui synthétisent la mélanine puis la distribuent aux kératinocytes par l'intermédiaire d'organelles particulières, les mélanosomes. Dans l'épiderme, le mélanocyte est impliqué dans l'unité mélanique épidermique, formant un réseau de distribution entre mélanocytes et kératinocytes, qui est constitué par un mélanocyte entouré d'environ 36 kératinocytes voisins. Les mélanocytes comptent pour environ 5 à 10% des cellules de la couche basale de l'épiderme. Tous les individus, sans distinction de phototype, ont approximativement le même nombre de mélanocytes pour une zone cutanée donnée. Les différences de pigmentation entre les individus ne sont pas dues au nombre de mélanocytes, mais à la nature de la mélanine synthétisée et aux propriétés biochimiques et fonctionnelles des mélanosomes. Les mélanosomes sont des organelles hautement spécialisées dont l'unique fonction est la synthèse et le transfert de mélanine. Ils naissent du réticulum endoplasmique sous forme de vacuoles sphériques appelées pré-mélanosomes qui contiennent un substrat protéinique amorphe, mais pas d'enzymes mélanogènes. Au cours de la maturation du pré-mélanosome, le substrat amorphe s'organise en une structure fibrillaire orientée dans l'axe longitudinal du mélanosome. On distingue quatre stades du développement du mélanosome correspondant à l'intensité de la mélanisation. La mélanine est déposée uniformément sur le réseau fibrillaire interne du mélanosome et l'opacité de l'organelle augmente jusqu'à saturation. Au fur et à mesure de la synthèse de la mélanine dans les mélanosomes, ceux-ci se déplacent de la région périnucléaire vers l'extrémité des dendrites des mélanocytes. Par phagocytose, l'extrémité des dendrites est capturée par les kératinocytes, les membranes sont dégradées et le contenu en mélanine des mélanosomes est redistribué dans les kératinocytes. La mélanine est ainsi répartie dans l'épiderme, assurant son brunissement et sa protection.

Pour ce qui est de la couleur des cheveux et des poils, elle repose notamment sur la présence en quantités et ratios variables de deux groupes de mélanines : les eumélanines (pigments bruns à noirs) et les phéo-mélanines (pigments rouges à jaunes). La pigmentation du cheveu et des poils requiert la présence de mélanocytes au niveau du bulbe du follicule pileux. Le follicule pileux est une invagination tubulaire de l'épiderme qui s'enfonce jusqu'aux couches profondes du derme. La partie intérieure du bulbe est une zone de prolifération cellulaire où se trouvent les précurseurs des cellules kératinisées constituant le cheveu. Les mélanocytes au niveau du bulbe du follicule pileux sont dans un état actif, c'est-à-dire qu'ils synthétisent de la mélanine. Ces pigments sont transmis aux kératinocytes destinés à former la tige pilaire, ce qui conduira à la pousse d'un cheveu ou d'un poil pigmenté. Les mécanismes conduisant à la pigmentation de la peau et des fibres kératiniques, notamment des poils et des cheveux, sont des mécanismes hautement régulés, sous la dépendance de multiples facteurs hormonaux ou cellulaires.

L'homéostasie des mélanocytes, finement régulée par ces facteurs hormonaux ou cellulaires, permet de conférer à la peau et aux fibres kératiniques une pigmentation naturelle, homogène, plus ou moins intense, conférant un aspect esthétique et cosmétique attractif. Or, dans la plupart des populations, l'obtention d'une coloration brune de la peau et le maintien d'une coloration constante de la chevelure sont des aspirations importantes. Le maintien d'un teint bronzé et d'une chevelure naturellement pigmentée sont des facteurs fortement impliqués dans l'obtention d'un aspect cosmétique attractif. Par ailleurs, des modifications de la physiologie de l'épiderme et du follicule pileux, notamment liées à l'âge, peuvent altérer la pigmentation de la peau, des cheveux et des poils. En particulier, ces modifications peuvent se traduire par une dysrégulation de l'homéostasie des mélanocytes, se manifestant par des troubles de la prolifération, de la maturation ou de la survie, le cas échéant accompagné d'une anomalie ou d'un déséquilibre de la mélanogenèse. Il existe d'autre part des maladies de la pigmentation comme par exemple le vitiligo qui est une maladie auto-immune se caractérisant par l'apparition sur la peau de plaques blanches liées à un défaut de pigmentation.

Il existe donc un réel besoin de produit facilitant et/ou améliorant la pigmentation de la peau et/ou des poils et/ou des cheveux, et utilisable par voie topique. De nombreuses solutions ont été proposées dans le domaine de la coloration artificielle par apport de colorants exogènes, tels que la DHA, censés donner à la peau et/ou aux poils et/ou aux cheveux une coloration la plus proche possible de ce qu'elle est naturellement ou, dans le domaine de la coloration naturelle, par stimulation des voies naturelles de pigmentation, par exemple en utilisant des actifs stimulant la mélanogenèse avec ou sans action des UV. Il a ainsi été proposé d'utiliser des compositions contenant un inhibiteur de phosphodiestérases (WO 95/17161), des prostaglandines (WO 95/11003), des fragments d'ADN (WO 95/01773), de l'ADN codant des récepteurs de MSH (WO 94/04674), des diacylglycérols (WO 94/04122), des dérivés de tyrosine (EP 0585018), des extraits de ballote (WO 93/10804), ou des extraits de xanthine (WO 91/07945). Ces différents composés agissent, directement ou indirectement par l'intermédiaire de l'a-MSH ou des prostaglandines, de façon à stimuler la biosynthèse de la mélanine, avec ou sans action des UV. D'excellents résultats sont certes obtenus par les solutions proposées dans l'état de la technique, mais les composés utilisés présentent souvent des effets secondaires non négligeables ou sont des mélanges complexes qui ne présentent pas de spécificité.

La découverte de substances alternatives ayant un effet sur la pigmentation de la peau et/ou des poils et/ou des cheveux reste donc un objectif majeur de la recherche. En particulier, il existe toujours un besoin de disposer d'actifs alternatifs, en particulier cosmétiques, pouvant de préférence être administrés par voie topique, qui induisent physiologiquement la pigmentation.

Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs favorisant la mélanogenèse. Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs permettant de réguler la synthèse ou l'accumulation de mélanine dans l'épiderme. Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs permettant d'augmenter les dépôts de mélanine dans les cheveux et/ou les poils. Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs pour faciliter et/ou améliorer la pigmentation de la peau et/ou des poils et/ou des cheveux dans le domaine de la dermatologie et de la cosmétique. Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs utiles pour prévenir et/ou limiter et/ou stopper le développement de la canitie, voire maintenir la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris ou blancs.

La présente invention a notamment pour objet de satisfaire ces besoins. Les microorganismes probiotiques, des microorganismes pouvant avoir un effet positif sur la santé du sujet qui les ingère, sont largement utilisés dans le domaine de la cosmétique. Ainsi, la demande FR 2 756 181 décrit l'utilisation de compositions cosmétiques à base de culture inactivée de bactéries de type Bifidobacterium, d'huile de menthe et d'un acide pour éliminer les tâches pigmentaires. La demande EP 1 110 555 décrit l'utilisation d'un agent bactérien, par exemple d'un extrait de bactéries Bifidobacterium, pour stabiliser et/ou régénérer l'écosystème cutané des mammifères, et traiter, entre autres, le pityriasis versicolor. La demande FR 2 912 917 décrit l'utilisation d'un milieu de culture conditionné, obtenu par contact avec des cellules du sang périphérique stimulées par des probiotiques, pour traiter des signes de l'inflammation et/ou des désordres immunitaires, tels que les hyperpigmentations inflammatoires, le vitiligo ou la canitie. La demande WO 2008/015343 décrit l'utilisation d'extraits de levure pour augmenter la synthèse de mélanine, et traiter le vitiligo et la canitie. La demande WO 2007/073122 décrit l'utilisation d'un son de riz fermenté avec une bactérie lactique pour blanchir la peau en empêchant la synthèse de mélanine.

La demande US 2002/0168388 décrit l'utilisation de compositions comprenant des bactéries inactivées et un extrait de matrice extracellulaire de plante pour contrer les dommages induits par les radiations UV. La demande WO 02/28402 décrit l'utilisation de compositions comprenant des probiotiques pour équilibrer la fonction immunitaire de la peau après exposition à des conditions de stress. La demande FR 2 834 718 décrit l'utilisation de substances actives obtenues par fermentation de semences végétales ou de fruits avec les bactéries Lactobacillus, Lactococcus ou Leuconostoc pour protéger la peau des effets nocifs des rayons UV et pour réguler la mélanogenèse dans la peau et les cheveux.

La demande FR 2 920 307 décrit l'utilisation de probiotiques pour traiter les manifestations d'inconfort et/ou de signes cutanés associées à un traitement cutané de surface, parmi lesquels le blanchiment de la peau. La demande FR 2 920 306 décrit l'utilisation d'un lysat de Bifidobacterium pour prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière cutanée, et ainsi prévenir et/ou diminuer des irritations cutanées ou les signes du vieillissement cutané.

La demande FR 2 920 300 décrit l'utilisation d'hespéridine en combinaison avec un probiotique pour renforcer la fonction barrière de la peau et ainsi traiter les signes cutanés du vieillissement. L'utilisation du probiotique Bifidobacterium comme agent pro-pigmentant n'a cependant pas été suggérée. Or les inventeurs ont ici montré de manière surprenante que les bactéries Bifidobacterium longum permettaient d'induire de manière significative la pigmentation cutanée ou capillaire. En particulier, cette souche de probiotique spécifique permet d'induire une pigmentation plus importante que d'autres types de probiotiques connus tels que les souches de Propionibacterium freudenreichii ou de Bacillus coagulans. La présente invention concerne donc l'utilisation cosmétique non-thérapeutique d'au moins une souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum comme agent induisant la pigmentation cutanée et/ou capillaire, pour homogénéiser la couleur de la peau et/ou des cheveux, en particulier pour prévenir et/ou traiter une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux, ladite au moins une souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum étant administrée par voie topique et ladite au moins une souche de Bifidobacterium longum n'étant pas la souche Bifidobacterium longum subsp. longum déposée le 29 janvier 2001 auprès de la CNCM (Paris, France) sous le numéro 1-2618.

Elle concerne également une souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum pour son utilisation, comme agent induisant la pigmentation cutanée et/ou capillaire, pour la prévention et/ou le traitement d'une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux d'origine pathologique, ladite souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum étant administrée par voie topique et ladite souche de Bifidobacterium longum n'étant pas la souche Bifidobacterium longum subsp. longum déposée le 29 janvier 2001 auprès de la CNCM (Paris, France) sous le numéro 1-2618. Description détaillée de l'invention Bifidobacterium longum La souche de bactérie Bifidobacterium longum utilisée dans le cadre de la présente invention est un microorganisme probiotique. On entend par "microorganisme probiotique" un microorganisme vivant qui, lorsqu'il est administré en quantité adéquate, a un effet positif sur la santé de son hôte ("Joint FAO/WHO Expert 10 Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotic in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria, 6 octobre 2001"). Au sens de la présente invention, le microorganisme envisagé peut être utilisé vivant, ou inactivé, incapable de se répliquer. On peut également utiliser une fraction de celui-ci ou l'un des composants de ce microorganisme. Selon une variante de l'invention, le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum utilisé dans le cadre de l'invention peut être mis en oeuvre sous une forme isolée ou purifiée, c'est-à-dire non mélangée à un ou des composé(s) susceptible(s) de lui être associé(s) dans son milieu d'origine ou dans son milieu de propagation.

Selon une variante de l'invention, le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum utilisé dans le cadre de l'invention peut être mis en oeuvre sous une forme vivante, semi-active, inactivée ou morte. En particulier, le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum utilisé dns le cadre de l'invention peut être mis en oeuvre sous une forme vivante ou inactivée.

Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum peut être mis en oeuvre sous forme inactivée ou morte. Au sens de l'invention, un microorganisme "inactivé" est un microorganisme qui n'est plus capable, temporairement ou définitivement, de former des colonies en culture.

Au sens de l'invention, un microorganisme "mort" est un microorganisme qui n'est plus capable, définitivement, de former des colonies en culture. Les microorganismes morts ou inactivés peuvent avoir les membranes cellulaires intactes ou rompues. Ainsi le terme "inactivé" désigne également les extraits et les lysats de microorganismes comme détaillés ci-après. L'obtention de microorganismes morts ou inactivés peut être effectuée par toute méthode connue de l'homme du métier. Selon un mode de réalisation avantageux, les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum mis en oeuvre selon l'invention sont au moins en partie inactivés ou morts. Par "microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum au moins en partie inactivés", on désigne une préparation de microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum conformes à l'invention comprenant au moins 80 (3/0, en particulier au moins 85 (3/0, plus particulièrement au moins 90 (3/0, voire au moins 95 (3/0, au moins 99 (3/0, ou au moins 99,99 (3/0 de microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum inactivés exprimés en unité formant colonie (ufc) par rapport à la totalité des microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum vivants non inactivés contenus dans la préparation initiale avant d'être soumise à un procédé d'inactivation. Le taux d'inactivation obtenu dépend des conditions d'application de la méthode d'inactivation qui sont ajustées par l'homme du métier selon le taux d'inactivation à obtenir. Selon un mode de réalisation, l'invention comprend la mise en oeuvre d'une préparation comprenant un maximum, de préférence 100%, de microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum inactivés.

Un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum inactivé convenant à l'invention peut être préparé par irradiation, traitement thermique ou lyophilisation d'une préparation de microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum. Ces méthodes sont connues de l'homme du métier. D'autres techniques connues parmi lesquelles le traitement haute pression ou l'extrusion peuvent également être envisagées par l'homme du métier. Plus particulièrement, l'inactivation de microorganismes probiotiques par irradiation peut comprendre la mise en oeuvre de rayons gamma, de rayons X ou une exposition aux UV. Le type de rayonnement, l'intensité, la dose et le temps d'exposition sont ajustés par l'homme du métier selon la quantité et la nature des microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum à inactiver. L'inactivation thermique peut être réalisée en incubant les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum de l'invention pendant une période de temps donnée, par exemple de 10 s à 90 min à une température de 100 à 150°C. Selon le microorganisme à inactiver, on peut envisager un traitement plus long, par exemple 2 h, à 170°C. L'inactivation thermique peut également être opérée par autoclavage en soumettant les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum de l'invention à une température de 121°C, pendant au moins 20 minutes et à une pression atmosphérique de 2 bars.

Alternativement, l'inactivation thermique peut être effectuée en soumettant les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum à une température de congélation, pendant une période de temps prolongée, ou à une série de cycles de congélation-décongélation. L'inactivation par lyophilisation peut être effectuée par toute méthode connue dans le domaine. Avantageusement, des microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum inactivés par lyophilisation peuvent être remis en culture. De préférence, un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum convenant à l'invention est mis en oeuvre sous une forme inactivée obtenue par irradiation, notamment par irradiation gamma.

Un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum selon l'invention peut être mis en oeuvre sous forme entière, c'est-à-dire pour l'essentiel dans sa forme native, ou sous forme d'extraits ou de lysats comprenant des fractions et/ou des métabolites de ce microorganisme. Au sens de l'invention, le terme "fraction" désigne un fragment ou composant dudit microorganisme doté d'une efficacité d'induction de la synthèse de mélanine par analogie audit microorganisme entier. Au sens de l'invention, le terme "métabolite" désigne toute substance issue du métabolisme des microorganismes, et notamment secrétée par les microorganismes Bifidobacterium longum considérés selon l'invention et dotée également d'une efficacité d'induction de la synthèse de mélanine.

Au sens de l'invention, on entend par "extrait" une préparation contenant des microorganismes inactivés dont la structure cellulaire n'a pas subi de destruction ou de dissolution. Les cellules biologiques ne sont dans l'ensemble pas fragmentées. Un extrait ou un lysat convenant à l'invention peut être préparé à partir de bactéries Bifidobacterium longum en fin de phase de croissance.

Selon un mode de réalisation, un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum convenant à l'invention peut être préparé sous forme d'un lysat. Un lysat au sens de l'invention désigne communément un matériau obtenu à l'issue de la destruction ou dissolution de cellules biologiques par un phénomène dit de lyse cellulaire provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires naturellement contenus dans les cellules du microorganisme considéré et de fragments de composants de membrane cellulaire. Au sens de la présente invention, le terme "lysat" est utilisé indifféremment pour désigner l'intégralité du lysat obtenu par inactivation du microorganisme concerné ou seulement une fraction de celui-ci. Le lysat mis en oeuvre est donc formé en tout ou partie des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires du microorganisme probiotique Bifidobacterium longum d'intérêt. On peut avantageusement utiliser dans le cadre de l'invention : - un extrait contenant des microorganismes inactivés de la souche de microorganisme concernée, ou - un lysat obtenu par lyse ou inactivation du microorganisme concerné. Cette inactivation cellulaire pour l'obtention d'un extrait ou d'un lysat peut être accomplie par différentes technologies, telles que par exemple un choc osmotique, un choc thermique, par ultrasons, ou encore sous contrainte mécanique de type centrifugation, ou des combinaisons de ces différentes technologies.

Plus particulièrement, ce lysat peut être obtenu selon la technologie décrite dans le brevet US 4,464,362, et notamment selon le protocole suivant.

Un microorganisme probiotique considéré est cultivé anaérobiquement dans un milieu de culture adéquat, par exemple selon les conditions décrites dans US 4,464,362 et EP 0 043 128. Lorsque la phase stationnaire du développement est atteinte, le milieu de culture peut être inactivé par pasteurisation, par exemple à une température de 60 à 65°C pendant 30 min. Les microorganismes peuvent alors être recueillis par une technique de séparation conventionnelle, par exemple filtration membranaire, centrifugés et remis en suspension dans une solution stérile de NaCI à une concentration physiologique. Dans le cas d'un lysat, celui-ci peut ensuite être obtenu par désintégration aux ultrasons d'un tel milieu afin de libérer les fractions cytoplasmiques, les fragments de paroi cellulaire et certains produits issus du métabolisme de ces microorganismes. Puis tous les composants dans leur distribution naturelle peuvent être stabilisés dans une solution aqueuse faiblement acide. On peut ainsi obtenir un lysat possédant une concentration de l'ordre de 0,1 à 50%, en particulier de 1 à 20% et notamment environ 5% en poids de matière(s) active(s) par rapport à son poids total. Selon une alternative possible à la technologie décrite ci-dessus, la centrifugation peut être appliquée en fin de fermentation (en début de phase stationnaire) avant le traitement thermique. Il est également envisageable de récupérer les microorganismes et le surnageant et de réaliser ultérieurement le traitement thermique, l'ensemble pouvant ensuite être séché. L'extrait ou le lysat peut être mis en oeuvre sous différentes formes, tel que sous la forme d'une solution ou sous une forme pulvérulente, de préférence sous la forme d'une solution. La conservation sous forme liquide peut nécessiter l'application d'un traitement de stabilisation tel qu'un traitement à ultra haute température (UHT). Toute méthode de stabilisation des liquides connue de l'homme de métier peut être envisagée pour la solution ou suspension de Bifidobacterium longum. Le lysat de Bifidobacterium longum utilisé dans le cadre de l'invention peut avantageusement être le lysat enregistré sous le nom INCI : Bifidat ferment Lysate, sous le nom EINECS : Bifidobacterium longum, sous le N° EINECS : N°306-168-4 et sous le N° CAS : N°96507-89-0. Le produit commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR® par la société K. RICHTER GmbH et qui est formé d'un lysat inactivé de l'espèce Bifidobacterium longum est particulièrement approprié pour la mise en oeuvre de l'invention.

Les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum incluent les sous- espèces Bifidobacterium longum subsp. infantis, Bifidobacterium longum subsp. longum, et Bifidobacterium longum subsp. suis. Des exemples de souches de Bifidobacterium longum appropriés incluent les souches Bifidobacterium longum subsp. longum BOR1, Bifidobacterium longum subsp. longum DJ010A, Bifidobacterium longum subsp. longum JDM301, Bifidobacterium longum subsp. longum M58739, Bifidobacterium longum subsp. infantis 157F-NC, Bifidobacterium longum subsp. infantis ATCC 15697, Bifidobacterium longum subsp. infantis ATCC 55813, Bifidobacterium longum subsp. infantis CCUG 52486, Bifidobacterium longum subsp. infantis JCM1217, Bifidobacterium longum subsp. infantis JCM1222, Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bifidobacterium longum FERM BP-7787, Bifidobacterium longum ATCC 15707, Bifidobacterium longum ATCC 15708, Bifidobacterium longum ATCC 55817, Bifidobacterium longum FERM P-6548, Bifidobacterium longum CNCM 1-1228, la souche Bifidobacterium longum déposée suivant le traité de Budapest auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM, Institut Pasteur, 28 rue du Dr Roux, 75724 Paris Cedex 15, France) sous le numéro CNCM 1-2170, et la souche Bifidobacterium longum BB536. De préférence, la souche de Bifidobacterium longum utilisée dans le cadre de l'invention n'est pas la souche Bifidobacterium longum subsp. longum déposée le 29 janvier 2001 auprès de la CNCM (Paris, France) sous le numéro 1-2618. De préférence, la souche de Bifidobacterium longum utilisée dans le cadre de l'invention est la souche Bifidobacterium longum BB536. Un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum utilisé dans le cadre de l'invention peut être formulé dans une composition à raison d'au moins 0,0001 (3/0 exprimé en poids sec, en particulier à raison de 0,0001 à 20 (3/0 et plus particulièrement à raison de 0,001 à 15 (3/0, en particulier de 0,01 à 10 (3/0, et notamment de 0,1 à 2 (3/0 par rapport au poids sec total de la composition le contenant. Un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum utilisé dans le cadre de l'invention peut en particulier être formulé dans une composition destinée à être administrée par voie orale ou topique. D'une manière générale, une composition à application topique selon l'invention, peut comprendre généralement de 103 à 1012 ufc/g, en particulier de 105 à 1010 ufc/g et plus particulièrement de 107 à 109 ufc/g de microorganismes Bifidobacterium longum vivants par gramme de support ou à des doses équivalentes calculées pour les microorganismes Bifidobacterium longum inactivés ou morts ou pour des fractions de microorganisme Bifidobacterium longum ou pour des métabolites produits.

Il peut être avantageux de mettre en oeuvre des microorganismes Bifidobacterium longum sous forme inactivée, voire morte, se présentant notamment sous la forme d'un lysat ou d'un extrait cellulaire, contenant typiquement des fragments cellulaires et des métabolites.

Un microorganisme Bifidobacterium longum peut également être inclus dans une composition sous forme de fractions de composants cellulaires ou sous la forme de métabolites, en particulier sous la forme d'un extrait ou sous la forme d'un lysat. Le ou le(s) microorganisme(s) Bifidobacterium longum, métabolite(s) ou fraction(s) peu(ven)t également être introduit(s) sous la forme d'une poudre lyophilisée, d'un surnageant de culture et/ou le cas échéant sous une forme concentrée. Lorsqu'une composition comprend des métabolites, les teneurs en métabolites dans les compositions correspondent sensiblement aux teneurs susceptibles d'être produites par l'équivalent de 103 à 1015 ufc, en particulier 105 à 1015 ufc, et plus particulièrement 107 à 1012 ufc de microorganismes Bifidobacterium longum vivants par gramme de support. L'expression de la quantité de métabolites ou de fractions d'un microorganisme en "ufc", ou de microorganismes morts, vise à désigner la quantité de ce microorganisme nécessaire à la production de ladite quantité de métabolites ou de fractions de microorganismes.

Composition cosmétique Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, ladite au moins une souche de Bifidobacterium longum, telle que définie à la section "Bifidobacterium longum" ci-dessus, est formulée dans une composition cosmétique comprenant en outre un véhicule cosmétiquement acceptable. Par "véhicule cosmétiquement acceptable", on entend ici un milieu sans odeur ou aspect désagréable, et qui ne génère pas de picotement, de tiraillement ou de rougeur inacceptable pour l'utilisateur, lors de son administration, en particulier lors de son application topique sur la peau ou ses annexes.

Le véhicule cosmétiquement acceptable sera adapté à la voie d'administration topique de la composition, en particulier à la nature du support sur lequel doit être appliquée la composition, ainsi qu'a la forme sous laquelle la composition est destinée à être conditionnée, notamment solide ou fluide à température ambiante et pression atmosphérique.

La composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour le mode d'administration par voie topique. Une composition destinée à une administration par voie topique peut être une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, une solution ou dispersion du type lotion ou sérum, une émulsion de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenue par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), une suspension ou une émulsion, de consistance molle, semi-solide ou solide, du type crème ou du type gel aqueux ou anhydre, une émulsion multiple (E/H/E ou H/E/H), une microémulsion, une nano-émulsion, une préparation de microcapsules, une préparation de microparticules, ou une dispersion vésiculaire de type ionique et/ou non ionique, ou une dispersion cire/phase aqueuse. Elle peut également se présenter sous la forme d'un système transdermique permettant une libération active ou passive du/des actif(s) par transdermie, par exemple de type patch ou gel patch (hydrogel), ou par injection. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles. Une composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention peut constituer une composition de traitement ou de soin de la peau ou du cuir chevelu, des fibres kératiniques comme les cheveux, les cils ou les sourcils, ou une composition de protection solaire ou de bronzage artificiel, ou encore un produit nettoyant ou démaquillant de la peau, des cheveux, des sourcils ou des cils, un produit déodorant ou encore un composé parfumant. De préférence, la composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention est une composition de protection solaire ou de bronzage artificiel. Une telle composition peut être alors non colorée ou faiblement colorée, et peut contenir éventuellement des actifs cosmétiques additionnels, notamment comme indiqué ci-après. Elle peut alors être utilisée comme base de soin pour la peau ou les lèvres, par exemple sous forme d'un baume à lèvres, protégeant les lèvres du froid et/ou du soleil et/ou du vent, comme une crème de soin de jour ou de nuit pour la peau du visage et/ou du corps.

Elle peut également se présenter sous forme de shampooing traitant ou non, colorant ou non, ou d'après-shampooing. Une composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention peut également constituer une composition cosmétique colorée et notamment une composition de maquillage de la peau, des fibres kératiniques, notamment les cheveux ou les cils, et/ou des muqueuses, en particulier une telle composition peut être un fond de teint, un blush, un fard à joues ou à paupières, un composé anti-cernes en stick, un rouge à lèvres ou un brillant à lèvres, présentant éventuellement des propriétés de soin ou de traitement. De préférence, il pourra s'agir d'une composition de maquillage colorée (beige ou verte) destinée à corriger la couleur du teint. Une composition administrée par voie topique peut notamment constituer une crème de nettoyage, de protection, de traitement ou de soin, une lotion, un gel ou une mousse pour le soin de la peau ou des cheveux, comme une lotion de nettoyage ou de désinfection, une composition pour le bain ou une composition déodorante. Une composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention peut également consister en une préparation solide constituant un savon ou un pain de nettoyage.

Selon un mode de réalisation de l'invention, une composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention peut être avantageusement formulée pour être administrée sur le cuir chevelu, les cheveux et les cils, et en particulier être préparée sous forme d'une solution, d'une crème, d'un gel, d'une émulsion, d'une mousse ou encore sous forme d'une composition pour aérosol contenant également un agent propulseur sous pression.

Selon un mode de réalisation, une composition cosmétique par voie topique utilisée dans le cadre de l'invention peut avantageusement être formulée sous toute forme galénique convenant au soin capillaire, notamment sous forme d'une lotion de soin capillaire, par exemple d'application journalière ou bi-hebdomadaire, d'un shampoing, notamment antipelliculaire, d'un après-shampoing, en particulier d'application hebdomadaire ou bi-hebdomadaire, d'un démêlant, d'une crème ou d'un gel capillaire, d'une lotion traitante, d'une composition de teinture (notamment d'oxydation) éventuellement sous forme de shampooing colorant, d'une lotion restructurante pour cheveux, d'une composition de permanente, d'une lotion ou d'un gel antichute, d'un shampoing antiparasitaire, ou d'un shampoing traitant, notamment anti-séborrhéique, d'un produit de soin du scalp notamment anti-irritant, anti-âge, restructurant, ou activateur de la circulation sanguine, d'un savon liquide ou solide de nettoyage du cuir chevelu d'application journalière, d'un produit de mise en forme de la coiffure, comme une laque, un produit de mise en pli ou un gel coiffant, d'un masque traitant, d'une crème ou d'un gel moussant de nettoyage des cheveux, ou d'un mascara capillaire à appliquer au pinceau ou au peigne. Selon un mode de réalisation, pour une application sur les cils ou les poils, une composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention peut se présenter sous forme d'un mascara, pigmenté ou non, à appliquer à la brosse sur les cils ou encore sur les poils de barbe ou de moustache.

Selon un mode de réalisation particulier, une composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention peut se présenter sous forme d'une crème ou d'une lotion capillaire, d'un shampooing ou d'un après-shampooing capillaire, d'un mascara capillaire ou pour les cils. Lorsqu'une composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 à 80% en poids, et de préférence de 10 à 50% en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les émulsionnants et les coémulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine cosmétique. L'émulsionnant et le coémulsionnant peuvent être présents, dans la composition cosmétique, en une proportion allant de 0,3 à 30% en poids, et de préférence de 0,5 à 20% en poids par rapport au poids total de la composition. Lorsque la composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention est une solution ou un gel huileux, la phase grasse peut représenter plus de 90% du poids total de la composition. De façon connue, les formes galéniques dédiées à une administration topique peuvent contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine cosmétique, et par exemple de 0,01 à 20% du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse et/ou dans la phase aqueuse. Comme matières grasses utilisables dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans la cadre de l'invention, on peut citer les huiles minérales comme par exemple le polyisobutène hydrogéné et l'huile de vaseline, les huiles végétales comme par exemple une fraction liquide du beurre de karité, l'huile de tournesol et d'amandes d'abricot, les huiles animales comme par exemple le perhydrosqualène, les huiles de synthèse notamment l'huile de Purcellin, le myristate d'isopropyle et le palmitate d'éthyl hexyle, les acides gras insaturés et les huiles fluorées comme par exemple les perfluoropolyéthers. On peut aussi utiliser des alcools gras, des acides gras comme par exemple l'acide stéarique et comme par exemple des cires notamment de paraffine, de carnauba et la cire d'abeilles. On peut aussi utiliser des composés silicones comme les huiles siliconées et par exemple les cyclométhicone et diméth icone, les cires, les résines et les gommes siliconées.

Comme émulsionnants utilisables dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le cadre de l'invention, on peut citer par exemple le stéarate de glycérol, le polysorbate 60, le mélange alcool cétylstéarylique/alcool cétylstéarylique oxyéthyléné à 33 moles d'oxyde d'éthylène vendu sous la dénomination Sinnowax AO® par la société HENKEL, le mélange de PEG-6/PEG-32/Glycol Stéarate vendu sous la dénomination de Tefose® 63 par société GATTEFOSSE, le PPG-3 myristyl éther, les émulsionnants silicones tels que le cétyldiméthicone copolyol et le mono- ou tristéarate de sorbitane, le stéarate de PEG-40, le monostéarate de sorbitane oxyéthyléné (200E). Comme solvants utilisables dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le cadre de l'invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment l'éthanol et l'isopropanol, le propylène glycol.

La composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention peut également contenir de façon avantageuse une eau thermale et/ou minérale, notamment choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy et l'eau de la Roche Posay. Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer les polymères carboxyliques tel que le carbomer, les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides et notamment le mélange de polyacrylamide, C13-14 lsoparaffine et Laureth-7 vendu sous le nom de Sepigel 305® par la société SEPPIC, les polysaccharides comme les dérivés cellulosiques tels que les hydroxyalkylcelluloses et en particulier les hydroxypropylcellulose et hydroxyéthylcellulose, les gommes naturelles telles que les guar, caroube et xanthane et les argiles.

Comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras comme les stéarates d'aluminium et la silice hydrophobe, ou encore l'éthylcellulose et le polyéthylène. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, la composition cosmétique telle que définie ci-dessus comprend en outre un actif cosmétique additionnel.

Avantageusement, un tel actif additionnel peut être destiné à exercer un effet cosmétique, de soin ou d'hygiène sur la peau, les cheveux, les cils, les poils et/ou le cuir chevelu. Les actifs additionnels sont choisis par l'homme du métier de telle sorte qu'ils ne nuisent pas à l'effet des microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum de l'invention. Selon une variante de réalisation, un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum, tel que défini ci-dessus à la section "Bifidobacterium longum", peut être avantageusement mis en oeuvre avec, à titre d'actif additionnel, un microorganisme non probiotique, en particulier la souche Vitreoscilla filiformis.

Un tel microorganisme non probiotique peut être mise en oeuvre sous forme vivante, semi-active, inactivée ou morte, notamment comme défini à la section "Bifidobacterium longum" ci-dessus. En particulier, un microorganisme de type Vitreoscilla filiformis, tel que décrit notamment dans la demande de brevet FR 0 625 782, peut être mis en oeuvre sous une forme vivante ou sous une forme de lysat fractionné ou complet avec son milieu de culture après évapo-concentration de la composition en H20.

La composition cosmétique mise en oeuvre dans le cadre de l'invention peut en outre comprendre tous les additifs cosmétiques usuels tels que l'eau, les solvants, les huiles, les cires, les pigments, les charges, les tensioactifs, les actifs cosmétiques, les filtres UV, les polymères, les gélifiants, les conservateurs et les parfums. Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir ce ou ces éventuels composés complémentaires, et/ou leur quantité, de manière telle que les propriétés avantageuses des constituants actifs de la composition selon l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées par l'adjonction envisagée. De préférence, la composition cosmétique mise en oeuvre dans le cadre de l'invention comprend en outre des filtres UV.

Utilisation cosmétique non-thérapeutique De manière surprenante, les inventeurs ont observé que l'application de microorganismes probiotiques de type Bifidobacterium longum régule l'homéostasie des mélanocytes, en favorisant la synthèse de mélanine, de manière plus efficace que d'autres microorganismes probiotiques tels que Propionibacterium freudenreichii ou Bacillus coagulans. Ainsi la pigmentation naturelle de la peau, des poils et des cheveux s'en trouvent renforcée. La pigmentation cutanée ou capillaire ainsi obtenue est avantageusement homogène. La présente invention concerne plus particulièrement l'utilisation cosmétique non- thérapeutique d'une souche de Bifidobacterium longum, telle que définie à la section "Bifidobacterium longum" ci-dessus, éventuellement formulée dans une composition cosmétique telle que définie à la section "Composition cosmétique" ci-dessus, comme agent induisant la pigmentation cutanée et/ou capillaire, pour induire physiologiquement la pigmentation et ainsi en particulier prévenir et/ou traiter une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux, ladite souche de Bifidobacterium longum étant administrée par voie topique. La composition cosmétique mise en oeuvre dans le cadre de l'invention peut en particulier être utilisée chez des sujets sains, typiquement des sujets ne présentant pas d'altérations de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux d'origine pathologique.

Elle peut, en particulier chez des sujets sains, être utilisée comme agent de bronzage, avantageusement comme agent de bronzage indépendant de la lumière du soleil et/ou des rayons UV, ou pour accélérer et/ou intensifier le bronzage. Elle peut également, en particulier chez ces sujets sains, être utilisée pour rendre le teint et/ou la couleur du teint plus homogène. La composition cosmétique mise en oeuvre dans le cadre de l'invention peut également être utilisée pour prévenir et/ou traiter cosmétiquement un défaut de pigmentation cutanée et/ou capillaire résultant d'un déséquilibre de l'homéostasie des mélanocytes.

Le déséquilibre de l'homéostasie des mélanocytes peut être un déséquilibre de la prolifération et/ou de la maturation et/ou de la survie des mélanocytes. La prolifération, la maturation et la survie concernent les différents stades de vie d'une cellule d'un tissu d'un organisme, i.e. sa division à partir d'une cellule souche ou d'une cellule mère, sa différentiation lui permettant l'acquisition de caractères propres au tissu dans lequel elle s'inscrit, comme par exemple l'expression des différentes enzymes et protéines nécessaires à la mélanogenèse, et son maintien jusqu'à sa sénescence et à l'apoptose. Une dysrégulation de ces étapes peut se traduire par un déséquilibre de la répartition des mélanocytes dans l'épiderme ou dans le follicule, ou un déséquilibre de la mélanogenèse affectant par exemple la couleur naturelle de l'épiderme, des cheveux ou des poils. Dans un mode de réalisation particulier, les défauts de pigmentation concernés par l'invention résultent d'un déséquilibre de la mélanogenèse. Le déséquilibre de l'homéostasie des mélanocytes se traduisant par les défauts de pigmentation concernés par l'invention peuvent également être associés au vieillissement cutané ou du cuir chevelu, et en particulier être aggravés par ce vieillissement. Les troubles de la pigmentation concernés par l'invention peuvent concerner l'épiderme, le cuir chevelu, les cheveux, les poils ou les cils. A titre de défauts de pigmentation capillaire cosmétiques visés par l'invention, on peut en particulier citer la canitie.

La canitie est un blanchiment naturel des cheveux qui apparaît avec l'âge, et est principalement associée à une diminution de mélanine dans la tige pilaire. Plus précisément, la canitie est liée à une raréfaction spécifique et progressive des mélanocytes des cheveux, affectant à la fois les mélanocytes du bulbe pileux et les cellules précurseurs de mélanocytes. Avantageusement, la mise en oeuvre de l'invention permet de réduire, voire de freiner ou retarder l'apparition des cheveux blancs et le grisonnement de la chevelure. Avantageusement, la présente invention permet de stimuler, voire de réactiver, la mélanogenèse, afin de retarder, de réduire, voire de diminuer la canitie. La composition mise en oeuvre dans le cadre de l'invention peut également être utilisée chez des sujets présentant des altérations de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux, en particulier des sujets présentant des défauts de pigmentation cutanée et/ou capillaire cosmétiques liés à une accumulation, notamment hétérogène, de mélanine, pour homogénéiser la couleur de la peau et/ou des cheveux. De tels défauts de pigmentation cutanée et/ou capillaire liés à une accumulation hétérogène de mélanine incluent le mélasma, les séquelles pigmentaires d'acné, la pigmentation post-inflammatoire, les dépigmentations dues aux brûlures ou à la chirurgie et les dyschromies bénignes du visage. Dans ces applications, les compositions mises en oeuvre dans le cadre de l'invention permettent de diminuer les dyschromies observées et d'homogénéiser la couleur de la peau, en particulier en augmentant ou améliorant la pigmentation de la peau autour des zones hyperpigmentées et/ou en augmentant ou améliorant la pigmentation de la peau au niveau des zones hypopigmentées. De préférence, l'altération de l'homogénéité de la peau et/ou des cheveux visée par la présente invention est sélectionnée dans le groupe constitué de la canitie, le mélasma, les séquelles pigmentaires d'acné, la pigmentation post-inflammatoire, les dépigmentations dues aux brûlures ou à la chirurgie et les dyschromies bénignes du visage. La présente invention concerne également un procédé de traitement cosmétique non-thérapeutique pour induire physiologiquement la pigmentation de la peau et/ou des cheveux, et ainsi homogénéiser la couleur de la peau et/ou des cheveux, et en particulier prévenir et/ou traiter une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux, dans laquelle on administre à un sujet par voie topique une quantité cosmétiquement efficace d'une souche de Bifidobacterium longum, telle que définie à la section "Bifidobacterium longum" ci-dessus, éventuellement formulée dans une composition cosmétique telle que définie dans la section "Composition cosmétique" ci- dessus. Par "quantité cosmétiquement efficace", on entend ici une quantité suffisante des agents utilisés dans le cadre de l'invention afin de traiter et/ou prévenir ledit désordre cosmétique, qui ne génère pas d'effets secondaires inacceptables pour l'utilisateur. Cette souche de Bifidobacterium longum, éventuellement formulée dans une composition cosmétique, est administrée par voie topique.

Avantageusement, l'application de la composition cosmétique se fait par exemple sous forme de masque, sur la peau, le cuir chevelu ou les cheveux. La souche de Bifidobacterium longum, éventuellement formulée dans une composition cosmétique, mise en oeuvre dans le cadre de l'invention peut en particulier être appliquée sur le visage ou sur le corps. Applications thérapeutiques La présente invention concerne également une méthode de prévention et/ou de traitement d'une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux d'origine pathologique chez un sujet, comprenant l'administration par voie topique chez un sujet qui en a besoin d'une quantité thérapeutiquement efficace d'une souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum telle que définie à la section "Bifidobacterium longum" ci-dessus. La présente invention concerne également l'utilisation d'une souche de Bifidobacterium longum telle que définie à la section "Bifidobacterium longum" ci-dessus, pour la fabrication d'une composition pharmaceutique, administrable par voie topique, destinée à la prévention et/ou au traitement d'une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux d'origine pathologique. Tel qu'utilisé dans le cadre des modes de réalisation de l'invention associés à une utilisation thérapeutique des microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum définis à la section "Bifidobacterium longum" ci-dessus, le terme "altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux d'origine pathologique" fait référence à une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux observée lors d'affections dermatologiques, résultant d'un déficit ou d'une absence de mélanine ou d'une répartition hétérogène de mélanine, en particulier une dyspigmentation. On entend par "dyspigmentation", une anomalie d'origine pathologique dans la formation ou la distribution de mélanine au niveau cutané ou capillaire. Les maladies cutanées et/ou capillaires de la pigmentation s'écartent du champ cosmétique par le degré de gravité et l'intensité des symptômes par lesquels elles se manifestent. Dans le cas d'altérations résultant d'un déficit ou d'une absence de mélanine, les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum définis ci-dessus permettront d'homogénéiser la couleur de la peau, en particulier en augmentant et/ou améliorant la pigmentation de la peau au niveau des zones dépigmentées ou hypopigmentées.

De telles altérations incluent en particulier les altérations de l'homogénéité de la couleur de la peau associées au vitiligo. Dans le cas d'altérations résultant d'un excès de mélanine, les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum définis ci-dessus permettront d'homogénéiser la couleur de la peau, en particulier en augmentant et/ou améliorant la pigmentation de la peau autour des zones hyperpigmentées. De telles altérations incluent en particulier les altérations de l'homogénéité de la couleur de la peau ou du teint associées à la dermite des prés ou aux lentigos actiniques. Selon un mode de réalisation, les altérations de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux d'origine pathologique sont choisies parmi le lentigo actinique, la dermite des prés et le vitiligo. Dans la description et dans les exemples suivants, sauf indication contraire, les pourcentages sont des pourcentages en poids et les plages de valeurs libellées sous la forme "entre ... et ..." incluent les bornes inférieure et supérieure précisées. Les ingrédients sont mélangés, avant leur mise en forme, dans l'ordre et dans des conditions facilement déterminées par l'homme du métier. La teneur et la nature des ingrédients mis en oeuvre dans les compositions de l'invention sont ajustées par l'homme du métier de manière à ne pas affecter substantiellement les propriétés requises pour les compositions de l'invention. Les exemples ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif du domaine de l'invention.

Brève description de la figure La Figure est un ensemble d'histogrammes montrant le niveau de mélanine, en pourcentage par rapport au témoin, quantifié dans des co-cultures de kératinocytes primaires (NHEK) et mélanocytes primaires (NHEM) incubées pendant 72 h avec un milieu de culture seul (témoin), de l'IBMX à 200 pM (IBMX) comme contrôle positif, un lysat de Bifidobacterium longum (B. longum CLR 1%), un lysat de Propionibacterium freudenreichii (P. freundenreichii 0,2%) et un lysat de Bacillus coagulans (B. coagulans 0,2 mg/m1).

Exemples Exemple 1 : Induction de la synthèse de mélanine par Bifidobacterium longum Cet exemple démontre l'activité pro-pigmentante du microorganisme probiotique Bifidobacterium longum. Matériel et méthodes Des mélanocytes humains primaires (NHEM) on été ensemencés en plaques 24- puits en présence (co-culture) de kératinocytes épidermiques humains normaux (NHEK) puis cultivés pendant 24 h. Les cellules ont ensuite été traitées avec rien (témoin négatif), IBMX (témoin positif, 200 pM), un extrait de Bifidobacterium longum (Repair Complex CLR® 1%), un extrait de Propionibacterium freudenreichii (0,2%) ou un extrait de Bacillus coagulans (2 mg/mi).

Après traitement, les cellules on été incubées pendant 72 h, toutes les conditions expérimentales ayant été réalisées en triplicat. Après 72 h d'incubation, les cellules ont été lysées par une solution de NaOH 0,5 N afin d'extraire la mélanine. La densité optique des échantillons a été mesurée à 405 nm, en référence à une gamme de mélanine exogène (courbe de mélanine standard 0,39 à 100 pg/ml).

Les résultats sont exprimés en pourcentage de stimulation relative par rapport au témoin cultivé en milieu de co-culture standard. Ils ont été analysés avec le test statistique de Student : * : 0,01 <p 0,05 significatif ; ** : 0,001 <p 0,01 très significatif ; *** : p < 0,001 extrêmement significatif Résultats Les inventeurs ont ainsi montré que l'incubation de co-cultures NHEK/NHEM avec des lysats de microorganismes probiotiques permettait d'augmenter de manière significative la production de mélanine par les mélanocytes par rapport à des co-cultures non-traitées (voir Figure). Ils ont en outre montré, de manière surprenante, que l'utilisation spécifique de lysats de souches de Bifidobacterium longum permettait d'accroître de manière encore plus importante la production de mélanine par rapport à l'utilisation de lysats d'autres probiotiques tels que P. freudenreichii ou B. coagulans. En effet, l'incubation des co- cultures NHEK/NHEM avec des lysats de B. longum CLR induit une augmentation de la production de mélanine d'environ 1,4 fois par rapport à un contrôle non-traité, tandis que les lysats de P. freudenreichii et de B. coagulans ne permettent d'atteindre qu'une augmentation d'environ 1,1 fois. Il est à noter que l'augmentation observée avec B. longum est même supérieure à celle obtenue avec le contrôle positif IBMX.

Ainsi ces résultats démontrent que le microorganisme probiotique B. longum peut être utilisé de manière très efficace comme agent pro-pigmentant. Exemple 2 : Compositions topiques selon l'invention Cet exemple décrit des compositions destinées à un usage topique particulièrement adaptées à la mise en oeuvre de la présente invention. Sauf indication contraire, les valeurs ci-dessous sont exprimées en pourcentage en poids par rapport au poids de la composition. Exemple 2A: Lotion pour le visage Poudre lyophilisée de Bifidobacterium longum 0,50 Gluconate de magnésium 3,00 Lactate de calcium 2,00 Antioxydant 0,05 lsopropanol 40,0 Conservateur 0,30 Eau cisp 100 (3/0 Exemple 2B: Lait pour le soin du visage (réparateur de sommeil) Poudre lyophilisée de Bifidobacterium longum 1,00 Stéarate de glycérol 1,00 Alcool cétylstéarylique/alcool cétylstéarylique oxyéthyléné à 30 moles OE (Sinnowax AO® vendu par HENKEL) 3,00 Alcool cétylique 1,00 Diméthicone (DC 200 Fluid® vendu par DOW CORNING) 1,00 Huile de vaseline 6,00 Myristate d'isopropyle (Estol IMP 1514® vendu par UNICHEMA) 3,00 Antioxydant 0,05 Glycérine 20,00 Conservateur 0,30 Eau qsp 100 (3/0 Exemple 2C: Gel pour le soin du visage (à conserver à 4 °C) Bifidobacterium longum 1012 ufc Hydroxypropylcellulose (Klucel H® vendu par HERCULES) 1,00 Vitamine E 2,50 Antioxydant 0,05 lsopropanol 40,00 Conservateur 0,30 Eau qsp 100 (3/0 Exemple 2D: Gel pour le soin du visage (à conserver à 4 °C) Lysat aqueux de Bifidobacterium longum 10,00 Hydroxypropylcellulose (Klucel H® vendu par HERCULES) 1,00 Culture complète inactivée et evapoconcentrée (evapoconcentrat) de Vitreoscilla filiformis 2,00 Vitamine E 2,50 Antioxydant 0,05 lsopropanol 40,00 Conservateur 0,30 Eau qsp 100 (3/025

Claims (11)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'au moins une souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum comme agent induisant la pigmentation cutanée et/ou capillaire, pour homogénéiser la couleur de la peau et/ou des cheveux, ladite au moins une souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum étant administrée par voie topique et ladite au moins une souche de Bifidobacterium longum n'étant pas la souche Bifidobacterium longum subsp. longum déposée le 29 janvier 2001 auprès de la CNCM (Paris, France) sous le numéro 1-2618.
2. 2. Utilisation cosmétique selon la revendication 1, dans laquelle ladite souche de Bifidobacterium longum est sous forme d'un lysat.
3. 3. Utilisation cosmétique selon la revendication 2, dans laquelle ledit lysat est le lysat commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR® par la société K. RICHTER GmbH.
4. 4. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, pour prévenir et/ou traiter une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des 20 cheveux.
5. 5. Utilisation cosmétique selon la revendication 4, dans laquelle l'altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux est sélectionnée dans le groupe constitué de la canitie, le mélasma, les séquelles pigmentaires d'acné, la 25 pigmentation post-inflammatoire, les dépigmentations dues aux brûlures ou à la chirurgie et les dyschromies bénignes du visage.
6. 6. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle ladite souche de Bifidobacterium longum est formulée dans une composition 30 cosmétique comprenant en outre un véhicule cosmétiquement acceptable.
7. 7. Utilisation cosmétique selon la revendication 6, dans laquelle la composition cosmétique comprend en outre un actif cosmétique additionnel. 35
8. 8. Souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum pour son utilisation comme agent induisant la pigmentation cutanée et/ou capillaire, pour laprévention et/ou le traitement d'une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux d'origine pathologique, ladite souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum étant administrée par voie topique et ladite souche de Bifidobacterium longum n'étant pas la souche Bifidobacterium longum subsp. longum déposée le 29 janvier 2001 auprès de la CNCM (Paris, France), sous le numéro 1-2618.
9. 9. Souche de Bifidobacterium longum pour son utilisation selon la revendication 8, ladite altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux d'origine pathologique étant sélectionnée dans le groupe constitué du lentigo actinique, de la dermite des prés et du vitiligo.
10. 10. Souche de Bifidobacterium longum pour son utilisation selon la revendication 8 ou 9, ladite souche de Bifidobacterium longum étant sous forme d'un lysat.
11. 11. Souche de Bifidobacterium longum pour son utilisation selon la revendication 10, ledit lysat étant le lysat commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR® par la société K. RICHTER GmbH.20