FR3050110A1 - Utilisation de microorganismes probiotiques comme agent favorisant la synthese de melanine - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation, par voie orale, de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM I-2618, comme agent pro-pigmentant, notamment pour homogénéiser la couleur de la peau et/ou des cheveux.

Description

Utilisation de microorganismes probiotiques comme agent favorisant la synthèse de mélanine

La présente invention concerne l’utilisation par voie orale de la souche de Bifidobacterium longum déposée sous le numéro 1-2618 auprès de la CNCM pour induire la pigmentation de la peau et des cheveux, et homogénéiser le teint.

La couleur des cheveux et de la peau humaine est fonction de différents facteurs, tels que les saisons de l'année, l'origine ethnique, le sexe et l'âge. Elle est principalement déterminée par la concentration et la distribution, dans les kératinocytes, de la mélanine produite par les mélanocytes. La mélanine, pigment naturel reconnu pour ses propriétés anti-radicalaires et absorbantes des rayonnements solaires, est un agent protecteur physiologique de la peau, existant sous deux formes majoritaires : l’eumélanine et la phéo-mélanine.

Les mélanocytes sont les cellules spécialisées qui synthétisent la mélanine puis la distribuent aux kératinocytes par l'intermédiaire d'organelles particulières, les mélanosomes.

Dans l’épiderme, le mélanocyte est impliqué dans l’unité mélanique épidermique, formant un réseau de distribution entre mélanocytes et kératinocytes, qui est constitué par un mélanocyte entouré d’environ 36 kératinocytes voisins. Les mélanocytes comptent pour environ 5 à 10% des cellules de la couche basale de l’épiderme. Tous les individus, sans distinction de phototype, ont approximativement le même nombre de mélanocytes pour une zone cutanée donnée. Les différences de pigmentation entre les individus ne sont pas dues au nombre de mélanocytes, mais à la nature de la mélanine synthétisée et aux propriétés biochimiques et fonctionnelles des mélanosomes.

Les mélanosomes sont des organelles hautement spécialisées dont l’unique fonction est la synthèse et le transfert de mélanine. Ils naissent du réticulum endoplasmique sous forme de vacuoles sphériques appelées pré-mélanosomes qui contiennent un substrat protéinique amorphe, mais pas d’enzymes mélanogènes. Au cours de la maturation du pré-mélanosome, le substrat amorphe s’organise en une structure fibrillaire orientée dans l’axe longitudinal du mélanosome. On distingue quatre stades du développement du mélanosome correspondant à l’intensité de la mélanisation. La mélanine est déposée uniformément sur le réseau fibrillaire interne du mélanosome et l’opacité de l’organelle augmente jusqu’à saturation. Au fur et à mesure de la synthèse de la mélanine dans les mélanosomes, ceux-ci se déplacent de la région périnucléaire vers l’extrémité des dendrites des mélanocytes. Par phagocytose, l’extrémité des dendrites est capturée par les kératinocytes, les membranes sont dégradées et le contenu en mélanine des mélanosomes est redistribué dans les kératinocytes. La mélanine est ainsi répartie dans l’épiderme, assurant son brunissement et sa protection.

Pour ce qui est de la couleur des cheveux et des poils, elle repose notamment sur la présence en quantités et ratios variables de deux groupes de mélanines : les eumélanines (pigments bruns à noirs) et les phéo-mélanines (pigments rouges à jaunes). La pigmentation du cheveu et des poils requiert la présence de mélanocytes au niveau du bulbe du follicule pileux. Le follicule pileux est une invagination tubulaire de l’épiderme qui s’enfonce jusqu’aux couches profondes du derme. La partie intérieure du bulbe est une zone de prolifération cellulaire où se trouvent les précurseurs des cellules kératinisées constituant le cheveu. Les mélanocytes au niveau du bulbe du follicule pileux sont dans un état actif, c'est-à-dire qu’ils synthétisent de la mélanine. Ces pigments sont transmis aux kératinocytes destinés à former la tige pilaire, ce qui conduira à la pousse d’un cheveu ou d’un poil pigmenté.

Les mécanismes conduisant à la pigmentation de la peau et des fibres kératiniques, notamment des poils et des cheveux, sont des mécanismes hautement régulés, sous la dépendance de multiples facteurs hormonaux ou cellulaires. L’homéostasie des mélanocytes, finement régulée par ces facteurs hormonaux ou cellulaires, permet de conférer à la peau et aux fibres kératiniques une pigmentation naturelle, homogène, plus ou moins intense, conférant un aspect esthétique et cosmétique attractif.

Or, dans la plupart des populations, l’obtention d’une coloration brune de la peau et le maintien d'une coloration constante de la chevelure sont des aspirations importantes. Le maintien d’un teint bronzé et d’une chevelure naturellement pigmentée sont des facteurs fortement impliqués dans l’obtention d’un aspect cosmétique attractif.

Il existe donc un réel besoin de produit facilitant et/ou améliorant la pigmentation de la peau et/ou des poils et/ou des cheveux, et utilisable par voie orale.

De nombreuses solutions ont été proposées dans le domaine de la coloration artificielle par apport de colorants exogènes, tels que la DHA, censés donner à la peau et/ou aux poils et/ou aux cheveux une coloration la plus proche possible de ce qu'elle est naturellement ou, dans le domaine de la coloration naturelle, par stimulation des voies naturelles de pigmentation, par exemple en utilisant des actifs stimulant la mélanogenèse avec ou sans action des UV.

Il a ainsi été proposé d'utiliser des compositions contenant un inhibiteur de phosphodiestérases (WO 95/17161), des prostaglandines (WO 95/11003), des fragments d'ADN (WO 95/01773), de l'ADN codant des récepteurs de MSH (WO 94/04674), des diacylglycérols (WO 94/04122), des dérivés de tyrosine (EP 0585018), des extraits de ballote (WO 93/10804), ou des extraits de xanthine (WO 91/07945). Ces différents composés agissent, directement ou indirectement par l'intermédiaire de Ι'α-MSH ou des prostaglandines, de façon à stimuler la biosynthèse de la mélanine, avec ou sans action des UV. D'excellents résultats sont certes obtenus par les solutions proposées dans l'état de la technique, mais les composés utilisés présentent souvent des effets secondaires non négligeables ou sont des mélanges complexes qui ne présentent pas de spécificité.

La découverte de substances alternatives ayant un effet sur la pigmentation de la peau et/ou des poils et/ou des cheveux reste donc un objectif majeur de la recherche.

En particulier, il existe toujours un besoin de disposer d'actifs alternatifs cosmétiques pouvant de préférence être administrés par voie orale, qui induisent physiologiquement la pigmentation.

Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs favorisant la mélanogenèse.

Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs permettant de réguler la synthèse ou l’accumulation de mélanine dans l’épiderme.

Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs permettant d’augmenter les dépôts de mélanine dans les cheveux et/ou les poils.

Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs pour faciliter et/ou améliorer la pigmentation de la peau et/ou des poils et/ou des cheveux dans le domaine de la cosmétique.

Il existe encore un besoin de disposer d'actifs alternatifs utiles pour prévenir et/ou limiter et/ou stopper le développement de la canitie, voire maintenir la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris ou blancs.

La présente invention a notamment pour objet de satisfaire ces besoins.

Les microorganismes probiotiques, des microorganismes pouvant avoir un effet positif sur la santé du sujet qui les ingère, sont largement utilisés dans le domaine de la cosmétique.

Ainsi, la demande FR 2 756 181 décrit l'utilisation de compositions cosmétiques à base de culture inactivée de bactéries de type Bifidobacterium, d'huile de menthe et d'un acide pour éliminer les tâches pigmentaires.

La demande EP 1 110 555 décrit l'utilisation d'un agent bactérien, par exemple d'un extrait de bactéries Bifidobacterium, pour stabiliser et/ou régénérer l'écosystème cutané des mammifères, et traiter, entre autres, le pityriasis versicolor.

La demande FR 2 912 917 décrit l'utilisation d'un milieu de culture conditionné, obtenu par contact avec des cellules du sang périphérique stimulées par des probiotiques, pour traiter des signes de l'inflammation et/ou des désordres immunitaires, tels que les hyperpigmentations inflammatoires, le vitiligo ou la canitie.

La demande WO 2008/015343 décrit l'utilisation d'extraits de levure pour augmenter la synthèse de mélanine, et traiter le vitiligo et la canitie.

La demande WO 2007/073122 décrit l'utilisation d'un son de riz fermenté avec une bactérie lactique pour blanchir la peau en empêchant la synthèse de mélanine.

La demande US 2002/0168388 décrit l'utilisation de compositions comprenant des bactéries inactivées et un extrait de matrice extracellulaire de plante pour contrer les dommages induits par les radiations UV.

La demande WO 02/28402 décrit l'utilisation de compositions comprenant des probiotiques pour équilibrer la fonction immunitaire de la peau après exposition à des conditions de stress.

La demande FR 2 834 718 décrit l'utilisation de substances actives obtenues par fermentation de semences végétales ou de fruits avec les bactéries Lactobacillus, Lactococcus ou Leuconostoc pour protéger la peau des effets nocifs des rayons UV et pour réguler la mélanogenèse dans la peau et les cheveux.

La demande FR 2 920 307 décrit l'utilisation de probiotiques pour traiter les manifestations d'inconfort et/ou de signes cutanés associées à un traitement cutané de surface, parmi lesquels le blanchiment de la peau.

La demande FR 2 920 306 décrit l'utilisation d'un lysat de Bifidobacterium pour prévenir une diminution de et/ou renforcer la fonction barrière cutanée, et ainsi prévenir et/ou diminuer des irritations cutanées ou les signes du vieillissement cutané.

La demande FR 2 920 300 décrit l'utilisation d'hespéridine en combinaison avec un probiotique pour renforcer la fonction barrière de la peau et ainsi traiter les signes cutanés du vieillissement. L'utilisation du probiotique Bifidobacterium comme agent pro-pigmentant n'a cependant pas été suggérée.

Or les inventeurs ont ici montré de manière surprenante que la souche bactérienne Bifidobacterium longum subsp. longum déposée le 29 janvier 2001 sous le numéro 1-2618 auprès de la CNCM (Paris, France) selon le Traité de Budapest, permettait d'induire de manière significative la pigmentation cutanée ou capillaire. En particulier, cette souche de probiotique spécifique permet d'induire une pigmentation plus importante que d'autres types de probiotiques connus tels que les souches de Propionibacterium freudenreichii ou de Bacillus coagulans, mais aussi que d'autres souches de Bifidobacterium longum.

La présente invention concerne donc l'utilisation cosmétique non-thérapeutique d'au moins une souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum déposée le 29 janvier 2001 sous le numéro 1-2618 auprès de la CNCM (Paris, France) selon le Traité de Budapest, comme agent induisant la pigmentation cutanée et/ou capillaire, pour homogénéiser la couleur de la peau et/ou des cheveux, ladite au moins une souche de microrganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 étant administrée par voie orale.

Description détaillée de l'invention

Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618

La souche de bactérie Bifidobacterium longum utilisée dans le cadre de la présente invention est un microorganisme probiotique.

On entend par "microorganisme probiotique" un microorganisme vivant, qui, lorsqu’il est administré en quantité adéquate, a un effet positif sur la santé de son hôte ("Joint FAO/WHO Expert 10 Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotic in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria, 6 octobre 2001").

Au sens de la présente invention, le microorganisme envisagé peut être utilisé vivant, ou inactivé, incapable de se répliquer. On peut également utiliser une fraction de celui-ci ou l’un des composants de ce microorganisme.

La souche de Bifidobacterium longum subsp. longum utilisée dans le cadre de l'invention a été déposée le 29 janvier 2001 auprès de la CNCM (Paris, France), sous le numéro 1-2618, selon le Traité de Budapest, et est par exemple décrite dans Schell et al. (2002) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99:14422-14427. La séquence de son génome est référencée sous le numéro GenBank AE014295.

Dans le contexte de l'invention, les références GenBank citées ci-dessus sont celles qui étaient disponibles le 3 juillet 2012.

Selon une variante de l’invention, le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 utilisé dans le cadre de l’invention peut être mis en oeuvre sous une forme isolée ou purifiée, c’est-à-dire non mélangée à un ou des composé(s) susceptible(s) de lui être associé(s) dans son milieu d’origine ou dans son milieu de propagation.

Selon une variante de l’invention, le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 utilisé dans le cadre de l’invention peut être mis en œuvre sous une forme vivante, semi-active, inactivée ou morte.

En particulier, le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 utilisé dans le cadre de l’invention peut être mis en œuvre sous une forme vivante ou inactivée.

Selon un mode de réalisation avantageux de l’invention, le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 peut être mis en œuvre sous forme inactivée ou morte.

Au sens de l’invention, un microorganisme "inactivé" est un microorganisme qui n’est plus capable, temporairement ou définitivement, de former des colonies en culture.

Au sens de l’invention, un microorganisme "mort" est un microorganisme qui n’est plus capable, définitivement, de former des colonies en culture.

Les microorganismes morts ou inactivés peuvent avoir les membranes cellulaires intactes ou rompues. Ainsi le terme "inactivé" désigne également les extraits et les lysats de microorganismes comme détaillés ci-après. L’obtention de microorganismes morts ou inactivés peut être effectuée par toute méthode connue de l’homme du métier.

Selon un mode de réalisation avantageux, les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 mis en œuvre selon l’invention sont au moins en partie inactivés ou morts.

Par "microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 au moins en partie inactivés", on désigne une préparation de microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 conformes à l’invention comprenant au moins 80 %, en particulier au moins 85 %, plus particulièrement au moins 90 %, voire au moins 95 %, au moins 99 %, ou au moins 99,99 % de microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 inactivés exprimés en unité formant colonie (ufc) par rapport à la totalité des microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 vivants non inactivés contenus dans la préparation initiale avant d’être soumise à un procédé d’inactivation. Le taux d’inactivation obtenu dépend des conditions d’application de la méthode d’inactivation qui sont ajustées par l’homme du métier selon le taux d’inactivation à obtenir. Selon un mode de réalisation, l’invention comprend la mise en œuvre d’une préparation comprenant un maximum, de préférence 100%, de microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 inactivés.

Un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM I-2618 inactivé convenant à l’invention peut être préparé par irradiation, traitement thermique ou, sous certaines conditions, par lyophilisation d’une préparation de microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618. Ces méthodes sont connues de l’homme du métier. D’autres techniques connues parmi lesquelles le traitement haute pression ou l’extrusion peuvent également être envisagées par l’homme du métier.

Plus particulièrement, l’inactivation de microorganismes probiotiques par irradiation peut comprendre la mise en œuvre de rayons gamma, de rayons X ou une exposition aux UV. Le type de rayonnement, l’intensité, la dose et le temps d’exposition sont ajustés par l’homme du métier selon la quantité et la nature des microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 à inactiver. L’inactivation thermique peut être réalisée en incubant les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 de l’invention pendant une période de temps donnée, par exemple de 10 s à 90 min à une température de 100 à 150°C. Selon le microorganisme à inactiver, on peut envisager un traitement plus long, par exemple 2 h, à 170°C. L’inactivation thermique peut également être opérée par autoclavage en soumettant les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 de l’invention à une température de 121 °C, pendant au moins 20 minutes et à une pression atmosphérique de 2 bars.

Alternativement, l’inactivation thermique peut être effectuée en soumettant les microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 à une série de cycles de congélation-décongélation. L’inactivation par lyophilisation peut être effectuée par toute méthode connue dans le domaine. Avantageusement, des microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 inactivés par lyophilisation peuvent être remis en culture.

De préférence, un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 convenant à l’invention est mis en œuvre sous une forme inactivée obtenue par irradiation, notamment par irradiation gamma.

Un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM I-2618 selon l’invention peut être mis en œuvre sous forme entière, c’est-à-dire pour l’essentiel dans sa forme native, ou sous forme d’extraits ou de lysats comprenant des fractions et/ou des métabolites de ce microorganisme.

Au sens de l’invention, le terme "fraction" désigne un fragment ou composant dudit microorganisme doté d’une efficacité d'induction de la synthèse de mélanine par analogie audit microorganisme entier.

Au sens de l’invention, le terme "métabolite" désigne toute substance issue du métabolisme des microorganismes, et notamment secrétée par les microorganismes Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 considérés selon l’invention et dotée également d’une efficacité d'induction de la synthèse de mélanine.

Au sens de l’invention, on entend par "extrait" une préparation contenant des microorganismes inactivés dont la structure cellulaire n’a pas subi de destruction ou de dissolution. Les cellules biologiques ne sont dans l’ensemble pas fragmentées.

Un extrait ou un lysat convenant à l’invention peut être préparé à partir de bactéries Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 en fin de phase de croissance.

Selon un mode de réalisation, un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 convenant à l’invention peut être préparé sous forme d’un lysat.

Un lysat au sens de l’invention désigne communément un matériau obtenu à l’issue de la destruction ou dissolution de cellules biologiques par un phénomène dit de lyse cellulaire provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires naturellement contenus dans les cellules du microorganisme considéré et de fragments de composants de membrane cellulaire. Au sens de la présente invention, le terme "lysat" est utilisé indifféremment pour désigner l’intégralité du lysat obtenu par inactivation du microorganisme concerné ou seulement une fraction de celui-ci. Le lysat mis en œuvre est donc formé en tout ou partie des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires du microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 d'intérêt.

On peut avantageusement utiliser dans le cadre de l’invention : - un extrait contenant des microorganismes inactivés de la souche de microorganisme concernée, ou un lysat obtenu par lyse ou inactivation du microorganisme concerné.

Cette inactivation cellulaire pour l’obtention d’un extrait ou d’un lysat peut être accomplie par différentes technologies, telles que par exemple un choc osmotique, un choc thermique, par ultrasons, ou encore sous contrainte mécanique de type centrifugation, ou des combinaisons de ces différentes technologies.

Plus particulièrement, ce lysat peut être obtenu selon la technologie décrite dans le brevet US 4,464,362, et notamment selon le protocole suivant.

Un microorganisme probiotique considéré est cultivé anaérobiquement dans un milieu de culture adéquat, par exemple selon les conditions décrites dans US 4,464,362 et EP 0 043 128. Lorsque la phase stationnaire du développement est atteinte, le milieu de culture peut être inactivé par pasteurisation, par exemple à une température de 60 à 65°C pendant 30 min. Les microorganismes peuvent abrs être recueillis par une technique de séparation conventionnelle, par exemple filtration membranaire, centrifugés et éventuellement remis en suspension dans une solution stérile de NaCI à une concentration physiologique. Dans le cadre d’un lysat, celui-ci peut ensuite être obtenu par désintégration aux ultrasons d’un tel milieu afin de libérer les fractions cytoplasmiques, les fragments de paroi cellulaire et certains produits issus du métabolisme de ces microorganismes. Puis tous les composants dans leur distribution naturelle peuvent être stabilisés dans une solution aqueuse faiblement acide.

On peut ainsi obtenir un lysat possédant une concentration de l'ordre de 0,1 à 50%, en particulier de 1 à 20% et notamment environ 5% en poids de matière(s) active(s) par rapport à son poids total.

Selon une alternative possible à la technologie décrite ci-dessus, la centrifugation peut être appliquée en fin de fermentation (en début de phase stationnaire) avant le traitement thermique.

Il est également envisageable de récupérer les microorganismes et le surnageant et de réaliser ultérieurement le traitement thermique, l’ensemble pouvant ensuite être séché.

De préférence, un extrait ou un lysat de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 utilisé dans le cadre de l'invention est obtenu par choc thermique. Typiquement, lorsque la phase stationnaire du développement de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 est atteinte, le milieu de culture contenant les microorganismes peut être centrifugé. Le concentré de microorganismes peut ensuite être inactivé par traitement thermique, par exemple à des températures de 71,7°C à 147°C pendant 3 s jusqu’à plusieurs minutes. La concentration bactérienne contient typiquement une partie des métabolites produits pendant la croissance ainsi que les parois bactériennes traitées thermiquement. La solution possède typiquement une concentration de l'ordre de 10 à 55%, en particulier de 12 à 20% et notamment environ 15% en poids de matière(s) active(s) par rapport à son poids total. Le traitement thermique appliqué peut être effectué de façon directe (contact direct entre le produit et la source de chaleur comme la vapeur) ou indirecte (le produit et la source de chaleur sont séparés par une barrière physique). Dans le cas de traitement thermique direct, les temps de traitement peuvent être plus courts, de l’ordre de quelques secondes (de 1 à 15 s). Le milieu de culture contenant les microorganismes (avant ou après centrifugation) peut être concentré par évaporation. Le traitement thermique peut être appliqué avant et/ou après l’étape d’évaporation. L’extrait ou le lysat peut être mis en œuvre sous différentes formes, tel que sous la forme d’une solution ou sous une forme pulvérulente, de préférence sous la forme d'une solution. La conservation sous forme liquide peut nécessiter l’application d’un traitement de stabilisation tel qu’un traitement à ultra haute température (UHT). Toute méthode de stabilisation des liquides connue de l’homme de métier peut être envisagée pour la solution ou suspension de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618.

Un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM I-2618 utilisé dans le cadre de l’invention peut être formulé dans une composition à raison d'au moins 0,0001 % exprimé en poids sec, en particulier à raison de 0,0001 à 20 % et plus particulièrement à raison de 0,001 à 15 %, en particulier de 0,01 à 10 %, et notamment de 0,1 à 2 % par rapport au poids sec total de la composition le contenant.

Un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM I-2618 utilisé dans le cadre de l'invention est en particulier formulé dans une composition destinée à être administrée par voie orale. D’une manière générale, une composition selon l’invention destinée à être administrée par voie orale peut comprendre pour les microorganismes Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 vivants de 103 à 1015 ufc/g, en particulier de 105 à 1015 ufc/g et plus particulièrement de 107 à 1012 ufc/g de microorganismes Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 vivants par gramme de support ou à des doses équivalentes calculées pour les microorganismes Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 inactivés ou morts ou pour des fractions de microorganisme Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 ou pour des métabolites produits. En particulier, dans une composition administrée par voie orale, la concentration de microorganisme et/ou de fraction et/ou de métabolite correspondant peut être ajustée de manière à correspondre à des doses, exprimées en équivalent de microorganisme, variant de 5x105 à 1013 ufc/jour (j) et en particulier de 108 à 1011 ufc/j.

Il peut être avantageux de mettre en œuvre des microorganismes Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 sous forme inactivée, voire morte, se présentant notamment sous la forme d'un lysat ou d’un extrait cellulaire, contenant typiquement des fragments cellulaires et des métabolites.

Un microorganisme Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 peut également être inclus dans une composition sous forme de fractions de composants cellulaires ou sous la forme de métabolites, en particulier sous la forme d'un extrait ou sous la forme d’un lysat. Le ou le(s) microorganisme(s) Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618, métabolite(s) ou fraction(s) peu(ven)t également être introduit(s) sous la forme d’une poudre lyophilisée, d’un surnageant de culture et/ou le cas échéant sous une forme concentrée.

Lorsqu’une composition comprend des métabolites, les teneurs en métabolites dans les compositions correspondent sensiblement aux teneurs susceptibles d’être produites par l’équivalent de 103 à 1015 ufc, en particulier 105 à 1015 ufc, et plus particulièrement 107 à 1012 ufc de microorganismes Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 vivants par gramme de support. L’expression de la quantité de métabolites ou de fractions d’un microorganisme en "ufc", ou de microorganismes morts, vise à désigner la quantité de ce microorganisme nécessaire à la production de ladite quantité de métabolites ou de fractions de microorganismes.

Composition cosmétique

Dans un mode de réalisation particulier de l’invention, ladite au moins une souche de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618, telle que définie à la section "Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618' ci-dessus, est formulée dans une composition cosmétique adaptée à une administration par voie orale, comprenant en outre un véhicule ingérable.

Par "véhicule ingérable", on entend ici un milieu adapté à une administration par voie orale, n'entrainant pas d'effets indésirables lors de ou suite à son administration, en particulier lors de ou suite à son ingestion par un individu.

Le véhicule ingérable sera adapté à la forme sous laquelle la composition est destinée à être conditionnée, notamment solide ou fluide à température ambiante et pression atmosphérique.

La composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour le mode d'administration par voie orale.

Une composition cosmétique utilisée dans le cadre de l’invention peut constituer une composition de traitement ou de soin de la peau ou du cuir chevelu, des fibres kératiniques comme les cheveux, les cils ou les sourcils, ou une composition de protection solaire ou de bronzage artificiel. De préférence, la composition cosmétique utilisée dans le cadre de l'invention est une composition de protection solaire ou de bronzage artificiel.

Une telle composition peut contenir éventuellement des actifs cosmétiques additionnels, notamment comme indiqué ci-après.

Dans le cas d’une composition cosmétique pour une administration par voie orale, et comprenant notamment un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 tel que défini à la section " Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM1-2618' ci-dessus, on privilégie l’utilisation d’un support ingérable.

Le support ingérable peut être de nature diverse selon le type de composition considérée.

Conviennent ainsi notamment comme supports alimentaires des comprimés, gélules ou tablettes, des suppléments oraux sous forme sèche et des suppléments oraux sous forme liquide.

Il peut par exemple s’agir de compléments alimentaires, dont la formulation peut être réalisée par les procédés usuels pour produire notamment une solution buvable, des dragées, des gélules, des gels, des émulsions, des comprimés à avaler ou à croquer, des capsules, notamment des capsules molles ou dures, des granulés à dissoudre, des sirops, des aliments solides ou liquides et des hydrogels permettant une libération contrôlée.

Selon un mode de réalisation, une composition cosmétique, mise en oeuvre dans le cadre de l’invention et administrée par voie orale, peut être formulée sous forme de dragées, de gélules, de gels, d’émulsions, de comprimés, de capsules, d’hydrogels, de barres alimentaires, de poudres, compactées ou non, de suspensions ou solutions liquides, de confiseries, de laits fermentés, de fromages fermentés, de chewing-gum, de pâte dentifrice ou de solutions spray.

Lorsque la composition de l’invention est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 à 80 % en poids, et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les émulsionnants et les coémulsionnants utilisés dans la composition sous forme d’émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine cosmétique. L’émulsionnant et le coémulsionnant peuvent être présents, dans la composition, en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, et de préférence de 0,5 à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition.

Lorsque la composition de l’invention est une solution ou un gel huileux, la phase grasse peut représenter plus de 80 % du poids total de la composition.

En particulier, le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 utilisé dans le cadre de l'invention peut être incorporé dans toute forme de compléments alimentaires ou d'aliments enrichis, par exemple des barres alimentaires ou des poudres, compactées ou non. Les poudres peuvent être diluées dans de l'eau, du soda, des produits laitiers ou dérivés du soja, ou être incorporées dans des barres alimentaires.

Un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM I-2618 de l’invention, tel que défini à la section "Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618' ci-dessus, peut être par ailleurs formulé avec les excipients et composants usuels pour de telles compositions orales ou compléments alimentaires, à savoir notamment des composants gras et/ou aqueux, agents humectants, épaississants, conservateurs, agents de texture, de saveur et/ou d’enrobage, antioxydants, conservateurs et colorants usuels dans le domaine de l’alimentaire.

Les agents de formulation et excipients pour composition orale, et notamment pour compléments alimentaires, sont connus dans ce domaine et ne font pas ici l'objet d'une description détaillée.

Conviennent notamment comme supports alimentaires, le lait, le yaourt, le fromage, les laits fermentés, les produits fermentés à base de lait, des glaces, des produits à base de céréales ou des produits à base de céréales fermentées, des poudres à base de lait, des formules pour enfants et nourrissons, des produits alimentaires de type confiserie, chocolat, céréales, des aliments pour animaux en particulier domestiques, des comprimés, gélules ou tablettes, des suspensions de bactéries liquides, des suppléments oraux sous forme sèche et des suppléments oraux sous forme liquide.

Dans un mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, la composition cosmétique telle que définie ci-dessus comprend en outre un actif cosmétique additionnel.

Avantageusement, un tel actif additionnel peut être destiné à exercer un effet cosmétique ou de soin sur la peau, les cheveux, les cils, les poils et/ou le cuir chevelu.

Les actifs additionnels sont choisis par l’homme du métier de telle sorte qu’ils ne nuisent pas à l’effet des microorganismes probiotiques Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 de l’invention.

Selon une variante de réalisation, un microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618, tel que défini ci-dessus à la section "Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618', peut être avantageusement mis en œuvre avec, à titre d’actif additionnel, un microorganisme non probiotique, en particulier la souche Vitreoscilla filiformis.

Un tel microorganisme non probiotique peut être mis en œuvre sous forme vivante, semi-active, inactivée ou morte, notamment comme défini à la section "Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618' ci-dessus. En particulier, un microorganisme de type Vitreoscilla filiformis, tel que décrit notamment dans la demande de brevet FR 0 625 782, peut être mis en œuvre sous une forme vivante ou sous une forme de lysat fractionné ou complet avec son milieu de culture après évapo-concentration de la composition en H20.

De façon connue, les formes galéniques dédiées à une administration orale peuvent contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique , tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les bactéricides et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine considéré, et par exemple de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse et/ou dans la phase aqueuse.

Comme matières grasses utilisables dans l’invention, on peut citer les huiles minérales comme par exemple le polyisobutène hydrogéné et l’huile de vaseline, les huiles végétales comme par exemple une fraction liquide du beurre de karité, huile de tournesol et d’amandes d’abricot, les huiles animales comme par exemple le perhydrosqualène, les huiles de synthèse notamment l’huile de Purcellin, le myristate d’isopropyle et le palmitate d’éthyl hexyle, les acides gras insaturés et les huiles fluorées comme par exemple les perfluoropolyéthers. On peut aussi utiliser des alcools gras, des acides gras comme par exemple l’acide stéarique et comme par exemple des cires notamment de paraffine, carnauba et la cire d’abeilles. On peut aussi utiliser des composés siliconés comme les huiles siliconées et par exemple les cyclométhicone et diméthicone, les cires, les résines et les gommes siliconées.

Comme émulsionnants utilisables dans l’invention, on peut citer par exemple le stéarate de glycérol, le polysorbate 60, le mélange alcool cétylstéarylique/alcool cétylstéarylique oxyéthyléné à 33 moles d’oxyde d’éthylène vendu sous la dénomination Sinnowax AO® par la société HENKEL, le mélange de PEG-6/PEG-32/Glycol Stéarate vendu sous la dénomination de Tefose® 63 par société GATTEFOSSE, le PPG-3 myristyl éther, les émulsionnants siliconés tels que le cétyldiméthicone copolyol et le mono- ou tristéarate de sorbitane, le stéarate de PEG-40, le monostéarate de sorbitane oxyéthyléné (20OE).

Comme solvants utilisables dans l’invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment l’éthanol et l’isopropanol, le propylène glycol.

La composition de l’invention peut également contenir de façon avantageuse une eau thermale et/ou minérale, notamment choisie parmi l’eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy et l’eau de la Roche Posay.

Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer les polymères carboxyliques tel que le carbomer, les copolymères acryliques tels que les copolymères d’acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides et notamment le mélange de polyacrylamide, C13-14-lsoparaffine et Laureth-7 vendu sous le nom de Sepigel 305® par la société SEPPIC, les polysaccharides comme les dérivés cellulosiques tels que les hydroxyalkylcelluloses et en particulier les hydroxypropylcellulose et hydroxyéthylcellulose, les gommes naturelles telles que les guar, caroube et xanthane et les argiles.

Comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d’acides gras comme les stéarates d’aluminium et la silice hydrophobe, ou encore l’éthylcellulose et le polyéthylène.

Bien entendu, les compositions topiques selon l'invention peuvent en outre contenir plusieurs autres actifs. A titre d'actifs conventionnellement mis en œuvre, on peut citer, les vitamines B3, B5, B6, B8, C, E, ou PP, la niacine, les caroténoïdes, les polyphénols et minéraux tels que zinc, calcium, magnésium ....

En particulier, on peut utiliser un complexe anti-oxydant comprenant les vitamines C et E, et au moins un caroténoïde, notamment un caroténoïde choisi parmi le β-carotène, le lycopène, l’astaxanthine, la zéaxanthine et la lutéine, des flavonoïdes telles que les catéchines, l’hespéridine, des proanthocyanidines et des anthocyanines.

Il peut également s’agir d’au moins un prébiotique ou un mélange de prébiotiques. Plus particulièrement, ces prébiotiques peuvent être choisis parmi les oligosaccharides, produits à partir du glucose, galactose, xylose, maltose, sucrose, lactose, amidon, xylane, l’hémicellulose, l’inuline, des gommes de type acacia par exemple, ou un de leurs mélanges. Plus particulièrement, l’oligosaccharide comprend au moins un fructo-oligosaccharide. Plus particulièrement, ce prébiotique peut comprendre un mélange de fructo-oligosaccharide et d’inuline.

Pour ce qui est des actifs lipophiles, on peut utiliser le rétinol (vitamine A) et ses dérivés, le tocophérol (vitamine E) et ses dérivés, les céramides, les huiles essentielles et les insaponifiables (tocotriènol, sésamine, gamma oryzanol, phytostérols, squalènes, cires, terpènes).

Comme autres actifs susceptibles d’être plus particulièrement associés au lysat dans une formule galénique orale, on peut également considérer tous les ingrédients communément utilisés et/ou autorisés. A titre illustratif, on peut citer les vitamines, les minéraux, les lipides essentiels, les oligoéléments, les polyphénols, les flavonoïdes, les phytoestrogènes, les antioxydants tels que l’acide lipoïque et le coenzyme Q10, les caroténoïdes, les probiotiques, les prébiotiques, les protéines et les acides aminés, les mono et polysaccharides, les amino-sucres, les phytostérols et alcools triterpéniques d’origine végétale.

Il s’agit, en particulier, des vitamines A, C, D, E, PP et du groupe B. Parmi les caroténoïdes, on choisit de préférence, le béta-carotène, le lycopène, la lutéine, la zéazanthine et l’astaxanthine. Les minéraux et oligo-éléments particulièrement mis en œuvre sont le zinc, le calcium, le magnésium, le cuivre, le fer, l’iode, le manganèse, le sélénium, le chrome (III). Parmi les polyphénols, on retient aussi en particulier les polyphénols de raisin, de thé, d’olive, de cacao, de café, de pomme, de myrtille, de sureau, de fraise, de canneberge, et d’oignon. De préférence parmi les phytoestrogènes, on retient les isoflavones sous la forme libre ou glycosylée, telles que la génistéine, la daidzéine, la glycitéine ou encore les lignanes, en particulier ceux du lin et du schizandra chinensis. Les probiotiques sont choisis de préférence dans le groupe constitué par les lactobacilles et les bifidobactéries. Les acides aminés ou les peptides et les protéines les contenant, tels que la taurine, la thréonine, la cystéine, le tryptophane, la méthionine. Les lipides appartiennent de préférence au groupe des huiles contenant des acides gras mono et polyinsaturés tels que les acides oléique, linoléique, alpha-linolénique, gamma-linolénique, stearidonique, les acides gras oméga-3 de poisson à longue chaîne tels que ΓΕΡΑ et le DHA, les acides gras conjugués issus de végétaux ou d’animaux tels que les CLA (Conjugated Linoleic Acid).

Utilisation cosmétique non-thérapeutique

De manière surprenante, les inventeurs ont observé que l'administration de microorganismes probiotiques de type Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM I-2618 régule l’homéostasie des mélanocytes, en favorisant la synthèse de mélanine, de manière plus efficace que d'autres microorganismes probiotiques tels que Propionibacterium freudenreichii ou Bacillus coagulans, ou que d'autres souches de Bifidobacterium longum. Ainsi la pigmentation naturelle de la peau, des poils et des cheveux s’en trouvent renforcée. La pigmentation cutanée ou capillaire ainsi obtenue est avantageusement homogène.

La présente invention concerne plus particulièrement l'utilisation cosmétique non-thérapeutique d'une souche de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618, telle que définie à la section "Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618' ci-dessus, éventuellement formulée dans une composition cosmétique telle que définie à la section "Composition cosmétique" ci-dessus, comme agent induisant la pigmentation cutanée et/ou capillaire, pour induire physiologiquement la pigmentation et ainsi en particulier prévenir et/ou traiter une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux, ladite une souche de microrganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 étant administrée par voie orale.

La composition cosmétique mise en œuvre dans le cadre de l'invention peut en particulier être utilisée chez des sujets sains, typiquement des sujets ne présentant pas d'altérations de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux d'origine pathologique.

Elle peut, en particulier chez des sujets sains, être utilisée comme agent de bronzage, avantageusement comme agent de bronzage indépendant de la lumière du soleil et/ou des rayons UV, ou pour accélérer et/ou intensifier le bronzage.

Elle peut également, en particulier chez ces sujets sains, être utilisée pour rendre le teint et/ou la couleur du teint plus homogène.

La composition cosmétique mise en œuvre dans le cadre de l'invention peut également être utilisée pour prévenir et/ou traiter cosmétiquement un défaut de pigmentation cutanée et/ou capillaire résultant d'un déséquilibre de l'homéostasie des mélanocytes.

Le déséquilibre de l'homéostasie des mélanocytes peut être un déséquilibre de la prolifération et/ou de la maturation et/ou de la survie des mélanocytes.

La prolifération, la maturation et la survie concernent les différents stades de vie d’une cellule d’un tissu d’un organisme, i.e. sa division à partir d’une cellule souche ou d’une cellule mère, sa différentiation lui permettant l’acquisition de caractères propres au tissu dans lequel elle s’inscrit, comme par exemple l’expression des différentes enzymes et protéines nécessaires à la mélanogenèse, et son maintien jusqu’à sa sénescence et à l’apoptose. Une dysrégulation de ces étapes peut se traduire par un déséquilibre de la répartition des mélanocytes dans l’épiderme ou dans le follicule, ou un déséquilibre de la mélanogenèse affectant par exemple la couleur naturelle de l’épiderme, des cheveux ou des poils.

Dans un mode de réalisation particulier, les défauts de pigmentation concernés par l'invention résultent d'un déséquilibre de la mélanogenèse.

Le déséquilibre de l'homéostasie des mélanocytes se traduisant par les défauts de pigmentation concernés par l'invention peuvent également être associés au vieillissement cutané ou du cuir chevelu, et en particulier être aggravés par ce vieillissement.

Les troubles de la pigmentation concernés par l'invention peuvent concerner l'épiderme, le cuir chevelu, les cheveux, les poils ou les cils. A titre de défauts de pigmentation capillaire cosmétiques visés par l’invention, on peut en particulier citer la canitie.

La canitie est un blanchiment naturel des cheveux qui apparaît avec l’âge, et est principalement associée à une diminution de mélanine dans la tige pilaire. Plus précisément, la canitie est liée à une raréfaction spécifique et progressive des mélanocytes des cheveux, affectant à la fois les mélanocytes du bulbe pileux et les cellules précurseurs de mélanocytes. Avantageusement, la mise en œuvre de l’invention permet de réduire, voire de freiner ou retarder l’apparition des cheveux blancs et le grisonnement de la chevelure. Avantageusement, la présente invention permet de stimuler, voire de réactiver, la mélanogenèse, afin de retarder, de réduire, voire de diminuer la canitie.

La composition mise en œuvre dans le cadre de l'invention peut également être utilisée chez des sujets présentant des altérations de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux, en particulier des sujets présentant des défauts de pigmentation cutanée et/ou capillaire cosmétiques liés à une accumulation, notamment hétérogène, de mélanine, pour homogénéiser la couleur de la peau et/ou des cheveux.

De tels défauts de pigmentation cutanée et/ou capillaire liés à une accumulation hétérogène de mélanine incluent le mélasma, les séquelles pigmentaires d'acné, la pigmentation post-inflammatoire, les dépigmentations dues aux brûlures ou à la chirurgie et les dyschromies bénignes du visage.

Dans ces applications, les compositions mises en œuvre dans le cadre de l'invention permettent de diminuer les dyschromies observées et d'homogénéiser la couleur de la peau, en particulier en augmentant ou améliorant la pigmentation de la peau autour des zones hyperpigmentées et/ou en augmentant ou améliorant la pigmentation de la peau au niveau des zones hypopigmentées.

De préférence, l'altération de l'homogénéité de la peau et/ou des cheveux visée par la présente invention est sélectionnée dans le groupe constitué de la canitie, le mélasma, les séquelles pigmentaires d'acné, la pigmentation post-inflammatoire, les dépigmentations dues aux brûlures ou à la chirurgie et les dyschromies bénignes du visage.

La présente invention concerne également un procédé de traitement cosmétique non-thérapeutique pour induire physiologiquement la pigmentation de la peau et/ou des cheveux, et ainsi homogénéiser la couleur de la peau et/ou des cheveux, et en particulier prévenir et/ou traiter une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux, dans laquelle on administre à un sujet par voie orale une quantité cosmétiquement efficace d'une souche de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618, telle que définie à la section "Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM I-2618' ci-dessus, éventuellement formulée dans une composition cosmétique telle que définie dans la section "Composition cosmétique" ci-dessus.

Par "quantité cosmétiquement efficace", on entend ici une quantité suffisante des agents utilisés dans le cadre de l'invention afin de traiter et/ou prévenir ledit désordre cosmétique, qui ne génère pas d'effets secondaires inacceptables pour l'utilisateur.

Cette souche de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618, éventuellement formulée dans une composition cosmétique, est administrée par voie orale.

De préférence, l'administration de la composition cosmétique selon l'invention se fait sous forme de complément alimentaire.

Dans la description et dans les exemples suivants, sauf indication contraire, les pourcentages sont des pourcentages en poids et les plages de valeurs libellées sous la forme "entre ... et..." incluent les bornes inférieure et supérieure précisées.

Les ingrédients sont mélangés, avant leur mise en forme, dans l'ordre et dans des conditions facilement déterminées par l'homme du métier.

La teneur et la nature des ingrédients mis en œuvre dans les compositions de l’invention sont ajustées par l’homme du métier de manière à ne pas affecter substantiellement les propriétés requises pour les compositions de l’invention.

Les exemples ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif du domaine de l’invention.

Brève description de la figure

La Figure est un ensemble d'histogrammes montrant le niveau de mélanine, en pourcentage par rapport au témoin, quantifié dans des co-cultures de kératinocytes primaires (NHEK) et mélanocytes primaires (NHEM) incubées pendant 72 h avec un milieu de culture seul (témoin), de ΓΙΒΜΧ à 200 μΜ (IBMX) comme contrôle positif, un lysat ou extrait de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 (B. longum CNCM 1-2618 1%), un lysat de Bifidobacterium longum Repair Complex CLR® (B. longum CLR 1%), un lysat de Propionibacterium freudenreichii (P. freundenreichii 0,2%) et un lysat de Bacillus coagulans (B. coagulans 0,2 mg/ml).

Exemples

Exemple 1 : Induction de la synthèse de mélanine par Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM1-2618

Cet exemple démontre l'activité pro-pigmentante du microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618.

Matériel et méthodes

Des mélanocytes humains primaires (NHEM) on été ensemencés en plaques 24-puits en présence (co-culture) de kératinocytes épidermiques humains normaux (NHEK) puis cultivés pendant 24 h. Les cellules ont ensuite été traitées avec rien (témoin négatif), IBMX (témoin positif, 200 μΜ), un lysat ou extrait de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 (1%), un lysat comparatif d'une autre souche de Bifidobacterium longum (Repair Complex CLR® 1%), un extrait de Propionibacterium freudenreichii (0,2%) ou un extrait de Bacillus coagulans (2 mg/ml).

Après traitement, les cellules ont été incubées pendant 72 h, toutes les conditions expérimentales ayant été réalisées en triplicat. Après 72 h d'incubation, les cellules ont été lysées par une solution de NaOH 0,5 N afin d'extraire la mélanine. La densité optique des échantillons a été mesurée à 405 nm, en référence à une gamme de mélanine exogène (courbe de mélanine standard 0,39 à 100 pg/ml).

Les résultats sont exprimés en pourcentage de stimulation relative par rapport au témoin cultivé en milieu de co-culture standard. Ils ont été analysés avec le test statistique de Student : * : 0,01 < p < 0,05 significatif ; ** : 0,001 < p < 0,01 très significatif ; *** : p < 0,001 extrêmement significatif Résultats

Les inventeurs ont ainsi montré que l'incubation de co-cultures NHEK/NHEM avec des lysats de microorganismes probiotiques permettait d'augmenter de manière significative la production de mélanine par les mélanocytes par rapport à des co-cultures non-traitées (voir Figure).

Ils ont en outre montré, de manière surprenante, que l'utilisation spécifique de lysats ou d’extraits de souches de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 permettait d'accroître de manière encore plus importante la production de mélanine par rapport à l'utilisation de lysats d'autres probiotiques tels que P. freudenreichii ou B. coagulans et même par rapport à des lysats d'autres souches de Bifidobacterium longum. En effet, l'incubation des co-cultures NHEK/NHEM avec des lysats de B. longum subsp. longum CNCM 1-2618 induit une augmentation de la production de mélanine d'environ 1,7 fois par rapport à un contrôle non-traité, tandis que les lysats de P. freudenreichii et de B. coagulans ne permettent d'atteindre qu'une augmentation d'environ 1,1 fois et le lysat de B. longum Repair Complex CLR® une augmentation d'environ 1,4 fois. Il est à noter que l'augmentation observée avec B. longum subsp. longum CNCM 1-2618 est même supérieure à celle obtenue avec le contrôle positif IBMX.

Ainsi ces résultats démontrent que le microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 peut être utilisé de manière très efficace comme agent pro-pigmentant.

Exemple 2 : Compositions selon l'invention pour la voie orale

Exemple 2A : Stick poudre

Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 1010 ufc

Citrate de calcium 50 mg

Gomme de xanthane 0,8 mg

Benzoate de sodium 0,2 mg

Maltodextrine qsp 30 g

On peut prendre un stick par jour.

Exemple 2B : Capsule

Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 1 09 ufc

Gluconate de magnésium 150 mg/capsule

Vitamine C 60 mg/capsule

Stéarate de magnésium 0,02 mg/capsule

On peut prendre une à trois de ces capsules par jour.

Claims (8)

1. REVENDICATIONS

   1. Utilisation cosmétique non-thérapeutique d'au moins une souche de microorganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum déposée le 29 janvier 2001 auprès de la CNCM (Paris, France) sous le numéro 1-2618, comme agent induisant la pigmentation cutanée et/ou capillaire, pour homogénéiser la couleur de la peau et/ou des cheveux, ladite au moins une souche de microrganisme probiotique Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 étant administrée par voie orale.
2. 2. Utilisation cosmétique selon la revendication 1, dans laquelle ladite souche de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 est sous forme vivante ou inactivée.
3. 3. Utilisation cosmétique selon la revendication 2, dans laquelle ladite souche de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 est inactivée et se présente sous forme d'un lysat ou d’un extrait cellulaire contenant des fragments cellulaires et des métabolites.
4. 4. Utilisation cosmétique selon la revendication 2 ou 3, dans laquelle le microorganisme Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 est inactivé par traitement thermique.
5. 5. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour prévenir et/ou traiter une altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux.
6. 6. Utilisation cosmétique selon la revendication 5, dans laquelle l'altération de l'homogénéité de la couleur de la peau et/ou des cheveux est sélectionnée dans le groupe constitué de la canitie, le mélasma, les séquelles pigmentaires d'acné, la pigmentation post-inflammatoire, les dépigmentations dues aux brûlures ou à la chirurgie et les dyschromies bénignes du visage.
7. 7. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans laquelle ladite souche de Bifidobacterium longum subsp. longum CNCM 1-2618 est formulée dans une composition cosmétique comprenant en outre un véhicule ingérable.
8. 8. Utilisation cosmétique selon la revendication 7, dans laquelle la composition cosmétique comprend en outre un actif cosmétique additionnel.