CN101772349A - MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体的调节 - Google Patents

Abstract

本发明涉及在皮肤细胞中调节POMC基因产物的受体(MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体)的表达，并可能调节POMC的表达的活性物质；尤其涉及调节表皮细胞的增殖和分化，以实现上皮再形成、维持神经分布、滋养皮肤、或修复正常色素沉着、或抗衰老、或独立地调节色素沉着、或使皮肤不老化。本发明还涉及筛选此类活性物质的方法。

Description

MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体的调节

本发明涉及活性组分，其调节由POMC(阿黑皮素原)基因编码的神经调节受体的表达，并可能调节相应神经介质(neuromediator)的表达。本发明还涉及组合物的用途，该组合物包含至少一种在皮肤水平上对POMC基因编码的神经调节受体的表达有活性的物质，以及筛选此类活性组分的方法。

背景技术

由于其感觉功能，因此皮肤是个体信息的最初来源。外周神经负责皮肤的神经分布且它们具有轴突，其细胞体沿着脊髓分布。皮肤神经分布尤其包括感觉神经和自主交感神经纤维。浅表游离神经末梢是唯一进入表皮内部的感觉纤维。皮肤细胞和皮肤神经间存在重要的交换。皮肤细胞合成大量作用于皮肤神经元的神经介质(旁分泌途径)。皮肤细胞还拥有对应于神经细胞和皮肤细胞自身释放的某些神经介质的受体；因此皮肤细胞可以接受这些神经介质并对它们做出应答。

皮肤老化与皮肤细胞代谢失调有关，其特征为角质形成细胞增殖减少、角质形成细胞分化失调、死细胞堆积和皮肤神经分布减少。

α-MSH或α-促黑激素(α-MSH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、β促脂解素(β-LPH)和β内啡肽是阿黑皮素原(POMC)单基因产生的神经激素。它们主要在脑垂体中合成，但在诸如皮肤的许多外周组织中也有发现(Wintzen M，Yaar M，Burbach JP，Gilchrest BA.J Invest Dermatol.(《皮肤学研究杂志》)，1996年4月；106(4)：673-8)。POMC基因和蛋白质α-MSH、ACTH、β-LPH及β内啡肽由真皮细胞(dermal cell)、成纤维细胞、朗格汉斯细胞、表皮细胞、黑色素细胞及角质形成细胞表达。

这些蛋白质对应的受体也由皮肤细胞表达。黑皮质素受体1(MC-1R或MCR-1)是α-MSH和ACTH的受体，黑皮质素受体2(MC-2R或MCR-2)是ACTH的受体，μ阿片样物质受体(μ阿片样物质R)是β内啡肽的受体。

皮肤中α-MSH、ACTH和β内啡肽抑制炎性细胞因子IL-1、TNFα和IL-10的合成，因此它们具有消炎性质。而且，这些细胞因子刺激这些神经激素的合成(Moustafa M，Szabo M，Ghanem GE，Morandini R，KempEH，MacNeil S，Haycock JW.J Invest Dermatol.，2002年12月；119(6)：1244-53)。因此，皮肤内存在神经皮肤炎症的负反向控制。

已知α-MSH和ACTH可通过作用于其在黑色素细胞中的相应受体调节黑色素生成。α-MSH和ACTH是黑色素细胞增殖的诱导物。此外，已知β内啡肽具有对黑色素细胞的促细胞分裂效应，并增加黑色素细胞的树突形成(dendricity)(Kauser S，Schallreuter KU，Thody AJ，GummerC，Tobin DJ，J Invest Dermatol.，2003-年6月；120(6)：1073-80)。

已知α-MSH和β内啡肽也由角质形成细胞合成。这两种蛋白质诱导皮肤角质形成细胞的增殖和分化(Chakraborty AK，Funasaka Y，Slominski A，Ermak G，Hwang J，Pawelek JM，Ichihashi M.，BiochimBiophys Acta.(《生物化学与生物物理学报》)，1996年8月28日；1313(2)：130-8)。

皮肤的不同细胞(角质形成细胞、黑色素细胞和成纤维细胞)能够合成其他神经介质，例如神经营养蛋白样神经生长因子(NGF)。角质形成细胞和成纤维细胞产生NGF、TrkA和p75NTR的受体。通过其自身与TrkA结合，NGF诱导这些细胞的增殖，以防角质形成细胞凋亡。众所周知，NGF可诱导神经元分化并使其存活；因此NGF在保持神经元密度方面起重要作用。此外，在小鼠体内，背根神经节神经元内显示出POMCmRNA的存在，这表明黑皮质素系统，特别是α-MSH参与了外周神经修复。因此，α-MSH在神经营养性能中起一定作用(Gispen WH，AdanRA。Ann N YAcad Sci.(《纽约科学院院报》)，1999年10月20日；885：342-9，van der Kraan M，Tatro JB，Entwistle ML，Brakkee JH，BurbachJP，Adan RA，Gispen WH.Brain Res Mol Brain Res.(《大脑研究与分子脑研究》)，1999年1月8日；63(2)：276-86)。此外，已知β内啡肽自身及其衍生物通过与神经细胞的μ阿片样物质受体结合，产生康乐感。

迄今为止，专业人员曾试图调节αMSH或β内啡肽等神经介质的释放或模拟它们的功能，以影响皮肤的稳态和/或改善皮肤的神经分布。

此外，专业人员一直试图通过不完全相当的不同代谢途径解决皮肤老化问题。但现在仍存在一些新途径亟待探索。

因此，一项在先专利申请WO2007/039058公开了将阿片样物质受体拮抗剂用于减量调节黑色素细胞中的阿片样物质受体表达的一般用途。另一项在先专利申请US2004/0214851公开了增加阿片样物质受体表达以用于诊断和/或治疗(仅用于受损组织)效用的方法。这些公开的内容未提供抵抗上文定义的或下文所述的皮肤老化的效应的方法。

发明目的

本发明人已经找到创新方法以修复皮肤神经分布，或维持或促进皮肤细胞的稳态，特别是用于一般的老化和色斑问题。

本发明还旨在提供用于用于评估皮肤美容学中的活性组分对皮肤的神经分布、皮肤稳态和黑色素生成的影响的标准。

本发明的主要目的是提供至少一种活性物质，特别是在皮肤水平提供至少一种活性物质，以：

-促进细胞稳态，特别是刺激角质形成细胞增殖，以允许上皮再形成，

-直接或间接修复或维持皮肤的神经分布，以允许维持表皮的神经网络并获得康乐感，

-直接或间接修复或维持血管生成，以维持令人满意的血液滋养，

-调节黑色素生成。

所有这些目的都是为了预防和/或抵抗皮肤老化和/或抵抗皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，例如光诱导的老化或时间性老化。

因此，本发明的一个目的是预防和/或抵抗皮肤性质的丧失，特别是表皮性质的丧失，以及预防和/或抵抗自然肤色的改变，特别是色斑，例如白斑或褐色斑。

本发明还旨在提供允许对参与皮肤神经分布、血管形成和上皮形成的其他介质的合成的级联诱导的物质。

本发明还旨在提供预防和/或抵抗皮肤水平的营养性能丧失的物质。

本发明还旨在提供上文所述的化妆学和/或药学，特别是皮肤学领域中的一些活性物质。

本发明的特别目的是提供可局部和/或营养保健地(neutraceutically)应用的活性物质，特别是至少一种植物提取物，其可能通过生物技术转化而来，或者至少一种已表征的分子。

对于生物技术，本发明人指包含至少一个在微生物的存在下进行的步骤的方法。

发明概述

在本发明人开发的用于缓和上述技术问题并实现本发明目的创新途径中，本发明人发现，非常有意思的是在皮肤水平上调节，且尤其提高、维持或降低POMC基因编码的至少一种介质的至少一种受体的表达。

鉴定活性组分的方法以诱导激素αMSH或β内啡肽的表达为基础，或以添加模拟这些神经激素的作用的物质为基础，但这些物质不会以任何方式导致这些激素的受体的表达。

本发明人发现，在时间性老化过程中，受体MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R的基因水平的表达减少了约4倍，角质形成细胞中POMC基因的表达增加了约5倍。此外，由于MC-1R和μ阿片样物质受体是由黑色素细胞表达的，因此可使用本发明的活性物质预防和/或抵抗皮肤老化和/或减轻皮肤的色素沉着。

本发明涉及调节MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R这三种受体中至少一种的表达的物质，特别是在皮肤水平的表达，以改善神经介质的效应，从而允许对参与皮肤神经分布、血管形成和上皮形成的其他介质的合成的级联诱导。

本发明涉及至少一种调节MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R这三种受体的基因中至少一种的表达的物质，特别是在皮肤水平上的表达，以维持或促进皮肤水平的细胞稳态，修复皮肤的神经分布或血液滋养，并调节黑色素生成。

对于调节受体MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质受体中的至少一种的表达，本发明人指调节(刺激或抑制，可能是部分刺激或抑制)分别编码蛋白质MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质R的基因中的至少一种，并调节(刺激或抑制，可能是部分刺激或抑制)蛋白质MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质受体中至少一种的相应信使RNA的合成，以及调节(刺激或抑制，可能是部分刺激或抑制)蛋白质MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质R的活性。

对于刺激受体MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质受体中的至少一种的表达，本发明人指刺激，可能是部分刺激分别编码蛋白质MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质R的基因中的至少一种，并刺激，可能是部分刺激对蛋白质MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质受体中至少一种的相应信使RNA的合成，以及刺激，可能是部分刺激蛋白质MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质R的活性。

对于抑制受体MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质受体中的至少一种的表达，本发明人指抑制，可能是部分抑制分别编码蛋白质MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质R的基因中的至少一种，并抑制，可能是部分抑制对蛋白质MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质受体中至少一种的相应信使RNA的合成，以及抑制，可能是部分抑制蛋白质MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质R的活性。

对于术语“修复”，本发明人是针对某参数而言，是指此参数从低于或高于良好生理功能所需的水平恢复到更适合相关受试者的生理水平。

对于术语“产生康乐感“，本发明人指通过释放容易与μ-阿片样物质受体结合的β内啡肽产生的康乐感。

本发明尤其涉及调节，尤其优选刺激MC-1R基因和/或MC-2R基因和/或μ阿片样物质R基因的表达，和/或分别由这些基因编码的蛋白质的表达，特别是在人体中。

本发明还特别涉及调节POMC基因产物，以及MC-1R和/或MC-2R受体，和/或μ阿片样物质R，以提高受体-配体复合物的效用；因此还可调节POMC基因表达的活性物质也是优选的。对于黑色素生成，优选刺激或维持或降低POMC基因的表达，以减轻色素沉着。

调节作用优选足以有效实现对表达这些受体中的至少一种受体的目标皮肤细胞增殖和/或分化的刺激，和/或修复，至少部分修复皮肤的神经分布。

与对照模型(不接触活性组分)中MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体基因的表达水平相比，活性组分能够使模型中这些受体基因的表达提高至少约1.2倍，优选至少约2倍，该模型包含至少一种细胞类型，这种细胞类型与该活性组分接触时会表达这些受体，该活性组分被认为能有效刺激或激活上述受体基因。

与对照模型(不接触活性组分)中MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质R的蛋白质表达水平相比，活性组分能够使模型中这些蛋白质的表达提高至少约1.1倍，优选至少约1.2倍，这种模型包含至少一种细胞类型，这种细胞类型与该活性组分接触时会表达这些受体，该活性组分被认为能有效刺激或激活上述受体的表达。

与对照模型(不接触活性组分)中MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质R基因的表达水平相比，活性组分使得模型中这些基因的表达水平约低于或等于其0.95倍，优选0.8倍，这种模型包含至少一种细胞类型，这种细胞类型与该活性组分接触时会表达这些受体，该活性组分被认为能有效抑制或降低上述受体的表达。

与对照模型(不接触活性组分)中MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质R基因的表达水平相比，活性组分使得模型中这些基因的表达水平约低于或等于其0.95倍，优选0.8倍，这种模型包含至少一种细胞类型，这种细胞类型与该活性组分接触时会表达这些受体，该活性组分被认为能有效抑制或降低上述受体的表达。

根据一种具体实施方法，优选激活或刺激MC-1R、MC-2R，和/或μ阿片样物质受体基因，和/或MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体蛋白质的表达，并可能维持或激活POMC基因和/或在角质形成细胞中和/或神经细胞，特别是皮肤神经网络中的神经细胞中由POMC基因编码的神经介质。

根据另一实施方法，这些被表达的受体中的至少一种在角质形成细胞中的表达被抑制或降低，以减少角质形成细胞增殖，特别是与这些皮肤细胞的过度增殖有关的病理学。被表达的受体MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体中的至少一种的表达优选在角质形成细胞中被刺激，以减少炎症反应，特别是与这些皮肤细胞的病状有关的炎症反应，包括与这些皮肤细胞的过度增殖有关的病理学。

根据另一具体实施方法，对黑色素细胞中基因MC-1R和/或μ阿片样物质受体的表达，和/或蛋白质MC-1R和/或μ阿片样物质受体的表达，以及可能的POMC基因的表达和/或POMC基因编码的神经介质的表达进行了调节。根据一种具体实施方案，基因MC-1R和/或μ阿片样物质受体的表达，和/或蛋白质MC-1R和/或μ阿片样物质受体的表达被降低以达到增白效果，以及另外可能会维持或降低POMC基因的表达和/或POMC基因编码的神经介质的表达。根据另一具体实施方案，基因MC-1R和/或μ阿片样物质受体的表达，和/或蛋白质MC-1R和/或μ阿片样物质受体的表达被刺激以达到着色效果，以及另外可能会维持或刺激POMC基因的表达和/或POMC基因编码的神经介质的表达。

本发明的一方面涉及一种鉴定活性物质的方法，该活性物质能够调节至少一种类型的活细胞的增殖和分化，这种细胞能够表达MC-1R、MC-2R和/或已表征的μ阿片样物质受体，其特征在于其包括：

-使至少一种类型的能够表达MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体，并可能表达POMC基因的活细胞接触这种活性物质；

-分析MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体的表达，其特别目的是鉴定调节，优选刺激MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体表达的活性物质。

有利地，通过对编码MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体的核苷酸序列的表达进行定性和/或定量分析，来分析受体MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体的基因表达。

有利地，RT-PCR包括用与SEQ ID No.1、2、3、4互补的DNA核苷酸序列中的至少一部分杂交的引物来扩增编码MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体，并可能编码POMC基因核苷酸序列的至少一部分。

SEQ ID N°1：MC-1R NM_002386

SEQ ID N°2：MC-2R NM_000529

SEQ ID N°3：μ阿片样物质受体NM_000914

SEQ ID N°4：POMC NM_000939

所用的活细胞优选包括角质形成细胞和/或黑色素细胞和/或神经细胞，包括皮肤神经网络，特别是提取自成年人类受试者特定部位(腹部、胸部等)的皮肤。优选使用所谓的“正常”细胞，即，例如非转化细胞(非转化的肿瘤细胞或非转化的遗传修饰细胞)和具有显著代表性，可用于被研究对象组的细胞类型试验。

优选根据年龄进行分类，以建立年龄/基因表达关系和年龄/蛋白质合成关系。年轻受试者的年龄介于17至40岁之间；中年受试者的年龄介于40至50岁之间，老年受试者为超过50岁。

鉴定方法优选包括分析蛋白质MC-1R(34.7kDa)、MC-2R(33.9kDa)和/或μ阿片样物质受体(44.8kDa)表达的步骤，该步骤通过这种方法进行，即将凝胶中的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上(Western印记)，此方法特别用于检测当活性物质与上述活细胞接触时，对相应蛋白质表达的调节。

根据第一种优选的实施方法，可表达MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体的活细胞类型为角质形成细胞。在这种情况中，发现该活性组分刺激或提高MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体的表达，并可能降低POMC基因的表达。

根据第二种实施方法，可表达MC-1R和/或μ阿片样物质受体的活细胞类型为黑色素细胞。在这种情况中，发现该活性组分调节MC-1R和/或μ阿片样物质受体的表达，并可能调节POMC基因的表达。

有利地，作用于角质形成细胞和/或神经细胞，包括皮肤神经网络时，所述活性物质诱导对NGF和VEGF合成的级联增加，并因此分别刺激神经分布(神经元密度和树突形成)和血管新生。

本发明的第二个方面涉及上述活性物质的用途；即，该物质可根据上述筛选方法被鉴定为是有活性的，作为用于化妆用组合物或营养保健用组合物中的活性物质，或用于生产药品，优选皮肤药组合物，尤其用来调节，优选刺激或降低蛋白质MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体的合成，尤其用来诱导角质形成细胞和/或黑色素细胞和/或神经细胞(特别是皮肤神经网络中的神经细胞)的增殖和/或分化和/或成熟。

本发明的第三方面涉及上述活性物质的用途，作为活性物质用于化妆用组合物或营养保健用组合物，或用于生产药物组合物，优选地是皮肤药组合物，特别用来预防和/或抵抗时间性皮肤老化或由日光导致的老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮稳态减弱，或增强上皮形成，或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善皮肤血管形成，或改善血管通透性过高(hyperpermeability)，或改善皮肤结疤过程中的血管生成，或预防和/或抵抗皮肤神经分布减弱，或改善皮肤神经分布，或产生一种康乐感，或改善肤色和/或色泽和/或减轻皮肤色素沉着，特别是通过增加或减少皮肤色素沉着来改善，特别是当这种色素沉着表现出局部斑点例如色斑时。

本发明的第四方面涉及化妆用组合物或营养保健用组合物，用来预防和/或抵抗皮肤老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮稳态减弱，或增强上皮形成，或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善皮肤血管形成，或改善血管通透性过高，或改善皮肤结疤过程中的血管生成，或预防和/或抵抗皮肤神经分布减少，或改善皮肤神经分布，或产生一种康乐感，或改善肤色和/或色泽和/或减轻皮肤色素沉着，特别是通过增加或减少皮肤色素沉着改善，特别是当这种色素沉着表现出局部斑点例如色斑时；上述组合物包括作为活性组分的上述定义的活性物质，可能还包括上述物质。

本发明的第五方面涉及一种药物组合物，特别用来预防和/或抵抗皮肤老化或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮稳态减弱，或增强上皮形成，或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，或预防和/或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善血管通透性过高，或改善皮肤结疤过程中的血管生成，或预防或抵抗皮肤神经分布减弱，或改善皮肤神经分布，或产生一种康乐感，或改善肤色和/或色泽和/或改善皮肤色素沉着，特别是通过增加或减少皮肤色素沉着改善，特别是当这种色素沉着表现出局部斑点例如色斑时；上述组合物包括作为活性组分的上述定义的活性物质，可能还包括上述物质。

本发明的第六方面涉及化妆性护理方法，其特征是将上述定义的化妆用组合物，或上述定义的活性物质用于皮肤以获得改善的美化效果。

由专业人员通过简单的常规做法确定所述活性物质的有效量。

本发明还涉及预防或治疗处理方法，作为上述全部目的和应用的一部分。

发明详述

本发明人已首次表明在时间性皮肤老化过程中受体MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R的表达会降低，特别是当这些受体由人类皮肤的角质形成细胞表达时。

本发明人还首次鉴定了在时间性皮肤老化过程中POMC基因表达的提高，特别是在人类皮肤角质形成细胞中。

因此本发明人开发了角质形成细胞中的筛选方法，用以寻找活性物质，特别是植物提取物或已表征的化学分子或通过生物技术转化而来的分子中的活性物质，这些活性物质特别是刺激编码受体MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R的mRNA的表达，并可能维持、刺激或抑制编码神经介质(由POMC基因编码)的mRNA的表达。然后测试所选活性物质对mRNA相应的蛋白质表达的作用。

本发明人还表征了角质形成细胞中MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体的表达。之前，仅鉴定了角质形成细胞中MC-2R的mRNA(Moustafa M，Szabo M，Ghanem GE，Morandini R，Kemp EH，MacNellS，Haycock JW.，J Invest Dermatol.，2002年12月；119(6)：1244-53.)，因此本发明人最先鉴定了角质形成细胞中的蛋白质MC-2R，并指出ACTH不仅通过与角质形成细胞中的MC-1R结合发挥其活性，还通过与MC-2R结合发挥其活性。

因此，本发明描述了物质的用途，所述物质刺激编码神经介质(由POMC基因编码)的至少一种受体的基因中的至少一种的表达，该受体优选选自至少一种皮肤细胞类型中的MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R，这种皮肤细胞表达这些受体中的至少一种。本发明描述了物质作为活性物质的用途，用于组合物的制备，以刺激选自α-MSH、ACTH和β-内啡肽中的一种神经介质与其相应受体间的相互作用。

已经将所选活性物质用于化妆用组合物、营养保健用组合物和药物组合物中，优选是皮肤药组合物，特别用于预防和/或抵抗表皮变薄，特别是时间性或光诱导的皮肤老化过程中的表皮变薄。

有利地，上述物质提高或刺激编码神经介质(由POMC基因编码)的受体的基因的表达，以抵抗或预防角质形成细胞和/或神经细胞中配体和受体间平衡的失调。

有利地，上述物质降低POMC基因的表达，以抵抗或预防在角质形成细胞和/或神经细胞中分别观察到的配体和受体表达的失调，特别是在老化过程中。

有利地，上述物质组合使用，以抑制POMC基因的表达并刺激受体基因的表达。

有利地，上述物质提高或维持POMC基因的表达以提高α-MSH、ACTH和β-内啡肽的上述作用。

有利地，上述物质提高角质形成细胞和/或神经细胞中由POMC基因编码的神经介质的至少一种受体的表达，以预防和/或抵抗皮肤老化或应激作用引起的变化，如皮肤老化过程中所观察到的那些变化。

因此，本发明涉及这些受体的调节，优选刺激，特别是减轻失调，尤其是α-MSH，和/或ACTH，和/或β-内啡肽与其相应受体的相互作用的减少，该作用的减少与细胞老化有关，并影响角质形成细胞和/或神经细胞，包括皮肤神经网络。

有利地，上述物质增加NGF的合成，从而可能在皮肤水平上增加外周神经的生长。因此本发明涉及物质的用途，该物质允许皮肤神经分布的增加，并被观察到在老化过程中或应激作用引起的变化中会减少，正如在皮肤老化过程中所观察到的那些变化。

有利地，上述物质增加VEGF的合成，从而可能在皮肤水平上增加血管形成。因此本发明涉及物质的用途，该物质可使皮肤得到更好的滋养，并被观察到在老化过程中或应激作用引起的变化中会减少，正如在皮肤老化过程中所观察到的那些变化。

能刺激角质形成细胞和/或神经细胞中MC-1R和/或MC-2R和/或μ阿片样物质受体表达的物质优选选自：

4种已表征的分子：

-苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氢-薁并[4，5-b]呋喃-4-基，

-Z-十氢-6，8a-二羟基-1-异丙基-3a，6-二甲基薁-5-基-2-甲基丁-2-烯酸酯

-2.6-二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)5-6(1-异丙基-1-羟基环戊烷))1，2环氧环庚烷(CAS号352220-52-1)及其酯

-7-乙酸酯-2，6-二甲基-4(2-甲基丁烯酸酯)5-6(1-异丙基-1-羟基环戊烷))1，2环氧环庚烷，已知其CAS号为86992-41-8，其通用名为lapiferrin；

以及含有这些已表征的分子的植物提取物。

6种植物提取物：淡黄鼬瓣花(Galeopsis ochroleuca)(野生大麻)、普通欧蓍草(Achillea millefolium)、野生芋头(Colocasia esculenta)、欧洲酸樱桃(Prunus cerasus)、黑刺李(Prunus spinosa)、长春布宁提取物(夹竹桃科(Apocynacea)Amsonia Abrenaemontan)

4种生物技术水解产物，通过用现有微生物发酵植物提取物获得：用乳酸菌特别是乳杆菌，例如植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)转化芒果、椰枣或番木瓜提取物，或用乳酸菌特别是乳杆菌，例如副干酪乳杆菌(lactobacillus paracasei)转化香蕉提取物，及其混合物。

在这些已表征的分子中，lapiferin，特别是多石阿魏(Ferula lapidosa)提取物中的，或来自多石阿魏提取物的，以及苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氢-薁并[4，5-b]呋喃-4-基是本发明的优选物质。

在植物提取物中，普通欧蓍草和黑刺李是本发明的优选物质。

根据优选实施方案，所述植物提取物优选通过将植物(优选根、根状茎、茎、树皮、花、果实、种子、胚原基或叶)浸泡于1-10％(p/p)(通常为1-5％)的溶剂中或溶剂混合物中获得，通常为水和醇、二醇或多元醇(例如乙醇、甘油、丁二醇和其他二醇、木糖醇等)的混合物，其比例为100/0至0/100，优选浸泡于水中。最后将获得的提取物过滤或蒸馏，以回收可溶部分，将此部分过滤，优选用0.45μm的滤膜。在微生物存在下通过发酵植物提取物以获得生物技术水解产物，该微生物通常来自乳杆菌科，特别是植物乳杆菌或副干酪乳杆菌，和双歧杆菌(bifidobacterium)科，特别是长双歧杆菌(bifidobacterium longum)，或酵母属(Saccharomyces)。优选对这些水解产物进行进一步过滤，优选用0.45μm的滤膜，以获得活性组分。

通过溶解于溶剂中制备已表征的分子(包括lapiferin和苯乙酸3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氢-薁并[4，5-b]呋喃-4-基)，这种溶剂通常为DMSO、乙醇、二醇，特别是溶解于浓度为0.1％的DMSO中。

上述活性物质用于化妆用组合物时，对于植物提取物和生物技术水解产物，其含量优选介于0.01％至5％(v/v)，对于已表征的分子，其含量介于1.10^-7％至1％(v/v)，优选介于1.10^-5％至1.10^-1％。

上述物质还表现出对神经细胞中的MC-1R和/或MC-2R和/或μ阿片样物质受体表达的刺激作用，特别是在皮肤神经网络中。

本发明特别涉及一种用于化妆护理或预防或治疗处理的组合物，用于改善皮肤结疤过程中的通透性过高，改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，从而改善皮肤上皮形成，促进维持皮肤神经分布。

本发明还涉及用于预防或治疗处理的组合物，以改善神经分布，预防和/或抵抗由于与神经细胞数量减少和/或活力降低相关导致的病理学，特别是在结疤和/或伤口愈合、妊娠纹、烧伤、牛皮藓或皮炎的情况下。

上述活性物质以及下文所述的调节MC-1R和/或μ阿片样物质R表达的活性物质优选与选自以下的活性物质组合使用：

-刺激皮肤神经营养性能和/或活化敏感皮肤神经的活性组分，例如专利申请FR 2825273所引用的组分，红椒(Capsicum annuum)的提取物、红色素(红辣椒)、或胡椒(Piper nigrum)、或谷氨酰胺基乙基吲哚(Exsymol)；

具有模拟β内啡肽效果的活性组分，以改善皮肤的屏障功能，例如专利申请US 2006069032所引用的组分，可可豆壳提取物；

-刺激β内啡肽合成的活性组分，可获得康乐感，例如Tephroline，来自一种植物灰毛豆(tephrosia purpurea)(Soliance)；

-刺激细胞增殖和/或细胞分化的活性组分，旨在具有抗老化活性，例如下列分子：NGF、α-MSH、β内啡肽、或衍生物，例如专利申请FR2857874中所述的那些物质，P3-内啡肽。

-保护成纤维细胞生长因子(特别是FGF2)不被降解的活性组分，例如申请人提交并公布的GB 244036专利申请中所述的植物提取物，特别是黄葵(Hibiscus Abelmoscus)提取物；

-刺激成纤维细胞活性和/或增殖的活性组分，例如发酵大豆多肽，这是申请人以Phytokine ^TM这一商品名销售的产品，可与黄葵提取物组合使用；

-活化透明质酸酶合成酶的活性组分，特别是活化透明质酸酶合成酶2，如专利FR2893252所述；

-刺激赖氨酰氧化酶(例如LOXL)活性和/或合成的活性组分，例如专利FR2855968所述的组分，特别是用于刺激弹性纤维的莳萝提取物。

-具有消炎特性(例如抑制PLA2)的活性组分，特别是专利FR2847267中所述的组分，特别是野葛根提取物

-可改变肤色的活性物质，例如用于亮化和/或美白皮肤的活性组分；

-具有消除浮肿特性的活性物质，例如橙皮素月桂酸酯或五羟黄酮辛酸酯

根据本发明的第二方面，发明人鉴定了一些活性物质，这些活性物质可调节，优选提高或降低选自以下的至少一种受体的表达：黑色素细胞表达的MC-1R和μ阿片样物质受体，和/或调节黑色素细胞表达的POMC基因的表达。此实施方案的具体目标在于改善肤色和/或改善皮肤色素沉着，特别是当这种色素沉着表现出局部瑕疵例如色斑时，以预防和/或抵抗与老化有关或无关的特定色素斑点的色素沉着或色素脱失，如下文所述。

本发明人还开发了一种用于黑色素细胞的筛选方法，以寻找活性物质，特别是植物提取物或已表征的化学分子或通过技术转化而来的分子等活性物质，特别用来调节编码MC-1R和μ阿片样物质R的mRNA的表达，并可能调节编码神经介质(由POMC基因编码)的mRNA的表达。然后测试此类选择的活性物质对mRNA的相应蛋白质表达的作用。

并将所选活性物质并入化妆用组合物、营养保健用组合物和药物组合物中，优选是皮肤药制剂，特别用于预防和/或抵抗色素沉着或色素脱失。

有利地，上述物质调节黑色素细胞中由POMC基因编码的神经介质的至少一种受体的表达，以预防或抵抗色素沉着或色素脱失。

有利地，上述物质POMC基因的表达，以预防或抵抗色素沉着或色素脱失；特别是，保留可同时刺激黑色素细胞中的POMC和受体的物质以增加色素沉着，并保留可同时减少或抑制黑色素细胞中的POMC和受体的物质以减少色素沉着。这些物质可组合使用以刺激POMC表达和/或受体表达并增加色素沉着或抑制POMC和受体并减少色素沉着。

根据一个实施方案，刺激黑色素细胞中MC-1R和/或μ阿片样物质受体中至少一种受体的表达和/或刺激POMC表达的物质可为选自以下的物质：

-1种已表征的分子：1甲基β咔啉3羧酸；

-下列植物提取物：大豆粉、(红色)菝葜(salsaparilla)(丽花菝葜(Smilax ornata))、普通欧蓍草、Cecropia obtusa、月见草(Oenotherabiennis)、胡萝卜、绵马、欧洲酸樱桃(欧洲酸樱桃)、或其任何混合物，以及；

-通过用现有微生物发酵植物提取物获得的生物技术水解产物，其选自：发酵过的酵母或羽扇豆，尤其是用乳酸菌(例如植物乳杆菌)发酵发酵植物提取物获得的生物技术水解产物；用乳酸菌转化(尤其是用乳杆菌转化，例如植物乳杆菌)的番木瓜、椰枣或大豆提取物；用双歧杆菌(例如长双歧杆菌)发酵的柠檬提取物，及其任何混合物。

活性物质优选可刺激MC-1R受体和/或刺激黑色素细胞中的POMC的表达的那些活性物质，优选为：

-1种已表征的分子：1甲基β咔啉3羧酸；

-下列植物提取物：大豆粉、月见草、菝葜(丽花菝葜)、Cecropiaobtusia、普通欧蓍草、胡萝卜、欧洲酸樱桃。

-通过用现有微生物发酵植物提取物获得的生物技术水解产物，其选自：用乳酸菌转化(尤其是用乳杆菌转化，例如植物乳杆菌)的番木瓜、羽扇豆、酵母、椰枣或大豆提取物。

该组合物特别用于增加色素沉着，具有增黑作用，以预防和/或抵抗与老化有关或无关的色素脱失斑点。

根据第二个实施方案，降低黑色素细胞中POMC基因表达的物质可为淡黄鼬瓣花(野生大麻)以及欧刺柏(Juniperus communis)(杜松子)的水提取物或水醇(hydroalcoolic)提取物，并且/或者降低黑色素细胞中MC-1R和/或μ阿片样物质受体中至少一种的表达的物质为欧刺柏(杜松子)的水提取物或水醇提取物。

该组合物特别用于减少色素沉着，具有增白或增亮作用，以提高皮肤亮度，预防和/或抵抗与老化有关或无关的色素沉着斑点。

本发明特别涉及用于化妆品或皮肤-化妆护理或预防性处理或治疗性处理的组合物，用来改变皮肤亮度以及色素沉着，特别是与老化有关或无关的色素斑点。

本发明的化合物被制成局部用组合物的形式，特别是化妆用组合物或药物组合物，优选可用于皮肤的皮肤用组合物。因此，对于这些组合物，赋形剂例如包含选自以下的至少一种化合物：防腐剂、软化剂、乳化剂、表面活性剂、保湿剂、增稠剂、调节剂、消光处理剂、稳定剂、抗氧化剂、调质剂、闪光剂、成膜剂、增溶剂、色素、染料、香料和遮光剂。这些赋形剂优选选自：氨基酸及其衍生物、聚甘油类、酯类、聚合物和纤维素衍生物、羊毛脂衍生物、磷脂类、乳铁蛋白、乳过氧化物酶、基于蔗糖的稳定剂、维生素E及其衍生物、天然和合成蜡、植物油、甘油三酯、不可皂化物、植物固醇类、植物酯类、硅氧烷及其衍生物、蛋白水解产物、荷荷芭油及其衍生物、脂溶性/水溶性酯、甜菜碱类、胺化物、蔗糖酯植物提取物、二氧化钛、甘氨酸、对羟苯甲酸酯，更优选丁二醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、乙二醇-15硬脂基醚、鲸蜡硬脂醇(cetearyl alcohol)、苯氧乙醇、羟苯甲酸甲酯、羟苯甲酸丙酯、羟苯甲酸丁酯、丁二醇、天然生育酚、甘油、二羟鲸蜡醇磷酸酯钠(sodium dihydroxycetyl Phosphate)、异丙基羟基鲸蜡基醚(isopropyl hydroxycetyl ether)、硬脂酸乙二醇酯、三异壬酸甘油酯(triisononanoin)、椰油酸辛酯、聚丙烯酰胺、异链烷烃、月桂基聚氧乙烯(7)醚、卡波姆、丙二醇、甘油、没药醇、聚二甲基硅氧烷、氢氧化钠、PEG 30-二聚羟基硬脂酸、癸酸/辛酸甘油三酯、鲸蜡硬脂醇辛酸酯、己二酸二丁酯、葡萄籽油、荷荷芭油、硫酸镁、EDTA、环状聚二甲基硅氧烷、黄原酸胶、柠檬酸、十二烷基硫酸钠、矿物蜡和矿物油、异硬脂醇异硬脂酸酯、丙二醇二壬酸、丙二醇异硬脂酸酯、PEG 8、蜂蜡、氢化棕榈仁油甘油酯、羊毛脂油、芝麻油、鲸蜡醇乳酸酯、羊毛脂醇、二氧化钛、乳糖、蔗糖、低密度聚乙烯和等渗盐水。

理想地，上述化合物配制成选自以下的剂型：水溶液或基于油的溶液、基于水的乳膏或凝胶或油基凝胶，特别是瓶装或管装，特别是沐浴液、香波、乳液、乳剂、微乳剂或纳米乳剂，特别是水包油或油包水或各种基于硅氧烷的乳膏或凝胶或油基凝胶；润肤液，特别是玻璃瓶装或塑料瓶装或喷雾装、吸塑装、液体皂、皮肤用皂、香膏剂、泡沫剂、无水产品，优选液体、乳膏剂或固体，例如棒状的，特别是唇膏。

本文所用的术语“局部应用”指将本发明的组合物用于或喷在皮肤表面。

本文所用的术语“可用于皮肤”表示所用化合物适合与人的皮肤接触，不会产生不必要的毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应或其等同状况。

专业人员将许多用于活性化妆品成分用于改善皮肤健康和/或外观。这些专业人员知道怎样配制这些化妆品或皮肤用组合物以获得最佳效果。此外，本发明所述的化合物与其他物质组合使用时具有协同作用。这些组合使用也在本发明范围内。CFTA Cosmetic Ingredient Handbook(CFTA化妆品成分手册)第二版(1992)描述了化妆品和药品行业目前常用的特别适合局部使用的各种化妆品和药品成分。这类成分的一些实例包括但不限于下列化合物：研磨剂、吸收剂化合物、具有美化目的化合物例如香水、色素、染料、精油、收敛剂等(例如，丁香油、薄荷脑、樟脑、桉树油、丁香酚、乳酸甲酯、金缕梅精馏液)，祛痘剂、抗絮凝剂、消沫剂、抗菌剂(例如：碘代丙烷基丁基氨基甲酸酯)、抗氧化剂、粘合剂、生物添加剂、吸湿剂、膨胀剂、螯合剂、添加剂、杀菌剂、变性剂、外部止痛剂、成膜材料、聚合物、乳浊剂、pH调节剂、还原剂、褪色或澄清剂(例如，对苯二酚、曲酸、抗坏血酸、磷酸抗坏血酸酯镁盐、抗坏血酸葡萄糖胺)、调节剂(例如：保湿剂)、皮肤舒缓及和/或抗疤痕剂(例如：泛醇及其衍生物，例如：乙基泛醇)、芦荟、泛酸及其衍生物、尿囊素、没药醇和甘草酸二钾盐、增稠剂、维生素及其衍生物或等同物。

附图简述

在图中：

图1显示了在老化过程中，人体活组织切片的角质形成细胞中的受体MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体基因表达的显著降低。

图2显示了通过对人体正常皮肤的活组织切片部分进行免疫荧光检查观察到的微管蛋白βIII和200神经丝表达的显著降低。

图3和4分别显示了年龄介于15至75岁的受试者的微管蛋白βIII和200神经丝的相对表达率。

图5和6分别显示了与图3和4中的研究相对应的统计分析。

当阅读解释性描述时，这些描述涉及仅用于说明目的且不以任何方式限制本发明领域的实施例，本发明的其他目的、特性和益处对本领域技术人员而言是显而易见的。

这些实施例是本发明不可或缺的一部分，对于本文所述的与任何先前技术相比的任何新特性，其整体包括实施例，均为构成本发明功能及一般方面完整性的一部分。

因此，每个实施例都有一般范围。

实施例

实施例1：通过免疫组织学证明人体活组织切片上的蛋白质MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体的表达水平在老化过程中的降低

发明人已经证明了取自年轻女性(年龄低于40岁)和老年女性(年龄超过50岁)的活组织切片中MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体在蛋白质水平上的表达在时间性老化过程中的变化。(见图1：取自30或60岁人类患者的人体活组织切片中的受体表达-免疫组织化学结果)

此研究用免疫组织学方法进行。

由于使用了抗-MC-1R(1/500)、抗-MC-2R(1/200)和抗-μ阿片样物质受体(1/1000)的抗体，从而得以明确的证明。

将重建的皮肤模型(

Coletica，里昂，法国)和活组织切片制成冷冻横切片，或者然后用石蜡密封，用于免疫标记。

所用抗体为：抗-MC-1R、抗-MC-2R和抗-μ阿片样物质受体(Chemicon International公司)的抗体。用合适的经缀合的二抗进行检测。

结果示于图1，其证明老化过程中角质形成细胞中的受体MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R的基因的表达水平降低。

实施例2：通过实时RT-PCR方法证明在老化过程中成年人角质形成细胞中MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体基因表达水平的降低和POMC基因表达水平的增加

本发明还涉及在时间性老化过程中，人类活组织切片的角质形成细胞的受体MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R基因表达的变化，和POMC基因表达水平的变化。用实时RT-PCR(逆转录酶聚合酶定量链式反应)分析这四种目的基因及肌动蛋白基因的表达。此技术通过将一种基因与肌动蛋白基因的表达(视为常数)进行对比，对这种基因表达进行精确定量。从而对此基因表达水平的调节进行定量。

将总RNA用“SV 96总RNA分离系统”试剂盒(Promega，Charbonnieres，法国)纯化。将纯化的RNA悬于100μl无RNA酶水(Promega，Charbonnieres，法国)中，测定后分到平板中(96孔微量滴定板，10μl总RNA(5ng/μl每PCR))。此项目中选用的引物如表I所示：

表I：

肌动蛋白有义链(SEQ ID N°5)肌动蛋白反义链(SEQ ID N°6)	GTGGGGCGCCCCAGGCACCACTCCTTAATGTCACGCACGATTTC
		MC-1R有义链(SEQ ID N°7)MC-1R反义链(SEQ ID N°8)	GGGCTCTGAGAACGACTTTTCCGGGCTCCTGTCTGGTTGG
MC-2R有义链(SEQ ID N°9)MC-2R反义链(SEQ ID N°10)	TCACGTCGCTGTTCCCGCTGATAAGAGAGACATGTAGCAGGCGCAGTA
		μ阿片样物质受体有义链(SEQ ID N°11)μ阿片样物质受体反义链(SEQ ID N°12)	CTCAGCCAGGACTGGTTTCTGTAAGATCGGACAGGTTGCCATCTAAGTG
POMC有义链(SEQ ID N°13)POMC反义链(SEQ ID N°14)	CGCCCAGTGAAGGTGTACCCGGCGTCTGGCTCTTCTCGGAGGTC

在OPTICON温度循环器中用“Quanti Tect SYBR Green RT-PCR”试剂盒(Qiagen，法国)对含mRNA的平板进行实时RT-PCR技术，其进行扩增循环。在50℃下逆转录(RT)30分钟，然后在95℃下15分钟，以抑制逆转录酶，激活聚合酶，变性获得的互补DNA(cDNA)。顺序进行50个循环的序列聚合反应(PCR)(95℃15秒，60℃30秒，72℃30秒)。每个循环结束时，读取荧光值，该值与片段数成比例。用每个基因的表达水平与肌动蛋白表达水平之比定义表达水平。

发明人指出年龄超过52岁的女性中MC-1R基因的表达比年轻女性低4倍，这具有统计学显著性。

发明人指出与年轻女性年龄超过5岁的女性中MC-2R基因的表达比该年轻女性低8倍，这具有统计学显著性。

发明人指出年龄超过55岁的女性中μ阿片样物质受体基因的表达比年轻女性低6.5倍，这具有统计学显著性。

发明人指出年龄超过50岁的女性中POMC基因的表达比年轻女性高5倍，这具有统计学显著性。

总之，本发明允许人体角质形成细胞中的受体及其配体表达间的平衡出现波动，以支持配体增多和所有受体减少。

实施例3：分析受体MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质R的信使RNA和POMC的mRNA的表达，例如在使角质形成细胞与活性组分接触或不与其接触的条件下，通过定量RT-PRC进行分析

本发明特别涉及筛选新分子的方法，此分子可诱导3种受体MC-1R、MC-2R和/或μ阿片样物质受体的合成，以恢复重建皮肤，恢复人体皮肤活组织切片中的老化角质形成细胞中相关受体的生理表达，这种生理表达可在年轻皮肤中的角质形成细胞中观察到。

所述活性组分具有不同来源(例如植物或合成分子)。

特别是，所述植物提取物通过将植物(优选根、根状茎、茎、树皮、花、果实、种子、胚芽或叶)浸泡于1-10％(p/p)(通常为1-5％)的一种溶剂或溶剂混合物中获得，通常为水和乙醇、乙二醇或多元醇(例如乙醇、甘油、丁二醇和其他二醇、木糖醇等)的混合物，其比例为100/0至0/100，优选浸泡于水中。最后将获得的提取物过滤或蒸馏，以回收可溶部分，将此部分过滤，优选0.45pm的滤膜。在微生物存在下通过发酵植物提取物获得生物技术水解产物，其中所述微生物通常来自乳杆菌属，特别是植物乳杆菌或副干酪乳杆菌，和双歧杆菌属，特别是长双歧杆菌或酵母菌。然后对这些水解产物进行进一步过滤，优选0.45μm的滤膜，以获得活性组分。

通过溶解于溶剂中制备所述已表征的分子，这种溶剂通常为DMSO、乙醇、乙二醇，特别是溶解于浓度为0.1％的DMSO中。

将活性组分溶于培养环境中，然后对角质形成细胞进行试验：对于植物提取物和生物技术水解产物，其含量通常介于0.1％至2％(v/v)，特别是介于0.5％至1％，对于已表征的分子，通常介于0.001％至0.01％。在本实施例培养环境中，对与植物提取物和生物技术水解产物，采用的是1％的含量，对于已表征的分子，采用的是0.01％的含量。

通过酶消化从正常人的整形手术中获取角质形成细胞，在用于角质形成细胞的特异性环境中使该角质形成细胞增殖，然后接种(例如每平方厘米50000个)到24孔板中，然后在严格无血清环境中在单层板中进行培养。汇合后，将细胞与用培养基稀释的活性物质接触，通常接触24小时。

用未处理的对照样(仅培养基)和3个阳性对照样(1ng/ml TGF-β，50pg/ml IL-1α和100ng/ml TNF-α)进行平行试验，例如在同一个培养板上。先前已试验1ng/ml TGF-β，50pg/ml IL-1α和100ng/ml TNF-α，通过分析mRNA(例如通过定量RT-PCR，对于这3种诱导剂用x2或x.08)，已经验证这三种浓度的细胞因子对3种受体的mRNA合成的刺激作用.

将细胞与活性物质接触后，例如接触24小时后，移去培养环境，保藏细胞，例如先用pH 7.4的磷酸盐溶液洗涤，然后在-80℃冷冻干燥。提取总RNA，例如用二氧化硅柱96-孔提取试剂盒，然后分到96-孔分光光度计上，在260nm处进行测定(纯度指标：280nm处蛋白质的量)。将RNA稀释，例如稀释到5ng/μl。进行第1步中的定量RT-PCR，例如在96-孔板上对50ng初始RNA进行，对肌动蛋白、MC-1R、MC-2R、μ阿片样物质R和POMC基因进行。使用每种基因的特定引物，例如0.5μM，见上表I中的明确说明。

扩增的各项参数如下：在OPTICON温度循环器中用“Quanti TectSYBR Green RT-PCR”试剂盒(Qiagen，法国)对含mRNA的板实施实时RT-PCR技术，进行扩增循环。在50℃下逆转录(RT)30分钟，然后在95℃下15分钟，以抑制逆转录酶，激活聚合酶，变性获得的互补DNA(cDNA)。顺序进行50个循环的聚合(PCR)(95℃15秒，60℃30秒，72℃30秒)。每个循环结束时，读取荧光值，该值与扩增的片段数成比例。用每个基因的表达水平与肌动蛋白基因表达水平之比定义表达水平。

基因MC-IR、MC-2R、μ阿片样物质受体和POMC的表达水平用与阴性对照(未处理)进行比较得出的变化百分数表示。作为受试物的这些活性物质如下表II所示：

表II

名称(拉丁名)	植物部位	MC-1R对照X：	MC-2R对照X：	μ阿片样物质R对照X：	POMC对照X：
						普通欧蓍草	整株植物	2.73	3.0	23.0	3.38
淡黄鼬瓣花	整株植物	2.9	1.0	1.0	1
						野生芋头	块茎	2.0	1.0	24.0	1
欧洲酸樱桃	茎	1.0	1.0	5.3	2.6
						月见草(Oenotherabiennis)	种子	0.67	1.0	1.0	0.36
黑刺李	果实	1.0	2.3	6.0	1
						(Z)-十氢-6，8a-二羟基-1-异丙基-3a，6-二甲基薁-5-基-2-甲基丁-2-烯酸酯	分子	1.0	18.5	1.0	1

名称(拉丁名)	植物部位	MC-1R对照X：	MC-2R对照X：	μ阿片样物质R对照X：	POMC对照X：
						苯基乙酸-3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氢-薁酚[4，5-b]呋喃-4-基	分子	20.0	20.0	1.0	1
芒果植物乳杆菌	果实	1.0	10	3	0.4
						椰枣植物乳杆菌	果实	1.0	1	60	1
番木瓜乳酸菌	果实	1.1	4	5	0.6
						香蕉乳酸菌	果实	1.2	10	42	0.4
Lapiferin	分子	1.0	2.8	4.0	1.0

“对照X”指“对照乘以”

结论：960中的13种活性物质在所考虑的条件下可显著提高角质形成细胞中编码MC-1R、MC-2R或μ阿片样物质R的基因的mRNA的(表达)率。此外，4种活性物质特别抑制了POMC基因的表达。

实施例4：分析受体MC-1R和μ阿片样物质R的信使RNA的表达，例如在使黑色素细胞与活性组分接触或不接触的条件下，通过定量RT-PRC进行

除了细胞培养以外，此实验的其他实验条件与上一个实施例相同。

通过酶消化从正常成人的整形手术中获取黑色素细胞，在黑色素细胞特定的环境中使黑色素细胞增殖，然后接种(例如每平方厘米50000个)到24孔板中，然后在黑色素细胞特定的环境中培养。汇合后，将细胞在培养环境中与稀释的活性物质接触，通常接触24小时。

表III

名称(拉丁名)	植物部位	MC-1R对照X：	μ阿片样物质R对照X：	POMC对照X：
					普通欧蓍草	植物	1.0	1.0	4.3
淡黄鼬瓣花	植物	1.0	1.0	0.47
					月见草	种子	4.0	1.0	1.96
1甲基β咔啉-3-羧酸		1.0	1.0	3.3
					酵母乳酸菌		1.0	1.0	2.18
柠檬长双歧杆菌		1.0	1.0	2.18
					菝葜(丽花菝葜)	根	3.9	1.0	2.74
欧刺柏	果实	0.4	1.0	0.25
					Cecropia obtusia	芽	3.2	1.0	2.18
番木瓜乳酸菌		2.58	1.0	1.0
					胡萝卜	果实	1.97	1.0	1.0
酸樱桃	果实	2.0	1.0	1.0
					羽扇豆植物乳杆菌		1.0	1.0	2.15
大豆粉	//	1.0	1.0	2.42

名称(拉丁名)	植物部位	MC-1R对照X：	μ阿片样物质R对照X：	POMC对照X：
					椰枣植物乳杆菌	果实	3.23	1.0	1.0
大豆植物乳杆菌		2.0	1.0	1.0

“对照X”指“对照乘以”

结论：10种活性物质提高了黑色素细胞中MC-1R基因的表达；9种活性物质提高了POMC基因的表达，并且2种活性物质降低了黑色素细胞中POMC基因的表达。

实施例5：检测活性组分作用后角质形成细胞中的MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体蛋白

分别用下列商业化的多克隆抗体通过电泳确定蛋白质MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体的特性：OPA1-15013(Affinity生物试剂)、AB5128(Chemicon International)和AB5511(Chemicon International)。

在K-SFM环境中在含5％CO₂的大气中于37℃下培养细胞，K-SFM(Invitrogen)中含BPE(25mg)、EGF(2.5μg)和normocin。

用PBS溶液洗涤细胞，在4℃下在蛋白酶抑制剂的存在下用裂解液(Tris 50mM，NaCl 250mM，pH 7.5，1％triton)提取30分钟，提取出蛋白质。将裂解产物离心分离(15分钟，13,000g)。用β-巯基乙醇存在下用Laemmli溶液稀释漂浮物，然后电泳。

将蛋白质在4-12％SDS-聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，用于免疫检测。将所得蛋白质转移到硝酸纤维素膜(Biorad)上。然后在室温下将膜浸泡于含3％BSA的TBS溶液中一小时。在4℃下用一抗培养过夜，然后在室温下用偶联了Alexa 488(invitrogen)的二抗对上述蛋白质进行免疫检测，时间为1小时。

上述抗体以如下稀释度使用：5μg/mL抗-MC-1R(抗体)、5μg/mL抗-MC-2R(抗体)和1/1000抗-μ阿片样物质R(抗体)。

通过图像分析进行半定量化。作为受试物的这些活性物质如下表IV所示：

表IV

名称	植物部位：	MC-2R对照X：	μ阿片样物质R对照X：
				普通欧蓍草	植物	18.2	2.81
淡黄鼬瓣花	植物	1.0	2.54
				野生芋头	块茎	1.0	1.52
欧洲酸樱桃	茎	1.0	1.44
				月见草	种子	1.0	1.46
黑刺李	果实	8.26	2.02
				(Z)-十氢-6，8a-二羟基-1-异丙基-3a，6-二甲基薁-5-基-2-甲基丁-2-烯酸酯		1.99	1.37
苯乙酸-3，6，9-三甲基-2，7-二氧-2，3，3a，4，5，7，9a，9b-八氢-薁酚[4，5-b]呋喃-4-基		1.96	1.66

“对照X”指“对照乘以”

结论：蛋白质水平的提高证实了在基因水平所观察到的由活性物质诱导的提高。淡黄鼬瓣花、月见草和两种已表征的分子虽然未提高μ阿片样物质R基因的表达，但是诱导了其蛋白质表达的提高。

实施例6：人体活组织切片中βIII微管蛋白和神经丝200的免疫检测

发明人已通过免疫荧光法表明在时间性老化过程中，微管蛋白βIII和神经丝200在神经生物性老化过程中会减少(图2)。发明人选择了这两种标记物用于检测皮肤中轴突延长的存在。标记物微管蛋白βIII可用于对细胞核数量和神经网络密度进行定量化，标记物神经丝200更适于指示成熟的神经网络。通过对80位年龄介于17岁至75岁的女性的乳房造影法活组织切片进行的免疫荧光学检查，发明人已证实超过38岁的女性的微管蛋白βIII的表达要降低3.7倍，神经丝200的表达则降低3.5倍。上述抗体被用于下列稀释液中：1∶500(抗-微管蛋白βIII)和1∶500(抗-神经丝200)。用结合了ALEXA 594的抗小鼠IgG(山羊)加入到ALEXA594，稀释到1∶100来检测免疫复合物。

图2显示了通过免疫荧光法对人体正常皮肤中的微管蛋白βIII和神经丝200进行的检测。

所谓的年轻受试者(26岁)体内微管蛋白βIII的免疫检测见图A，所谓的老年受试者(56岁)体内微管蛋白βIII的免疫检测见图B。所谓的年轻受试者(26岁)体内神经丝200的免疫检测见图C，所谓的老年受试者(56岁)体内神经丝200的免疫检测见图D。用白线表示真皮-表皮的交界处。每个图左上方的方块表示使用对照同种型抗体的阴性对照。

图3和4分别显示了年龄介于15至75岁的受试者的微管蛋白βIII和200神经丝的相对表达率。红色箭头表示曲线转折点。图5和6分别显示了与图3和4中的研究相对应的统计分析。结果显示，年轻受试者体内βIII微管蛋白和神经丝200的表达比38岁受试者体内的分别高3.7和3.5倍。所得结果代表了平均±SD，t检验的p值＝0.05。

实施例7：角质形成细胞培养中的漂浮物(floater)分泌的NGF和VEGF的量

将老年受试者的角质形成细胞进行培养，将细胞与活性物质接触一段时间，例如24小时，然后恢复环境，用ELISA技术检测角质形成细胞分泌的NGF或VEGF。所用方法与研发系统提供者(DY256)用于NGF的方法和Clinisciences(KHG0112)用于VEGF的方案一致。受试活性物质中，下列受试活性物质表现出了最强的调节作用，特别是对NGF，如表V所示。

表V

植物	植物部分	NGF对照乘以
			普通欧蓍草	植物	11.28
欧洲酸樱桃	茎	17.8
			淡黄鼬瓣花	植物	11.24

实施例8：存活的人体活组织切片中βlll微管蛋白和神经丝200的免疫检测

在DMEM培养基中，在存在或不存在NGF或活性组分的条件下，培养从成人整形手术中获得的活组织切片，保持存活4天。然后将活组织切片冷冻，进行免疫荧光学研究，以识别神经元标记物，特别是实施例6中所述的物质。

实施例9：重建的皮肤模型中分化和增殖标记物的免疫检测

此模型结合了重建真皮的培养和在此基础上进行的重建表皮的补充培养。

采用下列方案创建重建的真皮模型：

-将0.5至1.10⁶人体正常皮肤成纤维细胞接种到胶原蛋白基基底培养基上，通常为糖胺聚糖壳聚糖，然后在营养性培养基中培养，例如DMEM-Glutamax，其中补充了10％小牛血清、抗坏血酸最终浓度优选为1mM、EGF(表皮生长因子)最终浓度优选为10ng/mL、以及Normocin最终浓度优选为100μg/mL，培养21天。

采用下列方案创建重建的皮肤模型：

-将0.5至1.10⁶人体正常角质形成细胞接种到真皮替代物上，然后在营养性培养基中培养，例如DMEM-Glutamax/Ham F-12(比例3/1v/v)，其中补充了小牛血清、抗坏血酸最终浓度优选为1mM、EGF(表皮生长因子)最终浓度优选为10ng/mL、氢化可的松最终浓度优选为0.4μg/mL、umuline最终浓度优选为0.12UI/mL、异丙肾上腺素最终浓度优选为0.4μg/mL、三碘甲状腺原氨酸最终浓度优选为2.10^-9M、腺嘌呤最终浓度优选为24.3μg/mL和Normocin最终浓度优选为100μg/mL。在浸泡条件下培养7天。将培养物置于气-液界面处再培养14天，所用培养环境与浸泡培养时的培养基相同，除了小牛血清、氢化可的松、异丙肾上腺素、三碘甲状腺原氨酸和umuline之外。

然后在Boulin固定液(LOX、LOXL、弹力蛋白)或10％甲醛溶液(用于弹力蛋白)中制备重建皮肤(

Coletica，里昂，法国)，然后用石蜡密封，用于免疫组织化学研究，或直接用液氮冷冻，用于免疫荧光分析。从石蜡中取出6μm厚的切片，在甘氨酸-HCl(100mmol/l)中漂白。在第45天对重建皮肤进行Ki67(增殖标记物)、角蛋白14(所有细胞层的标记物)、角蛋白10(上基部的上层角质形成细胞层标记物)、内披蛋白、转谷胺酰胺酶、巢蛋白免疫检测。

实施例10：组合使用本发明产品和现有专利分子

可以将本发明产品与特别是可刺激对敏感皮神经起作用的皮肤神经营养机能的提取物组合使用，例如红椒提取物(甜椒)和/或红色素(红辣椒)和/或胡椒(L ′OREAL FR2825273)，和/或谷氨酰胺基乙基吲哚(Exsymol)。

可将本发明的产品与模拟β内啡肽作用以改善皮肤屏障功能的提取物组合使用，例如可可豆壳提取物(L′OREAL US2006069032)。

还可将本发明产品与活化β内啡肽以产生康乐感的提取物组合使用，例如Tephrosia purpurea(灰毛豆)提取物。

还可将本发明产品与其他分子或其衍生物组合使用，对于其他分子，例如α-MSH、β内啡肽，对于其衍生物，例如P3内啡肽和精油，以刺激角质形成细胞分化，以获得NGF的抗老化作用(CODIF FR2857874)，从而影响神经营养机能。

实施例11：将本发明产品配制成水包油乳剂型化妆品或药物制剂

配方11a：

配方11b：

配方11c：

实施例12：将本发明产品配制成油包水型

实施例13：将本发明产品配制成香波或沐浴凝胶型

实施例14：将本发明产品配制成唇膏型或其他无水产品

实施例15：将本发明产品配制成水凝胶(眼影、减肥霜等)

实施例16：将本发明产品配制成三重乳液型

初级乳W1/O

二级乳W1/O/W2

实施例17：含有本发明产品的药物制剂的制备

配方17a：丸剂的制备

^＊例如，按照实施例3中描述的提取过程，然后干燥，即可获得本发明产品。

配方17b：香膏剂的制备

^＊例如，按照实施例3中描述的提取过程，然后干燥，即可获得本发明产品。

配方17c：可注射制剂的制备

^＊例如，按照实施例3中描述的提取过程，然后干燥，即可获得本发明产品。

序列表

<110>巴斯夫美容护理法国公司(BASF BEAUTY CARE SOLUTIONS FRANCE SAS)

 

<120>MC-1R、MC-2R和μ阿片样物质受体的调节

 

<130>H197810/68 PCT2

 

<150>FR 07 55529

<151>2007-06-06

 

<160>14

<170>PatentIn版本3.3

 

<210>1

<211>2360

<212>DNA

<213>人(Homo sapiens)

 

<400>1

gagagggcag gtcccgggga agctccggac tcctagaggg gcggccaggt gggggccctg   60

gtgaccagga cagactgtgg tgttttttaa cgtaaaggag atccgcggtg tgagggaccc  120

cctgggtcct gcacgccgcc tggtggcagg ccgggccatg gtgggtgctc acgcccccgg  180

catgtggccg ccctcagtgg gaggggctct gagaacgact ttttaaaacg cagagaaaag  240

ctccattctt cccaggacct cagcgcagcc ctggcccagg aaggcaggag acagaggcca  300

ggacggtcca gaggtgtcga aatgtcctgg ggacctgagc agcagccacc agggaagagg  360

cagggaggga gctgaggacc aggcttggtt gtgagaatcc ctgagcccag gcggtagatg  420

ccaggaggtg tctggactgg ctgggccatg cctgggctga cctgtccagc cagggagagg  480

gtgtgagggc agatctgggg gtgcccagat ggaaggaggc aggcatgggg gacacccaag  540

gccccctggc agcaccatga actaagcagg acacctggag gggaagaact gtggggacct  600

ggaggcctcc aacgactcct tcctgcttcc tggacaggac tatggctgtg cagggatccc  660

agagaagact tctgggctcc ctcaactcca cccccacagc catcccccag ctggggctgg  720

ctgccaacca gacaggagcc cggtgcctgg aggtgtccat ctctgacggg ctcttcctca  780

gcctggggct ggtgagcttg gtggagaacg cgctggtggt ggccaccatc gccaagaacc  840

ggaacctgca ctcacccatg tactgcttca tctgctgcct ggccttgtcg gacctgctgg  900

tgagcgggag caacgtgctg gagacggccg tcatcctcct gctggaggcc ggtgcactgg     960

tggcccgggc tgcggtgctg cagcagctgg acaatgtcat tgacgtgatc acctgcagct    1020

ccatgctgtc cagcctctgc ttcctgggcg ccatcgccgt ggaccgctac atctccatct    1080

tctacgcact gcgctaccac agcatcgtga ccctgccgcg ggcgcggcga gccgttgcgg    1140

ccatctgggt ggccagtgtc gtcttcagca cgctcttcat cgcctactac gaccacgtgg    1200

ccgtcctgct gtgcctcgtg gtcttcttcc tggctatgct ggtgctcatg gccgtgctgt    1260

acgtccacat gctggcccgg gcctgccagc acgcccaggg catcgcccgg ctccacaaga    1320

ggcagcgccc ggtccaccag ggctttggcc ttaaaggcgc tgtcaccctc accatcctgc    1380

tgggcatttt cttcctctgc tggggcccct tcttcctgca tctcacactc atcgtcctct    1440

gccccgagca ccccacgtgc ggctgcatct tcaagaactt caacctcttt ctcgccctca    1500

tcatctgcaa tgccatcatc gaccccctca tctacgcctt ccacagccag gagctccgca    1560

ggacgctcaa ggaggtgctg acatgctcct ggtgagcgcg gtgcacgcgg ctttaagtgt    1620

gctgggcaga gggaggtggt gatattgtgt ggtctggttc ctgtgtgacc ctgggcagtt    1680

ccttacctcc ctggtccccg tttgtcaaag aggatggact aaatgatctc tgaaagtgtt    1740

gaagcgcgga cccttctggg tccagggagg ggtccctgca aaactccagg caggacttct    1800

caccagcagt cgtggggaac ggaggaggac atggggaggt tgtggggcct caggctccgg    1860

gcaccagggg ccaacctcag gctcctaaag agacattttc cgcccactcc tgggacactc    1920

cgtctgctcc aatgactgag cagcatccac cccaccccat ctttgctgcc agctctcagg    1980

accgtgccct cgtcagctgg gatgtgaagt ctctgggtgg aagtgtgtgc caagagctac    2040

tcccacagca gccccaggag aaggggcttt gtgaccagaa agcttcatcc acagccttgc    2100

agcggctcct gcaaaaggag gtgaaatccc tgcctcaggc caagggacca ggtttgcagg    2160

agccccccta gtggtatggg gctgagccct cctgagggcc ggttctaagg ctcagactgg    2220

gcactggggc ctcagcctgc tttcctgcag cagtcgccca agcagacagc cctggcaaat    2280

gcctgactca gtgaccagtg cctgtgagca tggggccagg aaagtctggt aataaatgtg    2340

actcagcatc acccacctta                                                2360

 

<210>2

<211>894

<212>DNA

<213>人

 

<400>2

atgaagcaca ttatcaactc gtatgaaaac atcaacaaca cagcaagaaa taattccgac     60

tgtcctcgtg tggttttgcc ggaggagata tttttcacaa tttccattgt tggagttttg    120

gagaatctga tcgtcctgct ggctgtgttc aagaataaga atctccaggc acccatgtac    180

tttttcatct gtagcttggc catatctgat atgctgggca gcctatataa gatcttggaa    240

aatatcctga tcatattgag aaacatgggc tatctcaagc cacgtggcag ttttgaaacc    300

acagccgatg acatcatcga ctccctgttt gtcctctccc tgcttggctc catcttcagc    360

ctgtctgtga ttgctgcgga ccgctacatc accatcttcc acgcactgcg gtaccacagc    420

atcgtgacca tgcgccgcac tgtggtggtg cttacggtca tctggacgtt ctgcacgggg    480

actggcatca ccatggtgat cttctcccat catgtgccca cagtgatcac cttcacgtcg    540

ctgttcccgc tgatgctggt cttcatcctg tgcctctatg tgcacatgtt cctgctggct    600

cgatcccaca ccaggaagat ctccaccctc cccagagcca acatgaaagg ggccatcaca    660

ctgaccatcc tgctcggggt cttcatcttc tgctgggccc cctttgtgct tcatgtcctc    720

ttgatgacat tctgcccaag taacccctac tgcgcctgct acatgtctct cttccaggtg    780

aacggcatgt tgatcatgtg caatgccgtc attgacccct tcatatatgc cttccggagc    840

ccagagctca gggacgcatt caaaaagatg atcttctgca gcaggtactg gtag          894

 

<210>3

<211>1891

<212>DNA

<213>人

 

<400>3

gatgagcctc tgtgaactac taaggtggga gggggctata cgcagaggag aatgtcagat     60

gctcagctcg gtcccctccg cctgacgctc ctctctgtct cagccaggac tggtttctgt    120

aagaaacagc aggagctgtg gcagcggcga aaggaagcgg ctgaggcgct tggaacccga    180

aaagtctcgg tgctcctggc tacctcgcac agcggtgccc gcccggccgt cagtaccatg    240

gacagcagcg ctgcccccac gaacgccagc aattgcactg atgccttggc gtactcaagt    300

tgctccccag cacccagccc cggttcctgg gtcaacttgt cccacttaga tggcaacctg    360

tccgacccat gcggtccgaa ccgcaccgac ctgggcggga gagacagcct gtgccctccg     420

accggcagtc cctccatgat cacggccatc acgatcatgg ccctctactc catcgtgtgc     480

gtggtggggc tcttcggaaa cttcctggtc atgtatgtga ttgtcagata caccaagatg     540

aagactgcca ccaacatcta cattttcaac cttgctctgg cagatgcctt agccaccagt     600

accctgccct tccagagtgt gaattaccta atgggaacat ggccatttgg aaccatcctt     660

tgcaagatag tgatctccat agattactat aacatgttca ccagcatatt caccctctgc     720

accatgagtg ttgatcgata cattgcagtc tgccaccctg tcaaggcctt agatttccgt     780

actccccgaa atgccaaaat tatcaatgtc tgcaactgga tcctctcttc agccattggt     840

cttcctgtaa tgttcatggc tacaacaaaa tacaggcaag gttccataga ttgtacacta     900

acattctctc atccaacctg gtactgggaa aacctgctga agatctgtgt tttcatcttc     960

gccttcatta tgccagtgct catcattacc gtgtgctatg gactgatgat cttgcgcctc    1020

aagagtgtcc gcatgctctc tggctccaaa gaaaaggaca ggaatcttcg aaggatcacc    1080

aggatggtgc tggtggtggt ggctgtgttc atcgtctgct ggactcccat tcacatttac    1140

gtcatcatta aagccttggt tacaatccca gaaactacgt tccagactgt ttcttggcac    1200

ttctgcattg ctctaggtta cacaaacagc tgcctcaacc cagtccttta tgcatttctg    1260

gatgaaaact tcaaacgatg cttcagagag ttctgtatcc caacctcttc caacattgag    1320

caacaaaact ccactcgaat tcgtcagaac actagagacc acccctccac ggccaataca    1380

gtggatagaa ctaatcatca gctagaaaat ctggaagcag aaactgctcc gttgccctaa    1440

cagggtctca tgccattccg accttcacca agcttagaag ccaccatgta tgtggaagca    1500

ggttgcttca agaatgtgta ggaggctcta attctctagg aaagtgcctg cttttaggtc    1560

atccaacctc tttcctctct ggccactctg ctctgcacat tagagggaca gccaaaagta    1620

agtggagcat ttggaaggaa aggaatatac cacaccgagg agtccagttt gtgcaagaca    1680

cccagtggaa ccaaaaccca tcgtggtatg tgaattgaag tcatcataaa aggtgaccct    1740

tctgtctgta agattttatt ttcaagcaaa tatttatgac ctcaacaaag aagaaccatc    1800

ttttgttaag ttcaccgtag taacacataa agtaaatgct acctctgatc aaagcacctt    1860

gaatggaagg tccgagtctt tttagtgttt t                                   1891

<210>4

<211>1071

<212>DNA

<213>人

 

<400>4

agcggcggcg aaggagggga agaagagccg cgaccgagag aggccgccga gcgtccccgc   60

cctcagagag cagcctcccg agacagagcc tcagcctgcc tggaagatgc cgagatcgtg  120

ctgcagccgc tcgggggccc tgttgctggc cttgctgctt caggcctcca tggaagtgcg  180

tggctggtgc ctggagagca gccagtgtca ggacctcacc acggaaagca acctgctgga  240

gtgcatccgg gcctgcaagc ccgacctctc ggccgagact cccatgttcc cgggaaatgg  300

cgacgagcag cctctgaccg agaacccccg gaagtacgtc atgggccact tccgctggga  360

ccgattcggc cgccgcaaca gcagcagcag cggcagcagc ggcgcagggc agaagcgcga  420

ggacgtctca gcgggcgaag actgcggccc gctgcctgag ggcggccccg agccccgcag  480

cgatggtgcc aagccgggcc cgcgcgaggg caagcgctcc tactccatgg agcacttccg  540

ctggggcaag ccggtgggca agaagcggcg cccagtgaag gtgtacccta acggcgccga  600

ggacgagtcg gccgaggcct tccccctgga gttcaagagg gagctgactg gccagcgact  660

ccgggaggga gatggccccg acggccctgc cgatgacggc gcaggggccc aggccgacct  720

ggagcacagc ctgctggtgg cggccgagaa gaaggacgag ggcccctaca ggatggagca  780

cttccgctgg ggcagcccgc ccaaggacaa gcgctacggc ggtttcatga cctccgagaa  840

gagccagacg cccctggtga cgctgttcaa aaacgccatc atcaagaacg cctacaagaa  900

gggcgagtga gggcacagcg ggccccaggg ctaccctccc ccaggaggtc gaccccaaag  960

ccccttgctc tcccctgccc tgctgccgcc tcccagcctg gggggtcgtg gcagataatc 1020

agcctcttaa agctgcctgt agttaggaaa taaaaccttt caaatttcac a          1071

 

<210>5

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>sonde肌动蛋白有义链

 

<400>5

gtggggcgcc ccaggcacca                                               20

<210>6

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>sonde肌动蛋白反义链

 

<400>6

ctcct taatg tcacgcacga tttc                           24

 

<210>7

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>Sonde MCR有义链

 

<400>7

gggctctgag aacgactttt                                 20

 

<210>8

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>sonde MCR1反义链

 

<400>8

ccgggctcct gtctggttgg                                 20

 

<210>9

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>sonde MCR2有义链

 

<400>9

tcacgtcgct gttcccgctg at                              22

 

<210>10

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>sonde MCR2反义链

<400>10

aagagagaca tgtagcaggc gcagta                        26

 

<210>11

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>sondeμ阿片样物质有义链

 

<400>11

ctcagccagg actggtttct gtaaga                        26

 

<210>12

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>sondeμ阿片样物质反义链

 

<400>12

tcggacaggt tgccatctaa gtg                           23

 

<210>13

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>sonde POMC有义链

 

<400>13

cgcccagtga aggtgtaccc                               20

 

<210>14

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>sonde POMC反义链

 

<400>14

ggcgtctggc tcttctcgga ggtc                          24

Claims (16)

1.至少一种调节黑色素细胞中MC-R表达的物质作为活性成分在化妆用组合物中的用途，或在制备营养保健用组合物或制备药物组合物，特别是皮肤用组合物中的用途。

2.根据权利要求1的用途，用于抵抗和/或预防α-MSH和/或ACTH的作用的失调。

3.根据前述权利要求中任一项的用途，用于预防或抵抗皮肤老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，和/或预防和/或抵抗表皮稳态减弱，和/或促进上皮形成，和/或改善细胞增殖和分化，特别是在表皮水平，和/或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，和/或改善皮肤血管形成，和/或改善血管的通透性过高，和/或改善皮肤结疤过程中的血管生成，和/或预防和/或抵抗皮肤神经分布减少，或改善皮肤神经分布，或产生康乐感，和/或改善肤色和/或调节皮肤色素形成，尤其是当所述色素形成表现为局部瑕疵例如色素斑时。

4.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述物质刺激MC-1R的表达，任选维持或刺激POMC的表达。

5.根据权利要求4的用途，用于增加色素沉着，具有增黑作用，以预防和/或抵抗与老化有关或无关的色素脱失斑点。

6.根据权利要求4或5的用途，其中所述物质选自：

-1甲基β咔啉-3-羧酸，

-乳酸菌发酵的酵母，

-双歧杆菌发酵的柠檬提取物，

-乳酸菌发酵的番木瓜提取物，

-乳酸菌发酵的羽扇豆提取物，

-乳酸菌发酵的大豆提取物，

-乳酸菌发酵的椰枣提取物，

-大豆粉提取物，

-菝葜(丽花菝葜)提取物，

-Cecropia obtuse提取物，

-月见草提取物，

-普通欧蓍草提取物，

-月见草提取物，

-胡萝卜提取物，

-绵马提取物，

-欧洲酸樱桃提取物，和

-其任何混合物。

7.根据权利要求1至3中任一项的用途，其中所述物质降低MC-1R的表达，并且任选维持或降低POMC的表达。

8.根据权利要求7的用途，用于减少皮肤色素沉着，具有增白或增亮的作用，以提高皮肤亮度，预防和/或抵抗与老化有关或无关的色素沉着斑点。

9.根据权利要求7或8的用途，其中所述物质可为：

-欧刺柏(杜松子)的水或水醇提取物；

-淡黄鼬瓣花的提取物；

-及其任何混合物。

10.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征是所述物质与选自以下的其他活性组分组合使用：

-刺激角质形成细胞增殖和/或分化的活性物质，旨在具有抗老化作用；

-模拟β内啡肽的作用以改善皮肤屏障功能的活性物质；

-刺激皮肤神经营养机能的活性物质；

-诱导康乐感的活性物质；

-允许改变肤色的活性物质；

-刺激成纤维细胞活性和/或增殖的活性物质；

-保护成纤维细胞生长因子不被降解，尤其是FGF2不被降解的活性物质；

-刺激透明质酸酶合酶，特别是透明质酸酶合酶2的活性物质；

-刺激诸如LOXL的赖氨酰氧化酶的活性和/或合成的活性物质；

-具有消炎特性的活性物质，特别是抑制磷脂酶A2的酶活力的活性物质；

-具有消除浮肿特性的活性物质；和

-其任何组合。

11.选自以下的物质作为活性成分在化妆用组合物中的用途，或在制备营养保健用组合物或制备药物组合物，特别是皮肤用组合物中的用途：

-1甲基β咔啉3羧酸，

-(红色)菝葜(丽花菝葜)提取物，

-普通欧蓍草提取物，

-Cecropia obtuse提取物，

-月见草提取物，

-胡萝卜提取物，

-绵马提取物，

-欧洲酸樱桃提取物，

-乳酸菌发酵的酵母，

-双歧杆菌发酵的柠檬提取物，

-乳酸菌发酵的番木瓜提取物，

-乳酸菌发酵的羽扇豆提取物，

-乳酸菌发酵的大豆提取物，

-乳酸菌发酵的椰枣提取物，

-大豆粉提取物，和

-其任何混合物，

旨在增加皮肤色素沉着，具有增黑作用，可预防和/或抵抗与老化有关或无关的色素脱失斑点。

12.选自淡黄鼬瓣花(野生大麻)，或欧刺柏(杜松子)的水或水醇提取物的物质作为作为活性成分在化妆用组合物中的用途，或在制备营养保健用组合物或制备药物组合物，特别是皮肤用组合物中的用途，旨在减少皮肤色素沉着，具有增白或增亮作用，可提高皮肤亮度，预防和/或抵抗与老化有关或无关的色素沉着斑点。

13.化妆用组合物或皮肤化妆用组合物或营养保健用组合物，用来预防和/或抵抗皮肤老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮稳态减弱，或促进上皮形成，或改善细胞增殖和分化，尤其是在表皮水平，或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善皮肤血管形成，或改善血管通透性过高，或改善皮肤结疤过程中的血管生成，或预防和/或抵抗皮肤神经分布减少，或改善皮肤神经分布，或产生康乐感，或改善肤色和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现出局部瑕疵例如色素斑时；所述组合物包含如权利要求6、9、11或12所定义的活性物质作为活性成分，可能地与权利要求10中所述的物质组合。

14.药物组合物，优选旨在预防和/或抵抗皮肤老化和/或抵抗在皮肤老化过程中观察到的应激作用诱导的变化，或预防和/或抵抗表皮稳态减弱，或促进上皮形成，或改善细胞增殖和分化，尤其是在表皮水平，或预防或抵抗皮肤血管形成的减少，或改善皮肤血管形成，或改善血管通透性过高，或改善皮肤结疤过程中的血管生成，或预防和/或抵抗皮肤神经分布减少，或改善皮肤神经分布，或产生康乐感，或改善肤色和/或调节皮肤色素形成，特别是当所述色素形成表现出局部瑕疵例如色素斑时；所述组合物包含如权利要求6、9、11或12所定义的活性物质作为活性成分，可能地与权利要求10中所述的物质组合。

15.美容护理方法，其包括将权利要求6、9、11或12所定义的物质用于皮肤以改善美容效果，可能地与权利要求10中所述的物质组合。

16.具有以下序列之一的核苷酸序列：

GGGCTCTGAGAACGACTTTT(MC-1R有义链-SEQ ID N^o 7)；

CCGGGCTCCTGTCTGGTTGG(MC-1R反义链-SEQ ID N^o 8)；

TCACGTCGCTGTTCCCGCTGAT(MC-2R有义链-SEQ ID N^o9)；

AAGAGAGACATGTAGCAGGCGCAGTA(MC-2R反义链-SEQID N^o 10)；

CTCAGCCAGGACTGGTTTCTGTAAGA(μ阿片样物质受体有义链-SEQ ID N^o 11)；

TCGGACAGGTTGCCATCTAAGTG(μ阿片样物质受体反义链-SEQ ID N^o 12)；

CGCCCAGTGAAGGTGTACCC(POMC有义链-SEQ ID N^o 13)；和

GGCGTCTGGCTCTTCTCGGAGGTC(POMC反义链-SEQ ID N^o14)。

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