JP2010178760A - チアクマイシン生産 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】炭素源、窒素源、無機塩などの微量元素及び吸着剤を含む栄養培地中において1種又は複数のチアクマイシンを生産し、蓄積する能力があるダクチロスポランギウムアウランチアクム(Dactylosporangium aurantiacum)亜種ハムデネンシス(hamdenensis)種に属する微生物を培養し、ここで前記窒素源は魚粉を含み、約50mg/Lブロスより大きな収量で生産されるチアクマイシンの生産及び回収のための方法、プロセス及び材料。
【選択図】なし
Description
魚粉 0.1%〜5%
グルコース 0.2%〜10%
K2HPO4 0.02%〜0.5%
MgSO4・7H2O 0.02%〜0.5%
KCl 0.01%〜0.3%
CaCO3 0.1%〜2%
カザミノ酸 0.05%〜2%
イーストエキス 0.05%〜2%
XAD−16樹脂 0.5%〜15%
上記の開示から理解されるように、本発明は種々様々の応用を有する。したがって、以下の例は、本発明を限定するためのものではなく説明するためのものとして提示する。
発酵器容積:5リットル
殺菌: 121℃、1.05kg/cm2、40分
インキュベーション温度:30℃
通気速度:培養体積当たり毎分0.5〜1.5体積
発酵器の撹拌:300〜500rpm
平衡:50:50:1、MeCN/H2O/AcOH(6L)
ローディング:メタノール(20mL)中、Biotage KP−C18−HSシリカを25g含む試料注入モジュールによる。
溶離剤:50:50:1、MeCN/H2O/AcOH
流量:230mL/分
圧力:溶媒−90psi
半径方向−100psi
検出器:波長−254nm
パス長−0.1cm
感度−2
チャート速度−60cm/hr
雑音フィルタ−5秒
画分収集:主要ピーク及び前のピークの間の屈曲点直後に手動で収集を開始し、主要ピーク高さの20%で収集を終了した。
カラムコンディショニング:100%MeCN(4L)
Claims (26)
- 栄養培地中でチアクマイシンを生産する能力がある微生物を培養し、栄養培地中に少なくとも1種のチアクマイシンを蓄積することを含み、ここで少なくとも1種のチアクマイシンの収量が全発酵ブロスに対し約50mg/Lより大きいチアクマイシンの生産方法。
- 前記収量が約100mg/Lブロスより大きい請求項1に記載の方法。
- 前記収量が約200mg/Lブロスより大きい請求項2に記載の方法。
- 前記収量が約50mg/Lブロス〜約500mg/Lブロスである請求項1に記載の方法。
- 前記収量が約100mg/Lブロス〜約500mg/Lブロスである請求項4に記載の方法。
- 前記微生物がダクチロスポランギウムアウランチアクム(Dactylosporangium aurantiacum)NRRL18085である請求項1に記載の方法。
- 前記チアクマイシンがチアクマイシンBである請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1種の溶媒又は溶媒混合物で溶出することにより望ましくない物質を篩別除去すること;少なくとも1種の溶媒又は溶媒混合物による抽出;結晶化;クロマトグラフィーによる分離;高速液体クロマトグラフィー(HPLC);MPLC;粉砕;及び少なくとも1種の溶媒又は溶媒混合物と飽和食塩水とによる抽出からなる群から選択される技術を用いて、前記栄養培地から前記チアクマイシンを分離する請求項1に記載の方法。
- 約25〜約35℃の温度、約6.0〜約8.0のpHで前記微生物を培養する請求項1に記載の方法。
- 栄養培地が、グルコース、ショ糖、デンプン、糖蜜、デキストリン、乳漿、グリセリン、脂質及びコーンミールからなる群から選択される1種又は複数の炭素源を含む請求項1に記載の方法。
- 必要に応じて付加的な炭素源を栄養培地に与える請求項1に記載の方法。
- 栄養培地が、牛肉エキス、大豆粕、全イースト、イーストエキス、ダイズ粉、ペプトン、カザミノ酸、魚粉、コーンスティープリカー、アンモニウム塩、カゼイン及びアミノ酸からなる群から選択される微生物成長を支持できる1種又は複数の窒素/有機源を含む請求項1に記載の方法。
- 栄養培地が魚粉を含む請求項12に記載の方法。
- 栄養培地が、K2HPO4、MgSO4・7H2O及びCaCO3からなる群から選択される微生物成長を支持できる1種又は複数の無機塩を含む請求項1に記載の方法。
- 栄養培地が、前記培養中に1種又は複数のチアクマイシンを吸着することができる少なくとも1種の吸着剤を含み、前記吸着剤はAmberlite(登録商標)XAD16、XAD16HP、XAD2、XAD7HP、XAD1180、XAD1600、IRC50、Duolite(登録商標)XAD761及び逆相シリカゲルからなる群から選択される請求項1に記載の方法。
- 逆相シリカゲルが、KP−C18、KP−C18−WP及びKP−C18HSからなる群から選択される請求項15に記載の方法。
- 微生物からのチアクマイシン生産のための栄養培地であって、炭素源、窒素源、微量元素及び吸着剤を含み、約50mg/Lブロスより大きな収量で1種又は複数のチアクマイシンを生産するために使用される栄養培地。
- 前記チアクマイシン収量が約100mg/Lブロスより大きい請求項17に記載の栄養培地。
- 前記チアクマイシン収量が約200mg/Lブロスより大きい請求項18に記載の栄養培地。
- 前記チアクマイシン収量が約50mg/Lブロス〜約500mg/Lブロスである請求項17に記載の栄養培地。
- 前記チアクマイシン収量が約100mg/Lブロス〜約500mg/Lブロスである請求項20に記載の栄養培地。
- 前記窒素源が魚粉である請求項17に記載の栄養培地。
- 前記微生物がダクチロスポランギウムアウランチアクム(Dactylosporangium aurantiacum)NRRL18085である請求項17に記載の栄養培地。
- 前記チアクマイシンがチアクマイシンBである請求項17に記載の栄養培地。
- 前記栄養培地が、前記培養中に1種又は複数のチアクマイシンを吸着することができる少なくとも1種の吸着剤を含む請求項17に記載の栄養培地。
- 炭素源、窒素源、無機塩などの微量元素及び吸着剤を含む栄養培地中において1種又は複数のチアクマイシンを生産し、蓄積する能力があるダクチロスポランギウムアウランチアクム(Dactylosporangium aurantiacum)亜種ハムデネンシス(hamdenensis)種に属する微生物を培養し、ここで前記窒素源は魚粉を含み、約50mg/Lブロスより大きな収量で生産されるチアクマイシン。
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