JP2013208131A - チアクマイシン生産 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】炭素源、窒素源、無機塩などの微量元素及び吸着剤を含む栄養培地中において1種又は複数のチアクマイシンを生産し、蓄積する能力があるダクチロスポランギウムアウランチアクム(Dactylosporangium aurantiacum)亜種ハムデネンシス(hamdenensis)種に属する微生物を液中好気性発酵条件下で培養する。前記窒素源は魚粉を含み、約50mg/Lブロスより大きな収量で生産されるチアクマイシンBを生産及び回収する。
【選択図】なし
Description
魚粉 0.1%〜5%
グルコース 0.2%〜10%
K2HPO4 0.02%〜0.5%
MgSO4・7H2O 0.02%〜0.5%
KCl 0.01%〜0.3%
CaCO3 0.1%〜2%
カザミノ酸 0.05%〜2%
イーストエキス 0.05%〜2%
XAD−16樹脂 0.5%〜15%
上記の開示から理解されるように、本発明は種々様々の応用を有する。したがって、以下の例は、本発明を限定するためのものではなく説明するためのものとして提示する。
発酵器容積:5リットル
殺菌: 121℃、1.05kg/cm2、40分
インキュベーション温度:30℃
通気速度:培養体積当たり毎分0.5〜1.5体積
発酵器の撹拌:300〜500rpm
平衡:50:50:1、MeCN/H2O/AcOH(6L)
ローディング:メタノール(20mL)中、Biotage KP−C18−HSシリカを25g含む試料注入モジュールによる。
溶離剤:50:50:1、MeCN/H2O/AcOH
流量:230mL/分
圧力:溶媒−90psi
半径方向−100psi
検出器:波長−254nm
パス長−0.1cm
感度−2
チャート速度−60cm/hr
雑音フィルタ−5秒
画分収集:主要ピーク及び前のピークの間の屈曲点直後に手動で収集を開始し、主要ピーク高さの20%で収集を終了した。
カラムコンディショニング:100%MeCN(4L)
(1)栄養培地中でチアクマイシンBを蓄積するために栄養培地中で微生物を培養し、及び栄養培地からチアクマイシンBを単離することを含むチアクマイシンBの選択的生産方法であって、該栄養培地が、該培養中にチアクマイシンBを吸着することができる吸着剤を含む、上記生産方法。
(2)前記栄養培地が吸着剤0.5−15重量%を含む、(1)に記載の方法。
(3)前記吸着剤が吸着性樹脂である(1)に記載の方法。
(4)前記吸着性樹脂がAmberlite(登録商標)XAD16、XAD16HP、XAD2、XAD7HP、XAD1180、XAD1600、IRC50及びDuolite(登録商標)XAD761からなる群から選択される(3)に記載の方法。
(5)前記微生物がダクチロスポランギウムアウランチアクム(Dactylosporangium aurantiacum)亜種ハムデネンシス(hamdenensis)である(1)に記載の方法。
(6)前記単離ステップが、1)少なくとも1種の溶媒又は溶媒混合物で溶出することにより望ましくない物質を篩別除去すること;2)少なくとも1種の溶媒又は溶媒混合物による抽出;3)結晶化;4)クロマトグラフィーによる分離;5)高速液体クロマトグラフィー(HPLC);6)MPLC;7)粉砕;8)及び少なくとも1種の溶媒又は溶媒混合物と飽和食塩水とによる抽出からなる群から選択される少なくとも一つの方法に従って実施される、(1)に記載の方法。
(7)前記培養ステップが、25〜35℃の温度、6〜8のpHで行われる(1)に記載の方法。
(8)前記栄養培地が、グルコース、ショ糖、デンプン、糖蜜、デキストリン、乳漿、グリセリン、脂質及びコーンミールからなる群から選択される1種又は複数の炭素源を含む、(1)に記載の方法。
(9)前記栄養培地が、K 2 HPO 4 、MgSO 4 ・7H 2 O及びCaCO 3 からなる群から選択される1種又は複数の無機塩を含む、(1)に記載の方法。
(10)前記栄養培地が、牛肉エキス、大豆粕、全イースト、イーストエキス、ダイズ粉、ペプトン、カザミノ酸、魚粉、コーンスティープリカー、アンモニウム塩、カゼイン及びアミノ酸からなる群から選択される1種又は複数の窒素/有機源を含む、(1)に記載の方法。
ここに説明的に記載した発明は、具体的にここに示さなかった任意の要素又は要素(複数)、限定又は限定(複数)がない状態でも適当に実行することができる。したがって、例えば、「含む」、「含有する」及び「有する」などの用語は、限定なしに拡張的に読まれるものとする。さらに、ここに使用する用語及び表現は、制限的ではなく記載のための用語として使用するものであり、そうした用語や表現は、図示し又は記載したものの任意の将来的な等価物又はその部分を除外する意図ではないし、本願特許請求の範囲内で様々な修正が可能であると認識される。したがって、好適実施形態と場合によって設ける特徴によって本発明を具体的に開示してきたが、ここに開示した発明の修正及び変形は当業者には可能であり、そのような修正及び変形は、ここに示した発明の範囲内であると考えられるという点が理解されるべきである。本発明は、ここでは広く総括的に記載してきた。総括的な開示の範囲内にある、より狭い種及び半総括的な群の各々もこれらの発明の一部を形成する。これは、除去した材料が具体的にそこに存在したか否かにかかわらず、総括概念から何らかの主題を除外する但し書き又は否定的制限を備えた各発明の総括的な記載を含む。さらに、発明の特徴又は様相がマーカッシュグループの形で記載される場合、当業者はマーカッシュの任意の個別的構成要素又は構成要素のサブグループの形でも発明がそこに記載されていることを認識するであろう。
Claims (10)
- 栄養培地中でチアクマイシンBを蓄積するために栄養培地中で微生物を培養し、及び栄養培地からチアクマイシンBを単離することを含むチアクマイシンBの選択的生産方法であって、該栄養培地が、該培養中にチアクマイシンBを吸着することができる吸着剤を含む、上記生産方法。
- 前記栄養培地が吸着剤0.5−15重量%を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記吸着剤が吸着性樹脂である請求項1に記載の方法。
- 前記吸着性樹脂がAmberlite(登録商標)XAD16、XAD16HP、XAD2、XAD7HP、XAD1180、XAD1600、IRC50及びDuolite(登録商標)XAD761からなる群から選択される請求項3に記載の方法。
- 前記微生物がダクチロスポランギウムアウランチアクム(Dactylosporangium aurantiacum)亜種ハムデネンシス(hamdenensis)である請求項1に記載の方法。
- 前記単離ステップが、1)少なくとも1種の溶媒又は溶媒混合物で溶出することにより望ましくない物質を篩別除去すること;2)少なくとも1種の溶媒又は溶媒混合物による抽出;3)結晶化;4)クロマトグラフィーによる分離;5)高速液体クロマトグラフィー(HPLC);6)MPLC;7)粉砕;8)及び少なくとも1種の溶媒又は溶媒混合物と飽和食塩水とによる抽出からなる群から選択される少なくとも一つの方法に従って実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記培養ステップが、25〜35℃の温度、6〜8のpHで行われる請求項1に記載の方法。
- 前記栄養培地が、グルコース、ショ糖、デンプン、糖蜜、デキストリン、乳漿、グリセリン、脂質及びコーンミールからなる群から選択される1種又は複数の炭素源を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記栄養培地が、K2HPO4、MgSO4・7H2O及びCaCO3からなる群から選択される1種又は複数の無機塩を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記栄養培地が、牛肉エキス、大豆粕、全イースト、イーストエキス、ダイズ粉、ペプトン、カザミノ酸、魚粉、コーンスティープリカー、アンモニウム塩、カゼイン及びアミノ酸からなる群から選択される1種又は複数の窒素/有機源を含む、請求項1に記載の方法。
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