JP3123864B2

JP3123864B2 - 新規化合物チオマリノールｃおよびその製造法

Info

Publication number: JP3123864B2
Application number: JP05273355A
Authority: JP
Inventors: 秀次高橋; 秀幸塩澤; 佳年生小川; 義陽境田; 顕雄鳥潟; 健太郎小玉; 晃石井
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1992-11-02
Filing date: 1993-11-01
Publication date: 2001-01-15
Anticipated expiration: 2016-01-15
Also published as: JPH06199865A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗菌活性を有する新規
化合物チオマリノールＣおよびその製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】海水より分離したアルテロモナス(Alter
omonas) 属に属する微生物が、例えば抗腫瘍活性を有す
るビスカベリン(bisucaberin) を生産することが知られ
ている（特開昭63-27484号）。しかし、ビスカベリンは
環状ペプチド化合物である。

【０００３】水酸基で置換されたテトラヒドロピラン骨
格を母核とした誘導体は数多いが、中でもチオマリノー
ルＣに類似した構造を有する化合物としては、例えばシ
ュードモナス・フルオレセンス(Pseudomonas fluoresce
ns) が生産するシュードモン酸(pseudomonic acid)Ａ
（J.Chem.Soc.Perkin Trans.I, 294頁(1977 年）、シュ
ードモン酸Ｂ(J.Chem.Soc.Perkin Trans.I, 318 頁(197
7 年））、シュードモン酸Ｃ(J.Chem.Soc.Perkin Tran
s.I 2,827頁(1982 年））およびシュードモン酸Ｄ（J.C
hem.Soc.Perkin Trans.I 2,655 頁(1983 年））が知ら
れている。しかし、これらシュードモン酸の抗菌活性は
チオマリノールＣより弱い。なお現在、シュードモン酸
Ａの２％軟膏（商品名「Bactroban」、Beecham 社) が皮
膚感染症治療剤として欧米で実用に供されている。

【０００４】また、シュードモン酸の末端カルボン酸を
アミドに変換した誘導体も知られている（特開昭52-102
279 号、特開昭54-12375号、特開昭54-90179号、特開昭
54-103871 号、特開昭54-125672 号）。しかし、これら
の中にはチオマリノールＣのような強い抗菌力、多くの
グラム陰性菌まで含む広い抗菌スペクトルを有するもの
はない。むしろその活性はシュードモン酸より弱くなる
傾向がある。

【０００５】また、海洋細菌由来の生理活性物質でもチ
オマリノールＣに類似した化合物が報告されている。(A
m.Chem.Soc. の２００年会（1990年 8月26-31 日）のAb
stracts of Papers,Part 2,ORGN.No.139) 。しかしなが
ら、この化合物の末端のカルボニル基に結合する複素環
基は２−ピペリドン−３−イル基であり、その抗菌活性
の詳細は不明である。

【０００６】一方、ホロシン(holothin,Helv.Chim.Act
a,42 巻，563 頁(1959 年））骨格を母核とした誘導体
としては、例えば放線菌の一種ストレプトミセス(Strep
tomyces)属より単離されたホロマイシン(holomycin,Hel
v.Chim.Acta,42巻，563 頁（1959年））、ピロシン(pyr
rothine,J.Am.Chem.Soc.,77 巻，2861頁（1955年））、
チオルチン(thiolutin,Angew.Chem.,66 巻，745 頁(195
4 年））、アウレオスリシン(aureothricin,J.Am.Chem.
Soc.,74 巻，6304頁(1952 年））などを挙げることがで
きる。また、細菌由来の抗生物質としてゼノルアブジン
(xenorhabdin) Ｉ〜Ｖ (特表昭 59-501950号、 J. Natur
al Products, 54 巻，774 頁 (1991) ）が単離されてい
る。しかし、これらの化合物にはチオマリノールＣほど
の強い抗菌活性は見い出されていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、海水よ
り分離したアルテロモナス(Alteromonas) 属に属するSA
NK 73390株の培養液から、抗菌作用を有する新規化合物
チオマリノールＣが生産されることを見出して本発明を
完成した。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明のチオマリノール
Ｃは下記の構造式および理化学的性状を有する。

【０００９】

【化２】

【００１０】（１）物質の性状：黄色粉末（２）分子式： C₃₀ H₄₄ N₂ O₈ S₂ （３）分子量： 624 (FAB-MS法により測定）（４）元素分析値：（％） ( 但し、C₃₀ H₄₄ N₂ O₈
S₂＋ H₂Oとして) 実測値： C 56.48、 H 7.23、 N 4.30、 S 9.
11 計算値： C 56.05、 H 7.21、 N 4.36、 S 9.
97 （５）赤外線吸収スペクトル：ν_max cm^-1 臭化カリウム(KBr) 錠剤法で測定した赤外線吸収スペク
トルは、次に示す通りである。

【００１１】3256、 3068、 2928、 2858、 1645、
1596、 1530、 1455、1384、 1287、 1225、 11
51、 1104、 1052、 974、 820、712。

【００１２】（６）紫外線吸収スペクトル：λ_max nm
(ε) メタノールまたはメタノール＋塩酸中で測定した紫外線
吸収スペクトルは、次に示す通りである。388(9,600)、
300(2,700)、 215(17,000) 。

【００１３】メタノール＋水酸化ナトリウム中で測定し
た紫外線吸収スペクトルは、次に示す通りである。386
(8,600)、 205(49,000) 。

【００１４】（７）比旋光度：［α］_D ²⁵ − 1.4°
（ｃ＝1.0, メタノール）（８）高速液体クロマトグラフィー：分離カラム；センシュウパックODS H-2151（カラムサイ
ズ、φ 6×150mm 、センシュウ科学（株）製）溶媒； 40 ％アセトニトリル−水流速； 1.5．ml／分保持時間； 11.3 分。

【００１５】（９）¹H−核磁気共鳴スペクトル：（δ：
ppm) 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用しして測定した核磁気共鳴スペクトル（360
MHz)は、次に示す通りである。

【００１６】10.70(1H,s), 9.81(1H,s), 7.05(1H,s),
5.68(1H,s),5.37(1H,m), 5.33(1H,m), 4.64(1H,s
(br)), 4.55(1H,m(br)),4.32(1H,d,J=4.3Hz), 4.01(2
H,t,J=6.6Hz), 3.67(1H), 3.62(1H),3.58(1H), 3.49
(1H), 3.35(1H), 3.18(1H,m(br)),2.56(1H,d(br),J=
14.2Hz), 2.34(2H,t,J=7.3Hz), 2.15(1H),2.11(3H,
s), 2.08(1H), 2.06(2H), 1.63(1H,m), 1.56(2H,
m),1.51(2H,m), 1.30(2H), 1.29(2H), 1.26(2H),0.
95(3H,d,J=6.3Hz), 0.91(3H,d,J=6.9Hz) 。

【００１７】（１０）¹³C −核磁気共鳴スペクトル：
（δ：ppm) 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（90 MH
z) は、次に示す通りである。171.8(s), 167.9(s),
165.7(s), 157.9(s), 134.2(d),133.9(s), 133.
6(s), 127.6(d), 116.5(d), 115.3(s),110.4(d),
74.4(d), 69.3(d), 69.2(d), 68.1(d),6
4.0(t), 63.0(t), 43.1(d), 42.5(t), 42.
0(d),34.6(t), 32.1(t), 28.4(t), 28.3(t),
28.1(t),25.2(t), 24.9(t), 20.0(q), 18.
6(q), 15.7(q)。

【００１８】（１１）溶解性：メタノール、エタノー
ル、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、ジメ
チルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、クロロホル
ム、酢酸エチル、アセトン、エチルエーテルに可溶。ｎ
−ヘキサン、水に不溶。

【００１９】（１２）薄層クロマトグラフィー： R_f値； 0.66 吸着剤；シリカゲル（メルク社製、Art.5719) 展開溶剤；メチレンクロリド：メタノール＝85：15。

【００２０】本発明の前記一般式(I) を有するチオマリ
ノールＣはいくつかの不斉炭素原子およびいくつかの二
重結合を有する。特にα，β−不飽和カルボニル部分は
異性化される可能性がある。それ故、種々の立体および
幾何異性体が存在する。本発明においては、これらの異
性体がすべて単一の式で示されている。従って、本発明
においては、ラセミ化合物を含むこれらの異性体および
これらの異性体の混合物をもすべて含むものである。

【００２１】本発明は、また、アルテロモナス属に属す
るチオマリノールＣ生産菌を培養し、その培養物よりチ
オマリノールＣを採取することを特徴とするチオマリノ
ールＣの製造法に関し、さらに詳しくは、上記のアルテ
ロモナス属に属するチオマリノールＣ生産菌がアルテロ
モナス・ラバ(Alteromonas rava)SANK 73390株である、
該製造法に関する。

【００２２】本発明の、チオマリノールＣを生産する上
記SANK 73390株は静岡県南伊豆町小稲の海岸で採取した
海水から常法により分離した海洋細菌である。

【００２３】チオマリノールＣの生産菌であるSANK 733
90株の菌学的性状は次の通りである。

【００２４】１．形態学的性状マリンアガー(Difco社製）上で 23 ℃で、 24 時間培養
後の観察では、細胞は直径 0.8-1.0 μm 、長さ 2.0-
3.6 μm の桿状であり、単極毛を有し、運動する。胞
子を形成せず、グラム染色は陰性である。

【００２５】２．マリンアガー培地上での生育状態 23 ℃で、24 時間培養したコロニーはいくぶん灰色を
帯びた黄色、不透明で円形、扁平状、全縁である。水溶
性の色素を生成しない。

【００２６】３．生理学的性状（１）海水の要求性：生育に海水を要求する。

【００２７】（２）Ｏ−Ｆ（オキシダティブ−ファーメ
ンタティブ）テスト［ヒュー・レイフソン(Hugh・Leifso
n)法(J.Bact., 66巻，24-26 頁、(1953 年))、人工海水
で調製］：糖を分解しない。

【００２８】（３）オキシダーゼ：＋（４）カタラーゼ：＋（５）酸素に対する態度：好気的。

【００２９】（６）硝酸塩の還元：− （７）デンプンの加水分解：＋（８）寒天の分解：− （９）ゼラチンの液化：＋（１０）ＤＮａｓｅの産生：＋（１１）リパーゼの産生：＋（１２）生育温度： 4℃では微弱に生育し、17−26 ℃
では良好な生育を示す。35 ℃では生育しない。

【００３０】（１３）栄養要求性：ジャーナル・オブ・
バクテリオロジー(Journal of Bacteriology) 、107
巻、268-294 頁(1971 年）記載の基本培地を用いた場
合、ビタミンフリーのカザミノ酸を要求する。

【００３１】（１４）炭素化合物の利用性：ジヤーナル
・オブ・バクテリオロジー(Journalof Bacteriology)、
107 巻、268-294 頁(1971 年）記載の基本培地にビタミ
ンフリーのカザミノ酸を 0.1％濃度添加し、振盪培養を
行なった場合。

【００３２】Ｌ−アラビノース：− Ｄ−リボース：− Ｄ−キシロース：− Ｄ−グルコース：＋Ｄ−ガラクトース：− Ｄ−フラクトース：
− 麦芽糖：＋ショ糖：− トレハロース：＋セロビオース：− メリビオース：− マンニトール：− ソルビトール：− グリセリン：− 酢酸ソーダ：＋プロピオン酸ソー
ダ：＋。

【００３３】４．化学分類学的性状（１）ＤＮＡのＧ＋Ｃ（グアニン＋シトシン含量）：4
3.4％(HPLC 法）（２）キノン系：ユビキノンＱ−８。

【００３４】以上の菌学的性状を有するSANK 73390株は
バージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・バ
クテリオロジー(Bergey's Manual of Syatematic Bacte
riology)、１巻(1984 年）および最新のインターナショ
ナル・ジャーナル・オブ・システマティック・バクテリ
オロジー(International Journal of SystematicBacter
iology) に記載の種と照合すると、海洋細菌のアルテロ
モナス・サイトレア(Alteromonas citrea)に類似した菌
と推定された。但し、本菌はアルテロモナス・サイトレ
ア(Alteromonas citrea)の基準株 ATCC 29719 株との比
較培養を行なったところ、本菌のコロニーの色調がいく
ぶん灰色を帯びた黄色であるのに対し、ATCC 29719 株
は緑色を帯びた黄色であり、SANK 73390 株は 4 ℃で
生育し、トレハロースとプロピオン酸ソーダを炭素源と
して利用する点でアルテロモナス・サイトレア(Alterom
onas citrea)と異なっている。それ故、本発明者らは本
菌をアルテロモナス属に属する新種であると確認し、ア
ルテロモナス属・ラバ種(Alteromonas rava)と命名し、
新菌株をアルテロモナス・ラバ・SANK 73390(Alteromon
as rava SANK 73390) 株と命名した。

【００３５】本菌株は、アルテロモナス・ラバ・SANK 7
3390(Alteromonas rava SANK 73390) 株としてブタペス
ト条約に従って通商産業省工業技術院微生物工業技術研
究所（1993年 1月 1日より「通商産業省工業技術院生命
工学工業技術研究所」と改称）に国際寄託されている
（寄託番号、微工研条寄第3381号(FERM BP-3381)：原寄
託日、1991年4 月30日）。

【００３６】以上、SANK 73390株について説明したが、
周知の如くアルテロモナス属の菌類の諸性質は一定した
ものではなく、自然的、または人工的な操作（例えば、
紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変
異を起こし易く、本発明のSANK 73390株もこの点は同じ
である。本発明にいうSANK 73390株はそのすべての変異
株を包含する。また、これらの変異株の中には、遺伝学
的方法、例えば、組み替え、形質導入、形質転換等によ
り得られたものも包含される。即ち、アルテロモナス属
に属するチオマリノールＣを生産する。SANK 73390株、
その変異株およびそれらと明確に区別されない菌株は、
すべてSANK 73390株に包含されるものである。

【００３７】本発明の新規化合物チオマリノールＣを得
るため、これらの微生物の培養は他の醗酵生成物を生産
するために用いられるような培地中で行なわれる。この
ような培地中には、微生物が資化出来る炭素源、窒素源
および無機塩を含有する。

【００３８】一般に、炭素源としてグルコース、フラク
トース、マルトース、シュクロース、マンニトール、グ
リセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウモ
ロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸などを単一に、あ
るいは併用して用いることが出来る。一般には、培地量
の 1−10 重量％で変量する。

【００３９】窒素源としては、一般に蛋白質を含有する
物質を醗酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、
ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプト
ン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキ
ス等の動物系、植物系またはエキス類の窒素源、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の無
機窒素源である。窒素源は、単一または併用して培地量
の 0.1− 6 重量％の範囲で用いる。

【００４０】培地中に取り入れる栄養無機塩は、ナトリ
ウム、アンモニウム、カルシウム、カリウム、マグネシ
ウム、鉄、フォスフェート、サルフェート、クロライ
ド、カーボネート等のイオンを得ることの出来る通常の
塩類である。また、コバルト、マンガン、ストロンチウ
ム等の微量の金属、その他ブロマイド、フルオライド、
ボレート、シリケート等の微量イオンを得る塩も含む。

【００４１】液体培養に際しては、消泡剤としてシリコ
ン油、植物油、界面活性剤等が使用される。

【００４２】アルテロモナス・ラバ(Alteromonas rava)
SANK 73390 株を培養しチオマリノールＣを生産する培
地の pH は、5.0-8.0 に変化させることが出来る。

【００４３】菌の生育温度は 4 ℃から 32 ℃までであ
るが 17 ℃から 26 ℃の範囲が生育良好である。チオマ
リノールＣの生産は、上記範囲のいずれの温度でも行い
得るが、20 ℃から 26 ℃が好適である。

【００４４】チオマリノールＣは、好気的に培養して得
られるが通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養
法、振盪培養法、通気攪拌培養法等が用いられる。

【００４５】小規模な培養においては、20 ℃から 26
℃で数日間振盪培養を行なうのが良好である。

【００４６】培養は三角フラスコ中で、1 −2 段階の種
の発育工程により開始する。種発育段階の培地は、炭素
源および窒素源を併用出来る。種フラスコは定温インキ
ュベーター中で 23 ℃、1 乃至 3 日間振盪するか、ま
たは充分に成長するまで振盪する。成長した種は第二の
種培地、または生産培地に接種するのに用いる。中間の
発育工程を用いる場合には、本質的に同様の方法で成長
させ、生産培地に接種するためにそれを部分的に用い
る。接種したフラスコを一定温度で 1 乃至３日間、
または生産量が最大に達するまで振盪し、インキュベー
ションが終わったらフラスコの含有物を遠心分離または
ろ過する。

【００４７】大量培養の場合には、攪拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成出来る。栄養培
地を１２５ ℃まで加熱して滅菌し、冷却後、滅菌培地
にあらかじめ成長させてあった種を接種する。培養は 2
0 ℃乃至 26 ℃で通気攪拌して行なう。この方法は、多
量の化合物を得るのに適している。

【００４８】培養の経過に伴って生産されるチオマリノ
ールＣの量の経時変化は、高速液体クロマトグラフィー
を用いて測定することが出来る。通常は、 19 時間から
200時間の培養でチオマリノールＣの生産量は最高値に
達する。

【００４９】培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体
内に存在するチオマリノールＣは、菌体、その他の固形
部分を珪藻土をろ過助剤とする、ろ過操作または遠心分
離によって分別し、そのろ液または上清中および菌体中
に存在するチオマリノールＣを、その物理化学的性状を
利用し抽出精製することにより得られる。例えば、ろ液
または、上清中に存在するチオマリノールＣは、中性ま
たは酸性pH条件下で水と混和しない有機溶剤、例えば酢
酸エチル、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレン
等の単独または、それらの組み合わせにより抽出精製す
ることができる。あるいは吸着剤として、例えば活性炭
または吸着用樹脂であるアンバーライトXAD-2 、XAD-4
（ローム・アンド・ハース社製）等や、ダイヤイオンHP
-10 、HP-20 、CHP-20、HP-50 （三菱化成（株）製）等
が使用される。チオマリノールＣを含む液を上記のごと
き吸着剤の層を通過させて不純物を吸着させて取り除く
か、またはチオマリノールＣを吸着させた後、メタノー
ル水、アセトン水、ｎ−ブタノール水等を用いて溶出さ
せることにより得られる。また、菌体内に存在するチオ
マリノールＣは、50−90 ％含水アセトンまたは含水メ
タノールにより抽出し有機溶剤を除去した後、ろ液と同
様な抽出精製操作を行なうことにより得られる。

【００５０】このようにして得られたチオマリノールＣ
は、更にシリカゲル、マグネシウム−シリカゲル系のフ
ロリジルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグラ
フィー、セファデックス LH-20（ファルマシア社製）等
を用いた分配カラムクロマトグラフィー、および順相、
逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等で精
製することが出来る。

【００５１】以上の分離、精製の手段を単独または適宜
組み合わせ反復用いることによりチオマリノールＣを分
離精製することができる。

【００５２】

【作用】本発明のチオマリノールＣは、文献未載の新規
化合物であり、動物（例、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ
等）において、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌および
マイコプラズマ菌に対し抗菌作用を示すことから、各種
細菌感染症を対象とする抗菌剤として有用である。

【００５３】本発明のチオマリノールＣを医薬として用
いる場合、常法に従って種々の形態で投与される。その
投与形態としては例えば散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル
剤、シロップ剤等の形態で経口的または注射剤（静脈
内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布剤、軟膏剤等
の形態で非経口的に安全に投与することが出来る。これ
らの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、
崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸
濁剤、コーティング剤、希釈剤などの医薬の製剤技術分
野において通常使用し得る既知の補助剤を用いて製剤化
することができる。投与量は対象疾患、投与経路および
投与回数などにより異なるが、例えば成人に対しては
1 日 20 mg から 2000 mgを、症状に応じて 1 回また
は数回に分けて投与するのが好ましい。

【００５４】

【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【００５５】実施例１．チオマリノールＣのタンク培養Ａ）培養アルテロモナス・ラバSANK 73390株を塗抹し充分生育さ
せたマリンアガー（Marine Agar,Difco 社製）斜面培地
1 本に、滅菌したマリンブロス(MarineBroth,Difco
社製）培地 10 ml を加え、菌懸濁液を調製した。

【００５６】マリンブロス培地 15 リットルを含む 30
リットル容通気攪拌培養槽１基を加熱滅菌した後、菌懸
濁液を全量接種し、培養温度 23 ℃、通気量 7.5 リッ
トル／分の条件下、24 時間の培養を行ない種培養液と
した。なお初発攪拌数は 100rpmとし、次いで溶存酸素
濃度を 5.0 ppm に保つよう攪拌数を随時変化させた。

【００５７】培地組成−１（表１）で示される培地 300
リットルを含む 600 リットル容通気攪拌培養槽２基
を加熱滅菌した後、種培養液を各 3 リットル接種し、
培養温度 23 ℃、通気量 150 リットル／分の条件下、
29 時間の培養を行なった。なお初発攪拌数は 82 rpm
とし、次いで溶存酸素濃度を 5.0 ppm に保つよう攪拌
数を随時変化させた。

【００５８】

【表１】培地組成−１グルコース 1.5 ％バクトペプトン(Difco社製） 1.5 ％バクトイーストエキス(Difco社製） 0.2 ％ NaCl 3.89 ％ MgCl₂ ・ 6 H₂O 2.52 ％ Na₂SO₄ 0.648 ％ CaCl₂ ・ 2 H₂O 0.4767％ KCl 0.11 ％ Na₂CO₃ 0.038 ％クエン酸第二鉄 0.02 ％滅菌前 pH 7.6 。

【００５９】Ｂ）単離得られた培養液 700 リットルは、塩酸で pH 3 に調整
し、アセトン 700 リットルを添加、1 時間攪拌しなが
ら抽出した。抽出液は、酢酸エチル 700 リットルで 1
回、さらに 300 リットルで 1 回抽出した。得られ
た酢酸エチル層を 300 リットルの 5 ％重炭酸ナトリ
ウム、300 リットルの飽和食塩水で洗浄し、さらに無水
硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。途中
シリカゲル 540 g を加え、さらに濃縮、乾固した。

【００６０】得られた乾固物をメチレンクロリドに懸濁
し、シリカゲル 4 kg を同溶剤で充填したカラムに重
層し、次いでメチレンクロリド、メチレンクロリド−酢
酸エチル(1：1)、酢酸エチル、酢酸エチル−メタノール
(9：1)と順次展開溶媒の極性を上げて溶出した。溶出液
を 2 リットルずつ分画し、酢酸エチル−メタノールで
溶出したチオマリノールＣを含むフラクションを集め、
減圧下で濃縮した。途中シリカゲル 50 g を加え、更に
濃縮、乾固した。

【００６１】得られた乾固物をヘキサン−アセトン溶液
に懸濁し、シリカゲル 200 g をヘキサンで充填したカ
ラムに重層し、次いでヘキサン−アセトン(1：1)溶液で
溶出した。溶出液は 500 ml ずつ分画し、チオマリノー
ルＣを含むフラクション１および２を得た。フラクショ
ン１を減圧下で濃縮した。途中シリカゲル 25 g を加
え、さらに濃縮、乾固した。

【００６２】得られた乾固物をヘキサン−アセトン−酢
酸エチル (1:1:2)溶液に懸濁し、シリカゲル 200 g を
ヘキサンで充填したカラムに重層し、次いでヘキサン−
アセトン−酢酸エチル(1:1:2) 溶液で溶出した。溶出液
は 500 ml づつ分画し、チオマリノールＣを含むフラ
クションを得た。先のフラクション２を合併し減圧下で
濃縮した。途中シリカゲル 20 g を加えさらに濃縮、乾
固した。

【００６３】得られた乾固物をヘキサン−アセトン−酢
酸エチル(1:1:1) 溶液に懸濁し、シリカゲル 200 g を
ヘキサンで充填したカラムに重層し、次いでヘキサン−
アセトン−酢酸エチル(1:1:1) 溶液で溶出した。溶出液
は 500 ml づつ分画し、チオマリノールＣを含むフラク
ションを集め減圧下で濃縮し油状物を得た。

【００６４】油状物はさらにセファデックスLH-20 を用
いてクロマトグラフィーを行なった。メチレンクロリド
−酢酸エチル−メタノール(19:19:2) で充填した 200 m
l のカラムを用い、同溶媒で展開し精製した。チオマリ
ノールＣを含むフラクションを集め、濃縮した。途中シ
リカゲル 25 g を加え、更に濃縮、乾固した。

【００６５】得られた乾固物をメチレンクロリドに懸濁
し、シリカゲル 250 g をメチレンクロリドで充填した
カラムに重層し、次いでメチレンクロリド−アセトン溶
液を順次展開溶媒の極性を上げて(9:1〜1:9)溶出した。
溶出液は 1 リットルずつ分画し、チオマリノールＣを
含むフラクションを集め、減圧下濃縮、乾固して、150
mg のチオマリノールＣを単離した。

【００６６】

【発明の効果】

試験例１．チオマリノールＣの抗菌作用一般グラム陽性および陰性細菌に対するチオマリノール
Ｃの最小発育阻止濃度(MIC) は、普通寒天培地（栄研化
学（株）製）を用いた寒天培地希釈法によって測定し
た。

【００６７】結果を表２に示す。

【００６８】

【表２】

【００６９】表２から明かのごとく、チオマリノールＣ
は一般グラム陽性および陰性細菌に対して優れた効果を
示した。

【００７０】以上から、本発明の新規化合物チオマリノ
ールＣは抗菌作用を示し、各種細菌に対する抗菌剤とし
て有用である。

【００７１】試験例２．チオマリノ−ルＣの抗マイコプ
ラズマ菌作用一般マイコプラズマ菌に対するチオマリノ−ルＣの最小
阻止濃度（MIC ）は、以下の測定条件下において、寒天
平板希釈法によって測定した。

【００７２】測定条件接種菌量：10⁵ CFU ／ml を 0.005 ml 接種測定用培地：チャノック(Chanock) の培地(P.N.A.S.,48
巻、41-49頁(1962 年) 記載の培地に20 % 馬血清を添加
した培地) 培養条件：37℃、5 日間、微好気培養［BBL ガスパッ
ク(BBL GasPac(商品名、Becton Dickinson Microbiolog
y Systems 社、米国))法］結果を表３に示す。

【００７３】

【表３】

【００７４】表３から明かのごとく、チオマリノ−ルＣ
は一般マイコプラズマ菌に対して優れた効果を示した。

【００７５】

【発明の効果】以上から、本発明の新規化合物チオマリ
ノ−ルＣは抗菌作用を示し、各種細菌に対する抗菌剤と
して有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者境田義陽福島県いわき市泉町下川字大剱389−４三共株式会社内 (72)発明者鳥潟顕雄東京都品川区広町１丁目２番58号三共株式会社内 (72)発明者小玉健太郎茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社内 (72)発明者石井晃茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社内 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07D 495/04 A61K 35/74 ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の構造式で表される化合物：【化１】
【請求項２】下記の理化学的性状を有することを特徴と
する化合物：（１）物質の性状：黄色粉末（２）分子式：Ｃ₃₀Ｈ₄₄Ｎ₂Ｏ₈Ｓ₂ （３）分子量：６２４（FAB-MS法により測定）（４）元素分析値：（％）（但し、Ｃ₃₀Ｈ₄₄Ｎ₂Ｏ₈Ｓ
₂＋Ｈ₂Ｏとして）実測値：Ｃ 56.48、Ｈ 7.23、Ｎ 4.30、Ｓ 9.11 計算値：Ｃ 56.05、Ｈ 7.21、Ｎ 4.36、Ｓ 9.97 （５）赤外線吸収スペクトル：ν_maxｃｍ^-1 臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外線吸収ス
ペクトルは、次に示す通りである：3256、3068、2928、
2858、1645、1596、1530、1455、1384、1287、1225、11
51、1104、1052、974、820、712 （６）紫外線吸収スペクトル：λ_maxｎｍ（ε）メタノールまたはメタノール＋塩酸中で測定した紫外線
吸収スペクトルは、次に示す通りである：388(9,600)、
300(2,700)、215(17,000)；メタノール＋水酸化ナトリウム中で測定した紫外線吸収
スペクトルは、次に示す通りである：386(8,600)、205
(49,000) （７）比旋光度：［α］_D ²⁵ −１．４°（ｃ＝１．
０，メタノール）（８）高速液体クロマトグラフィー：分離カラム：センシュウパックＯＤＳＨ−２１５１
（カラムサイズφ６×１５０ｍｍ、センシュウ科学
（株）製）溶媒：４０％アセトニトリル−水流速：１．５ｍｌ／分保持時間：１１．３分（９）¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（３６０
ＭＨｚ）は、次に示す通りである： 10.70(1H,s), 9.81(1H,s), 7.05(1H,s), 5.68(1H,s), 5.37(1H,m), 5.33(1H,m), 4.64(1H,s(br)), 4.55(1H,m(br)), 4.32(1H,d,J=4.3Hz), 4.01(2H,t,J=6.6Hz), 3.67(1H), 3.62(1H), 3.58(1H), 3.49(1H), 3.35(1H), 3.18(1H,m(br)), 2.56(1H,d(br),J=14.2Hz), 2.34(2H,t,J=7.3Hz), 2.15(1H), 2.11(3H,s), 2.08(1H), 2.06(2H), 1.63(1H,m), 1.56(2H,m), 1.51(2H,m), 1.30(2H), 1.29(2H), 1.26(2H), 0.95(3H,d,J=6.3Hz), 0.91(3H,d,J=6.9Hz) （１０）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（９０Ｍ
Ｈｚ）は、次に示す通りである： 171.8(s), 167.9(s), 165.7(s), 157.9(s), 134.2(d), 133.9(s), 133.6(s), 127.6(d), 116.5(d), 115.3(s), 110.4(d), 74.4(d), 69.3(d), 69.2(d), 68.1(d), 64.0(t), 63.0(t), 43.1(d), 42.5(t), 42.0(d), 34.6(t), 32.1(t), 28.4(t), 28.3(t), 28.1(t), 25.2(t), 24.9(t), 20.0(q), 18.6(q), 15.7(q) （１１）溶解性：メタノール、エタノール、プロパノー
ル、ブタノール等のアルコール類、ジメチルスルホキシ
ド、ジメチルホルムアミド、クロロホルム、酢酸エチ
ル、アセトン、エチルエーテルに可溶；ｎ−ヘキサン、
水に不溶（１２）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値：０．６６吸着剤：シリカゲル（メルク社製、Art.5719）展開溶剤：メチレンクロリド：メタノール＝８５：１
５。
【請求項３】アルテロモナス属に属する請求項１または
２記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より該化
合物を採取することを特徴とする、請求項１または２記
載の化合物の製造方法。
【請求項４】請求項３記載の製造方法において、アルテ
ロモナス属に属する請求項１または２記載の化合物の生
産菌が、アルテロモナス・ラバＳＡＮＫ７３３９０
（ＦＥＲＭＢＰ−３３８１）株であることを特徴とす
る方法。