JPH0419233B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野 本発明は細菌感染症の治療剤として有用な次の
式（）で表わされる新規アンサマイシン系抗生
物質およびその製造法に関する。 従来の技術 放線菌の生産するアンサマイシン系抗生物質の
うち式（）で表わされる化合物（）はストレ
プトバリシン群抗生物質に属し、これに含まれる
化合物としてはストレプトバリシン
（streptovaricin）Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ（J.
Amer.Chem.Soc.、93〜、6273（1971）、プロトスト
レプトバリシン（protostrptovaricin）Ｉ−Ｖ（J.
Amer.Chem.Soc.、98〜、870（1976））およびダマ
バリシン（damavaricin）Ｃ、Ｄ（J.Antibiotics、
29〜、201（1976）などが知られている。 発明が解決しようとしている問題点 近年β−ラクタム剤の多用によつて耐性菌とく
にグラム陽性菌の耐性菌が増加しており、交叉耐
性のない薬剤の出現が要望されている。またβ−
ラクタム剤の多くは注射剤であるが、比較的副作
用の少ない経口剤の開発も望まれている。アンサ
マイシン系抗生物質は主としてグラム陽性菌に有
効で、かつβ−ラクタム剤と交叉耐性を示さず、
経口投与で有効である。 また、抗菌剤のうち抗結核剤としてリフアンピ
シン（rifampicin）が発売されているが、多年に
亘る使用によつて耐性菌が出現している。リフア
ンピシンに交叉耐性を示さない抗結核剤の開発も
また重要である。 問題点を解決するための手段 本発明者らは新規な抗生物質の探索を目的とし
て多数の微生物を土壌より分離し、その産生する
抗生物質を分離検索したところ、ある種の微生物
が新規な抗生物質を産生すること、該微生物がス
トレプトミセス属に属すること、該微生物を適宜
の培地に培養することによつてグラム陽性細菌お
よび抗酸性菌に対して抗菌力を示す抗生物質を培
地中に蓄積しうることなどを知り、この抗生物質
を単離し、その物理化学的および生物学的諸性質
から、当該抗生物質が新規な抗生物質であり、そ
の構造は式（）で表わされることが認め、これ
を抗生物質TAN−528Bと称することとした。本
発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究
した結果、本発明を完成した。 本発明は、(1)式（）で表わされる化合物
（）、および(2)ストレプトミセス属に属し、式
（）で表わされる化合物（）を生産する能力
を有する微生物を培地に培養し、培養物中に該化
合物を生成蓄積せしめ、これを採取することを特
徴とする化合物（）の製造法である。 なお本明細書においては、抗生物質TAN−
528Bを単に「TAN−528B」と称することもあ
る。 本発明に使用される化合物（）生産菌の一例
としては沖縄県本部町の土壌より新たに分離され
たＣ−46366株より紫外線照射によつて誘導した
変異株CM−11株が挙げられ、CM−11株の菌学
的性状は下記の通りである。 形態 気菌糸はイースト麦芽寒天、チロシン寒天お
よびベンネツト寒天培地で良好に着生し、胞子
形成も豊富である。分枝は単純分枝で車軸分枝
は見られない。気菌糸は比較的長く伸長し、そ
の先端は直状である。菌核等の特殊構造は観察
されない。 電子顕微鏡での観察による胞子の表面構造は
平滑であり、その殆んどが円筒形である。又そ
の大きさは0.43〜0.58μ×0.94〜1.40μで通常20
個以上連鎖する。 培養性状 28℃、14日間培養後の各種培地上での性状は
第１表に示す通りである。なお色名およびその
記号はカラー・ハーモニー・マニユアル、第４
版（コンテイナー・コーポレーシヨン・オブ・
アメリカ、1958年発行）によつた。

【表】

【表】 色素
生理的性質 CM−11株の生理的諸性質は第２表に示す通
りである。 第２表 Γメラニン様色素の生成 ペプトン・イースト・鉄寒天 陽性 チロシン寒天 陽性（微弱） Γスターチの加水分解 陰性 Γゼラチンの液化 陽性 Γミルクの凝固 陽性 ミルクのペプトン化 陽性 Γ硝酸還元 陽性 Γ食塩耐性 ７％で生育 Γ生育温度範囲 10−40.5℃ 至適温度 17−35.5℃ CM−11株の炭素源の資化性は第３表に示す通
りである。

【表】 CM−11株をイースト・エキス（１％）、グル
コース（１％）からなる液体培地を用いて28℃
66〜90時間振盪培養し、定常期の菌体を得た。上
記菌体をビー・ベツカーらの方法〔アプライド・
マイクロビオロジー（Applied Microbiology）
第12巻、421頁、1964年〕に従つて菌体中のジア
ミノピメリン酸を分析した結果、LL体であるこ
とが判明した。 以上の性状を要約すると、CM−11株はストレ
プトミセス属に属し、気菌糸先端は直状で胞子表
面構造は平滑型の形態を有する。発育色調は一般
に明るい黄褐色ないしは淡緑黄色で、気菌糸は白
色系である。なおメラニン様可溶性色素を生成す
る。以上の特徴的性状を有するCM−11株の近縁
な既知菌種を検索すると、ストレプトミセス・ア
ルボロングス〔インターナシヨナル・ジヤーナ
ル・オブ・システマテイツク・バクテリオロジ、
22巻、271頁、1972年（International Journal
of Systenmatic Bacteriology）〕が最も近似し
ている。CM−11株とストレプトミセス・アルボ
ロングスISP5570株を細部について比較すると、
グリセロール・アスパラギン寒天および無機塩ス
ターチ寒天上でCM−11株の気菌糸の着生が、
ISP5570株より良好であり、しかも胞子の連鎖状
態も長目である。また糖の利用性（例えばイノシ
トール、マンニトール、フラクトース、ラムノー
スなど）および抗生物質生産性などで両者は相違
している。 以上よりCM−11株は若干の相違点があるもの
の、基本的性状においてストレプトミセス・アル
ボロングスとよく一致することから、ストレプト
ミセス・アルボロングスと同定するのが妥当であ
る。従つて本発明者らは、CM−11株をストレプ
トミセス・アルボロングスCM−11
（Streptomyces albolongus CM−11）と命名し
た。 なお、本明細書においては、ストレプトミセ
ス・アルボロングスCM−11を「CM−11株」と
略称することもある。 CM−11株は昭和59年（1984年）９月25日に財
団法人発酵研究所（IFO）に受託番号IFO 14376
として、また本微生物は昭和59年（1984年）10月
１日に通商産業省工業技術院微生物工業技術研究
所（FRI）に受託番号FERM Ｐ−7877としてそ
れぞれ寄託されている。 ストレプトミセス属菌は、その性状が変化しや
すく、たとえば紫外線、エツクス線、放射線、人
工変異剤などを用いる人工的変異手段で容易に変
異しうるものであり、この様な変異株であつても
化合物（）の生産能を有するものは、すべて本
発明の方法に使用することが出来る。 本発明の方法において、化合物（）生産菌が
培養される培地は、液状でも固体状でもよいが、
液状の培地がより便宜的に用いられ、また表面培
養、振盪培養法によつてもよいが、深部培養方法
がより有利に用いられる。培地中には化合物
（）生産菌が同化し得る炭素源たとえばでんぷ
ん、グルコール、デキストリン、グリセリン、シ
ユークロースおよびｎ−パラフイン、アルコール
類（例、メタノール）など、窒素源としては、た
とえば有機窒素源としてコーン・スチープ・リカ
ー、大豆粉、綿実粉、ペプトン、肉エキスなど、
無機窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、尿素などを使用し
得る。その他、必要に応じて無機塩類たとえばナ
トリウム、カリウム、マグネシウムまたは燐を含
む塩類、重金属塩類たとえば鉄、マンガン、亜
鉛、コバルト、銅、ニツケルなどの塩類、消泡剤
たとえば大豆油、ラード油、チキン油、シリコン
油、アクトコール（武田薬品工業株式会社製）な
どを適宜添加しても良い。液体培養に際しては、
培地のPHは中性付近、特にPH約６〜８が好まし
い。培養温度は約17℃〜30℃、培養時間は約24〜
72時間が望ましい。 培養物から目的とする化合物（）を採取する
には微生物の生産する代謝物をその微生物の培養
物から採取するのに通常使用される分離手段が適
宜利用される。たとえば化合物（）は中性脂溶
性の性質を示し、主として培養液中に含まれる
ので、まず培養液に過補助剤を加えて過ある
いはそのまま遠心分離することによつて菌体を除
去する。得られた培養液に水と混和しない有機溶
媒たとえばクロロフオルム、酢酸エチル、メチル
イソブチルケトンあるいはブタノールなどを加
え、化合物（）を抽出する。抽出液を弱アルカ
リ性水溶液たとえば炭酸水素ナトリウム溶液など
で洗滌後、有機溶媒層を濃縮する。 濃縮物は吸着、分配あるいは分子ふるいの性質
を利用したクロマトグラフイーによつてさらに精
製される。すなわち濃縮物を適宜の担体に接触さ
せて有効成分を吸着せしめ、次いで適宜の溶媒
で、有効成分を脱離せしめ、分別採取する手段が
有利に利用される。担体としてはシリカゲル、結
晶セルロース、吸着性樹脂たとえばダイヤイオン
HP−20（三菱化成工業株式会社製）、アンバーラ
イトXAD−（ローム・アンド・ハース社製、
米国）、セフアデツクスLH−20（フアルマシア・
フアインケミカルズ社製、スエーデン）などが用
いられる。溶出溶媒は担体の種類によつて異なる
が、たとえばクロロフオルム、ジクロロメタン、
酢酸エチル、アセトン、アルコール類、ピリジ
ン、酢酸あるいはこれらの混合溶媒を適宜組み合
わせて用いられる。化合物（）を含む溶出液は
濃縮乾固され、適当な溶媒たとえば酢酸エチルあ
るいは四塩化炭素などから結晶化あるいは濃縮乾
固物に石油エーテルまたはヘキサンなどを加えて
粉末化される。 後述の実施例１で得られた抗生物質TAN−
528Bの物理化学的性状はつぎの通りである。 (1) 外観；橙黄色結晶粉末 (2) 融点；170−175℃（分解点） (3) 比旋光度；〔α〕²⁷ _D−32゜±5゜ （ｃ＝0.10、クロロフオルム中） (4) 分子量測定値；768（Ｍ＋Na）⁺（SIMS法）
745（M⁺）（EI−MS法） (5) 元素分析値； 実測値，Ｃ；59.86，Ｈ；6.48， Ｎ；1.98，Ｓ；3.52 計算値，Ｃ；59.58，Ｈ；6.35， Ｎ；1.88，Ｏ；27.90，Ｓ；4.29 (6) 分子式（分子量）； C₃₇H₄₇NO₁₃S（745.84） (7) 紫外線吸収スペクトル；メタノール中、 λ_nax210±2nｍ（Ｅ１％ １cm＝440±100）、 275±3nｍ（Ｅ１％ １cm＝315±80）、第１図参照。 (8) 赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム中、主
要ピークはつぎの通りである。 3450、2980、2900、1720、1670、1640、
1605、1465、1410、1380、1290、1155、1100、
990、925、780、650cm^-1第２図参照。 (9) CMRスペクトル（100MHz）；重ジメチルス
ルホキシド中。少くとも下記のシグナルが認め
られる。 δ194.65（ｓ）、179.73（ｓ）、178.62（ｓ）、172.94
（ｓ） 164.96（ｓ）、161.57（ｓ）、161.49（ｓ）、150.24
(d) 136.37（ｓ）、136.02（ｓ）、134.76(d)、128.77
（ｓ） 127.32（ｓ）、126.97（ｓ）、125.74(d)、122.67
（ｓ） 108.85（ｓ）、78.18(d)、75.31(d)、74.83(d) 73.39(d)、70.69(d)、61.64（ｑ）、50.98（ｑ） 54.54(d)、46.89（ｓ）、41.26(d)、37.01(d) 33.58(d)、22.85（ｑ）、15.13（ｑ）、14.20（ｑ） 11.41（ｑ）、10.81（ｑ）、10，40（ｑ）、9.30（ｑ）
ppm （ｓはsinglet、ｄはdoublet、ｑはquartetをそ
れぞれ表わす。） (10) 溶解性； 易溶、アセトン、酢酸エチル、ジクロロメタ
ン、ジメチルスルフオキサイド、難溶、水、ヘ
キサン (11) 呈色反応； 陽性、バートン、酢酸マグネシウム反応 陰性、ニンヒドリン、ドラーゲントルフ、エ
ールリツヒ反応 (12) 安定性；有機溶媒中で安定 (13) 薄層クロマトグラフイー；シリカゲル
HF₂₅₄（メルク社製、西独） 溶媒系 Rf値 ジクロロメタン：メタノール 0.38 （９：１） 以上述べた性質から、TAN−528Bは新規なナ
フタレノイド・アンサマイシン系抗生物質であ
り、その構造式は、前記式（）で表わされる。 抗生物質TAN−528Bの各種微生物に対する抗
菌活性を第４表に示す。

【表】

【表】 以上のように抗生物質TAN−528Bはinvitro試
験において、グラム陽性菌および抗酸性菌に対し
て抗菌力を有している。 抗生物質TAN−528Bの毒性については、マウ
スへの経口および皮下投与ともにLD₅₀（mg／Kg）
値は200以上であるので、TAN−528Bの毒性は
低い。 上記データから明らかなように、化合物（）
は、グラム陽性菌および抗酸性菌に対し抗菌性を
示し、しかも毒性が低い。したがつて、化合物
（）は、温血動物〔例、ヒト、家畜（例、牛、
豚、羊）、家禽（例、ニワトリ、アヒル）など〕
の細菌感染症の治療を目的として細菌感染症治療
剤として用いることができる。なかでも、黄色ブ
ドウ状球菌感染治療剤、抗結核剤などとして用い
ることができる。 化合物（）の投与量は、対象疾患、症状、投
与対象、投与方法などによつて異なるが、通常、
温血動物１Kg当たり１日約0.5〜５mgであり、こ
れを１〜３回に分けて投与される。化合物（）
を投与するにあたつては、それ自体あるいは適宜
の薬理的に許容される担体、賦形剤、希釈剤と混
合し、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、注射剤
などの剤型で経口的または非経口的に投与するこ
とができる。 また化合物（）は新しい医薬品の合成中間体
としてもきわめて有望な化合物である。 上記のストレプトミセス・アルボロングスCM
−11株は、抗生物質TAN−528A（以下、TAN−
528Aと略称することもある。）も併産する。
TAN−528Aは、ストレプトミセス属に属する抗
生物質TAN−528A生産菌（例、ストレプトミセ
ス・アルボロングスＣ−46366株：IFOに昭和58
年（1983年）８月５日にIFO 14280として、FRI
に昭和58年８月９日にFERM Ｐ−7198としてそ
れぞれ寄託されている。）を培地に培養し、採取
することにより得られる。TAN−528Aとその製
造は、日本特許出願昭58−193208号明細書に記載
されている。上記日本特許出願昭58−193208号明
細書の実施例２で得られた抗生物質TAN−528A
の物理化学的性状はつぎの通りである。 (1) 外観；橙黄色結晶粉末 (2) 融点；161〜163℃（分解点） (3) 比旋光度；〔α〕²⁵ _D＋910゜±100゜ （ｃ＝0.10、クロロフオルム中） (4) pKa′値；8.75（滴定法） (5) 分子量測定値；746（Ｍ＋3H）⁺（SIMS法）743
（M⁺）（EI−MS法） (6) 元素分析値； 実測値，Ｃ；61.20，Ｈ；6.72，Ｎ；1.89，
Ｏ；26.11，Ｓ；4.48 計算値，Ｃ；61.36，Ｈ；6.64，Ｎ；1.88，
Ｏ；25.81，Ｓ；4.31 (7) 分子式（分子量）； C₃₈H₄₉NO₁₂S（743.865） (8) 紫外線吸収スペクトル；メタノール中、 λ_nax218±2nｍ（Ｅ１％ １cm＝485±50）、 245，270，350nｍ（肩）、440±3nｍ（Ｅ１％ １cm＝60±10） (9) 赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム中、主
要ピークはつぎの通りである。 3450、2970、2930、2880、1730、1670、
1620、1560、1460、1405、1370、1290、1250、
1200、1165、1140、1105、1050、1035、980、
925、880、820、780、750、735、630cm^-1。 (10) CMRスペクトル（100MHz）；重クロロフオ
ルム中、 少くとも下記のシグナルが認められる。 195.19、183.19、180.41、172.85、164.40、
162.73、161.98、147.46、144.54、142.89、
140.70、139.45、137.09、131.79、128.97（ｓ）、
128.97(d)、127.71、123.89、109.06、82.79、
76.57、73.14、70.00、62.86、51.78、46.92、
41.93、38.80、38.37、36.96、20.55、18.90、
17.47、16.04、15.65、12.09、9.21、9.10（ただ
し、ｓはsinglet、ｄはdoubletをそれぞれ表
す）。 (11) 溶解性； 易溶、アセトン、酢酸エチル、ジクロロメタ
ン、ジメチルスルフオキサイド、難溶、水、ヘ
キサン (12) 呈色反応； 陽性、バートン、酢酸マグネシウム反応 陰性、ニンヒドリン、ドラーゲントルフ、エ
ールリツヒ反応 (13) 安定性；有機溶媒中で安定 (14) 薄層クロマトグラフイー；シリカゲル
HF₂₅₄（メルク社製、西独） 溶媒系 Rf値 酢酸エチル：メタノール 0.62 （50：１） ジクロロメタン：メタノール 0.44 （９：１） 上記の物理化学的性質から、該抗生物質TAN
−528Aの構造式は、以下に示すものであると考
えられる。 実施例 以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体的
に説明する。なお、培地におけるパーセント
（％）は、とくにことわりのないかぎり、重量／
容量パーセントを表わす。 実施例 １ グルコース２％、可溶性澱粉３％、コーン・ス
チープ・リカー１％、生大豆粉１％、ペプトン
0.5％、NaCl 0.3％、CaCO₃0.5％（PH7.0）から
なる培地500mlを２容坂口フラスコに入れ、125
℃、25分間滅菌したのち、ストレプトミセス・ア
ルボロングスCM−11（IFO14376、FERM Ｐ−
7877）を接種し、28℃で２日間往復振盪機上で培
養した。得られた種培養液1.0を上記種培地と
同一組成の培地120を含む200容ステンレス・
スチール・タンクに移植し、28℃で２日間通気撹
拌培養（通気量120／分；撹拌170回転／毎分）
を行つた。得られた前培養120をマルトース２
％、可溶性澱粉２％、ポリペプトン（大五栄養化
学株式会社製）１％、リン酸第２カリウム0.1％、
硫酸マグネシウム0.05％、硫酸第一鉄0.01％、硫
酸亜鉛0.005％、CaCO₃0.5％（PH7.0）からなる主
培養培地4000を含む6000容タンクに接種し、
20℃、50時間通気撹拌培養（通気量4000／分；
撹拌120回転／毎分）を行つた。 得られた培養液（4000）をハイフロ・スーパ
ーセル（ジヨーンズ・マンビル社製、米国）
（90.8Kg）トプコ（東興パーライト社製）（105Kg）
を用いて過し、液（4230）をPH３で酢酸エ
チル（1400×２）で抽出し、抽出液を２％炭酸
水素ナトリウム水（400×１）で洗い、さらに
水洗後、酢酸エチル層を濃縮し、濃縮物にｎ−ヘ
キサンを加え、沈殿化し、沈澱物を酢酸エチル
（９）に溶かして１％炭酸水素ナトリウム水
（３×２）で洗い水洗後、酢酸エチル層を濃縮
して、濃縮物にｎ−ヘキサンを加えて析出した沈
澱物をエタノール１に溶解した。エタノールを
約400mlまで濃縮し、室温に放置するとTAN−
528Aの結晶が析出したのでろ取した。収量38.0
ｇ。結晶として得られたTAN−528Aは、融点、
比旋光度、紫外部吸収スペクトル、赤外部吸収ス
ペクトル、CMRスペクトルでTAN−528A標準
品と一致した。 結晶母液を減圧濃縮し、ｎ−ヘキサンを加えて
橙色の沈殿物（26.4ｇ）を得た。この粉末10.0ｇ
を少量のクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフイー（シリカゲル：120ｇ）に
付した。１％メタノール〜クロロホルムの溶媒系
で展開し、2800mlから3340mlまでの溶出画分をあ
つめて減圧濃縮し、残渣にｎ−ヘキサンを加えて
沈殿物をろ取した。収量；1.1ｇ。この粉末を少
量の1.5％メタノール〜ジクロルメタンに溶解し、
シリカゲルカラムクロマトグラフイー（シリカゲ
ル：20ｇ）に付した。1.5％メタノール〜ジクロ
ルメタンの溶媒系で展開し、950mlから1370mlま
での溶出画分をあつめて減圧濃縮し、残渣をｎ−
ヘキサンで粉末化し、252mgの目的物（抗生物質
TAN−528B）を得た。 発明の効果 本発明の化合物（）は新規化合物であり、細
菌感染症の治療剤として有用である。また、本発
明の化合物（）は、新しい医薬品の合成中間体
として用いることもできる。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で得られた、抗生物質TAN
−528Bの紫外部吸収スペクトルを、第２図は抗
生物質TAN−528Bの赤外部吸収スペクトルをそ
れぞれ表わす。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 で表わされる化合物。 ２ ストレプトミセス属に属し、式 で表わされる化合物を生産する能力を有する微生
   物を培地に培養し、培養物中に該化合物を生成蓄
   積せしめ、これを採取することを特徴とする式
   （）で表わされる化合物の製造法。