JPH0639479B2 - 抗生物質ｔａｎ−７４９，その製造法およびそれを含有する細菌感染症治療剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は細菌感染症の治療剤として有用な新規抗生物質
ＴＡＮ−749（以下、「ＴＡＮ−749」と略称することも
ある。），その製造法およびその製剤に関する。

従来の技術 ＴＡＮ−749A,CおよびB,Dは、分子式Ｃ₁₅Ｈ₂₇Ｎ_５Ｏ_３
およびＣ₁₆Ｈ₂₉Ｎ_５Ｏ_３でそれぞれ表わされるが、分子
式が近似の抗生物質として、ストレプトミセス(Strepto
myces)属菌の産生するロイシルネガマイシン(Leucylneg
amycin)（分子式Ｃ₁₅Ｈ₃₁Ｎ_５Ｏ_５）が挙げられる［ザ
・ジャーナル・オブ・アンティビオティクス(The Journ
al of Antibiotics),24,732(1971)参照。］。

発明が解決しようとする問題点 細菌によって惹起される疾病は抗生物質投与による治療
法の発達によってかなり克服されている。しかし、従来
の抗生物質を長期または大量に投与することによる起因
菌の変化（菌交代現象）あるいは耐性菌の出現（耐性化
現象）などによる疾患の増大および自己免疫能力の低下
した人々への治療法の必要性などは現在の感染症医療分
野で大きな問題となっている。この問題を克服するため
に、当分野では、常に新規骨格を有し、新しい生物活性
を示す抗生物質、あるいはそれらを合成するための中間
原料が求められている。

問題点を解決するための手段 本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
のバクテリアを土壌より分離し、その産生する抗生物質
を分離探索したところ、ある種の微生物が新規な抗生物
質を産生すること、該微生物がシュードモナス属に属す
ること、該微生物を適宜の培地に培養することによって
耐性菌を含むグラム陽性および陰性菌に対して抗菌力を
示す抗生物質を培地中に蓄積しうることなどを知り、こ
の抗生物質を単離し、その物理化学的および生物学的諸
性質から、当該抗生物質が新規抗生物質であることを確
め、これを抗生物質ＴＡＮ−749と称することとした。
ＴＡＮ−７４９は４成分から成り、これらをそれぞれＴ
ＡＮ−７４９A,B,CおよびＤと命名した。

本明細書においては抗生物質ＴＡＮ−749A,B,CおよびＤ
またはそれぞれを総称して抗生物質ＴＡＮ−749あるい
は単にＴＡＮ−749と称することもある。

本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究した
結果、本発明を完成した。

本発明は、(1)抗生物質ＴＡＮ−749A,B,CまたはＤまた
はこれらの塩， (2)シュードモナス属に属し、抗生物質ＴＡＮ−７４９
A,B,CおよびＤのうち少なくとも１種を生産する能力を
有する微生物を培地に培養し、培養物中に抗生物質ＴＡ
Ｎ−７４９A,B,CおよびＤのうち少なくとも１種を生成
蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする抗生物質
ＴＡＮ−749A,B,C,Dまたはこれらの塩の製造法および (3)抗生物質ＴＡＮ−749A,B,CおよびＤのうち少なくと
も１種を含有する細菌感染症治療剤に関する。

本発明方法で使用される抗生物質ＴＡＮ−749を生産す
る菌としては、シュードモナス(Pseudomonas)属に属
し、抗生物質ＴＡＮ−749を産生する能力を有する微生
物であればいずれのものでもよい。その例としては、例
えばシュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas f
luorescens)が挙げられる。その具体例としては、長野
県白馬山で採集した植物から分離したシュードモナス・
フルオレッセンスＹＫ−437株（以下、「ＹＫ−437株」
と略称することもある。）が挙げられる。

ＹＫ−437株の菌学的性状を以下に挙げる。

(a)形態 肉汁寒天斜面上で24℃，５日間培養後の観察では、細胞
は0.5〜1.0μｍ×1.5〜４μｍの桿状で、鞭毛による運
動性が認められる。胞子を形成しない。

またグラム染色は陰性で、抗酸性を示さない。

(b)各種培地上での生育状態 24℃で培養し、１ないし14日間にわたって観察した。

肉汁寒天平板培養：コロニーは無色，透明で、円形、
表面は頭状ないし凸円状、周縁は波状である。拡散性色
素は生成しない。

肉汁寒天斜面培養：良好な光沢のある拡布状の生育を
示し、不透明、無色を呈す。

肉汁液体培養：混濁状に生育し、弱い菌膜を形成す
る。沈澱は認められない。

肉汁ゼラチン穿刺培養：主として上部でよく生育す
る。液化し、液化活性は強い。

リトマス・ミルク：リトマスの還元能は認められな
い。ペプトン化活性は認められるが凝固は認められな
い。

(c)生理的性質 硝酸塩の還元：− 脱窒反応：− ＭＲ（メチルレッド）テスト：− ＶＰ（フォーゲス・プロスカウエル）テスト：− インドールの生成：− 硫化水素の生成（酢酸鉛紙）：− デンプンの加水分解：− クエン酸の利用（コーゼル，クリステンセンおよびシ
モンズの各培地）：＋ 無機窒素源の利用 Ｉ）硝酸カリウム：＋ II）硫酸アンモニウム：＋ 色素の生成（キングＡ，Ｂおよびマンニット酵母エキ
ス寒天の各培地）：キングＢ培地でレモン色の菌体内色
素の生成が認められ、また、レモン色の可溶性色素の生
成が認められる。

キングＡ培地：グリセリン10ｇ，ペプトン20ｇ，塩化マ
グネシウム1.4ｇ，硫酸アンモニウム10ｇ，寒天15ｇ，
蒸留水1000ml，pH7.2 キングＢ培地：グリセリン10ｇ，ペプトン20ｇ，リン酸
一水素カリウム1.5ｇ，硫酸マグネシウム1.5ｇ，寒天15
ｇ，pH7.2 ウレアーゼ：＋ オキシダーゼ：＋ カタラーゼ：＋ 生育の範囲 Ｉ）pH：pH4.1〜8.5で生育するが、最適pHは6.3〜8.2。

II）温度：８〜36℃で生育するが最適温度は11〜24℃ 酸素に対する態度：好気的。

Ｏ−Ｆ（オキシダテイブーファーメンタティブ）テス
ト［ヒュー・レイフソン(Hugh Leifson)法］：酸化型。

糖からの酸およびガスの生成： ＤＮＡのＧ＋Ｃ（グアニン−シトシン）含量：66.4±
1.5モル％ 食塩耐性：０〜５％ カルボキシメチルセルロース，コロイダルキチンの分
解能：− 寒天，アルギネートの分解能：− トウィーン(Tween)80の分解能：＋ 以上の菌学的諸性状を有するＹＫ−437株を、バージー
ズ・マニュアル・オブ・デターミネイティブ・バクテリ
オロジー(Bergey's Manual of Determinative Bacterio
logy)第８版およびインターナショナル・ジャーナル・
オブ・システマティック・バクテリオロジー(Internati
onal Journal of Systematic Bacteriology)第30巻 22
5〜420頁（1980年）および同誌バリデーション・リスト
(Validation list)に記載の種と照合すると、ＹＫ−437
株は、鞭毛による運動性を示すグラム陰性桿菌で、好気
性で、カタラーゼ陽性，オキシダーゼ陽性であり、ＤＮ
ＡのＧ＋Ｃ含量が、66.4±1.0モル％であることから、
シュードモナス属に属すると考えられた。

上記バージーズ・マニュアル・オブ・デターミネイティ
ブ・バクテリオロジーによれば、シュードモナス属は、
栄養要求性，ポリ・ベータ・ヒドロキシブチレートの菌
体内蓄積、ＤＬ−アルギニンの利用性および４０℃にお
ける生育からセクションＩ，II，IIIおよびIVに分けら
れている。

ＹＫ−４３７株の性質についてさらに実験し得られた結
果を第１表に示した。

ＹＫ−４３７株は、栄養要求性がなく、菌体内にポリ・
ベータ・ヒドロキシブチレートを蓄積しないことから、
セクションＩには、１０種の菌種が含まれている。ＹＫ
−４３７株は、蛍光性の色素を生成し、アルギニン・ジ
ヒドロラーゼを有することから、シュードモナス・エル
ギノーザ，シュードモナス・プチダ，シュードモナス・
フルオレッセンス，シュードモナス・クロロフィス，シ
ュードモナス・オーレオファッシエンスのいずれかの菌
種に属するものと考えられた。

ＹＫ−４３７株は、脱窒反応，トレハロース，ゲラニオ
ールの利用性で、シュードモナス・エルギノーザと相違
し、ゼラチンの加水分解，トレハロースの利用性で、シ
ュードモナス・プチダと相違した。また、脱窒反応，リ
パーセ活性，炭素源の利用性で、シュードモナス・クロ
ロラフィスと相違し、ソルビット，アドニットの利用性
で、シュードモナス・オーレオファッシエンスと相違し
た。

ＹＫ−４３７株の性質は、シュードモナス・フルオレッ
センスのそれと良く一致を示したので、ＹＫ−４３７株
を、シュードモナス・フルオレッセンスと同定し、シュ
ードモナス・フルオレッセンスＹＫ−４３７（Pseudomo
nas fluorescens ＹＫ−４３７）と呼称することにし
た。

上記シュードモナス・フルオレッセンスＹＫ−４３７株
は、昭和60年（1985年）６月７日に財団法人発酵研究所
（ＩＦＯ）に受託番号ＩＦＯ １４４４６として寄託さ
れ、また本微生物は、昭和60年（1985年）６月１５日に
通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）
に受託番号ＦＥＲＭＰ−８３１２として寄託され、該寄
託がブダペスト条約に基づく寄託に切換えられて、受託
番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１００５として同研究所に保管さ
れている。

本発明方法に用いられるシュードモナス属細菌は一般に
その性状が変化しやすく、たとえば紫外線，Ｘ線，化学
薬品（例、ニトロソグアニジン，エチルメタンスルホン
酸）などを用いる人工変異手段で容易に変異しうるもの
であるが、どの様な変異株であっても、本発明の対象と
するＴＡＮ−749の生産能を有するものはすべて本発明
方法に使用することができる。

ＴＡＮ−749を生産する菌の培養に際しては、炭素源と
しては、たとえばグルコース，麦芽糖，乳糖，廃糖蜜，
油脂類（例、大豆油，オリーブ油など），有機酸類
（例、クエン酸，コハク酸，グルコン酸など）など菌が
資化しうるものが適宜用いられる。窒素源としては、た
とえば大豆粉，棉実粉，コーン・スティープ・リカー，
乾燥酵母，酵母エキス，肉エキス，ペプトン，尿素，硫
酸アンモニウム，硝酸アンモニウム，塩化アンモニウ
ム，リン酸アンモニウムなどの有機窒素化合物や無機窒
素化合物が利用できる。また、無機塩としては、たとえ
ば塩化ナトリウム，塩化カリウム，炭酸カルシウム，硫
酸マグネシウム，リン酸一カリウム，リン酸二ナトリウ
ムなどの通常細菌の培養に必要な無機塩類が単独もしく
は適宜、組合せて使用される。また、ＴＡＮ−749を生
産する菌の資化しうる硫黄化合物、たととえば硫酸塩
（例、硫酸アンモニウムなど），チオ硫酸塩（例、チオ
硫酸アンモニウムなど），亜硫酸塩（例、亜硫酸アンモ
ニウムなど）などの無機硫黄化合物，含硫アミノ酸
（例、シスチン，システィン，Ｌ−チアゾリン−４−カ
ルボン酸），ヒポタウリン，含硫ペプチド（例、グルタ
チオン）などの有機硫黄化合物または、これらの混合物
を培地に添加すると目的物の生成量が増大する場合があ
る。

また、硫酸第１鉄，硫酸銅などの重金属類，ビタミン
B₁，ビチオンなどのビタミン類なども必要に応じて添加
される。さらにシリコーンオイルやポリアルキレングリ
コールエーテルなどの消泡剤や界面活性剤を培地に添加
してもよい。その他菌の発育を助け、ＴＡＮ−749の生
産を促進するような有機物や無機物を適宜に添加しても
よい。

培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法と同様に
行なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培
養の場合は静置培養，攪拌培養，振蘯培養，通気培養な
どいずれを実施してもよいが、とくに通気攪拌培養が好
ましい。又培養温度は約10℃ないし30℃の範囲が好まし
くさらに好ましくは約17℃ないし24℃であり、培地のpH
は約４ないし８の範囲さらに好ましくは約６ないし７の
範囲であり、約８時間ないし168時間、好ましくは約24
時間ないし144時間培養する。

培養物から目的とするＴＡＮ−749を採取するには微生
物の生産する代謝物をその微生物の培養物から採取する
のに通常使用される分離手段が適宜利用される。たとえ
ばＴＡＮ−749は水溶性塩基性物質の性質を示し、主と
して培養ろ液中に含まれるので、まず培養液にろ過補助
剤を加えてろ過あるいは遠心分離によって、菌体を除去
する。得られた培養ろ過を適宜の担体に接触させてろ液
中の有効成分を吸着させ、次いで適宜の溶媒で有効物質
を脱着させ、分別採取する手段が有利に利用される。ク
ロマトグラフィーの担体としては活性炭，粉末セルロー
ス，吸着性樹脂など化合物の吸着性の差を利用、または
陽イオン交換樹脂，陽イオン交換セルロース，陽イオン
交換セファデックスなど化合物の官能基の差を利用，あ
るいはセファデックス類など化合物の分子量の差を利用
するものが有利に用いられる。これら担体から目的とす
る化合物を溶出するためには担体の種類，性質によって
組み合せが異なるが、たとえば水溶性有機溶媒の含水溶
液すなわち、含水アセトン，含水アルコール類など、あ
るいは酸，アルカリ，緩衝液もしくは無機あるいは有機
塩を含む水溶液などが適宜組み合わせて用いられる。

またこれらのクロマトグラフィーによって得られた抗生
物質を含む粗物質を分取用高速液体クロマトグラフィー
に付し、精製品を得る事も行われる。

さらに詳しく述べるならば、担体として陽イオン交換樹
脂たとえばアンバーライトＩＲＣ−50あるいはＣＧ−50
（ローム・アンド・ハース社製，米国）などを用いると
ろ液中の抗菌性物質は吸着され、塩類あるいは酸含有の
水溶液あるいは緩衝液などで溶出される。あるいは陽イ
オン交換分子ふるい性樹脂たとえばＣＭ−セファデック
ス（ファルマシア・ファィン・ケミカルズ社製，スウェ
ーデン）などの担体に抗生物質を吸着せしめ、塩類ある
いは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などによって溶出さ
せることが出来る。これら溶出液中の塩類，着色物質な
どを取り除くためにはクロマトグラフィー用活性炭（武
田薬品工業株式会社製）あるいは吸着性樹脂たとえばダ
イヤイオンＨＰ−20あるいはＳＰ−207（三菱化成工業
株式会社製），アンバーライトＸＡＤ−II（ローム・ア
ンド・ハース社製，米国）などが有利に用いられる。分
画された溶出区分は濃縮，凍結乾燥などの工程を経て、
粉末化される。かくして得られた粉末の純度が悪い場
合、さらに精製するためには高速液体クロマトグラフィ
ー法（ＨＰＬＣ）が有利に利用される。用いられる担体
としてはたとえばＴＳＫゲル（東洋曹達株式会社製），
ＹＭＣゲル（山村化学研究所製）などが挙げられ、移動
層としてはメタノールあるいはアセトニトリルなどと無
機塩含有水溶液あるいは緩衝液などとの混合液が用いら
れる。なおＴＡＮ−749は鉱酸たとえば塩酸，硫酸，リ
ン酸などあるいは有機酸たとえば蟻酸，酢酸，修酸など
の塩として単離される。

このようにして、塩の形で単離されたＴＡＮ−749塩
を、常套手段により遊離形のＴＡＮ−749とすることも
でき、また該遊離形の化合物を常套手段により上記と同
様の塩の形にすることもできる。

後述の実施例１で得られたＴＡＮ−749A,B,CおよびＤ二
塩酸塩の物理化学的性状はつぎの通りである。

[1]ＴＡＮ−749Ａ・二塩酸塩 (1)外観：無色固体 (2)比旋光度：▲［α］²⁵ _D▼-11°±５°（Ｃ＝1.06,H₂
O） (3)pKa′値：8.0 (4)分子量測定値：326(M+H)⁺,348(M+Na)⁺（SI-MS法によ
る）（Ｍは遊離体の分子量を表わす。） (5)分子式：Ｃ₁₅Ｈ₂₇Ｎ_５Ｏ_３・２ＨＣｌ (6)元素分析値：試料は五酸化リン上,40℃で６時間減圧
乾燥（１モルの水分を含むとして計算）（％） (7)紫外部（ＵＶ）吸収スペクトル：水中，第１図参照 (8)赤外部（ＩＲ）吸収スペクトル：ＫＢｒ法，第２図
参照 主な吸収を示す（波数） 3400，3100，1700，1670，1550，1440，1380， 1340，1280，1220，1150，1100，1000，960， 870，680(cm^-1) (9)¹³Ｃ核磁気共鳴(NMR)スペクトル：100MHz,δppm,重
水中、下記のシグナルが認められる。

第３図参照 174.7(s)，172.3(s)，171.7(s)，139.3(d)， 139.3(d)，129.6(d)，125.3(d)，69.2(d)， 49.2(d)，47.8(t)，39.8(t)，39.1(t)， 38.1(t)，35.2(t)，16.0(q) （ただし、s:singlet，d:doublet，t:triplet，q:quart
etを表わす） (10)高速液体クロマトグラフィー(HPLC)： カラム：YMCパックA312（山村化学研究所製）， 移動相：12％メタノール/0.01Mリン酸溶液(pH3),流速：
2ml/分 Ｒｔ＝4.4（分） (11)呈色反応： 陽性，エールリッヒ反応，ジメチルベンツアルデヒド，
過マンガン酸カリウム 陰性，ニンヒドリン，グレイグ・リーバック，坂口，ド
ラーゲンドルフ反応 (12)溶解性： 可溶，水，ジメチルスルフォキサイド，メタノール 難溶，アセトン，酢酸エチル，ジエチルエーテル (13)酸性，中性，塩基性の区別：中性（遊離体は塩基
性） [2]ＴＡＮ−749Ｂ・二塩酸塩 (1)外観：無色固体 (2)比旋光度：▲［α］²⁵ _D▼+56°±20°（Ｃ＝1.0,H
₂O） (3)pKa′値：8.05 (4)分子量測定値：340(M+H)⁺,362(M+Na)⁺（ＳＩ−ＭＳ
法） (5)分子式：Ｃ₁₆Ｈ₂₉Ｎ_５Ｏ_３・２ＨＣｌ (6)元素分析値：Ａと同じ条件（1.5モルの水分を含むと
して計算）（％） (7)ＵＶ吸収スペクトル：水中，第４図参照 (8)ＩＲ吸収スペクトル：ＫＢｒ法，第５図参照 3300，3100，1700，1660，1610，1550，1450， 1420，1380，1350，1280，1220，1150，1070， 1000，960，930，870，690(cm^-1) (9)¹³ＣＮＭＲスペクトル：100MHz,δppm,重水中，第６
図参照 174.7(s)，171.6(s)，139.3(d)，139.2(d)， 129.6(d)，125.5(d)，72.6(d)，52.3(d)， 49.3(d)，39.9(t)，39.1(t)，37.5(t)， 35.2(t)，18.8(q)，16.0(q) (10)ＨＰＬＣ：Ａと同じ条件 Ｒｔ＝7.2（分） (11)呈色反応：Ａと同じ (12)溶解性：Ａと同じ (13)酸性，中性，塩基性の区別：中性（遊離体は塩基
性） [3]ＴＡＮ−749Ｃ・二塩酸塩 (1)外観：無色固体 (2)比旋光度：▲［α］²³ _D▼−11°±５°（ｃ＝0.68,H
₂O） (3)分子量測定値：326(M+H)⁺，348(M+Na)⁺ （ＳＩ−ＭＳ法） (4)分子式：Ｃ₁₅Ｈ₂₇Ｎ_５Ｏ_３・２ＨＣｌ (5)元素分析値：（0.5モルの水分を含むとして計算）
（％） (6)ＵＶ吸収スペクトル：水中，第７図参照 (7)ＩＲ吸収スペクトル：ＫＢｒ法，第８図参照 3250，3070，1660，1630，1540，1430，1340， 1260，1200，1150，1085，995，860，650(cm^-1) (8)¹³ＣＮＭＲスペクトル：100MHz,δppm,重水中 174.7(s)，172.3(s)，171.6(s)，145.1(d)， 143.0(d)，132.0(d)，123.1(d)，69.2(d)， 49.2(d)，47.7(t)，39.7(t)，39.1(t)， 38.0(t)，35.2(t)，20.6(q) (9)呈色反応：Ａと同じ (10)ＨＰＬＣ：カラム；ＹＭＣパックＡ３１２（山村化
学研究所製），移動相；３０％アセトニトリル／0.01Ｍ
オクタンスルフォン酸−0.02Ｍリン酸溶液(pH3)，流
速；2ml／分 Ｒｔ＝5.7（分）［Ａ：Ｒｔ＝5.3（分）］ (11)溶解性：Ａと同じ (12)酸性，中性，塩基性の区別：中性（遊離体は塩基
性） [4]ＴＡＮ−749Ｄ・二塩酸塩 (1)外観：無色固体 (2)比旋光度：▲［α］²⁴ _D▼＋30°±10°（ｃ＝0.5,H₂
O） (3)分子量測定値：340(M+H)⁺，362(M+Na)⁺ （ＳＩ−ＭＳ法） (4)分子式：Ｃ₁₆Ｈ₂₉Ｎ_５Ｏ_３・２ＨＣｌ (5)元素分析値：（0.5モルの水分を含むとして計算）
（％） (6)ＵＶ吸収スペクトル：水中，第９図参照 (7)ＩＲ吸収スペクトル：ＫＢｒ法，第10図参照 3250，3050，1660，1635，1530，1435，1345， 1260，1200，1150，995，860，650(cm^-1) (8)¹³ＣＮＭＲスペクトル：100MHz,δppm,重水中 174.7(s)，171.7(s)，171.6(s)，145.3(d)， 143.0(d)，132.0(d)，123.2(d)，72.5(d)， 52.2(d)，49.3(t)，39.9(t)，39.2(t)， 37.5(t)，35.3(t)，20.7(q)，18.8(q) (9)呈色反応：Ａと同じ (10)ＨＰＬＣ：Ｃと同じ条件 Ｒｔ＝6.2（分）［Ｂ：Ｒｔ＝5.8（分）］ (11)溶解性：Ａと同じ (12)酸性，中性，塩基性の区別：中性（遊離体は塩基
性） 以上記載した物理化学的性状から明らかなようにＴＡＮ
−７４９ＡとＣおよびＢとＤはそれぞれ立体異性体の関
係にある。

次に、ＴＡＮ−749の生物学的性状について述べる。

まず、ＴＡＮ−749A,B,CおよびＤ（二塩酸塩）の各種微
生物に対する抗菌スペクトルを第２および３表に示す。

次に、ＴＡＮ−749Ａ・二塩酸塩の臨床分離スタフィロ
コッカス・アウレウス菌に対する抗菌力を第４表に示
す。

また、ＴＡＮ−749A,B,CおよびＤ（二塩酸塩）のマウス
感染症における治療効果は、第５表に示すとおりであ
る。

さらに、ＴＡＮ−７４９A,B（二塩酸塩）のマウスを用
いた急性毒性は第６表に示すとおりである。

これらのデータから明らかなように、ＴＡＮ−749およ
びその塩はグラム陽性菌およびグラム陰性菌に対して抗
菌性を示し、哺乳動物などに対する毒性が低い。また、
ＴＡＮ−749およびその塩は種々の耐性菌に対して有効
であり、交叉耐性を示さない。したがってＴＡＮ−749
およびその塩は哺乳動物（例、マウス，ラット，ウサ
ギ，犬，ヒト）の細菌感染症の治療に用いることが出来
る。

ＴＡＮ−749またはその塩をたとえば細菌感染症の治療
剤として用いる際、該治療剤はＴＡＮ−749またはその
塩を薬理学的に許容され得る担体と混合することにより
得られる。例えば、経口治療剤を製造する際には、適当
量の結合剤（例、ハイドロキシプロピルセルロース，ハ
イドロキシプロピルメチルセルロース，マクロゴース
等），崩壊剤（例、スターチ，カルボキシメチルセルロ
ースカルシウム等），賦形剤（例、乳糖，スターチ等）
および滑沢剤（例、ステアリン酸マグネシウム，タルク
等）等が用いられる。

非経口治療剤、例えば注射剤を製造する際には、等張化
剤（例、グルコース，Ｄ−ソルビトール，Ｄ−マンニト
ール，塩化ナトリウム等），保存剤（例、ベンジルアル
コール，クロロブタノール，パラヒドロキシ安息香酸メ
チル，パラヒドロキシ安息香酸プロピル等）および緩衝
剤（例、リン酸緩衝液，酢酸ナトリウム緩衝液等）等が
用いられる。

次にＴＡＮ−７４９またはその塩の投与法について述べ
る。

たとえばＴＡＮ−749またはその塩を注射剤として非経
口的に上記哺乳動物の皮下または筋肉内に約１ないし50
mg/kg/日，好ましくは約５ないし20mg/kg/日投与する。
また経口的にはＴＡＮ−749またはその塩をカプセル剤
とし、ＴＡＮ−749として約１ないし100mg/kg/日、好ま
しくは約５ないし50mg/kg/日投与する。また、ＴＡＮ−
749またはその塩は、殺菌剤として用いることができ
る。たとえばＴＡＮ−749またはその塩をＴＡＮ−749と
して約0.01ないし0.1w/v％の濃度で蒸留水に溶解した液
剤、または1gあたりＴＡＮ−749として約0.2ないし20m
g，好ましくは約１ないし10mg含有する軟膏剤として、
上記哺乳動物の手，足，眼，耳などに塗布することによ
り、これらの部位の殺菌，消毒に用いることができる。

実施例 次に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。
なお、培地におけるパーセントは、特にことわりのない
かぎり重量／容量％を示す。

実施例１ 栄養寒天斜面上に生育したシュードモナス・フルオレッ
センスＹＫ−437（ＩＦＯ １４４４６，ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−１００５）をグルコース２％，ソルブル・スターチ
３％，生大豆粉１％，コーンスティープリカー0.3％，
ポリペプトン（大五栄養化学株式会社製）0.5％，食塩
0.3％を含有する水溶液(pH0.7)に沈降性炭酸カルシウム
0.5％を添加した培地500mlを含む２容坂口フラスコに
接種して、24℃で48時間往復振蘯培養した。この培養液
全量を上記培地で消泡剤アクトコール（武田薬品工業株
式会社製）0.05％を添加した培地30を含む容量50の
タンクに接種し、24℃で通気量30／分、200回転／分
の条件下で48時間培養した。この培養液６をグリセロ
ール３％，グルコース0.1％，ポリペプトン（大五栄養
化学株式会社製）0.5％，内エキス（和光純薬工業株式
会社製）0.5％，食塩0.5％，チオ硫酸ナトリウム0.05
％，塩化コバルト２ppm，アクトコール0.05％を添加し
た培地120を含む容量200のタンクに接種し、24℃で
通気量120／分，170回転／分の条件下で66時間培養し
た。

上記で得られた培養液（105）を２Ｎ塩酸でpH6.5に調
整後、ハイフロスーパーセル（ジョンズ・マンビル・プ
ロダクト社製，米国）を加え、ろ過，水洗しろ液（102
）を得た。ろ液をpH6.5に調整後、ＩＲＣ−50（Na
⁺型，２）を充填したカラムを通過させた。水でカラ
ムを洗浄後、２Ｍ食塩水（500）で溶出した。溶出液
を活性炭（２）のカラムを通過させ、水で洗浄後、８
％イソブタノール水（15）で溶出した。溶出液をpH6.
2に調整後２まで濃縮し、濃縮液をＣＭセファデック
スＣ−25（Na⁺型，0.5）を充填したカラムを通過させ
た。0.1Ｍ食塩水（20）で活性区分を溶出した。

溶出液の前半にＴＡＮ−749Ｂ成分が、後半にＴＡＮ−7
49Ａ成分が溶出された。

各溶出区分を各々活性炭のクロマトグラフィー（1.0
および4.0）に対し、脱塩後、濃縮，凍結乾燥して、
ＴＡＮ−749Ｂの粗物質(4.0g)およびＴＡＮ−749Ａの粗
物質(8.9g)を得た。

粗物質Ｂ(4.0g)を分取用逆相高速液体クロマトグラフィ
ー［担体：YMCパックS-30（山村化学研究所製），移動
相：８％メタノール／0.02Mリン酸溶液(pH 3)］に付
し、活性画分を得た。この画分をＣＭセファデックスＣ
−25（Na⁺型，0.25）のカラムクロマトグラフィー，
つづいて活性炭のクロマトグラフィー（0.3）に付
し、精製された溶出画分を得た。この画分を濃縮，凍結
乾燥し、ＴＡＮ−７４９Ｂ・二塩酸塩（０．６６ｇ）を
白色粉末として得た。同様の方法で粗物質Ａ(8.9g)を処
理し、ＴＡＮ−７４９Ａ・二塩酸塩の白色粉末(4.7g)を
得た。

実施例２ 栄養寒天斜面上に生育したシュードモナス・フルオレッ
センスＹＫ−437（ＩＦＯ １４４４６，ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−１００５）をグルコース２％，ソルブル・スターチ
３％，生大豆粉１％，コーンスティープリカー0.3％，
ポリペプトン（大五栄養化学株式会社製）0.5％，食塩
0.3％を含有する水溶液(pH7.0)に沈降性炭酸カルシウム
0.5％を添加した培地500mlを含む２容坂口フラスコに
接種して、24℃で48時間往復振盪培養した。この培養液
全量を上記培地に消泡剤アクトコール（武田薬品工業株
式会社製）0.05％を添加した培地１２０を含む容量２
００のタンクに接種し、24℃で通気量１２０／分、
１８０回転／分の条件下で48時間培養した。この培養液
５０をグリセロール３％，グルコース 0.1％，ポリ
ペプトン（大五栄養化学株式会社製）0.5％，内エキス
（和光純薬工業株式会社製）0.5％，食塩0.5％，チオ硫
酸ナトリウム0.05％，塩化コバルト２ppm，アクトコー
ル0.05％を添加した培地１２００を含む容量２０００
のタンクに接種し、24℃で通気量１２００／分，１
５０回転／分の条件下で66時間培養した。

上記で得られた培養液（１１５０）をpH6.5に調整
後、ハイフロスーパーセル（ジョンズ・マンビル・プロ
ダクト社製，米国）を加え、ろ過，水洗しろ液（１２２
０）を得た。ろ液をpH6.2に調整後、ＩＲＣ−50（Na⁺
型，２０）を充填したカラムを通過させた。水でカラ
ムを洗浄後、０．５Ｎ塩酸水（２００）で溶出した。
溶出液をpH5.6に調整後、ダイアイオンＳＰ−２０７
（２０）のカラムを通過させ、水（１２０）で溶出
した。溶出液を２まで濃縮し、濃縮液をＣＧ−５０
（▲ＮＨ^＋ _４▼型３）を充填したカラムを通過させ
た。0.4−0.6Ｍ食塩水（４０）で活性区分を溶出分画
した。

溶出液の前半にＴＡＮ−７４９A,B,C,およびＤ成分が、
後半にＴＡＮ−７４９Ａ成分が溶出された。

各溶出区分を各々活性炭のクロマトグラフィー（１．２
および２．０）に対し、８％イソブタノール水（４
および１０）で溶出した。ＴＡＮ−７４９Ａのみを
含む区分は濃縮，凍結乾燥され、ＴＡＮ−７４９Ａ（4
7.5ｇ）が得られた。

ＴＡＮ−７４９A,B,C,Dを含む区分は同様に処理された
３ロット分（出発培養液にして３４５０分）をまとめ
て濃縮，濃縮液（２）はＣＧ−５０（▲ＮＨ^＋ _４▼
型，３）のカラムクロマトグラフィーに付された。カ
ラムを０．２Ｍ食塩水で洗浄後、０．５−０．８Ｍ食塩
水（４０）で溶出した。溶出液の前半にはＴＡＮ−７
４９ＢおよびＤが、後半にはＴＡＮ−７４９ＡおよびＣ
が含まれていた。ＴＡＮ−７４９ＡおよびＣを含む画分
を活性炭のクロマトグラフィーに付し、脱塩後、濃縮，
凍結乾燥し、ＴＡＮ−７４９Ｃが少量含まれるＴＡＮ−
７４９Ａの粉末（２０ｇ）が得られた。

ＴＡＮ−７４９ＢおよびＤを含む画分は活性炭のクロマ
トグラフィーに付され、脱塩後、溶出液はＣＭ−セファ
デックスＣ−２５（Ｎａ^＋型，１）のカラムクロマト
グラフィーに付され、０．２Ｍ食塩水で溶出された。溶
出液を濃縮し、濃縮液を分取用逆層系ＨＰＬＣ［担体：
ＯＤＳ，ＹＭＣ−Ｐak Ｓ−３０，移動相：５％メタノ
ール／0.02Ｍリン酸緩衝液（pH３．０）］に付した。Ｔ
ＡＮ−７４９Ｂのみを含む画分をＣＭ−セファデックス
および活性炭のクロマトグラフィーに付し、ＴＡＮ−７
４９Ｂ（３．０５ｇ）を得た。ＴＡＮ−７４９Ｂおよび
Ｄを含む画分を濃縮し、再度ＨＰＬＣに付した。ＴＡＮ
−７４９Ｄのみを含む画分を濃縮し、濃縮液をＩＲＡ−
４０２（Ｃｌ⁻型，１０ml）のカラム中を通過させ、通
過，水洗液を活性炭のクロマトグラフィーに付し、脱塩
した。その結果、ＴＡＮ−７４９Ｄ（15.5mg）が得られ
た。

ＴＡＮ−７４９Ｃが少量含まれるＴＡＮ−７４９Ａの粉
末（３ｇ）をＣＭ−セファデックス，ＣＧ−５０，活性
炭のクロマトグラフィーに付し、上述した方法によって
ＴＡＮ−７４９Ｃの混合比率を高めた。比率の高まった
粉末を上記ＨＰＬＣの条件で、２度くり返し精製して、
ＴＡＮ−７４９Ｃ（20.2mg）が得られた。

実施例３ 上記の成分(1),(2),(3)および(4)を混和した後、常法に
従って顆粒化する。これに成分(5)を加え、常法に従っ
て１号ゼラチンカプセル（第１０改正日本薬局法）に封
入し、カプセル剤とする。

実施例４ 注射剤 ＴＡＮ−７４９Ｂ２０ｇを蒸留水１に溶かし、これに
マンニトール１００ｇを加えて溶かし、滅菌濾過して、
アンプルに２mlずつ分注する。これを凍結乾燥機に入れ
て乾燥後封をすると使用時溶解用のアンプルが得られ
る。使用に際しては、該アンプルを開封し、２mlの生理
食塩水に溶解し、皮下または筋肉内投与用注射剤とす
る。

発明の効果 本発明のＴＡＮ−７４９A,B,CおよびＤはバクテリアに
よって生産される新規抗生物質であり、耐性菌を含むグ
ラム陽性およびグラム陰性菌に有効であるので臨床用医
薬品たとえば細菌感染症の治療剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図，第２図および第３図は抗生物質ＴＡＮ−７４９
Ａ・二塩酸塩のＵＶ，ＩＲおよび¹³ＣＮＭＲスペクトル
を、第４図，第５図および第６図は抗生物質ＴＡＮ−７
４９Ｂ・二塩酸塩のＵＶ，ＩＲおよび¹³ＣＮＭＲスペク
トルを、第７図および第８図は抗生物質ＴＡＮ−７４９
Ｃ・二塩酸塩のＵＶおよびＩＲスペクトルを、第９図お
よび第１０図は抗生物質ＴＡＮ−７４９Ｄ・二塩酸塩の
ＵＶおよびＩＲスペクトルをそれぞれ示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:39） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:39）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】二塩酸塩として次の物理化学的性状を有す
   る抗生物質ＴＡＮ−749A,B,CまたはＤ ＴＡＮ−７４９Ａ； (1)外観：無色固体 (2)分子式：Ｃ₁₅Ｈ₂₇Ｎ_５Ｏ_３・２ＨＣｌ (3)紫外部(UV)吸収スペクトル：水中 (4)赤外部(IR)吸収スペクトル：ＫＢｒ法 主な吸収を示す（波数） 3400，3100，1700，1670，1550，1440， 1380，1340，1280，1220，1150，1100， 1000，960，870，680(cm^-1) (5)¹³Ｃ核磁気共鳴(NMR)スペクトル：100MHz,δppm,重
   水中、下記のシグナルが認められる。 174.7(s)，172.3(s)，171.7(s)，139.3(d)， 139.3(d)，129.6(d)，125.3(d)，69.2(d)， 49.2(d)，47.8(t)，39.8(t)，39.1(t)， 38.1(t)，35.2(t)，16.0(q) (6)呈色反応： 陽性，エールリッヒ反応，ジメチルベンツアルデヒド，
   過マンガン酸カリウム 陰性，ニンヒドリン，グレイグ・リーバック，坂口，ド
   ラーゲンドルフ反応， ＴＡＮ−７４９Ｂ； (1)外観：無色固体 (2)分子式：Ｃ₁₆Ｈ₂₉Ｎ_５Ｏ_３・２ＨＣｌ (3)ＵＶ吸収スペクトル：水中 (4)ＩＲ吸収スペクトル：ＫＢｒ法 3300，3100，1700，1660，1610，1550，1450， 1420，1380，1350，1280，1220，1150，1070， 1000，960，930，870，690(cm^-1) (5)¹³ＣＮＭＲスペクトル：100MHz,δppm,重水中、下記
   のシグナルが認められる。 174.7(s)，171.6(s)，139.3(d)，139.2(d)， 129.6(d)，125.5(d)，72.6(d)，52.3(d)， 49.3(d)，39.9(t)，39.1(t)，37.5(t)， 35.2(t)，18.8(q)，16.0(q) (6)呈色反応： 陽性，エールリッヒ反応，ジメチルベンツアルデヒド，
   過マンガン酸カリウム 陰性，ニンヒドリン，グレイグ・リーバック，坂口，ド
   ラーゲンドルフ反応， ＴＡＮ−７４９Ｃ； (1)外観：無色固体 (2)分子式：Ｃ₁₅Ｈ₂₇Ｎ_５Ｏ_３・２ＨＣｌ (3)ＵＶ吸収スペクトル：水中 (4)ＩＲ吸収スペクトル：ＫＢｒ法 3250，3070，1660，1630，1540，1430，1340， 1260，1200，1150，1085，995，860，650(cm^-1) (5)¹³ＣＮＭＲスペクトル：100MHz,δppm,重水中、下記
   のシグナルが認められる。 174.7(s)，172.3(s)，171.6(s)，145.1(d)， 143.0(d)，132.0(d)，123.1(d)，69.2(d)， 49.2(d)，47.7(t)，39.7(t)，39.1(t)， 38.0(t)，35.2(t)，20.6(q) (6)呈色反応： 陽性，エールリッヒ反応，ジメチルベンツアルデヒド，
   過マンガン酸カリウム 陰性，ニンヒドリン，グレイグ・リーバック，坂口，ド
   ラーゲンドルフ反応， ＴＡＮ−７４９Ｄ； (1)外観：無色固体 (2)分子式：Ｃ₁₆Ｈ₂₉Ｎ_５Ｏ_３・２ＨＣｌ (3)ＵＶ吸収スペクトル：水中 (4)ＩＲ吸収スペクトル：ＫＢｒ法 3250，3050，1660，1635，1530，1435，1345， 1260，1200，1150，995，860，650(cm^-1) (5)¹³ＣＮＭＲスペクトル：100MHz,δppm,重水中、下記
   のシグナルが認められる。 174.7(s)，171.7(s)，171.6(s)，145.3(d)， 143.0(d)，132.0(d)，123.2(d)，72.5(d)， 52.2(d)，49.3(d)，39.9(t)，39.2(t)， 37.5(t)，35.3(t)，20.7(q)，18.8(q) (6)呈色反応： 陽性，エールリッヒ反応，ジメチルベンツアルデヒド，
   過マンガン酸カリウム 陰性，ニンヒドリン，グレイグ・リーバック，坂口，ド
   ラーゲンドルフ反応， またはこれらの塩。
2. 【請求項２】シュードモナス属に属し、抗生物質ＴＡＮ
   −749A,B,CおよびＤのうち少なくとも１種を生産する能
   力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に抗生物質
   ＴＡＮ−749A,B,CおよびＤのうち少なくとも１種を生成
   蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする抗生物質
   ＴＡＮ−749A,B,CまたはＤまたはこれらの塩の製造法。
3. 【請求項３】抗生物質ＴＡＮ−749A,B,CおよびＤのうち
   少なくとも１種を含有する細菌感染症治療剤。