JPS6147491A - 抗生物質,その製造法および微生物 - Google Patents
抗生物質,その製造法および微生物Info
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- JPS6147491A JPS6147491A JP16869184A JP16869184A JPS6147491A JP S6147491 A JPS6147491 A JP S6147491A JP 16869184 A JP16869184 A JP 16869184A JP 16869184 A JP16869184 A JP 16869184A JP S6147491 A JPS6147491 A JP S6147491A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
産業上の利用分野
本発明は細菌感染症の治療剤として有用な新規セフェム
系抗生物質、その製造法および微生物に関する。 従来の技術 天然由来のセフェム系抗生物質は大部分真菌あるいは放
射菌によって生産されていた。デアセトキシセファロス
ポリンCがバクテリアの一種によって生産されることが
報告されている。〔ジャーナル・オン・アンティビオテ
ィクス、 85.1897(1982)3゜ 発明が解決しようとしている問題点 セフェム系抗生物質の原料として最も汎用されている化
合物はペニシリンGとセファロスポリンCであるが、こ
れらはいずれも真菌の醗酵生産物である。真菌による醗
酵は一般的に醗酵時間が長く、コスト高2反省エネルギ
、−化の原因となっており、醗酵生産上重要な問題とな
っている。 0 また、近年セフェム系抗生物質
の多用により、耐性菌が増大しつつあり、臨床医学上問
題となっている。セフェム系抗生物質は選択毒性に関し
ては最も有用な抗生物質であるので、セファロスポリネ
ースに安定なセフェム系抗生物質は非常に重要視されて
いる。 問題点を解決するための手段 本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
のバクテリアを土壌より分離し、その産生ずる抗生物質
を分離探索したところ、ある種の微生物が新規な抗生物
質を産生すること、該微生物がキサントモナス属に属す
る新菌種であること、該微生物を適宜の培地に培養する
ことによって耐性菌を含むダラム陽性および陰性菌に対
して抗菌力を示す抗生物質を培地中に蓄積しうることな
どを知り、この抗生物質を単離し、その物理化学的およ
び生物学的諸性質から、当該抗生物質が新規なセフェム
系抗生物質であることを確め、これらの知見に基づいて
さらに研究した結果、本発明を完成した。 8一 本発明は、(11一般式 〔式中、R1は水素またはホルミルアミノを、R2はセ
リ″ンおよびアラニンから選ばれたlもしくは2個のア
ミノ酸あるいはペプチドの残基または水素を、R8は−
NH−、C(=NH)−NH2または−CH2NH2を
それぞれ示す。〕で表わされる化合物またはその塩。 (2)キサントモナス属に属し、化合物tT)を生産す
る能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に化合
物(1)を生成蓄積せしめ、採取することを特徴とする
化合物(11またはその塩の製造法。 (3)ゼラチンの液化活性およびオキシダーゼ活性がい
ずれも陽性で、グルコースおよびマンノースから酸およ
びガスを生成せず、かつ4%の食塩存在下でも生育可能
な新菌種キサントモナス・ラフタムゲナである。 上記式中、−8er−は−NH−CH−CO−を示■ CH−OH す。セリンの残基とは、NT(2−C)]−CO−ある
■ CH2−OH いは−NH−CT(−Co−を示し、アラニンの残基管 CH2−0AT を示す。 上記一般式において、Rにおけるアミノ酸あるいはペプ
チド残基としては、セリンの残基(すなわちN)T −
CH−Co−、Ser −色表示−1,mともCH−0
I( ある。〕あるいはアアランの残基−セリンの残基Ala
−ser−と表示することもある。)が特に好ましい。 本明細書においては、一般式(1)で示される化合物の
うち、ある種の化合物を次のとおり称するものとする。 本明細書においては、抗生物質TAN−592人ないし
F成分を総称して抗生物質TAN−592あるいはTA
N、592と、抗生物質’I”AN−591AないしC
成分を総称して抗生物質TAN−591あるいはTAN
−591とそれぞれ称することもある。 本発明方法で使用される抗生物質TAN−592を生産
する菌としては、キサントモナス(Xanthomon
as )属に属し、抗生物質TA、N−592を産生す
る能力を有する微生物であればいずれのものでもよい。 その例としては、たとえば新菌種キサントモナス・ラク
タムゲナ(Xanjhnmonas lactamg
cna ) が挙げられる。その具体例としては、三重
県阿山郡で採集された植物から採取されたキサントモナ
ス・ラクタムゲナYK−280株(以下、「YK−28
0株」と略称することもある。)が挙げられる。 YK−280株の菌学的性状を以下に挙げる。 =7− (a)形態 肉汁寒天斜面上で24′C,5日間培養後の観察では、
細胞は直径0.2〜0.8μm、長さ0.6〜1.9μ
mの桿状で、鞭毛による運動性が認められる。 鞭毛は極単毛である。胞子を形成しない。またダラム染
色は陰性で、抗酸性を示さない。 (bl各種培地−にでの生育状態 24tで培養し、1ないし14日間にわたって観察した
。 ■肉汁寒天平板培養:コロニーは半透明のレモンイエロ
ーで、円形、表面は層状ないし凸円状、周縁は全縁状で
ある。拡散性色素は生成しない。 ■肉汁寒天斜面培養:良好な光沢のある拡布状の生育を
示し、不透明、黄色を呈す。 ■肉汁液体培養:混濁状に生育し、弱い菌環を形成する
。沈澱も認められる。 ■肉汁ゼラチン穿刺培養:主として上部でよく生育する
。層状に液化し、液化活性は強い。 ■リドマス・ミルク:リドマスの還元能は認められない
。弱いペプトン化活性は認められるが凝固は認められな
い。 tc)生理的性質 ■硝酸塩の還元ニー ■脱窒反応ニー ■MR(メチルレッド)テヌト:− ■vP(フォーゲス・プロヌカウェル)テストニー■イ
ンドールの生成ニー ■硫化水素の生成(酢酸鉛紙):」− ■デンプンの加水分解:十 ■クエン酸の利用(コーゼル、クリステンセンおよびシ
モンズの各培地):十 ■無機窒素源の利用 ■)硝酸カリウムニー ■)硫酸アンモニウム:十 0色素の生成(キングA、Bおよびマンニット酵母エキ
ス寒天の各培地):キングB培地で黄色の菌体内色素の
生成が認められるが、拡散性色素の生成は認められない
。 キングA培地:グリセリン10y−,ペプトン20り、
塩化マグネシウム1.4!i’、硫酸アンモニウム10
グ、寒天159.蒸留水1000me 。 +)H7,2 キングB培地:グリセリンtoe、ペプトン209、リ
ン酸−水素カリウム1.5y−、硫酸マグネシウム1.
59.寒天15ii1.pH7,2■ウレアーゼニー 0オキシダーゼ:+ 0カタラーゼ:十 0生育の範囲 1) pH: pl−14,6〜83で生育するが、最
適pI−Tは6.2〜73゜ ■)温度:11〜40tで生育するが最適温度は16〜
26’b N o酸素に対する態度:好気的。 [相]0−F(オキシダティブーファーメンタテイブ)
テスト〔ヒユー・レイフソン(Hugh・Lei fs
on )法〕:培養初期は非分解型だが、培養後期には
酸化型。 ■糖からの酸およびガスの生成: +:陽性、±:疑陽性、−二陰性 @DNAのGC(グアニン−シトシン)含Rニア5.7
±1,5% 0食塩耐性:0〜4% [相]カルホキジメチルセルロ−ス チンの分解能:+ ■寒天,アルギネートの分解能ニー 〇トウイーy(Tween)80の分解能:+(早い)
以上の菌学的諸性状を有するYK−280株を、パーシ
ーズ・マニュアル・イブ・デターミネイティブ・バクテ
リオロジー第8版およびインターナショナル・ジャーナ
ル・イブ・システマテイック・バクテリオロジー第30
巻225〜420頁(1980年)および同誌バリデー
ション・リスト( Validation list
)に記載の種と照合すると、Yr(−280株は、極
中毛の鞭毛による運動性を示す黄色のカロチノイド色素
を有するダラム陰性桿閑で、好気性で、DNAのGC含
滑が高く、硝酸塩の還元能がなく、速やかにでんぷんお
よびトウイーン80を分解することからキサントモナス
属に属するとするのが妥当である。そこで、YK−28
0株を上記文献記載のキサントモナス属の公知の種(
species )と比較した。キサントモナス属の公
知の種としては、上記の文献に記載された5種のみが知
られている。そこで、これら5種とYK−280株の性
質を比較したところ、次のYK−280株の性質すなわ
ち、1)ゼラチンの液化活性が陽性で、2)オキシダー
ゼ活性が陽性で、3)グルコースおよびマンノースから
の酸およびガスの生成がなく、4)4%の食塩存在下で
も生育可能である点で、これら全ての性質をみたす菌株
は見当らなかった。 そこで、YK,−280株は、新菌種に属する株である
と認め、該新菌種をキサントモナス・ラクタムゲナ(
Xanthomnnas lactamgena )
と命名した。 上J己キサントモナス・ラクタムゲナYK−280株は
、昭和59年(1984年)3月208(−財団法人発
酵研究所(ITi’0)に受託番号IF014880と
して寄託され、また本微生物は、昭和59年(1984
年)4月28日に通商産業省工業技術院微生物工業技術
研究所(T;’Ri月二受託番号FERM P−76
02として寄託されている。 本発明方法で使用される抗生物質TAN−591を生産
する菌としては、キサントモナス(Xantho−mo
na s )属に属し、抗生物質TAN−591を産生
する能力を有する微生物であればいずれのものでもよい
。その例としては、たとえば新菌種キサントモナス−−
yクタムゲナ(Xanthomonas Iact −
amgena)が挙げられる。その具体例としては、三
重県阿山郡で採集された植物から採取されたキサントモ
ナス・ラクタムゲナYK−27s株<以下、「YK−2
78株」と略称することもある。)が挙げられる。 YK−278株の菌学的性状を以下に挙げる。 ral形 態 肉汁寒天斜面上で24t;、5日間培養後の観察では、
細胞は直径02〜08μm、長さ0.6〜】、9/Am
の桿状で、鞭氾による運動性が認められる。 編上は極単氾である。胞子を形成しない。またダラム染
色は陰性で、抗酸性を示さない。 市)各種培地上での生育状態 24セで培養し、1ないし14日間にわたって観察した
。 、■肉H−寒天平板培養:コロニーは半透明のレモンイ
エローで、円形、表面は層状、周縁は金縁状である。拡
散性色素は生成しl
系抗生物質、その製造法および微生物に関する。 従来の技術 天然由来のセフェム系抗生物質は大部分真菌あるいは放
射菌によって生産されていた。デアセトキシセファロス
ポリンCがバクテリアの一種によって生産されることが
報告されている。〔ジャーナル・オン・アンティビオテ
ィクス、 85.1897(1982)3゜ 発明が解決しようとしている問題点 セフェム系抗生物質の原料として最も汎用されている化
合物はペニシリンGとセファロスポリンCであるが、こ
れらはいずれも真菌の醗酵生産物である。真菌による醗
酵は一般的に醗酵時間が長く、コスト高2反省エネルギ
、−化の原因となっており、醗酵生産上重要な問題とな
っている。 0 また、近年セフェム系抗生物質
の多用により、耐性菌が増大しつつあり、臨床医学上問
題となっている。セフェム系抗生物質は選択毒性に関し
ては最も有用な抗生物質であるので、セファロスポリネ
ースに安定なセフェム系抗生物質は非常に重要視されて
いる。 問題点を解決するための手段 本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
のバクテリアを土壌より分離し、その産生ずる抗生物質
を分離探索したところ、ある種の微生物が新規な抗生物
質を産生すること、該微生物がキサントモナス属に属す
る新菌種であること、該微生物を適宜の培地に培養する
ことによって耐性菌を含むダラム陽性および陰性菌に対
して抗菌力を示す抗生物質を培地中に蓄積しうることな
どを知り、この抗生物質を単離し、その物理化学的およ
び生物学的諸性質から、当該抗生物質が新規なセフェム
系抗生物質であることを確め、これらの知見に基づいて
さらに研究した結果、本発明を完成した。 8一 本発明は、(11一般式 〔式中、R1は水素またはホルミルアミノを、R2はセ
リ″ンおよびアラニンから選ばれたlもしくは2個のア
ミノ酸あるいはペプチドの残基または水素を、R8は−
NH−、C(=NH)−NH2または−CH2NH2を
それぞれ示す。〕で表わされる化合物またはその塩。 (2)キサントモナス属に属し、化合物tT)を生産す
る能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に化合
物(1)を生成蓄積せしめ、採取することを特徴とする
化合物(11またはその塩の製造法。 (3)ゼラチンの液化活性およびオキシダーゼ活性がい
ずれも陽性で、グルコースおよびマンノースから酸およ
びガスを生成せず、かつ4%の食塩存在下でも生育可能
な新菌種キサントモナス・ラフタムゲナである。 上記式中、−8er−は−NH−CH−CO−を示■ CH−OH す。セリンの残基とは、NT(2−C)]−CO−ある
■ CH2−OH いは−NH−CT(−Co−を示し、アラニンの残基管 CH2−0AT を示す。 上記一般式において、Rにおけるアミノ酸あるいはペプ
チド残基としては、セリンの残基(すなわちN)T −
CH−Co−、Ser −色表示−1,mともCH−0
I( ある。〕あるいはアアランの残基−セリンの残基Ala
−ser−と表示することもある。)が特に好ましい。 本明細書においては、一般式(1)で示される化合物の
うち、ある種の化合物を次のとおり称するものとする。 本明細書においては、抗生物質TAN−592人ないし
F成分を総称して抗生物質TAN−592あるいはTA
N、592と、抗生物質’I”AN−591AないしC
成分を総称して抗生物質TAN−591あるいはTAN
−591とそれぞれ称することもある。 本発明方法で使用される抗生物質TAN−592を生産
する菌としては、キサントモナス(Xanthomon
as )属に属し、抗生物質TA、N−592を産生す
る能力を有する微生物であればいずれのものでもよい。 その例としては、たとえば新菌種キサントモナス・ラク
タムゲナ(Xanjhnmonas lactamg
cna ) が挙げられる。その具体例としては、三重
県阿山郡で採集された植物から採取されたキサントモナ
ス・ラクタムゲナYK−280株(以下、「YK−28
0株」と略称することもある。)が挙げられる。 YK−280株の菌学的性状を以下に挙げる。 =7− (a)形態 肉汁寒天斜面上で24′C,5日間培養後の観察では、
細胞は直径0.2〜0.8μm、長さ0.6〜1.9μ
mの桿状で、鞭毛による運動性が認められる。 鞭毛は極単毛である。胞子を形成しない。またダラム染
色は陰性で、抗酸性を示さない。 (bl各種培地−にでの生育状態 24tで培養し、1ないし14日間にわたって観察した
。 ■肉汁寒天平板培養:コロニーは半透明のレモンイエロ
ーで、円形、表面は層状ないし凸円状、周縁は全縁状で
ある。拡散性色素は生成しない。 ■肉汁寒天斜面培養:良好な光沢のある拡布状の生育を
示し、不透明、黄色を呈す。 ■肉汁液体培養:混濁状に生育し、弱い菌環を形成する
。沈澱も認められる。 ■肉汁ゼラチン穿刺培養:主として上部でよく生育する
。層状に液化し、液化活性は強い。 ■リドマス・ミルク:リドマスの還元能は認められない
。弱いペプトン化活性は認められるが凝固は認められな
い。 tc)生理的性質 ■硝酸塩の還元ニー ■脱窒反応ニー ■MR(メチルレッド)テヌト:− ■vP(フォーゲス・プロヌカウェル)テストニー■イ
ンドールの生成ニー ■硫化水素の生成(酢酸鉛紙):」− ■デンプンの加水分解:十 ■クエン酸の利用(コーゼル、クリステンセンおよびシ
モンズの各培地):十 ■無機窒素源の利用 ■)硝酸カリウムニー ■)硫酸アンモニウム:十 0色素の生成(キングA、Bおよびマンニット酵母エキ
ス寒天の各培地):キングB培地で黄色の菌体内色素の
生成が認められるが、拡散性色素の生成は認められない
。 キングA培地:グリセリン10y−,ペプトン20り、
塩化マグネシウム1.4!i’、硫酸アンモニウム10
グ、寒天159.蒸留水1000me 。 +)H7,2 キングB培地:グリセリンtoe、ペプトン209、リ
ン酸−水素カリウム1.5y−、硫酸マグネシウム1.
59.寒天15ii1.pH7,2■ウレアーゼニー 0オキシダーゼ:+ 0カタラーゼ:十 0生育の範囲 1) pH: pl−14,6〜83で生育するが、最
適pI−Tは6.2〜73゜ ■)温度:11〜40tで生育するが最適温度は16〜
26’b N o酸素に対する態度:好気的。 [相]0−F(オキシダティブーファーメンタテイブ)
テスト〔ヒユー・レイフソン(Hugh・Lei fs
on )法〕:培養初期は非分解型だが、培養後期には
酸化型。 ■糖からの酸およびガスの生成: +:陽性、±:疑陽性、−二陰性 @DNAのGC(グアニン−シトシン)含Rニア5.7
±1,5% 0食塩耐性:0〜4% [相]カルホキジメチルセルロ−ス チンの分解能:+ ■寒天,アルギネートの分解能ニー 〇トウイーy(Tween)80の分解能:+(早い)
以上の菌学的諸性状を有するYK−280株を、パーシ
ーズ・マニュアル・イブ・デターミネイティブ・バクテ
リオロジー第8版およびインターナショナル・ジャーナ
ル・イブ・システマテイック・バクテリオロジー第30
巻225〜420頁(1980年)および同誌バリデー
ション・リスト( Validation list
)に記載の種と照合すると、Yr(−280株は、極
中毛の鞭毛による運動性を示す黄色のカロチノイド色素
を有するダラム陰性桿閑で、好気性で、DNAのGC含
滑が高く、硝酸塩の還元能がなく、速やかにでんぷんお
よびトウイーン80を分解することからキサントモナス
属に属するとするのが妥当である。そこで、YK−28
0株を上記文献記載のキサントモナス属の公知の種(
species )と比較した。キサントモナス属の公
知の種としては、上記の文献に記載された5種のみが知
られている。そこで、これら5種とYK−280株の性
質を比較したところ、次のYK−280株の性質すなわ
ち、1)ゼラチンの液化活性が陽性で、2)オキシダー
ゼ活性が陽性で、3)グルコースおよびマンノースから
の酸およびガスの生成がなく、4)4%の食塩存在下で
も生育可能である点で、これら全ての性質をみたす菌株
は見当らなかった。 そこで、YK,−280株は、新菌種に属する株である
と認め、該新菌種をキサントモナス・ラクタムゲナ(
Xanthomnnas lactamgena )
と命名した。 上J己キサントモナス・ラクタムゲナYK−280株は
、昭和59年(1984年)3月208(−財団法人発
酵研究所(ITi’0)に受託番号IF014880と
して寄託され、また本微生物は、昭和59年(1984
年)4月28日に通商産業省工業技術院微生物工業技術
研究所(T;’Ri月二受託番号FERM P−76
02として寄託されている。 本発明方法で使用される抗生物質TAN−591を生産
する菌としては、キサントモナス(Xantho−mo
na s )属に属し、抗生物質TAN−591を産生
する能力を有する微生物であればいずれのものでもよい
。その例としては、たとえば新菌種キサントモナス−−
yクタムゲナ(Xanthomonas Iact −
amgena)が挙げられる。その具体例としては、三
重県阿山郡で採集された植物から採取されたキサントモ
ナス・ラクタムゲナYK−27s株<以下、「YK−2
78株」と略称することもある。)が挙げられる。 YK−278株の菌学的性状を以下に挙げる。 ral形 態 肉汁寒天斜面上で24t;、5日間培養後の観察では、
細胞は直径02〜08μm、長さ0.6〜】、9/Am
の桿状で、鞭氾による運動性が認められる。 編上は極単氾である。胞子を形成しない。またダラム染
色は陰性で、抗酸性を示さない。 市)各種培地上での生育状態 24セで培養し、1ないし14日間にわたって観察した
。 、■肉H−寒天平板培養:コロニーは半透明のレモンイ
エローで、円形、表面は層状、周縁は金縁状である。拡
散性色素は生成しl
【い。
■肉汁寒天ネ]面培養:良好な光沢のある拡布状の生育
を示し、不透明、黄色をVする。 ■肉汁液体培養:混濁状に生育し、弱い閉環を形成する
。沈澱もわずかに認められる。 ■肉汁ゼラチン穿刺培養°トとして1部でよく生育する
。層状に液化12、液化活性は強い。 ■リドマス・ミルり:リドマスの;驚冗能は11忍パノ
)られない。弱いペブトフ化活性は認められるが41固
は認められない。 lc)生理的性質 ■硝酸塩の還元ニー ■脱窒反応ニー ■MR(メチルレッド)テストニー ■VP(フォーゲス・プロスカラエル)テストニー■イ
ンドールの生成:〜 ■硫化水素の生成(酢酸鉛紙):± ■デンプンの加水分解:+ ■クエン酸の利用(コーゲル・クリステン七ンおよびシ
モンズの各培地):+ ■無機窒素源の利用 i)硝酸カリウム:+ lr)硫酸アンモニウム:± 0色素の生成(キングA、Bおよびマンニット酵母エキ
ス寒天の各培地):3種の培地共、黄色の菌体内色素の
生成が認められるが、拡散性色素の生成は認められない
。 キングA培地:グリセリン10グ、ペプトン20v、塩
化マグネシウム1.4y、硫酸アンモニウム1oy−、
寒天15ノ、蒸留水1000me 。 pH7,2 キングB培地:グリセリン107.ペプトン20!li
’、!Jン酸−水素カリウム1.5p、硫酸マグネシウ
ム】、5グ、寒天15グ、pH1,20ウレアーゼニー 〇オキシダーゼ:+ 0カタラーゼ:十 O生育の範囲 1) pH: pi−T4.6〜83で生育するが、
最適p)Tは6.9〜7.7゜ ■)温度:14〜38′Cで生育するが最適温度は18
〜25C8 [相]酸素に対する態度:好気的。 @’0− F (オキシダティブーファーメンタテイブ
)テスト〔ヒユー・レイフソン(r−1部gh・Lei
fson)法〕:培養初期は非分解型だが、培養後期に
は酸化型。 ◎糖からの酸およびガスの生成: (以下余白) +:陽性、十:疑陽性、−:陰性 [相]I)NAのQC(グアニン−シトシン) 含Fニ
ア 4.4 +1.、5% 0食塩耐性:0〜4% [相]カルボキシメチルセルロース、アルキネートの分
解能:+ ■寒天、コロイダルキチンの分解能ニー[相]トウイー
ン(Tween ) 80 (7)分解能: + (l
lzQ以上の菌学的諸性状を有するYK−278株を、
パーシーズ・マニュアル・オブ・デターミイ、イテイブ
・バクテリオロジー第8版およびインターナショナル・
ジャーナル・オブ・システマテイツク・バクテリオロジ
ー第30巻225〜420口(1980年)および同誌
バリケーション・リストに記載の種と照合すると、Yr
(−278株は、極単氾の鞭毛による運動性を示す黄色
のカロチノイド色素を有するダラム陰t/I桿菌で、好
気性で、DNAのGC含慴が高く、硝酸塩の還元能がな
く、速やかにでんぷんおよびトウイーン80を分解する
ことからキサントモナス属に属するとするのが妥当であ
る。そこで、YK−278株を上記文献記載のキサント
モナス属の公知の種(5pecies )と比較した。 キサントモナス属の公知の種とじては、1−記の文献に
記載された5種のみが知られている。そこで、これら5
種とYK−278株の性質を比較したところ、次のYK
−278株の性質すなわち、1)ゼラチンの液化活性が
陽性で、2)オキシダーゼ活性が陽性で、3)グルコー
スおよびマンノースからの酸およびガスの生成がなく、
4)4%の食塩存在丁でも生育可能である点で、これら
全ての性質をみたす菌株は見当らなかった。 しかし、前に述べた抗生物質TAN−592生産閑(キ
サ生産上ナス・ラクタムゲナ)と比べると、無機窒素源
の利用性、多糖の分解能などにわずかなちがいが認めら
れるが、その他の諸性状は極めてよく似ている。 そこで、YK−278株は、前記した新菌種キサントモ
ナス・ラクタムゲナに属する株であると3忍め、該菌株
をキサントモナス・ラクタムゲナ(Xanthomon
as Iactamgena)YK−278と命名し
た。 上記キサントモナス・ラクタムゲナYK−278株は、
昭和59年(1984年)6月18日にIP’0に受託
番号TPO14851として寄託され、また本微生物は
、昭和59年(1984年)6月25日にP R,Tに
受託番号F[1,M I)−7681として寄託され
ている。 なお、本菌株は1−記TAN−591以外に、TA、N
−592A、、B、C,l)、Eおよび[−も併産する
能力を有している。これらTA、N=592各成分は本
菌株の培養P液から単離され、薄層クロマトグラフィー
、高速液体クロマトグラフィー。 紫外部吸収スペクトル、赤外部吸収スペクトル。 円二色性スペクトル、分子1i(SIMS法)などの各
物理化学的性質によって、TA、N−592標品と同一
であることか判明した。 本発明方法に用いられるキサントモナス属細菌は一般に
その性状が変化しやすく、たとえば紫外線、X線、化学
薬品(例、ニトロソグアニジン。 エチルメタンスルホン酸)などを用いる人工異手段で容
易に変異しつるものであるが、どの様な変異株であって
も、本発明の対象とする化合物[1)の生産能を有する
ものはすべて本発明方法に使用することかできる。 化合物(1)を生産する菌の培養に際しては、炭素源と
しては、たとえばグルコース、麦芽糖、乳糖、廃糖蜜、
油脂類(例、大豆油、オリーブ油など)、有機酸類(例
、クエン酸、コハク酸、グルコン酸など)など菌が資化
しつるものが適宜用いられる。窒素源としては、たとえ
ば大豆粉、棉実粉、コーン・ステイープ・リカー、乾燥
酵母、酵叶エキス、肉エギス、ペプトン、尿素、硫酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム。 リン酸アンモニウノ・などの有機窒素化合物や無機窒素
化合物が利用できる。また、無機塩としては、たとえば
塩化す11ウム、塩化カリウム、炭酸カルシウム、硫酸
マグネシウム、リン酸−カリウム。 リン酸二ナトリウムなどの通常細菌の培養に必要な無機
塩類が中伸もしくは適宜、組合せて使用される。また、
化合物(1)を生産する閑の資化しつる硫黄化合物、た
とえば硫酸塩(例、硫酸アンモニウムなど)、チオ硫酸
塩(例、チオ硫酸アンモニウムなど)9曲硫酸塩(例、
亜硫酸アンモニウム)などの無機硫黄化合物、含硫アミ
ノ酸(例、シスチン、ンヌテインl L−デアシリジン
−4−カルボン酸)、ヒポタウリン、含硫ペプチド(例
、グルタチオン)などの有機硫黄化合物または、これら
の混合物を371地に添1ノロすると目的物の生成1■
が増大する場合がある。 また、硫酸第1鉄、硫酸銅などの重金属類、ビタミンB
、Iビオチンなどのビタミン類なども必要に応じて添加
される。さらにシリコーンオイルやポリアルキレングリ
コールエーテルなどの消泡剤や界面活性剤を培地に添加
してもよい。その細菌の発育を助け、化合物(1)の生
産を促進するような有機物や無機物を適宜に添加しても
よい。 培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法と同様に
行なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培
養の場合は静置培養、攪拌培養。 振盪培養2通気培養などいずれを実施してもよいが、と
くに通気攪拌培養が好ましい。又培養温度はおよそxo
’tr(いしgo″Cの範囲が好ましくさらに好ましく
はおよそ17℃ないし24℃であり、培地のpHは約4
ないし8の範囲さらに好ましくは約6ないし7の範囲で
あり、およそ8時間ないし168時間、好ましくはおよ
そ24時間ないし144時間培養する。 培養物から目的とする化合物(T)を採取するには微生
物の生産する代謝物をその微生物の培養物から採取する
のに通常使用される分離手段が適宜利用される。たとえ
ば化合物(1)は水溶性塩基性物質(官能基としては弱
酸性基も含まれているが、分子全体としては塩基性物質
)の性質を示し、主として培養沢液中に含まれるので、
まず培養液に沢過補助剤を加えて沢過あるいは遠心分離
によって、菌体を除去する。得られた培養沢液を適宜の
担体に接触させてr液中の有効成分を吸着させ、次いで
適宜の溶媒で有効物質を脱着させ、分別採取する手段が
有利に利用される。クロマトグラフィーの担体としては
活性炭、シリカゲル、粉末セルロース、吸着性樹脂など
化合物の吸着性の差を利用、または陽イオン交換樹脂、
陽イオン交換セルロース、陽イオン交換セファデックス
など化合物の官能基の差を利用、あるいはセファデック
ス類など化合物の分子用の差を利用するものが有利に用
いられる。これら担体から目的とする化合物を溶出する
ためには担体の種類、性質によって組み合せが異なるが
、たとえば水溶性有機溶媒の含水溶液すなわち、含水ア
セトン、含水アルコール類など、あるいは酸、アルカリ
、緩衝液もしくは無機あるいは有機塩を含む水溶液など
が適宜組み合わせて用いられる。 またこれらのクロマトグラフず−によって得られた抗生
物質を含む粗物質を分収用高速液体クロマトグラフィー
に付し、精製品を得る事も行われる。 さらに詳しく述べるならば、担体として陽イオン交換樹
脂たとえばダウエックス−50W(ダウ・ケミカル社製
、米国)、アンバーライ)IR−120(ローム・アン
ド・ハース社製、 米国) 。 ダイヤイオンSK’116(三菱化成工業株式会社製)
などを用いるとr液中の抗菌性物質は吸着され、塩類あ
るいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などで溶出される
。あるいは陽イオン交換分子ふるい性樹脂たとえばCM
−セファデックス(ファルマシア・ファイン・ケミカル
ズ社製、スウェーデン)などの担体に抗生物質を吸着せ
しめ、塩類あるいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液など
によって溶出させることが出来る。これら溶出液中の塩
類9着色物質などを取り除くためにはクロマトグラフィ
ー用活性炭(武田薬品工業株式会社製)あるいは吸着性
樹脂たとえばダイヤイオンHP−20(三菱化成工業株
式会社製〕、アンバーライトXAT)−It(ローム・
アンド・ハース社製、米国)などが有利に用いられる。 分画された溶出区分は濃縮、凍結乾燥などの工程を桶て
、粉末化される。かくして得られた粉末の純度が悪い場
合、さらに精製するためには高速液体クロマトグラフィ
ー法(1−I P T、 C)が有利に利用される。用
いられる担体としてはたとえばTSKゲル(東洋曹達株
式会社製)、YMCゲル(山村化学研究所製)などが挙
げられ、移動層としてはメタノールあるいはアセトニト
リルなどと無機塩含有水溶液あるいは緩衝液などとの混
合液が用いられる。なお化合物(1)は鉱酸たとえば塩
酸、硫酸、リン酸などあるいは有機酸たとえば蟻酸、酢
酸、修酸などの七ノー、ジーあるいはトリー塩として単
離される。 後述の実施例1で得られたTAN−592・塩酸塩の物
理化学的性質はつぎの通りである。 (噂 TAN−592A・二塩酸塩: 1)外観:白色粉末 幻分子量測定値:SIMS法、(M+H)+3)分子式
二026F14□N90.2S、2HCl・(2H20
)※1 ※2 4)元素分析値(%): 実測値 計算値C,8
8,49±2.OC,88,481−1,6,08±1
.0 H,5,88N、15.68±1.5 N、
15.510.27.56 S、 4.22±1.OS、 8.95CI、
7.95±1.5 CI、 8.78※1.試料は
5酸化リン上、60℃で8時間、減圧乾燥したもの。※
2.2モルの付着水を含むとして計算。 5)紫外部吸収(UV)スペクトル: O λ 2 26042nm(E1%−124±20)ma
x 1cm6)円二色性
(CD)スペクトルニ ア〕赤外部吸収(IR)スペクトル:臭化カリウム中の
主な波数(crn)はつぎの通りである。51図参照 8420.8080.2960.1780,1780゜
1670.1510,1400,1260,1170゜
1060.980,860.510 8)核磁気共鳴(18C−NMR)スペクトル:重水中
、 100MHzでのシグナルは下記に認められる(δ
I)pm)。 179.79(Sl、 177.00+s1.176.
11(s1170.98(Sl、170.77(sl、
166.42(山162.24(Sl、 159.
68(Sl、 184.46(31118,40(81
,79,67(31,72,70(山67.07+11
. 66.01(dl、 68.26(t157
.58(dl、 57.08を山、 56.5
2を山48.61ft+、 41.18(11,87
,85(1182,68(11,28,98ft+、
28.65(tl27.52(tl、 28.5
0ft+(S:シングレソト、d、ダブレット、t;
トリプレット、q;クワルテソト)9)アミノ酸分析値
:定沸点塩酸(5,5N−HCI)中、110℃、15
時間加水分解した試料。セリンおよびα−アミノ−アジ
ピン酸が検出された。 10)薄層クロマトグラフィー(TLC)ニスポットフ
ィルム、セルロース(東京化成工業株式会社製)。 溶媒系、アセトニトリル:3%硫酸アンモニウム(1:
1)、Rf二0.58 11)高速液体クロマトグラフィー(HP’r、CJ:
担体、YMCパックA312(山村化学研究新製)、移
動層、2チメタノール10.01Mリン酸緩衝液(pH
s、o)2ml/m1n0Rt=8.7 (min ) 以下に記す物性はA、B、C,D、E、F成分共同じ。 12)溶解性: 51!Itmニジメチルスルフォキサイド、メタノール
、アセトン、酢酸エチル 13)呈色反応: 陽性:ニンヒドリン、ブレイブ・ソーパンク。坂口反応 陰性:パートン反応、過マンガン酸カリウム (vll TAN−592B、−塩酸塩1)外観:白
色粉末 2)分子@測定値:SIMSυE、 (M−1−H)+
7913)分子式:C29H46N1oO□4S、HC
l、(2H20)4)元素分析値(肯: 実測値31
計算値02C,40,OO±2.OC,40,85H
,5,88±1.OH,5,95 N、15.64±1.5 N、16.280.29.
65 S、 430±to S、 8.71CI、
4.58±1.5 CI、 4.11※l、※2
.Aと同じ条件 3l− 5)UVスペクトル: λ 2260±2nm(E”%−108±2(1)−I
O max ICIn6)CDス
ペクトルニ ア)IRスペクトル:第2図参照 8400.8080.2950.1780.1780゜
1660.1520,1,190.1250,1170
゜1060.980,860.520゜ 8) 18C−NMRスペクトル: 179.85(sl、 177.20(s)、 176
.24(sl。 174.41(S)、171.18(S)、166.4
2(山。 162.28tS1.159.61(s)、 134.
55(81゜117.97(31,79,67(sl、
72.86 (dl 。 67.10(11,66,00(dl、 61.89
(tl。 68.19(tl、 59.10(d)、 57.
40(dl。 57.18(dl、 56.80(山、 48
.58 (tl 。 41.46(tl、 N7.N6(tl、 82.
74(t)。 29.88(tl、 28.6e(tl、 27,
411゜28.52 ft+ 9)アミノ酸分析値:(Aと同じ条件)セリフ(約2モ
ル)およびα−アミノ−アジピン酸が検出された。 10) TT、C: (Aと同じ条件)Rf=0.61 LUHPT、C: (Aと同じ条件) Rt=4.2(min) (lxl TAN−592C・二塩酸塩1)外観:白
色粉末 2)分子量測定値:SIMS法、(M+H)+8623
)分子式:CB2H5,N11O25S、2HC1,(
4H2o)4)元素分析値(%): 実測値 計算
値22C,88,04±2.OC,88,17)1.
6.801.OH,6,11 N、14.80−1m1.5 N、15.800.8
0.19 S、 8.18±t、o S、 8.t8C1,
7、r6±x、5 C+、 7.04※1.Aと同じ
条件、※2,4モルの付着水51JVスペクトル: 6)CDスペクトルニ ア)IRスペクトル:第3図参照 8420.80?0.8000,2950,1780゜
1785.1660,1520,1450,1890゜
・ 1250,1165,1060,860,520゜
B)18C−NMRスペクトル: 179.52(Sl、 178.64(sl、 176
.16(sl。 175.71tS1.174.49(81,173,9
4(Sl。 169.48(Sl、 166.45(dl、 162
.54(81゜159.67(Sl、 182.57(
S)、 128.59(sl。 79.791S)、 72.88(d)、 66.
82(tl。 66.47(dl、 64.06(tl、 68.
87ttl。 58.97(山、 58.28(dl、 56
.26(山。 56.21(dl、 51.98を山、 48
.62(tl。 41.46ft)、 87.25(tl、 82.
11ft+。 29.88(t)、 28.91(tl、 27.
85(11゜2B、4Ht1. 19.47(Q1 9)アミノ酸分析値:(Aと同じ条件)セリン(約2モ
ル)、アラニンおよびα−アミノ−アジピン酸が検出さ
れた。 10) TLC: (/L!:同シ条件)Rf=0.6
8 n))IPLc : (Aと同じ条イ1つRt=4.6
(min ) (XI TAN−592D・二塩酸塩1)外観:白色
粉末 2)分子量測定値:STMS法、 (M+H)+661
8)分子式:C2,H4oN80.1S・2HC1・(
8H20)4)元素分析値(%): 実測値 計算
値*2※l C,37,51±2.OC,88,12H,6,28±
1.0 H,6,14N、 14.10±1.5
N、14,280.28.44 S、4.00±1.o S、 4.07CI、
9.94±1.5 C1,9,00※1.Aと同じ条
件、※2.3モルの付着水5)UVスペクトル: =35− 6)CDスペクトルニ ア)IRスペクトル:第4図参照 8420.8075,2950.1770゜1?85.
1670.1550,14,60゜・ 1400,12
60,1170.1110゜1065.870.540 8)”C−NMRスペクトル: 179.86(Sl、176.10(S)、175.8
6(31170,69(sl、 170.18(S)
、 168.18(s)159.69(Sl、182
.59 C81、122,91(8172,69を山、
67.04(tl、 68.21(t)62
.08td+、 60.24(dl、 57.
58(山56.57を山、 56.89(dl、
4B、64(1141,19tt1. 87.4
1(t)、 82.86(1128,97(11,
28,71(tl、 27.51(1128,71
ft+。 9〕アミノ酸分析値:(Aと同じ条件〕セリンおよびα
−アミノ−アジピン酸が検出さj、た。 10)TLC: (Aと同じ条件) Rf=0.62 11)HPLC: (Aと同じ条件) R1=7.9(min) (均 TAN−592E・二塩酸塩 1〕外外観自白粉末 2)分子量測定値:SIMS法、(M+)I辻7488
) 分子式: C28H4,N、O□、8.2HCI−
(R20)4〕元素分析値(%): 実測値 計算
値02C,89,71±2.0.C,40,10H,5
,87±1.0. H,5,89N、14.85±1
.5 、 N、 15.0 B、0.26.71 S、 8.90±1.0. S、 8.82CI
、 7.46±1.5.C1,8,45・ ※1.
Aと同じ条件、※2.付着水1モルとして計算。 5)UVスペクトル: 6)CDスペクトル 7)TRスペクトル:第5図参照 8400.8060,2950,1765゜1780.
1660.1540,14.60゜” 1890,12
40,1170,1110゜1060.10211.
870. 810゜8) 18C−NMRスペクトル
: 179.41(Sl、176.44(S)、176.2
0 (Sl 。 174.28+31.171.02(Sl、 168.
01(sl。 159.66(Sl、 188.50(sl、 121
.05(sl。 72.88(dl、 67.11(11,6192
(11゜Ll、12(tl、 62.06を山、
60.20dl。 58.99 (山、 57.88(di、 5
6.82(dl。 56.27(dl、 48.62(tl、 41.
40(tl。 37.49(tl、 82.54(11,29,23
ft+。 28.59(11,27,40(t)、 28.78
(tl9)アミノ酸分析値:(Aと同じ条件)セリン(
約2モル〕およびα−アミノ−アジピン酸が検出された
。 10) TT、C: (Aと同じ条件)Rf=0.64 1j)HPLC: (Aと同じ条件) Rt=9.6 (min) (dll TAN−592F・二塩酸塩1)外観二白
色粉末 2j分子昂測定値;8TM8法、 (M+J+8193
〕分子式: C8,l−15oN1o014S・2)1
c1.(4)120)4)元素分析値(%]: 実測値
・ 計算値82※I C,as、oo±2.0. C,s8.6sH,6,
87±1.o、 H,6,27N、 14.85±1
.5. N、14.580.29.88 S、 llo±1.0. S、 8.88CI、
7.78±1.5.C1,7,3611fl、Aと
同じ条件、※2,4モルの付着水として計算。 5)UVスペクトル: 5)CDスペクトルニ ア)TRスペクトル:第6図参照 8420.3070,2950,17.70゜1785
.1660,1540,1460゜1895.1840
.1250,1160゜1110、.1065. 58
0 8)アミノ酸分析値=(Aと同じ条件)セリン(約2モ
ル)、アラニンおよびα−アミノ−アジピン酸が検出さ
れた。 9)TT、C:LAと同じ条件) Rf=0.67 10)HPLC: (Aと同じ条件) Rt=10.1 (min) 後述の実施例2で得られたTAN−591・塩酸塩の物
理化学的性質はつぎの通りである。 (XI)TAN−591A・二塩酸塩 4O− 1)外観二白色粉末 2)分子量測定値:STMS法、 (M+H) 67
63)分子式” C26H4□N70.2S−2HC1
,(2H20)4)元素分析値(%): 実測値
計算値″c、4o、as±2.0. C,89,7
9T(、6,58±to、 H,6,04N、 12
.81±1.5. N、12.50、 0,28.5
4 8.4.07±to、 S、 4.09CI 、
8.40±1゜5. CI、 9.04※1.試
料は5酸化リン上、60℃で8時間。 減圧乾燥したもの。※2.2モルの付着水を含むとして
計算。 5)紫外部吸収(UV)スペクトル: λ 2260±20m(E1%=118+20)maX
1cIrL6】円二色性(
CD)スペクトル: 〔θ〕1120+2+27000±50007)赤外部
吸収(T I? )スペクトル:気化カリウム中の主な
波数(σ )はつぎの通りである。第7図参照 3420,8250,8080,2950゜1780.
1785.1675.]515゜1410.1360.
1280,11601060、 980. 860.
5208)核磁気共鳴(18C−NMR)スペクトル二
重水中、 100MIIzでのシグナルは下記にi忍め
られる(δpr)m )。 179.74(sl、 l 77.19(sl、 17
6.16(sl。 170.90(Sl、170.66(31,166,4
2を山。 162.12(Sl、 134.89(Sl、 117
.77(Sl。 79.70+51. 72.71(dl、 67.1
2ft+。 66.02+d+、 68.22(tL 57.5
8(dl。 57J5(dl、 56.67Fd1. 42.22
ttl。 41.21ft+、 8746ft+、 82.7
7(tl。 81.28F11. 29JO(11,28,62ft
l。 25.08ft+、 23.50ft+(S;シング
レット、d:ダブレット、t;トリプレット、q;クヮ
ルテット) 9)アミノ酸分析値:定沸点塩酸(5,5N−HCI
)中、110℃、15時間加水分解した試料。セリンお
よびα〜ルアミノ−アジピンが検出された。 10〕薄層クロマトグラフィー(TI、C)ニスボット
フィルム、セルロース(東京化酸二り業株式会社製〕。 溶媒系、アセトニトリル:3%硫酸アンモニウム(1:
])、Rf=0.45 11)高速液体クロマトグラフィー()IPT、C):
担体、YMCバックA、312(山村化学研究新製)、
移動層、0.OIM!Jン酸緩衝液(1)8 8.0
) jUl/m1nll、R1=2.4 (min)以
下に記す物性はA、B、C成分共同じ。 12)溶解性: 易溶:水、含水アセトン、含水アルコールa溶:、メチ
ルスルフォキサイド、メタノール、アセトン、酢酸エチ
ル 13)呈色反ri、;: 陽性:ニンヒドリン、グレイグ、リーバツク反応 陰性:バートン反応、過マンガン酸カリウム、坂口反応 (XIV) TAN −591B 、二塩酸塩1)外観
:白色粉末 2〕分子量測定値:STMS法、(M−1−H辻763
3)分子式:C29H46N80□4S、2HC1−(
2H20)※1 4)元素分析値□□□): 実測値 計算値02
C,89,84±2.0. C,89,95H,6,
o2±1.0. H,6,01、N、12.52±1
.5. N、12.850.29.88 S、4.40+1.0. S、 8.68C1,7
,57±1.5. CI、 g、i8※1.※2.
Aと同じ条件 r、)UVスペクトル: λ2260±2nm(B”%=124:f:20)O may ICWL6)C
Dスペクトルニ ア)IRスペクトル:第8図参照 8400.8270,8080,2970゜1780.
1785,1670.1580゜1410.1260.
1160,1060゜980、 875. 520゜ 8)”C−NMRスペクトル: 179.69(Sl、177.191Sl、176.2
1(81゜174.14(Sl、 171.04(S
l、 170.89(Sl。 166.881d1.162.07(sl、t 84.
95(Sl。 117.55(sl、 79.68(sl、 7
2.84(dl。 67.09(tl、 66.00(dl、 68
.90(tl。 63.10+11. 59.00f山、 57.
41(dl。 57J6(山、 56J7td1. 42.25
(11゜41.41(tl、 87.85ft1.
82.77(11゜81.47(11,29,20
(11,28,60(11゜24.94 (11、28
,49(tl9)アミノ酸分析値=(Aと同じ条件)セ
リン(約2モル)およびα−アミノ−アジピン酸が検出
された。 1o)TT、C: (Aと同じ条イL1すRf=0.4
7 11) T(PLC: (Aと同じ条件)Rt=2.8
(min) (XV) TA、N −59I C、二塩酸塩l)外観
:白色粉末 + 2)分子量測定値:SIMS法、(M+)I) 88
43)分子式:08゜1]5、N、015S、8)IC
+・(4H20)4)元素分析値(%): 実1111
1値 計算値621ll C,86,74±2.0. C,87,85H,6,
81±t、o、 H,6,16N、 1 1.74
」=1.5. N、12,420.29.94 S、 3.48±to、 S、 8.16cl、
11.86±1.5. CI 、 10.48※l、
Aと同じ条件、※2,4モルの付着水5)IJVスペク
トル: λ 226(H:2nm(E”=110±20)O max 1crn6)CDス
ペクトルニ 〔θ〕 2 ±2 +89000±50007)TR
スペクトル:第9図参照 3440.3270,8080,2950゜1780.
174+1.1675.1580゜1410.1,25
0,1150,1060゜960 、 8 (10、
540 8)アミノ酸分析値:(Aと同じ条件)セリン(約2モ
ル)、アラニンおよびα−アミノ−アジピン酸が検出さ
れた。 9)TLC: (Aと同じ条件) Rf=0.51 10) I(PT、C: (Aと同じ条件〕Rt=3.
3(min) −1−に述べたセリン、アラニンおよびα〜ルアミノ−
アジピンは、それぞれL一体、■ノ一体およびD一体で
あることがII P L Cで決定された。 上記物理化学的性状から、本発明の化合物の化学構造式
は、前に述べた一般式(1)で表わされると考えられる
。 次に、化合物+11の生物学的性状について述べる。 まず、TAN−592(塩酸塩)の各種微生物に対する
抗菌スペクトルを第1表に示す。 −48〜 (注):* 培地:バクト・アンテイビオテイツクメ
デウム3(ディフコ)i17.5 q、バクト・イーストエキスト ラクト(ディフコ)苓5g、バ クト・アガー(ディフコ)+20 9、蒸留水+11.pH無調整。 接種閑潰:約106/ml菌液の1白金耳量を用いた。 また、TAN−592A、、B、Cは種々のβ−ラクタ
メースに対して安定である。第2表に、エシェリキア・
コリPG8を被検菌とし、2種のβ−ラクタメースに対
する安定性をしらべた結果を示す。 第2表 数値は阻止円直径(IIIll)を示す。培地ニジアミ
ノピメリン酸(20q/l! )を含む栄養寒天培地(
pH7,0)。PCG:ベンジルペニシリン、0℃:セ
ファロスポリンC,CMC:セファマイシンC0薬剤濃
度は全て100μ9/m10*1:バチルス由来、カル
ビオケミカル社(米国)p、*2:エンテロバクタ−・
クロアカ由来。 *3:阻止円径なし。 また、TAN−592B塩酸塩のマウス感染症における
治療効果は、第3表に示すとおりである。 第31乏 また、抗生物WTAN−59211・塩酸塩を197k
qとなる量をマウスに皮下段!j、 l、でも死C例は
a忍められなかったので、抗生物ff1TAN−592
は低毒性と考えられる。 これらのデータから明らかなように、抗生物質TAN−
592はグラム陽性菌およびグラム陰性菌に対して抗菌
性を示し、哺乳動物などに対する毒性が低い抗生物質で
ある。また、T A N −592A、BおよびCは種
々のβ−ラクタメースに対して安定である。 さらに、TAN−591(塩酸塩)の各種微生物に対す
る抗菌スペクトルを第4表に示す。 、以下余白) (注):* 培地:バクト・アンテイビオテイツクメ
デウム(ディフコ)17.5 q、バクト・イーストエキスト ラクト(ディフコ)、5(i+、バ クト・アガ〜(ディフコ)、20 q、蒸留水rII、pi−1黙調整。 接種菌晴:約10′/*/菌液の1白金耳量を用いた。 また、TAN−591A、R,Cは種々のβ−ラクタメ
ースに対して安定である。第5表に、エシェリキア・コ
リPG8を被険菌とし、2種のβ−ラクタメースに対す
る安定性をしらべた結果を示す。 数値は阻止円直径(−)を示す。培地ニジアミノピメリ
ン酸(20mg/lを含む栄養寒天培地(pH7,0)
。PCG :ベンジルペニシリン、cpc:セフ70ス
ポリンC,CMC:セファマイシンC0薬剤濃度は全て
100μ9/露l。 *1:バチルス由来、カルビオケミカル社(未刊)製、
*2:エンテロバクタ−・クロアカ由来。 *3:阻止円径なし。 また、TAN−591A塩酸塩のマウス感染症における
治療効果は、第6表に示すとおりである。 第6表 感染菌 投讐去 ED5oq/に’i また、抗生物質TAII−591A・塩酸塩を197に
りとなる量をマウスに皮下投与しても死亡例は封忍めら
れなかったので、抗生物質TAN−591は低毒性と考
えられる。 これらのデータから明らかなよう薔こ、化合物(1)は
ダラム陽性菌およびダラム陰性菌に対して抗菌性を示し
、哺乳動物など番こ対する毒性が低い抗生物質である。 また、化合物(1)lこおいて、R1がホルミルアミノ
である化合物は、β−ラクタメース産生株に対して安定
である。したがって化合物(1)は哺乳動物(例、マウ
ス、ラット ウサギ、犬、ヒト)の細菌感染症の治療に
用いることが出来る。 化合物(1)をたとえば細菌感染症の治療剤として用い
るには、化合物(1)を薬理学的に許容され得る担体、
賦形剤、希釈剤など表混合し、たとえば化合物(1)を
注射剤として非経口的に」−記咄乳動物の皮下または筋
肉内に約1ないし5011f/kq/B、好ましくは約
5ないし20ダ/kq/日投与する。また経口剤古して
、化合物(1)をカプセル剤とし、化合物(1)として
約1ないし100り/ kO/日、好ましくは約5ない
し50ダ/ kq/日投り・する。 また、化合物(1)は、殺菌剤として用いることができ
る。たとえば化合物(1)を約0.01ないし0.IW
/V%の濃度で蒸留水に溶解した液剤、または1qあた
り化合物(1)を約02ないし20q、好ましくは約1
ないし10117含有する軟膏剤として、」−記咄乳動
物の毛2足、眼、耳などに塗布することにより、これら
の部位の殺菌、消毒に用いることができる。 化合物(1)はまた新しい医薬の合成中間体としCも極
めて有望な化合物である。 実施例 次に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。 なお、培地におけるパーセントは、特にことわりのない
かぎり重帛/容量係を示す。 実施例1 三重県阿山郡柘植で採集した植物から分離採取され、栄
養寒天斜面上に生育されたキサントモナス・ラクタムゲ
ナYK−280(TPO14380゜P[RM P−
7602)をグルコース2%、ソルブル・スターチ3%
、生大豆粉1%、コーンステイープリカー03係、ポリ
ペプトン(人丑栄養化学株式会ネー1製)05%1食塩
03襲を含有する水溶液(pH7,0)に沈降性炭酸カ
ルシウム05チを流力1比だ培地500m1を含む27
?容坂口フラスコに接種して、24℃で48時間往復振
帰培養した。この培養液全甲を1−記培地に消泡剤アク
トコール(武田薬品T業株式会社製)005%を添加し
た培地120eを含む容f7t、 200 /のタンク
(:接種し、24°Cで通気量1200e/分、120
回転/分の条件下で48時間培養した。この培養液全j
?jをデキストリン3%、生大豆粉3%、ポリペプトン
02%を含有する水溶液(pH無調整)に沈降性炭酸カ
ルシウム05%、アクトコール005%を添加した培地
1200eを含む容:贋″2000eのタンクに接種し
、24°Cで通気量1200e/分、100回転/分の
条件下で66時間培養した。 」−記で得られた培養液(11407?)を2N塩酸で
p H6,0に調整後、ハイクロス−パーセル(ジヨツ
ブ・マンビル・プロダクト社製、米国)を加え、沢過、
水洗しr液(18T、Ol)を得た。 加液をp l−(6,3に調整後、ダウエックス−50
W(Na+i、 50−10 aメ’7シ、:L+
25 e >全充填したカラムを通過させた。水(7
5e)でカラムを洗浄後、2M食塩水(500e)で溶
出した。 溶出液を活性炭(151?)のカラムを通過させ、水(
451で洗浄後、8%インブタノール−N/100塩酸
(1051で溶出した。溶出液をp1162に調整後1
2gまで濃縮19、濃縮液をp I−17,3に調整し
て、ダイヤイオンI−IP−20(IOC)を充填した
カラムを通過させた。001MIJ7酸緩?12(pl
T7.a、 20 e )テカラムを洗浄・糸、00
1リン酸緩衝液(pH2,5,100e)で溶出した。 溶出液を活性炭(2,51のカラムを通過させ、水(6
e)で洗浄後、8%イソブタノール−N/200塩酸(
18e)で溶出した。溶出液を1.6eまで濃縮し、濃
縮液をp I−17,8に調整後、ダイヤイオンI−I
P−20(5(1−100メ・7シユ、2e)を充填し
たカラムを通過させた。0.OIMIJン酸緩衝液(p
lT7.8. 4 e )テ洗浄後、0.OIM I3
7酸緩衝液(plT 3.a、 20 e )でm出
分画した。各分画を液体クロマトグラフィーの分析に付
し、TAN−592A、R,Cを主成分とする−”−−
104 分画とTAN−5921)、 E、Fを主成分とする
分画の2群に分離17た。 1.1ieテ?!Pラレタ’l’ A N −592A
−、H、Cヲ」二成分とする分画な集めて活性炭(5(
l ome)のカラムを通過させ、水(1,5/)でr
’51:/f”後、8%イソブタノール−N/200塩
酸(3e)で溶出した。溶出液を濃縮後、濃縮液をCM
−セファデックスC−25(Na 型、0.87’)
を充填またカラムを通過させ、002M食嘱水(401
?)で溶出分画した。各分画を液体クロマトグラフィー
の分析(こ付し、TAN−592A、 Bそれぞれを川
−ピークとして含む分画とTAN−592Cを主成分と
する分画を集めた。 TAN−592Aの弔−分画を集めて、活性炭(0,3
e)のカラムを通過させ、水(0,9e)で洗浄後、8
96イソブタノール〜N/200塩酸(2,1iで溶出
した。溶出液を濃縮後、凍結乾燥してTAN−592A
二塩酸塩の白色粉末(1,5g)が得られた。同様にし
てTAN−592Bの単一分画からはTAN−592B
・−塩酸塩R62− の白色粉末(2,01、TAN−592C主成分分画か
らはTA、N−592Cの粗粉末(1,9g)が得られ
た。 TAN−592Cの粗粉末(0,7g)をCM−セフ7
デツクスC−25(Na”Q、 100m?)を充填
したカラムを通過させ、002M食塩水(3e)で溶出
分画した。各分画を液体クロマトグラフィーの分析に付
し、 TA、N−592Cを主成分きする分画を集め、
活性炭(Bowl)のカラムを通過させた。水(100
g/)で洗浄後、8%インブタノール−N/200塩酸
(210g?)で溶出し、溶出液を濃縮した。 濃縮液をYMC−Pack 5H−J43(2011
1Iφx250fi、山村化学研究所要)を用いた分取
用高速液体クロマトグラフィーに付し、0.01Mリン
酸緩衝液(pI−13,0)で溶出分画した。各分画を
液体クロマトグラフィーの分析に付し、単一ピークを示
す分画を集めた。有効区分をI N NaOHてp I
−(7,8に調整後、lNllClでpHa、oに再調
整し、活性炭(20*t)を充填したカラムを通過させ
た。水(80+w/)てカラムを洗った後、896イン
ブタノール水(200mlりで溶出し、溶出液を濃縮後
、凍結乾燥してTAN〜592C二塩峻塩の白色粉末(
110q)が得られた1゜上記で得られたT’AN−5
9211,rり、ト1を主成分とする分画を集めて活性
炭(200mg)Oカラムを1m過さぜ、水(600m
l)で洗浄後、8%イソブタノール−N/200塩酸(
1,,41?)で溶出した。溶出液を濃縮後、濃縮液を
CM−セファテックスc−25(Na+型、80(1+
l)を充填したカラムを通過させ、0.02M食塩水(
151)で溶出分画した。各分画を液体クロマトグラフ
ィーの分析に付し、TA’N−592D、?、、Fそれ
ぞれを主成分とする分画を集めた。 TAN−592D主成分分画を集めて、活性炭(80g
/)のカラムを通過させ、水(250g+/)で洗浄後
、8%イソブタノール−N/200塩酸(560g/)
で溶出した。溶出液を濃縮後、凍結乾燥してTAN−5
92Dの粗粉末(1286q)が得られた。TAN−5
92E、Fの主成分分画も同様の操作を行ない、TAN
−592Eの粗粉末(1560q)、TAN−592F
の粗粉末(6569)が得られた。 TAN−592Dの粗粉末(1236q)を、YMC−
P a c k 5r−1−848を用いた分取用高速
液体クロマトグラフィーに付し、1%メタノール−00
1Mリン酸緩衝液(pT−110)で溶出分画した。各
分画を液体クロマトグラフィーの分析に付し、単一ピー
クを示す分画を集めた。有効区分をl N NaOHで
p H7,3jこ調整後、lNNaC1でpI(8,0
に再調整し、活性炭(50禦l)を充填したカラムを通
過させ、水(200g+/)でカラムを洗った後、8%
イソブタノール水(40(1+/)で溶出した。 溶出液を濃縮後、凍結乾燥してTA、N−592D二塩
酸塩の白色粉末(832q)が得られた。 TAN−592E、Fの粗粉末も同様に分取用高速7液
体クロマトグラフィーに付し、TAN−592Eの二塩
酸塩の白色粉末(501ダ)、TAN−592F二塩酸
塩の白色粉末(46q)が得られた。 実施例2 栄養寒天斜面−1−に生育させたキサントモナス・ラク
タムゲナYK−278(IFO14351゜Ti”ER
M P−7681)の菌株を、グルコース2%、ソル
ブル・スターチ3%、生大豆粉1%。 廃糖蜜1%、ポリペプトン0.5%1食塩03%を含有
する水溶液(p t−17,0)に沈降性炭酸カルシウ
ム0.5%を添加した培地40m1を含む200 tt
l容三角フラスコ15本に接種して、24°Cで24時
間振盪培養しその培養物を種菌とした。 次に、デキストリン3.0%、コーン・グルテン・ミー
ル1.5%、ポリペプトン02%、チオ硫酸ナトリウム
0.1%、沈降性炭酸カルシウム0.5%(pH7,0
)を含有する培地16eを200m1(D三角フラスコ
に各々40m1ずつ分注し、1200C。 20分間滅菌したものに種菌を1m/ずつ接種して、1
7°Cで、230回転/分の条件下で90時間振盪培養
した。 上記で得られた培養液(16e)を2N塩酸でp H6
,5ニaFfA整後、水(16e)を加え、遠心分離し
、p液(821)を得た。1液をダウエックス−50W
(Na+型、50−100メツシユ、o5e)を充填し
たカラムを通過させた。水(1,511’)でカラムを
洗浄後、2M食塩水(Ionで溶出した。溶出液を活性
炭(0,31のカラムを通過させ、水(1e)で洗浄後
、896インブタノールーN/200塩酸(2,2e)
で溶出した。溶出液をp I−16,2に調整後0.5
eまで濃縮し、濃縮液をp H7,8に調整して、ダイ
ヤイオンHP〜20(0,611を充填したカラムを通
過させた。0.01MIJ7酸緩衝液(pT−17,L
1.6 g )テカラムを洗浄後、0.01Mリン
酸緩衝液(pHLo、6e)で溶出分画した。溶出分画
を3区分にまとめ、それぞれを活性炭(80肩/)のカ
ラム中を通過させ、水(300胃l)で洗浄後、896
イソブタノールーN/200塩酸(600ml)で溶出
した。溶出液を濃縮し、凍結乾燥し、粗物質T(402
m9)。 H(760m?)および冒(448m?)を得た。 粗物質璽にはTAN−592A、BおよびCが。 粗物質1こはTAN−592D、 EおよびFが含まれ
ていることがo r’ i、 cによって確3忍された
。 これらの粗物質を実施例4および5の方法に準拠して精
製し、TAN−592(塩酸塩)Alsダ)、B19q
)、C(35ツ)、D(12q)。 E(15#)およびF(24mg)を得た。 粗物質1(400q)を水(100渭t)に溶かし、溶
解液をCM−セファデックスC−25(Na+型、50
m11)を充填したカラムを通過させ、0.02M食塩
水(1,fylで溶出分画した。各分画を液体クロマト
グラフィーの分析に付し、TAN−591A、B、Cを
それぞれ主成分とする分画を集めた。 TAN−591A、B、Cをそれぞれ主成分とする分画
を活性炭(各1(1+/)のカラムを通過させ、水(各
80 ml )で洗浄後、896イソブタノール水(各
70g1りで溶出した。溶出液を濃縮後、濃縮液をYM
C−Pack 5H−848(20m+φx250m
)を用いた分収用高速液体クロマトグラフィーに付し、
0、oIMリン酸緩衝液(pH4,5)で溶出分画した
。各分画を液体クロマトグラフィーの分析に付し、単一
ピークを示す分画を集めた。 有効区分をINNao)IでpH7,3j:調整後、t
NT(C+でr))TR,Oに再調整し、活性炭(5m
l)を充填したカラムを通過させた。水(2oml)で
カラムを洗った後、8チイソプタノール水(5omi)
で溶出し、溶出液を濃縮後、凍結乾燥してTAN−59
1’A(8η)、B(18η)およびC(22η)の塩
酸塩の白色粉末がそれぞれ得られた。 実施例3 キサントモナス・ラクタムゲナYK−280(IFO1
4110,FERM P−7602)を実施例1と同様
にして培養された培養液(1001)を遠心分離し、湿
菌体を70%アセトン水(10f)中に加え、30分攪
拌した。抽出液を濃縮し、濃縮液(IIりを活性炭のカ
ラムクロマトグラフィー(10oml)−二付し、50
%アセトン水(500vdりで溶出した。溶出液の濃縮
液をアンバーライトT RA−68(酢酸型5oml)
のカラムクロマトグラフィーに付し、0.2M酢酸ナト
リウム溶液(85(1ml)で溶出した。溶出液の活性
区分を活性炭クロマトグラフィーに付し、脱塩掃作を行
い、塩除去液を濃縮、凍結乾燥した。 得られた粗粉末を分収用逆層系高速クロマトグラフィー
に付し、デアセチルセファロスポリンC</、q”f)
を得た。標品とはT L CのRt値、HPLC(7)
Rt値、UVCD、TR,lH−NMRx−り)フ ルおよびバイオオートグラフィーで一致した。 実施例4 キサントモナス・ラクタムゲナYK−278(IFO1
4851,FERM P 7681Jを実施例2と
同様にして培養された培養液(1001りから実施例8
と同様の方法でデアセチルセファロスポリンC(1■〕
が得られた。 発明の効果 本発明の化合物(1)は、バクテリアによって生産され
るセフェム系抗生や質であり、本発明方法によればセフ
ェム骨格を有する本発明の目的化合物を短時間で醗酵法
により製造出来る。 また本発明の化合物(1)は、セファロスポリネー刈こ
安定であるので、臨床用医薬品として有望である。
を示し、不透明、黄色をVする。 ■肉汁液体培養:混濁状に生育し、弱い閉環を形成する
。沈澱もわずかに認められる。 ■肉汁ゼラチン穿刺培養°トとして1部でよく生育する
。層状に液化12、液化活性は強い。 ■リドマス・ミルり:リドマスの;驚冗能は11忍パノ
)られない。弱いペブトフ化活性は認められるが41固
は認められない。 lc)生理的性質 ■硝酸塩の還元ニー ■脱窒反応ニー ■MR(メチルレッド)テストニー ■VP(フォーゲス・プロスカラエル)テストニー■イ
ンドールの生成:〜 ■硫化水素の生成(酢酸鉛紙):± ■デンプンの加水分解:+ ■クエン酸の利用(コーゲル・クリステン七ンおよびシ
モンズの各培地):+ ■無機窒素源の利用 i)硝酸カリウム:+ lr)硫酸アンモニウム:± 0色素の生成(キングA、Bおよびマンニット酵母エキ
ス寒天の各培地):3種の培地共、黄色の菌体内色素の
生成が認められるが、拡散性色素の生成は認められない
。 キングA培地:グリセリン10グ、ペプトン20v、塩
化マグネシウム1.4y、硫酸アンモニウム1oy−、
寒天15ノ、蒸留水1000me 。 pH7,2 キングB培地:グリセリン107.ペプトン20!li
’、!Jン酸−水素カリウム1.5p、硫酸マグネシウ
ム】、5グ、寒天15グ、pH1,20ウレアーゼニー 〇オキシダーゼ:+ 0カタラーゼ:十 O生育の範囲 1) pH: pi−T4.6〜83で生育するが、
最適p)Tは6.9〜7.7゜ ■)温度:14〜38′Cで生育するが最適温度は18
〜25C8 [相]酸素に対する態度:好気的。 @’0− F (オキシダティブーファーメンタテイブ
)テスト〔ヒユー・レイフソン(r−1部gh・Lei
fson)法〕:培養初期は非分解型だが、培養後期に
は酸化型。 ◎糖からの酸およびガスの生成: (以下余白) +:陽性、十:疑陽性、−:陰性 [相]I)NAのQC(グアニン−シトシン) 含Fニ
ア 4.4 +1.、5% 0食塩耐性:0〜4% [相]カルボキシメチルセルロース、アルキネートの分
解能:+ ■寒天、コロイダルキチンの分解能ニー[相]トウイー
ン(Tween ) 80 (7)分解能: + (l
lzQ以上の菌学的諸性状を有するYK−278株を、
パーシーズ・マニュアル・オブ・デターミイ、イテイブ
・バクテリオロジー第8版およびインターナショナル・
ジャーナル・オブ・システマテイツク・バクテリオロジ
ー第30巻225〜420口(1980年)および同誌
バリケーション・リストに記載の種と照合すると、Yr
(−278株は、極単氾の鞭毛による運動性を示す黄色
のカロチノイド色素を有するダラム陰t/I桿菌で、好
気性で、DNAのGC含慴が高く、硝酸塩の還元能がな
く、速やかにでんぷんおよびトウイーン80を分解する
ことからキサントモナス属に属するとするのが妥当であ
る。そこで、YK−278株を上記文献記載のキサント
モナス属の公知の種(5pecies )と比較した。 キサントモナス属の公知の種とじては、1−記の文献に
記載された5種のみが知られている。そこで、これら5
種とYK−278株の性質を比較したところ、次のYK
−278株の性質すなわち、1)ゼラチンの液化活性が
陽性で、2)オキシダーゼ活性が陽性で、3)グルコー
スおよびマンノースからの酸およびガスの生成がなく、
4)4%の食塩存在丁でも生育可能である点で、これら
全ての性質をみたす菌株は見当らなかった。 しかし、前に述べた抗生物質TAN−592生産閑(キ
サ生産上ナス・ラクタムゲナ)と比べると、無機窒素源
の利用性、多糖の分解能などにわずかなちがいが認めら
れるが、その他の諸性状は極めてよく似ている。 そこで、YK−278株は、前記した新菌種キサントモ
ナス・ラクタムゲナに属する株であると3忍め、該菌株
をキサントモナス・ラクタムゲナ(Xanthomon
as Iactamgena)YK−278と命名し
た。 上記キサントモナス・ラクタムゲナYK−278株は、
昭和59年(1984年)6月18日にIP’0に受託
番号TPO14851として寄託され、また本微生物は
、昭和59年(1984年)6月25日にP R,Tに
受託番号F[1,M I)−7681として寄託され
ている。 なお、本菌株は1−記TAN−591以外に、TA、N
−592A、、B、C,l)、Eおよび[−も併産する
能力を有している。これらTA、N=592各成分は本
菌株の培養P液から単離され、薄層クロマトグラフィー
、高速液体クロマトグラフィー。 紫外部吸収スペクトル、赤外部吸収スペクトル。 円二色性スペクトル、分子1i(SIMS法)などの各
物理化学的性質によって、TA、N−592標品と同一
であることか判明した。 本発明方法に用いられるキサントモナス属細菌は一般に
その性状が変化しやすく、たとえば紫外線、X線、化学
薬品(例、ニトロソグアニジン。 エチルメタンスルホン酸)などを用いる人工異手段で容
易に変異しつるものであるが、どの様な変異株であって
も、本発明の対象とする化合物[1)の生産能を有する
ものはすべて本発明方法に使用することかできる。 化合物(1)を生産する菌の培養に際しては、炭素源と
しては、たとえばグルコース、麦芽糖、乳糖、廃糖蜜、
油脂類(例、大豆油、オリーブ油など)、有機酸類(例
、クエン酸、コハク酸、グルコン酸など)など菌が資化
しつるものが適宜用いられる。窒素源としては、たとえ
ば大豆粉、棉実粉、コーン・ステイープ・リカー、乾燥
酵母、酵叶エキス、肉エギス、ペプトン、尿素、硫酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム。 リン酸アンモニウノ・などの有機窒素化合物や無機窒素
化合物が利用できる。また、無機塩としては、たとえば
塩化す11ウム、塩化カリウム、炭酸カルシウム、硫酸
マグネシウム、リン酸−カリウム。 リン酸二ナトリウムなどの通常細菌の培養に必要な無機
塩類が中伸もしくは適宜、組合せて使用される。また、
化合物(1)を生産する閑の資化しつる硫黄化合物、た
とえば硫酸塩(例、硫酸アンモニウムなど)、チオ硫酸
塩(例、チオ硫酸アンモニウムなど)9曲硫酸塩(例、
亜硫酸アンモニウム)などの無機硫黄化合物、含硫アミ
ノ酸(例、シスチン、ンヌテインl L−デアシリジン
−4−カルボン酸)、ヒポタウリン、含硫ペプチド(例
、グルタチオン)などの有機硫黄化合物または、これら
の混合物を371地に添1ノロすると目的物の生成1■
が増大する場合がある。 また、硫酸第1鉄、硫酸銅などの重金属類、ビタミンB
、Iビオチンなどのビタミン類なども必要に応じて添加
される。さらにシリコーンオイルやポリアルキレングリ
コールエーテルなどの消泡剤や界面活性剤を培地に添加
してもよい。その細菌の発育を助け、化合物(1)の生
産を促進するような有機物や無機物を適宜に添加しても
よい。 培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法と同様に
行なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培
養の場合は静置培養、攪拌培養。 振盪培養2通気培養などいずれを実施してもよいが、と
くに通気攪拌培養が好ましい。又培養温度はおよそxo
’tr(いしgo″Cの範囲が好ましくさらに好ましく
はおよそ17℃ないし24℃であり、培地のpHは約4
ないし8の範囲さらに好ましくは約6ないし7の範囲で
あり、およそ8時間ないし168時間、好ましくはおよ
そ24時間ないし144時間培養する。 培養物から目的とする化合物(T)を採取するには微生
物の生産する代謝物をその微生物の培養物から採取する
のに通常使用される分離手段が適宜利用される。たとえ
ば化合物(1)は水溶性塩基性物質(官能基としては弱
酸性基も含まれているが、分子全体としては塩基性物質
)の性質を示し、主として培養沢液中に含まれるので、
まず培養液に沢過補助剤を加えて沢過あるいは遠心分離
によって、菌体を除去する。得られた培養沢液を適宜の
担体に接触させてr液中の有効成分を吸着させ、次いで
適宜の溶媒で有効物質を脱着させ、分別採取する手段が
有利に利用される。クロマトグラフィーの担体としては
活性炭、シリカゲル、粉末セルロース、吸着性樹脂など
化合物の吸着性の差を利用、または陽イオン交換樹脂、
陽イオン交換セルロース、陽イオン交換セファデックス
など化合物の官能基の差を利用、あるいはセファデック
ス類など化合物の分子用の差を利用するものが有利に用
いられる。これら担体から目的とする化合物を溶出する
ためには担体の種類、性質によって組み合せが異なるが
、たとえば水溶性有機溶媒の含水溶液すなわち、含水ア
セトン、含水アルコール類など、あるいは酸、アルカリ
、緩衝液もしくは無機あるいは有機塩を含む水溶液など
が適宜組み合わせて用いられる。 またこれらのクロマトグラフず−によって得られた抗生
物質を含む粗物質を分収用高速液体クロマトグラフィー
に付し、精製品を得る事も行われる。 さらに詳しく述べるならば、担体として陽イオン交換樹
脂たとえばダウエックス−50W(ダウ・ケミカル社製
、米国)、アンバーライ)IR−120(ローム・アン
ド・ハース社製、 米国) 。 ダイヤイオンSK’116(三菱化成工業株式会社製)
などを用いるとr液中の抗菌性物質は吸着され、塩類あ
るいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などで溶出される
。あるいは陽イオン交換分子ふるい性樹脂たとえばCM
−セファデックス(ファルマシア・ファイン・ケミカル
ズ社製、スウェーデン)などの担体に抗生物質を吸着せ
しめ、塩類あるいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液など
によって溶出させることが出来る。これら溶出液中の塩
類9着色物質などを取り除くためにはクロマトグラフィ
ー用活性炭(武田薬品工業株式会社製)あるいは吸着性
樹脂たとえばダイヤイオンHP−20(三菱化成工業株
式会社製〕、アンバーライトXAT)−It(ローム・
アンド・ハース社製、米国)などが有利に用いられる。 分画された溶出区分は濃縮、凍結乾燥などの工程を桶て
、粉末化される。かくして得られた粉末の純度が悪い場
合、さらに精製するためには高速液体クロマトグラフィ
ー法(1−I P T、 C)が有利に利用される。用
いられる担体としてはたとえばTSKゲル(東洋曹達株
式会社製)、YMCゲル(山村化学研究所製)などが挙
げられ、移動層としてはメタノールあるいはアセトニト
リルなどと無機塩含有水溶液あるいは緩衝液などとの混
合液が用いられる。なお化合物(1)は鉱酸たとえば塩
酸、硫酸、リン酸などあるいは有機酸たとえば蟻酸、酢
酸、修酸などの七ノー、ジーあるいはトリー塩として単
離される。 後述の実施例1で得られたTAN−592・塩酸塩の物
理化学的性質はつぎの通りである。 (噂 TAN−592A・二塩酸塩: 1)外観:白色粉末 幻分子量測定値:SIMS法、(M+H)+3)分子式
二026F14□N90.2S、2HCl・(2H20
)※1 ※2 4)元素分析値(%): 実測値 計算値C,8
8,49±2.OC,88,481−1,6,08±1
.0 H,5,88N、15.68±1.5 N、
15.510.27.56 S、 4.22±1.OS、 8.95CI、
7.95±1.5 CI、 8.78※1.試料は
5酸化リン上、60℃で8時間、減圧乾燥したもの。※
2.2モルの付着水を含むとして計算。 5)紫外部吸収(UV)スペクトル: O λ 2 26042nm(E1%−124±20)ma
x 1cm6)円二色性
(CD)スペクトルニ ア〕赤外部吸収(IR)スペクトル:臭化カリウム中の
主な波数(crn)はつぎの通りである。51図参照 8420.8080.2960.1780,1780゜
1670.1510,1400,1260,1170゜
1060.980,860.510 8)核磁気共鳴(18C−NMR)スペクトル:重水中
、 100MHzでのシグナルは下記に認められる(δ
I)pm)。 179.79(Sl、 177.00+s1.176.
11(s1170.98(Sl、170.77(sl、
166.42(山162.24(Sl、 159.
68(Sl、 184.46(31118,40(81
,79,67(31,72,70(山67.07+11
. 66.01(dl、 68.26(t157
.58(dl、 57.08を山、 56.5
2を山48.61ft+、 41.18(11,87
,85(1182,68(11,28,98ft+、
28.65(tl27.52(tl、 28.5
0ft+(S:シングレソト、d、ダブレット、t;
トリプレット、q;クワルテソト)9)アミノ酸分析値
:定沸点塩酸(5,5N−HCI)中、110℃、15
時間加水分解した試料。セリンおよびα−アミノ−アジ
ピン酸が検出された。 10)薄層クロマトグラフィー(TLC)ニスポットフ
ィルム、セルロース(東京化成工業株式会社製)。 溶媒系、アセトニトリル:3%硫酸アンモニウム(1:
1)、Rf二0.58 11)高速液体クロマトグラフィー(HP’r、CJ:
担体、YMCパックA312(山村化学研究新製)、移
動層、2チメタノール10.01Mリン酸緩衝液(pH
s、o)2ml/m1n0Rt=8.7 (min ) 以下に記す物性はA、B、C,D、E、F成分共同じ。 12)溶解性: 51!Itmニジメチルスルフォキサイド、メタノール
、アセトン、酢酸エチル 13)呈色反応: 陽性:ニンヒドリン、ブレイブ・ソーパンク。坂口反応 陰性:パートン反応、過マンガン酸カリウム (vll TAN−592B、−塩酸塩1)外観:白
色粉末 2)分子@測定値:SIMSυE、 (M−1−H)+
7913)分子式:C29H46N1oO□4S、HC
l、(2H20)4)元素分析値(肯: 実測値31
計算値02C,40,OO±2.OC,40,85H
,5,88±1.OH,5,95 N、15.64±1.5 N、16.280.29.
65 S、 430±to S、 8.71CI、
4.58±1.5 CI、 4.11※l、※2
.Aと同じ条件 3l− 5)UVスペクトル: λ 2260±2nm(E”%−108±2(1)−I
O max ICIn6)CDス
ペクトルニ ア)IRスペクトル:第2図参照 8400.8080.2950.1780.1780゜
1660.1520,1,190.1250,1170
゜1060.980,860.520゜ 8) 18C−NMRスペクトル: 179.85(sl、 177.20(s)、 176
.24(sl。 174.41(S)、171.18(S)、166.4
2(山。 162.28tS1.159.61(s)、 134.
55(81゜117.97(31,79,67(sl、
72.86 (dl 。 67.10(11,66,00(dl、 61.89
(tl。 68.19(tl、 59.10(d)、 57.
40(dl。 57.18(dl、 56.80(山、 48
.58 (tl 。 41.46(tl、 N7.N6(tl、 82.
74(t)。 29.88(tl、 28.6e(tl、 27,
411゜28.52 ft+ 9)アミノ酸分析値:(Aと同じ条件)セリフ(約2モ
ル)およびα−アミノ−アジピン酸が検出された。 10) TT、C: (Aと同じ条件)Rf=0.61 LUHPT、C: (Aと同じ条件) Rt=4.2(min) (lxl TAN−592C・二塩酸塩1)外観:白
色粉末 2)分子量測定値:SIMS法、(M+H)+8623
)分子式:CB2H5,N11O25S、2HC1,(
4H2o)4)元素分析値(%): 実測値 計算
値22C,88,04±2.OC,88,17)1.
6.801.OH,6,11 N、14.80−1m1.5 N、15.800.8
0.19 S、 8.18±t、o S、 8.t8C1,
7、r6±x、5 C+、 7.04※1.Aと同じ
条件、※2,4モルの付着水51JVスペクトル: 6)CDスペクトルニ ア)IRスペクトル:第3図参照 8420.80?0.8000,2950,1780゜
1785.1660,1520,1450,1890゜
・ 1250,1165,1060,860,520゜
B)18C−NMRスペクトル: 179.52(Sl、 178.64(sl、 176
.16(sl。 175.71tS1.174.49(81,173,9
4(Sl。 169.48(Sl、 166.45(dl、 162
.54(81゜159.67(Sl、 182.57(
S)、 128.59(sl。 79.791S)、 72.88(d)、 66.
82(tl。 66.47(dl、 64.06(tl、 68.
87ttl。 58.97(山、 58.28(dl、 56
.26(山。 56.21(dl、 51.98を山、 48
.62(tl。 41.46ft)、 87.25(tl、 82.
11ft+。 29.88(t)、 28.91(tl、 27.
85(11゜2B、4Ht1. 19.47(Q1 9)アミノ酸分析値:(Aと同じ条件)セリン(約2モ
ル)、アラニンおよびα−アミノ−アジピン酸が検出さ
れた。 10) TLC: (/L!:同シ条件)Rf=0.6
8 n))IPLc : (Aと同じ条イ1つRt=4.6
(min ) (XI TAN−592D・二塩酸塩1)外観:白色
粉末 2)分子量測定値:STMS法、 (M+H)+661
8)分子式:C2,H4oN80.1S・2HC1・(
8H20)4)元素分析値(%): 実測値 計算
値*2※l C,37,51±2.OC,88,12H,6,28±
1.0 H,6,14N、 14.10±1.5
N、14,280.28.44 S、4.00±1.o S、 4.07CI、
9.94±1.5 C1,9,00※1.Aと同じ条
件、※2.3モルの付着水5)UVスペクトル: =35− 6)CDスペクトルニ ア)IRスペクトル:第4図参照 8420.8075,2950.1770゜1?85.
1670.1550,14,60゜・ 1400,12
60,1170.1110゜1065.870.540 8)”C−NMRスペクトル: 179.86(Sl、176.10(S)、175.8
6(31170,69(sl、 170.18(S)
、 168.18(s)159.69(Sl、182
.59 C81、122,91(8172,69を山、
67.04(tl、 68.21(t)62
.08td+、 60.24(dl、 57.
58(山56.57を山、 56.89(dl、
4B、64(1141,19tt1. 87.4
1(t)、 82.86(1128,97(11,
28,71(tl、 27.51(1128,71
ft+。 9〕アミノ酸分析値:(Aと同じ条件〕セリンおよびα
−アミノ−アジピン酸が検出さj、た。 10)TLC: (Aと同じ条件) Rf=0.62 11)HPLC: (Aと同じ条件) R1=7.9(min) (均 TAN−592E・二塩酸塩 1〕外外観自白粉末 2)分子量測定値:SIMS法、(M+)I辻7488
) 分子式: C28H4,N、O□、8.2HCI−
(R20)4〕元素分析値(%): 実測値 計算
値02C,89,71±2.0.C,40,10H,5
,87±1.0. H,5,89N、14.85±1
.5 、 N、 15.0 B、0.26.71 S、 8.90±1.0. S、 8.82CI
、 7.46±1.5.C1,8,45・ ※1.
Aと同じ条件、※2.付着水1モルとして計算。 5)UVスペクトル: 6)CDスペクトル 7)TRスペクトル:第5図参照 8400.8060,2950,1765゜1780.
1660.1540,14.60゜” 1890,12
40,1170,1110゜1060.10211.
870. 810゜8) 18C−NMRスペクトル
: 179.41(Sl、176.44(S)、176.2
0 (Sl 。 174.28+31.171.02(Sl、 168.
01(sl。 159.66(Sl、 188.50(sl、 121
.05(sl。 72.88(dl、 67.11(11,6192
(11゜Ll、12(tl、 62.06を山、
60.20dl。 58.99 (山、 57.88(di、 5
6.82(dl。 56.27(dl、 48.62(tl、 41.
40(tl。 37.49(tl、 82.54(11,29,23
ft+。 28.59(11,27,40(t)、 28.78
(tl9)アミノ酸分析値:(Aと同じ条件)セリン(
約2モル〕およびα−アミノ−アジピン酸が検出された
。 10) TT、C: (Aと同じ条件)Rf=0.64 1j)HPLC: (Aと同じ条件) Rt=9.6 (min) (dll TAN−592F・二塩酸塩1)外観二白
色粉末 2j分子昂測定値;8TM8法、 (M+J+8193
〕分子式: C8,l−15oN1o014S・2)1
c1.(4)120)4)元素分析値(%]: 実測値
・ 計算値82※I C,as、oo±2.0. C,s8.6sH,6,
87±1.o、 H,6,27N、 14.85±1
.5. N、14.580.29.88 S、 llo±1.0. S、 8.88CI、
7.78±1.5.C1,7,3611fl、Aと
同じ条件、※2,4モルの付着水として計算。 5)UVスペクトル: 5)CDスペクトルニ ア)TRスペクトル:第6図参照 8420.3070,2950,17.70゜1785
.1660,1540,1460゜1895.1840
.1250,1160゜1110、.1065. 58
0 8)アミノ酸分析値=(Aと同じ条件)セリン(約2モ
ル)、アラニンおよびα−アミノ−アジピン酸が検出さ
れた。 9)TT、C:LAと同じ条件) Rf=0.67 10)HPLC: (Aと同じ条件) Rt=10.1 (min) 後述の実施例2で得られたTAN−591・塩酸塩の物
理化学的性質はつぎの通りである。 (XI)TAN−591A・二塩酸塩 4O− 1)外観二白色粉末 2)分子量測定値:STMS法、 (M+H) 67
63)分子式” C26H4□N70.2S−2HC1
,(2H20)4)元素分析値(%): 実測値
計算値″c、4o、as±2.0. C,89,7
9T(、6,58±to、 H,6,04N、 12
.81±1.5. N、12.50、 0,28.5
4 8.4.07±to、 S、 4.09CI 、
8.40±1゜5. CI、 9.04※1.試
料は5酸化リン上、60℃で8時間。 減圧乾燥したもの。※2.2モルの付着水を含むとして
計算。 5)紫外部吸収(UV)スペクトル: λ 2260±20m(E1%=118+20)maX
1cIrL6】円二色性(
CD)スペクトル: 〔θ〕1120+2+27000±50007)赤外部
吸収(T I? )スペクトル:気化カリウム中の主な
波数(σ )はつぎの通りである。第7図参照 3420,8250,8080,2950゜1780.
1785.1675.]515゜1410.1360.
1280,11601060、 980. 860.
5208)核磁気共鳴(18C−NMR)スペクトル二
重水中、 100MIIzでのシグナルは下記にi忍め
られる(δpr)m )。 179.74(sl、 l 77.19(sl、 17
6.16(sl。 170.90(Sl、170.66(31,166,4
2を山。 162.12(Sl、 134.89(Sl、 117
.77(Sl。 79.70+51. 72.71(dl、 67.1
2ft+。 66.02+d+、 68.22(tL 57.5
8(dl。 57J5(dl、 56.67Fd1. 42.22
ttl。 41.21ft+、 8746ft+、 82.7
7(tl。 81.28F11. 29JO(11,28,62ft
l。 25.08ft+、 23.50ft+(S;シング
レット、d:ダブレット、t;トリプレット、q;クヮ
ルテット) 9)アミノ酸分析値:定沸点塩酸(5,5N−HCI
)中、110℃、15時間加水分解した試料。セリンお
よびα〜ルアミノ−アジピンが検出された。 10〕薄層クロマトグラフィー(TI、C)ニスボット
フィルム、セルロース(東京化酸二り業株式会社製〕。 溶媒系、アセトニトリル:3%硫酸アンモニウム(1:
])、Rf=0.45 11)高速液体クロマトグラフィー()IPT、C):
担体、YMCバックA、312(山村化学研究新製)、
移動層、0.OIM!Jン酸緩衝液(1)8 8.0
) jUl/m1nll、R1=2.4 (min)以
下に記す物性はA、B、C成分共同じ。 12)溶解性: 易溶:水、含水アセトン、含水アルコールa溶:、メチ
ルスルフォキサイド、メタノール、アセトン、酢酸エチ
ル 13)呈色反ri、;: 陽性:ニンヒドリン、グレイグ、リーバツク反応 陰性:バートン反応、過マンガン酸カリウム、坂口反応 (XIV) TAN −591B 、二塩酸塩1)外観
:白色粉末 2〕分子量測定値:STMS法、(M−1−H辻763
3)分子式:C29H46N80□4S、2HC1−(
2H20)※1 4)元素分析値□□□): 実測値 計算値02
C,89,84±2.0. C,89,95H,6,
o2±1.0. H,6,01、N、12.52±1
.5. N、12.850.29.88 S、4.40+1.0. S、 8.68C1,7
,57±1.5. CI、 g、i8※1.※2.
Aと同じ条件 r、)UVスペクトル: λ2260±2nm(B”%=124:f:20)O may ICWL6)C
Dスペクトルニ ア)IRスペクトル:第8図参照 8400.8270,8080,2970゜1780.
1785,1670.1580゜1410.1260.
1160,1060゜980、 875. 520゜ 8)”C−NMRスペクトル: 179.69(Sl、177.191Sl、176.2
1(81゜174.14(Sl、 171.04(S
l、 170.89(Sl。 166.881d1.162.07(sl、t 84.
95(Sl。 117.55(sl、 79.68(sl、 7
2.84(dl。 67.09(tl、 66.00(dl、 68
.90(tl。 63.10+11. 59.00f山、 57.
41(dl。 57J6(山、 56J7td1. 42.25
(11゜41.41(tl、 87.85ft1.
82.77(11゜81.47(11,29,20
(11,28,60(11゜24.94 (11、28
,49(tl9)アミノ酸分析値=(Aと同じ条件)セ
リン(約2モル)およびα−アミノ−アジピン酸が検出
された。 1o)TT、C: (Aと同じ条イL1すRf=0.4
7 11) T(PLC: (Aと同じ条件)Rt=2.8
(min) (XV) TA、N −59I C、二塩酸塩l)外観
:白色粉末 + 2)分子量測定値:SIMS法、(M+)I) 88
43)分子式:08゜1]5、N、015S、8)IC
+・(4H20)4)元素分析値(%): 実1111
1値 計算値621ll C,86,74±2.0. C,87,85H,6,
81±t、o、 H,6,16N、 1 1.74
」=1.5. N、12,420.29.94 S、 3.48±to、 S、 8.16cl、
11.86±1.5. CI 、 10.48※l、
Aと同じ条件、※2,4モルの付着水5)IJVスペク
トル: λ 226(H:2nm(E”=110±20)O max 1crn6)CDス
ペクトルニ 〔θ〕 2 ±2 +89000±50007)TR
スペクトル:第9図参照 3440.3270,8080,2950゜1780.
174+1.1675.1580゜1410.1,25
0,1150,1060゜960 、 8 (10、
540 8)アミノ酸分析値:(Aと同じ条件)セリン(約2モ
ル)、アラニンおよびα−アミノ−アジピン酸が検出さ
れた。 9)TLC: (Aと同じ条件) Rf=0.51 10) I(PT、C: (Aと同じ条件〕Rt=3.
3(min) −1−に述べたセリン、アラニンおよびα〜ルアミノ−
アジピンは、それぞれL一体、■ノ一体およびD一体で
あることがII P L Cで決定された。 上記物理化学的性状から、本発明の化合物の化学構造式
は、前に述べた一般式(1)で表わされると考えられる
。 次に、化合物+11の生物学的性状について述べる。 まず、TAN−592(塩酸塩)の各種微生物に対する
抗菌スペクトルを第1表に示す。 −48〜 (注):* 培地:バクト・アンテイビオテイツクメ
デウム3(ディフコ)i17.5 q、バクト・イーストエキスト ラクト(ディフコ)苓5g、バ クト・アガー(ディフコ)+20 9、蒸留水+11.pH無調整。 接種閑潰:約106/ml菌液の1白金耳量を用いた。 また、TAN−592A、、B、Cは種々のβ−ラクタ
メースに対して安定である。第2表に、エシェリキア・
コリPG8を被検菌とし、2種のβ−ラクタメースに対
する安定性をしらべた結果を示す。 第2表 数値は阻止円直径(IIIll)を示す。培地ニジアミ
ノピメリン酸(20q/l! )を含む栄養寒天培地(
pH7,0)。PCG:ベンジルペニシリン、0℃:セ
ファロスポリンC,CMC:セファマイシンC0薬剤濃
度は全て100μ9/m10*1:バチルス由来、カル
ビオケミカル社(米国)p、*2:エンテロバクタ−・
クロアカ由来。 *3:阻止円径なし。 また、TAN−592B塩酸塩のマウス感染症における
治療効果は、第3表に示すとおりである。 第31乏 また、抗生物WTAN−59211・塩酸塩を197k
qとなる量をマウスに皮下段!j、 l、でも死C例は
a忍められなかったので、抗生物ff1TAN−592
は低毒性と考えられる。 これらのデータから明らかなように、抗生物質TAN−
592はグラム陽性菌およびグラム陰性菌に対して抗菌
性を示し、哺乳動物などに対する毒性が低い抗生物質で
ある。また、T A N −592A、BおよびCは種
々のβ−ラクタメースに対して安定である。 さらに、TAN−591(塩酸塩)の各種微生物に対す
る抗菌スペクトルを第4表に示す。 、以下余白) (注):* 培地:バクト・アンテイビオテイツクメ
デウム(ディフコ)17.5 q、バクト・イーストエキスト ラクト(ディフコ)、5(i+、バ クト・アガ〜(ディフコ)、20 q、蒸留水rII、pi−1黙調整。 接種菌晴:約10′/*/菌液の1白金耳量を用いた。 また、TAN−591A、R,Cは種々のβ−ラクタメ
ースに対して安定である。第5表に、エシェリキア・コ
リPG8を被険菌とし、2種のβ−ラクタメースに対す
る安定性をしらべた結果を示す。 数値は阻止円直径(−)を示す。培地ニジアミノピメリ
ン酸(20mg/lを含む栄養寒天培地(pH7,0)
。PCG :ベンジルペニシリン、cpc:セフ70ス
ポリンC,CMC:セファマイシンC0薬剤濃度は全て
100μ9/露l。 *1:バチルス由来、カルビオケミカル社(未刊)製、
*2:エンテロバクタ−・クロアカ由来。 *3:阻止円径なし。 また、TAN−591A塩酸塩のマウス感染症における
治療効果は、第6表に示すとおりである。 第6表 感染菌 投讐去 ED5oq/に’i また、抗生物質TAII−591A・塩酸塩を197に
りとなる量をマウスに皮下投与しても死亡例は封忍めら
れなかったので、抗生物質TAN−591は低毒性と考
えられる。 これらのデータから明らかなよう薔こ、化合物(1)は
ダラム陽性菌およびダラム陰性菌に対して抗菌性を示し
、哺乳動物など番こ対する毒性が低い抗生物質である。 また、化合物(1)lこおいて、R1がホルミルアミノ
である化合物は、β−ラクタメース産生株に対して安定
である。したがって化合物(1)は哺乳動物(例、マウ
ス、ラット ウサギ、犬、ヒト)の細菌感染症の治療に
用いることが出来る。 化合物(1)をたとえば細菌感染症の治療剤として用い
るには、化合物(1)を薬理学的に許容され得る担体、
賦形剤、希釈剤など表混合し、たとえば化合物(1)を
注射剤として非経口的に」−記咄乳動物の皮下または筋
肉内に約1ないし5011f/kq/B、好ましくは約
5ないし20ダ/kq/日投与する。また経口剤古して
、化合物(1)をカプセル剤とし、化合物(1)として
約1ないし100り/ kO/日、好ましくは約5ない
し50ダ/ kq/日投り・する。 また、化合物(1)は、殺菌剤として用いることができ
る。たとえば化合物(1)を約0.01ないし0.IW
/V%の濃度で蒸留水に溶解した液剤、または1qあた
り化合物(1)を約02ないし20q、好ましくは約1
ないし10117含有する軟膏剤として、」−記咄乳動
物の毛2足、眼、耳などに塗布することにより、これら
の部位の殺菌、消毒に用いることができる。 化合物(1)はまた新しい医薬の合成中間体としCも極
めて有望な化合物である。 実施例 次に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。 なお、培地におけるパーセントは、特にことわりのない
かぎり重帛/容量係を示す。 実施例1 三重県阿山郡柘植で採集した植物から分離採取され、栄
養寒天斜面上に生育されたキサントモナス・ラクタムゲ
ナYK−280(TPO14380゜P[RM P−
7602)をグルコース2%、ソルブル・スターチ3%
、生大豆粉1%、コーンステイープリカー03係、ポリ
ペプトン(人丑栄養化学株式会ネー1製)05%1食塩
03襲を含有する水溶液(pH7,0)に沈降性炭酸カ
ルシウム05チを流力1比だ培地500m1を含む27
?容坂口フラスコに接種して、24℃で48時間往復振
帰培養した。この培養液全甲を1−記培地に消泡剤アク
トコール(武田薬品T業株式会社製)005%を添加し
た培地120eを含む容f7t、 200 /のタンク
(:接種し、24°Cで通気量1200e/分、120
回転/分の条件下で48時間培養した。この培養液全j
?jをデキストリン3%、生大豆粉3%、ポリペプトン
02%を含有する水溶液(pH無調整)に沈降性炭酸カ
ルシウム05%、アクトコール005%を添加した培地
1200eを含む容:贋″2000eのタンクに接種し
、24°Cで通気量1200e/分、100回転/分の
条件下で66時間培養した。 」−記で得られた培養液(11407?)を2N塩酸で
p H6,0に調整後、ハイクロス−パーセル(ジヨツ
ブ・マンビル・プロダクト社製、米国)を加え、沢過、
水洗しr液(18T、Ol)を得た。 加液をp l−(6,3に調整後、ダウエックス−50
W(Na+i、 50−10 aメ’7シ、:L+
25 e >全充填したカラムを通過させた。水(7
5e)でカラムを洗浄後、2M食塩水(500e)で溶
出した。 溶出液を活性炭(151?)のカラムを通過させ、水(
451で洗浄後、8%インブタノール−N/100塩酸
(1051で溶出した。溶出液をp1162に調整後1
2gまで濃縮19、濃縮液をp I−17,3に調整し
て、ダイヤイオンI−IP−20(IOC)を充填した
カラムを通過させた。001MIJ7酸緩?12(pl
T7.a、 20 e )テカラムを洗浄・糸、00
1リン酸緩衝液(pH2,5,100e)で溶出した。 溶出液を活性炭(2,51のカラムを通過させ、水(6
e)で洗浄後、8%イソブタノール−N/200塩酸(
18e)で溶出した。溶出液を1.6eまで濃縮し、濃
縮液をp I−17,8に調整後、ダイヤイオンI−I
P−20(5(1−100メ・7シユ、2e)を充填し
たカラムを通過させた。0.OIMIJン酸緩衝液(p
lT7.8. 4 e )テ洗浄後、0.OIM I3
7酸緩衝液(plT 3.a、 20 e )でm出
分画した。各分画を液体クロマトグラフィーの分析に付
し、TAN−592A、R,Cを主成分とする−”−−
104 分画とTAN−5921)、 E、Fを主成分とする
分画の2群に分離17た。 1.1ieテ?!Pラレタ’l’ A N −592A
−、H、Cヲ」二成分とする分画な集めて活性炭(5(
l ome)のカラムを通過させ、水(1,5/)でr
’51:/f”後、8%イソブタノール−N/200塩
酸(3e)で溶出した。溶出液を濃縮後、濃縮液をCM
−セファデックスC−25(Na 型、0.87’)
を充填またカラムを通過させ、002M食嘱水(401
?)で溶出分画した。各分画を液体クロマトグラフィー
の分析(こ付し、TAN−592A、 Bそれぞれを川
−ピークとして含む分画とTAN−592Cを主成分と
する分画を集めた。 TAN−592Aの弔−分画を集めて、活性炭(0,3
e)のカラムを通過させ、水(0,9e)で洗浄後、8
96イソブタノール〜N/200塩酸(2,1iで溶出
した。溶出液を濃縮後、凍結乾燥してTAN−592A
二塩酸塩の白色粉末(1,5g)が得られた。同様にし
てTAN−592Bの単一分画からはTAN−592B
・−塩酸塩R62− の白色粉末(2,01、TAN−592C主成分分画か
らはTA、N−592Cの粗粉末(1,9g)が得られ
た。 TAN−592Cの粗粉末(0,7g)をCM−セフ7
デツクスC−25(Na”Q、 100m?)を充填
したカラムを通過させ、002M食塩水(3e)で溶出
分画した。各分画を液体クロマトグラフィーの分析に付
し、 TA、N−592Cを主成分きする分画を集め、
活性炭(Bowl)のカラムを通過させた。水(100
g/)で洗浄後、8%インブタノール−N/200塩酸
(210g?)で溶出し、溶出液を濃縮した。 濃縮液をYMC−Pack 5H−J43(2011
1Iφx250fi、山村化学研究所要)を用いた分取
用高速液体クロマトグラフィーに付し、0.01Mリン
酸緩衝液(pI−13,0)で溶出分画した。各分画を
液体クロマトグラフィーの分析に付し、単一ピークを示
す分画を集めた。有効区分をI N NaOHてp I
−(7,8に調整後、lNllClでpHa、oに再調
整し、活性炭(20*t)を充填したカラムを通過させ
た。水(80+w/)てカラムを洗った後、896イン
ブタノール水(200mlりで溶出し、溶出液を濃縮後
、凍結乾燥してTAN〜592C二塩峻塩の白色粉末(
110q)が得られた1゜上記で得られたT’AN−5
9211,rり、ト1を主成分とする分画を集めて活性
炭(200mg)Oカラムを1m過さぜ、水(600m
l)で洗浄後、8%イソブタノール−N/200塩酸(
1,,41?)で溶出した。溶出液を濃縮後、濃縮液を
CM−セファテックスc−25(Na+型、80(1+
l)を充填したカラムを通過させ、0.02M食塩水(
151)で溶出分画した。各分画を液体クロマトグラフ
ィーの分析に付し、TA’N−592D、?、、Fそれ
ぞれを主成分とする分画を集めた。 TAN−592D主成分分画を集めて、活性炭(80g
/)のカラムを通過させ、水(250g+/)で洗浄後
、8%イソブタノール−N/200塩酸(560g/)
で溶出した。溶出液を濃縮後、凍結乾燥してTAN−5
92Dの粗粉末(1286q)が得られた。TAN−5
92E、Fの主成分分画も同様の操作を行ない、TAN
−592Eの粗粉末(1560q)、TAN−592F
の粗粉末(6569)が得られた。 TAN−592Dの粗粉末(1236q)を、YMC−
P a c k 5r−1−848を用いた分取用高速
液体クロマトグラフィーに付し、1%メタノール−00
1Mリン酸緩衝液(pT−110)で溶出分画した。各
分画を液体クロマトグラフィーの分析に付し、単一ピー
クを示す分画を集めた。有効区分をl N NaOHで
p H7,3jこ調整後、lNNaC1でpI(8,0
に再調整し、活性炭(50禦l)を充填したカラムを通
過させ、水(200g+/)でカラムを洗った後、8%
イソブタノール水(40(1+/)で溶出した。 溶出液を濃縮後、凍結乾燥してTA、N−592D二塩
酸塩の白色粉末(832q)が得られた。 TAN−592E、Fの粗粉末も同様に分取用高速7液
体クロマトグラフィーに付し、TAN−592Eの二塩
酸塩の白色粉末(501ダ)、TAN−592F二塩酸
塩の白色粉末(46q)が得られた。 実施例2 栄養寒天斜面−1−に生育させたキサントモナス・ラク
タムゲナYK−278(IFO14351゜Ti”ER
M P−7681)の菌株を、グルコース2%、ソル
ブル・スターチ3%、生大豆粉1%。 廃糖蜜1%、ポリペプトン0.5%1食塩03%を含有
する水溶液(p t−17,0)に沈降性炭酸カルシウ
ム0.5%を添加した培地40m1を含む200 tt
l容三角フラスコ15本に接種して、24°Cで24時
間振盪培養しその培養物を種菌とした。 次に、デキストリン3.0%、コーン・グルテン・ミー
ル1.5%、ポリペプトン02%、チオ硫酸ナトリウム
0.1%、沈降性炭酸カルシウム0.5%(pH7,0
)を含有する培地16eを200m1(D三角フラスコ
に各々40m1ずつ分注し、1200C。 20分間滅菌したものに種菌を1m/ずつ接種して、1
7°Cで、230回転/分の条件下で90時間振盪培養
した。 上記で得られた培養液(16e)を2N塩酸でp H6
,5ニaFfA整後、水(16e)を加え、遠心分離し
、p液(821)を得た。1液をダウエックス−50W
(Na+型、50−100メツシユ、o5e)を充填し
たカラムを通過させた。水(1,511’)でカラムを
洗浄後、2M食塩水(Ionで溶出した。溶出液を活性
炭(0,31のカラムを通過させ、水(1e)で洗浄後
、896インブタノールーN/200塩酸(2,2e)
で溶出した。溶出液をp I−16,2に調整後0.5
eまで濃縮し、濃縮液をp H7,8に調整して、ダイ
ヤイオンHP〜20(0,611を充填したカラムを通
過させた。0.01MIJ7酸緩衝液(pT−17,L
1.6 g )テカラムを洗浄後、0.01Mリン
酸緩衝液(pHLo、6e)で溶出分画した。溶出分画
を3区分にまとめ、それぞれを活性炭(80肩/)のカ
ラム中を通過させ、水(300胃l)で洗浄後、896
イソブタノールーN/200塩酸(600ml)で溶出
した。溶出液を濃縮し、凍結乾燥し、粗物質T(402
m9)。 H(760m?)および冒(448m?)を得た。 粗物質璽にはTAN−592A、BおよびCが。 粗物質1こはTAN−592D、 EおよびFが含まれ
ていることがo r’ i、 cによって確3忍された
。 これらの粗物質を実施例4および5の方法に準拠して精
製し、TAN−592(塩酸塩)Alsダ)、B19q
)、C(35ツ)、D(12q)。 E(15#)およびF(24mg)を得た。 粗物質1(400q)を水(100渭t)に溶かし、溶
解液をCM−セファデックスC−25(Na+型、50
m11)を充填したカラムを通過させ、0.02M食塩
水(1,fylで溶出分画した。各分画を液体クロマト
グラフィーの分析に付し、TAN−591A、B、Cを
それぞれ主成分とする分画を集めた。 TAN−591A、B、Cをそれぞれ主成分とする分画
を活性炭(各1(1+/)のカラムを通過させ、水(各
80 ml )で洗浄後、896イソブタノール水(各
70g1りで溶出した。溶出液を濃縮後、濃縮液をYM
C−Pack 5H−848(20m+φx250m
)を用いた分収用高速液体クロマトグラフィーに付し、
0、oIMリン酸緩衝液(pH4,5)で溶出分画した
。各分画を液体クロマトグラフィーの分析に付し、単一
ピークを示す分画を集めた。 有効区分をINNao)IでpH7,3j:調整後、t
NT(C+でr))TR,Oに再調整し、活性炭(5m
l)を充填したカラムを通過させた。水(2oml)で
カラムを洗った後、8チイソプタノール水(5omi)
で溶出し、溶出液を濃縮後、凍結乾燥してTAN−59
1’A(8η)、B(18η)およびC(22η)の塩
酸塩の白色粉末がそれぞれ得られた。 実施例3 キサントモナス・ラクタムゲナYK−280(IFO1
4110,FERM P−7602)を実施例1と同様
にして培養された培養液(1001)を遠心分離し、湿
菌体を70%アセトン水(10f)中に加え、30分攪
拌した。抽出液を濃縮し、濃縮液(IIりを活性炭のカ
ラムクロマトグラフィー(10oml)−二付し、50
%アセトン水(500vdりで溶出した。溶出液の濃縮
液をアンバーライトT RA−68(酢酸型5oml)
のカラムクロマトグラフィーに付し、0.2M酢酸ナト
リウム溶液(85(1ml)で溶出した。溶出液の活性
区分を活性炭クロマトグラフィーに付し、脱塩掃作を行
い、塩除去液を濃縮、凍結乾燥した。 得られた粗粉末を分収用逆層系高速クロマトグラフィー
に付し、デアセチルセファロスポリンC</、q”f)
を得た。標品とはT L CのRt値、HPLC(7)
Rt値、UVCD、TR,lH−NMRx−り)フ ルおよびバイオオートグラフィーで一致した。 実施例4 キサントモナス・ラクタムゲナYK−278(IFO1
4851,FERM P 7681Jを実施例2と
同様にして培養された培養液(1001りから実施例8
と同様の方法でデアセチルセファロスポリンC(1■〕
が得られた。 発明の効果 本発明の化合物(1)は、バクテリアによって生産され
るセフェム系抗生や質であり、本発明方法によればセフ
ェム骨格を有する本発明の目的化合物を短時間で醗酵法
により製造出来る。 また本発明の化合物(1)は、セファロスポリネー刈こ
安定であるので、臨床用医薬品として有望である。
第1図、第2図、第8図、第4図、第5図、第6図、第
7図、第8図および第9図は、抗生物質TAN−592
A・二塩酸塩、B・−塩酸塩、C・二塩酸塩、D・二塩
酸塩、E・二塩酸塩、F・二塩酸塩、抗生物質TAN−
59tA・二塩酸塩。 B・二塩酸塩およびC・二塩酸塩の赤外部吸収スペクト
ルをそれぞれ示す。 代理人 弁理士 天 井 作 次 手 粘“花 ネ市 jE i’LF (自発
)昭和60年8J12F+ 1、 事イ11の表示 昭和59年特許願第168691号 2 発明の名ゼ1、 抗生物質、その製造法および微生物 3、 Nli ’itを4−ろ古 If件との関係 ↑旨’INN願人 住所 大阪市東区道修町2−1’ l−127番地名
fイ1、 (29”A ) 武111薬品1.業体
式会月代表音 倉 体 育 四 部 4 代理人 lt +i斤 大阪市淀用区1・玉本町2丁[」17番
85号5 補1Eのχ・1象 明細書の発明の詳細な説明のIIi’116 補正の
内容 (1)明細書第14頁第20行〜第15頁第1行の「寄
託されている。」を「寄託され、該寄託はブダペスト条
約に基づく寄託に切替えられて、受託番号FERM
BP−635として同研究所(FRI)に保管されてい
る。」に訂正する。 (2)同書第22頁第4行の「寄託されている。」を「
寄託され、該寄託はブダペスト条約に基づく寄託に切替
えられて、受託番号FERMBP−636として同研究
所(FRI)に保管されている。」に訂正する。 (3)同書第59頁第16行および第69頁第12行の
rFERM P−7602Jを「FERM BP−
635Jそれぞれ訂正する。 (4)同書第66頁第5行および第70頁第11
・行のrFERM P−7681JをrFERM
BP−636jにそれぞれ訂正する。 以上 受託番号変更届 昭和60年8月2日 I、?]+:イ’lの表示 昭和5 q年特許願第16869 I冒2 発明α)
名(イド 抗生物質、その製造法お」−び微生物 3 1続をし)こ者 ・11イ11との関係 特許j1漕ri人11g
+i11 人阪市す!区道修町2「目27番地名
ゼ1、 (293) 代用薬品7に業株式会社
代表台 倉林育四部 4 代理人 住 所 大阪市淀用区十三本町2丁目17番85号5、
旧寄託機関の名称 J二業技術院a゛h生物1−業技術研究所6 旧受託
番号 別紙のとおり 7 新寄託機関の名称 工業技術院微生物1−業技術研究所 8 新受託番号 別紙のとおり 9 添付pH@ (1) I l録 (1)新受託番号を証11目′ろ書面 (2)別紙
7図、第8図および第9図は、抗生物質TAN−592
A・二塩酸塩、B・−塩酸塩、C・二塩酸塩、D・二塩
酸塩、E・二塩酸塩、F・二塩酸塩、抗生物質TAN−
59tA・二塩酸塩。 B・二塩酸塩およびC・二塩酸塩の赤外部吸収スペクト
ルをそれぞれ示す。 代理人 弁理士 天 井 作 次 手 粘“花 ネ市 jE i’LF (自発
)昭和60年8J12F+ 1、 事イ11の表示 昭和59年特許願第168691号 2 発明の名ゼ1、 抗生物質、その製造法および微生物 3、 Nli ’itを4−ろ古 If件との関係 ↑旨’INN願人 住所 大阪市東区道修町2−1’ l−127番地名
fイ1、 (29”A ) 武111薬品1.業体
式会月代表音 倉 体 育 四 部 4 代理人 lt +i斤 大阪市淀用区1・玉本町2丁[」17番
85号5 補1Eのχ・1象 明細書の発明の詳細な説明のIIi’116 補正の
内容 (1)明細書第14頁第20行〜第15頁第1行の「寄
託されている。」を「寄託され、該寄託はブダペスト条
約に基づく寄託に切替えられて、受託番号FERM
BP−635として同研究所(FRI)に保管されてい
る。」に訂正する。 (2)同書第22頁第4行の「寄託されている。」を「
寄託され、該寄託はブダペスト条約に基づく寄託に切替
えられて、受託番号FERMBP−636として同研究
所(FRI)に保管されている。」に訂正する。 (3)同書第59頁第16行および第69頁第12行の
rFERM P−7602Jを「FERM BP−
635Jそれぞれ訂正する。 (4)同書第66頁第5行および第70頁第11
・行のrFERM P−7681JをrFERM
BP−636jにそれぞれ訂正する。 以上 受託番号変更届 昭和60年8月2日 I、?]+:イ’lの表示 昭和5 q年特許願第16869 I冒2 発明α)
名(イド 抗生物質、その製造法お」−び微生物 3 1続をし)こ者 ・11イ11との関係 特許j1漕ri人11g
+i11 人阪市す!区道修町2「目27番地名
ゼ1、 (293) 代用薬品7に業株式会社
代表台 倉林育四部 4 代理人 住 所 大阪市淀用区十三本町2丁目17番85号5、
旧寄託機関の名称 J二業技術院a゛h生物1−業技術研究所6 旧受託
番号 別紙のとおり 7 新寄託機関の名称 工業技術院微生物1−業技術研究所 8 新受託番号 別紙のとおり 9 添付pH@ (1) I l録 (1)新受託番号を証11目′ろ書面 (2)別紙
Claims (3)
- (1)一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、R^1は水素またはホルミルアミノを、R^2
はセリンおよびアラニンから選ばれた1もしくは2個の
アミノ酸あるいはペプチドの残基または水素を、R^3
は−NH−C(=NH)−NH_2または−CH_2N
H_2をそれぞれ示す。〕で表わされる化合物またはそ
の塩。 - (2)キサントモナス属に属し一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、R^1は水素またはホルミルアミノを、R^2
はセリンおよびアラニンから選ばれた1もしくは2個の
アミノ酸あるいはペプチドの残基または水素を、R^3
は−NH−C(=NH)−NH_2または−CH_2N
H_2をそれぞれ示す。〕で表わされる化合物を生産す
る能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に該化
合物を生成蓄積せしめ、採取することを特徴とする該化
合物またはその塩の製造法。 - (3)ゼラチンの液化活性およびオキシダーゼ活性がい
ずれも陽性で、グルコースおよびマンノースから酸およ
びガスを生成せず、かつ4%の食塩存在下でも生育可能
な新菌種キサントモナス・ラクタムゲナ。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP16869184A JPS6147491A (ja) | 1984-08-10 | 1984-08-10 | 抗生物質,その製造法および微生物 |
EP84115169A EP0160745A3 (en) | 1984-05-07 | 1984-12-11 | Cephem compounds and their production |
CA000470121A CA1247029A (en) | 1984-05-07 | 1984-12-14 | Cephem compounds and their production |
US06/681,783 US4667027A (en) | 1984-05-07 | 1984-12-14 | Cephem compounds and their production |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP16869184A JPS6147491A (ja) | 1984-08-10 | 1984-08-10 | 抗生物質,その製造法および微生物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6147491A true JPS6147491A (ja) | 1986-03-07 |
Family
ID=15872673
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP16869184A Pending JPS6147491A (ja) | 1984-05-07 | 1984-08-10 | 抗生物質,その製造法および微生物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6147491A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0466045A (ja) * | 1990-07-06 | 1992-03-02 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 油脂組成物及び複合菓子用焼菓子類の製造方法 |
-
1984
- 1984-08-10 JP JP16869184A patent/JPS6147491A/ja active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0466045A (ja) * | 1990-07-06 | 1992-03-02 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 油脂組成物及び複合菓子用焼菓子類の製造方法 |
JP2569911B2 (ja) * | 1990-07-06 | 1997-01-08 | 鐘淵化学工業株式会社 | 油脂組成物及び複合菓子用焼菓子類の製造方法 |
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