JPS6066987A - 抗生物質ｔａν−５４７，その製造法および微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 木発明者らは、新規な抗生物質の棟木を目的として多数
の微生物を土壌より分離し、その産生ずる抗生物質を分
離探累したところ、ある和ｉの微生物が新規な抗生物質
を産生ずること、該微生物がリゾバクター属にＸ’ｌｔ
する新ｔ￥Ｉ　Ｉｌｉであること、該厳生物を適宜の培
地に培養することによってβ−ラクタメーヌ産生株を含
むグフム陽性粗菌およびグフム陰性州菌に対して抗菌力
を刀（ず抗生物ｒりを培地中に蓄積しうろことなどを知
り、この抗生物質を４１直し、その物理化学的および生
物学的詔性賀から、当該抗生物質が新規な抗生物質であ
ることを確め、これを抗生物質ＴＡＮ−５４１と称する
ことにした。ＴＡＮ−５４７は少くとも３個の成分から
成シ、これら全ＴＡＮ−５４７Ａ　、Ｂ　、Ｃと命名し
た。

本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究を重
ねた結果、本発明を完成した。

本発明は、（１）抗生物質ＴＡＮ−５４７Ａ　、Ｂ　。

Ｃまたはそれらの塩、　（２）　！ｊゾバクター属に属
する抗生物質ＴＡＮ−５４γＡ、ＢおよびＣの一種また
は二種以上を生産する能力を有する微生物を培地に培養
し、培養物中に該抗生物質を生成蓄積せしめ、採取する
ことを特徴とする抗生物質ＴＡＮ−５４７Ａ、ｎ、ｃま
たはそれらの塩の製造法。

および（３）オキシダティグ−ファーメンタティグテス
トが非分解型で、ショ糖および乳糖からの酸およびガス
を生成せず、硝酸塩の還元能を有する新菌種リゾバクタ
ー・ラクタムゲヌスである。

木明剤書においては、抗生物ＮＴｈｘ−５４７Ａ、Ｂお
よびＣの総称として、それらの二つまたは三つの混合物
の名称として、あるいはそれぞれ単一化合物の名称とし
て、「抗生物質ＴＡＮ−５４７」あるいは単にｒＴＡＨ
−５４７Ｊが用いられることもある。

また、木明ｆ４Ｉ書においては、抗生物質’Ｉ’ＡＮ−
５４７Ａ、ＢおよびＣの−ａまたは二種以上を生産する
能力を有する微生物を、「抗生物質ＴＡＮ−５４７生産
菌」と称することもある。

本発明で使用される抗生物質ＴＡＮ−５４７生産菌とし
ては、リゾバクター（Ｌｙｅｏｂａｃｔｅｒ　）　ＩＤ
Ｉに属し、抗生物質ＴａＮ−５４７に産生ずる能力を有
するものであれば如何なる微生物でもよい。

その例としては、たとえば新菌種リゾバククー・ラクタ
ムゲネス（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ　ｌａｃｔａｍｇｃｎ
ｕｅ）が挙げられる。その具体例としては、岡山県新見
市の土壌から採取されたりゾパクター・ラクタムゲヌス
ＹＫ−９０株（以下、「ＹＫ−９０株」と略称すること
もある。）が挙げられる。

ＹＫ−９Ｑ株の菌学的性状を以ｒに挙げる。

（ａ）形態 肉汁寒天斜面上で２４”Ｃ，５日間培養後のＭＭでは、
和胞は直径０．７〜０．９μｍ、長さ１０口〜３．５μ
ｍの桿状で、長さ６．５〜８．０μｍの長稈状を示すこ
ともある。鞭毛は認められないが、グフィデイングによ
る運動性が認められろ。

胞子を形成しない、、またグフム染色は陰性で、抗酸性
を示さない。

（ｂ）各種培地上での生育状態 ２４℃で培養し、盲ないし１４日間にわたって観祭した
。

■肉汁寒天平板培！！！：コロニーは不透明なうす黄色
で、円形、表面は凸円状、周縁紘全縁状である。拡散性
色素は生成しない。

Ｏ）肉汁邸天斜面培ｇ！：中程度の拡布状の生育を示し
、不透明、淡黄色を呈する。

■肉汁液体培９１：うすい混濁状に生育し、菌模ｔ″形
成する。沈澱はない。

■肉汁ゼラチン穿刺培ｇｌ＝表面でよく生育し、中深部
でも生育が認められる。層状、袋状に液化し、液化活性
は強い。

■リドマス・ミｐり：リドマスの還元能は弱い。

ペプトン化活性は強力だが級固は認められない。

（ｃ）生理的性質 ■硝酸塩の還元：＋ ■脱窒反応ニー ■ＭＲ（メチμレッド）テストニー ■ＶＰ（７オーゲス・プロスヵウエ／ｌ／）テストニ　
− ■インドーμの生成ニー （（Ｄ硫化水素の生成（ＴＳ工寒大および酢酸か１＞麺
、）二　− ＴＳ工蒜天：肉エキス４Ｆ、ペプトン１５ｇ。

乳糖１０Ｆ、白糖１０　ｆ　、　：ｉ’　ＦつＪＪ、ｊ
ｉ　ｌ　ｌ　、　ｉｐ、化ｆトリウム５Ｆ、チオ硫酸ナ
トリウム０．０８Ｆ。

亜硫酸ナトリウム０．４ｇ、硫酸プＲ−鉄０　、２　ｆ
。

フェノールレッド０．０２Ｆ、寒天１５Ｆ、蒸留水１０
００鹸、ｐＨ７，４ ■デンプンの加水分解ニー ■クエン酸の利用（コーゼ／Ｌ／、クリステン七ンおよ
びクモンズの各培地）二十 （？）窒素源の利用 ■）硝酸カリウムニー ■）硫酸アンモニウム：→・ ■）グルタミン酸ナトリウム：＋ （Ｉφ色素の生成（キングＡ、Ｂおよびマンニット酵母
エキス寒天の各培地）：拡散性色素の生成は認められな
い。

キングＡ培地：グリセリン１０９．ペプトン２０ｆ、塩
化マグネシウム１．４Ｆ、硫酸アンモニウム１０ｆ、寒
天１５１１％５留水１０ＱＯｓｒ／。

ｐＨ７、２ キングＢ培地：グリセリンＩＯＮ、ベグトン２Ｏｆ　、
リン酸−水素カリウム１．５ｇ、硫酸マグネシウム１．
５Ｆ、寒天１５ｆ、ｐＴ１７．’１（リウレアーゼ：− ０オキシダーゼ：＋ ［相］カタヲーゼ：±（凝陽性） ■）生育の範囲 Ｉ）　ｐＨ：　ｐＨ５・４〜７．６で生育するが、最適
ｐＨは５．６〜６．６゜ ■）温ａ′：１０〜３０℃で生育するがＪＩＪ適温）ｔ
ｉｔ−！１Ｉ５−２７　°ｃ０ ０Φ酸素に苅する態度：好気的ないＬ通性轍気や’Ｌ（
ΣΦ０−Ｆ（オキシダティブー７７−メンタテイブ）テ
スト〔ヒユー・レイフソン　（Ｈｕｇｈ・Ｌｅｉｆｓｏ
ｎ　）法〕：非分解型。

＠糖からの酸および〃ヌの生成： ｔ＋少ＤＮＡのＧＣ（グアニンークトシン＞含ｍ：１５
．８±１．５％ ０ミクロシストの形成能ニー ［相］力μボキＶメチμセルロースの分解能：＋［相］
コロイダμキチンの分解能：＋ 以上の菌学的賭性状を有するｙｘ−９０ａを、バージー
メ・マニュアル・オフ・デターミネイテイ７−バクテリ
オロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｅ　Ｍａｎｎｕａｌｏｆ　Ｄ
ｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏ＋；
ｇ　）　Ｍ　８版およびインターナＳ／ヨナル・ジャー
ナル・オフ゛・システマティックーバクデリオロジ−（
工ｎｔｅｒｎａ−ｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢＡｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）
第３０巻２２５−４２０頁（１９８０年）、同第３２巻
１４６〜１４９頁（１９８２年ンに記載の種と照合する
と、ＹＫ−９０株は、鞭毛をもたない黄色のグフィディ
ングによる運動性を示すグラム陰性桿菌で、好気性で、
ＤＮＡｆ）ＧＯ含量が高く、ミクロＶ７．トの形成能が
ないことから、リゾバククームに属するとするのが妥当
である。そこで、ＹＫ−９０株をリゾバクター属の公知
のｌａ　（ｓｐｅｃｉｅｇ）と比較した。リゾバクター
属の公知の種としては、インターナシ目すμ・ジャーナ
ル−オフ・クステマティック・バクテリオロジー第２８
巻、３６７−３９３頁（１９７８年）に記載された４種
と１亜種のみが知られている。そこで、これら５種（上
記文献には４６株の記載がある）とＹＫ−９０株の性質
を比較したところ、次のよりなＹＫ−９０株の性質すな
わち、１）オキシダティブー７アーメンタテを有し、４
）可溶性色素の生成が認められず、５）デンプンの加水
分解能がなく、６）硝酸塩の利用性がないなどの点で、
これら全ての性質をみたす菌株は見当らなかった。

そこで、ＹＫ−９０株は、新菌種にｈＬ３する株である
と認め、該新菌種をリゾバククー・フクタムゲヌヌ（Ｌ
ｙｅｏｂａｃｔｅｒ　１ａｃｔａｍｇｅｎｕｓ）　と命
名した。

上記リゾバクター・ラクタムケヌヌＹＫ−９０株は、昭
和５８年９月１４日に財団法人発酵研究所（工ＦＯ）に
受託番号ＩＦ０　１４２８８として寄託され、また本微
生物は、昭和ｒ？年２月７９日に通商産業省工業技術院
藏生物工業技術研究所（ＦＲ工）に受託番号ＦＥＲＭ　
Ｐ−７２＜ｔ７として寄託されている。

本発明に用いられるリゾバクター属澗菌は一般にその性
状が変化しやすく、たとえは紫外線、Ｘ線、化学薬品（
例、ニトロソグアニジン、エチルメタン７μホン酸）な
どを用いる人工変異手段で容易に変異しつるものである
が、どの様な変異株であっても、本発明の対象とするＴ
　Ａ　Ｎ　−５４７の生産能を有するものはすべて本発
明に使用することができる。

ＴＡＮ−５４７生産菌の培養に際しては、炭素源として
は、たとえばグルコーヌ、マルトース。

廃糖蜜、油脂類（例、大豆油、オリーブ油など）。

有機酸Ｍ（例、クエン酸、コハク酸、グルコン酸など）
など菌が質化しうるものが適宜用いられる。

窒素源としては、たとえば大豆粉、綿実粉、コーン・ス
テイープ・リカー、乾燥酵母、酵母エキヌ。

肉エキス、ペプトン、Ｒｇ、硫酸アンモニウム。

硝酸アンモニウム、塩化アイモニウム、リン酸アンモニ
ウムなどの有機窒素化合物や無機窒素化合物が利用でき
る。また、着槻塩としては、たとえば塩化ナトリウム、
塩化カリウム、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、リ
ン酸−カリウム、リン酸二ナトリウムなどの通常Ａ′ｉ
１１菌の詔５ｉに必要な無機塩類が単独もしくは適宜、
組合せて使用される。

また、リゾバクター属に属する抗生物Ｆ（Ｔ　Ａ　Ｎ　
＝５４１生匣菌の資化しうるｉｉ：ｆ黄化合物、たとえ
ば硫峻塩（例、硫酸アンモニウムなど）、チオ硫酸塩（
例、チオ硅酸アンモニウムなど）、亜硫酸塩（例、亜硫
酸アンモニウム）などの無機硫黄化合物＋　含硫アミノ
酸（例、シヌチン、システィン。

Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン＋１＆）、ヒポタウリ
ン、含硫ペプチド（例、グルタチオン）なとの有機硫黄
化合物ｉたけ、これらの混合物を培地に添加すると目的
物の生成量が増大する場合がある。

また、硫酸第１鉄、硫酸銅などの重合回類、ビタミンＢ
□　、ビオチンなどのビタミン類なども必要に応じて添
加される。さらにシリコーンオイルやポリアルキレング
リコ−〜エーテルなどの消泡剤や界面活性剤を培地に添
加してもよい。その細菌の発育を助け、−ＴＡＮ−５４
７の生産を促進するような有機物や無機物を適宜に添加
してもよい。

培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法と同様に
行なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培
養の場合は静置培養、撹拌培養。

振斂培養１通気培養などいずれを実施してもよいが、と
くに通気攪拌培養が好ましい。又培養温度はおよそ１０
９０〜３０℃の範囲が好ましく、培地のｐＨは約４〜８
の範囲でおよそ８時間〜１６８時間、好ましくは２４時
冊〜１４４時間培養する。

培養物から目的とする抗生物質ＴＡＮ−５４７を採取す
るには微生物の生産する代謝物をその縁生物の培養物か
ら採取するのに通常使用される分離手段が適宜利用式れ
る。たとえば抗生物質ＴＡＮ−５４７は水溶性塩基性物
質（官能基としては弱酸性基も含まれているが、分子全
体としては塩基性物質）の性質を示し、主として培養ｐ
液中に含まれるので、まず培養液に濾過補助剤？加えて
濾過らるいは遠心分離によって、菌体を除去する。

得られた培ｆｆＰ液を適宜の担体に接触させてＰ液中の
有効成分を吸着させ、次いで適宜の溶媒で有効物質を脱
着させ、分別採取する手段が有利に利用される。クロマ
トグラフィーの担体としては活性炭、シリカゲμ、粉末
セルロース、吸着性樹脂など化合物の吸着性の差を利用
、または陽イオン交換樹脂、陽イオン交換七μロース、
陽イオン交換セファデックスなど化合物の官能基の差を
利用。

あるいはセファデックス類など化合物の分子Ａの差を利
用するものが有利に用いられる。これら担体から目的と
する化合物を溶出するためには担体の種類、性質によっ
て組み合せが異なるが、たとえば水溶性有機溶媒の含水
溶液すなわち、含水アセトン、＠水アμコー／Ｉ／ｌ＝
など、あるいは的、アルカリ、緩衝液もしくは無機ある
いは有価塩を含む水溶液などが適宜組み合わせて用いら
れる。

またとれらのクロマトグラフィーによって得られた抗生
物質を含む粗物質を分取用高速液体クロマトグラフィー
に付し、精製品を得る事も行われる。

さらに詳しく述べるならば、担体として陽イオン交換樹
脂たとえばダウエックス−５０Ｗ（ダウ・ケミカル社製
、米国）、アンバーライトＩＲ−１２０，２００（ロー
ム・アンド・ハース社製。

米国）、ダイヤイオン５Ｋ１１６（三菱化成工業株式会
社ｆＡ）などを用いると炉液中の抗劇性物質は吸着され
、塩類おるいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などで溶
出される。あるいは陽イオン交換分子ふるい（！′＋：
樹脂たとえばＣＭ−セファデックス（ファルマシア・フ
ァイン・グミカμズ１１゜スウェーデン）などの担体に
抗生物質を吸着せしめ、塩類あるいは酸含有の水溶液あ
るいは緩便Ｓ液などによって溶出させることが出来る。

これら溶出液中の塩類１着色物質などを取シ除くために
はクロマトグラフィー用活性炭（武田典品工業株式会社
製）あるいは吸着性樹脂たとえばダイヤイオン五Ｐ−２
０（三菱化成工業株式会社製）、アンバーフィトＸＡＤ
−ＩＩ（ローム・アンド・ハース社製、米国）などが有
利に用いられる。分画された溶出区分は濃縮、凍結乾燥
などの工程金経て、粉末化される。かくして得られた粉
末の純度が惑い場合さらに精製するためには高速液体ク
ロマトグラフィー法が有利に利用はれる。用いられる担
体としてはたとえばＴ　Ｓ　Ｋゲ／Ｌ／（東洋ＲＶ　ｉ
”ｆｓ株式会社製）、ＹＭＣゲ／Ｉ／（山村化学研究新
製）などが挙けられ、移′＃Ｊ層としてはメタノ−／Ｉ
／するいはアセトニトリルなどと無機塩含有水溶液ある
いは緩衝液などとの混合液が用いられる。なおＴ　Ａ　
Ｈ−５４７は鉱酸たとえば塩酸、硫酸、リン酸などある
いは有機酸たとえば蟻酸、酢酸、麹酸などの塩として単
離される。

後述の実施例２で得られたＴＡＮ−５４２・二塩酸塩の
物理化学的性質はつき゛の通シである。

＜　Ｉ　＞ＴｈＮ−５４７ｈ−二ｍｒｑＱ塩：１）外観
：白色粉末 水中） ３）分子量測定値：８１ＭＳ法、ＣＭ＋Ｈ）”　８８ ４）推定分子式：Ｃ２６Ｈ４□Ｎ９０□、Ｓ・２ＨＣＩ
・Ｃ，３８，２９±２．０　Ｇ、３８．３３Ｈ，６，４
８±１．ＯＨ，６，０６ Ｎ、１５．１１±１．５　Ｎ、＋５．４７０．２７．４
９ ３．４．１２±１．ＯＳ、３．９４ Ｃ１，８，７１±１．５　Ｃ１，８，７０※１．試料Ｆ
ｉ５酸化リンす、室温で１５時間。

減圧乾燥したもの。※２．３モルの付着水全台むとして
計算。

６）紫外部吸収（ＵＶ）スペクト／ｌ／：壽ＩＮけ哄ρ
−λ２２６０±２ｎｍ（Ｅ１％＝１１７±２０）Ｏ ｍａＸ　１４ｍ ７）円二色性（ＣＤ）スペクト／Ｌ／：　Ｏ （θ　）　”　＋２９５００±５０００２６０±２ （−ニーのコツトン効果；＋：＋のコツトン効果） ８）光外部吸収（工Ｒ）ヌベク）／Ｌ／：臭化カリウム
中の主な波数（１）はつぎの通りである。＄２１菖冬−
照。

３４２０、　３２５０．　３０８０．　３００口。

＋７７５．１７３０，１６７０．１５１０゜＋４５０．
１４００．１２６０．Ｎ６５゜＋０６０．　９８０．　
８ｉ、５１０ ９）核磁気共鳴（”’Ｃ−ＮＭＲ）スペクトノソニー屯
水中、１００ＭＨｚ　でのシグナ／ｌ／は少くとも下記
に認められる（δｐｐｍ　）。

＋７９．８４．　１７７．４２．　１７６．０５．　＋
７３．７５゜１７１．１２．　１６６．４０．　１６２
．１６．　１５９．６２゜１３４．８６．　１１７．４
０．　７９゜６４．　γ２．６６゜６γ、＋６．　６５
．９４．　５７．３４．　５６．３＋。

５２．０３．　４３．５９．　４＋、２３．　３７．３
６゜３２．８０．　２８．９８．　２８．６０．　２７
．５０゜２３．５０．　１９４５ １０）アミノ酸分析値：定ｂ１；点塩酸（５，５Ｎ−Ｈ
Ｃｌ）中、ＩＩＯ”Ｃ，１５時間加水分解した試料。

アラニンｉ０．８６モル α−アミノ−アジピン酸ｉ０．９４モル溶媒系、アセト
ニトリｉｖ：３％硫酸アンモニウム（１：Ｉ）、Ｒｆ＝
０．５２ １２）高速液体クロマトグラフィーＣＨＰＬＣ）：」１
Ｉ体、　Ｙ　？Ｊ　ＣパックＡ３１２（山村化学研究新
製）、移動層、２％メタノ−／Ｉ／／１０．旧Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ３、０２，２ｍｌ　／ｍｉ、ｏ。

Ｒｔ＝５．８（ｍｉｎ） 以下に記す物性はＡ、Ｂ、Ｃ成分（２塩酸）共同じ。

１３）溶解性： 易溶：水、含水アセトン、含水アルコール難溶ニジメチ
ルスルフォキサイド、メタノール、アセトン、酢酸エチ
ル １４）呈色反応： 陽性：ニンヒドリン、ブレイブ・リーバツク、坂口反応 陰性：工−ρリッと、パートン反応、過マンガン酸カリ
ウム １５）安定性： 酸性および塩基性水溶液中で不安定、中性水溶液中でや
一不安定 百６）物質の区分： 両性物質（２塩酸塩は中性物質） （ｉｉ）ＴＡＮ−５４７Ｂ・二塩酸塩 １）外月：白色２づ〕末 ２）比旋光度：〔σ〕２５＋　５４　、８°　Ｌ１５゜
（Ｃ＝０．５６．水中） ３）分子岱情り定値：　５ｒｕｓ法、　（Ｍ＋Ｈ）γ５
９４）推定分子式：　Ｃ２９Ｉ（４６Ｎ］０Ｏ１２Ｓ　
−２１（Ｃ１−（３Ｉ（２０） ※１　※２ ５）元素分析値部）：　実測値　計↓；１．’　ｆ＋＊
Ｃ，３９，０２±２．ｏ　ｃ、３９．３２Ｈ，６，５１
±１．ＯＬ６．１４ Ｎ、　１５．４６±１．５　Ｎ、＋５．８１０．２７．
０９ Ｓ、３．５０±１．ＯＳ、３．６２ Ｃ１，８，２７±１．５　Ｃ１，８，０１？Ｉｉ＋、※
２．Ａと同じ条件 ６）ｔｒｗスペクト／Ｌ／：耳３ｈＩ、タ遇町λＨ２Ｏ
２６０±２ｍｍ（Ｅ”％−１１３±２０）ｍａＸ　１ａ
１ ７）ＣＤスペクト／Ｉ／： ２０ Ｃｅ　’：Ｊ　２２Ｂ１２　３３６００±５０００およ
び（ｅ　）”０＋３０７００±５０００ ２６０±２ ８）工Ｒスペクト／Ｌ／：臭化カリウム中の主な波゛　
数（１１）はつぎの通りである。３！−り開部ぐ、。

３３７０、　３２６０．　３２２０．　３０８０゜３Ｑ
Ｏ０，１７Ｂ（１，１７３５，１６７５゜＋５３５．　
１４６０．　１４＋０．　１２６０゜＋１７０．　１０
７０．　８８０．　８００゜５３０゜ ９　）　１３ｃ　−Ｎ　Ｍ　Ｒヌベクト／Ｌ／：重水中
、１００ＭＩＩＩＺ　でのシグナルは少くとも下記に認
められる（δｐｐｍ　）。

１７９．７８．１７７．９２．１７６．８８．１７６．
１５゜１７３．４９．１７０．７７、１６６．４１．１
６２．２５゜＋５９．５９，１３４．３９．　１１８．
６Ｌ　７９．６６゜７２．９１．　６７．１１．　６６
．０４．５６．９５゜５６．０３．　５３．１４．　５
＋、７２．　４３．６１゜４＋、５２．　３７．３２．
　３７．６２，２９．２３゜２８．６６、　２γ−５０
＝　２３−４７＋　１９．５５゜１９．５１ １０）アミノ酸分析値：（Ａと同じ条件）アラニン：２
．１モル ａ−アミノ−アジピン酸：１．１モル ＋１）ＴＬＣ：（Ａと同じ条件） Ｒｆ　−０、５５ １２）ｕｐｙ、ｃ　：　＜　ｈと同じ条件）Ｒｔ−６，
８（ｍｉｎ＞ （ＩＩＩ）ＴＡ　１丁　−５４７Ｃ・　二基１１り２塩
１）外観−白色粉末 ２）比旋光織：（α）ｉ５＋２５．ｌ°±１５°＜ｃ＝
０．４９．水中） ３）　分子ｆｆ１６１１］定値：　ｓｘＭｓ法、（Ｍ＋
Ｈ＞＋８３０４）推定分子式：　Ｃ３２Ｈ５１Ｎよ、０
１３　Ｓ・２ＨＣ’Ｉ−・Ｃ３Ｈ２０） ５）元素分析ｇ１（％Ｊ：　実測＠１＊１　計算値８２
Ｃ，３９，６１±２．０　Ｇ、４０．Ｉ７Ｈ，６，５４
±１．ＯＨ，６，２２ Ｌ１５．９２±Ｌ５　Ｎ、１６．１０ ０．２６．７５ Ｓ、３．４１±１．０　８．３．３５ ａ１．．６．４１±１．５　ＣＬ、７．４１※１．※２
．Ａと同じ条件 ７）ＣＤスペクト／＋／： ８）工Ｒスペクトｌｖ：臭化カリウム中の主な波数（ｃ
ｌｓ−”）はつぎの通シである。耳ｔｒ４参Ａσ−１３
３５０、３２５０，３０７０，３００口。

２９５０、＋γ８０．　１７３５．　１６６５゜＋５３
０．　１４５０．　１４００．　１３００゜１２５０、
　１＋６０．　１０６０．　７９０゜５２０゜ ９　）　′３Ｃ−Ｍ　Ｍ　Ｒスペクト／Ｉ／：重水中、
１００Ｍ■２でのシグナＩｖＶｉ少くとも下記に認めら
れる（δｐｐｍ　）。

１７９．７９．１７８．０４．　＋１７．４７．１７７
．３８゜１７６、＋２．１７３．４７．１７１．０８．
　＋６６．３２゜１６２．０７．　＋５９．５２．１３
５．０　、１１７．２ｒ。

７９．５７．　７２．８６．　６７、＋０．　６５．８
８゜５７．２８．　５５．８γ、５３．０γ、５２．３
５゜５＋、６２．　４３．５２．　４＋、５２．　３７
．２γ。

３２．７３．　２９．２５．　２８．４８．　２７．３
６゜２３．４＋、＋９．４５．　＋９．４２．　１９．
２５１０）アミノ酸分析値：（Ａと同じ条件ンアラニン
：３．１モμ α−アミノ−アジピン酸＝１．１モｐ Ｉｆ）ＴＬｃ、（人と同じ条件） Ｒｆ＝０．６０ １２）ＨＰＬＣ：　（Ａと同じ条件） Ｒｔ＝１１．７（ｍｉｎ） 次にＴＡＮ−５４７の生物学的性状について述べる。Ｔ
ＡＮ−５４７（各二塩酸塩）の各種微生物に対する抗菌
メベクトルは第１表に示すとおりでちる。

（注）：ｌ！！　培地：パクト・アンテイビオテイツク
メケウム３（ディ７コ）； １７．５Ｆ、パクト・イーヌ トエキストラクｌ−（ディフコ）； ５Ｆ、パクト・アガー（ディ フコ）；２（１，蒸留水；１ （１、ｐＨ７，０゜ 接種菌量：約Ｉｎ　／ｕ／菌液の１白金耳景を用いた。

ＴＡＮ−５４７のβ−ラクタメースに対する安定性を第
２表に示す。対照に較べて、ＴＡＮ−５４７Ｇ成分（二
塩酸塩）は極めてβ−フクタメースに列して安定である
。

１に−７Ａ）Ｊ−ｒダ２めマラス、池、イ、注直”−ｈ
’す豊々ｈ劫光１１／￥７２未１毫本１ヒＬリー（”４
ろ・β　ｌＸ−１”　１７　−！ 第３表 ＣＰ　Ｚ　：　ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ、　ＣＢＲ：
　ｃｅｐｈａ、１ｏｒｉｄｉｎｅＰ　ＣＧ　：　ｂｅｎ
ｚｙｌｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎなお、上記第２表において
、エッシェリヒア・コリＴＮ７１３ｍ生のβ−ヲクタメ
ーヌおよびクレグシエフ・オキシトーカＴＮ　＋　７１
９ｆｎ生ｔｖβ−フクタメースに対する安定性は、ＰＣ
Ｇのそれらに対する安定性を１００として表わした。ま
た、セラチア・マμセッセンヌＴＮ８１産生のβ−ラク
タメーヌおよびプロテウス・ブルガリスＧＭ４４１３産
生のβ−ヲクタメースに対する安定性は、ＣＥＲのそバ
に対する安定性を１００として表わした。

抗生物質ＴＡＮ−５４７Ｇ”二塩酸塩’ｅ１ｆ／ｋｔｙ
となる量をマウスに皮下投与しても死亡例は認められな
かったので、抗生物質ＴＡＮ−５４７は低ン１ｊ性と考
えられる。

これらのデータから明らかなように、抗生物質ＴＡＮ−
５４７はβ−ラクタメーヌ産生株を含むグラム陽性菌お
よびグラム陰性菌に対して抗菌性を示し、１１０乳動物
などに対する毒性が低い抗生物質である。したがってＴ
ＡＮ−５４７はｌ’＋）ｉ乳動物（例、マウス、ラット
、ウサギ、犬、ヒト）のｆｆ＋＋１菌感染症の治療に用
いることが出来る。

ＴＡＮ−５４７をたとえば＃Ｉｒ１４感染症の治療剤と
して用いるには、たとえばＴＡＮ−５４７に注射剤とし
て非経口的に上紀噛″ｔｔ動物の皮「または筋肉内に約
１〜５０１１９７に９　／日、好ましくは約５〜２０１
１９７に９７日投与する。また経口剤として、抗生物質
ＴＡＮ−５４７をカプセμ剤とし、ＴＡＮ−５４７とし
て約１〜１００Ｗｌ／ｋｙ／日好ましくは約５〜５０ダ
／＃７日投与する。

また、ＴＡＮ−５４７は、殺菌剤として用いることがで
きる。たとえばＴＡＮ−５４７を約０．０１〜０．１Ｗ
／Ｖ％の濃度で蒸留水に溶解した液剤、またはＩＦあた
りＴＡＮ−５４γを約０．２〜２０ダ、好ましくは約１
〜１０ｑ含有する軟膏剤として、上記哺乳動物の手１足
、眼、耳などに塗布することにより、これらの部位の殺
菌、消壽に用いることができる。

抗生物質ＴＡＮ−５４７はまた新しい医薬品の合成中間
体としても極めて有望な化合物である。

以上述べた諸性質から、ＴＡＮ−５４７はセフェム系抗
生物質と考えられる。しかしながら、分子式が０２６Ｈ
４１Ｎ９０１１Ｓ・　Ｃ２９Ｈ４６’１ＯＯ１２Ｓ　ま
たはＣ３２Ｈ５□Ｎ□、Ｏ□３Ｓであるセフェム系抗生
物質は知られていないので、ＴＡＮ−５４７は新規化合
物と考えられる。

次に実施例金挙げて本発明をさらに具体的に説明する。

なお、パーセントは、特にことわシのないかぎり重量／
容量％を示す。

実施例１ 栄養寒天斜面上に生Ｙ１させフ仁リゾバクター・ラクタ
ムゲヌヌＹＫ−９０（ＩＦｏ　１４２８８゜ＦＥＲＭ　
Ｐ−７２’１２）の菌株を、グルコース２％、ソμグμ
・スターチ３％、生大豆粉１％。

％を含有する水溶液（ｐＨ７、０）に沈降性炭酸力μグ
ラム０．５％を添加した培地４０ｒｓｌ’ｃ信む２００
ｍ？容三角フラスコ３木に接種して、２４℃で４８時間
振盆培養しその培養物を種菌とする。

次に、デキストリン３％、生大豆粉１．５％。

コーン・グルテン・ミーＡ／１．５％、ポリペプトン（
大五栄養化学工業株式会社）０．２％、チオ硫酸ナトリ
ウム０．１％を含有する水溶液（ｐｎ６．５）に沈降性
伏酸力μグラム０．５％を添加した培地４０００ｒｑｔ
を２００＊ｔの三角フヲヌコに各々４Ｏｔｓｌずつ分注
し、１２０°Ｃ９２０分間滅菌したものに種菌をＩｔｔ
ｔｌずつ接種して、２４℃で、２００回転／分の条件下
で７２時間振盪培養した。

上記で得られた培養液（２０６）を７％修麹酸ｐＨ３，
５に調整後、ハイフロヌーバーセ／Ｉ／（ジョンズ・マ
ンビル・プロダクト社製、米国）を加え、通過してｐ液
（１６ｅ）を得た。ｒ液を痺６．８に調整後、活性炭（
１（１）を充填したカラムを通過させた。水（３１）で
カラムを洗浄後、抗生物１ＴＡｉ−５４７ｅ８％イ／　
７”夕／　−／ｌ／　−Ｎ／２００塩酸（８ｅ）で溶出
した。溶出液を１．８ｅまで濃縮後、濃縮液をアンバー
ライ）ＣＧ−５０（Ｔｉ”ｍ、１．＋ｇ＞＜ローム・ア
ンド・ハース社製。

米国）のカラムを通過させた。水（４，５Ｎ）でカラム
を洗浄後Ｎ／＋００　塩酸（９ｅ）で溶出分ｊ＋ｉｉ　
ｌ、た。有効区分を集めて濃縮し、ｍ輸液をｐＨ７，１
Ｊ１４整後、ダイヤイオンＨＰ−２０（５０−１００メ
ツシユ、０．５ｇ）（三菱化成工業株式会社製）を充興
したカラムを通過させた。０．０　＋Ｍリン酸ＲＫ液（
ｐＨ７、３、１、５＃　）テカラムｅ洗ｉ）後、０．０
１ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ３，５，５ｅ）で溶出分画し
た。有効区分金集めて、溶出液をｐＮ７．２に調整後、
活性度（１００ｍ？）を充填したカラムを通過はせ、水
（３００ｒｌ）でカラムを洗った後、８％インブタノー
ル−Ｎ／２００榔酸（６ｊｌＯｓｙ／）で溶出した。溶
出液を濃縮後、濃縮液をＣＭ−セファデックスＣ２５（
Ｎａ１７，２０゜ｆｆ／）（）７／Ｌ’、マシア・ファ
イン・ケミカｔｖ社製。

スエーデン）を充填したカラム全１朗過させ、０．０２
Ｍ−食塩水（６ｅ）で溶出分画した。各分画を液体クロ
マトグラフィーの分析に付し、ＴＡＮ−５４７Ａ、Ｂ、
Ｃｋ生成分とする分両全それぞれ集めた。

ＴＡＮ−５４７Ａ主成分分画をｐＨ７，２に調整後、活
性炭（１０ガｊ）を充填したカラムを通過式せ、水Ｃ３
０Ｍｔ）でカラムを洗った後、８％イソゲタノール−Ｎ
／２００塩酸（７０ηｔ）で浴出した。

溶出液を満縮後、凍結乾燥してＴＡＮ−５４７Ａ二塩酸
塩の′ｍ粉末（６１増）が得られた。

ＴＡＮ−５４７Ｂ　、Ｃの主成分分画も同様の操作を行
ない、ＴＡＮご５４７Ｂ二塩１１Ｑ塩の粗粉末ｃ　１４
４Ｆｊ４）、Ｔｈｙ−５４７ｃ二塩酸塩の粗粉末（２２
６ダ）が得られた。

ＴＡＮ−５４７に塩酸塩の粗粉末（６１ダ）を担体とし
てＹＭＣ−ＧＥＬＯＤ８ニー１５（山村化学研究新製）
を用いた分取用高速液体クロマトグラフィーに付し、０
．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ３，０）で溶出分画した。

６分Ｉｓを液体クロマトグラフィーの分析に付し、単一
ピークを示す部分を集めた。有効区分’ｅ　ＩＮ　Ｎａ
ＯＨ″ｒｐＨ７，５に調整後、ＩＮＭＣＩ　テｐＨ３、
ＯＫｖＪ調整シ、活性炭（５＃ｙｔ）を充填したカラム
を通過させ、水（２５ｃｙ／）でカラムを洗った後、８
％インゲタノール水（２５ｍｌ）で溶出した。溶出液を
′１ｆＪ縮後、Ｍｔ結乾燥しでＴ　Ａ　Ｎ　−５４７Ａ
二塩酸塩の白色粉末（４０１ｑ）が得られた。

ＴＡＮ−５４７Ｂ　、Ｃ二塩酸塩の粗粉末も同様に分取
用高速液体クロマトグラフィーに付し、ＴＡＮ−５４７
Ｂ二塩酸塩の白色粉末（９６１ダ）。

ＴＡＮ−５４７Ｃ二塩酸塩の白色粉末（１１２ツ）が得
られた。

【図面の簡単な説明】

第１図、第３図および第５図は、抗生物質ＴＡＮ−５４
７Ａ・二塩酸塩、Ｂ・二塩酸塩およびＣ・二塩酸塩の葉
外部吸収スベク）／Ｌ’ｉそれぞれポし、第２図、＠４
図および第６図は、抗生物質ＴＡＮ−５４７Ａ・二塩酸
塩、Ｂ・二塩酸塩およびＣ・二塩酸塩の赤外部吸収スペ
ク）／ｌ”ｔそれぞれ示す。 ＄１図 表ｊｆ、（面） 第３図 速、食（ｎｍｌ ＄５図 城＋　（ｎｍ　） 嘲剖癲２ 丁−ｂに　十市　−１１モ　゛）フ−Ｙ（自発）昭和５
９年１１月；３０口 １　”Ｊ＋件の表示 昭和５８年特３１願第１７４８９７シ」−２発明の名称 抗生物質′１′八Ｎ−５４７、その製ａ　７１、おにび
微生物３　補正を４′る古 １１４１１との関係　特許出願人 １１−所　大阪市東区道修町２丁１１２７番地名称　（
２９３）　武１１．１薬品−に業株−（会社代表前　倉
　林　ｆｆ　四　部 ４、代理人 住所　大阪市淀用区−１−〕本町２　’Ｉ’ｔ＝１１７
　ａ　８５シー、’６、補止の内容 （１）明細は第１１頁第６行の１寄託されている３、ｊ
を「寄託され、該寄託はブタペスト条約に括−ノく寄託
に切換えられて、受託番”ｉ　Ｆ　Ｉ’；　Ｉｔ　ＭＩ
ＬＰ−５７５として同研究所（＋”１０）に保’ｌ′ｊ
されている。１に力１１゛４−る。 （２）同；！１第１６頁第＋ｓｔｉの！実施例２．・金
１実施例１１に訂ｉｆ（°ｄる。 （：（）同；ＩＹ第１６頁第１５行のＩＴ八へ−５４２
１４ｉ’ｒＡ　Ｎ　５４７　、Ｉ　ｉｊ、ｔｌ’＋ＩＥ
４°ろ、。 （４）同、１）第＋９ｒｔ第１：３行の１２塩酸１の後
に１４ｉ４挿入ずろ１゜ （５）同１１）第１９　ｔ’ｉ第２０行の１−ブレイブ
１を１タレイグ１に′、１’ｉ１４’る。 （６）同、１１第２１１’ｆ第４（ｊ（１’）：ＩＩ％
′１をｌ　［ｖｌ　１．１　；ｉｆ’　ｄ・する、。 （７）同１１）第２４頁第１８？１と第１９（」の間に
次υ）記載を挿入４−る、。 ［以上述べた性質から、抗生物：ｔｔｒΔＮ　５・１７
の構造式は、一般式 さｌｌ３ １式中、ｌ（は水素、アラニルまたはアラニル−アラニ
ルを示４゛３、［て表わされろと考えられる。 なお、１．記入（丁）中、アラニール（Ｊ式？１１１．
−にＩＩ−ＧＯで、 ０１１゜ アラニル　アラニル（」式 ％式％ 表イー］される。　よノこ、　′■゛　ΔＮ　５４７Δ
のイ、（７ｊ貴人（３式（１）においＣＲか水素てΔ９
す、′１゛ΔＮ５４７１、（のそれは式（１）においζ
Ｉ（がアシールごあり、１゛ΔＩ刈　５４７Ｃのそれ（
」式（１）において１セがアラニール−アラニルである
。１（８）同１１）第２７頁第１５行の１第２表」を１
第３表１に言１’　１Ｌ４−る。 （９）同書第３０頁第６行のＩ＋’　７２４７１を１１
３Ｐ　−−５７５Ｊに１；Ｔ１４る１、 ７　添イ・ｊ’　ｆｉｌ類のト１ｉ４ （１）原イず託についての受託証１許木　１　通−以　
１゜

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 り、円二色性ヌベクトルが２２８±２ｎｍで−の、２６
   ０±２ｎｍで十のコツトン効果をそれぞれ示し、分子式
   がそれぞれＣ２６Ｈ４□Ｎ９０□１”ＩＣ２ＤＨ４６Ｎ
   １００１２　”’・　Ｃ３２Ｈ５１Ｎｌ１０１３Ｓであ
   るゞ７１ム系抗生物質ＴＡＮ−５４７Ａ、１３；Ｃまた
   はそれらの塩。 （２）リゾバクター属に属する抗生物質ＴＡＮ−５４７
   Ａ、ＢおよびＣの一種または二種以上を生産する能力？
   有する微生物を培地に培養し、培養物中に該抗生物質を
   生成蓄積せしめ、採取することを特徴とする抗生物質Ｔ
   ＡＮ−５４７Ａ、Ｂ、Ｃまたはそれらの塩の製造法。 （３）オキシダテイプーフアーメンタテイグテヌトが非
   分解型で、ショ糖および乳糖からの酸およびガヌを生成
   せず、かつ硝酸塩の還元能を有する新菌種リゾバクター
   ・ヲクタムゲヌス。