JPS615792A - 抗生物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 葭泉五Δ捗匪庄」 本発明は、抗菌剤などとして有用な新規抗生物質、その
製造法およびその製造に用いることのできる微生物に関
する。

従来の技術　　・ 従来バクテリアが産生ずる細胞壁合成阻害作用を示す抗
生物質として、スルファゼメンおよびイソスルファゼメ
ンが知られており（Ｎａｔｕｒｅ、　２８９巻、５９０
〜５９１頁、　１９８１年）、その後、ＳＱ　２６１８
０゜２６７００、２６８２３．　２６８７５．２６９７
Ｏ、２６８１２なども発見されている（　Ｎａｔｕｒｅ
、　２９１巻、　４８９〜４９１頁、　１９８１年）。

これらは主としてダラム陰性閑に対して抗菌性を示す抗
生物質として知られている。また、最近ＳＱ　２８３３
２．２ｇ５０２．２８５０３などの報告も見られる（Ｊ
、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、　３６巻、　１２４５〜
１２５１頁。

１２５２〜１２５７頁、　１９８３年）。

発明が解決しようとする問題点 細菌によって惹起される疾病は抗生物質投与による治療
法の発達によってがなり克服されている。

しかし、従来の抗生物質を長期あるいは大量に投与する
ことによる起因菌の変化（菌交代現象）あるいは耐性菌
の出現（耐性化現象）は現在の感染症治療医学分野で大
きな問題となっている。この問題を克服するために当分
野では常に新規骨格を有し、新規生物活性を示す抗生物
質あるいはそれらの合成のための中間原料が求められて
いる。

問題点を解決するための手ｐ 本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
の微生物を土壌より分離し、その産生ずる抗生物質を探
索したところ、ある種の微生物が新規な抗生物質を産生
ずること、該微生物がエンペドバクター属およびリゾバ
クター属に属する新菌種であること、該微生物を適宜の
培地に培養することによってグラム陽性細菌およびダラ
ム陰性細菌に対して抗菌力を示す抗生物質を培地中に蓄
積しうろことなどを知り、この抗生物質を単離し、その
物理化学的および生物学的諸性質から、当該抗生物質が
新規な抗生物質であることを確かめ、これを抗生物質Ｔ
　Ａ　Ｎ　−５８８と称することにした。

本発明者らは、また、上記抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ−５８８
が分子中にＮ−アセチル基およびカルボキシ基を有する
こと、該アセチル基を脱離することができることを見い
出した。

さらに、本発明者らは、エンペドバクター属菌およびリ
ゾバクター属菌が、上記抗生物質ＴＡＮ−５８８のＮ−
デアセチル体を生成蓄積させ得ること、アシネトバクタ
−属菌と、上記抗生物質ＴＡＮ、−５８８および／また
はそのＮ−デアセチル体を生産する能力を有するエンペ
ドバクター属菌またはリゾバクター属閑とを混合培養す
ることにより、抗生物質ＴＡＮ−５８８のＮ−デアセチ
ル体を、混合培養しない場合より多量に生成蓄積せしめ
ることができることを見い出した。

本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究した
結果、本発明を完成した。

本発明は、［＋］、抗生物質ＴＡＮ−５８８，そのノく
ラニトロベンノルもしくはベンツヒドリルエステル体、
またはこれらのＮ−デアセチル体またはそれらの塩。

［２］、エンペドバクター属またはリゾノくフタ−属に
属し抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８および／またはその
Ｎ−デアセチル体を生産する能ツノを有する微生物を培
地に培養し、培養物中に抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８
および／またはそのＮ−デアセチル体を生成蓄積せしめ
、これを採取することを特徴とする抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ
　−５８８および／またはそのＮ−デアセチル体または
その（それらの）塩の製造法。

［３］、ＤＮＡのＧＣ（グアニン＋ントンン）含量が７
０％をこえるエンペドバクター・ラクタムゲヌス。

［４］、白色のコロニーを形成し、０−Ｆ（オキシダテ
ィブ−ファーメンタティブ）テストが非分解型でかつ無
機窒素源の資化性を有さないリゾバクター・アルプス。

［５］、抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８またはその塩を
脱アセチル化することを特徴とする抗生物質ＴＡＮ−５
８８のＮ−デアセチル体またはその塩の製造法。

［６］、抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８またはその塩に
ペンツヒドリル基を導入し得る化合物を反応させ、抗生
物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８のベンツヒドリルエステル体
とし、次いでこれを脱アセチル化反応に付すことを特徴
とする抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル
体のベンツヒドリルエステル体の製造法、および ［７］、エンペドバクター属またはリゾバクター属に属
し抗生物質−Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８および／またはその
Ｎ−デアセチル体を生産する能力を何する微生物と、該
微生物と混合培養することにより該微生物に抗生物質Ｔ
　Ａ’　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体を蓄積させる
能力を有するアシネトバクタ−属に属する微生物とを培
地に混合培養し、培養物中に、抗生物質ＴΔＮ　−５８
８のＮ−デアセチル体を生成蓄積せしめ、これを採取す
ることを特徴とする抗生物質ＴＡＮ−５８８のＮ−デア
セチル体またはその塩の製造法である。

なお、本明細書においては抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８
８を単にＩＴ　Ａ’　Ｎ　−５８８Ｊと称することもあ
る。

本発明方法で使用される抗生物質Ｔ　ＡＮ　−５８８お
よび／またはそのＮ〜デアセチル体の生産菌としては、
エンペドバクター（Ｅ　ｍｐｅｄｏｂａｃｔｅｒ）属ま
たはリゾバクター（Ｌ　ｙｓｏｂａｃｔｅｒ）属に属し
、抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８および／またはそのＮ
−デアセチル体を産生ずる能力を有するものであれば如
何なる微生物でもよい。エンペドバクター属に属する生
産菌の例としては、たとえば新菌種エンペ）・バクター
・ラクタムゲヌス（Ｅ　ｍｐｅｄｏｂａｃｔｅｒｌａｃ
Ｌａｍｇｅｎｕｓ）があげられる。その具体例としては
、本発明者らが１」本国島根県益田市の土壌より採取し
たエンペドバクター・ラクタムケヌスＹＫ−２５８株（
以下、ｒＹ　Ｋ−２５８株」と称することもある。）が
あげられる。

Ｙ　Ｋ　−２５８株の菌学的性状は下記のとおりてあ　
　′る。

（ａ）形　態 肉汁寒天斜面上で２４℃、５日間培養後の観察ては、細
胞は直径Ｏ、４〜Ｏ、６μｍ、長さ２０〜３０μｍの長
稈状て、１２〜３０μｍのフィラメント状を呈すること
しある。鞭毛は認められず、運動性も認められない。胞
子を形成せず、またダラム染色は陰性で、抗酸性を示さ
ない。

（ｂ）各種培地上での生育状態 ２４℃で培養し、１ないし１４日間にわたって観察した
。

■肉汁寒天平板培養・コロニーは半透明なうす黄色で、
円形、表面は頭状、周縁は金縁状である。拡散性色素は
生成しない。

■肉汁寒天斜面培養、良好な拡布状の生育を示し、淡黄
色ないしこはく色を呈する。

■肉汁液体培養：混副状に生育し、沈澱を生し、菌膜を
形成する。

■肉汁ゼラヂン穿刺培養：主として」一部で生育し、噴
火口状に液化する。液化活性は比較的弱い。

■リドマス・ミルク、リドマスの還元、ペプトン化およ
び凝固いずれの活性も認められない。

（ｃ）生理的性質 ■硝酸塩の還元− ■脱窒反応・− ■ＭＲ（メチルレッド）テスト、− ■ＶＰ（フォーゲス・プロスカラエル）テスト。

■インドールの生成− ■硫化水素の生成（ＴＳＩ寒天および酢酸鉛紙）■デン
プンの加水分解ニー ■クエン酸の利用（コ−ゼル、クリステンセンおよびシ
モンズの各培地）、十 ■無機窒素源の利用 １）硝酸カリウム　− １１）硫酸アンモニウムニー ［株］色素の生成（キングＡ、Ｂおよびマンニット酵母
エキス寒天の各培地）、拡散性色素の生成は認められな
い。

■ウレアーゼニー ■オキンダーゼ、＋ ■カタラーゼ、− ■生育の範囲 ｉ　）ｐＨ：ｐＨ５，４〜８．５で生育するが、最適ｐ
１１は５８〜６，６゜ 培地・グルコース０８１％、イーストエキストラクトＯ
、０１％、硫酸アンモニウム０１％。

食塩Ｏ、１％、硫酸マグネンウ”ム（７水塩）０゜０５
％、リン酸バッファーＯ、１Ｍ（別滅菌）。

ｉｉ）温度：２０〜３２℃で生育するが最適４晶度は２
４〜３１　℃。

培地肉汁液体培地。

■酸素に対する態度：好気的 ＠ｌＯ−・Ｆ（オキソダテイブーフアーメンタテイブ）
テスト［ヒユー・レイフソン（Ｈｕｇｈ−Ｌ　ｅｉｆｓ
ｏｎ）法］：非非分梨型 Ｏ糖からの酸、ガスの生成および利用性：（ＪＩＸ″″
Ｆ＃匂） 酸　　　　ガス　　　利用性 （ペプトン水）（ペプトン水）（デーヒス培地）し−ア
ラビノース　　−　　　　　　−−Ｄ−キンロース　　
　±　　　　　　−−〇−グルコース　　　− −＋ Ｄ−マンノース　　　−−＋ Ｄ−フラクトース　　−−→− Ｄ−ガラクトース　　−　　　　　　−−麦　　　芽　
　　糖　　　　−−１＋ シ　　　　ョ　　　　糖　　　　　　−−〜乳　　　　
　　　糖　　　　− トレハロース　　　　−　　　　　　−十り〜ソルビッ
ト　　　−　　　　　　−−Ｄ−マンニット　　　−−
− イノジット　　　　　　−　　　　　　−−グリセリン
　　　　　−　　　　　−−デンプン ーー十 ＠ＤＮＡのｃｃ（グアニン→−シＹンン）含量ニア４４
％±１．５％（Ｔｍ法） ■多糖の分解能。

カルボキンメチルセルロース、＋ コロイダルキチン＋ アルギン酸ナトリウム、− ［相］アクチノマインンに対する感受性：耐性以上の菌
学的性状を存するＹ　Ｋ　−２５８株を、バーシーズ・
マニュアル・オブ・デターミネイティブ・　バクテリオ
ロノ−（Ｂｅｒｇｅｙ’　ｓ　　Ｍａｎｎｕａｌｏｆ　
　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　　ＢａｃＬｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ）第８版−およびインターナショナル・ジャーナ
ル・オブ・ンステマテイック・バクテリオロノ−（Ｉｎ
［ｅｒｎａ−ｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏ−ｇｙ）
第３０巻２２５〜４２０頁（１９８０年）、第３２巻１
４６〜１４９頁（１９８２年）に記載の種と照合すると
、淡黄色のダラム陰性桿菌で、運動性を有さず、好気的
で、糖からの酸、ガスの生能がなく、ＤＮＡのＧＣ含量
か高いことから、フラボバクテリウム属に属するとする
のが妥当である。しかし、これまでに記載されたフラボ
バクテリウム属の菌種は異質な種が混在していることが
細菌分類学の見地から指摘されてきており、近年、フラ
ボバクテリウム属の定義の修正がインタ−ナノヨナル・
ンヤーナル・オブ・ノステマテイノク・ハクテリオロノ
ー第２９巻、４１６〜４２６頁（１９７９年）でおこな
われた。当該文献およびアニコアル・レビュー・オブ・
マイクロバイオロジー（Ａｎｎｕａｌ　　Ｒｅｖｉｅｗ
　　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ−１ｏｇｙ）３７巻、２３
３−２５２頁Ｃ１，９８３年）によれば、Ｙ　Ｋ　−２
５８株はフラボバクテリウム属よりも、むしろエンペド
バクター属に属するとした方がより妥当である。しかし
、ＤＮＡのＧＣ含量が７０％を越える値を示す種の記載
は見当らない。そこてＹ　Ｋ　−２５８株は、新菌種に
属する株であると認め、該新菌種をエンペドバクター・
ラクタムゲヌス（Ｅｍｐｅ−ｄｏｂａｃｔｅｒ　　ｌａ
ｃｔａｍｇｅｎｕｓ）と命名した。

上記エンペドバクター・ラクタムゲヌス　ＹＫ−２５８
株は昭和５９年（１９８４年）２月２０日に財団法人発
酵研究所（ＩＦＯ，日本国大阪府大阪市淀川区十三本町
２丁目１７番８５号）にＩ　Ｆ　Ｏ１４３２２として寄
託されている。また本微生物は、昭和５９年（１９８４
年）３月２６日に日本国通商産業省工業技術院微生物工
業技術研究所（ＦＲＩ、日本国茨城県筑波郡谷田部町東
１丁目１番３号）に受託番号ＦＥＲＭＰ−７５５８とし
て寄託され、該寄託はブタペスト条約による寄託に切換
えられてＦＥＲＭ　　ＢＰ−６９９としてＦＲＩに保管
されている。　　〜 本発明方法で使用されるリゾバクター属に属する抗生物
質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８および／またはそのＮ〜デアセ
ヂル体の生産菌の例としては、たとえば新菌種リゾバク
ター・アルプス（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ　　ａｌｂｕｓ
）があげられる。その具体例としては、本発明者らが日
本国滋賀県神崎郡の土壌より採取したリゾバクター・ア
ルプス　ｓｐ、　ｎｏｖ、　ＹＫ−４２２株（以下、ｒ
ｙ　Ｋ　−４２２株」と略称することもある。）かあげ
られる。

Ｙ　Ｋ−４２２株の菌学的性状は下記のとおりである。

（ａ）形　態 肉汁液体培養で２４°Ｃ，２日間培養後の観察では、細
胞は直径０４〜Ｏ、７μｍ、長さ２．０〜４４μｍの長
稈状で、２０〜３０μｍのフィラメント状を呈すること
もある。鞭毛は認めらず、運動性も認めらない。

胞子またはミクロンストを形成せず、またダラム染色は
陰性で、抗酸性を示さない。（ｂ）各種培地上での成育
状態 ２４℃で培養し、Ｉないし１４日間に４つたって観察し
た。

■肉ｄ−寒天平板培養：コロニーは半透明な白色で、円
形、表面は凸円状、周縁は金縁状でムコイダルな生育を
示す。拡散性色素は生成しない。

■肉汁寒天斜面培養、良好な糸状の生育を示し、白色を
呈する。

■肉汁液体培養：うすく混濁状に生育し、少量の沈澱を
生じ、弱い閉環を形成する。

■肉汁ゼラヂン穿刺培養：」二部で生育し、層状に液化
する。液化活性は比較的強い。

■リドマス・ミルクリドマスの還元、ペプトン化が認め
られるが凝固は認められない。

■乾燥酵母平板コロニー周辺に溶菌円を形成し、ブライ
ディングによる運動性を示す。

（’Ｃ）生理的性質 ■硝酸塩の還元二一 ■脱窒反応− ■ＭＲ（メチルレッド）テスト；− ■ＶＰ（フォーゲス・プロスカラエル）テスト二〇イン
ドールの生成、− ■硫化水素の生成（ＴＳＩ寒天および酢酸鉛紙）■デン
プンの加水分解ニー ■クエン酸の利用（クリステンセンおよびンモンズの各
培地）：＋ ■無機窒素源の利用 １）硝酸カリウム゛− １ｉ）硫酸アンモニウム− ■色素の生成（キングＡ、Ｂおよびマンニ・ソト酵母エ
キス寒天の各培地）：拡散性色素の生成は認めらない。

■ウレアーゼニー ＠オキンダーゼ：＋ ■カタラーゼ・→− ■生育の範囲 ｉ　）ｐＨ：ｐ１１４．６〜８．２で生育するか、最適
ｐＨは６３〜７９゜ 培地・グルコースＯ、１％、イーストエキストラクト０
０１％、硫酸アンモニウム０１％１食塩０１％、硫酸マ
グネシウム（７水塩）Ｏ、０５％ｐ１１は苛性ソーダま
たは硫酸で調節。

ＩＩ）温度；１４〜３２℃で成育するが最適温度は２１
〜２８０Ｃｏ培地・肉汁液体培地 ■酸素に対する態度二好気的２ ［相］０−Ｆ（オキノダーティブフアーメンタティブ）
テスト［ヒユー・レイフソン（Ｉｌｕｇｈ・Ｌｅｉｆ−
ｓｏｎ）法］非分解型。

■糖からの酸、ガスの生成および利用性酸　　　　　ガ
ス　　　利用性 （ペプトン水）（ペプトン水）（デービス培地）Ｌ−ア
ラビノース　　　−一　　　　　　−±Ｄ−キシロース
　　　　−−」− Ｄ−グルコース　　　　−−十 り−マンノース　　　　−　　　　　　−＋Ｄ−フラク
トース　　　−−十 り−ガラクトース　　　−−十 麦芽糖　　〜　　−＋ ノ　　ヨ　　糖　　　　　　　−−十 乳　　　糖　　　　　−−＋ トレハロース　　　　−−−十 叶ソルビット　　　−−− Ｄ−マンニット　　　　−　　　　　　−十イノンット
　　　　−　　　　　−− グリセリン　　　　−−± デンプン　　　　　−−十 ＠ｌＤＮＡのＧＣ（グアニン＋シトシン）含量＋７Ｏ、
２％±１．５％（Ｔｍ法） ■多糖の分解能。

カルボ゛キンメチルセルロ−ス６ コロイダルキチン：＋ アルギン酸ナトリウム± 以上の菌学的性状を何するＹＫ−４２２株を、バーノー
ズ・マニコアル・オブ・デクーミネイティブ・バクテリ
オロジー第８版及びインターナショナル・ジャーナル・
オブ・ンステマテイソク・バクテリオロジー第３０巻２
２５〜４２０頁（１９８０年）、同第３２巻１４６〜】
４９頁（１９８２年）および当該文献のバリデー７ョン
・リストに記載の種と照合すると、ムコイダルな成育を
示すダラム陰性桿菌で、一部フィラメント状の菌も認め
られブライディングによる運動性を示し、コロイダルキ
チンおよび乾燥酵母の分解能を有し、ミクロシストを形
成せず、ＤＮＡのＧＣ含量が高いことから、リゾバクタ
ー属に属するとするのが妥当である。しかし、これまで
に記載されたリゾバクター属の菌種（インターナショナ
ル・ジャーナル・オブ・システマテイソク・バタテリオ
ロジー第２８巻、３６７〜３９３頁（１９７８年））と
は、ＯＦテストが非分解型であること、コロニーに何ら
明瞭な色調を有さないこと、無機窒素源の資化性を有さ
ないなどの点で異なっていた。そこでＹＫ−４２２株は
、新菌種に属する株であると認め、該新菌種をリゾバク
ター・アルプス（Ｌ　ｙｓｏｂａｃｔｅｒａｌｂｕｓ）
ｓｐ、　ｎｏｖ、　ＹＫ−４２２と命名した。

」１記リゾバクター・アルプス５ｐ、　ｎｏｖ、ＹＫ−
４２２株は、昭和５９年（１９８４年）１０月５日にＩ
ＦＯに受託番号Ｉ　Ｆ　０１４３３４として寄託されて
いる。また、本微生物は、昭和５９年（１９８４年）１
１月１４日にＦＲＩに受託番号ＦＥＲＭ　　Ｐ−７９３
８として寄託され、該寄託はブダペスト条約による寄託
に切換えられてＦＥＲＭ　　ＢＰ−６９８としてＦＲＩ
に保管されている。

本発明方法で使用される混合培養に用いられるアシネト
バクター＠菌としては、アシネトバクタ＝（Ａｃｉｎｅ
ｔｏｂａｃｔｅｒ）属に属し、抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−
５８８および／またはそのＮ−デアセチル体を生産する
能力を有するエンペドバクター属菌またはリゾバクター
属菌と混合培養することにより、抗生物質、Ｔ　Ａ　Ｎ
　−５８８のＮ−デアセチル体を著量生成蓄積せしめる
能力を有するものであれば如何なる微′生物でもよい。

　　　　　。

」１記でいう著量生成蓄積せしめるとは、該アシネトバ
クター属菌を用いないで、該エンペドバクター属菌また
は該リゾバクター属菌を単独に用いた場合の抗生物質Ｔ
ΔＮ　−５８８のＮ−デアセチル体の生成蓄積量よりも
多量に該目的物が生成蓄積されることをいう。

アシネトバクタ−属に属する該微生物の例としては、た
とえばアシネトバクタ−・エスピー（Ａｃｉｎｅｔｏｂ
ａｃＬｅｒ　ｓｐ、）があげられる。その具体例として
は、本発明音らが、日本国大阪府大阪市淀川区で採取し
た淡水より分離したアシネトバクタ−・エスピーＹ　Ｋ
　−５０４株（以下［Ｙ　Ｋ　−５０４株」と称するこ
ともある。）があげられる。

Ｙ　Ｋ−５０４株の菌学的性状は下記のとおりである。

（ａ）形　態 肉汁寒天斜面上で２４℃、５日間培養後の観察では、細
胞は直径Ｏ、８−１．５μｍ、長さ１．１−２．１μｍ
の短稈状ないし、球状で二個が対となって存在オること
か多い。鞭毛は認められず、運動性も認められない。胞
子を形成せず、またダラム染色は陰性で、抗酸性を示さ
ない。

（ｂ）各種培地上での生育状態° 　２４℃で培養し、イないし１４日間にわたって観察し
た。

■肉汁寒天平板培養コロニーは小さく点状で、表面は　
円状、周縁は金縁状である。拡散性色素は生成しない。

■肉汁寒天斜面培養：中程度の糸状の生育を示し、無色
で、光沢を有する。

■肉汁液体培養混濁状に生育し、沈澱生じ、菌膜は形成
しない。

■肉汁ゼラチノ穿刺培ＩＩ：主として」二部で弱く生育
する。液化活性は認められない。

■リドマス・ミルク：リドマスの還元、ペプトン化およ
び凝固いずれの活性も認められない。

（ｃ）生理的性質 ■硝酸塩の還元、− ■脱窒反応− ■Ｍｒｔ（メヂルレッド）テスト：　−■ＶＰ（）１−
ゲスパプロスカウェル）テスト。

■インドールの生成、− ■硫化水素の生成（ＴＳＩ寒天および酢酸鉛紙）■デン
プンの加水分解ニー ■クエン酸の利用（コーゼル、クリステンセンおよびシ
モンズの各培地）、− ■無機窒素源の利用 Ｉ）硝酸カリウム、− １ｉ）硫酸アンモニウム、− ［相］色素の生成（キングＡ、Ｂおよびマンニット酵母
エキス寒天の各培地）；拡散性色素の生成は認められな
い。

■ウレアーゼ− ＠オキンダーゼ：− ■カタラーゼ・十 ■生育の範囲 １）ｐＨ・ｐ）Ｉ　５〜８で生育するが、最適ｐＨは６
〜７５゜ 培地・肉汁液体培地。

１ｉ）ｉｉ度ニア、５〜３９℃で生育するが最適温度（
よ１５〜２２℃。

培地・肉汁液体培地。

■酸素に対する態度好気的 ＠１Ｏ−Ｆ（オキシダティブ−ファーメンタティブ）テ
スト［ヒユー・レイフソン（Ｈｕｇｈ−Ｌｅｉ　−ｆｓ
ｏｎ）法］：非分解型。

＠糖からの酸、ガスの生成および利用性酸　　　　　ガ
ス　　　　利用性 （ペプトン水）（ペプトン水）（デーヒス培地）　　−
し−アラビノース　　−− Ｄ−キシロース　　　− Ｄ−グルコース　　０−　　　　−　　　　　−Ｄ−マ
ンノース　　　− Ｄ−フラクトース　　−　　　　　−−Ｄ−ガラクトー
ス　　−　　　　　− 麦芽糖　　− ノ　　　ヨ　　糖　　　　　　　　　　−乳　　　　糖
　　　　　　　−− トレハロース　　　　− Ｄ−ツルヒツト　　　− ｐ−マンニット　　　　− イノンット　　　　　　− グリセリン　　　　　− □□□−−← デンプン　　　　　　− ベプトン水、デービス培地での生育は極めて弱ｔ）。

ただし、デービス基礎培地にし一アルギニンを０２％添
加した 培地では良好な生育を示す。

［株］ＤＮＡのＧＣ（グアニン＋シントン）含量＋４Ｏ
、０％±１５％（Ｔｍ法） ■多糖の分解能： カルボキシメチルセルロース− コロイダルキチンニー アルギン酸ナトリウム；− 以上の菌学的性状を有するＹ　Ｋ　−５０４株を、バー
ノーズ・マニコアル・オブ・デターミネイティブ・バク
テリオロジー第８版およびインターナシシナ・ジャーナ
ル・オブ・システマテイック・バクテリオロジー第３０
巻２２５〜４２０頁（１９８０年）、同第３２巻１４６
〜１４９頁（１９８２年）に記載の種と照合すると、ダ
ラム陰性の短稈状ないし球状の細菌で、運動性がなく、
好気的で、糖からの酸、ガスの生成能がなく、オキシダ
ーゼが陰性、カタラーゼが陽性、ＤＮＡのＧＣ含量が４
Ｏ、０％±１．５％（Ｔｍ法）であることから、アシネ
トバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　）属に属す
るとするのが妥当と考えられる。そこで、該菌株をアシ
ネトバクタ−・エスピー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐ、）Ｙ　Ｋ　−５０４と呼称することにした。

上記アシネトバクタ−・エスピーＹ　Ｋ　−５０４株は
、昭和６０年（１９８５年）１月３１日にＪＦＯに受託
番号Ｉ　Ｆ　Ｏ１４４２０として寄託されている。また
本微生物は、昭和６０年（１９８５年）２月１２日にＦ
ＲＩにブダペスト条約による寄託として受託番号Ｆ　Ｅ
　ＲＭＢ　Ｐ　−７０９として畜託されている。

本発明に用いられるエンペドバクター属細菌またはリゾ
バクター属細菌は一般にその性状が変化しやすく、たと
えば紫外線、Ｘ線、化学薬品（例、ニトロソグアニノン
、エチルメクンスルホン酸）などを用いる人工変異手段
で容易に変異しうるちのであり、どの様な変異株であっ
ても本発明の対象とするＴ　Ａ　Ｎ　−５８８および／
またはそのＮ−デアセチル体の生産能を有するものはす
べて本発明に使用することができる。

本発明に用いられるアシネトバクタ−属細菌は一般にそ
の性状が変化しやすく、たとえば紫外線。

Ｘ線、化学薬品（例、ニトロソグアニジン、エチルメタ
ンスルホン酸）などを用いる人工変異手段で容易に変異
しうるものであり、どの様な変異株であっても、抗生物
質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８および／またはそのＮ−デアセ
チル体を生産する能力を有するエンペドバクター属また
はりゾハクター属に属する微生物と混合培養することに
より、抗生物質ＴＡＮ−５８８のＮ−デアセチル体を該
エンペドバクター属菌またはリゾバクター属菌に著量蓄
積させる能力を有するものはずへて本発明方法に使用す
ることができる。

Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８および／またはそのＮ−デアセチ
ル体の生産菌の培養に際しては、炭素源としては、たと
えばグルコース、フラクトース、マルトース。

ソルブル・スターチ、デキストリン、油脂類（例、大豆
油、オリーブ油など）、有機酸類（例、クエン酸。

コハク酸、グルコン酸なぐ）など菌が資化しうるちのが
適宜用いられる。窒素源としては、たとえば大豆粉、綿
実粉、コーン・グルテン・ミール、乾燥酵母、酵母エキ
ス、肉エキス、ペプトン、尿素などの有機窒素化合物が
利用できる。また、無機塩としては、たとえば塩化ナト
リウム、塩化カワラム、炭酸カルノウム、硫酸マグネン
ウム、リン酸−カリウム、リン酸二ナトリウムなどの通
常細菌の培養に必要な無機塩類が単独もしくは適宜、組
合せて使用される。

また、硫酸第１鉄、硫酸銅などの重金属類、ヒタミンＢ
＋、ビオチンなとのビタミン類なとも必要に以五余白 応じて添加される。さらに、ンリコ＝ンオイルやポリア
ルキレングリコールエーテルなとの消泡剤や界面活性剤
を培地に添加してもよい。その細菌の発育を助け、Ｔ　
Ａ　Ｎ　−５８１１１および／またはそのＮ−デアセチ
ル体の生産を促進するような有機物や無機物を適宜に添
加してもよい。

培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法と同様に
行えばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培養
の場合は静置培養、攪拌培養、振盪培養１通気培養など
いずれを実施してもよいがとくに通気攪拌培養が好まし
い。又培養温度はおよそ１５℃〜３２℃の範囲が好まし
く、培地のｐＨは約５〜８の範囲でおよそ８時間〜１６
８時間好ましくはおよそ２４時間〜１４４時間培養する
。

抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８のデアセチル体の生産（
混合培養を含む）においては、培養時間が約１８〜４８
時間であることが好ましい。

抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ−５８８のＮ−デアセチル体の生産
のための混合培養法は、先に述へた抗生物質ＴＡ　Ｎ　
−５８８および／またはそのＮ−デアセチル体の生産の
ための培養法に準して行うことかできる。

抗生物質１”ＡＮ−５８８のＮ−デアセチル体の検出に
は、ンユードモナス・エルギノーザＣ−，１４１を試験
菌とするＴ　Ｌ　Ｃ−バイオオートクラフィー法が用い
られる。

本発明のアノネトバクター属菌を用いて混合培養すると
、本発明のエンペドバクター属菌あるいはリゾバクター
属菌を単独に用いて培養する場合に比し、目的物である
抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ−５８８のＮ−デアセチル体を多量
に生成蓄積させることができるので、本発明の混合培養
法は工業的生産」二有利である。

培養物から目的とする抗生物質ＴΔＮ　−５８８および
／またはそのＮ−デアセチル体を採取するには微生物の
生産−４−る代謝物をその微生物の培養物から採取する
のに通常使用される分離手段か適宜利用される。たとえ
ば抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８およびそのＮ−デアセ
チル体は水溶性である性質を示し、主として培養ろ液中
に含まれるので、まず培養液にろ過補助剤を加えてろ過
あるいは遠心分離によって菌体を除去し、得られた培養
ろ液を適宜の担体に接触させてろ液中の有効成分を吸着
させ、次いで適宜の溶媒で有効物質を脱着させ、分別採
取する手段が有利に利用される。クロマトグラフィーの
担体としては活性炭、シリカゲル、粉末セルロース、吸
着性樹脂など化合物の吸着性の差を利用、またはイオン
交換樹脂、イオン交換セルロースなど化合物の官能基の
差を利用、あるいは分子ふるい性担体類など化合物の分
子量の差を利用するのが有利に用いられる。これら担体
から目的とする化合物を溶出するためには担体の種類、
性質によって組み合ゼが異なるが、たとえば水溶性有機
溶媒の含水溶液ずなイつち、含水アセトン、含水アルコ
ール類など、あるいは酸、アルカリ、緩衝液もしくは無
機あるいは有機塩を含む水溶液などが適宜組み合わせて
用いられる。また、これらのクロマトグラフィーによっ
て得られた本抗生物質の組物質を分取用高速液体クロマ
トグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、さらに精製する事も
できる。

他に活性炭クロマトグラフィーによって脱塩された溶出
液を濃縮し、濃縮液からイオン・ベアード抽出法ずなわ
ち４級アルキルアンモニウム・ハライドを含む有機溶媒
で本抗生物質を回収することもできる。

さらに詳しく述べるならば、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８１’ｌ
は酸性物質なので、担体として陰イオン交換樹脂たとえ
ばダウエックス−１（ダウ・アンド・ケミカル社製、米
国）、アンバーライトＩＲＡ−６８，４００，４０２，
４１０（ローム・アンド・ハース社製、米国）、ダイヤ
イオノ５Ａ−２１ＡおよびＣ（三菱化成工業株式会社製
、日本）などを用いるとる液中の本抗生物質は吸着され
、塩類あるいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などで溶
出される。また、陰イオン交換セルロースたとえばＤ　
Ｅ　−３２（ワットマン社製、英国）、ＤＥＡＥ−セル
ロース（ブラウン社製、西独）なと、あるいは陰イオン
交換分子ふるい性樹脂たとえばＤ　Ｅ’Ａ　Ｅ−あるい
はＱＡＥ−セファデックス（ファルマシャ社製、スウェ
ーデン）などの担体に本抗生物質を吸着せしめ、塩類あ
るいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などによって溶出
させることが出来る。これら溶出液中の塩類、着色物質
などを取り除くためにはクロマト用活性炭（武田薬品工
業株式会社製、日本）あるいは吸着性樹脂たとえばダイ
ヤイオンＨＰ−２０または５Ｐ−２０７（王菱化成工業
株式会社製、日本）、アンバーライトＸＡＤ−ｎ（ロー
ム・アンド・）蔦−ス社製、米国）などが有利に用いら
れる。分画された溶出区分は、濃縮、凍結乾燥などの工
程を経て、粉末化される。かくして得られた粉末の純度
が悪い場合、さらに精製するためには高速液体クロマト
グラフィーが有利に利用される。用いられる担体として
は、たとえばＴＳＫゲル（東洋曹達株式会社製、日本）
、ＹＭＣゲル（山村化学研究新製、日本）などが挙げら
れ、移動層としてはメタノールあるいはアセトニトリル
などと酸性水溶液あるいは緩衝液などとの混合液が用い
られる。上述したイオ“ン・ペアード抽出法において用
いられる４級アルキルアンモニウム・ハライドについて
はたとえばトリ〜ｎ−オクヂルメチルアンモニウムクロ
ライド、テトラ−ｎ−ペンチルアンモニウムクロライド
。

ｎ−テトラデノルノメチルベンノルアンモニウＪ１クロ
ライドなどがあり、有機溶媒としては通常メヂレンク口
うイト、クロロホルム、ジクロロエタンなどが用いられ
る。

また、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体は両性
物質で、塩基性の性質の方が強いため、担体としては陽
イオン交換樹脂たとえばダウエックス５０Ｗ（ダウ・ア
ンド・ケミカル社製、米国）、アンバーライトＩＲ−１
２０Ｂ（ローム、アンド・ハース社製、米国）、ダイヤ
イオンＳ　Ｋ　−１１０（三菱化成工業株式会社製１日
本）などを用いると、ろ液中の本抗生物質は吸着され、
塩類あるいは酸またはアルカリ含有の水溶液あるいは緩
衝液などで溶出される。また、陽イオン交換分子ふるい
性樹脂たとえばＣＭ−セファデックス（ファルマシア社
製、スウェーデン）などの担体に本抗生物質を吸着せし
め、塩類倉荷の水溶液あるいは緩衝液などによって溶出
させることが出来る。これら溶出液中の塩類１着色物質
などを取り除くためにはクロマトグラフィー用活性炭あ
るいは吸着性樹脂たとえばダイヤイオンＳＰ’−２０７
あるいはＨＰ−２０などが有利に用いられる。分画され
た溶出区分は濃縮、凍結乾燥などの工程を経て、粉末化
される。このようにして得られた粉末の純度が悪い場合
、さらに精製するために高速液体クロマトグラフィーが
有利に利用される。担体、移動層などはＴ　Ａ　Ｎ−５
８８の精製の場合と同様である。

Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８は精製過程において、用いられた
塩類、緩衝液中の陽イオンたとえばナトリウム、カリウ
ム、リチウム、カルシウム、アンモニウムイオンなどと
結合した状態で存在するが、この場合そのままのｐＨで
活性炭クロマトグラフィーに付すると対応する塩として
単離され、ｐＨ約５ないし２好ましくはＩ）Ｈ約４．５
ないし３に溶出液を調整し、活性炭のクロマトグラフィ
ーに付すと遊離体として得られる。Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８
８のＮ−デアセヂル体は中性付近のＩ）Ｈで活性炭クロ
マトグラフィーに付すと、両性イオン化合物として得ら
れる。また、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセヂル体
は、塩基性の性質の方が強いため、強酸と塩を形成し得
る。該強酸としては、たとえば塩酸、リン酸、＠酸、ト
リフルオ［）酢酸なとか挙げられる。

かくして得られたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８は逆層系高速液
体クロマトクラフィー上２本のピークを存する。

これらのピークを仮にΔ、Ｂと称すると、以下に述へる
現象が認められる。分取用高速液体クロマトグラフィー
によりＡ、Ｂのピーり°をそれぞれ採取すると、かなり
単一のＡ、Ｂが得られるが、これらをｐＨ３，５，７の
緩衝液中に室温で放置すると、いずれのｐＨにおいても
約一時間後にはＡはＢとなり、ＢはＡとなって、ＡＢが
約１：１の平衡混合物に変化する。従ってＴ　Ａ　Ｎ　
−５８８そのも°　のをＡ、Ｂに分離することは現在知
られている分離技術では不可能と思われる。しかし、Ｔ
ＡＮ−５８８をｐ−ニトロヘンシルエステル体あるいは
ヘンツヒドリル体とするとＡ型化合物とＢ型化合物にそ
れぞれ分けることができる。

抗生物質Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８またはその塩を脱アセチ
ル化する方法としては、公知の脱アセチル化反応が採用
される。

その−例としては、たとえばまずＴ　Ａ　Ｎ　−５８８
にバラニトロベンジルもしくはベンツヒドリル基を導入
しエステル体とし、さらにＴ　Ａ　Ｎ　−５８８のアセ
チル基を脱離し、必要により該バラニトロヘンシルもし
くはベンツヒドリル基を脱離することにより行なわれる
。

上記したバラニトロベンジル基を導入するには、Ｔ　Ａ
　Ｎ　−５８８またはその塩にバラニトロベンジル基を
導入し得る化合物を反応させる。該バラニトロベンジル
基を導入し得る化合物の例としては、たとえば、バラニ
トロベンジルブロマイド、バラニトロヘンシルクロライ
Ｆなどが挙げられる。

バラニトロベンジル基を導入し得る化合物の使用量は、
約１ないし５当量、好ましくは約１ないし２当量である
。反応は溶媒中で行なうのが好ましく、該溶媒としては
たとえば、ジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチ
ルアセトアミド（ＤＭＡ、Ａ）、テトラヒドロフラン（
ＴＨＦ）などが挙げられる。

該反応においては、反応を促進するために、たとえばト
リエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）、ピリジンなどを約０１な
いしＯ、５当量、好ましくは約Ｏ１ないし０２当量の量
で添加してもよい。

反応温度は、約００Ｃ〜４０℃さらに好ましくは約２０
°Ｃ〜３０℃であり、反応時間は約０５〜８時間さらに
好ましくは約１〜４時間である。反応は攪拌下に行なう
のが好ましい。

上記したベンツヒドリル基を導入するには、ＴＡ　Ｎ−
５８８またはその塩にベンツヒドリル基を導入し得る化
合物を反応させる。該ベンツヒドリル基を導入し得る化
合物の例としては、たとえば、ジフェニルジアゾメタン
、ジフェニルメヂルブロマイドなどが挙げられる。ベン
ツヒドリル基を導入し得る化合物の使用量は、約１ない
し６当量。

好ましくは約２ないし４当量である。反応は溶媒中で行
なうのが好ましく、該溶媒としてはたとえばＴＨＦ、ジ
オキザン、酢酸エチル、ノクロロメタンなどが挙げられ
る。該反応においては、反応を促進するために、たとえ
ば希塩酸、希硫酸、希リン酸などを少量、たとえば約Ｏ
、Ｏｌないし１．０当量添加してｌ）Ｈを約１ないし３
．好ましくは約１．５ないし２５付近に調整することが
好ましい。反応温度は約−１０°Ｃ〜→−５０℃さらに
好ましぐは００６〜３０℃であり、反応時間は約３０分
ないし約８時間さらに好ましくは約１ないし３時間であ
る。反応は、攪拌下に行なうのが好ましい。

」１記で得られたエステル体は、通常用いられる分離・
精製手段を用いて採取され得る。該手段としてはたとえ
ば目的物はたとえばジクロルメタン。

クロロホルムなどで有機層に抽出され、抽出液を濃縮し
、ａ輸液をエーテルあるいはヘキサンなとに加えると該
エステル体が結晶性粉末として析出する。このエステル
体はソリカゲル法で２成分に単離されるが、次の反応に
進む場合には混合物として用いてもよい。

さらに、上記で得られたＴ　Ａ　Ｎ＝　５８８のバラニ
トロベンジルエステル体もしくはベンツヒドリル体を脱
アセチル化反応に付す。

該脱アセチル化反応としては、たとえば、イミノエーテ
ル法、加溶媒分解法、酵素を用いた加水分解法などが挙
げられる。

イミノエーテル法を用いる場合には、たとえば原料化合
物に五塩化リン、ホスゲン、二塩化リン。

オキン塩化リンなとを反応させる。」二記反応試薬は、
約１〜５当量さらに好ましくは約１゜５〜３当量用いる
のが好ましい。該反応はたとえばメヂレンク口うイト、
ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素、トリクロ
ロエタンなどの溶媒の存在下に行なうと好都合である。

反応を促進させるために、たとえばピリジン、Ｎ、Ｎ−
ジメヂルアニリン。

トリエヂルアミン、アニリン、トルイジンなどを過剰量
たとえば約３〜２０当量さらに好ましくは約５〜１０当
量用いるとよい。

該脱アセチル化反応は、反応温度約−３０℃ないし０℃
さらに好ましくは一１５℃ないし一５℃で、反応時間約
１５分ないし８時間さらに好ましくは約３０分ないし２
時間で行なうのが良い。反応は攪拌下に行なうのが好都
合である。

中間体として生成されるイミノクロライドをイミノエー
テルにするために反応液中に過剰のメタノールを加え、
約−３０℃〜０℃好ましくは約−１５℃〜−５℃で約１
５分ないし２時間好ましくは約３０分ないし１時間攪拌
し、さらに反応の終結のために約１０℃〜４０℃好まし
くは約２０°Ｃ〜３０℃で約３０分ないし２時間攪拌す
る。さらに反応液中に希塩酸を加え、Ｃ−Ｎ結合を切断
する。反応温度は約１０℃〜４０℃好ましくは約２０６
Ｃ〜３０℃で、反応時間は約１５分ないし２時間好まし
くは約３０分ないし１時間である。

加溶媒分解法を用いるには、たとえば原料化合物をメタ
ノール、エタノールあるいはそれらと水の混合溶液にと
かし、約２０℃ないし還流温度好ましくは約５０℃ない
し還流温度で、約Ｏ、５ないし３０時間、好ましくは約
２ないし８時間反応させる。

かくして得られた反応液は中和され、水と混和しない有
機溶媒たとえばメチレンクロライド、ジエチルエーテル
、酢酸エチルなどで、生成物を抽出し、抽出液を濃縮し
、Ｔ　Ａ　Ｎ−５８８のデアセチル体のバラニトロヘン
シルもしくはベンツヒドリル体が得られる。

次に最終工程としてエステル基を離脱させるためには、
たとえば酸加水分解法、接触還元法などが用いられる。

酸加水分解法を用いる場合には、酸としてたとえばトリ
フルオロ酢酸、ギ酸、塩酸などを原料化合物に対し約３
〜２０当量用い反応させる。また、アニソールを約１な
いし５当里、好ましくは約２ないし４当量加えるのが好
ましい。該反応においては、溶媒として、たとえばメチ
レンクロライド。

クロロポルム、　Ｔ　ＨＦ　、酢酸エチルなとか用いら
れる。

反応温度は約−３０６Ｃ〜０℃さらに好ましくは約−２
０６Ｃ〜−１０℃であり、反応時間は約０５〜８時間さ
らに好ましくは約１〜４　時間である。

接触還元法を用いる場合には、触媒としてたとえばパラ
ジウム、白金、それらの酸化物などを用い、水素気流下
に反応させる。

反応温度は約０°Ｃ〜５０℃さらに好ましくは約１０℃
〜Ｑ’Ｃであり、反応時間は約０１〜６時間さらに好ま
しくは約０２〜２時間である。

このようにして生成した遊離のカルボン酸体は反応液中
の不純物をろ過あるいはクロマトグラフィー法たとえば
活性炭、吸着性樹脂などを用いた方法などで取り除き、
濃縮、凍結乾燥することにより、分離、採取、精製でき
る。

」二記各工程において、得られた化合物が異性体の混合
物である場合には、たとえばカラムクロマトグラフィー
、たとえば担体としてシリカゲル、セファデックスＬＨ
−２０（ファルマソア社製、スエーデン）、ダイヤイオ
ンＨＰ−２０などを用いた方法。

あるいは再結晶法など、また、分取用逆層系クロマトグ
ラフィー［担体の例：ＹＭＣゲル、ＴＳＫゲル、移動層
の例：緩衝液またはメタノールあるいはアセトニトリル
を含む緩衝液コなどにより各異性体成分に分離すること
が出来る。

後述の実施例１で得られたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８ナトリ
ウム塩（ＡおよびＢの平衡混合物）の物理化学的性状を
つぎに示す。

ｌ）外観：白色粉末 水中） ３）構成元素がＣ、Ｈ、Ｎ　、　ＯおよびＮａからなる
元素分析値（％）、五酸化リン」二４０℃で６時間乾燥
した資料 実測値　　計算値× Ｃ，３８，５±２．ＯＣ，３９，６］ Ｈ，４，５±１．０Ｈ、３，９９ Ｎ、　９．１±１．５　　　Ｎ、　９．２４０、３９．
５８ Ｎａ、　６．９±１．５　　　Ｎａ、　７．５８（×Ｏ
、５モルの付着水を含むとして計算）４）水分含量・３
．０±１５％（熱天秤法）５）　　８１ＭＳ法による分
子イオンピークは次のとおりである。

ｍ／ｚ　　６１１（２Ｍ＋Ｎａ）＋、　　３１７（Ｍ＋
Ｎａ）十、　　２９５（Ｍ４−ＩＩ）”６）分子式 ％式％ ７）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル（水中）：第１図８
）光外部吸収（ＩＲ）スペクトル（ＫＢｒ法）・臭化カ
リウム綻による吸収スペクトル（第２図）の主な吸収（
波数）は次のとおりである。

３４５０、　＋７８Ｏ、１７３Ｏ、１６６［１，１５５
０，＋３８５．１３２０゜＋２９Ｏ、１２６Ｏ、　＋２
０Ｏ、１１２Ｏ、１０４Ｏ、　９８Ｏ、　９１０゜８］
Ｏ、　７７Ｏ、　６９Ｏ、　６０Ｏ、　５４０ｃｍ−’
９）　　＋３ｃ〜核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（１
００Ｍ　Ｈｚ　、重水中）、下記のシグナルが認められ
る。

１８２．０２（Ｓ）、　　１７７．３’ｏ（Ｓ）、　　
　１７３．７９（ｓ）。

１７３．３０（Ｓ）、　　１７３：２５（Ｓ）、　　　
１７２．５８（Ｓ）。

９６．９７（ｓ）、　　　９６．９２（ｓ）、　　　７
４．２７（ｔ）。

７２．６３（ｔ）、　　　５５．５７（ｄ）、　　　５
５．３４（ｄ）。

３１．９２（Ｌ）、　　　３１．０８（ｔ）、　　　３
Ｏ、９８（ｔ）。

２４．５８（Ｑ）、　Ｉ）ｌ）ｍ（ただし、ｓ　；　ｓ
ｉｎｇｌｅｔ。

ｄ　：　ｄｏｕｂｌｅｔ、　ｔ　；　ｔ、ｒｉｐｌｅｔ
、　ｑ　；　ｑｕａｒｔｅｔ）１０）　　円二色性（Ｃ
Ｄ）スペクトル（水中）２３２±３ｎｍにｎｅｇａｔｉ
ｖｅのコツトン効果を示す。

ＩＩ）　　溶解性。

可溶、水、ジメチルスルフォキサイド。

難溶、酢酸エチル、クロロホルム、ジエチルエーテル。

１２）呈色反応・ 陽性、ニンヒドリン反応 陰性、ブレイブ・リーバツク、吸口、エールリッヒ、バ
ー　トン、ドラーゲンド ルフ反応 １３）７ミ／酸分析、６Ｎ−塩酸中、２０時間、１００
°Ｃで分解すると既知アミノ酸としてセリンが検出され
る。

１４）　　安定性：水溶液中ｐＨ５では安定、ｐＨ３お
よび７ではやや不安定、ｐＨ９では不安定。

１５）　　４層クロマトグラフィー（ＴＬｃ）（セルロ
ー＋６）　　酸性、中性、塩基性の区別：中性物質＋７
）　　高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣＸ担体：
ＹＭＣＡ−３１２，山村化学研究所製。

日本、移動層：４％メタノール／　Ｏ、０１．Ｍ燐酸緩
衝液（＋）Ｈ６，３）、　　２ｍｌ／ｍ１ｎ）：Ｒ，ｔ
＝４．３および４．８（ｍｉｎ）後述の実施例４で得ら
れたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８のパラニトロベンジルエステ
ル（ＡおよびＢの混合物）の物理化学的性状をつぎに示
す。

ｌ）外観：白色粉末 ＣＨＣｌ３中） ３）分子量＋４０７（Ｓ　Ｉ　Ｍ　Ｓ法による）４）元
素分析値・ 計算値：Ｃ，５０，１３；　　Ｈ，４，２１；　　Ｎ、
１Ｏ、３２；Ｏ、３５．３５ 実測値：Ｃ，５０，２６；　　Ｈ，，４，３２，Ｎ、１
Ｏ、３１５）分子式：Ｃ１７ＨＩ７Ｎ３０゜ ２６２±２（２８１±２０）、　　２１４±２（２７８
±２Ｏ、肩）７）　　ＪＲスペクトル：ＫＢｒ法、第３
図３４００、　３０８Ｏ、　２９６Ｏ、　１８０５．　
１７６Ｏ、　１６８０゜１６１０、　１５２Ｏ、　１４
５Ｏ、　１３８Ｏ、　　＋３５Ｏ、　１２７０゜１１８
０、　　＋１０５．　１０５Ｏ、　１０１５．　９７Ｏ
、　９０５゜８５０、　７４Ｏ、　６９Ｏ、　６０Ｏ、
　５４０　ｃｍ−’８）　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：
９０ＭＨｚ、　ＣＤ　ＣＩｓ中δｐｐｍ　、ｒ　（Ｈｚ
） ２．０５（３１１，ｓ）、　　２．３−３．３（４１１
，’ｍ）、　　４．１０（ＩＨ，ｍ）。

４．５−５．１（２Ｈ，ｍ）、　　５．３５（２Ｈ，ｓ
）、　　６．２５（ＩＩＩ、ｄ。

１ｉｋｅ）、　　７．５５（２Ｈ，ｄｄ　１ｉｋｅ）、
　　　８．２７（２Ｈ，ｄ。

１ｉｋｅ） ９）　　ＴＬＣ 担体、ノリカゲル（メルク社製、西独）展開溶媒：クロ
ロホルム：メタノール（１９＋Ｌ）Ｒｆ値、０２５およ
びＯ、３２ １０）　　酸性、中性、塩基性の区別：中性物質後述の
実施例４で得られたＴ　Ａ　Ｎ−５８８Ａパラニトロベ
ンンルエステルの物理化学的性状を以下に示す。

ｌ）外観：白色粉末 ＣＨＣ１３中） ３）分子量：４０７（Ｓ　Ｉ　ＭＳ法による）４）元素
分析値： 計算値：Ｃ，５０，１３；　　Ｈ，４，２１；　　Ｎ、
Ｉ（１，３２；Ｏ、３５．３５ 実測値：Ｃ，５０，２０：　　Ｈ，４，２２；　　Ｎ、
１Ｏ、１３５）分子式：Ｃ，、Ｈ，、Ｎ３０９ ±２ｎｍ（２８２±３０）、　２＋４±２　ｎｍ（２７
６±３Ｏ、肩）７）　　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：（
１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ５）。

１７３．７０（ｓ）、　１７１．５３（ｓ）、　１７Ｏ
、７２（ｓ）、　１６５．０９（ｓ）、　１４８．０６
（ｓ）、　１４１．３８（ｓ）、　１２８．８６（ｄ）
。

１２３．９１（ｄ）、　９１．８２（Ｓ）、　７１．６
０（ｔ）、６７．２９（ｔ）。

５３．００（ｄ）、　２９．０９（ｔ）、　２７．４９
（ｔ）、　２２．６４（Ｑ）。

ｐｐｍ。

８）　　ＩＲスペクトル・ＫＢｒ法　第４図３４００、
　３０８Ｏ、　２９５Ｏ、　１８０５．　１７７５．　
１７６０゜１６８０、　１６１Ｏ、　　＋５３Ｏ、　１
４５Ｏ、　１３８０、１３５０゜１ａｏｏ；　　＋２７
５．　１１９Ｏ、　１１０５．　　ＩＯ’６０，１０２
０゜９８０、　９１Ｏ、　８５Ｏ、　７４Ｏ、　７０Ｏ
、　６００゜５４０　　ｃｍ−’ ９）ＴＬＣ： 担体ンリカゲル（メルク社製、西独） 展開溶媒、クロロホルム：メタノール（１９：　］　）
Ｒｆ値、Ｏ、２５ １０）酸性、中性、塩基性の区別：中性物質後述の実施
例４で得られたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８Ｂバラニトロヘン
シルエステルの物理化学的性状をつぎに示す。

１）外観８白色粉末 ＣＨＣｌ　３中） ３）分子量：４０７（Ｓ　Ｉ　Ｍ　Ｓ法による）４）元
素分析値。

計算値：Ｃ，５０，１３；　　Ｈ，４，２１；’　Ｎ、
ＩＯ，３２゜Ｏ、３５．３５ 実測値・Ｃ，５０，ｌＯ，Ｈ，４，２１，Ｎ、１Ｏ、１
５５）分子式：Ｃ１７Ｈ８７Ｎ３０゜ ±２　ｎｍ（２８２±３０）、２１４±２ｎｍ（２８０
±、肩）７）　　”Ｃ−ＮＭＲスペクトル＋　ＣＩｏｏ
ＭＨｚ。

ＣＤＣｌ５）。

１７３．５９（ｓ）、　　１７Ｏ、８６（ｓ）、　　１
７Ｏ、６１．（ｓ）、　　１６５．０６（ｓ）、１４ｇ
、ｘ２（ｓ）、ｘ４＋２＋［ｓ）、　　　１２８．９６
（ｄ）。

１２３．９６（ｄ）、　　９１．６９（ｓ）、　　７４
．６０（ｔ）、　　６７．３９（ｔ）、　　５１．９４
（ｄ）、　　２９．１１（Ｌ）、　　２７．３８（ｔ）
。

２２．６７（ｑ）、ｐｐｍ ８）　　ＩＲスペクトル：ＫＢｒ法、第５図３４００、
　３０９Ｏ、　２９５Ｏ、　１８０５．　１７６θ、　
　１６８０゜１６＋Ｏ、　１５３Ｏ、　１４５Ｏ、　１
３ｇＯ、　　＋３５５．　１２７０゜１１８０、　１１
０５．　１，０５５．　１０１５．　９６５．　９１０
゜８５５、　７４Ｏ、　６９５．　６０Ｏ、　５４０　
ｃｍ−’９）　　ＴＬＣ：ＴＡＮ−５８８Ａパラニトロ
ベンジルエステルの場合と同一条件 Ｒｆ値、Ｏ、３２ １０）　　酸性、中性、塩基性の区別中性物質後述の実
施例５て得られた′Ｉ″ＡＮ−５８８ヘンツヒドリルエ
ステル（Ａ型およびＢ型の混合物）の物理化学的性状を
つぎに示す。

ｌ）外観無色結晶 ２）融点：１５３〜１５５°Ｃ（分解点）ＣＨＣＩ３中
） ４）分子量：ｍ／　ｚ　４３８（Ｍ　”ＸＥ　Ｉ　−Ｍ
　Ｓ法）５）元素分析値 計算値Ｃ，６３，０１；　　Ｈ，５，０６，Ｎ、６．３
９゜Ｏ、２５．５４ 実測値ＩＣ，６２，８３：　　Ｈ，５，３２，Ｎ、６．
２８６）分子式：Ｃ−５Ｈｘ−Ｎ２Ｏ７ ７）　　ＵＶスペクトル：メタノール中８）　ＩＲスペ
クトル：ＫＢｒ法、第６図３３８０、　３０ｇＯ、　３
０５Ｏ、　２９６Ｏ、　１８０Ｏ、　．１７８０゜１７
５０、　　＋７０５．　１６９Ｏ、　１６０Ｏ、　１５
９Ｏ、　　ｌ５４０゜１５００、　１４６Ｏ、１３８Ｏ
、　１３１Ｏ、　１２８Ｏ、　１１９０゜１１１０、　
１０６Ｏ、　　９８Ｏ、　　９２Ｏ、　　８８Ｏ、　　
７５０゜７１０、　　７０Ｑ、　　　６５Ｏ、　　６３
Ｏ、　　６１Ｏ、　　５７０゜５５０、　　４７０　Ｃ
ｍ−’ ９）　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル＋９０ＭＨｚ、ＣＤ　
Ｃ１３中。

δ１３ｐｍ　　Ｊ（Ｈｚ）。

１．９７（３１１，ｓ）、　２．１−３．５（４Ｈ，ｍ
）、　　３．８−４．２（ＩＩＩ。

ｍ）、　４．５−５．１（２１１，ｍ）、　６．１−６
．４（ＩＩｌ、ｂｒ）、　６．９７（ＩＨ，ｓ）、　７
．３−７．４（Ｉ０Ｈ、ｍ）（ｍ：ｍｕｌｔｉｐｌ゛ｅ
ｔ、　ｂｒ：ｂｒｏａｄ、　Ｉ−１：ｐｒｏｔｏｎを表
わす） １０）、ＴＬＣ：後述Ａ型のそれと同じ条件Ｒｆ値、０
５８および０６５ １１）　　酸性、中性、塩基性の区別：中性物質後述す
る実施例５で得られたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８ペツツヒド
リルエステル（Ａ型）およびＴ　Ａ　Ｎ　−５８８ベン
ツヒドリルエステル（Ｂ型）の物理化学的性状をつぎに
示す。

Ａ型化合物 ｌ）外観：無色結晶 ２）融点・９７〜１３５℃（徐々に発泡１分解）５、Ｃ
Ｉ４ＣＩ３中） ４）分子量：Ｅｌ−ＭＳ法による分子イオンビーり　　
　　ＩＩｌｚ　　４３８（Ｍ”）５）元素分析値 計算値：Ｃ，６３，［ｌｌ：　　Ｈ，５，０６，Ｎ、６
．３９；Ｏ、２５．５４ 実測値：Ｃ，６２，６２；　　Ｈ，５，０６，Ｎ、６．
３２６）　分子式：　Ｃ＝　−Ｈ、ｔ　Ｎ　＊　０７７
）　紫外線吸収（ＵＶ）スペクトル、（メタノール中） ８）ＩＲ／２．ベクトル：ＫＢｒ法、第７図３３８０、
　３０８Ｏ、’　　３０５Ｏ、　１８０Ｏ、　１７ｇＯ
、　１７６０゜１６８５．　１５４０，１５０Ｏ、　１
４５Ｏ、　　Ｈ８０，１３１０゜１２８０、　１１９Ｏ
、　１１＋、Ｏ、　１０５Ｏ、　　９８Ｏ、　　９２０
゜８８０、　　７５Ｏ、　　７１Ｏ、　　６５Ｏ、　　
６１Ｏ、　　５５０ｃｍ−’ ９）　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：　１００ＭＨｚ、　
ＣＤＣｌ３．ｄ６−ＤＭＳＯ液中、δｐｐｌＩＩＪ（Ｈ
２）１．９８（３Ｈ，ｓ）、　２．２−３．４（４Ｈ，
ｍ）、　４．１０（ｌＨ，ｄｄ。

”　　Ｊ＝８．１０）、　４．４−５．０（２１１，ｍ
）、　　６．９３（ＩＨ，ｓ）。

７．３Ｍ７．５（Ｉ０Ｈ、ｍ）、　８．２７（１１１，
ｄ、Ｊ＝７）１０）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
：担体、シリカゲル（メルク社製、西独）。

展開溶媒、酢酸エチル Ｒｆ値、　Ｏ、５８ １１）　　酸性、中性、塩基性の区別、中性物質Ｂｆｆ
ｉ化合物 ■）外観：無色結晶 ２）融点：　１５７−１６０℃（分解点）ＣＨＣ１３中
） ４）分子量＋ｍ／ｚ　　４３８（Ｍ”ＸＥ　Ｉ　−ＭＳ
法）５）元素分析値、 計算値＋Ｃ，６３，０１；　　Ｈ，５，０６，Ｎ、６．
３９゜Ｏ、２５．５４ 実測値：Ｃ，６３，１］；　　Ｈ，５，１３，Ｎ、６．
３０６）分子式Ｃ，３Ｈ２，Ｎ　、０７ ７）　　ＵＶスペクトル：メタノール中８）　　ＩＲス
ペクトル：ＫＢｒ法、第８図３４００、　３０８Ｏ、　
３０５Ｏ、　１８＋５．　１７８０゜１７３５、　１７
０５．　１５４Ｏ、　１４６Ｏ、　１３８０゜１２９０
、　１２６’５．　１１９Ｏ、　１０６Ｏ、　　９８０
゜９２Ｏ、８８Ｏ、　　７６Ｏ、　　７１５□　　６１
０゜５５０　ｃｍ−’ ９）　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：１００Ｍ、Ｈｚ、　
ＣＤ　Ｃ１３中 δＩＩ）ｆ）ｍ　　Ｊ　（Ｈｚ）。

１．４１８（３１１，ｓ）、　　２．２−３．４（４Ｈ
，ｍ）、　　４．０３（ＩＨ，ｄｄ。

Ｊ＝Ｌ１０）、　　４．６−５．２（２１１，ｍ）、　
　６．３２（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝５）、　　８．９６（１）
１．ｓ）、　　７．２−７．５Ｃ１０Ｈ，ｍ＞１０）　
　ＴＬＣ・（Ａ型の場合と同じ条件）Ｒｆ値、　Ｏ、６
５ １１）酸性、中性、塩基性の区別：中性物質実施例６で
得られたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体のヘ
ンツヒドリルエステル（Ａ型およびＢ型の混合物）の物
理化学的性状を以下に示す。

ｌ）外観、白色粉末 ＣＨＣｌ、中） ３）分子量：ｍ／ｚ　３９６（Ｍ＋）（Ｅ　Ｉ　−ＭＳ
法）４）元素分析値 計算値：Ｃ，６３，６３，１（，５，０９，、Ｎ、７．
０７゜Ｏ、２４．２２ 実測値Ｃ，６３，６３，Ｉ（，５，０５；　　Ｎ、７’
：ｏ２５）分子式：Ｃ，、Ｈ，、Ｎ、Ｏ，， ６）　　ＵＶスペクトル：メタノール中１％ λ　　　２２０±２　ｎｍ（Ｅ、、？、ｌ＝　３３６±
５Ｏ、肩）乍鷺り ７）　　ＩＲスペクトル：ＫＢｒ法、第９図３４０Ｏ、
３ｏｓｏ、　　２９７Ｏ、　１８００，１７８Ｏ、　１
７４０゜１６００、　１’５０Ｏ、　１４６Ｏ、　１３
０５．、　１２７Ｏ、　１１．９０゜１１１０、　１０
６Ｏ、　９８Ｏ、　９２Ｏ、　８８Ｏ、　８５０゜７５
０、　７１Ｏ、　６５Ｏ、　６２Ｏ、　　６０５　ｃｍ
−藁８）　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：９０Ｍ　Ｊ（ｚ
、　ＣＤ　ＣＩ３中 ６９１１ｍ　Ｊ　（１−１ｚ）　。

２．２−３．５（４Ｈ，ｍ）、　　３．７−４．０（２
Ｈ，ｍ）、　　４．４−４．６（ＩＨ，ｍ）、　　６．
９７（ＩＨ９ｓ）、　　　７．２−７．４（ｌｏｌｌ、
ｍ）９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：機
器、Ｍｏｄｅｌ　　６０００Ａ／６６０／４４０（ウォ
ーターズ社製、米国） 担体、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ　Ａ−３１２（山村化学研究所
製１日本） 移動相、６５％メタノール１Ｏ、６ｔＭリン酸緩衝液（
ｐＨ６，３） 流速、２ｍｌ／ｍｉｎ、Ｒｔ：５．３および５．６ｍ１
ｎ１０）　　呈色反応 陽性、ニンヒドリン 陰性、塩化第二鉄 ＋１）　　酸性、中性、塩基性の区別；塩基性物質実施
例７で得られたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル
体（Ａ型およびＢ型の混合物）の物理化学的性状をつぎ
に示す。

ｌ）外観：白色粉末 中） ３）分子量：ｍ／ｚ　２３１　（Ｍ＋Ｈ）”　　（ＦＤ
−Ｍｓ法） ４）元素分析値： 実測値　　計算値※ Ｃ，４０，４２Ｃ，４０，１７ Ｈ，４，３６Ｈ，４，６４ Ｎ、、１１．６５　　　Ｎ　、１１．７１Ｏ、４３．４
８ （×付着水Ｏ、５モルを含むとして計算）５）分子式Ｃ
ＲＨ，，Ｎ２０Ｉｌ（０，５Ｈ２０）６）　　ｕｖスペ
クトル゛水中 １％ λ　　　２２１±２　ｎｍ（Ｅ　　　＝　１５４±２０
）ｍａｘ　　　　　　　　　　１ｃｍ ７）　　ＩＲスペクトル＋ＫＢｒ法、第１０図上な吸収
はつぎのとおりである。

３４５０、　３２２Ｏ、　２９６Ｏ、　２９０Ｏ、　　
＋８０Ｏ、　１７６０゜１７４０、　　＋６７Ｏ、　１
５８Ｏ、　１４２Ｑ、　　＋３９Ｏ、　１３７０゜１３
１０　、１２５０，１２０Ｏ、　　＋１２Ｏ、　１０５
Ｏ、、１０３０゜９ｇＯ、　９５Ｏ、　９２Ｏ、　８１
［１，７７０，７２０゜６９０、　６１Ｏ、　．５４０
　ｃｍ−’８）　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００Ｍ
　１−１　ｚ、　Ｄ　、　Ｏ中、下記のングナルが認め
られる。δｐｌ）ｍＪ（Ｈｚ）２．５２　（ＩＨ，ｍ）
、　　２．７２　（ＩＨ，ｍ）、　　２．９１　（Ｉｔ
ｌ。

ｍ）、　　３．０８　（ＩＨ，ｍ）、　４Ｊ５　（ｌｉ
ｔ、ｍ）、　４．５６　（１［＋。

ｍ）、　　４．８０　（１）１．ｍ） ９）円二色性（ＣＤ）スペクトル：水中２３３±３ｒ＋
ｍにｎｅｇａｔｉｖｅのコツトン効果を示す。

１０）溶解性 可溶：水 難溶ニジメチルスルフォキサイド、酢酸エチル、ジエチ
ルエーテル ＩＩ）ＨＰＬＣ：機器、担体、流速は前述のデアセチル
体のベンツヒドリルエステル（Ａ型およびＢ型の混合物
）の条件と同じ。

移動相、Ｏ、０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，３）Ｒｔ：
　３．１および３．３＋＋＋１ｎ１２）　　呈色反応 陽性：ニンヒドリン、ヨード 陰性、塩化第二鉄 １３）　　酸性、中性、塩基性の区別二両性物質実施例
８で得られたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体
（Ａ型）の結晶の物理 化学的性状を以下に示す。

ｌ）外観：無色結晶 ２）融点：　１７７−１８１’Ｃ（分解点）水中） ４）分子Ｈｈ：ｍ／ｚ　２３１（Ｍ＋１−１）”　　（
ＦＤ−ＭＳ法）５）元素分析値。

実測値　　計算値 Ｃ，４１，５７Ｃ，４１，７５ Ｈ，４，３９Ｈ，４，３８ Ｎ、１２．１＋　　、　　Ｎ、１２．１７Ｏ、４１．７
１ ６）分子式：　Ｃｓ　Ｈ、ｏＮ　ｔ　Ｏ−７）　　ＵＶ
スペクトル：水中 ８）ＩＲスペクトル：ＫＢｒ法、第■図上な吸収はつぎ
の通り。

３４５０、　３２２Ｏ、　２９５Ｏ、　２９０Ｏ、　　
’１８０Ｏ、　１７３５゜１６６Ｇ、　　１５８０，１
４４Ｏ、　１４２０，１４０Ｏ、　１３６０゜１３４０
、　１３１Ｏ、　１２８Ｏ、　１２０Ｏ、　１１６Ｏ、
　１１１０゜＋０５Ｏ、　１０２５．９８Ｏ、　９４Ｏ
、　９２Ｏ、’８１０゜７７０’、　　　　　７１ｊｌ
、　　　　　６９Ｏ、　　　　６０Ｏ、　　　’　　５
４０　　ｃｍ　−電９）　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：
４００Ｍ　Ｈｚ、　Ｄ　ｐ　Ｏ中、下記のシグナルが認
められる。δｐｐｍ　Ｊ（Ｈｚ）２．５２　（ｉｌｌ、
ｍ）、　　２．７２　（ＩＩＩ、ｍ）、２．９１　（１
１１，ｍ）。

３、ｏｓ　（１１１，ｍ）。

４、’３４　（ＩＩＩ、ｍ）、　　４．５５　（ＩＨ，
ｍ）、　　４．７８　（ＩＨ，ｍ）１０）　　ＣＤスペ
クトル：水中 ２３８±３ｎｍにｎｅｇａｔｉｖｅのコツトン効果を示
す。

１１）　　溶解性： 可溶：水 難溶ニジメチルスルフォキサイド、酢酸エチル、クロロ
ホルム、ジエチルエーテル １２）　　ＨＰＬＣ・条件は前述のＡ型とＢ型との混合
物の場合と同じ ＲＬ、　３．３ｍ１ｎ １３）　　酸性、中性、塩基性の区別・両性物質実施例
９で得られたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体
（Ｂ型）の粉末の物理化学的性状を以下に示す。

１）外観：白色粉末 ２）分子量：ｍ／　ｚ　２３１（Ｍ　＋　Ｈ）÷　（Ｆ
Ｄ−ＭＳ法）３）元素分析値− 実測値　　計算値゛ Ｃ，４０，９８Ｇ　、４Ｏ、１７ Ｈ，４，８８Ｈ，４，６４ Ｎ、１２．１７　　、　　Ｎ、＋１．７１Ｏ、４３．４
８ （×Ｏ、５モルの付着水を含むとして計算）４）分子式
：Ｃ，Ｈ，。Ｎ　２０　ｇ ５）ＵＶスペクトル：水中 ６）　　ＩＲスペクトル：ＫＢｒ法、第１２回生な吸収
は次のとおり ３４４０、　２９８Ｏ、　１８０Ｏ、　１？６Ｏ、　１
６７Ｏ、　１５７０゜１５２０、　１，３９Ｏ、　　＋
２９Ｏ、　１２５Ｏ、　１１９Ｏ、　　ＩＱ！ｔｏ。

１０５０、　９９Ｏ、　９２Ｏ、　８１Ｏ、　７６Ｏ、
　７２０゜６９０　ｃｍ−’ ７）　　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル・４００Ｍ　Ｈｚ、　
Ｄ　ｔ　Ｏ中、下記のシグナルが認められる。δｐｐｍ
Ｊ（Ｈｚ）２．５２　（ＩＩＩ、ｍ）、　　２．７２　
（ＩＨ，ｍ）、　　２．９０　（ＩＨ。

ｍ）、　　３．０８　（ＩＩ（、ｍ）、　　４．４４　
（ＩＨ，ｍ）、　　４．６８（ＩＩＩ、ｍ）、　　　４
．８６　（ＩＩＩ、ｍ）８）　　ＣＤスペクトル：水中 ２２４±２ｎｍにｎｅｇａｔｉｖｅのコツトン効果を示
す。

９）溶解性 可溶、水 難溶、ノメチルスルフオキザイド、酢酸エチル、クロロ
フォルム、ジエチルエーテ ル １０）ＨＰＬＣ：条件は前述のＡ型とＢ型との混合物と
同じ Ｒｔ、　３．１ｍ１ｎ １１）酸性、中性、塩基性の区別：両性物質実施例へた
物理化学的性状および反応工程から、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５
８８は、窒素に結合したアセチル基を有し、またカルボ
キシル基を有することが分かる。

次にＴ　Ａ　Ｎ　−５８８の生物学的性状について述べ
る。Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８ナトリウム塩（ＡおよびＢの
平衡混合物）の各種微生物に対する抗菌スペクトルは第
１表に示すとおりである。

第　　　１　　　表 最小生育阻止濃度（注１） ミクロコツカス・ルテウス　　　　ＩＦＯ１２７０８０
，３９バチルス・ズブチリス　　　　　　　ＮＩＨＪ　
　Ｐｃｔ　２１９　３．１３バチルス・セレウス　　　
　　　　　ＦＤＡ　　　　５　　１２．５エシエリヒア
・コリ　　　　　　　　ＮＩＨＪ　　ＪＣ２５０サルモ
ネラ・チフイムリウム　　　　ＩＦｏ　　１２５２９　
　５０ソトロバクター・フロインディ　　　ＩＰＯ１２
６８１１００クレブシエラ・ニューモニエ　　　　ＩＦ
Ｏ３３１７１００セラチア・マルセッセンス　　　　　
ＩＦＯ１２６４８５０プロテウス・ミラビリス　　　　
　ＡＴＣＣ２１１００’　２５プロテウス・ブルガリス
　　　　　　ＩＦｏ　　　３９８８　　２５プロテウス
・モルガニ−ＩＦｏ　　　３１６８　１００ンユートモ
ナス・エルギノーザ　　ＩＦｏ　　　３１１８（！　＞
１００アルカリゲネス・フェカリス　　　　ＩＦＯ１３
１１１５０アシネトバクター・カルコアセ メディウム３（ディフコ・ラボラトリーズ、米国）＋１
７．５ｇ、バクト・イースト・エキストラクト（ディフ
コ・ラボラトリーズ、米国）；５．Ｏｇ、ハクト・アガ
ー（ディフコ・ラボラトリ一ズ、米国）；２０ｇ、蒸留
水；１０１００Ｏ（ｐＨ無調整）を用い、接種菌液とじ
て約１０６コロニー・フォーミング・ユニット／ｍＱを
用いた。

またＴ　Ａ　Ｎ　−５８８ナトリウム塩の実験的マウス
感染症における治療効果は第２表に示す七おりである。

第　　　２　　　表 さらに、Ｔ　Ａ　Ｎ−５８８す′トリウム塩を４００ｍ
ｇ／ｋｇでマウスに皮下投与してもあるいは４０００ｍ
ｇ／　ｋｇをマウスに経口投与しても急性毒性は認めら
れなかった。

次にＴ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体（Ａ型お
よびＢ型の混合物）の生物学的性状について述へる。

なお、該化合物のＡ型およびＢ型の混合物＆Ａ型化合物
′および・Ｂ型化合物は生物学的性質において同等であ
る。

Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体の各種微生物
に対する抗菌スペクトルは第３表に示すとおりである。

第　　３　　表 試　験　閑　　　　　　　　　　最小生育阻止濃度（注
１）（ｌ１ｇ／ｍρ） スタフィロコッカス・アウレウス　　　ＦＤΔ　１２９
Ｐ　　　　５０ミクロコツカス・ルテウス　　　　　　
ＩＦＯｒ２７０８　　　６．２バチルス・ズブチリス　
　　　　　　　ＮＩＩＩＪ　Ｐｃｔ　２１９　　１２．
５バヂルス・セレウス　　　　　　　　　ＦＤΔ　５５
０エンエリヒア・コリ　　　　　　　　　　ＮＩＨＪ　
ＪＣ２２５ザルモネラ・ヂフイムリウム　　　　　ＩＰ
Ｏ１２５２９５０ノドａｔ＜フタ−・フロインデ（ＩＦ
ｏ　　１２６８１．　　　５０クレプンエラ・ニューモ
ニエ　　　　　ＩＦＯ３３１７１００セラチア・マルセ
ッセンス　　　　　　ＩＰＯ１２６４８２５プロテウス
・ミラビリス　　　　　　　ＡＴＣＣ２１１００＋００
プロテウス・ブルガリス　　　　　　　ＩＦＯ３９，！
１８　　１００プロテウス・モルガニ−ＩＦＯ３１６８
＞　１００ンユウドモナス・エルギノーザ　　　　ＩＦ
ｏ　　３０８０　　　５０アルカリゲネス・フェカリス
　　　　　ＩＦＯ１３＋１１　　１００アシネトバクタ
−・カルコアセティレスＩＦＯ１３００６５０（注１）
培地として、バクト・アンティビオティック・メディウ
ム３（ディフコ・ラボラトリーズ米国）；１７．５ｇ、
バクト・イースト・エキストラクト（ディフコ・ラボラ
トリーズ、米国）；５０ｇ、バクト・アガー（ディフコ
・ラボラトリーズ、米国）；２０ｇ、蒸留水；Ｉ０００
ｍｆ２　（ｐＨ無調整）を用い、接種菌液として約１（
１６コロニー・フォーミング・ユニット／ｍＱを用いた
。

また、Ｔ　Ａ　Ｎ−５８８のデアセチル体は種々のβ−
ラクタメースに対して安定である。

第４表に、エノエリヒア・コリＰＧ８を被検菌とし、２
　種のβ−ラクタメースに対する安定性をしらべた結果
を示す。

第　　４　　表 数値は阻止円直径（ｍｍ）を示す。培地、ノアミノピメ
リン酸（２０ｍｇ／ｉ２　）を含む栄養寒天培地（叶１
７．０）。

ＰＣＧ　　ヘンノルペニンリン、ＣＰＣ：セファロスボ
リンＣ，ＣＭＣセファマイノンＣ６薬剤濃度はＴ　Ａ　
Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体は１ｏ００μｇ／ｍ１
２　。

池は全てＩＯ０７ｚｇ／ｍ（！　６ ′Ｉ・バチルス・セレウス由来、カルビオケミカル社（
米国）製。

′２．エンテロバクタ−・クロアカ由来。

７３　阻止円径なし。

このように、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８，そのバラニトロベ
ンツルーもしくはベンツヒドリル−エステル体、または
これらのＮ−デアセヂル体［以下、これらを総称して、
化合物（１）という。］またはそれらの塩は、ダラム陽
性菌、ダラム陰性閑に対して抗菌性を示し、また毒性は
低い。したがって、本発明の化合物（１）またはそれら
の塩は、哺乳動物［例、ラット、マウス、イヌ、ネコ、
家畜（ウマ等）、ヒト］、家禽などの細菌感染症の治療
に用いることができる。

本発明の化合物（＋）またはそれらの塩を細菌感、　染
症の治療剤として用いるには、薬理学的に許容゛し得る
担体、賦形剤、希釈剤などと共に、錠剤、カプセル剤な
どとして経口的に、注射剤などとして非経口的に投与す
ることができる。注射剤とする場合の希釈剤等の例とし
ては、たとえば生理食塩水等が挙げられる。カプセル剤
とする場合の担体の例として、たとえば乳糖などが挙げ
られる。その投与量は、経口剤の場合は、化合物（【）
として約５−５０ｍｇ／　ｋｇ／日、好ましくは約１０
−２５ｍｇ／ｋｇ／日であり、非経肖剤の場合は、約２
５〜２５ｍｇ／ｋｇＺ日、好ましくは約５〜２０ｍｇ／
　ｋｇ／　Ｉヨである。

また、本発明によって得られる化合物（１）またはそれ
らの塩は、殺菌剤、消毒剤として用いることができる。

たとえば化合物（＋）としてＯ、０１〜０゜１Ｗ／Ｖ％
の濃度で蒸留水に溶解した液剤、またはワセリン、ラノ
リンを基剤とし、１ｇあたり化合物（１）としてＯ、２
−２０ｍｇ、好ましくは１〜１０ｍｇ含有する軟膏剤と
して、ヒトおよび動物の手１足、眼。

耳などの殺菌、消毒に用いることができる。

本発明方法で得られる化合物（１）は、また、新しい医
薬品の合成中間体としても極めて有望な化合物である。

以上述べた物理化学的性状および生物学的諸性質から、
化合物（Ｉ）は新規抗生物質である。

末巖桝 次に実施例をもってさらに詳細に本発明の詳細な説明す
るが、これによって・本発明が限定されるものではない
。なお、培地におけるパーセントは、特にことわりのな
いかぎり重量／容量％を示ず。

実施例１ 栄養寒天斜面上に生育させたエンペドバクター・ラクタ
ムゲヌス・　Ｙ　Ｋ　＝２５８（Ｉ　Ｆ　Ｏ１４３２２
゜ＦＥＲＭ　　ＢＰ−６９９）の菌株を、グルコース２
％、ソルブル・スターチ３％、生大豆粉１％、ポリペプ
トン（大五栄養化学株式会社製１日本）０，５％。

食塩０３％を含有する水溶液（ｐＨ７，ｏ）に沈降性炭
酸カルシウムＯ、５％を添加した培地５００ｍ１２を含
む２容坂ロフラスコに接種して、２４℃で４８時間往復
振盪培養した。この培養液全量を上記培地に消泡剤アク
トコール（武田薬品工業株式会社製１日本）００５％を
添加した培地３０Ｉ２を含む容量５０Ｑのタンクに接種
し、２４℃で通気量５０σ／分、２００回転／分の条件
下で４８時間培養した。この培養液６ａをデキストリン
３％生大豆粉１，５％、コーン・グルテン・ミール１．
５％、ポリペプトンＯ、２％、チオ硫酸ナトリウムＯ、
１％を含有する水溶液（ｐＨ６，５）にアクトコ−Ｊｌ
ｌｏ、０５％を添加した培地１２０ａを含む容＠　２０
０１２のファーメンタ−に接種し、１７℃で通気量２０
０Ｑ　／分、１５０回転／分の条件下で６６時間培養し
た。

ファーメンタ−２基からのｆ＠養液（２３ＧＱ）をｐＨ
８に調整後、ハイフロ・スーパー・セル（ジョンズ・マ
ンビル社製、米国）９ｋｇを用いてろ過した。

ろ液（２００１２）を叶Ｉ６に調整後アンバーライトＩ
ＲＡ　−４０２（ＣＩ型、　１０（２、Ｃ７−ム・アン
トＨハース社製、米国）のカラムクロマトグラフィーに
付した。

抗生物質を２％食塩水で溶出し、溶出液（５３１２）を
ｐＨ６に調整後活性炭クロマトグラフィー（５Ｑ。

武田薬品工業株式会社製、日本）に付した。抗生物質を
８％イソブタノールで溶出し、溶出液（］４）を減圧下
５Ｑまで濃縮した。濃縮液をｐＨ６に調整後２％トリー
ｎ−オクチルメチルアンモニウムクロライド／メチレン
クロライド溶液（２，５ＱＸ　２　）で抽出した。抽出
液を１．６％ヨウ化ナトリウム水（２，５ｅ）で処理し
、抗生物質を水層に転溶させた。水を濃縮し、濃縮液を
活性炭のクロマトグラフィ〜（５００ｍ１２）に付し、
８％イソブタノールで溶出した。

溶出液を濃縮後、凍結乾燥して、粗粉末１．４１ｇを得
た。粗粉末（１、４ｇ）を水（１００ｍ１２）に溶かし
、溶解液をＱＡＥ−セファデックスＡ−２５（ＣＩ型、
ファルマノヤ社製、スウェーデン）　２００ｍｇのカラ
１、クロマトグラフィーに付し、Ｏ、０３Ｍ食塩水で溶
出分画した。分画区分を集め（６００ｍｇ）、ｐＨ５，
１に調整後活性炭クロマトグラフィー脱塩し、溶出液を
濃縮後、凍結乾燥し、粉末（３８４ｍｇ）を得た。この
粉末を、水に溶解させ担体としてＹＭＣ−Ｐａｃｋ　　
５ｌ−１−３４３（山村化学研究新製、日本）を用いた
分取用高速液体クロマトグラフィーに付し、Ｏ、０１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ６，３）で溶出した。抗生物質を含
む両分を集め、活性炭クロマトグラフィーで脱塩し、溶
出液を濃縮、凍結乾燥し、ＴＡ、Ｎ−５８８ナトリウム
塩の白色粉末（１４１ｍｇ）を得た。

実施例２ 栄養寒天上生育させたエンペドバクター・ラクタムゲヌ
スＹＫ−２５８株（Ｉ　ＦＯ１４３２２，ＦＥＲＭ　　
Ｂ　Ｐ　−６９９）をグルコース２％、ソルブル・スタ
ーチ３％、生大豆粉１％、ポリペプトンＯ、５％９食塩
０，３％を含有する水溶液（ｐＨ７，０）に沈降性炭酸
カルシウムＯ、５％を添加した培地５００ｍ１２を含む
２ｅ容坂ロフラスコ２本に接種して、２４℃で４８時間
往復振盪培養した。この培芥液全量を」−記培地に消泡
剤アクトコール００５％を添加した培地１２０Ｑを含む
容量２００ρのタンクに接種し、２４℃で通気量２００
ρ／分、１５０回転／分の条件下で、４８時間培養した
。

この培養液６０Ｑをデキストリン３％、生大豆粉Ｉ５％
、コーン・グルテン・ミール１．５％、ポリペプトン０
２％、チオ硫酸ナトリウム０１％を含有する水溶液（＋
＋８６．５）にアクトコールＯ、０５％を添加した培地
１２０Ｏｆ＋を含む容ｆｉ２０００Ｑのタンクに接種し
、１７℃で通気ｆｉ２０００ｆ２／分、１２０回転／分
の条件下で９０時間培養した。

かくして得られた培養液をハイフロ・スーパーセル（ジ
ョンズ・マンヒル社製、米国）を用いてろ過した。ろ液
（１１５０ρ）をアンバーライトＩＲＡ−４０２ＣＣＱ
型）４０１１！のカラムクロマトグラフィーに付した。

抗生物質を２％食塩水（２００（りで溶出し、溶出液を
活性炭（２０１２）のカラムクロマトグラフィーに付し
た。８％イソ・ブタノール溶出液（８１４りをアンバー
ライトＩＲＡ−６８（Ｃ１Ｉ型）クロマトグラフィーに
付し、１％食塩水で溶出した。溶出液（５４のを再び活
性炭（１０１２）のカラムクロマトグラフィーに付し、
抗生物質を８％イソブタノール水て溶出した。溶出液（
８０１２）を減圧上濃縮し、濃縮液（５ρ）をｐＨ４，
５に補正後２％トリーｎ−オクチルメヂルアンモニウム
・クロライド／メチレンクロライド溶液（２５σ×２）
で抽出した。抽出液を１．６％ヨウ化ナトリウム溶液で
処理して抗生物質を水層へ転溶し、転溶液を濃縮した。

濃縮液（１、５Ｑ）を活性炭（０，５１２）のクロマト
グラフィ〜で脱塩操作し、溶出液を濃縮した。濃縮液を
ＱＡＥ−セファデックス（Ｃ１型）２００ｍＱのカラム
クロマトグラフィーに付した。Ｏ、０３Ｍ食塩水で溶出
分画し、活性画分（１，３１２）を得た。活性画分を活
性炭（５００ｍＱ）のクロマトグラフィーで脱塩操作し
、溶出液を濃縮後、凍結乾燥してＴ　Ａ　Ｎ　−５８８
の白色粉末（３，５６ｇ）を得た。一方抽出廃水層には
約５０％の抗生物質が残存していたので、水層（５ｇ）
をＱＡＥ−セファデックス（Ｃρ型）１ρのカラムクロ
マトグラフィーに付した。

抗生物質をＯ、０３ＭおよびＯ、０５Ｍ食塩水で溶出し
、溶出液を活性炭（２ｉ２）のカラムクロマトグラフィ
ーに付した。食塩除去液（２ρ）を再度２％トリーｎ−
オクヂルメチルアンモニウム・クロライド／メチレンク
ロライド溶液で抽出（ＩＱ、×２）シた。抽出液をヨウ
化ナトリウム溶液で処理、活性炭の脱塩工程を経て、Ｔ
　Ａ　Ｎ−５８８ナトリウム塩の白色粉末（３，１８ｇ
）を得た。

実施例３ 栄養寒天」−に成育させたりゾバクタ−・アルプスｓｐ
、　ｎｏｖ、　　ＹＫ−４２２株（ＩＦＯ１４３８４、
ＦＥＲＭ　　ＢＰ−６９８）をグルコース２％、ソルブ
ル・スターヂ３％、生大豆粉ｆ％、ポリペプトンＯ、５
％を含有する培地（ｐＨ無修正）５００ｍ１２を含む２
Ｑ容坂ロフラスコに接種して、２４℃で４８時間往復振
盪培養した。この培養液全量を」二記培地に消泡剤アク
トコール　００５％を添加した培地＋２０＆を含む容量
２００ρのタンクに接種し、２８℃で通気量１２０（１
７分。

１８０回転／分の条件下で、４８時間培養した。この培
養液１２０ρをデキストリン３％、生大豆粉３％、ポリ
ペプトン０２％を含有する水溶液（ｐＪ−ｆ無修正）に
アクトコールＯ，（１５％を添加した培地４０００ρを
含む容１Ａ　６０００ρのタンクに接種し、２２℃で通
気量４［＋００Ｑ／分、１２０回転／分の条件下で６６
時間培養した。

かくして得られた培養液をハイフロ・スーパーセル（ジ
ョンズ・マンビル社製、米国）を用いてろ過した。ろ液
（４３６０ρ）をアンバーライトＩＲＡｉ０２（ＣＩ型
）４００１２のカラムクロマトグラフィーに付した。抗
生物質を２％食塩水（２０００Ｑ、）で溶出し、溶出液
を活性炭（１６００のカラムクロマトグラフィーに付し
た。８％イソブタノール溶出液（６４０ｉ２）をアンバ
ーライトＩＲＡ−６３（Ｃ１２型）４０Ｑのカラムクロ
マトグラフィーに付し、１％食塩水で溶出した。

溶出液（２００Ｃ）を再び活性炭（８０Ｑ、）のカラム
クロマトグラフィーに（ｔ　ｌ、、抗生物質を８％イソ
ブタノール水で溶出した。溶出液（４００＆）を減圧上
濃縮し。

濃縮液を凍結乾燥し、凍結乾燥品にアセトンを加え沈澱
物としてＴ　Ａ　Ｎ−５８８のナトリウム塩（６２０ｇ
）を得た。この粉末はＨＰ　Ｌ　Ｃ分析の結果、ＴＡＮ
−５８８ナトリウム塩を５７％含有していた。かくして
得られた粉末（５ｇ）を水にとかし、ＱＡＥ−セファデ
ックス（Ｃ１型）２００ｍのカラムクロマトグラフィー
に付した。００３Ｍ食塩水て溶出分画し、活性画分（１
，，２１２）を得た。活性画分を活性炭（５００４りの
クロマトグラフィーて脱塩操作し、溶出液を濃縮後、凍
結乾燥してＴ　Ａ　Ｎ−５８８の白色粉末（２，５０ｇ
）を得ノこ。

コ（７）ＴＡＮ−５８８ノ精製粉末は、ＴＬＣのＲｆ値
、）（ＰＬＯのＲ１値、ＴＲ，ＵＶ、ＣＤおよびＮＭＲ
スペクトルおよび抗菌スペクトルによって、前記実施例
１で得られたＴ　Ａ　Ｎ　−５８８ナトリウム塩と同一
である。

実施例４ Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８ナトリウム塩（４００ｉｎｇ）を
ＤＭＦ（４ｍ）に溶解し、トリエチルアミン（１００μ
Ｑ）、バラニトロベンジルブロマイド（８００ｍｇ）を
加え、室温で３時間攪拌した。反応液に００１Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ６，３，５０ｍ１りした。抽出液を水洗後
、−濃縮して得られた油状物を酢酸エチル−石油ヘンジ
ンで粉末（５０７ｍｇ）にし、ＴＡＮ−５８８−Ａ−バ
ラニトロヘンシルエステルおよびＴＡＮ−５８８−Ｂ−
バラニトロベンジルエステルの混合物を得た。得られた
粉末を移動相として酢酸エヂル：メタノール±１９゜１
を用いてセファデックス＋、Ｈ−２０のカラムクロマト
グラフィーに付し、ＴＡＮ−５８８−八−バラニトロヘ
ンシルエステル（１０５ｍｇ）、　Ｔ　Ａ　Ｎ−５８Ｌ
−Ｂ−バラニトロヘンシルエステル（６７ｍｇ）および
両者の混合物（２８ｈ＋ｇ）を得た。

実施例５ ベン゛アフェノンヒドラゾン５８１３ｇ、　Ｉ　、　Ｉ
　、３．３〜テトラメヂルグアニジン４２ｍＱ、ヨード
１５０ｍｇをＣＨ２ＣＬ　５００ｉρにとかした。混合
液を０℃〜〜５℃に冷却後ｍ−りクロ過安息香酸（７０
％純度）７４ｇを加え、０℃で４０分間攪拌した。反応
液を水洗後、硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を留去し、
ジフェニルジアゾメタンを得た。

ＴＡＮ−５８８３１ｇをＴＨＦ＋＝懸副し、上記で得ら
れたジフェニルジアゾメタン全量をＴＨＦ！５０ｍ１２
に溶かして加えた。混合液を０℃に冷却後、２Ｎ　ＨＣ
Ｉ、６０吋を滴下し、室温で１時間攪拌した。２Ｎ　Ｈ
ＣＩ　ｌ０ｘ６加え、さらに１時間攪拌後、ＣＨｔ、ｃ
　Ｉｔを３Ｑ加えた。得られた溶液を水洗後、濃縮し、
残渣にエーテルを加え、ＴＡＮ−！Ｊ８ヘンツヒドリル
エステル（Ａ型およびＢ型の混合物）の白色結晶性粉末
２８ｇが得られた。上記混合物（１゜８ｇ）をシリカゲ
ル（１８０ｍＱ）のカラムクロマトグラフィーに付し、
クロロフォルム、メタノール（９７：　３　）の溶媒系
で溶出した。Ｂ型の化合物が先に溶出し、Ａ型の化合物
が後で溶出した。各分画を濃縮するとＴ　Ａ　Ｎ　−５
８８ヘンツヒドリルエステルのＡ型化合物（４３３ｍｇ
）、　Ｂ型化合物（４００ｍｇ）およびΔ型およびＩ３
型の混合物（４７６ｍｇ）が無色結晶として得られた。

実施例６ Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８ベンツヒドリルエステルびＢ型の
混合物）２６ｇ（５９ｍｍｏｌ）をＣＨｔＣｌ，１．２
Ｃに懸濁させ、−２０℃に冷却した。ピリジン４９ＪＩ
７２、５塩化リン３７６ｇを加え−１０〜−１５℃で５
０分間攪拌した。−３０℃まで温度を下Ｉｆた゛後Ｍｅ
Ｏ８　１８０ｍ（１を加え、−５°〜−１５℃で３０分
間攪拌し、さら（こ室温で１時間攪拌した。Ｉ　Ｎ　Ｈ
ＣＩ　３００デρを加え室温で４５分間攪拌後、反応液
に５０％リン酸ナトリラム１００ｍ＆　、　　２Ｎ　Ｎ
ａ０Ｈ（ｃａ　５００ｍｇ）を加え、水層のｐＨを８．
０に調整した。ＣＨ２Ｃｌ、２層と水層を分（ジ、水層
をさらにＣＨ２Ｃｌｙ　（６００ｍ１２）で抽出し、Ｃ
Ｈ，Ｃ’ｌ、層を合イっせ、濃縮後、残渣にエーテルを
加えてＴ　Ａ　Ｎ　７５８８のＮ−デアセチル体のベン
ツヒドリルエステル（Ａ型およびＢ型の混合物）の粉末
１７．９ｇを得た。

実施例７ Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体のベンツヒド
リルエステル（Ａ型およびＢ型の混合物）３９６ｍｇを
ＣＨｚＣｌ、］Ｏｍ（に懸濁させ、−２０℃に冷却した
。

アニソール４３４μｅトリフルオロ酢酸９２４μ夕を加
え一２０°〜−１層℃で４０分間攪拌した。反応液にＣ
Ｈｐ　Ｃｌ　２２８０ｍ１２を加え、Ｏ、１Ｍ　１ｉ３
ＰＯ，−Ｎａ２ＨＰＯ，溶液（＋）Ｈ７，３Ｘ４２０ｍ
ｅ）で抽出した。抽出液をｐＨ５，５に調整後、濃縮し
、ダイヤイオンＨＰ−２０（５０−１００ｍｅｓｈ　’
１００好）を充填したカラムを通過させ、水洗後４０％
ＭｅＯＨ水で溶出分画した。抗菌性を示す分画を集め濃
縮後、凍結乾燥してＴＡＮ−５８８のＮ−デアセチル体
（Ａ型およびＢ型の混合物）の白色粉末１４３ｍｇを得
た。

実施例８ Ｔ　Ａ　Ｎ−５８８のＮ−デアセチル体（Δ型およびＢ
型の混合物）の白色粉末１００ｍｇを水にとがし、７℃
でＬ夜装置すると、無色結晶が析出した。析出結晶をろ
取すると、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体（
Δ型）４０ｍｇが得られた。

実施例９ Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８ベンツヒドリルエステル（Ｂ型）
６５７ｍｇを実施例６と同様の反応および処理を行い、
ＴＡＮ　−５８８のＮ−デアセチル体のベンツヒドリル
エステル（１Ｂ型）２００ｍｇを得た。該化合物１８０
ｍｇをＴＨＥ、水（１：ｌ）１８ｍｇにとかし、１０％
バラノユウムー炭素９０Ｂを加え、水素気流中攪拌した
。反応液をろ適役、ろ液を濃縮し、ンエチルエーテルで
水層を洗滌後、水層を濃縮、凍結乾燥し、ＴＡ　Ｎ−５
８８のＮ−デアセチル体（Ｂ型）の粉末７７ｍｇを得た
。

実施例１０ 栄養寒天斜面上に生育させたエンペドバクター・ラクタ
ムゲヌスＹＫ−２５８（ＩＦｏ　　１４３２２．　ＦＥ
　ＲＭ　　Ｂ　Ｐ　−６９９）の菌株を、グルコース２
％。

ソルブル・スターチ３％、生大豆粉１％、ポリペプトン
０５％１食塩０３％を含有する水溶液（ｐＨ７，０）に
沈降性炭酸力ルノウムＯ、５％を添加した培地５００ｍ
Ｑを含む２ａ容坂ロフラスコに接種して、２４℃で４８
時間往復振盪培養した。この培養液全量を」二記培地に
消泡剤アクトコールＯ、０５％を添加した培地３０（を
含む容量５０ｆ２のタンクに接種し、２４°Ｃで通気量
５０ρ／分、２００回転／分の条件下で４８時間培養し
た。この培養液６Ｑをデキストリン３％。

生大豆粉１．５％、コーン・グルテン・ミール１５％。

ポリペプトン０２％、チオ硫酸ナトリウムＯ、１％を含
有する水溶液（ｐＨ６，５）にアクトコールＯ、０５％
を添加した培地１２０Ｑを含む容量２００Ｑのタンクに
接種し、１７℃で通気量２００ρ／分、１５０回転／分
の条件下で２４時間培養した。得られた培地中には、Ｔ
Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセル体（Ａ型およびＢ型の
混合物）が含まれていることが、シュードモナス・エル
ギノーザＣ〜１４１を試験菌とするＴ　Ｌ　Ｃ−バイオ
オートグラフィー法により確認された。

実施例１１ 栄養寒天斜面」二に生育させたリゾバクター・アルプス
ｓｐ、　ｎｏｖ、　ＹＫ−４２２（ｒ　ＦＯ１４３８４
，ＦＥＲＭ　　Ｂｌ’−６９８）の菌株を、グルコース
２％、ソルブル・スターチ３％、生大豆粉１％、ポリペ
プトンＯ、５％１食塩Ｏ、３％を含有する水溶液（ｐＩ
＋７．０）に沈降性炭酸力ルソウム０５％を添加した培
地５ＱＯｍＱを含　　　　　〜む２Ｑ容坂ロフラスコに
接種して、２４℃で４８時間往復振盪培養した。この培
養液全量を」二記培地に消泡剤アクトコールＯ、０５％
を添加した培地３０ｅを含容量５０りのタンクに接種し
、２４℃て通気量５０Ｑ／分、２００回転／分の条件下
で４８時間培養した。この培養液６Ｑ、をデキストリン
３％、生大豆粉１５％、コーン・グルテン・ミール１．
５％、ポリペプトン０２％、チオ硫酸ナトリウムＯ１％
を含有する水溶液（ｐＨ６，５）にアクトコール００５
％を添加した培地１２０ρを含む容量２００Ｑのタンク
に接種し、１７℃で通気量２００ρ／分、１５０回転／
分の条件Ｆで２４時間培養した。得られた培地中には、
ＴΔＮ＝５８８のＮ−デアセチル体（Ａ型およびＢ型の
混合物）が含まれていることが、シュードモナス・エル
ギノーザＣ−１４１を試験菌とするＴ　Ｌ　Ｃ−バイオ
オートグラフィー法により確認された。

実施例１２ 栄養寒天斜面上に生育させたエンペドバクター・ラクタ
ムゲヌスＹＫ−２５８（ＩＦＯ１４３２２，ＦＥＲＭ　
　ＢＰ−６９９）の菌株を、グルコース２％。

ソルブル・スターチ３％、生大豆粉１％、ポリペプトン
Ｏ、５％１食塩Ｏ、３％を含有する水溶液（ｐＨ７，ｏ
）に沈降性炭酸カルシウム０５％を添加した培地５００
ｍ１を含む２Ｑ容坂ロフラスコに接種して、２４℃で４
８時間往復振盪培養した。この培養液全量を上記培地に
消泡剤アクトコールＯ、０５％を添加した培地３０Ｑを
含む容量５０ｆのタンクに接種し、２４℃で通気量５０
Ｑ／分、２００回転／分の条件下で４８時間培養した。

栄養寒天斜面上に生育させたアシネトバクター・エスピ
ーＹＫ−５０４（ＩＦＯ１４４２０，ＦＥＲＭＢ　Ｐ−
７０９）の菌株を、グルコース２％、ソルブル・スター
チ３％。生大豆粉１％、ポリすプトン０５％１食塩０，
３％を含有する水溶液（ｐＨ７，０）に沈降性炭酸カル
シウム０５％を添加した培地５００ｍ１を含む２Ｑ容坂
ロフラスコに接種して、２４℃で４８時間往復振盪培養
した。この培養液全量を上記培地に消泡剤アクトコール
Ｏ、０５％を添加した培地３００、を含む容量５０１２
のタンクに接種し、２４℃で通気量５０Ｑ／分、２００
回転／分の条件下で４８時間培養した。

このようにして得た二種類の培養液のそれぞれ３Ｑ、を
、デキストリン３％、生大豆粉１．５％、コーン・グル
テン・ミール１．５％、ポリペプトンＯ、２％、チオ硫
酸ナトリウムＯ１％婆含有する水溶液（ｐＨ６，５）に
アクトコールＯ、０５％を添加した培地１２０ρを含む
容量２００Ｑのタンクに接種し、通気量２００９／分、
　１５０回転／分の条件下で２４℃で２４時間混合培養
し、２０℃に温度を変換し、更に４２時間混合培養した
。

培養液にハイツロスーパーセルを加え、ろ過し、ろ液（
１００のを得た。ろ液をｐＨ５に調整し、アンバーライ
トＩ　ＲＡ−４０２（ＣＩ−型、ｌ０Ｒ）のカラムクロ
マトグラフィーに付し、水洗後２％食塩水（５０ρ）で
溶出した。溶出液中にはＴ　Ａ　Ｎ　−５８８が３２μ
ｇ／ｍｌの濃度で含有されていた。通過液（１００ｆ２
）をダウエックス５０Ｗｘ２（Ｈ＋、Ｉ　ＱＱ）のカラ
ムクロマトグラフィーに付し、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８の
Ｎ−デアセヂル体を吸着させた。水溶出液とＯ、２Ｎア
ンモニア溶出液（５０（２）を濃縮し、濃縮液（１３σ
）をｐＨ５に調整後活性炭（２ａ）のクロマトグラフィ
ーに付した。８％イソブタノール溶出液（２ｒ）を濃縮
し、濃縮液（１ｅ）を再度ダウエックス５０ＷＸ２（Ｈ
生型、５０〜１００メツシユ、Ｏ、４Ｑ）のカラムクロ
マトグラフィーに付した。活性区分をＯ、２Ｎアンモニ
ア水て溶出１分画した。有効区分（１４ρ）を活性炭ク
ロマトグラフィーで脱塩し、除去液を濃縮し、濃縮液に
アセトンを加えて、粗粉末を得た。

この粗粉末を分取用逆層系高速クロマトグラフィーし担
体：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ、ＯＤＳ、５Ｈ−３４３，山村化
学研究所製１日本、移動層Ｏ、０２Ｍリン酸緩衝液（ｐ
１１６３）］に付し、活性を示すピーク部分を採取し、
溶出液中の無機塩を活性炭クロマトグラフィーで除去し
た。抗生物質を含む両分を濃縮、Ｓ結乾燥し、アセトン
を加えて、Ｔ　Ａ　Ｎ−５８８のＮ〜デアセヂル体の粉
末（５０ｍｇ）を得た。この粉末はＴＬＣバイオオート
グラム、ＨＰＬＣバイオヒストグラム。

ＩＲおよびＰＭＲで標品（ＴΔＮ　−５８８のＮ−デア
セチル体、Ａ型およびＢ型の混合物）と同定された。

実施例１３ 栄養寒天斜面上に生育させたリゾバクター・アルプス　
ｓｐ、　ｎｏｖ、　ＹＫ−４２２（Ｉ　Ｐｏ　　１４３
ｇ４．ＦＥＲＭ　　ＢＰ−６９８）の菌株を、グルコー
ス２％２ソルブル・スターヂ３％、生大豆粉１％、ポリ
ペプトンＯ、５％１食塩０３％を含有する水溶ＫｊＬ（
ｐ＋ｎ、ｏ）に沈降性炭酸力ルンウムＯ、５％を添加し
た培地５００ｍ１を含む２Ｑ容坂ロフラスコに接種して
、２４°Ｃて４８時間往復振盪培養した。この培養液全
量を上記培地に消泡剤アクトコールＯ、０５％を添加し
た培地３０Ｑを含む容量５０Ｑのタンクに接種し、２４
℃で通気ｆｆ１５０（！／分、２００回転／分の条件下
で４８時間培養した。

栄養寒天斜面上に生育させたアシネトバクター・エスピ
ー　ＹＫ−５０４（１，ＦＯ１４４２０，ＦＥＲＭ　　
Ｂ　Ｐ　−７０９）の菌株を、グルコース２％、プルプ
ル・スターヂ３％、生大豆粉１％、ポリペプトンＯ、５
％９食塩０３％を含有する水溶液（ｐＨ７，０）に沈降
性炭酸カルシウム０５％を添加した培地５ＱＯｍｌを含
む２Ｑ容坂ロフラスコに接種して、２４℃で４８時間往
復振盪培養した。この培養液全量を上記培地に消泡剤ア
クトコールＯ、０５％を添加した培地３０Ｑを含む容量
５０１２のタンクに接種し、２４℃で通気量５０Ｑ／分
、２００回転／分の条件下で４８時間培養した。

このようにして得た二種類の培養液のそれぞれ３Ｑ、を
、デキストリン３％、生大豆粉１．５％、コーン・グル
テン・ミール１．５％、ポリペプトンＯ、２％、チオ硫
酸ナトリウムＯ、１％を含有する水溶液（ｐ１１６．５
）にアクトコール００５％を添加した培地１２０ｆｆｉ
を含む容！２００１２のタンクに接種し、通気量２００
Ｑ／分、１５０回転／分の条件下で２４℃で２４時間混
合培養し、２０℃に温度を変換し、更に、４２時間混合
培養した。得られた培地中には、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８
のＮ−デアセチル体（Ａ型およびＢ型の混合物）が含ま
れていることが、ンユートモナス・エルギノーザＣ−１
４１を試験菌とするＴ　Ｌ　Ｃバイオオートグラフィー
法により確認された。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８（ＡおよびＢの平衡混
合物）の紫外部吸収スペクトルを示す。第２図、第３図
、第４図、第５図、第６図、第７図、第８図、第９図。 第１０図、第１１図および第１２図は、Ｔ　Ａ　Ｎ−５
８８（ＡおよびＢの平衡混合物）、ＴＡＮ−５８８のバ
ラニトロベンジルエステル（ＡおよびＢの混合物）、Ｔ
ＡＮ−５８８バラニトロベンジルエステル（Ａ型）、Ｔ
ＡＮ−５８８バラニトロベンジルエステル（Ｂ型）、Ｔ
ＡＮ　−５８８ベンツヒドリルエステル　（ＡおよびＢ
の混合物）、ＴＡＮ−５８８ベンツヒドリルエステル（
Ａ型）、Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８ベンツヒ下リルエステル
（Ｂ型）。 Ｔ　Ａ　Ｎ　−５８８のＮ−デアセチル体のベンツヒド
リルエステル（ＡおよびＢの混合物）、ＴＡＮ−５８８
のＮ−デアセチル体のベンツヒドリルエステル（Ａ型）
、ＴＡＮ−５８８のＮ−デアセチル体のベンツヒドリエ
ステル（Ｂ型）、、Ｔ　Ａ　Ｎ　ｌ−５８８のＮ−デア
セチル体（ＡおよびＢの混合物）、ＴＡＮ−５８８のＮ
−デアセチル体（Ａ型）およびＴ　Ａ　Ｎ　−５８８の
Ｎ−デアセチル体（Ｂ型）の赤外部吸収スペクトルをそ
れぞれ示す。 竿１図 城東（ｎｍ） 親特？ 剣噸ｔ−≦ （転）−井≦

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ［１］、カルボキシ基におけるナトリウム塩として次の
   物理化学的性状を有する抗生物質ＴＡＮ−５８８； （１）外観：白色粉末 （２）構成元素がＣ、Ｈ、Ｎ、ＯおよびＮａからなる元
   素分析値（％）、五酸化リン上で４０℃、６時間乾燥し
   た試料。 実測値　　　　　　　計算値＾※ Ｃ、３８．５±２０　Ｃ、３９．６１ Ｈ、４．５±１．０　Ｈ、３．９９ Ｎ、９．１±１．５　Ｎ、９．２４ Ｏ、３９．５８ Ｎａ、６．９±１．５　Ｎａ、７．５８ （※０．５モルの付着水を含むとして計算）（３）分子
   式：Ｃ＿１＿０Ｈ＿１＿１Ｎ＿２Ｏ＿７Ｎａ（４）ＳＩ
   ＭＳ法による分子イオンピークは次のとおりである。 ｍ／ｚ６１１（２Ｍ＋Ｎａ）＾＋、３１７（Ｍ＋Ｎａ）
   ＾＋、２９５（Ｍ＋ I I ）＾＋ （５）紫外部吸収スペクトル（水中）：２１６ｎｍ付近
   に肩を示す。 （６）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム綻による主
   な吸収。 ３４５０、１７８０、１７３０、１６６０、１５５０、
   １３８５、１３２０、１２９０、１２６０、１２００、
   １１２０、１０４０、９８０、９１０、８１０、７７０
   、６９０、６００、５４０ｃｍ＾−＾１。 （７）溶解性：水、ジメチルスルフォキサイドに可溶。 酢酸エチル、クロロホルム、 ジエチルエーテルに難溶。 （８）呈色反応・ニンヒドリン反応に陽性。 グレイグ・リーバック、坂口、エールリッ ヒ、バートン、ドラーゲンドルフ反応に陰性。 （９）酸性、中性、塩基性の区別：中性物質（遊離体は
   酸性物質）、 そのパラニトロベンジル−もしくはベンツヒドリルエス
   テル体、またはこれらのＮ−デアセチル体またはそれら
   の塩。 ［２］、エンペドバクター属またはリゾバクター属に属
   し抗生物質ＴＡＮ−５８８および／またはそのＮ−デア
   セチル体を生産する能力を有する微生物を培地に培養し
   、培養物中に抗生物質ＴＡＮ−５８８および／またはそ
   のＮ−デアセチル体を生成蓄積せしめ、これを採取する
   ことを特徴とする抗生物質ＴＡＮ−５８８および／また
   はそのＮ−デアセチル体またはその（それらの）塩の製
   造法。 ［３］、ＤＮＡのＧＣ（グアニン＋シトシン）含量が７
   ０％をこえるエンペドバクター・ラクタムゲヌス。 ［４］、白色のコロニーを形成し、Ｏ−Ｆ（オキシダテ
   ィブ−ファーメンタティブ）テストが非分解型でかつ無
   機窒素源の資化性を有さないリゾバクター・アルプス。 ［５］、抗生物質ＴＡＮ−５８８またはその塩を脱アセ
   チル化することを特徴とする抗生物質ＴＡＮ−５８８の
   デアセチル体またはその塩の製造法。 ［６］抗生物質ＴＡＮ−５８８またはその塩にベンツヒ
   ドリル基を導入し得る化合物を反応させ、抗生物質ＴＡ
   Ｎ−５８８のベンツヒドリルエステル体とし、次いでこ
   れを脱アセチル化反応に付すことを特徴とする抗生物質
   ＴＡＮ−５８８のデアセチル体のベンツヒドリルエステ
   ル体の製造法。 ［７］、エンペドバクター属またはリゾバクター属に属
   し抗生物質ＴＡＮ−５８８および／またはそのＮ−デア
   セチル体を生産する能力を有する微生物と、該微生物と
   混合培養することにより該微生物に抗生物質ＴＡＮ−５
   ８８のＮ−デアセチル体を蓄積させる能力を有するアシ
   ネトバクター属に属する微生物とを培地に混合培養し、
   培養物中に、抗生物質ＴＡＮ−５８８のＮ−デアセチル
   体を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
   抗生物質ＴＡＮ−５８８のＮ−デアセチル体またはその
   塩の製造法。