JPH03181497A

JPH03181497A - 抗生物質ｔａｎ―１２８９およびその製造法

Info

Publication number: JPH03181497A
Application number: JP1322173A
Authority: JP
Inventors: Hideo Ono; 英男小野; Nozomi Katayama; 片山　望; Shigetoshi Tsuboya; 重利坪谷
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1989-12-11
Filing date: 1989-12-11
Publication date: 1991-08-07

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は病原微生物による感染症の治療剤として有用な
新規抗生物質ＴＡＮ−１２８９その製造法および用途に
関する。

従来の技術抗生物質ＴＡＮｉ２８９二塩酸塩のＵ■スペクトル、分
子式および塩酸加水分解物のアミノ酸分析を指標として
既知抗生物質との異同を調べたところ、近縁の化合物と
してハイペブチン（ザ・ジャーナル・オブ・アンチバイ
オティクス（ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂ
ｉｏｔｉｃｓ　）、　４２巻、１４６０頁。

１９８９年参照）が認められた。しかし、抗生物質ＴＡ
Ｎ−１２８９二塩酸塩と／＼イペプチンニ塩酸塩の分子
式は異なる。

発明が解決しようとする課題細菌によって惹起される疾病は抗生物質投与による治療
法の発達によってかなり克服されている。

しかし、従来の抗生物質を長期あるいは大量に投与する
ことによる起因間の変化（閑交代現象）あるいは耐性菌
の出現（耐性化現象）は現在の感染症治療医療分野で大
きな問題となっている。この問題を克服するために、当
分野では、常に新規骨格を有し、新しい生物活性を示す
抗生物質、あるいはそれらを合成するための中間原料が
求められている。

課題を解決するための手段本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
のバクテリアを土壌より分離し、その産生ずる抗生物質
を分離探索したところ、ある種の微生物が新規な抗生物
質を産生ずること、該微生物がリゾバクター属に属する
こと、該微生物を適宜の培地に培養することによって多
剤嗣性菌を含むダラム陽性および一部のダラム陰性菌に
対して抗菌力を示す抗生物質を培地中に蓄積しうろこと
などを知り、この抗生物質を単離し、その物理化学的お
よび生物学的諸性質から、当該抗生物質が新規抗生物質
であることを確かめ、これを抗生物質ＴＡＮ−１２８９
と称することとした。

本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究した
結果、本発明を完成した。

本発明は、（１）抗生物質ＴΔＮ−１２８９またはその
塩、（２）リゾバクター属に属し、抗生物質ＴＡＮ−１
２８９を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、
培養物中に抗生物質ＴＡＮ１２８９を生産する能力を有
する微生物を特徴とする抗生物質ＴＡＮ−１２８９また
はその塩の製造法および（３）本物質またはその塩を含
有する感染症治療剤を提供するものである。

本明細書においては抗生物質ＴＡＮ−１２８９を単にｒ
ＴＡＮ−１２８９Ｊと弥することもある。

本発明で使用されるＴＡＮ−１２８９生産閏としては、
リゾバクター（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ）属に属し、あれ
ぽいかなる微生物でもよい。その具体例としては、本発
明者らが宮崎県都井岬の土壌より採取したＰＫ−２３２
株（以下、ｒＰＫ−２３２株」と略称することもある。

）が挙げられる。

ＰＫ−２３２株の菌学的性状は下記のとおりである。

（ａ）形　態肉汁寒天斜面上で２４°Ｃ，５日間培養後の観察では、
細胞は幅０．４〜０．８μｍｓ長さ０．９〜２．２μｍ
の桿状あるいは、長さ２０〜４０μｍのフィラメント状
を示し、鞭毛はなく、ブライディングによる運動性を有
する。胞子を形成せず、またミクロシストも形成しない
。ダラム染色は陰性で、抗酸性を示さない。

（ｂ）各種培地上での生育状態２４°Ｃで培養し、ｌないし１４日間にわたって観察し
た。

■肉汁寒天平板培養：コロニーは不透明で光沢があり、
クリーム色で、円形、周縁はひだ状■肉汁寒天斜面培養
：良好な拡布状の生育を示し、クリーム色を呈す。

■肉汁液体培養：混濁状に生育し、沈澱を生じ、菌膜を
形成する。

■肉汁ゼラチン穿刺培養：主として上部で生育し、液化
する。

■リドマス・ミルク：ペプトン化か認められる。

（ｃ）生理的性質 ■哨酸塩の還元 ■脱窒反応。

■Ｍ　Ｒ（メチルレッド）テスト。

■■Ｐ（フォーゲス・プロスカラエル）テスト：■イン
ドールの生成。

■硫化水素の生成（ＴＳＩ寒天および酢酸鉛紙）■デン
プンの加水分解 ■クエン酸の利用クリステンセン。

シ　　モ　　　ン　　ズ ■無機窒素源の利用＋ｉ）硝酸カリウム：）硫酸アンモニウム： ■色素の生成：キングＡおよびマンニット酵母エキス寒
天の各培地において、可溶性色素の生成は認められない
がキングＢ培地で淡褐色の色素の生成が認められる。

■ウレアーゼ ■オキシダーゼ：　＋［株］カタラーゼ、　＋ ■生育温度＋　　１６．５〜３７．５°Ｃで生育するが
最適温度は１７〜２５°Ｃ０培地：　肉汁液体培地。

■酸素に対する態度：　好気的。

＠ｔｏ　−Ｆ　（オキシダティブーファーメンタテイブ
）テスト［ヒユー・レイフソン（Ｉｌｕｇｈ−Ｌｅｉｆ
ｓｏｎ）法］：非分解。

Ｏ糖の利用性＝　Ｄ−マンノース、Ｄ−フラクトース、
　Ｄ　−カラクトース、マルトース、シュクロース、ラ
クトース、トレハロース、Ｄ−ソルビトール、ソルボー
スおよびラフィノースを利用する。

０の高分子多糖の分解能ＣＭＣ：　　＋コロイダル・キチン二　十アルギン酸ナトリウム。

＠Ｔｗｃｅｎ　ｇｏの加水分解゛　＋［相］アミノ酸脱炭酸オルニチン：アルギニンリ　　　ジ　　ン　：＠ＤＮＡのＧＣ（グアニン−シトシン）含量７２２±ｌ
　０％（Ｔｍ法）以上の菌学的諸性状を有するＰＫ−２３２株を、バーシ
ーズ・マニュアル・イブ・デターミネイティブ・バクテ
リオＯン（Ｂｅｒｇｅｙ　ｓ　　Ｍａｎｕａｌ　　ｏｒ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　ＢａｃＬｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ　）第８版およびインターナンヨナル・ンヤーナル・
イブ・／ステマチイック・バタテリオロジー（Ｉｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ　ＪｏｕｒｎａｌｏｒＳｙｓｔｅｍ
ａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第３０巻　２２
５〜４２０百（１９８０年）、同第３２巷　１４６〜１
４９頁、（１９８２年）に記載の種と照合すると、ダラ
ム陰性桿菌で、鞭毛はなく、ブライディングによる運動
性を示し、胞子およびミクロシストを形成しない。好気
性で、高分子多糖を分解し、ＤＮＡのＧＣ含量が、７２
．２％であることから、リゾバクター属に属する細菌と
考えられた。そこで、ＰＫ−２３２株をリゾバクター属
の一菌種と考え、リゾバクター・エスピーＰＫ−２３２
（Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ　　ｓｐ、　　Ｐ　Ｋ　−２３
２）と呼称することにした。

上記リゾバクター・エスピーＰＫ−２３２株は、１９８
９年１１月２９日から通商産業省工業技術院微生物工業
技術研究所（ＦＲＩ、日本国茨城県つくば苗束１丁目１
番３号）に受託番号ＦＥＲＭＰ−１１１３６として、ま
た１９８９年１１月１３日から財団法人発酵研究所（ｒ
Ｆｏ、日本国大阪府大阪市淀川区十三本町２丁目１７番
８５号）にｒＦｏ　　１４９７４としてそれぞれ寄託さ
れている。

本発明に用いられるリゾバクター属細菌は、股にその性
状が変化しやすく、たとえば紫外線。

Ｘ線あるいは化学薬品（例、ニトロソグアニジン、エチ
ルメタンスルホン酸）などを用いる人工変異手段で容易
に変異しうるちのであり、どのような変異株であっても
、本発明の対象とするＴＡＮ１２８９の生産能を有する
ものは、すべて本発明に使用することができる。

ＴＡＮ−１２８９生産閑の培養に際しては、炭素源とし
ては、たとえばグルコース、フラクト−ス、マルトース
、可溶性デンプン、デキストリン１、由脂類（例、大豆
部、オリーブ油など）および有機酸類（例、クエン酸、
コハク酸、グルコン酸など）などか適宜用いられる。窒
素源としては、たとえば大豆粉、綿実粉、コーン・グル
テン・ミール、乾燥ｎ￥母、酵母エキス、肉エキス、ペ
プトンおよび尿素などの有機窒素化合物が利用できる。

また、無機塩としては、たとえば塩化ナトリウム、塩化
カリウム、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、リン酸
−カリウムおよびリン酸二ナトリウムなどの通常細菌の
培養に必要な無機塩類が単独もしくは適宜、組合せて使
用される。

また、硫酸第一鉄、硫酸銅などの重金属類、ビタミンＢ
、およびビオチンなどのビタミン類なども必要に応じて
添加される。さらにシリコンオイルやポリアルキレング
リコールエーテルナトの消泡剤や界面活性剤を培地に添
加してもよい。その他、菌の発育を助け、ＴＡＮ−１２
８９の生産を促進するような有機物や無機物を適宜に添
加してもよい。

培養方法としては、一般の抗生物質の生産方性と同様に
行えばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培養
の場合は静置培養、攪拌培養、振盪培養、通気培養など
いずれを実施してもよいが、特に通気攪拌培養が好まし
い。また、培養温度はおよそ１７℃〜３０℃の範囲が好
ましく、培地のｐＨは約５〜８の範囲でおよそ８時間な
いし１６８時間、好ましくは約２４時間〜１４４時間培
養する。

培養物から目的とするＴＡＮ−１２８９を採取するには
微生物の生産する代謝物をその微生物の培養物から採取
するのに通常使用される分離手段が適宜利用される。た
とえばＴＡＮ１２８９１１水溶性塩基性物質の性質を示
し、主として培養ろ液中に含まれるので、まず培養液に
ろ湯桶助剤を加えてろ過あるいは遠心分離によって、菌
体を除去する。得られた培養ろ液を適宜の担体に接触さ
せてろ液中の有効成分を吸着させ、次いで適宜の溶媒で
有効物質を脱着させ、分別採取する手段が有利に利用さ
れる。クロマトグラフィーの担体としては活性炭、粉末
セルロース、吸着性樹脂など化合物の吸着性の差を利用
、または陽イオン交換樹脂、陽イオン交換セルロースあ
るいは陽イオン交換セファデックスなど化合物の官能基
の差を利用あるいはセファデックスあるいはバイオゲル
類など化合物の分子量の差を利用するものが有利に用い
られる。これら担体から目的とする化合物を溶出するた
めには担体の種類、性質によって組み合せが異なるが、
たとえば水溶性有機溶媒の含水溶液すなわち、含水アセ
トンあるいはａ水アルコール類など、あるいは酸、アル
カリ、緩衝液もしくは無機あるいは有機塩を含む水溶液
などが適宜組み合わせて用いられる。

また、ろ液中から粗物質を得るにはろ液を塩基性好まし
くはｐＨ７〜９に調整し、有機溶媒たとえばブタノール
、イソブタノールまたはｎ−アミルアルコールなどで抽
出し、抽出液を濃縮し、Ｉｎ縮肢にアセトンを加えて粉
末にする方法によっても得られる。

さらにこれらのクロマトグラフィーあるいは溶媒抽出に
よって得られた抗生物質を含む粗物質を分取用高速液体
クロマトグラフィーに付し、精製品を得る事も行われる
。

さらに詳しく述べるならば、担体として陽イオン交換樹
脂たとえばアンバーライトＩ　ＲＣ−５０あるいはＣＧ
−５０（Ｃｊ−ム・アンド・ハース社製、米国）などを
用いるとる液中の抗菌性物質は吸着され、塩類、アルカ
リあるいは酸含有の水溶Ｉ夜あるいは緩衝液などで溶出
される。また、陽イオン交換分子ふるい他樹脂たとえば
ＣＭ−セファデックス（ファルマシア・ファイン・ケミ
カルス゛ｉ土重２スウェーデン）などの担体に抗生物質
を吸首せしめ、塩類あるいは酸含有の水溶戚あるいは緩
衝液などによって溶出させることが出来る。これら溶出
ｔｌｌ中の塩類１着色物質などを取り除くためにはクロ
マトグラフィー用活性炭（武田薬品工業株式会社製）あ
るいは吸着性樹脂たとえばダイヤイオンＨＰ−２０ある
いはＳｌ’−２０７（三菱化成工業株式会社製）あるい
はアンバーライトＸＡＤ−■（ローム・アンド・ハース
社製、米国）などが有利に用いられる。分画された溶出
区分は濃縮、凍結乾燥などの工程を経て、粉末化される
。かくして得られた粉末の純度が悪い場合、さらに精製
するためには高速液体クロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ
）が有利に利用される。用いられる担体としてはたとえ
ばＴＳＫゲル（東ソー株式会社製）あるいはＹＭＣゲル
（山村化学研究新製）などが挙げられ、移動層としては
メタノールあるいはアセトニトリルなどと無機塩含有水
溶液あるいは緩衝液などとの混合液が用いられる。なお
ＴＡＮ１２８９は鉱酸たとえば塩酸、硫酸、リン酸など
あるいは有機酸たとえば蟻酸、酢酸、修酸などの塩とし
て単離される。

このようにして、塩の形で単離されたＴＡＮｉ２８９塩
を、常套手段により遊離形のＴＡＮ１２８９とすること
もでき、また該遊離形の化合物を常套手段により上記と
同様の塩の形にすることもできる。

後述の実施例２で得られたＴＡＮｉ２８９二塩酸塩の物
理化学的性状はつぎの通りである。

（１）外観：白色粉末（２）旋光度：［αコ２３＋７±２°（ｃｏ、５０．水
中）（３）分子量：　ｍ／　ｚ　１１００８（＋　Ｈ）
”＋（Ｓｌ−マス・スペクトルより）（４）元素分析値：（％）（水分５モルとして計算）実
測値、　　Ｃ，４３，７４，Ｈ，７，２１；　　Ｎ、１
５．１４・ＣＱ、　６．７１計算値；　　Ｃ，４４，１０；　　Ｈ，６，９７・　Ｎ
　、　１５．５５；ＣＨ２．　ａ、　０５（５）分子式：　　Ｃ４３ＨＢｇＮ　＋３０１５・２Ｈ
Ｃ（２（６）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：水中、１
％極大値：２２２±３ｎｍ（ＥｔｃＩ＋、　１１８±２０
）。

２７２±３ｒ＋ｍ（Ｅ’％　１３±３）。

１ｃｍ２７９±３ｎｍ（Ｅ’％　１１±３）１ｃｍ（７）赤外部吸収（Ｉ　Ｒ）スペクトル：ＫＢｒ錠剤中
。

主な吸収を示す（波数、ｃ’ｍ−’）３３８０、２９７０．１７５０．１６７０．１５１０．
　Ｈ８０１３２０、１２６０，１２３０，１１１０，１
０５０，８４０，５５０（８）　１３Ｃ核磁気共鳴（Ｎ
ＭＲ）スペクトル７５　Ｍ　Ｈｚ、　Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏｄ
ｏ中、δｐｐｍ　；１７３．７５（Ｑ）、　１７１．３
３（Ｑ）、　１７１．２２（Ｑ）、　１６９．８２（Ｑ
）、　　１６９．５７（Ｑ）、　１ｆ＋８．９６（Ｑ）
、　１６１３．８６（Ｑ）。

＋ｓｇ、ｇｔ（Ｑ）、　１６７．５９（Ｑ）、　１６７
．５０（Ｑ）、　１５６．７４（Ｑ）、　１５６．５７
（Ｑ）、　１３０．７６（Ｑ）、　１２７．９０（ＣＨ
＋）。

１１４．４６（ＣＨ＋）、　７５．００（ＣＨ）、　７
２．９０（ＣＨ＋）、　７２．４５（Ｃ１ｌ）、　７１
．７０（ＣＨ＋）、　６３．４３（ＣＨ）、　５８．２
２（Ｃ１１）５７．８６（ＣＨ＋）、　５６．４８（Ｃ
Ｈ）、　５３．６８（Ｃ１１）、　５２．８６（ＣＨ）
、　５１．３９（ＣＨ＋）、　４８．６３（ＣＨ＋）、
　４０．１２（ＣＨ＋、）。

３０．７０（ＣＨ）、　３０．４６（Ｃ１１）、　２８
．９３（Ｃ１ｌｔ）、　２４．９８（９）（１０）（１１）（ＣＢ、）、　　２４．３５（ＣＨ）、　　２３．１２
（ＣＨ３）、　　２０．７８（ＣＨ−）１９．４６（Ｃ
Ｈ３）、　　１８．９７（ＣＨ３）、　　１８．８５（
ＣＨ，）１７、０７（Ｃ１５）、　　１７．０３（ＣＨ
＋３）（たたし、Ｑは四級炭素、Ｃ８はメチン、ＣＨ２
はメチレン、ＣＨ３はメチルを示す。）溶解性：可溶；　水、メタノール、ジメチルスルフォキサイドＲｍ：　酢酸エチル、アセトン呈色反応：陽性；ニンヒドリン、バートン、坂口反応陰性；ドラー
ゲンドルフ、エールリッヒ反応高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）・担　　体、ＹＭＣ−パック　Ａ−３
１２（山村化学研究新製）移動相；２２％アセトニトリル１０．０１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ３）流　　　速；　２ば／ｍｉｎ検出法；ＵＶ吸収（２１４ｎｍ）溶出時間；２，６分（１２）ス１層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：ａ）担
　　体；セルロースｆ（東京化或工業株式会社製）展ＩＳ”ｔ５　ｍ　媒；アセトニトリル：水（３：ｌ）
Ｒ「値；０５８ｂ）担　　体；シリカゲル６０Ｆｘｓ＊展開溶媒、ｎ−
ブタノール：酢酸；水（２・ｌ：１）Ｒｆ値；０．１６（１３）アミノ酸分析：６Ｎ塩酸中、１１０’Ｃ，１５
時間加水分解した試料アラニン、バリン、ロイシン。

アルギニン（１４）性質・中性物質（遊離体は水溶性塩基性物質）
次に、ＴＡＮ−１２８９の生物学的活性について述へる
。ＴＡＮ−１２８９二塩酸塩の各種細菌に対する抗菌活
性は第１表に示すとおりである。

第 ■ 表ＦＤＡ　２０９ＰＩＦｏ　３７６２ミクロコツカス・ルテウス　ＩＰＯ１２７０８バチルス
・ズブチリス　ＮＩＩＩＪ　Ｐｃｔ　２１９バチルス・
セレウス　ＰＤＡ　５バチルス・メガテリウム　ＩＰｏ　１２１０８１．５６１．５６１．５６６．２５ＩＰｏ　３９８９ＩＦｏ　３１８１エシェリヒア・コリ　ＮＩＩＩＪ　ＪＣ２ＩＰＯＬ２５
２９シトロバクタ−・フロインデイ　ＩＦｏ　１２６８１ク
レブシエラ・ニューモニエ　ＩＦＯ３３１７エンテロバ
クター・クロアカ　ＩＦＯ１２９３７ブロテウス・ブル
ガリス　ＩＦｏ　３９８８シユードモナス・エルギノー
ザ　ＩＰｏ　３０８０アルカリゲネス・フエカーリス　
ＩＦＯ１３１１１つづくアシネトバクタ−・カルコアセティクス　　　　２５（
ｌ主１）バクト・アンティビオティック・メディウム３
（デイフコ・ラボラトリーズ、米国）１７゜５ｇ、バク
ト・イースト・エキストラクト（デイフコ・ラボラトリ
ーズ、米国）５０ｇ、蒸留水１ｏｏ。

ｄ（ｐＨ無調整）からなる培地を用い、接種菌液として
約ｌＯ６コロニー・フォーミング・ユニット（ＣＦ　Ｕ
　）／ｄヲ用い、アガー・グイリュージョン店によって
訓電した。

次に、ＴＡＮ−１２８９二塩酸塩の臨床分離スタフィロ
コッカス・アウレウスに対する抗菌活性を第２表に示す
。

第２表２４１１０８ｐＨ４３、ｌ　３１．５６１．５６（注ｌ）寒天希釈法による。培地ニドリプティケース・
ソイ・アカ−（ベクトン・デイキンソンＣＢｅｃｔｏｎ
　　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）社製、米国）に】Ｏ％馬血ｌ
ｆ４を添加したもの。接種菌量：　１０’ＣＦＵ／ｄ培
養温度、３７°Ｃ培養時間二１８時間（注２）用いた菌
株は、いずれもメチシリン削性スタフィロコッカス・ア
ウレウスまた、スタフィロコッカス・アウレウス３０８Ａ−１を
腹腔内感染させたマウスに対する′ＦＡ　Ｎ−１２８９
二塩酸塩の治療効果は、第３表に示すとおりである。

第３表さらに、ＴＡＮ−１２８９二塩酸塩の急性毒性をマウス
を用いて測定した結果は第４表に示すとおりである。

第　　４　　表これらのデータから明らかなように、ＴＡＮ１２８９お
よびその塩は多剤６ｊ性菌を含むグラム陽性菌および一
部のダラム陰性閑に対して強い抗菌性を示し、哺乳動物
などに対する毒性が弱い。

したがってＴＡＮ−１２８９およびその塩は哺乳動物（
到、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、豚、牛。

犬、ヒト）の病原微生物による感染症の治療に広く用い
ることが出来る。

ＴＡＮ−１２８９またはその塩を感染症の治療剤として
用いるには、たとえばＴＡＮ−１２８９またはその塩を
薬理学的に許容され得る担体、賦形剤、希釈剤などと混
合し、たとえばＴＡＮ１２８９またはその塩を注射剤と
して非経口的に上記哺乳動物の皮下、静脈内または筋肉
内に約０゜Ｏｌないし１０　ｍｇ／　ｋｇ／日、好まし
くは約０．０２ないし５　ｍｇ／　ｋｇ／日投与する。

また経口的にはＴＡＮ−１２８９またはその塩をカプセ
ル剤あるいは錠剤とし、ＴＡＮ−１２８９として約０．
１ないし５０　ｍｇ／　ｋｇ／日、好ましくは約０．２
ないし２５　ｍｇ／　ｋｇ／日投与する。

また、ＴＡＮ−１２８９またはその塩は、殺菌剤として
用いることができる。たとえばＴＡＮ１２８９またはそ
の塩をＴＡＮ−１２８９として約ｏ、ｏｏｔないし０．
１ｗ／ｖ％の濃度で蒸留水に溶解した液剤、あるいはＩ
ｇあたりＴＡＮ１２８９として約０．０１ないし１ｍｇ
、好ましくは約０．０２ないし０．５ｍｇ含有する軟膏
剤として、上記哺乳動物の手２足、眼、耳などに塗布あ
るいは点眼することにより、これらの部位の殺菌、消毒
に用いることができる。

実施例次に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。

なお、培地におけるパーセントは、特にことわりのない
かぎり重量／容量％を示す。

実施例１栄養寒天斜面上に生育したりゾバクター・エスピーＰＫ
−２３２（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１１１３６；ＩＦＯ１４９
７４）の菌株を、グルコース２％。

可溶性デンプン３％、生大豆粉１％、コーン・ステイー
プ・リカー０．３％、ポリペプトン（日本製薬株式会［
ａ）０．５％および食塩０．３％を含有する水溶液（１
）Ｉ（７，０）に比降性炭酸カルシウム０．５％を添加
した培地５００ｄを含む２０００ｄ容坂ロフラスコに接
種して、２４°Ｃで４８時間振盪培養した。上記組成か
らなる培地に０．０５％のアクトコール（消泡剤、武田
薬品工業株式会社製）を加えた培地３０＆を含む５０Ｑ
容ファーメンタ−にＱ通気、毎分２００回転の攪拌をし
なから２４°Ｃで４８時間培養した。培養液６Ｑをデキ
ストリン３％、コーン・ステイープ・リカー１％、ポリ
ペプトン０．２％、塩化カルシウム０．５％、グリセロ
ール１％、Ｌ〜ハＩＪン０．２％およびアクトコールＯ
Ｏ５％からなる培地１２０ｆ２を含む２００Ｃ容ファー
メンタ−２基にそれぞれ移植し、毎分１２０ｆ２通気、
毎分１７０回転の攪拌をしながら２０’Ｃで９０時間培
養した。

実施例２実施例１で得られた培養液２００ｊにハイフロス−パー
セル（ジョンズ・マンビル・プロダクト社製、米国）を
加え、ろ過、水洗しろ液（２００＆）を得た。ろ液をｐ
Ｈ６，５に調整後、ダイヤイオンＨＰ−２０（ＩＯＣ）
を充填したカラムを通過させた。水（３０Ｃ）でカラム
を洗浄後、８％イソブタノール−０，０２Ｎ塩酸（５０
Ｃ）で溶出した。溶出酸をｐＨ８，０に調整後、イソブ
タノール（＋８＆）で３回抽出した。得られた抽出族を
ｐｉ（３，０に調を加え、水（０，８＆）で３回抽出し
た。抽出液を１）ｌ−１６，０に調整後、ダイヤイオン
ＨＰ−２０（５０−１００メツシユ、０．５Ｑ）を充填
したカラムを通過させた。水（ｌ。５Ｑ）でカラムを洗
浄後、メタ／−ル（１５５ｆｆ）次いでメタノール／Ｉ
Ｎ塩酸（４９：Ｉ、２＆）で溶出、分画した。活性画分
を集め、濃縮、凍結乾燥して、ＴＡＮ−１２８９の粗粉
末（５，２ｇ）を得た。

この粗粉末（５、２ｇ）を分取用逆（自系高速液体クロ
マトグラフィー［担体：ＹＭＣ−パック５３６３．１−
１５，０ＤＳ（山村化学研究新製、移動相：１８％アセ
トニトリル−〇、ＯＩＭリン酸緩゛衝１ｆｆｌ　（ｐＨ
３）］に付し、活性画分を得た。この画分をｐｌ−（（
３に調整後、アンバーライトＩＲＡ４０２（（ｄ！型、
ｌ＆）を充填したカラムを通過させ、水（１ａ）で洗浄
した。通過液と水洗液を合わせ、ダイヤイオンＨＰ−２
０（５０−１００メツシユ。

０．７１２）のカラムクロマトグラフィーを行ない、ｊ
９／−ル／ｌＮ塩酸（４９：　１．　３１２）テ溶出、
分画した。活性画分を集め、濃縮乾固し、残渣にアセト
ンを加え粉末化して、ＴＡＮ−１２８９二塩酸塩（７１
５ｍｇ）を白色粉末として得た。

発明の効果本発明のＴＡＮ−１２８９はバクテリアによって生産さ
れる新規抗生物質であり、病原微生物の発育を強力に阻
害するので臨床用医薬品あるいは動物用薬品として、た
とえば感染症の治療剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は抗生物質ＴＡＮ−１２８９二塩酸
塩のＵＶおよびＩＲスペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】［１］二塩酸塩として次の物理化学的性状を有する抗生
物質ＴＡＮ−１２８９；（１）外観：白色粉末（２）分子式：Ｃ＿４＿３Ｈ＿６＿９Ｎ＿１＿３Ｏ＿１
＿５・２ＨＣｌ（３）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：
水中極大値：２２２±３ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ
１１８±２０）、２７２±３ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ
＿ｍ１３±３）、２７９±３ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ
＿ｍ１１±３）（４）赤外部吸収（ＩＲ）スペクトル：
ＫＢｒ錠剤中、主な吸収を示す（波数、ｃｍ＾−＾１３３８０、２９７０、１７５０、１６７０、１５１０、
１３８０、１３２０、１２６０、１２３０、１１１０、
１０５０、８４０、５５０（５）＾１＾３Ｃ核磁気共鳴
（ＮＭＲ）スペクトル；７５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ＿６
中、δｐｐｍ：１７３．７５（Ｑ）、１７１．３３（Ｑ
）、１７１．２２（Ｑ）、１６９．８２（Ｑ）、１６９
．５７（Ｑ）、１６８．９６（Ｑ）、１６８．８６（Ｑ
）、１６８．８１（Ｑ）、１６７．５９（Ｑ）、１６７
．５０（Ｑ）、１５６．７４（Ｑ）、１５６．５７（Ｑ
）、１３０．７６（Ｑ）、１２７．９０（ＣＨ）、１１
４．４６（ＣＨ）、７５．００（ＣＨ）、７２．９０（
ＣＨ）、７２．４５（ＣＨ）、７１．７０（ＣＨ）、６
３．４３（ＣＨ）、５８．２２（ＣＨ）、５７．８６（
ＣＨ）、５６．４８（ＣＨ）、５３．６８（ＣＨ）、５
２．６７（ＣＨ）、５１．３９（ＣＨ）、４８．６３（
ＣＨ）、４０．１２（ＣＨ＿２）、３０．７０（ＣＨ）
、３０．４６（ＣＨ）、２８．９３（ＣＨ＿２）、２４
．９８（ＣＨ＿２）、２４．３５（ＣＨ）、２３．１２
（ＣＨ＿３）、２０．７８（ＣＨ＿３）、１９．４６（
ＣＨ＿３）、１８．９７（ＣＨ＿３）、１８．８５（Ｃ
Ｈ＿３）、１７．０７（ＣＨ＿３）、１７．０３（ＣＨ
＿３）（ただし、Ｑは四級炭素、ＣＨはメチン、ＣＨ＿
２はメチレン、ＣＨ＿３はメチルを示す。）（６）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、バートン、坂口反応陰性；ドラーゲンドルフ、エールリッヒ反応（７）性質
：中性物質（遊離体は水溶性塩基性物質）またはこれら
の塩。［２］リゾバクター属に属し、抗生物質ＴＡＮ−１２８
９を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養
物中に抗生物質ＴＡＮ− １２８９を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴
とする抗生物質ＴＡＮ−１２８９またはその塩の製造法
。［３］抗生物質ＴＡＮ−１２８９またはその塩を含有す
る感染症治療剤。