JPH0215031A - 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な抗菌的に活性な材料、その製造方法、そ
の製薬上の用途、それらを製造する新規な微生物に関す
る。

〔発明の概要〕

多数の微生物が自然から単離されそしてこれら微生物の
成るものは種々の代謝生成物（それらは単離されそして
その成るものは有用な抗菌性活性を有する）を生成する
ことが分った。４種のこのような代謝生成物はＭＭ４７
７６ｐＨ６．ＭＭ４７７６７゜ＭＭ５５２５６及びＭＭ
５５２６０と命名された物質である。それらは新規なグ
リコ４ブチド化合物と考えられそして有用な抗菌性活性
を有することが分った。

本発明は従って新規な物質ＭＭ４７７６ｐＨ６．ＭＭ４
７７６７、ＭＭ５５２５６及びＭＭ５５２６０　　を提
供する。

本発明は、又物質ＭＭ４７７６ｐＨ６．ＭＭ４７７６７
゜ＭＭ５５２５６又はＭＭ５５２６０を製造する方法を
提供し、それは生産微生物を培養し次に培養物からＭＭ
４７７６ｐＨ６．ＭＭ４７７６７、ＭＭ５５２５６　　
又はＭＭ５５２６０又はその誘導体を単離することよシ
なる。

本発明は、さらに物質ＭＭ４７７６ｐＨ６．ＭＭ４７７
６７゜ＭＭ５５２５６及び／又はＭＭ５５２６０を製造
する方法を提供し、それはＭＭ４７７６ｐＨ６．ＭＭ４
７７６７゜ＭＭ５５２５６及び／又はＭＭ５５２６０又
はその誘導体を、他の抗菌的に活性な物質及び／又は不
活性な物質と混合したその溶液からアフイニテイ樹脂へ
の吸着により分離することよシなる。

物質ＭＭ４７７６６　　は下記の％徴を有了る。

（１）それが高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分光法（Ｆａ
ｓｔ　Ａｔｏｍ　１３ｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ（ＦＡＢ）
ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）　　により１９６
９±２の見掛は上の分子量を有し； （１１）それが属Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐ詩従来Ｎｏｃａ
ｒｄｉａとして知られている）の教生物の培養により得
られることができ； （ｉｉｉ）　　２　ａｔ　７分の流速で１０％アセトニ
トリルを含むｐ　Ｈ６，０の含水０．　Ｉ　Ｍ　ＮａＨ
！ＰＯ，溶媒系によるＣ　１８　ｐ　Ｂｏｎｄａｐａｋ
（商標名）カラムパッキング（カラムの大きさ直径３．
９　ｍ　Ｘ長さ３００　ｍ　）を用いる高速液体クロマ
トグラフィ（ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　　１
ｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）（ｈ、ｐ
、　ｌ、　ｃ、　）におけるその保持時間が、２２０及
び２　ｆ３　Ｑ　及び２８０ｍｍにおける紫外線吸収に
よシ測定するとき約４．６分であり（米国Ｗａｔｅｒｓ
　Ａａｓｏｃｉａｔｅｓによシ供給される充填り、ｐ、
　１．ｃ、カラム）；そして Ｇｖ）　　それが５ｔａｐｈｙｌｏｅｏｃｅｕｓ　ａｕ
ｒｅｕｓ　Ｖ５７３に対する抗菌性活性を示す。

物質ＭＭ４７７６７　　は下記の特徴を有する。

（１）それが高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分光法によ、
９１８０７±２の見掛は上の分子量を有し；（１１）　
　それが属Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ　（従来Ｎｏｃ
ａｒｄｉａとして知られている）、の微生物の培養によ
り得られることができ； （ｉｉｉ）　　２　ｓｇ　７分の流速で１０％アセトニ
トリルを含むｐＨ６，０の含水０．　Ｉ　Ｍ　ＮａＨ，
ＰＯ４溶媒系によるＣｌ８ｐ　Ｂｏｎｄａｐａｋ　（商
標名）カラムパッキング（カラムの大きて直径３．９　
ｍ　Ｘ長さ３００　ｍｍ　）を用いる高速液体クロマト
グラフィ（ｈ、　ｐ、　ｌ、　ｃ。）におけるその保持
時間が、２２０及び２８０　及び２８０ｍｍにおける紫
外線吸収により測定するとき約７，４分であ＃）（米国
Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓによシ供給される
充填り、　ｐ、　１．　ｃ。カラム）；そしてＧｖ）　
　それが５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕａ　ａｕｒｅｕｓ
　Ｖ５７３に対する抗菌性活性を示す。

物質ＭＭ５５２５６は下記の特徴を有する。

（１）そｎが高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分光法により
１８０７±２の見掛は上の分子量を有し；（１１）それ
が属Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ（従来Ｎｏｃａｒｄｉ
ａとして知られている）の微生物の培養によシ得ること
ができ； （ｉｉｉ）　　２　ｄ　／分の流速で１５％アセトニト
リル及び０．００５Ｍナトリウム１−ヘブタンスルホネ
ートイオ７対試薬を含むｐ　Ｈ５，０の含水０．　Ｉ　
Ｍ　ＮａＨｔ　ＰＯ４溶媒系によるＣ　１８　ｐ　Ｂｏ
ｎｄａｐａｋ（商標名）カラムパッキング（カラムの大
きさ直径３．９　ｗ　Ｘ長さ３００１１１Ｂ）を用いる
高速液体クロマトグラフィ（Ｈ，Ｐ、　Ｌ、　Ｃ，）に
おけるその保持時間が、２１０ｎｍ　の紫外線吸収によ
り測定したとき約８，０分であシ（米国Ｗａｔｅｒｓ　
Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓによシ供給される充填り、　ｐ、
　ｌ、　ｃ、カラム）；Ｇｖ）　　それはＭＭ４７７６
７　　のエピマーであシ；そして （Ｖ）　　それが５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕ
ｒｅｕｓ　Ｖ５７３に対して抗菌性活性を示す。

物質ＭＭ５５２６０　　は以下の特徴を有する。

（１）それが高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分光法により
１８０７±１の見掛は上の分子量を有し；（１０それが
属Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐａｉｓ（従来Ｎｏｃａｒｄｉａ
として知られている）の微生物の培養によシ得ることが
でき； （ｉｉｉ）　　２ゴ／分の流速で１０チＣＨ３ＣＮを含
むｐＨｐＨ６．００含水ｏ、　１ｍ　ＮａＨ，ＰＯ４溶
媒系によるＣ１８μ　Ｂｏｎｄａｐａｋ　（商標名）カ
ラムパッキング（カラムの大きさ直径３．９　ｗｘ　Ｘ
長さ３００■）を用いる高速液体クロマトグラフィ（Ｈ
ＰＬＣ）におけるその保持時間が、２２０ｎｒｎにおけ
る紫外線吸収により測定するとき約４．６分であ）（米
国Ｗａｔｅｒａ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅａによシ供給され
る充填ＨＰＬＣカラム）； （ｉｖ）　　それが５ｔａｐｈｙｌｏｅｏｃｃｕｓ　ａ
ｕｒｅｕｓ　Ｖ５７３に対する抗菌性活性を示す。

ＭＭ４７７６７及びＭＭ５５２５６は、式（１）〔式中
Ｒ１は水素でありそしてＲ２はメチルアミノである（Ｍ
Ｍ４７７６７）か又はＲＩ　Ｆｉメチルアミノでありそ
してＲ１は水素であり（ＭＭ５５２５６）そしてＲ３、
Ｒ４及びＲｓの一つは糖マ／ノースであシそしてＲ３，
Ｒ４及びＲＩＩの他の二つは水素である〕 の化合物であると考えられている。

本発明は又ＭＭ４７７６７のアグリコン（ａｇｌｙｃｏ
ｎｅ）及びプソイドアグリコン（ｐｓｅｕｄｏａｇｌｙ
ｃｏｎｅ）誘導体を提供する。

本明細書でＭＴ５５２６１　　と命名されるアグリ／は
式（１０を有する。

■ 本明細書でＭＴ５５２６２　　と命名されるプソイドア
グリコンは式（ＩＩＩ）を有する。

ｈ ＭＭ４７７６６．４７７６７、ＭＭ５５２５６及びＭＭ
５５２６０は、生産微生物の培養及び培養物からのＭＭ
４７７６ｐＨ６．ＭＭ４７７６７、ＭＭ５５２５６　及
び／又ＨＭＭ５５２６０又はその誘導体の回収によυ得
ることができる。

不明細書で用いられる用語「培養」（そしてその用語の
派生語）は、炭素、窒素、硫黄及び鉱物塩の同化可能な
源の存在下の生物の時間をかけた好気的生長を意味する
。このような好気的生長は、固体又は半固体の栄養培地
、又は栄養物が溶解又は懸濁している液体培地中で生ず
る。培養は好気的表面又は液内培養により生ずる。栄養
培地は、複雑な栄養物よりなるか又は化学的に限定され
る。

本発明による培養法釦用いられる好適な微生物は、ＭＭ
４７７６ｐＨ６．ＭＭ４７７６７、ＭＭ５５２５６及び
ＭＭ５５２６０を合成できる属Ａｍｙｅｏｌａｔｏｐｓ
ｉｓ（従来Ｎｏｃａｒｄｉａとして知られている）に属
する細菌株を含むことが分った。このような菌株の例は
３ｐ、ＮＣＩＢ　　４００１１及びその変異体でありそ
れは自然から単離したことが分った。

本明細書で用いられる用語「変異体」ハ、自然発生的に
又は外部の剤の作用により（その剤が故意に又はそれ以
外に適用される）生ずるナベでの変異株を含む。変異株
を生成する好適な方法は、Ｈ，１，Ａｄｌｅｒ　’Ｔｅ
ｅｈｎｉｑｕｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅＤｅｖｓｌｏｐｍｅ
ｎｔ　ｏｆ　Ｍｉｅｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ’ｒＲａｄ
ｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓ　
ｆｏｒ工ｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉ
ａｍｓＪ。

ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ａ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕ
ｍ、　Ｖｉｅｎｎａ。

１９７３．２４１ページ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
　ＡｔｏｍｉｃＥｎｅｒｇｙ　　Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ。

によシ概説されているものを含みそして以下のものを含
む。

（ｉ）　　イオン化照射（例えばＸ−線及びλ−線）。

紫外線、紫外線プラス感光剤（例えば８−メトキシプソ
ラレン）、亜硝酸、ヒドロキシルアミン、ビリ′ミジ／
塩基頌似体（例えば５−ブロモウラシル）、アクリジン
、アルキル化剤（例えばマスタードガス、エチル−メタ
ンスルホネート）、過酸化水素、フェノール、ホルムア
ルデヒド、熱及ヒ（１１）遺伝学的技術（例えば組換え
、形質転換、形質導入、溶原化、溶原変換、原形質体融
合、自然発生変異体に対する選択的技術。

ｓｐ、ＮＣＩＢ　　４００１１は、Ａｍｙｃｏｌａｔｏ
ｐａｉｓｏｒｉｅｎｔａｌ　ｉｓ　の従来報告されてい
ない非定形の菌株として同定され、それ散文特に生物学
的に純粋な形で本発明の一部を形成する。それは１９８
８年４月１１日に第４００１１号としてスコツトランド
、アバ−デインのｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１
ｅｃｔｉｏｎｓｏｆ　　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　　ａｎ
ｄ　Ｍａｒｉｎｅ　ＢａｅｔｅｒｉａＬｔｄ（Ｎ、Ｃ，
１，Ｂ） に寄託された。

３ｐ、ＮＣｌＢ４Ｏ０１１を培養するための発酵培地は
、好適には無機塩とともに同化可能な炭素及び同化可能
な窒素の源を含む。窒素の好適なのは、イーストエキス
、大豆粉、肉エキス、綿実、小麦粉、麦芽、デイステイ
ラーズ命ドライド・ンルフルズ、アミノ酸、蛋白加水分
解物及びアンモニウム及び硝酸塩窒素を含む。好適な炭
素源は、グルコース、ラクトース、マルトース、でん粉
及びグリセロールを含む。好適には培養培地は又アルカ
リ金属イオン（例えばナトリウム）、ハロゲンイオン（
例えば塩素）及びアルカリ土類金属イオン（例えはカル
シウム及びマグネシウム）並に微量元素例えば鉄及びコ
バルトを含む。

培養は好適には約２０〜３５℃有利には２０〜３０℃の
温度で行うことができ、培養は所望の生成物の最適な収
量を得るために発酵の開始後好適にｔｉ７日以内有利に
は約３〜５日で収穫される。

所望の生成物又はその誘導体は、次に培養培地から単離
しそして処理しそしてグリコペプチド化合物に関する従
来の技術を用いて、精製することができる。すべてのこ
のような単離及び精製工程は、好都合には冷却〜外界温
度例えば４〜３０℃好都合には２０〜２５℃の範囲内の
温度で行うことができる。

所望の生成物は一般に主として培養戸液から得られ、そ
して例えば濾過又は遠心分離により発酵ブロスから固体
物質を除去して透明な培養Ｐ液を得ることを含むことは
、最初の単離段階について好都合である。

透明な培養Ｆ液から所望の生成物をざらに単離すること
は、好都合にはアフイニテイ樹脂例えばＤ−７ラニルー
Ｄ−アラニン−セファロース・アフイニテイ樹脂への吸
着によシ行うことができる。

所望の化合物は、抗菌性活性に関するテストによυ及び
／又はり、ｐ、　１．　ｃ、保持時間をモニターするこ
とにより、従来性われているやｐ方で容易に同定できる
。

好適には分離工程は、好ましくは最後の段階として高速
液体クロマトグラフィ段階を含むことができる。溶離は
、含水Ｎａ　Ｈｔ　ＰＯ４／アセトニトリルを用いて行
うことができる。

ＭＭ４４７６７　　のアグリコン及びプソイドアグリコ
ン誘導体は％ＭＭ４４７６７の加水分解特に酸加水分解
により製造できる。好ましい方法ではＭＭ４４７６７は
、鉱酸例えば塩酸とともに加熱されそして方法はＨＰＬ
Ｃによりモニター嘔れる。弱い酸条件（例えばＩＭＭＣ
Ｉ）では、１０〜１５分間の加熱は、プソイドアグリコ
ンＭＴ５５２６２を生成しよう。強い酸条件（例えば５
ＭＨＣ１）では、さらに長い加熱は、アグリコンＭＴ５
５２６−１を生成できる。

ＭＭ４７７６ｐＨ６．ＭＭ４７７６７、ＭＭ５５２５６
及びＭＭ５５２６０及びそれらの誘導体特にＭＴ５５２
６１及びＭＴ５５２６２　　ｆｌ、結晶性又は非結晶性
でありそしてもし結晶性ならば任意に水利又は溶媒和さ
れる。

本発明による化合物は、好適には実質的に純粋な形例え
ば少くとも５０チ純粋、好適に少くとも６０チ純粋、有
利には少くとも７５俤純粋、好ましくは少くとも８５チ
純粋、さらに好ましくは少くとも９５チ純粋、特に少く
とも９８チ純粋（すべての％は重量／重量として計算さ
れる）で提供される。不純又はよシ純粋ではない形の本
発明による化合物は、例えば製薬上の用途に好適な同一
の化合物又は関連のある化合物（例えば対応する誘導体
）のさらに純粋な形の製造に用いることができる。

ＭＭ４７７６ｐＨ６．ＭＭ４７７６７、ＭＭ５５２５６
．ＭＭ５５２６０、ＭＴ５５２６１及びＭＴ５５２６２
及びそれらの製薬上許容しうる誘導体は、抗菌性を有し
そして動物特にヒトを含む晴乳動物特にヒト及び家畜（
農場の動物を含む）における細菌性感染の治療に有用で
ある。化合物は広い範囲の生物（例えば本明細書で記述
てれたものを含む）により生ずる感染の治療に用いるこ
とができる。

本発明は、製菓上許容しうる担体又は添加物とともにＭ
Ｍ４７７６ｐＨ６．ＭＭ４７７６７、ＭＭ５５２５６゜
ＭＭ５５２６０．ＭＴ５５２６１又はＭＴ５５２６２又
はその製薬上許容しうる誘導体を含む製薬組成物を提供
する。

本発明は又動物特にヒト及び家畜における細菌性感染を
治療する方法を扶供し、それはその必要のある患者にＭ
Ｍ４７７６ｐＨ６．ＭＭ４７７６７゜ＭＭ５５２５６．
ＭＭ５５２６０．ＭＴ５５２６１　又はＭＴ５５２６２
　又はその製薬上許容しうる誘導体又は本発明による組
成物を投与することよりなる。

本発明による化合物及び組成物は、他の抗生物質との類
似によシヒト又は動物用の医薬品に用いられる任意の好
都合なや処方で投与されるように処方できる。

本発明による化合物及び組成物は、任意の経路例えば経
口、局所又は非経口によシ投与されるように処方できる
。組成物は、例えば錠剤、カプセル、粉末、顆粒、トロ
ーチ、クリーム、シロップ又は液剤例えば溶液又は懸濁
液の形に作られ、それらは経口の用途に又は注射又は注
入による非経口投与のための滅菌の形で処方できる。

経口投与用の錠剤及びカプセルは、単位投与の形であり
そして例えば結合剤例えばシロップ、アラビアゴム、ゼ
ラチン、ソルビトール、トラガントガム又はポリビニル
ピロリドン；充填剤例えばラクトース、砂糖、とうもろ
こしでん粉、燐酸カルシウム、ソルビトール又はグリシ
ン：打錠用滑沢剤例えばステアリン酸マグネシウム、タ
ルク、ポリエチレングリコール又はシリカ；崩壊剤例え
ばじゃがいもでん粉；及び製薬上許容しうる湿潤剤例え
ばナトリウムラウリルサルフエートヲ含ム従来の添加物
を含むことができる。錠剤は通常の製薬上の実施で周知
の方法によυコーティングされる。

経口液剤は例えば水性又は油性の懸濁液、溶液、エマル
ション、シロップ又はエリキシルの形であるか、又は使
用前に水又は他の好適な媒体により再溶解しうる乾燥生
成物として提供できる。このような液剤は、例えば沈澱
防止剤例えばソルビトール、メチルセルロース、グルコ
ースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース
、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニ
ウムゲル又は水素化食用脂肪；乳化剤例えばレシチン、
ソルビタンモノオレエート又はアラビアゴム；非水性媒
体（食用油を含むことができる）例えばアーモンド油、
油状エステル（例えばグリセリン）、プロピレングリコ
ール又ハエチルアルコール；保存料例えばメチル又はプ
ロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸；及
びもし所望ならば従来の香味料及び着色剤を含む従来の
添加物を含むことができる。

局所投与を目的とする本発明による組成物は、例えば軟
膏、クリーム、ローション、眼用軟膏、点眼薬、点耳薬
、含浸したドレッシング及びエロゾルの形であり、そし
て例えば保存料、薬剤の浸透を助ける溶媒並に軟膏及び
クリームにおける含湿剤を含む適切な従来の添加物を含
むことができる。このような局所用処方は、又作用を及
ぼさない従来の担体例えばクリーム又は軟膏ペース及び
ローション用のエタノール又ハオレイルアルコールを含
むことができる。このような担体は約１〜約９８重量％
の処方を構成し、さらに普通にはそれらは約８０重九チ
までの処方を構成するだろう。

本発明による組成物は座剤として処方でき、それらは従
来の座薬ペース例えばココアバター又は他のグリセリド
を含むことができる。

非舒口投与を目的とする本発明による組成物は、好都合
には流体単位投与の形であシ、それは化合物及び滅菌媒
体（水が好ましい）を利用して製造できる。使用される
媒体及び濃度に応じて化合物は媒体に懸濁されるか又は
溶解される。溶液の製造に当って、化合物は、注射用の
水に溶解されそして滅菌濾過され好適なバイアル又はア
ンプルに充填され次にシールされる。有利には、例えば
局所麻酔薬、保存料及びバッファー剤を含む従来の添加
物が媒体中に溶解される。溶液の安定性を増すために、
組成物はバイアルに充填された後に凍結されそして水が
真空上除去され、得られた凍結乾燥された粉末を次にバ
イアルにシールされそして注射用の水の添付したバイア
ルが供給されて使用前に液体を再生する。非経口懸濁液
は実質的に同一のやり方で製造されるが、ただし化合物
は溶解される代りに媒体に懸濁てれそして滅菌は濾過で
は達成できない。化合物はその代シ滅菌諌体に懸濁てれ
る前にエチレンオキシドに曝すことにより滅菌できる。

有利には界面活性剤又は湿潤剤が、化合物の均一な分布
を助けるためにこのような懸濁液に含まれる。

本発明による化合物又は組成物は、好適には抗菌的に有
効な量で患者に投与できる。

本発明による組成物は、好適には投与の方法に応じて０
．１重量％好ましくは１０重量％から６０重量％（組成
物の全重量に基づく）の本発明による化合物を含むこと
ができる。

本発明による化合物は、好適には１．０〜５０〜／に９
体重の１８ｆｉりの投与量で患者に投与できる。

成人（体重約７０　Ｋ９　）では、５０〜３０００ｗｇ
例えば約１５００岬の本発明による化合物が毎日投与で
きる。好適には成人に対する投与量は１日当シ５〜２０
Ｍ１／Ｋｆである。しかしより多い又はよシ少い投与量
が、通常の臨床上の実施に従って用いることができる。

本発明による組成物が単位投与の形で提供きれるとき、
各単位投与物に好適には２５〜１０００　Ｍｉ好ましく
は５０〜５００■の本発明による化合物を含むことがで
きる。

〔実施例〕

下記の実施例は本発明を説明する。

ＭＭ４７７６６及びＭＭ４７７６７の生成及び単離実施
例１ ａ）発酵 培養ＮＣＩＮＣｌＢ４Ｏ０１１Ｈ１：ａｒｔｎｅｙ瓶中
の固体アガースラント上で２６℃で７日間生長した。

アガー培地は下記の組成を有した。

イーストエキス　　　　　　　　４．０麦芽エキス　　
　　　　　　　１０．０デキストロース　　　　　　　
　４．０アガー　　　　　　　　　　　２０．０脱イオ
ン水を加えて　　　　　　１ｔ 〔成分は、Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　
Ｐ、Ｏ。

Ｂｏｘ　１４Ｂ、　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ａｖｅｎｕｅ、　
］ｌ：ａａｔＭｏｌｅｓｅｙ、　５ｕｒｒｅｙにより供
給されるすべてｒＢａｃｔｏＪ、９！ｉ品（ＢａｃｔＯ
商標名）であった。〕培地は滅菌前にｐＨ７，３に調節
をれた。

胞子の懸濁液は、ＮＣＩＢ　４００１１のＭｃ（：：ａ
ｒｔｎｓ）ｒ瓶のアガー培養物に０．００５％Ｔｒｉｔ
ｏｎｘ１００を含む滅菌水１００Ｎｌを加え次に１分間
超音波処理を行うことにより調製した。胞子懸濁液の部
分（１−）を用いて、発泡プラスチックプラグにより閉
じられ＆５００ｔＲ１容の三角フラスコに含まれた発酵
培地（１００ｄ）に接種した。（ＴｒｉｔｏｎＸｌｏｏ
は、Ｂ、　Ｄ、　Ｈ，ＣｈｅｍｉｃａｔｓＬｔｄ、、　
ＰＯＯｌｅ　、　Ｄｏｒａｅｔから得られた。）発酵培
地は以下のものを含んだ。

成分　　　　量Ｃｌ／ｌ） 大豆粉　　　　　　　　　　　１０ グリセロール　　　　　　　２０ マルトース　　　　　　　　　　２ ストック微量元素　　　　　　１０Ｔｎｔ脱イオン水を
加えて　　　　　　１ｔ ストック微量元素溶液は以下のものを含んだ。

−一」Ｌユ立−量（Ｗ／１） ＣＩＬＣｌｔ”２ＨｚＯ１０ ＭｇＣｌ　！　拳６Ｈ，０１Ｏ ＮａＣ１１０ Ｆｅ　Ｃｌ　ｓ　　　　　　　　　　　　　　　３Ｚｎ
Ｃ１，０，５ ＣｕＣ１！”２Ｈｔ０　　　　　　　　　０．５Ｍｎ５
Ｏ＋　＠４ＨｔＯＯ，５ ＣＯＣＩ、・６Ｈ，００，５ 培地を、１５分間１１７℃で滅θ前にｐＨ７゜３に調節
した。

（大豆粉は、Ｂｒ１ｔｉｓｈ　Ａｒｋａｄｙ　Ｃｏ、Ｌ
ｔｄ、。

Ｏｌｄ　Ｔｒａｆｆｏｒｄ、　Ｍａｎｃｈｅａｔｅｒに
よシ供給されるＡｒｋａｓｏｙ　５０であった。） 発酵フラスコのインキュベーションは、　旋動振盪機で
２６℃、２４０ｒｐｍで９６時間行われた。

収穫したブロスは次に遠心分離により透明にてれた。サ
ンプルを、従来のカップ法を用いて５ｔａｐｈｙｌｏｃ
ｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　０ｘｆｏｒｄに関するバイ
オアッセイによシ抗生物質の活性についてモニターした
。

ｂ）ＭＭ４７７６６及びＭＭ４７７６７の単離グリコペ
プチドＭＭ４７７６６及びＭＭ４７７６７を、Ｄ−アラ
ニル−Ｄ〒アラニン−セファロース・アフイニテイ樹脂
への吸着により透明にしたブロスから単離した。

アフィニテイ吸着ｖｌＪは、活性化ＣＨ−セファロース
４Ｂ上に不動化されｆｃＤ−アラニル−Ｄ−アラニンか
ら製造されｆｃ（６−アミノヘキサン酸−活性化−セフ
ァロース−４Ｂは、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ　　Ｃ
ｏ、、Ｐｏｏｌｅ、Ｄｏｒｓｅｔから得られた）。

ａ）で記述されたように製造された透明化ブロス（１４
００ｄ）をＤ−アラニル−Ｄ−アラニン−セファロース
・アフイニテイ樹脂（１４−湿潤容量）とともに１時間
攪拌した。混合物をガラス焼結ろう斗上で濾過し涙液を
捨てた。アフイニテイ樹脂を蒸留水（１０００ｔ／）　
　に再懸濁しそして前述のように濾過した。樹脂を蒸留
水によりもう一度洗つた。グリコペプチドを５０％アセ
トニトリルを含む０．１　Ｍアンモエフ５０ｍによシア
フイニテイ樹脂から溶離した。溶離液を減圧下蒸発乾固
してＭＭ４７７６６及びＭＭ４７７６７の混合物８０ｍ
ｇを得た。

この混合物を次に１−の蒸留水に再溶解しそしてＷａｔ
ｅｒｓ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ　Ｃ１８逆相カラムパ
ッキング（５５〜１０５ミクロン）　（ＷａｔｅｒｓＡ
ｓｓｏｃｉａｔｅｓ、　３４　Ｍａｐｌｅ　５ｔｒｅｅ
ｔ、　Ｍｉｌｆｏｒｄ。

Ｍａ　Ｂ　Ｓ、米国）によυ充填され７’ｃ　ＨＰＬＣ
カラム（９，４＋ｍ　Ｘ　５００　ｍ　）でクロマトグ
ラフィを行った。カラムを％４−／分の流速で１０チア
セトニトリルを含む０．１　Ｍ　ＮａＨｔ　ＰＯ４（ｐ
Ｈ６，０）によシ溶離した。両分（８−）を集めそして Ｓｔａｐｈｙｌｏｅｏｃｃｕｇ　ａｕｒｅｕｓ　０ｘｆ
ｏｒｄに対するディスク拡散によりバイオアッセイした
。抗菌的に活性な画分は、又μＢｏｎｄａｐａｋＣ１８
逆相材料を含むＷａｔｅｒｌ高速液体クロマトグラフィ
カラム（３，９ｘ３００■）でモニターした。グリコペ
プチドは、流速２４／分で１０％アセトニトリルを含む
０．　Ｉ　Ｍ　ＮａＨｔ　ＰＯ４（ｐＨ６，０）により
カラムから溶離した。溶離液をＨｅｗｌｅｔｔ−ｐａｃ
ｋａｒｄ１０４０Ａダイオード・アレイＨＰＬＣモニタ
ー（Ｈｅｗｌｅｔｔ−ｐａｃｋａｒｄ　、（：：ｏｒｖ
ａｌｌｉｓ　　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ。

１００Ｎ、　Ｅ、　Ｃ１ｒｃｌｅ　Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ
、　Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ。

オレゴン、米国）により２２０　ｎｍ及び２８０　ｎｍ
でモニターされた。これらの条件下、ＭＭ４７７６６は
４゜６分の保持時間を有しそしてＭＭ４７７６７は７．
４分の保持時間を有した（バンコマイシンＲ準品は、同
一の条件下で７．１分の保持時間を有する）。画分６〜
８はＭＭ４７７６６を含みそして一緒にされた（２２ゴ
）。両分１０〜１５はＭＭ４７７６７を含みそして一緒
にされた（４２ｄ）。

無機の不純物は、別々のバルクからＤ−アラニル−１）
−アラニン−セファロース・アフイニテイ樹脂（バルク
当、９１５ｍ／湿潤容量）へもう−度吸収することによ
シ除去された。ｓｔ脂を水洗しそしてグリコペプチドを
前述のように５０チアセトニトリルを含む０．１　Ｍア
ンモニアによシ溶離した。

それぞれの場合の溶離液ば、蒸発乾固して２．３■のＭ
Ｍ４７７６６及び９．８　ｗｖのＭＭ４７７６７　　を
生じた。

ＭＭ４７７６６の性質 ＦＡＢ質楡分光法は１９７０±２　で分子イオン（ＭＨ
＋）を示した。

ＭＭ４７７６７の性質 ＦＡＢ質量分光法は１８０８±２で分子イオン（ＭＨ＋
）を示しそしてサンプルの酸加水分解はフェニルアラニ
ンとＮ−メチルｍ−クロロ−ｐ−ヒドロキシフェニルグ
リシンとを生シた。

分子式：　Ｃｍ　ｓ　Ｈ＠Ｉ　Ｎａ　０ｓ　ＩＣ１＊Ｕ
Ｖ（ＨｔＯ）　　λｍａｘ２８ｏｎｍ（γ８０２８）Ｉ
Ｒ（ＫＢｒ）　１６５３．１６０５．１５９５．１５０
１ｃ！ｎ−’第１図は、３５３°Ｋ　のＤＭＳＯ中の４
００ＭＨ。

”　ＨＮＭＲを示す。内部標準としてテトラメチルシラ
ン。Ｎ−メチルシングレットは６２．２９で生ずる。

実施例１において実質的に生成した物質の抗菌性活性は
、ミクロタイター法により決定された。

０ｘｏｉｄ　Ｎｏ、　２ブｏ　ス（Ｏｘｏｉｄ　Ｌｔｄ
、　Ｗａｄｅ　Ｒｏａｄ。

Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋａ、　）（ａｍｐｓｈｉｒｅ、　
　英国によシ供給、Ｑｚｏｉｄは商標名）を５ｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐｐ、を除いてすべての生物につ
いて用い、 ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐｐ、、はＴｏｄｄ　
ＨｅｗＬｔｔプロス（０ｘｏｉｄ　Ｊ、ｔｄ、により供
給）を用いてテス１１れた。接極物は１０倍希釈された
１晩のプロス培養物であった。マイクロタイター・プレ
ートは３７℃で２４時間インキュベートされた。

結果は第１表に示される。

（Ｍ　Ｉ　Ｃ μ２／ゴ） 米多重耐性（メチシリン、テトラサイクリン、エリスロ
マイシン及びゲンタミシン耐性）実施例２　　ＭＭ４７
７６２　　の製造ａ）発酵 木綿ガーゼキャップを付けた５０〇−容の三角フラスコ
に含まれたｉ培地１００ｒｎｔを、１５分間オートクレ
ーブ中で１２１℃で滅菌した。フラスコに、液体窒素に
保存された培養ＮＣｌＢ４Ｏ０１１の胞子懸濁液２−を
接種し穴。フラスコを次に２４　Ｏｒｐｍ　　の旋動振
盪テーブル上で７２時間２６℃でインキュベートした。

生成した増殖接種物１０−を用いて同様なやり方で製造
した種培地の２本のフラスコのそれぞれに接種した。発
酵を次に２４０ｒｐｍの旋動振盪テーブル上で２６℃で
４８時間行つな。０．１％泡防止剤、ポリエチレングリ
コールＰ２Ｏ００を加えた種培地１５ｔを、１２１℃で
１時間２０を容の十分にバッフルされた発酵槽中で滅菌
した。発酵槽を２００　ｒｐｍで３個の羽根形の円板イ
ンペラーを備えた攪拌器により攪拌し、そして毎分１容
量当υ０．５容量で滅菌空気を供給した。第２段階の押
接種物２００−を用いて発酵槽に接種しそしてインキュ
ベーションを２６０で４８時間行った。０．５ｂａｒの
過圧の空気を全体を通して保った。

最後の発酵では、０．１％Ｐ２Ｏ００を含む発酵培地３
００ｔを１時間１２１℃で４５０を容の十分にバッフル
された発酵槽中で滅菌した。発酵槽を５Ｑｒｐｍで３個
の羽根形の円板インペラーを備えた攪拌器により攪拌し
た。２０１容の発酵槽からの増殖接種物８Ｌを加えそし
て発酵を７２時間２６℃でインキュベートした。滅閑空
気を第１日には毎分１容量当、ｊ　０．２５容量で供給
し次に残）の時間Ｑ、　５　ｖ、ｖ、ｍ。に増大した。

０．５ｂａｒノ過王の空気は、全体を通して維持された
。発酵物は８２時間で収穫されそして遠心分離により透
明にされた。

種及び発酵培地は同一の組成のものであつ念。

培地は以下のものを含む。

成　　分 大　　豆　　粉 グリセロール マルトース ＣＯＣｌ、・６Ｈ７０ 微量元素溶液 脱イオン水を加えて 微量元素溶液は以下の 量（ｒ／ｌ） ０．００５ ｔ ものを含んだ。

ＣａＣ１！＠２Ｈ，０１０ ＭｇＣ１、・６迅０　　　　　　　１ＯＮａＣ１ｉ。

ＦｅＣ１，３ Ｚ　ｎ　Ｃｌ　ｔ　　　　　　　　　　　　　　　　Ｑ
、５ＣｕＣ１！＠２Ｈ！０　　　　　　　　　０．５Ｍ
ｎＳＯ４”４Ｈ！０　　　　　　　　　　０．５培地を
滅菌前にｐＨ７，３に調節した。（大豆粉はＡｒｋａｄ
ｙ−Ａ、　Ｄ、Ｍ、　、　Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ、　　
英国により供給されるＡｒｋａｓｏｙ５０であった。）
実施例２ａからの透明になったプロスを、Ｒｏｍｉｃｏ
ｎ中空系カートリッジを付したＡｌｆａ−Ｌａｖａｌ　
ＵＦＢＲＩ／ｕ限外濾過器（Ａｌｆａ　−Ｉ、ａｖａｌ
。

Ｂｒｅｎｔｆｏｒｄ、　Ｍｉｄｄｌｅｓｅｚ）を用いて
さらに処理した。限外濾過物（ａ４ｏｔ）を０．５ｔ１
分の流速で２２．６　を容１）ｉａｉｏｎ　　ＨＰ２０
カラム（三菱化成、東京、日本により供給されるＨＰ　
２０　）に適用した。カラムを１０ｔの水で洗い次に０
．２５ｔ／分で０．１　Ｍアンモニア中の５０％プロパ
ン−１−オールにより溶離した。ＩＬずつの両分を集め
た。

抗生物質活性を有するもの（８−２２）をまとめそして
減圧下蒸発させて２．５ｔとした。

沈でんした固体を遠心分離により濃縮物から除去しそし
てペレットを脱イオン水により２回洗った。上澄み液及
び２回の水洗液を合わせＣ３，３ｔ）そしてＨＣＩによ
りｐＨｓ、ｓ　　とした。この溶液を次に既に０．０５
　Ｍ　ＮＩＬＨＩ　ＰＯ４（ｐＨ６，５）により平衡に
妊れた０、７５を容のＣＭ　５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｃ２５
カチオン交換カラム（Ｎａ＋形）　（ＣＭ　５ｅｐｈａ
ｄｅｘはＰｈａｒｒｎａｃｉａ　Ｌｔｄ、。Ｕｐｐｓａ
ｌａ、スウェーデンににより供給きれた）に適用した。

カラムを０．０５ＭＮ凰ＨＩＰＯ４（ＰＨ７，０）（０
，９Ａ）により洗いそして浸透液及び洗液の両方を捨て
た。ＭＭ４７７６７は、１０−７分の流速で０．０５Ｍ
　ＮａＨ！ＰＯ，（ｐＨ７，０）から０．２　Ｍ　Ｎａ
ｔ　ＨＰＯａ　（ｐＨ９，２）の指数勾配（混合容器中
の１ｔ）を用いて溶離した。２０ゴずつの両分を集め、
ＭＭ４７７６７　　を含むもの（１４０〜２５０）をま
とめた。まとめた両分を１４−７分で０、５９　を容の
Ｉ）ｉ　ａ　ｉ　ｏｎ　ＨＰ　２０カラムに適用した。

カラムを６００−の脱イオン水によυ洗いそして０．１
Ｍ７ンモニア中の５０％プロパン−１−オールにより溶
離し穴。２０−ずつの両分を集めＭＭ４７７６７を含む
画分（２０〜６６）をまとめそして真空濃縮した。Ｎａ
Ｈ，ＰＯ，を濃縮した溶液に加えて０．０５　Ｍのモル
で合計１．５６としｐＨを６．５に調節し念。溶液を次
に第二のＣＭ　５ｅｐｈａｄｅｘＣ２５カチオン交換カ
ラム（０，６９Ｌ）　に適用した。

浸透液を捨てそしてカラムを０．０５　Ｍ　ＮａＨｚ　
ＰＯ４（ｐＨ７，０）　（１ｔ）　によυ洗った。

ＭＭ４７７６７を、１０ｍ１１分の流速で０．０５　Ｍ
ＮａＨｔ　ＰＯａ　（ｐＨ７，０）から０．２　Ｍ　Ｎ
ａ　ｔ　ＨＰ　Ｏａ　（ｐＨ９，２）の指数勾配（混合
容器中で１６）を用いて溶離した。２０−ずつの両分を
集めそしてＭＭ４７７６７を含む両分（１２４〜２６０
）をまとめそしてＤ−アラニル−Ｄ−アラニン・５ｅｐ
ｈａｒｏｓｅアフイニテイ樹脂を用いて脱塩した。樹脂
をｐＨ７，０で１時間まとめた両分とともに攪拌しそし
て樹脂を濾過により回収した。樹脂を次に蒸留水（２ｘ
８００ｍ）によシ洗いそして５％アセトニトリルを含む
０．１　Ｍアンモニア３０ＯＮｌずつを６回溶離した。

なお若干のＭＭ４７７６７　を含む浸透液及び水洗液を
もう一度り−アラニルーＤ−アラニ／・アフイニテイ樹
脂によシ処理し、樹脂を前述のように回収し洗いそして
溶離した。ＭＭ４７７６７を含む溶離液を合わせアンモ
ニア及びアセトニトリルを真空下蒸発させて除いた。溶
液を最後に凍結乾燥して実質的に純粋なＭＭ４７７６７
　　を２．８４１得た。

実施例３ ＭＭ５５２５６　　は、実施例２に記載されたようにＭ
Ｍ４７７６７の単離及び抽出中に単離できる。

実施例２に記載されたこの方法に従ってＭＭ５５２５６
は、第一のＣＭ　５ｅｐｈａｄｅｘ　カラムからのその
初めの溶離によ、９ＭＭ４７７６７から分離できる。Ｍ
Ｍ５５２５６　　にともなう活性は、画分８２〜１３６
で検出された。これらの両分をまとめそして１０ｓｔ／
／分でｐｉａｉｏｎ　ＨＰ２０　、ｌ’７　ラム（０，
５３１）に適用した。カラムを７００−の脱イオン水に
よシ洗いそして０．１　Ｍアンモニア中の５０チプロパ
ン−１−オールにより溶離した。画分（２０ｔ／）を集
めＭＭ５５２５６を含むもの（３〜２１）をまとめそし
て真空下濃縮した。

ＮａＨ！　ＰＯ４を濃縮した溶液に加えて０．０５Ｍの
モルの合計１．５ｔが得られｐＨをｐＨ６，５に調節し
た。溶液を次に第二のＣＭ　５ａｐｈａｄｅｘ　Ｃ２５
カチオン交換カラム（０，７１）に適用した。浸透液を
捨てカラムを０．０５　Ｍ　ＮａＨＨＰＯａ　（ＰＨ７
，０）（１，５ｔ）によシ洗った。

ＭＭ５５２５６を０．０５Ｍ　ＮａＨ＊ＰＯａ（ＰＨ７
，０）から０．２Ｍ　　Ｎａ、ＨＰＯ４（ｐＨ９，２）
の指数勾配（混合容器中でＩｔ）を用いて溶離した。両
分（１８−）を集めそしてＭＭ５５２５６　を含む両分
（８０〜工４５）をまとめそして無機の不純物をＤ−ア
ラニル−Ｄ−アラニン・セファロース・アフイニテイ樹
脂によ多処理することにより除去した。樹月ハをｐ　Ｈ
７，０で１時間まとめた画分とともに攪拌し、樹脂を濾
過によシ回収した。樹脂を次に蒸留水（２Ｘ　１．５　
ｔ　）により洗いそして５０％アセトニトリルを含む０
．１Ｍアンモニア（ｓｘ４００ｓ／）によシ溶離した。

これらを次にＦＣ−突上濃縮しそして凍結乾燥して７５
７■のＭＭ５５２５６　　を得た。

実施例４ ＭＭ４７７６７からのＭＭ５５２５６の製法実質的に実
施例２におけるように製造しりＭＭ４７７６７を１００
ＩＩＰ含む３０ｔ／の溶液を８時間７０℃で加熱した。

イオン対ＨＰＬＣによシ得られた溶液をモニターするこ
とによ、ｊ）４５：５５の比のＭＭ４７７６７及びＭＭ
５５２５６の混合物が示されｆｃ（２ｍｌ１分の流速の
０．　Ｉ　Ｍ　ＮａＨｚ　ＰＯ４（Ｐ　Ｈ５，０）＋１
５％ＣＨｓ　ＣＮ＋　０．００．５　Ｍ　１−ヘプタン
スルホン酸ナトリウム塩により溶離するＷａ　ｔ　ｅ　
ｒ　ａμＢｏｎｄａｐａｋカラム３．８ｍＸ　３００ｍ
、　　２１０　ｎｍのモニター紫外綜吸収）。ＭＭ４７
７６７け５．４分の保持時間を有し、一方ＭＭ５５２５
６は８分の保持時間を有した（このシステムではバンコ
マイシンは４．０分の保持時間を有する）。

ＮａＨ，ＰＯ，を上述の得られた溶液に加えてｐＨ６，
５で０．００５Ｍのモルを有する合計２００ｄを得た。

溶液を次に０．０５　Ｍ　ＮａＨｔＰＯ４（ｐＨ６，５
）中に充填されたＣ　Ｍ　５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｃ２５カ
チオン交換カラム（１８２ｍ）に適用した。浸透液を捨
てそしテカラムを０．０５　Ｍ　ＮａＨｚ　ＰＯ４（ｐ
Ｈ７，０）（５００ゴ）により洗った。

ＭＭ５５２５６を０．０５　Ｍ　ＮａＨｔ　ＰＯａ　（
Ｐ　Ｈ７，０）から０．２　Ｍ　ＮＪＬｔＨＰＯａ　（
ｐＨ９，２）　　の指数勾配（混合容器中の５００ｔ／
）を用いて溶離した。両分（１６ｙ）を集めそしてＭＭ
５５２５６　を含むもの（２８〜４３）をまとめそして
無機の不純物をＤ−アラニル−Ｄ−アラニン５ｅｐｈａ
ｒｏｓｅアフイニテイ樹脂を用いて除いた。ａ＋語をｐ
　Ｈ７，０で１時間まとめた両分とともに攪拌し、次Ｋ
濾過により回収した。樹脂を次に脱イオン水（３Ｘ２０
Ｑｍ）により洗いそして５０％アセトニトリルを含む０
．１Ｍアンモニア（３ｘ　２　ｓ　Ｏｗｔ　）にょシ溶
離した。これらを次にまとめ真空濃縮しそして凍結乾燥
して３５．６　ｑのＭＭ５５２５６を得た。

ＭＭ５５２５６の物理的及び分光学的性質分子ｔ：１８
０７ 分子式：　ＣＨＩ　Ｈａｓ　Ｎｏ　０ｓ１Ｃ１ｔ３５３
°Ｋにおけ７）　ＤＭＳＯ中ノ４００Ｍｚ　！ＨＮＭＲ
内部標準としてテトラメチルシラ／。

δ２．４２で生ずるＮ−メチルシングレットを除いてＭ
Ｍ４７７６７のそれと非常に似たスペクトル。

実施例５ ＭＭ５５２６０の製造 ５．７ｔの含水濃縮物が、実質的に実施例２ｂに記載さ
れたように製造された第一の］）ｉａｉｏｎＨＰ２０カ
ラムの溶離液から得られた。

濃縮物をＮａＨ、ＰＯ４の添加にょシｐＨ６，５に調節
しそして外界温度で攪拌後得られ六沈でんを濾過によシ
除いた。

Ｆ液を、既に０．００５Ｍ　ＮａＨｔＰＯａ　（ＰＨ６
，５）によシ平衡にされた０、８９を容のＣＭ　５ｅｐ
ｈａｄｅｘＣ２５カチオン交換カラム（Ｎ　ａ＋形）に
適用した（　ＣＭ　５ｅｐｈａｄｅｘは、ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ　Ｌｔｄ、　。

’（Ｊｐｐｓａｌｍ　、スウェーデンによシ供給された
）。

カラムを０．００５Ｍ　ＮａＨ，ＰＯ、（ｐＨ６，５）
（０，８５ｔ）により洗い、浸透液及び洗液を捨てた。

カラムを２０−７分の流速で０．０５　Ｍ　ＮａＨ！　
Ｐ　Ｏ４（ｐＨ６，８）から０．２　Ｍ　Ｎａ　ｔ　Ｈ
Ｐ　Ｏ４（ｐ　Ｈ９，１）　ノ指数勾配（混合容器中１
４）を用いて溶離した。

２０−ずつの両分を集めた。画分４１〜９０及び１５１
〜１８５をまとめた（１８６〜２７５はＭＭ４７７６７
　を含み９１〜１５０はＭＭ５５２５６を含んだ）。

まとめた両分を６０−７分で１．４Ｌ容ｐｉａｉｏｎＨ
Ｐ２０カラムに適用した。カラムを２ｔの脱イオン水に
より洗いそして０．１５　Ｍアンモニア中の５０％プロ
パン−１−オール２，５ｔによシ希釈した。初めの１ｔ
を捨て残りの１．５ｔをＸ空濃縮した。

ＮａＨ！Ｐ０４を加えて濃縮した溶液をｐＨ６，５に調
節した。溶液を次に０．００５　Ｍ　ＮａＨ！　ＰＯ４
（ｐＨ６，７）中で平衡にした０１９８を容のＣＭＳｅ
ｐｈａｄｅｘ　Ｃ２５カチオ／交換カラムに適用した。

カラムを２００−の０．００５　Ｍ　ＮａＨｔＰＯｔ　
（ｐＨ６，５）及び６００　ｄｏ　Ｏ，０５ＭＮａＨｔ
ＰＯ＋　（１）Ｈ６，５）によシ洗った。

浸透液及び洗液を捨てそしてカラムを２０−７分の流速
で０．０５　Ｍ　ＮａＨｔＰＯ４（ＰＨ６，５）からｏ
、　Ｉ　Ｍ　Ｎａ２ＨＰＯ４（ｐＨ８，７）の指数勾配
（混合容器中の１ｔ）を用いて溶離した。２０−ずつの
両分を集めそして２８０　ｎｍの紫外線吸収を用いてモ
ニターした。画分８１〜９５をまとめ（１６６〜２１０
はＭＭ５５２５６を含んだ）そして１）ｉａｉｏｎＨＰ
２０カラムでさらに処理しｆＣ（２７５ｍ）。

まとめた画分の適用後カラムを５００−の脱イオン水に
より洗った。浸透液及び洗液を捨てセしてカラムを０．
１５Ｍアンモニア中の５０チプロノ（ノー１−オール５
００Ｗ１ｔにより溶離した。

１６０ｇＬｔ後溶離液を集め真空濃縮した。

この溶液をｐ　Ｉ（７，０で１時間攪拌することによシ
２５ｇ／湿潤容量のＤ−アラニル−Ｄ−アラニン５ｅｐ
ｈａｒｏａｅアフイニテイ樹脂によシ処理した。

樹脂を濾過によシ回収し、脱イオン水によシ洗い（２Ｘ
５０ｍ）そして５０チアセトニトリルを含む０．１Ｍア
ンモニア（４Ｘ１００ｄ）によυ溶離した。まとめた溶
離液を真空濃縮しそして凍結乾燥して９０■の生成物を
得た。

この生成物の６０ｖを、０．１　Ｍ　ＮａＨ，ＰＯ，（
ｐＨ６，０）中で平衡した２２ｍＸ２５０ｍ＋ガラスカ
ラム中のＭａｔｒｅｘＣ１８２０〜４５　ｐバッキング
を用いる次のクロマトグラフィにかけた（Ｍａ　ｔ　ｒ
　ｅ　ｘバッキング材料はＡｍ１ｃｏｎ　Ｉ、ｔｄ、　
’［Ｊｐｐｅｒ　Ｍｉｌｌ。

Ｓｔｏｎｅｈｏｕｇｅ、　Ｇｌｏｗ　ＧＬＩＯ２ＢＪ、
により供給されな）。

固体を平衡化バッファーに溶解して２０−の溶液が得ら
れ、それをカラムに適用した。カラムを３−７分で１０
　％　ＣＨｍ　ＣＮを含む０．１　Ｍ　ＮａＨ，ＰＯ７
（ｐＨ６，０）により溶離した。４．８−ずつの画分を
集めそして２８０　ｎｍの紫外線吸収を用いてモニター
した。両分１１６〜１４５をまとめ、真壁濃、縮して前
述のようにＤ−アラニル−Ｄ−アラニン５ｅｐｈａｒｏ
ａｅアフイニテイ樹脂により処理した。

得られた濃縮物を凍結乾燥して１３■のＭＭ５５２６０
を得た。ＨＰＬＣ（２２０ｎｍの紫外線吸収によシモニ
ターされる、２１１１／／分の流速の１０チＯＨ，ＣＮ
を含む０．　Ｉ　Ｍ　ＮａＨ１ＰＯ４（ＰＨ６，０＞　
により溶離でれるＷａｔｅｒｓ　Ｃ１８ｐ　Ｂｏ＋１ｄ
ａｐａｋ　カラム、３、９　ｔｍ　Ｘ　３００　ｗｍ　
）にかけられたとき、ＭＭ５５２６０は４．６分の保持
時間を有した（なお、このシステムのバンコマイシンは
７．１分の保持時間を有した）。

ＭＭ５５２６０の性質 ＦＡＢ質量分光法は、１８３０±１で分子イオン（ＭＮ
ａ”）を示した。

実施例６ ＭＭ４７７６７（ＭＴ５５２６１）のアグリコンの製造
ＭＭ４７７６７（１００ａＦ％０．０５５ｍモル）を５
Ｍ塩酸（１０＋ｄ）に溶解しそして得られた溶液を１０
０℃で油浴中で加熱した。反応をアセトニトリル１０．
０５Ｍ含水酢酸ナトリウム（ｐＨ５，０）バッファー混
合物によｐ′Ｂ離する５ｐｈｅｒｉｓｏｒｂ　８１００
０Ｓ２カラムのＨＰＬＣによシモニターした。１１分後
反応溶液を水浴で冷却しそして希水酸化ナトリウム水溶
液によｊ９　ｐ　Ｈ８，０に調節した。溶液を次に凍結
乾燥しそして得られた粗面体を、水中３（ｌプロパン−
１−オールに勾配する水により溶離する１）ｉａｉｏｎ
　ＨＰ２０　；３Ｓ樹脂のカラムの通過によす脱塩且精
製した。両分をＨＰＬＣ（前述）によシモニターしそし
て精製アグリコンを含むものをプールしそして凍結乾燥
して表題化合物ＭＴ５５２６１を得た。（５１１１ＩＰ
、　７６％）−２ｍａ：ｃ（ＨｔＯ）２７８ｍｍ（ｇ７
４３０）：ｕｍａｘ（ＫＢｒ）１６５３，１６００゜１
５０７．１２０９，１０６１ｃｒｎ−’：　ｍ／Ｚ（正
キセノンＦ、　Ａ、　Ｂ、　；グリセロール／チオグリ
セロール／ＴＦＡ）ＭＨ”１２１２゜ ＭＴ５５２６１の杭菌性活性は、実施例１ｂに記載され
たようなマイクロタイター法により求められた。結果を
第２表に示す。

実施例７ ＭＭ４７７６７（ＭＴ５５２６２）のプンイドアグリコ
／の製造 １Ｍ塩酸（２０Ｐ１１ｔ）中のＭＭ４７７６７（２００
■。

０、ｌ１ｍモル）を１００℃で油浴中で加熱しそして反
応溶液を対応するアグリコンの製造について記述した（
実施例６）のようにＨＰＬＣによりモニターした。３８
分後反応溶液を水浴で冷却しそして希水酸化ナトリウム
水溶液によ、９　ｐ　Ｈ８，０に調節した。溶液を次に
凍結乾燥しそして得られた粗固体を水中４０％プロパン
−１−オールに勾配する水により溶離するｐｉａｉｏｎ
ＨＰ２０　ＳＳ樹脂のカラムを通すことにより脱塩且精
製した。両分をＨＰＬＣ（前述）によりモニターしそし
て精製したプソイドドアグリコンを含むものをプールし
凍結乾燥して表題化合物ＭＴ５５２６２を得た。

（３５Ｗｑ、　２３％）、λｍＢｚ２７７ｎｍ　（ｇ７
５６５）：υｍａｘ（ＫＢｒ）１６５４，１５９６，１
４９０，１２１１゜１０６０　ｃｍ−”　：　ｍ／　Ｚ
　（正キセノンＦ、　　Ａ、　　Ｂ、　　：クリセロー
ル／チオグリセロール／ＴＦＡ）ＭＨ＋１３５５　。

ＭＴ５５２６２　の抗開性活性は、実施例１ｂで記載さ
れたようなマイクロタイター法によシ求められた。結果
を第２表に示す。

ＭＩＣ μｔ／ｗｔｌ） 米多重耐性（メチシリン、テトラサイクリン、エリスロ
マイシン及びゲンタミシン耐性）参考例 アフイニテイ樹脂の製造 ６−アミツペキサン酸セファロース４ＢのＮ−ヒドロキ
シサクシ／イミドエステル（６０Ｆ）をガラス焼結物上
に置き吸引下１ｍＭ塩酸（２ｔ）によシ洗つ六。湿った
ケーキを次に０．１Ｍ重炭酸ナトリウム溶液（６０ｔｎ
ｔ）中のＤ−アラニル−Ｄ−アラニン（１，ｓ　ｙ　）
の溶液に加えそしてときどき次の１時間振盪した。懸濁
液を吸引上濾過し残渣を１時間０．１　Ｍ　ｌ−リス（
ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲｌ５）（ｔｏｏ
ｙ）に懸濁し次にガラス焼結物を通して再濾過した。ケ
ーキを次々と０．１　Ｍ重炭酸ナトリウム溶液、０．０
５Ｍ　ＴＲｌ５（０，５Ｍ塩化ナトリウムを含む）、０
．０５Ｍぎ酸塩バッファー（ｐＨ４，０）（０，５Ｍ塩
化ナトリウムを含む）そして最後に蒸留水で洗った。ア
フィニティ樹脂を次に含水懸濁液中に４℃で貯蔵した。

ＮＣｌＢ４Ｏ０１１の分類 用いた方法 下記の方法は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ種の同定のた
めにｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔｓｅｐ
ｔｏｍｙｃｅａプロジェクトにより推せんされたもの （Ｓｈｉｒｌｉｎｇ、　Ｅ、　Ｂ、及びＱｏｔｔｌｉｅ
ｂ、　Ｄ。

”Ｍｅｔｈｏｄａ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｈａｒａｃｔｅ
ｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ　　
５ｐｅｃｉｅｓ’　ＩｎｔＩＩＪ、　５ｙｓｔ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、　１６：３１３−３４０（１９
６６））並にＡｍｙｅｏｌａｔａ及びＡｍｙｃｏｌａｔ
ｏｐｓｉｓ　種の同定について推せんされたもの （Ｌｅｅｈｅｖａｌ　ｉｅｒ　、　Ｍ、　Ｐ。、　Ｐｒ
ａｕｓｅｒ、　Ｈａ　。

Ｌ　ａ　ｂ　ｅ　ｄ　ａ　＊　Ｄｏ　Ａｓ及びＲｕａｎ
、　Ｊ。−８，”　ＴＷＯｎｅｗ　ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ
　ｎｏｃａｒｄｉｏｆｏｒｍａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ：Ａｍｙｏｌａｔａ　ｇｅｎ、　ｎｏｖＩｌａｎｄで
ある。

全細胞の加水分解物中のジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）
の異性体及び炭水化物は、コマガタ及びスズキによ、シ
記載された方法を用いて薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ
）により確認された。

ＣＫｏｍａｇａｔａ、　Ｋ、及び５ｕｚｕｋｉ、　Ｋ、
−Ｉ。−Ｌｉｐｉｄａｎｄ　Ｃｅ１ｌ−Ｗａｌｌ　Ａｎ
ａｌｙａｉａ　　ｉｎ　ＢａｅｔｅｒｉａｌＳｙｇｔｅ
ｍａｔｉｃａ”Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ　Ｍｉｅｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ。

１９：１６１−２０７（１９８７））。ミコール酸はＭ
ｉｎｎｉｋｉｎ　　らによシ記載された方法により求め
られた。

（Ｍｉｎｎｉｋｉｎ、Ｄ、Ｅ、、Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ
、１．Ｇ、及び（：：ａｌｄｉｃｏｔｔ、　Ａ、７３．
　”ｐｈｉｎ　Ｌａｙｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｙ　ｏｆ　Ｍｅｔｈａｎｏｌｙｓａｔｅｓ　　ｏｆＭｙ
ｃｏｌｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　Ｂａｃ
ｔｅｒｉａ”結果 １、培養上の特徴 培養物ＮＣｌＢ４Ｏ０１１は、ＩＳＰにより推せんされ
るすべての生長培地で生長し、十分に生長したクリーム
／淡オレンジ〜オレンジ色の基質菌糸及び白色の気菌糸
を形成した。可溶性の顔料は、用いたすべての培地で検
出されなかった。種々の培地上のＮＣｌＢ４Ｏ０１１の
培養上の特徴は第３表に要約きれている。

２、化学上の＠徴 培養物ＮＣｌＢ４Ｏ０１１の加水分解され大全細胞は、
ジアミノピメリン酸のメン異性体を含んだ。

アラビノース及びガラクトースは存在する主な糖であシ
、リボースは少量で検出された。ミコール酸は存在しな
かった。これらの結果は、培養物ＮＣｌＢ４Ｏ０１１が
タイプＡ糖パターンを有する細胞壁タイプ■を有するこ
とを示す（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒら、１９８６）。し
かしミコール酸がないことは、この培養物が確実に属Ｎ
ｏｃａｒｄｉａ　　以外であることを示す。

３、生理学上の特徴 培養物ＮＣｌＢ４Ｏ０１１及びＡｍｙｃｏｌａｔｏｐｓ
ｉａｏｒｉｅｎｔａｌｉａ　ＡＴＣＣ１９７９５の主な
生理学上の特徴を第４表に示す。

ｌ５Ｐ２良 ｌ５Ｐ３艮 ｌ５Ｐ４艮 ｌ５Ｐ５並 ｌ５Ｐ６　　貧弱 ｌ５Ｐ７良 栄養アガー貧弱 焔白 非常に貧弱　　白 並　　　　白 貧弱　　　白 なし 貧弱　　オレンジ なし 淡いオレンジ オレンジ 淡いオレンジ オレンジ クリーム オレンジ クリーム なし なし なし なし なし なし なし 第　　４ 表 分解 アデニン カゼイン ＋ ヒポキサンチン チロシン キサンチン 生成 硝酸塩還元酵素 アミラーゼ ウレアーゼ メラニン エスクリナーゼ ゲラチナーゼ 安息香酸エステル くえん酸エステル ムコン酸エステル マレイン酸エステル リゾチーム（５００単位／−） サリチレート ＮａＣ１（５％、ｗ／ｖ） リフアンピシリン（５０ｕＰ／ＩＲｔ）生長 ２８℃ ３７℃ ４５℃ アデニトール アラビノース セロビオース デキストリン エリスリトール ガラクトース グルコース イノシトール ラクトース マルトース マンニトール メリビオース α−メチル−Ｄ−グルコシド　−　　　　　　＋ラフィ
ノース　　　　　　　　− ラムノース　　　　　　　　　＋　　　　　　＋サリシ
ン　　　　　　　　　　　　　　　　十ンルビトール 砂糖　　　　　＋　　　＋ トレハロース　　　　　　　　＋　　　　　　＋キシロ
ース　　　　　　　　　　　　　　　＋（コントロール
：糖なし） キー：＋／−＝変化した結果 ＮＣｌＢ４Ｏ０１１の同定 主な化学、生理学及び形態学上の特徴に基づいて、培養
物ＮＣｌＢ４Ｏ０１１はＡｍｙｃｏｌａｐｔｏｇｉａｏ
ｒｉｅｎｔａｌｉｓの非定形菌と同定される。生理学及
び形態学のテストから得られた結果は、ＮＣｌＢ４Ｏ０
１１ｉｊＡｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｉ　ｏｒｉｅｎｔａ
ｌｉｓ（ＡＴＣＣ１９７９５）の定形菌及びその種の２
１個の他の単離物の両方に関する公表された結果とは実
質的に異ることを示す（Ｌｅｅｈｅｖａｌｉｅｒら、１
９８６）。しかしＮＣｌＢ４Ｏ０１１は、関連のある属
例えば ７）、ｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ （Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８６
）　　にライて公表された結果とははっきり異る。それ
故、培養物ＮＣｌＢ４Ｏ０１１は、種Ａｍｙｃｏｌａｔ
ｏｐｓｉａｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　の新しい非定形な函
株として同定される。

【図面の簡単な説明】

第１図はＭＭ４７７６７のＩＨＮＭＲを示す。

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. （１）式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｒ＾１は水素でありそしてＲ＾２はメチルアミノ
   である（ＭＭ４７７６７）か又はＲ＾１はメチルアミノ
   でありそしてＲ＾２は水素であり（ＭＭ５５２５６）そ
   してＲ＾３、Ｒ＾４及びＲ＾５の一つは糖マンノースで
   ありそしてＲ＾３、Ｒ＾４及びＲ＾５の他の二つは水素
   である〕 の化合物又はその製薬上許容しうる誘導体であるか；又
   は下記の特徴即ち、 （ｉ）それが高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分光法により
   １９６９±２の見掛け上の分子量を有し； （ｉｉ）それが属Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ（従来Ｎ
   ｏｃａｒｄｉａとして知られている）の微生物の培養に
   より得ることができ； （ｉｉｉ）２ｍｌ／分の流速で１０％アセトニトリルを
   含むｐＨ６．０の含水０．１ＭＮａＨ＿２ＰＯ＿４溶媒
   系によるＣ１８μＢｏｎｄａｐａｋ（商標名）カラムパ
   ッキング（カラムの大きさ直径３．９ｍｍ×長さ３００
   ｍｍ）を用いる高速液体クロマトグラフィ（ｈ．ｐ．ｌ
   ．ｃ．）におけるその保持時間が、２２０及び２８０ｍ
   ｍにおける紫外線吸収により測定するとき約４．６分で
   あり（米国Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓｓｏｅｉａｔｅｓにより
   供給される充填ｈ．ｐ．ｌ．ｃ．カラム）；そして （ｉｖ）それがＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒ
   ｅｕｓＶ５７３に対する抗菌性活性を示す特徴 を有することを特徴とするＭＭ４７７６６と命名された
   物質、又は下記の特徴即ち、 （ｉ）それが高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分光法により
   １８０７±１の見掛け上の分子量を有し； （ｉｉ）それが属Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ（従来Ｎ
   ｏｃａｒｄｉａとして知られている）の微生物の培養に
   より得ることができ； （ｉｉｉ）２ｍｌ／分の流速で１０％ＣＨ＿３ＣＮを含
   むｐＨ６．０の含水０．１￥ｍ￥ＮａＨ＿２ＰＯ＿４溶
   媒系によるＣ１８μＢｏｎｄａｐａｋ（商標名）カラム
   パッキング（カラムの大きさ直径３．９ｍｍ×長さ３０
   ０ｍｍ）を用いる高速液体クロマトグラフィ（ｈ．ｐ．
   ｌ．ｃ．）におけるその保持時間が、２２０ｎｍにおけ
   る紫外線吸収により測定するとき約３３分であり（米国
   Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓにより供給される
   充填ｈ．ｐ．ｌ．ｃ．カラム）；そして （ｉｖ）それがＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒ
   ｅｕｓＶ５７３に対する抗菌性活性を示す特徴 を有することを特徴とするＭＭ５５２６０と命名された
   物質。
2. （２）生産微生物を培養し、次に培養物からＭＭ４７７
   ６６、ＭＭ４７７６７、ＭＭ５５２５６又はＭＭ５５２
   ６０又はその誘導体を単離することよりなる請求項１記
   載のＭＭ４７７６６、ＭＭ４７７６７、ＭＭ５５２５６
   又はＭＭ５５２６０を製造する方法。
3. （３）ＭＭ４７７６６、ＭＭ４７７６７、ＭＭ５５２５
   ６及び／又はＭＭ５５２６０又はその誘導体を、他の抗
   菌的に活性な物質及び／又は不活性な物質と混合したそ
   の溶液からアフイニテイ樹脂への吸着により分離するこ
   とよりなる物質ＭＭ４７７６６、ＭＭ４７７６７、ＭＭ
   ５５２５６及び／又はＭＭ５５２６０を製造する方法。
4. （４）生産微生物がＡｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ　ｏｒ
   ｉｅｎｔａｌｉｓＮＣＩＢ４００１１である請求項２又
   は３記載の方法。
5. （５）生物学上純粋な形のＡｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ
   ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　ＮＣＩＢ４００１１又はその変
   異体。
6. （６）式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） のＭＴ５５２６１と命名された化合物、又は式（III）
   ▲数式、化学式、表等があります▼（III） のＭＴ５５２６２と命名された化合物。
7. （７）請求項１記載の式（ I ）の化合物ＭＭ４７７６
   ７の加水分解よりなる請求項６記載の式（II）の化合物
   ＭＴ５５２６１又は式（III）のＭＴ５５２６２を製造
   する方法。
8. （８）製薬上許容しうる担体又は賦形剤と一緒の請求項
   １記載の化合物又は請求項６記載の化合物を含む製薬組
   成物。
9. （９）ヒトを含む動物における細菌性感染を治療する方
   法において、有効且つ非毒性量の請求項１又は６記載の
   化合物又は請求項８記載の組成物をそれに投与すること
   よりなる方法。
10. （１０）治療に用いられる請求項１又は６記載の化合物
    。
11. （１１）ヒトを含む動物における細菌性感染の治療に用
    いられる請求項１又は６記載の化合物。
12. （１２）ヒトを含む動物における細菌性感染の治療に用
    いられる薬剤の製造における請求項１又は６記載の化合
    物の用途。