JPS6133558B2

JPS6133558B2 -

Info

Publication number: JPS6133558B2
Application number: JP53122277A
Authority: JP
Inventors: Satoru Imada; Kazuhiko Kanetaka; Yoshi Haibara
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1978-10-03
Filing date: 1978-10-03
Publication date: 1986-08-02
Also published as: US4225586A; IT1193505B; DK148659B; FR2449099A1; GB2032913A; FR2449099B1; IT7926201A0; JPS5549394A; DE2939333A1; DE2939333C2; ES484597A1; GB2032913B; DK414079A; DK148659C; CH644871A5; NL7907191A; BE879170A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規抗生物質SB−72310およびその塩
ならびにその製造法に関する。本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的と
して多数の微生物を土壌より分離し、その産生す
る抗生物質を分離探索したところ、ある種の微生
物が新規な抗生物質を産生すること、該微生物が
シユードモナス属に属すること、該微生物を適宜
の培地に培養することによつてグラム陽性細菌お
よびグラム陰性細菌に対て抗菌力を示す抗生物質
を培地中に蓄積しうることなどを知り、この抗生
物質を単離し、その物理化学的および生物学的諸
性質から、当該抗生物質が新規な抗生物質である
ことを確め、これを抗生物質SB−72310と称する
ことにした。さらに抗生物質SB−72310の生産条件について
も検討を加え、抗生物質SB−72310生産菌の資化
しうる硫黄化合物を培地に添加して培養すること
により、抗生物質SB−72310の生産量が著しく増
大することを見出した。本発明者らは、これらの
知見に基づいてさらに研究を重ねた結果、本発明
を完成した。本発明は、１抗生物質SB−72310およびその塩
２シユードモナス属に属する抗生物質SB−
72310生産菌を培地に培養し、培養物中に抗生物
質SB−72310を生成蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とする抗生物質SB−72310の製造法、
である。なお、本願では抗生物質SB−72310を単に
「SB−72310」と称することもある。本発明で使用される抗生物質SB−72310生産菌
としては、シユードモナス（Pseudomonas）属
に属し、抗生物質SB−72310を産生する能力を有
するものであれば如何なる微生物でもよい。抗生物質SB−72310生産菌の例としては、たと
えば本発明者らによつて兵庫県西宮市の土壌より
採取したシユードモナス属SB−72310株（以下、
「SB−72310株」と略称することもある。）があげ
られる。シユードモナス属SB−72310株の菌学的性状は
下記のとおりである。 (a) 形態肉汁寒天斜面上で28℃、２日間培養後の観察
では、細胞は直径0.8〜1.1μ、長さ1.6〜4.1μ
の桿状で、多形性を示さない。運動性があり、
極鞭毛を有する。胞子を形成せず、また細胞貯
蔵物としてポリーベーターヒドロキシ酪酸を蓄
積する（R.Y.ステイニアら、ジヤーナル・オ
ブ・ジエネラル・マイクロバイオロジー
（Journal of General Microbiology）第43巻、
第159頁、1966年）。グラム染色は陰性で、抗酸
性を示さない。 (b) 各種培地上での生育状態 28℃で培養し、１ないし14日間にわたつて観
察した。肉汁寒天平板培養：３日間培養で直径１な
いし３mmの円形、隆起状、全縁の集落を形成
する。表面は平滑、不透明、灰白色を呈す
る。拡散性色素は生成しない。肉汁寒天斜面培養：中程度の糸状の生育を
示し、不透明、灰白色を呈する。肉汁液体培養：混濁状に生育し、少量の沈
澱を生じ、菌膜を形成する。肉汁ゼラチン穿刺培養：液化する。リトマス・ミルク：ペプトン化する。 (c) 生理的性質硝酸塩の還元：陽性脱窒反応：陰性 MR（メチルレツド）テスト：陰性 VP（フオーゲス・プロスカウエル）テス
ト：陰性インドールの生成：陰性硫化水素の生成：陰性デンプンの加水分解：陰性クエン酸の利用：陽性無機窒素源の利用 (i) 硝酸カリウム：陽性 (ii) 硫酸アンモニウム：陽性色素の生成：認められないウレアーゼ：陽性オキシダーゼ：陽性カタラーゼ：陽性生育の範囲 (i) PH：PH4.0〜8.85で生育するが、最適PH
は4.5〜7.0。 (ii) 温度：８〜42℃で生育するが最適温度は
24〜36℃。酸素に対する態度：好気的Ｏ−Ｆ（オキシダテイブ−フアーメンタテ
イブ）テスト〔ヒユー・レイフソン
（Hugh・Leifson）法〕：酸化的糖からの酸およびガスの生成：Ｌ−アラビ
ノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−マンノース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガ
ラクトース、麦芽糖、シヨ糖、トレハロー
ス、Ｄ−ソルビツト、Ｄ−マンニツト、イノ
シツトおよびグリセリンをそれぞれ１W/V
％含むペプトン水で微弱な酸の生成が認めら
れるが、ガスの生成は認められない。各種炭素源の利用性：各種炭素源を含む無
機塩培地（リン酸２カリウム0.7W/V%、リ
ン酸１カリウム0.3W/V%、硫酸アンモニウ
ム0.1W/V%、食塩0.1W/V%、硫酸マグネシ
ウム・７水塩0.01W/V%）で14日間培養した
結果を第１表に示す。

【表】

【表】註：＋：生育あり
±：微弱な生育あり
−：生育なし
その他の性質 (i) マロン酸の利用性：陽性 (ii) フエニルアラニンの脱アミノ反応：陰性 (iii) デカルボキシラーゼ活性 (a) アルギニン：陽性 (b) リジン：陰性 (c) オルニチン：陰性 (iv) アルギニン・ジヒドロラーゼ活性：陽性 (v) エスクリンの加水分解性：陽性 (vi) ツイーン（Tween）80の加水分解性：
陽性 (vii) DNAのGC（グアニン−シトシン）含
量：64.3モル％以上の菌学的性質を有するSB−72310株をバー
ジーズ・マニユアル・オブ・デターミナテイブ・
バクテリオロジー（Bergy′s Manual of
Determinative Bacteriology）第７版および第８
版の記載と照合すると、SB−72310株はグラム陰
性桿菌で、好気性で、極鞭毛を有して運動性があ
り、オキシダーゼ陽性、カタラーゼ陽性であると
ころからシユードモナダセー科に属することは明
らかである。さらに栄養要求性がなく、ポリ−β
−ヒドロキシ酪酸を蓄積すること、またアルギニ
ン・ジヒドロラーゼを有するということなどの性
質から検索すると、シユードモナス・シユードア
ルカリゲネス（Pseudomonas
pseudoalcaligenes）、シユードモナス・シユード
マレイ（P.pseudomallei）、シユードモナス・マ
レイ（P.mallei）およびシユードモナス・カリオ
フイリ（P.caryophylli）に近縁と考えられる。
しかし、シユードモナス・シユードアルカリゲネ
スは、炭水化物としてはフラクトースだけしか利
用できないという点で、シユードモナス・シユー
ドマレイはほとんどの株で脱窒が認められるこ
と、またでんぷんを加水分解することおよび栄養
源の資化性の点で、シユードモナス・マレイは非
運動性であること、および脱窒が認められる点
で、シユードモナス・カリオフイリは、黄緑色の
非螢光水溶性色素を生じ、脱窒を行なう点で、い
ずれもSB−72310株とは明らかに区別される。したがつて、本菌株はシユードモナス属の新種
に属すると考えられる。そこでSB−72310株の生
育最適PHが4.5〜7.0とシユードモナス属細菌とし
てはやや低い特徴にもとづいて本菌をシユードモ
ナス・メソアシドフイラ（Pseudomonas
mesoacidophila）と命名した。なお、本菌株SB−72310株は工業技術院微生物
工業技術研究所にFERM−Ｐ No.4653として、
財団法人発酵研究所にIFO 13884として、ジ・ア
メリカン・タイプ・カルチヤー・コレクシヨン
（The American Type Culture Collection U.S.
A.）にATCC−31433として、それぞれ寄託され
ている。本発明に用いられるシユードモナス属細菌は一
般にその性状が変化しやすく、たとえば紫外線、
Ｘ線、化学薬品（例、ニトロソグアニジン、エチ
ルメタンスルホン酸）などを用いる人工変異手段
で容易に変異しうるものであり、どの様な変異株
であつても本発明の対象とするSB−72310の生産
能を有するものはすべて本発明に使用することが
できる。 SB−72310生産菌の培養に際しては、炭素源と
しては、たとえばグルコース、シユークロース、
マルトース、廃糖蜜、グリセロール、油脂類
（例、大豆油、オリーブ油など）、有機酸類（例、
クエン酸、コハク酸、グルコン酸など）など菌が
資化しうるものが適宜用いられる。窒素源として
は、たとえば大豆粉、棉実粉、コーン・ステイー
プ・リカー、乾燥酵母、酵母エキス、肉エキス、
ペプトン、尿素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム
などの有機窒素化合物や無機窒素化合物が利用で
きる。また、無機塩としては、たとえば塩化ナト
リウム、塩化カリウム、炭酸カルシウム、硫酸マ
グネシウム、リン酸一カリウム、リン酸二ナトリ
ウムなどの通常細菌の培養に必要な無機塩類が単
独もしくは適宜、組合せて使用される。シユードモナス属に属する抗生物質SB−72310
生産菌の資化しうる硫黄化合物、たとえば硫酸塩
（例、硫酸アンモニウムなど）、チオ硫酸塩（例、
チオ硫酸アンモニウムなど）、亜硫酸塩（例、亜
硫酸アンモニウム）などの無機硫黄化合物、含硫
アミノ酸（例、シスチン、システイン、Ｌ−チア
ゾリジン−４−カルボン酸）、ヒポタウリン、含
流ペプチド（例、グルタチオン）などの有機硫黄
化合物または、これらの混合物を培地に添加する
と目的物の生成量が増大することが見出された。
該硫黄化合物を培地に添加するときの濃度は0.01
〜1.0W/V%、さらに好ましくは0.02〜0.5W/V%
である。該硫黄化合物を培地中に添加して培養す
ると、SB−72310の生成量が増大し、工業上きわ
めて有利である。また、硫酸第１鉄、硫酸銅などの重金属類、ビ
タミンB₁、ビオチンなどのビタミン類なども必
要に応じて添加される。さらにシリコーンオイル
やポリアルキレングリコールエーテルなどの消泡
剤や界面活性剤を培地に添加してもよい。その他
菌の発育を助け、SB−72310の生産を促進するよ
うな有機物や無機物を適宜に添加してもよい。培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法
と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培養で
もよい。液体培養の場合は静置培養、撹拌培養、
振盪培養、通気培養などいずれを実施してもよい
がとくに通気撹拌培養が好ましい。又培養温度は
およそ15℃〜35℃の範囲が好ましく、培地のPHは
約４〜８の範囲でおよそ８時間〜168時間、好ま
しくは24時間〜144時間培養する。生成したSB−72310は主として培養液中に存
在するので、培養物を遠心分離あるいは過によ
つて上清液と菌体とに分離し、その上清液から精
製するのが有利である。しかし、培養物から、直
接に精製することも可能である。本物質の力価測定は、たとえばコマモナス・テ
リゲナ（Comamonas terigena）IFO 12685株を
試験菌として、SB−72310を標準品として、TSA
（トリプテイケース・ソイ・アガー（Baltimore
Biologicals Limited、U.S.A.製）培地を用いる
カツプ法、ペーパーデイスク法により実施でき
る。 SB−72310を採取するには、微生物が生産する
代謝産物を採取するのに通常用いられる手段を適
宜利用することができる。たとえば遠心分離によ
つて菌体を除去したのち、その液から一般に有
効物質を分離、採取、精製する方法を用いる。す
なわち適当な溶媒に対する溶解性および溶解度の
差、溶液からの析出法および析出速度の差、種々
の吸着親和力の差、イオン交換体によるイオン交
換クロマトグラフイーあるいは減圧濃縮、凍結乾
燥、結晶化、再結晶、乾燥などの手段が単独ある
いは任意の順序に組合わせて、または反復して用
い、利用される。その１例を示すと次のとおりである。すなわち
培養終了培養液を過し、得られる液を活性炭
カラムに通過させ、吸着されるSB−72310を親水
性有機溶媒系を用いて溶出させる。親水性有機溶
媒系として用いられるものには、アセトン、メチ
ルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどの
低級ケトン類、メタノール、エタノール、イソプ
ロパノール、プロパノール、ブタノール等の低級
アルコール類の単独または混合溶媒と水との混合
溶液があげられる。またイオン交換樹脂としては
当該物質が酸性物質であるため、アニオン交換樹
脂〔アンバーライトIRA−400、402、米国アンバ
ーライト社製造；ダウエツクス−１、米国ダウ・
アンド・ケミカル社製造；ダイヤイオンSA−
21A、三菱化成製造〕等のCl型等が有利に利用出
来る。吸着した当該物質の溶出には食塩等の水溶
液を用い有効物質を溶出する。溶出液の脱塩には
再び活性炭のカラムクロマトグラフイーを行う。
次に有効物質を溶出した溶出液を濃縮した後、ア
セトン等を加えて析出する沈澱を取したのち、
アセトン、エーテル等で洗浄後乾燥すると淡褐色
の粉末が得られる。得られた粉末をさらに精製す
るには、DEAEセフアデツクス（スエーデンフ
アルマシア社製）のカラムクロマトグラフイーが
有利に利用出来る。すなわち、DEAEセフアデツ
クスＡ−25をリン酸緩衝液（PH6.6）で洗浄した
後、さきに得られた粉末を水に溶解した液を通
過、吸着せしめ、同緩衝液で洗浄後、0.5W/V%
食塩を含ませた緩衝液で溶出する。得られた有効
区分をPH3.0に調整後、再び活性炭カラムに通
し、20V/V%メタノール水で洗浄する。ついで含
水アセトンで溶出し、有効区分を減圧濃縮後、ア
セトンを加えるとSB−72310が得られる。また本
品は金属塩およびアンモニウム塩を形成する。金
属塩としては、たとえばナトリウム塩、カリウム
塩、リチウム塩などが挙げられる。後述の実施例１で得られたSB−72310の物理化
学的性質はつぎのとおりである。 (1) 融点：110℃以上である。 (2) 外観：白色粉末 (3) 元素分析値：（％）五酸化リン上で40℃、６時間減圧乾燥したも
の。Ｃ 34.40 34.18（34.40±0.5）Ｈ 5.56 5.54（ 5.50±0.5）Ｎ 13.30 13.65（13.45±0.5）Ｓ 7.56 7.75（ 7.75±0.5）（Ｏ 38.90±1.0） (4) 分子量 400±20（滴定法による。）推定分子式（上記の実測値より） C₁₂H₂₀N₄SO₉・（H₂O）計算値
Ｃ 34.78；Ｈ 5.35；Ｎ 13.52；Ｓ 7.74(%) (5) 比旋光度〔α〕^２３ _Ｄ＋0.5゜±５゜（Ｃ＝0.93、H₂O） (6) 紫外線吸収スペクトル：末端吸収のみ（21nｍ以上以上に特異な吸収
を示さない。） (7) 赤外線吸収スペクトル：（第１図）臭化カリウム錠による吸収スペクトルの主要
ピークはつぎの通りである。 3440（ｓ）、2920（ｍ）、2850（ｍ）、2600
（ｗ）、1770（ｓ）、1650（ｓ）、1530（ｓ）、
1458（ｍ）、1390（ｗ）、1340（ｗ）、1280
（sh）、1240（ｓ）、1210（sh）、1180（ｍ）、
1118（ｗ）、1043（ｓ）、792（ｗ）、632（ｓ）
（cm^-1）（ただし、ｓ、ｍ、ｗは強、中、弱を、shは肩
を、それぞれ示す。） (8) 溶媒に対する溶解性：石油エーテル、ヘキサン、ジエチルエーテ
ル、ベンゼン、酢酸エチル、クロロホルムには
不溶。エタノール、ピリジン、アセトンには難
溶。メタノール、ジメチルスルフオキシドには
可溶。水には易溶。 (9) 呈色反応：ニンヒドリン、過マンガン酸カリウム試薬に
は陽性。塩化第２鉄−フエリシアン化カリウム
試薬、坂口反応、モーリツシユ試薬には陰性。
エールリツヒ試薬には擬陽性。 (10) 塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質 (11) 核磁気共鳴スペクトル（ジメチルスルフオキ
シド中100MHZ）δ3.31ppmにＯ−CH₃のシグ
ナルを認める。 (12) 安定性： PH３〜PH７の水溶液は60℃、10分間の加熱に
は安定。PH8.5以上では不安定。後述の実施例２で得られたSB−72310・ナトリ
ウム塩の物理化学的性状はつぎのとおりである。 (1) 融点：110℃以上である。 (2) 外観：白色粉末 (3) 元素分析値：（％）五酸化リン上で40℃、６時間減圧乾燥したも
の。Ｃ 31.75 31.68 Ｈ 5.19 5.11 Ｎ 12.68 12.57 Ｓ 7.16 7.10 Na 5.01 4.95 (4) 分子量：分子中Naを１モル含有するとすれば 438±５（滴定法による）推定分子式（上記の実測値より） C₁₂H₁₉N₄SO₉Na・2H₂O 計算値Ｃ 31.72；Ｈ 5.10；Ｎ 12.33；
Ｓ 7.06 ；Na 5.06 (5) 比旋光度：〔α〕^２３ _Ｄ＋8.5゜±５゜（Ｃ＝0.91、H₂O） (6) 紫外線吸収スペクトル：末端吸収のみ (7) 赤外線吸収スペクトル：（第２図）臭化カリウム錠による吸収スペクトルの主要
ピークはつぎの通りである。 3430（ｓ）、3250（sh）、3000（ｍ）、1770
（ｓ）、1640（ｓ）、1530（ｓ）、1450（ｗ）、
1405（ｗ）、1343（ｗ）、1280（sh）、1245
（ｓ）、1180（ｗ）、1118（ｗ）、1050（ｓ）、820
（ｗ）、785（ｗ）、632（ｓ）、（cm^-1）（ただし、ｓ、ｍ、ｗは強、中、弱を、shは肩
を、それぞれ示す。） (8) 溶媒に対する溶解性：石油エーテル、ヘキサン、ジエチルエーテ
ル、ベンゼン、酢酸エチル、クロロホルム、ア
セトンには不溶。メタノール、エタノール、ピ
リジンには難溶。ジメチルスルフオキシドには
可溶。水には易溶。 (9) 呈色反応：ニンヒドリン、過マンガン酸カリウム試薬に
は陽性。塩化第２鉄−フエリシアン化カリウム
試薬、坂口反応、モーリツシユ試薬には陰性。
エールリツヒ試薬には擬陽性。 (10) 安定性： PH３〜PH７の水溶液は60℃、10分間加熱には
安定。PH8.5以上では不安定。 SB−72310の遊離形のものを塩にするには、た
とえば遊離酸の水溶液に約当モルの水酸化ナトリ
ウムを添加し凍結乾燥するとナトリウム塩が得ら
れる。またSB−72310の塩を遊離形のものにするには
たとえば、SB−72310ナトリウム塩の水溶液に約
１規定の塩酸を加えPH約3.0とした後活性炭で脱
塩操作を行うと遊離形が得られる。以上のSB−72310の物理化学的性質およびその
他の物理化学的性質のデータから本物質の化学構
造式は次のとおりであると決定された。次にSB−72310の生物学的性状について述べ
る。SB−72310およびそのナトリウム塩の各種微
生物に対する抗菌スペクトルは第２表に示すとお
りである。この表から明らかなように抗生物質
SB−72310はグラム陽性菌および陰性菌に有効で
ある。抗生物質SB−72310・ナトリウム塩の急性毒性
はマウスに対する静脈内投与で500mg/Kgでは死亡
例を認めず、低毒性である。

【表】本発明によつて得られるSB−72310は、上記抗
菌スペクトルから明らかなように、グラム陰性
菌、グラム陽性菌に対して抗菌力を示す。したが
つて、哺乳動物（例、マウス、ラツト、イヌ、
人）および家禽（例、ニワトリ、アヒル）の上記
細菌の感染症の治療に用いることができる。 SB−72310をたとえば大腸菌感染症の治療薬と
して用いるには、たとえばSB−72310を生理的食
塩水に溶解して注射剤として非経口的に皮下また
は筋肉内に15〜60mg／Kg／日投与する。また経口
剤として、抗生物質SB−72310を乳糖と混合して
カプセル剤とし、SB−72310として60〜400mg／
Kg／日投与する。また、本発明によつて得られるSB−72310は、
殺菌剤として用いることができる。たとえばSB
−72310を0.1〜1.0W/V%の濃度で蒸留水に溶解
した液剤、またはワセリン、ラノリンを基剤と
し、１ｇあたりSB−72310を15〜60mg含有する軟
膏剤として、上記の動物の手、足、眼、耳などの
殺菌、消毒に用いることができる。また、SB−72310は新しい医薬品の合成中間体
としても極めて有望な化合物である。以上の諸性質を有する抗生物質SB−72310を、
既知抗生物質と比較してみると、まず水溶性酸性
物質でＳを含有する抗生物質としては、ペニシリ
ン類、セフアロスポリン類があげられるが、本品
は紫外部吸収を示さないことからセフアロスポリ
ン類とは異なり、また本品の核磁気共鳴ペクトル
でＯ−メチルのシグナルが認められることおよ
び、酸加水分解によつてグルタミン酸が検出され
ることから、天然に得られているペニシリン類、
セフアロスポリン類とは一致しないことが明らか
である。また、シユードモナス属細菌によつて産生され
る抗生物質としては数多くのものが知られている
が、水溶性酸性物質でＳを含有する抗細菌性抗生
物質は全く知られていない。またシユードモナス
属細菌以外の微生物の産生する既知抗生物質のい
ずれとも物理化学的および生物学的性状を異にし
ている。したがつて本抗生物質は新規化合物であ
ると判断される。次に実施例をもつてさらに詳細に本発明の内容
を説明するが、これによつて本発明が限定される
ものではない。パーセントは、特にことわりのな
いかぎり重量／容量％を示す。実施例１栄養寒天斜面上に生育させたシユードモナス・
メソアシドフイラSB−72310（FERM−Ｐ
No.4653；IFO 13884；ATCC−31433）の菌株
を、グルコース１％、ポリペプトン（大五栄養化
学社製）0.5％、肉エキス0.5％、食塩0.5％（PH
7.0）からなる培地500mlを含む２容坂口フラス
コ２本に接種して、28℃で48時間往復振盪培養し
その培養物を種菌とする。次に、シユークロース1.5％、酵母エキス0.3
％、硫酸アンモニウム0.2％、リン酸第１カリウ
ム0.6％、リン酸第２カリウム0.3％、硫酸マグネ
シウム0.05％、食塩0.05％からなる培地120を
200容ステンレス製発酵槽に入れ、120℃で20分
間蒸気滅菌したのち、前記種菌を接種した。つい
で温度28℃、通気量120／分、撹拌回転数180r.
p.m.の条件下で78時間培養した。この培養物を
シヤープレス遠心分離機にかけ、菌体を分離し、
上清液110をえた。PH4.2に調整したのち活性炭
（クロマト用「白サギ」武田薬品工業製）15を
充てんしたカラムに通し活性物質を吸着させ水45
で洗滌後、50V/V%アセトン水45で溶出し
た。溶出液を10宛分画し、コマモナス・テリゲ
ナIFO 12685を被検菌として有効区分をしらべ、
フラクシヨンNo.2〜３を集めて水20を加えた
後、ダウエツクス−１（Cl）（米国ダウ・アン
ド・ケミカル社製）10を詰めたカラムに通し
た。水25で洗滌後、５％食塩水50で溶出し
た。有効区分を集めPH4.0に調整後、再び活性炭
カラム（８）に通し、水24で洗滌後20V/V%
メタノール水で溶出を行つた。有効区分を50mlま
で減圧濃縮した後、アセトン200mlを加え、析出
する沈でんを取、アセトン50ml、エーテル100
mlで洗滌後、減圧乾燥すると粗物質12ｇが得られ
た。ここに得られた粗物質10ｇをＭ／100リン酸緩
衝液（PH6.6）500mlに溶解した後、同緩衝液で緩
衝化されたDEAE Sephadex Ａ−25（スエーデ
ン、フアルマシア社製造）カラム200mlに通過さ
せ吸着せしめた。同緩衝液400mlでカラムを洗滌
後、0.5％食塩を添加した同緩衝液で溶出を行つ
た。有効フラクシヨンを集め、Ｎ−塩酸を添加し
て液性をPH3.2に調整した後活性炭カラム60mlに
通過させた。同カラムを水200ml、20V/V%メタ
ノール水100mlで洗滌した後、50V/V%アセトン
水で溶出を行い、有効フラクシヨンを集めて減圧
下に濃縮した後、メタノール５mlを加えて溶解
し、アセトン100mlを加え冷所に放置した。析出
した沈澱を取し、エーテルで洗滌後、五酸化リ
ン上で減圧下、40℃、６時間乾燥すると、3.8ｇ
の粉末が得られた。その赤外線吸収スペクトルを
第１図に示す。元素分析値Ｃ 34.40、Ｈ 5.56、Ｎ 13.30、Ｓ 7.56％実施例２実施例１で得られたSB−72310遊離体2.0ｇを
水45mlに溶解後、冷却しながら−水酸化ナトリウ
ム約4.5mlを加えた後、PHを測定しながら注意し
てＮ−水酸化ナトリウムを加えPH6.5に調整した
後、凍結乾燥を行ない白色粉末SB−72310・モノ
ナトリウム塩2.1ｇが得られた。本品を40℃６時
間減圧乾燥したものの赤外線吸収スペクトルは第
２図に示される。また元素分析値はＣ 31.75、
Ｈ 5.19、Ｎ 12.68、Ｓ 7.16、Na 5.01％であ
つた。実施例３栄養寒天斜面上に生育させたシユードモナス・
メソアシドフイラSB−72310FERM−Ｐ
No.4653；IFO 13884；ATCC−31433）の菌体を
グリセリン３％、グルコース0.1％、ポリペプト
ン（大五栄養化学社製）0.5％、肉エキス0.5％、
食塩0.5％（PH6.5）からなる培地40mlを200ml三
角フラスコに接種して28℃で48時間、回転式振盪
培養機上で培養したものを種菌とする。次に種菌１mlを200ml三角フラスコ内の種々の
硫黄化合物を前述の培地40mlに移植して28℃で96
時間回転振盪培養したところ、第３表に示すよう
にSB−72310の生産量の増大が認められた。

【表】【図面の簡単な説明】

第１図は、抗生物質SB−72310の赤外線吸収ス
ペクトル（KBr法）を、第２図は、抗生物質SB
−72310・ナトリウム塩の赤外線吸収スペクトル
（KBr法）を、それぞれ示す。

Claims

【特許請求の範囲】１次の物理化学的性状を有する抗生物質SB−
72310およびその塩 (1) 融点：110℃以上である。 (2) 外観：白色粉末 (3) 元素分析値：（％）Ｃ 34.40±0.5 Ｈ 5.50±0.5 Ｎ 13.45±0.5 Ｏ 38.90±1.0 Ｓ 7.75±0.5 （40℃、６時間五酸化リン上で減圧乾燥したも
の。） (4) 分子量：400±20（滴定法による。） (5) 比旋光度：〔α〕^２３ _Ｄ＋0.5゜±５゜（Ｃ＝
0.93、H₂O） (6) 紫外線吸収スペクトル：210nｍ以上に特異
な吸収を示さない。 (7) 赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム錠によ
る吸収スペクトルの主な吸収（波数）は次のと
おりである： 1770、1650、1530、1240、1043。 (8) 溶解性：石油エーテル、ヘキサン、ジエチル
エーテル、ベンゼン、酢酸エチル、クロロホル
ムに不溶。エタノール、ピリジン、アセトンに
難溶。メタノール、ジメチルスルホキシドに可
溶。水に易溶。 (9) 呈色反応：ニンヒドリン、過マンガン酸カリ
ウム試薬に陽性。塩化第二鉄−フエリシアン化
カリウム試薬、坂口反応、モーリツシユ試薬に
陰性。エールリツヒ試薬に擬陽性。 (10) 塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質。２シユードモナス属に属する抗生物質SB−
72310生産菌を培地に培養し、培養物中に抗生物
質SB−72310を生成蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とする抗生物質SB−72310の製造法。３培地中にシユードモナス属に属する抗生物質
SB−72310生産菌の資化しうる硫黄化合物を添加
して培養する特許請求の範囲第２項記載の方法。４硫黄化合物が硫酸アンモニウム、亜硫酸アン
モニウム、チオ硫酸アンモニウム、システイン、
シスチン、Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸、
ヒポタウリンまたはグルタチオンである特許請求
の範囲第３項記載の方法。