JPS588089A - 抗菌性増強物質ｆ２およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗菌性増強物質Ｆ２シよびその塩ならび
Ｋその製造法に関する。

本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
の微生物を土壊よ）分離し、その産生ずる抗生物質を分
離探索し九ところ、ある種の微生物が新規な抗菌性増強
物質を産生ずること、該微生物がＶニードモナス属に属
すること、該微生物を適宜Ｏ培地に培養するととＫよっ
てグラム陰性細１１Ｋｊｔするβ−フタ！ム抗生物質の
抗１作用を増強する物質を培地中に蓄積しうろことなど
を知シ、とれを単離し、その物理化学的および生物学的
諸性質から、！！＃抗菌性増強物質が新規な活性物質で
あることを確め、これを抗菌性増強物質Ｔ２と称するこ
とにした。

本発明者らは、これらＯ知見に基づいてさらに研究を重
ね九結果、本発明を兜成し丸。

なお、本願では抗１性増強物質Ｆ２を単に「Ｆ２」と称
することもある。

本発明は、（１）抗菌性増強物質Ｆ２Ｔｈよびその塩、
（２）Ｖニードモナス属に属する抗菌性増強物質Ｆ２生
産菌を培地に培養し、培養物中に抗１性増強物質ｒ２を
生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする杭１
性増強物質Ｆ２４Ｄ製造法である。

本発明で使用される抗１性増強物質ｒ２生産曹としては
、シュード叱ナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｍｓ）属に属し、
抗菌性増強物質ｒ２を産生する能力を有するものであれ
ば如何なる細菌でもよい、たとえば、本発明者らＫよっ
て分離、命名されえＶ：Ｌ−ド壁ナス・アＶドフイフ（
Ｐ暴・ｕｄｏｍｏｎａａ　ａｏｉｄｏｐｈｉｌａ）Ｇ−
６３０２株〔工業技術院微生物工業技術研究所にＦＩＲ
Ｍ−Ｐ４４３４４として、財団法人発酵研究所にＩｉ’
０　１３７７４として、ジ・アメ！カン・タイプ・力！
チャー・プレクｓ／Ｗン（Ｔｈｅムｍｅｒｉｏａｎ　Ｔ
ｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒ＠Ｃｏ１１ｅｏｔｉｏｎ　ｔＬ　
ａム）にム〒ＣＣ３１３６３としてそれぞれ寄託）Ｔｈ
ヨヒ＄’ニード毫ナス・メソアＶドフイフ（Ｐｇｅｕｄ
ｏｍｏｎａａ　　ｍａ＠ｓｏａｏｉｄｏｐｈｉ１ｍ　　
　）８　　Ｂ　−７２８１０株〔工業技術院微生物工業
研究所にＦ）ｌ：１１Ｍ−Ｐ轟４６５３として、財団法
人発酵研究所ＫＩ。

ＦＯ１３８８４として、ジ・アメリカン・タイプ・力μ
チャー・コレクｙａンにム丁ＣＣ＄１４３３としてそれ
ぞれ寄託〕があげられる。

本発明に用いられるＶニードそナス属細菌は一般にその
性状が変化し中すく、たとえば紫外線。

ｘ！１．化学薬品などを用いる人工変異手段で賽易に変
異しうるものであ〉、どの様なｆ異味であっても本発明
Ｏ屑象とするＦ２Ｃ）生産能を有するものはすべて本発
明に使用することができる。

零１の培養に際しては、炭素源としては、たとエハク〜
コース、Ｖユータ賛−ス、マ〜ドース。

廃糖蜜、ダリセａ　−＊　、油脂類（例、大豆油、オリ
ーブ油など）、有機酸類（例、クエン酸、］ハク酸、グ
〜コン酸など）など蒙が資化しうるものが適宜用いられ
る。ｉＩ素源としては、たとえば大豆粉、棉寮粉、コー
ン・ステイープ・リカー、乾燥酵母、＃母エキス、肉エ
キス、ペプトン、尿素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、塩化アンそニラふ、リン酸アンモニウムなど０
１１１１１１１化舎物や無機窒素化金物が利用で色る。

また、無機塩としては、丸とえば環化ナトリクム、塩化
禽プウム１脚酸力Ｈｐウム、硫酸マグネＶウム、リン酸
−力−ウふ、リン酸二ナトリウムなどの通常ｍｈｏ培養
に必要な無４１１塩類が単独もしくは適宜、組合せて使
用される。さらに贅化しうる硫黄化合物たとえば硫酸ナ
トリウム、チオ硫酸ナトリウムなどの無機硫黄化金物、
Ｖスチン、Ｖスティン。

メチオニンなどの有機硫黄化金物を添加すると目的物の
生成量が増大することがＩ＋出され丸。特にＶスティン
およびチオ硫酸ナトリウムは好オしい。

硫黄化合物の培地中の濃度ａ、ｏ、ｏｔ〜１．ＯＷ／マ
％さらに好ましぐは、０．０２〜０．５１７マ％である
。＠黄化合物を培地中に添加すると、Ｆ２０生戒量が増
大し、工業上きわめて有利である。

また、硫酸第１鉄、ｆＲ鹸錫などの重金属類、ビタミン
脹、ビオチンなどのビタミン類なども必要に応じて添加
される。さらＫＶリコーンオイμヤＩリア、／＆／午Ｖ
ングリコーμエーテ声などの消泡剤や界面活性剤を培地
に添加してもよい、その他曹の発育を助け、Ｆ２の生産
を促進するような有機物中無機物を適宜に添加してもよ
い。

培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法と同様に
行なえばよく、固体培養でも液体培養で屯よい、液体培
養Ｏ場合は静置培豐、攪拌培養。

擾盪培費０通気培養などいずれを実施してもよいが、と
くに通気攪拌培養が好ましい。又培養温度はおよそ１５
℃〜３５℃の範囲が好ましく、培地ｏＦＭは約４〜８０
１［囲でおよそ８時間〜１６８時間、好ましくは２４時
聞〜１４４時間培養する。

生成し九Ｆ２は主として培養ろ液中に存在するので、培
養物を遠心分離あるいは一過によって上清液と一体とに
分離し、その上清液から精製するのが有利である。しか
し、培養物から、直接に精−すること−可能である。

本物質の力価側室は、丸とえは工Ｖエリキア・コリＩＰ
Ｏ１２７３４株を試験１として、竜フメノキＶムを６．
０５μｇ／ｄ含有する肉汁寒天を用いるカップ法、ペー
パ、−ディスク法によ〉実施で勤る。

本杭１性増強物質ｒ２を採取するには、微生物が生産す
る代謝産物を採取するＯＫ通通常−られる手段を適宜利
用することができる。たとえば遠心分離によって一体を
除去し丸のち、そのＰ液から一般に有効物質を分離、採
取、精製する方法を用いる。すなわち適当な溶媒に財す
る溶解性および溶解度の差、溶液からの析出法および析
出適度の差、種々Ｏ吸着属和力Ｏ差、イオン交換体によ
るイオン交換り田マトグフフイーあるいは減圧濃縮、凍
結乾燥、結晶化、再結晶、乾燥など０手段が単独あるい
は任意の順序に！１合わせて、または反復して用い、利
用される。

その１例を示すと次のとお拳である。すなわち培養終了
後培養液を一過し、得られるｒ液を活性度カフムに通過
させ、吸着されるＦ２を親水性有機溶媒系を用いて溶出
させる。親水性有機ｓｇ系として用いられるもＯＫは、
アセトン、メチμエチｐケトン、メチ〜イソブチμケＦ
ンなどＯ低級ケトン類、メタノ−１４／、エタノ−〜、
イソデ賞バノー〃、プロパノー！、ブタノ−〜等の低級
アμコーμ類の単独を九は混合１＃織と水とＯ温合溶液
があげられる。ｔたイオン交換樹脂としては当該物質が
酸性物質である丸め、アニオン交換樹脂〔アン／＜−フ
ィトＩＲムー４００，４０２．米国。

ローム・アンド・ハウス社製造；ダウエックス−１米国
〆つ・アンド・ケミカル社製造；メイヤイオンＳム−２
１ム　日本、三菱化成（日本）製造〕等ＯＣ１ｇ１１等
が有利に利用出来る。吸着し九当該物質の溶出には食塩
等の水溶液を用い有効物質を溶出する。溶出液Ｏ脱塩に
は再び活性炭のカヲムクレマトグフフイーを行う０次に
有効物質を溶出しえ溶出液を濃縮した後、アセトン等を
加えて析出する沈澱をＰ取しえのち、アセトン、エーテ
ル等で洗浄後乾燥すると淡褐色の粉末が得られる。得ら
れえ粉末をさらに精製するＫは、ｑム鵞セファデツタス
（スエーデン　ファμマＶア社製）の倉フムク騨マドグ
ツフィーが有利に利用出来る。すなわち、ｑＡＫセファ
デックスム−２５をリン酸緩衝液（−６，＠）で洗浄し
丸後、さＩＫ得られえ粉末を水に溶解した液を通過、吸
着せしめ、同緩衝液で洗浄後、０，５Ｗ／マＸ食填を含
ませ九緩衝液で洗浄ｌｉｔ、　Ｏ！％食塩を含ませえ緩
衝液で溶出する。得られ九有効区分をｐＨｓ、ｏＫＫ整
後、再び活性択カフ五に通し、水洗、２０マ／マ％メタ
ノーｙ水で洗浄する。ついで含水アセトンで溶出し、有
効区分を減圧濃縮後、アセトンを加えるとＦ２が得られ
る。を九本品は金属塩およびアンモニウム塩を形成する
。金属塩としては、九とえばすＦリウム塩、カリウム塩
、リチウム填亀どがあげられる。

実施例／で得られ九ｒ２モノナトリウム填の物理化学的
性質はつぎのとお〉である。

１ａｌｋ点：２１６〜２１！Ｉｔ（分解）Ｌ　物質の色
、形状：無色結晶性粉末 １　元素分析：５酸化リン上で４０℃、＠時開減圧乾燥
したもの。（Ｘ） Ｃ３２，１１ Ｈ５，３Ｂ 頁　　　　７．２７ ｓ　　　ｔｏ、ｓｙ 冨ａ　　　　　３．＠ ４、分子量；モノナト亨ウム填として計算される分子量
６０５．推定分子式（上記の実測値よ））　０１１□６
”３？’４４ＭＢ０．４７’−□６８１Ｍ”５．紫外部
吸収スペクトｆｉ／： 末端吸収のみ（２１０ｎｍ以上に特異な吸収を示さない
、） ６、赤外部吸収スペクトＩＩ＆！＝ 臭化カリウム錠による吸収スペクトμを第１図に示す。

Ｔ、比旋光度： 〔直）２Ｄ６＋６．８５（Ｏ婁０．３８　、　ｍｌ−Ｃ
Ｈ！ＧＯＯＩＩ）（１）２．６　−７−　７２　　（ａ
　　−０，５４４、ｐＨＴすＪｌｉ＊＜）＆　被磁気共
鳴スペクトμ（シメチμス〜フオキｖｙ中１００ＭＨｚ
　）　８１．８４Ｋ　−ＣＨ３ｔ）ｓｙグナルを認める
。

１　溶媒に賞する溶解性： 石油エーテル、ヘキサン、ジエチルエーテル、ベンゼン
、＃酸エチ〃およびりｐロホＮムには不溶。工！ノー〃
、ビプジン、アセトンには離溶、メタノール、ジメチル
スルフオキシドには可溶、水には鳥溶。

１１　　呈色反応ニ ゲレイグーリーバーツタ反応、過マンプン酸カリウム試
薬には陽性。ニンヒドリン試薬、坂口反応、モーリッシ
ュ試薬には陰性。

１１、安定性： ｐＨ３〜ｐ１（９の水溶液は、６０℃、１０分加熱で安
定。

１２、塩基性、中性、酸性の区別：酸性物質実施例二で
得られたＴ２ジナトリウ五填の物理化学的性質はつぎの
とお）である。

１、融点：明確な融点を示さない。

２、物質の色、形状二台色糖本 １　元素分析：５酸化ずン上４０℃、６時聞減圧乾燥し
丸。（ヅ・） Ｃ３１，３５ ！　　　　　５．２４ Ｎ　　　　　６．７８ ８　　　　　１０．３８ １１ａ　　　　　　７．１ ４、分子量：分子中に＆を２ｍ０１含有するとすれば分
子量６４７．６゜ ５　案外部吸収スペクト〃：末端吸収のみ６、赤外部吸
収スペクト／Ｌ／： 夷化力すウ五綻による吸収スペクトｙを第２図に示す。

１、比旋光度二（ａ）Ｄ＋５．５°　（ｃ−０，５６゜
Ｍ−０Ｍ３ＣＯＯＨ） ８、溶媒に対する溶解性： 石油エーデ／Ｌ／、ヘキサン、ジエチルエーテル、ベン
ゼン、＃酸エチ〜、クロロホルムおよびアセトンに不溶
。メタノール、エタノールおよびピリジンには難溶。ジ
メチルスルフオキシドには可溶。水には易溶。

９、呈色反応ニ ゲレイグーリーバツク反応、過マンガン酸カリウム試薬
には陽性。ニンヒドリン試薬、坂口反応、モーリッシュ
試薬には陰性。

１０、安定性ニ ー１３〜ｐＨ９の水溶液は６０℃、１０分加熱で安定。

実施例３で得られた　７ｇ：；＝車端性質はつぎのとお
シである。

１、融点：２０Ｔ〜２０８℃（分解） ２、物質の色、形状：無色結晶性粉末 ３、元素分析：５酸化リン上で４０℃、６時間減圧乾燥
したもの。（％） Ｃ３２，５９ Ｅｌ　　　　　　　５．２２ １　　　　６．９３ ８　　　１０．１４ Ｍａ　　　　　　３．７ ４、分子量：モノナトリウム壜として計算される分子量
６２１．６゜推定分子式（上記の実測値より　）　Ｃ１
＆／％−１０Ｈ２ＯＭ−４４Ｍ３０１４”−１６’％　
”Ｉ”５、　　Ｘ外部吸収スペクトＡ／： 末端吸収のみ（２１０ｎｍ＋以上に特異な吸収を示さな
い、） ６、赤外部吸収スペクトμ； 臭化カリウム錠による吸収スペクト〜を第３図に示す。

γ、比旋光度：〔α）％Ｆ　＋６．０°　（ｃ　ｗ０１
１７．　Ｎ　−ｃｍ、ｃｏａｍ　　） ８．核磁気共鳴スペクト／％／（ジメチルスルフオキシ
ド中１００ＭＨｚ）δ１．８４に一〇ものシグナルを認
める。

９、溶媒に対する溶解性： 石油エーテμ、ヘキサン、ｙエチルエーテル、ベンイン
、酢酸エチμおよびクロロホルムには不溶。エタノ−μ
、ピリジン、アセトンには難溶。メタノ−〜、ジメチμ
スＰ７オキＶドには可溶。水には易溶。

１Ｇ、呈色反応ニ ゲレイグー！−バック反応、過マンガン酸カプウム試薬
には陽性、ニンｔドリン試薬、坂ロ反応、モーリツＶユ
試薬には陰性。

＄１．安定性： ｐＨ３〜ｐＨｓの水溶液は、６０℃、１０分加熱で安定
。

１２、塩基性、中性、酸性の区別：酸性物質実施例グで
得られたＦ２ジナトリウム塩Ｏ物理化学的性質はつぎゃ
とおりである。

１、融点：明確な融点を示さない。

１　物質の色、形状：臼色給未１．・。

３、元素分析：５酸化リン上４０℃、６時間減圧乾燥し
九。　（≠） Ｃ３０，８３ Ｈ５，３５ Ｍ　　　　　　　６．９１ ８　　　　　　９．６１１ Ｎａ　　　　　　　７−３ １　４、　　分子量二分子中Ｎ＆を２　ｍｏｌ含有する
とすれば分子量６２９．９゜ ５、　　＠外部吸収スペタ）ｆｉ／：末端吸収０み６、
赤外部吸収スベク）Ａ／： 臭化カリウム錠による吸収スペクトルを第４１　　図に
示す。

７、比旋光度、〔α〕ゎ＋６．１’　　（０−０，３９
゜ａ−ｃｍ、ｃｏｏｎ　） Ｂ、溶媒に対する溶解性： 石油エーテル、へ＊をン、ジェチμエーテ々１　　、ベ
ンゼン、酢酸エチμ、クロロホ〜ムお・よびア（トンに
不溶。メタノ−〜、エタノーμおよびピリジンには離溶
。ジメチルスルフオキシドには可溶。水には易溶。

９、呈色反応ニ ゲレイグーリーバツク反応、過マンガン酸カリクム試薬
には陽性。ニンヒドリン試薬、坂口反応、モーリツＶユ
試薬には陰性。

ＩＱ、　　安定性： ｐＨ３〜ｐＨｓの水溶液は６０℃、１０分加熱で安定。

次に抗菌性増強物質Ｆ２の生物学的性状について述べる
。ｉ’２は半蒙１濃度のセフメッキレムやメＶ９ナムの
共存下に工Ｖエリキア・コリに対して抗ＩＩ作用を示す
ことが第１表および第２表から明らかである。

第１表：実施例／で得九ｒ２によるセフメッキレムおよ
びメＶ９す＾の抗５ｒａｓ増強作用（試験Ｈ：工Ｖエリ
キア・コリ　ＩＦＯ１２７３４）第　　１　　表 ＊肉汁寒天培地に記載通シの薬剤を含ませ、８鰭径のベ
ーパーディスクを用いて検定。

本中８■径のベーパーディスクに試料溶液２５μｇを浸
みこませて寒天上に置いた。

第２表：実施例３で得九ｒ２によるセフメッキレムおよ
びメνリナムの抗＊護Ｓ増強作用（試験＠：エシエリキ
ア・コリ　エｖｏ　　１２７３４）串、＄Ｉｉいずれも
第１表と同意義を示す。

１［Ｋプロテウス・ミフビリス　ＡＴＣＣ２１１００Ｋ
）ｔするセフメツキシムおよびメＶリナムの抗Ｉｌ１作
用に対して−ｒ２は抗菌作用を増強させる作用を示すこ
とが第３表および第４表から明らかである。

第３表：実施例／で得九ｙ２によるセフメツキシムおよ
びメＶ９すふの抗菌ａｌｌ増強作用０（試験菌ニブロチ
ウス・ミフビリス　ＡＴＣ０２１１００） 第３表 本試験菌、共存薬剤濃度以外は第１表と同一条件で試験
。

第４表：実施例３で得たＦ２によるセフメツキシムおよ
びメシリナムの抗菌性用増強作用８（試験菌ニブロチウ
ス・ミフビリス　ムＴＣＣ２１１００） 第４表 本試験１、共存薬剤濃度以外は第１表と同一条件で試験
。

１１えＦ２はエシェリキア・コリの増殖に屑して七ファ
レキＶンやセフメツキシムとＡｌ１１して強い生育阻害
作用を示す。第５表および第６表にはきμシーのセファ
レキＶンシよび１μυ−のセフメツキシム共存下にＦ２
を働らかせたときのエシェリキア・コ―の増殖度を示す
。

第５表：Ｆ２（実施例／で得たもの）と−ノアレキＶン
を九はセフメツキシムの共存下のエシェリキア・コ９Ｉ
ＦＯ１２７３４の生育阻害作用第５表 蒙塘１２％（Ｗ／マ）を食有する！ム１培地（ディ７コ
社製アンチビオチタメＶウム轟Ｓ、：Ｌ、１５％、ディ
７コ社製酵母エキス０．５％）ｓ＊６ｃ水、５０μｇ／
ｓＪセファｖＩｔｓｙン１１えは１０μｇ／ｄセフメッ
キＶム１ｄおよび！ム１培地で財数増殖期初期まで増殖
させ要項養液１ｄを接種し、３７℃で２時間振盪培養し
えＯち、培養液の吸光度をＶマＸ・ボｙユロムａｇｏス
ベタＦロニツク２０比色計を用いてｌｉｏｏｎｍで測定
しえ。

第６表：Ｆ２（！Ｊ！施例まで得え一〇）とセファレキ
Ｖンま九はセフメツ年Ｓ’ＡＯ共存下Ｏ工Ｖエリキア・
コリＩＦＯ１２Ｌ１４０生育阻害作用０第６表 中篇５表と同一の方法による。

第５表および第６表から明らかなようＫｒ２はセファレ
キシンおよびセフメッキリム共存下に工Ｖエリキア・コ
リの増殖を阻−し、吸光度の低下をひ龜おこしている。

さらに１培養液を位相差顛黴鏡を用いて観察すると、ｒ
２無添加時にはセフアレＩＦンを九は（フメノキＶムの
影響を受けて細胞は非常に畏くなっているが、ｒ２を添
加すると添加濃度に応じて伸畏比が抑えられると同時に
１部分的′ｔｋｌ＃大がおこり、を九ｌｌ−が進行し丸
。

本発明方法によって得られる抗菌性増強物質ｒ２は工Ｖ
エヅキア・ブリ、プロプウス・ミフビリスの感染マウス
に、セフメツ年Ｖふヤセファレ等Ｖンと共働して顕著な
抗菌作用を示し九。したがって、Ｔ２はこれら抗生物質
と併用することＫよシ哺乳動物（例、マウス、フット、
イヌ、人）および家禽（例、ニワトリ、アとｌｖ）の上
記ｓｉ＋ｉｉの感染症の治療に用いることができる。

抗菌性増強物質ｒ２を丸とえば大−ｔｉｕｃ染症Ｏ治療
に用いるには、友とえばセフメッキＶム０゜５〜２．０
ｇと）’２０．５〜１０ｇとを生理的食塩水１０〜１０
０ｍＫＪＩ解して、点滴静脈注射液Ｋｉぜて成人に賞し
て１日に２〜Ｓ回投与する。

さらに、ｒ２は新しい医薬品の金成中関体として−極め
て有望な化合物である。

ｙ２をマウスに静脈投与し九ときのＬＤ、。は〉Ｉｇ／
ｋｇであつ九。

以上の諸性質を有する抗ＩＩｗ用増強物質ｒ２を、既知
抗生物質と比較してみると、まず水溶性酸性物質でＳを
含有する抗生物質としては、ベニシラン類、竜ファロス
ボ讐ン類があげられるが、水晶は赤外部吸収スペクトル
において１７２０Ｃ１ｌ−１以上Ｋｑ！収を示さず、オ
友通常の方法では抗１性を示さないことから、これらと
は異なる。

また、Ｖニードモナス属細ｉ１１によって産生される抗
生物質としては数多くのものが知られているが、水溶性
酸性物質で８を含有する抗菌性増強物質は全く知られて
いない、またＶニードモナス属細１以外の微生物の産生
ずる既知抗生物質のいずれとも物理化学的および生物学
的性状を異にしている。し友がって本願物質は新規化合
物であると判断される。

次に実施例をもってさらに詳細に本発明の詳細な説明す
るが、これＫよって本発明が限定されるものではない。

パーセントは、特にことわ）のないかｒｂ重量／容量％
を示す。

実施例１ 栄養寒天斜面上に生育させたシュードモナス・アＶドフ
イフ　Ｇ−６３０２株（ＦＩＲＭ−ＰＡ４３４４１１Ｆ
Ｏ１３７Ｔ４；ムＴＣＣ−，１１３６３）の１体を、ダ
ルコース１％、ポリペプトン（大五栄養化学社製）０．
５％、肉エキス０゜５％９食塩０．５％（ｐＨ７，０）
からなる培地５００ｍを含む２１容坂ロプツスコ２本に
接種して、２８℃で４８時間往復振４Ｉｌ壕餐しその培
養物を種菌とする。

次にグリセロ−μ３％、グ〜コース０．１％。

ポリベグトン０．５％、肉エキス０．５％、　）ＩａＣ
ｌｏ、５％、Ｖスティン０．１％からなる培地１２０ｊ
を２００１賽ステンレス製発酵檀に入れ、その液性を３
０％水酸化す）！ラム溶液でｐＨＴ、　Ｑに調製し、１
２０℃で２０分ｗ；ｍ気滅−し九のち、前記ｉｍ＊を接
種し丸。つ−で温度２８℃１通気量１２・１７分、攪拌
回転数１８　Ｏｒ、４亀の条件下で７ａ時間培養し丸。

仁の培養物奢りヤーデレス遠心分離機Ｋかけ、１体を分
離し、上清液１１Ｑｌをええ、ｐｌ（４，２ＫｍＩｌＩ
Ｌ九のち活性炭（タロマＦ用　内サギ　式日薬品工業ｍ
）１５１を充てんし九カフ五に通し活性物質を吸着させ
水４５１で洗滌後５０Ｙ／ＹＸア竜トン水４５１で溶出
し丸。溶出液を１０１宛分圃し、工Ｖエリキア・コリＩ
ＦＯ１２７３４を被検菌としてセフメッキ＄／ＡＱ、０
５μｇ／ｍを含有する肉汁寒天で有効区分をしらべ、フ
フクＶヨン４２〜３を集めて水２０１を加え死後、ダウ
エツタス−１（Ｃ１）　（米国ダウ・アンド・ケミカル
工業製造）１０１を詰め九★フ本に通した。水２５１！
で洗滌後、５％食樵水５０Ｆで溶出し丸、有効区分を集
めｐＨ４，ＯＫ調整後、再び活性炭カラム（８１）に通
し、水２４ｊで洗ｌＩ後２０Ｖ／マ％メタノール水で溶
出を行った。有効区分を５０ｓ／まで減圧濃縮し先後、
アセトン２００ｄを加え、析出する沈でんを沖取、アセ
トン５０Ｉｋｔ、エーテル１００ｄで洗滌後、減圧乾燥
す石と粗物質２５ｇが得られた。

ここに得られた粗物質Ｉ　Ｑ　ｇｆｒＭ／２５９ン酸緩
衝液（ＰＨ６，６）５００ｊＫｉｌｌ解した後、同緩衝
液で緩衝化され九ｑムＥ　　５ｅｐｈａｄ＠ｘム−２５
（スエーデン、ファμマＶア社製造）カラム２００ｍｇ
に通過させ吸着せしめた。同緩衝液４００ばでカラムを
洗滌し、０．５％食塩を添加した同緩衝液４００ｍ（で
カラムを洗滌後、１％食塩を添加し走向緩衝液で溶出を
打つ丸、有効フックＶＢンを集め、Ｉ−塩酸を添加して
液性を−３，０Ｘｍｌ整し九袂活性鍛カフ五６０ｓｔに
通過させ丸。同カフＡを水２００ｓＪ、５０Ｖ／ｖＸ）
ｌ／−＊水１０Ｑａｇで洗滌した後、８Ｑマ／マ％イソ
ブタノーμ水で溶出を行い、有効フッタＶ！ンを集めて
−を５．５に調整したのち減圧下に濃縮し先後、メタノ
−＊５０ＭＩｔを加えて溶解し濾過後、冷所に放置し丸
。析出しえ結晶をｐ取し、エーテルで洗滌後、５酸化リ
ン上で減圧下、４０℃、６時間乾燥し、２．８ｇのＦ２
・モノナト賛つ五填の結晶を得え。その赤外部啜収スペ
タトｐを１１１図に示す。

元素分析値　Ｃ３２，１＋、　Ｈ５，３８，夏７．２７
，８１０、６？、　Ｉａ　３．１１％ 実施例λ 実施例／で得られ九ｒ２モノナトリウム樵３゜Ｏｇを水
９０ｓ（Ｋ１１解後、冷却しなから夏−水酸化ナトリウ
ム４．５ｍｔを加え先後、−を測定しながら注意してＮ
−水酸化ナトリウムを加え−Ｔ。

ＯＫ調整し死後、凍結乾燥を行ない白色粉末のＦ２・ジ
ナトリウム塩３．１ｇが得られ丸。氷晶を４０℃６時間
減圧乾燥したものの赤外部スベクトフふは第２図に示さ
れる。また元素分析値はＣ３１，３５，Ｈ５，２４，Ｉ
　＠、　１８．８１０．３８．１ｒａ５、ＩＸであった
。

実施例３ 栄養寒天斜面上に生育させたシュード（ナス・メソアシ
ドフイ’Ｆ　　８Ｂ−７２３１０（ｒＥＲＭ−ＦＡ４６
５３＋ＩＦＯ１３８８４ｓＡＴＣＣ−３１４３３）の菌
体を、グルコース１％、ボ書ペプトン（大工栄養化学社
製）０，５％、肉エキス０．５％２食塩０．５Ｘ（ｐＨ
７，Ｏ）からなる培地５００ｍを含む２１容坂ロフフス
コ２零に接種して、２８℃で４８時間往復振ｍ＠養しそ
の培養物を１１値とする。

次にグｌ竜ローｆｉ／３％、グルコースａ、ｔ％。

／９ペプトン０．５％、肉エキス０．５Ｘ、ｌＥａユ０
．５％、Ｖスティン０．１％からなる培地１２０ｇを２
００１容ステンレス製発酵槽に入れ、その液性を３０％
水酸化すｔリウム溶液にてｐＨｒ、　。

に調整し、１２０℃で２０分＠蒸気減値したのち、前記
ｌ１ｉＩ［を接種しえ。ついで温度２＠℃２通気量１２
０４／分、攪拌回転数１１１　Ｏｒ−ｐ−ｕの条件下で
Ｔ魯時閲培養し友。こ０＠費物をＶヤーデレス遠心分離
機にかけ、一体を分離し、上清液ＩＨＩＩをえ丸。ｐ！
４４．２に調整しえのち活性炭（クロマト用　白すギ　
成田薬品工業１１Ｍ）１５４を充てんし九カラムに通し
活性物質を吸着させ水４５１で洗１１１１５０Ｖ／Ｖ％
アセトン水４５ｇで溶出し友。溶出液を１０ｊ宛分画し
、工Ｖエリ等ア・スリＩＦＯ１２７３４を被検−として
セフメツキン五０．０５μｇ／ｍ　を含有する肉汁寒天
で有効区分をしらべ、フッタ５フ ２０ｊを加え死後、ダクエツタス−１　（Ｃ１）　（米
国　ダウ・アンド・ケミカル工業製造）１ａ１を詰めた
カラムに通し丸．水２５１で洗滌後、５％食塩水５０ｇ
で溶出し丸。有効区分を集め−（４。

０に調整後、再び活性度カラム（畠ｊ）に通し、水２４
１で洗滌後２０マ／マ％メタノーμ水で溶出を打つ友．
有効区分を５０ｍｔで減圧濃縮し丸後、アセト７２００
−を加え、析出する沈でんをｌ取、アセト７５０ｍ（、
エーテル１００ｄで洗滌後、減圧乾燥すると粗物質２１
ｇが得られ丸。

ここに得られた粗物質１０ｇをＭ／１０Ｇ　リン酸緩衝
液（Ｐ）１６．６）５００−に溶解した後、同緩衝液で
緩衝化され九ＱＡＥ　　Ｓｅ芦１ｄ・Ｘム−２５（スエ
ーデン、ファルマシア社ｌｌ造）カラム２００−に通過
させ吸着せしめた。同緩衝液４００ｄでオフ五を洗滌し
、０．５％食塩を添加し走間緩衝液４００ｄでカラムを
洗滌後１１食塩を添加し走間緩衝液で溶出を打つ九。有
効フックＶＭンを集め、頁−塩酸を添加して液性を…３
．０Ｋｉｌ整し先後活性関カフ五６０１１ｔに通過させ
丸。同カラ五を水２０Ｇ＃ｔ、８Ｖ／Ｖ％イソブタノ−
μ水で溶出を行い、有効７フタＶヨンを集めてｐＨ５゜
５に調整し丸のち減圧下に濃縮し先後、メタノ−μ５０
ａｇを加えて溶解し、ｌ過後冷所に放置した。

析出した結晶をｌ取し、エーテルで洗滌後、５酸化呼ン
上で減圧下、４０℃、６時間乾燥し、Ｆ２・モノナ）９
？Ｊ−填結轟１．５ｇを得友。その渉外部吸収スペクト
μを１１３図に示す。元素分析値Ｃ３２，５５１，Ｈ５
，２２，Ｍ　６−９３．　Ｓ　ｔｏ、　１４．Ｎａ３、
Ｔ（％）。

実施調音 実施例３で得られたＦ２−ｅノナトリウム撫１゜Ｏｇを
水３０ａ？に溶解後、冷却しなから璽−水酸化ナトリウ
ム約１．５ｄを加えた後、−を測定しながら注意してＮ
−水酸化ナトリウムを加え−１１、Ｏに調整し先後、凍
結乾燥を行ない白色粉末のｙ２ジナトリウム塩１．０５
ｇが得られ丸０本品を４０℃６時間減圧乾燥し丸ものの
赤外部スペクトツムは第４図に示される。壕九元素分析
値はＣ３０，８３，Ｈ５，３５，Ｉ　ＬＳＩ、　８９．
６Ｊｉ、　Ｍａ　ｒ。

３％であった。

【図面の簡単な説明】

ＪＩＮ図は実施例１で得たＦ２モノナトリウム塩、第２
図は実施例２で得＊Ｆ２シナ）Ｖラム塩、第３図は実施
例３で得九ｒ２モノナトリウム填および第４図は実施例
グで４７’、：Ｆ２＄７ナトリウム填の渉外部吸収スペ
クト〃をそれぞれ示す。 手　　続　　補　　正　　書　　　　　　　　　　　　
　賑昭和５６年テ月尾日 龜 特許庁長官殿 り事件の表示 昭和ｉ＃都１月γ日提出の特許ｌＮ（υ亀　補正をする
奢 事件とＯ関係　　特許出願人 住所　大阪市東区道修町１丁目ｍＷ番地名称　（ＳＳＳ
）式日薬品工業株式金社代表者　　小　　西　　新共衛 表代理人 住　所　　大阪市淀用区十三本町＄丁目１テ番＄ｉ号補
正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 補正の内容 ｔ！４１１１１１１１Ｋｓ　Ｉ買１１５行ノｒ　１．　
Ｉ　Ｊｔｒ　Ｙ−Ｉ　Ｊに補正する。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 〔１〕モノナトリウム填として次の物理化学的性状を有
   する抗１性増強物質ｒ２およびその填（１）外観：無色
   結晶性粉末 （２）元素分析値（Ｘ）： Ｃ３１，８１±１．　０ Ｈ５，３５±０．５ 頁　　　１．９＠±９．５ ８　１０．８１±１．０ １ｋ　　　３．８７±０．５ （３）紫外部吸収スベタ）／’：２１０ｎｍ以上に特異
   な吸収を示さない。 （４）赤外部吸収スベク）μ：臭化★リウ五錠による吸
   収スベタト〜の主′＆＠収（波数）は次のとを）で参る
   ： １６９０．１８Ｂ５．１５５５．　１３７５゜１２２０
   ．１０５０．　８２０（ｃｓ−１）（５）比旋光度：　
   （ａ）　Ｄ　＋ｌｉ°±２＠（ｍｌ−ＣＨ，（ＸＸＥ　
   ）（６）溶解性二石油エーテ！、ヘキ量ン、ジエチルエ
   ーテル１ベンゼン、酢酸エチμおよびタロロホμ五には
   不溶、エタノ−と、ビプジンおよびア竜トンにはＳ＊、
   メタノ−〜シよびジメチμスμフオキＶドには可溶、水
   には晶溶。 （７）　　塩基性、中性、酸性の区別：酸性物質（８）
   分子量＝５９４±ｒ７（ｑノナトリウム塩としてナトリ
   ウム含量より計算） （Ｓ）　　呈色反応；グレイグー９−バッタｘ応、ｎマ
   ンＩン酸カリウムＩＫ薬Ｋｌｌ性。二ン＊ｙ９ン賦薬、
   坂口反応、碌−チッＶ工試薬Ｋ１１ｋ性。 〔２〕Ｖニード毫ナス属に属する抗菌性増強物質ｒ２生
   産曹を培地に培養し、鳩養物中に抗菌性増強物質ｒ２を
   生成蓄積せしめ、仁れを採取することを特徴とする抗菌
   性増強物質Ｆ２の製造法。