JP2000053514A - レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質、これを用いた殺菌剤、水処理剤、スライム抑制剤、及びこれらの製造方法 - Google Patents
レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質、これを用いた殺菌剤、水処理剤、スライム抑制剤、及びこれらの製造方法Info
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- JP2000053514A JP2000053514A JP10223421A JP22342198A JP2000053514A JP 2000053514 A JP2000053514 A JP 2000053514A JP 10223421 A JP10223421 A JP 10223421A JP 22342198 A JP22342198 A JP 22342198A JP 2000053514 A JP2000053514 A JP 2000053514A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 レジオネラ属細菌に対する高い殺菌性と、低
腐食性、安全性を兼ね備えた殺菌剤、水処理剤、スライ
ム抑制剤及びこれらの製造方法を提供する。 【解決手段】 レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質
である。レジオネラ属細菌を吸着材を添加した培地で培
養し、レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質を吸着材
に吸着させ、吸着材に吸着せしめた殺菌性物質を溶出
し、回収することにより製造する。
腐食性、安全性を兼ね備えた殺菌剤、水処理剤、スライ
ム抑制剤及びこれらの製造方法を提供する。 【解決手段】 レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質
である。レジオネラ属細菌を吸着材を添加した培地で培
養し、レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質を吸着材
に吸着させ、吸着材に吸着せしめた殺菌性物質を溶出
し、回収することにより製造する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】 本発明は、レジオネラ症や
冷却水系統のスライム障害の原因となるレジオネラ属細
菌に対し、殺菌性を有する物質及びその製造方法に関す
る。
冷却水系統のスライム障害の原因となるレジオネラ属細
菌に対し、殺菌性を有する物質及びその製造方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】 レジオネラ症（在郷軍人病）は、肺炎
類似の症状を引き起こす細菌性疾患であり、冷却塔冷却
水や空調設備を媒介として集団発生する点、適切な治療
を行わない場合の致命率が１５〜２５％にも及ぶ点にお
いて重大な社会問題となっている。
類似の症状を引き起こす細菌性疾患であり、冷却塔冷却
水や空調設備を媒介として集団発生する点、適切な治療
を行わない場合の致命率が１５〜２５％にも及ぶ点にお
いて重大な社会問題となっている。
【０００３】 レジオネラ症の原因となるレジオネラ属
細菌は、通常土壌中に存在するが土埃と共に舞い上が
り、冷却塔より冷却水系に侵入し、冷却水中で増殖す
る。そして、冷却塔からの飛散水によりその下を通る通
行人に感染したり、或いは外気取入口からビル内に侵入
し、内部で働いている人々に感染するという経路が最も
有力な感染経路と推定されている。
細菌は、通常土壌中に存在するが土埃と共に舞い上が
り、冷却塔より冷却水系に侵入し、冷却水中で増殖す
る。そして、冷却塔からの飛散水によりその下を通る通
行人に感染したり、或いは外気取入口からビル内に侵入
し、内部で働いている人々に感染するという経路が最も
有力な感染経路と推定されている。
【０００４】 また、レジオネラ属細菌に限らず、細菌
類が冷却水系に侵入して増殖した場合には、配管内など
にスライムが付着して配管が閉塞したり、或いは熱交換
率が低下する等のスライム障害の原因ともなり得る。こ
のような事態は、冷却水の交換、消毒、冷却設備の清掃
等を行うことにより防止することができるが、比較的簡
便に実施可能な殺菌剤による消毒が最も頻繁に行われて
いる。
類が冷却水系に侵入して増殖した場合には、配管内など
にスライムが付着して配管が閉塞したり、或いは熱交換
率が低下する等のスライム障害の原因ともなり得る。こ
のような事態は、冷却水の交換、消毒、冷却設備の清掃
等を行うことにより防止することができるが、比較的簡
便に実施可能な殺菌剤による消毒が最も頻繁に行われて
いる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】 従来、殺菌剤として
は、塩素系やイソチアゾリン等の有機窒素硫黄系の殺菌
剤が用いられているが、前者は腐食性が強く冷却配管等
を腐食する点において、後者は高価であり作業者の手に
付着した場合に薬傷を負う可能性がある点において好ま
しくない。
は、塩素系やイソチアゾリン等の有機窒素硫黄系の殺菌
剤が用いられているが、前者は腐食性が強く冷却配管等
を腐食する点において、後者は高価であり作業者の手に
付着した場合に薬傷を負う可能性がある点において好ま
しくない。
【０００６】 即ち、現状では、レジオネラ属細菌に対
する高い殺菌性と、低腐食性、安全性を兼ね備えた殺菌
剤として、十分に満足できるものは見出されておらず、
これらの性質を満足する殺菌剤が切望されている。
する高い殺菌性と、低腐食性、安全性を兼ね備えた殺菌
剤として、十分に満足できるものは見出されておらず、
これらの性質を満足する殺菌剤が切望されている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】 従来、レジオネラ属細
菌が通常の培地では培養できず活性炭を添加した培地で
のみ培養できるという事実から、培地の成分若しくはレ
ジオネラ属細菌の生産物に、レジオネラ属細菌の生育阻
害物質が存在するのではないかという仮説が提唱されて
いる。しかしながら、当該生育阻害物質の存在を確認
し、或いは単離・特定したという報告は未だ為されてい
ない。
菌が通常の培地では培養できず活性炭を添加した培地で
のみ培養できるという事実から、培地の成分若しくはレ
ジオネラ属細菌の生産物に、レジオネラ属細菌の生育阻
害物質が存在するのではないかという仮説が提唱されて
いる。しかしながら、当該生育阻害物質の存在を確認
し、或いは単離・特定したという報告は未だ為されてい
ない。
【０００８】 そこで、本発明者らは、前記生育阻害物
質が存在するとの仮定に基づき鋭意検討した結果、当該
生育阻害物質がレジオネラ属細菌が生産する物質である
こと、及び当該生育阻害物質が、殺菌性、特にレジオネ
ラ属細菌に対し特異的な殺菌性を有することを見出し
て、本発明に到達した。
質が存在するとの仮定に基づき鋭意検討した結果、当該
生育阻害物質がレジオネラ属細菌が生産する物質である
こと、及び当該生育阻害物質が、殺菌性、特にレジオネ
ラ属細菌に対し特異的な殺菌性を有することを見出し
て、本発明に到達した。
【０００９】 即ち、本発明によれば、レジオネラ（Le
gionella）属細菌が生産する殺菌性物質が提供される。
また、本発明によれば、レジオネラ属細菌を吸着材の存
在下で培養し、当該吸着材から抽出してなる殺菌性物質
が提供される。
gionella）属細菌が生産する殺菌性物質が提供される。
また、本発明によれば、レジオネラ属細菌を吸着材の存
在下で培養し、当該吸着材から抽出してなる殺菌性物質
が提供される。
【００１０】 本発明の殺菌性物質は、レジオネラ属細
菌に対する殺菌性を有するものであり、更にはレジオネ
ラ属細菌に対し特異的な殺菌性を有するものである。従
って、本発明の殺菌性物質は、当該殺菌性物質を有効成
分とする殺菌剤組成物、水処理剤、スライム抑制剤とし
て好適に用いることができる。
菌に対する殺菌性を有するものであり、更にはレジオネ
ラ属細菌に対し特異的な殺菌性を有するものである。従
って、本発明の殺菌性物質は、当該殺菌性物質を有効成
分とする殺菌剤組成物、水処理剤、スライム抑制剤とし
て好適に用いることができる。
【００１１】 また、本発明によれば、レジオネラ属細
菌を吸着材を添加した培地で培養し、当該レジオネラ属
細菌が生産する殺菌性物質を前記吸着材に吸着させ、当
該吸着材に吸着せしめた殺菌性物質を溶出し、回収する
ことを特徴とするレジオネラ属細菌産生殺菌性物質の製
造方法が提供される。
菌を吸着材を添加した培地で培養し、当該レジオネラ属
細菌が生産する殺菌性物質を前記吸着材に吸着させ、当
該吸着材に吸着せしめた殺菌性物質を溶出し、回収する
ことを特徴とするレジオネラ属細菌産生殺菌性物質の製
造方法が提供される。
【００１２】 本発明の製造方法においては、レジオネ
ラ属細菌を液体培養により培養することが好ましく、培
養するレジオネラ属細菌としては、レジオネラ・ニュー
モフィラ（Legionella pneumophila）又はレジオネラ・
ボゼマニー（Legionella bozemanii）を用いることがで
きる。
ラ属細菌を液体培養により培養することが好ましく、培
養するレジオネラ属細菌としては、レジオネラ・ニュー
モフィラ（Legionella pneumophila）又はレジオネラ・
ボゼマニー（Legionella bozemanii）を用いることがで
きる。
【００１３】
【発明の実施の形態】 本発明の殺菌性物質は、レジオ
ネラ属細菌が生産する殺菌性物質であり、具体的には例
えば、レジオネラ属細菌を吸着材を添加した培地で培養
し、当該レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質を前記
吸着材に吸着させ、当該吸着材に吸着せしめた殺菌性物
質を溶出し、回収する方法により得ることができる。以
下、詳細に説明する。
ネラ属細菌が生産する殺菌性物質であり、具体的には例
えば、レジオネラ属細菌を吸着材を添加した培地で培養
し、当該レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質を前記
吸着材に吸着させ、当該吸着材に吸着せしめた殺菌性物
質を溶出し、回収する方法により得ることができる。以
下、詳細に説明する。
【００１４】 本発明で培養に用いる細菌は、レジオネ
ラ属の細菌である限りにおいて特に限定されず、入手が
容易な菌種を適宜選択して用いればよい。具体的にはレ
ジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophil
a）、レジオネラ・ボゼマニー（Legionella bozemani
i）等を用いることができる。
ラ属の細菌である限りにおいて特に限定されず、入手が
容易な菌種を適宜選択して用いればよい。具体的にはレ
ジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophil
a）、レジオネラ・ボゼマニー（Legionella bozemani
i）等を用いることができる。
【００１５】 本発明では、上述のようなレジオネラ属
細菌（以下、単に「レジオネラ」という。）を、吸着材
を添加した培地で培養する。レジオネラに殺菌性物質を
生産させ、当該吸着材にレジオネラが生産する殺菌性物
質を吸着させるためである。
細菌（以下、単に「レジオネラ」という。）を、吸着材
を添加した培地で培養する。レジオネラに殺菌性物質を
生産させ、当該吸着材にレジオネラが生産する殺菌性物
質を吸着させるためである。
【００１６】 従前においても、ＢＣＹＥ（buffered c
harcoal yeast extract）α培地のように活性炭を吸着
材として添加した培地により、レジオネラを培養するこ
とが定法として行われている。吸着材を添加しなけれ
ば、培地由来の物質或いはレジオネラ自身が生産する自
己増殖阻害物質により、レジオネラが生育を阻害される
ため、レジオネラの培養が不能となると考えられていた
からである。
harcoal yeast extract）α培地のように活性炭を吸着
材として添加した培地により、レジオネラを培養するこ
とが定法として行われている。吸着材を添加しなけれ
ば、培地由来の物質或いはレジオネラ自身が生産する自
己増殖阻害物質により、レジオネラが生育を阻害される
ため、レジオネラの培養が不能となると考えられていた
からである。
【００１７】 しかしながら、本発明者の研究により、
吸着材を添加しない培地においても条件によってはレジ
オネラが培養可能であることが確認されており、更に
は、このような条件でレジオネラを培養した後、吸着材
を添加して同様の操作を行っても殺菌性物質の存在は確
認されなかった。
吸着材を添加しない培地においても条件によってはレジ
オネラが培養可能であることが確認されており、更に
は、このような条件でレジオネラを培養した後、吸着材
を添加して同様の操作を行っても殺菌性物質の存在は確
認されなかった。
【００１８】 即ち、本発明における吸着材は、レジオ
ネラが生産した殺菌性物質を吸着する手段であるのみな
らず、何らかの形でレジオネラの殺菌性物質の生産を誘
導し、また、殺菌性物質の生産性を向上させる因子にな
っていると推察される。
ネラが生産した殺菌性物質を吸着する手段であるのみな
らず、何らかの形でレジオネラの殺菌性物質の生産を誘
導し、また、殺菌性物質の生産性を向上させる因子にな
っていると推察される。
【００１９】 本発明で用いる吸着材は、脂溶性物質で
ある、本発明の殺菌性物質を吸着し得る限りにおいて特
に限定されず、従前と同様に活性炭を吸着材として用い
ることも可能である。但し、活性炭のように培地が黒濁
せず、培養後の処理が容易な吸着材を用いることが好ま
しい。このような吸着材の例としては、ポリスチレンか
らなる合成吸着材（例えば、商品名：Diaion HP-20（三
菱化学（株）製）、Amberlite XAD-2（ローム・アンド
・ハース社製））が挙げられる。
ある、本発明の殺菌性物質を吸着し得る限りにおいて特
に限定されず、従前と同様に活性炭を吸着材として用い
ることも可能である。但し、活性炭のように培地が黒濁
せず、培養後の処理が容易な吸着材を用いることが好ま
しい。このような吸着材の例としては、ポリスチレンか
らなる合成吸着材（例えば、商品名：Diaion HP-20（三
菱化学（株）製）、Amberlite XAD-2（ローム・アンド
・ハース社製））が挙げられる。
【００２０】 レジオネラの培養は、通常、寒天培地の
ような固形の平板培地により行うが、本発明において
は、液体培地を用いた液体培養により培養することが好
ましい。液体培養の方が大量培養に適しており、培養後
の処理も容易だからである。液体培地は、レジオネラの
生存や増殖、エネルギー代謝等に必要な全ての栄養素、
無機塩、緩衝剤等を脱イオン水に溶解し、既述の吸着材
を添加して調製することができる。
ような固形の平板培地により行うが、本発明において
は、液体培地を用いた液体培養により培養することが好
ましい。液体培養の方が大量培養に適しており、培養後
の処理も容易だからである。液体培地は、レジオネラの
生存や増殖、エネルギー代謝等に必要な全ての栄養素、
無機塩、緩衝剤等を脱イオン水に溶解し、既述の吸着材
を添加して調製することができる。
【００２１】 このような液体培地にレジオネラを植菌
し、３５〜３７℃で６〜７日間培養する。培養方法の例
としては、培地を静置した状態で液表面や容器底面近傍
に菌を培養する静置液体培養の他、培地を機械的に通気
攪拌、または振とうすることにより液中に菌を分散させ
ながら培養する液体内浮遊培養等が挙げられる。本発明
においては、大量培養に適し、殺菌性物質の吸着材への
吸着を促進できる点において、液体内浮遊培養が好まし
い。
し、３５〜３７℃で６〜７日間培養する。培養方法の例
としては、培地を静置した状態で液表面や容器底面近傍
に菌を培養する静置液体培養の他、培地を機械的に通気
攪拌、または振とうすることにより液中に菌を分散させ
ながら培養する液体内浮遊培養等が挙げられる。本発明
においては、大量培養に適し、殺菌性物質の吸着材への
吸着を促進できる点において、液体内浮遊培養が好まし
い。
【００２２】 上述のような方法でレジオネラを培養す
ることにより、レジオネラが生産する殺菌性物質が培地
中の吸着材に吸着される。前記殺菌性物質は比較的低分
子の脂溶性化合物と推定されるため、吸着材から適当な
有機溶剤を用いて溶出させることにより回収することが
できる。具体的には、前記吸着材を充分に水洗した後、
メタノール等の有機溶剤により吸着成分を溶出する方法
で回収すればよい。
ることにより、レジオネラが生産する殺菌性物質が培地
中の吸着材に吸着される。前記殺菌性物質は比較的低分
子の脂溶性化合物と推定されるため、吸着材から適当な
有機溶剤を用いて溶出させることにより回収することが
できる。具体的には、前記吸着材を充分に水洗した後、
メタノール等の有機溶剤により吸着成分を溶出する方法
で回収すればよい。
【００２３】 当該溶出物は、濃縮乾固することにより
油状物として得ることができるが、適当な精製処理を加
えたものを用いることが好ましい。精製方法としては、
一般的に行われる天然有機化合物の精製方法、具体的に
は有機溶媒抽出法、シリカゲルを用いたカラムクロマト
グラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
等の方法又はこれらを組み合わせた方法が挙げられる。
油状物として得ることができるが、適当な精製処理を加
えたものを用いることが好ましい。精製方法としては、
一般的に行われる天然有機化合物の精製方法、具体的に
は有機溶媒抽出法、シリカゲルを用いたカラムクロマト
グラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
等の方法又はこれらを組み合わせた方法が挙げられる。
【００２４】 前記の油状物は、そのまま又は希釈して
液状で、或いは噴霧乾燥又は凍結乾燥して粉末状で用い
ることができる。前記の方法により得られる殺菌性物質
は、有機溶剤に対する溶解性等から比較的低分子の脂溶
性化合物と推察されるが、その化学的組成については、
未だ確認されていない。
液状で、或いは噴霧乾燥又は凍結乾燥して粉末状で用い
ることができる。前記の方法により得られる殺菌性物質
は、有機溶剤に対する溶解性等から比較的低分子の脂溶
性化合物と推察されるが、その化学的組成については、
未だ確認されていない。
【００２５】 しかしながら、本発明者が検討した結
果、前記殺菌性物質は以下に示すような性質を有するこ
とが確認された。第一に、本発明の殺菌性物質は、レジ
オネラに対する殺菌性を有することが確認された。即
ち、本発明の殺菌性物質は、レジオネラに起因するレジ
オネラ症、スライム障害等の抑制に極めて有効なもので
ある。
果、前記殺菌性物質は以下に示すような性質を有するこ
とが確認された。第一に、本発明の殺菌性物質は、レジ
オネラに対する殺菌性を有することが確認された。即
ち、本発明の殺菌性物質は、レジオネラに起因するレジ
オネラ症、スライム障害等の抑制に極めて有効なもので
ある。
【００２６】 第二に、本発明の殺菌性物質は、レジオ
ネラに対し特異的な殺菌性を有するものであることが確
認された。即ち、本発明の殺菌性物質はレジオネラを選
択的に殺菌する安全な殺菌剤として極めて有用なもので
ある。従って、本発明の殺菌性物質は、当該殺菌性物質
を有効成分とする殺菌剤組成物として好適に用いること
ができ、また、冷却水系統に添加する水処理剤、スライ
ム抑制剤としての用途も期待できる。
ネラに対し特異的な殺菌性を有するものであることが確
認された。即ち、本発明の殺菌性物質はレジオネラを選
択的に殺菌する安全な殺菌剤として極めて有用なもので
ある。従って、本発明の殺菌性物質は、当該殺菌性物質
を有効成分とする殺菌剤組成物として好適に用いること
ができ、また、冷却水系統に添加する水処理剤、スライ
ム抑制剤としての用途も期待できる。
【００２７】
【実施例】 以下、本発明の殺菌性物質について更に詳
細に説明する。但し、本発明はこれらの実施例に限定さ
れるものではない。なお、実施例、比較例における殺菌
性及び抗菌性については、以下に示す方法により評価し
た。
細に説明する。但し、本発明はこれらの実施例に限定さ
れるものではない。なお、実施例、比較例における殺菌
性及び抗菌性については、以下に示す方法により評価し
た。
【００２８】（殺菌性評価用緩衝液の調製）殺菌性評価
用緩衝液（以下、単に「緩衝液」という。）として表１
に示す組成の緩衝液を調製した。
用緩衝液（以下、単に「緩衝液」という。）として表１
に示す組成の緩衝液を調製した。
【００２９】
【表１】
【００３０】（殺菌性評価）テスト実施２日前に保存用
培地から表２に示す組成のＢＣＹＥα培地に移植画線し
たレジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophi
la)ＧＩＦＵ９１３４株又は、レジオネラ・ボゼマニー
（Legionella bozemanii）ＧＩＦＵ９１４０株を、１白
金耳分とり４ｍｌの滅菌水に懸濁させ、試験管ミキサー
で約１分間充分に混合した。
培地から表２に示す組成のＢＣＹＥα培地に移植画線し
たレジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophi
la)ＧＩＦＵ９１３４株又は、レジオネラ・ボゼマニー
（Legionella bozemanii）ＧＩＦＵ９１４０株を、１白
金耳分とり４ｍｌの滅菌水に懸濁させ、試験管ミキサー
で約１分間充分に混合した。
【００３１】
【表２】
【００３２】 ５０ｍｌ平底フラスコに緩衝液を３０ｍ
ｌずつ分注してシリコ栓をし、１２１℃で１５分間オー
トクレーブ滅菌したものに対し、前記菌の懸濁液を滅菌
チップ付メカニカルピペットにより５０μｌ加えた。こ
の際、コントロールの菌数は１０4個／ｍｌを目安とし
て調製した。
ｌずつ分注してシリコ栓をし、１２１℃で１５分間オー
トクレーブ滅菌したものに対し、前記菌の懸濁液を滅菌
チップ付メカニカルピペットにより５０μｌ加えた。こ
の際、コントロールの菌数は１０4個／ｍｌを目安とし
て調製した。
【００３３】 試験濃度に応じてエタノールに溶解希釈
した殺菌性物質を滅菌チップ付メカニカルピペットで平
底フラスコに所定量添加した。但し、エタノールの影響
を避けるため、緩衝液中のエタノール濃度は１％以下と
なるようにした。殺菌性物質を含まないエタノールのみ
を３０μｌ添加したもの（即ち、緩衝液中のエタノール
濃度が１％のもの）をコントロールとした。
した殺菌性物質を滅菌チップ付メカニカルピペットで平
底フラスコに所定量添加した。但し、エタノールの影響
を避けるため、緩衝液中のエタノール濃度は１％以下と
なるようにした。殺菌性物質を含まないエタノールのみ
を３０μｌ添加したもの（即ち、緩衝液中のエタノール
濃度が１％のもの）をコントロールとした。
【００３４】 振とう培養装置に平底フラスコをセット
し、温度３６℃、振とう速度約６０ｒｐｍ．で２４時間
振とう後、振とうを停止し、サンプリングを行なった。
予め表面を乾かした、表２に示す組成のＢＣＹＥα培地
に、サンプリング液を５０μｌ、滅菌チップ付メカニカ
ルピペットで接種し、接種したサンプリング液を滅菌コ
ンラジ棒で培地に完全に吸収されるまで十分に塗り拡げ
た。
し、温度３６℃、振とう速度約６０ｒｐｍ．で２４時間
振とう後、振とうを停止し、サンプリングを行なった。
予め表面を乾かした、表２に示す組成のＢＣＹＥα培地
に、サンプリング液を５０μｌ、滅菌チップ付メカニカ
ルピペットで接種し、接種したサンプリング液を滅菌コ
ンラジ棒で培地に完全に吸収されるまで十分に塗り拡げ
た。
【００３５】 接種終了後、直ちにシャーレを逆さまに
した状態で３６℃のインキュベータに投入し、７日間培
養した後で出現した集落数を計数した。計数した集落数
を２０倍することにより、１ｍｌ当たりの生菌数に換算
して薬剤と２４時間接触後の生菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）と
した。
した状態で３６℃のインキュベータに投入し、７日間培
養した後で出現した集落数を計数した。計数した集落数
を２０倍することにより、１ｍｌ当たりの生菌数に換算
して薬剤と２４時間接触後の生菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）と
した。
【００３６】 ２４時間接触で培地上に現れた集落数が
０個の時、殺菌効果ありとし、殺菌効果の認められた最
低の薬剤濃度を最小殺菌濃度（以下、「ＭＢＣ」とい
う。）とした。
０個の時、殺菌効果ありとし、殺菌効果の認められた最
低の薬剤濃度を最小殺菌濃度（以下、「ＭＢＣ」とい
う。）とした。
【００３７】（抗菌性評価）抗菌性評価は、液体培地希
釈法により行った。なお、抗菌性評価用の培地にはニュ
ートリエントブロス（肉エキス５ｇ、ペプトン１０ｇ、
塩化ナトリウム５ｇを脱イオン水に溶解し、全体を１０
００ｍｌとしたもの、ｐＨ＝７．２）を用いた。
釈法により行った。なお、抗菌性評価用の培地にはニュ
ートリエントブロス（肉エキス５ｇ、ペプトン１０ｇ、
塩化ナトリウム５ｇを脱イオン水に溶解し、全体を１０
００ｍｌとしたもの、ｐＨ＝７．２）を用いた。
【００３８】 試験管にニュートリエントブロスを１０
ｍｌ入れ、１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌を行
った後、保存用培地から試験菌株を少量移植し、３６℃
で一晩振とう培養して、種菌を作った。
ｍｌ入れ、１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌を行
った後、保存用培地から試験菌株を少量移植し、３６℃
で一晩振とう培養して、種菌を作った。
【００３９】 当該種菌を、オートクレーブ滅菌したニ
ュートリエントブロス３０ｍｌに、１０4個オーダーに
なるように懸濁し、滅菌済み２４穴マイクロプレートに
１９８０μｌずつ分注した。エタノールに溶解、希釈し
た殺菌性物質を２０μｌずつ各菌懸濁培地に添加した。
コントロールとしては、エタノールのみ２０μｌ添加し
たものを用意し、殺菌性物質を添加したものと同様の処
理を行った。
ュートリエントブロス３０ｍｌに、１０4個オーダーに
なるように懸濁し、滅菌済み２４穴マイクロプレートに
１９８０μｌずつ分注した。エタノールに溶解、希釈し
た殺菌性物質を２０μｌずつ各菌懸濁培地に添加した。
コントロールとしては、エタノールのみ２０μｌ添加し
たものを用意し、殺菌性物質を添加したものと同様の処
理を行った。
【００４０】 ３７℃で２４時間培養後、培地の濁度の
上昇が認められなければ細菌が増殖していないものと判
断し、細菌が増殖しない最低の殺菌性物質濃度を最小発
育阻止濃度（以下、「ＭｌＣ」という。）とした。
上昇が認められなければ細菌が増殖していないものと判
断し、細菌が増殖しない最低の殺菌性物質濃度を最小発
育阻止濃度（以下、「ＭｌＣ」という。）とした。
【００４１】（実施例１） レジオネラ増殖用の培地と
して、表３に示す組成の液体培地２００ｍｌを用意し
た。なお、合成吸着材としては、ポリスチレンからなる
合成吸着材 Diaion HP-20（商品名：三菱化学（株）
製）を使用した。
して、表３に示す組成の液体培地２００ｍｌを用意し
た。なお、合成吸着材としては、ポリスチレンからなる
合成吸着材 Diaion HP-20（商品名：三菱化学（株）
製）を使用した。
【００４２】
【表３】
【００４３】 表２に示す組成のＢＣＹＥα培地に予め
画線培養しておいたレジオネラ・ニューモフィラＧＩＦ
Ｕ９１３４株を、菌数がおよそ１０3個／ｍｌとなるよ
うに前記液体培地に植菌し、３６℃で７日間培養した。
画線培養しておいたレジオネラ・ニューモフィラＧＩＦ
Ｕ９１３４株を、菌数がおよそ１０3個／ｍｌとなるよ
うに前記液体培地に植菌し、３６℃で７日間培養した。
【００４４】 培養終了後、培地中の合成吸着材を取り
出し、ガラス製のクロマト管に充填した。そのカラムを
水でよく洗浄した後、メタノールを用いて吸着している
物質を溶出した。メタノール溶出液を濃縮・乾固させ、
再び水で溶解させ酢酸エチルを同量加えて溶媒抽出を行
なった。得られた酢酸エチル抽出物を濃縮・乾固し、１
０ｍｇの油状物を得た。
出し、ガラス製のクロマト管に充填した。そのカラムを
水でよく洗浄した後、メタノールを用いて吸着している
物質を溶出した。メタノール溶出液を濃縮・乾固させ、
再び水で溶解させ酢酸エチルを同量加えて溶媒抽出を行
なった。得られた酢酸エチル抽出物を濃縮・乾固し、１
０ｍｇの油状物を得た。
【００４５】（実施例２） レジオネラ・ボゼマニーＧ
ＩＦＵ９１４０株を用い、実施例１と同様の培養、処理
を行い、８ｍｇの油状物を得た。
ＩＦＵ９１４０株を用い、実施例１と同様の培養、処理
を行い、８ｍｇの油状物を得た。
【００４６】（比較例１） 表３中の成分のうち、合成
吸着材のみを添加せず同様に調製した液体培地２００ｍ
ｌに、実施例１と同様にレジオネラを培養した。培養終
了後、培地に合成吸着材１０ｍｌを添加し、培地を攪拌
して吸着処理を行った。吸着終了後、合成吸着材を取り
出し、実施例１と同様の処理を行い、７ｍｇの油状物を
得た。
吸着材のみを添加せず同様に調製した液体培地２００ｍ
ｌに、実施例１と同様にレジオネラを培養した。培養終
了後、培地に合成吸着材１０ｍｌを添加し、培地を攪拌
して吸着処理を行った。吸着終了後、合成吸着材を取り
出し、実施例１と同様の処理を行い、７ｍｇの油状物を
得た。
【００４７】（比較例２） 表３に示す組成の液体培地
２００ｍｌを攪拌し、培地由来の成分の吸着処理を行っ
た。吸着終了後、合成吸着材を取り出し、実施例１と同
様の処理を行い、３ｍｇの油状物を得た。
２００ｍｌを攪拌し、培地由来の成分の吸着処理を行っ
た。吸着終了後、合成吸着材を取り出し、実施例１と同
様の処理を行い、３ｍｇの油状物を得た。
【００４８】 以下、実施例１〜２、比較例１〜２で得
られた油状物について、殺菌性その他の評価を行った結
果を示す。
られた油状物について、殺菌性その他の評価を行った結
果を示す。
【００４９】（殺菌性評価）まず、実施例１及び比較例
１〜２で得られた油状物について、レジオネラ・ニュー
モフィラに対する殺菌性を評価した。その結果、表４に
示すように、実施例１の油状物ではＭＢＣが２５μｇ／
ｍｌと殺菌性が認められた。
１〜２で得られた油状物について、レジオネラ・ニュー
モフィラに対する殺菌性を評価した。その結果、表４に
示すように、実施例１の油状物ではＭＢＣが２５μｇ／
ｍｌと殺菌性が認められた。
【００５０】 一方、比較例１及び比較例２において
は、いずれもＭＢＣは１００μｇ／ｍｌ以上であり、殺
菌性は認められなかった。比較例２の結果より、殺菌性
物質が培地由来の成分ではなく、レジオネラの生産物で
あることが明らかになった。
は、いずれもＭＢＣは１００μｇ／ｍｌ以上であり、殺
菌性は認められなかった。比較例２の結果より、殺菌性
物質が培地由来の成分ではなく、レジオネラの生産物で
あることが明らかになった。
【００５１】
【表４】
【００５２】 また、表５に示すように、実施例１と比
較例１の３日目〜７日目の生菌数を比較すると合成吸着
材を添加した実施例１の方が培養初期におけるレジオネ
ラの増殖が速いものの、従来レジオネラが生育しないと
いわれていた吸着材を添加しない培地（比較例１）にお
いても増殖が確認された。しかしながら、比較例１の結
果より明らかなように、殺菌性物質は実施例１のように
吸着材を培地に添加しなければ生産されないことが確認
された。
較例１の３日目〜７日目の生菌数を比較すると合成吸着
材を添加した実施例１の方が培養初期におけるレジオネ
ラの増殖が速いものの、従来レジオネラが生育しないと
いわれていた吸着材を添加しない培地（比較例１）にお
いても増殖が確認された。しかしながら、比較例１の結
果より明らかなように、殺菌性物質は実施例１のように
吸着材を培地に添加しなければ生産されないことが確認
された。
【００５３】
【表５】
【００５４】 次に、実施例１の油状物（即ち、レジオ
ネラ・ニューモフィラ生産物）のレジオネラ・ボゼマニ
ーＧＩＦＵ９１４０株に対する殺菌性及び、実施例２の
油状物（即ち、レジオネラ・ボゼマニー生産物）のレジ
オネラ・ニューモフィラＧＩＦＵ９１３４株に対する殺
菌性を評価した。
ネラ・ニューモフィラ生産物）のレジオネラ・ボゼマニ
ーＧＩＦＵ９１４０株に対する殺菌性及び、実施例２の
油状物（即ち、レジオネラ・ボゼマニー生産物）のレジ
オネラ・ニューモフィラＧＩＦＵ９１３４株に対する殺
菌性を評価した。
【００５５】 その結果、表６〜表７に示すように、実
施例１の油状物のレジオネラ・ボゼマニーＧＩＦＵ９１
４０株に対するＭＢＣは５０μｇ／ｍｌ、実施例２の油
状物のレジオネラ・ニューモフィラＧＩＦＵ９１３４株
に対するＭＢＣは１２．５μｇ／ｍｌであり、いずれも
殺菌性が認められた。即ち、本発明の殺菌性物質は、殺
菌性物質を生産した菌種以外の菌種に対しても、レジオ
ネラ属細菌である限りにおいて殺菌作用を有することが
確認された。
施例１の油状物のレジオネラ・ボゼマニーＧＩＦＵ９１
４０株に対するＭＢＣは５０μｇ／ｍｌ、実施例２の油
状物のレジオネラ・ニューモフィラＧＩＦＵ９１３４株
に対するＭＢＣは１２．５μｇ／ｍｌであり、いずれも
殺菌性が認められた。即ち、本発明の殺菌性物質は、殺
菌性物質を生産した菌種以外の菌種に対しても、レジオ
ネラ属細菌である限りにおいて殺菌作用を有することが
確認された。
【００５６】
【表６】
【００５７】
【表７】
【００５８】（抗菌性評価）次に、実施例１の油状物の
レジオネラ属細菌以外の細菌に対する抗菌性を評価し
た。レジオネラ属細菌以外の細菌としては、Bacillus s
ubtilis（バチルス・サブチルス）、Micrococcus luteu
s（マイクロコッカス・ルテウス）、Escherichia coli
（エシェリキア・コリ）、Pseudomonas aeruginosa（シ
ュードモナス・エルギノーサ）を選択した。
レジオネラ属細菌以外の細菌に対する抗菌性を評価し
た。レジオネラ属細菌以外の細菌としては、Bacillus s
ubtilis（バチルス・サブチルス）、Micrococcus luteu
s（マイクロコッカス・ルテウス）、Escherichia coli
（エシェリキア・コリ）、Pseudomonas aeruginosa（シ
ュードモナス・エルギノーサ）を選択した。
【００５９】 その結果、表８に示すように、実施例１
の油状物のレジオネラ属細菌以外の細菌に対するＭＩＣ
はいずれも１００μｇ／ｍｌ以上であり、抗菌性は確認
できなかった。抗菌性がなければ、殺菌性を有すること
はないため、本発明の殺菌性物質の殺菌作用はレジオネ
ラ属細菌に特異的であると判断した。
の油状物のレジオネラ属細菌以外の細菌に対するＭＩＣ
はいずれも１００μｇ／ｍｌ以上であり、抗菌性は確認
できなかった。抗菌性がなければ、殺菌性を有すること
はないため、本発明の殺菌性物質の殺菌作用はレジオネ
ラ属細菌に特異的であると判断した。
【００６０】
【表８】
【００６１】
【発明の効果】 以上説明したように、本発明の殺菌性
物質は、レジオネラ属細菌に対する殺菌性を有するた
め、レジオネラ属細菌に起因するレジオネラ症、スライ
ム障害等の抑制に極めて有効である。また、本発明の殺
菌性物質は、レジオネラ属細菌に対し特異的な殺菌性を
有するため、レジオネラ属細菌を選択的に殺菌する安全
な殺菌剤として極めて有用である。従って、本発明の殺
菌性物質は、当該殺菌性物質を有効成分とする殺菌剤組
成物として好適に用いることができ、また、冷却水系統
に添加する水処理剤、スライム抑制剤としての用途が期
待できる。
物質は、レジオネラ属細菌に対する殺菌性を有するた
め、レジオネラ属細菌に起因するレジオネラ症、スライ
ム障害等の抑制に極めて有効である。また、本発明の殺
菌性物質は、レジオネラ属細菌に対し特異的な殺菌性を
有するため、レジオネラ属細菌を選択的に殺菌する安全
な殺菌剤として極めて有用である。従って、本発明の殺
菌性物質は、当該殺菌性物質を有効成分とする殺菌剤組
成物として好適に用いることができ、また、冷却水系統
に添加する水処理剤、スライム抑制剤としての用途が期
待できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０２Ｆ 1/50 ５３２ Ｃ０２Ｆ 1/50 ５３２Ａ ５４０ ５４０Ｂ Ｃ１２Ｐ 1/04 Ｃ１２Ｐ 1/04 Ｚ (72)発明者 井上 浩章 茨城県つくば市緑ヶ原４−４ アクアス株 式会社つくば総合研究所内 Ｆターム(参考） 4B064 AH19 CA02 CC01 DA02 DA16 4H011 AA02
Claims (10)
- 【請求項１】 レジオネラ（Legionella）属細菌が生産
する殺菌性物質。 - 【請求項２】 レジオネラ（Legionella）属細菌を吸着
材の存在下で培養し、当該吸着材から抽出してなる殺菌
性物質。 - 【請求項３】 レジオネラ（Legionella）属細菌に対す
る殺菌性を有する請求項１又は２に記載の殺菌性物質。 - 【請求項４】 レジオネラ（Legionella）属細菌に対
し、特異的な殺菌性を有する請求項１〜３のいずれか一
項に記載の殺菌性物質。 - 【請求項５】 請求項１〜４のいずれか一項に記載の殺
菌性物質を有効成分とする殺菌剤組成物。 - 【請求項６】 請求項１〜４のいずれか一項に記載の殺
菌性物質を有効成分とする水処理剤。 - 【請求項７】 請求項１〜４のいずれか一項に記載の殺
菌性物質を有効成分とするスライム抑制剤。 - 【請求項８】 レジオネラ（Legionella）属細菌を吸着
材を添加した培地で培養し、当該レジオネラ（Legionel
la）属細菌が生産する殺菌性物質を前記吸着材に吸着さ
せ、当該吸着材に吸着せしめた殺菌性物質を溶出し、回
収することを特徴とするレジオネラ（Legionella）属細
菌産生殺菌性物質の製造方法。 - 【請求項９】 レジオネラ（Legionella）属細菌を液体
培養により培養する請求項８に記載のレジオネラ（Legi
onella）属細菌産生殺菌性物質の製造方法。 - 【請求項１０】 培養するレジオネラ（Legionella）属
細菌が、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pne
umophila）又はレジオネラ・ボゼマニー（Legionella b
ozemanii）である請求項８又は９に記載のレジオネラ
（Legionella）属細菌産生殺菌性物質の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10223421A JP2000053514A (ja) | 1998-08-06 | 1998-08-06 | レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質、これを用いた殺菌剤、水処理剤、スライム抑制剤、及びこれらの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10223421A JP2000053514A (ja) | 1998-08-06 | 1998-08-06 | レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質、これを用いた殺菌剤、水処理剤、スライム抑制剤、及びこれらの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000053514A true JP2000053514A (ja) | 2000-02-22 |
Family
ID=16797887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10223421A Withdrawn JP2000053514A (ja) | 1998-08-06 | 1998-08-06 | レジオネラ属細菌が生産する殺菌性物質、これを用いた殺菌剤、水処理剤、スライム抑制剤、及びこれらの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000053514A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005534332A (ja) * | 2002-07-29 | 2005-11-17 | オプティマー ファーマシューティカルズ、インコーポレイテッド | チアクマイシン生産 |
| CN103204589A (zh) * | 2013-03-06 | 2013-07-17 | 付永全 | 用生物方法处理和稳定工业循环水水质的方法 |
| US8883986B2 (en) | 2005-01-31 | 2014-11-11 | Optimer Pharmaceuticals, Inc. | Macrolide polymorphs, compositions comprising such polymorphs, and methods of use and manufacture thereof |
| CN105906071A (zh) * | 2016-06-20 | 2016-08-31 | 滨州学院 | 一种用于含重金属有机废水的微生物水处理剂 |
| US9808530B2 (en) | 2013-01-15 | 2017-11-07 | Astellas Pharma Europe Ltd. | Composition of tiacumicin compounds |
-
1998
- 1998-08-06 JP JP10223421A patent/JP2000053514A/ja not_active Withdrawn
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005534332A (ja) * | 2002-07-29 | 2005-11-17 | オプティマー ファーマシューティカルズ、インコーポレイテッド | チアクマイシン生産 |
| JP2010178760A (ja) * | 2002-07-29 | 2010-08-19 | Optimer Pharmaceuticals Inc | チアクマイシン生産 |
| JP2013208131A (ja) * | 2002-07-29 | 2013-10-10 | Optimer Pharmaceuticals Inc | チアクマイシン生産 |
| US8883986B2 (en) | 2005-01-31 | 2014-11-11 | Optimer Pharmaceuticals, Inc. | Macrolide polymorphs, compositions comprising such polymorphs, and methods of use and manufacture thereof |
| US9808530B2 (en) | 2013-01-15 | 2017-11-07 | Astellas Pharma Europe Ltd. | Composition of tiacumicin compounds |
| CN103204589A (zh) * | 2013-03-06 | 2013-07-17 | 付永全 | 用生物方法处理和稳定工业循环水水质的方法 |
| CN105906071A (zh) * | 2016-06-20 | 2016-08-31 | 滨州学院 | 一种用于含重金属有机废水的微生物水处理剂 |
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|---|---|---|---|
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