JP2009155342A - 細胞毒素、プロドラッグ、リンカーとその有用な安定剤 - Google Patents

Abstract

【課題】類似構造を持つ既知化合物に比して高度の作用特異性、低毒性を示し、血中安定性の改善された化合物を提供する。
【解決手段】生体内で酵素により又は還元的に切断されてリンカーアームを含んでいるプロドラッグ誘導体から活性薬物部分を遊離するリンカーアームを提供する。さらにこのリンカーアームは、細胞毒素間の抱合体及びリンカーアーム、細胞毒素と抗体又はペプチドのようなターゲッティング剤間の抱合体を含む。
【選択図】 なし

Description

＜関連特許出願に対する相互参照文献＞
本特許出願は、２００１年５月３１日出願のアメリカ合衆国プロヴィジョナル特許出願第６０／２９５，１９６号、２００１年５月３１日出願の第６０／２９５，２５９、２００１年５月３１日出願の第６０／２９５，３４２、及び２００１年７月１１日出願の第６０／３０４，９０８号の通常出願である。各当該仮出願の開示は、すべての目的に対してその全容を本発明に参照して組み込まれている。

＜背景技術＞
多くの治療薬、特に癌の化学療法に特効を奏する治療薬は、しばしば生体内で急性毒性、特に骨髄と粘膜への毒性、ならびに慢性の心臓および神経への毒性を示す。このような高い毒性は、その適用を制限しかねない。より安全でより特異的な治療薬、特に抗腫瘍剤の開発は、これら生成物の副作用（毒性、非腫瘍細胞の破壊など）の数と熾烈さの点で、腫瘍細胞及び疾病に対するより大きな有効性のために望ましい。いくつかの現存の治療薬に伴うもう一つの困難は、血漿中におけるこれら薬物の至適以下の安定性である。これらの化合物の安定化のために機能性グループを追加すると活性を有意に低下する結果となる。従って、良好な治療活性レベルを維持しながら化合物を安定化する手段を決定することが望ましい。

より選択的な細胞傷害薬の探索が何十年もの間極めて活発に行われているが、薬用量を制限する毒性（即ち正常組織に対する細胞毒素の有害な活性）はがん治療における主要な失敗原因の一つである。例えば、ＣＣ−１０６５及びデュオカルマイシンは極めて強力な細胞毒素であることが知られている。

ＣＣ−１０６５は最初１９８１年にストレプトミセス ゼンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｚｅｌｅｎｓｉｓ）からアップジョン（ＵＰＪＯＨＮ）社によって単離され（ハンカら、ジャーナルオブ アンチバイオテクノロジー（（Ｈａｎｋａ Ｅｔ Ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．）３１：１２１１（１９７８）；マーティンら、ジャーナルオブ アンチバイオテクノロジー（Ｍａｒｔｉｎ Ｅｔ Ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．）３３：９０２（１９８０）；マーティンら、ジャーナルオブ アンチバイオテクノロジー（Ｍａｒｔｉｎ Ｅｔ Ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．）３４：１１１９（１９８１））、生体内および実験動物において共に強力な抗腫瘍ならびに抗微生物活性を有することが発見された（リーら、キャンサー レス． ４２：９９９（１９８２）（Ｌｉ Ｅｔ Ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．））。ＣＣ−１０６５は５’−Ｄ（Ａ／ＧＮＴＴＡ）−３’及び５’−Ｄ（ＡＡＡＡＡ）−３’配列を好んで副溝内で二本鎖Ｂ−ＤＮＡに結合し（スウェンソンら、キャンサー レス．４２：２８２１（１９８２）（Ｓｗｅｎｓｏｎ Ｅｔ Ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．））、該分子中に存在するＣＰＩの左側ユニットにより３’−アデニンのＮ３位をアルキル化する（ハーリーら、サイエンス ２２６：８４３（１９８４）（Ｈｕｒｌｅｙ Ｅｔ Ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ））。その強力で広範な抗腫瘍活性にも拘わらずＣＣ−１０６５は、実験動物で遅延死を引き起こすためにヒトには使用出来ない。

ＣＣ−１０６５及びデュオカリマイシンの類似体ならびに誘導体が多数当分野では知られている。これら化合物の多くの構造、合成及び諸性質への研究は概説されている。例えば、（ボジャーら、アンゲウ．ケミカル．イント．イーディー（Ｂｏｇｅｒ Ｅｔ Ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．）３５：１４３８（１９９６））及びボジャーら、ケミカル レビュー（Ｂｏｇｅｒ Ｅｔ Ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．）９７：７８７（１９９７））参照。

協和発酵工業株式会社のグループが多数のＣＣ−１０６５誘導体を調製している。例えば、アメリカ合衆国特許第５，１０１，０３８号、５，６４１，７８０号、５，１８７，１８６号、５，０７０，０９２号、５，７０３，０８０号、５，０７０，０９２号、５，６４１，７８０号、５，１０１，０３８号及び５，０８４，４６８号、発行されたＰＣＴ（特許協力条約）特許出願ＷＯ ９６／１０４０５ならびに発行されたヨーロッパ特許出願０ ５３７ ５７５ Ａ１参照。これらの特許又は特許出願はいずれも切断可能なプロドラッグ形成による細胞毒素の安定性向上の術策を開示しているものはない。

アップジョン社（ファルマシア アップジョン：Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＵＰＪＯＨＮ）もまた積極的にＣＣ−１０６５誘導体を調製している。例えば、アメリカ合衆国特許第５，７３９，３５０号、４，９７８，７５７号、５，３３２，８３７号及び４，９１２，２２７号参照。許可されたこれらのアメリカ合衆国特許は、プロドラッグ戦略が特許に開示された化合物の生体内安定性を向上し、又はその毒性の低下に有用であろうことを開示も暗示もしていない。

研究ではまたプロドラッグ形態の新規の治療薬品、その構造の一定の化学的又は酵素による修飾によって生体内で医薬（活性治療化合物）に転化し得る化合物の開発に集中している。毒性低減のためにこの転化は、循環系あるいは非標的組織よりもむしろ作用部位又は標的組織系に限られることが好ましい。しかしながら、プロドラッグさえも、その多くは、プロドラッグが患者体内の望ましい部位に到達する前にプロドラッグを分解又は活性化する酵素の存在のために血液及び血漿中では安定性が低いという特徴があるので問題がある。

それ故、技術の進歩にも拘わらず、哺乳動物及び特にヒトの治療用の改良された治療薬、具体的には類似構造を持つ既知化合物に比して高度の作用特異性、低毒性を示し、血中安定性の改善された細胞毒素の開発が引き続き必要である。本発明はこれらの要望に取り組むものである。

本発明はＣＣ−１０６５及びデュオカルマイシンの類似体である細胞毒素（細胞傷害抗体）に関する。本発明はまたリンカーアームを提供し、このものは例えば生体内で酵素により又は還元的に切断されてリンカーアームを含んでいるプロドラッグ誘導体から活性薬物部分を遊離する。さらに本発明は本発明のリンカーアームと細胞毒素間の抱合体及びリンカーアーム、細胞毒素と抗体又はペプチドのようなターゲッティング剤間の抱合体を含む。

本発明はまた治療薬及びマーカーの安定化に有用なグループにも関する。安定化グループは、血液又は非標的組織に存在する可能性のある酵素による治療薬あるいはマーカーのクリアランス（排泄）と代謝を制限するために選択され、さらに当該薬物又はマーカーの細胞への送達を制限するために選択される。安定化グループは薬剤又はマーカーの分解を阻止する役割を果たし、且つ、薬剤又はマーカーに他の物理学的特徴を与えるように作用することもあり得る。安定化グループはまた薬剤又はマーカーが製剤化又は製剤化されていない形態で貯蔵されている間のそれらの安定性を向上させ得る。

最初の局面において、本発明は化学式Ｉに記載の構造を持つ細胞毒性化合物を提供する。

この式において、環状系Ａは、置換又は非置換のアリール基、置換又は非置換のヘテロアリール基、および置換又は非置換のヘテロシクロアルキル基から選ばれた一つである。記号Ｅ及びＧはＨ（水素）、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のヘテロアルキル基、異種元素、又は単結合を表す。Ｅ及びＧは任意に連結して非置換のアリール基、置換又は非置換のヘテロアリール基及び置換又は非置換のヘテロシクロアルキル基から選択された環状系を形成する。

典型的な実施の形態において、環状系Ａは置換又は非置換のフェニル環である。環状系Ａは、本発明の定義の節に記載されているような一つ以上のアリール置換基で置換されていることが望ましい。一つの好適な実施の形態において、フェニル環はＣＮ部分で置換されている。

Ｒ³が付加されている６員環内の湾曲線は、この環状系がその内部のいずれかの位置に一つ以上の不飽和結合を持つ可能性を示し、また環の芳香族性を示すことがあり得る。

記号Ｘは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ²³から選ばれた一つのメンバーを表す。Ｒ²³はＨ（水素）、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のヘテロアルキル基、及びアシル基から選ばれた一員である。

記号Ｒ³は、（＝Ｏ）、ＳＲ¹¹、ＮＨＲ¹¹及びＯＲ¹¹からなる群から選ばれた一種を表し、ここでＲ¹¹はＨ、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のヘテロアルキル基、アシル基、Ｃ（Ｏ）Ｒ¹²、Ｃ（Ｏ）ＯＲ¹²、Ｃ（Ｏ）ＮＲ¹²Ｒ¹³、Ｃ（Ｏ）ＯＲ¹²、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ¹²）₂、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ¹²Ｒ¹³、Ｃ（Ｏ）ＯＲ¹²、ＳＲ¹²又はＳＩＲ¹²Ｒ¹³Ｒ¹⁴である。記号Ｒ¹²、Ｒ¹³、及びＲ¹⁴は独立してＨ、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のヘテロアルキル基及び置換又は非置換のアリール基を表し、ここでＲ¹²とＲ¹³はこれらの基が付加している窒素原子と共に任意に連結して４から６員からなり、任意に二つ以上の異種原子を含む置換又は非置換の異項環系を形成する。

Ｒ⁴とＲ⁵は独立してＨ、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のアリール基、置換又は非置換のヘテロアリール基、置換又は非置換のヘテロシクロ（異項環）アルキル基、置換又は非置換のアリールアルキル基、ハロゲン、ＮＯ₂、ＮＲ¹⁵Ｒ¹⁶、ＮＣ（Ｏ）Ｒ¹⁵、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ¹⁵Ｒ¹⁶、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ¹⁵、Ｃ（Ｏ）Ｒ¹⁵、ＯＰ（Ｏ）ＯＲ¹⁵ＯＲ¹⁶及びＯＲ¹⁵からなる群から選ばれた一つである。Ｒ¹⁵とＲ¹⁶は独立してＨ、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のヘテロアルキル基、置換又は非置換のアリール基、置換又は非置換のヘテロアリール基、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル基、アリールアルキル基及び置換又は非置換のペプチジル基を表し、ここでＲ¹⁵とＲ¹⁶はそれらが付加している窒素原子と共に任意に連結して４員から６員を持ち、任意に二つ以上の異種原子を含む置換又は非置換の異項環系を形成する。

Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶は随意にその構造中に一つ以上の切断可能なグループを含むことがある。典型的な切断可能なグループにはペプチド、アミノ酸及びジスルフィドが含まれるがこれらに限定されるものではない。

Ｒ⁶は単結合であり、存在してもよく、存在しなくてもよい。Ｒ⁶が存在する場合、Ｒ⁶とＲ⁷は連結してシクロプロピル環を形成し、Ｒ⁷はＣＨ₂−Ｘ¹又は−ＣＨ₂−である。Ｒ⁷が−ＣＨ₂−の場合、それはシクロプロパン環の一成分である。記号Ｘ¹は遊離して行くグループを表す。当業者はＲ⁶とＲ⁷との組合せを、化学原子価の原理に違反しないように組み合わせる。

別の局面において、本発明は酵素によって切断されるグループを含む切断可能なリンカーアームを提供する。切断可能なリンカーは一般に生体内でその構成体に切断可能性を与えるものである。このように、リンカーは，生体内において、例えば、血流中においてこのようなグループを欠く構成体の切断速度に比して昂進された速度で切断する一つ以上のグループを含むことがある。また、リンカーアームと治療薬ならびに診断薬との抱合体も提供される。リンカーは、治療薬のプロドラッグ類似体を形成し、逆に治療薬又は診断薬をターゲッティング剤、検出可能なラベル、または固体の支持体に連結するのに有用である。リンカーは、本発明の細胞毒素を含む複合体中に組み込んでもよい。リンカーは化学式ＩＩに示す一般形式を持つ。

上記化学式において、記号Ｅは酵素で切断され得る部分（例えば、ペプチド、エステル等）を表す。記号Ｒ、Ｒ^I、Ｒ^II及びＲ^IIIは、例えばＨ、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のヘテロアルキル基、ポリ（エチレングリコール）、アシル基、ターゲッティング剤、検出可能なラベルを含むメンバーを表す。目下好適な実施の形態において、カルボキシル部分の酸素原子は検出可能なラベル、治療薬部分又は固体の支持体である部分に繋がれている。

なお、さらなる局面において、本発明はジスルフィド部分に基づく切断可能なリンカーアームを提供する。このように、化学式ＩＩＩに記載の構造を持つ化合物が提供される。

記号Ｒ、Ｒ^I、Ｒ^II、Ｒ^III、Ｒ^IIII、Ｒ^V及びＲ^VIによって表されるラジカルの本体は上記のＲ、Ｒ^I、Ｒ^II及びＲ^IIIについて記載した通りである。

本発明の他の局面、有利な点及び目的は以下の詳細な記述を検討すれば明らかになるであろう。

＜略字、略号＞
本発明で使用されているように、“ＡＬＡ”はアラニンを指し、“ＢＯＣ”はＴ−ブチルオキシカルボニル基を指し、“ＤＤＱ”は２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンを指す。本発明で使用されているように、記号“Ｅ”は酵素で切断可能なグループを表す。“ＥＤＣＩ”は１−（３−ジメチルアミノプロピル−３−エチルカルボジイミドである。本発明で使用されているように、“ＦＭＯＣ”は９−フルオレニルメチロキシカルボニルを指す。“ＬＥＵ”はロイシンである。記号“ＰＭＢ”はパラ−メトキシベンジルを指す。“ＴＢＡＦ”はテトラブチルアンモニウムフルオリドを指す。略号“ＴＢＳＯ”はＴ−ブチルジメチルシリルエステルを指す。“ＴＦＡ”はトリフルオロ酢酸を指す。記号“Ｑ”は治療薬、診断薬又は検出可能なラベルを指す。

＜定義＞
特別に定義されない限り、本発明で使用されているすべての技術的及び科学的用語は、一般に、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されているのと同じ意味を有する。一般に本発明で使用されている命名法ならびに以下に述べる細胞培養、分子遺伝学、有機化学、核酸化学及びハイブリッド形成における実験室での手法は、当分野においては周知されて通常用いられているものである。核酸及びペプチドの合成には標準の技法が使用されている。一般に、酵素の反応及び精製段階は製造者の仕様書に従って行なわれる。その技法及び操作は一般に当分野のならびに種々の文献の通常の方法に従って行なわれ（全般的に、本発明に参照して組み込まれている（サンブローク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、モレキュラークローニング ア ラボラトリーマニュアル（（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）２ｄ Ｅｄ．（１９８９）コールドスプリングハーバー（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，）ニューヨーク 参照）、これらの方法は本発明全体を通じて提供されている。本発明で使用されている命名法及び以下に述べる分析化学ならびに有機合成における実験室操作は、当分野では周知のものであり、且つ、通常使用されているものである。化学合成及び化学分析に対しては標準の技法又はその修飾された方法が使用されている。用語「治療薬」とは、治療的有効量で存在する場合に、哺乳動物に所望の治療効果を惹き起こす化合物を意味することを意図するものである。がん腫の治療のためには、治療薬はまた標的細胞に入り込む能力を持つことが望ましい。

用語「細胞毒素」とは、がん細胞に対して所望の細胞毒性効果を有する治療薬を意味することを意図するものである。範例を示すためでこれらに限るものではないが、典型的な細胞毒素にはコンブレタスタチン、デュオカルマイシン、ＣＣ−１０６５抗腫瘍抗生物質、アンスラサイクリン、及びこれらの関連物質が含まれる。他の細胞毒素にはマイコトキシン、リシンとその類似体、カリセアマイシン、ドキシルビシンとメイタンシノイドが含まれる。

用語「マーカー」は、腫瘍又は他の医学的状態の特徴付け、例えば、ある腫瘍の診断、進行状況、及び腫瘍細胞によって分泌される因子のアッセイに有用な化合物を意味することを意図するものである。マーカーは「診断試薬」のサブセットと考えられる。

用語「ターゲッティンググループ」は、（１）そのグループが付加している実体（例えば、治療薬又はマーカー）を標的細胞、例えば特異なタイプの腫瘍細胞に指向することが出来るか、或いは（２）標的組織、例えば腫瘍において優先的に活性化される部分を意味するものである。ターゲッティンググループは、また分子量の小さいものであってもよく、これには、非ペプチドとペプチドの両方が含まれることを意図する。ターゲッティンググループはまた高分子であってもよく、これにはサッカリド（糖質）、レクチン、受容体、受容体に対するリガンド、ＢＳＡのようなタンパク質、抗生物質等が含まれる。

用語「切断可能なグループ」は、生体内で不安定な分子部分を意味する。好適には、切断可能なグループは、マーカー又は薬物を抱合体の残余の部分から切断することによりマーカー又は治療薬の活性化を可能にする。効力発生の面から定義すると、リンカーは好適には生体内で生物的環境によって切断される。切断方法には制限はなく、例えば、酵素、還元、ｐＨ等の何らかの過程によってもたらされる。好適には、切断可能なグループは、活性化が所望される作用部位で、それは治療作用又はマーカー活性の部位のような標的の細胞（例えば、癌腫細胞）又は組織内或いは近傍の部位であり得るが、起り得るように選択される。このような切断は酵素によるものであり、典型的な酵素により切断可能なグループには、天然のアミノ酸又は天然のアミノ酸を末端に持ち、且つ、そのカルボキシル末端でリンカーに付加しているペプチド配列を含む。切断速度向上度は本発明にとっては重要ではないが、切断可能なリンカーの好適例は、切断可能グループの少なくとも約１０％が、最も好適には少なくとも約３５％が、血流中で投与後２４時間内に切断されるものである。好適な切断可能なグループは、ペプチド結合、エステル連鎖、及びジスルフィド連鎖である。

用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、ここでは互換性を持たせて使用され、アミノ酸残基のポリマー（重合体）を指す。これらの用語は、一つ以上のアミノ酸残基が対応する天然由来のアミノ酸の人工的疑似体であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然由来のアミノ酸ポリマー及び非天然由来のアミノ酸ポリマーに適用される。またこれらの用語は「抗体」も意味する。

用語「アミノ酸」は、天然由来及び合成アミノ酸、ならびに天然由来のアミノ酸と同様に機能するアミノ酸の類似体及び擬似体を指す。天然由来のアミノ酸とは遺伝暗号によりコードされているもの、ならびに後に修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン、及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体とは、天然由来のアミノ酸と同じ基礎的化学構造、例えば、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲグループに結合したα−炭素原子を持つ化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このような類似体は、修飾されたＲグループ（例えば、ノルロイシン）或いはペプチド基幹（バックボーン）を有するが、天然由来のアミノ酸と同じ基本化学構造を維持している。アミノ酸擬似体とは、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然由来のアミノ酸と同様に機能する化合物を指す。用語「非天然アミノ酸」は、上述の２０種の天然由来のアミノ酸の“Ｄ”体を表すことを意図するものである。さらに、用語非天然アミノ酸は、天然アミノ酸の類似体、及び天然アミノ酸の合成による修飾型を含むことを理解すべきである。合成による修飾型には、これらに制限されるものではないが、炭素原子２個まで短縮又は伸長されたアルキレン鎖を持つアミノ酸、随意に置換されたアリール基からなるアミノ酸、及びハロゲン化されたグループ、好適にはハロゲン化されたアルキルならびにアリール基を含むアミノ酸を包含する。本発明のリンカー又は抱合体に付加された場合、アミノ酸は「アミノ酸側鎖」の形となり、ここでアミノ酸のカルボン酸グループはケト基（（Ｃ（Ｏ））で置換されている。このように、例えば、アラニン側鎖は−Ｃ（Ｏ）＝ＣＨ（ＮＨ₂）−ＣＨ₃などである。

「核酸」とは、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチドと、一本鎖あるいは二本鎖型のこれらのポリマーを指す。この用語は、既知のヌクレオチド類似体又は修飾されたバックボーン（基幹）残基或いは連結を含む核酸を包含し、これらのものは合成の、天然由来の、及び非天然のものであって、対照の核酸と同様の結合性を持ち、対照のヌクレオチドと同様に代謝される。このような類似体の例には、制限は無く、ホスホロチオエート、ホスホラミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡｓ）が含まれる。

特に指定の無い限り、特定の核酸配列はまた暗に保存的に修飾されたその変異配列（例えば、縮重コドン置換配列）及び相補配列、ならびにその暗に指示された配列を包含する。具体的には、縮重コドン置換は、一つ以上の選択された（又はすべての）コドンの第3位を混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成してもよい（バザーら、核酸 レス．（Ｂａｔｚｅｒ Ｅｔ Ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．）１９：５０８１（１９９１）；オオツカら、ジャーナル．バイオエル．ケミカル．（Ｏｈｔｓｕｋａ Ｅｔ Ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；ロッソリーニら、モレキュラー セル プロウブス（Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ Ｅｔ Ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｂｅｓ）８：９１−９８（１９９４））。用語「核酸」は、遺伝子、ＣＤＮＡ、ＭＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、及びポリヌクレオチドと互換的に使用される。

記号^^^は、結合として使用されるか又は、ある結合に垂直に示されて、表示された分子部分がその分子の残余の部分、固体支持体等に付加している場所を示す。

用語「アルキル」は、それ自体で或いは別の置換基の一部として、特に言及のない限り、直鎖又は分枝鎖、或いは環状炭化水素ラジカル、又はそれらの組合せを意味し、これらは完全飽和、一価または多価不飽和であってもよく、且つ、指定された数の炭素原子（例えば、Ｃ₁−Ｃ₁₀は１から１０の炭素を意味する）を持つ２価及び多価のラジカルを含むことが出来る。飽和炭化水素ラジカルの例には、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、例えば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等の同族体及び異性体が含まれる。不飽和アルキル基は、一つ以上の二重結合又は三重結合を持つものである。不飽和アルキル基の例には、これらに限定されるものではないが、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−プロピニル、３−プロピニル、３−ブチニル、及びより高級の同族体と異性体が含まれる。用語「アルキル」はまた、特に言及のない限り、以下にさらに詳細に定義される「ヘテロアルキル」のようなアルキルの誘導体を含むことを意図するものである。炭化水素基に限定されるアルキル基は「ホモアルキル」と呼ばれる。

用語「アルキレン」は、それ自身で又は別の置換基の部分として、これに限定されるものではないがいが、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−によって例示されるアルカンに由来する２価のラジカルを意味し、さらに以下に「ヘテロアルキレン」として記載されるグループを含む。典型的なアルキル（又はアルキレン）基は、１から２４個の炭素原子を有し、本発明においては１０個以下の炭素原子を持つ基が好適である。「低級アルキル」又は「低級アルキレン」は、より短鎖のアルキル又はアルキレン基であり、一般に、８個以下の炭素原子を有する。

用語「ヘテロアルキル」は、それ自身で又は別の用語と組み合わせて、特に言及のない限り、安定な直鎖又は分枝鎖、或いは環状炭化水素ラジカル又はそれらの組合せを意味し、所定の数の炭素原子とＯ、Ｎ、Ｓｉ及びＳからなるグループから選ばれた少なくとも１個の異種原子からなり、ここで窒素、炭素及び硫黄原子は随意に酸化されていてもよく、窒素異種原子は随意に４価であってもよい。異種原子Ｏ、Ｎ、Ｓｉ及びＳは、ヘテロアルキル基の如何なる内部位置に置かれてもよく、或いは、アルキル基がその分子の残余の部分に付加する位置に置かれてもよい。ヘテロアルキルの例は、これらに限定されるものではないが、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＮＨ−ＣＨ₃、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｎ（ＣＨ₃）−ＣＨ₃、−ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−ＣＨ₃、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ₃、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｓ（Ｏ）₂−ＣＨ₃、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ₃、−Ｓｉ（ＣＨ₃）₃、−ＣＨ₂−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ₃、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ₃）−ＣＨ₃である。例えば−ＣＨ₂−ＮＨ−ＯＣＨ₃及び−ＣＨ₂−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ₃）₃のように異種原子は２個までなら連続していてもよい。同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、それ自身で又は別の置換基の部分として、これらに限定はされないが、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−及び−ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＮＨ−ＣＨ₂−によって例示されるヘテロアルキル由来の２価のラジカルを意味する。ヘテロアルキレン基については、異種原子は又一方の或いは両方の鎖端を占めることが出来る（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノ等）。用語「ヘテロアルキル」及び「ヘテロアルキレン」は、ポリ（エチレングリコール）及びその誘導体を包含する（例えば、シェアウォーター ポリマーズのカタログ２００１参照）。さらにまた、アルキレン及びヘテロアルキレン結合グループについては、結合グループの配向は、結合グループの構造式が書かれた方向によって示されるものではない。例えば、構造式−Ｃ（Ｏ）₂Ｒ’−は、−Ｃ（Ｏ）₂Ｒ’−及び−Ｒ’Ｃ（Ｏ）₂−の両方を表すものである。

用語「アルキル」又は「ヘテロアルキル」と組み合わせていた用語「低級」は、１から６個の炭素原子を持つ分子部分を指す。

用語「アルコオキシ」、「アルキルアミノ」及び「アルキルチオ」（又はチオアルコオキシ）は通常の意味で使用され、分子の残余の部分にそれぞれ酸素原子、アミノ基、或いは硫黄原子を介して付加したアルキル基を指す。

一般に、「アシル置換基」はまた上記のグループから選択される。本発明で使用されているように、用語「アシル置換基」は、本発明の化合物の多環中核に直接又は間接に付加し、且つ、カルボニル炭素原子の原子価を満たしているグループを指す。

用語「シクロアルキル」及び「ヘテロシクロアルキル」は、それ自身で又は他の用語との組合せで、他に言及のない限り、それぞれ置換又は非置換の「アルキル」及び置換又は非置換の「ヘテロアルキル」の環状種を表す。さらに、ヘテロシクロアルキルについては、異種原子は異項環がその分子の残余の部分に付加している位置を占めることが出来る。シクロアルキルの例には、これらに限定されるものではないが、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチル等が含まれる。ヘテロシクロアルキルの例には、これらに限定されるものではないが、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラニ−２−イル、テトラヒドロフラニ−３−イル、テトラヒドロシエニ−２−イル、テトラヒドロシエニ−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル等が含まれる。環状構造の異種原子及び炭素原子は随意に酸化される。

用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、それ自身で或いは別の置換基の部分として、特に言及されない限り、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素原子を意味する。加えて「ハロアルキル」のような用語は、モノハロアルキル及びポリハロアルキルを含むことを意図するものである。例えば、用語「ハロ（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル」は、これらに限定されるものではないが、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピル等を含むことを意味するものである。

用語「アリール」は、特に言及されない限り、単環又は互いに融合した或いは共有結合した多環（好適には１から３員環）であり得るところの置換又は非置換の多不飽和で芳香族の炭化水素を意味する。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれた１から４種の異種原子の一つを含むアリール基（又は環）を指し、ここで窒素、酸素及び硫黄原子は随意に酸化され、且つ、窒素原子は随意に４級である。ヘテロアリール基は、異種原子を通じて分子の残余の部分に付加することが出来る。アリールとヘテロアリール基の非制限例には、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキザゾリル、４−オキザゾリル、２−フェニル−４−オキザゾリル、５−オキザゾリル、３−イソオキザゾリル、４−イソオキザゾリル、５−イソオキザゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンズイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、及び６−キノリルが含まれる。上記列挙の各アリ−ル及びヘテロアリール環系に対する置換基は、以下の記述の容認される置換基のグループから選択される。「アリール」及び「ヘテロアリール」にはまた、一つ以上の非芳香環系がアリ−ル又はヘテロアリール環系に融合、そうでなければ結合した環系も含まれる。

簡潔に述べると、用語「アリール」は、他の用語と組み合わせて使用する場合（例えば、アリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）、上に定義されたようなアリール及びヘテロアリール環の両方を含む。このように、用語「アリールアルキル」は、炭素原子（例えば、メチレン基）が、例えば酸素原子によって置換されているアルキル基を含むアルキル基（例えば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチル等）にアリール基が付加しているラジカルを含むことを意味する（例えば、フェノオキシメチル、２−ピイリジロキシメチル、３−（１−ナフチロオキシ）プロピル等）。

各上記用語（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」、及び「ヘテロアリール」は、上に示されたラジカルの置換及び非置換型の両方を含む。各タイプのラジカルに対する好適な置換基を以下に示す。

アルキル及びヘテロアルキルラジカル（しばしばアルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、及びヘテロシクロアルケニルと呼ばれるグループを含む）は、全般的に、それぞれ、「アルキル置換基」及び「ヘテロアルキル置換基」と呼ばれ、それらの置換基は、それらに限定されるものではないが、以下のものから選ばれた多様なグループの一種以上であってもよい、即ち、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ₂Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）₂Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）₂Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）₂ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ₂Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ₂を数にしてゼロから（２ｍ’＋１）、ここでｍ’はこのようなラジカル中の炭素原子の総数である。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、各々好適に独立してハロゲン、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、例えば、１−３個のハロゲンで置換されたアリール、置換又は非置換のアルキル、アルコオキシ、又はチオアルコオキシ或いはアリールアルキル基を指す。例えば、本発明の化合物が１個以上のＲグループを含む場合、各Ｒグループは、これらのグループが一つ以上存在する場合、それぞれＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’であるように独立して選ばれる。Ｒ’とＲ’’が同一の窒素原子に付いている場合、これらのグループは窒素原子と結合して５−、６−、又は７−員環を形成することが出来る。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’は、それらに限定されるものではないが、１−ピロリジニル及び４−ピロリジニルを含むことを意味する。上述の置換基に関する論議から、当業者は、用語「アルキル」が、ハロアルキル（例えば、ＣＦ₃及び−ＣＨ₂ＣＦ₃）及びアシル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ₃、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ₃、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₃等）のような水素グループ以外のグループに結合した炭素原子を含むグループを包含することを意味するということが理解できる。

アルキルラジカルについて記述された置換基と同様に、アリール置換基及びヘテロアリール置換基は一般にそれぞれ「アリール置換基」及び「ヘテロアリール置換基」と呼ばれ、多様であり、例えば、ハロゲン、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ₂Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）₂Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）₂Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）₂ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ₂Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ₂、−Ｒ’、−Ｎ₃、−ＣＨ（Ｐｈ）₂、フルオロ（Ｃ₁−Ｃ₄）アルコオキシ、及びフルオロ（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキルから、ゼロより芳香環系上の開放原子価の総数までの範囲の数で選択され、ここでＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、好適には独立して水素、（Ｃ₁−Ｃ₈）アルキルとヘテロアルキル、非置換のアリール及びヘテロアリール、（非置換アリール）−（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、及び（非置換アリール）オキシ−（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキルから選択される。例えば、本発明の化合物が一つ以上のＲグループを含む場合、これらのグループが一つ以上存在する時、各Ｒグループは、それぞれがＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’であるように独立して選択される。

アリール又はヘテロアリール環の隣接する原子上のアリール置換基の二つは、随意に、化学式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）_q−Ｕ−の置換基で置き換えてもよく、ここでＴとＵは独立して−ＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’又は単結合であり、ｑは０から３の整数である。その代わりに、アリール又はヘテロアリール環の隣接する原子上のアリール置換基の二つは、随意に、構造式−Ａ−（ＣＨ₂）_r−Ｂ−の置換基で置き換えてもよく、ここでＡとＢは独立して−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）₂−、−Ｓ（Ｏ）₂ＮＲ’−又は単結合であり、ｒは１から４の整数である。このように形成された新しい環の単結合のうちの一つは随意に一つの二重結合で置き換えてもよい。代わりに、アリール又はヘテロアリール環の隣接する原子上の置換基の二つは、随意に、化学式−（ＣＲＲ’）_s−Ｘ−（ＣＲ’’Ｒ’’’）_dの置換基で置き換えてもよく、ここでＸは−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）₂−、又は−Ｓ（Ｏ）₂ＮＲ’−である。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’及びＲ’’’は、好適には独立して水素又は置換或いは非置換の（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルから選択される。

本発明で使用されているように、用語「異種原子」は酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）及びケイ素（Ｓｉ）を含む。

記号「Ｒ」は置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、及び置換又は非置換のヘテロシクリル（複素環式）グループから選ばれた置換基を表す一般的略号である。

用語「薬剤学的に許容可能な塩」には、本発明に記載の化合物上に見出される特定の置換基に依存して、比較的無毒な酸又は塩基を用いて調製された活性化合物の塩が含まれる。本発明の化合物が比較的酸性の機能性を含む場合、塩基付加塩は、このような化合物の中性型を清潔な或いは適切な不活性溶媒中で十分量の所望の塩基と接触させることにより獲得することができる。薬剤学的に許容可能な塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、又はマグネシウムの塩、或いは類似の塩を含む。本発明の化合物が、比較的塩基性の機能性を含む場合、酸付加塩は、このような化合物の中性型を、清潔な或いは適切な不活性溶媒中で十分量の所望の酸と接触させることにより獲得することができる。薬剤学的に許容可能な酸付加塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、燐酸塩、燐酸水素塩、燐酸二水素塩、硫酸塩、硫酸水素塩、沃化水素酸塩、亜燐酸塩等のような無機酸から誘導された塩、ならびに酢酸塩、プロピオン酸塩、イソ酪酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、フマル塩酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トリルスルホン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩等のような比較的無毒な有機酸から誘導された塩を含む。また、アルギン酸塩等のアミノ酸塩、及びグルクロン酸塩又はガラクツロン酸塩等のような有機酸塩も含まれる（例えば、ベルゲら、“ファーマセウティクル ソルツ”ジャーナル オブ ファーマセウィカル サイエンス １９７７，６６，１−１９参照（Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ））。本発明のある特異な化合物は、塩基性及び酸性の機能性の両方を備えていて、これら化合物が塩基又は酸付加塩のいずれにも転化することが出来る。

中性型の化合物は、好適には、通常の方法により塩を塩基又は酸と接触させ、元の化合物を分離することにより再生される。原型の化合物は、種々の塩の形態と極性溶媒中の溶解性のようなある種の物理的性質において異なるが、それ以外では、塩は本発明の目的に対して化合物の原型と同等である。

塩型に加えて、本発明はプロドラッグ型の化合物を提供する。本発明に記載のプロドラッグは、生理的条件下で化学変化を受けて本発明の化合物を提供する化合物である。加えて、プロドラッグは、生体外（エキソビボ）環境で化学的又は生化学的方法により本発明の化合物に転化することが出来る。例えば、プロドラッグは、適当な酵素又は化学的試薬と共に経皮パッチ（貼布）保持体に貯蔵された場合、本発明の化合物に徐々に転化され得る。

本発明の一定の化合物は、水和型を含み、非溶媒和型ならびに溶媒和型で存在し得る。一般に、溶媒和型は非溶媒和型と同等であり、本発明の範囲に含まれる。本発明の一定の化合物は、多様な結晶形又は非結晶形で存在することがある。一般に、すべての物理的形態は、本発明で企図される使用に対しては同等であり、本発明の範囲内にあることを意図するものである。

本発明の一定の化合物は、不斉炭素原子（光学中心）又は二重結合を有し、ラセミ体、ジアステレオマー、ゲノム異性体及び個々の異性体は、本発明の範囲に含まれる。

本発明の化合物は、又、このような化合物を形成する一つ以上の原子において、不自然な割合の原子同位体を含んでもよい。例えば、これらの化合物は、トリチウム（³Ｈ）、ヨード−１２５（¹²⁵Ｉ）又は炭素−１４（¹⁴Ｃ）のような放射活性同位元素で放射性同位体ラベルしていてもよい。本発明の化合物のすべての同位元素による変異物は、放射活性であってもなくても、本発明の範囲内に含まれることを意図するものである。

「付加する部分」又は「ターゲッティンググループを付加するための部分」は、ターゲッティンググループのリンカーへの付加を可能にする部分を指す。典型的な付加する部分は、説明のためで限定されるものではないが、アルキル、アミノアルキル、アミノカルボニルアルキル、カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルキル−マレイン酸イミド、アルキル−Ｎ−ヒドロキシルコハク酸イミド、ポリ（エチレングリコール）−マレイン酸イミド、及びポリ（エチレングリコール）−Ｎ−ヒドロキシルコハク酸イミドを含み、これらはすべてさらに置換されてもよい。リンカーは、又、ターゲッティンググループに実際に付加している付加部分を持つことも出来る。

本発明で使用されているように、用語「遊離するグループ」は、反応において基質から切断される基質の部分を指す。

「抗体」は、一般に、抗原に特異的に結合して認識する免疫グロブリンからの骨組領域又はその断片からなるポリペプチドを指す。認識される免疫グロブリンは、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン及びミュー定常領域鎖ならびに無数の免疫グロブリン可変領域鎖を含む。Ｌ鎖はカッパ又はラムダとして分類される。Ｈ鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、又はイプシロンとして分類され、それらは順番にそれぞれ免疫グロブリンのクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥを定義する（特徴を明確にする）。

典型的な免疫グロブリン（抗体）の構造単位は四量体からなる。各四量体は相同の二対のポリペプタイド鎖からなり、各対は一本の「Ｌ鎖（軽鎖）」（約２５ｋＤａ）と一本の「Ｈ鎖（重鎖）」（約５０−７０ｋＤａ）を有する。各鎖のＮ末端は主として抗原認識の役割を担う約１００から１１０以上のアミノ酸からなる可変領域を定義する。用語可変Ｌ鎖（ＶＬ）及び可変Ｈ鎖（ＶＨ）はそれぞれこれらＬ鎖とＨ鎖を指す。

抗体は、例えば、完全な免疫グロブリンとして、又は種々のペプチダーゼによる消化で生成される多数の十分に特長づけられた断片として存在する。このように、例えば、ペプシンは抗体をヒンジ領域におけるジスルフィド連結の下部で消化してそれ自身ＶＨ−ＣＨ１にジスルフィド結合で連結する軽鎖であるＦａｂ’の二量体のＦ（ａｂ’）₂を生成する。Ｆ（ａｂ’）₂は緩和な条件下で還元されてヒンジ領域のジスルフィド連結を分解し、それによってＦ（ａｂ’）₂二量体をＦａｂ’モノマー（単量体）に転化する。Ｆａｂ’単量体は本質的にヒンジ領域の一部を伴うＦａｂである（基礎免疫学（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）ポール編、サードエディション １９９３参照（Ｐａｕｌ ｅｄ．，３^rd ｅｄ．））。種々の抗体断片が一つの完全な（無傷の）抗体の消化に関して定義されているが、当業者はこのような断片が化学的に又は組換えＤＮＡ方法論を用いて新たに合成され得ること認識するであろう。このように、抗体なる用語はまた、本発明で使用されているように、抗体全体の修飾によって生成された抗体断片又は組換えＤＮＡ方法論を用いて新たに合成された抗体断片（例、短鎖Ｆｖ）を含む。

モノクローナル又はポリクローナル抗体の調製には当分野で既知の如何なる技法を使用してもよい（例えば、コーラー＆ミルスタイン ネイチャー（Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ）２５６：４９５−４９７（１９７５）、コズボールら、免疫学 トゥディ（Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ）４：７２（１９８３）、コールら（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．）ｐｐ．７７−９６ イン モノクロニカル アンチボディース アンド キャンサー セラピー アラン アール．リス インク．（ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）（１９８５）参照）。

ポリクローナル抗体の生成法は当業者には周知のことである。近交系統のマウス（例えばＢＡＬＢ／Ｃマウス）又はウサギをフロインドのアジュバントのような標準アジュバントと標準の免疫プロトコールを用いてタンパク質で免疫する。動物の免疫原標品に対する免疫応答を試料血液を採取しベーターサブユニットに対する反応性の抗体価を決定して測定する。免疫原に対する抗体の適度に高い抗体価が得られた場合、血液を動物から採取して抗血清を調製する。もし望むのであれば、抗血清をさらに分画して該タンパク質に対して反応性のある抗体の濃縮を実施することが出来る。

モノクローナル抗体は、当業者が熟知している種々の技法によって得られる。簡単に述べると、所望の抗原で免疫した動物からの脾臓細胞を通常は骨髄腫細胞との融合により不死化する（コーラー＆ミルスタイン ユーラ． ジャーナル インミューモル．６：５１１−５１９（１９７６）参照（Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）。不死化の別法にはエプスタイン・バーウイルス、がん遺伝子、又はレトロウイルスあるいは当分野で周知の他の方法による形質転換が含まれる。

なおさらなる好適な実施の形態において、抗体はヒトの又はヒト化抗体である。「ヒト化」は、典型的にそのポリペプチド配列の機能を実質的に変えることなくアミノ酸配列を実存するヒトの配列に変更することによってヒトにおける免疫活性を最小限にするために修飾された非ヒトポリペプチド配列を指す（ジョーンズら、ネイチャー ３２１：５２２−５２５（１９８６）（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ）及び公開英国特許出願第８７０７２５２号参照）。「ヒト」抗体は完全にヒト抗体遺伝子由来のポリペプチド配列からなり、例えばファージディスプレイ法により又はヒトの免疫グロブリン遺伝子を含むように遺伝的に変更されたマウスから得ることが出来る。

「固体支持体」は、本発明で使用されているように、選択された溶媒系では実質上不溶か又はそれが可溶の選択された溶媒系から容易に（例えば沈殿により）分離出来る物質を指す。本発明の実施に有用な固体支持体は活性化されて又は活性化能を持っていて選択された物質種の該固体支持体への結合を可能にするグループを含有することが出来る。固体支持体は又例えば本発明の個々の又は一種以上の化合物が結合した基板、チップ、ウエハース又はウエル（Ｗｅｌｌ）であってもよい。

本発明で用いる「反応性機能グループ」は、これに限定されるものではないが、オレフィン、アセチレン、アルコール、フェノール、エーテル、酸化物、ハロゲン化物、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、シアン酸塩、イソシアン酸塩。チオシアン酸塩、イソチオシアン酸塩、アミン、ヒドラジン、ヒドラゾーン、ヒドラジド、ジアゾ、ジアゾニウム、ニトロ、ニトリル、メルカプタン、スルフィド、ジスルフィド、スルフォキシド、スルホン、スルホン酸、スルフィン酸、アセタール、ケタール、無水物、硫酸塩（エステル）、スルフェン酸イソニトリル、アミジン、イミド、イミデート、ニトロン、ヒドロキシルアミン、オキシム、ヒドロキサミン酸、チオヒドロキサミン酸、アレン、オルトエステル、亜硫酸塩、エナミン、イナミン、尿素、プソイド尿素、セミカルバジド、カルボジイミド、カルバミン酸塩、イミン、アジド、アゾ化合物、アゾオキシ化合物、及びニトロソ化合物を含むグループを指す。反応性機能グループは又バイオ抱合体を調製するために使用されるグループ、例えばＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル、マレイン酸イミド等を含む（例えば、ハーマンソン バイオコンジュゲート テクニックス アカデミック プレス サンディエゴ １９９６参照（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ））。各これら機能性グループの調製法は当分野で周知のものであり、特定の目的のためのそれらの応用又は修飾は当業者の能力でなし得ることである（例えば、サンドラー アンド カノウ編 オーガニック ファンクショナル グループ プレパレイション アカデミック プレス サンディエゴ １９８９参照（Ｓａｎｄｌｅｒ ａｎｄ Ｋａｎｏ，ｅｄｓ．Ｏｒｇａｎｉｃ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ））。

本発明の化合物は単一の異性体（例えば、エナンチオマー、シス−トランス、ポシショナル、ジアステレオマー）又は異性体の混合物として調製される。好適な実施の形態において、これらの化合物は実質上単一の異性体として調製される。実質上単一の異性体として純粋な化合物の調製法は当分野では既知のものである。例えば、エナンチオマーが濃縮された混合物及び純粋なエナンチオマー化合物は、エナンチオマーとして純粋な合成中間体を用いキラル中心の立体化学をそのまま残すか、或いは結果としてその完全な転換に至る反応と組み合わせて調製することが出来る。別法として、合成過程にある最終産物又は中間体は単一の立体異性体に分割することが出来る。特定の立体中心を反転又は無変化のままで残す技法及び立体異性体混合物の分割技法は当分野では周知であり、当業者は特定の状況に対する適切な方法を選択することが出来る。一般的には、ファーニスら（編）、ヴォーゲルス エンサイクローペディア オブ プラクティカル オーガニック ケミストリー フィフスエディション（Ｆｕｒｎｉｓｓ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｖｏｇｅｌ’ｓ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５^th Ｅｄ．）、ロングマン サイエンティフィック アンド テクニカル リミテッド エセックス（Ｌｏｎｇｍａｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｌｔｄ．，Ｅｓｓｅｘ）１９９１，ｐｐ．８０９−８１６、及びへーラー エシーシー．ケム．レス．２３：１２８（１９９８）（Ｈｅｌｌｅｒ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．）参照。

＜細胞毒素（細胞障害抗体）＞
多くの治療薬、特に、がんの化学療法に特効を示す治療薬はしばしば生体内で急性毒性、特に骨髄及び粘膜毒性ならびに慢性の心臓と神経に対する毒性を表す。このような高い毒性はこれら治療薬の適用を制限しかねない。より安全でより特異的な治療薬、特に抗腫瘍剤の開発を行うことは、腫瘍細胞に対するより大きな効果とこれら製品の副作用（毒性、非腫瘍細胞の破壊等）の数と激烈さの減少のために望ましい。

より選択性のある細胞毒性薬物の探索は何十年の間極めて活発であり、用量を制限する毒性（即ち、細胞毒素が正常組織に及ぼす有害な活性）はがん治療における失敗の主要原因の一つである。例えば、ＣＣ−１０６５デュオカルマイシンは極めて強力な細胞毒素であることが知られている。これら化合物類似体を評価する試みが多数行われてきたが、しかし、たいていの物は治療薬用量で有害な毒性を示すことが判明した。従って、目標は、毒性及び非腫瘍細胞の破壊のような不都合な副作用を減少する一方で、腫瘍細胞に対する効果増大のため抗腫瘍剤の特異性を改善することであった。

研究は、プロドラッグ、即ち、その構造の生体内で一定の化学的又は酵素による修飾によって医薬（活性の治療化合物）に転化する能力のある化合物の形態をしている新規治療薬の開発に集中してきている。毒性軽減の目的には、この転化は循環系又は非標的組織よりも薬物の作用部位又は標的組織に限定されることが好ましい。しかしながら、プロドラッグさえも、その多くが、プロドラッグが患者体内の所望の部位に到達する前に、プロドラッグを分解又は活性化する酵素の存在のために血中及び血清中で安定性が低いという特徴が判明しているので問題がある。

それ故、当分野での進歩にも拘わらず、哺乳類及び特にヒトの治療のために改善された治療薬の開発、より具体的には、高度の作用特異性、低減された毒性、及び同様の構造の既知化合物に比して血液中での改善された安定性を示す細胞毒素及び関連プロドラッグの開発の要望が引き続いている。

第一の局面において、本発明は化学式Iに記載の構造を有する細胞毒性化合物を提供する。

ここで環系Ａは置換又は非置換のアリール基、置換又は非置換のヘテロアリール基、及び置換又は非置換のヘテロシクロアルキル基から選択された１種である。典型的な環系はフェニル及びピロール（環）を含む。

記号Ｅ及びＧは水素、非置換のアルキル基、置換又は非置換のヘテロアルキル基、異種原子、又は単結合を表す。Ｅ及びＧは随意に連結して置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール及び置換又は非置換のヘテロシクロアルキルから選択された環系を形成する。

記号ＸはＯ、Ｓ、ＮＲ²³から選ばれた一員を表す。Ｒ²³は水素、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のヘテロアルキル基及びアシル基から選ばれた一種である。

記号Ｒ³は（＝Ｏ）、ＳＲ¹¹、ＮＨＲ¹¹及びＯＲ¹¹から選ばれた一員を表し、ここでＲ¹¹は水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、アシル、Ｃ（Ｏ）¹²、Ｃ（Ｏ）ＯＲ¹²、Ｃ（Ｏ）ＮＲ¹²Ｒ¹³、Ｃ（Ｏ）ＯＲ¹²、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ¹²）₂、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ¹²Ｒ¹³、Ｃ（Ｏ）ＯＲ¹²、ＳＲ¹²又はＳｉＲ¹²Ｒ¹³Ｒ¹⁴である。記号Ｒ¹²、Ｒ¹³、及びＲ¹⁴は独立して水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル及び置換又は非置換のアシルを表し、ここでＲ¹²とＲ¹³はそれらが付加する窒素原子と共に随意に連結して４から６員環からなり随意に２個以上の異種原子を含む置換又は非置換のヘテロシクロアルキル環系を形成する。一つ以上のＲ¹²、Ｒ¹³、又はＲ¹⁴はその構造中に切断可能なグループを含むことが出来る。

Ｒ⁴とＲ⁵は水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ₂、ＮＲ¹⁵Ｒ¹⁶、ＮＣ（Ｏ）Ｒ¹⁵、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ¹⁵Ｒ¹⁶、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ¹⁵、Ｃ（Ｏ）Ｒ¹⁵、ＳＲ¹⁵及びＯＲ¹⁵から独立に選ばれたメンバーである。Ｒ¹⁵とＲ¹⁶は独立して水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のペプチジルを表し、ここでＲ¹⁵とＲ¹⁶はそれらが付加する窒素原子と共に随意に連結して４から６員からなり随意に２つ以上の異種原子を含む置換又は非置換のヘテロシクロアルキル環系を形成する。

Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶は随意に一つ以上の切断可能なグループをそれらの構造中に含む。典型的な切断可能なグループには、これらに限定されるものではないが、ペプチド、アミノ酸及びジスルフィドが含まれる。

別の典型的な実施の形態において、本発明は化学式Ｉに記載の化合物を提供し、ここでＲ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶のうちの少なくとも一つは以下の構造式からなり、

ここでＲ³⁰は水素、置換又は非置換のアルキル及び置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれた一員である。記号Ｒ³¹及びＲ³²は独立して水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール及び置換又は非置換のヘテロアリールを表し、或いはＲ³¹及びＲ³²は両方で以下の化学式となり、

ここでＲ³³及びＲ³⁴は独立して水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール又は置換又は非置換のヘテロアリールを表す。記号Ｒ³⁵は置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、又はＮＲ³⁶を表す。Ｒ³⁶は水素、置換又は非置換のアルキル及び置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれた一員である。Ｘ⁵はＯ又はＮＲ¹⁷であり、ここでＲ¹⁷は水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれた一員である。なお実施の形態において、少なくともＲ³³とＲ³⁴のうちの一つはＬ⁵Ｘ⁶から選ばれ、ここで「Ｌ」及び「Ｘ」の本体は一般に本発明に記載の通りである。

典型的な実施の形態において、上記構造中のＲ³¹、Ｒ³²、Ｒ³³及びＲ³⁴のうちの少なくとも一つは保護された又は保護されていない反応性機能グループ、ターゲッティング剤又は検出可能なラベルを含む部分で置換されたアリール又はヘテロアリール部分である。

なおさらなる典型的な実施の形態において、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶のうちの少なくとも一つは、構造式Ｉに記載の化合物の別の分子への抱合に適当な反応性グループを持つ。さらなる典型的な実施の形態において、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶は置換又は非置換のアルキル及び置換又は非置換のヘテロアルキルから独立的に選ばれ、且つ、アルキル又はヘテロアルキル部分の遊離末端に反応性機能的グループを有する。Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶は、そのうち一つ以上が別種のグループ、例えば、ターゲッティング剤、検出可能なラベル、固体支持体等に抱合されていてもよい。

本発明における論議から明らかなように、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶のうち少なくとも一つが反応性機能的グループである場合、そのグループは化学式Ｉに記載の化合物ともう一つの分子種との間の結合の成分であり得る。Ｒ¹⁵とＲ¹⁶のうちの少なくとも一つが構造式Ｉに記載の化合物と、もう一つの分子種との間の結合であるところの典型的な実施の形態において、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶のうちの少なくとも一つは酵素によって切断される部分である。

さらなる典型的な実施の形態において、Ｒ⁴とＲ⁵のうち少なくとも一つは以下の構造である。

上記化学式において、記号Ｘ²及びＺ¹はＯ、Ｓ、ＮＲ²³から独立に選ばれる１種を表す。グループＲ¹⁷とＲ¹⁸は水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のヘテロアルキル、ハロゲン、ＮＯ₂、ＮＲ¹⁹Ｒ²⁰、ＮＣ（Ｏ）Ｒ¹⁹、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ¹⁹、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ¹⁹、Ｃ（Ｏ）Ｒ¹⁹、ＳＲ¹⁹又はＯＲ¹⁹から独立に選ばれる。

記号Ｒ¹⁹とＲ²⁰は独立して、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のペプチジルを表し、ここでＲ¹⁹とＲ²⁰はそれらが付加している窒素原子と共に随意に連結して４から６員環からなり随意に２つ以上の異種原子を含み、Ｚ¹がＮＨの場合、Ｒ¹⁷とＲ¹⁸は共にＨではなく、Ｒ¹⁷はＮＨ₂ではないという条件で、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル環系を形成する。本発明を通して、記号Ｒ¹⁹とＲ²⁰はまたＲ⁴とＲ⁵に対して記載されたグループを含む。このように、例えば、すぐ前に記載され連続して連結されている二つ以上の融合フェニル−異項環系又はリンカーと組み合わされた融合環を持つ化合物を提供することは本発明の範囲内にある。なお、リンカーの存在するこれらの実施の形態において、リンカーはＲ⁴又はＲ⁵置換基として、或いはＲ¹⁷又はＲ¹⁸置換基として存在してもよい。

Ｒ⁶は単結合であり、存在してもしなくてもよい。Ｒ⁶が存在する場合、Ｒ⁶とＲ⁷は連結
してシクロプロピル環を形成する。Ｒ⁷はＣＨ₂−Ｘ¹又は−ＣＨ₂−である。Ｒ⁷が−ＣＨ₂−である場合、それはシクロプロパン環の一成分である。記号Ｘ¹は遊離するグループを表す。Ｒ⁶とＲ⁷の組合せは化学原子価の原理に違反しないように解釈処理される。

６員環内の曲線は環が一つ以上の不飽和結合を有し、芳香族環である可能性を示唆している。このように、下記のような環構造及び関連構造は化学式Ｉの範囲内にある。

及び

典型的な実施の形態において、環系Ａは置換又は非置換のフェニル環である。環系Ａは本発明の定義の節に記載された１個以上のアリールグループ置換基で置換されていることが好ましい。好適な実施の形態においてフェニル環はＣＮ部分で置換されている。

別の典型的な実施の形態において、本発明は化学式ＩＶに記載の構造を持つ化合物を提供する。

この実施の形態において、ラジカルＲ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶、Ｒ⁷、とＸの実体は実質的に上記の通りである。記号ＺはＯ、Ｓ、ＮＲ²³から独立に選ばれた一員である。記号Ｒ²³は水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル及びアシルから選ばれた一員を表す。ＸとＺが共にＮＲ²³である場合、各Ｒ²³は独立的に選ばれる。記号Ｒ¹は水素、置換又は非置換の低級アルキル、又はＣ（Ｏ）Ｒ⁸を表す。Ｒ⁸はＮＲ⁹Ｒ¹⁰、ＮＲ⁹ＮＨＲ¹⁰及びＯＲ⁹から選ばれた一員である。Ｒ⁹とＲ¹⁰は水素、置換又は非置換のアルキル及び置換又は非置換のヘテロアルキルから独立に選ばれる。ラジカルＲ²は水素、或いは置換又は非置換の低級アルキルである。Ｒ²が置換されたアルキルである場合、それが過フッ化アルキル、例えば、ＣＦ₃以外であることが一般に望ましい。

上述のように、Ｘ¹は遊離して行くグループであってもよい。有用な遊離するグループには、ハロゲン化物、アジド、スルホン酸エステル（例えば、アルキルスルホニル、アリールスルホニル）、オキソニウムイオン、アルキル過塩素酸エステル、アンモニオアルカンスルホン酸エステル、アルキルフロオロスルホネート及びフッ化化合物（例えば、トリフレート、ノナフレート、トレスレート）等が含まれるが、これらに限定されるものではない。特定の一連の反応条件に適切なこれら及び他の分離するグループの選択は、当業者には容易になし得る能力の範囲内のことである（例えば、マーチ ジャーナル．アドバンスド オーガニック ケミストリー セカンドエディション、ジョン ウィリー アンド ソンズ，１９９２（Ｍａｒｃｈ Ｊ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２^nd Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ），サンドラー エスアール カロ ダブエリュー．オーガニック ファンダメンタル グループ プレパレーションズ セカンドエディション アカデミック プレス インク．１９８３（Ｓａｎｄｌｅｒ，ＳＲ，Ｋａｒｏ，Ｗ．，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，２^nd Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）及び、ウエイド エルジー コンペンディウム オブ オーガニック シンセティック メソッズ， ジョン ウィリー アンド ソンズ １９８０参照（Ｗａｄｅ，ＬＧ，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）。

典型的な実施の形態において、Ｒ¹はＣＯ₂ＣＨ₃のようなエステル部分である。さらなる実施の形態において、Ｒ²は置換又は非置換の低級アルキル基であり、置換又は非置換されていてもよい。目下、好適な低級アルキル基はＣＨ₃である。なおさらなる実施の形態において、Ｒ¹はＣＯ₂ＣＨ₃であり、Ｒ²はＣＨ₃である。

なお別の実施の形態において、Ｒ⁴とＲ⁵は、水素、ハロゲン、ＮＨ₂、Ｏ（ＣＨ₂）₂Ｎ（Ｍｅ）₂及びＮＯ₂から独立に選ばれたメンバーである。Ｒ⁴とＲ⁵は水素又はＯＣＨ₃でないことが好ましい。

なお別の実施の形態において、本発明は、化学式Ｖ及びＶＩに記載の構造を持つ化合物を提供する。

及び

上記化学式において、ＸはＯ、且つＺはＯであることが好ましい。

化学式Ｉに記載の化合物は又ペプチジルリンカーを置換基として含んでもよい。リンカーは該化合物上の如何なる所望の位置に配置されてもよい。典型的な実施の形態において、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶のうち少なくとも一つは、化学式ＶＩＩ式に記載の構造を持つ。

以下に続く論議において、化学式ＶＩＩに記載のリンカーはＲ¹¹として例示される。論議の焦点は明快性を促進するためだけにあり、当業者にはリンカーが本発明の化合物の如何なる位置にもあり得ることは明らかである。

化学式ＶＩＩにおいて、記号Ｘ³は保護された又は保護されない反応性機能的グループ、検出可能なラベル或いはターゲッティング剤を表す。グループＬ¹及びＬ²は置換又は非置換のアルキルと置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれたリンカーである。典型的なリンカーＬ¹及びＬ²はポリ（エチレングリコール）部分からなる。これらのリンカーは存在することもしないこともあり、従ってｑとｖは０と１から独立に選ばれた整数である。記号ＡＡ¹、ＡＡ^b及びＡＡ^b+1は天然の、ならびに非天然のα−アミノ酸を表す。ＡＡ¹とＡＡ^b間の破断線は何らかの数のアミノ酸がこれら二つの列挙されたアミノ酸種の中間体であり得ることを示唆している。典型的な実施の形態において、括弧内のアミノ酸の総数（“ｂ”）は約０から約２０である。さらなる典型的な実施の形態において、“ｂ”は約１から約５の整数である。

化学式ＶＩＩに記載の典型的なリンカーが化学式ＶＩＩＩに示されている。

ここで記号Ｒ²¹とＲ²²は置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、検出可能なラベル及びターゲッティング剤を独立して表す。グループＲ¹²とＲ²⁵は水素、置換又は非置換の低級アルキル、アミノ酸側鎖、検出可能なラベル及びターゲッティング剤から独立して選ばれる。ＡＡ¹、ＡＡ^b及びＡＡ^b+1によって表される上記構造のアミノ酸部分は実質的に化学式ＶＩＩの該当部分と同じである。

別の実施の形態において、化学式Ｉに記載の化合物は、化学式ＩＸに記載の構造を持つリンカーを含む。

ここで記号Ｘ⁴は保護された又は保護されない反応性機能的グループ、検出可能なラベル及びターゲッティング剤を表す。記号Ｌ³及びＬ⁴は置換又は非置換のアルキル或いは置換又は非置換のヘテロアルキルであるリンカーを表す。リンカーのアミノ酸部分は実質的に化学式ＶＩＩについて記載の該当部分と同じである。典型的なリンカーはその枠組みの中にポリ（エチレングリコール）類似体を含む。各リンカーは存在することも又はしないこともあり、従ってｐとｑは０と１から独立に選ばれた整数である。

化学式ＩＸに記載のリンカーは、化学式Ｉに記載の分子の如何なる位置に置換されてもよい。典型的な実施の形態において、化学式ＩＸのリンカーはＲ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶から選ばれる１種である。当業者はまた、このリンカーが一つ以上のＲ¹⁷又はＲ¹⁸の成分、又は化学式Ｉに記載の化合物の高級類似体における同様の部位であってもよいことが判る。

化学式ＩＸに記載の一つの典型的なリンカーが化学式Ｘに示されている。

化学式Ｘにおいて、Ｒ²⁷とＲ²⁸は、水素、置換又は非置換の低級アルキル、アミノ酸側鎖、検出可能なラベル及びターゲッティング剤の中から独立に選ばれる１種である。記号“ｓ”は、選ばれて何らかの所望の長さのリンカーを提供し得る整数を表す。目下のところ、“ｓ”が０から６の、さらに好適には１と５の間の整数であるリンカーが好ましい。

なお別の典型的な実施の形態において、本発明は、化学式ＸＩに示されているような、その構造中に切断可能なジスルフィド部分を含む一つ以上のリンカーで置換された化学式Ｉに記載の分子を提供する。

ここでＸ⁴は、保護された反応性機能的グループ、保護されていない反応性機能的グループ、検出可能なラベル及びターゲッティング剤の中から選ばれる１種である。Ｌ³は、置換又は非置換のアルキル及び置換又は非置換のヘテロアルキルグループ、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキルの中から選ばれた一つのリンカーである。Ｌ⁴は、置換又は非置換のアルキル及び置換又は非置換のヘテロアルキルグループ、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のシクロアルキルの中から選ばれた一つのリンカーである。記号ｐとｔは、０と１とから独立に選ばれた整数を表す。

化学式ＸＩに記載の典型的な実施の形態において、リンカーＬ⁴は置換又は非置換のエチレン部分である。

グループＸ⁴は、Ｒ²⁹、ＣＯＯＲ²⁹、Ｃ（Ｏ）ＮＲ²⁹、及びＣ（Ｏ）ＮＮＲ²⁹から選ばれる１種であり、ここでＲ²⁹は、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、及び置換又は非置換のヘテロアリールの中から選ばれる１種である。

なお別の典型的な実施の形態において、Ｒ²⁹は、Ｈ（水素）、ＯＨ、ＮＨＮＨ₂から選ばれる１種である。

及び

ここで、Ｒ³⁰は、反応性機能的グループを末端に持つ置換又は非置換のアルキル、機能的なグループを末端に持つ置換又は非置換のヘテロアリール、及び−（Ｌ³）_pＸ⁴を表し、Ｌ³、Ｘ⁴及びｐは独立して選ばれる。

また、例えば、本発明の化合物又はその類似体の二量体、三量体、四量体及びより高分子の類似体のような分子種を含むポリ又は多原子価分子種である本発明の化合物は本発明の範囲内にある。ポリ又は多原子価分子種は、本発明の単一の分子種又は一つ以上の分子種から組み立てることが出来る。例えば、二量体（ダイマー）構成体は「ホモダイマー又はヘテロダイマー」であり得る。さらに、本発明の化合物或いはその反応性類似体がオリゴマー又はポリマーの枠組み（例、ポリリジン、デキストラン、ヒドロキシエチル澱粉等）に付加しているポリ又は多原子価構成体は本発明の範囲内にある。この枠組みは好適には多機能である（即ち、本発明の化合物付加のための反応性部位の配列を有する）ことが好ましい。さらに、この枠組みは、本発明の単一の分子種又は本発明の一つ以上の分子種で誘導体化することも出来る。

さらに、本発明は、機能化されて、同様には機能化されていない類似化合物と比べ水溶性が高められた化合物を提供する化合物を含む。このように、本発明に記載されている置換基は何であれ、水溶性の高められた類似のラジカルで置き換えることが出来る。例えば、ヒドロキシル基をジオールで、アミンを四級アミン、ヒドロキシアミン又は同様のさらに水溶性の高い部分で置換することは本発明の範囲内にある。好適な実施の形態において、追加の水溶性は、本発明に記載の化合物のイオンチャネルに対する活性に必須ではない部位において親化合物の水溶性を高める部分で置換することにより与えられる。有機化合物の水溶性を高める方法は当分野では周知である。このような方法は、それらに限定されるものではないが、有機物の核を、永久的に帯電された部分、例えば、四級アンモニウム、又は生理的に妥当なｐＨで帯電されるグループ、例えば、カルボン酸、アミンで機能化することを含む。他の方法は、有機物の核にヒドロキシル又はアミンを含むグループ、例えば、アルコール、ポリオール、ポリエーテル等を付けることを含む。代表的な例には、これらに限定されるものではないが、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（エチレングリコール）及びポリ（プロピレングリコール）が含まれる。これら化合物に対する適切な機能化化学及び術策は当分野では周知である。例えば、ダンら編集 ポリメリック ドラッグス アンド ドラッグ デリバリー システムス、エーシーエスシンポジウムシリーズ ４６９巻、アメリカンケミカル ソサイエティ、ワシントンＤ．Ｃ．１９９１参照（Ｄｕｎｎ，Ｒ．Ｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ Ｖｏｌ．４６９，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９９１）。

本発明の典型的な細胞毒素は表２に示されている。

＜プロドラッグと切断可能なリンカー＞
上記の節で、本発明の細胞毒素に付いているものとして明確に例示されたリンカーに加えて、本発明はまた本質的に如何なる分子種への付加にも適切な切断可能なリンカーアームを提供する。本発明のリンカーアームの側面は、本発明においては、それらの治療薬部分への付加を参照して例示される。しかしながら当業者には、リンカーは、これらに限定されるものではないが、診断薬、分析用試薬、生体分子、ターゲッティング剤、検出可能なラベル等を含む多様な分子種に付けられることは容易に分かるであろう。

一側面において、本発明は、ターゲッティンググループを治療薬及びマーカーに付けるために有用なリンカーに係る。別の側面において、本発明は、化合物に安定性を与え、それらの生体内毒性を軽減し、又はそうでなければ、それらの薬物動態学、生物学的利用能（バイオアベイラビリティー）及び／又は薬力学に好ましく影響するリンカーを提供する。このような実施の形態においては、一旦、薬物がその作用部位に送達されたならば、リンカーは切断されて活性の薬物を遊離することが一般に好ましい。このように、本発明の一つの実施の形態においては、本発明のリンカーは跡を残さないので、一旦、治療薬又はマーカーから除去されると（活性化の間のように）、リンカーの存在の痕跡は何も残らない。

別の実施の形態において、リンカーは、治療作用部位又はマーカー活性の部位におけるような標的細胞内或いはその近傍の部位で切断される能力を持つという特徴がある。このような切断は本質的に酵素によるものであることが好ましい。この特徴は、治療薬又はマーカーの全身性の活性化を低減し、毒性及び全身性副作用の軽減を助長する。

リンカーはまた治療薬又はマーカーが循環系中にある間の分解に対してそれらを安定化する役目をしている。この特徴は、このような安定化は、リンカーを付けられた薬物又はマーカーの循環中の半減期を延長する結果となるので、重大な利益をもたらす。リンカーはまたそれを付けられた薬物或いはマーカーの活性を低減する役目を果たし、そのようにして抱合体は循環系中では比較的無害で、所望の活性部位における活性化後に所望の効果を示して、例えば毒性となる治療薬抱合体に対して、リンカーのこの特徴は、薬物の治療係数を改善するのに役立つ。

安定化グループは、治療薬又はマーカーの血中又は非標的組織に存在する可能性のある酵素によるクリアランス及び代謝を制限するために、且つ、治療薬又はマーカーの細胞内への輸送を限定するために選択されることが好ましい。安定化グループは、治療薬又はマーカーの分解を阻止する役目を果たし、且つ、また治療薬又はマーカーの他の物理的特徴を提供するために作用することもある。安定化グループは、また、処方され、或いは処方されていない形体での保存の間に治療薬又はマーカーの安定性を向上する可能性がある。

理想的には、安定化グループは、もし、それが治療薬又はマーカーをヒトの血中に３７℃で２時間保存して検査する場合、治療薬又はマーカーを分解から保護する役目を果たし、与えられた検査条件下でヒト血中に存在する酵素による治療薬又はマーカーの分解が、結果的に２０％以下、好適には２％以下になるならば、治療薬又はマーカーの安定化に有用である。

本発明はまた、これらのリンカーを含む抱合体に関する。さらに詳しくは、本発明は、疾病の治療、特にがんの化学療法に使用され得るプロドラッグに関する。具体的には、本発明に記載のリンカーの使用は、同様の構造を持つプロドラッグに比して高度の作用特異性、低減された毒性、及び血中における改善された安定性を示すプロドラッグを準備する。

このように、何らかの種々のグループをリンカー鎖の一部として含み、このようなグループを欠く構成体に比して向上した速度で生体内、例えば、血流中で切断するリンカーが提供される。また、治療薬及び診断薬とリンカーアームの抱合体も提供される。リンカーは、治療薬のプロドラッグ類似体を形成し、治療薬又は診断薬を可逆的にターゲッティング剤、検出可能なラベル、又は固体の支持体に連結するのに有用である。リンカーは、本発明の細胞毒素を含む複合体に組み込まれてもよい。

一つの実施の形態において、本発明は、化学式ＩＩに示す一般化学式を持つリンカーを提供する。

上記の構造式において、記号Ｅは酵素によって切断可能な部分（例えば、ペプチド、ジスルフィド、エステル等）を表す。記号Ｒ、Ｒ^I、Ｒ^II及びＲ^IIIは、例えば，水素、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、ポリ（エチレングリコール）、アシル、ターゲッティング剤、或いは検出可能なラベルを含むものを表す。典型的な実施の形態において、カルボニル部分は、検出可能なラベル、治療に役立つ部分又は固体の支持体である部分に繋がれている。カルボニル部分は、さらに、その断片が切られている端の位置にある酸素、硫黄、窒素又は炭素に付加している。さらなる典型的な実施の形態において、カルボニル部分は、ウレタンの一成分である。カルボニル部分に繋がれている酸素は、ターゲッティング剤、細胞毒素、固体の支持体等に付いている。

＜ペプチドを基盤とするリンカー＞
典型的な実施の形態において、酵素により切断可能なグループはアミノ酸又はペプチド配列であり、末端基のアミノ酸のカルボニル末端でリンカーの残余の部分に付加している。目下の好適なアミノ酸又はペプチドは、腫瘍により活性化されるものである。腫瘍により活性化されるペプチドは、酵素により切断可能であり、腫瘍部位において特異的に切断される。選ばれた腫瘍に関与する特定の酵素により活性化される特異的ペプチドを利用することが出来、多数のこのようなペプチドが当分野で知られている。リンカーに使用されるアミノ酸は、天然又は非天然のアミノ酸である。好適な実施の形態において、配列中の少なくとも一つのアミノ酸は天然アミノ酸である。アミノ酸部分を組み込んでいるリンカーの典型的な調製が反応経路１に記載されており、コンブレスタチンの本発明のリンカーへの接合を詳細に述べている。

反応経路１において、ＥＤＣＩが仲介する第一級アミンのｔ−Ｂｏｃで保護されたロイシンとの脱水的結合は、保護されたロイシン−アミン抱合体を提供する。抱合体は、ｐ−ニトロフェニルカーボネートで活性化されたコンブレスタチンを介してコンブレスタチンに結合共役し、その生成物はｔ−Ｂｏｃグループのトリフルオロ酢酸による切断によって脱保護される。

別の実施の形態において、リンカーは化学式ＸＩＩに記載されているようなサイクリックアミノカルバメートである。

上記化学式中のラジカルは、実質的には線状のリンカーに関して記述されたものと同じである。Ｒ、Ｒ’、Ｒ''及びＲ'''のうちの二つは、それらが付いている原子と共に置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、或いは置換又は非置換のヘテロシクロアルキル部分を形成する。

本発明の環状アミノカルバメートリンカーの典型的な合成経路は、反応経路２に記載されている。

反応経路２において、ｐ−メトキシベンジルで保護されたフェニレンジアミンは、保護されていないアニリンの窒素にｔ−Ｂｏｃで保護されたロイシンとＥＤＣＩを用いて結合される。ｐ−メトキシベンジルグループは、ＤＤＱの作用を介して除去され、リンカーアームはコンブレスタチンにｐ−ニトロフェニルカーボネートで活性化されたコンブレスタチンを用いて結合される。ｔ−ＢｏｃグループはＴＦＡで除去されて、コンブレスタチン−リンカー複合体を提供する。

なお別の実施の形態において、下記の化学式ＸＩＩＩに示されるようなアミノカーボネートベンジルアルコールリンカーが提供される。

上記の化学式におけるラジカルの実体は、実質的には上述のものと同様である。Ｒ''''は、上述のアリール部分に対する何らかの置換基を表している。一つ以上のＲ''''グループが存在する場合、各Ｒ''''グループは独立して選択され、ｚは０から５の整数である。

本発明のアミノカーボネートベンジルアルコ−ルリンカーの典型的な合成は、以下反応経路３に記載されている。

反応経路３において、ｔ−ブチルメチルシリル基でｏ−位（オルト位）を保護され、ベンジル位が活性化されたフェニルアルコールが治療用又は診断用の薬物に結合される。抱合体はテトラブチルアンモニウムフルオリドで処理されてｔ−ブチルメチルシリル保護基を除去する。遊離のＯＨグループは、ｐ−ニトロフェニルクロロフォーメートにより活性カーボネートに転化される。活性化カーボネート中間体を使用して保護されたＢｏｃＬｅｕＮＨ（ＣＨ₂）₂ＮＨＥｔをＯＨ基に結合し、リンカー−試薬抱合体を形成する。

＜ペプチド リンカー−デュオカルマイシン抱合体＞
ＣＣ−１０６５及びデュオカルマイシンは極めて強力な抗腫瘍細胞毒素であることが知られており、治療薬用量で有害な毒性を示す。腫瘍で活性化されるペプチドを細胞毒素に付けることにより、全身性の毒性は低減され、治療係数は向上する。このように、本発明は、また、デュオカルマイシンのプロドラッグ抱合体、ならびにデュオカルマイシンと化学式Ｉに記載のターゲッティング試薬又は他の試薬との間の抱合体を提供する。

本発明の抱合体への典型的な合成方式が反応経路４に記されている。追加の合成経路は本発明に添付の実施例中に述べられている。

反応経路４において、細胞毒素はｐ−ニトロフェニルクロロフォーメートにより活性のカーボネートに転化され、活性化された誘導体は、ＦＭＯＣで保護され腫瘍で活性化されるペプチドと接触処理されて抱合体を形成する。抱合体は、ピペリジンで処理され、ＦＭＯＣグループを除去して所望の化合物を提供する。

血清、肝臓、腸管等の中の酵素により切断される多くのペプチド配列が当分野で知られている。本発明の典型的なペプチド配列は、プロテアーゼにより切断されるペプチド配列を含む。プロテアーゼ感受性配列の使用について以下に続く議論の焦点は、説明を明確にすることにあって、本発明の範囲を限定するためのものではない。

ペプチドを切る酵素がプロテアーゼである場合、リンカーは一般に、プロテアーゼに対する切断認識配列を包含するペプチドを含む。プロテアーゼに対する切断認識配列は、タンパク質分解切断の間にプロテアーゼにより認識される特異なアミノ酸配列である。多くのプロテアーゼ切断配列が当分野で知られており、これら及び他の切断部位をリンカー部分に含むことが出来る。例えば、マタヨシら、サイエンス（Ｍａｔａｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ）２４７：９５４（１９９０）；ダンら、メス エンザイモル（Ｄｕｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．）２４１：２５４（１９９４）；セイダら、メス エンザイモル（Ｓｅｉｄａｈ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．）２４４：１７５（１９９４）；ソーンベリーら、メス エンザイモル（Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．）２４４：６１５（１９９４）；ウェバーら、メス エンザイモル（Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．）２４４：５９５（１９９４）；スミスら、メス エンザイモル（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．）２４４：４１２（１９９４）；ブーヴィェら、メス エンザイモル（Ｂｏｕｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．）２４８：６１４（１９９５）；ハーディーら、イン アミロイド プロテイン プレカーサー イン ディベロップメント エイジング アンド アルツハイマーズ デイズィーズ イーディー マスターズら、１９０−１９８（１９９４）参照（Ｈａｒｄｙ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ａｍｙｌｏｉｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ａｇｉｎｇ，ａｎｄ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，ｅｄ．Ｍａｓｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．ｐｐ．）。

プロテアーゼの癌転移への関与が示唆されている。プロテアーゼであるウロキナーゼ合成増加が、多くの癌における転移能増大と関連していた。ウロキナーゼは、プラスミノーゲンからプラスミンを活性化し、プラスミノーゲンはあまねく細胞外空間に局在して、その活性化が細胞外マトリックス内のタンパク質の分解を惹き起こし、それを通じて転移する腫瘍細胞が侵入する。プラスミンは、また、コラゲナーゼを活性化し、かくして毛細管及びリンパ系を取り巻く基底膜中のコラーゲンの分解を促進し、それによって腫瘍細胞の標的組織への侵入を可能にする（ダノら、アドバンス．キャンサー ４４：１３９（１９８５）（Ｄａｎｏ，ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．））。このように、ウロキナーゼにより切断されるペプチド配列をリンカーとして利用することは本発明の範囲内にある。

本発明は、また、トリプターゼによる切断を受けやすいペプチド配列の利用を提供する。ヒトのマスト細胞は、α、βＩ、βＩＩ、及びβＩＩＩと呼ばれる少なくとも４種の異なったトリプターゼを発現する。これらの酵素は、血漿のプロチーゼ阻害剤によっては制御されず、試験管内で少数の生理的基質を切断するのみである。セリンプロテアーゼであるトリプターゼファミリーは、マスト細胞を含む種々のアレルギー性及び炎症性疾病への関与が示唆されてきており、それはこれらの疾病を持つ患者からの生物的液体中にトリプターゼレベルの上昇が発見されるからである。しかしながら、疾病の病理生理学におけるトリプターゼの正確な役割はいまだ解明されないままである。トリプターゼの生物的機能及び対応する生理的意義の範囲は、実質的にその基質特異性によって定義されている。

トリプターゼは、プロ−ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、腫瘍の転移及び侵入に関与するプロテアーゼのチモーゲン型の強力な活性化因子である。プラスミノーゲンカスケードの活性化は、結果として細胞の遊出及び移動のための細胞外マトリックスの破壊となり、これがＰｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＬｙｓのＰ４−Ｐ１配列におけるプロ−ウロキナーゼ・プラスミノーゲン活性化因子の機能である可能性がある（スタックら、ジャーナルオブバイオロジカル ケミストリー（Ｓｔａｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）２６９（１３）：９４１６−９４１９（１９９４））。血管作動性の腸ペプチドである血管透過性調節への関与が示唆されている神経ペプチドもまたトリプターゼにより主としてＴｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ配列で切断される（タムら、エーエム リスピル．セル モレキュラー バイオロジカル（Ｔａｍ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）３：２７−３２（１９９０））。Ｇタンパク質共役型のレセプターＰＡＲ−２は、トリプターゼによりＳｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ配列において切断、活性化されることが出来て繊維芽細胞の増殖を促進するが、一方、トロンビンで活性化されるレセプターＰＡＲ−１はトリプターゼによりＰｒｏ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ配列において不活性化される（モリーノら、ジャーナルオブバイオロジカル ケミストリー（Ｍｏｌｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）２７２（７）：４０４３−４０４９（１９９７））。ひとまとめにして考えると、この証拠は疾病の結果としての組織改造におけるトリプターゼの中心的役割を示唆している。このことは、いくつかのマスト細胞仲介疾病において観察される甚大な変化と一致している。慢性喘息及び長期呼吸器疾患の顕著な特徴は、繊維症と基底組織の肥厚であり、これはその生理的標的のトリプターゼによる活性化の結果であり得る。同様に、一連の報告が、種々の癌におけるマスト細胞密度、トリプターゼ活性及び劣悪な予後に血管新生が関連していることを示している（クセンスら、ジーンス アンド ディベロップメント（Ｃｏｕｓｓｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）１３（１１）：１３８２−９７（１９９９）；タカナミら、キャンサー（Ｔａｋａｎａｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ）８８（１２）：２６８６−９２（２０００）；トス−ジャカティクスら、ヒューマン パソロジー（Ｔｏｔｈ−Ｊａｋａｔｉｃｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）３１（８）：９５５−９６０（２０００）；リバッティら、インターナショナル ジャーナル オブ キャンサー（Ｒｉｂａｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ）８５（２）：１７１−５（２０００））。

特定のプロテアーゼが選択されたペプチド配列を切るがどうかを評価する方法がこの分野で知られている。例えば、７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ）フルオロジェニック（発蛍光性）ペプチド基質の使用は、プロテアーゼの特異性決定の十分に確立された方法である（ジマーマンら、（１９７７）アナリティカル バイオケミストリー（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）７８：４７−５１）。アニリド結合の特異的切断は、蛍光を発するＡＭＣ脱離グループを遊離して個々の基質の切断率の簡単な決定を可能にする。さらに最近になって、ＡＭＣペプチド基質ライブラリーのアレイ（リーら、（１９９９）バイオオーガニック アンド メディカル ケミストリー レターズ（Ｌｅｅ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ）９：１６６７−７２）及びポジショナル−スキャニングライブラリー（ラノら、（１９９７）ケミストリー アンド バイオロジー（Ｒａｎｏ，Ｔ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ）４：１４９−５５）が採用され、単一の実験に広範囲の基質を試料に取ってプロテアーゼのＮ末端特異性の輪郭を急速に定めている。このように、当業者は一連の整理されたペプチド配列を容易に評価して、不当な実験に頼ることなく本発明におけるそれらの配列の利用性を決定し得る。

＜ジスルフィドリンカー＞
なお別の局面において、本発明は、ジスルフィド部分に基く切断可能なリンカーアームを提供する。それゆえ化学式ＩＩＩに記載の構造を持つ化合物が提供される。

記号Ｒ、Ｒ^I、Ｒ^II、Ｒ^III、Ｒ^IIII、Ｒ^V及びＲ^VIによって表されるラジカルの本体は、上記Ｒ^I、Ｒ^II及びＲ^IIIについての記載の通りである。

別の実施の形態において、本発明は化学式ＸＩＶに示されているようなジスルフィドカルバメートリンカーを提供する。

記号Ｒ、Ｒ^I、Ｒ^II、Ｒ^III、Ｒ^IIII、Ｒ^V及びＲ^VIによって表されるラジカルの本体は、上に記載の通りである。

上述のように、本発明のリンカーは、治療薬としてコンブレタスタチン又はデュオカルマイシンのような細胞毒素からなる抱合体を形成するために使用することが出来る。デュオカルマイシンは血漿中で不安定である。本発明のリンカーは、循環系中に存在している間デュオカルマイシンを安定化し、ひとたび所望の作用部位に達すると、薬物を解放（活性化）することに特異な有用性を持っている。加えて、コンブレタスタチン又はデュオカルマイシンが活性化後、最大活性を取り戻すために、リンカー及びターゲッティンググループは共に完全に除去される。それゆえ、本発明の一つの実施の形態において、リンカーは痕跡を残さないリンカーである。治療薬としてデュオカルマイシンのような細胞毒素からなる抱合体は又特に興味深い。本発明のリンカーは、循環系中ではデュオカルマイシンを安定化し、標的細胞内又はその近傍で活性化後、最適に強力な細胞毒素を遊離するのに役立つ。細胞毒素は、標的細胞内又はその近傍で切断されるので、無差別な活性化による全身性毒性は減少する。さらに、循環系中の安定性の増加は、また、細胞毒素の半減期及び全般的有効性の増大をもたらす。

本発明のジスルフィドリンカーアーム−細胞毒素抱合体の典型的な調製経路が反応経路５に示されている。

反応経路５において、アミン基を保護されたスルフヒドリルａは、２，２’−ジピリジルジスルフィドｂと反応してアミン基を保護され、活性化されたジスルフィドｃを形成する。活性化されたジスルフィドは、遊離のスルフヒドリル基を持つカルボン酸エステルｄと接触してピリジルチオールを除去し、ジスルフィド部分を含むアミン基を保護されたカルボン酸エステルｅを形成する。このメチルエステルはＬｉＯＨの作用で切断されて、対応するカルボン酸ｆを形成する。このカルボン酸は、マレイン酸イミドグループとアミンを含むヘテロバイファンクショナルなＰＥＧ分子に、ＥＤＣＩの作用により結合して化合物ｇを形成する。ＰＥＧ誘導体は、コンブレタスタチンの活性カーボネートｈと接触反応して抱合体ｉを形成する。所望ならば、接合体ｉは、ターゲッティング剤、検出可能なラベル等にマレイン酸イミド部分を介して付けることが出来る。

別の実施の形態において、本発明は、ウレタン連結の非カルボニル酸素がアリールグループに由来するジスルフィドカルバメートリンカーを提供する。本発明の代表的なリンカーが化学式ＸＶに記されている。

ラジカルの本体は本質的に上記の通りである。Ｒ^VIIは定義の項に記載されたようなアリールグループ上の置換基である。記号ｗは０から４の整数を表す。一つ以上のＲ^VIIが存在する場合、各グループは独立して選ばれる。

化学式ＸＶに記載の化合物の典型的な調製経路が反応経路６に示されている。

反応経路６において、ＴＢＳでヒドロキシ基を保護されたベンジルブロミド誘導体ａがＱ−ＯＨとアルキル化の条件下で反応してｂを形成する。化合物ｂは、テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）の作用により保護基を外されてｃを形成し、これがｄによりアシル化されてカーボネートｅを形成する。カーボネートｅは、上記反応経路５からのヘテロバイファンクショナルなＰＧＥ誘導体ｉと反応する。その結果生じるＰＧＥ付加物ｆは、マレイン酸イミド部分を介して別の分子に抱合することが出来る。

＜ジスルフィドリンカー−デュオカルマイシン抱合体＞
上述のように、本発明のジスルフィドリンカーはまた、治療薬又は診断薬部分を生体内で安定化し、プロドラッグを形成し、且つ、試薬をターゲッティング剤及び検出可能なラベルのような分子種に抱合するために有用である。それゆえ、なお別の局面において、本発明は、デュオカルマイシンと化学式Ｉに記載の本発明のジスルフィドリンカーとの間の抱合体を提供する。反応経路７が本発明の抱合体調製の簡便な経路を提供する。

反応経路７において、本発明のデュオカルマイシン細胞毒素ａはｐ−ニトロフェニルクロロフォーメートにより活性化されたカルボン酸エステルｂに転化される。化合物ｂは反応経路５からのヘテロバイファンクショナルなＰＧＥリンカーと結合して化合物ｄを形成し、この化合物は、次いである抗体とマレイン酸イミドースルフヒドリル結合反応を介して結合して抱合体ｅを形成してもよい。

上述のように、一定の毒性試薬の治療効力は、試薬を選択的に所望の部位に送達し、及び／又はその試薬が所望の部位に送達されるまでは本質的に不活性型に保持する術策によって劇的に改善される。本発明は、また、試薬を選択された位置に送達し、及び／又は生物活性のある試薬をそれが所望の位置に到達するまでは不活性化するという原則に従って作動するリンカーアームを提供する。

このように、ある実施の形態において、本発明は、上述の細胞毒素の、ならびに他の試薬の、効果的な性質を有するリンカーアームとの抱合体を提供する。一つの実施の形態において、リンカーアームは、治療用又は診断用の部分を、該部分を体内の所望の位置に選択的に送達する試薬に抱合する。該部分とターゲッティング試薬間のリンカーは、生体内で安定であること、或いは切断されることが出来る。試薬が切断されるならば、所望の作用位置に到達した後に優先的に切断されることが好ましい。

別の実施の形態において、本発明は診断用の、又は治療用の部分を別の試薬につながらないが、その部分が所望の活動位置に到達するまでそれを本質的に不活性化するリンカーを提供する。所望の活動位置において活性分子種はリンカーを切断し、好適に該部分の活性型を復活する。この術策は、多くの毒性があるが高度に有用な試薬の全身性毒性を緩和する手段を提供する。

本発明のウレタン及びジスルフィドリンカーは、本発明の代表的なデュオカルマイシン類似体との抱合に関連して例示される。それぞれ表１及び表３参照のこと。

＜ターゲッティング剤＞
本発明のリンカー及び細胞毒素は、選択的に荷重を生体の細胞又は器官に送達するターゲッティング剤に連結することが出来る。抗体（例えば、キメラ、ヒト化及びヒトの）、受容体に対するリガンド、レクチン、サッカリド、抗体等の典型的なターゲッティング剤は、当分野で認められ、本発明の実施に制限なく有用である。他のターゲッティング剤は、特異的な分子認識モチーフを含まぬ一群の化合物を含み、ポリ（エチレングリコール）、ポリサッカリド、ポリアミノ酸等の高分子を含み、これらは細胞毒素に分子塊を付加する。追加の分子塊は細胞毒素の薬物動態学、例えば、血清中の半減期に影響を与える。

典型的な実施の形態において、本発明は、細胞毒素、リンカー或いは細胞毒素−リンカーのターゲッティング剤との抱合体を提供し、ターゲッティング剤は、例えば、抗体、受容体、ペプチド、レクチン、サッカリド、核酸、又はこれらの組合せの生物分子である。本発明の典型的な抱合体への調製経路は上記の反応経路に記載されている。

本発明の実施に有用な生物分子は如何なる供給源からでも誘導可能である。生物分子は天然の供給源からの分離、或いは合成法により生成することができる。タンパク質は天然タンパク質又は変異タンパク質であることが出来る。突然変異は、化学的（突然）変異誘発、部位特異的（突然）変異誘発又は当業者には既知の突然変異を含む他の手段によって実行され得る。本発明の実行に有用なタンパク質は、例えば、酵素、抗原、抗体及び受容体を含む。抗体はポリクローナル或いはモノクローナルであってもよい。ペプチド及び核酸は天然供給源から分離することができ、又は、その元（原料）が全合成或いは部分合成から合成されたものであってもよい。

認識部分がタンパク質または抗体であるこれらの実施の形態において、タンパク質は、そのタンパク質表面上の利用出来る何らかの反応性ペプチド残基によりＳＡＭ成分又はスペーサーアームに繋がれることが出来る。好適な実施の形態において、反応性グループはアミン又はカルボキシレート（カルボン酸エステル）である。特に好適な実施の形態において、反応性グループはリジン残基のε−アミングループである。さらに、これらの分子は、基体又はＳＡＭの表面に非特異的相互作用（例えば、ケミソープション（化学吸着）、フィジソープション（物理吸着））により吸着され得る。

抗体である認識部分は、タンパク質、ペプチド、核酸、サッカリド、又は薬物、除草剤、殺虫剤、工業化学品及び戦争薬品のような低分子である（分析）試料の認識に利用することが出来る。特定の分子に対する抗体を作る方法は、当業者には周知のことである。フェン（Ｆｅｎｇ）らに１９９２年９月１５日発行の米国特許第５／１４７，７８６号、スタンカー（Ｓｔａｎｋｅｒ）らに１９９４年８月２日発行の第５／３３４，５２８号、アル−バヤティ（Ａｌ−Ｂａｙａｔｉ）、Ｍ．Ａ．Ｓ．に１９９７年１１月１１日に発行された第５／６８６，２３７号と、ヘス（Ｈｏｅｓｓ）らに１９９６年１１月１２日に発行された第５／５７３，９２２号参照。抗体を表面に付ける方法もまた当分野では周知である。デルマーチら、ランギール（Ｄｅｌａｍａｒｃｈｅ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｇｕｉｒ）１２：１９４４−１９４６（１９９６）参照。

ターゲッティング剤は、本発明のリンカーにあらゆる利用可能な反応性グループによっても付けることが出来る。例えば、ペプチドは、アミン、カルボキシル、スルフヒドリル、又はヒドロキシルグループを介して付けることが出来る。このようなグループは、ペプチド末端、或いはペプチド鎖の内部側の位置に存在することが出来る。核酸は、塩基上の反応性グループ（例えば、エキソサイクリックアミン）或いは糖部分上の利用可能なヒドロキシルグループ（例えば、３’−又は５’−ヒドロキシル）を介して付けることが出来る。ペプチド及び核酸の鎖は、さらに、一つ以上の位置において誘導体化されて、適当な反応性グループのこれらの鎖への付加を可能にすることが出来る。クライセイら、ニュクリエック アシッド レス．（Ｃｈｒｉｓｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．）２４：３０３１−３０３９（１９９６）参照。

ペプチド又は核酸が、完全に或いは部分的に合成分子である場合、反応性グループ又はマスクされた反応性グループは、合成過程の間に組み込むことが出来る。ペプチド及び核酸の両者における反応性グループの組み込みに適当な多くの誘導体化されたモノマーが当業者に知られている。例えば、ザ ペプチド：アナリシス、シンセシス、バイオロジー 第２巻：“スペシャルメソッド イン ペプチドシンセシス”グロス アンド メレンホファー ジェイ イーディーエス アカデミックプレス ニューヨーク（１９８０）（Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｅ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２：“Ｓｐｅｃｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．ａｎｄ Ｍｅｌｅｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）参照。多くの有用なモノマーが市場で入手可能である（Ｂａｃｈｅｍ，Ｓｉｇｍａ，ｅｔｃ．）。このマスクされたグループは、次いで合成後に外すことができ、その時点で、モノマーは、本発明の化合物の成分との反応に利用することが出来る。

別の典型的な実施の形態において、ターゲッティング部分は、本発明の化合物に封入複合体を介して付けられる。例えば、本発明の化合物又はリンカーは、シクロデキストリン或いは修飾されたシクロデキストリンのような部分を含むことが出来る。シクロデキストリンは、多種類の微生物によって生成される一群の環状オリゴサッカリドである。シクロデキストリンは、かご型の環状構造を持つ。この形状により、シクロデキストリンは、多種類の分子をその内部空洞に封入することが出来る。例えば、スズェティリィ ジャーナル シクロデキストリンス ゼア インクルーション コンプレックス（Ｓｚｅｊｔｌｉ，Ｊ．，ＣＹＣＬＯＤＥＸＴＲＩＮＳ ＡＮＤ ＴＨＥＩＲ ＩＮＣＬＵＳＩＯＮ ＣＯＭＰＬＥＸＥＳ）；アカデミアイ クラド ブダペスト（Ａｋａｄｅｍｉａｉ Ｋｌａｄｏ，Ｂｕｄａｐｅｓｔ）１９８２及びベンダーら、シクロデキストリン ケミストリー シュプリンガー出版 ベルリン（Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＣＹＣＬＯＤＥＸＴＲＩＮ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ）１９７８参照。

シクロデキストリンは、例えば、薬物、殺虫剤、除草剤及び戦争薬物を含む一連の有機分子と封入複合体を形成することが出来る。テンジャルラら、ジャーナルオブ ファーマ．サイエンス（Ｔｅｎｊａｒｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．）８７：４２５−４２９（１９９８）；ズーグルら、ファーマ．ディベロップメントテクノロジー（Ｚｕｇｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｖ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．）３：４３−５３（１９９８）；アルバールら、クリティカル レビュー テー．ドラッグ キャリアー システム（Ａｌｂｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．）１２：３１１−３３７（１９９５）参照。重要なことは、シクロデキストリンは、その封入複合体中の化合物の鏡像異性体間の区別が出来ることである。かくして、好適な実施の形態において、本発明は、鏡像異性体の混合物中の特定の鏡像異性体の検出の手段を与える。ケッペンフホエファーら、クロマトグラフィー（Ｋｏｐｐｅｎｈｏｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．）Ａ ７９３：１５３−１６４（１９９８）参照。シクロデキストリンを他の分子に付ける多数の経路が当分野で知られている。例えば、ヤマモトら、ジャーナルオブフィジカル ケミストリー（Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．）Ｂ １０１：６８５５−６８６０（１９９７）、及びスリーニバーサン ケイ ジャーナル アプライド オブ ポリマーサイエンス（Ｓｒｅｅｎｉｖａｓａｎ，Ｋ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．）６０：２２４５−２２４９（１９９６）参照。

本発明のシクロデキストリン−ターゲッティング剤抱合体は、さらに、アンチセンスオリゴヌクレオチド−細胞毒素抱合体を参照して例示される。シクロデキストリン−オリゴヌクレオチド抱合体に議論を集中するのは説明の明確化のためであって、本発明の細胞毒素が抱合し得るターゲッティング剤の範囲を限定するものではない。

典型的な核酸ターゲッティング剤には、アプタマー、アンチセンス化合物、及び三重らせんを形成する核酸が含まれる。一般的に、糖残基のヒドロキシルグループ、塩基残基からのアミノグループ、又は、ヌクレオチドのリン酸の酸素が、ヌクレオチドを基盤とするターゲッティング剤を細胞毒素に結合するために必要な化学機能性として利用される。しかしながら、当業者は、他の「非天然」の反応性のある機能性を従来の技法により核酸に付け得ることを容易に理解できると推測される。例えば、糖残基のヒドロキシルグループは、当分野では周知の技法を用いて、メルカプト又はアミノグループに転化することが出来る。

アプタマー（又は、核酸抗体）は、特定の分子標的を結合する一本鎖又は二本鎖のＤＮＡ或いは一本鎖のＲＮＡ分子である。一般に、アプタマーは、分子標的、例えば、タンパク質の作用を、血中に循環している標的のプールへの結合により阻害することによって機能する。アプタマーは、化学的機能性を有し、かくして、本発明に記載のように、細胞毒素に共有結合することが出来る。

低分子の薬物、代謝物、補因子、毒素、サッカリドを基盤とする薬物、核酸を基盤とする薬物、糖タンパク質等を含む多種多様な分子標的が、アプタマーと非共有結合で、しかし特異な関連を形成する能力を有するが、一般に、分子標的は、血清タンパク質、キニン、エイコサノイド、細胞表面分子等を含むタンパク質又はペプチドからなる。アプタマーの例は、ギレアデ（Ｇｉｌｅａｄ）のアンチトロンビン阻害剤 ＧＳ ５２２及びその誘導体を含む（ギレアデ サイエンス フォスターシティ カリフ．（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．））。また、マカヤら、プロック．ナチュラ．アカデミック サイエンス（Ｍａｃａｙａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．）ＵＳＡ ９０：３７４５−９（１９９３）；ボックら、ネイチャー（Ｂｏｃｋ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ））３５５：５６４−５６６（１９９２）及びワンら、バイオケミストリー（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）３２：１８９９−９０４（１９９３）参照。

所定の生物分子に特異的なアプタマーは、当分野で既知の技法を用いて同定することが出来る。例えば、トールら、（Ｔｏｏｌｅ ｅｔ ａｌ．）（１９９２）ＰＣＴ公報（Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ）Ｎｏ．ＷＯ ９２／１４８４３；ターク アンド ゴールド（Ｔｕｅｒｋ ａｎｄ Ｇｏｌｄ）（１９９１） ＰＣＴ公報（Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ）Ｎｏ．ＷＯ ９１／１９８１３；ワイントラウブ アンド ハッチンソン（Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ ａｎｄ Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ）（１９９２）ＰＣＴ公報（Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ）Ｎｏ．９２／０５２８５；及びエリングトン アンド スゾスタク ネイチャー（Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｎａｔｕｒｅ）３４６：８１８（１９９０）参照。簡単に述べると、これらの技法は、一般的に、分子標的のオリゴヌクレオチドの無差別混合物との複合体形成を含む。アプタマー−分子標的複合体は、複合体を形成しないオリゴヌクレオチドから分離される。アプタマーは分離された複合体から回収されて増幅される。このサイクルは反復されて、分子標的に対して最高の親和性を有するアプタマー配列を同定する。

遺伝子の不適当な発現に起因する疾病に対して、このような遺伝子の発現の特異的な防止又は低減は理想的な治療を代表する。原則として、特定の遺伝子産物の生成は、ｍＲＮＡ中の利用できる配列、或いは、ｍＲＮＡ前駆体のプロセッシングに必須の転写産物内の配列、又は、遺伝子自体内の配列に相補的な一本鎖のデオキシヌクレオチド又はリボヌクレオチドのハイブリッド形成によって阻害、低減、又は遮断されることがあり得る。遺伝子制御のこの範例は、しばしばアンチセンス又はアンチ遺伝子阻害と呼ばれる。追加の効力は、本発明のようにアルキル化剤の核酸への抱合によって与えられる。

アンチセンス化合物は、特定のタンパク質の産出の原因となるｍＲＮＡの生成を束縛、損傷又は防止するように設計された核酸である。アンチセンス化合物は、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡ、一本鎖または二本鎖のオリゴヌクレオチド、またはそれらの類似体を含み、特異的に個々のｍＲＮＡ種に対合して転写及び／又はｍＲＮＡ種のＲＮＡプロセシング及び／又はコードされているポリペプチドの翻訳を阻害することが出来、それによってそれぞれのコードされているポリペプチドの量の低減を実施する。（チンら、プロック．ナチュラ．アカデミック サイエンス（Ｃｈｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）８６：１０００６−１００１０（１９８９）；ブローダーら、アン．インタ．メディカル（Ｂｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．）１１３：６０４−６１８（１９９０）；ローレウら、フェブス レターズ（Ｌｏｒｅａｕ ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ）２７４：５３−５６（１９９０）；ホルセンベルグら、（Ｈｏｌｃｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．）Ｗ０９１／１１５３５；Ｗ０９１／０９８６５；Ｗ０９１／０４７５３；Ｗ０９０／１３６４１；ＷＯ９１／１３０８０，ＷＯ９１／０６６２９及び ＥＰ ３８６５６３）。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その精妙な標的感受性及び選択性のために、本発明の細胞毒素のような治療薬を所望の分子標的に送達するのに有用である。

他の研究者達は、核酸が三重らせん形成を介して二本鎖ＤＮＡに結合して転写及び／又はＤＮＡ合成を阻害することが出来ると報告している。三重らせん化合物（三本鎖薬物とも呼ばれる）は、また、二本鎖ＤＮＡの配列に結合して、選択的にウイルス遺伝子のような疾病惹起遺伝子、例えば、ＨＩＶ及び単純ヘルペスウイルスならびにがん遺伝子の転写を阻害することを意図したオリゴヌクレオチドであり、即ち、細胞核においてタンパク質の生成を遮断する。これらの薬物は、細胞のゲノム中の二本鎖ＤＮＡに直接結合して三重らせんを形成し、細胞が標的タンパク質を作ることを妨害する。例えば、ＰＣＴ公報（ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）Ｎｏｓ．ＷＯ ９２／１０５９０，ＷＯ ９２／０９７０５，Ｗ０９１／０６６２６、及び米国特許（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．）Ｎｏ．５，１７６，９９６参照。このように、本発明の細胞毒素も、また、三重らせんを形成する核酸配列に抱合する。

核酸（例えば、アンチセンス化合物及び三重らせん薬物）の部位特異性は、ホスフォジエステル結合の修飾又はオリゴヌクレオチド末端の化学的修飾によっては重大な影響を受けない。その結果、これらの核酸は化学的に修飾することが出来て、全般的な結合安定性を高め、化学的分解に関する安定性を増加し、オリゴヌクレオチドの細胞内への輸送率を増大して分子に化学反応性を付与する。アンチセンス治療に有用な種々の核酸を構築する一般的経路は、ファン デル クロルら、バイオテクニックス（ｖａｎ ｄｅｒ Ｋｒｏｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）６：９５８−９７６（１９８８）及びステインら、キャンサー レス．（Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．）４８：２６５９−２６６８（１９８８）によって概説されている。それ故、典型的な実施の形態において、本発明の細胞毒素は、ホスフォジエステル結合の修飾によって核酸に抱合される。

加えて、オリゴヌクレオチドの機能的な性質として、関連する標的配列への特異的なハイブリッド形成或いは関与が保持されている限り、アプタマー、アンチセンス化合物及び本発明の細胞毒素を持つ三重らせん薬物もまた核酸の置換、付加、欠失、又は転位を含むことが出来る。例えば、いくつかの実施の形態は、ホスホチオエート類似体を採用し、このものは天然由来のホスフェートジエステル対照物よりもヌクレアーゼによる分解に対してより抵抗性があり、かくして、生体内でより高度の持続性とより大きな効能を持つことが期待される（例えば、キャンベルら、ジャーナルオブ バイオケミストリー バイオフィジックス メソッド（Ｃａｍｐｂｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ）２０：２５９−２６７（１９９０）参照）。オリゴヌクレオチドのホスフォラミデ−ト誘導体もまた相補ポリヌクレオチドに結合して、共有結合したリガンド類を追加収容する能力を持つことが知られており、本発明の方法に順応する。例えば、フロエラーら、ヌクリエック アシッド レス．（Ｆｒｏｅｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．）１６（１１）：４８３１（１９８８）参照。

いくつかの実施の形態において、アプタマー、アンチセンス化合物及び三重らせん薬物は、Ｏ−メチルリボヌクレオチドからなる（ヨーロッパ特許公報（ＥＰ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ）Ｎｏ．３６０６０９）。キメラオリゴヌクレオチドもまた使用されてもよい（ダグルら、ヌクリエック アシッド レス．（Ｄａｇｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．）１８：４７５１（１９９０））。いくつかの適用に対しては、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び三重らせんは、ポリアミド核酸（ニールセンら、サイエンス（Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ）２５４：１４９７（１９９１）及びＰＣＴ公報（ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ）Ｎｏ．ＷＯ ９０／１５０６５）又は他の陽イオン誘導体（レットシンガーら、ジャーナルオブ アメリカン ケミカル ソサイエティ（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１１０：４４７０−４４７１（１９８８））からなってもよい。他の応用ではオリゴヌクレオチドを利用してもよく、ここでは、一つ以上のホスフォジエステル結合が、ＰＣＴ公報（ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ）Ｎｏｓ．ＷＯ ９２／０５１８６及び９１／０６５５６に記載の２−４原子長のヌクレオシド間結合のような立体的等価グループ、又はフォルムアセタールグループ（マッテウッチら、ジャーナルオブ アメリカン ケミカル ソサイエティ（Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１１３：７７６７−７７６８（１９９１））或いはアミドグループ（ニールセンら、サイエンス（Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ）２５４：１４９７−１５００（１９９１））で置換されていた。

加えて、例えば、糖又は塩基が化学的に修飾されているヌクレオチド類似体は、本発明に採用され得る。プリン及びピリミジンの「類似」形は当分野で一般に既知であり、その多くは化学療法剤として使用されている。典型的なしかし網羅的ではないリストには、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ⁶−イソペンテニルアデニン、１−メチルアデニン、１−メチルプソイドウラシル、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ⁶−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、ベータ−Ｄ−マンノシルキューオシン、５’−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ⁶−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（Ｖ）、ワイブトキソシン、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、及び２，６−ジアミノプリンを含む。加えて、通常の塩基のハロゲン化塩基による類似体もある。さらに、塩基上の２’−フラノースの位置は、非荷電のかさばったグループ置換を持つことが出来る。非荷電のかさばったグループの例には分枝アルキル、糖、及び分枝糖が含まれる。

末端修飾もまた、有用な手順を提供して、細胞毒素を核酸に抱合し、細胞型特異性、薬物動態学、核透過性、オリゴヌクレオチド薬剤に対する絶対細胞摂取率を改変する。例えば、反応性グループを包含するための５’と３’末端における一連の置換が知られており、これが細胞毒素の共有結合による付加を可能にする。例えばオリゴデオキシヌクレオシド配列：遺伝子発現のアンチセンス酵素阻害薬（ＯＬＩＧＯＤＥＯＸＹＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥＳ：ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ ＩＮＨＩＢＩＴＯＲＳ ＯＦ ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，）（１９８９）コーエン編、シーアールシー出版（Ｃｏｈｅｎ，Ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ）；アンチセンス核酸療法による癌、エイズへの治療の展望（ＰＲＯＳＰＥＣＴＳ ＦＯＲ ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＦＯＲ ＣＡＮＣＥＲ ＡＮＤ ＡＩＤＳ，）（１９９１），ウィックストーム編、ウィーリー−リス（Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍ，Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ）；遺伝斯調節（ＧＥＮＥ ＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮ）：アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡの生物学（ＢＩＯＬＯＧＹ ＯＦ ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ ＲＮＡ ＡＮＤ ＤＮＡ，）（１９９２）エリクソン アンド イザント編、レーベン出版（Ｅｒｉｃｋｓｏｎ ａｎｄ Ｉｚａｎｔ，Ｅｄｓ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ）；及び、アンチセンスＲＮＡとＤＮＡ（ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ ＲＮＡ ＡＮＤ ＤＮＡ，）（１９９２），マリー編ウィーリー−リス（Ｍｕｒｒａｙ，Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ）参照。アンチセンス化合物に関する一般的方法については、アンチセンスＲＮＡとＤＮＡ（ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ ＲＮＡ ＡＮＤ ＤＮＡ，）（１９８８），ディー エー メルトン、コールドスプリングハーバー研究所、ニューヨーク（Ｄ．Ａ．Ｍｅｌｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）参照。

ターゲッティング剤は、一般に、細胞毒素に共有結合を介して連結している。共有結合は、非可逆的、部分可逆的、又は完全可逆的であってもよい。可逆性の度合は、ターゲッティング剤−細胞毒素複合体の生体内分解に対する感受性に対応する。

好適な実施の形態において、結合は可逆的（例えば、容易に切断される）又は部分可逆的（例えば、部分的に、或いは徐々に切断される）である。結合の切断は、生物的又は生理的過程を介して起こり得る。生理的又は生物的過程は、複合体内の何らかの選択された部位にある結合を、細胞毒素とリンカー間の結合を切断する前後に切断し（例えば、そうでなければ感受性の化学的機能性に連結しているエステルグループ又は他の保護グループを除去し）、その結果、部分的に分解された複合体をもたらす。他の切断も、また、例えばリンカーとターゲッティング剤との間で起こり得る。

投与後、複合体を急速に分解するためには、一般に、血漿中を循環する酵素（例えば、アミダーゼ、リダクターゼ）に依存して薬剤から樹状突起物を切断する。これらの酵素は、非特異的アミノペプチダーゼとエステラーゼ、ジペプチジルカルボキシペプチダーゼ、血液凝固カスケードのプロテアーゼ等を包含する。

その代わり、切断は非酵素的過程を介する。例えば、化学的加水分解は、送達後、複合体が経験するｐＨ差によって引き起こされてもよい。このような場合、複合体は、輸送媒体中の酸性或いは塩基性ｐＨではより高い安定性を示す一方で、７．４の生理的ｐＨでは高度の化学的な不安定性を持つという特徴があり得る。このような過程で切断される典型的な複合体は、その枠組みの中にＮ−マンニッヒ（Ｍａｎｎｉｃｈ）塩基結合を組みこんでいる複合体である。

大抵の場合複合体の切断は、投与の間、または投与後間もなく起こる。しかしながら、他の実施の形態においては、切断は複合体が薬剤の作用部位に到達するまでは起こらない。

細胞毒−ターゲッティング剤複合体の分解に対する感受性は、複合体の加水分解又は酵素による非結合薬剤への転化の研究を通じて確かめることが出来る。一般に、この方法を使用することにより試験管内と生体内活性の間に良好な相関が見出される。例えば、フィップスら、ジャーナルオブ ファーマ．サイエンス（Ｐｈｉｐｐｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ）７８：３６５（１９８９）参照。転化率は、例えば、吸光度測定法又はガス−液体或いは高圧液体クロマトグラフィーによって容易に決定される。半減期及び他の動力学的パラメーターは次いで標準技法を用いて計算され得る。例えば、ローリーら、有機化学のメカニズム及びセオリー 第２巻 ハーパー＆ロウ出版、ニューヨーク（Ｌｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ．ＭＥＣＨＡＮＩＳＭ ＡＮＤ ＴＨＥＯＲＹ ＩＮ ＯＲＧＡＮＩＣ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｈａｒｐｅｒ＆Ｒｏｗ，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）（１９８１）参照。

＜スペーサーグループ（“Ｌ^x”）＞
切断可能なグループに加えて、一つ以上のリンカーグループが細胞毒素とターゲッティング剤の間に任意に導入される。スペーサーグループは少なくとも二つの反応性機能グループを含む。典型的には、スペーサーグループの一つの化学機能性（部）が細胞毒素の化学機能性（部）に結合し、一方、スペーサーグループの他の化学機能性（部）は、ターゲッティング剤或いは切断可能なリンカーの化学機能性（部）への結合に用いられる。スペーサーグループの化学機能性（部）の例には、ヒドロキシ、メルカプト、カルボニル、カルボキシ、アミノ、ケトン及びメルカプトグループが含まれる。スペーサーはまた切断可能なリンカーの一成分であってもよく、この場合、一般にＬ^xとして表示され、ここで「ｘ」は整数である。

Ｌ^xで表されるリンカーは、一般に置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール或いは置換または非置換のヘテロアルキルグループである。

典型的なスペーサーグループは、例えば、６−アミノヘキサノール、６−メルカプトヘキサノール、１０−ヒドロキシデカン酸、グリシン及び他のアミノ酸、１，６−ヘキサンジオール、β−アラニン、２−アミノエタノール、システアミン（２−アミノエタンチオール）、５−アミノペンタン酸、６−アミノヘキサン酸、３−マレイン酸イミド安息香酸、フタリド、α−置換フタリド、カルボニルグループ、動物エステル、核酸、ペプチド等を含む。

スペーサーは、細胞毒素−ターゲッティング剤複合体に追加の分子塊及び化学機能性を導入するのに役立つ。一般に、分子塊及び化学機能性の追加は、複合体の血清中の半減期ならびに他の性質に影響を与える。かくして、スペーサーグループを注意深く選択することにより血清中の半減期に幅のある細胞毒素複合体を得ることが出来る。

＜反応性機能グループ（Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐｓ）＞
説明を明確にするため、以下の議論は本発明の細胞毒素のターゲッティング剤への抱合を重点とする。議論の焦点は、本発明の一実施形態を例示し、これから他の実施の形態は当業者により容易に推測される。議論を単一の実施の形態に集中して本発明を限定することを意味するものではない。

本発明の典型的な化合物は反応性機能グループを持ち、これは一般に置換又は非置換のアルキル或いはヘテロアルキル鎖上に局在して、別の分子種への容易な付加を可能にする。反応性グループにとって便利な位置は、側鎖の末端位である。

本発明の実施に有用な反応性グループ及び反応の種類は一般に生物抱合体化学の分野では周知のものである。反応性細胞毒素類似体に利用出来る。現在好まれている種類の反応は、比較的緩和な条件下で進行するものである。これらの反応は、求核置換（例えば、アミン及びアルコールのハロゲン化アシル、活性エステルとの反応）には限定されないが、求電子置換（例えば、エナミン反応）及び炭素−炭素ならびに炭素−異種原子多重結合への付加（例えば、ミカエル反応、ディールス・アルダー反応）を含む。これらの及び他の有用な反応は、例えば、マーチ、有機化学の進歩、第３巻、ジョン ウィリー＆ソンズ、ニューヨーク（１９８５）（Ｍａｒｃｈ， ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＯＲＧＡＮＩＣ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８５）；ハーマンソン、生物抱合技術（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，ＢＩＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥ ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ，）アカデミックプレス、サンディエゴ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，）１９９６；及びフィーニーら、プロテインの修飾（Ｆｅｅｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ）；アドバンセス イン ケミストリーズ（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｅｒｉｅｓ，）Ｖｏｌ．１９８，アメリカンケミカル ソサイエティ、ワシントンＤ．Ｃ．（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，）１９８２に論じられている。

典型的な反応タイプは、カルボキシルグループ及びそれらの誘導体の反応を含み、それら誘導体は、それらに限定されるものではないが、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾールエステル、酸ハロゲン化物、アシルイミダゾール、チオエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族エステルを含む。ヒドロキシルグループはエステル、エーテル、アルデヒド等に転化することが出来る。ハロゲン化アルキルグループは、例えば、アミン、カルボキシレートアニオン、チオールアニオン、カルバニオン、又はアルコキシドイオンとの反応によって新しい分子種に転化される。ジエノフィル（例えば、マレイン酸イミド）グループはディールス・アルダー反応に関与する。アルデヒド又はケトングループは、イミン、ヒドラゾーン、セミカルバゾーン或いはオキシムに、又は、グリニヤール付加反応又はアルキルリチュウム付加反応のような機構を介して、転化され得る。ハロゲン化スルフォニルは容易にアミンと反応して、例えば、スルフォンアミドを形成する。アミン又はスルフォヒドリルグループは、例えば、アシル化、アルキル化、又は酸化される。アルケンは、付加環化、アシル化、マイケル付加反応等を用いて一連の新分子種に転化され得る。エポキシドは容易にアミン及びヒドロキシル化合物と反応する。

当業者は、これらの結合の多くが多様な方法で多様な条件を用いて生成され得ることを容易に理解することができると考えられる。例えば、エステルの調製については、例えば、マーチ、前出、１１５７参照、チオエステルについては、マーチ、前出、３６２−３６３、４９１，７２０−７２２、８２９、９４１、及び１１７２参照、カーボネートについては、マーチ、前出、３４６−３４７参照、カルバメートについてはマーチ、前出、１１５６−５７参照、アミドについては、マーチ、前出、１１５２参照、尿素とチオ尿素については、マーチ、前出、１１７４参照、アセタールとケタールについては、グリーンら、前出１７８−２１０及び、マーチ、前出、１１４６参照、アチロキシアルキル誘導体についてはプロドラッグス（ＰＲＯＤＲＵＧＳ）：トピカル アンド アーキュラー ドラッグデリバリー（ＴＯＰＩＣＡＬ ＡＮＤ ＯＣＵＬＡＲ ＤＲＵＧ ＤＥＬＩＶＥＲＹ，）、ケイ．ビー．スローンら、マーシャル デッカーインク．ニューヨーク（Ｋ．Ｂ．Ｓｌｏａｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，）１９９２参照、エノールエステルについては、マーチ、前出、１１６０参照、Ｎ−スルフォニルイミデイトについては、バンデッガードら、ジャーナルオブ メディカル ケミストリー（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．ＣＨＥＭ．，）３１：２０６６（１９８８）参照、無水物についてはＭａｒｃｈ、前出、３５５−５６，６３６−３７，９９０−９１，及び１１５４参照、Ｎ−アシルアミドについては、マーチ、前出、３７９参照、Ｎ−マンニッヒ（Ｍａｎｎｉｃｈ）塩基については、マーチ、前出、８００−０２及び８２８参照、ヒドロキシメチルケトンエステルについては、ペトラセックら、アナリシス ニューヨーク アカデミック．サイエンス（Ｐｅｔｒａｃｅｋ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，）５０７：３５３−５４（１９８７）参照、ジスルフィド、ホスホネートエステル及びホスホナミデートについては、マーチ、前出、１１６０参照。

反応性機能グループは、それらが反応性自己誘発物類似体の組み立てに必要な反応に参加又は妨害しないように選択することが出来る。別法として、反応性機能グループは、保護グループの存在により、反応への参加から防ぐことが出来る。当業者は、特定の機能性グループを、選択された一連の反応条件に干渉することから防ぐ方法を理解するであろう。有用な保護グループの例については、グリーンら、有機化学合成における保護基部グループ（Ｇｒｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ，ＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥ ＧＲＯＵＰＳ ＩＮ ＯＲＧＡＮＩＣ ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ，）、ジョン ウィリー＆ソンズ、ニューヨーク（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，）１９９１参照。

典型的には、ターゲッティング剤は細胞毒素に、標準の化学的技法を用い、それぞれの化学的機能性を介して共有結合で連結される。任意に、デンドリマー（樹状突起体）又は試薬は、ターゲッティング剤に一つ以のスペーサーグループを介して連結される。スペーサーグループは、組み合わせて使用される場合、等価であっても異なっていてもよい。

一般に、細胞毒素とターゲッティング剤（又は他の薬剤）、ならびに随意にスペーサーグループとの間に結合を形成する前に、化学機能性の少なくとも一つが活性化される。当業者は、ヒドロキシ、アミノ、及びカルボキシグループを含む多様な化学機能性が種々の標準の方法と条件を用いて活性化され得ることがわかる。例えば、細胞毒素又はターゲッティング剤のヒドロキシルグループは、ホスゲン処理により活性化されて対応スルクロロフォーメートを形成し、ｐ−ニトロフェニルクロロフォーメート処理により活性化されて対応するカーボネートを形成する。

典型的な実施の形態において、本発明は、カルボキシル機能性を含むターゲッティング剤を利用する。カルボキシルグループは、例えば、対応するハロゲン化アシル又は活性エステルへの転化により活性化されてもよい。この反応は、マーチ、前出、ｐｐ．３８８−８９に説明されているような種々の条件下で行われ得る。典型的な実施の形態において、ハロゲン化アシルは、カルボキシル含有グループの塩化オキザリルとの反応を介して調製される。活性化された試薬は、細胞毒素、又は細胞毒素−リンカーアームの組合せと反応して本発明の抱合体を形成する。当業者は、カルボキシル含有グループを含むターゲッティング剤の使用は単に説明のためであること、ならびに多くの他の機能グループを持つ試薬が本発明の樹状突起体に抱合出来ることを認識するであろう。

本発明の化合物が、検出可能なラベルに抱合する場合、そのラベルは、好適には放射活性同位元素、蛍光試薬、蛍光試薬前躯体、発色団、酵素及びそれらの組合せからなるグループから選ばれた一種である。種々のグループを抗体に抱合する方法は当分野では周知である。例えば、抗体にしばしば抱合される検出可能なラベルは、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ（性）ホスファターゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ及びグルコ−スオキシダーゼのような酵素である。

＜検出可能なラベル＞
本発明の化合物及び方法に関連して用いられる特定のラベル又は検出可能なグループは、それが本発明の化合物の活性又は有用性に重大な干渉をしない限り、一般に本発明の重要な局面ではない。検出可能なグループは、検出可能な物理的又は化学的性質を有する如何なる物質であってもよい。このような検出可能なラベルは、免疫検定の分野でよく開発されていて、一般に、このような方法に有用なたいていの如何なるラベルも本発明に適用することが出来る。それゆえラベルは、分光光度的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的、又は化学的手段によって検出出来る何らかの組成物である。本発明における有用なラベルは、磁性ビーズ（例えば、ダイナビーズ（ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ^TM））、蛍光色素（例えば、フルオレッセイン・イソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミン等）、放射能ラベル（例えば、³Ｈ、¹²⁵Ｉ、³⁵Ｓ、¹⁴Ｃ又は³²Ｐ）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びＥＬＩＳＡで通常使用される他の酵素）及び金コロイド又は着色ガラス或いはプラスチックビ−ズ（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックス等）のような比色測定ラベルを含む。

ラベルは、直接又は間接に、当分野で周知の方法に従って、本発明の化合物に結合され得る。上記のように、多様なラベルが、要求される感受性、化合物との抱合の容易性、安定性必要条件、利用可能な装置、及び処理施設に依存するラベルの選択によって使用され得る。

非放射性同位体ラベルは、しばしば間接的手段によって付けられる。一般に、リガンド分子（例えば、ビオチン）は抱合体の成分に共有結合する。リガンドは次いで別の分子（例えば、ストレプトアビジン）分子に結合し、これは本質的に検出可能であり、又は検出可能な酵素、蛍光化合物或いは化学発光化合物のようなシグナル系に共有結合している。

本発明の抱合体の成分は、また、直接にシグナル発生化合物に、例えば、酵素或いは蛍光団との抱合により抱合することが出来る。ラベルとして興味深い酵素は、主としてヒドロラーゼ、特にホスファターゼ、エステラーゼ及びグリコシダーゼ、又はオキシダーゼ、特にペロオキシダーゼであろう。

蛍光化合物はフルオレッセインとその誘導体、ローダミンとその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン等を含む。化学発光化合物は、ルシフェリン、及び２，３−ジヒドロフタラジンダイオン、例えば、ルミノールを含む。使用の可能性のある種々のラベル又はシグナル発生系の概説については、米国特許（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ）Ｎｏ．４，３９１，９０４参照。

ラベル検出手段は当業者には周知のことである。それゆえ例えば、ラベルが放射活性ラベルである場合、検出手段はシンチレーションカウンター又はオートラジオグラフィーにおけるような写真フイルムを含む。ラベルが蛍光ラベルである場合、ラベルは蛍光発光団を適当な波長の光で励起し、その結果起こる蛍光を検出することによって検出し得る。蛍光は肉眼で、写真フイルムによって、電荷共役装置（ＣＣＤｓ）又は光電子増倍管のような電子検出器等を用いて検出してもよい。同様に、酵素的なラベルは、その酵素の適切な基質を提供してその結果得られる反応生成物を検出して見つけてもよい。最後に、単純な比色ラベルは、単に、ラベルに関連する色を観察することによって検出してもよい。かくして、種々の計深棒検査において、金はしばしば桃色を呈し、一方、種々の抱合ビーズはそのビーズの色を表す。

蛍光ラベルは、取り扱いにそれほど警戒を要せず、且つ、高処理量の視覚化技法（コンピューターからなる統合システムにおける分析のため画像のディジタル化を含む光学分析）に対応し得るので現在好まれている。好適なラベルは、典型的に以下の一つ以上の特徴を持っていて、それらは、高感度、高安定性、低バックグラウンド、低環境感受性、及びラベルの高特異性である。多くの蛍光ラベルが以下の、ならびに当業者には既知の多数の他の商業的供給源から市場で入手出来、それらは、シグマケミカルカンパニー（サン ルイス）（ＳＩＧＭＡ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）、アール＆ディーシステムス（ミネアポリス）（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ））、ファーマシア エルケイビー バイオテクノロジー（ピスカタウェイ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、クローンテック ラボラトリース インク．（パロ アルト）（ＣＬＯＮＴＥＣＨ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ））、ケム ジーンス コーポ．（Ｃｈｅｍ Ｇｅｎｅｓ Ｃｏｒｐ．）、アルドリッチ ケミカルカンパニー（ミルウォーキー）（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ））、グレン リサーチ インク．（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．）、ギブコ ビーアールエル ライフテクノロジース インク．（ゲーサーズバーグ）（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））、フルカ ケミカ−バイオケミカ アナリティカ（フルカ ケミ エージー（ブーフス スイス）（Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｃａ−Ｂｉｏｃｈｅｍｉｋａ Ａｎａｌｙｔｉｋａ（Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｅ ＡＧ，Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））、及びアプライド バイオシステムス（フォスターシティ）（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ， ＣＡ））である。さらに、当業者は、特定の適用に対する適切な蛍光発色団を、もしそれが容易に市場で入手出来ないならば、選択する方法を認識し、且つ、必要な蛍光発色団を新たに合成し、又は、市場で入手出来る蛍光化合物を合成的に修飾して所望の蛍光ラベルに到達することが出来るであろう。

低分子の蛍光発色団に加えて、天然由来の蛍光タンパク質及びこのようなタンパク質を遺伝子工学で改変した類似体は本発明に有用である。このようなタンパク質は、例えば、刺胞動物の緑色蛍光タンパク質（ワードら フォトケム．フォトバイオル．フィジオル．（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｔｏｂｉｏｌ．）３５：８０３−８０８（１９８２））、レビニューら、コンプ．バイオケム．フィジオ．（Ｌｅｖｉｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏ．，）７２Ｂ：７７−８５（１９８２））、ビブリオ フィッシェリ ストレイン（Ｖｉｂｒｉｏ ｆｉｓｃｈｅｒｉ Ｓｔｒａｉｎ）からの黄色蛍光タンパク質（バルドウィンら、バイオケミストリー（Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）２９：５５０９−１５（１９９０））、渦べん毛虫（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．）からのペリジニン−クロロフィル（モーリスら、プラント モレキュラー バイオロジー（Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）２４：６７３−６７７（１９９４））、シネチョコッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）のような海洋シアノバクテリア（ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）からのフィコビリタンパク質、例えば、フィコエリスリンとフィコシアニン タンパク質（ウィルバンクら、ジャーナル オブ バイオ．ケム．（Ｗｉｌｂａｎｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２６８：１２２６−３５（１９９３））等を含む。

＜医薬製剤（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）＞
別の実施の形態において、本発明は、本発明の化合物と薬剤として許容され得る担体からなる医薬製剤を提供する。

なお実施の形態において、本発明は、薬剤として許容され得る担体とターゲッティング剤の本発明の細胞毒素との抱合体を含む医薬製剤を提供する。

本発明に記載の化合物、又は薬剤として許容され得るその付加塩又はその水和物は、患者に多様な経路或いは投与様式を用いて投与出来る。適当な投与経路には、これらに限定されるものではないが、吸入、経皮、経口、直腸内、経粘膜、腸内及び筋肉内、皮下ならびに静脈内注射を含む非経口投与が含まれる。

本発明で使われているように、用語「投与する」又は「投与」は、直接及び間接に化合物をその所望の作用部位に送達するすべての手段を含むことを意図する。

本発明に記載の化合物、又は薬剤的に許容される塩及び／又はその水和物は、単一で、本発明の他の化合物と組み合わせて、及び／又は他の治療薬と混合したカクテルで投与されてもよい。勿論、本発明の化合物と共投与され得る治療薬の選択は、部分的に、処置される病状次第である。

例えば、自己誘発物質に依存する生物によって併発される病態を患っている患者に投与される場合、本発明の化合物は、疼痛、感染及び他の症状ならびにその疾病に通常伴う副作用の処置に使用される薬剤を含むカクテルで投与することが出来る。このような薬剤は、例えば鎮痛剤、抗生物質等を含む。

がん治療を受けている患者に投与される場合、化合物は抗がん剤及び／又は補助強化剤を含むカクテルで投与してもよい。化合物は、また、制吐剤、放射線防護剤等のような放射線治療の副作用を処理する薬剤を含むカクテルで投与してもよい。

本発明の化合物と共投与され得る補助強化剤は、例えば、以下の薬物を含む、三環系抗うつ薬（例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドキセピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモキサピン及びマプロチリン）、非三環系抗うつ薬（例えば、セルトラリン、トラゾドン及びシタロプラム）、Ｃａ²⁺拮抗薬（例えば、ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピン及びカロベリン）、アンフォテリシン、トリパラノール類似体（例えば、タモキシフェン）、抗不整脈薬剤（例えば、キニジン）、血圧降下薬（例えば、レセルピン）、チオール除去薬（例えば、ブシオニン及びスルフォキシミン）、及びカルシウムロイコボリンである。

本発明の活性化合物は、そのまま或いは医薬組成物の形で投与され、活性化合物は一つ以上の医薬として許容され得る担体、賦形剤、又は稀釈剤との混合物となっている。本発明に従って使用される製剤組成物は、典型的には、賦形剤及び補助剤からなる一つ以上の生理学的に許容される担体を用い、通常の方法で処方され、この担体は活性化合物の、医薬として使用することが出来る製剤への処置を容易にしている。妥当な処方は、選ばれた投与経路次第である。

注射のためには、本発明の薬物は水溶液に、好適にはハンク溶液、リンガー溶液、又は生理食塩水のような生理的に適合した緩衝液で処方されてよい。経粘膜投与に対しては，浸透すべきバリヤーに適当な浸透剤が処方に用いられる。このような浸透剤は、当分野では周知のことである。

経口投与に対して、化合物は、活性化合物を当分野では周知の製剤的に許容される担体と結合することにより容易に処方され得る。このような担体は、治療される患者による経口摂取のために、本発明の化合物が錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー（泥漿）剤，懸濁液剤等として処方されることを可能にする。経口使用のための医薬製剤は、固体の賦形剤を用いて得ることができ、その結果得られた混合物を任意にすり潰し、必要なら、適当な補助剤を加えた後、顆粒混合物を加工処理して錠剤又は糖衣錠の芯を得る。適当な賦形剤は、特に乳糖、ショ糖、マニトール又はソルビトールを含む糖のような補形剤例えば，とうもろこし澱粉、小麦澱粉、米澱粉、馬鈴薯澱粉、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシジエチルセルーロースナトリウムのようなセルロ−ス製品、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。必要に応じて、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、又はアルギン酸ナトリウム等の塩を分解試薬として加えてもよい。

糖衣錠の芯には適当なコーティングが提供される。このために、濃縮糖溶液が使用され、この液は任意にアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコ−ル、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液、及び適当な有機溶媒、或いは溶媒混合物を含むことがある。染料又は色素を錠剤或いは糖衣錠のコ−ティングに識別のため、又は活性化合物の用量の異なった組合せを特徴づけるために加えてもよい。

経口で使用出来る医薬製剤は、ゼラチン製の押しはめカプセル剤、ならびにゼラチン及びグリセロール又はソルビトールのような可塑剤で作られた軟らかい封入カプセル剤を含む。押しはめカプセル剤は、活性成分を乳糖のような賦形剤、澱粉のような結合剤、及び／又はタルク又はステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤，ならびに任意に安定剤と混ぜて含むことが出来る。軟カプセル剤内に、活性化合物は、脂肪油、流動パラフィン、或いは流動ポリエチレングリコールのような適当な液体に溶解又は懸濁してもよい。さらに、安定剤を加えてもよい。経口投与のすべての処方は、このような投与に適切な薬用量であるべきである。

バッカル投与に対して、組成物は、通常の方法で処方調剤された錠剤又はトローチ剤の形を取る。

吸入投与に対して、本発明に従って使用される化合物は、適当なプロペラント（噴射剤）、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、炭酸ガス又は他の適当なガスと共に加圧パック又はネブライザーからのエアロゾルスプレー投与の形で便利に送達される。

加圧エアロゾルの場合、薬用量単位は、計器測定量を送達するためのバルブを用意することによって決定してもよい。吸入器又はインサフレーターに使用される例えばゼラチンのカプセル及び薬包は、化合物と乳糖又は澱粉のような適当な粉末基材との粉末混合物を含んで処方調剤される。

化合物は、注射、例えば、一時的大量注射又は連続注射による非経口投与のために処方調剤されるものがある。注射のための処方調剤は、単位薬用量の形で、例えば、保存剤を加えてアンプルで、又は複数用量容器で提出される。組成物は、油性又は水性の賦形剤中で、懸濁液、溶液又は乳濁液のような形をとってもよく、且つ、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、或いはアルギン酸又はアルギン酸ナトリウムのようなその塩の如き懸濁化、安定化、及び／又は分散化剤のような調剤薬を含むことがある。

非経口投与のため医薬製剤は、水溶型の活性化合物の水溶液を含む。そのうえ、活性化合物の懸濁液が適当な油状の注射懸濁液として調製されることがある。適当な親油性溶媒又は賦形剤は、ごま油のような脂肪油、或いはエチルオレエート（オレイン酸エチルエステル）又はトリグリセリド、或いはリポソームのような合成脂肪酸エステルを含む。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランのような懸濁液の粘度を増大する物質を含むことがある。任意ではあるが、懸濁液は、また、適当な安定剤又は化合物の溶解度を増大して高濃度溶液の調製を可能にする薬剤を含んでもよい。

代わりとして活性成分は、使用する前に適当な賦形剤、例えば、無菌の発熱物質を含まない水で薬剤に構成するための粉末状であってもよい。

化合物はまた、例えば、カカオ脂又は他のグリセリドのような通常の座剤基材を含む座剤或いは保持浣腸剤のような肛門剤組成物に調剤されてもよい。

前述の調剤に加えて、化合物は、また、デボー調製薬品として調剤されることがある。このような長時間作用性の調剤は、移植又は経皮的送達（例えば、皮下的に、又は筋肉内的に）、筋肉内注射、或いは経皮パッチ（貼布）によって投与されることがある。かくして、例えば、化合物は、適当な高分子又は疎水性物質（例えば、薬剤として許容される油中の乳濁液として）又はイオン交換樹脂と共に、或いは難溶性誘導体として、難溶性塩として調剤されてもよい。

医薬組成物はまた、適当な固相又はゲル相の担体、或いは賦形剤を含むことがある。このような担体又は賦形剤の例は、炭酸カルシウム、燐酸カルシウム、種々の糖、澱粉、セルロース誘導体、ゼラチン、及びポリエチレングリコールのような高分子を含むが、これらに限定されるものでない。

＜ライブラリー＞
本発明の細胞毒素、細胞毒素とリンカーの細胞毒素−リンカー及び薬物−リンカー抱合体のライブラリーもまた本発明の範囲内にある。典型的なライブラリーは、少なくとも１０種の化合物、さらに好適には少なくとも１００種の化合物、さらにより好適には少なくとも１０００種の化合物、なおさらに好適には少なくとも１００，０００種の化合物を含む。ライブラリーは、特定の性質、例えば、細胞毒性、リンカーの酵素による切断、又は他の切断試薬について容易に問いただせる形式になっている。典型的な形式は、チップフォーマット、マイクロアレイ等を含む。

平行、又は連結（コンビナトリアル）合成の主要な目的は、本発明を通じて骨格（足場、スカフォールド）と呼ばれている共通の特徴をすべて共有する種々の分子のライブラリーを創製することにある。スカフォールド分子の各可変部における異なった部分を置換することにより、ライブラリー内の探査可能空間量は大きくなる。理論と現代医薬品化学は、占有空間の概念を、与えられた化合物の与えられた生物標的に対する効力を決定する主要因子とし唱導する。標的にされる空間の大きな割合を探査する種々の分子ライブラリーを創製することによって、高度に効果的なリード（先導）化合物を開発する確率は劇的に増大する。

平行合成は、一般に高分子樹脂のような固相支持体上で行われる。スカフォールド、又は他の適当な中間体は、化学的リンカーにより樹脂に切断可能に繋がれている。反応が行われてスカフォールドを、それが粒子に繋がれている間に修飾する。試薬及び／又は反応条件の変更により構造の多様性が生じこれが各ライブラリーの顕著な特徴である。

「低」分子（分子量２００−１０００の非オリゴマー）の平行合成は、１９９０年以前にはめったに試みられなかった。例えば、キャンプスら、アナクス デ クイミカ（Ｃａｍｐｓ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｋｓ ｄｅ Ｑｕｉｍｉｃａ，）７０：８４８（１９９０）参照。最近、エルマン（Ｅｌｌｍａｎｎ）が、いくつかのプロスタグランジン及びβターン模写体と共に、１１種のベンゾジアピン類似体の固相支持の平行（また「コンビナトリアル」とも呼ばれる）合成を開示した。これらの開示は、米国特許第５，２８８，５１４号に例示されている。別の関連ある低分子の平行合成の開示は米国特許第５，３２４，４８３号に見出されるであろう。この特許は、１６の異なった各スカフォールドにおける４から４０種の化合物の平行合成を開示している。

チェンらは、また、有機合成戦略を適用して、高分子支持体上で多段階工程を用いて合成された非ペプチドライブラリーを開発している（チェンら、ジャーナル オブ アメリカン ケミカル ソサイエティ（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，）１１６：２６６１−２６６２（１９９４））。

一旦、特異な化合物のライブラリーが生成されると、免疫抱合体、又は抗体のライブラリーの調製は、自己誘発物質のライブラリーを出発点として用い、本発明に記載の方法を用いて行うことが出来る。

＜キット＞
別の局面において、本発明は、本発明の一種以上の化合物又は組成物を含むキットならびに化合物又は組成物の使用法を提供する。典型的な実施の形態において、本発明は本発明のリンカーアームを別の分子に抱合するためのキットを提供する。キットは、リンカー、及びリンカーを特定の機能性グループに付けるための方法を提供する。キットに対する他のフォーマットは、当業者には明らかであり、且つ、本発明の範囲内にある。

＜方法＞
上述の組成物及び構成物に加えて、本発明は、また、本発明の化合物及び抱合体を利用して実施出来る多数の方法を提供する。

＜精製＞
別の典型的な実施の形態において、本発明は、本発明の細胞毒素に対する分子標的を分離する方法を提供し、細胞毒素は、その構造の一部として構造式Ｉに従うグループを持つ分子に結合する。この方法は、好適には、標的を含む細胞調製物を構造式Ｉに従う固定化化合物と接触させ、それによって受容体と固定化化合物との間に複合体を形成することからなる。

本発明の細胞毒素は、親和性支持体上に、何らかの当分野で認められている手段によって親和性支持体上に固定化され得る。別法として、細胞毒素は、一種以上の本発明のリンカーを用いて固定化することが出来る。

なお別の典型的な実施の形態において、本発明は、本発明のリンカーを含む親和性精製マトリックスを提供する。

本発明の標的分離方法は、典型的にはアフィニイティークロマトグラフィー技法を利用する。アフィニイティークロマトグラフィーは、生体分子又は生体高分子のような分子種の持つ一定の支持された化学構造に対する高感度の認識部位を利用して、それらの効率のよい分離を可能にする。文献は、アフィニイティークロマトグラフィーを主題とする記事、小研究論文、及び書籍で充満しており、アフィニイティークロマトグラフィー支持体、架橋メンバー、リガンド、ならびにそれらの調製と使用のような題目を含んでいる。これら参考文献を選び出してみると以下の文献が含まれる、オストローブ メソッズ エンザイモル．（Ｏｓｔｒｏｖｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．）１８２：３５７−７１（１９９０）、ファーメント、バイオエンジニアリング（Ｆｅｒｍｅｎｔ，Ｂｉｏｅｎｇ．）７０：１９９−２０９（１９９０）、ハンら、ジャーナル オブ クロマトグラフィー（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．）４９２：４３１−６９（１９８９）、“ヘパリン−セファロース アフィニティークロマトグラフィーによる酵素の精製”（“Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ ｂｙ ｈｅｐａｒｉｎ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ”）、ジャーナル オブ クロマトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，）１８４：３３５−４５（１９８０）；ファロッキー、エンザイム アンジニアリング（Ｆａｒｏｏｑｉ，Ｅｎｚｙｍｅ Ｅｎｇ．，）４：４４１−２（１９７８）、ニシカワ、ケミカル テクノロジー（Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，）５（９）：５６４−７１（１９７５）、ギルフォードら、プラクト．ハイパフォーム．リキッド クロマトグラム（Ｇｕｉｌｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ，ＰＲＡＣＴ．ＨＩＧＨ ＰＥＲＦＯＲＭ．ＬＩＱ．ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲ．，）、シンプソン（編）（Ｓｉｍｐｓｏｎ（ｅｄ．））１９３−２０６（１９７６）、ニシカワ、プロック．イント．ワークショップ テクノロジー プロテイン セプ．インプロブ．ブラッド プラズマ フラクション、サンベルグ（編）、（Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｗｏｒｋｓｈｏｐ Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｐ．Ｉｍｐｒｏｖ．Ｂｌｏｏｄ Ｐｌａｓｍａ Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ，Ｓａｎｄｂｅｒｇ（ｅｄ．））４２２−３５（１９７７）、“酵素のアフィニティー クロマトグラフィー”、（“Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ，”）アフィニティークロマトグラフィー、プロック．イント．シンプ．（Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐ．）２５−３８，（１９７７）（Ｐｕｂ．１９７８）、及びアフィニティークロマトグラフィー（ＡＦＦＩＮＩＴＹ ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹ）：ア プラクティカル アプローチ（Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ）、ディーンら（編）、アイアール プレス リミテッド オックスフォード、イングランド（Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄ．），ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｏｘｆｏｒｄ， Ｅｎｇｌａｎｄ）（１９８５）。当業者は、本発明の資料を利用して、特定のアフィニイティークロマトグラフィー法を開発に十分な手引きを有する。

現法において、種々の化学的構造を持つアフィニイティークロマトグラフィーの媒体を支持体として使用することが出来る。例えば、アガロースゲル及び架橋されたアガロースゲルは、その親水性により非特異的結合が比較的少ないので支持体として有用である。他の有用な支持体には、例えば、細孔径調節ガラス（ＣＰＧ）ビーズ、セルロース粒子、ポリアクリルアミドゲルビーズ及びデキストランとエピクロロヒドリン製のセファデックスビーズが含まれる。

＜疾病の治療＞
本発明の細胞毒素は、活性で強力なデュオカルマイシン誘導体である。元の試薬は、例外的に強力な抗腫瘍抗生物質であり、その生物学的効果を、ＤＮＡの可逆的、立体電子的に制御された順序選択性アルキル化を介してもたらす（ボジャーら、ジャーナル オブ オーガニック ケミストリー（Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）５５：４４９９（１９９０）；ボジャーら、ジャーナル オブ アメリカン ケミカル ソサイエティー（Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１１２：８９６１（１９９０）；ボジャーら、ジャーナル オブ アメリカン ケミカル ソサイエティー（Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１１３：６６４５（１９９１）；ボジャーら、ジャーナル オブ アメリカン ケミカル ソサイエティー（Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１１５：９８７２（１９９３）；ボジャーら、バイオオーガニック メソッド ケミカル レター（Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．）２：７５９（１９９２））。デュオカルマイシンの最初の開示に引き続いて、広範囲の努力がデュオカルマイシンのＤＮＡアルキル化選択性とその構造的原因の解明に注がれている。

なお、さらなる実施の形態において、本発明は、細胞死滅の方法を提供する。この方法は、細胞にその細胞を殺すに十分な量の本発明の化合物を投与することを含む。典型的な実施の形態において、化合物は、その細胞を持つ患者に投与される。さらなる実施の形態において、この投与は、その細胞を含む腫瘍の生長を遅延停止する役目を果たす。

＜有効薬用量＞
本発明による使用に適当な医薬組成物は、その活性成分が治療有効量で即ち、その所望の目的達成に有効な量で含まれている組成物を包含する。特定の適用に有効な実際量は、とりわけ、治療される病状次第で決まる。例えば、鎌状赤血球の脱水を軽減し、及び／又は赤血球の鎌状赤血球化又は変形の発生を原位置で遅延させる方法で投与される場合、このような組成物は、この結果を達成するために有効な量の活性成分を含む。有効量の決定は、特に本発明における詳細な開示に照らし、当業者の能力で十分に可能である。

本発明に記載のどの化合物についても、治療に有効な量は、最初に細胞培養試験から決定することが出来る。目標の血漿濃度は、細胞の生長又は分裂を阻害する能力のある活性化合物の濃度である。好適な実施の形態において、細胞活性は少なくとも２５％阻害される。細胞活性の少なくとも約５０％、７５％或いは９０％以上さえもの阻害を誘引する能力のある活性化合物の目標血漿濃度が今のところの望ましい。患者における細胞活性の阻害率を測定して、達成された血漿の薬物濃度の適切性を評価することが出来、且つ、薬用量を上下に調節して所望の阻害率を得る事が出来る。

当分野では周知のように、ヒトに使用するための治療有効量は、また、動物モデルからも決定することが出来る。例えば、ヒトに対する薬用量は、動物において有効と見出された血中循環濃度を達成するように処方することが出来る。ヒトにおける薬用量は、上述のように、細胞阻害を測定して薬用量を上下に調節して調整することが出来る。

治療有効薬用量はまた、同様の薬理学的活性を発現することが知られている化合物についてのヒトのデータから決定することも出来る。適用される薬用量は、既知化合物と比較して、投与された化合物の相対的バイオアベイラビリティー及び力価に基づいて調節することが出来る。

当分野では周知のように、上述の方法及び他の方法に基きヒトにおける最大効果を達成するために薬用量を調節することは、当業者の能力で十分出来ることである。

局所投与の場合、投与された化合物の全身性循環濃度は、特に重要なものではない。このような場合、化合物は、所望の結果を得るために有効な局所の濃度を達成するように投与される。

異常な細胞増殖に関連する疾病の予防及び／又は治療への使用には、投与された化合物の約０．００１μＭから２０μＭの循環濃度が好適で、約０．０１μＭから５μＭがさらに好適である。

本発明に記載の化合物の経口投与についての患者への濃度は典型的には、一日当たり、約１ｍｇから約１０，０００ｍｇ、さらに典型的には、約１０ｍｇから約１，０００ｍｇ、最も典型的には、約５０ｍｇから約５００ｍｇの範囲である。患者の体重の見地から言えば、典型的な薬用量は、約０．０１から約１５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、さらに典型的には、約０．１から約１５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、最も典型的には、約１から約１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの範囲である。

他の投与様式については、薬用量と投与間隔を個々に調節して治療されている特定の臨床徴候に有効な投与化合物の血漿レベルを提供することが出来る。例えば、ある実施の形態において、本発明に従う化合物は、比較的高濃度で、一日当たり、多数回投与出来る。その代わりに、本発明の化合物を、最低有効濃度で投与し、且つ、より頻繁でない投与プログラムを用いることがさらに望ましいことがある。このことは、個人の疾病の重篤度に相応した治療プログラムを提供することができる。

本発明に提供された教示を利用して、実質的な毒性を引き起こさず、しかも特定の患者の示す臨床症状の治療に完全に効果のある有効な治療処置プログラムを計画することが出来る。この計画は、化合物の力価、相対的バイオアベイラビリティー、患者の体重、有害な副作用の存在と重篤度、好適な投与様式及び選ばれた薬物の毒性の輪郭を考慮して活性化合物を慎重に選択することを含むべきである。

本発明の化合物、組成物及び方法は、以下に続く実施例によりさらに説明される。これらの実施例は、本発明を説明するために提出されるのであって、本発明を制限するためのものではない。

〔実施例１〕
＜１．１ 材料と方法＞
以下の実施例において、特に言及がなければ、温度は摂氏（℃）で与えられ、操作は室温又は外界温度（典型的には、約１８−２５℃の範囲）で行われ、溶媒の蒸発は、減圧下（典型的には、４．５−３０ｍｍＨｇ）、６０℃までの浴温度でロータリーエバポレーターを用いて行われ、反応経過は典型的にＴＬＣで追跡され、また、反応時間は説明のためのみに与えれ、融点は未補正であり、生成物は満足な¹Ｈ−ＮＭＲ及び／又は微量分析データを示し、得量は説明のためのみに提供され、ならびに、以下の通常の略字もまた用いられる、ｍｐ（融点）、Ｌ（リットル）、ｍＬ（ミリリットル）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、ｇ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、ｍｉｎ（分）、ＬＣ−ＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析）及びｈ（時間）。

¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、バリアンマーキュリー３００ＭＨｚ分光光度計で測定され、割当てられた構造と一致した。化学シフトは、テトラメチルシランからダウンフィールドへのｐｐｍで報告された。エレクトロスプレー質量スペクトルは、パーキンエルマーＳｃｉｅｘＡＰＩ３６５質量分析計で記録された。元素分析は、ロバートソンマイクロリットラボラトリーズ、マジソン、ＮＪによって施行された。フラッシュクロマトグラフィー用のシリカゲルは、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ等級（２３０−４００メッシュ）であった。逆相分析ＨＰＬＣは、ＨＰ １１００又はバリアンプロスター２１０装置に、ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａ５μｍＣ−１８（２）１５０ｍｍ×４．６ｍｍ ｃｏｌｕｍｎ又はＶａｒｉａｎＭｉｃｒｏｓｏｒｂ−ＭＶ０．１μｍＣ−１８ １５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ ｃｏｌｕｍｎを付けて行われた。ＵＶ２５４ｎｍの検出で、勾配０％から５０％のバッファーＢ、１５分間、又は勾配１０％から１００％のバッファーＢ、１０分間の流速は１ｍＬ／ｍｉｎであった。バッファーＡは、２０ｍＭ蟻酸アンモニウム＋２０％アセトニトリル、又は、アセトニトリル中０．１％トリフルオロ酢酸、バッファーＢは、２０ｍＭ蟻酸アンモニウム＋８０％アセトニトリルまたは１％トリフルオロ酢酸水溶液である。逆相調製用ＨＰＬＣは、バリアンプロスター２１５装置にウオータースデルタパック１５μｍＣ−１８ ３００ｍｍ×７．８ｍｍカラムを付けて行われた。

＜１．２ 合成方法＞
［１．２ａ 化合物 １３４の合成］

化学式Ｉの化合物は、適当なスピロシクロプロピルシクロヘキサジエニル類似体（化合物Ｂ）を活性化されたヘテロサイクリック化合物ＡとＮ，Ｂ−ジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）或いはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中で水素化ナトリウムを用いて反応させることにより容易に調製される。その結果生じた化合物２８は、次いで塩酸のような適当なハロ酸での処理により化合物２９に転化される。化合物２９は、接触還元により還元されて化合物６５を与え、この化合物は活性化エステルと連結して化合物１３４、化学式Ｉの化合物を与える。

化学式Ｉの他の化合物は、公表された手順に従って調製され、還元、酸化、付加、水抽出、蒸発、及び精製のような当業者には周知の方法を用いて修飾されて追加の類似体を生成する。

［１．２ｂ 化合物Ａの合成］
５−ニトロ−２−カルボン酸（０．８３ｇ，４．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド（６０ｍＬ）溶液に０℃でＥＤＣ（１．１５ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を加えた。その結果得られた懸濁液を０℃で４５分間攪拌し、この時までにＥＤＣは完全に溶解した。４−ニトロフェノール（０．８３ｇ，６．０ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（０．７３ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を加え、その結果得られた混合物を外界温で攪拌した。１３時間後、混合物を酢酸エチルで希釈、１０％クエン酸水溶液で２回、続いて水、及び塩水で洗浄、次いでＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥、ろ過して、減圧濃縮した。その結果得られた残渣を、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中７％ 酢酸エチル）で精製し、１．０２ｇ（７８％）のＡが黄色固体として得られた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）δ９．０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．２（ｄ，２Ｈ），７．８（ｍ，２Ｈ），７．４（ｄ，２Ｈ），７．３（ｓ，１Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ）．

［１．２ｃ 化合物２８の合成］
化合物Ｂ（２０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）溶液に、−４０℃で水素化ナトリウム（４．０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、油中６０％）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）溶液を加えた。得られた混合物は、徐々に（１．５ｈ）０℃まで温まるにまかせ、次いで−４０℃に冷やしもどした。Ａ（３７ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を加えて、混合物は徐々に（１．５ｈ）０℃まで温まるにまかせ、その温度に２０分間保持した。混合物を−３０℃に冷却、酢酸（１０ｕＬ）で反応停止、１０分間攪拌、酢酸エチルで希釈、次いで水次に塩水で洗浄した。有機層を分離してＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥、ろ過して、減圧濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中５０％から１００％酢酸エチル）精製により１６．３ｍｇ（４３％）の２８をやや黄色の固体として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）δ１１．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４（ｍ，２Ｈ），７．１（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ），４．４（ｓ，２Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），２．４（ｄｄ，１Ｈ），１．４（ｍ，１Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ４９０（Ｍ−Ｈ）^-．

［１．２ｄ 化合物２９の合成］
化合物２８（５０ｍｇ，０．１０３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）溶液を、１ｍＬの無水塩化水素（ジオキサン中）で処理した。得られた溶液を外界温で３０分間攪拌し、次いで溶媒を濃縮した。得られた残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中５０％から１００％酢酸エチル）で精製して５０ｍｇ（１００％）の２９をやや黄色の固体として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣＬ₃）δ１１．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４（ｍ，２Ｈ），７．１（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ），４．４（ｓ，２Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），２．４（ｄｄ，１Ｈ），１．４（ｍ，１Ｈ）．

［１．２ｅ 化合物６５の合成］
２９（１１０ｍｇ，０．１８４ｍｍｏｌ）の１：１メタノール：メチレンクロリド（２０ｍｌ）溶液に、１０％パラジウム活性炭（１００ｍｇ）を加えた。混合物をパー（Ｐａｒｒ）装置を用い、５０ｐｓｉで１時間水素化した。混合物をセライト上でろ過し、メチレンクロリドで洗浄、次いで減圧濃縮して９４ｍｇ（９０％得量）の６５を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）δ７．８−７．３（ｍ，５Ｈ），４．４（ｍ，３Ｈ），３．８（ｍ，５Ｈ），３．４（ｓ，３Ｈ）。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ４５４（Ｍ−Ｈ）^-．

［１．２ｆ 化合物１３４の合成］
化合物Ｃ（１９ｍｇ，０．０４４ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（２−（１Ｈ−７−ａｚａｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ−１−ｙｌ）−１，１，３，３−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｕｒｏｎｉｕｍ ｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）（５０ｍｇ，０．１３２ｍｍｏｌ）をジメチルフォルムアミド（２ｍｌ）に溶解し、Ｎ−メチルモルフォリン（１９．３μ１，０．１７６ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、６５（２０ｍｇ，０．０４４ｍｍｏｌ）のジメチルフォルムアミド（１ｍｌ）溶液を加えた。反応混合物を１６時間、室温で攪拌し、次いで減圧濃縮した。得られた固体を水及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄して真空乾燥し、次いで酢酸エチルで洗浄した。粗製品をシリカゲルと５％メタノール／メチレンクロリドを用いて精製し、１５ｍｇ（３９％ｙｉｅｌｄ）の１３４を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１１．０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１０．９ （ｓ，１Ｈ），８．５（ｓ，１Ｈ），８．３（ｂｒ ｓ，２Ｈ），８．０（ｍ，２Ｈ），７．９（ｓ，１Ｈ），７．７（ｍ，３Ｈ），７．５（ｄ，１Ｈ），７．３（ｔ，２Ｈ），４．６（ｍ，２Ｈ），４．５（ｄ，２Ｈ），［４．３］（ｍ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．７（ｄ，１Ｈ），３．５（ｔ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），１．７（ｍ，２Ｈ），０．９（ｄ，６Ｈ）．

同様に、以下の化合物が調製された。

４６：¹ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ８．９（ｓ，１Ｈ），８．７（ｓ，１Ｈ），８．４（ｄｄ，１Ｈ），８．１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），４．８（ｄ，１Ｈ），４．５５（ｍ，２Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｓ，１Ｈ），３．７（ｍ，４Ｈ），３．４（ｔ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．５（ｂｒ ｓ，４Ｈ），２．４（ｓ，３Ｈ）．

９５：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１２（ｓ，１Ｈ），１０．６（ｄ，１Ｈ），８．２５（ｓ，１Ｈ），８．２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１（ｓ，１Ｈ），７．７（ｍ，５Ｈ），７．５（ｄ，１Ｈ），４．６（ｔ，１Ｈ），４．５（ｄ，１Ｈ），４．４（ｍ，２Ｈ），４．１（ｍ，１Ｈ），３．９（ｄ，２Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．３（ｍ，１０Ｈ），２．８（ｓ，３Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），１．６（ｂｒ ｓ，３Ｈ），０．９（ｓ，６Ｈ）．

４７：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ９．１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４（ｔ，２Ｈ），６．９（ｓ，１Ｈ），６．８（ｄｄ，１Ｈ），４．８（ｄ，１Ｈ），４．５（ｍ，２Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｍ，３Ｈ），３．７（ｍ，２Ｈ），３．４（ｔ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．６（ｂｒ ｓ，４Ｈ），２．４（ｓ，３Ｈ）．

５２：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１２．５（ｓ，１Ｈ），１１．８（ｓ，１Ｈ），１０．４（ｓ，１Ｈ），８．４（ｓ，１Ｈ），７．８（ｍ，５Ｈ），７．５（ｍ，２Ｈ），７．３（ｔ，１Ｈ），７．１（ｔ，１Ｈ），６．７（ｓ，１Ｈ），４．６（ｍ，４Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ）．

１０８：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１０．９（ｓ，１Ｈ），１０．７（ｓ，１Ｈ），１０．０（ｓ，１Ｈ），８．５（ｓ，１Ｈ），８．３（ｓ，１Ｈ），８．１（ｍ，５Ｈ），７．８（ｍ，５Ｈ），７．５（ｍ，２Ｈ），７．３（ｍ，５Ｈ），７．１（ｍ，５Ｈ），５．０（ｍ，２Ｈ），４．８（ｍ，１Ｈ），４．６（ｍ，２Ｈ），４．３（ｍ，２Ｈ），４．１（ｔ，２Ｈ），３．９（ｍ，１Ｈ），３．７（ｍ，４Ｈ），３．０（ｍ，６Ｈ），２．６（ｓ，２Ｈ），２．３（ｔ，１Ｈ），１．８（ｓ，３Ｈ），１．５（ｍ，９Ｈ），１．３（ｍ，４Ｈ），０．８（ｍ，６Ｈ）．

４３：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１２．１（ｓ，２Ｈ），１１．８（ｓ，１Ｈ），１０．５（ｄ，１Ｈ），８．３（ｓ，１Ｈ），８．０（ｓ，１Ｈ），７．８（ｍ，５Ｈ），７．６（ｓ，１Ｈ），７．２（ｄ，２Ｈ），４．７（ｍ，２Ｈ），４．５（ｍ，３Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．５（ｍ，２Ｈ），３．２（ｍ，２Ｈ），２．９（ｓ，３Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．３（ｓ，４Ｈ）．

１５３：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１２．３（ｂｒｓ，１Ｈ），１１．７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１０．５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１０．０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．３（ｍ，２Ｈ），７．９（ｍ，４Ｈ），７．５（ｓ，１Ｈ），７．４（ｄ，１Ｈ），７．０（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，５Ｈ），４．１（ｍ，１Ｈ），３．９（ｄ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．４（ｍ，８Ｈ），２．９（ｂｒ ｓ，３Ｈ），２．８（ｓ，３Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），１．８（ｓ，２Ｈ），１．６（ｂｒ ｓ，４Ｈ），１．４（ｍ，２Ｈ），１．２（ｄ，４Ｈ），０．９（ｍ，１６Ｈ）．

４５：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１２．０（ｓ，１Ｈ），１１．６（ｓ，１Ｈ），１０．８（ｓ，１Ｈ），８．４（ｓ，１Ｈ），８．３（ｄ，２Ｈ），８．０（ｓ，１Ｈ），７．８（ｍ，３Ｈ），７．６（ｓ，１Ｈ），７．４（ｔ，１Ｈ），４．６（ｍ，５Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．４（ｍ，８Ｈ），２．９（ｓ，３Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ）．

１１５：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ９．１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．４（ｓ，１Ｈ），８．３（ｓ，１Ｈ），７．７（ｄ，１Ｈ），７．５（ｍ，３Ｈ），７．２（ｍ，３Ｈ），６．９（ｓ，２Ｈ），４．７（ｄ，１Ｈ），４．５（ｍ，４Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），３．５（ｍ，１４Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），１．３（ｔ，３Ｈ）．

１０９：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．９（ｓ，１Ｈ），１０．５（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｄ，１Ｈ），８．２（ｓ，１Ｈ），７．７（ｍ，６Ｈ），７．２（ｄ，１Ｈ），７．１（ｔ，１Ｈ），６．８（ｄ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．４（ｄ，２Ｈ），４．３（ｍ，２Ｈ），３．７（ｓ，３Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ）．

１３５：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１１．０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１０．９（ｓ，１Ｈ），８．５（ｓ，１Ｈ），８．３（ｂｒ ｓ，２Ｈ），８．０（ｍ，２Ｈ），７．９（ｓ，１Ｈ），７．７（ｍ，３Ｈ），７．５（ｄ，１Ｈ），７．３（ｔ，２Ｈ），４．６（ｍ，２Ｈ），４．５（ｄ，２Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．７（ｄ，１Ｈ），３．５（ｔ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），１．７（ｍ，２Ｈ），０．９（ｄ，６Ｈ）．

２４：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１０．８（ｓ，１Ｈ），８．６（ｓ，１Ｈ），８．３（ｍ，５Ｈ），７．９（ｓ，１Ｈ），７．８（ｄ，２Ｈ），７．７（ｄ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．６（ｄ，２Ｈ），７．４（ｍ，５Ｈ），５．３（ｓ，２Ｈ），４．９（ｔ，１Ｈ），４．７（ｄ，１Ｈ），４．４（ｍ，１Ｈ），４．０（ｍ，２Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ６９６（Ｍ−Ｈ）^-．

２５：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ８．６（ｓ，１Ｈ），８．３（ｍ，５Ｈ），７．８（ｍ，３Ｈ），７．６（ｍ，３Ｈ），７．４（ｍ，１Ｈ），４．８（ｍ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），４．１（ｍ，２Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ６０５（Ｍ−Ｈ）^-．

２７：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１０．９（ｓ，１Ｈ），１０．３（ｓ，１Ｈ），８．６（ｓ，１Ｈ），８．３（ｓ，１Ｈ），８．２（ｄ，１Ｈ），８．１（ｍ，２Ｈ），７．８（ｍ，３Ｈ），７．６（ｄ，１Ｈ），７．３（ｓ，１Ｈ），６．９（ｄ，１Ｈ），６．８（ｔ，１Ｈ），６．４（ｄ，１Ｈ），４．８（ｔ，１Ｈ），４．６（ｄ，１Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），４．０（ｍ，２Ｈ）．

１５４：¹Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ）：δ１０．７（ｓ，１Ｈ），１０．０（ｓ，１Ｈ），８．６（ｓ，１Ｈ），８．４（ｓ，１Ｈ），８．２（ｓ，１Ｈ），８．１（ｍ，３Ｈ），７．９（ｍ，５Ｈ），７．７（ｍ，１Ｈ），７．６（ｍ，３Ｈ），７．３（ｍ，５Ｈ），５．０（ｓ，２Ｈ），４．８（ｔ，１Ｈ），４．６（ｄ，１Ｈ），４．３（ｍ，３Ｈ），４．１（ｄ，１Ｈ），３．９（ｍ，１Ｈ），３．１（ｓ，１Ｈ），３．０（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，１Ｈ），２．３（ｍ，５Ｈ），１．６（ｍ，５Ｈ），１．４（ｔ，２Ｈ），１．２（ｄ，３Ｈ），０．９（ｍ，１２Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ １１３４（Ｍ−Ｈ）^-．

１６２：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．６（ｓ，１Ｈ），１０．９（ｓ，１Ｈ），１０．５（ｓ，１Ｈ），９．９（ｓ，１Ｈ），８．６（ｓ，１Ｈ），８．３（ｓ，１Ｈ），８．２（ｄ，１Ｈ），８．０（ｍ，５Ｈ），７．８（ｍ，４Ｈ），７．６（ｄ，１Ｈ），７．５（ｍ，３Ｈ），７．１（ｔ，１Ｈ），４．８（ｔ，１Ｈ），４．６（ｄ，２Ｈ），４．３（ｍ，３Ｈ），４．１（ｄ，１Ｈ），３．９（ｍ，１Ｈ），２．４（ｍ，２Ｈ），２．３（ｍ，３Ｈ）１．５（ｍ，９Ｈ），１．２（ｍ，３Ｈ），０．９（ｍ，１２Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ １０４４（Ｍ−Ｈ）^-．

７９：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ９．４（ｓ，１Ｈ），８．５（ｓ，１Ｈ），８．１（ｓ，２Ｈ），８．０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．９（ｄ，２Ｈ），７．６（ｓ，２Ｈ），７．５（ｓ，１Ｈ），７．０（ｄ，２Ｈ），６．９（ｄ，３Ｈ），４．７（ｄ，１Ｈ），４．５（ｍ，２Ｈ），４．２（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．７（ｍ，４Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ），２．４（ｔ，２Ｈ），１．１（ｓ，９Ｈ），０．４（ｂｒ ｓ，６Ｈ）．

８０：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ９．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．３（ｓ，１Ｈ），８．２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．０（ｍ，３Ｈ），７．５（ｍ，４Ｈ），７．４（ｍ，２Ｈ），７．０（ｍ，４Ｈ），４．７（ｄ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．４（ｍ，１Ｈ），４．２（ｍ，５Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．９（ｓ，３Ｈ），２．３（ｍ，２Ｈ），１．１（ｓ，９Ｈ），０．４（ｂｒ ｓ，６Ｈ）．

８１：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ１０．５（ｓ，１Ｈ），８．８（ｓ，１Ｈ），８．６（ｄ，２Ｈ），８．０（ｄ，２Ｈ），７．８（ｄ，２Ｈ），７．４（ｍ，３Ｈ），７．３（ｄ，２Ｈ），７．０（ｍ，２Ｈ），６．９（ｄ，２Ｈ），４．６（ｍ，３Ｈ），４．４（ｍ，２Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ），１．０（ｓ，９Ｈ），０．３（ｓ，６Ｈ）．

８２：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ８．５（ｓ，２Ｈ），８．４（ｓ，１Ｈ），８．２（ｓ，１Ｈ），８．０（ｍ，４Ｈ），７．６（ｍ，４Ｈ），７．５（ｓ，１Ｈ），７．３（ｓ，１Ｈ），７．１（ｓ，２Ｈ），４．７（ｍ，３Ｈ），４．５５（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ），１．０（ｓ，９Ｈ），０．４（ｂｒ ｓ，６Ｈ）．

８３：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ９．６（ｓ，１Ｈ），８．４（ｓ，１Ｈ），８．１（ｓ，２Ｈ），８．０（ｍ，１Ｈ），７．８（ｓ，１Ｈ），７．６（ｍ，２Ｈ），７．５（ｓ，１Ｈ），７．３５（ｑ，２Ｈ），７．０（ｓ，１Ｈ），４．７（ｄ，１Ｈ），４．５５（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），１．０（ｓ，９Ｈ），０．４（ｂｒ ｓ，６Ｈ）．

８９：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ９．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．２（ｓ，１Ｈ），８．０（ｂｒ ｓ，２Ｈ），７．５（ｍ，９Ｈ），７．２（ｓ，１Ｈ），７．１（ｄ，１Ｈ），６．９（ｓ，１Ｈ），５．１（ｓ，２Ｈ），４．７（ｄ，１Ｈ），４．５５（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｓ，９Ｈ），０．４（ｂｒ ｓ，６Ｈ）．

９０：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ９．６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．２（ｓ，１Ｈ），８．０（ｍ，２Ｈ），７．５（ｍ，８Ｈ），７．３（ｍ，２Ｈ），７．１（ｄ，１Ｈ），６．６（ｄ，１Ｈ），５．２（ｓ，２Ｈ），４．７（ｄ，１Ｈ），４．５５（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｓ，９Ｈ），０．３（ｂｒ ｓ，６Ｈ）．

１６３：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１２．０（ｓ，１Ｈ），１１．６（ｓ，１Ｈ），１０．４（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ），８．４（ｓ，１Ｈ），８．１（ｍ，４Ｈ），７．９（ｍ，３Ｈ），７．５（ｍ，３Ｈ），７．２（ｄ，２Ｈ），４．９（ｓ，２Ｈ），４．７（ｍ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．６（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ），１．１（ｓ，９Ｈ），０．７（ｓ，６Ｈ）．

９２：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１２．０（ｓ，１Ｈ），１０．４（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ），８．３（ｓ，１Ｈ），７．９（ｓ，１Ｈ），７．８（ｍ，４Ｈ），７．５（ｄ，２Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），６．９（ｍ，３Ｈ），４．７（ｍ，３Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，２Ｈ），３．８（ｍ，４Ｈ），３．５（ｍ，１Ｈ），３．２（ｍ，２Ｈ），２．９（ｓ，３Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ）．

９８：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ８．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１（ｄ，１Ｈ），８．０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，２Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．６（ｄ，２Ｈ），７．５（ｓ，１Ｈ），７．４（ｍ，２Ｈ），７．０（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｄ，２Ｈ），４．８（ｍ，３Ｈ），４．５５（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，６Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ），２．４（ｍ，２Ｈ），１．０５（ｓ，９Ｈ），０．４（ｂｒ ｓ，６Ｈ）．

１１０：¹Ｈ ＮＭＲ（Ｃ₃Ｄ₆₀）：δ１１．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．７（ｓ，１Ｈ），９．６（ｄ，１Ｈ），８．２（ｓ，１Ｈ），７．９（ｍ，２Ｈ），７．７（ｄ，２Ｈ），７．６（ｍ，３Ｈ），７．５（ｄ，１Ｈ），７．２（ｍ，３Ｈ），６．９（ｍ，３Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ），４．９（ｍ，２Ｈ），４．７（ｍ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），３．８（ｍ，２５Ｈ），３．５（ｍ，１Ｈ），３．２（ｍ，２Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．３（ｍ，４Ｈ），２．０（ｓ，３Ｈ）．

１１３：¹Ｈ ＮＭＲ（Ｃ₃Ｄ₆₀）：δ１１．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１０．１（ｓ，１Ｈ），９．９（ｓ，１Ｈ），８．４（ｓ，１Ｈ），７．９（ｍ，３Ｈ），７．７（ｍ，２Ｈ），７．５（ｍ，３Ｈ），７．４（ｍ，１Ｈ），７．２（ｓ，１Ｈ），７．１（ｄ，２Ｈ），６．９（ｔ，１Ｈ），５．０（ｓ，２Ｈ），４．６（ｄ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），４．４（ｍ，１Ｈ），３．９（ｄ，１Ｈ），３．７（ｓ，３Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），２．４（ｓ，３Ｈ）．

１１４：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１１．７（ｓ，１Ｈ），１０．４（ｄ，１Ｈ），１０．２（ｔ，１Ｈ），８．３（ｓ，１Ｈ），７．９（ｓ，１Ｈ），７．８（ｍ，７Ｈ），７．５（ｍ，２Ｈ），７．０（ｍ，６Ｈ），４．９（ｓ，２Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），４．４（ｍ，１Ｈ），３．９（ｄ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．７（ｍ，２Ｈ），３．５（ｍ，２５Ｈ），２．９（ｓ，３Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．２（ｍ，２Ｈ）．

１５９：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１２．０（ｍ，１Ｈ），１１．９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．３（ｍ，２Ｈ），８．０（ｍ，４Ｈ），７．６（ｍ，２Ｈ），７．３（ｓ，１Ｈ），７．１（ｄ，１Ｈ），６．９（ｓ，１Ｈ），４．５（ｍ，３Ｈ），４．３（ｍ，２Ｈ），３．９（ｄ，１Ｈ），３．８（ｓ，６Ｈ），３．５（ｍ，８Ｈ），３．２（ｍ，４Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．３（ｍ，４Ｈ），１．４（ｍ，９Ｈ），１．１（ｍ，３Ｈ），０．８（ｍ，１２Ｈ）．

１３１：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．９（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ），７．７（ｍ，１Ｈ），７．５（ｓ，１Ｈ），７．０（ｍ，３Ｈ），６．７（ｄ，１Ｈ），４．７（ｍ，１Ｈ），４．４（ｄ，１Ｈ），４．３（ｍ，２Ｈ），３．９（ｄ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ）．

１２９：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．９（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ），７．８（ｍ，４Ｈ），４．５（ｍ，２Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），３．８（ｄ，１Ｈ），３．７（ｓ，３Ｈ），３．４（ｔ，１Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ）．

１３６：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．９（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｄ，２Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．３（ｄ，１Ｈ），７．１（ｄｄ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｍ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．５（ｍ，１Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ）．

１３７：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．９（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ），８．０（ｍ，１Ｈ），７．５（ｍ，３Ｈ），７．２（ｓ，１Ｈ），７．０（ｍ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），４．４（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，２Ｈ），３．８（ｄ，１Ｈ），３．７（ｓ，３Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），２．４（ｍ，２Ｈ），１．３（ｓ，９Ｈ）．

１４３：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．９（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ），８．０（ｍ，２Ｈ），７．７（ｍ，３Ｈ），７．３（ｓ，１Ｈ），７．１（ｄ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），４．２（ｍ，２Ｈ），３．９（ｄ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），３．３（ｍ，２Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ）．

１４８：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．９（ｓ，１Ｈ），１０．１（ｓ，１Ｈ），７．７（ｄ，２Ｈ），７．５（ｓ，１Ｈ），７．３（ｓ，１Ｈ），７．１（ｄ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），４．４（ｄ，１Ｈ），４．３（ｍ，３Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），３．７（ｓ，３Ｈ），３．５（ｍ，３Ｈ），２．８（ｓ，６Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ）．

１５０：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１０．３（ｓ，１Ｈ），９．４（ｓ，１Ｈ），７．８（ｍ，１Ｈ），７．５（ｍ，２Ｈ），７．１（ｓ，１Ｈ），６．９（ｄｄ，１Ｈ），４．５（ｍ，４Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．７５（ｄ，１Ｈ），３．５（ｍ，１Ｈ），３．１（ｍ，２Ｈ），２．７５（ｓ，６Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），２．１（ｍ，２Ｈ）．

１５１：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１．９（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ），７．７（ｄ，２Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），４．４（ｍ，１Ｈ），３．９（ｄ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．５（ｍ，１Ｈ），３．３（ｂｒ ｍ，８Ｈ），２．９（ｓ，３Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ）．

２５１：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ１２．０（ｓ，１Ｈ），７．９（ｍ，１Ｈ），７．７（ｄ，１Ｈ），７．６（ｓ，１Ｈ），７．４（ｓ，１Ｈ），７．２（ｄｄ，１Ｈ），４．６（ｍ，３Ｈ），４．４（ｍ，２Ｈ），３．９（ｍ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．７（ｍ，１Ｈ），３．６（ｍ，２Ｈ），３．４（ｍ，４Ｈ），３．２（ｍ，２Ｈ），３．０（ｍ，４Ｈ），２．９（ｓ，６Ｈ），２．７（ｍ，４Ｈ），２．６（ｓ，２Ｈ），１．６（ｍ，２Ｈ），１．３（ｍ，８Ｈ），０．９（ｑ，２Ｈ）．

２２７：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ１０．３（ｓ，１Ｈ），８．７（ｓ，１Ｈ），７．７（ｄ，２Ｈ），７．５（ｍ，３Ｈ），７．１（ｍ，２Ｈ），６．９（ｄ，２Ｈ），４．６（ｍ，５Ｈ），４．２５（ｍ，２Ｈ），４．１５（ｍ，２Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），３．１（ｓ，２Ｈ），２．９（ｍ，１２Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．５（ｓ，６Ｈ），２．３（ｓ，３Ｈ）．

２３０：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ１０．３（ｓ，１Ｈ），８．６（ｓ，１Ｈ），７．７（ｄ，２Ｈ），７．５（ｍ，３Ｈ），７．１（ｍ，２Ｈ），６．９（ｄ，２Ｈ），６．７（ｓ，２Ｈ），４．７（ｍ，４Ｈ），４．１（ｍ，４Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），３．５（ｍ，２Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），３．２（ｍ，４Ｈ），３．１（ｓ，２Ｈ），２．８（ｍ，５Ｈ），２．４（ｍ，１０Ｈ），２．２（ｍ，７Ｈ）．

１６６：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ５３２（Ｍ−Ｈ）^-．

１６５：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ９２０（Ｍ−Ｈ）^-．

９：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ９６６（Ｍ−Ｈ）^-．

１７：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ７５３（Ｍ−Ｈ）^-．

１９：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ６９６（Ｍ−Ｈ）^-．

５０：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ８００（Ｍ−Ｈ）^-．

１７４：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ８．４（ｓ，１Ｈ），７．９（ｍ，１Ｈ），７．５（ｍ，２Ｈ），７．２（ｍ，２Ｈ），４．７５（ｍ，３Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｓ，９Ｈ），０．４（ｂｒ ｓ，６Ｈ）；ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ６２７（Ｍ−Ｈ）^-．

１７６：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ８．４（ｓ，１Ｈ），７．９（ｍ，１Ｈ），７．５（ｍ，２Ｈ），７．１（ｍ，２Ｈ），４．７（ｍ，３Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｓ，９Ｈ），０．４（ｂｒ ｓ，６Ｈ）．

９４：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ８．５（ｄ，２Ｈ），８．２（ｄ，２Ｈ），７．９（ｓ，２Ｈ），７．８（ｄ，２Ｈ），７．５（ｍ，２Ｈ），７．４（ｍ，４Ｈ），６．８（ｄ，２Ｈ），４．７（ｄ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），４．４（ｍ，１Ｈ），３．９（ｍ，６Ｈ），３．３（ｍ，１Ｈ），２．９（ｔ，２Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ），２．１（ｍ，２Ｈ），１．６（ｓ，６Ｈ），１．０（ｓ，９Ｈ），０．３（ｂｒ ｓ，６Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ １０３８（Ｍ−Ｈ）^-．

〔実施例２〕
＜２．１ 合成方法＞

［２．１ａ 化合物１３４の合成］
化学式Ｉの化合物は、適当なスピロシクロプロピルシクロヘキサジエニル類似体（化合物Ｂ）を活性化されたヘテロサイクリック化合物ＡとＮ，Ｂ−ジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）或いはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中で水素化ナトリウム用いて反応させることにより容易に調製される。その結果得られた化合物２８は、次いで塩酸のような適当なハロ酸での処理により化合物２９に転化される。化合物２９との原位置における活性化による結合を用いて化合物１、化学式Ｉの化合物を生成する。

構造式Ｉの他の化合物は、公表された手順に従って調製され、還元、酸化、付加、水抽出、蒸発、及び精製のような当業者には周知の方法を用いて修飾されて追加の類似体を生成する。

［２．１ｂ 化合物Ａの合成］
５−ニトロ−２−カルボン酸（０．８３ｇ，４．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド（６０ｍＬ）溶液に、０℃でＥＤＣ（１．１５ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を加えた。その結果得られた懸濁液を０℃で４５分間攪拌し、その時までにＥＤＣは完全に溶解した。４−ニトロフェノール（０．８３ｇ，６．０ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（０．７３ｇ，６．０ｍｍｏｌ）とを加え、得られた混合物を外界温で攪拌した。１３時間後、混合物を酢酸エチルで希釈し、１０％クエン酸水溶液で２回、次いで水、ならびに塩水で洗浄した後、Ｎａ₂Ｓ０₄上で乾燥、ろ過して減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中７％酢酸エチル）により精製して、１．０２ｇ（７８％）の化合物Ａを黄色の固体として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）δ９．０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．２（ｄ，２Ｈ），７．８（ｍ，２Ｈ），７．４（ｄ，２Ｈ），７．３（ｓ，１Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ）．

［２．１ｃ 化合物２８の合成］
化合物Ｂ（２０ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド（１．０ｍＬ）溶液に、−４０℃で、水素化ナトリウム（４．０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ，油中６０％）のＮ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド（１．０ｍＬ）の懸濁液を加えた。その結果得られた混合物は、徐々に（１．５時間かけて）０℃まで温め、次いで−４０℃まで冷却した。化合物Ａ（３７ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を混合物に加え、徐々に（１．５時間かけて）０℃まで温め、その温度に２０分間保持した。混合物を−３０℃に冷却、酢酸（１０μＬ）で反応を停止し、水次いで塩水で洗浄した。有機層を分離、Ｎａ₂Ｓ０₄上で乾燥、ろ過して減圧濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中５０％から１００％の酢酸エチル）により精製して、１６．３ｍｇ（４３％）の化合物２８をやや黄色の固体として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）δ１１．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４（ｍ，２Ｈ），７．１（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ），４．４（ｓ，２Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），２．４（ｄｄ，１Ｈ），１．４（ｍ，１Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ４９０（Ｍ−Ｈ）^-．

［２．１ｄ 化合物２９の合成］
化合物２８（５０ｍｇ，０．１０３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド（１．０ｍＬ）溶液を１ｍＬの無水の塩酸〈塩化水素〉（ジオキサン中１．０Ｍ）で処理した。得られた溶液を外温で３０分間攪拌した後、溶媒を濃縮した。その結果得られた残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中５０％から１００％の酢酸エチル）により精製して、５０ｍｇ（１００％）の化合物２９をやや黄色の固体として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）δ１１．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ）９．４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４（ｍ，２Ｈ），７．１（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ），４．４（ｓ，２Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），２．４（ｄｄ，１Ｈ），１．４（ｍ，１Ｈ）．

［２．１ｅ 化合物１３４の合成］
化合物２９（６６ｍｇ，０．１３６ｍｍｏｌ）の無水メチレンクロリド（１０ｍＬ）溶液に、−７０℃で、順次、４−ニトロ−フェニルクロロフォーメート（５５ｍｇ，０．２７３ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（２７ｍｇ，０．２７３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物は徐々に温まるに任せた。２時間後、混合物を氷浴に置き、アミンＣ（８２ｍｇ，０．２７３ｍｍｏｌ）を一度に加えた。その結果得られた混合物を外界温で一晩攪拌した。２２時間後、混合物を飽和ＮａＨＣ０₃水溶液に注ぎ入れた。水層を分離してメチレンクロリドで抽出した。有機抽出液をあわせてＭｇＳ０₄上で乾燥、ろ過して、減圧濃縮した。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中１％から２％のメタノール）により精製して、４２ｍｇ（３８％）の化合物１を、やや黄色の固体として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）δ１１．０（ｓ，１Ｈ），８．６（ｓ，１Ｈ），８．４（ｄ，１Ｈ），８．２（ｂｒ ｄ，１Ｈ），７．６（ｍ，２Ｈ），６．８（ｍ，１Ｈ），４．８（ｍ，１Ｈ），４．７（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，１Ｈ），４．１（ｍ，２Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），３．４（ｍ，５Ｈ），２．７（ｄ，３Ｈ），１．６（ｓ，６Ｈ），１．４（ｓ，９Ｈ），１．２（ｍ，４Ｈ），０．９（ｍ，９Ｈ）．

同様に、以下の化合物が調製された。

２２０：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣＩ₃）：δ１１．４（ｄ，１Ｈ），８．７（Ｓ，１Ｈ），８．４（ｄｄ，１Ｈ），８．１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，１Ｈ），７．６５（Ｓ，１Ｈ），５．８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），４．７（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，２Ｈ），４．２（ｍ，１Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），３．０（ｓ，２Ｈ），２．７５（Ｓ，３Ｈ），２．６５（Ｓ，３Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ６１３（Ｍ−Ｈ）^-．

２２２：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ１０．３（ｓ，１Ｈ），８．７（ｄ，２Ｈ），８．４（ｄ，１Ｈ），８．１（ｍ，１Ｈ），７．７（ｄ，２Ｈ），７．６（ｍ，１Ｈ），６．９（ｄ，２Ｈ），４．９（ｄ，１Ｈ），４．７（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，３Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．６（ｍ，１Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），３．１（ｓ，３Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．３（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ７４５（Ｍ−Ｈ）^-．

２２４：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ８９９（Ｍ−Ｈ）^-．

２２９：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ５９８（Ｍ−Ｈ）^-．

２３３：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ８１６（Ｍ−Ｈ）^-．

２３５：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ９１３（Ｍ−Ｈ）^-．

８：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ８５６（Ｍ−Ｈ）^-．

２３２：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ６１２（Ｍ−Ｈ）^-．

２３４：ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ９５２（Ｍ−Ｈ）^-．

〔実施例３〕
＜３．１ 合成方法＞

［３．１ａ 化合物２３９ の合成］
化学式Ｉの化合物は、適当なスピロシクロプロピルシクロヘキサジエニル類似体（化合物Ｂ）を活性化されたヘテロサイクリック化合物ＡとＮ，Ｂ−ジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）或いはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中で水素化ナトリウムを用いて反応させることにより容易に調製される。その結果得られた化合物２８は、塩酸のような適当なハロ−酸での処理により化合物２９に転化される。化合物２９との原位置における活性化による結合を用いて化合物１、構造式Ｉの化合物を生成する。化合物２９は、４−ニトロフェニルエステルとして活性化され、化合物Ｃと連結して化合物２３９、化学式Ｉの化合物が生成する。

化学式Ｉの他の化合物は、公表された手順に従って調製され、還元、酸化、付加、水抽出、蒸発、及び精製のような当業者には周知の方法を用いて修飾されて追加の類似体を生成する。

［３．１ｂ 化合物Ａの合成］
５−ニトロ−２−カルボン酸（０．８３ｇ，４．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（６０ｍＬ）に０℃でＥＤＣ（１．１５ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた懸濁液を０℃で４５分間攪拌し、ＥＤＣを完全に溶解させた。４−ニトロフェノール（０．８３ｇ，６．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．７３ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で攪拌した。１３時間後に、混合物を酢酸エチルで希釈し、クエン酸の１０％水溶液で２回、次いで水及び塩性溶液で洗浄後、Ｎａ₂Ｓ０₄上で乾燥、ろ過して減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中７％酢酸エチル）によって精製し、１．０２ｇ（７８％）のＡを黄色固体として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）δ９．０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．２（ｄ，２Ｈ），７．８（ｍ，２Ｈ），７．４（ｄ，２Ｈ），７．３（ｓ，１Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ）．

［３．１ｃ 化合物２８の合成］
Ｂ（２０ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチフォルムアミド（１．０ｍＬ）溶液に−４０℃で水素化ナトリウム（４．０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ，油中６０％）のＮ，Ｎ−ジメチフォルムアミド（１．０ｍＬ）懸濁液を加えた。得られた混合物を徐々に（１．５時間かけて）０℃まで加温し、次いで−４０℃に冷却した。化合物Ａ（３７ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を徐々に（１．５時間かけて）０℃まで加温し、その温度で２０分間保持した。混合物を−３０℃に冷却し、酢酸（１０μＬ）で反応を止め、１０分間攪拌し、酢酸エチルで希釈、次いで水及び塩性溶液で洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳ０₄上で乾燥、ろ過して減圧濃縮した。シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中で５０％から１００％の酢酸エチルで溶出）で精製し、１６．３ｍｇ（４３％）の２８をやや黄色の固体を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）δ１１．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４（ｍ，２Ｈ），７．１（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ），４．４（ｓ，２Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），２．４（ｄｄ，１Ｈ），１．４（ｍ，１Ｈ）。ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ４９０（Ｍ−Ｈ）^-．

［３．１ｄ 化合物２９の合成］
２８（５０ｍｇ，０．１０３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド（１．０ｍＬ）溶液に１ｍＬの無水塩化水素（ジオキサン中１．０Ｍ）を加えて処理した。得られた溶液を室温で３０分間攪拌し、次いで溶媒を濃縮した。得られた残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（メチレンクロリド中で５０％から１００％の酢酸エチルで溶出）で精製し、５０ｍｇ（１００％）の２９をやや黄色の固体を得た。¹Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣ１₃）δ１１．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．４（ｍ，２Ｈ），７．１（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８（ｓ，１Ｈ），４．４（ｓ，２Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），２．４（ｄｄ，１Ｈ），１．４（ｍ，１Ｈ）．

［３．１ｅ 化合物２３９の合成］
２９（２４ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）のメチレンクロリド懸濁液（５ｍｌ）に−７８℃で、４−ニトロフェニルクロロフォーメート（４０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（２８μ１，０．２ｍｍｏｌ）とを加えた。反応混合物を室温まで温め、次いで、減圧濃縮した。得られた残渣をジエチルエーテルで洗浄した後、真空乾燥し、９を黄色固体として得た。黄色固体９（１９ｍｇ，０．０２９ｍｍｏｌ）をメチレンクロリド（３ｍｌ）に溶解して、アミンＣ（２０ｍｇ，０．０２９ｍｍｏｌ）、次いでトリエチルアミン（８．３μ１，０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を１６時間攪拌した後減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルとメチレンクロリド：メタノール、４０：１の混合液を用いたカラムクロマトグラフィーで精製し、１２ｍｇ（収量４５％）の２３９を黄色固体として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ９．９（ｓ，１Ｈ），９．７（ｓ，１Ｈ），８．７（ｓ，１Ｈ），８．４（ｄｄ，１Ｈ），８．３（ｄ，１Ｈ），８．１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ），６．７（ｍ，２Ｈ），４．７５（ｍ，１Ｈ），４．５５（ｍ，２Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．８（ｍ，４Ｈ），３．５（ｍ，１８Ｈ），３．０（ｍ，２Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．５（ｍ，４Ｈ），１．７（ｍ，２Ｈ），１．４（ｍ，１０Ｈ），１．０（ｍ，２Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ １１００（Ｍ−Ｈ）^-．

同様にして、以下の化合物が調製された。

２３８：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ１０．３（ｓ，１Ｈ），８．７（ｓ，１Ｈ），８．５（ｍ，１Ｈ），８．４（ｄ，１Ｈ），８．２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．７（ｍ，４Ｈ），７．２（ｍ，１Ｈ），４．８（ｍ，１Ｈ），４．６（ｍ，２Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．７（ｍ，２Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），３．２（ｍ，２Ｈ），２．９（ｓ，３Ｈ），２．５（ｓ，３Ｈ）．ＥＳＭＳ ｍ／ｚ ７１０（Ｍ−Ｈ）^-．

２４２：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ９．７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），９．０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．６（ｓ，１Ｈ），８．４（ｄ，１Ｈ），８．１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．７（ｍ，１Ｈ），７．５（ｍ，１Ｈ），７．４（ｍ，１Ｈ），４．７（ｄ，１Ｈ），４．５（ｍ，２Ｈ），３．９（ｓ，４Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），３．６（ｍ，１Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），３．０（ｍ，５Ｈ），２．６（ｓ，３Ｈ），２．５（ｍ，２Ｈ），１．５（ｍ，９Ｈ），１．４（ｍ，６Ｈ）．

２４４：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ８．６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．４（ｄ，１Ｈ），８．１（ｍ，１Ｈ），７．７（ｍ，６Ｈ），６．９（ｍ，２Ｈ），４．７５（ｍ，１Ｈ），４．５５（ｍ，２Ｈ），４．１（ｍ，２Ｈ），３．９（ｍ，４Ｈ），３．７（ｍ，１２Ｈ），３．５（ｍ，２Ｈ），３．４（ｍ，３Ｈ），３．２（ｍ，３Ｈ），３．１（ｍ，５Ｈ），２．７（ｓ，６Ｈ），２．１（ｍ，２Ｈ），１．５（ｓ，６Ｈ）．

２４８：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ９．９（Ｓ，１Ｈ），９．３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１（ｍ，１Ｈ），７．５（ｍ，３Ｈ），７．１（ｍ，２Ｈ），４．８（ｄ，１Ｈ），４．５（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），３．７（ｍ，２Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），３．０（ｍ，８Ｈ），２．５（ｍ，２Ｈ），１．５（ｄｄ，６Ｈ），１．３（ｓ，９Ｈ）．

２５０：¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ１₃）：δ９．４（ｓ，１Ｈ），８．６（ｓ，１Ｈ），８．３（ｍ，１Ｈ），８．１（ｍ，１Ｈ），７．９（ｍ，２Ｈ），７．５（ｍ，７Ｈ），７．１（ｍ，４Ｈ），４．８（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，２Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），４．９５（ｓ，３Ｈ），４．８５（ｓ，３Ｈ），４．７（ｍ，１Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ），３．１（ｍ，４Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．２（ｓ，３Ｈ），１．５（ｓ，６Ｈ）．

２７２：¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１２．０（ｍ，１Ｈ），８．８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．３（ｍ，１Ｈ），７．９（ｍ，３Ｈ），７．７（ｍ，３Ｈ），６．９（ｍ，２Ｈ），４．８５（ｓ，１Ｈ），４．７（ｍ，１Ｈ），４．５（ｍ，３Ｈ），３．８（ｍ，４Ｈ），３．６（ｍ，４Ｈ），３．４（ｍ，５Ｈ），３．１（ｍ，６Ｈ），２．７（ｓ，３Ｈ），２．２（ｍ，２Ｈ），１．４（ｓ，６Ｈ）．

［実施例４］
＜増殖検定＞
細胞毒性化合物の生物活性測定のために選択された検定法は、確立された³Ｈ−チミジン増殖検定法である。この検定法は、外来の放射活性³Ｈ−チミジンの取り込みを測定することによってＤＮＡ合成を評価するので細胞増殖の便利な定量方法である。この検定法は再現性が高く、且つ、多数の化合物に対応出来る。

前記骨髄球白血病細胞ＨＬ−６０を１０％の加熱不活化したウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含むＲＰＭＩ培地で培養した。検定の当日、細胞を集め、洗浄して、０．５×１０⁶細胞／ｍｌの濃度で、１０％のＦＣＳを含むＲＰＭＩに再懸濁した。１００μｌの細胞懸濁液を９６ウエルの培養プレートに加えた。ドキソルビシン又は試験化合物の段階希釈（３倍増の）を作り、１００μｌの化合物をウエル毎に加えた。最後に、１０μｌの１００μＣｉ／ｍｌ³Ｈ−チミジンをウエル毎に加えて、２４時間培養した。培養プレートを９６ウエルハーベスター（パッカードインスツルメンツ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ））を用いて集め、パッカードトップカウントカウンターで放射能を測定した。４パラメター計算曲線が、ＩＣ₅₀値を決定するためのプリズム ソフトウェア（Ｐｒｉｓｍ ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用い、薬物のモル濃度の関数として³Ｈ−チミジン取り込みに合致した。

本発明の化合物は、上記検定において一般に、約１ｐＭから約１００ｎＭ、好適には、約１０ｐＭから約１０ｎＭのＩＣ₅₀値を持つ。

本発明で言及又は参照された各々の特許出願、特許、出版物、及び他の公開書類は、個々の特許出願、特許、出版物、及び他の公開書類が具体的、且つ、個々に参照して組み込まれたことを示すのと同様に全て本発明に組み込まれている。

本発明は、その具体的な実施の形態を参照して記述されているが、当業者は、種々の変更をすることが可能であり、本発明の真の目的と範囲ならびに付帯する特許請求の範囲から逸脱することなく置き換えてもよい。加えて、多くの修飾を行って、特定の状況、材料、事態の構成、工程、工程段階又は諸段階を本発明の目的、精神及び範囲にて適応することも可能である。このような修飾はすべて本書に付帯の特許請求の範囲内にあることを意図するものである。

表１は、細胞毒素に抱合された本発明の典型的な切断可能なウレタンリンカーを示す。

表２は、本発明の典型的な細胞毒素を示す。

表３は、細胞毒素に抱合された本発明の典型的なジスルフィドリンカーを示す。

Claims (45)

1. 抗体と、前記抗体に結合する化合物を含む組成物であって、
   前記化合物は以下の構造を持ち、前記抗体は、抗原に特異的に結合して認識する免疫グロブリンからの骨組領域又はその断片からなるポリペプチドである組成物。
   

   

   上記構造式中、
   環系Ａは、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール及び置換又は非置換のヘテロシクロアルキルグループから選ばれたメンバーであり、
   ＥとＧは、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、異種原子、又は単結合から独立に選ばれたメンバーであり、またＥとＧは任意に連結して置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール及び置換又は非置換のヘテロシクロアルキルから選ばれた環系を形成し、
   Ｘは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ²³から選ばれたメンバーであり、Ｒ²³は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、及びアシルから選ばれたメンバーであり、
   Ｒ³は、ＯＲ¹¹であり、
   Ｒ¹¹は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、アシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ¹²、Ｃ（Ｏ）ＮＲ¹²Ｒ¹³、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ¹²）₂、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ¹²Ｒ¹³、Ｃ（Ｏ）ＯＲ¹²又はＳｉＲ¹²Ｒ¹³Ｒ¹⁴から選ばれたメンバーであり、
   Ｒ¹²、Ｒ¹³、及びＲ¹⁴は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル及び置換又は非置換のアリールから独立に選ばれたメンバーであり、Ｒ¹²とＲ¹³は、それらが結合している窒素原子と共に任意に連結して、４から６のメンバーを持ち、任意に２個以上の異種原子を含む置換又は非置換のヘテロシクロアルキル環系を形成し、
   Ｒ⁴とＲ⁵は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ₂、ＮＲ¹⁵Ｒ¹⁶、ＮＣ（Ｏ）Ｒ¹⁵、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ¹⁵Ｒ¹⁶、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ¹⁵、Ｃ（Ｏ）Ｒ¹⁵、ＳＲ¹⁵及びＯＲ¹⁵から独立に選ばれたメンバーであり、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、及び置換又は非置換のヘテロシクロアルキルを独立して表し、ここで、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶はそれらが結合している窒素原子と共に任意に連結して４から６のメンバーを持ち、任意に２個以上の異種原子を含む置換又は非置換のヘテロシクロアルキル環系を形成し、
   Ｒ⁶は、存在するか又は存在しない単結合であり、存在する場合、Ｒ⁶とＲ⁷は連結してシクロプロピル環を形成し、且つ、
   Ｒ⁷は、ＣＨ₂−Ｘ¹又は前記シクロプロピル環にてＲ⁶に連結された−ＣＨ₂−であり、Ｘ¹は、ハロゲン化物、アジド、スルホン酸エステル、オキソニウムイオン、アルキル過塩素酸エステル、アンモニオアルカンスルホン酸エステル、アルキルフルオロスルホネート、トリフレート、ノナフレート、及びトレスレートから選ばれ、
   Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵、又はＲ¹⁶は、以下の基（ａ）、（ｂ）、又は（ｃ）の一つと結合する。
   （ａ）
   

   

   （式中、
   Ｘ⁴は、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル；酸ハロゲン化物；アシルイミダゾール；チオエステル；ｐ−ニトロフェニルエステル；アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族のエステル；ヒドロキシル基；ハロゲン化アルキル；マレイン酸イミド；アルデヒド；ケトン；ハロゲン化スルフォニル；アミン；スルフォヒドリル；アルケン並びにエポキシドから選ばれ、Ｘ⁴は、前記抗体に結合し、
   Ｌ³は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換のヘテロアルキルグループから選ばれたリンカーであり、
   ＡＡ¹、ＡＡ^c及びＡＡ^c+1は、天然の遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸、遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸の「Ｄ」立体化学フォーム、及び以下の構造を持つアミノ酸から独立に選ばれたメンバーであり、
   

   

   Ｒ²⁵は、置換又は非置換のＣ₁-Ｃ₆アルキルであり、
   Ｌ⁴は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換のヘテロアルキルグループから選ばれたリンカーであり、
   ｐとｔは、０と１から独立に選ばれた整数であり、且つｃは、０から２０の整数である。）
   （ｂ）
   

   

   （式中、
   Ｘ³は、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル；酸ハロゲン化物；アシルイミダゾール；チオエステル；ｐ−ニトロフェニルエステル；アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族のエステル；ヒドロキシル基；ハロゲン化アルキル；マレイン酸イミド；アルデヒド；ケトン；ハロゲン化スルフォニル；アミン；スルフォヒドリル；アルケン並びにエポキシドから選ばれ、ここでＸ³は、前記抗体に結合し、
   Ｌ¹は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換のヘテロアルキルグループから選ばれたリンカーであり、
   ＡＡ¹、ＡＡ^b及びＡＡ^b+1は、天然の遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸、遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸の「Ｄ」立体化学フォーム、及び以下の構造を持つアミノ酸から独立に選ばれたメンバーであり、
   

   

   Ｒ²⁵は、置換又は非置換のＣ₁-Ｃ₆アルキルであり、
   Ｌ²は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換のヘテロアルキルグループから選ばれたリンカーであり、
   ｑとｖは、０と１から独立に選ばれた整数であり、且つｂは、０から２０の整数である。）
   （ｃ）
   

   

   （式中、
   Ｒ³⁰は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、及び置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれたメンバーであり、
   Ｒ³¹とＲ³²は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、及び置換又は非置換のヘテロアリールから独立に選ばれたメンバーであり、又は、Ｒ³¹とＲ³²は共に一体となって下記の置換基
   

   

   であり、ここで、Ｒ³³とＲ³⁴は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、及び置換又は非置換のヘテロアリールから独立に選ばれたメンバーであり、
   Ｒ³⁵は、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、及びＮＲ³⁶から選ばれたメンバーであり、
   前記式中、Ｒ³¹、Ｒ³²、Ｒ³³及びＲ³⁴の少なくとも一つは、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル；酸ハロゲン化物；アシルイミダゾール；チオエステル；ｐ−ニトロフェニルエステル；アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族のエステル；ヒドロキシル基；ハロゲン化アルキル；マレイン酸イミド；アルデヒド；ケトン；ハロゲン化スルフォニル；アミン；スルフォヒドリル；アルケン並びにエポキシドから選ばれる部分で置換されているアリール又はヘテロアリール部分であり、
   Ｒ³⁶は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、及び置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれたメンバーであって、前記抗体に結合し、且つ
   Ｘ⁵は、Ｏ又はＮＲ³⁷であり、
   Ｒ³⁷は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、及び置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれたメンバーである。）
2. 請求項１記載の組成物であり、Ａは、置換又は非置換のフェニルである組成物。
3. 請求項１記載の組成物であり、Ａは、置換又は非置換のピロールである組成物。
4. 請求項１記載の組成物であり、Ｘ¹は、アジド、ハロゲン、アルキルスルホニル及びアリールスルホニルより選ばれたメンバーである組成物。
5. 請求項４記載の組成物であり、ハロゲンはＣｌ又はＢｒである組成物。
6. 請求項１記載の組成物であり、Ｒ⁴とＲ⁵は、Ｈ、ハロゲン、ＮＨ₂、Ｏ（ＣＨ₂）₂Ｎ（Ｍｅ）₂及びＮＯ₂から独立に選ばれたメンバーである組成物。
7. 請求項１記載の組成物であり、Ｒ⁴とＲ⁵のうち少なくとも一つはＨ及びＯＣＨ₃から選ばれたメンバー以外のものである組成物。
8. 請求項１記載の組成物であり、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶のうち少なくとも一つは以下の化学式からなる組成物。
   

   
9. 請求項８記載の組成物であり、Ｒ³¹及びＲ³²のうちの一つは、前記抗体に結合される組成物。
10. 請求項１記載の組成物であり、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶から選ばれた一つのメンバーは前記抗体に結合する組成物。
11. 請求項１記載の組成物であり、前記化合物が、以下の構造
    

    

    又は
    

    

    を持つ組成物。
12. 請求項１１記載の組成物であり、ＸはＯ、及びＺはＯである組成物。
13. 請求項１記載の組成物であり、Ｒ⁴及びＲ⁵から選ばれたメンバーは以下の化学式を持ち、
    

    

    Ｘ²とＺ¹は、Ｏ、Ｓ及びＮＲ²³から独立に選ばれたメンバーであり、
    Ｒ¹⁷とＲ¹⁸は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ₂、ＮＲ¹⁹Ｒ²⁰、ＮＣ（Ｏ）Ｒ¹⁹、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ¹⁹、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ¹⁹、Ｃ（Ｏ）Ｒ¹⁹、及びＯＲ¹⁹から独立に選ばれたメンバーであり、
    Ｒ¹⁹とＲ²⁰は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のヘテロアルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換のヘテロシクロアルキルから独立に選ばれ、ここで、Ｒ¹⁹とＲ²⁰はそれらが結合している窒素原子と共に任意に連結して４から６のメンバーを持ち、任意に２個以上の異種原子を含む置換又は非置換のヘテロシクロアルキル環系を形成し、且つ、Ｒ¹⁹とＲ²⁰から選ばれた一つ以上のメンバーが基（ａ）、（ｂ）、又は（ｃ）のうちの一つに結合する組成物。
14. 請求項１３記載の組成物であり、Ｚ¹がＮＨである場合、Ｒ¹⁷とＲ¹⁸は共にＨではなく、且つ、Ｒ¹⁷はＮＨ₂ではない組成物。
15. 請求項１３記載の組成物であり、Ｘ²はＯであり、且つ、Ｚ¹はＯとＮＲ²³とから選ばれたメンバーである組成物。
16. 請求項１記載の組成物であり、Ｒ¹¹は以下の構造を持つペプチジル部分であって、
    

    

    ＡＡ¹、ＡＡ^b及びＡＡ^b+1は、天然の遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸、遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸の「Ｄ」立体化学フォーム、及び以下の構造を持つアミノ酸から独立に選ばれたメンバーであり、
    

    

    Ｒ²⁵は、置換又は非置換のＣ₁−Ｃ₆アルキルである組成物。
17. 請求項１６記載の組成物であり、Ｌ¹とＬ²から選ばれた少なくとも一つのメンバーはポリエチレングリコール部分からなる組成物。
18. 請求項１６記載の組成物であり、前記ペプチジル部分は下記の構造を有し、
    

    

    Ｒ²¹とＲ²²は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、及び置換又は非置換のヘテロシクロアルキルから独立に選ばれたメンバーであり、
    Ｒ¹²とＲ²⁵は、Ｈ、及び置換又は非置換の低級アルキルから独立に選ばれたメンバーであり、且つ、ｓは、０から２０の整数である組成物。
19. 請求項１６記載の組成物であり、ｂは、１から５の整数である組成物。
20. 請求項１６記載の組成物であり、Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶から選ばれた少なくとも一つのメンバーは以下の構造を有する組成物。
    

    
21. 請求項２０記載の組成物であり、Ｌ³とＬ⁴から選ばれた少なくとも一つのメンバーはポリエチレングリコール部分からなる組成物。
22. 請求項２０記載の組成物であり、前記メンバーは、以下の構造を有し、
    

    

    Ｒ²⁷及びＲ²⁸は、Ｈ、及び置換又は非置換の低級アルキルから独立に選ばれたメンバーであり、且つ、ｓは、０から６の整数である組成物。
23. 請求項２２記載の組成物であり、ｃは、１から５の整数である組成物。
24. 請求項２２記載の組成物であり、Ｌ⁴は、置換又は非置換のエチレン部分である組成物。
25. 請求項２２記載の組成物であり、Ｘ⁴は、Ｒ²⁹、ＣＯＯＲ²⁹、Ｃ（Ｏ）ＮＲ²⁹、及びＣ（Ｏ）ＮＮＲ²⁹から選ばれたメンバーであり、
    Ｒ²⁹は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨＮＨ₂、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル及び置換又は非置換のヘテロアリールから選ばれたメンバーである組成物。
26. 請求項２５記載の組成物であり、Ｒ²⁹は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨＮＨ₂、
    

    

    から選ばれたメンバーである組成物。
27. 請求項１記載の組成物であり、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶の少なくとも一つは、置換又は非置換のアルキル又はヘテロアルキル鎖に位置する反応性グループを持ち、この反応性グループは、前記化合物を前記抗体に抱合するために適当な、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル；酸ハロゲン化物；アシルイミダゾール；チオエステル；ｐ−ニトロフェニルエステル；アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族のエステル；ヒドロキシル基；ハロゲン化アルキル；マレイン酸イミド；アルデヒド；ケトン；ハロゲン化スルフォニル；アミン；スルフォヒドリル；アルケン並びにエポキシドから選ばれる組成物。
28. 請求項２７記載の組成物であり、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶のうち少なくとも一つは、置換されたアルキル及び置換されたヘテロアルキルから選ばれたメンバーであり、このメンバーはその遊離末端に前記反応性グループを持つ組成物。
29. 請求項１記載の組成物であり、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶のうちの一つは、前記基（ａ）、（ｂ）、又は（ｃ）である組成物。
30. 請求項１８記載の組成物であり、Ｒ²¹とＲ²²のうち少なくとも一つは、置換又は非置換のアルキル又はヘテロアルキル鎖に位置する反応性グループを持ち、この反応性グループは、前記化合物を前記抗体に抱合するために適当な、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル；酸ハロゲン化物；アシルイミダゾール；チオエステル；ｐ−ニトロフェニルエステル；アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族のエステル；ヒドロキシル基；ハロゲン化アルキル；マレイン酸イミド；アルデヒド；ケトン；ハロゲン化スルフォニル；アミン；スルフォヒドリル；アルケン並びにエポキシドから選ばれる組成物。
31. 請求項３０記載の組成物であり、Ｒ²¹とＲ²²のうち少なくとも一つは、置換されたアルキル及び置換されたヘテロアルキルから選ばれたメンバーであり、このメンバーはその遊離末端に前記反応性グループを持つ組成物。
32. 抗体と、前記抗体に結合する化合物を含む組成物であって、
    前記化合物は以下の構造を持ち、前記抗体は、抗原に特異的に結合して認識する免疫グロブリンからの骨組領域又はその断片からなるポリペプチドである組成物。
    

    

    上記構造式中、
    Ｘ及びＺは、Ｏ、Ｓ及びＮＲ²³から独立に選ばれたメンバーであり、
    Ｒ²³は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、及びアシルから選ばれたメンバーであり、
    Ｒ¹は、Ｈ、置換又は非置換の低級アルキル、又はＣ（Ｏ）Ｒ⁸であり、ここでＲ⁸は、ＮＲ⁹Ｒ¹⁰及びＯＲ⁹から選ばれたメンバーであり、
    Ｒ⁹、及びＲ¹⁰は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル及び置換又は非置換のヘテロアルキルから独立に選ばれたメンバーであり、
    Ｒ²は、Ｈ、又は置換若しくは非置換の低級アルキルであり、
    Ｒ³は、（＝Ｏ）、及びＯＲ¹¹から選ばれたメンバーであり、
    Ｒ¹¹は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、アシル、Ｃ（Ｏ）Ｒ¹²Ｒ¹³、Ｃ（Ｏ）ＮＲ¹²Ｒ¹³、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ¹²）₂、Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ¹²Ｒ¹³、Ｃ（Ｏ）ＯＲ¹²及びＳｉＲ¹²Ｒ¹³Ｒ¹⁴から選ばれたメンバーであり、
    Ｒ¹²、Ｒ¹³、及びＲ¹⁴は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル及び置換又は非置換のアリールから独立に選ばれたメンバーであり、Ｒ¹²とＲ¹³は、それらが結合している窒素原子と共に任意に連結して、４から６のメンバーを持ち、任意に２個以上の異種原子を含む置換又は非置換のヘテロシクロアルキル環系を形成し、
    Ｒ⁴とＲ⁵は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、ハロゲン、ＮＯ₂、ＮＲ¹⁵Ｒ¹⁶、ＮＣ（Ｏ）Ｒ¹⁵、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ¹⁵Ｒ¹⁶、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ¹⁵、Ｃ（Ｏ）Ｒ¹⁵及びＯＲ¹⁵から独立に選ばれたメンバーであり、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、及び置換又は非置換のヘテロシクロアルキルから独立に選ばれ、ここで、Ｒ¹⁵とＲ¹⁶はそれらが結合している窒素原子と共に任意に連結して４から６のメンバーを持ち、任意に２個以上の異種原子を含む置換又は非置換のヘテロシクロアルキル環系を形成し、
    Ｒ⁶は、存在するか又は存在しない単結合であり、存在する場合、Ｒ⁶とＲ⁷は連結してシクロプロピル環を形成し、且つ、
    Ｒ⁷は、ＣＨ₂−Ｘ¹又は前記シクロプロピル環にてＲ⁶に連結された−ＣＨ₂−であり、Ｘ¹は、ハロゲン化物、アジド、スルホン酸エステル、オキソニウムイオン、アルキル過塩素酸エステル、アンモニオアルカンスルホン酸エステル、アルキルフルオロスルホネート、トリフレート、ノナフレート、及びトレスレートから選ばれ、
    Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ¹⁵、又はＲ¹⁶は、以下の基（ａ）、（ｂ）、又は（ｃ）の一つと結合する。
    （ａ）
    

    

    （式中、
    Ｘ⁴は、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル；酸ハロゲン化物；アシルイミダゾール；チオエステル；ｐ−ニトロフェニルエステル；アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族のエステル；ヒドロキシル基；ハロゲン化アルキル；マレイン酸イミド；アルデヒド；ケトン；ハロゲン化スルフォニル；アミン；スルフォヒドリル；アルケン並びにエポキシドから選ばれ、Ｘ⁴は、前記抗体に結合し、
    Ｌ³は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換のヘテロアルキルグループから選ばれたリンカーであり、
    ＡＡ¹、ＡＡ^c及びＡＡ^c+1は、天然の遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸、遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸の「Ｄ」立体化学フォーム、及び以下の構造を持つアミノ酸から独立に選ばれたメンバーであり、
    

    

    Ｒ²⁵は、置換又は非置換のＣ₁-Ｃ₆アルキルであり、
    Ｌ⁴は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換のヘテロアルキルグループから選ばれたリンカーであり、
    ｐとｔは、０と１から独立に選ばれた整数であり、且つｃは、０から２０の整数である。）
    （ｂ）
    

    

    （式中、
    Ｘ³は、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル；酸ハロゲン化物；アシルイミダゾール；チオエステル；ｐ−ニトロフェニルエステル；アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族のエステル；ヒドロキシル基；ハロゲン化アルキル；マレイン酸イミド；アルデヒド；ケトン；ハロゲン化スルフォニル；アミン；スルフォヒドリル；アルケン並びにエポキシドから選ばれ、ここでＸ³は、前記抗体に結合し、
    Ｌ¹は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換のヘテロアルキルグループから選ばれたリンカーであり、
    ＡＡ¹、ＡＡ^b及びＡＡ^b+1は、天然の遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸、遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸の「Ｄ」立体化学フォーム、及び以下の構造を持つアミノ酸から独立に選ばれたメンバーであり、
    

    

    Ｒ²⁵は、置換又は非置換のＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
    Ｌ²は、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換のヘテロアルキルグループから選ばれたリンカーであり、
    ｑとｖは、０と１から独立に選ばれた整数であり、且つｂは、０から２０の整数である。）
    （ｃ）
    

    

    （式中、
    Ｒ³⁰は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、及び置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれたメンバーであり、
    Ｒ³¹とＲ³²は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、及び置換又は非置換のヘテロアリールから独立に選ばれたメンバーであり、又は、Ｒ³¹とＲ³²は共に一体となって下記の置換基
    

    

    であり、ここで、Ｒ³³とＲ³⁴は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、及び置換又は非置換のヘテロアリールから独立に選ばれたメンバーであり、
    Ｒ³⁵は、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、及びＮＲ³⁶から選ばれたメンバーであり、
    前記式中、Ｒ³¹、Ｒ³²、Ｒ³³及びＲ³⁴の少なくとも一つは、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル；酸ハロゲン化物；アシルイミダゾール；チオエステル；ｐ−ニトロフェニルエステル；アルキル、アルケニル、アルキニル及び芳香族のエステル；ヒドロキシル基；ハロゲン化アルキル；マレイン酸イミド；アルデヒド；ケトン；ハロゲン化スルフォニル；アミン；スルフォヒドリル；アルケン並びにエポキシドから選ばれる部分で置換されているアリール又はヘテロアリール部分であり、
    Ｒ³⁶は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、及び置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれたメンバーであって、前記抗体に結合し、且つ
    Ｘ⁵は、Ｏ又はＮＲ³⁷であり、
    Ｒ³⁷は、Ｈ、置換又は非置換のアルキル、及び置換又は非置換のヘテロアルキルから選ばれたメンバーである。）
33. 請求項３２記載の組成物であり、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶のうち少なくとも一つは以下の化学式からなる組成物。
    

    
34. 請求項３２記載の組成物であり、Ｒ¹¹は以下の構造を持つペプチジル部分であって、
    

    

    ＡＡ¹、ＡＡ^b及びＡＡ^b+1は、天然の遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸、遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸の「Ｄ」立体化学フォーム、及び以下の構造を持つアミノ酸から独立に選ばれたメンバーであり、
    

    

    Ｒ²⁵は、置換又は非置換のＣ₁−Ｃ₆アルキルである組成物。
35. 請求項３２記載の組成物であり、Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶から選ばれた少なくとも１つのメンバーが以下の構造を持ち、
    

    

    ＡＡ¹、ＡＡ^b及びＡＡ^b+1は、天然の遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸、遺伝暗号によりコードされているα−アミノ酸の「Ｄ」立体化学フォーム、及び以下の構造を持つアミノ酸から独立に選ばれたメンバーであり、
    

    

    Ｒ²⁵は、置換又は非置換のＣ₁−Ｃ₆アルキルである組成物。
36. 請求項３２記載の組成物であり、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶から選ばれた少なくとも１つのメンバーが、前記抗体に結合する組成物。
37. 請求項３３記載の組成物であり、Ｒ³¹及びＲ³²の少なくとも一つが、前記抗体に結合する組成物。
38. 請求項３２記載の組成物であり、Ｒ²が、ＣＦ₃以外である組成物。
39. 請求項３２記載の組成物であり、Ｒ¹が、ＣＯ₂ＣＨ₃である組成物。
40. 請求項３２記載の組成物であり、Ｒ²が、ＣＨ₃である組成物。
41. 請求項３２記載の組成物であり、Ｒ¹が、ＣＯ₂ＣＨ₃であり、且つＲ²が、ＣＨ₃である組成物。
42. 請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物と、医薬として許容し得る担体からなる医薬製剤。
43. 細胞を殺すための薬物の製造における、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物の使用。
44. がん腫細胞を持つ患者において前記がん腫細胞を殺すための薬物の製造における、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物の使用。
45. 哺乳動物における腫瘍の生長を遅延又は停止するための薬物の製造における、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の化合物の使用。