JP2003535146A - 免疫促進性オリゴデオキシヌクレオチド - Google Patents

免疫促進性オリゴデオキシヌクレオチド

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Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）： 【化３】

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （技術分野） 本発明は、免疫促進性のオリゴデオキシ核酸分子（ＯＤＮ）およびそのような
ＯＤＮを含有する医薬組成物に関する。
【０００２】 （背景技術） ワクチンは、他のいかなる医学的介入よりも多くの生命（および資源）を救う
ことができる（ノッサル（Nossal）、１９９８）。世界的なワクチン接種プログ
ラムのおかげで多くの致死的疾患の発症率は急激に減少している。この見方は疾
患の完成されたパネル（whole panel）、たとえば、結核、ジフテリア、百日咳
、麻疹および破傷風にはあてはまるが、ＡＩＤＳなどの大抵のウイルス感染症を
含む多数の感染疾患に対する有効なワクチンは存在しない。また、感染性である
か非感染性であるかを問わず、マラリアおよび癌を含めて毎年何百万もの患者の
何百万もの人命を奪う他の疾患に対するワクチンも存在しない。さらに、抗生物
質に耐性の細菌および微生物の急激な出現は他の治療を要求しており、ワクチン
は必然の選択となってきている。最後に、ワクチンに対する大いなる必要性はま
た、心血管性疾患または癌または創傷よりもむしろ感染疾患が世界的に死亡およ
び不具の最大の原因であるという事実によっても説明される（ブルーム（Bloom
）およびウィダス（Widdus）、１９９８）。
【０００３】 免疫学的な観点からの今日のワクチンの分野における１つの主要な問題は、伝
統的なワクチン（および/またはこれら製剤に含まれる免疫変調化合物）が高レ
ベルの抗体を誘発させるべくデザインされているということである（ハロウ（Ha
rrow）およびレーン（Lane）、１９８８）。しかしながら、抗体自体は、ウイル
ス、細胞内細菌、ある種の寄生虫および癌によって引き起こされる大抵の病気を
含む多数の疾患を防ぐうえでは有効ではない。そのような疾患の例は、これらに
限られるわけではないが、上記ＨＩＶウイルスまたはマラリアの場合のPlasmodi
um種である。多くの実験系で、これら適応症には免疫系の体液性部門よりもむし
ろＴ細胞を含む細胞性部門が重要であることが示されている。それゆえ、従来の
ワクチンの限界を克服する新規で革新的な技術が必要とされている。焦点は、抗
原特異的なＴ細胞（病原感染細胞上に発現された分子を認識する）を含む細胞性
の免疫系を信頼性をもって誘発する技術に対するものでなければならない。理想
的には、ワクチンは、正常な細胞から病気になった細胞および/または感染した
細胞を識別できるＴ細胞と、それと同時に細胞外画分中の病原体を認識するＢ細
胞によって分泌される抗体との両者を誘発させるべくデザインされる。
【０００４】 幾つかの確立されたワクチンは、生きた弱毒化した微生物からなるが、ビルレ
ントな野生株に逆戻りする危険が存在する。この点は、とりわけ免疫無防備状態
の宿主では生命を脅かす筋書きともなりうる。別法として、ワクチンは病原体由
来の抗原をこれら抗原に対する免疫応答を誘発もしくは促進する化合物（これら
化合物は一般にアジュバントと呼ばれる）と組み合わせて投与される。なぜなら
、これらサブユニットワクチン自体は一般に有効でないからである。
【０００５】 上記ワクチンが価値ある医学的治療であることに疑問はないわけであるが、そ
の複合性ゆえに、たとえばワクチン接種した個体の細胞によって発現される分子
と交差反応性を示すワクチンに含まれる抗原に対して重篤な副作用が惹起されう
るという不利がある。さらに、規制当局、たとえば世界保健機構（ＷＨＯ）、食
品医薬品局（ＦＤＡ）、およびそれらの対応ヨーロッパ部門による、ワクチンの
組成および免疫の誘発機構の正確な記述に対する現存する要求は、満たすのが難
しい。
【０００６】 抗原提示細胞は先天免疫系に属しており、先天免疫系は微生物への暴露後の初
期に感染を制限する第一線の宿主防御として発展してきたものである（ホフマン
（Hoffmann）ら、１９９９）。先天免疫系の細胞は、獲得免疫系によって認識さ
れる一層複雑で特異的な構造ではなく、標的上に発現されたパターンないし比較
的に非特異的な構造を認識する（ホフマン（Hoffmann）ら、１９９９）。先天免
疫系の細胞の例はマクロファージおよび樹状細胞であるが、顆粒球（たとえば、
好中球）、ナチュラルキラー細胞その他もそうである。対照的に、獲得免疫系の
細胞は、Ｔ細胞の場合にはペプチドを含む特異的で抗原性の構造を認識し、Ｂ細
胞の場合にはペプチド並びに三次元構造を認識する。獲得免疫系は先天免疫系に
比べてはるかに特異的で複雑であり、所定の病原体／抗原への暴露を繰り返すこ
とにより改善される。
【０００７】 系統発生的には先天免疫系は遥かに古く、非常に原始的な生物において既に認
めることができる。それにもかかわらず、先天免疫系は抗原暴露の初期相におい
て重要である。というのは、病原体を封じ込める（containing）ことに加えて、
先天免疫系の細胞、すなわちＡＰＣは獲得免疫系の細胞の初回抗原刺激を受けさ
せ（prime）、かくして特異的な免疫応答を惹起して侵入者の排除に導くからで
ある。要約すると、先天免疫系の細胞、とりわけＡＰＣは、（ａ）原始的なパタ
ーン認識系により感染を封じ込めること、および（ｂ）獲得免疫系の細胞に初回
抗原刺激を受けさせて特異的な免疫応答および記憶に導き、侵入してきた病原体
または他の標的の排除という結果となること、によって免疫応答の誘導相の際に
重要な役割を果たしている（ロイット（Roitt）ら、１９９８）。これらメカニ
ズムはまた、腫瘍細胞を排除または封じ込めるのにも重要である。
【０００８】 上記のように、先天免疫系の細胞は、その各標的上に発現されたパターンを認
識する。例を挙げると、グラム陰性細菌の場合のリポ多糖（ＬＰＳ）、ミコバク
テリアの糖脂質、グラム陽性細菌のリポテイコ酸、酵母のマンナンおよびウイル
スの二本鎖ＲＮＡである（ホフマン（Hoffmann）ら、１９９９）。さらに、先天
免疫系の細胞は、腫瘍細胞上のタンパク質の変化したグリコシル化などのパター
ンを認識する。 最近の知見は、原生生物または下等真核生物のＤＮＡを哺乳動物（および、お
そらく全てではないが大抵の脊椎動物）の先天免疫系（しかしながら、おそらく
獲得免疫系も）によって認識されるさらなるパターンとして記載している（クリ
ーグ（Krieg）、１９９６；リップフォード（Lipford）ら、１９９８）。
【０００９】 免疫系は、細菌を含む下等生物を、おそらく病原体と宿主とのＤＮＡの構造上
および配列使用上の差異ゆえに認識する。とりわけ、非脊椎動物に由来するＤＮ
Ａの短いストレッチ、あるいはある種の塩基の前後関係での非メチル化シトシン
−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含む短い合成ＯＤＮの形態のものが標的
にされる（クリーグ（Krieg）ら、１９９５）。ＣｐＧモチーフは細菌ＤＮＡで
は予想された頻度で見出されるが、脊椎動物ＤＮＡでは遥かに低い頻度でしか見
出されない（リップロード（LipLord）ら、１９９８;ピゼツキー（Pisetsky）、
１９９９）。さらに、非脊椎動物（すなわち、細菌）のＣｐＧモチーフはメチル
化されていないのに対して脊椎動物のＣｐＧ配列はメチル化されている。これら
細菌ＤＮＡと脊椎動物ＤＮＡとの差異は、脊椎動物が非脊椎動物のＤＮＡを危険
なシグナルとして認識することを可能にする。
【００１０】 天然のＣｐＧ含有ＤＮＡ（ＯＤＮ）並びにＣｐＧモチーフを含有しチオホスフ
ェート置換（ホスフェートをチオホスフェート残基と交換）されたＯＤＮ（Ｃｐ
Ｇ−ＯＤＮ）は、免疫細胞増殖および体液性免疫応答の強力なアクチベーターで
あるのみならず（クリーグ（Krieg）ら、１９９５）、強い細胞性免疫応答をも
刺激する（リップフォード（Lipford）ら、１９９８に概説）。非メチル化Ｃｐ
Ｇモチーフを含むＤＮＡ／ＯＤＮは、単球（樹状細胞、マクロファージ）および
Ｂ細胞を直接活性化することができる。同様に、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞
は直接には活性化されないが、単球由来のＩＬ−１２（インターロイキン１２）
に応答し、そのＩＦＮ−γ産生は顕著に増大している（チェイス（Chace）ら、
１９９７）。その結果、ＣｐＧ ＤＮＡによる単球およびＮＫ細胞の誘発は、Ｔ
ｈ１型応答の誘導および細胞障害性Ｔ細胞の発生を促進する。
【００１１】 ポリイノシン−ポリシチジン酸（ポリＩ：Ｃ）などのようなイノシンおよびシ
トシンに基づくリボ核酸は、Ｔｈ１特異的な免疫応答を促進することが知られて
いる。イノシンおよびシトシンに基づくリボ核酸はＩＬ−１αおよびＩＬ−１２
などのサイトカインを産生するようにマクロファージを刺激することが知られて
おり（マネッティ（Manetti）ら、１９９５）、強力な１型インターフェロンの
インデューサー（マネッティ（Manetti）ら、１９９５）および強力なＮＫ細胞
スティミュレーター（カバノー（Cavanaugh）ら、１９９６）としても知られて
いる。 しかしながら、この作用はイノシンおよびシトシン残基を含むリボ核酸に厳格
に限られている（ＷＯ９８／１６２４７）。
【００１２】 （発明の開示） （発明が解決しようとする技術的課題） 本発明の発明者らによる研究は、非メチル化ＣｐＧモチーフを含むＯＤＮは免
疫系を刺激するうえで有効であるが、本質的な欠点、とりわけ特異性（高いバッ
クグラウンド）および高い全身的なＴＮＦ−α産生などの副作用に関する欠点を
有することを示している。高い全身的なＴＮＦ−α放出はトキシックショック症
候群を引き起こすことが知られており、これは患者の死を引き起こしうるもので
ある。
【００１３】 （その解決方法） それゆえ、本発明の目的は、そのようなＣｐＧ配列に基づくＯＤＮのような激
しい副作用を有することのない適当な新規なＯＤＮを提供することである。さら
に、本発明の目的は、知られたＯＤＮを含有する医薬組成物の副作用を低減する
こと、および動物、とりわけヒトを含む哺乳動物のワクチン接種に適した有効な
免疫促進特性を備えた、安全かつ有効な充分に許容できる（well-tolerable）医
薬組成物を提供することである。
【００１４】 この目的は、式（Ｉ）：
【化２】 （式中、ＸはいずれもＯまたはＳ、 ＮＭＰはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキシ
イノシン−、デオキシシトシン−、デオキシウリジン−、デオキシチミジン−、
２−メチル−デオキシイノシン−、５−メチル−デオキシシトシン−、デオキシ
プソイドウリジン−、デオキシリボースプリン−、２−アミノ−デオキシリボー
スプリン−、６−Ｓ−デオキシグアニン−、２−ジメチル−デオキシグアノシン
−またはＮ−イソペンテニル−デオキシアデノシン−モノホスフェートまたは−
モノチオホスフェートよりなる群から選ばれた２'デオキシヌクレオシドモノホ
スフェートまたはモノチオホスフェート、 ＮＵＣは、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキシイノシン
−、デオキシシトシン−、デオキシウリジン−、デオキシチミジン−、２−メチ
ル−デオキシイノシン−、５−メチル−デオキシシトシン−、デオキシプソイド
ウリジン−、デオキシリボースプリン−、２−アミノ−デオキシリボースプリン
−、６−Ｓ−デオキシグアニン−、２−ジメチル−デオキシグアノシン−または
Ｎ−イソペンテニル−デオキシアデノシンよりなる群から選ばれた２'デオキシ
ヌクレオシド、 ａおよびｂは０〜１００の整数であり、ただしａ＋ｂは４〜１５０である、 ＢおよびＥは核酸分子の５'末端または３'末端の一般的な基） の構造を有する免疫促進性のオリゴデオキシ核酸分子（ＯＤＮ）によって解決さ
れる。
【００１５】 驚くべきことに、デオキシイノシン残基を含むＯＤＮ（Ｉ−ＯＤＮ）がＣｐＧ
モチーフを含むＯＤＮに匹敵する、または多くの場合ＣｐＧモチーフを含むＯＤ
Ｎよりも良好な免疫促進作用を示すことがわかった。さらに、本発明によるＯＤ
Ｎは、ＣｐＧ ＯＤＮに比べて一層特異的な免疫応答を所定の抗原または抗原フ
ラグメントに対して産生する。加えて、本発明によるＯＤＮは、有害な副作用の
誘発、とりわけ全身的なＴＮＦ−αまたはＩＬ−６の誘発が低減している。 ポリ−ＩＣすなわちＷＯ９８／１６２４７において言及された分子などのよう
なイノシン含有ＲＮＡ分子についてある種の免疫促進作用が記載されてはいるが
、驚くべきことにデオキシイノシン残基を含むデオキシ核酸分子が良好な免疫促
進性のＯＤＮであることがわかった。
【００１６】 さらに、本発明によるＩ−ＯＤＮは、特定のＣｐＧモチーフに基づくＯＤＮと
は対照的に、ＣｐＧオリゴヌクレオチドについて記載されているような（たとえ
ば、ＥＰ０４６８５２０Ａ２、ＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９８／１８８１０、
ＷＯ９８／３７９１９、ＷＯ９８／４０１００、ＷＯ９８／５２５８１、ＷＯ９
９／５１２５９およびＷＯ９９／５６７５５（すべて参照のため本明細書中に引
用する）を参照）特定のモチーフまたはパリンドローム配列には依存しない。そ
れゆえ、本発明によるＩ−ＯＤＮの一つの群はＣＩモチーフを含んでいるのが好
ましい（それゆえ、これら引用した文献に記載されたＯＤＮのうちでも１または
それ以上のグアノシン残基がデオキシイノシン残基で置換されているものは本発
明のＯＤＮの好ましい態様である）。ＣＩモチーフはその主たる免疫促進特性に
は必要ではない、というのはＣＩまたはＩＣの文脈中にイノシンが位置していな
いＩ−ＯＤＮもまた免疫促進特性を示すからである。
【００１７】 それゆえ、本発明によるＩ−ＯＤＮはデオキシイノシン残基を含むＤＮＡ分子
であり、一本鎖の形態で提供されるのが好ましい。 本発明によるＩ−ＯＤＮは、組換え法により単離するかまたは化学的に合成す
ることができる。後者の場合、本発明によるＩ−ＯＤＮはまた修飾したオリゴヌ
クレオチドを含んでいてよく、そのような修飾したオリゴヌクレオチドは、メチ
ルホスホネートや他のリンベースの修飾オリゴヌクレオチド、たとえば、ホスホ
トリエステル、ホスホアミデートおよびホスホロジチオレートなどの標準的な化
学変換を用いて合成することができる。しかしながら、他の非リンベースの修飾
オリゴヌクレオチドを用いることができ（スターチャック（Stirchak）ら、３月
１７日（１９８９）、６１２９−６１４１）、モノホスフェートまたはモノチオ
ホスフェートが本発明に使用するのに好ましい２'デオキシヌクレオシドモノホ
スフェートである。
【００１８】 本発明によるＩ−ＯＤＮのＮＭＰは、デオキシアデノシン−、デオキシグアノ
シン−、デオキシイノシン−、デオキシシトシン−、デオキシウリジン−、デオ
キシチミジン−、２−メチル−デオキシイノシン−、５−メチル−デオキシシト
シン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート（通常通り、ホスフェー
ト基またはチオホスフェート基はデオキシリボースの５'である）よりなる群か
ら選ばれるのが好ましい。ＣｐＧモチーフに基づくＯＤＮでは該モチーフがメチ
ル化されていないことが必須であるが、驚くべきことに、このことは本発明によ
るＯＤＮの場合には当てはまらない。というのも、たとえば２−メチル−デオキ
シイノシンや５−メチル−デオキシシトシン残基は本発明によるＯＤＮの免疫促
進特性に対していかなる一般的な悪影響をも及ぼさないからである。代わりに、
ＮＭＰの２−デオキシ形に代えて、他のとりわけ不活性な基、たとえば、−Ｆ、
−ＮＨ2、−ＣＨ3など、特に−ＣＨ3がリボース基の２位に位置していてよい。
もちろん、−ＯＨおよびＳＨ基は、リボース、とりわけイノシンＮＭＰについて
のリボース残基の２'位に存在することは本発明によるＩ−ＯＤＮでは排除され
る。
【００１９】 本発明によるＯＤＮの長さは、従来技術に従って使用される標準ＯＤＮの範囲
内である。それゆえ、４未満および１５０を超える全長の分子は徐々に低下した
免疫促進能を示す。好ましいＯＤＮは１０〜６０、とりわけ１５〜４０の塩基（
ヌクレオシド）を含み、これはこれら好ましい態様において式Ｉ中のａ＋ｂが１
０〜６０、好ましくは１５〜４０であることを意味する。 これに対して、従来技術で免疫促進性であるとして記載されているイノシンお
よびシチジン含有リボ核酸分子は、分子量が２００,０００を遥かに超える大き
くて比較的定められていないポリ核酸であった（Sigma Chemicalsより市販され
ているポリイノシン−ポリシチジン酸の分子量は２２０,０００〜４６０,０００
（少なくとも５００〜１０００のＣ＋Ｉ残基）の範囲である）。本発明による分
子は遥かに長さが短く、長さおよび組成がよく定められたＤＮＡ分子であり、製
品における再現性の高いものである。
【００２０】 さらに、式Ｉで示されるＩ−ＯＤＮのデオキシイノシン含有ＮＭＰが１〜４の
硫黄原子を有するモノチオホスフェートであり、他のＮＭＰ、とりわけ他の全て
のＮＭＰがヌクレオシドモノチオホスフェートとして存在するのが好ましい。な
ぜなら、そのようなＯＤＮは一層高いヌクレアーゼ耐性を示すからである（本発
明において「モノチオホスフェート」中の「モノ」はホスフェートに関するもの
であること、すなわち各ＮＭＰ中に１つのホスフェート基（１つのリン原子）が
存在することは明らかである）。好ましくは、本発明によるＮＭＰにおいて、Ｘ1 およびＸ2の少なくとも一方はＳであり、Ｘ3およびＸ4の少なくとも一方はＯで
ある。好ましくは、Ｘ3およびＸ4はＯである（Ｘ３は、（ＮＭＰの合成のために
）、たとえばホスフェート基からまたはＮＭＰ−リボースの３'基から由来する
ものであってよい）。
【００２１】 好ましくは、本発明によるＯＤＮは下記配列を含む： ｈｈｈ ｗｄｉ ｄｈｈ ｈ、 ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｎｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ ｗｎ、 ｎｈｈ ｗｄｉ ｄｉｎ ｈｈｈ ｈｄｉ ｎｄｉ ｎｈ、 ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｄｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ ｗｎまたは ｎｈｈ ｗｄｉ ｄｉｄ ｈｈｈ ｈｄｉ ｄｄｉ ｄｈ （式中、ｎはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキ
シシトシン−またはデオキシチミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホス
フェートよりなる群から選ばれた２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェート
またはモノチオホスフェート、 ｈはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシシトシン−またはデオキシチ
ミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれ
た２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート、 ｉは、デオキシイノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、 ｗはいずれも、デオキシアデノシン−またはデオキシチミジン−モノホスフェ
ートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれた２'−デオキシヌク
レオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート、 ｄはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−またはデオキシ
チミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ば
れた２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート
）。
【００２２】 上記に記載したように、本発明によるＩ−ＯＤＮには特別のモチーフ（ＣｐＧ
やパリンドロームなどの）は必要ない。しかしながら、好ましい態様において式
ＩによるＯＤＮが２'−デオキシイノシン−モノホスフェートまたは−モノチオ
ホスフェートに３'側にて隣接した２'−デオキシシトシン−モノホスフェートま
たは−モノチオホスフェートを少なくとも１つ含んでそのような５'−ＣＩ３'−
モチーフを形成するように、ＣＩモチーフを含むＯＤＮが好ましい。
【００２３】 本発明による好ましいＯＤＮは、下記配列の１またはそれ以上を含む： ｇａｃｉｔｔ、 ｉａｃｉｔｔ、 ｇａｉｃｔｔ、 ｉａｉｃｔｔ （式中、ａはデオキシアデノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェ
ート、 ｇはデオキシグアノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、 ｉはデオキシイノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、 ｃはデオキシシトシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、 ｔはデオキシチミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート）。
【００２４】 本発明によるＩ−ＯＤＮは、医薬の分野への応用、たとえば動物またはヒトに
医薬として投与するのに特に適している。本発明によるＩ−ＯＤＮは、とりわけ
ワクチン組成物中またはワクチン組成物とともに免疫促進剤として機能するのに
特に適している。 それゆえ、本発明はまた本発明によるＯＤＮを含む医薬組成物にも関する。
【００２５】 本発明による好ましい医薬組成物はワクチンであるので、該組成物は本発明に
よるＯＤＮの他に抗原を含んでいなければならない。この抗原がワクチン接種し
た個体の防御／免疫応答を引き起こす能力は、該抗原を本発明によるＯＤＮと組
み合わせることにより、とりわけ該ＯＤＮの免疫促進作用によって著しく増大す
る。
【００２６】 ワクチンは、全く様々な異なる抗原を含んでいてよい。抗原の例は、不活化し
たウイルスまたは細菌、真菌、原生生物あるいは癌細胞などの完全に殺した生物
である。抗原はまた、これら生物／組織の下部画分（subfractions）、タンパク
質、または最も単純な形態でペプチドからなっていてもよい。抗原はまた、グリ
コシル化タンパク質またはペプチドの形態で免疫系によって認識されてよく、多
糖または脂質であるかまたは含んでいてよい。短いペプチドを用いることができ
る。なぜなら、たとえば細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）は主要組織適合複合体（Ｍ
ＨＣ）と結合した通常８〜１１アミノ酸長の短い形態の抗原を認識するからであ
る（ラメンシー（Rammensee）ら、Immunogenetics 41, (1995), 178-228）。Ｂ
細胞は約１５アミノ酸から開始して一層長いペプチドを認識する（ハロウ（Harr
ow）ら、Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)）。
【００２７】 Ｔ細胞エピトープとは対照的に、Ｂ細胞抗原の三次元構造もまた抗体による認
識には重要である。持続した抗原特異的な免疫応答を得るため、必要な免疫系の
全ての細胞が関与する免疫カスケードを誘起するのにアジュバントが役に立つ。
主としてアジュバントは、その作用の仕方に制限はないが、いわゆる抗原提示細
胞（ＡＰＣ）に作用する。これら細胞は通常、まず抗原と出会い、ついでプロセ
シングした抗原または非修飾抗原を免疫エフェクター細胞に提示する。媒介する
細胞型もまた関与していてよい。適当な特異性を有するエフェクター細胞だけが
増殖性の（productive）免疫系において活性化される。アジュバントはまた、抗
原および同時に注射した他の因子を局所的に保持する。さらに、アジュバントは
他の免疫細胞に対する化学誘引物質として作用し、あるいは免疫系に対する刺激
剤として局所的および/または全身的に作用する。
【００２８】 本発明の好ましい態様によれば、Ｔ細胞エピトープを抗原として用いる。ある
いは、Ｔ細胞エピトープとＢ細胞エピトープとの組み合わせも好ましい。 本発明の組成物に使用する抗原は重要ではない。もちろん、異なる抗原の混合
物を本発明に従って用いることも可能である。好ましくは、ウイルスまたは細菌
病原体に由来する、または真菌または寄生虫に由来するタンパク質またはペプチ
ドをそのような抗原（誘導体化した抗原またはグリコシル化したまたは脂質化し
た（lipidated）抗原または多糖または脂質を含む）として用いる。他の好まし
い抗原の採取源は腫瘍抗原である。好ましい病原体は、ヒト免疫不全ウイルス（
ＨＩＶ）、Ａ型およびＢ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ラウス
肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエン
ザウイルス、ロタウイルス、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus
aureus）、クラミジア・ニューモニア（Chlamydia pneumonias）、クラミジア
・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）、ミコバクテリウム・チューバーキ
ュローシス（Mycobacterium tuberculosis）、ストレプトコッカス・ニューモニ
ア（Streptococcus pneumonias）、バシラス・アントラシス（Bacillus anthrac
is）、ビブリオ・コレラ（Vibrio cholerae）、プラスモジウム（Plasmodium）
種（Pl. falciparum, Pl. vivaxなど）、アスペルギルス（Aspergillus）種また
はカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）から選択される。
【００２９】 抗原はまた癌細胞によって発現される分子であってもよい（腫瘍抗原）。入手
（derivation）プロセスは、病原体／癌細胞からの特定のタンパク質の精製、該
病原体の不活化並びにそのようなタンパク質のタンパク質分解によるまたは化学
的な誘導体化または安定化を含む。同様にして、腫瘍抗原（癌ワクチン）または
自己免疫抗原もまた本発明による医薬組成物に用いることができる。そのような
組成物を用いて腫瘍ワクチン接種または自己免疫疾患の治療を行ってよい。
【００３０】 ペプチド抗原の場合、ペプチドのミミトープ（mimitopes）／アゴニスト／ス
ーパーアゴニスト（superagonists）／アンタゴニストまたは免疫学的特性に影
響を及ぼすことなくある位置で変化させたペプチドまたは非ペプチドのミミトー
プ／アゴニスト／スーパーアゴニスト／アンタゴニスト（スパービエ（Sparbier
）およびウォルデン（Walden）、１９９９に概説）が本発明に含まれる。ペプチ
ド抗原はまた、ポリカチオン性化合物または免疫促進性化合物との相互作用を容
易にするためにペプチド抗原のカルボキシ末端側かまたはアミノ末端側のいずれ
かに伸長を含んでいてよい。自己免疫疾患の治療のためにはペプチドアンタゴニ
ストを適用することができる。
【００３１】 抗原はまた、抗原提示および抗原提示細胞への抗原のターゲティングを促進す
る分子を含むように誘導体化してもよい。 本発明の一つの態様において、本発明の医薬組成物は自己免疫疾患に関与する
タンパク質またはタンパク質断片およびペプチドに対する耐性を付与するように
働く。この態様に用いる抗原は、免疫系に対して寛容にするかまたは自己免疫プ
ロセスに関与するエピトープに対する免疫応答をダウンレギュレーションするよ
うに働く。 好ましくは本発明による医薬組成物、とりわけワクチンの形態の医薬組成物は
、ポリカチオン性ポリマー、好ましくはポリカチオン性ペプチド、とりわけポリ
アルギニン、ポリリシンまたは抗菌性ペプチドをさらに含む。
【００３２】 本発明に従って用いるポリカチオン性化合物は、ＷＯ９７／３０７２１による
特徴的な作用を示すあらゆるポリカチオン性化合物であってよい。好ましいポリ
カチオン性化合物は、塩基性ポリペプチド、有機ポリカチオン、塩基性ポリアミ
ノ酸またはその混合物から選ばれる。これらポリアミノ酸は、少なくとも４アミ
ノ酸残基の鎖長を有していなければならない（ゴールドマン（Goldman）ら（１
９８３）に記載のTuftsinを参照）。特に好ましいのは、ポリリシン、ポリアル
ギニン、および８を超える、とりわけ２０を超えるアミノ酸残基の範囲に２０％
を超える、とりわけ５０％を超える塩基性アミノ酸を含むポリペプチドまたはそ
の混合物のようなペプチド結合を含む物質である。他の好ましいポリカチオンお
よびその医薬組成物は、ＷＯ９７／３０７２１（たとえば、ポリエチレンイミン
）およびＷＯ９９／３８５２８に記載されている。好ましくは、これらポリペプ
チドは２０〜５００アミノ酸残基、とりわけ３０〜２００残基を含む。 これらポリカチオン性化合物は化学的にまたは組換えにより製造してよく、あ
るいは天然の採取源に由来してもよい。
【００３３】 カチオン性（ポリ）ペプチドはまた、ガンツ（Ganz）およびレーラー（Lehrer
）、１９９９;ハンコック（Hancock）、１９９９に概説されている特性を有する
ポリカチオン性で抗菌性の微生物ペプチドであってもよい。これら（ポリ）ペプ
チドは、原核生物または動物または植物起源のものであってよく、化学的にまた
は組換えにより製造されてよい（アンドロー（Andreu）およびリバ（Rivas）、
１９９８；ガンツ（Ganz）およびレーラー（Lehrer）、１９９９；シマコ（Simm
aco）ら、１９９８）。そのようなペプチドの配列は、たとえば以下のインター
ネットアドレスの下に抗菌配列データベース（Antimicrobial Sequences Databa
se）中に見出すことができる：http://www.bbcm.univ.trieste. it/~tossi/pagl.html 。
【００３４】 そのような宿主防御ペプチドまたは防御剤（defensives）もまた、本発明によ
るポリカチオン性ポリマーの好ましい形態である。一般に、好ましくはＡＰＣ（
樹状細胞を含む）によって媒介される獲得免疫系を最終生成物として活性化（ま
たはダウンレギュレーション）することを可能にする化合物はポリカチオン性ポ
リマーとして用いる。 本発明においてポリカチオン性物質として使用するのに特に好ましいのは、カ
テリシジン（cathelicidin）由来の抗菌ペプチドまたはその誘導体（Ａ１４１６
／２０００、参照のため本明細書中に引用する）、とりわけ哺乳動物、好ましく
はヒト、ウシまたはマウスのカテリシジンに由来する抗菌ペプチド、または（ヒ
ト）成長ホルモンなどの神経刺激性の化合物である。
【００３５】 天然の採取源に由来するポリカチオン性化合物としては、ＨＩＶ−ＲＥＶまた
はＨＩＶ−ＴＡＴ（由来のカチオン性ペプチド、アンテナペディア（antennaped
ia）ペプチド、キトサンまたはキトサンの他の誘導体）または生化学的な製造ま
たは組換え製造によりこれらペプチドまたはタンパク質に由来する他のペプチド
が挙げられる。他の好ましいポリカチオン性化合物は、カテリン（cathelin）ま
たはカテリンの関連物質またはカテリンに由来する物質である。たとえば、マウ
スカテリンは、アミノ酸配列：ＮＨ2−ＲＬＡＧＬＬＲＫＧＧＥＫＩＧＥＫＬＫ
ＫＩＧＯＫＩＫＮＦＦＱＫＬＶＰＱＰＥ−ＣＯＯＨを有するペプチドである。カ
テリンの関連物質またはカテリンに由来する物質はカテリン配列の全部または一
部を含み、少なくとも１５〜２０アミノ酸残基を有する。誘導体化は、２０の標
準アミノ酸以外のアミノ酸による天然アミノ酸の置換または修飾を含む。さらに
、さらなるカチオン性残基がそのようなカテリン分子中に導入されてよい。これ
らカテリン分子は、抗原および本発明による免疫原性ＯＤＮと組み合わせるのが
好ましい。しかしながら、これらカテリン分子は驚くべきことに、さらなるアジ
ュバントを加えなくとも抗原に対するアジュバントとして有効なことがわかった
。それゆえ、そのようなカテリン分子は、さらなる免疫刺激性物質を用いたまた
は用いないワクチン製剤において有効なアジュバントとして用いることが可能で
ある。
【００３６】 本発明に従って用いることのできる他の好ましいポリカチオン性物質は、３〜
７の疎水性アミノ酸のリンカーによって隔てられた少なくとも２つのＫＬＫモチ
ーフを含む合成ペプチドである（Ａ１７８９／２０００、参照のため本明細書中
に引用する）。 本発明による医薬組成物の免疫促進作用が、各成分単独の作用の付加から予測
されるものと比較して、あるいは抗原とともに用いたＯＤＮまたはポリカチオン
の作用の付加から予測されるものと比較してさえも有意に高いことは非常に驚く
べきことであった。
【００３７】 式Ｉ中のＢおよびＥは、核酸分子の５'末端および／または３'末端の一般的な
基である。そのような基の例は、当業者であれば容易に利用できる（たとえば、
“Oligonucleotides and Analogues - A Practical Approach”（１９９１）、
エックスタイン（Eckstein）編、オックスフォードユニバーシティープレス）。
本発明によるＩ−ＯＤＮについては、Ｂおよび／またはＥは、−Ｈ、−ＣＨ3、
−ＣＯＣＨ3、−ＯＨ、−ＣＨＯ、ホスフェート、チオホスフェート、サルフェ
ートまたはチオサルフェート、またはホスホアルキル基、とりわけＣ1−Ｃ6のア
ルキル長および／または末端アミノ基を有するもの（アミノ基は本発明によるＩ
−ＯＤＮのさらなる標識に用いることができる、たとえば−ＰＯ4−(ＣＨ2)n−
ＮＨ2または−ＰＯ4−(ＣＨ2)n−ＮＨ−標識など）から独立に選ばれるのが好ま
しい。
【００３８】 Ｂとして特に好ましいのは、ヌクレオシド、とりわけ上記２'デオキシヌクレ
オチド（すなわち、ホスフェートまたはチオホスフェート基を含まない）である
。あるいは、これら基はまた、他の分子、とりわけ担体分子または標識へのリン
カー基を含んでいてよい。ＯＤＮが固相表面または粒子または標識に結合してい
るＯＤＮのそのような形態では、これら表面、粒子、標識などもＢおよび／また
はＥ基の一部である。 もちろん、式Ｉによる分子のイオン化した（塩）形態や互変異性の形態は式Ｉ
に包含される。
【００３９】 本発明による医薬組成物は、さらなる活性成分（薬理学的に活性な物質）、と
りわけワクチンに関連して用いることのできる物質をさらに含んでいてよい。そ
のようなさらなる活性成分の好ましい態様は、サイトカイン、抗炎症性物質、抗
菌性物質またはそれらの組み合わせである。 もちろん、本発明による医薬組成物は、補助物質、とりわけ薬理学的に許容し
うる担体、緩衝液物質、安定化剤またはそれらの組み合わせをさらに含んでいて
よい。
【００４０】 本発明の医薬組成物中の成分の相対量は、個々の抗原の必要性および該医薬組
成物を投与する動物および／またはヒトに大きく依存する。それゆえ、本発明に
よる医薬組成物は、本発明の１またはそれ以上のＯＤＮを好ましくは１ｐｇ〜１
０ｇ、好ましくは１ｎｇ〜１ｇ、さらに好ましくは１００ｎｇ〜１０ｍｇ、とり
わけ１０ｍｇ〜１ｍｇ含むのが好ましい。抗原およびポリカチオン性ポリマーは
同等の投与量で投与してよく、ワクチン当たり１〜１０,０００ｍｇの抗原およ
び０.１〜１,０００ｍｇのポリカチオン性ポリマーが好ましい。
【００４１】 本発明の医薬組成物は、患者、たとえばワクチン接種候補者に有効量にて、た
とえば１週間、２週間または１ヶ月の間隔で投与してよい。本発明の医薬組成物
で処置する患者はまた、繰り返しワクチン接種してもよいし、または１回だけワ
クチン接種してもよい。本発明の好ましい使用は、とりわけヒトまたは動物を特
定の抗原に対して防御することなく能動免疫することである。 本発明の医薬組成物の投与経路は重要ではなく、たとえば、皮下、筋肉内、皮
内または経皮注射が経口摂取とともに適している。
【００４２】 たとえば抗原／ポリカチオン組成物と別に免疫促進性物質を注射することによ
って、本発明の医薬組成物を別々に投与することも可能である。それゆえ、本発
明はまた、第一の成分として抗原およびポリカチオン性ポリマーを含む組成物、
第二の成分として免疫促進性または走化性の物質を含む組成物、を含むキットに
も関する。 上記成分は同じ部位に同時に投与することもできるが、異なる部位に異なる時
間で、または異なる期間で投与することも可能である。また、組成物または成分
の全身性または局所性の投与をそれぞれ変えることも可能である。
【００４３】 本発明の詳細を下記実施例および図面により記載するが、本発明はもちろんこ
れらに限られるわけではない。実施例 すべての実験においてチオホスフェート置換ＯＤＮ（ホスフェートをチオホス
フェート残基で置換、以下、「チオホスフェート置換オリゴデオキシヌクレオチ
ド」という）を用いたが、これはそのようなＯＤＮがより高いヌクレアーゼ耐性
を示すからである（バラス（Ballas）ら、１９９６；クリーグ（Krieg）ら、１
９９５；パロンチ（Parronchi）ら、１９９９）。
【００４４】実施例１ ：種々のＩ−ＯＤＮとポリＬ−アルギニン（ｐＲ６０）とを組み合わせ
た注射は卵アルブミン由来のペプチドに対する免疫応答を相乗的に促進するマウス ： Ｃ５７ＢＩ／６（Harlan/Olac）ペプチド ： ニワトリ卵アルブミンのＭＨＣクラスＩ（Ｈ−２Ｋｂ）拘束エピトープである
ＯＶＡ257-264ペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）(ロッツシュク（Rotzschke）ら、
１９９１）を標準固相Ｆ−ｍｏｃ化学合成法を用いて合成し、ＨＰＬＣ精製し、
ついで純度をマススペクトロメトリーにより分析した。投与量：３００ｍｇ／マ
ウス。
【００４５】ポリＬ−アルギニン６０（ｐＲ６０） ： 平均重合度が６０アルギニン残基のポリＬ−アルギニン；SIGMA chemicals。
投与量：１００ｍｇ／マウス。ＣｐＧ−ＯＤＮ１６６８ ： ＣｐＧモチーフを含むチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｇ ａｃｇ
ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量
：５ナノモル／マウス。
【００４６】Ｉ−ＯＤＮ１ ： デオキシイノシンを含有するチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｉ ａ
ｃｉ ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。
投与量：５ナノモル／マウス。Ｉ−ＯＤＮ２ ： デオキシイノシンを含有するチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｇ ａ
ｃｉ ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。
投与量：５ナノモル／マウス。Ｉ−ＯＤＮ３ ： デオキシイノシンを含有するチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｉ ａ
ｃｉ ｔｔｃ ｃｔｉ ａｔｉ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。
投与量：５ナノモル／マウス。
【００４７】実験群 （１群５匹のマウス） １．ＯＶＡ257-264 ２．ＯＶＡ257-264 ＋ ｐＲ６０ ３．ＯＶＡ257-264 ＋ ＣｐＧ１６６８ ４．ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ１ ５．ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ２ ６．ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ３ ７．ＯＶＡ257-264 ＋ ＣｐＧ１６６８ ＋ ｐＲ６０ ８．ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ１ ＋ ｐＲ６０ ９．ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ２ ＋ ｐＲ６０ １０．ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ３ ＋ ｐＲ６０
【００４８】 第０日目にマウスの後ろ足に上記化合物を含む全量１００ｍｌ（各足当たり５
０ｍｌ）を注射した。注射４日後に動物を屠殺し、膝窩リンパ節を回収した。リ
ンパ節を７０ｍｍセルストレーナーに通し、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、SIGMA
chemicals）を含むＤＭＥＭ培地（GIBCO BRL）で２回洗浄した。細胞をＤＭＥＭ
／５％／ＦＣＳ中に３×１０6細胞／ｍｌに調節した。ＩＦＮ−ｇ ＥＬＩＳＰＯ
Ｔアッセイを記載に従って（ミヤヒラ（Miyahira）ら、１９９５）３回ずつ行っ
た。この方法は、抗原特異的なＴ細胞の定量をするために広く用いられている手
順である。リンパ球をイクスビボにて培地バックグラウンド−コントロール、Ｏ
ＶＡ257-264ペプチドまたはコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）で刺激した。単一の
ＩＦＮ−ｇ産生Ｔ細胞を表すスポットをカウントし、バックグラウンドスポット
の数を全試料から差し引いた。ＣｏｎＡで刺激した後に検出された多数のスポッ
ト（データは示していない）は、使用したリンパ球が良好な状態にあることを示
している。マウスの各実験群について図１にスポット数／１×１０6細胞を示す
。 注射１時間後に尾静脈より採血し、血清を調製して全身的なＴＮＦ−ａの誘発
をＥＬＩＳＡを用いて決定した（図２）。
【００４９】実施例２ ：グアノシンをデオキシ−イノシンで交換すると、とりわけポリＬ−ア
ルギニン（ｐＲ６０）と組み合わせたときに非免疫原性のＧｐＣ配列が高度に免
疫原性の配列に変換されるマウス ： Ｃ５７Ｂ１／６（Harlan/Olac）ペプチド ： ニワトリ卵アルブミンのＭＨＣクラスＩ（Ｈ−２Ｋｂ）拘束エピトープである
ＯＶＡ257-264ペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）(ロッツシュク（Rotzschke）ら、
１９９１）を標準固相Ｆ−ｍｏｃ合成法を用いて合成し、ＨＰＬＣ精製し、つい
で純度をマススペクトロメトリーにより分析した。投与量：３００μｇ／マウス
。
【００５０】ポリＬ−アルギニン６０（ｐＲ６０） ： 平均重合度が６０アルギニン残基のポリＬ−アルギニン；SIGMA chemicals。
投与量：１００μｇ／マウス。ＣｐＧ−ＯＤＮ１６６８ ： ＣｐＧモチーフを含むチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｇ ａｃｇ
ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量
：５ナノモル／マウス。ＧｐＣ−ＯＤＮ ： 非免疫原性のＧｐＣモチーフを含むチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａ
ｔｇ ａｇｃ ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成
した。投与量：５ナノモル／マウス。
【００５１】Ｉ−ＯＤＮ９ ： デオキシイノシンを含有するチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｇ ａ
ｉｃ ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。
投与量：５ナノモル／マウス。Ｉ−ＯＤＮ１０ ： デオキシイノシンを含有するチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｉ ａ
ｉｃ ｔｔｃ ｃｔｉ ａｔｉ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。
投与量：５ナノモル／マウス。
【００５２】実験群 （１群５匹のマウス） ＯＶＡ257-264 ＯＶＡ257-264 ＋ ｐＲ６０ ＯＶＡ257-264 ＋ ＣｐＧ１６６８ ＯＶＡ257-264 ＋ ＧｐＣ ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ９ ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ１０ ＯＶＡ257-264 ＋ ＣｐＧ１６６８ ＋ ｐＲ６０ ＯＶＡ257-264 ＋ ＧｐＣ ＋ ｐＲ６０ ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ９ ＋ ｐＲ６０ ＯＶＡ257-264 ＋ Ｉ−ＯＤＮ１０ ＋ ｐＲ６０
【００５３】 第０日目にマウスの各後ろ足に上記化合物を含む全量１００μｌ（各足当たり
５０μｌ）を注射した。注射４日後に動物を屠殺し、膝窩リンパ節を回収した。
リンパ節を７０μｍセルストレーナーに通し、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、SIGM
A chemicals）を含むＤＭＥＭ培地（GIBCO BRL）で２回洗浄した。細胞をＤＭＥ
Ｍ／５％ＦＣＳ中に３×１０6細胞／ｍｌに調節した。ＩＦＮ−ｇ ＥＬＩＳＰＯ
Ｔアッセイを記載に従って（ミヤヒラ（Miyahira）ら、１９９５）３回ずつ行っ
た。この方法は、抗原特異的なＴ細胞の定量をするために広く用いられている手
順である。リンパ球をイクスビボにて培地（バックグラウンド）、ＯＶＡ257-26 4 ペプチド、無関係のペプチドｍＴＲＰ２181-188（マウスチロシナーゼ関連プロ
テイン２、ＶＹＤＦＦＶＷＬ）、ｐＲ６０およびコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）
で刺激した。単一のＩＦＮ−ｇ産生Ｔ細胞を表すスポットをカウントし、バック
グラウンドスポットの数を全試料から差し引いた。ＣｏｎＡで刺激した後に検出
された多数のスポット（データは示していない）は、使用したリンパ球が良好な
状態にあることを示している。マウスの各実験群について図３にスポット数／１
×１０6細胞を示してあり、イクスビボで刺激した３回の試行の標準偏差を示し
てある。注射１時間後に尾静脈より採血し、血清を調製して全身的なＴＮＦ−ａ
およびＩＬ−６の誘発をサイトカイン特異的ＥＬＩＳＡを用いて決定した（図４
）。
【００５４】実施例３ ：デオキシイノシンを含むランダムな２０−ｍｅｒ配列とメラノーマ由
来のペプチドとを組み合わせた注射は該ペプチドに対する強い免疫応答を誘発し
、該免疫応答はポリＬ−アルギニン（ｐＲ６０）を同時に投与することによって
さらに促進することができるマウス ： Ｃ５７Ｂ１／６（Harlan/Olac）ペプチド ： マウスチロシナーゼ関連プロテイン２のＭＨＣクラスＩ（Ｈ−２Ｋb）拘束エ
ピトープであるＴＲＰ−２ペプチド（ＶＹＤＦＦＶＷＬ）（ブロム（Bllom）ら
、１９９７）を標準固相Ｆ−ｍｏｃ合成法により合成し、ＨＰＬＣ精製し、つい
で純度をマススペクトロメトリーにより分析した。投与量：３００μｇ／マウス
。
【００５５】ポリＬ−アルギニン６０（ｐＲ６０） ： 平均重合度が６０アルギニン残基のポリＬ−アルギニン；SIGMA chemicals。
投与量：１００μｇ／マウス。ＣｐＧ−ＯＤＮ１６６８ ： ＣｐＧモチーフを含むチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｇ ａｃｇ
ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量
：５ナノモル／マウス。
【００５６】ｗｄｉ ： チオホスフェート置換ＯＤＮ：ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｎｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ
ｗｎをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量：５ナノモル／マウス
。ｗｄｉｄｉｎ ： チオホスフェート置換ＯＤＮ：ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｎｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ
ｗｎをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量：５ナノモル／マウス
。ｗｄｉｄ ： チオホスフェート置換ＯＤＮ：ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｄｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ
ｗｎをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量：５ナノモル／マウス
。ｗｄｉｄｉｄ ： チオホスフェート置換ＯＤＮ：ｎｈｈ ｗｄｉ ｄｉｄ ｈｈｈ ｈｄｉ ｄｄｉ
ｄｈをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量：５ナノモル／マウス
。
【００５７】実験群 （１群５匹のマウス） １．ＴＲＰ−２ ２．ＴＲＰ−２ ＋ ｐＲ６０ ３．ＴＲＰ−２ ＋ ＣｐＧ１６６８ ４．ＴＲＰ−２ ＋ ｗｄｉ ５．ＴＲＰ−２ ＋ ｗｄｉｄｉｎ ６．ＴＲＰ−２ ＋ ｗｄｉｄ ７．ＴＲＰ−２ ＋ ｗｄｉｄｉｄ ８．ＴＲＰ−２ ＋ ＣｐＧ１６６８ ＋ ｐＲ６０ ９．ＴＲＰ−２ ＋ ｗｄｉ ＋ ｐＲ６０ １０．ＴＲＰ−２ ＋ ｗｄｉｄｉｎ ＋ ｐＲ６０ １１．ＴＲＰ−２ ＋ ｗｄｉｄ ＋ ｐＲ６０ １２．ＴＲＰ−２ ＋ ｗｄｉｄｉｄ ＋ ｐＲ６０
【００５８】 第０日目にマウスの各後ろ足に上記化合物を含む全量１００μｌ（各足当たり
５０μｌ）を注射した。注射４日後に動物を屠殺し、膝窩リンパ節を回収した。
リンパ節を７０μｍセルストレーナーに通し、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、SIGM
A chemicals）を含むＤＭＥＭ培地（GIBCO BRL）で２回洗浄した。細胞をＤＭＥ
Ｍ／５％ＦＣＳ中に３×１０6細胞／ｍｌに調節した。ＩＦＮ−ｇ ＥＬＩＳＰＯ
Ｔアッセイを記載に従って（ミヤヒラ（Miyahira）ら、１９９５）３回ずつ行っ
た。この方法は、抗原特異的なＴ細胞の定量をするために広く用いられている手
順である。リンパ球をイクスビボにて培地（バックグラウンド）、ＴＲＰ−２ペ
プチド、無関係のＯＶＡ257-264ペプチド、ｐＲ６０およびコンカナバリンＡ（
ＣｏｎＡ）で刺激した。単一のＩＦＮ−ｇ産生Ｔ細胞を表すスポットをカウント
し、バックグラウンドスポットの数を全試料から差し引いた。ＣｏｎＡで刺激し
た後に検出された多数のスポット（データは示していない）は、使用したリンパ
球が良好な状態にあることを示している。マウスの各実験群について図５にスポ
ット数／１×１０6細胞を示してあり、イクスビボで刺激した３回の試行の標準
偏差を示してある。
【００５９】実施例４ ：Ｉ−ＯＤＮとポリＬ−アルギニン（ｐＲ６０）とを組み合わせた注射
はメラノーマ由来のペプチドに対する免疫応答を相乗的に促進する実験群 （１群５匹のマウス） １．ＴＲＰ−２181-188 ２．ＴＲＰ−２181-188 ＋ ｐＲ６０ ３．ＴＲＰ−２181-188 ＋ ＣｐＧ１６６８ ４．ＴＲＰ−２181-188 ＋ Ｉ−ＯＤＮ２ ５．ＴＲＰ−２181-188 ＋ ＣｐＧ１６６８ ＋ ｐＲ６０ ６．ＴＲＰ−２181-188 ＋ Ｉ−ＯＤＮ２ ＋ ｐＲ６０
【００６０】 第０日目にマウスの各後ろ足に上記化合物を含む全量１００μｌ（各足当たり
５０μｌ）を注射した。注射４日後に動物を屠殺し、膝窩リンパ節を回収した。
リンパ節を７０μｍセルストレーナーに通し、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、SIGM
A chemicals）を含むＤＭＥＭ培地（GIBCO BRL）で２回洗浄した。細胞をＤＭＥ
Ｍ／５％／ＦＣＳ中に３×１０6細胞／ｍｌに調節した。ＩＦＮ−γ ＥＬＩＳＰ
ＯＴアッセイを記載に従って（ミヤヒラ（Miyahira）ら、１９９５）３回ずつ行
った。この方法は、抗原特異的なＴ細胞の定量をするために広く用いられている
手順である。リンパ球をイクスビボにて培地バックグラウンド−コントロール、
ＴＲＰ−２181-188ペプチド、無関係のＯＶＡ257-264ペプチドおよびコンカナバ
リンＡ（ＣｏｎＡ）で刺激した。単一のＩＦＮ−γ産生Ｔ細胞を表すスポットを
カウントし、バックグラウンドスポットの数を全試料から差し引いた。ＣｏｎＡ
で刺激した後に検出された多数のスポット（データは示していない）は、使用し
たリンパ球が良好な状態にあることを示している。マウスの各実験群について図
６にスポット数／１×１０6細胞を示してあり、イクスビボで刺激した３回の試
行の標準偏差を示してある。 注射１時間後に尾静脈より採血し、血清を調製して全身的なＴＮＦ−αおよび
ＩＬ−６の誘発をサイトカイン特異的ＥＬＩＳＡを用いて決定した（図７）。
【００６１】実施例５ ：ランダムな１０−ｍｅｒ Ｉ−ＯＤＮとポリＬ−アルギニン（ｐＲ６
０）とを組み合わせた注射はメラノーマ由来のペプチドに対する免疫応答を相乗
的に促進する実験群 （１群５匹のマウス） １．ＴＲＰ−２181-188 ２．ＴＲＰ−２181-188 ＋ ｐＲ６０ ３．ＴＲＰ−２181-188 ＋ ＣｐＧ１６６８ ４．ＴＲＰ−２181-188 ＋ ＯＤＮ１７ ５．ＴＲＰ−２181-188 ＋ ＣｐＧ１６６８ ＋ ｐＲ６０ ６．ＴＲＰ−２181-188 ＋ ＯＤＮ１７ ＋ ｐＲ６０
【００６２】 第０日目にマウスの各後ろ足に上記化合物を含む全量１００μｌ（各足当たり
５０μｌ）を注射した。注射４日後に動物を屠殺し、膝窩リンパ節を回収した。
リンパ節を７０μｍセルストレーナーに通し、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、SIGM
A chemicals）を含むＤＭＥＭ培地（GIBCO BRL）で２回洗浄した。細胞をＤＭＥ
Ｍ／５％／ＦＣＳ中に３×１０6細胞／ｍｌに調節した。ＩＦＮ−γ ＥＬＩＳＰ
ＯＴアッセイを記載に従って（ミヤヒラ（Miyahira）ら、１９９５）３回ずつ行
った。この方法は、抗原特異的なＴ細胞の定量をするために広く用いられている
手順である。リンパ球をイクスビボにて培地バックグラウンド−コントロール、
ＴＲＰ−２181-188ペプチド、無関係のＯＶＡ257-264ペプチドおよびコンカナバ
リンＡ（ＣｏｎＡ）で刺激した。単一のＩＦＮ−γ産生Ｔ細胞を表すスポットを
カウントし、バックグラウンドスポットの数を全試料から差し引いた。ＣｏｎＡ
で刺激した後に検出された多数のスポット（データは示していない）は、使用し
たリンパ球が良好な状態にあることを示している。マウスの各実験群について図
８にスポット数／１×１０6細胞を示してあり、イクスビボで刺激した３回の試
行の標準偏差を示してある。
【００６３】マウス ： Ｃ５７Ｂ１／６（Harlan/Olac）ペプチド ： マウスチロシナーゼ関連プロテイン２のＭＨＣクラスＩ（Ｈ−２Ｋb）拘束エ
ピトープであるＴＲＰ−２ペプチド（ＶＹＤＦＦＶＷＬ）（ブロム（Bllom）ら
、１９９７）を標準固相Ｆ−ｍｏｃ合成法により合成し、ＨＰＬＣ精製し、つい
で純度をマススペクトロメトリーにより分析した。投与量：１００μｇ／マウス
。
【００６４】ポリＬ−アルギニン６０（ｐＲ６０） ： 平均重合度が６０アルギニン残基のポリＬ−アルギニン；SIGMA chemicals。
投与量：１００μｇ／マウス。ＣｐＧ−ＯＤＮ１６６８ ： ＣｐＧモチーフを含むチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｇ ａｃｇ
ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量
：５ナノモル／マウス。ＯＤＮ１７ ： デオキシイノシンを含むチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｈｈｈ ｗｄｉ ｄｈｈ ｈをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した（ｈ＝ＣＡＴ、ｗ＝ＡＴ、ｄ＝Ｇ
ＡＴ）。投与量：１０ナノモル／マウス。
【００６５】マウス ： Ｃ５７Ｂ１／６（Harlan/Olac）ペプチド ： マウスチロシナーゼ関連プロテイン２のＭＨＣクラスＩ（Ｈ−２Ｋb）拘束エ
ピトープであるＴＲＰ−２ペプチド（ＶＹＤＦＦＶＷＬ）（ブロム（Bllom）ら
、１９９７）を標準固相Ｆ−ｍｏｃ合成法により合成し、ＨＰＬＣ精製し、つい
で純度をマススペクトロメトリーにより分析した。投与量：１００μｇ／マウス
。
【００６６】ポリＬ−アルギニン６０（ｐＲ６０） ： 平均重合度が６０アルギニン残基のポリＬ−アルギニン；SIGMA chemicals。
投与量：１００μｇ／マウス。ＣｐＧ−ＯＤＮ１６６８ ： ＣｐＧモチーフを含むチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｇ ａｃｇ
ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量
：５ナノモル／マウス。Ｉ−ＯＤＮ２ ： デオキシイノシンを含むチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｇ ａｃｉ ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与
量：５ナノモル／マウス。
【００６７】実施例６ ：オリゴデオキシＩＣ26-merとポリＬ−アルギニン（ｐＲ）とを組み合
わせた投与は卵アルブミン（ＯＶＡ）特異的な体液性応答を促進するマウス ： Ｃ５７Ｂ１／６（Harlan/Olac）卵アルブミン（ＯＶＡ） ： ニワトリ卵からの卵アルブミン、グレードＶ、SIGMA chemicals、Ａ−５５０
３、ロット５４Ｈ７０７０：投与量：５０μｇ／マウス。
【００６８】ポリＬ−アルギニン（ｐＲ） ： 平均重合度が６０アルギニン残基のポリＬ−アルギニン；SIGMA chemicals、
Ｐ−４６６３、ロット６８Ｈ５９０３。投与量：１００μｇ／マウス。オリゴデオキシＩＣ、２６−ｍｅｒ（オリゴｄＩＣ26-mer） ： オリゴｄＩＣ26-merを標準ホスホアミダイト化学により４μモルスケールで合
成し、ＨＰＬＣ（NAPS GmbH、ゲッチンゲン、ドイツ）により精製した。投与量
：５ナノモル／マウス。
【００６９】実験群 （１群４匹のマウス） １．ＯＶＡ ＋ オリゴｄＩＣ26-mer ＋ ｐＲ ２．ＯＶＡ ＋ オリゴｄＩＣ26-mer ３．ＯＶＡ ＋ ｐＲ ４．ＯＶＡ
【００７０】 第０日目にマウスの各後ろ足に上記化合物を含む全量１００μｌ（各足当たり
５０μｌ）を注射した。注射２４時間後に血清を回収し、ＯＶＡ特異的抗体の存
在についてＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。これらの結果は、ＯＶＡとオ
リゴｄＩＣおよびｐＲとを組み合わせた注射がＯＶＡを各物質単独で注射したと
きに比べてＯＶＡ特異的なＩｇＧ抗体の産生を促進したことを示している（図１
３Ａ、Ｂ）。興味深いことに、オリゴｄＩＣ／ｐＲと組み合わせたＯＶＡの単一
の注射を行ったときにＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１の両者の力価が増大し、Ｔｈ１
細胞およびＴｈ２細胞の両者が関与していることを意味していた。しかしながら
、１１５日後にはＯＶＡとオリゴｄＩＣ／ｐＲとを注射したマウスの血清でＩｇ
Ｇ２ａの増大レベルのみが検出できた。 これらデータは、オリゴｄＩＣおよびｐＲと組み合わせたＯＶＡの注射がＯＶ
Ａ特異的な体液性応答を促進することを示している。この応答は、初期の相では
Ｔｈ１およびＴｈ２の両者により誘発された抗体イソ型が産生されるが、その後
、主としてＴｈ１によって誘発された抗体が産生されるという特徴を有する。
【００７１】参照文献
【００７２】
【表１】
【００７３】
【表２】
【００７４】
【表３】
【００７５】
【表４】
【００７６】
【表５】
【図面の簡単な説明】
【図１】 卵アルブミン由来ペプチドＯＶＡ257-264、ポリＬ−アルギニン
（ｐＲ６０）およびデオキシイノシンＩ含有オリゴデオキシヌクレオチド（Ｉ−
ＯＤＮ）またはＣｐＧ１６６８を注射後のＯＶＡ257-264に対する免疫応答を示
す。マウスの後ろ足に所定の混合物を注射した。４日後、水切りしたリンパ節細
胞をイクスビボにてＯＶＡ257-264で刺激した。２４時間後にＩＦＮ−ｇ産生細
胞の数をＥＬＩＳＰＯＴアッセイを用いて決定した。結果をスポット数／１×１
０6リンパ節細胞として表してある。
【図２】 ＯＶＡ257-264、ポリＬ−アルギニン（ｐＲ６０）およびＩ含有
オリゴデオキシヌクレオチド（Ｉ−ＯＤＮ）またはＣｐＧ１６６８を注射後の全
身性のＴＮＦ−ａ産生の誘発を示す。マウスの後ろ足に所定の混合物を注射した
。注射１時間後に尾静脈から採血し、血清を調製した。血清中のＴＮＦ−ａの濃
度をＥＬＩＳＡを用いて決定した。
【図３】 卵アルブミン由来ペプチドＯＶＡ257-264、ポリＬ−アルギニン
（ｐＲ６０）およびデオキシイノシン含有オリゴデオキシヌクレオチド（Ｉ−Ｏ
ＤＮ）、ＣｐＧ１６６８またはＧｐＣを注射後のＯＶＡ257-264に対する免疫応
答を示す。マウスの後ろ足に所定の混合物を注射した。４日後、水切りしたリン
パ節細胞をイクスビボにてＯＶＡ257-264、無関係のペプチドｍＴＲＰ２181-188 （マウスチロシナーゼ関連プロテイン２、ＶＹＤＦＦＶＷＬ）またはｐＲ６０で
刺激した。２４時間後にＩＦＮ−ｇ産生細胞の数をＥＬＩＳＰＯＴアッセイを用
いて決定した。結果をスポット数／１×１０6リンパ節細胞として３回の試行の
標準偏差とともに表してある。
【図４】 ＯＶＡ257-264、ポリＬ−アルギニン（ｐＲ６０）およびＩ含有
オリゴデオキシヌクレオチド（Ｉ−ＯＤＮ）、ＧｐＣまたはＣｐＧ１６６８を注
射後の全身性のＴＮＦ−ａ産生の誘発を示す。マウスの後ろ足に所定の混合物を
注射した。注射１時間後に尾静脈から採血し、血清を調製した。血清中のＴＮＦ
−ａおよびＩＬ−６の濃度をサイトカイン特異的なＥＬＩＳＡを用いて決定した
。
【図５】 ＴＲＰ−２、ポリＬ−アルギニン、ＣｐＧ１６６８またはデオキ
シイノシンを含むランダムな２０−ｍｅｒ配列を注射後の卵アルブミン由来ペプ
チドＯＶＡ257-264に対する免疫応答を示す。マウスの後ろ足に所定の混合物を
注射した。４日後、水切りしたリンパ節細胞をイクスビボにてＴＲＰ−２、無関
係のペプチドＯＶＡ257-264またはｐＲ６０で刺激した。２４時間後にＩＦＮ−
ｇ産生細胞の数をＥＬＩＳＰＯＴアッセイを用いて決定した。結果をスポット数
／１×１０6リンパ節細胞として３回の試行の標準偏差とともに表してある。
【図６】 メラノーマ由来ペプチドとＩ−ＯＤＮおよびポリＬ−アルギニン
（ｐＲ６０）とを組み合わせた注射を示す。
【図７】 メラノーマ由来ペプチドとＩ−ＯＤＮおよびｐＲ６０とを組み合
わせた注射が全身性のＴＮＦ−αおよびＩＬ−６の誘発を低減させることを示す
。
【図８】 メラノーマ由来ペプチドとランダムな１０−ｍｅｒ Ｉ−ＯＤＮ
およびｐＲ６０とを組み合わせた注射を示す。
【図９】 オリゴｄＩＣ26-merおよびｐＲと組み合わせた卵アルブミン（Ｏ
ＶＡ）の投与がＯＶＡ特異的なＩｇＧ抗体の産生を促進することを示す。マウス
の後ろ足に所定の混合物を皮下注射した。注射２４日および１１５日後に血清を
回収し、ＯＶＡ特異的なＩｇＧ２ａ抗体（Ａ）およびＩｇＧ１抗体（Ｂ）につい
てＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。結果を抗体力価として示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ， ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，Ｉ Ｎ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 カローラ・シュラック オーストリア、アー−1170ヴィーン、ツァ イラーガッセ23／31番 (72)発明者 アレーナ・エギエド オーストリア、アー−1130ヴィーン、ラフ ィテガッセ18−22／９番 Ｆターム(参考） 4C057 MM01 4C085 AA03 DD86 EE06 FF14 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA02 MA04 NA06 ZB09 【要約の続き】 ン−またはＮ−イソペンテニル−デオキシアデノシンよ りなる群から選ばれた２'デオキシヌクレオシド、Ｘは いずれもＯまたはＳ、ａおよびｂは０〜１００の整数で あり、ただしａ＋ｂは４〜１５０である、ＢおよびＥは 核酸分子の５'末端または３'末端の一般的な基）の構造 を有する免疫促進性のオリゴデオキシ核酸分子（ＯＤ Ｎ）、並びにそのようなＯＤＮを含む医薬組成物を記載 する。

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 （式中、ＸはいずれもＯまたはＳ、 ＮＭＰはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキシ
    イノシン−、デオキシシトシン−、デオキシウリジン−、デオキシチミジン−、
    ２−メチル−デオキシイノシン−、５−メチル−デオキシシトシン−、デオキシ
    プソイドウリジン−、デオキシリボースプリン−、２−アミノ−デオキシリボー
    スプリン−、６−Ｓ−デオキシグアニン−、２−ジメチル−デオキシグアノシン
    −またはＮ−イソペンテニル−デオキシアデノシン−モノホスフェートまたは−
    モノチオホスフェートよりなる群から選ばれた２'デオキシヌクレオシドモノホ
    スフェートまたはモノチオホスフェート、 ＮＵＣは、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキシイノシン
    −、デオキシシトシン−、デオキシウリジン−、デオキシチミジン−、２−メチ
    ル−デオキシイノシン−、５−メチル−デオキシシトシン−、デオキシプソイド
    ウリジン−、デオキシリボースプリン−、２−アミノ−デオキシリボースプリン
    −、６−Ｓ−デオキシグアニン−、２−ジメチル−デオキシグアノシン−または
    Ｎ−イソペンテニル−デオキシアデノシンよりなる群から選ばれた２'デオキシ
    ヌクレオシド、 ａおよびｂは０〜１００の整数であり、ただしａ＋ｂは４〜１５０である、 ＢおよびＥは核酸分子の５'末端または３'末端の一般的な基） の構造を有する免疫促進性のオリゴデオキシ核酸分子（ＯＤＮ）。
  2. 【請求項２】 ＮＭＰが、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、
    デオキシイノシン−、デオキシシトシン−、デオキシウリジン−、デオキシチミ
    ジン−、２−メチル−デオキシイノシン−、５−メチル−デオキシシトシン−モ
    ノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれる、請求項
    １に記載のＯＤＮ。
  3. 【請求項３】 ａ＋ｂが１０〜６０、好ましくは１５〜４０である、請求項
    １または２に記載のＯＤＮ。
  4. 【請求項４】 Ｘ1およびＸ2の少なくとも一方がＳであり、Ｘ3およびＸ4の
    少なくとも一方がＯであり、好ましくはＮＭＰがいずれもヌクレオシド−モノチ
    オホスフェートである、請求項１ないし３のいずれかに記載のＯＤＮ。
  5. 【請求項５】 下記配列： ｈｈｈ ｗｄｉ ｄｈｈ ｈ、 ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｎｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ ｗｎ、 ｎｈｈ ｗｄｉ ｄｉｎ ｈｈｈ ｈｄｉ ｎｄｉ ｎｈ、 ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｄｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ ｗｎまたは ｎｈｈ ｗｄｉ ｄｉｄ ｈｈｈ ｈｄｉ ｄｄｉ ｄｈ （式中、ｎはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキ
    シシトシン−またはデオキシチミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホス
    フェートよりなる群から選ばれた２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェート
    またはモノチオホスフェート、 ｈはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシシトシン−またはデオキシチ
    ミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれ
    た２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート、 ｉは、デオキシイノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、 ｗはいずれも、デオキシアデノシン−またはデオキシチミジン−モノホスフェ
    ートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれた２'−デオキシヌク
    レオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート、 ｄはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−またはデオキシ
    チミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ば
    れた２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート
    ） を含む、請求項１ないし４のいずれかに記載のＯＤＮ。
  6. 【請求項６】 ２'−デオキシイノシン−モノホスフェートまたは−モノチ
    オホスフェートに３'側にて隣接した２'−デオキシシトシン−モノホスフェート
    または−モノチオホスフェートを少なくとも一つ含む、請求項１ないし５のいず
    れかに記載のＯＤＮ。
  7. 【請求項７】 下記配列： ｇａｃｉｔｔ、 ｉａｃｉｔｔ、 ｇａｉｃｔｔ、 ｉａｉｃｔｔ （式中、ａはデオキシアデノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェ
    ート、 ｇはデオキシグアノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、 ｉはデオキシイノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、 ｃはデオキシシトシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、 ｔはデオキシチミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート） を含む、請求項１ないし６のいずれかに記載のＯＤＮ。
  8. 【請求項８】 下記配列： ｗｄｉ、 ｗｄｉｄ、 ｗｄｉｄｉｎまたは ｗｄｉｄｉｄ （式中、ｗ、ｄ、ｉおよびｎは前記と同じ） を含む、請求項１ないし７のいずれかに記載のＯＤＮ。
  9. 【請求項９】 ＢおよびＥが、−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＯＨ、−ＣＯＣＨ3、−
    ＯＨ、−ＣＨＯ、−ＰＯ4、−ＰＳＯ3、−ＰＳ2Ｏ2、−ＰＳ3Ｏ、−ＰＳ4、−Ｓ
    Ｏ3、−ＰＯ4−(ＣＨ2)1-6−ＮＨ2または−ＰＯ4−(ＣＨ2)1-6−ＮＨ−標識より
    なる群から独立に選ばれる、請求項１ないし８のいずれかに記載のＯＤＮ。
  10. 【請求項１０】 医薬、とりわけ免疫促進剤としての請求項１ないし９のい
    ずれかに記載のＯＤＮの使用。
  11. 【請求項１１】 請求項１ないし９のいずれかに記載のＯＤＮを含む医薬組
    成物。
  12. 【請求項１２】 請求項１ないし９のいずれかに記載のＯＤＮおよび抗原を
    含む医薬組成物。
  13. 【請求項１３】 さらにポリカチオン性ポリマー、好ましくはポリカチオン
    性ペプチド、とりわけポリアルギニン、ポリリシンまたは抗菌性ペプチド、とり
    わけカテリシジン由来の抗菌性ペプチド、または成長ホルモン、とりわけヒト成
    長ホルモンを含む、請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
  14. 【請求項１４】 さらに活性成分、とりわけサイトカイン、抗炎症性物質、
    抗菌性物質またはそれらの組み合わせを含む、請求項１１ないし１３のいずれか
    に記載の医薬組成物。
  15. 【請求項１５】 さらに補助物質、とりわけ薬理学的に許容しうる担体、緩
    衝液物質、安定化剤またはそれらの組み合わせを含む、請求項１１ないし１４の
    いずれかに記載の医薬組成物。
  16. 【請求項１６】 請求項１ないし９のいずれかに記載の１またはそれ以上の
    ＯＤＮを１ｎｇ〜１ｇ、好ましくは１００ｎｇ〜１０ｍｇ、とりわけ１０ｍｇ〜
    １ｍｇ含む、請求項１１ないし１５のいずれかに記載の医薬組成物。
  17. 【請求項１７】 ワクチンを調製するための請求項１ないし９のいずれかに
    記載のＯＤＮの使用。
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