CZ304195B6 - Imunostimulační farmaceutický přípravek - Google Patents
Imunostimulační farmaceutický přípravek Download PDFInfo
- Publication number
- CZ304195B6 CZ304195B6 CZ2002-4168A CZ20024168A CZ304195B6 CZ 304195 B6 CZ304195 B6 CZ 304195B6 CZ 20024168 A CZ20024168 A CZ 20024168A CZ 304195 B6 CZ304195 B6 CZ 304195B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- monothiophosphate
- monophosphate
- deoxyadenosine
- deoxyinosine
- cells
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 21
- 150000004712 monophosphates Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical compound OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- RPFPNGBGDKGFRI-XLPZGREQSA-N 9-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-2-methyl-3h-purin-6-one Chemical compound C12=NC(C)=NC(O)=C2N=CN1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 RPFPNGBGDKGFRI-XLPZGREQSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229910052717 sulfur Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- COVHWGAKPGOZBI-QJPTWQEYSA-N [(2r,3s,5r)-3-hydroxy-5-[6-(3-methylbut-3-enylamino)purin-9-yl]oxolan-2-yl]methyl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=NC=2C(NCCC(=C)C)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 COVHWGAKPGOZBI-QJPTWQEYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 56
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 49
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 49
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 49
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 claims description 27
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 22
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 21
- VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N desoxyinosine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 14
- GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N dTMP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 11
- PHNGFPPXDJJADG-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine-5'-monophosphate Chemical compound O1[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 PHNGFPPXDJJADG-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 10
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 claims description 9
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- KHWCHTKSEGGWEX-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyadenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 KHWCHTKSEGGWEX-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 7
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 claims description 7
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 claims description 6
- LTFMZDNNPPEQNG-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 LTFMZDNNPPEQNG-KVQBGUIXSA-N 0.000 claims description 6
- WKKCYLSCLQVWFD-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydropyrimidin-4-amine Chemical compound N=C1NCNC=C1 WKKCYLSCLQVWFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 108060001132 cathelicidin Proteins 0.000 claims description 5
- 102000014509 cathelicidin Human genes 0.000 claims description 5
- POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N cathelicidin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C1=CC=CC=C1 POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N 0.000 claims description 5
- -1 nucleoside monothiophosphate Chemical class 0.000 claims description 5
- 229920002851 polycationic polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 claims description 5
- MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 2'-deoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 0.000 claims description 4
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims description 4
- MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N desoxyuridine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 4
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 claims description 4
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 4
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 3
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims description 3
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- ASOJEESZSWWNQK-RRKCRQDMSA-N 5-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O ASOJEESZSWWNQK-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 2
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 2
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 claims description 2
- RVUPEZHWLRDMDM-FIXISWKDSA-N (2r,3s,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)-5-(3-methylbut-3-enyl)oxolan-3-ol Chemical compound C1=NC2=C(N)N=CN=C2N1[C@@]1(CCC(=C)C)C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 RVUPEZHWLRDMDM-FIXISWKDSA-N 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- FERYXNKLCFJNMG-QJPTWQEYSA-N (2r,3s,5r)-2-(hydroxymethyl)-5-[6-(3-methylbut-3-enylamino)purin-9-yl]oxolan-3-ol Chemical compound C1=NC=2C(NCCC(=C)C)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 FERYXNKLCFJNMG-QJPTWQEYSA-N 0.000 abstract 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 abstract 1
- 239000011593 sulfur Chemical group 0.000 abstract 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 70
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 48
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 43
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 40
- 101500027983 Rattus norvegicus Octadecaneuropeptide Proteins 0.000 description 34
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 30
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 30
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 29
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 29
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 29
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 28
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 28
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 24
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical group [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-azaniumyl-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-carboxylatobutanoyl]amino]-6-azaniumy Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N 0.000 description 16
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 16
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 16
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000012705 nitroxide-mediated radical polymerization Methods 0.000 description 10
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 9
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 9
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 9
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010007004 cathelin Proteins 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 8
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 8
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 8
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 8
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 7
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 6
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 6
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 6
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 5
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 5
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 5
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 5
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 5
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical group C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 3
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 2
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 101000609762 Gallus gallus Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 101150106931 IFNG gene Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 101000608782 Mus musculus Tyrosinase Proteins 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical group O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000002483 superagonistic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDRISBUVHBMJEF-MROZADKFSA-N 5-deoxy-D-ribose Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O WDRISBUVHBMJEF-MROZADKFSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 1
- 102000014133 Antimicrobial Cationic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010050820 Antimicrobial Cationic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 241000228257 Aspergillus sp. Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 241001647372 Chlamydia pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000946053 Homo sapiens Lysosomal-associated transmembrane protein 4A Proteins 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102100034728 Lysosomal-associated transmembrane protein 4A Human genes 0.000 description 1
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 108091081548 Palindromic sequence Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 102100029251 Phagocytosis-stimulating peptide Human genes 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 241001442539 Plasmodium sp. Species 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- 108010084754 Tuftsin Proteins 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000011529 cardiovascular cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N hydridophosphorus(.) (triplet) Chemical class [PH] BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L thiosulfate(2-) Chemical group [O-]S([S-])(=O)=O DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 229940035670 tuftsin Drugs 0.000 description 1
- IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N tuftsin Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/24—Heterocyclic radicals containing oxygen or sulfur as ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/18—Type of nucleic acid acting by a non-sequence specific mechanism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
Použití molekuly oligodeoxynukleové kyseliny vzorce I, kde X je vždy O nebo S; každý NMP je 2' deoxynukleosidmonofosfát nebo monothiofosfát vybraný z deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, deoxyinosin-, deoxycytosin-, deoxyuridin-, deoxythymidin-, 2-metyldeoxyinosin-, 5-metyldeoxycytosin-, deoxypseudouridin-, deoxyribosapurin-, 2-aminodeoxyribosapurin-, 6-S-deoxyguanin-, 2-dimetyldeoxyguanosin- nebo N-isopentenyldeoxyadenosinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu; NUC je 2' deoxynukleosid vybraný z deoxyadenosinu, deoxyguanosinu, deoxyinosinu, deoxycytosinu, deoxyuridinu, deoxythymidinu, 2-metyldeoxyinosinu, 5-metyldeoxycytosinu, deoxypseudouridinu, deoxyribosapurinu, 2-aminodeoxyribosapurinu, 6-S-deoxyguaninu, 2-dimetyldeoxyguanosinu nebo N-isopentenyldeoxyadeosinu; a a b jsou čísla od 0 do 100, kde a + b je 4 až 150, B a E jsou běžné skupiny pro 5' nebo 3' konce molekul nukleové kyseliny; pro výrobu imunostimulačního farmaceutického přípravku.
Description
linunostímulační farmaceutický přípravek
Oblast techniky
Vynález se týká imunostimulačních farmaceutických přípravků na bázi molekul oligodeoxynukleové kyseliny (ODN).
Dosavadní stav techniky
Vakcíny mohou zachránit více životů (a zdrojů) než jakákoli jiná lékařská intervence (Nossal, 1998). Díky celosvětovým očkovacím programům se drasticky snížila incidence mnoha smrtelných onemocnění. Ačkoli toto platí pro celou řadu onemocnění, například tuberkulózu, záškrt, černý kašel, spalničky a tetanus, pro mnoho infekčních onemocnění zahrnujících většinu virových infekcí, jako je například AIDS, neexistují účinné vakcíny. Neexistují účinné vakcíny pro další onemocnění, infekční nebo neinfekční, vyžadující si každým rokem milióny životů miliónů pacientů, které zahrnují malárii a nádorová onemocnění. Navíc rychle se vyvíjející baktérie a mikroorganismy rezistentní na antibiotika volají po alternativních léčebných postupech, kde vakcíny jsou logickou volbou. Velká potřeba vakcín je konečně také ilustrována faktem, že infekční onemocnění, spíše než kardiovaskulární choroby nebo nádorová onemocnění či poranění, zůstávají největší příčinou úmrtí a neschopnosti na světě (Bloom a Widdus, 1998).
Z imunologického pohledu je dnes na poli vakcín největším problémem fakt, že tradiční vakcíny (a/nebo imunomodulační sloučeniny obsažené v těchto přípravcích jsou navrženy, aby indukovaly vysoké hladiny protilátek (Harrow a Lané (1988). Avšak protilátky sami o sobě nejsou účinné v prevenci velkého množství onemocnění zahrnujících většinu chorob způsobených viry, intracelulárními baktériemi, určitými parazity a nádory. Příklady takových onemocnění jsou, ale nejsou omezeny na výše uvedený virus HIV nebo Plasmodium spec. v případě malárie. U četných experimentálních systémů bylo prokázáno, že v těchto případech je zodpovědná buněčná část imunitního systému, zahrnující T buňky, spíše než část protilátková. Proto jsou potřeba nové inovační technologie, aby se překonala omezení konvenčních vakcín. Střed pozornosti musí být položen na technologiích, které spolehlivě indukují buněčný imunitní systém, včetně antigen specifických T buněk, které rozpoznávají molekuly na buňkách infikovaných patogeny. Vakcíny jsou ideálně navrhovány tak, aby indukovaly T buňky rozpoznávající nemocné a/nebo infikované buňky od buněk normálních a současně protilátky sekretované B buňkami rozpoznávajícími patogeny v extracelulárních kompartmentech.
Některé zavedené vakcíny obsahují živé atenuované organismy, kde existuje riziko zvratu k virulentnímu divokému kmeni. Toto může mít život ohrožující následky zejména u imunosuprimovaných hostitelů. Vakcíny jsou alternativně podávány jako kombinace antigenů odvozených od patogenů spolu se sloučeninami, které indukují nebo zvyšují imunitní odpovědi proti těmto antigenům (tyto sloučeniny jsou běžně nazývány adjuvantní látky), protože tyto podjednotkové vakcíny nejsou sami o sobě obecně účinné.
Zatímco není pochyb, že výše uvedené vakcíny jsou cennými lékařskými léčebnými prostředky, je nevýhodou, že vlivem jejich komplexity mohou být vyvolány závažné vedlejší účinky, například kantigenům, které jsou obsaženy ve vakcíně vykazující zkříženou reaktivitu s molekulami exprimovanými buňkami očkovaných jedinců. Navíc je obtížné splnit existující požadavky regulačních autorit, například Světové zdravotnické organizace (WHO), amerického Food and Drug Administration (FDA) a jejich evropských protějšků, které se týkají přesné specifikace složení vakcíny a mechanismů indukce imunity.
Buňky prezentující antigen patří k vrozenému imunitnímu systému, který se vyvinul jako první obranná linie hostitele, a který omezuje infekci časně po expozici mikroorganismům (Hofmann et
- 1 CZ 304195 B6 al., 1999). Buňky vrozeného imunitního systému rozpoznávají vzory nebo relativně nespecifické struktury exprimované na jejich cílech, spíše než sofistikovanější, specifické struktury, které jsou rozpoznávány adaptivním imunitním systémem (Hoffman et al., 1999). Příklady buněk vrozeného imunitního systému jsou makrofágy a dendritické buňky, ale také granulocyty (například neutrofily), přirozené zabíječské buňky, a další buňky. Oproti tomu buňky adaptivního imunitního systému rozpoznávají specifické antigenní struktur)' zahrnující peptidy v případě T buněk, a peptidy stejně tak jako trojrozměrné struktury v případě B buněk. Adaptivní imunitní sytém a zlepšuje se po opakované expozici danému patogenu/antigenu. Fylogeneticky je vrozený imunitní systém mnohem starší a může být nalezen už u velmi primitivních organismů. Nicméně vrozený imunitní systém je kritický během iniciální fáze antigenní expozice, protože navíc k tomu, že buňky vrozeného imunitního systému (buňky APC) zadržují patogeny, také vybavují buňky adaptivního imunitního systému informacemi a tedy spouštějí specifické imunitní odpovědi vedoucí ke zbavení se vetřelců. Celkově řečeno hrají buňky vrozeného imunitního systému a obzvláště APC buňky kritickou úlohu během indukční fáze imunitních odpovědí prostřednictvím
a) zadržením původců infekcí pomocí rozpoznávacího systému primitivních vzorů, a
b) vybavením buněk adaptivního imunitního systému informacemi, což vede ke specifickým imunitním odpovědím a paměti mající za následek zbavení se vznikajících patogenů nebo dalších cílů (Roitt et al., 1998). Tyto mechanismy mohou být také důležité ke zbavení se nebo k zadržení nádorových buněk.
Jak je zmíněno výše, rozpoznávají buňky vrozeného imunitního systému vzory exprimované na jejich příslušných cílech. Příklady jsou lipopolysacharidy (LPS) v příkladě Gram negativních baktérií, mykobakteriální glykolipidy, lipoteichové kyseliny Gram pozitivních baktérií, manany kvasinek a dvouvláknové RNA virů (Hoffmann et al., 1999). Navíc mohou rozpoznávat struktury, jako jsou například narušené glykosylace proteinů na nádorových buňkách.
Nedávné nálezy popisují DNA prvků nebo nižších eukaryot jako další struktury rozpoznávané vrozeným (ale možná také adaptivním) imunitním systémem savců (a pravděpodobně většinou, ne-li všemi obratlovci) (Krieg, 1966; Lipford et al., 1998).
Imunitní systém rozpoznává nižší organismy zahrnující baktérie pravděpodobně díky strukturálním a sekvenčním rozdílům mezi patogenem a hostitelskou DNA. Cílem jsou obzvláště krátké úseky DNA odvozené od non-obratlovců, nebo ve formě krátkých syntetických ODN obsahujících nemetylované cytosin-guanin dinukleotidy (CpG) v určitém kontextu bází (Krieg et al., 1995). Motivy CpG jsou nacházeny v očekávané frekvenci v bakteriální DNA, ale jsou mnohem méně časté v DNA obratlovců (LipLord et al., 1998; Pisetsky, 1998). Motivy CpG non-obratlovců (tj. bakteriální) nejsou navíc metylované, zatímco CpG sekvence obratlovců metylované jsou. Tyto rozdíly mezi bakteriální DNA a DNA obratlovců umožňují obratlovcům rozpoznávat DNA non-obratlovců jako nebezpečný signál.
Přirozené DNA obsahující CpG, ODN, stejně tak jako thiofosfátem substituované (záměna thiofosfátových reziduí za fosfát) ODN obsahující CpG motivy (CpG-ODN) nejsou pouze silnými aktivátory proliferace imunitních buněk a humorálních imunitních odpovědí (Krieg et al., 1995), ale také stimulují silné buněčné imunitní odpovědi (přehled v Lipford et al., 1998). DNA/ODN obsahující nemetylované CpG motivy mohou přímo aktivovat monocytové buňky (dendritické buňky, makrofágy) a B buňky. Přirozené zabíječské buňky nejsou pravděpodobně přímo aktivovány, ale odpovídají na IL—12 odvozený z monocytů (interleukin 12) se značným zvýšením jejich produkce IFN-γ (Chace et al., 1997). V důsledku toho podporuje indukce monocytů a NK buněk pomocí CpG DNA indukci odpovědí Th 1 typu a rozvoj cytotoxických T buněk.
Je známo, že ribonukleová kyselina založená na inosinu a cytosinu, jako je polyinosinová-polycytidylová kyselina (póly I.C), podporuje Thl-specifické imunitní odpovědi. Je známo, že stimuluje makrofágy k produkci cytokinů, jako jsou IL-Ία a IL—12 (Manetti et al., 1995), je známa
-2CZ 304195 B6 také jako účinný induktor interferonu prvního typu (Manetti et al., 1995) a účinný stimulátor NK buněk (Cavanaugh et al., 1996).
Tento účinek byl však přísně omezen na ribonukleovou kyselinu obsahující inosinová a cytidino5 vá rezidua (WO98/16 247).
Zkoumání výzkumníků předkládaného vynálezu ukázala, že ODN obsahující nemetylované CpG motivy, které ačkoli účinně stimulují imunitní systém, mají základní nevýhody, obzvláště s ohledem na specifitu (vysoké pozadí) a indukci vedlejších účinků, jako je například vysoká systémoío vá tvorba TNF-α. Vysoké systémové uvolňování TNF-α je známo, že způsobuje syndrom toxického šoku, který může způsobit smrt postižených pacientů.
Proto je cílem předkládaného vynálezu poskytnout vhodné nové farmaceutické přípravky na bázi
ODN, které nemají takové drastické vedlejší účinky jako ODN založené na CpG sekvencích. 15 Přídavným cílem je snížit vedlejší účinky farmaceutických preparátů obsahujících známé ODN a poskytnout bezpečné a účinné dobře tolerované farmaceutické preparáty s účinnými imunostimulačními vlastnostmi, které jsou vhodné pro vakcinaci živočichů, obzvláště savců, včetně člověka.
Podstata vynálezu
Prvním aspektem předmětu vynálezu v hlavním provedení i) je použití molekuly oligodeoxynukleové kyseliny, mající strukturu definovanou vzorcem I
(I), kde kterýkoliv ze substituentů X je O nebo S;
kterýkoliv ze zbytků NMP je 2' deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, deoxyinosin-, deoxycytosin-, deoxyuridin-, deoxythymidin-, 2-methyldeoxyinosin-, 5-methyldeoxycytosin-, deoxypseudouridin35 deoxyribosapurin-, 2-aminodeoxyribosapurin-, 6-S-deoxyguanin-, 2-dimethyleoxyguanosinnebo N-isopentenyldeoxyadenosinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu;
NUC je 2' deoxynukleosid vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosinu, deoxyguanosinu, deoxyinosinu, deoxycytosinu, deoxyuridinu, deoxythymidinu, 2-methyldeoxyinosinu, 5-methyl40 deoxycytosinu, deoxypseudouridinu, deoxyribosapurinu, 2-aminodeoxyribosapurinu, 6-S-deoxyguanínu, 2-dimethyldeoxyguanosinu nebo N-isopentenyldeoxyadenosinu; a a b jsou celá čísla od 0 do 100 s výhodou že součet a + bje číslo mezi 4 až 150,
-3 CZ 304195 B6
B a F jsou běžné skupiny pro 5' nebo 3' konce molekul nukleové kyseliny;
pro výrobu imunostimulačního farmaceutického přípravku.
Přednostní provedení tohoto aspektu předmětu vynálezu zahrnují zejména ii) použití podle provedení i), kde kterýkoliv ze zbytků NMP je vybrán ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, deoxyinosin-, deoxycytosin-, deoxyuridin-, deoxythymidin-, 2-methyldeoxyinosin-, 5-methyldeoxycytosin-, monofosfátu nebo -monothiofosfátu;
iii) použití podle provedení i) nebo ii), kde součet a + b je mezi 10 a 60, přednostně mezi 15 a 40;
iv) použití podle kteréhokoliv z provedení i) až iii), kde alespoň jeden z X| a X2 je S a alespoň jeden z X3 a X4 je O a přednostně kterýkoliv ze zbytků NMP je nukleosid monothiofosfát;
v) použití podle kteréhokoliv z provedení i) až iv), kde molekula oligodeoxynukleové kyseliny obsahuje sekvenci hhh wdi dhh h, nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn, nhh wdi din hhh hdi ndi nh, nhh hhh wdi dhh hhh hhh wn nebo nhh wdi did hhh hdi ddi dh, kde kterýkoliv ze symbolů n představuje 2' deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, deoxyinosin-, nebo deoxythymidinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu, kterýkoliv ze symbolů h představuje 2'-deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxycytosin-, nebo deoxythymidinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu, i je deoxyinosinmonofosfát nebo -monothiofosfát, kterýkoliv ze symbolů w představuje 2'-deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, nebo deoxythymidinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu, a kterýkoliv ze symbolů d představuje 2'-deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxyguanosin- nebo deoxythymidinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu;
vi) použití podle kteréhokoliv z provedení i) až v), kde molekula oligodeoxynukleové kyseliny obsahuje alespoň jeden 2'-deoxy-cytosinmonofosfát nebo -monothiofosfát 3'—přilehlý k 2' deoxyinosinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu, zejména deoxyinosindeoxycytosin 26-mer;
vii) použití podle kteréhokoliv z provedení i) až vi), kde molekula oligodeoxynukleové kyseliny obsahuje sekvenci gacitt, zejména tcc atg aci ttc ctg atg ct, iacitt, gaictt, iaictt,
-4CZ 304195 B6 kde a je deoxyadenosinmonofosfát nebo -monothiofosfát, g je deoxyguanosinmonofosfát nebo -monothiofosfát, i je deoxyinosinmonofosfát nebo -monothiofosfát, c je deoxycytosinmonofosfát nebo -monothiofosfát a t je deoxythymidinmonofosfát nebo -monothiofosfát;
viii) použití podle kteréhokoliv z provedení i) až vii), kde molekula oligodeoxynukleové kyseliny obsahuje sekvenci wdi, wdid, wdidin, nebo wdidid, kde w, d, i a n mají výše uvedený význam;
ix) použití podle kteréhokoliv z provedení i) až viii), kde B a E jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z -H, -CH3, -COH,
-COCHj, -OH, -CHO, -PO4, -PSO3, -PS2O2, -PS3O, -PS4, -SO3, -ΡΟ4(0Η2)16-ΗΝ2 nebo -PO4(CH2)i_6-NH-značka; a
x) použití podle kteréhokoliv z provedení i) až ix), kde imunostimulačním farmaceutickým přípravkem je vakcína;
Dalším aspektem předmětu vynálezu (provedení xi)) je farmaceutický přípravek, který obsahuje molekulu oligonukleové kyseliny podle kteréhokoliv z provedení i) až ix), popřípadě v kombinaci s antigenem (provedení vynálezu xi)).
Ještě dalším aspektem předmětu vynálezu (provedení xiii)) je farmaceutický přípravek podle provedení xi) nebo xii), který dále obsahuje polykationtový polymer, přednostně polykationtový peptid, obzvláště polyarginin, polylysin nebo antimikrobiální peptid, obzvláště antimikrobiální peptid odvozený od kathelicidinu, syntetický peptid obsahující 2 KLK-motivy oddělené linkerem tří až sedmi hydrofobních aminokyselin nebo růstový hormon, obzvláště lidský růstový hormon.
Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z provedení xi) až xiii) popřípadě přídavně obsahuje další účinné složky, obzvláště cytokiny, protizánětlivé látky, antimikrobiální látky nebo jejich kombinace (provedení vynálezu xiv)).
Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z provedení xi) až xiv) popřípadě přídavně obsahuje pomocné látky, obzvláště farmaceuticky přijatelný nosič, pufrační látky, stabilizátory nebo jejich kombinace (provedení vynálezu xv)).
Zvláště výhodný farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z provedení xi) až xv) obsahuje 1 ng až 1 g, přednostně 100 ng až 10 mg, obzvláště 10 až 1 mg jedné nebo více molekul oligodeoxynukleové kyseliny podle kteréhokoliv z provedení i) až ix) (provedení vynálezu xvi).
V dalším popisuje je vynález příležitostně objasňován v širším kontextu než odpovídá rozsahu, který je skutečně předmětem tohoto vynálezu. Výslovně se proto uvádí, že do rozsahu vynálezu spadají jen aspekty explicitně uvedené výše, a jen ty jsou také předmětem připojených patentových nároků. Následující popis májen ilustrativní význam.
Následuje podrobnější popis a vysvětlení vynálezu.
V souvislosti s vynálezem se překvapivě ukázalo, že ODN obsahující deoxyinosinová rezidua (iODN) vykazují imunostimulační účinek srovnatelný, nebo v mnoha případech dokonce lepší, než ODN obsahující motivy CpG. Navíc ODN podle předkládaného vynálezu produkují specifičtější imunitní odpovědi k danému antigenu nebo antigennímu fragmentu než CpG ODN. Navíc ODN podle předkládaného vynálezu snížily indukci nežádoucích vedlejších reakcí, obzvláště indukci systémového TNF-α nebo IL-6.
-5 CZ 304195 B6
Zatímco určité imunostimulační účinky byly popsány pro RNA molekuly obsahující RNA molekuly, jako jsou například poly-IC nebo molekuly zmíněné v WO 98/16 247, ukázalo se překvapivě, že molekuly deoxynukleové kyseliny obsahující rezidua deoxyinosinu mohou být dobrými imunostimulačními ODN.
Navíc I-ODN podle předkládaného vynálezu jsou oproti ODN založených na specifických motivech CpG nezávisle na specifickém motivu nebo palindromické sekvenci popsané pro CpG oligonukleotidy (viz např. EP 0 468 520 A2, WO 96/02 555, WO98/18 810, WO98/37 919, WO 98/40 100, WO 98/52 581, WO99/51 259 a WO99/56 755, všechny začleněny zde jako reference). Proto jedna skupina I-ODN podle předkládaného vynálezu může přednostně obsahovat Cl motiv (a proto jsou preferované formy předkládaných ODN popsané v těchto začleněných referencích, kde jedno nebo více guanosinových reziduí jsou nahrazeny deoxyinosinovými reziduy). Tento motiv není nezbytný pro svou hlavní imunostimulační vlastnost, protože I-ODN s inosinem neumístěným v Cl nebo IC kontextu vykazují imunostimulační vlastnosti také.
I-ODN podle předkládaného vynálezu je proto molekula DNA obsahující reziduum deoxyinosinu, která je přednostně poskytnuta v jednovláknové formě.
I-ODN podle předkládaného vynálezu může být izolována prostřednictvím rekombinantních metod nebo může být chemicky syntetizována. V druhém případě může I-ODN podle předkládaného vynálezu obsahovat modifikované oligonukleotidy, které mohou být syntetizovány za použití standardních chemických transformací, jako jsou například methylfosfonáty nebo jiné modifikované oligonukleotidy založené na fosforu, jako jsou například fosfotriestery, fosfoainidáty a fosfordithioráty. Další modifikované oligonukleotidy bez fosforu mohou být také použity (Stirchak et al., březen 17 (1989), 6139-6141), avšak monofosfáty a monothiofosfáty jsou přednostní 2' deoxynukleosid monofosfátem pro použití v předkládaném vynálezu.
NMP z I-ODN podle předkládaného vynálezu jsou přednostně vybrány ze skupiny obsahující deoxyadenosin-, deoxycytosin-, deoxyuridin-, deoxythymidin-, 2-methy 1-deoxyinosin-, 5methyl-deoxycytosin-, monofosfát nebo -monothiofosfát (jako obvykle je fosfátová nebo thiofosfátová skupina 5' deoxyribózy). Zatímco pro ODN založených na CpG motivech je základem, že tento motiv je nemethylovaný, toto není překvapivě případ ODN podle předkládaného vynálezu, kde například 2-methyl-deoxyinosinová nebo 5-methyl-deoxycytosinová rezidua nemají obecně žádný negativní účinek na imunostimulační vlastnosti ODN podle předkládaného vynálezu. Alternativně mohou být přítomny na 2- pozici ribózové skupiny místo 2-deoxyforem NMP také další obzvláště inertní skupiny, jako jsou například -F, -NH2, -CH3, obzvláště -CH3. -OH a SH skupiny jsou ovšem vyloučeny pro I-ODN podle předkládaného vynálezu z umístění v pozici 2'- ribózy, obzvláště ribózového rezidua pro inosin NMP.
Délka ODN podle předkládaného vynálezu je v rozmezí standardních ODN použitých podle dosavadních znalostí. Proto molekuly s celkovou délkou pod 4 a nad 150 bází vykazují postupně se snižující imunostimulační potenciál. Přednostní ODN obsahují mezi 10 a 60 bázemi, obzvláště mezi 15 a 40 bázemi (nukleotidy), z čehož vyplývá a + b ve vzorci I je v těchto přednostních formách mezi 10 a 60 bázemi, přednostně mezi 15 a 40 bázemi.
Zatímco molekuly ribonukleové kyseliny obsahující inosin a cytidin, kteréjsou v předchozích pracích popsané jako imunostimulační molekuly, jsou veliké a relativně nedefinované polynukleové kyseliny s molekulovými váhami daleko nad 200000 (komerčně dostupná polyinosinovápolycytidylová kyselina od společnosti Sigma Chemicals, má molekulovou váhu v rozmezí 220000 až 460000 (alespoň 500-1000 C+l reziduí)). Molekuly podle předkládaného vynálezu jsou molekuly DNA, které jsou mnohem kratší s dobře definovanou délkou a složením, a jsou v produktech vysoce reprodukovatelné.
Dále je preferováno, že deoxyinosin obsahující NMP z I-ODN podle vzorce I je monothiofosfát s jedním nebo čtyřmi atomy síry, a také že další NMP, obzvláště všechny další NMP, jsou pří-6CZ 304195 B6 tomnyjako nukleosid monothiofosfáty, protože takové ODN vykazují vyšší rezistenci k nukleázám (je jasné pro předkládaný vynález, že termín „mono“ ve výrazu „monothiofosfáty“ se týká fosfátu, tj., že jedna fosfátová skupina (jeden atom fosforu) je přítomna v každém NMP). Přednostně alespoň jeden atom zX a X2 je S a alespoň jeden atom z X3 a X4 je O v NMP podle předkládaného vynálezu. X3 a X4 jsou přednostně O. X3 může být (v důsledku syntézy NMP) odvozeno například z fosfátové skupiny nebo z 3- skupiny NMP ribózy).
ODN podle předkládaného vynálezu přednostně obsahují sekvenci hhh wdi dhh h, nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn, nhh wdi din hhh hdi ndi nh, nhh hhh wdi dhh hhh hhh wn nebo nhh wdi did hhh hdi ddi dh, kde jakékoli n je 2' deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, deoxyinosin-, deoxycytosin-, nebo deoxythymidin-monofosfát nebo -monothiofosfát, jakékoli h je 2' je deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny obsahující deoxyadenosin-, deoxycytosin-, nebo deoxythymidin-monofosfát nebo -monothiofosfát, ije deoxyinosin-monofosfát nebo -monothiofosfát, jakékoli w je 2' deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny obsahující deoxyadenosin-, nebo deoxythymidin-monofosfát nebo -monothiofosfát, a jakékoli d je 2'-deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny obsahující deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, nebo deoxythymidin-monofosfát nebo -monothiofosfát.
Jak je zde uvedeno výše, není pro I-ODN podle předkládaného vynálezu nezbytný specifický motiv (jako je například CpG nebo palindrom). ODN obsahující Cl motiv jsou však preferovány, takže v přednostní formě obsahuje ODN podle vzorce I alespoň jeden 2' deoxyinosin-monofosfát nebo -monothiofosfát, 3'—přilehlý k 2' deoxyinosin-monofosfátu nebo -monothiofosfátu za vzniku 5'-CI 3'-motivu.
Přednostní ODN podle předkládaného vynálezu obsahují jednu nebo více ze sekvencí gaictt, iacitt, gaictt, iaictt, kde a je deoxyadenosin-monofosfát nebo -mon othiofosfát, g je deoxyguanosin-monofosfát nebo -monothiofosfát, a je deoxyinosin-monofosfát nebo -monothiofosfát, c je deoxycytosin-monofosfát nebo -monothiofosfát a t je deoxythymidin-monofosfát nebo -monothiofosfát.
-7 CZ 304195 B6
I-ODN podle předkládaného vynálezu jsou obzvláště vhodné pro aplikaci na farmaceutickém poli, například k aplikaci jako lék zvířeti nebo člověku. Jsou specificky přizpůsobeny, aby účinkovaly jako imunostimulační látka, obzvláště ve vakcínovém přípravku nebo spolu s ním.
Proto se předkládaný vynález také týká farmaceutického přípravku obsahujícího ODN podle předkládaného vynálezu.
Protože přednostní farmaceutický přípravek podle předkládaného vynálezu je vakcínou, měl by tento přípravek obsahovat antigen místo ODN podle předkládaného vynálezu. Potenciál tohoto antigenu zvýšit ochranu/imunitní odpověď očkovaného jedince je silně zvýšen jeho kombinací s ODN podle předkládaného vynálezu, obzvláště vlivem jejich imunostimulační aktivity.
Vakcína může obsahovat celou řadu různých antigenů. Příklady antigenů jsou usmrcené celé organismy, jako jsou například inaktivované viry nebo baktérie, plísně, prvoci nebo dokonce nádorové buňky. Antigeny se mohou také skládat ze subfrakcí těchto organismů/tkání z proteinů, nebo v jejich jednodušší formě z peptidů. Antigeny mohou být také rozpoznávány imunitním systémem ve formě glykosylovaných proteinů nebo peptidů a mohou také být nebo obsahovat polysacharidy nebo lipidy. Mohou být použity krátké peptidy, protože například cytotoxické T buňky (CTL) rozpoznávají antigeny ve formě krátkých obvykle 8-11 aminokyselin dlouhých peptidů ve spojení s hlavním histokompatibilním komplexem (MHC) (Rammensee et al., Immunogenetics 41, (1995), 178-228). B buňky rozpoznávající další peptidy od zhruba 15 aminokyselin (Harrow et al., Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)). Na rozdíl od epitopů T buněk mohou být trojrozměrné struktury antigenů B buněk také důležité pro rozpoznávání protilátkami. K získání trvalých antigen specifických imunitních odpovědí jsou užitečné ke spuštění imunitních kaskád, které zahrnují všechny nezbytné buňky imunitního systému, adjuvantní látky. Adjuvantní látky primárně účinkují, ale nejsou omezeny na jejich způsob účinku, na takzvané antigen prezentující buňky (APC). Tyto buňky se obvykle první setkávají s antigenem(-eny) s následující prezentací zpracovaného nebo nemodifikovaného antigenu imunitnímu efektoru. Roli mohou hrát také přechodné buněčné typy. Pouze efektorové buňky s příslušnou specifickou jsou aktivovány v produktivní imunitní odpovědi. Adjuvantní látka může také lokálně zadržovat antigeny a spolu injekčně podané další faktory. Navíc může adjuvantní látka účinkovat jako chemoatraktant pro další imunitní buňky, nebo může účinkovat lokálně a/nebo systematicky jako stimulující látka pro imunitní systém.
Podle přednostní formy jsou jako antigeny použity epitopy T buněk. Alternativně může být preferována kombinace epitopů T buněk a B buněk.
Antigeny, které mají být použity v předkládaných přípravcích nejsou kritické. Podle předkládaného vynálezu je možné samozřejmě použít také směsi různých antigenů. Proteiny nebo peptidy odvozené z virového nebo bakteriálního patogenu, nebo z plísní či parazitů jsou přednostně použity jako takové antigeny (zahrnujíce derivatizované antigeny nebo glykosylované nebo lipidové antigeny, polysacharidy nebo lipidy). Dalším přednostním zdrojem antigenů jsou nádorové antigeny. Přednostní patogeny jsou vybrány ze skupiny obsahující virus lidské imunodeficience (HIV), viry hepatitidy A a B, virus hepatitidy C (HCV), virous Rousova sarkomu (RSV, virus Ebsteina Barrové (EBV), virus chřipky, rotavirus, Stafylokokus aureus, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Mycobktérium tuberculosis, Streptokokus pneumoniae, Bacillus antracis, Vibrio cholearae, Plasmodium sp. (Pl. falciparum, Pl. vivax, etc.), Aspergillus sp. nebo Candida alsbicans. Antigeny mohou být také molekuly exprimované nádorovými buňkami (nádorové antigeny). Derivační proces může zahrnovat purifikaci specifického proteinu z patogenních/nádorových buněk, inaktivaci patogenu, stejně tak jako proteolytickou nebo chemickou derivatizací nebo stabilizaci takového proteinu. Stejným způsobem mohou být také použity ve farmaceutickém přípravku podle předkládaného vynálezu nádorové antigeny (nádorové vakcíny) nebo autoimunní antigeny. S takovými přípravky může být provedena nádorová vakcinace nebo léčba autoimunních onemocnění.
-8CZ 304195 B6
V případě peptidových antigenu je v předkládaném vynálezu zahrnuto použití peptidových minitopů/agonistů/superagonistů/ antagonistů nebo peptidů změněných v určitých pozicích bez ovlivnění imunologických vlastností nonpetidových mimitopů/ agonistů/ superagonistů/ antagonistů (přehledem v Sparbier a Walden, 1999). Peptidové antigeny mohou také obsahovat prodloužení buďto na karboxy nebo na amino konci peptidového antigenu usnadňujíce interakci s polykationickou sloučeninou(ami), nebo imunostimulační sloučeninou(ami). Pro léčbu autoimunních onemocnění mohou být použití antagonisté na bázi peptidů.
Antigeny mohou být také derivatizovány, aby obsahovaly molekuly zvyšující prezentaci antigenu a zacílení antigenů k antigen prezentujících buňkám.
V jedné formě vynálezu slouží farmaceutický přípravek k získání tolerance k proteinům nebo proteinovým fragmentům a peptidům, které hrají roli v autoimunních onemocněních. Antigeny použité v těchto formách slouží k umožnění tolerance imunitního systému nebo ke snížení imunitních odpovědí proti epitopům hrajících roli v autoimunních procesech.
Přednostně farmaceutický přípravek podle předkládaného vynálezu, obzvláště ve formě vakcíny, dále obsahuje polykationický polymer, přednostně polykationický peptid, obzvláště polyarginin, polylysin nebo antimikrobiální peptid.
Polykationická sloučenina(y), která má být použita podle předkládaného vynálezu, může být jakákoli polykationická sloučenina, která vykazuje charakteristický účinek podle WO 97/30 721. Přednostní polykationické sloučeniny jsou vybrané z bazických polypeptidů, organických polykationtů, bazických polyaminokyselin nebo jejich směsí. Tyto polyaminokyseliny by měly mít délku řetězce alespoň 4 aminokyselinová rezidua (viz: Tuftsin, jak je popsáno v Goldman et al. (1983)). Obzvláště přednostní jsou látky obsahující peptidické vazby, jako jsou polylysin, polyarginin a polypeptidy obsahující více než 20 %, obzvláště více než 50 % bazických aminokyselin v rozmezí více než 8, obzvláště více než 20 aminokyselinových reziduí nebo jejich směsí. Další přednostní polykationty ajejich farmaceutické přípravky jsou popsané ve WO 97/30 721 (například polyethyleniminy) a WO 99/38 528. Přednostně obsahují tyto polypeptidy mezi 20 a 500 aminokyselinovými rezidui, obzvláště mezi 30 a 200 rezidui.
Tyto polykationické sloučeniny mohou být produkovány chemicky nebo rekombinantně, nebo mohou být odvozeny z přirozených zdrojů.
Kationické (poly)peptidy mohou být také polykationické antibakteriální mikrobiální peptidy s vlastnostmi, které jsou přehledně shrnuty v (Ganz a Lehrer, 1999; Hancock, 1999). Tyto (poly)peptidy mohou být prokaryotického nebo rostlinného původu, nebo mohou být produkovány chemicky nebo rekombinantně (Andreu a Rivas, 1998; Ganz a Lehrer, 1999; Simamco et al., 1998). Peptidy mohou také patřit do třídy defensinů (Ganz, 1999; Ganz a Lehrer, 1999). Sekvence takových peptidů mohou být například nalezeny v Antimikrobial Sequence Database na následující internetové adrese:
http://www.bbcm.univ.trieest.it/~tossi/pagl.html
Takové obranné peptidy hostitele, neboli defensiny, jsou také přednostní formou polykationického polymeru podle předkládaného vynálezu. Obecně je jako polykationický polymer použita sloučenina umožňující jako koncový produkt aktivaci (nebo sníženou regulaci) adaptivního imunitního sytému přednostně zprostředkovanou pomocí APC (zahrnujících dendritické buňky).
Obzvláště preferované pro použití jako polykationická látka v předkládaném vynálezu jsou od cathelicidinu odvozené antimikrobiální peptidy nebo jeho deriváty (A 1416/2000, začleněno zde jako reference), obzvláště antimikrobiální peptidy odvozené od savčího cathelicidinu, přednostně od lidského, hovězího nebo myšího cathelicidinu, nebo neuroaktivní sloučeniny, jako je například (lidský) růstový hormon.
-9CZ 304195 B6
Polykationické sloučeniny odvozené z přirozených zdrojů zahrnují HIV-REV nebo HIV-TAT (odvozené kationické peptidy, antennapedía peptidy, chitosan nebo jiné deriváty chitinu), nebo jiné peptidy odvozené z těchto peptidů nebo proteinů biochemickou nebo rekombinantní produkcí. Další přednostní polykationické sloučeniny jsou cathelin nebo příbuzné či odvozené látky od cathelinu. Například myší cathelin je peptid, kteiý má aminokyselinovou sekvenci NH2RLAGLLRKGGEKIGEKLKKIGOKIKNFFQKLVPQPE-COOH. Příbuzné látky odvozené od cathelinu obsahují celou, nebo části sekvence cathelinu s alespoň 15 až 20 aminokyselinovými reziduii. Derivace mohou zahrnovat substituci nebo modifikaci přirozených aminokyselin, které nejsou mezi 20 standardními aminokyselinami. Navíc mohou být do takových cathelinových molekul vložena další kationická rezidua. Je preferováno, aby tyto cathelinové molekuly byly zkombinovány s antigenem a imunogenním ODN podle předkládaného vynálezu. Překvapivě se však ukázalo, že tyto cathelinové molekuly jsou účinné také jako adjuvantní látky pro antigen bez přidání dalších adjuvantních látek. Je proto možné použít takové cathelinové molekuly jako účinné adjuvantní látky v očkovacích přípravcích s nebo bez dalších imunoaktivačních látek.
Další přednostní polykationická látka k použití podle předkládaného vynálezu je syntetický peptid obsahující alespoň 2 KLK motivy oddělené spojovací částí ze 3 až 7 hydrofobních aminokyselin (A 1789/2000, začleněno zde jako reference).
Je velmi překvapivé, že imunostimulační účinek farmaceutického přípravku podle předkládaného vynálezu byl významně vyšší, než mohlo být očekáváno ze součtu účinků každé jednotlivé složky nebo dokonce součtu účinků ODN nebo polykationtu s antigenem.
B a E ve vzorci 1 jsou běžné skupiny pro 5' a/nebo 3' konce molekul nukleové kyseliny. Příklady takových skupin jsou snadno dostupné pro osoby znalé oboru (viz například „Oligonucleotides and Analogues - A Practical Approach“ (1991), ed. Eckstein, Oxford University Press). Pro IODN podle předkládaného vynálezu B a/nebo E jsou přednostně vybrány nezávisle z -H, -CH3, -COCH3, -OH, -CHO, fosfátové, thiofosfátové, sulfátové nebo thiosulfátové skupiny, nebo fosfoalkylové skupiny, obzvláště s délkou alkylu C|-C6 a/nebo s terminální aminoskupinou (aminoskupina může být například použita pro další označení I-ODN podle předkládaného vynálezu, např. -PO4(CH2)n-NH2 nebo -PO4-(CH2)n-NH-značka). Obzvláště preferované jako B jsou nukleosidy, obzvláště 2'deoxynukleotidy zmíněné výše (tj. bez fosfátové nebo thiofosfátové skupiny). Alternativně mohou tyto skupiny také obsahovat vazebné skupiny k jiným molekulám, obzvláště nosičské molekuly nebo značky. V takových formách ODN, kde ODN jsou navázány na pevné povrchy nebo částice nebo značky, jsou tyto povrchy, částice, značky, atd. také částí B a/nebo E skupin.
Samozřejmě jakákoli (sůl) forma nebo tautomerní formy molekul podle vzorce 1 jsou zahrnuty v tomto vzorci 1.
Farmaceutický přípravek podle předkládaného vynálezu může dále zahrnovat další aktivní složky (farmaceuticky aktivní látky, obzvláště látky, které jsou použitelné ve spojení s vakcínami. Přednostní formy takových dalších aktivních složek jsou cytokiny, protizánětlivé látky, antimikrobiální látky nebo jejich kombinace.
Farmaceutický přípravek podle předkládaného vynálezu může samozřejmě dále obsahovat pomocné látky, obzvláště farmaceuticky přijatelný nosič, pufrační látky, stabilizační látky nebo jejich kombinace.
Relativní množství složek v předkládaném farmaceutickém přípravku je vysoce závislé na nezbytnosti jednotlivého antigenu a na zvířeti/člověku, kterému by měl být přípravek aplikován.
Proto farmaceutický přípravek podle předkládaného vynálezu přednostně obsahuje jeden nebo více ODN podle předkládaného vynálezu, přednostně 1 pg až 10 g, přednostně 1 ng až 1 g, přednostněji 1000 ng až 10 mg, obzvláště 10 až 1 mg. Antigen, stejně tak jako polykationický poly-10 CZ 304195 Β6 mer mohou být aplikovány v podobných dávkách, preferováno je rozmezí 1 až 10 000 mg antigenu a 0,1 až 1000 mg polykationtu na očkování.
Předkládané přípravky mohou být aplikovány pacientovi, například kandidátovi očkování, v účinných množstvích, například týdně, dvakrát týdně, nebo v měsíčních intervalech. Pacienti, kteří mají být léčeni předkládanými přípravky mohou být také očkováni opakovaně nebo pouze jednou. Přednostní použití předkládaného vynálezu je aktivní imunizace, obzvláště člověka nebo zvířat bez ochrany proti specifickému antigenu.
Způsob aplikace předkládaného přípravku není kriticky důležitý, vhodná je například podkožní, intramuskulámí, intradermální nebo transdermální injekce, stejně tak jako perorální aplikace.
Je také možné aplikovat předkládaný přípravek odděleně, například injekcí imunostimulující látky odděleně od přípravku s antigenem/polykationtem. Předkládaný vynález proto také zahrnuje soupravu obsahující přípravek obsahující antigen a polykationický polymer jako jednu složku a přípravek obsahující imunostimulační a chemotaktickou látku jako druhou složku.
Složky mohou být aplikovány na stejné místo nebo ve stejný čas, avšak aplikace na různá místa nebo v různých časech po různá časová období jsou také možná. Je také možné měnit systémové a lokální aplikace přípravku nebo složek.
Přehled obrázků na výkresech
Detaily předkládaného vynálezu jsou popsány následujícími příklady provedení vynálezu a obrázky, ale vynález jimi není samozřejmě omezen.
Obr. 1 ukazuje imunitní odpověď proti peptidů O V A257_264 odvozenému od ovalbuminu po injekci OVA257_264, poly-L-argininu (pR 60) a deoxyinosin I obsahujících oligonukleotidů (I-ODN) nebo CpG 1668. Myším byly do zadních tlapek injekčně aplikovány směsi, jak je uvedeno. O čtyři dny později byly buňky drénujících lymfatických uzlin ex vivo stimulovány pomocí OVA257-264· Počet IFN-g produkujících buněk byl určen o 24 hodin později za použití stanovení ELISPOT. Výsledky jsou vyjádřeny jako počet skvm/106 buněk lymfatických uzlin.
Obr. 2 ukazuje indukci systémové tvorby TNF-a po injekci OVA257_264, poly-L-argininu (pr60) a deoxyinosin 1 obsahujících oligonukleotidů (I-ODN) nebo CpG 1668. Myším byly do zadních tlapek injekčně aplikovány směsi, jakje uvedeno. O jednu hodinu po injekci byla odebrána krev z ocasní žíly a z krve bylo připraveno sérum. Koncentrace TNF-a v séru byla určena stanovením ELISA.
Obr. 3 ukazuje imunitní odpověď proti peptidů OVA257-264 odvozenému od ovalbuminu po injekci OVA257-264, poly-L-argininu (pR 60) a deoxyinosin I obsahujících oligonukleotidů (I-ODN) nebo CpG 1668 nebo CpC. Myším byly do zadních tlapek injekčně aplikovány směsi, jak je uvedeno. O čtyři dny později byly buňky drénujících lymfatických uzlin ex vivo stimulovány pomocí OVA257_264 irelevantním peptidem mTRP2i8i-i88 (protein 2 příbuzný myší tyrosináze, VYDFFVWL) nebo pR 60. Počet IFN-g produkujících buněk byl určen o 24 hodin později za použití stanovení ELISPOT. Výsledky jsou vyjádřeny jako počet skvm/106 buněk lymfatických uzlin se standardní odchylkou tripletů.
Obr. 4 ukazuje indukci systémové tvorby TFN-a po injekci OVA257_264, poly-L-argininu (pR60) a deoxyinosin I obsahujících oligonukleotidů (I-ODN) CpC nebo CpG 1668. Myším byly do zadních tlapek injekčně aplikovány směsi, jakje uvedeno. O jednu hodinu po injekci byla odebrána krev z ocasní žíly a z krve bylo připraveno sérum. Koncentrace TNF-a a IL—6 v séru byla určena cytokin specifickými stanoveními ELISA.
- 11 CZ 304195 B6
Obr. 5 ukazuje imunitní odpověď proti peptidu OVA257-204 odvozenému od ovalbuminu po injekci TRP-2, poly-L-argininu, CpG 1668 nebo 20-mer sekvencí obsahujících deoxyinosin. Myším byly do zadních tlapek injekčně aplikovány směsi, jak je uvedeno. O čtyři dny později byly buňky drénujících lymfatických uzlin ex vivo stimulovány pomocí TRP-2, irelevantním peptidem OVA257-264 nebo pR60. Počet IFN-g produkujících buněk byl určen o 24 hodin později za použití stanovení EL1SPOT. Výsledky jsou vyjádřeny jako počet skvrn/106 buněk lymfatických uzlin se standardní odchylkou tripletů.
Obr. 6 ukazuje kombinovanou injekci I-ODN a poly-L-argininu (pR 60) spolu s peptidem odvozeným od melanomu.
Obr. 7 ukazuje, že kombinovaná injekce 1-ODN a (pR 60) spolu s peptidem odvozeným od melanomu snižuje indukci systémového TNF-α a IL-6.
Obr. 8 ukazuje kombinovanou injekci náhodného 10-mer I-ODN a (pR 60) spolu s peptidem odvozeným od melanomu.
Obr. 9 ukazuje, že kombinovaná aplikace ovalbuminu (OVA) s oligo-dlC2ó-mera pR zvyšuje produkci OVA specifických IgG protilátek. Myším byly do zadních tlapek injekčně aplikovány směsi, jak je uvedeno. 24. a 115. den po injekci byla odebrána séra, v kterých byly stanoveny ELISA stanovením OVA specifické IgG2a (A) a IgGl (B) protilátky. Výsledky jsou uvedeny jako titr protilátek.
Příklady provedení vynálezu
Ve všech experimentech byly použity thiofosfátem substituované ODN (s thiofosfátovými rezidui substituujícími fosfát, odtud nazývány „thiofosfátem substituované oligonukleotidy“), protože takové ODN vykazují vyšší nukleázovou rezistenci (Ballas et al., 1996; Krieg et al., 1995; Parronchi etal., 1999).
Příklad 1
Kombinovaná injekce různých I-ODN a poly-L-argininu (pR 60) synergický zvyšuje imunitní odpověď proti peptidu odvozenému od ovalbuminu Myši C57BI/6 (Harlan/Olac)
Peptid Peptid OVA257-264 (SIINFEKL), MHC 1. třídy (H-2Kb) omezený epitop kuřecího ovalbuminu (Rotzschke et al., 1991), byl syntetizován za použití standardní chemické syntézy F-moc na pevné fázi, purifikován pomocí HPLC a analyzován pomocí hmotové spektroskopie kvůli čistotě. Dávka: 300 mg/myš
Poly-L-arginin60 (pR60) Poly-L-arginin s průměrným stupněm polymerace 60 argininových reziduí; společnost Sigma. Dávka 100 mg/myš
CpG-ODN 1668 thiofosfátem substituované ODN obsahující CpG motiv: tet atg acg ttc ctg atg ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen, Dávka 5 nmol/myš
I-ODN 1 thiofosfátem substituované ODN obsahující deoxyinosin: tcc ati aci ttc ctg atg ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka 5 nmol/myš
I-ODN 2 thiofosfátem substituované ODN obsahující deoxyinosin: tcc atg aci ttc ctg atg ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka 5 nmol/myš
I-ODN 3 thiofosfátem substituované ODN obsahující deoxyinosin: tcc ati aci ttc cti ati ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka 5 nmol/myš
- 12CZ 304195 B6
Experimentální skupiny (5 myší na skupinu)
1. OVA257-264
2. OVA257_264 + pR 60
3. OVA257_264 + CpG 1668
4. OVA257-264 + I-ODN 1
5. OVA257-264 + I-ODN 2
6. O V A257-264 + I-ODN 3
7. OVA257_264 + CpG 1668 + pR 60
8. OVA257 264 + I-ODN 1 + pR 60
9. OVA257_264 + I-ODN 2 + pR 60
10. OVA257_264 + I-ODN 3 + pR 60
V den 0 bylo myším injekčně aplikováno clo každé zadní tlapky celkový objem 100 ml (50 ml na tlapku) obsahující výše zmíněné sloučeniny. Zvířata byla usmrcena 4 dny po injekci a byly odebrány popliteální lymfatické uzliny. Lymfatické uzliny byly protlačeny přes 70 mm buněčné síto a promyty dvakrát médiem DMEM (Gibeo BRL) obsahujícím 5% fetální telecí sérum (FCS, společnost Sigma). Buňky byly upraveny na 3 x 106buněk/mI v DMEM/5%/FCS. Analýza ELISPOT IFNg byla provedena v tripletu, jak bylo popsáno (Miyahira et al., 1995). Tato metoda je široce používaným postupem umožňujícím kvantifikaci antigen specifických T buněk. Lymfocyty byly stimulovány ex vivo s médiem sloužícím jako kontrola, peptidem OVA257 264 nebo Concavalinem A (Con A). Skvrny reprezentující jednotlivé IFN-g produkující T buňky byly spočítány a počet skvrn pozadí byl odečten ze všech vzorků. Vysoký počet detekovaných skvrn po stimulaci s Con A (data nejsou uvedena) ukazují na dobrý stav použitých lymfocytů. Pro každou experimentální skupinu myší jsou počty skvrn/106 buněk ilustrovány na Obrázku 1.
Jednu hodinu po injekci byla odebrána krev z ocasní žíly a bylo připraveno sérum k určení indukce systémového TNF-a za použití stanovení ELISA (Obrázek 2).
Příklad 2
Výměna guanosinu desoxy-inosinem mění neimunogenní GpC-sekvenci na vysoce imunogenní, obzvláště v kombinaci s poly-L-argininem (pR60).
Myši C57BI/6 (Harlan/Olac)
Peptid Peptid OVA2572Ď4 (SIINFEK.L), MHC 1. třídy (H-2Kb) omezený epitop kuřecího ovalbuminu (Rotzschke et al., 1991), byl syntetizován za použití standardní chemické syntézy F-moc na pevné fázi, purifikován pomocí HPLC a analyzován pomocí hmotové spektroskopie kvůli čistotě. Dávka: 300 pg/myš
Poly-L-arginin60 (pR60) Poly-L-arginin s průměrným stupněm polymerace 60 argininových reziduí; společnost Sigma. Dávka 100 mg/myš
CpG-ODN 1668 thiofosfátem substituované ODN obsahující CpG motiv: tet atg acg ttc ctg atg ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen, Dávka 5 nmol/myš
CpG-ODN thiofosfátem substituované ODN obsahující neimunogenní CpG motiv: tet atg acg ttc ctg atg ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen, Dávka 5 nmol/myš
I-ODN 9 thiofosfátem substituované ODN obsahující deoxyinosin: tcc ati aic ttc ctg atg ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka 5 nmol/myš
I-ODN 10 thiofosfátem substituované ODN obsahující deoxyinosin: tcc ati aic ttc cti ati ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka 5 nmol/myš
- 13 CZ 304195 B6
Experimentální skupiny (5 myší na skupinu)
OV A257-264
OVA257_264 + pR 60
OVA257_264 + CpG 1668
OVA257_264 + GpC
OVA257-264 + I-ODN 9
OVA257-264 + I-ODN 10
OVA257_264 + CpG 1668 + pR 60
OVA257_264 + CpG + pR 60
OVA257_264 + I-ODN 9 + pR 60
OVA257-264 + I-ODN 10 + pR 60
V den 0 bylo myším injekčně aplikováno do každé zadní tlapky celkový objem 100 μΐ (50 ml na tlapku) obsahující výše zmíněné sloučeniny. Zvířata byla usmrcena 4 dny po injekci a byly odebrány popliteální lymfatické uzliny. Lymfatické uzliny byly protlačeny přes 70 mm buněčné síto a promyty dvakrát médiem DMEM (Gibco BRL) obsahujícím 5% fetální telecí sérum (FCS, společnost Sigma). Buňky byly upraveny na 3 x 106buněk/ml v DMEM/5%/FCS. Analýza EL1SPOT IFNg byla provedena v tripletu, jak bylo popsáno (Miyahira et al., 1995). Tato metoda je široce používaným postupem umožňujícím kvantifikaci antigen specifických T buněk. Lymfocyty byly stimulovány ex vivo s médiem sloužícím jako kontrola, peptidem OVA257_264 irelevantním peptidem mTRP-2l8l_|88 (protein-2 příbuzný myší tyrosináze, VYDFFVWL), pR 60 a Concavalinem A (Con A). Skvrny reprezentující jednotlivé IFN-g produkující T buňky byly spočítány a počet skvrn pozadí byl odečten ze všech vzorků. Vysoký počet detekovaných skvrn po stimulaci s Con A (data nejsou uvedena) ukazují na dobrý stav použitých lymfocytů. Pro každou experimentální skupinu myší jsou počty skvrn/106 buněk ilustrovány na obrázku 3, jsou uvedeny standardní odchylky ex vivo stimulovaných tripletů. Jednu hodinu po injekci byla odebrána krev z ocasní žíly a bylo připraveno sérum k určení indukce systémového TNF-a a IL—6 za použití stanovení EL1SA (Obrázek 4).
Příklad 3
Kombinovaná injekce náhodných 20-mer sekvencí obsahujících desoxyinosin a peptidu odvozeného od melanomu indukuje silnou imunitní odpověď proti peptidu, která může být dále zvýšena ko-aplikací poly-L-argininu (pR 60).
Myši C57BI/6 (Harlan/Olac)
Peptid TRP-2 (VYDFFVWL), MHC 1. třídy (H-2Kb) omezený epitop proteinu-2 příbuzného myši tyrosináze (Bllom et al., 1997), byl syntetizován za použití standardní chemické syntézy F-moc na pevné fázi, purifikován pomocí HPLC a analyzován pomocí hmotové spektroskopie kvůli čistotě. Dávka: 300 mg/myš
Poly-L-arginin 60 (pR60) Poly-L-arginin s průměrným stupněm polymerace 60 argininových reziduí; společnost Sigma. Dávka 100 mg/myš
CpG-ODN 1668 thiofosfátem substituované ODN obsahující CpG motiv: tet atg acg ttc ctg atg ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen, Dávka 5 nmol/myš wdi thiofosfátem substituované ODN: nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka 5 nmol/myš wdidin thiofosfátem substituované ODN: nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka 5 nmol/myš
- 14CZ 304195 B6 wdid thiofosfátem substituované ODN: nhh hhh wdi dhh hhh hhh wn byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka 5 nmol/myš wdidid thiofosfátem substituované ODN: nhh hhh wdi did hdi ddi dh byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka 5 nmol/myš
Experimentální skupiny (5 myší na skupinu)
1. TRP-2
2. TRP-2 + pR60
3. TRP-2 + CpG 1668
4. TRP-2 + wdi
5. TRP-2 + wdidin
6. TRP-2 + wdid
7. TRP-2 + wdidid
8. TRP-2 + CpG 1668 + pR60
9. TRP-2 + wdi + pR 60
10. TRP-2 + wdidin + pR 60
11. TRP-2 + wdid + pR 60
12. TRP-2 + wdidid+ pR 60
V den 0 bylo myším injekčně aplikováno do každé zadní tlapky celkový objem 100 ml (50 μΐ na tlapku) obsahující výše zmíněné sloučeniny. Zvířata byla usmrcena 4 dny po injekci a byly odebrány popliteální lymfatické uzliny. Lymfatické uzliny byly protlačeny přes 70 mm buněčné síto a promyty dvakrát médiem DMEM (Gibco BRL) obsahujícím 5% fetální telecí sérum (FCS, společnost Sigma). Buňky byly upraveny na 3 x 106buněk/ml v DMEM/5%/FCS. Analýza EL1SPOT IFN-g byla provedena v tripletu, jak bylo popsáno (Miyahira et al., 1995). Tato metoda je široce používaným postupem umožňujícím kvantifikaci antigen specifických T buněk. Fymfocyty byly stimulovány ex vivo s médiem sloužícím jako kontrola, peptidem TRP-2, irelevantním peptidem OVA257_264, pR60 a Concavalinem A (Con A). Skvrny reprezentující jednotlivé IFN-g produkující T buňky byly spočítány a počet skvrn pozadí byl odečten ze všech vzorků. Vysoký počet detekovaných skvrn po stimulaci s Con A (data nejsou uvedena) ukazují na dobrý stav použitých lymfocytů. Pro každou experimentální skupinu myší jsou počty skvrn/106 buněk ilustrovány na Obrázku 5, jsou uvedeny standardní odchylky ex vivo stimulovaných tripletů.
Příklad 4
Experimentální skupiny (5 myší na skupinu)
| TRP-2,8M88 | ||
| TRP-2,8M88 | + | pR 60 |
| TRP—2|8|_i88 | + | CpG 1668 |
| TRP—2,8,_]88 | + | I-ODN 2 i |
| TRP—2i8i_,88 | + | CpG 1668 + pR 60 |
| TRP-2|8|_|88 | + | I-ODN 2 + pR 60 |
V den 0 bylo myším injekčně aplikováno do každé zadní tlapky celkový objem 100 ml (50 μΐ na tlapku) obsahující výše zmíněné sloučeniny. Zvířata byla usmrcena 4 dny po injekci a byly odebrány popliteální lymfatické uzliny. Lymfatické uzliny byly protlačeny přes 70 pm buněčné síto a promyty dvakrát médiem DMEM (Gibco BRL) obsahujícím 5% fetální telecí sérum (FCS, společnost Sigma). Buňky byly upraveny na 3 x 106buněk/ml v DMEM/5%/FCS. Analýza ELISPOT IFN-γ byla provedena v tripletu, jak bylo popsáno (Miyahira et al., 1995). Tato meto- 15CZ 304195 B6 da je široce používaným postupem umožňujícím kvantifikaci antigen specifických T buněk. Lymfocyty byly stimulovány ex vivo s médiem sloužícím jako kontrola, peptidem TRP—2)8| i88, irelevantním peptidem OVA257 204 a Concavalinem A (Con A). Skvrny reprezentující jednotlivé IFN-γ produkující T buňky byly spočítány a počet skvrn pozadí byl odečten ze všech vzorků. Vysoký počet detekovaných skvrn po stimulaci s Con A (data nejsou uvedena) ukazují na dobrý stav použitých lymfocytu. Pro každou experimentální skupinu myší jsou počty skvrn/106 buněk ilustrovány na Obrázku 6 jsou uvedeny standardní odchylky ex vivo stimulovaných tripletů.
Jednu hodinu po injekci byla odebrána krev z ocasní žíly a bylo připraveno sérum k určení indukce systémového TNF-α a IL-6 za použití specifických ELISA stanovení (Obrázek 7).
Příklad 5
Kombinovaná injekce náhodných 10-mer I-ODN a poly-L-argininu (pR 60) synergicky zvyšuje imunitní odpověď proti peptidů odvozenému od melanomu.
Experimentální skupiny (5 myší na skupinu)
| TRP-2i8i_188 | ||
| TRP-2|8|_|88 | + | pR 60 |
| TRP-218)_i88 | + | CpG 1668 |
| TRP—2 i8i_]88 | + | ODN 17 |
| TRP- 2|8| _| 88 | + | CpG 1668 + pR60 |
| TRP-2|8i_]88 | + | ODN 17 + pR60 |
V den 0 bylo myším injekčně aplikováno do každé zadní tlapky celkový objem 100 ml (50 μΐ na tlapku) obsahující výše zmíněné sloučeniny. Zvířata byla usmrcena 4 dny po injekci a byly odebrány popliteální lymfatické uzliny. Lymfatické uzliny byly protlačeny přes 70 pm buněčné síto a promyty dvakrát médiem DMEM (Gibco BRL) obsahujícím 5% fetální telecí sérum (FCS, společnost Sigma). Buňky byly upraveny na 3 χ 106 buněk/ml v DMEM/5%/FCS. Analýza ELISPOT IFN-γ byla provedena v tripletu, jak bylo popsáno (Miyahira et al., 1995). Tato metoda je široce používaným postupem umožňujícím kvantifikaci antigen specifických T buněk. Lymfocyty byly stimulovány ex vivo s médiem sloužícím jako kontrola, peptidem TRP—2)8(_is8, irelevantním peptidem OVA257-264 a Concavalinem A (Con A). Skvrny reprezentující jednotlivé IFN-γ produkující T buňky byly spočítány a počet skvrn pozadí byl odečten ze všech vzorků. Vysoký počet detekovaných skvrn po stimulaci s Con A (data nejsou uvedena) ukazují na dobrý stav použitých lymfocytů. Pro každou experimentální skupinu myší jsou počty skvrn/106 buněk ilustrovány na Obrázku 8 jsou uvedeny standardní odchylky ex vivo stimulovaných tripletů.
Myši C57BI/6 (Harlan/Olac)
Peptid TRP-2 (VYDFFVWL), MHC 1. třídy (H-2Kb) omezený epitop proteinu-2 příbuzného myši tyrosináze (BHom et al., 1997), byl syntetizován za použití standardní chemické syntézy F-moc na pevné fázi, purifikován pomocí HPLC a analyzován pomocí hmotové spektroskopie kvůli čistotě. Dávka: 100 mg/myš
Poly-L-arginin60 (pR60) Poly-L-arginin s průměrným stupněm polymerace 60 argininových reziduí; společnost Sigma. Dávka 100 mg/myš
CpG-ODN 1668 thiofosfátem substituované ODN obsahující CpG motiv: tet atg acg ttc ctg atg ct byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen, Dávka 5 nmol/myš
ODN 17 thiofosfátem substituované ODN obsahující deoxyinosin: hhh wdi dhh h byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. (h = CAT, w = AT, d =
GAT). Dávka 10 nmol/myš
- 16CZ 304195 B6
Myši C57BI/6 (Harlan/Olac)
Peptid TRP-2 (VYDFFVWL), MHC 1. třídy (H-2Kb) omezený epitop proteinu-2 příbuzného myši tyrosináze (Bllom et al., 1997), byl syntetizován za použití standardní chemické syntézy F-moc na pevné fázi, purifikován pomocí HPLC a analyzován pomocí hmotové spektroskopie kvůli čistotě. Dávka: 100 mg/myš
PoIy-L-arginin60 (pR60) Poly-L-arginin s průměrným stupněm polymerace 60 argininových reziduí; společnost Sigma. Dávka 100 mg/myš
CpG-ODN 1668 thiofosfátem substituované ODN obsahující CpG motiv: tet atg acg ttc ctg atg et byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen, Dávka 5 nmol/myš
1-ODN 2 thiofosfátem substituované ODN obsahující deoxyinosin: tcc atg aci ttc ctg atg et byly syntetizovány společností NAPS GmbH, Góttingen. Dávka: 5 nmol/myš
Příklad 6
Kombinovaná aplikace oligo-deoxyIC26-mer a poly-L-argininu (pR) zvyšuje na ovalbumin (OVA) specifickou humorální odpověď.
Myši C57BI/6 (Harlan/Orlac)
Ovalbumin (OVA) Ovalbumin z kuřecích vajec, stupeň V, společnost SIGMA Chemicals, A5503, šarže 54H7070. Dávka 50 pg/myš
Poly-L-arginin 60 (pR60) Poly-L-arginin s průměrným stupněm polymerace 60 argininových reziduí; společnost Sigma Chemicals, PA663, šarže 68H5903. Dávka 100 pg/myš
Oligo-deoxy IC, 26-mer (oligo-dIC26-mer) oligo-dIC26-mer byl syntetizován standardní fosfoamididovou chemií v 4 pmol měřítku a purifikován pomocí HPLC (společnost NAPS, Německo).
Experimentální skupiny (4 myši na skupinu)
1. OVA + oligo-dIC26_mer + pR
2. OVA + 0líg0-dIC26-mer
3.OVA + pR
4. OVA
V den 0 bylo myším injekčně aplikováno do každé zadní tlapky celkový objem 100 pl (50 pl na tlapku) obsahující výše zmíněné sloučeniny. 24 dnů po injekci bylo odebráno sérum, které bylo vyšetřeno stanovením ELISA na přítomnost OVA specifických protilátek. Tyto výsledky ukazují, že injekce OVA v kombinaci s oligo-dIC a pR zvyšuje produkci OVA specifických IgG protilátek ve srovnání s injekcí OVA s každou se substancí samotnou (Obrázek 13A, B). Zajímavé je, že titry IgG2a i IgG 1 byly zvýšeny po jediné injekci OVA s oligo-dlC/pR, což ukazuje, že na podíl Thl i Th2 buněk. Avšak po 115 dnech byly stále ještě detekovatelné pouze zvýšené hladiny IgG2 v séru myší po injekci OVA a oligo-dlC/pR.
Tato data demonstrují, že kombinovaná injekce OVA s oligo-dIC a pR zvyšuje OVA specifickou humorální odpověď. Tato odpověď je charakterizována produkcí izotypů protilátek indukovaných Thl i Th2 buňkami včasné fázi, ale později hlavně protilátkami indukovanými Thl buňkami.
Reference
Andreu, D., a Rivas, L. (1998). Animal antimicrobial peptides: an overview. Biopolymers 47, 415 433.
- 17CZ 304195 B6
Ballas, Z. K., Rasmussen, W. L., a Krieg, A. M. (1996). Induction of NK activity in murine and human cells by CpG motif in oligodeoxynucleotides and bacterial DNA. J Immunol 157, 18401845.
Bloom, B. R., a Widdus, R. (1998). Vaccine visions and their globál impact. Nat Med 4, 480484.
Bloom, Μ. B., Perry-Lalley, D., Robbins, P. F., Li, Y., el-Gamil, M., Rosenberg, S. A., a Yang, J. C. (1997). Identification of tyrosinase-related protein 2 as a tumor rejection antigen for the B 16 melanoma. J. Exp Med 185, 453—459.
Buschle, M., Schmidt, W., Berger, M., Schaffner, G., Kurzbauer, R., Killisch, 1., Tiedemarm, J. K., Trska, B., Kirlappos, H., Mechtler, K., Schilcher, F., Gabler, C., a Bimtsiel, M. L. (1998). Chemically defined, cell-free cancer vaccines: use of tumor antigen-derived peptides or polyepitope proteins for vaccination. Gene Ther. Mol. Biol. 1, 309-321.
Buschle, M., Schmidt, W., Zauner, W., Mechtler, K., Trska, B., Kirlappos, H., a Birnstiel, M. L. (1997). Transloading of tumor antigen-derived peptides into antigen-presenting cells. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 94, 3256-3261.
Cavanaugh, P. F., Jr., Ho, Y-K, a Bardos, T. J. (1996). The activation of murine macrophages and natural killer cells by the partially thiolated double stranded RNA póly (1). mercapto poly(C). Res. Comm. Mol. Pathol. Pharmacol. 91, 131-147.
Chace, J. H., Hooker, N. A., Mildenstein, K. L., Krieg, A. M., a Cowdery, J. S.(l997). Bacterial DNA-induced NK cell IFN-gamma production is dependent on macrophage secretion of IL—12. Clin Immunol Immunopathol 84, 185-193.
Davis, H. L., Weeranta, R., Waldschmidt, T. J., Tygrett, L., Schorr, J., a Krieg, A. M. (1998). CpG DNA is a potent enhancer of specific immunity in mice immunized with recombinant hepatitis B surface antigen. J. Immunol 160, 870-876.
Deng, G. M., Nilsson, 1. M., Verdrengh, M., Collins, L. V., and Tarkowski A. (1999). Intraarticularly localized bacterial DNA containing CpG inotifs induces arthritis. Nat Med 5, 702705.
Ganz, T. (1999). Defensins and host defense [commenť]. Science 286, 420—421.
Ganz, T., a Lehrer, R. 1.(1999). Antibiotic peptides from higher eukaryotes: biology and applications. Mol Med Today 5, 292-297.
Hancock, R. E. (1999). Host defence (cationic) peptides: what is their future clinical potential? Drugs57,469—473.
Harlow, E., a Lané, D. (1988). Antibodies: a laboratory manual (Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory).
Hartmann, G., Weiner, G. J„ a Krieg, A. M. (1999). CpG DNA: A potent signál for growth, activation, and maturation of human dendritic cells. Proč Nati Acad Sci USA 96, 9305-9310. Hoffman, J. A., Kafatos F. C., Janeway, C. A., Ezekowitz, R. A. (1999). Phylogenetic perspectives in innate immunity. Science 284, 1313-1318.
Klinmam, D. M., Yi, A. K., Beaucage, S. L., Conover, J., a Krieg, A. M. (1996). CpG motifs present in bacteria DNA rapidly induce lymphocytes to secrete interleukin 6, interleukin 12, and interferon gamma. Proč Nati Acad Sci USA 93, 2879-2883.
Krieg, A. M. (1999). CpG DNA: a novel immunomodulator [letter]. Trends Microbiol 7, 64-5. Krieg A. M. (1996). An innate immune defense mechanism based on the recognition of CpG motifs in microbial DNA. J Lab Clin Med 128, 128-133.
Krieg, A. M., Yi, A. K., Matson, S., Waldschmidt, T. J., Bishop, G. A., Teasdale, R., Koretzky, G. A., a Klinman, D. M. (1995). CpG motifs in bacterial DNA trigger direct B-cell activation. Nátuře 374, 546-549.
Krieg, A. M., Yi, A. K., Schorr, J., a Davis, H. L. (1998). The role of CpG dinucleotides in DNA vacines. Trends Microbiol 6, 23-27.
- 18CZ 304195 B6
Lethe, B., van den Eynde, B., van Pel, A., Corradin, G., a Boon, T. (1992). Mouše tumor rejection antigens P815A and P815B: two epitopes carried by a single peptide. Eur J Immunol 22,2283-2288.
Liljeqvist, S., a Stáhl, S. (1999). Production of recombinant subunit vaccines: protein immunogens, live delivery systems and nucleic acid vaccines. J. Biotechnol 73, 1-33.
Lipford, G. B., Heeg, K., a Wagner, H. (1998). Bacterial DNA as immune cell activator. Trends Microbiol 6, 496-500.
Manetti, R., Annunziato, F., Tomasevic, L., Gianno, V., Parronchi, P., Romagnani, S. a Maggi, E. (1995). Polyinosinic acid: polycytidylic acid promotes T helpertype 1—specific immune responses by stimulating macrophage production of interferon-a and interleukin-12. Eur. J. Immunol. 25, 2656-2660.
Mosmann, T. R., Cherwinski, H., Bond, M. W., Giedlin, M. A., a Coffman, R. L. (1986). Two types of murine helper T cell cloně. 1. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins. J Immunol 136, 2348-2357.
Nossal, G. (1998). Living up to the legacy. Nat Med 4, 475—476.
Oxenius, A., Martinic, Μ M., Hengartner, H., a Klenerman, P. (1999). CpG-containing oligonucleotides are efficient adjuvants for induction of protective antiviral immune responses with Tcell peptide vaccines. J Virol 73, 4120-4126.
Paillard, F. (1999). CpG: the double-edged sword [comment]. Hum Gene Ther 10, 2089-2090. Pamer, E. G., Harty, J. T., a Bevan, M. J. (1991). Precise prediction of a dominant class I MHCrestricted epitope of Listeria monocytogenes. Nátuře 353, 852-855.
Parronchi, P., Brugnolo, F., Annunziato, F., Manuelli, C., Sampognaro, S., Mavilia, C., Romagnani, S., a Maggi, E. (1999). Phosphorothioate oligodeoxynucleotides promote the in vitro development of human allergen-specific CD4+ T cells into Thl effectors. J Immunol 163, 59465953.
Pisetsky, D. S. (1997). Immunostimulatory DNA; a clear and present danger? Nat Med 3, 829831.
Pisetsky, D. S. (1999). The influence of base sequence on the imunostimulatory properties of DNA. Immunol Res 19, 35—46.
Rammensee, H. G., Friede, T., Stevanoviic S. (1995). MHC ligands and peptide motifs: first listing. Immunogenetics 41, 178-228.
Rodrigues, M., Nussenzweig, R. S., Romero, P., a Zavala, F. (1992). The in vivo cytotoxic activity of CD8+ T cell clones correlates with their levels of expression of adhesion molecules. J Exp Med 175, 895-905.
Roitt, L., Brostoff, J., a Male, D. (1998). Immunology (London: Mosby International Ltd). Rotzschke, O., Falk, K., Stevanovic, S., Jung, G., Walden, P., a Rammensee, H. G. (1991). Exact prediction of a natural T cell epitope. Eur J Immunol 21, 2891-2894.
Schmidt, W., Buschle, M., Zauner, W., Kirlappos, H., Mechtler, K., Trska, B., a Bimstiel, M. L. (1997). Cell-free tumor antigen peptide-based cancer vaccines. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 94, 3262-3267.
Schwartz) D. A., Quinn, T. J., Thome, P. S., Sayeed, S., Yi, A. K., a Krieg, A. M. (1997). CpG motifs in bacterial DNA cause inflammation in the lower respirátory tract, J Clin Invest 100, 6873.
Shimonkevitz, R., Colon, S., Kappler, J. W., Marrack, P., a Grey, Η. M., (1984). Antigen recognition by H2-resctricted T cells 11. A tryptic ovalbumin peptide that substitutes for processed antigen. J Immunol 133, 2067-2074.
Simmaco, M., Mignogna, G., a Barra, D. (1998). Antimicrobial peptides from amphibian skin: what do they telí us? Biopolymers 47, 435—450.
Sparbier, K., a Walden, P. (1999). T cell receptor specificity and mimotopes. Curr Opin Immunol 11,214-218.
- 19CZ 304195 B6
Sparwasser, T., Koch, E. S., Vabulas, R. M., Heeg, K., Lipford, G. B., Ellwart, J. W., a Wagner, H. (1998). Bacterial DNA and immunostimulatory CpG oligonucleotides trigger maturation and activation of murine dendritic cells. Eur J Immunol 28, 2045-2054.
Sparwasser, T., Mietlike, T., Lipford, G., Erdmann, A., Hacker, H., Heeg, K., a Wagner, H. (1997). Macrophages sense pathogens via DNA motif: induction of tumor necrosis factor-alphamediated shock. Eur J Immunol 27, 1671-1679.
Weiner, G. J., Liu, Η. M., Wooldridge, J. E., Dahle, C. E., a Krieg, A. M. (1997). Immunostimulatory oligodeoxynucleotides containing he CpG motifs are effective as immune adjuvants in tumor antigen immunization. Proč Nati Acad Sci USA 94, 10833-10837.
Yew, N. S., Wang, K. X., Przybylska, M., Bagley, R. G., Stedman, M., Marshali, J., Scheule, R. K., a Cheng, S. H. (1999). Contribution of plasmid DNA to inflammation in the lung after administration of cationic lipid:pDNA complexes. Hum Gene Ther 10, 223-234.
Claims (16)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použití molekuly oligodeoxynukleové kyseliny, mající strukturu definovanou vzorcem 1 (I), kde kterýkoliv ze substituentů X je O nebo S;kterýkoliv ze zbytků NMP je 2' deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, deoxyinosin- deoxycytosin-, deoxyuridin-, deoxythymidin-, 2-methyldeoxyinosin-, 5-methyldeoxycytosin-, deoxypseudouridin-, deoxyribosapurin-, 2-aminodeoxyribosapurin-, 6-S-deoxyguanin-, 2-dimethyldeoxyguanosinnebo N-isopentenyldeoxyadenosinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu;NUC je 2' deoxynukleosid vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosinu, deoxyguanosinu, deoxyinosinu, deoxycytosinu, deoxyuridinu, deoxythymidinu, 2-methyldeoxyinosinu, 5-methyldeoxycytosinu, deoxypseudouridinu, deoxyribosapurinu, 2-aminodeoxyribosapurinu, 6-S-deoxyguaninu, 2-dimethyldeoxyguanosinu nebo N-isopentenyldeoxyadenosinu;a a b jsou celá čísla od 0 do 100 s výhradou, že součet a + b je číslo mezi 4 až 150,B a E jsou běžné skupiny pro 5' nebo 3' konce molekul nukleové kyseliny;-20CZ 304195 B6 pro výrobu imunostimulačního farmaceutického přípravku.
- 2. Použití podle nároku 1, kde kterýkoliv ze zbytků NMP je vybrán ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, deoxyinosin-, deoxycytosin-, deoxyuridin-, deoxythymidin-, 2-methyldeoxyinosin-, 5-methyldeoxycytosinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu.
- 3. Použití podle nároku 1 nebo 2, kde součet a + b je mezi 10 a 60, přednostně mezi 15 a 40.
- 4. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde alespoňjeden z Xj a X2 je S a alespoňjeden z X3 a X4 je O a přednostně kterýkoliv ze zbytků NMP je nukleosid monothiofosfát.
- 5. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, kde molekula oligodeoxynukleové kyseliny obsahuje sekvenci hhh wdi dhh h, nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn, nhh wdi din hhh hdi ndi nh, nhh hhh wdi dhh hhh hhh wn nebo nhh wdi did hhh hdi ddi dh, kde kterýkoliv ze symbolů n představuje 2' deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, deoxyinosin-, nebo deoxythymidinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu, kterýkoliv ze symbolů h představuje 2’-deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxycytosin-, nebo deoxythymidinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu, i je deoxyinosinmonofosfát nebo -monothiofosfát, kterýkoliv ze symbolů w představuje 2'-deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, nebo deoxythymidinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu, a kterýkoliv ze symbolů d představuje 2'-deoxynukleosid monofosfát nebo monothiofosfát vybraný ze skupiny sestávající z deoxyadenosin-, deoxyguanosin-, nebo deoxythymidinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu.
- 6. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kde molekula oligodeoxynukleové kyseliny obsahuje alespoň jeden 2'-deoxycytosinmonofosfát nebo -monothiofosfát 3'—přilehlý k 2' deoxyinosinmonofosfátu nebo -monothiofosfátu, zejména deoxyinosindeoxycytosin 26-mer.
- 7. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, kde molekula oligodeoxynukleové kyseliny obsahuje sekvenci gacitt, zejména tcc atg aci ttc ctg atg ct, iacitt, gaictt, iaictt, kde-21 CZ 304195 B6 a je deoxyadenosinmonofosfát nebo -monothiofosfát, g je deoxyguanosinmonofosfát nebo -monothiofosfát, i je deoxyinosinmonofosfát nebo -monothiofosfát, c je deoxycytosinmonofosfát nebo -monothiofosfát a t je deoxythymidinmonofosfát nebo -monothiofosfát.
- 8. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, kde molekula oligodeoxynukleové kyseliny obsahuje sekvenci wdi, wdid, wdidin, nebo wdidid, kde w, d, i a n mají výše uvedený význam.
- 9. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 8, kde B a E jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z -H, -CH3, -COH, -COCH3, -OH, -CHO, -PO4, -PSO3, -PS2O2, -PS3O, -PS4, -SO3, -PO4(CH2),_6-HN2 nebo -PO4(CH2), 6-NH-značka.
- 10. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, kde imunostimulačním farmaceutickým přípravkem je vakcína.
- 11. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje molekulu oligodeoxynukleové kyseliny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9.
- 12. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje molekulu oligodeoxynukleové kyseliny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9 a antigen.
- 13. Farmaceutický přípravek podle nároku 11 nebo 12, vyznačující se tím, že dále obsahuje polykationtový polymer, přednostně polykationtový peptid, obzvláště polyarginin, polylysin nebo antimikrobiální peptid, obzvláště antimikrobiální peptid odvozený od kathelicidinu, syntetický peptid obsahující 2 KLK-motivy oddělené linkerem tří až sedmi hydrofobních aminokyselin nebo růstový hormon, obzvláště lidský růstový hormon.
- 14. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 11 až 13, vyznačující se tím, že dále obsahuje další účinné složky, obzvláště cytokiny, protizánětlivé látky, antimikrobiální látky nebo jejich kombinace.
- 15. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 11 až 14, vyznačující se tím, že dále obsahuje pomocné látky, obzvláště farmaceuticky přijatelný nosič, pufrační látky, stabilizátory nebo jejich kombinace.
- 16. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 11 až 15, vyznačující se tím , že obsahuje 1 ng až 1 g, přednostně 100 ng až 10 mg, obzvláště 10 až 1 mg jedné nebo více molekul oligodeoxynukleové kyseliny podle kteréhokoliv z nároků 1 a 9.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0100000A AT410173B (de) | 2000-06-08 | 2000-06-08 | Antigene zusammensetzung |
| AT19732000 | 2000-11-23 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20024168A3 CZ20024168A3 (cs) | 2003-09-17 |
| CZ304195B6 true CZ304195B6 (cs) | 2013-12-27 |
Family
ID=25608484
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2002-4168A CZ304195B6 (cs) | 2000-06-08 | 2001-06-07 | Imunostimulační farmaceutický přípravek |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US8568742B2 (cs) |
| EP (1) | EP1296713B1 (cs) |
| JP (2) | JP5271471B2 (cs) |
| KR (1) | KR100799788B1 (cs) |
| CN (1) | CN1309418C (cs) |
| AT (1) | ATE249839T1 (cs) |
| AU (2) | AU2001281812B2 (cs) |
| BR (1) | BRPI0111639B8 (cs) |
| CA (1) | CA2411575C (cs) |
| CZ (1) | CZ304195B6 (cs) |
| DE (1) | DE60100814T2 (cs) |
| DK (1) | DK1296713T3 (cs) |
| ES (1) | ES2206424T3 (cs) |
| HK (1) | HK1056678A1 (cs) |
| HU (1) | HU228264B1 (cs) |
| IL (2) | IL152959A0 (cs) |
| IS (1) | IS1993B (cs) |
| MX (1) | MXPA02012010A (cs) |
| NO (1) | NO329492B1 (cs) |
| PL (1) | PL211036B1 (cs) |
| PT (1) | PT1296713E (cs) |
| RU (2) | RU2293573C2 (cs) |
| SI (1) | SI1296713T1 (cs) |
| SK (1) | SK287689B6 (cs) |
| TR (1) | TR200302015T4 (cs) |
| WO (1) | WO2001093905A1 (cs) |
Families Citing this family (88)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6977245B2 (en) | 1999-04-12 | 2005-12-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response |
| PT1296713E (pt) * | 2000-06-08 | 2004-02-27 | Intercell Biomediz Forschungs | Oligodesoxinucleotidos imunoestimuladores |
| EP1350262B8 (en) * | 2000-12-08 | 2008-08-13 | Coley Pharmaceuticals GmbH | Cpg-like nucleic acids and methods of use thereof |
| CA2433967A1 (en) * | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Intercell Ag | Anti-inflammatory use of polycationic compounds |
| EP1347775B1 (en) * | 2001-01-05 | 2016-11-30 | Valneva Austria GmbH | Uses for polycationic compounds as vaccine adjuvants |
| US7244438B2 (en) | 2001-01-05 | 2007-07-17 | Intercell Ag | Uses for polycationic compounds |
| WO2002053185A2 (en) * | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Intercell Ag | Anti-inflammatory use of polycationic compounds |
| AT410798B (de) | 2001-01-26 | 2003-07-25 | Cistem Biotechnologies Gmbh | Verfahren zur identifizierung, isolierung und herstellung von antigenen gegen ein spezifisches pathogen |
| EP1390494A2 (en) * | 2001-05-21 | 2004-02-25 | Intercell AG | Method for stabilising of nucleic acids |
| WO2003035695A2 (en) * | 2001-07-26 | 2003-05-01 | Tanox, Inc. | Agents that activate or inhibit toll-like receptor 9 |
| US7666674B2 (en) | 2001-07-27 | 2010-02-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Use of sterically stabilized cationic liposomes to efficiently deliver CPG oligonucleotides in vivo |
| WO2003020884A2 (en) | 2001-08-14 | 2003-03-13 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human Services | Method for rapid generation of mature dendritic cells |
| MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
| US20050250716A1 (en) * | 2001-12-07 | 2005-11-10 | Intercell Ag | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides |
| AU2002366710A1 (en) | 2001-12-20 | 2003-07-09 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of | USE OF CpG OLIGODEOXYNUCLEOTIDES TO INDUCE ANGIOGENESIS |
| US8466116B2 (en) | 2001-12-20 | 2013-06-18 | The Unites States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Use of CpG oligodeoxynucleotides to induce epithelial cell growth |
| US8088388B2 (en) * | 2002-02-14 | 2012-01-03 | United Biomedical, Inc. | Stabilized synthetic immunogen delivery system |
| CA2388049A1 (en) | 2002-05-30 | 2003-11-30 | Immunotech S.A. | Immunostimulatory oligonucleotides and uses thereof |
| JP2005533855A (ja) | 2002-07-24 | 2005-11-10 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | 病原性ウイルスからの別のリーディングフレームによりコードされる抗原 |
| AR040996A1 (es) | 2002-08-19 | 2005-04-27 | Coley Pharm Group Inc | Acidos nucleicos inmunoestimuladores |
| US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
| JP2006504687A (ja) | 2002-09-13 | 2006-02-09 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | Ｃ型肝炎ウイルスペプチドの単離方法 |
| US8263091B2 (en) | 2002-09-18 | 2012-09-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method of treating and preventing infections in immunocompromised subjects with immunostimulatory CpG oligonucleotides |
| JP5116971B2 (ja) | 2002-10-15 | 2013-01-09 | インターセル アーゲー | Ｂ群連鎖球菌の接着因子をコードする核酸、ｂ群連鎖球菌の接着因子、およびその使用 |
| JP2006520202A (ja) | 2003-03-04 | 2006-09-07 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | ストレプトコッカス・ピオゲネス抗原 |
| CA2517673C (en) | 2003-03-24 | 2013-08-13 | Intercell Ag | Improved vaccines for preventing viral infection |
| US20070041998A1 (en) * | 2003-03-24 | 2007-02-22 | Intercell Ag | Use of alum and a th1 immune response inducing adjuvant for enhancing immune responses |
| US7628994B2 (en) | 2003-03-31 | 2009-12-08 | Intercell Ag | S. epidermidis antigens |
| EP2336357A1 (en) | 2003-04-15 | 2011-06-22 | Intercell AG | S. pneumoniae antigens |
| WO2004099242A2 (en) | 2003-05-07 | 2004-11-18 | Intercell Ag | Streptococcus agalactiae antigens i + ii |
| CA2525540A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-09 | Intercell Ag | Enterococcus antigens |
| EP1648502B1 (en) * | 2003-07-11 | 2010-12-01 | Intercell AG | Hcv vaccines |
| JP4817599B2 (ja) * | 2003-12-25 | 2011-11-16 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 免疫活性増強剤とこれを用いた免疫活性の増強方法 |
| KR100721928B1 (ko) | 2004-11-05 | 2007-05-28 | 주식회사 바이오씨에스 | ＣｐＧ 올리고데옥시뉴클레오티드를 함유하는 피부질환의치료 또는 예방용 약학적 조성물 |
| DK1931379T3 (da) | 2005-10-07 | 2013-08-19 | Sec Dep For Health | Proteiner med forbedret opløselighed samt fremgangsmåder til frembringelse og anvendelse af samme |
| TW200806315A (en) | 2006-04-26 | 2008-02-01 | Wyeth Corp | Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions |
| EP2402023A1 (en) | 2006-06-28 | 2012-01-04 | Statens Serum Institut | Expanding the t cell repertoire to include subdominant epitopes by vaccination with antigens delivered as protein fragments or peptide cocktails |
| AU2007271350B2 (en) | 2006-07-07 | 2013-03-21 | Intercell Ag | Small Streptococcus pyogenes antigens and their use |
| EP2289906A1 (en) | 2006-09-15 | 2011-03-02 | Intercell AG | Borrelia antigens |
| EP1923069A1 (en) | 2006-11-20 | 2008-05-21 | Intercell AG | Peptides protective against S. pneumoniae and compositions, methods and uses relating thereto |
| AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
| CA2675379A1 (en) | 2007-01-12 | 2008-07-17 | Intercell Ag | Protective proteins of s. agalactiae, combinations thereof and methods of using the same |
| CN102015754A (zh) | 2007-05-02 | 2011-04-13 | 英特塞尔股份公司 | 克雷伯菌（Klebsiella）抗原 |
| EP2158211B1 (en) | 2007-05-31 | 2016-08-10 | Medigene AG | Mutated structural protein of a parvovirus |
| EP2012122A1 (en) | 2007-07-06 | 2009-01-07 | Medigene AG | Mutated parvovirus structural proteins as vaccines |
| EP2511291A3 (en) | 2007-06-18 | 2012-11-07 | Intercell AG | Chlamydia antigens |
| BRPI0909664A2 (pt) | 2008-03-17 | 2019-09-24 | Intercell Ag | peptídios protetores contra s. pneumoniae e composições, métodos e usos relacionados com os mesmos |
| EP2303318A2 (en) | 2008-06-20 | 2011-04-06 | Wyeth LLC | Compositions and methods of use of orf1358 from beta-hemolytic streptococcal strains |
| WO2010089340A2 (en) | 2009-02-05 | 2010-08-12 | Intercell Ag | Peptides protective against e. faecalis, methods and uses relating thereto |
| EP2405938A2 (en) | 2009-02-13 | 2012-01-18 | Intercell AG | Nontypable haemophilus influenzae antigens |
| AU2010301043B2 (en) | 2009-06-22 | 2014-01-09 | Wyeth Llc | Compositions and methods for preparing Staphylococcus aureus serotype 5 and 8 capsular polysaccharide conjugate immunogenic compositions |
| PL2445522T3 (pl) | 2009-06-22 | 2018-01-31 | Wyeth Llc | Kompozycje immunogenne antygenów Staphylococcus aureus |
| BR112012004276A2 (pt) | 2009-08-27 | 2017-10-24 | Novartis Ag | adjuvante compreendendo alumínio, oligonucleotídeo e policátion |
| EP2319871A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-11 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
| EP2308896A1 (en) | 2009-10-09 | 2011-04-13 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
| BR112012007821A2 (pt) | 2009-10-09 | 2017-05-30 | Sanofi Sa | polipeptídeos para ligação ao "receptor de produtos finais de glicação avançada" bem como composições e métodos envolvendo os mesmos |
| US8765148B2 (en) | 2010-02-19 | 2014-07-01 | Valneva Austria Gmbh | 1C31 nanoparticles |
| EP2547357A1 (en) | 2010-03-18 | 2013-01-23 | Novartis AG | Adjuvanted vaccines for serogroup b meningococcus |
| SI3170508T1 (sl) | 2010-06-04 | 2020-01-31 | Wyeth Llc | Formulacije cepiva |
| HUE052850T2 (hu) | 2010-08-23 | 2021-05-28 | Wyeth Llc | Neisseria meningitidis RLP2086 antigéneket tartalmazó stabil készítmények |
| KR101907434B1 (ko) | 2010-09-03 | 2018-10-12 | 발네바 오스트리아 게엠베하 | C. 디피실의 a 독소 및 b 독소 단백질의 분리된 폴리펩타이드 및 이의 용도 |
| WO2012031760A1 (en) | 2010-09-08 | 2012-03-15 | Medigene Ag | Parvovirus mutated structural proteins comprising cross - protective b - cell epitopes of a hpv l2 protein as well as products and methods relating thereto |
| ES2585328T5 (es) | 2010-09-10 | 2022-12-14 | Wyeth Llc | Variantes no lipidadas de antígenos ORF2086 de Neisseria meningitidis |
| PL3150222T3 (pl) | 2010-12-22 | 2020-05-18 | Wyeth Llc | Stabilne immunogenne kompozycje antygenów staphylococcus aureus |
| RU2587633C2 (ru) * | 2011-05-26 | 2016-06-20 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Иммуностимулирующие олигодезоксинуклеотиды |
| CN103547675A (zh) * | 2011-05-26 | 2014-01-29 | 英特维特国际股份有限公司 | 免疫刺激性寡脱氧核苷酸 |
| ITMI20111182A1 (it) | 2011-06-28 | 2012-12-29 | Canio Buonavoglia | Vaccino per coronavirus canino |
| SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
| MY167723A (en) | 2012-03-09 | 2018-09-21 | Pfizer | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| FI3363806T3 (fi) | 2012-12-20 | 2023-01-31 | Glykokonjugaatiomenetelmä | |
| JP6446377B2 (ja) | 2013-03-08 | 2018-12-26 | ファイザー・インク | 免疫原性融合ポリペプチド |
| CA2923129C (en) | 2013-09-08 | 2020-06-09 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| WO2016130569A1 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Mj Biologics, Inc. | A composition comprising pedv antigens and methods for making and using the composition |
| AU2015256729B2 (en) | 2014-05-09 | 2019-09-19 | Universiteit Utrecht Holding B.V. | New CATH2 derivatives |
| BR112017017460A2 (pt) | 2015-02-19 | 2018-04-10 | Pfizer Inc. | composições de neisseria meningitidis e métodos das mesmas |
| TWI718144B (zh) | 2015-05-04 | 2021-02-11 | 美商輝瑞股份有限公司 | Ｂ型鏈球菌多醣－蛋白質軛合物、製造軛合物之方法、含軛合物之免疫原性組成物、及其用途 |
| US10751402B2 (en) | 2016-11-09 | 2020-08-25 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions and uses thereof |
| US10183070B2 (en) | 2017-01-31 | 2019-01-22 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| EP3527223A1 (en) | 2018-02-16 | 2019-08-21 | 2A Pharma AB | Mutated parvovirus structural protein |
| AU2019220386A1 (en) | 2018-02-16 | 2020-08-20 | 2A Pharma Ab | Parvovirus structural protein for the treatment of autoimmune diseases |
| SG11202110646PA (en) | 2019-05-20 | 2021-10-28 | Valneva Se | A subunit vaccine for treatment or prevention of a respiratory tract infection |
| US20220233672A1 (en) | 2019-05-31 | 2022-07-28 | Universidad De Chile | An immunogenic formulation that induces protection against shiga toxin-producing escherichia coli (stec) |
| WO2021211279A1 (en) | 2020-04-17 | 2021-10-21 | Regents Of The University Of Minnesota | SARS-CoV-2 SPIKE RECEPTOR BINDING DOMAIN AND COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF |
| US20230321212A1 (en) | 2020-08-26 | 2023-10-12 | Pfizer Inc. | Group b streptococcus polysaccharide-protein conjugates, methods for producing conjugates, immunogenic compositions comprising conjugates, and uses thereof |
| EP4058056A1 (en) | 2020-10-07 | 2022-09-21 | Valneva Sweden AB | Cholera vaccine formulation |
| WO2023083964A1 (en) | 2021-11-11 | 2023-05-19 | 2A Pharma Ab | Parvovirus structural protein against beta- and gamma-hpv |
| WO2023232901A1 (en) | 2022-06-01 | 2023-12-07 | Valneva Austria Gmbh | Clostridium difficile vaccine |
| WO2024069420A2 (en) | 2022-09-29 | 2024-04-04 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising an rsv f protein trimer |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3906092A (en) * | 1971-11-26 | 1975-09-16 | Merck & Co Inc | Stimulation of antibody response |
| WO1992011389A1 (en) * | 1990-12-21 | 1992-07-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Hla dqbeta dna typing |
| WO1992014424A1 (en) * | 1991-02-13 | 1992-09-03 | Howmedica, Inc. | Acetabular cup positioning insert |
| US5691136A (en) * | 1991-10-23 | 1997-11-25 | Baylor College Of Medicine | Fingerprinting bacterial strains using repetitive DNA sequence amplification |
| WO1998016247A1 (en) * | 1996-10-11 | 1998-04-23 | The Regents Of The University Of California | Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3725545A (en) * | 1971-02-03 | 1973-04-03 | R Maes | Enhancement of antibody production by nucleic acid-polycation complexes |
| CA2016841C (en) * | 1989-05-16 | 1999-09-21 | William D. Huse | A method for producing polymers having a preselected activity |
| ZA908001B (en) | 1989-10-11 | 1991-08-28 | Merrell Dow Pharma | Inosine/guanosine derivatives as immunosuppressive agents |
| US5514577A (en) * | 1990-02-26 | 1996-05-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide therapies for modulating the effects of herpes viruses |
| US5646262A (en) * | 1994-07-28 | 1997-07-08 | Georgetown University | Antisense oligonucleotides against hepatitis B viral replication |
| US20020081577A1 (en) * | 1995-06-06 | 2002-06-27 | Robert L. Kilkuskie | Oligonucleotides speciific for hepatitis c virus |
| ZA964446B (en) * | 1995-06-06 | 1996-12-06 | Hoffmann La Roche | Oligonucleotides specific for hepatitis c virus |
| CA2223061C (en) * | 1995-06-06 | 2008-04-22 | Jan Vijg | Method of and apparatus for diagnostic dna testing |
| ATE229571T1 (de) * | 1996-10-02 | 2002-12-15 | Us Gov Health & Human Serv | Nachweis und identifizierung von nicht-polio enteroviren |
| JP4101888B2 (ja) | 1997-06-06 | 2008-06-18 | ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション | 免疫刺激オリゴヌクレオチド、その組成物およびその使用方法 |
| US5955443A (en) * | 1998-03-19 | 1999-09-21 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of PECAM-1 |
| US6001651A (en) * | 1998-03-20 | 1999-12-14 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of LFA-3 |
| IL126919A0 (en) * | 1998-11-05 | 1999-09-22 | Univ Ben Gurion | Antisense oligomer |
| CN1313864A (zh) * | 1998-06-24 | 2001-09-19 | 基因创新有限公司 | Hcv包膜蛋白颗粒∶用于疫苗接种的用途 |
| KR100863630B1 (ko) * | 1999-09-25 | 2008-10-15 | 유니버시티 오브 아이오와 리써치 파운데이션 | 면역자극성 핵산 |
| WO2001083503A2 (en) | 2000-05-01 | 2001-11-08 | Hybridon, Inc. | MODULATION OF OLIGONUCLEOTIDE CpG-MEDIATED IMMUNE STIMULATION BY POSITIONAL MODIFICATION OF NUCLEOSIDES |
| AT410173B (de) * | 2000-06-08 | 2003-02-25 | Cistem Biotechnologies Gmbh | Antigene zusammensetzung |
| PT1296713E (pt) * | 2000-06-08 | 2004-02-27 | Intercell Biomediz Forschungs | Oligodesoxinucleotidos imunoestimuladores |
| CA2517673C (en) * | 2003-03-24 | 2013-08-13 | Intercell Ag | Improved vaccines for preventing viral infection |
| US7951845B2 (en) * | 2006-01-19 | 2011-05-31 | The Regents Of The University Of Michigan | Composition and method of treating hearing loss |
-
2001
- 2001-06-07 PT PT01960277T patent/PT1296713E/pt unknown
- 2001-06-07 DK DK01960277T patent/DK1296713T3/da active
- 2001-06-07 ES ES01960277T patent/ES2206424T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 HU HU0301229A patent/HU228264B1/hu unknown
- 2001-06-07 KR KR20027016711A patent/KR100799788B1/ko active IP Right Grant
- 2001-06-07 CZ CZ2002-4168A patent/CZ304195B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-06-07 CA CA2411575A patent/CA2411575C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 AT AT01960277T patent/ATE249839T1/de active
- 2001-06-07 WO PCT/EP2001/006433 patent/WO2001093905A1/en active IP Right Grant
- 2001-06-07 SI SI200130047T patent/SI1296713T1/xx unknown
- 2001-06-07 IL IL15295901A patent/IL152959A0/xx active IP Right Grant
- 2001-06-07 PL PL358982A patent/PL211036B1/pl unknown
- 2001-06-07 EP EP20010960277 patent/EP1296713B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 SK SK1815-2002A patent/SK287689B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-06-07 MX MXPA02012010A patent/MXPA02012010A/es active IP Right Grant
- 2001-06-07 CN CNB018107974A patent/CN1309418C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 BR BRPI0111639A patent/BRPI0111639B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-06-07 DE DE2001600814 patent/DE60100814T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 TR TR200302015T patent/TR200302015T4/xx unknown
- 2001-06-07 JP JP2002501476A patent/JP5271471B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 RU RU2003100409A patent/RU2293573C2/ru active
- 2001-06-07 RU RU2007103151A patent/RU2413520C2/ru active
- 2001-06-07 US US10/297,555 patent/US8568742B2/en active Active
- 2001-06-07 AU AU2001281812A patent/AU2001281812B2/en not_active Expired
- 2001-06-07 AU AU8181201A patent/AU8181201A/xx active Pending
-
2002
- 2002-11-18 IS IS6627A patent/IS1993B/is unknown
- 2002-11-20 IL IL152959A patent/IL152959A/en unknown
- 2002-12-04 NO NO20025835A patent/NO329492B1/no not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-12-11 HK HK03109011A patent/HK1056678A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-01-10 JP JP2013002571A patent/JP5908851B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2013-03-06 US US13/786,815 patent/US8945591B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-12-30 US US14/585,740 patent/US9492537B2/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3906092A (en) * | 1971-11-26 | 1975-09-16 | Merck & Co Inc | Stimulation of antibody response |
| WO1992011389A1 (en) * | 1990-12-21 | 1992-07-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Hla dqbeta dna typing |
| WO1992014424A1 (en) * | 1991-02-13 | 1992-09-03 | Howmedica, Inc. | Acetabular cup positioning insert |
| US5691136A (en) * | 1991-10-23 | 1997-11-25 | Baylor College Of Medicine | Fingerprinting bacterial strains using repetitive DNA sequence amplification |
| WO1998016247A1 (en) * | 1996-10-11 | 1998-04-23 | The Regents Of The University Of California | Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Jinsuk Woo et al.: "G/C-Modified oligonucleotides with selective complementarity: synthesis and hybridization properties", Nucleic Acids Res., Vol. 24(13), 2470-2475, 1996 * |
| Miura Naoyuki et al.: "Use of the deoxyinosine-containing probe to isolate and sequence cDNA encoding the fusion (F) glycoprotein of Sendai virus (HJV), Gene, vol. 38(1-3), 271-274, 1985 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9492537B2 (en) | Methods and compositions involving immunostimulatory oligodeoxynucleotides | |
| US7858588B2 (en) | Immunostimulatory oligodeoxynucleic molecules | |
| AU784403B2 (en) | Pharmaceutical composition for immunomodulation and preparation of vaccines comprising an antigen and an immunogenic oligodeoxynucleotide and a polycationic polymer as adjuvants | |
| AU2001281812A1 (en) | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides | |
| US7148191B2 (en) | Antigenic composition | |
| AU2002320762A1 (en) | Immunostimulatory oligodeoxynucleic molecules |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20210607 |