PL211036B1 - Zastosowanie cząsteczki immunostymulującego kwasu oligodezoksynukleinowego (ODN) i zawierająca ją kompozycja - Google Patents
Zastosowanie cząsteczki immunostymulującego kwasu oligodezoksynukleinowego (ODN) i zawierająca ją kompozycjaInfo
- Publication number
- PL211036B1 PL211036B1 PL358982A PL35898201A PL211036B1 PL 211036 B1 PL211036 B1 PL 211036B1 PL 358982 A PL358982 A PL 358982A PL 35898201 A PL35898201 A PL 35898201A PL 211036 B1 PL211036 B1 PL 211036B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- monothiophosphate
- monophosphate
- odn
- deoxyadenosine
- use according
- Prior art date
Links
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 title claims abstract description 43
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 101500027983 Rattus norvegicus Octadecaneuropeptide Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 30
- 150000004712 monophosphates Chemical class 0.000 claims abstract description 24
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- RPFPNGBGDKGFRI-XLPZGREQSA-N 9-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-2-methyl-3h-purin-6-one Chemical compound C12=NC(C)=NC(O)=C2N=CN1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 RPFPNGBGDKGFRI-XLPZGREQSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 60
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 55
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 55
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 55
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 32
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 31
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 claims description 30
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N desoxyinosine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- WKKCYLSCLQVWFD-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydropyrimidin-4-amine Chemical compound N=C1NCNC=C1 WKKCYLSCLQVWFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- -1 deoxytimidine Chemical compound 0.000 claims description 11
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 claims description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- KHWCHTKSEGGWEX-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyadenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 KHWCHTKSEGGWEX-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 9
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 claims description 9
- PHNGFPPXDJJADG-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine-5'-monophosphate Chemical compound O1[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 PHNGFPPXDJJADG-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 7
- MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 2'-deoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 0.000 claims description 7
- MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N desoxyuridine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229920002851 polycationic polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 6
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 claims description 5
- LTFMZDNNPPEQNG-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 LTFMZDNNPPEQNG-KVQBGUIXSA-N 0.000 claims description 4
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 108060001132 cathelicidin Proteins 0.000 claims description 4
- 102000014509 cathelicidin Human genes 0.000 claims description 4
- POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N cathelicidin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C1=CC=CC=C1 POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 4
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 claims description 4
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 4
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- ASOJEESZSWWNQK-RRKCRQDMSA-N 5-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O ASOJEESZSWWNQK-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 2
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 2
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 claims description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N dTMP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims 1
- CGPPXVAUDMUIPK-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid trihydroxy(sulfanylidene)-lambda5-phosphane Chemical compound OP(O)(O)=O.OP(O)(O)=S CGPPXVAUDMUIPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical compound OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 7
- FERYXNKLCFJNMG-QJPTWQEYSA-N (2r,3s,5r)-2-(hydroxymethyl)-5-[6-(3-methylbut-3-enylamino)purin-9-yl]oxolan-3-ol Chemical compound C1=NC=2C(NCCC(=C)C)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 FERYXNKLCFJNMG-QJPTWQEYSA-N 0.000 abstract 1
- COVHWGAKPGOZBI-QJPTWQEYSA-N [(2r,3s,5r)-3-hydroxy-5-[6-(3-methylbut-3-enylamino)purin-9-yl]oxolan-2-yl]methyl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=NC=2C(NCCC(=C)C)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 COVHWGAKPGOZBI-QJPTWQEYSA-N 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 52
- JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-azaniumyl-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-carboxylatobutanoyl]amino]-6-azaniumy Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N 0.000 description 38
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 29
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 27
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 27
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 25
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 22
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 22
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 22
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 18
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 18
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 16
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 15
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 15
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 15
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 13
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 13
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 12
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 12
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 12
- 238000012705 nitroxide-mediated radical polymerization Methods 0.000 description 12
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 10
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 10
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 9
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 9
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 8
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 8
- 108010007004 cathelin Proteins 0.000 description 8
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical group [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 7
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 7
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 6
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 5
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 101001091423 Agaricus bisporus Polyphenol oxidase 2 Proteins 0.000 description 4
- 101000705994 Bombyx mori Phenoloxidase subunit 2 Proteins 0.000 description 4
- 101000606124 Margaritifera margaritifera Tyrosinase-like protein 2 Proteins 0.000 description 4
- 101000773106 Pinctada maxima Tyrosinase-like protein Proteins 0.000 description 4
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical group C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 3
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 2
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 2
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 101000609762 Gallus gallus Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 2
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical group O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 101000994818 Agrotis ipsilon Insulin-related peptide 2 Proteins 0.000 description 1
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 1
- 241000228257 Aspergillus sp. Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 241001647372 Chlamydia pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 101150101999 IL6 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 102100029251 Phagocytosis-stimulating peptide Human genes 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 241001442539 Plasmodium sp. Species 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- 108010084754 Tuftsin Proteins 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 201000011529 cardiovascular cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- LUEWUZLMQUOBSB-GFVSVBBRSA-N mannan Chemical class O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H](O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]3O)CO)[C@@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-GFVSVBBRSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000012121 regulation of immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L thiosulfate(2-) Chemical group [O-]S([S-])(=O)=O DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 229940035670 tuftsin Drugs 0.000 description 1
- IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N tuftsin Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/24—Heterocyclic radicals containing oxygen or sulfur as ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/18—Type of nucleic acid acting by a non-sequence specific mechanism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 358982 (22) Data zgłoszenia: 07.06.2001 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
07.06.2001, PCT/EP01/006433 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
13.12.2001, WO01/93905 (11) 211036 (13) B1 (51) Int.Cl.
A61K 39/39 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) A61P 37/04 (2006.01)
Opis patentowy przedrukowano ze względu na zauważone błędy
Zastosowanie cząsteczki immunostymulującego kwasu oligodezoksynukleinowego (ODN) i zawierająca ją kompozycja
(73) Uprawniony z patentu: INTERCELL BIOMEDIZINISCHE | |
(30) Pierwszeństwo: | FORSCHUNGS UND ENTWICKLUNGS AG, |
08.06.2000, AT, A1000/2000 | Wiedeń, AT |
23.11.2000, AT, A1973/2000 | (72) Twórca(y) wynalazku: |
(43) Zgłoszenie ogłoszono: 23.08.2004 BUP 17/04 | WALTER SCHMIDT, Wiedeń, AT KAREN LINGNAU, Wiedeń, AT CAROLA SCHELLACK, Wiedeń, AT ALENA EGYED, Wiedeń, AT |
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono: | |
30.04.2012 WUP 04/12 | (74) Pełnomocnik: |
rzecz. pat. Ewa Gromek |
PL 211 036 B1
Opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy zastosowania cząsteczki immunostymulującego kwasu oligodezoksynukleinowego (ODN) i zawierającej ją kompozycji.
Szczepionki mogą uratować życie (i zasoby) w większej ilości przypadków niż jakiekolwiek inne interwencje medyczne (Nossal, 1998). Dzięki ogólnoświatowym programom szczepień drastycznie zmniejszono częstość występowania wielu śmiertelnych chorób. Aczkolwiek wyobrażenie takie odnosi się do całego zestawu chorób, na przykład gruźlicy, błonicy, kokluszu, odry i tężca, to w rzeczywistości jednak brak skutecznych szczepionek dla licznych chorób zakaźnych, włącznie z większością zakażeń wirusowych, takich jak AIDS. Nie ma także żadnych skutecznych szczepionek przeciw innym chorobom, czy to zakaźnym, czy niezakaźnym, zabierającym życie milionom chorych każdego roku, w tym takim chorobom jak malaria i rak. Oprócz tego, szybki rozwój bakterii i innych drobnoustrojów opornych na antybiotyki wymaga alternatywnego leczenia przy użyciu szczepionek, co stanowi logiczny wybór.
W końcu, olbrzymie zapotrzebowanie na szczepionki ilustruje fakt, ż e raczej choroby zakaź ne, a nie choroby sercowo-naczyniowe czy rak lub urazy, ciągle jeszcze pozostają najczęstszą przyczyną śmierci i kalectwa w całym świecie (Bloom i Widdus, 1998).
Z immunologicznego punktu widzenia, głównym problemem w dziedzinie szczepionek jest dziś to, że szczepionki tradycyjne (i/lub związki immunomodulujące zawarte w tych preparatach) przeznaczone są do tego, aby powodować powstawanie wysokiego poziomu przeciwciał (Harrow i Lane, 1988). Jednakże, przeciwciała same z siebie nie są skuteczne pod względem zapobiegania wielu chorobom, włącznie z większością chorób powodowanych przez wirusy, bakterie wewnątrzkomórkowe, niektóre pasożyty i raka. Przykładowymi tego rodzaju chorobami są, ale bez ograniczania się tylko do nich, wspomniane powyżej zakażenia wirusem HIV lub, w przypadku malarii, pierwotniakami z rodzaju Plasmodium. W licznych eksperymentalnych układach wykazano, że we wskazaniach tych ważne jest raczej komórkowe ramię układu odpornościowego, włączając w to komórki T, a nie ramię humoralne. Toteż, istnieje zapotrzebowanie na nowe, innowacyjne technologie, niezbędne do pokonania ograniczeń związanych ze szczepionkami typowymi. Skupić się przy tym należy na tych technologiach, które niezawodnie prowadzą do indukowania komórkowego układu odpornościowego, włącznie z komórkami T antygenowo swoistymi, rozpoznającego cząsteczki, do ekspresji których dochodzi na komórkach zakażonych czynnikiem chorobotwórczym. W rozwiązaniu idealnym, szczepionki powinny być tak zaprojektowane, aby indukowały komórki T odróżniające komórki chore i/lub zakażone od komórek normalnych, a równocześnie, aby przeciwciała wydzielane przez komórki B rozpoznawały czynniki chorobotwórcze w przedziałach pozakomórkowych.
Szereg różnych uznanych szczepionek składa się z żywego atenuowanego organizmu i w ich przypadku istnieje ryzyko rewersji do zjadliwego szczepu typu dzikiego. Taki zagrażający życiu scenariusz może wystąpić zwłaszcza u gospodarzy o upośledzonej odporności. Alternatywnie, szczepionki stosuje się w postaci kombinacji antygenów, pochodzących od czynników chorobotwórczych, ze związkami indukującymi lub wzmagającymi odpowiedzi immunologiczne skierowane przeciw tym antygenom (związki tego rodzaju powszechnie nazywa się adiuwantami), ponieważ tego rodzaju szczepionki podjednostkowe same z siebie, na ogół, nie są skuteczne.
Aczkolwiek nie ma wątpliwości, że powyższe szczepionki są cennym lekami, występuje tu jednak ta niekorzyść, że w wyniku ich złożoności wywoływane być mogą poważne działania uboczne, na przykład, wobec antygenów zawartych w szczepionce, które manifestują krzyżową reaktywność z cząsteczkami, do ekspresji których dochodzi w komórkach osobników szczepionych. Poza tym, obowiązujące wymagania władz kontrolnych [takich jak, na przykład, Światowa Organizacja Zdrowia (WHO), Departament Kontroli Żywności i Leków (FDA) i ich partnerzy europejscy], dotyczące dokładnego wyszczególnienia składu szczepionki i mechanizmu indukowania odporności, są trudne do spełnienia. Komórki prezentujące antygen należą do wrodzonego układu odpornościowego, który rozwinął się jako pierwsza linia obrony ograniczająca zakażenie wkrótce po ekspozycji na drobnoustroje (Hoffmann i in., 1999). To raczej komórki wrodzonego układu odpornościowego rozpoznają konfiguracje czy względnie niespecyficzne struktury wyrażane na ich obiektach docelowych, niż bardziej wyrafinowane, specyficzne struktury rozpoznawane przez adaptywny układ odpornościowy (Hoffmann i in., 1999). Przykładowymi komórkami wrodzonego układu odpornościowego są makrofagi i komórki dendrytyczne, a także granulocyty (na przykład, krwinki białe obojętnochłonne), naturalne komórki K, oraz inne jeszcze komórki. W przeciwieństwie do tego, komórki adaptywnego układu odpornościowego rozpoznają specyficzne struktury antygenowe, włącznie z peptydami, jak również trójwymiarowe struktury
PL 211 036 B1 w przypadku komórek B. Adaptywny ukł ad odpornoś ciowy jest o wiele bardziej specyficzny i wyrafinowany niż wrodzony układ odpornościowy, przy czym ulepsza się on po powtarzanej ekspozycji na dany czynnik chorobotwórczy/antygen. Filogenetycznie, wrodzony układ odpornościowy jest starszy i obecność jego można stwierdzić już w organizmach bardzo prymitywnych. Tym niemniej jednak, wrodzony układ odpornościowy ma decydujące znaczenie podczas początkowej fazy ekspozycji antygenu dlatego, że oprócz zawartości czynników chorobotwórczych, komórki wrodzonego układu odpornościowego, na przykład komórki APC, piętnują komórki adaptywnego układu odpornościowego, a przez to wzbudzają swoiste odpowiedzi immunologiczne, skutkują ce oczyszczeniem z intruzów. Podsumowując, komórki wrodzonego układu odpornościowego, a w szczególności komórki APC, odgrywają decydującą rolę w trakcie indukcyjnej fazy odpowiedzi immunologicznych, przez a) powstrzymywanie zakażeń za pomocą prymitywnego systemu rozpoznawania konfiguracji i b) piętnowanie komórek adaptywnego układu odpornościowego prowadzące do zaistnienia swoistych odpowiedzi immunologicznych i pamięci, w wyniku czego dochodzi do oczyszczenia z będących intruzami czynników chorobotwórczych lub innych obiektów docelowych (Roitt i in., 1998). Mechanizmy te mogą także mieć ważne znaczenie, jeśli chodzi o pozbycie się lub powstrzymanie rozwoju komórek rakowych. Jak wyżej wspomniano, komórki wrodzonego układu odpornościowego rozpoznają konfiguracje wyrażone na ich poszczególnych obiektach docelowych. Przykładowo wymienić tu można lipopolisacharydy (LPS) w przypadku bakterii Gram-ujemnych, prątkowe glikolipidy, kwasy lipoteichowe lub bakterie Gram-dodatnie, mannany z drożdży i dwuniciowe RN wirusów (Hoffmann, 1999). Poza tym, mogą one rozpoznawać konfiguracje takie, jak zmienione glikozylacje białek na komórkach nowotworowych.
W opisach współczesnych odkryć podaje się DNA pierwotniaków lub niższych eukariontów jako dalsze przykłady rozpoznawane przez wrodzony (ale także, być może, adaptywny) układ odpornościowy ssaków (i, prawdopodobnie, większości, jeśli nie wszystkich, kręgowców) (Krieg, 1996; Lipford i in., 1998).
Układ odpornościowy rozpoznaje niższe organizmy, włącznie z bakteriami, przypuszczalnie dzięki strukturalnym i sekwencyjnym różnicom występującym między DNA czynnika chorobotwórczego i DNA gospodarza. W szczególności, obiektami docelowymi stają się krótkie fragmenty sekwencji DNA, pochodzące od niekręgowców lub występujące w postaci krótkich syntetycznych ODN zawierających niezmetylowane dinukleotydy cytozynoguaninowe (CpG) w pewnym kontekście zasad (Krieg i in., 1995). Stwierdzono, że motywy CpG występują z oczekiwaną częstotliwoś cią w DNA bakteryjnym, ale o wiele rzadziej w DNA kręgowców (Lipford i in., 1998; Pisetsky, 1999). Oprócz tego, motywy CpG niekręgowców (a więc bakteryjne) nie są zmetylowane, podczas gdy sekwencje CpG kręgowców są zmetylowane. Te różnice między bakteryjnym DNA i DNA kręgowców pozwalają kręgowcom rozpoznawać DNA niekręgowców jako sygnał niebezpieczeństwa.
Naturalne DNA zawierające CpG, ODN, jak również podstawione tiofosforanem (wymiana reszt fosforanowych na tiofosforanowe) ODN zawierające motywy CpG są nie tylko silnymi aktywatorami proliferacji komórek immunologicznie kompetentnych i humoralnych odpowiedzi immunologicznych (Krieg i in., 1995), ale także stymulują silne komórkowe odpowiedzi immunologiczne (przegląd w: Lipford i in., 1998). DNA/ODN zawierające niezmetylowane motywy CpG mogą bezpośrednio aktywować komórki monocytowe (komórki dendrytyczne, makrofagi) i komórki B. Podobnie, naturalne komórki-zabójcy (NK) nie ulegają aktywacji bezpośredniej, ale odpowiadają na kontakt z IL-12 (interleukiną 12) pochodzącą od monocytów, ze znacznym zwiększeniem wytwarzania swych IFN-γ (Chace i in., 1997). W rezultacie, indukcja monocytów i komórek NK przez DNA z CpG pobudza indukcję odpowiedzi typu Th1 i rozwój cytotoksycznych komórek T.
Kwas rybonukleinowy oparty na inozynie i cytozynie, taki jak kwas poliinozynowy-policytydylowy (poli I:C) znany jest z tego, że pobudza odpowiedzi immunologiczne swoiste względem Th1. Znany jest też ze stymulowania wytwarzania przez makrofagi cytokin takich jak IL-1a i IL-12 (Manetti i in., 1995), a także z tego, że jest silnie działającym czynnikiem indukującym tworzenie się interferonu typu 1 (Manetti i in., 1995) i silnym stymulatorem komórek NK (Cavanaugh i in., 1996).
Jednakże, aktywność ta była ściśle ograniczona do kwasu rybonukleinowego zawierającego reszty inozyny i cytydyny (W098/16247).
Wyniki badań przeprowadzonych przez twórców niniejszego wynalazku wykazały, że ODN zawierające motywy niezmetylowanych sekwencji CpG, chociaż skuteczne pod względem stymulowania układu immunologicznego, mają jednak zasadnicze wady, zwłaszcza jeśli chodzi o swoistość (wysokie tło) i działania uboczne, takie jak układowe tworzenie się TNF-α To układowe uwalnianie TNF-α znane
PL 211 036 B1 jest z tego, że powoduje zespół wstrząsu toksycznego, który może doprowadzić do śmierci dotkniętych nim pacjentów.
Celem niniejszego wynalazku są odpowiednie, nowe ODN, bez tego rodzaju drastycznych działań ubocznych, jakie obserwuje się w przypadku ODN opartych na sekwencjach CpG. Celem niniejszego wynalazku jest także zmniejszenie działania ubocznego kompozycji farmaceutycznych zawierających znane ODN i dostarczenie bezpiecznych i skutecznych, dobrze tolerowanych kompozycji farmaceutycznych o skutecznych właściwościach immunostymulujących, odpowiednich do szczepienia zwierząt, zwłaszcza saków, oraz ludzi. Cel ten został osiągnięty przez opracowanie cząsteczki immunostymulującego kwasu oligodezoksynukleinowego (ODN) według wynalazku.
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie cząsteczki immunostymulującego kwasu oligodezoksynukleinowego (ODN) o budowie przedstawionej wzorem (I), w którym:
X oznacza O lub S,
NMP oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmującej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno-, dezoksyinozyno-, dezoksycytozyno-, dezoksyurydyno-, dezoksytymidyno-, 2-metylodezoksyinozyno-, 5-metylodezoksycytozyno-, dezoksypseudourydyno-, dezoksyrybozopuryno-, 2-aminodezoksyrybozopuryno-, 6-S-dezoksyguanino-, 2-dimetylodezoksyguanozyno- lub N-izopentenylodezoksyadenozynomonofosforan lub -monotiofosforan,
NUC oznacza 2'-dezoksynukleozyd, wybrany z grupy obejmującej dezoksyadenozynę, dezoksyguanozynę, dezoksyinozynę, dezoksycytozynę, dezoksyurydynę, dezoksytymidynę, 2-metylodezoksyinozynę, 5-metylodezoksycytozynę, dezoksypseudourydynę, dezoksyrybozopurynę, 2-aminodezoksyrybozopurynę, 6-S-dezoksyguanidynę, 2-dimetylodezoksyguanidynę lub N-izopentenylodezoksyadenozynę, a i b oznaczają liczby całkowite od 0 do 100, z tym, że suma a + b mieści się w zakresie od 4 do 150,
B i E oznaczają grupy zwykłe dla końców 5' i 3' cząsteczek kwasów nukleinowych, do wytwarzania immunostymulującej kompozycji farmaceutycznej.
Korzystnie, cząsteczkę ODN stanowi cząsteczka oligo-C28.
Korzystnie, każda grupa o symbolu NMP jest wybrana z grupy obejmującej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno-, dezoksyinozyno-, dezoksycytozyno-, dezoksyurydyno-, dezoksytymidyno-, 2-metylodezoksyinozyno-, 5-metylodezoksycytozynomonofosforan lub -monotiofosforan.
Korzystnie, że suma a + b mieści się w zakresie od 10 do 60, korzystnie w zakresie od 15 do 40.
Korzystnie, co najmniej jeden z symboli X1 i X2 oznacza S i co najmniej jeden z symboli X3 i X4 oznacza O, oraz korzystnie, którykolwiek NMP oznacza nukleozydomonotiofosforan.
Korzystnie, ODN zawiera sekwencję nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn, nhh wdi din hhh hdi ndi nh, nhh hhh wdi dhh hhh hhh wn lub nhh wdi did hhh hdi ddi dh, przy czym:
którykolwiek n oznacza 2-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmują cej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno-, dezoksycytozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan, którykolwiek h oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmują cej dezoksyadenozyno-, dezoksycytozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan, i oznacza dezoksyinozynomonofosforan lub -monotiofosforan,
PL 211 036 B1 którykolwiek w oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmującej dezoksyadenozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan, oraz którykolwiek d oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmują cej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub
-monotiofosforan.
Korzystnie, ODN zawiera sekwencję hhh wdi dhh h.
Korzystnie, ODN zawiera co najmniej jeden 2'-dezoksycytozyno-monofosforan lub -monotiofosforan, przyległy w pozycji 3' do 2'-dezoksyinozynomonofosforanu lub -monotiofosforanu.
Korzystniej, ODN zawiera deoksyinozynę-deoksycytozynę 26-mer.
Korzystnie, ODN zawiera sekwencję:
gacitt, iacitt, gaictt, iaictt, przy czym:
a oznacza dezoksyadenozynomonofosforan lub -monotiofosforan, g oznacza dezoksyguanozynomonofosforan lub -monotiofosforan, i oznacza dezoksyinozynomonofosforan lub -monotiofosforan, c oznacza dezoksycytozynomonofosforan lub -monotiofosforan, oraz t oznacza dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan.
Korzystniej, gacitt stanowi tcc atg aci ttc ctg atg ct.
Korzystnie, ODN zawiera sekwencję:
wdi, wdid, wdidin lub wdidid, przy czym:
w, d, i oraz n mają wyżej podane znaczenie.
Korzystnie, B i E są, niezależnie, wybrane z grupy obejmującej -H, -CH3, -COH, -COCH3, -OH, -CHO, -PO4, -PSO3, -PS2O2, -PS3O, -PS4, -SO3, -PO4(CH2)1-6-NH2 lub -PO4-(CH2)1-6-NH-znacznik.
Korzystnie, immunostymulującą kompozycją farmaceutyczną jest wacyna.
Przedmiotem wynalazku jest również kompozycja farmaceutyczna, która zawiera ODN jak określono wyżej.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto kompozycja farmaceutyczna, która zawiera ODN jak określono wyżej oraz antygen.
Korzystnie, kompozycja farmaceutyczna zawiera jeszcze polimer polikationowy, korzystnie peptyd polikationowy, zwłaszcza poliargininę, polilizynę lub peptyd przeciwbakteryjny, zwłaszcza przeciwbakteryjny peptyd wywodzący się z katelicydyny, syntetyczny peptyd zawierający 2KLK-motywy przedzielone łącznikiem o 3-7 hydrofobowych aminkokwasach, albo hormon wzrostu, zwłaszcza ludzki hormon wzrostu.
Korzystnie, kompozycja farmaceutyczna zawiera jeszcze składniki aktywne, zwłaszcza cytokiny, substancje przeciwzapalne, substancje przeciwbakteryjne lub ich kombinacje.
Korzystnie, kompozycja farmaceutyczna zawiera jeszcze substancje pomocnicze, zwłaszcza farmaceutycznie dozwolony nośnik, substancje buforowe, stabilizatory lub ich kombinacje.
Korzystnie, kompozycja farmaceutyczna zawiera jeden, lub więcej niż jeden ODN w ilości mieszczącej się w zakresie od 1 ng do 1 g, korzystnie w zakresie od 100 ng do 10 mg, a zwłaszcza w zakresie od 10 mg do 1 mg.
Nieoczekiwanie stwierdzono, że ODN zawierające reszty dezoksyinozyny (I-ODN) wykazują działanie immunostymulujące porównywalne z działaniem ODN zawierających motywy CpG, a w wielu przypadkach nawet lepsze od niego. Co więcej, ODN według niniejszego wynalazku dają więcej swoistych odpowiedzi immunologicznych na kontakt z danym antygenem lub fragmentem antygenu niż
CpG-ODN. Poza tym, ODN według niniejszego wynalazku redukowały indukcję szkodliwych reakcji ubocznych, a zwłaszcza indukcję układowego TNF-α lub IL-6. Podczas, gdy pewne działania immunostymulujące opisano w przypadku cząsteczek RNA zawierających inozynę (takich jak poli-IC lub cząsteczki wymienione w dokumencie patentowym W098/16247), to nieoczekiwanie stwierdzono, że także cząsteczki kwasu dezoksynukleinowego zawierające reszty dezoksyinozyny mogą być dobrymi immunostymulującymi ODN. Poza tym, I-ODN według niniejszego wynalazku, w przeciwieństwie do
PL 211 036 B1
ODN opartych na specyficznym motywie CpG, nie zależą od specyficznego motywu lub sekwencji palindromowej, jak to opisano dla oligonukleotydów z CpG (patrz, na przykład: EP 0468 520 A2, WO96/02555, WO98/18810, WO98/37919, WO98/40100, WO98/52581, WO99/51259 i WO99/56755, wszystkie te dokumenty włączone do niniejszego opisu jako odnośniki). Toteż, jedna grupa I-ODN według niniejszego wynalazku może, korzystnie, zawierać motyw CI [stąd właśnie ODN opisane w tych dokumentach włączonych do niniejszego opisu jako odnośniki (w których to ODN jedna, lub więcej niż jedna reszta guanozyny jest zastąpiona resztą dezoksyinozyny) stanowią korzystne wykonania ODN według niniejszego wynalazku]. Nie jest to konieczne dla podstawowej właściwości polegającej na immunostymulowaniu, ponieważ I-ODN z inozyną nie umieszczoną w kontekście CI lub IC wykazują równie dobre właściwości immunostymulujące.
Tak więc, I-ODN według niniejszego wynalazku stanowi cząsteczkę zawierającą resztę dezoksyinozyny, korzystnie obecną w postaci pojedynczej nici.
I-ODN według niniejszego wynalazku można wyodrębniać metodami rekombinantowymi, albo otrzymywać na drodze syntezy chemicznej. W tym ostatnim przypadku, I-ODN według niniejszego wynalazku mogą zawierać także oligonukleotydy zmodyfikowane, które można zsyntetyzować z wykorzystaniem typowych transformacji chemicznych, takie jak metylofosfoniany, albo, też w oparciu o fosfor, ale inaczej zmodyfikowane oligonukleotydy, takie jak fosfotriestry, fosfoamidany i ditiofosforany. Uż yć można także innych, nie zmodyfikowanych w oparciu o fosfor oligonukleotydów [Stirchak i in., MAR 17, 6129 - 6141 (1989)], jednakże w niniejszym wynalazku jako 2'-dezoksynukleozydomonofosforanów korzystnie używa się monofosforanów lub monotiofosforanów. NMP w I-ODN według niniejszego wynalazku korzystnie dobiera się z grupy obejmującej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno-, dezoksyinozyno-, dezoksycytozyno-, dezoksyurydyno-, dezoksytymidyno-, 2-metylodezoksyinozyno-, 5-metylodezoksycytozynomonofosforan lub -monotiofosforan (jak zwykle, ugrupowanie fosforanu lub tiofosforanu znajduje się w pozycji 5' dezoksyrybozy). Podczas, gdy jest rzeczą istotną dla ODN opartych na motywie CpG, aby motyw ten nie był zmetylowany, nie obowiązuje to, nieoczekiwanie, w przypadku ODN według niniejszego wynalazku. I tak, na przykład, reszty 2-metylodezoksyinozyny lub 5-metylodezoksycytozyny nie wywierają żadnego ogólnego ujemnego wpływu na właściwości immunostymulujące ODN według niniejszego wynalazku. Alternatywnie, zamiast postaci 2-dezoksy NMP, w pozycji 2 ugrupowania rybozy mogą występować także inne, zwłaszcza obojętne, grupy, takie jak, na przykład, -F, -NH2, -CH3, szczególnie -CH3. Oczywiście, dla I-ODN według niniejszego wynalazku wykluczona jest obecność grup -OH i SH w pozycji 2' rybozy, zwłaszcza reszty rybozy dla inozynowych NMP.
Długość ODN według niniejszego wynalazku mieści się w zakresie długości typowych ODN stosowanych w dotychczasowym stanie techniki. Toteż, cząsteczki o ogólnej długości poniżej 4 i powyżej 150 wykazują stopniowe obniżenie potencjału immunostymulacyjnego. Korzystne ODN zawierają od 10 do 60, a zwłaszcza od 15 do 40 zasad (nukleozydów), zakładając, ż e w tych korzystnych wykonaniach wynalazku suma a + b we wzorze I mieści się w zakresie od 10 do 60, korzystnie w zakresie od 15 do 40.
Podczas, gdy cząsteczki kwasu rybonukleinowego zawierające inozynę i cytydynę, opisane jako immunostymulujące w dotychczasowym stanie techniki, stanowią duże i względnie nieokreślone kwasy polinukleinowe o masie cząsteczkowej daleko większej od 200000 [dostępny w handlu kwas poliinozynowy-policytydylowy z firmy Sigma Chemicals ma masę cząsteczkową mieszczącą się w zakresie od 220000 do 460000 (co najmniej 500 - 1000 reszt C + I)], to czą steczki wedł ug niniejszego wynalazku stanowią cząsteczki DNA o znacznie mniejszej długości, mają dobrze określoną długość i skład i są w wysokim stopniu odtwarzalne w produktach.
W dalszym cią gu korzystne jest to, ż e obejmują cy dezoksyinozynę NMP w I-ODN wedł ug wzoru I stanowi monotiofosforan zawierający od 1 do 4 atomów siarki, a także i to, że również dalsze NMP, a zwł aszcza wszystkie dalsze NMP, obecne są jako nukleozydomonotiofosforany, ponieważ takie ODN manifestują wyższą odporność na działanie nukleazy [z punktu widzenia niniejszego wynalazku jest oczywiste, że „mono w „monotiofosforanach odnosi się do fosforanu, co oznacza, że w każdym NMP obecne jest jedno ugrupowanie fosforanowe (jeden atom fosforu)]. Korzystnie, w NMP według niniejszego wynalazku co najmniej jeden z symboli X1 i X2 oznacza S i co najmniej jeden z symboli X3 i X4 oznacza O. Korzystnie, X3 i X4 oznaczają O. [Podstawnik o symbolu X3 moż e wywodzić się (w rezultacie syntezy NMP) na przykład z grupy fosforanowej albo z grupy 3' NMP-rybozy].
Korzystnie, ODN według niniejszego wynalazku zawierają sekwencję: nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn, nhh wdi din hhh hdi ndi nh,
PL 211 036 B1 nhh hhh wdi dhh hhh hhh wn lub nhh wdi did hhh hdi ddi dh, przy czym:
którykolwiek n oznacza 2-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmują cej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno-, dezoksycytozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan, którykolwiek h oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmują cej dezoksyadenozyno-, dezoksycytozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan, i oznacza dezoksyinozynomonofosforan lub -monotiofosforan, którykolwiek w oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmującej dezoksyadenozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan, oraz którykolwiek d oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmują cej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan. Jak to w sposób ogólny przedstawiono powyżej, dla I-ODN według niniejszego wynalazku nie jest potrzebny specyficzny motyw (taki, jak CpG lub palindrom). Jednakże, korzystne są ODN zawierające motyw CI, tak, że w korzystnym wykonaniu wynalazku ODN o wzorze I zawiera co najmniej jeden 2'-dezoksycytozy-nomonofosforan lub -monotiofosforan przyległy w pozycji 3' do 2'-dezoksyinozynomonofosforanu lub -monotiofosforanu, z utworzeniem takiego właśnie motywu 5'-CI 3'.
Korzystne ODN według niniejszego wynalazku zawierają jedną, lub więcej niż jedną sekwencję:
gacitt, iacitt, gaictt, iaictt, przy czym:
a oznacza dezoksyadenozynomonofosforan lub -monotiofosforan, g oznacza dezoksyguanozynomonofosforan lub -monotiofosforan, i oznacza dezoksyinozynomonofosforan lub -monotiofosforan, c oznacza dezoksycytozynomonofosforan lub -monotiofosforan, oraz t oznacza dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan.
I-ODN według niniejszego wynalazku w sposób szczególny nadają się do wykorzystania w dziedzinie farmacji, na przykład do stosowania jako leki dla zwierzą t lub ludzi. Są one specyficznie przystosowane do działania jako środki immunostymulujące, zwłaszcza w składzie kompozycji stanowiących szczepionki lub łącznie z takimi kompozycjami. Wynalazek niniejszy dotyczy także kompozycji farmaceutycznej zawierającej ODN według niniejszego wynalazku.
Ponieważ korzystną kompozycją farmaceutyczną według niniejszego wynalazku jest szczepionka, to kompozycja taka powinna zawierać oprócz ODN według niniejszego wynalazku także i antygen. Potencjał tego antygenu wzmagający ochronę/odpowiedź immunologiczną zaszczepionego osobnika ulega silnemu podwyższeniu przez skombinowanie go z ODN według niniejszego wynalazku, a to dzięki ich aktywności immunostymulującej.
Szczepionka może zawierać pełen asortyment rozmaitych antygenów. Przykładowymi antygenami są: zabite w całości organizmy, takie jak zdezaktywowane wirusy lub bakterie, grzyby, pierwotniaki a nawet komórki rakowe. Antygeny mogą także składać się z podfrakcji tych organizmów/tkanek, białek lub, w swej najprostszej postaci, z peptydów. Antygeny mogą być także rozpoznane przez układ odpornościowy w postaci glikozylowanych białek lub peptydów i mogą także stanowić, lub zawierać, polisacharydy lub lipidy. Można użyć krótkich peptydów, ponieważ, na przykład, limfocyty T cytotoksyczne (CTL) rozpoznają antygeny w postaci krótkich (zazwyczaj o długości od 8 do 11 aminokwasów) peptydów łącznie z głównym układem zgodności tkankowej (MHC) [Rammensee i in., Immunogenetics, 41, 178 - 228 (1995)1. Komórki B rozpoznają dłuższe peptydy, od około 15 aminokwasów [Harrow i in., Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory (1988)]. W przeciwieństwie do epitopów komórek T, trójwymiarowa struktura antygenów komórek B także może mieć ważne znaczenie dla rozpoznania przeciwciał. Do uzyskania przedłużonych, antygenowo swoistych odpowiedzi immunologicznych, pomocne okazują się adiuwanty, mianowicie przy wyzwalaniu kaskad immunologicznych, które wymagają zaangażowania wszystkich komórek układu immunologicznego. Pierwotnie czynne są adiuwanty, ale nie są one ograniczone w sposobie swego działania na tak zwanych komórkach prezentujących antygeny (APC). Komórki te zazwyczaj wpierw spotykają się z antygenem(ami),
PL 211 036 B1 po czym następuje prezentacja poddanego obróbce lub niezmodyfikowanego antygenu efektorowi immunologicznemu. Mogą także być zaangażowane pośrednie typy komórek. Jedynie komórki efektorowe o odpowiedniej swoistości są zaktywowane w produkcyjnej fazie odpowiedzi immunologicznej. Adiuwant może także miejscowo zatrzymywać antygeny i współwstrzyknięte inne czynniki. Oprócz tego, adiuwant może być czynny jako chemoatraktant dla innych komórek immunologicznie kompetentnych, albo może też działać miejscowo i/lub układowo jako środek stymulujący układ immunologiczny.
Zgodnie z korzystnym sposobem wykonania wynalazku, jako antygeny stosuje się epitopy komórek T. Alternatywnie, może też okazać się korzystna kombinacja epitopów komórek T i epitopów komórek B.
Rodzaj antygenów przewidzianych do użycia w kompozycji według niniejszego wynalazku nie jest decydujący. Oczywiście, w niniejszym wynalazku można wykorzystać także mieszaniny rozmaitych antygenów. Korzystnie, jako tego rodzaju antygeny stosuje się białka lub peptydy pochodzące od wirusów lub bakterii chorobotwórczych, albo od grzybów lub pasożytów (włącznie z antygenami derywatyzowanymi, antygenami glikozylowanymi, antygenami lipidowanymi albo polisacharydami lub lipidami). Innym korzystnym źródłem antygenów są antygeny nowotworowe. Korzystne czynniki chorobotwórcze wybiera się z grupy obejmującej ludzki wirus upośledzenia odporności (HIV), wirusy zapalenia wątroby typu A i typu B, wirus zapalenia wątroby typu C (HCV), wirus mięsaka Rousa (RSV), wirus Epsteina i Barr (EBV), wirus grypy, rotawirus, Staphylococcus aureus, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Mycobacterium tuberculosis, Streptococcus pneumoniae, Bacillus anthracis, Vibrio cholerae, Plasmodium sp. (PI. falciparum, Pi. vivax itd.), Aspergillus sp. lub Candida albicans. Antygenami mogą być także cząsteczki, których ekspresja dokonuje się z udziałem komórek rakowych (antygeny nowotworowe). Proces derywatyzacji może obejmować wyodrębnianie specyficznego białka z czynnika chorobotwórczego/komórek rakowych, inaktywację czynnika chorobotwórczego, jak również proteolityczną lub chemiczną derywatyzację lub stabilizację białka tego rodzaju. W taki sam sposób można wykorzystać w składzie kompozycji według niniejszego wynalazku także antygeny nowotworowe (szczepionki rakowe) albo antygeny autogeniczne. W przypadku takich kompozycji można przeprowadzić szczepienie szczepionką nowotworową lub leczenie choroby autoimmunizacyjnej. W przypadku antygenów peptydowych, wynalazek obejmuje swym zakresem zastosowanie peptydowych mimitopów/agonów/superagonów/antagonów lub peptydów zmienionych w niektórych pozycjach bez wpływu na ich właściwości immunologiczne (przegląd w: Sparbier i Walden, 1999). Antygeny peptydowe mogą także zawierać, albo przy C-końcu, albo przy N-końcu antygenu peptydowego, elongacje ułatwiające wzajemne oddziaływanie ze związkiem (związkami) polikationowymi lub immunostymulującymi. Do leczenia chorób autoimmunizacyjnych można użyć antagonów peptydowych.
Antygeny można także derywatyzować, w celu włączenia cząsteczek wzmagających prezentację antygenu i nacelowujących antygeny na komórki prezentujące antygen.
W jednym z wykonań niniejszego wynalazku, kompozycja farmaceutyczna sł u ż y do nadawania tolerancji białkom lub fragmentom białek i peptydom zaangażowanym w chorobach autoimmunizacyjnych. Antygeny używane w takich wykonaniach wynalazku służą nadawaniu tolerancji układowi immunologicznemu, albo supresyjnej regulacji odpowiedzi immunologicznych skierowanych przeciw epitopom zaangażowanym w procesach autoimmunizacyjnych.
Korzystnie, kompozycja farmaceutyczna według niniejszego wynalazku, zwłaszcza w postaci szczepionki, zawiera jeszcze polimer polikationowy, korzystnie peptyd polikationowy, a zwłaszcza poliargininę, polilizynę lub przeciwbakteryjny peptyd.
Związkiem (związkami) polikationowymi przeznaczonymi do stosowania według niniejszego wynalazku mogą być jakiekolwiek związki polikationowe przejawiające charakterystyczne działanie zgodne z opisem zamieszczonym w dokumencie patentowym WO 97/30721. Korzystne związki polikationowe wybiera się z grupy obejmującej polipeptydy zasadowe, polikationy organiczne, poliaminokwasy zasadowe lub ich mieszaniny. Wspomniane poliaminokwasy powinny mieć długość wynoszącą co najmniej 4 reszty aminokwasów [patrz: tuftsyna, jak opisano w: Goldman i in., (1983)]. Szczególnie korzystne są substancje zawierające wiązania peptydowe, takie jak polilizyna, poliarginina i polipeptydy zawierające więcej niż 20%, zwłaszcza ponad 50% zasadowych aminokwasów, w liczbie ponad 8, a zwł aszcza ponad 20 reszt aminokwasowych lub ich mieszanin. Inne korzystne polikationy i zawierające je kompozycje farmaceutyczne są opisane w dokumentach patentowych WO 97/30721 (na przykład, polietylenoimina) i WO 99/38528. Korzystnie, polipeptydy te zawierają od 20 do 500 reszt aminokwasów, w szczególności od 30 do 200 reszt. Tego rodzaju związki polikationowe można wytwarzać chemicznie lub rekombinacyjnie, albo też można je uzyskiwać ze źródeł naturalnych.
PL 211 036 B1 (Poli)peptydami kationowymi mogą być też polikationowe, przeciwbakteryjne peptydy drobnoustrojowe o właściwościach podanych przeglądowo w: Ganz i Lehrer, (1999); Hancock, (1999). (Poli)peptydy te mogą pochodzić od zwierząt lub roślin, względnie można je wytworzyć chemicznie lub rekombinacyjnie (Andreu i Rivas, 1998; Ganz i Lehrer, 1999; Simmaco i in., 1998). Peptydy te mogą także należeć do grupy defenzyn (Ganz, 1999; Ganz i Lehrer, 1999). Sekwencje tych peptydów można znaleźć, na przykład, w Antimicrobial Sequences Database pod następującym adresem internetowym: http://www.bbcm.univ.trieste.it/~tossi/pagl.html
Takie peptydy obronne lub defenzyny także stanowią korzystną formę polimeru polikationowego według niniejszego wynalazku. Ogólnie, jako polimeru polikationowego używa się związku umożliwiającego, jako produkt końcowy, aktywację (lub regulację supresyjną) adaptywnego układu immunologicznego, korzystnie takiego, w którym pośredniczą APC (włącznie z komórkami dendrytycznymi).
Specjalnie korzystne, jeśli chodzi o użycie jako substancji polikationowych w niniejszym wynalazku, okazują się wywodzące się z katelicydyny przeciwbakteryjne peptydy lub ich pochodne (dokument patentowy A 1416/2000, włączony do niniejszego opisu jako odnośnik), a zwłaszcza peptydy przeciwbakteryjne wywodzące się z katelicydyny ssaków, korzystnie z katelicydyny ludzkiej, bydlęcej lub mysiej, albo związki neuroaktywne, takie jak (ludzki) hormon wzrostu (somatotropina).
Do związków polikationowych pochodzących ze źródeł naturalnych należą HIV-REV lub HIV-TAT (pochodne peptydy kationowe, peptydy antennapedia, chitozan i inne pochodne chityny) lub inne peptydy pochodzące od tych peptydów lub białek, otrzymane metodą biochemiczną lub rekombinacyjną. Innymi korzystnymi związkami polikationowymi są katelina, albo substancje pokrewne katelinie lub pochodzące od niej. I tak, na przykład, katelina mysia jest peptydem o następującej sekwencji aminokwasów:
NH2-RLAGLLRKGGEKIGEKLKKIGOKIKNFFQKLVPQPE-COOH.
Substancje pokrewne katelinie lub pochodzące od niej, zawierają całość lub części sekwencji kateliny o co najmniej 15 - 20 resztach aminokwasowych. Derywatyzacja może obejmować podstawienie lub modyfikację naturalnych aminokwasów przez aminokwasy, nie należące do grupy 20 występujących powszechnie aminokwasów typowych. Ponadto, do tego rodzaju cząsteczek kateliny wprowadzić można dalsze reszty kationowe.
Korzystnie, te kationowe cząsteczki kombinuje się z antygenem i immunogennym ODN według niniejszego wynalazku. Jednakże, nieoczekiwanie stwierdzono, że takie cząsteczki kateliny są skuteczne także jako adiuwant dla antygenu i to bez dodatku innych adiuwantów. Tak więc, stało się możliwe użycie tego rodzaju cząsteczek kateliny jako skutecznych adiuwantów w preparatach szczepionek wraz z innymi substancjami immunoaktywującymi lub bez nich.
Inną korzystną substancją polikationową nadającą się do wykorzystania w niniejszym wynalazku jest peptyd syntetyczny zawierający co najmniej 2 motywy KLK, przedzielone łącznikiem o 3 - 7 hydrofobowych aminokwasach (dokument patentowy A 1789/2000, włączony do niniejszego opisu jako odnośnik). Bardzo zaskakujący był fakt, że efekt immunostumulacyjny powodowany przez kompozycję farmaceutyczną według niniejszego wynalazku okazał się znacząco większy niż można było tego oczekiwać na podstawie zsumowania skutków działania wszystkich poszczególnych składników, a nawet zsumowania skutków działania ODN lub polikationu i antygenu. Symbole B i E we wzorze I oznaczają grupy zwykłe dla końców 5' i/lub 3' cząsteczek kwasów nukleinowych. Przykłady grup tego rodzaju są łatwo dostępne dla specjalistów w tej dziedzinie techniki [patrz, na przykład: Oligonucleotides and Analogues - A Practical Approach red. Eckstein, Oxford University Press (1991)]. W przypadku I-ODN według niniejszego wynalazku B i/lub E korzystnie dobiera się, niezależnie, z grupy obejmującej -H, -CH3, -COCH3, -OH, -CHO, ugrupowanie fosforanu, tiofosforanu, siarczanu lub tiosiarczanu, albo grupę fosfoalkilową, szczególnie z częścią alkilową o długości C1 - C6 i/lub z końcową grupą aminową (grupy aminowej można w dalszym ciągu użyć do dalszego znakowania I-ODN według niniejszego wynalazku, na przykład: -PO4-(CH2)n-NH2 lub -PO4-(CH2)n-NH-znacznik). Szczególnie korzystne jako B są nukleozydy, a zwłaszcza wyżej wspomniane 2'-dezoksynukleotydy (to jest bez ugrupowań fosforanowych lub tiofosforanowych). Alternatywnie, ugrupowania takie mogą także zawierać grupy łącznikowe, łączące z innymi cząsteczkami, w szczególności cząsteczkami nośnika lub znacznikami. W takich postaciach ODN, w których są one związane ze stałymi powierzchniami, cząstkami lub znacznikami, powierzchnie takie, cząstki, znaczniki itd. także stanowią część grup o symbolu B i/lub E.
Oczywiście, jakiekolwiek postacie zjonizowane (sole) lub tautomeryczne cząsteczek według wzoru I są objęte zakresem wspomnianego wzoru I.
PL 211 036 B1
Kompozycja farmaceutyczna według niniejszego wynalazku może jeszcze obejmować dalsze składniki aktywne (substancje farmaceutycznie aktywne), w szczególności substancje nadające się do wykorzystania w szczepionkach. Korzystnymi przykładowymi dalszych składnikami aktywnymi tego rodzaju są cytokiny, substancje przeciwzapalne, substancji przeciwbakteryjne lub ich kombinacje.
Oczywiście, kompozycja farmaceutyczna według niniejszego wynalazku może jeszcze zawierać substancje pomocnicze, w szczególności farmaceutycznie dozwolony nośnik, substancje buforujące, stabilizatory lub ich kombinacje.
Względne ilości składników obecnych w kompozycji farmaceutycznej według niniejszego wynalazku w wysokim stopniu zależą od wymagań odnoszących się do danego antygenu i konkretnego zwierzęcia/człowieka, któremu ta kompozycja ma być zaaplikowana. Stąd też, kompozycja farmaceutyczna według niniejszego wynalazku korzystnie może zawierać jeden, lub więcej niż jeden ODN według niniejszego wynalazku, korzystnie w ilości mieszczącej się w zakresie od 1 pg do 10 g, także korzystnie w zakresie od 1 ng do 1 g, korzystniej w zakresie od 100 ng do 10 mg, a zwłaszcza w zakresie od 10 mg do 1 mg. Antygen, a również polimer polikationowy stosuje się w podobnych dawkach, przy czym korzystnie substancje te stosuje się w ilości mieszczącej się w zakresie od 1 do 10000 mg antygenu i w zakresie od 0,1 do 1000 mg polikationu na jedno szczepienie.
Kompozycje według niniejszego wynalazku można stosować u chorego, na przykład u osobnika kandydującego do szczepienia, w ilości skutecznej, na przykład w przedziałach czasowych jedno- lub dwutygodniowych, albo miesięcznych. Pacjenci przewidziani do leczenia kompozycjami według niniejszego wynalazku także mogą być zaszczepiani wielokrotnie lub tylko jeden raz. Korzystne wykorzystanie niniejszego wynalazku polega na aktywnym uodpornieniu, zwłaszcza ludzi lub zwierząt nie zabezpieczonych przeciw konkretnemu antygenowi. Rodzaj drogi podawania kompozycji według niniejszego wynalazku nie jest decydujący i odpowiednie jest w tym przypadku podskórne, domięśniowe, doskórne lub przezskórne podawanie leku, jak również przyjmowanie go drogą doustną. Możliwe jest także oddzielne stosowanie kompozycji według niniejszego wynalazku, to znaczy przez wstrzyknięcie substancji immunostymulującej oddzielnie od kompozycji antygen/polikation. Toteż, wynalazek niniejszy ukierunkowany jest także na zestaw zawierający jako jeden swój składnik kompozycję składającą się z antygenu i polimeru polikationowego, i jako drugi składnik kompozycję obejmującą substancję immunostymulującą lub chemotaktyczną. Składniki kompozycji można stosować w tym samym miejscu lub czasie, jednakże możliwe jest także stosowanie ich w różnych miejscach i w różnym czasie lub w rozmaitych okresach. Można także dokonywać zmian w układowym lub miejscowym stosowaniu kompozycji lub jej składników.
Szczegóły niniejszego wynalazku opisano w następujących przykładach i przedstawiono na figurach, oczywiście nie ograniczających zakresu wynalazku w jakikolwiek sposób. Fig 1. przedstawia odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciw pochodzącemu z owoalbuminy peptydowi OVA257-264 po wstrzyknięciu OVA257-264, poli-L-argininy (pR 60) i zawierających dezoksyinozynę I oligodezoksynukleotydów (I-ODN) lub CpC 1668. Myszom wstrzyknięto w poduszeczki tylnych łap mieszaniny pokazane na figurze. Po upływie 4 dni limfocyty węzłów chłonnych drenujących stymulowano ex vivo OVA257-264. Liczbę komórek produkujących IFN-g oznaczone po upływie 24 godzin z zastosowaniem testu ELISPOT. Otrzymane wyniki wyrażono jako liczbę plam/1x106 komórek węzłów chłonnych.
Fig. 2 przedstawia indukcję wytwarzania układowego TNF-a po wstrzyknięciu OVA257-264, poli-L-argininy (pR 60) i zawierających I oligodezoksynukleotydów (I-ODN) lub CpG 1668. Myszom wstrzyknięto w poduszeczki tylnych łap mieszaniny pokazane na figurze. Po upływie godziny od wstrzyknięcia, z żyły ogonowej pobrano krew i sporządzono preparat surowicy. Techniką ELISA oznaczono w surowicach stężenie TNF-a.
Fig. 3 przedstawia odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciw pochodzącemu z owoalbuminy peptydowi OVA257-264, po wstrzyknięciu OVA257-264, poli-L-argininy (pR 60) i zawierających dezoksyinozynę oligodezoksynukleotydów (I-ODN), CpG 1668 lub GpC. Myszom wstrzyknięto w poduszeczki tylnych łap mieszaniny pokazane na figurze. Po upływie 4 dni limfocyty węzłów chłonnych drenujących stymulowano ex vivo OVA257-264, peptydem mTRP2181-188, tu nieistotnym (pokrewne mysiej tyrozynazie białko-2, VYDFFVWL), lub pR 60. Liczbę komórek produkujących IFN-g oznaczono po upływie 24 godzin z zastosowaniem testu ELISPOT. Otrzymane wyniki wyrażono jako liczbę plam/1x106 komórek węzłów chłonnych, z odchyleniem standardowym z trzech powtórzeń.
Fig. 4 przedstawia indukcję wytwarzania układowego TNF-a po wstrzyknięciu OVA257-264, poli-L-argininy (pR 60) i zawierających I oligodezoksynukleotydów (I-ODN), GpC lub CpG 1668. Myszom wstrzyknięto w poduszeczki tylnych łap mieszaniny pokazane na figurze. Po upływie godziny od
PL 211 036 B1 wstrzyknięcia, z żyły ogonowej pobrano krew i sporządzono preparat surowicy. Techniką ELISA specyficzną względem cytokin oznaczono w surowicach stężenie TNF-a.
Fig. 5 przedstawia odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciw pochodzącemu z owoalbuminy peptydowi OVA257-264, po wstrzyknięciu TRP-2, poli-L-argininy, CpG 1668 i dezoksyinozyny zawierającej losowe 20-merowe sekwencje. Myszom wstrzyknięto w poduszeczki tylnych łap mieszaniny pokazane na figurze. Po upływie 4 dni limfocyty węzłów chłonnych drenujących stymulowano ex vivo TRP-2, peptydem OVA257-254, tu nieistotnym, lub pR 60. Liczbę komórek produkujących IFN-g oznaczono po upływie 24 godzin z zastosowaniem testu ELISPOT. Otrzymane wyniki wyrażono jako liczbę plam/1x106 komórek węzłów chłonnych, z odchyleniem standardowym z trzech powtórzeń.
Fig. 6 przedstawia połączone wstrzyknięcie I-ODN i poli-L-argininy (pR 60) razem z peptydem pochodzącym z czerniaka.
Fig. 7 pokazuje, że połączone wstrzyknięcie I-ODN i pR 60 razem z peptydem pochodzącym z czerniaka redukuje indukcję układowego TNF-α i Il-6.
Fig. 8 przedstawia połączone wstrzyknięcie I-ODN z losową 10-merową sekwencją razem z peptydem pochodzącym z czerniaka.
Fig. 9 pokazuje, że łączne zastosowanie owoalbuminy (OVA) z oligo-dIC26-mer i pR wzmaga wytwarzanie swoistych względem OVA przeciwciał IgG. Myszom wstrzyknięto w poduszeczki tylnych łap mieszaniny pokazane na figurze. W dniu 24 i 115 po wstrzyknięciu zebrano surowice i podano badaniu przesiewowemu techniką ELISA na obecność swoistych względem OVA przeciwciał IgG2a (A) i IgGl (B). Otrzymane wyniki przedstawiono jako miano przeciwciała.
P r z y k ł a d y
We wszystkich eksperymentach użyto podstawionych tiofosforanem ODN (z resztami fosforanowymi zastąpionymi przez reszty tiofosforanowe, w niniejszym opisie nazywanych „oligodezoksynukleotydami podstawionymi tiofosforanem), ponieważ takie właśnie ODN manifestują większą odporność na działanie nukleaz (Bailas i in., 1996; Krieg i in., 1995; Parronchi i in., 1999).
P r z y k ł a d 1
Połączone wstrzyknięcie różnych I-ODN i poli-L-argininy (pR 60) w sposób synergistyczny wzmaga odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciw peptydowi pochodzącemu z owoalbuminy.
Myszy | C57BI/6 (Harlan/Olac) |
Peptyd | Peptyd OVA257-264 (SIINFEKL), epitop owoalbuminy kurzej z zależną od MHC klasa I restrykcją związaną z układem (H-2Kb) (Rotzschke i in., 1991), zsyntetyzowano typową metodą syntezy na podłożu stałym (chemia F-moc), poddano oczyszczaniu metodą HPLC i analizowano metodą spektroskopii mas pod względem czystości. Dawka: 300 mg/mysz. |
Poli-L-arginina 60 (pR60) | Poli-L-arginina o średnim stopniu polimeryzacji 60 reszt argininy; SIGMa Chemicals. Dawka: 100 mg/mysz. |
CpG-ODN 1668 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające motyw CpG: tcc atg acg ttc ctg atg ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
I-ODN 1 | ODN podstawione tiofosforanem zawierające dezoksyinozynę: tcc ati aci ttc ctg atg ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka:5 nmoli/mysz. |
I-ODN 2 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające dezoksyinozynę: tcc atg aci ttc ctg atg ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
I-ODN 3 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające dezoksyinozynę: tcc ati aci ttc cti ati ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
PL 211 036 B1
Grupy doświadczalne (5 myszy w grupie).
1. OVA257-264 2. OVA257-264 + pR 60
3. OVA257-264 + CpG 1668
4. OVA257-264 + I-ODN 1 5. OVA257-264 + I-ODN 2 6. OVA257-264 + I-ODN 3
7. OVA257-264 + CpG 1668 + pR 60
8. OVA257-264 + I-ODN 1 + pR 60
9. OVA257-264 + I-ODN 2 + pR 60
10. OVA257-264 + I-ODN 3 + pR 60
W dniu 0 myszom wstrzyknięto do poduszeczek obu tylnych łap po, ogółem, 100 μl (a więc po 50 gl w każdą poduszeczkę) preparatów zawierających związki wyżej wymienione. Po upływie 4 dni od wstrzyknięcia zwierzęta uśmiercono i pobrano podkolanowe węzły chłonne. Węzły chłonne przepuszczono przez 70 μm perkolator do komórek i przemyto 2 razy podłożem DMEM (GIBCO BRL) zawierającym 5% płodowej surowicy cielęcej (FCS, SIGMA Chemicals). Komórki doprowadzono do stężenia 3 x 106 komórek/ml w DMEM/5 %/FCS. Przeprowadzono test IFN-g ELISPOT, w trzech powtórzeniach, sposobem już opisanym (Miyahira i in., 1995). Sposób ten jest szeroko stosowaną metodą umożliwiającą kwantyfikowanie komórek T antygenowo swoistych.
Limfocyty stymulowano ex vivo przy użyciu podłoża tło-kontrola, peptydu OVA257-264 lub konkanawaliny A (Con A). Zliczono plamy reprezentujące pojedyncze komórki wytwarzające IFN-g i odjęto liczbę plam tła z wszystkich próbek. Duża liczba wykrytych plamek po stymulacji z udziałem Con A (dane nie uwidocznione) wskazuje na dobrą kondycję użytych limfocytów. Dla każdej doświadczalnej grupy myszy liczba plamek/1 x 106 komórek jest przedstawiona na fig. 1. Po upływie godziny od wstrzyknięcia, pobrano krew z żyły ogonowej i sporządzono preparaty surowicy w celu oznaczenia indukcji układowego INF-a zastosowaniem techniki ELISA (Fig. 2).
P r z y k ł a d 2
Wymiana guanozyny na dezoksinozynę przekształca sekwencję GpC nieimmunogenną w sekwencję wysoce immunogenną, zwłaszcza przy połączeniu z poli-L-argininą (pR60)
Myszy | C57BI/6 (Harlan/Olac) |
Peptyd | Peptyd OVA257-264 (SIINFEKL), epitop owoalbuminy kurzej z zależną od MHC klasa I restrykcją związaną z układem (H-2Kb) (Rotzschke i in., 1991), zsyntetyzowano typową metodą syntezy F-moc na podłożu stałym, poddano oczyszczaniu metodą HPLC i analizowano metodą spektroskopii mas pod względem czystości. Dawka: 300 gg/mysz. |
Poli-L-arginina 60 (pR60) | Poli-L-arginina o średnim stopniu polimeryzacji 60 reszt argininy; SIGMA Chemicals. Dawka: 100 gg/mysz. |
CpG-ODN 1668 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające motyw CpG: tcc atg acg ttc ctg atg ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
GpC-ODN | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające nieimmunogenny motyw GpC: tcc atg agc ttc ctg atg ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
I-ODN 9 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające dezoksyinozynę: tcc atg aic ttc ctg atg ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
I-ODN 10 | ODN podstawione tiofosforanem zawierające dezoksyinozynę: tcc ati aic ttc cti ati ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
PL 211 036 B1
Grupy doświadczalne (5 myszy w grupie)
OVA257 -264 OVA257-264 + pR 60
OVA257-264 + CpG 1668 OVA257-264 + GpC
OVA257-264 + I-ODN 9
OVA257-264 + I-ODN 10
OVA257-264 + CpG 1668 + pR 60
OVA257-264 + GpC + pR 60
OVA257-264 + I-ODN 9 + pR 60
OVA257-264 + I-ODN 10 + pR 60
W dniu 0 myszom wstrzyknięto do poduszeczek obu tylnych łap po, ogółem, 100 μl (a więc po 50 μl w każdą poduszeczkę) preparatów zawierających związki wyżej wymienione. Po upływie 4 dni od wstrzyknięcia zwierzęta uśmiercono i pobrano podkolanowe węzły chłonne. Węzły chłonne przepuszczono przez 70 μm perkolator do komórek i przemyto 2 razy podłożem DMEM (GIBCO BRL) zawierającym 5% płodowej surowicy cielęcej (ECS, SIGMA Chemicals). Komórki doprowadzono do stężenia 3 x 106 komórek/ml w DMEM/5 %/FCS. Przeprowadzono test IFN-g ELISPOT, w trzech powtórzeniach, sposobem już opisanym (Miyahira i in., 1995). Sposób ten jest szeroko stosowaną metodą umożliwiającą kwantyfikowanie komórek T antygenowo swoistych. Limfocyty stymulowano ex vivo, w trzech powtórzeniach, przy użyciu podłoża (tło), peptydu OVA257-264, peptydu mTRP-2181-188 (pokrewnego mysiej tyrozynazie biaika-2, VYDFFVWL), tu nieistotnego, pR 60 i konkanawaliny A (Con A). Zliczono plamy reprezentujące pojedyncze komórki wytwarzające IFN-g i odjęto liczbę plam tła z wszystkich próbek. Duża liczba wykrytych plamek po stymulacji z udziałem Con A (dane nie uwidocznione) wskazuje na dobrą kondycję użytych limfocytów. Dla każdej doświadczalnej grupy myszy liczba plamek/1 x 106 komórek jest przedstawiona na fig. 3. Podano odchylenia standardowe z trzech ex vivo stymulowanych powtórzeń. Po upływie godziny od wstrzyknięcia, pobrano krew z żyły ogonowej i sporządzono preparaty surowicy w celu oznaczenia indukcji układowego TNFa i IL-6, z zastosowaniem techniki ELISA specyficznej dla cytokin (Fig. 4).
P r z y k ł a d 3
Połączone wstrzyknięcie losowych 20-merowych sekwencji zawierających dezoksyinozynę i peptydu pochodzącego z czerniaka indukuje silną odpowiedź immunologiczną skierowną przeciw peptydowi, którą można jeszcze wzmóc przez łączne z nimi zastosowanie poli-L-argininy (pR 60).
Myszy | C57BI/6 (Harlan/Olac) |
1 | 2 |
Peptyd | Peptyd TRP-2 (VYDFFVWL), epitop pokrewnego mysiej tyrozynazie białka-2 z zależną od MHC klasa I restrykcją związaną z układem (H-2Kb) (Bloom i in., 1997), zsyntetyzowano typową metodą syntezy F-moc na podłożu stałym, poddano oczyszczaniu metodą HPLC i analizowano metodą spektroskopii mas pod względem czystości. Dawka: 300 μq/mysz. |
Poli-L-arginina 60 (pR60) | Poli-L-arginina o średnim stopniu polimeryzacji 60 reszt argininy; SIGMA Chemicals. Dawka: 100 μq/mysz. |
CpG-ODN 1668 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające motyw CpG: tcc atq acq ttc ctq atq ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
wdi | Podstawione tiofosforanem ODN: nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn zsyntetyzowane przez NAPS GmbH Getynqa. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
wdidin | Podstawione tiofosforanem ODN: nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynqa. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
PL 211 036 B1 cd. tabeli
1 | 2 |
wdid | Podstawione tiofosforanem ODN: nhh hhh wdi dhh hhh hhh wn zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
wdidid | Podstawione tiofosforanem ODN: nhh wdi did hhh hdi ddi dh zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
Grupy eksperymentalne
1. TRP - 2 | ||
2. TRP - 2 | + | pR 60 |
3. TRP - 2 | + | CpG 1668 |
4. TRP - 2 | + | wdi |
5. TRP - 2 | + | wdidin |
6. TRP - 2 | + | wdid |
7. TRP - 2 | + | wdidid |
8. TRP - 2 | + | CpG 1668 + pR 60 |
9. TRP - 2 | + | wdi + pR 60 |
10. TRP - 2 | + | wdidin + pR 60 |
11. TRP - 2 | + | wdid + pR 60 |
12. TRP - 2 | + | wdidid + pR 60 |
W dniu 0 myszom wstrzyknięto do poduszeczek obu tylnych łap po, ogółem, 100 μl (a więc po 50 μl w każdą poduszeczkę) preparatów zawierających związki wyżej wymienione. Po upływie 4 dni od wstrzyknięcia zwierzęta uśmiercono i pobrano podkolanowe węzły chłonne. Węzły chłonne przepuszczono przez 70 μm perkolator do komórek i przemyto 2 razy podłożem DMEM (GIBCO BRL) zawierającym 5% płodowej surowicy cielęcej (FCS, SIGMA chemicals). Komórki doprowadzono do stężenia 3 x 106 komórek/ml w DMEM/5 %/FCS. Przeprowadzono test IFN-g ELISPOT, w trzech powtórzeniach, sposobem już opisanym (Miyahira i in., 1995). Sposób ten jest szeroko stosowaną metodą umożliwiającą kwantyfikowanie komórek T antygenowo swoistych. Limfocyty stymulowano ex vivo, w trzech powtórzeniach, przy użyciu podłoża (tło), peptydu TRP-2, peptydu OVA257-264, tu nieistotnego, pR 60 i konkanawaliny A (Con A). Zliczono plamy reprezentujące pojedyncze komórki wytwarzające IFN-g i odjęto liczbę plam tła z wszystkich próbek. Duża liczba wykrytych plamek po stymulacji z udziałem Con A (dane nie uwidocznione) wskazuje na dobrą kondycję użytych limfocytów. Dla każdej doświadczalnej grupy myszy liczba plamek/1 x 106 komórek jest przedstawiona na fig. 5. Podano odchylenia standardowe z trzech ex vivo stymulowanych powtórzeń.
P r z y k ł a d 4
Połączone wstrzyknięcie I-ODN i poli-L-argininy (pR 60) wzmaga sposób synergistyczny odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciw peptydowi pochodzącemu z czerniaka.
Grupy doświadczalne (5 myszy w grupie) 1. TRP-2181-188 2. TRP-2181 -188 + pR 60
3. TRP-2181-188 + CpG 1668
4. TRP-2181-188 + I-ODN 2
5. TRP-2181-188 + CpG 1668 + pR 60
6. TRP-2181-188 + I-ODN 2 + pR 60
W dniu 0 myszom wstrzyknięto do poduszeczek obu tylnych łap po, ogółem, 100 μl (a więc po 50 μl w każdą poduszeczkę) preparatów zawierających związki wyżej wymienione. Po upływie 4 dni od wstrzyknięcia zwierzęta uśmiercono i pobrano podkolanowe węzły chłonne. Węzły chłonne przepuszczono przez 70 μm perkolator do komórek i przemyto 2 razy podłożem DMEM (GIBCO BRL) zawierającym 5% płodowej surowicy cielęcej (FCS, SIGMA Chemicals). Komórki doprowadzono do stężenia 3 x 106 komórek/ml w DMEM/5 %/FCS. Przeprowadzono test IFN-γ ELISPOT, w trzech powtórzeniach, sposobem już opisanym (Miyahira i in., 1995). Sposób ten jest szeroko stosowaną metodą umożliwiającą kwantyfikowanie komórek T antygenowo swoistych. Limfocyty stymulowano ex vivo w trzech powtórzeniach przy użyciu podłoża tło-kontrola, peptydu TRP-2181-188, peptydu OVA257-264, tu
PL 211 036 B1 nieistotnego, i konkanawaliny A (Con A). Zliczono plamy reprezentujące pojedyncze komórki wytwarzające IFN-γ i odjęto liczbę plam tła z wszystkich próbek. Duża liczba wykrytych plamek po stymulacji z udziałem Con A (dane nie uwidocznione) wskazuje na dobrą kondycję użytych limfocytów. Dla każdej doświadczalnej grupy myszy liczba plamek/1 x 106 komórek jest przedstawiona na fig. 6. Podano odchylenie standardowe z trzech ex vivo stymulowanych powtórzeń.
Po upływie godziny od wstrzyknięcia, pobrano krew z żyły ogonowej i sporządzono preparaty surowicy w celu oznaczenia indukcji układowego TNF-α i IL-6 z zastosowaniem specyficznej techniki ELISA (Fig. 7).
P r z y k ł a d 5
Połączone wstrzyknięcie losowego 10-merowego I-ODN i poli-L-argininy (pR 60) wzmaga w sposób synergistyczny odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciw peptydowi pochodzącemu z czerniaka.
Grupy doświadczalne (5 myszy w każdej grupie) 1. TRP-2181-188 2. TRP-2181-188 + pR 60
3. TRP-2181-188 + CpG 1668
4. TRP-2181-188 + ODN 17
5. TRP-2181-188 + CpG 1668 + pR 60
6. TRP-2181-188 + ODN 17 + pR 60.
W dniu 0 myszom wstrzyknięto do poduszeczek obu tylnych łap po, ogółem, 100 gl (a więc po 50 gl w każdą poduszeczkę) preparatów zawierających związki wyżej wymienione. Po upływie 4 dni od wstrzyknięcia zwierzęta uśmiercono i pobrano podkolanowe węzły chłonne. Węzły chłonne przepuszczono przez 70 gm perkolator do komórek i przemyto 2 razy podłożem DMEM (GIBCO BRL) zawierającym 5% płodowej surowicy cielęcej (FCS, SIGMA Chemicals). Komórki doprowadzono do stężenia 3 x 106 komórek/ml w DMEM/5 %/FCS. Przeprowadzono test IFN-γ ELISPOT w trzech powtórzeniach, sposobem już opisanym (Miyahira i in., 1995). Sposób ten jest szeroko stosowaną metodą umożliwiającą kwantyfikowanie komórek T antygenowo swoistych. Limfocyty stymulowano ex vivo, w trzech powtórzeniach, przy użyciu podłoża-tła, peptydu TRP-2181-188, peptydu OVA257-264, tu nieistotnego i konkanawaliny A (Con A). Zliczono plamy reprezentujące pojedyncze komórki wytwarzające IFN-γ i odjęto liczbę plam tła z wszystkich próbek. Duża liczba wykrytych plamek po stymulacji z udziałem Con A (dane nie uwidocznione) wskazuje na dobrą kondycję użytych limfocytów. Dla każdej doświadczalnej grupy myszy liczba plamek/1 x 106 komórek jest przedstawiona na fig. 8. Podano odchylenia standardowe z trzech ex vivo stymulowanych powtórzeń.
Myszy | C57BI/6 (Harlan/Olac) |
1 | 2 |
Peptyd | Peptyd TRP-2 (VYDFFVWL), epitop pokrewnego mysiej tyrozynazie białka-2 z zależną od MHC klasa I restrykcją związaną z układem (H-2Kb) (Bloom i in., 1997), zsyntetyzowano typową metodą syntezy F-moc na podłożu stałym, poddano oczyszczaniu metodą HPLC i analizowano metodą spektroskopii mas pod względem czystości. Dawka: 100 gg/mysz. |
Poli-L-arginina 60 (pR60) | Poli-L-arginina o średnim stopniu polimeryzacji 60 reszt argininy; SIGMA Chemicals. Dawka: 100 gg/mysz. |
CpG-ODN 1668 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające motyw CpG: tcc atg acg ttc ctg atg ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
ODN 17 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające dezoksyinozynę: hhh wdi dhh h zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 10 nmoli/mysz. |
Myszy | C57BI/6 (Harlan/Olac) |
PL 211 036 B1 cd. tabeli
1 | 2 |
Peptyd | Peptyd IRP-2 (VYDFFVWL), epitop pokrewnego mysiej tyrozynazie białka-2 z zależną od MHC klasa I restrykcją związaną z układem (H-2Kb) (Bloom i in., 1997), zsyntetyzowano typową metodą syntezy F-moc na podłożu stałym, poddano oczyszczaniu metodą HPLC i analizowano metodą spektroskopii mas pod względem czystości. Dawka: 100 gg/mysz. |
Poli-L-arginina 60 (pR60) | Poli-L-arginina o średnim stopniu polimeryzacji 60 reszt argininy; SIGMA Chemicals. Dawka: 100 gg/mysz. |
CpG-ODN 1668 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające motyw CpG: tcc atg acg ttc ctg atg ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
I-ODN 2 | Podstawione tiofosforanem ODN zawierające dezoksyinozynę: tcc atg aci ttc ctg atg ct zsyntetyzowane przez NAPS GmbH, Getynga. Dawka: 5 nmoli/mysz. |
P r z y k ł a d 6
Połączone zastosowanie oligodezoksyIC26-mer i poli-L-argininy (pR) wzmaga humoralną odpowiedź swoistą względem ovoalbuminy (OVA).
Myszy | C57BI/6 (Harlan/Olac) |
Owoalbumina (OVA) | Ovoalbumina z jaja kurzego, gatunek V, SIGMA Chemicals, A-5503, seria 54H7070 Dawka: 50 gg/mysz |
Poli-L-arginina (PR) | Poli-L-arginina o średnim stopniu polimeryzacji 60 reszt argininy; SIGMA Chemicals, P-4663, seria 68H5903 Dawka: 100 gg/mysz |
Oligodezoksy IC, 26merowy (oligo-dIC26-mer) | 0ligo-dIC26-mer zsyntetyzowany typową chemiczną metodą fosfoamidytową w skali 4 gmoli i oczyszczony metodą HPLC (NAPS Getynga, Niemcy). Dawka: 5 nomoli/mysz. |
Grupy eksperymentalne (4 myszy w grupie)
1. OVA + oligo-dIC26-mer + PR
2. OVA + oligo -dIC26-mer
3. OVA + pR
4. OVA
W dniu 0 myszom wstrzyknięto do poduszeczek obu tylnych łap po, ogółem, 100 μΐ (a więc po 50 gl w każdą poduszeczkę) preparatów zawierających związki wyżej wymienione. Po upływie 24 godzin od wstrzyknięcia, zebrano surowice i podane je badaniu przesiewowemu techniką ELISA na obecność przeciwciał swoistych względem OVA. Otrzymane wyniki pokazują, że wstrzyknięcie ONA łącznie z oligo-dlC i pR wzmagało wytwarzanie swoistych względem OVA przeciwciał IgG, co widać w porównaniu z wynikami wstrzyknięcia OVA łącznie z każdą z tych substancji osobno (Fig. 13A, B). Jest rzeczą interesującą, że zarówno miano IgG2a jak i miano IgGl zwiększało się po pojedynczym wstrzyknięciu OVA z oligo-dIC/pR, co nasuwa wniosek, że zaangażowane tu były tak komórki Th1 jak i komórki Th2. Jednakże, po upływie 115 dni, w surowicach myszy, którym wstrzyknięto OVA i oligodIC/pR, wykrywalne były ciągle jeszcze jedynie podwyższone poziomy miana IgG2a.
Dane powyższe pokazują, że połączone wstrzyknięcie OVA, oligo-dlC i pR powoduje wzmożenie humoralnej odpowiedzi swoistej względem OVA. Odpowiedź ta charakteryzuje się wytwarzaniem we wczesnej fazie izotypów przeciwciał indukowanych tak przez Th1 jak i przez Th2, ale później przeważnie przeciwciał indukowanych przez Th1.
PL 211 036 B1
Odnośniki
D. Andreu i L. Rivas, Animal amtimicrobial peptides: a overview, 47, 415 - 433 (1998).
Z.K. Bailas, W.L. Rasmussen i A.M. Krieg, Induction of NK activity in murine and human cells by CpG motif in oligodeoxynucleotides and bacterial DNA, J. Immunol., 157, 1840 -1845 (1996).
B.R. Bloom i R. Widdus, „Vaccine visions and their global impact, Nat. Med., 4, 480 - 484 (1998).
M.B. Bloom, D. Perry-Lalley, P.F. Robbins, Y. Li., M. el-Gamil, S.A. Rosenberg i J.C. Yang, „Identification of tyrosinase-related protein 2 as a tumor rejection antigen for the B 16 melanoma,
J. Exp. Med., 185, 453 - 459 (1997).
M. Buschle, W. Schmidt, M. Berger, G. Schaffner, R. Kurz-bauer, L. Killisch, J.K. Tiedemarm, B. Trska, H. Kirlappos, K. Mechtler, F. Schilcher, C. Gabier i M.L. Birntsrlel, Chemically defined, cell free cancer vaccines: use of tumor antigen-derived peptides or polyepitope proteins for vaccination, Gene Ther. Mol. Biol., 1, 309 - 321 (1998).
M. Buschle, W. Schmidt, W. Zauner, K. Mechtler, B. Trska, H. Kirlappos i M.L. Birnstiel, „Transloading of tumor antigen-derived peptides into antigen-presenting cells, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94, 3256 3261 (1997).
P.F. Cavanaugh, jr, Y-K Ho i T.J. Bardos, „The activation of murine macrophages and natural killer cells by the Partially tiolated double stranded RNA poly (1).mercapto poly (C), Res. Comm. Mol. Pathol. Pharmacol., 91, 131 - 147 (1996).
J.H. Chace, N.A. Hooker, K.L. Mildenstein, A.M. Krieg i J.S. Cowdery, Bacterial DNA-induced NK cell IFN-gamma production is dependent on macrophage secretion of IL-12, Clin. Immunol. Immunopathol., 84, 185 - 193 (1997).
H.L.Davis, R. Weeranta, T.J. Waldschmidt, L. Tygrett, J. Schorr i A.M. Krieg, „CpG DNA is a potent enhancer of specific immunity in mice immunized with recombinant hepatitis B surface antigen, J. Immunol., 160, 870 - 876 (1998).
G.M. Deng, L.M Nilsson, M. Verdrengh, L.V. Collins i A. Tarkowski, „Intra-articularly localized bacterial DNA containing CpG motifs induces arthritis, Nat. Med., 5, 702 -705 (1999).
T. Ganz, „Defensins and host defense [comment], Science, 286, 420 - 421 (1999).
T. Ganz i R.L. Lehrer, „Antibiotic peptides from higher eukaryotes: biology and applications, Mol. Med. Today, 5, 292 -297 (1999).
R.E. Hancock, „Host defence (cationic) peptides: what is their future clinical potential?, Drugs, 57, 469 - 473 (1999).
E. Harlow i D. Lane, Antibodies: a laboratory manual, (Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory) (1988). G. Harmann, G.J. Weiner i A.M. Krieg, „CpG DNA: A potent signal for growth, activation and maturation of human dendritic cells, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 9305 - 9310 (1999).
J.A. Hoffmann, F.C. Kafatos, C.A. Janeway i R.A. Ezekowitz, „Phylogenetic perspectives in innate immunuity, Science, 284, 1313 - 1318 (1999).
D.M. Klinman, A.K. Yi, S.L. Beaucage, S.L. Conover i A.M. Krieg, „CpG motifs present in bacteria DNA rapidly induce Lymphocytes to secrete interleukin 6, interleukin 12, and interferon gamma, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 2879 - 2883 (1996).
A.M. Krieg, „CpG DNA: a nowel immunomodulator [letter], Trends Microbiol, 7, 64 - 65 (1999).
A.M. Krieg, „An innate immune defense mechanism based on the recognition of CpG motifs in microbial DNA, J. Lab. Clin. Med., 128, 128 - 133 (1996).
A.M. Krieg, A.K. Yi, S. Matson, T.J. Waldschmidt, G.A. Bishop, R. Teasdale, G.A. Koretzky i D.M. Klinman, „CpG motifs in bacterial DNA trigger direct B-cell activation, Nature, 374, 546 - 549 (1995).
A. M. Krieg, A.K. Y±, J. Schorr i H.h. Davis, „The role of CpG dinucleotides in DNA vaccines, Trends Microbiol., 6, 23 - 27 (1998).
B. Lethe, B. van den Eynde, van Pel, G. Corradin i T. Boon, „Mouse tumor rejection antigens P815A i P815B: two epitopes carried by a single peptide, Eur. J. Immunol., 22, 2283 -2288 (1992).
S. Liljeqvist i S. Stahl, Production of recombinant subunit vaccines: protein immunogens, live delivery systems and nucleic acid vaccines, J. Biotechnol., 73, 1 - 33 (1999).
G.B.Lipford, K. Heeg i H. Wagner, Bacterial DNA as immune cell activator, Trends Microbiol., 6, 496 - 500 (1998).
PL 211 036 B1
R. Manetti, F. Annunziato, L. Tomasevic, V. Gianno, P. Parronchi, S. Romagnani i E. Maggi, „Polyinosinic acid:policytydylic acid promotes T helper type 1-specific immune responses by stimulating macrophage production of interferon-a and interleukin-12, Eur. J. Immunol., 25, 2656 -2660 (1995).
T.R. Mosmann, H. Cherwinski, M.W. Bond, M.A. Giedlin i R.L. Coffman, „Two types of murine helper T cell clone. 1. Definition according to profiles of Lymphokine activities and secreted proteins, J. Immunol., 136, 2348 - 2357 (1986).
G. Nossal, „Living up to the legacy, Nat. Med., 4, 475 - 476 (1998).
A. Oxenius, M.M. Martinic, H. Hengartner i P. Klenerman, „CpG-containing oligonucleotides are efficient adjuvants for induction of protective antiviral immune responses with T-cell peptide vaccines, J. Virol., 73, 4120 - 4126 (1999).
F. Paillard, „CpG: the double-edged sword [comment], Hum. Gene. Ther., 10, 2089 - 2090 (1999).
E.G. Pamer, J.T. Harty i M.J. Bevan, Precise prediction of a dominant class I MHC-restricted epitope of Listeria monocytogenes, Nature, 353, 852 - 855 (1991).
P. Parronchi, F. Brugnolo, F. Annunziato, C. Manuelli, S. Sampognaro, C. Mavilia, S. Romagnani i E. Maggi, „Phosphorothioate oligodeoxynucleotides promote the in vitro development of human allergen-specific CD4+ T cells into Th1 effectors, J. Immunol., 163, 5946 - 5953 (1999).
D.S. Pisetzky, „lmmunostimulatory DNA: a clear and present danger?, Nat. Med., 3, 829 - 831 (1997).
D.S. Pisetzky, „The influence of base sequence on the immunostimulatory properties of DNA, Immunol. Res, 19, 35 - 46 (1999).
H. G. Rammensee, T. Friede, S. Stevanoviic, „MHC ligands and peptide motifs: first listing, Immunogenetics, 41, 178 - 228 (1995).
M. Rodrigues, R.S. Nussenzweig, P. Romero i F. Zavala, „The in vivo cytotoxic activity of CD8+ T cell clones correlates with their levels of expression of adhesion molecules, J. Exp. Med., 175, 895 905 (1992).
L. Roitt, J. Brostoff i D. Male, Immunology (Londyn, Mosby International Ltd) (1998).
O. Rotzschke, K. Falk, S. Stevanovic, G. Jung, P. Walden i H.G. Rammensee, „Exact prediction of a natural T cell epitope, Eur. J. Immunol., 21, 2891 - 2894 (1991).
W. Schmidt, M. Buschle, W. Zauner, H. Kirlappos, K. Mechtler. B. Trska i M.L. Bimstiel, „Cellfree tumor antigen peptide-based cancer vaccines, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 3262 - 3267 (1997).
D.A. Schwartz, T.J. Quinn, P.S. Thome, S. Sayeed, A.K. Yi i A.M Krieg, „CpG motifs in bacterial DNA cause inflammation in the lower respiratory tract, J. Clin. Invest., 100, 68 - 73 (1997).
R. Shimonkevitz, S. Colon, J.W. Kappler, P. Marrack i H.M. Grey, „Antigen recognition by H2-restricted T-cells 11. A tryptic ovalbumin peptide that substitutes for processed antigen, J. Immunol., 133, 2067 - 2074 (1984).
M. Simmaco, G. Mignogna i D. Barra, „Antimicrobial peptides from amphibian skin: what do they tell us?, Biopolymers, 47, 435 - 450 (1998).
K. Sparbier i P. Walden, „T-cell receptor specifity and mimotopes, Curr. Opin. Immunol., 11, 214 - 218 (1999).
T. Sparwasser, E.S. Koch, R.M. Vabulas, K. Heeg, G.B. Lip-ford, J.W. Ellwart i H. Wagner, Bacterial DNA and immunostimulatory CpG oligonucleotides trigger maturation and activation of murine dendritic cells, Eur. J. Immunol., 28, 2045 - 2054 (1998).
T. Sparwasser, I. Miethke, G. Lipford, K. Borschert, H. Hacker, K. Heeg i H. Wagner, Bacterial DNA causes septic shock [letter], Nature, 386, 336 - 337 (1997).
T. Sparwasser. I. Miethke, G. Lipford, A. Erdmann, H. Hacker, K. Heeg i H. Wagner, „Microphages sense pathogens via DNA motif: induction of tumor necrosis factor-alfa-mediated shock, Eur. J. Immunol., 27, 1671 - 1679 (1997).
G. J. Weiner, H.M. Liu, J.E. Wooldridge, CE. Dahle i A.M. Krieg, „Immunostimulatory oligodeoxynucleotides containing the CpG motif are effective as immune adjuvants in tumor antigen immunization, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 10833 -10837 (1997).
N. S. Yew, K.X. Wang, M. Przybylska, R.G. Bagley, M. Stedman, J. Marshall, R.K. Scheule i S.H. Cheng, Contribution of plasmid DNA to inflammation in the lung after administration of cationic lipid:pDNA complexes, Hum. Gene Ther., 10, 223 -234 (1999).
PL 211 036 B1
Claims (20)
1. Zastosowanie cząsteczki immunostymulującego kwasu oligodezoksynukleinowego (ODN) o budowie przedstawionej wzorem (I), w którym:
Zastrzeżenia patentowe
X oznacza O lub S,
NMP oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmującej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno-, dezoksyinozyno-, dezoksycytozyno-, dezoksyurydyno-, dezoksytymidyno-, 2-metylodezoksyinozyno-, 5-metylodezoksycytozyno-, dezoksypseudourydyno-, dezoksyrybozopuryno-, 2-aminodezoksyrybozopuryno-, 6-S-dezoksyguanino-, 2-dimetylodezoksyguanozyno- lub N-izopentenylodezoksyadenozynomonofosforan lub -monotiofosforan,
NUC oznacza 2'-dezoksynukleozyd, wybrany z grupy obejmującej dezoksyadenozynę, dezoksyguanozynę, dezoksyinozynę, dezoksycytozynę, dezoksyurydynę, dezoksytymidynę, 2-metylodezoksyinozynę, 5-metylodezoksycytozynę, dezoksypseudourydynę, dezoksyrybozopurynę, 2-aminodezoksyrybozopurynę, 6-S-dezoksyguanidynę, 2-dimetylodezoksyguanidynę lub N-izopentenylodezoksyadenozynę, a i b oznaczają liczby całkowite od 0 do 100, z tym, że suma a + b mieści się w zakresie od 4 do 150,
B i E oznaczają grupy zwykłe dla końców 5' i 3' cząsteczek kwasów nukleinowych, do wytwarzania immunostymulującej kompozycji farmaceutycznej.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że cząsteczkę ODN stanowi cząsteczka oligo-C28.
3. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że każda grupa o symbolu NMP jest wybrana z grupy obejmującej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno-, dezoksyinozyno-, dezoksycytozyno-, dezoksyurydyno-, dezoksytymidyno-, 2-metylodezoksy-inozyno-, 5-metylodezoksycytozynomonofosforan lub -monotiofosforan.
4. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, albo 3, znamienne tym, że suma a + b mieści się w zakresie od 10 do 60, korzystnie w zakresie od 15 do 40.
5. Zastosowanie według zastrz. 1-4, znamienne tym, że co najmniej jeden z symboli X1 i X2 oznacza S i co najmniej jeden z symboli X3 i X4 oznacza O, oraz korzystnie, którykolwiek NMP oznacza nukleozydomonotiofosforan.
6. Zastosowanie według zastrz. 1-5, znamienne tym, że ODN zawiera sekwencję nhh hhh wdi nhh hhh hhh wn, nhh wdi din hhh hdi ndi nh, nhh hhh wdi dhh hhh hhh wn lub nhh wdi did hhh hdi ddi dh, przy czym:
którykolwiek n oznacza 2-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmującej dezoksyadenozyno-, dezoksyguanozyno-, dezoksycytozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan, którykolwiek h oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmującej dezoksyadenozyno-, dezoksycytozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan, i oznacza dezoksyinozynomonofosforan lub -monotiofosforan, którykolwiek w oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmującej dezoksyadenozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan, oraz
PL 211 036 B1 którykolwiek d oznacza 2'-dezoksynukleozydomonofosforan lub -monotiofosforan, wybrany z grupy obejmują cej dezoksy-adenozyno-, dezoksyguanozyno- lub dezoksytymidynomonofosforan lub
-monotiofosforan.
7. Zastosowanie według zastrz. 1-6, znamienne tym, że ODN zawiera sekwencję hhh wdi dhh h.
8. Zastosowanie według zastrz. 1-7, znamienne tym, że ODN zawiera co najmniej jeden 2'-dezoksycytozyno-monofosforan lub -monotiofosforan, przyległy w pozycji 3' do 2'-dezoksyinozynomonofosforanu lub -monotiofosforanu.
9. Zastosowanie według zastrz. 8, znamienne tym, że ODN zawiera deoksyinozynędeoksycytozynę 26-mer.
10. Zastosowanie według zastrz. 1-9, znamienne tym, że ODN zawiera sekwencję:
gacitt, iacitt, gaictt, iaictt, przy czym:
a oznacza dezoksyadenozynomonofosforan lub -monotiofosforan, g oznacza dezoksyguanozynomonofosforan lub -monotiofosforan, i oznacza dezoksyinozynomonofosforan lub -monotiofosforan, c oznacza dezoksycytozynomonofosforan lub -monotiofosforan, oraz t oznacza dezoksytymidynomonofosforan lub -monotiofosforan.
11. Zastosowanie według zastrz. 10, znamienne tym, że gacitt stanowi tcc atg aci ttc ctg atg ct.
12. Zastosowanie według zastrz. 1-11, znamienne tym, że ODN zawiera sekwencję:
wdi, wdid, wdidin lub wdidid, przy czym:
w, d, i oraz n mają wyżej podane znaczenie.
13. Zastosowanie według zastrz. 1-11, znamienne tym, że B i E są, niezależnie, wybrane z grupy obejmującej -H, -CH3, -COH, -COCH3, -OH, -CHO, -PO4, -PSO3, -PS2O2, -PS3O, -PS4, -SO3,
-PO4(CH2)1-6-NH2 lub -P04-(CH2)1-6-NH-znacznik.
14. Zastosowanie według zastrz. 1-13, znamienne tym, że immunostymulującą kompozycją farmaceutyczną jest wacyna.
15. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera ODN określoną w zastrz. 1.
16. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera ODN określoną w zastrz. 1-13, oraz antygen.
17. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 15 albo 16, znamienna tym, że zawiera jeszcze polimer polikationowy, korzystnie peptyd polikationowy, zwłaszcza poliargininę, polilizynę lub peptyd przeciwbakteryjny, zwłaszcza przeciwbakteryjny peptyd wywodzący się z katelicydyny, syntetyczny peptyd zawierający 2KLK-motywy przedzielone łącznikiem o 3-7 hydrofobowych aminokwasach, albo hormon wzrostu, zwłaszcza ludzki hormon wzrostu.
18. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 15 albo 16, albo 17, znamienna tym, że zawiera jeszcze składniki aktywne, zwłaszcza cytokiny, substancje przeciwzapalne, substancje przeciwbakteryjne lub ich kombinacje.
19. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 15-18, znamienna tym, że zawiera jeszcze substancje pomocnicze, zwłaszcza farmaceutycznie dozwolony nośnik, substancje buforowe, stabilizatory lub ich kombinacje.
20. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 15-19, znamienna tym, że zawiera jeden, lub więcej niż jeden ODN określoną w zastrz. 1-13 w ilości mieszczącej się w zakresie od 1 ng do 1 g, korzystnie w zakresie od 100 ng do 10 mg, a zwłaszcza w zakresie od 10 mg do 1 mg.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AT0100000A AT410173B (de) | 2000-06-08 | 2000-06-08 | Antigene zusammensetzung |
AT19732000 | 2000-11-23 | ||
PCT/EP2001/006433 WO2001093905A1 (en) | 2000-06-08 | 2001-06-07 | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL358982A1 PL358982A1 (pl) | 2004-08-23 |
PL211036B1 true PL211036B1 (pl) | 2012-04-30 |
Family
ID=25608484
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL358982A PL211036B1 (pl) | 2000-06-08 | 2001-06-07 | Zastosowanie cząsteczki immunostymulującego kwasu oligodezoksynukleinowego (ODN) i zawierająca ją kompozycja |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8568742B2 (pl) |
EP (1) | EP1296713B1 (pl) |
JP (2) | JP5271471B2 (pl) |
KR (1) | KR100799788B1 (pl) |
CN (1) | CN1309418C (pl) |
AT (1) | ATE249839T1 (pl) |
AU (2) | AU2001281812B2 (pl) |
BR (1) | BRPI0111639B8 (pl) |
CA (1) | CA2411575C (pl) |
CZ (1) | CZ304195B6 (pl) |
DE (1) | DE60100814T2 (pl) |
DK (1) | DK1296713T3 (pl) |
ES (1) | ES2206424T3 (pl) |
HK (1) | HK1056678A1 (pl) |
HU (1) | HU228264B1 (pl) |
IL (2) | IL152959A0 (pl) |
IS (1) | IS1993B (pl) |
MX (1) | MXPA02012010A (pl) |
NO (1) | NO329492B1 (pl) |
PL (1) | PL211036B1 (pl) |
PT (1) | PT1296713E (pl) |
RU (2) | RU2293573C2 (pl) |
SI (1) | SI1296713T1 (pl) |
SK (1) | SK287689B6 (pl) |
TR (1) | TR200302015T4 (pl) |
WO (1) | WO2001093905A1 (pl) |
Families Citing this family (88)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6977245B2 (en) | 1999-04-12 | 2005-12-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response |
DK1296713T3 (da) * | 2000-06-08 | 2004-01-26 | Intercell Biomedizinische Forschungs & Entwicklungs Gmbh | Immunstimulerende oligodeoxynukleotider |
EP1350262B8 (en) * | 2000-12-08 | 2008-08-13 | Coley Pharmaceuticals GmbH | Cpg-like nucleic acids and methods of use thereof |
JP2004519452A (ja) * | 2001-01-05 | 2004-07-02 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | ポリカチオン性化合物の用途 |
WO2002053185A2 (en) * | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Intercell Ag | Anti-inflammatory use of polycationic compounds |
US7244438B2 (en) | 2001-01-05 | 2007-07-17 | Intercell Ag | Uses for polycationic compounds |
US20040081655A1 (en) * | 2001-01-05 | 2004-04-29 | Karen Lingnau | Methods and compositions comprising polycationic compounds |
AT410798B (de) | 2001-01-26 | 2003-07-25 | Cistem Biotechnologies Gmbh | Verfahren zur identifizierung, isolierung und herstellung von antigenen gegen ein spezifisches pathogen |
WO2002095027A2 (en) * | 2001-05-21 | 2002-11-28 | Intercell Ag | Immunostimulatory oligodeoxynucleic molecules |
CN1642982A (zh) * | 2001-07-26 | 2005-07-20 | 唐诚公司 | 活化或抑制类Toll受体9的试剂 |
US7666674B2 (en) | 2001-07-27 | 2010-02-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Use of sterically stabilized cationic liposomes to efficiently deliver CPG oligonucleotides in vivo |
AU2002361468A1 (en) | 2001-08-14 | 2003-03-18 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human S | Method for rapid generation of mature dendritic cells |
MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
AU2002358616A1 (en) * | 2001-12-07 | 2003-06-17 | Intercell Ag | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides |
US8466116B2 (en) | 2001-12-20 | 2013-06-18 | The Unites States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Use of CpG oligodeoxynucleotides to induce epithelial cell growth |
AU2002366710A1 (en) | 2001-12-20 | 2003-07-09 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of | USE OF CpG OLIGODEOXYNUCLEOTIDES TO INDUCE ANGIOGENESIS |
US8088388B2 (en) * | 2002-02-14 | 2012-01-03 | United Biomedical, Inc. | Stabilized synthetic immunogen delivery system |
CA2388049A1 (en) | 2002-05-30 | 2003-11-30 | Immunotech S.A. | Immunostimulatory oligonucleotides and uses thereof |
JP2005533855A (ja) | 2002-07-24 | 2005-11-10 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | 病原性ウイルスからの別のリーディングフレームによりコードされる抗原 |
AR040996A1 (es) | 2002-08-19 | 2005-04-27 | Coley Pharm Group Inc | Acidos nucleicos inmunoestimuladores |
US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
US7378234B2 (en) | 2002-09-13 | 2008-05-27 | Intercell Ag | Method for isolating hepatitis C virus peptides |
US8263091B2 (en) | 2002-09-18 | 2012-09-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method of treating and preventing infections in immunocompromised subjects with immunostimulatory CpG oligonucleotides |
EP2314603A3 (en) | 2002-10-15 | 2011-05-18 | Intercell AG | Nucleic acids coding for adhesion factors of group B streptococcus, adhesion factors of group B streptococcus and futher uses thereof |
SI1601770T1 (sl) | 2003-03-04 | 2010-01-29 | Intercell Ag | Streptococcus pyogenes antigeni |
DE602004029657D1 (de) | 2003-03-24 | 2010-12-02 | Intercell Ag | Verbesserte impfstoffe |
JP2006521321A (ja) * | 2003-03-24 | 2006-09-21 | インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト | 免疫応答を促進するためのミョウバンおよびTh1免疫応答誘起アジュバントの使用 |
US7628994B2 (en) | 2003-03-31 | 2009-12-08 | Intercell Ag | S. epidermidis antigens |
WO2004092209A2 (en) | 2003-04-15 | 2004-10-28 | Intercell Ag | S. pneumoniae antigens |
US7438912B2 (en) | 2003-05-07 | 2008-10-21 | Intercell Ag | S.agalactiae antigens I + II |
CA2525540A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-09 | Intercell Ag | Enterococcus antigens |
CA2530062A1 (en) * | 2003-07-11 | 2005-01-20 | Intercell Ag | Hcv vaccines |
JP4817599B2 (ja) * | 2003-12-25 | 2011-11-16 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 免疫活性増強剤とこれを用いた免疫活性の増強方法 |
KR100721928B1 (ko) * | 2004-11-05 | 2007-05-28 | 주식회사 바이오씨에스 | CpG 올리고데옥시뉴클레오티드를 함유하는 피부질환의치료 또는 예방용 약학적 조성물 |
DK1931379T3 (da) | 2005-10-07 | 2013-08-19 | Sec Dep For Health | Proteiner med forbedret opløselighed samt fremgangsmåder til frembringelse og anvendelse af samme |
TW200806315A (en) | 2006-04-26 | 2008-02-01 | Wyeth Corp | Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions |
EP2040745B1 (en) | 2006-06-28 | 2012-12-05 | Statens Serum Institut | Expanding the t cell repertoire to include subdominant epitopes by vaccination with antigens delivered as protein fragments or peptide cocktails |
EP2059531A1 (en) | 2006-07-07 | 2009-05-20 | Intercell AG | Small streptococcus pyogenes antigens and their use |
EP2287176A1 (en) | 2006-09-15 | 2011-02-23 | Intercell AG | Borrelia antigens |
EP1923069A1 (en) | 2006-11-20 | 2008-05-21 | Intercell AG | Peptides protective against S. pneumoniae and compositions, methods and uses relating thereto |
AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
EP2269625A3 (en) | 2007-01-12 | 2012-08-08 | Intercell AG | Protective proteins of S. agalactiae, combinations thereof and methods of using the same |
EP2338902A1 (en) | 2007-05-02 | 2011-06-29 | Intercell AG | Klebsiella antigens |
EP2158211B1 (en) | 2007-05-31 | 2016-08-10 | Medigene AG | Mutated structural protein of a parvovirus |
EP2012122A1 (en) | 2007-07-06 | 2009-01-07 | Medigene AG | Mutated parvovirus structural proteins as vaccines |
EP2167530A2 (en) | 2007-06-18 | 2010-03-31 | Intercell AG | Chlamydia antigens |
WO2009115508A2 (en) | 2008-03-17 | 2009-09-24 | Intercell Ag | Peptides protective against s. pneumoniae and compositions, methods and uses relating thereto |
CN102316894A (zh) | 2008-06-20 | 2012-01-11 | 惠氏有限责任公司 | 来自β-溶血性链球菌菌株的ORF1358的组合物和使用方法 |
EP2424882A2 (en) | 2009-02-05 | 2012-03-07 | Intercell AG | Peptides protective against e. faecalis, methods and uses relating thereto |
US8617574B2 (en) | 2009-02-13 | 2013-12-31 | Valneva Austria Gmbh | Nontypable Haemophilus influenzae antigens |
SI2445522T1 (sl) | 2009-06-22 | 2017-10-30 | Wyeth Llc | Imunogeni sestavki antigenov Staphylococcusa aureusa |
US9125951B2 (en) | 2009-06-22 | 2015-09-08 | Wyeth Llc | Compositions and methods for preparing Staphylococcus aureus serotype 5 and 8 capsular polysaccharide conjugate immunogenic compositions |
JP2013503148A (ja) | 2009-08-27 | 2013-01-31 | ノバルティス アーゲー | アルミニウム、オリゴヌクレオチドおよびポリカチオンを含むアジュバント |
EP2319871A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-11 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
EP2308896A1 (en) | 2009-10-09 | 2011-04-13 | Sanofi-aventis | Polypeptides for binding to the "receptor for advanced glycation endproducts" as well as compositions and methods involving the same |
PE20121689A1 (es) | 2009-10-09 | 2012-12-14 | Sanofi Sa | Polipeptidos para union al receptor para productos finales de glicosilacion avanzada asi como composiciones y metodos que implican a los mismos |
US8765148B2 (en) | 2010-02-19 | 2014-07-01 | Valneva Austria Gmbh | 1C31 nanoparticles |
US20130071422A1 (en) | 2010-03-18 | 2013-03-21 | Michele Pallaoro | Adjuvanted vaccines for serogroup b meningococcus |
SI3170508T1 (sl) | 2010-06-04 | 2020-01-31 | Wyeth Llc | Formulacije cepiva |
HRP20210242T4 (hr) | 2010-08-23 | 2024-05-10 | Wyeth Llc | Stabilne formulacije antigena iz bakterije neisseria meningitidis rlp2086 |
PL2753352T5 (pl) | 2010-09-03 | 2022-10-17 | Valneva Austria Gmbh | Izolowany polipeptyd białek toksyny a i toksyny b z c. difficile i jego zastosowania |
AR082925A1 (es) | 2010-09-08 | 2013-01-16 | Medigene Ag | Proteinas estructurales mutadas por parvovirus con epitopo de celulas b de proteccion cruzada, producto y metodos relacionados |
CN103096920B (zh) | 2010-09-10 | 2016-03-23 | 惠氏有限责任公司 | 脑膜炎奈瑟球菌orf2086抗原的非脂质化变体 |
CA2819120C (en) | 2010-12-22 | 2016-07-05 | Wyeth Llc | Stable immunogenic compositions of staphylococcus aureus antigens |
WO2012160183A1 (en) * | 2011-05-26 | 2012-11-29 | Intervet International B.V. | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides |
BR112013029966A2 (pt) * | 2011-05-26 | 2017-01-31 | Intervet Int Bv | oligodesoxinucleotídeo imunoestimulatório não metilado, vetor, e, vacina para prevenir ou combater uma doença infecciosa |
ITMI20111182A1 (it) | 2011-06-28 | 2012-12-29 | Canio Buonavoglia | Vaccino per coronavirus canino |
BR122016004924A2 (pt) | 2012-03-09 | 2019-07-30 | Pfizer Inc. | Polipeptídeo isolado e composições imunogênicas compreendendo os mesmos |
SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
HRP20221438T1 (hr) | 2012-12-20 | 2023-02-03 | Pfizer Inc. | Postupak glikokonjugiranja |
JP6446377B2 (ja) | 2013-03-08 | 2018-12-26 | ファイザー・インク | 免疫原性融合ポリペプチド |
CA2923129C (en) | 2013-09-08 | 2020-06-09 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
WO2016130569A1 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Mj Biologics, Inc. | A composition comprising pedv antigens and methods for making and using the composition |
CA2948455C (en) | 2014-05-09 | 2023-09-19 | Universiteit Utrecht Holding B.V. | New cath2 derivatives |
AU2016221318B2 (en) | 2015-02-19 | 2020-06-25 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
EP3292146A1 (en) | 2015-05-04 | 2018-03-14 | Pfizer Inc | Group b streptococcus polysaccharide-protein conjugates, methods for producing conjugates, immunogenic compositions comprising conjugates, and uses thereof |
US10751402B2 (en) | 2016-11-09 | 2020-08-25 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions and uses thereof |
AU2018215585B2 (en) | 2017-01-31 | 2022-03-17 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
JP2021513840A (ja) | 2018-02-16 | 2021-06-03 | 2エー ファーマ アーベー | 自己免疫疾患の処置のためのパルボウイルス構造タンパク質 |
EP3527223A1 (en) | 2018-02-16 | 2019-08-21 | 2A Pharma AB | Mutated parvovirus structural protein |
SG11202110646PA (en) | 2019-05-20 | 2021-10-28 | Valneva Se | A subunit vaccine for treatment or prevention of a respiratory tract infection |
EP3980056A4 (en) | 2019-05-31 | 2023-03-29 | Universidad De Chile | IMMUNOGENIC FORMULATION THAT INDUCES PROTECTION AGAINST SHIGA TOXIN-PRODUCING ESCHERICHIA COLI (STEC). |
US20230146256A1 (en) | 2020-04-17 | 2023-05-11 | Regents Of The University Of Minnesota | SARS-CoV-2 SPIKE RECEPTOR BINDING DOMAIN AND COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF |
CA3192786A1 (en) | 2020-08-26 | 2022-03-03 | Pfizer Inc. | Group b streptococcus polysaccharide-protein conjugates, methods for producing conjugates, immunogenic compositions comprising conjugates, and uses thereof |
CA3194598A1 (en) | 2020-10-07 | 2022-04-14 | Valentina SCREPANTI-SUNDQUIST | Cholera vaccine formulation |
WO2023083964A1 (en) | 2021-11-11 | 2023-05-19 | 2A Pharma Ab | Parvovirus structural protein against beta- and gamma-hpv |
WO2023232901A1 (en) | 2022-06-01 | 2023-12-07 | Valneva Austria Gmbh | Clostridium difficile vaccine |
WO2024069420A2 (en) | 2022-09-29 | 2024-04-04 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising an rsv f protein trimer |
Family Cites Families (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3725545A (en) | 1971-02-03 | 1973-04-03 | R Maes | Enhancement of antibody production by nucleic acid-polycation complexes |
US3906092A (en) | 1971-11-26 | 1975-09-16 | Merck & Co Inc | Stimulation of antibody response |
CA2016841C (en) * | 1989-05-16 | 1999-09-21 | William D. Huse | A method for producing polymers having a preselected activity |
ZA908001B (en) | 1989-10-11 | 1991-08-28 | Merrell Dow Pharma | Inosine/guanosine derivatives as immunosuppressive agents |
US5514577A (en) | 1990-02-26 | 1996-05-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide therapies for modulating the effects of herpes viruses |
ES2101083T3 (es) * | 1990-12-21 | 1997-07-01 | Hoffmann La Roche | Tipado del dna hla dqbeta. |
US5098437A (en) * | 1991-02-13 | 1992-03-24 | Pfizer Hospital Products Group, Inc. | Acetabular cup positioning insert |
ATE198773T1 (de) | 1991-10-23 | 2001-02-15 | Baylor College Medicine | Fingerabdruckartige identifikation von bakterienstämmen mittels amplifikation repetitiver dna-sequenzen |
US5646262A (en) * | 1994-07-28 | 1997-07-08 | Georgetown University | Antisense oligonucleotides against hepatitis B viral replication |
US20020081577A1 (en) * | 1995-06-06 | 2002-06-27 | Robert L. Kilkuskie | Oligonucleotides speciific for hepatitis c virus |
JP4484967B2 (ja) * | 1995-06-06 | 2010-06-16 | ベス イスラエル ディーコネス メディカル センター | Dna診断試験の方法及び装置 |
ZA964446B (en) * | 1995-06-06 | 1996-12-06 | Hoffmann La Roche | Oligonucleotides specific for hepatitis c virus |
CA2267648A1 (en) | 1996-10-02 | 1998-04-09 | David Kilpatrick | Detection and identification of non-polio enteroviruses |
EP1537877A3 (en) * | 1996-10-11 | 2005-08-03 | The Regents Of The University Of California | Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates |
ES2326848T3 (es) | 1997-06-06 | 2009-10-20 | The Regents Of The University Of California | Inhibidores de la actividad de secuencias inmunoestimulatorias de adn. |
US5955443A (en) * | 1998-03-19 | 1999-09-21 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of PECAM-1 |
US6001651A (en) * | 1998-03-20 | 1999-12-14 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of LFA-3 |
IL126919A0 (en) * | 1998-11-05 | 1999-09-22 | Univ Ben Gurion | Antisense oligomer |
NZ508797A (en) * | 1998-06-24 | 2004-02-27 | Innogenetics N | Particles of HCV envelope proteins: use for vaccination |
DE60022665T2 (de) | 1999-09-25 | 2006-06-22 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Immunstimulierende nukeinsäuren |
ATE292638T1 (de) | 2000-05-01 | 2005-04-15 | Hybridon Inc | Modulation von oligonukleotid cpg-vermittelter immunstimulation durch modifikation der nucleoside |
DK1296713T3 (da) * | 2000-06-08 | 2004-01-26 | Intercell Biomedizinische Forschungs & Entwicklungs Gmbh | Immunstimulerende oligodeoxynukleotider |
AT410173B (de) * | 2000-06-08 | 2003-02-25 | Cistem Biotechnologies Gmbh | Antigene zusammensetzung |
DE602004029657D1 (de) * | 2003-03-24 | 2010-12-02 | Intercell Ag | Verbesserte impfstoffe |
US7951845B2 (en) * | 2006-01-19 | 2011-05-31 | The Regents Of The University Of Michigan | Composition and method of treating hearing loss |
-
2001
- 2001-06-07 DK DK01960277T patent/DK1296713T3/da active
- 2001-06-07 AU AU2001281812A patent/AU2001281812B2/en not_active Expired
- 2001-06-07 IL IL15295901A patent/IL152959A0/xx active IP Right Grant
- 2001-06-07 TR TR200302015T patent/TR200302015T4/xx unknown
- 2001-06-07 WO PCT/EP2001/006433 patent/WO2001093905A1/en active IP Right Grant
- 2001-06-07 JP JP2002501476A patent/JP5271471B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 RU RU2003100409A patent/RU2293573C2/ru active
- 2001-06-07 SK SK1815-2002A patent/SK287689B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-06-07 SI SI200130047T patent/SI1296713T1/xx unknown
- 2001-06-07 BR BRPI0111639A patent/BRPI0111639B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-06-07 CA CA2411575A patent/CA2411575C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 CN CNB018107974A patent/CN1309418C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 CZ CZ2002-4168A patent/CZ304195B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-06-07 RU RU2007103151A patent/RU2413520C2/ru active
- 2001-06-07 EP EP20010960277 patent/EP1296713B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 AU AU8181201A patent/AU8181201A/xx active Pending
- 2001-06-07 MX MXPA02012010A patent/MXPA02012010A/es active IP Right Grant
- 2001-06-07 AT AT01960277T patent/ATE249839T1/de active
- 2001-06-07 DE DE2001600814 patent/DE60100814T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-07 KR KR20027016711A patent/KR100799788B1/ko active IP Right Grant
- 2001-06-07 HU HU0301229A patent/HU228264B1/hu unknown
- 2001-06-07 US US10/297,555 patent/US8568742B2/en active Active
- 2001-06-07 PL PL358982A patent/PL211036B1/pl unknown
- 2001-06-07 PT PT01960277T patent/PT1296713E/pt unknown
- 2001-06-07 ES ES01960277T patent/ES2206424T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-11-18 IS IS6627A patent/IS1993B/is unknown
- 2002-11-20 IL IL152959A patent/IL152959A/en unknown
- 2002-12-04 NO NO20025835A patent/NO329492B1/no not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-12-11 HK HK03109011A patent/HK1056678A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-01-10 JP JP2013002571A patent/JP5908851B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2013-03-06 US US13/786,815 patent/US8945591B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-12-30 US US14/585,740 patent/US9492537B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9492537B2 (en) | Methods and compositions involving immunostimulatory oligodeoxynucleotides | |
US7858588B2 (en) | Immunostimulatory oligodeoxynucleic molecules | |
AU784403B2 (en) | Pharmaceutical composition for immunomodulation and preparation of vaccines comprising an antigen and an immunogenic oligodeoxynucleotide and a polycationic polymer as adjuvants | |
AU2001281812A1 (en) | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides | |
ZA200209479B (en) | Immunostimulatory oligodeoxynucleotides. | |
AU2002320762A1 (en) | Immunostimulatory oligodeoxynucleic molecules |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RECP | Rectifications of patent specification |