FI91875C - Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja - Google Patents
Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja Download PDFInfo
- Publication number
- FI91875C FI91875C FI883708A FI883708A FI91875C FI 91875 C FI91875 C FI 91875C FI 883708 A FI883708 A FI 883708A FI 883708 A FI883708 A FI 883708A FI 91875 C FI91875 C FI 91875C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- process according
- alkanol
- elution
- basic proteins
- proteins
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 23
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 7
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 3
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 3
- -1 sulpho groups Chemical group 0.000 claims description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 claims 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 claims 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 abstract description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 13
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 7
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 5
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 5
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 2
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241001400590 Richia Species 0.000 description 1
- 229910006069 SO3H Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229920006243 acrylic copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000021235 carbamoylation Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 238000002788 crimping Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L sodium tetrathionate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)SSS([O-])(=O)=O HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
91675
Menetelmå emåksisten proteiinien eriståmiseksi proteiini-seoksista, jotka sisåltåvåt tållaisia emåksisiå proteiine-ja 5 Valmistettaessa ihmisinsuliinia geeniteknologisten menetelmien avulla insuliinin biosynteesi tapahtuu kåyt-tåen erastå edeltavåå molekyyliå, proinsuliinia. Tåsså B-ketju on liittynyt C-peptidin (yhdiståvå peptidi) vålityk-sella A-ketjuun. Geeniteknologisessa tuotannossa Esche-10 richia colin avulla saadaan joskus ensin fuusioproteiinia, jossa olevaan prosinsuliiniin on liittynyt vielå vieras proteiini, esim. β-galaktosidaasi. Tåmå vieras proteiini tåytyy lohkaista ennen jatkokåsittelyå (vrt. DE-hakemus-julkaisu 34 40 988). Halogeenisyaanipilkkomisen jålkeen 15 kysteiiniryhmåt muutetaan sulfitolyysin avulla (kåsittele-mållå natriumsulfiitilla ja natriumtetrationaatilla) S-sulfonaattimuodokseen. Molekyyli voidaan muuttaa tåstå muodosta luontaiseksi avaruusrakenteekseen pelkiståvåå poimutusta kåyttåen (esim. kåsittelemållå merkaptoetano-20 lilla emåksisesså liuoksessa), samalla kun sen disulfidi-sillat muodostuvat oikealla tavalla. Proinsuliini tai pre-proinsuliini (* proinsuliinin johdannainen; alkutavu pre tarkoittaa yhtå tai useampaa muuta aminohappoa proinsuliinin N-pååsså) muutetaan entsymaattista pikkoutumista kåyt-25 tåen (esim. trypsiinin avulla) pilkkoutumisseokseksi, joka sisåltåå insuliinin esiastetta, insuliini-arg-B31-B32:a, ja C-peptidiå. Nåiden lisåksi syntyy vielå joitakin sivu-tuotteita, kuten esimerkiksi insuliini-des-thr-B30:a, in-suliini-arg-B31sa sekå epåtåydellisesti pilkkoutuneita 30 vålimuotoja.
Mainitut insuliinijohdannaiset ja yhdisteet, joita syntyy kåsiteltåesså låhtoaineita alkuvaiheissa kemialli-sesti, tåytyy erottaa toisistaan. Tålloin on erityisen vaikeaa erottaa luonteeltaan emåksisiå insuliinijohdannai-35 sia, jotka ovat peråisin aminohapoista, jotka ovat terti- 91875 2 aarirakenteen muodostumisen jalkeen molekyylin sisåosissa.
Tåmå osoitetaan vertailukokeessa (ks. osa B): Anio-ninvaihtomenetelmåsså, joka on kuvattu DE-patenttijulkai-sussa 2629568 ja joka on kehitetty insuliinin puhdistuk-5 seen, on se erikoisuus, ettå eluointinesteen proteiinien aggregoitumisen ehkåisemiseksi lisåtåån ei-ionista tensi-diå. Kåytettåesså tåtå insuliinien puhdistukseen hyvin so-pivaa menetelmåå yritettåesså erottaa ja eriståå emåksisiå proteiineja, joita saadaan esimerkiksi geeniteknista alku-10 peråa olevan proinsuliinin tryptisen pilkkomisen avulla, erottuminen on tåysin riittåmåtontå. Tåmå kåy ilmi vastaa-vasta eluutiokåyråstå (ks. osa B); havaitaan, ettå yksit-tåisen peptidin piikit menevåt påållekkåin.
Tunnetaan kuitenkin jo menetelmiå, joiden avulla 15 saavutetaan mainittujen proinsuliinin pilkkoutumistuottei-den erottuminen. Steiner et al. esittåvåt artikkelissa J. Biol. Chem. 246 (1971) 1365-1374 menetelmån C-peptidin eriståmiseksi proinsuliinin pilkkoutumistuoteseoksesta. Tåsså menetelmåsså (saantoja ei ilmoiteta) kromatografoin-20 ti suoritetaan kåyttåen heikosti hapanta, karboksimetyyli-ryhmiå sisåltåvåå (CM) selluloosapohjaista kationinvaihta-jaa. Pakkaus- ja eluointiliuoksiin lisåtåån tålloin 7 mol/1 ureaa proteiinien aggregoitumisen eståmiseksi. Tål-laisen suuren ureapitoisuuden låsnåolo on haitallista, 25 koska se johtaa proteiinien muuttumiseen, ennen kaikkea vapaiden aminoryhmien karbamoyloitumiseen. Markussen et al. kuvaavat teoksessa Protein Engineering, Vol. 1, no. 3, s. 205-213 (1987) anioninvaihtokromatografointimenetelmåå, jossa kåytetåån dietyyli-2-hydroksipropyyliaminoetyylipi-30 toisia (QAE) anioninvaihtajia kolmiulotteisesti verkkoutu-neessa polysakkaridiverkkorakenteisessa matriisissa. Tåsså menetelmåsså - anioninvaihtokromatografialle ei ilmoiteta saantoja - kåytetåån proteiinien aggregoitumisen eståmiseksi 60-% etanoliliuosta. Tållaisten våkevien etanoli-35 liuosten kåyton haittana ovat tarvittavat turvallisuustoi- il 91875 3 menpiteet, joita tarvitaan erityisesti tyoskenneltåesså orgaanisten liuottinden kanssa teknisesså mittakaavassa. Toisaalta mainittuja etanolikonsentraatioita kaytettåesså esiintyi proteiinien denaturoitumista, kuten myohemmåt 5 tutkimukset osoittivat.
Yritettåesså loytåå parempaa emåksisten proteiinien erotus- ja eristysmenetelmåå - sellaisia emåksisiå prote-iineja sisåltåvistå - proteiiniseoksista havaittiin yllåt-tåvåsti, ettå tåmå pååmåårå voidaan saavuttaa kromatogra-10 foimalla proteiiniseos kayttåen voimakkaasti hapanta kat-ioninvaihtajaa ja eluoimalla alkanolin vesiliuoksella, joka sisåltåå vain suhteellisen pienen måårån alkanolia.
On erityisen yllåttåvåå, etta nåin voidaan tekniikan ta-soon verrattuna sekå parantaa erotuskykya etta valttåå 15 erotuksen aikana tapahtuvaa proteiinien lisamuuttumista.
On huomionarvoista, etta voidaan erottaa jopa johdannai-sia, joissa on - proinsuliinin esikåsittelyn yhteydessa syntyviå - muutoksia tertiaarirakenteen sisasså olevissa proteiineissa. Erotettavien proteiinien aggregoitumista ei 20 ole havaittu. Ioninvaihtajien uudelleenkåytolle ei ole mitåån vaikeuksia.
Keksinnon kohteena on siis menetelmå emåksisten proteiinien eriståmiseksi proteiiniseoksista, jotka sisål-tåvåt tållaisia emaksisia proteiineja ja joita saadaan 25 pilkkomalla entsymaattisesti luontaista, puolisynteettistå tai geeniteknologista alkuperåå olevaa proinsuliinia ja/ tax sen johdannaisia, tåyttåmållå ioninvaihtaja proteiini-seoksella ja eluoimalla, jolloin ioninvaihtajana kaytetåån voimakkaasti hapanta kationinvaihtajaa ja eluointi suori-30 tetaan kåyttåen vesi/C1-C4-alkanoliseosta, joka sisåltåå n.
10-50 til.-*, edullisesti n. 20-40 til.-*, erityisesti 30 til.-* alkanolia. Menetelmålle on tunnusomaista se, mitå patenttivaatimuksessa 1 esitetåån. Menetelman avulla ha-luttujen proinsuliinien tai niiden johdannaisten, esim.
35 apinan preproinsuliinin, pilkkoutumisseoksista voidaan 4 91575 eriståå emåksiset proteiinit niin, etta saannot ovat hy-våt. Ioninvaihtajina tulevat periaatteessa kyseeseen kaikki voimakkaasti happamat kationinvaihtaj at, joiden funktionaalinen ryhmå on sulforyhma, erityisesti sulfopro-5 pyyliryhmå CH2-CH2-CH2-S03H, esim. matriisissa, joka koostuu hydrofiilisistå hydroksyyliryhmiå sisaltavistå vinyylipo-lymeereista (esim. RFractogel TSK, valmistaja Merck, Darmstadt), akryylikopolymeereistå (esim. SP RTrisacryl M, valmistaja Réactifs IBF, Villeneuve-la-Garenne, Ranska) tai 10 geeleista, jotka sisåltavåt osan verkkoutunutta agaroosia (esim. S-RSepharose, valmistaja Pharmacia, Uppsala, Ruot-si); erityisen edullisen on S-Sepharose.
Juuri ennen voimakkaasti happaman kationinvaihtajan tåyttåmistå pilkkoutumisseoksella tåmå tulisi tasapainot-15 taa puskuriliuoksella. Tamå puskuriliuos koostuu edulli-sesti vesi/C^-C^-alkanoliseoksesta, jonka alkanolipitoisuus on edullisesti n. 10-50 til.-%, erityisen edullisesti n. 20-40 til.-%, erityisesti n. 30 til.-%. Edullisia alkano-leja ovat etanoli ja isopropanoli, erityisesti isopropano-20 li. Muita lisaaineita, joita puskuriliuokseen voidaan li-satå, ovat esim. suola, erityisesti fysiologisesti siedet-tavå mineraalisuola, yksi tai useampia orgaanisia happoja, edullisesti maitohappo, emås, edullisesti NaOH, ja/tai såilontaaineet. Puskuriliuoksen edullinen pH-arvo on n.
25 2,5-5,5, erityisen edullinen n. 3,5-4,0.
Voimakkaasti happaman kationinvaihtajan tåytto voidaan suorittaa liuottamalla pilkkoutumisseos puskuriliuok-seen - edullisesti sellaiseen, jolla on edella kuvattu koostumus ja edella esitetty pH-arvo - ja saattamalla nåin 30 saatu liuos kontaktiin voimakkaasti happaman kationinvaihta jan kanssa.
Eluointiliuoksella, jolla voi olla periaatteessa samanlainen koostumus kuin alussa mainitulla puskuriliuok-sella, pH-arvo on edullisesti 3,5-4,0. Erityisen sopiva on 35 eluointimenetelma, jossa eluointiliuoksen suolakonsentraa- ii 91875 5 tiogradientti muuttuu ajan mukana edullisesti lineaarises-ti. Tåmå konsentraatiogradientti voi olla esim. sellainen, jossa eluoinnin alussa eluointiliuoksessa on pieni suola-konsentraatio (rajatapauksessa noin 0) ja jossa suolakon-5 sentraatio eluoinnin kuluessa kohoaa. Tållå tavalla voi-daan saada aikaan erityisen tehokas proteiiniseoksen ero-tus. Edullinen suolakonsentraatiogradientti vaihtelee ar-vosta n. 0 mol suolaa/1 (eluoinnin alussa) arvoon η. 1 mol suolaa/1 (eluoinnin lopussa), erityisen edullisesti arvos-10 ta n. 0,15 (eluoinnin alussa) arvoon n. 0,35 mol/1 (eluoinnin lopussa). Suolalisåyksenå tulevat kyseeseen monet orgaaniset ja epåorgaaniset suolat. Edullisia ovat fysiologisesti siedettåvåt suolat kuten ammonium- ja alkalisuo-lat, erityisen edullisesti natriumsuolat, erityisesti nat-15 riumkloridi.
Keksinnon mukainen erotusmenetelmå voidaan toteut-taa eri tavoin. Edullista on suoritus pylvåsmenetelmåå tai panosmenetelmåå kåyttåen. Låmpotila, joka on pidettåvå ioninvaihtokromatografiassa edullisesti vakiona, voi vaih-20 della laajalla alueella. Edullinen on låmpotilavåli n. 10 - n. 50 °C, erityisesti n. 15 - n. 25 °C.
Seuraavan suoritusesimerkin (A) tarkoituksena on selvittåå låhemmin keksintoå. Sitå seuraavan vertailuesi-merkin (B) tarkoituksena on osoittaa keksinnon mukaisen 25 menetelmån paremmuus tekniikan tason mukaiseen insuliinin puhdistusmenetelmåån nåhden (DE-patenttijulkaisu 2629568).
A) Suoritusesimerkki (keksinnon mukainen) 6 1 S-Sepharosea lietetåån puskurin vesiliuokseen, joka sisåltåå 50 mmol/1 maitohappoa, 50 % isopropanolia ja 30 1 mol/1 natriumkloridia ja jonka pH-arvo on n. 3,5, ja sillå tåytetåån n. 80 cm korkea pylvås, jonka halkaisija on 10 cm. Pylvås saatetaan tasapainoon kåyttåen 10 1 aloi-tuspuskuriliuosta (vesiliuos) (50 mmol/1 maitohappoa, 30 % isopropanolia, 0,15 mol/1 natriumkloridia, pH n. 3,5). 15 35 g kiteistå pilkkoutumisseosta, joka sisåltåå 6,2 g insu- 91875 6 liini-arg-B31-32:a, 3 g insuliini-arg-B31:a ja insuliini-des-thr-B30:a sekå tuntemattomia pilkkoutumisvålituotteita sekå johdannaisia, joita syntyy preproihmisinsuliinin pilkkoutumisessa, liuotetaan 3 l:an aloituspuskuria ja 5 kaadetaan pylvååseen. Sen jålkeen eluoidaan vesiliuoksel-la, joka sisåltåå 50 mmol/1 maitohappoa ja 30 % isopro-panolia ja jonka PH-arvo on 3,5 (såådetty natriumhydroksi-dilla) ja natriumkloridigradientti 0,15 mol/1 - 0,35 mol/1. Eluointiliuoksen tilavuus on 2 x 20 1. Virtausno-10 peus on 1,5 1 tunnissa. Fraktiot, jolden insuliini-arg-B31-32-pitoisuus on HPLC:n (korkeapainenestekromatografia) mukaan yli 90 %, otetaan talteen, laimennetaan vedellå suhteessa 1:1 ja saostetaan lisååmållå 10 ml 10-% ZnCl2-liuosta 1 litraan liuosta ja sååtåmållå pH arvoon 6,8.
15 Saanto on 5 g insuliini-arg-B31-32:a, mikå vastaa insulii-ni-arg-B31-32:n suhteen vaiheen saantoa 80 %.
B) Vertailu
Vertailuesimerkki I suoritettiin DE-patenttijul-kaisun 2629568 mukaisesti ja esimerkki 2 keksinnon mukai-20 sesti. Taulukossa 1 on esitetty menetelmisså kåytetyt pa-rametrit ja saavutetut tulokset. Kuva 1 esittåå vertailu-esimerkin I eluoinnin aikana saatua eluointikåyråå, kuva 2 vastaavaa keksinnon mukaisen esimerkin 2 kåyraå. Havait-tiin absorptio UV-alueella kåytettåesså aallonpituutta 278 25 nm (A27e) eluointiajan eli fraktion jårjestysluvun suhteen. Eluointikåyråt osoittavat, ettå keksinnon mukaista mene-telmåå kåytettåesså saavutetaan emåksisten proteiinien parempi erottuminen kuin DE-patenttijulkaisun 2629568 mukaista menetelmåå kåytettåesså. Vastaavasti keksinnon mu-30 kaista menetelmåå kåytettåesså saavutetaan myos parempi saanto ja suurempi tuotteen puhtaus (ks. taulukko 1).
ti s V 91875 o w ^ <e J5 i i «0 i to X I] Μ «-Μ P 3
O3 1 O O m a ra P
Γ-ιζ O Μ -n O CO
£ (ΟΉΌΟ-Ηιη ·Η C M
*. u *nH >1 - Μ η η a) Φ
fl)C 3 3 3 .C -H 3 P - * P
1j id ρ P w >—1 o> o o c 01 c ,_l -H O J3 ·· Φ <0 P I ·· Ή 3 ni ¢71 h ·Η ·· ·Η 0) «Λ CM 01 ·η
m ο Φ HUJ η ΦιΟ η ηΛ! C
ν ι-t !> Λ ·γΙ ρ - - I :3 ·Η
Ο Ο β C g Ή :3 Ρ 3 Ο η gH
a C · ·γΙΛ^>3·Η Π Q) Μ η X a C >ιΡ :3 ϋϋ ‘ 05 3 .lid) -Η Ο Μ 3 Ρ 3 3 m I 3 Μ 3 p 3 -H EHPÉ - ·Η Dvr-> φ j<+j+J:flJ3MnnH UO4 .J c 3 3 Φ ·- » O 3 O (0 c 3 Φ s Jd il:«·Η ^ j: w c i ·· c ij Φ i -ri ·η n ^ p< di 3 D><—1 Φ
o tn β Q) i—I g M O4 Mco-rH
u :0 w 3 .C :3 Φ 3 - O 30)01 q. C 3 0 3 >ι·Η > *n O Μ I I ^ “ P 3 M C M g 3 CU Q< ·Η tU3 , P -H 3 O -H .3 W P ft O CM3
•J Φ n .c -h .h >1 3 m 3 m # # ·η 3 +J
ti +j X ftP >iM 3-H SI -Η ·Η I Λ « ra Φ φ X >vH m g O rH o m rH ·η 3 •Η ·Η K JLO C fti-l O Ή +1 H dP \ OO (H 3 C ft og @ 3 O >1 3 -H U I tn I 01 -H :3 H H I M-l M >1 3 > 33 o · o C --H ft JO 3 m w — am m — gz m ro c <n hh φ ft >-------- O - 4J -Η I I I I +-> 3 33 X Og 3 Μ ·η|
3-H 00 C I ft P 3 3 P
O -H VO 3ΙΛΉ3 P <H I Ή ICO
H Lj H m <4-1 -H OH Q Φ u 3 CP ·· M
- ^ p <T\ I M >i g 3 > -f-l C Μ Η φ O η m CM -Η >ιΤ3 >ι» O R 01 M 3 3 3 jj c «X 3>i>iC^ c 3ΦΜ inc tS S -H CM X -nPÆ-HO -H a M +J fe -Μ I φ
3q3 M 3 Φ > M g — P C tn-H
^ nj u 3 Φ Ρ ·Η ·· φ 3m φ - -Η M 01
2 > ft 3 fi Æt3-M:3a «Ν O φ O --i 3 X
S° C β -Η --H 3 > ·Η v O -H < rHIp .,-ι C *H QQ <ϋ ·· ·Η ί<β <d Η O Η H J3 ·Η (d C«j β Φ ^ Ρ ·Η Ρ ·η ^ I OP 01 C Ρ
ο C X 3 C :3 Μ ι—I 3 >ι<-ι W X η C ·Η jC
•Η ·Η Η Η ·Η g +J :3 -Ρ Ρ - V) >ιΛ -Η ·Η 3 a 3 -η c .c 3 σι οι φο ι-ιυ r-ι ft „<3 η 3 Ο >ί β ·Η ·Η g Η tn Φ :3 3:3 ·η +ι ·Η Μ η g ·Η - Ο >ι Ο 4ΐηα ® _ 4-> Μ c — <η η σ\ ftr-ι μ η c φ «3 ρ φ 3 Ρ ·Η :3 3 X 3 0 -Μ -Μ
2·Η 3 > I Φ Η ·Η > 0»CCU3 ι—I C
fS C Φ Η » >ig^ Μ Οι Φ I *r-t r-Ι^φ
·Η -Ρ 3 < ·Η >,jd Ό J--4 3 Φ C +J
+» -Η 3 Φ W rH +J >,·Η >, .» Μ η +J Λ» <*> 3 .· ο 3
Ο'Η Οιβ αβΦΜΜ-^ΛΗ ΟΜ >iCM ·Η +J
t" C ι -η ι 3 Ο -Μ φ +J dPx:-H ι—ι ο in :3 3 m 0) Τΐ2 Ed « Κ C CH Φ3 ma: lOg ^ νο CO ^ Ι^·Η WC αχ Μ0·Η>ι6 3 ·Η\ ΗΧΗ tn I Η3 g Ο ·Η 3 ·Μ g Μ·Μ ^r-t 3 · Ο -ι-l «λ g 3
g Ο Ηβ@ ρβοίΗΠΙ +JC Ο 3 > «Η c 00 ΦΟΦ+J
CU .Μ-------- 3 2 h j, S S c go f e ·η φ c ··
φ -Μ -Μ -Μ O
SJ rH 01 'Ο Ό -P
> φ a « c ij >, M 3 3 e ι» m tn > .. 3 φ .H -P " -H m m •Η 0) φ -03·· £ .£ ·Γ1 -Η -H PC»·· rHv3 *β Μ» -ΗΦ3» φ^ρ P 30 g0>33 p 3 a x x ta μ Λ Ρ p Φ ρ -π ·η n ·· a ο ·Η χί o
C3r-I 3 3-H-H 3 3 3 M
φ 3 o > (¼ p a k > a< ω a » υ » * 11 1111
Claims (9)
1. Menetelma emåksisten proteiinien eristSmiseksi proteiiniseoksista, jotka sisSltSvåt sellaisia emaksisiå 5 proteiineja ja joita saadaan pilkkomalla entsymaattisesti luontaista, puolisynteettistå tai geeniteknista alkuperåå olevaa proinsuliinia ja/tai sen johdannaista, t u η n e t-t u siita, etta taytetaån voimakkaasti hapan kationin-vaihtaja proteiiniseoksella ja eluoidaan mainitut emaksi-10 set proteiinit vesi/C^-C^-alkanoliseoksella, joka sisaitaa n. 10 - 50 til.-% alkanolia, jolloin eluointiliuoksen pH såådetaan vSlille n. 2,5 - 5,5, ja eluointiin kaytetaan suolakonsentraatiogradienttia, kuten ammonium- tai alka-lisuolagradienttia, joka on vålilia n. 0 - 1 mol/1.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelma, t un net t u siita, etta voimakkaasti happamana kationin-vaihtajana kaytetaan kationinvaihtajaa, jossa on sulforyh-miå, erityisesti sulfopropyyliryhmia.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelma, 20 tunnettu siita, etta voimakkaasti happaman katio- ninvaihtajan pakkaus suoritetaan pH-arvon ollessa vaiilia n. 2,5-5,5, edullisesti vaiilia n. 3,5-4,0.
4. Yhden tai useamman patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta eluointiin ’ 25 kaytetty H20/C1-C4-alkanoliseos sisåltaa C1-C4-alkanolina etanolia tai isopropanolia, erityisesti isopropanolia.
5. Yhden tai useamman patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta eluointiliuoksen pH saadetaan arvoon n. 3,5-4,0.
6. Yhden tai useamman patenttivaatimuksen 1-5 mu kainen menetelma, tunnettu siita, etta pakkaus- ja eluointiliuos sisaitaa puskuriainetta, jonka pohjana on edullisesti orgaaninen happo, erityisesti maitohappo.
7. Yhden tai useamman patenttivaatimuksen 1-6 mu-35 kainen menetelma, tunnettu siita, etta eluointiin II 91875 kåytetåån ammonium- tai alkalisuolagradienttia, joka on valilla n. 0,15-0,35 mol/1.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, tunnet t u siitå, ettå vesi/C^C^-alkanoliseos sisåltåå n. 5 20-40 til.-% alkanolia.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelma, tunnet t u siitå, ettå vesi/C1-C4-alkanoliseos sisåltåå n. 30 til.-% alkanolia. 91875
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3726655 | 1987-08-11 | ||
| DE19873726655 DE3726655A1 (de) | 1987-08-11 | 1987-08-11 | Verfahren zur isolierung basischer proteine aus proteingemischen, welche solche basischen proteine enthalten |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI883708A0 FI883708A0 (fi) | 1988-08-09 |
| FI883708A FI883708A (fi) | 1989-02-12 |
| FI91875B FI91875B (fi) | 1994-05-13 |
| FI91875C true FI91875C (fi) | 1994-08-25 |
Family
ID=6333496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI883708A FI91875C (fi) | 1987-08-11 | 1988-08-09 | Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5101013A (fi) |
| EP (1) | EP0305760B1 (fi) |
| JP (1) | JP2587867B2 (fi) |
| KR (1) | KR0129539B1 (fi) |
| AT (1) | ATE96447T1 (fi) |
| AU (1) | AU609170B2 (fi) |
| CA (1) | CA1340237C (fi) |
| DE (2) | DE3726655A1 (fi) |
| DK (1) | DK173502B1 (fi) |
| ES (1) | ES2047007T3 (fi) |
| FI (1) | FI91875C (fi) |
| HU (1) | HU198218B (fi) |
| IE (1) | IE61557B1 (fi) |
| IL (1) | IL87385A (fi) |
| NO (1) | NO175004C (fi) |
| NZ (1) | NZ225746A (fi) |
| PH (1) | PH26874A (fi) |
| PT (1) | PT88230B (fi) |
| ZA (1) | ZA885871B (fi) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE59305396D1 (de) * | 1992-12-02 | 1997-03-20 | Hoechst Ag | Verfahren zur Gewinnung von Proinsulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
| EP0821006B1 (de) | 1996-07-26 | 2004-04-21 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Insulinderivate mit erhöhter Zinkbindung |
| DE19652713C2 (de) * | 1996-12-18 | 2001-11-22 | Aventis Pharma Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Insulin und Insulinderivaten durch Chromatographie an stark saurem Kationenaustauscher |
| KR100341297B1 (ko) * | 1997-03-29 | 2002-11-16 | 주식회사종근당 | 재조합활성형프로인슐린의분리.정제방법 |
| DE19726167B4 (de) | 1997-06-20 | 2008-01-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung |
| DE19825447A1 (de) | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
| US6444788B1 (en) * | 1999-03-15 | 2002-09-03 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatography of GLP-1, analogs and derivatives thereof |
| EP1163268B1 (en) * | 1999-03-15 | 2011-05-11 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatographic separation of glp-1 and related peptides |
| US6451987B1 (en) * | 1999-03-15 | 2002-09-17 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatography of proteins and peptides |
| DE10114178A1 (de) | 2001-03-23 | 2002-10-10 | Aventis Pharma Gmbh | Zinkfreie und zinkarme Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität |
| DE10227232A1 (de) * | 2002-06-18 | 2004-01-15 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Saure Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität |
| DE10235168A1 (de) * | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Preproinsulin |
| US7193035B2 (en) * | 2002-10-29 | 2007-03-20 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Crystals of insulin analogs and processes for their preparation |
| SE0300791D0 (sv) * | 2003-03-20 | 2003-03-20 | Amersham Biosciences Ab | Use of ph-responsive polymers |
| AU2004266757A1 (en) * | 2003-08-21 | 2005-03-03 | Novo Nordisk A/S | Separation of polypeptides comprising a racemized amino acid |
| US7906069B2 (en) * | 2005-08-04 | 2011-03-15 | Toyo Seikan Kaisha, Ltd. | Method for sterilizing a plastic bottle |
| WO2010043566A2 (de) | 2008-10-17 | 2010-04-22 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Kombination von einem insulin und einem glp-1-agonisten |
| FR2947818B1 (fr) * | 2009-07-09 | 2011-07-29 | Inst Superieur Des Sciences Agronomiques Agroalimentaires Horticoles Et Du Paysage Agro Campus Ouest | Utilisation d'un coproduit issu d'un procede d'extraction du lysozyme a partir de blanc d'oeuf, pour l'obtention d'au moins une proteine basique de blanc d'oeuf |
| PT2554183T (pt) | 2009-11-13 | 2018-07-09 | Sanofi Aventis Deutschland | Composição farmacêutica que compreende um agonista de glp-1, uma insulina e metionina |
| PL3345593T3 (pl) | 2009-11-13 | 2024-04-08 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Kompozycja farmaceutyczna zawierająca desPro36-eksendynę-4(1-39)-Lys6-NH2 i metioninę |
| SI2611458T1 (sl) | 2010-08-30 | 2017-01-31 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Uporaba AVE0010 za izdelavo zdravila za zdravljenje sladkorne bolezni tipa 2 |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| CA2846413C (en) | 2011-08-29 | 2021-11-02 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for use in glycemic control in diabetes type 2 patients |
| AR087744A1 (es) | 2011-09-01 | 2014-04-16 | Sanofi Aventis Deutschland | Composicion farmaceutica para uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa |
| EP2748181B1 (en) * | 2011-09-30 | 2016-03-30 | GE Healthcare BioProcess R&D AB | Method for purification of cleaved pro-insulin |
| US10421795B2 (en) * | 2012-12-17 | 2019-09-24 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Process for purifying insulin and analogues thereof |
| US10407483B2 (en) | 2014-03-14 | 2019-09-10 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Purifying insulin using cation exchange and reverse phase chromatography in the presence of an organic modifier and elevated temperature |
| JP6970615B2 (ja) | 2014-12-12 | 2021-11-24 | サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | インスリングラルギン／リキシセナチド固定比処方 |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
| WO2018147393A1 (ja) * | 2017-02-10 | 2018-08-16 | 三菱ケミカル株式会社 | ヒトインスリン精製用分離剤及びヒトインスリンの精製方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2629568C3 (de) * | 1976-07-01 | 1981-09-10 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten |
| NL7713966A (nl) * | 1976-12-27 | 1978-06-29 | Univ Minnesota | Werkwijze voor het behandelen van insuline. |
| DK311477A (da) * | 1977-07-08 | 1979-01-09 | Leo Lab | Fremgangsmaade ved fremstilling af rent insulin |
| US4459226A (en) * | 1982-02-26 | 1984-07-10 | Eli Lilly And Company | Process for recovering insulin |
| DD247684A1 (de) * | 1983-04-14 | 1987-07-15 | Ulrich Krabiell | Verfahren zur isolierung von insulinderivaten |
| DE3486491T2 (de) * | 1983-04-25 | 2003-01-16 | Chiron Corp., Emeryville | Hybrid-DNS-Synthesis von reifen insulinähnlichen Wachstumsfaktoren |
| DE3440988A1 (de) * | 1984-11-09 | 1986-07-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur spaltung von peptiden und proteinen an der methionyl-bindung |
| DE3511269A1 (de) * | 1985-04-12 | 1986-10-09 | Veb Berlin-Chemie, Ddr 1199 Berlin | Verfahren zur reinigung von insulin |
| JPS6379591A (ja) * | 1986-09-22 | 1988-04-09 | Mitsui Toatsu Chem Inc | ｔＰＡの精製方法 |
| AU607988B2 (en) * | 1987-04-21 | 1991-03-21 | Southern Cross Biotech Pty Ltd. | Production of proteins in active forms |
| ATE114668T1 (de) * | 1988-10-26 | 1994-12-15 | American Cyanamid Co | Verfahren zur verringerung des aggregatinhaltes in wachstumshormonen gleichenden stoffen. |
-
1987
- 1987-08-11 DE DE19873726655 patent/DE3726655A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-08-04 ES ES88112661T patent/ES2047007T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-04 EP EP88112661A patent/EP0305760B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-04 DE DE88112661T patent/DE3885214D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-04 AT AT88112661T patent/ATE96447T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-08-09 FI FI883708A patent/FI91875C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-08-09 KR KR1019880010123A patent/KR0129539B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-08-09 NZ NZ225746A patent/NZ225746A/en unknown
- 1988-08-09 PH PH37374A patent/PH26874A/en unknown
- 1988-08-09 IL IL87385A patent/IL87385A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-08-09 HU HU884131A patent/HU198218B/hu unknown
- 1988-08-09 US US07/230,085 patent/US5101013A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-10 CA CA000574320A patent/CA1340237C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-10 AU AU20591/88A patent/AU609170B2/en not_active Expired
- 1988-08-10 PT PT88230A patent/PT88230B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 DK DK198804476A patent/DK173502B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 JP JP63198127A patent/JP2587867B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-10 NO NO883554A patent/NO175004C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 ZA ZA885871A patent/ZA885871B/xx unknown
- 1988-08-10 IE IE244188A patent/IE61557B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0305760A2 (de) | 1989-03-08 |
| AU2059188A (en) | 1989-02-16 |
| IE882441L (en) | 1989-02-11 |
| EP0305760B1 (de) | 1993-10-27 |
| EP0305760A3 (en) | 1990-06-06 |
| NO883554D0 (no) | 1988-08-10 |
| KR890003799A (ko) | 1989-04-18 |
| ATE96447T1 (de) | 1993-11-15 |
| JP2587867B2 (ja) | 1997-03-05 |
| DK173502B1 (da) | 2001-01-08 |
| US5101013A (en) | 1992-03-31 |
| JPS6486896A (en) | 1989-03-31 |
| DK447688D0 (da) | 1988-08-10 |
| CA1340237C (en) | 1998-12-15 |
| NZ225746A (en) | 1990-11-27 |
| FI883708A (fi) | 1989-02-12 |
| NO175004C (no) | 1994-08-17 |
| PH26874A (en) | 1992-11-16 |
| KR0129539B1 (ko) | 1998-04-04 |
| HU198218B (en) | 1989-08-28 |
| ZA885871B (en) | 1989-04-26 |
| DE3885214D1 (de) | 1993-12-02 |
| FI91875B (fi) | 1994-05-13 |
| FI883708A0 (fi) | 1988-08-09 |
| NO883554L (no) | 1989-02-13 |
| DE3726655A1 (de) | 1989-02-23 |
| IE61557B1 (en) | 1994-11-16 |
| PT88230A (pt) | 1989-06-30 |
| IL87385A (en) | 1993-08-18 |
| ES2047007T3 (es) | 1994-02-16 |
| DK447688A (da) | 1989-02-12 |
| AU609170B2 (en) | 1991-04-26 |
| NO175004B (no) | 1994-05-09 |
| IL87385A0 (en) | 1989-01-31 |
| PT88230B (pt) | 1995-03-01 |
| HUT47958A (en) | 1989-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI91875C (fi) | Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja | |
| US7790677B2 (en) | Insulin production methods and pro-insulin constructs | |
| Bensch et al. | hBD‐1: a novel β‐defensin from human plasma | |
| KR101530065B1 (ko) | 엑센딘-4 및 이의 유사체의 융합 단백질, 제조방법 및 이의 용도 | |
| EP0397420B1 (en) | Enzymatic removal of a protein amino-terminal sequence | |
| JP4975895B2 (ja) | 高圧液体クロマトグラフィーによるインシュリンの単離方法 | |
| WO2006058620A2 (de) | Verfahren zur herstellung von carboxy-terminal amidierten peptiden | |
| NO318424B1 (no) | Fremgangsmate for isolering av insulin med korrekt koblede cysteinbroer | |
| EP3845240A1 (en) | Novel pro-insulin aspart structure and method for preparing insulin aspart | |
| LT3329B (en) | Method for the purification of insulin | |
| DK149778B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af des-pheb1-humaninsulin eller derivater deraf | |
| WO1990004035A1 (en) | Recombinant pdgf and methods for production | |
| JPS6461482A (en) | Dehydrocamptothecin and production thereof | |
| KR890001244B1 (ko) | 성장 호르몬-양 물질의 정제방법 | |
| HU196218B (en) | Process for preparing quinoline carboxylic acid boric acid anhydrides | |
| US5459049A (en) | Motilin-like polypeptide and use thereof | |
| DK146622B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af aminosyrer ud fra de tilsvarende n-carbamylaminosyrer | |
| EP1525218B1 (en) | Bicyclic oligopeptides and their use as glucagon receptor antagonists | |
| Gaertner et al. | Site-specific religation of G-CSF fragments through a thioether bond | |
| RU2087151C1 (ru) | Способ получения высокочистого инсулина | |
| JP2994017B2 (ja) | ポリペプチド | |
| CN107935895A (zh) | 化合物及其制备方法和应用 | |
| KR880012505A (ko) | 신규 염소화 방법 | |
| EP1841725B1 (en) | A process for the purification of gabapentin | |
| CN111909255A (zh) | 胰岛素衍生物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: AVENTIS PHARMA DEUTSCHLAND GMBH |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH Free format text: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH |
|
| MA | Patent expired |