HU198218B - Process for isolating basic proteins from protein-mixtures - Google Patents
Process for isolating basic proteins from protein-mixtures Download PDFInfo
- Publication number
- HU198218B HU198218B HU884131A HU413188A HU198218B HU 198218 B HU198218 B HU 198218B HU 884131 A HU884131 A HU 884131A HU 413188 A HU413188 A HU 413188A HU 198218 B HU198218 B HU 198218B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- elution
- process according
- protein
- alkanol
- mixture
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 20
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 title claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 13
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 claims description 12
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 10
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 10
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- -1 sulfopropyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 5
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 159000000011 group IA salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 5
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 4
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229920006243 acrylic copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000021235 carbamoylation Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 101150008001 pl gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L sodium tetrathionate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)SSS([O-])(=O)=O HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás bázikus proteinek elkülönítésére proinzulin és/vagy származékai enzimatikus hasításakor keletkező proteinkeverékekből.
Humáninzulin géntechnikai előállításánál az inzulin bioszintézisét egy prekurzoron, a proinzulinon keresztül hajtják végre, melynek során a B-láncot a C-peptiden ( = Connecting Peptide) át kapcsolják össze az A-lánccal. Az Escherichia coli révén végbemenő géntechnológiai folyamatban olykor előbb egy fúziós proteint kapunk, melynél a proinzulinhoz még egy idegen protein, például β-galaktozidáz kapcsolódik. Ezt az idegen proteint a további feldolgozás előtt először le kell hasítani, pl. halogén-cianiddal (1. DE-OS 34 40 988). A halogén-cianiddal való hasítás után a cisztein-maradékot szulfitolizissel (nátrium-szulfittal és nátrium-tetrationáttal való kezeléssel) S-szulfonáttá alakítjuk. Ebből a formából a molekulát reduktív úton (például merkapto-etanollal való kezeléssel bázikus oldatban) a diszulfid-hid képzése közben natív térszerkezetébe viszik át. A proinzulinból illetve pre-proinzulinból (a = = proinzulin származéka; a .pre* előtag a proinzulin N-terminusán lévő egy vagy több kiegészítő aminosavra vonatkozik) enzimatikus hasítással (pl. tripszinnel) egy inzulinprekurzort, az inzulin-Arg-B31-B32-t és C-peptidet tartalmazó hasítási keveréket állítanak elő. A keverék ezek mellett még néhány mellékterméket, mint pl. inzulin-Des-Thr-B30-t, inzulin-Arg-B31-t valamint nem teljesen lehasadt intermediereket tartalmaz.
A kiindulási anyag kémiai kezelésével első lépcsőben keletkezett inzulinszármazékokat és vegyületeket egymástól el kell választani. Különösen nehéz ez a feladat, ha bázikus jellegű inzulinszármazékokat kell szétválasztani. amelyek a tercier-szerkezet képződése után a molekulán belül lévő aminosavakon derivatizálódást mutatnak.
Erre vonatkozólag egy összehasonlító kísérlet ad tájékoztatást (1. B rész): a 26 29 568 sz. német szövetségi köztársaság-beli szabadalmi leírás inzulin tisztítására vonatkozó anioncserélő eljárást ismertet, melynek során az eluáló folyadékhoz a protein-aggregáció elkerülése érdekében nemionos tenzidet adnak. Ez az eljárás jól alkalmazható inzulinok tisztításához, de ha pL géntechnikai eredetű proinzulin tripszinnel történő hasításával kapott bázikue proteinek elválasztását és elkülönítését kísérlik meg, ez nem hozza meg a kívánt eredményt, a szétválasztás nem sikerül. Ezt a megfelelő eluálási profil (1. B rész) bizonyltja; látható, hogy az egyes peptidekre vonatkozó hullámcsúcsok egymásba átmennek.
Ismeretesek olyan eljárások is, amelyek segítségével az említett proinzulin hasítási termékek szétválaszthatok. - Steiner és társai a .Journ. of Bioi. Chem.* 246, 1365-1374. oldalán (1971) C-peptid elkülönítésére vonatkozó eljárásról tájékoztatnak proinzulin hasítási termékből. Ennél az eljárásnál (hozamot nem adtak meg) gyengén savanyú, karboximetilcsoportokát (CM) tartalmazó, cellulózbázisú kationcserélőn krornatografálunk. A felvitelre kerülő és az eluáló oldathoz 7 mól/1 karbamidot adnak, hogy megakadályozzák a proteinek aggregációját. Ilyen nagy mennyiségű karbamid jelenléte azonban hátrányos, mert ez proteinszármazékok kialakulásához vezet, elsősorban a szabad aminocsoportok karbamoilezödéséhez.
Markussen és társai a .Protein Engineering* 1. kőt. 3. sz. 205-213. oldalán (1987) kromatográfiás eljárást ismertetnek háromdimenziós, térhálósított poliszacharid mátrix alapú, dietil-2-hidroxi-propil-amino-etil-tartalmú (QAE) anioncserélőn. - Ennél az eljárásnál - az anioncserélős kromatográfia hozamát nem adták meg - a proteinek aggregációjának meggátlására 60%-os etanol-oldatban dolgoznak. A koncentrált etanol-oldatok alkalmazásának az a hátránya, hogy a koncentrált szerves oldószerekkel kapcsolatban szükséges technikai, biztonsági előírásokat kell követni. Másfelől pedig az említett alkohol-koncentrációnál a proteinek denaturálódása lép fel.
A fentiek ismeretében azt a feladatot tűztük ki, hogy megfelelő szétválasztási és elkülönítési eljárást dolgozunk ki bázikus proteinek előállításához proteinkeverékekből. Azt tapasztaltuk, hogy ha a proteinkeverékeket erősen savas kationcserélőn kromatografáljuk és az eluáláshoz viszonylag kis mennyiségű alkoholt használunk, a technika állásához képest egyrészt a szétválasztás kedvezőbb eredményt ad, másrészt a proteinek átalakulása is messzemenően elkerülhető. Figyelemreméltó, hogy olyan származékok is elválaszthatók, amelyek - a proinzulin előkezelésénél keletkező - változást mutatnak a szóbanlevő proteinek tercier-szerkezetében. A szétválasztott proteinek aggregációjára nem került sor. Az ioncserélő ismételt alkalmazása semmiféle nehézséget nem okoz.
A találmány tárgya tehát eljárás bázikus proteinek elkülönítésére proinzulin és/vagy ennek természetes, félszintetikus vagy géntechnikai eredetű származékai enzimatikus hatásával kapott proteinkeverékekből, melynek során a proteinkeveréket ioncserélőre visszük fel és eluáljuk. Találmányunkat az jellemzi, hogy ioncserélőként erősen savas kationcserélöt alkalmazunk és az eluáláshoz viz és 1-4 szénatomos alkanol keverékét használjuk, a keverék kb. 10-50 térfogat%, előnyösen kb. 20-40 térfogat%, különösen 30 térfogat% aikanolt tartalmaz. A találmány szerinti eljárással nagy hozammal lehet bázikus proteineket elkülöníteni tetszés szerinti proinzulinok illetve ezek származékai, mint pl. majom-pre-proinzulín hasítási keverékeiből. Ioncserélőként elvben valamennyi erősen savas kationcserélő szóba jöhet. Előnyösek
HU 198218 Β azok az erősen savas kationceerólők, melyek funkciós csoportként szulfocsoportot, különösen szulfo-propilcsoportot (-CH2-CH2-CH2-SOaH) tartalmaznak, pl. hidrofil, hidroxiceoportot tartalmazó vinilpolimer (pl. <8>Fracto- 5 gél TSK, gyártó cég Merck, Darmstadt), akril-kopolimer (pl. SP <> Trisacryl M, gyártó cég Réactifs IBF, Villeneuve-la-Gavenne, Franciaország) mátrixon vagy térhálós agaróz részt tartalmazó géleken (pl. S-,8) Sepharo- ló ee, gyártó cég Pharmacia, Upsala, Svédország); különösen előnyös az S-Sepharose.
Közvetlenül a hasítási keverék felvitele előtt az erősen savas kationcserélőhőz pufferoldatot kell adni. A pufferoldat előnyösen 15 víz ée 1-4 szénatomos alkohol keveréke, melyben az alkohol mennyisége előnyösen kb. 10-50 térfogat*, célszerűen kb. 20-40 térfogat*, különösen kb. 30 térfogat*. Előnyben részesülnek az etanol és az izopropanol, kü- 20 lönösen az izopropanol· A pufferoldathoz további adalékanyagok adhatók, pl. só, előnyösen fiziológiásán elviselhető ásványi sók, egy vagy több tetszés szerinti szerves sav, előnyösen tejsav, valamilyen bázis, előnyösen 25 NaOH, és/vagy konzerváló anyagok. A pufferoldat előnyös pH-értéke kb. 2,5-5,5 között, különösen kb. 3,5-4,0 között van.
Az erősen savas kationcserélőre való felvitelhez a hasitási keveréket egy pufféról- 30 datban - előnyösen az előbbiekben leírt őszszetételben és a megadott pH értéken - oldjuk és az igy kapott oldatot az erősen savas kationcserélővei érintkezésbe hozzuk.
Az eluáló oldat - melynek lényegében az 35 előbb leírt pufferoldattal azonos összetétele van - pH-értéke előnyösen 3,5-4,0 között van. Különösen olyan elúciós eljárás minősül előnyösnek, melynél az eluáló oldat előnyösen lineáris felfutású sókoncentráció-gradienst 40 mutat.
Ez a koncentráció-gradiens például úgy hozható létre, hogy az eluálás kezdetén az eluáló oldat sókoncentrációja csekély (határesetben közel 0) és az elúciós folyamat során 45 a sókoncentrációt növeljük. Ezen a módon a proteinkeveréket különösen hatékonyan lehet szétválasztani. Az előnyÖB sókoncentrációgradiens a közel 0 mól só/1 (az eluálás kezdete) és a kb. 1 mól só/1 (az eluálás vége, 50 között váltakozhat, különösen előnyös a kb.
0,15 (az eluálás kezdete) és a 0,35 mól/1 (az eluálás vége) közötti érték. Sóadalékként számos szerves és szervetlen só jöhet számításba. Előnyösek a fiziológiásán elviselhető 55 sók, mint az ammónium- és alkáli-sók, célszerűen nátrium-sók, különösen a nátrium-klorid.
A találmány szerinti szétválasztási eljárást különböző módon, előnyösen oszlopon 60 vagy szakaszosan valósíthatjuk meg. A hőmérsékletet - amelyet az ioncserélő-kromatográfiában előnyösen konstants értéken kell tartani - széles körben variálhatjuk. Előnyös a kb. -10 °C-50 °C közötti, különösen a 15-20 °C közötti hőmérséklet-intervallum.
Az alábbi kiviteli példában (A) a találmányt közelebbről mutatjuk be. Az utána következő összehasonlító példával (B) a találmány szerinti eljárás előnyeit kívánjuk bizonyítani a technika állásához tartozó (26 29 568 sz. NSZK-beli szabadalmi leírás), inzulin tisztítására vonatkozó eljárással szemben.
A) példa a találmány szerinti eljáráshoz mmól/1 tejsavat, 30 tömeg* izopropanolt és 1 raól/1 nátrium-kloridot tartalmazó kb. 3,5 pH-értékű vizes pufferoldatban 6 1 S-Sepharose-t feliszapolunk és kb. 80 cm magasságban 10 cm átmérőjű oszlopba töltünk. Az oszlopot 10 1 vizes start-pufferoldattal (50 mmól/1 tejsav, 30 tömeg* izopropanol, 0,15 mmól/1 nátrium-klorid, pH-érték kb. 3,5) tartjuk egyensúlyban. Pre-prohumáninzulin tripszinnel végrehajtott hasításából származó, 6,2 g inzulin-Arg-B31-32-t, 3 g inzulin-Arg-B31-t és inzulin-Des-Thr-B30-t, valamint ismeretlen hasitási intermediereket és származékokat tartalmazó kristályos hasitási keverékből 15 g-t 3 1 start-pufferben oldunk és az oszlopra felvisszük. Utána 50 mmól/1 tejsavat és 30 tömeg* izopropanolt tartalmazó, 3,5 pH-értéken (NaOH-val beállított) vizes oldattal és 0,15 mól/1-0,35 mól/1 grádiensű nátrium-kor id dal eluáljuk. Az eluáló oldat tömege 2 x 20 1. Az átfolyási sebesség 1,5 1/óra. Azokat a frakciókat, melyek inzulin-Arg-B31-32 tartalma HPLC (High Pressure Liquid Chromatography = nagynyomású folyadék-kromatogrefia) szerint 90* fölött van, összegyűjtjük, 1:1 arányban vizzel hígítjuk, majd 10 ml 10%-os ZnCLz-oldat/l oldat hozzáadásával és a pH 6,8-ra való beállításával kicsapjuk. A hozam 5 g inzulin-Arg-B31-32, ami az inzulin-Arg-B31-32-re vonatkoztatva 80% oszlophozamnak felel meg.
B) összehasonlító példák
Az I összehasonlító példát a 26 29 568 ez. NSZK-beli szabadalmi leírás, és a II példát a találmány szerint hajtottuk végre. Az
1. táblázatban az eljárási paramétereket és az elért eredményeket állítottuk egymással szembe. Az 1. ábra az I összehasonlító példánál, a 2. ábra a II, a találmány szerinti eljárásnál felvett elúciós profilt mutatja. Az A abszorpciót az UV-tartományban 278 nm hullámhosszúságnál (Arra), szemben az elúciós idővel illetve a frakciók számával vittük fel· Az elúciós profilok mutatják, hogy a találmány szerint jobban szétválaszthatók a bázikus proteinek, mint a 26 29 568 sz. NSZK-beli szabadalmi leirásban ismertetett eljárással. Ennek megfelelően a találmány szerinti eljárás nagyobb hozamot és a termék nagyobb tisztaságát is eredményezi (l· 1. táblázat).
-3HU 198218 B fi *9 fi
N oo
S c
•fi
B z
s lO σ>
o
I «Α
PÍ23
| o uí | 75 c | |||
| co | fi | |||
| bű | fi. | |||
| *s co | X fi. | o »4 fi. | ||
| b | * | o | tt | |
| o | > | o | ||
| •σ -fi | fi 00 •o | tt | bű | 00 |
| ► w | O CO | co | •O «X |
Λ
M 00 •sl 11 > CO 4J n -o I M bű oo h X » 2 C o *2 tt
2*3 c «<£ * X) CJ Jj co S i «ο «Η N CO «Ο a -x bű Jtí U «ο ί | ~ C ss
C N összehasonlító ioncserélőé kromatográfia (E. coli révén géntechnikailag előállított majom-proinzulin tripszines kezelésével nyert proteinkeverékre vonatkozóan) <3 0» •ο Λ ft
W B Z «Β b ti *7) 00 ~ fi CO B X «Ο B
8*3
Cű O) 5 8 W 4 C jz (D g «» s *«-* <0 e JS «3 p á 3
Os
8-g| C 2 g c °á § §·?
:8 „ v l? >* r p. -a
SOS
O
X c
V
S έ
•w
B o
,C
O
Λ!
Jt
0) _ u IT sí X 3 a s £ s ► o
O *5 iH Sfi »25 ω o £ g.3 Sf c 4
4» O
SC fi.
| g a b | tt O (fi | tt ΙΛ | |
| 2 o 8 | X» bű | X I | |
| Ί 0. O | x5 | o | |
| © i x | •X | X |
I ttf
Í “ < 9 x -S g « &
•fi fi _>
<J rH J CO £ X bű <
** L Ό -« C N g X <o
M tí «5 3
04 S σι >»
B I c u c e c*3 0) •a β S fi I 00 cd •fi >
a. C P V flt «Μ *9 4
CU bű l * .1. fi Ü N
SS .2 2 O -<B
U.
bű •fi u>
s
HU 198218 Β
Claims (7)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás bázikus proteinek elkülönítésére proinzulin és/vagy ennek természetes, félszintetikus vagy géntechnikai .eredetű 5 származékai enzimatikus hasításával kapott proteinkeverékekből, melynek során a proteinkeveréket ioncserélőre visszük fel és eluáljuk, azzal jellemezve, hogy ioncserélőként erősen savas kationcseré- 10 löt alkalmazunk, és az eluáláshoz víz és 1-4 szénatomos alkanol olyan keverékét használjuk, mely 10-50 térfogata, előnyösen kb. 20-40 térfogat%, különösen 30 tétfogatX alkanolt tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy erősen savas kationcseré lőként szulfocsoportot, különösen szulfopropilcsoportot tartalmazó kationcserélőt alkalmazunk.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypontok szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a proteinkeveréket 2,5-5,5 előnyösen 3,5-4,0 pH-értáken visszük fel az erősen savas kationcserélőre.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az eluáláshoz, viz és 1-4 szénatomos alkanol olyan keverékét alkalmazzuk, mely alkanolként etanolt vagy izopropanolt, különösen izopropanolt tartalmaz.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az elúciós oldat pH-ját 3,5-4# pH-értékre állítjuk be.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti 15 eljárás azzal jellemezve, hogy a felvitelre kerülő és az elúciós oldathoz puffért, előnyösen szerves savat, különösen tejsavat alkalmazunk.
- 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti 20 eljárás azzal jellemezve, hogy az eluálást0-1 mól/1, különösen 0,15-0,35 mól/1 ammónium- vagy alkálisó-gradienssel hajtjuk végre.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19873726655 DE3726655A1 (de) | 1987-08-11 | 1987-08-11 | Verfahren zur isolierung basischer proteine aus proteingemischen, welche solche basischen proteine enthalten |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT47958A HUT47958A (en) | 1989-04-28 |
| HU198218B true HU198218B (en) | 1989-08-28 |
Family
ID=6333496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU884131A HU198218B (en) | 1987-08-11 | 1988-08-09 | Process for isolating basic proteins from protein-mixtures |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5101013A (hu) |
| EP (1) | EP0305760B1 (hu) |
| JP (1) | JP2587867B2 (hu) |
| KR (1) | KR0129539B1 (hu) |
| AT (1) | ATE96447T1 (hu) |
| AU (1) | AU609170B2 (hu) |
| CA (1) | CA1340237C (hu) |
| DE (2) | DE3726655A1 (hu) |
| DK (1) | DK173502B1 (hu) |
| ES (1) | ES2047007T3 (hu) |
| FI (1) | FI91875C (hu) |
| HU (1) | HU198218B (hu) |
| IE (1) | IE61557B1 (hu) |
| IL (1) | IL87385A (hu) |
| NO (1) | NO175004C (hu) |
| NZ (1) | NZ225746A (hu) |
| PH (1) | PH26874A (hu) |
| PT (1) | PT88230B (hu) |
| ZA (1) | ZA885871B (hu) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0600372T3 (da) | 1992-12-02 | 1997-08-11 | Hoechst Ag | Fremgangsmåde til fremstilling af proinsulin med korrekt forbundne cystinbroer. |
| DE59711533D1 (de) | 1996-07-26 | 2004-05-27 | Aventis Pharma Gmbh | Insulinderivate mit erhöhter Zinkbindung |
| DE19652713C2 (de) * | 1996-12-18 | 2001-11-22 | Aventis Pharma Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Insulin und Insulinderivaten durch Chromatographie an stark saurem Kationenaustauscher |
| KR100341297B1 (ko) * | 1997-03-29 | 2002-11-16 | 주식회사종근당 | 재조합활성형프로인슐린의분리.정제방법 |
| DE19726167B4 (de) | 1997-06-20 | 2008-01-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung |
| DE19825447A1 (de) | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
| ATE509028T1 (de) * | 1999-03-15 | 2011-05-15 | Novo Nordisk As | Ionen-austausch-chromatographische trennung von glp-1 und verwandten peptiden |
| US6451987B1 (en) * | 1999-03-15 | 2002-09-17 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatography of proteins and peptides |
| US6444788B1 (en) | 1999-03-15 | 2002-09-03 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatography of GLP-1, analogs and derivatives thereof |
| DE10114178A1 (de) | 2001-03-23 | 2002-10-10 | Aventis Pharma Gmbh | Zinkfreie und zinkarme Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität |
| DE10227232A1 (de) * | 2002-06-18 | 2004-01-15 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Saure Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität |
| DE10235168A1 (de) * | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Preproinsulin |
| US7193035B2 (en) * | 2002-10-29 | 2007-03-20 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Crystals of insulin analogs and processes for their preparation |
| SE0300791D0 (sv) * | 2003-03-20 | 2003-03-20 | Amersham Biosciences Ab | Use of ph-responsive polymers |
| DE602004023626D1 (de) * | 2003-08-21 | 2009-11-26 | Novo Nordisk As | Trennung von polypeptiden mit einer racemisierten aminosäure |
| WO2007015586A1 (ja) * | 2005-08-04 | 2007-02-08 | Toyo Seikan Kaisha, Ltd. | プラスチックボトル殺菌方法 |
| EP3228320B1 (de) | 2008-10-17 | 2019-12-18 | Sanofi-Aventis Deutschland GmbH | Kombination von einem insulin und einem glp-1-agonisten |
| FR2947818B1 (fr) * | 2009-07-09 | 2011-07-29 | Inst Superieur Des Sciences Agronomiques Agroalimentaires Horticoles Et Du Paysage Agro Campus Ouest | Utilisation d'un coproduit issu d'un procede d'extraction du lysozyme a partir de blanc d'oeuf, pour l'obtention d'au moins une proteine basique de blanc d'oeuf |
| UY33025A (es) | 2009-11-13 | 2011-06-30 | Sanofi Aventis Deustschland Gmbh | Composicion farmaceutica que comprende un agonista de glp-1 metionina |
| AR080669A1 (es) | 2009-11-13 | 2012-05-02 | Sanofi Aventis Deutschland | Composicion farmaceutica que comprende un agonista de glp-1, una insulina y metionina |
| MX339614B (es) | 2010-08-30 | 2016-06-02 | Sanofi - Aventis Deutschland GmbH | Uso de ave0010 para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 2. |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| RU2650616C2 (ru) | 2011-08-29 | 2018-04-16 | Санофи-Авентис Дойчланд Гмбх | Фармацевтическая комбинация для применения при гликемическом контроле у пациентов с сахарным диабетом 2 типа |
| TWI559929B (en) | 2011-09-01 | 2016-12-01 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| PL2748181T3 (pl) | 2011-09-30 | 2016-08-31 | Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab | Sposób oczyszczania rozszczepionej proinsuliny |
| EP2931301B2 (en) | 2012-12-17 | 2021-09-15 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Process for purifying insulin and analogues thereof |
| EP3116531B1 (en) | 2014-03-14 | 2021-10-20 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Purifying insulin using cation exchange and reverse phase chromatography in the presence of an organic modifier and elevated temperature |
| CN107206058A (zh) | 2014-12-12 | 2017-09-26 | 赛诺菲-安万特德国有限公司 | 甘精胰岛素/利西拉来固定比率配制剂 |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
| JPWO2018147393A1 (ja) * | 2017-02-10 | 2019-11-21 | 三菱ケミカル株式会社 | ヒトインスリン精製用分離剤及びヒトインスリンの精製方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2629568C3 (de) * | 1976-07-01 | 1981-09-10 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten |
| NL7713966A (nl) * | 1976-12-27 | 1978-06-29 | Univ Minnesota | Werkwijze voor het behandelen van insuline. |
| DK311477A (da) * | 1977-07-08 | 1979-01-09 | Leo Lab | Fremgangsmaade ved fremstilling af rent insulin |
| US4459226A (en) * | 1982-02-26 | 1984-07-10 | Eli Lilly And Company | Process for recovering insulin |
| DD247684A1 (de) * | 1983-04-14 | 1987-07-15 | Ulrich Krabiell | Verfahren zur isolierung von insulinderivaten |
| ATE95236T1 (de) * | 1983-04-25 | 1993-10-15 | Chiron Corp | Hybrid-dns-synthesis von reifen insulinaehnlichen wachstumsfaktoren. |
| DE3440988A1 (de) * | 1984-11-09 | 1986-07-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur spaltung von peptiden und proteinen an der methionyl-bindung |
| DE3511269A1 (de) * | 1985-04-12 | 1986-10-09 | Veb Berlin-Chemie, Ddr 1199 Berlin | Verfahren zur reinigung von insulin |
| JPS6379591A (ja) * | 1986-09-22 | 1988-04-09 | Mitsui Toatsu Chem Inc | ｔＰＡの精製方法 |
| AU607988B2 (en) * | 1987-04-21 | 1991-03-21 | Southern Cross Biotech Pty Ltd. | Production of proteins in active forms |
| DE68919647T2 (de) * | 1988-10-26 | 1995-05-11 | American Cyanamid Co | Verfahren zur Verringerung des Aggregatinhaltes in Wachstumshormonen gleichenden Stoffen. |
-
1987
- 1987-08-11 DE DE19873726655 patent/DE3726655A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-08-04 ES ES88112661T patent/ES2047007T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-04 EP EP88112661A patent/EP0305760B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-04 AT AT88112661T patent/ATE96447T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-08-04 DE DE88112661T patent/DE3885214D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-09 KR KR1019880010123A patent/KR0129539B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-08-09 NZ NZ225746A patent/NZ225746A/en unknown
- 1988-08-09 PH PH37374A patent/PH26874A/en unknown
- 1988-08-09 FI FI883708A patent/FI91875C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-08-09 IL IL87385A patent/IL87385A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-08-09 US US07/230,085 patent/US5101013A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-09 HU HU884131A patent/HU198218B/hu unknown
- 1988-08-10 AU AU20591/88A patent/AU609170B2/en not_active Expired
- 1988-08-10 CA CA000574320A patent/CA1340237C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-10 DK DK198804476A patent/DK173502B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 JP JP63198127A patent/JP2587867B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-10 IE IE244188A patent/IE61557B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 PT PT88230A patent/PT88230B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 NO NO883554A patent/NO175004C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 ZA ZA885871A patent/ZA885871B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT88230B (pt) | 1995-03-01 |
| FI91875C (fi) | 1994-08-25 |
| DK447688A (da) | 1989-02-12 |
| ES2047007T3 (es) | 1994-02-16 |
| HUT47958A (en) | 1989-04-28 |
| IL87385A (en) | 1993-08-18 |
| KR0129539B1 (ko) | 1998-04-04 |
| FI91875B (fi) | 1994-05-13 |
| NZ225746A (en) | 1990-11-27 |
| IE882441L (en) | 1989-02-11 |
| IL87385A0 (en) | 1989-01-31 |
| EP0305760A3 (en) | 1990-06-06 |
| DK173502B1 (da) | 2001-01-08 |
| NO883554D0 (no) | 1988-08-10 |
| ATE96447T1 (de) | 1993-11-15 |
| CA1340237C (en) | 1998-12-15 |
| NO175004C (no) | 1994-08-17 |
| IE61557B1 (en) | 1994-11-16 |
| EP0305760B1 (de) | 1993-10-27 |
| AU2059188A (en) | 1989-02-16 |
| DE3885214D1 (de) | 1993-12-02 |
| US5101013A (en) | 1992-03-31 |
| KR890003799A (ko) | 1989-04-18 |
| PT88230A (pt) | 1989-06-30 |
| NO175004B (no) | 1994-05-09 |
| JPS6486896A (en) | 1989-03-31 |
| DE3726655A1 (de) | 1989-02-23 |
| FI883708A (fi) | 1989-02-12 |
| ZA885871B (en) | 1989-04-26 |
| PH26874A (en) | 1992-11-16 |
| NO883554L (no) | 1989-02-13 |
| JP2587867B2 (ja) | 1997-03-05 |
| FI883708A0 (fi) | 1988-08-09 |
| AU609170B2 (en) | 1991-04-26 |
| DK447688D0 (da) | 1988-08-10 |
| EP0305760A2 (de) | 1989-03-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU198218B (en) | Process for isolating basic proteins from protein-mixtures | |
| US7790677B2 (en) | Insulin production methods and pro-insulin constructs | |
| JP4975895B2 (ja) | 高圧液体クロマトグラフィーによるインシュリンの単離方法 | |
| AU644105B2 (en) | Production of biologically active insulin-like growth factor I from high expression host cell systems | |
| EP0216833B1 (en) | Novel insulin derivatives and pharmaceutical preparations containing these derivatives | |
| US5157021A (en) | Insulin derivatives and pharmaceutical preparations containing these derivatives | |
| US20100145033A1 (en) | Novel orthogonal process for purification of recombinant human parathyroid hormone (rhpth) (1-34) | |
| US7955819B2 (en) | Process for producing sugar chain asparagine derivative | |
| JPH04230699A (ja) | クロマトグラフィーによるインスリンの精製方法 | |
| HU196218B (en) | Process for preparing quinoline carboxylic acid boric acid anhydrides | |
| EP0437544A1 (en) | Recombinant pdgf and methods for production | |
| EP0037255B1 (en) | Process for producing an insulin precursor | |
| AU767006B2 (en) | Monomeric analogues of human insulin | |
| DE69416663T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von menschlichem Glicentin | |
| EP0557076A1 (en) | Selective removal of N-terminal extensions from folded insulin precursors using dipeptidyl-aminopeptidase-1 | |
| JP2887060B2 (ja) | グリセンチンの生産方法 | |
| HUT51328A (en) | Process for producing proteins | |
| JPH05503004A (ja) | 少なくとも１個の分子内ジスルフィド結合を含有する蛋白質を相当する還元された組替え蛋白質を５．０以下のｐＨで酸化することによって製造する方法 | |
| JP2598024B2 (ja) | シグナルペプチドをコードしているｄｎａ | |
| JPH08205887A (ja) | グリセンチンまたはグリセンチン類縁物質の抽出法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HPC4 | Succession in title of patentee |
Owner name: AVENTIS PHARMA DEUTSCHLAND GMBH., DE |