FI91875B - Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja - Google Patents
Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja Download PDFInfo
- Publication number
- FI91875B FI91875B FI883708A FI883708A FI91875B FI 91875 B FI91875 B FI 91875B FI 883708 A FI883708 A FI 883708A FI 883708 A FI883708 A FI 883708A FI 91875 B FI91875 B FI 91875B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- process according
- alkanol
- elution
- protein
- basic proteins
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 20
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 25
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 13
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 13
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- -1 sulpho groups Chemical group 0.000 claims description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 3
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 claims 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 claims 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 abstract description 6
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 6
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 5
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 3
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241001400590 Richia Species 0.000 description 1
- 229910006069 SO3H Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006243 acrylic copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000021235 carbamoylation Effects 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L sodium tetrathionate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)SSS([O-])(=O)=O HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
9Ί 575
Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiini-seoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja 5 Valmistettaessa ihmisinsuliinia geeniteknologisten menetelmien avulla insuliinin biosynteesi tapahtuu käyttäen erästä edeltävää molekyyliä, proinsuliinia. Tässä B-ketju on liittynyt C-peptidin (yhdistävä peptidi) välityksellä A-ketjuun. Geeniteknologisessa tuotannossa Esche-10 richia colin avulla saadaan joskus ensin fuusioproteiinia, jossa olevaan prosinsuliiniin on liittynyt vielä vieras proteiini, esim. β-galaktosidaasi. Tämä vieras proteiini täytyy lohkaista ennen jatkokäsittelyä (vrt. DE-hakemus-julkaisu 34 40 988). Halogeenisyaanipilkkomisen jälkeen 15 kysteiiniryhmät muutetaan sulfitolyysin avulla (käsittelemällä natriumsulfiitilla ja natriumtetrationaatilla) S-sulfonaattimuodokseen. Molekyyli voidaan muuttaa tästä muodosta luontaiseksi avaruusrakenteekseen pelkistävää poimutusta käyttäen (esim. käsittelemällä merkaptoetano-20 lilla emäksisessä liuoksessa), samalla kun sen disulfidi-sillat muodostuvat oikealla tavalla. Proinsuliini tai pre-proinsuliini (* proinsuliinin johdannainen; alkutavu pre tarkoittaa yhtä tai useampaa muuta aminohappoa proinsuliinin N-päässä) muutetaan entsymaattista pikkoutumista käyt-25 täen (esim. trypsiinin avulla) pilkkoutumisseokseksi, joka sisältää insuliinin esiastetta, insuliini-arg-B31-B32:a, ja C-peptidiä. Näiden lisäksi syntyy vielä joitakin sivutuotteita, kuten esimerkiksi insuliini-des-thr-B30:a, in-suliini-arg-B31ta sekä epätäydellisestä pilkkoutuneita 30 välimuotoja.
Mainitut insuliinijohdannaiset ja yhdisteet, joita syntyy käsiteltäessä lähtöaineita alkuvaiheissa kemiallisesti, täytyy erottaa toisistaan. Tällöin on erityisen vaikeaa erottaa luonteeltaan emäksisiä insuliinijohdannai-35 siä, jotka ovat peräisin aminohapoista, jotka ovat terti- 91875 2 aarirakenteen muodostumisen jälkeen molekyylin sisäosissa.
Tämä osoitetaan vertailukokeessa (ks. osa B): Anio-ninvaihtomenetelmässä, joka on kuvattu DE-patenttijulkaisussa 2629568 ja joka on kehitetty insuliinin puhdistuk-5 seen, on se erikoisuus, että eluointinesteen proteiinien aggregoitumisen ehkäisemiseksi lisätään ei-ionista tensi-diä. Käytettäessä tätä insuliinien puhdistukseen hyvin sopivaa menetelmää yritettäessä erottaa ja eristää emäksisiä proteiineja, joita saadaan esimerkiksi geeniteknistä alku-10 perää olevan proinsuliinin tryptisen pilkkomisen avulla, erottuminen on täysin riittämätöntä. Tämä käy ilmi vastaavasta eluutiokäyrästä (ks. osa B); havaitaan, että yksittäisen peptidin piikit menevät päällekkäin.
Tunnetaan kuitenkin jo menetelmiä, joiden avulla 15 saavutetaan mainittujen proinsuliinin pilkkoutumistuottei-den erottuminen. Steiner et ai. esittävät artikkelissa J. Biol. Chem. 246 (1971) 1365-1374 menetelmän C-peptidin eristämiseksi proinsuliinin pilkkoutumistuoteseoksesta. Tässä menetelmässä (saantoja ei ilmoiteta) kromatografoin-20 ti suoritetaan käyttäen heikosti hapanta, karboksimetyyli-ryhmiä sisältävää (CM) selluloosapohjaista kationinvaihta-jaa. Pakkaus- ja eluointiliuoksiin lisätään tällöin 7 mol/1 ureaa proteiinien aggregoitumisen estämiseksi. Tällaisen suuren ureapitoisuuden läsnäolo on haitallista, 25 koska se johtaa proteiinien muuttumiseen, ennen kaikkea vapaiden aminoryhmien karbamoyloitumiseen. Markussen et ai. kuvaavat teoksessa Protein Engineering, Voi. 1, no. 3, s. 205-213 (1987) anioninvaihtokromatografointimenetelmää, jossa käytetään dietyyli-2-hydroksipropyyliaminoetyylipi-30 toisia (QAE) anioninvaihtajia kolmiulotteisesti verkkoutu-neessa polysakkaridiverkkorakenteisessa matriisissa. Tässä menetelmässä - anioninvaihtokromatografiälle ei ilmoiteta saantoja - käytetään proteiinien aggregoitumisen estämiseksi 60-% etanoliliuosta. Tällaisten väkevien etanoli-35 liuosten käytön haittana ovat tarvittavat turvallisuustoi- il 91875 3 menpiteet, joita tarvitaan erityisesti työskenneltäessä orgaanisten liuottimien kanssa teknisessä mittakaavassa. Toisaalta mainittuja etanolikonsentraatioita käytettäessä esiintyi proteiinien denaturoitumista, kuten myöhemmät 5 tutkimukset osoittivat.
Yritettäessä löytää parempaa emäksisten proteiinien erotus- ja eristysmenetelmää - sellaisia emäksisiä proteiineja sisältävistä - proteiiniseoksista havaittiin yllättävästi, että tämä päämäärä voidaan saavuttaa kromatogra-10 foimalla proteiiniseos käyttäen voimakkaasti hapanta kat-ioninvaihtajaa ja eluoimalla alkanolin vesiliuoksella, joka sisältää vain suhteellisen pienen määrän alkanolia.
On erityisen yllättävää, että näin voidaan tekniikan tasoon verrattuna sekä parantaa erotuskykyä että välttää 15 erotuksen aikana tapahtuvaa proteiinien lisämuuttumista.
On huomionarvoista, että voidaan erottaa jopa johdannaisia, joissa on - proinsuliinin esikäsittelyn yhteydessä syntyviä - muutoksia tertiaarirakenteen sisässä olevissa proteiineissa. Erotettavien proteiinien aggregoitumista ei 20 ole havaittu. Ioninvaihtajien uudelleenkäytölle ei ole mitään vaikeuksia.
Keksinnön kohteena on siis menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja ja joita saadaan 25 pilkkomalla entsymaattisesti luontaista, puolisynteettistä tai geeniteknologista alkuperää olevaa proinsuliinia ja/ tai sen johdannaisia, täyttämällä ioninvaihtaja proteiini-seoksella ja eluoimalla, jolloin ioninvaihtajana käytetään voimakkaasti hapanta kationinvaihtajaa ja eluointi suori-30 tetaan käyttäen vesi/C1-C4-alkanoliseosta, joka sisältää n.
10-50 til.-%, edullisesti n. 20-40 til.-%, erityisesti 30 til.-% alkanolia. Menetelmälle on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään. Menetelmän avulla haluttujen proinsuliinien tai niiden johdannaisten, esim.
35 apinan preproinsuliinin, pilkkoutumisseoksista voidaan 91875 4 eristää emäksiset proteiinit niin, että saannot ovat hyvät. Ioninvaihtajina tulevat periaatteessa kyseeseen kaikki voimakkaasti happamat kationinvaihtajat, joiden funktionaalinen ryhmä on sulforyhmä, erityisesti sulfopro-5 pyyliryhmä CH2-CH2-CH2-S03H, esim. matriisissa, joka koostuu hydrofiilisistä hydroksyyliryhmiä sisältävistä vinyylipo-lymeereistä (esim. RFractogel TSK, valmistaja Merck, Darmstadt), akryylikopolymeereistä (esim. SP RTrisacryl M, valmistaja Räactifs IBF, Villeneuve-la-Garenne, Ranska) tai 10 geeleistä, jotka sisältävät osan verkkoutunutta agaroosia (esim. S-RSepharose, valmistaja Pharmacia, Uppsala, Ruotsi); erityisen edullisen on S-Sepharose.
Juuri ennen voimakkaasti happaman kationinvaihtajän täyttämistä pilkkoutumisseoksella tämä tulisi tasapainot-15 taa puskuriliuoksella. Tämä puskuriliuos koostuu edullisesti vesi/C^-C^-alkanoliseoksesta, jonka alkanolipitoisuus on edullisesti n. 10-50 til.-%, erityisen edullisesti n. 20-40 til.-%, erityisesti n. 30 til.-%. Edullisia alkano-leja ovat etanoli ja isopropanoli, erityisesti isopropano-20 li. Muita lisäaineita, joita puskuriliuokseen voidaan lisätä, ovat esim. suola, erityisesti fysiologisesti siedettävä mineraalisuola, yksi tai useampia orgaanisia happoja, edullisesti maitohappo, emäs, edullisesti NaOH, ja/tai säilöntäaineet. Puskuriliuoksen edullinen pH-arvo on n.
25 2,5-5,5, erityisen edullinen n. 3,5-4,0.
Voimakkaasti happaman kationinvaihtajän täyttö voidaan suorittaa liuottamalla pilkkoutumisseos puskuriliuokseen - edullisesti sellaiseen, jolla on edellä kuvattu koostumus ja edellä esitetty pH-arvo - ja saattamalla näin 30 saatu liuos kontaktiin voimakkaasti happaman kationinvaihta jän kanssa.
Eluointiliuoksella, jolla voi olla periaatteessa samanlainen koostumus kuin alussa mainitulla puskuriliuoksella, pH-arvo on edullisesti 3,5-4,0. Erityisen sopiva on 35 eluointimenetelmä, jossa eluointiliuoksen suolakonsentraa- ii 91875 5 tiogradientti muuttuu ajan mukana edullisesti lineaarisesti. Tämä konsentraatiogradientti voi olla esim. sellainen, jossa eluoinnin alussa eluointiliuoksessa on pieni suola-konsentraatio (rajatapauksessa noin 0) ja jossa suolakon-5 sentraatio eluoinnin kuluessa kohoaa. Tällä tavalla voidaan saada aikaan erityisen tehokas proteiiniseoksen ero tus. Edullinen suolakonsentraatiogradientti vaihtelee arvosta n. 0 mol suolaa/1 (eluoinnin alussa) arvoon n. 1 mol suolaa/1 (eluoinnin lopussa), erityisen edullisesti arvos-10 ta n. 0,15 (eluoinnin alussa) arvoon n. 0,35 mol/1 (eluoinnin lopussa). Suolalisäyksenä tulevat kyseeseen monet orgaaniset ja epäorgaaniset suolat. Edullisia ovat fysiologisesti siedettävät suolat kuten ammonium- ja alkalisuo-lat, erityisen edullisesti natriumsuolat, erityisesti nat-15 riumkloridi.
Keksinnön mukainen erotusmenetelmä voidaan toteuttaa eri tavoin. Edullista on suoritus pylväsmenetelmää tai panosmenetelmää käyttäen. Lämpötila, joka on pidettävä ioninvaihtokromatografiassa edullisesti vakiona, voi vaih-20 della laajalla alueella. Edullinen on lämpötilaväli n. 10 - n. 50 °C, erityisesti n. 15 - n. 25 °C.
Seuraavan suoritusesimerkin (A) tarkoituksena on selvittää lähemmin keksintöä. Sitä seuraavan vertailuesi-merkin (B) tarkoituksena on osoittaa keksinnön mukaisen 25 menetelmän paremmuus tekniikan tason mukaiseen insuliinin puhdistusmenetelmään nähden (DE-patenttijulkaisu 2629568).
A) Suoritusesimerkki (keksinnön mukainen) 6 1 S-Sepharosea lietetään puskurin vesiliuokseen, joka sisältää 50 mmol/1 maitohappoa, 50 % isopropanolia ja 30 1 mol/1 natriumkloridia ja jonka pH-arvo on n. 3,5, ja sillä täytetään n. 80 cm korkea pylväs, jonka halkaisija on 10 cm. Pylväs saatetaan tasapainoon käyttäen 10 1 aloi-tuspuskuriliuosta (vesiliuos) (50 mmol/1 maitohappoa, 30 % isopropanolia, 0,15 mol/1 natriumkloridia, pH n. 3,5). 15 35 g kiteistä pilkkoutumisseosta, joka sisältää 6,2 g insu- 91875 6 liini-arg-B31-32:a, 3 g insuliini-arg-B31:a ja insuliini-des-thr-B30:a sekä tuntemattomia pilkkoutumisvälituotteita sekä johdannaisia, joita syntyy preproihmisinsuliinin pilkkoutumisessa, liuotetaan 3 l:an aloituspuskuria ja 5 kaadetaan pylvääseen. Sen jälkeen eluoidaan vesiliuoksella, joka sisältää 50 mmol/1 maitohappoa ja 30 % isopropanolia ja jonka PH-arvo on 3,5 (säädetty natriumhydroksi-dilla) ja natriumkloridigradientti 0,15 mol/1 - 0,35 mol/1. Eluointiliuoksen tilavuus on 2 x 20 1. Virtausno-10 peus on 1,5 1 tunnissa. Fraktiot, joiden insuliini-arg-B31-32-pitoisuus on HPLC:n (korkeapainenestekromatografia) mukaan yli 90 %, otetaan talteen, laimennetaan vedellä suhteessa 1:1 ja saostetaan lisäämällä 10 ml 10-% ZnCl2-liuosta 1 litraan liuosta ja säätämällä pH arvoon 6,8.
15 Saanto on 5 g insuliini-arg-B31-32:a, mikä vastaa insulii-ni-arg-B31-32:n suhteen vaiheen saantoa 80 %.
B) Vertailu
Vertailuesimerkki I suoritettiin DE-patenttijul-kaisun 2629568 mukaisesti ja esimerkki 2 keksinnön mukai-20 sesti. Taulukossa 1 on esitetty menetelmissä käytetyt parametrit ja saavutetut tulokset. Kuva 1 esittää vertailu-esimerkin I eluoinnin aikana saatua eluointikäyrää, kuva 2 vastaavaa keksinnön mukaisen esimerkin 2 käyrää. Havaittiin absorptio UV-alueella käytettäessä aallonpituutta 278 25 nm (A278) eluointiajan eli fraktion järjestysluvun suhteen. Eluointikäyrät osoittavat, että keksinnön mukaista menetelmää käytettäessä saavutetaan emäksisten proteiinien parempi erottuminen kuin DE-patenttijulkaisun 2629568 mukaista menetelmää käytettäessä. Vastaavasti keksinnön mu-30 kaista menetelmää käytettäessä saavutetaan myös parempi saanto ja suurempi tuotteen puhtaus (ks. taulukko 1).
ti V 91875 s o w ^ «e JS i i «j in X II m n-h 3 3
O3 1 O O n a n P
Γ-ιζ O M -n O CO
£ 3 Ή Ό O -H m -H CM
*. n ·ηπ >1 *· m n n a) a> (DC 3 3 3 JS -H 3 P * - p 1j m p P n h & o o cnc ,_l -H o JS ·· φ (0 3 I ·· Ή 3 dj ¢71 h -H ·· Ή O (Km n η·η
m o Φ 3 P n O’ 3 >h n A! C
v 1—t > :3 -H p «· »· I :3 -H
n O β C g ·Η :3 P 3 o h gn
Se ® -H JS M > 3 -H ro φ n η X C C >ιΡ :3 CO » S3
.li a) -H O M 3 P 3 3 in I 3 M
e p « -M EH+Jg v ·η σι·Γ~ι a) -H j<pp:3 3Mro.-i Μ Oi .J e 3 3 Φ >* n O 3 O tee 3 φ β j* n :3 -h j* js m e 1 ·· e ij φ I -H Ή n .* 04 Q| 3 θ'»—ι Φ o CT' 3 iin g M Oi M ro ·Η u :0 n 3 JS :3 Φ 3 » O 3 m n q. C 3 0 3 >ι·Η > *n O M I I ^ “ P 3 M C M £ 3 Οι Oi ·Η t?3 , P -H 3 O -H JS n P Oi O CM3 •Ja) n js -h .h >i 3 n 3 n # # ·η e 4>
ti -M X OiP >iM 3-H JS -H -M I JS
«n ® φ X >vH n g O .H o m rH ·η 3 •M -h K JLO C OirH O -H p γΗ <#> \ 00 CT» 3 C Oi o g @ 3 O >i 3 -H U I O’ I n -H :3 H H I W M >» « > 33 O .03 -H Oi JO 3 h w -Olin m 'r gz ro ro e cr» hh dl ft >-------- O * 4_> -H I I I I +-> 3 33 X 0 g 3 M ·η|
g . H ω 3 I Oi M 3 3 P
O -H 'Φ 3 I Λ -H 3 P rH I Ή ICO
H ϋ H in Ή·Η OHO Φ u 3 ».* en ·· M
- ^ 3 O’ »—ίΗ M >i g 3 > -H 3 M H φ gon CN -H >iT3 >1» O S ® M 3 3 3 £ p 3 VO .* 3 >i >i C Λ! 3 3 Φ M ime ti S -H CN JÄ -ripJS.HU rlS M P (M -M I φ M 3 Φ > M g '-P C O’-Η ^3U β Φ P ·Η ·· φ 3 m φ - -H M n
2 > Oi SS JS Ό -H :3 E O φ O -M 3 X
S° a n -h -h n > -h - © -h < >-hi3 .,-1 C *H QQ <ϋ ·· ·Η ί<0 <Ö rl O H H J3 ·Η (d
e3 3 ® > P -H P -ro >, I OP n C P
o e X 3 C :3 M i—I 3 >i»h NJ OI C -H jC
•H -H H H ·Η g +J :3 +J P - VJ >iJ3 -H -H 3 Οι 9 Ή C JS 3 n n ΦΟ i-IO H Oi „.3 n 3 O h ·Ή ·Η g H CPU) :3 3:3 Ή P -HM n g *H *· O >i O P n Oi ® _ -pm e »>» i—i n σ» Oir4 as n e Φ
«3 4J φ 3 +j -H :3 3 X 3 0 -M -M
2 -M fl > I Φ rl Ή > OS C Oi 3 i—I C
fS C Φ Wn>ig^ M Οι Φ I -n» rH * φ
M -H 44 β < -H >,jd Ό --jS -M 3 Φ C +J
+» -H β β »HP >vH g) H p <#> <*> 3 » n S
® 'H 0| C Q 3 φ M M Λ J3 iH On >iOj -H p ti C i -h i 3 O -M Φ -P *· js -H i—i o m :3n n n
T:2 M3 acc·—ΙΦΌ ns lOg ^ vo oo I X-H
«C QJ< Μ0·Η>ι£3 ·Η\ H4!H tP I h:k) g g ·Μ 9 -M g >*>,P M-M »r-t 3 · O tIcp g 3 g O Hg@p3n.-in PC O 3 > h e oo φ m a> p CU -------- rj 2 S i Π | ,_J ±J ·· 5 5ie e C ® f e -h φ e ··
^ § -H -M -M O
S ® « 'S « ti > φ Oi «5 e ij >, M 3 3 3 jj M O’ > ·· 3 Φ .H P " -h n n •Hm Φ * 0 3 ·· g .m τι ·Η ·Η PCn·· rHv3 *β Μη -H φ 3 n φ·^ρ P 30 g Q) 3 3 Ρ3η X X ta M JS P p Φ p -h ή n .· n o -h js o
33r-l 3 3-H -H 3 3 3 M
φ 3 o > Oi p a m>0iu ano 11 ‘ il 1 1 1 1
Claims (9)
1. Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät sellaisia emäksisiä 5 proteiineja ja joita saadaan pilkkomalla entsymaattisesti luontaista, puolisynteettistä tai geeniteknistä alkuperää olevaa proinsuliinia ja/tai sen johdannaista, tunnet-t u siitä, että täytetään voimakkaasti hapan kationin-vaihtaja proteiiniseoksella ja eluoidaan mainitut emäksi-10 set proteiinit vesi/C^-C^-alkanoliseoksella, joka sisältää n. 10 - 50 til.-% alkanolia, jolloin eluointiliuoksen pH säädetään välille n. 2,5 - 5,5, ja eluointiin käytetään suolakonsentraatiogradienttia, kuten ammonium- tai alka-lisuolagradienttia, joka on välillä n. 0 - 1 mol/1.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että voimakkaasti happamana kationin-vaihtajana käytetään kationinvaihtajaa, jossa on sulforyh-miä, erityisesti sulfopropyyliryhmiä.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että voimakkaasti happaman katio- ninvaihtajan pakkaus suoritetaan pH-arvon ollessa välillä n. 2,5-5,5, edullisesti välillä n. 3,5-4,0.
4. Yhden tai useamman patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että eluointiin ’ 25 käytetty H20/C1-C4-alkanoliseos sisältää C1-C4-alkanolina etanolia tai isopropanolia, erityisesti isopropanolia.
5. Yhden tai useamman patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että eluointiliuoksen pH säädetään arvoon n. 3,5-4,0.
6. Yhden tai useamman patenttivaatimuksen 1-5 mu kainen menetelmä, tunnettu siitä, että pakkaus- ja eluointiliuos sisältää puskuriainetta, jonka pohjana on edullisesti orgaaninen happo, erityisesti maitohappo.
7. Yhden tai useamman patenttivaatimuksen 1-6 mu-35 kainen menetelmä, tunnettu siitä, että eluointiin li 91875 käytetään ammonium- tai alkalisuolagradienttia, joka on välillä n. 0,15-0,35 mol/1.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vesi/C^C^-alkanoliseos sisältää n. 5 20-40 til.-% alkanolia.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vesi/C1-C4-alkanoliseos sisältää n. 30 til.-% alkanolia. 91875
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3726655 | 1987-08-11 | ||
| DE19873726655 DE3726655A1 (de) | 1987-08-11 | 1987-08-11 | Verfahren zur isolierung basischer proteine aus proteingemischen, welche solche basischen proteine enthalten |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI883708A0 FI883708A0 (fi) | 1988-08-09 |
| FI883708A FI883708A (fi) | 1989-02-12 |
| FI91875B true FI91875B (fi) | 1994-05-13 |
| FI91875C FI91875C (fi) | 1994-08-25 |
Family
ID=6333496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI883708A FI91875C (fi) | 1987-08-11 | 1988-08-09 | Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5101013A (fi) |
| EP (1) | EP0305760B1 (fi) |
| JP (1) | JP2587867B2 (fi) |
| KR (1) | KR0129539B1 (fi) |
| AT (1) | ATE96447T1 (fi) |
| AU (1) | AU609170B2 (fi) |
| CA (1) | CA1340237C (fi) |
| DE (2) | DE3726655A1 (fi) |
| DK (1) | DK173502B1 (fi) |
| ES (1) | ES2047007T3 (fi) |
| FI (1) | FI91875C (fi) |
| HU (1) | HU198218B (fi) |
| IE (1) | IE61557B1 (fi) |
| IL (1) | IL87385A (fi) |
| NO (1) | NO175004C (fi) |
| NZ (1) | NZ225746A (fi) |
| PH (1) | PH26874A (fi) |
| PT (1) | PT88230B (fi) |
| ZA (1) | ZA885871B (fi) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2097426T3 (es) * | 1992-12-02 | 1997-04-01 | Hoechst Ag | Procedimiento para la obtencion de proinsulina con puentes de cistina correctamente unidos. |
| DK0821006T3 (da) | 1996-07-26 | 2004-08-16 | Aventis Pharma Gmbh | Insulinderivater med öget zinkbinding |
| DE19652713C2 (de) * | 1996-12-18 | 2001-11-22 | Aventis Pharma Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Insulin und Insulinderivaten durch Chromatographie an stark saurem Kationenaustauscher |
| KR100341297B1 (ko) * | 1997-03-29 | 2002-11-16 | 주식회사종근당 | 재조합활성형프로인슐린의분리.정제방법 |
| DE19726167B4 (de) | 1997-06-20 | 2008-01-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung |
| DE19825447A1 (de) | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
| US6444788B1 (en) | 1999-03-15 | 2002-09-03 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatography of GLP-1, analogs and derivatives thereof |
| WO2000055203A1 (en) * | 1999-03-15 | 2000-09-21 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatographic separation of glp-1 and related peptides |
| US6451987B1 (en) * | 1999-03-15 | 2002-09-17 | Novo Nordisk A/S | Ion exchange chromatography of proteins and peptides |
| DE10114178A1 (de) | 2001-03-23 | 2002-10-10 | Aventis Pharma Gmbh | Zinkfreie und zinkarme Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität |
| DE10227232A1 (de) * | 2002-06-18 | 2004-01-15 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Saure Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität |
| DE10235168A1 (de) * | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Preproinsulin |
| US7193035B2 (en) * | 2002-10-29 | 2007-03-20 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Crystals of insulin analogs and processes for their preparation |
| SE0300791D0 (sv) * | 2003-03-20 | 2003-03-20 | Amersham Biosciences Ab | Use of ph-responsive polymers |
| KR20060106812A (ko) * | 2003-08-21 | 2006-10-12 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 라세미화 아미노산을 포함하는 폴리펩티드의 분리 |
| EP1958879B1 (en) * | 2005-08-04 | 2012-07-11 | Toyo Seikan Kaisha, Ltd. | Method for sterilization of plastic bottle |
| DK2349324T3 (en) | 2008-10-17 | 2017-12-11 | Sanofi Aventis Deutschland | COMBINATION OF AN INSULIN AND A GLP-1 AGONIST |
| FR2947818B1 (fr) * | 2009-07-09 | 2011-07-29 | Inst Superieur Des Sciences Agronomiques Agroalimentaires Horticoles Et Du Paysage Agro Campus Ouest | Utilisation d'un coproduit issu d'un procede d'extraction du lysozyme a partir de blanc d'oeuf, pour l'obtention d'au moins une proteine basique de blanc d'oeuf |
| KR101836070B1 (ko) | 2009-11-13 | 2018-03-09 | 사노피-아벤티스 도이칠란트 게엠베하 | Ｇｌｐ－１ 작용제, 인슐린 및 메티오닌을 포함하는 약제학적 조성물 |
| JP5973918B2 (ja) | 2009-11-13 | 2016-08-23 | サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | Ｇｌｐ−１アゴニスト及びメチオニンを含む薬学的組成物 |
| PT2611458T (pt) | 2010-08-30 | 2016-12-16 | Sanofi Aventis Deutschland | Utilização de ave0010 para o fabrico de um medicamento para o tratamento da diabetes mellitus tipo 2 |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| CN108079281A (zh) | 2011-08-29 | 2018-05-29 | 赛诺菲-安万特德国有限公司 | 用于2型糖尿病患者中的血糖控制的药物组合 |
| AR087744A1 (es) | 2011-09-01 | 2014-04-16 | Sanofi Aventis Deutschland | Composicion farmaceutica para uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa |
| EP2748181B1 (en) | 2011-09-30 | 2016-03-30 | GE Healthcare BioProcess R&D AB | Method for purification of cleaved pro-insulin |
| US10421795B2 (en) * | 2012-12-17 | 2019-09-24 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Process for purifying insulin and analogues thereof |
| EP3116531B1 (en) | 2014-03-14 | 2021-10-20 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Purifying insulin using cation exchange and reverse phase chromatography in the presence of an organic modifier and elevated temperature |
| CN107206058A (zh) | 2014-12-12 | 2017-09-26 | 赛诺菲-安万特德国有限公司 | 甘精胰岛素/利西拉来固定比率配制剂 |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
| WO2018147393A1 (ja) * | 2017-02-10 | 2018-08-16 | 三菱ケミカル株式会社 | ヒトインスリン精製用分離剤及びヒトインスリンの精製方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2629568C3 (de) * | 1976-07-01 | 1981-09-10 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten |
| NL7713966A (nl) * | 1976-12-27 | 1978-06-29 | Univ Minnesota | Werkwijze voor het behandelen van insuline. |
| DK311477A (da) * | 1977-07-08 | 1979-01-09 | Leo Lab | Fremgangsmaade ved fremstilling af rent insulin |
| US4459226A (en) * | 1982-02-26 | 1984-07-10 | Eli Lilly And Company | Process for recovering insulin |
| DD247684A1 (de) * | 1983-04-14 | 1987-07-15 | Ulrich Krabiell | Verfahren zur isolierung von insulinderivaten |
| ATE95236T1 (de) * | 1983-04-25 | 1993-10-15 | Chiron Corp | Hybrid-dns-synthesis von reifen insulinaehnlichen wachstumsfaktoren. |
| DE3440988A1 (de) * | 1984-11-09 | 1986-07-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur spaltung von peptiden und proteinen an der methionyl-bindung |
| DE3511269A1 (de) * | 1985-04-12 | 1986-10-09 | Veb Berlin-Chemie, Ddr 1199 Berlin | Verfahren zur reinigung von insulin |
| JPS6379591A (ja) * | 1986-09-22 | 1988-04-09 | Mitsui Toatsu Chem Inc | ｔＰＡの精製方法 |
| AU607988B2 (en) * | 1987-04-21 | 1991-03-21 | Southern Cross Biotech Pty Ltd. | Production of proteins in active forms |
| EP0365858B1 (en) * | 1988-10-26 | 1994-11-30 | American Cyanamid Company | Process for reducing the aggregate content of growth hormone-like materials |
-
1987
- 1987-08-11 DE DE19873726655 patent/DE3726655A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-08-04 AT AT88112661T patent/ATE96447T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-08-04 EP EP88112661A patent/EP0305760B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-04 ES ES88112661T patent/ES2047007T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-04 DE DE88112661T patent/DE3885214D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-09 PH PH37374A patent/PH26874A/en unknown
- 1988-08-09 NZ NZ225746A patent/NZ225746A/en unknown
- 1988-08-09 IL IL87385A patent/IL87385A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-08-09 HU HU884131A patent/HU198218B/hu unknown
- 1988-08-09 KR KR1019880010123A patent/KR0129539B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-08-09 US US07/230,085 patent/US5101013A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-09 FI FI883708A patent/FI91875C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 JP JP63198127A patent/JP2587867B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-10 CA CA000574320A patent/CA1340237C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-10 PT PT88230A patent/PT88230B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 IE IE244188A patent/IE61557B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 AU AU20591/88A patent/AU609170B2/en not_active Expired
- 1988-08-10 NO NO883554A patent/NO175004C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 DK DK198804476A patent/DK173502B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-08-10 ZA ZA885871A patent/ZA885871B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE882441L (en) | 1989-02-11 |
| DK447688D0 (da) | 1988-08-10 |
| HU198218B (en) | 1989-08-28 |
| NZ225746A (en) | 1990-11-27 |
| NO175004B (no) | 1994-05-09 |
| DK173502B1 (da) | 2001-01-08 |
| FI883708A0 (fi) | 1988-08-09 |
| ZA885871B (en) | 1989-04-26 |
| AU609170B2 (en) | 1991-04-26 |
| DK447688A (da) | 1989-02-12 |
| NO883554L (no) | 1989-02-13 |
| IL87385A (en) | 1993-08-18 |
| JP2587867B2 (ja) | 1997-03-05 |
| FI91875C (fi) | 1994-08-25 |
| PH26874A (en) | 1992-11-16 |
| ES2047007T3 (es) | 1994-02-16 |
| IE61557B1 (en) | 1994-11-16 |
| FI883708A (fi) | 1989-02-12 |
| EP0305760A2 (de) | 1989-03-08 |
| JPS6486896A (en) | 1989-03-31 |
| HUT47958A (en) | 1989-04-28 |
| EP0305760B1 (de) | 1993-10-27 |
| CA1340237C (en) | 1998-12-15 |
| PT88230A (pt) | 1989-06-30 |
| ATE96447T1 (de) | 1993-11-15 |
| AU2059188A (en) | 1989-02-16 |
| DE3726655A1 (de) | 1989-02-23 |
| KR0129539B1 (ko) | 1998-04-04 |
| NO883554D0 (no) | 1988-08-10 |
| PT88230B (pt) | 1995-03-01 |
| DE3885214D1 (de) | 1993-12-02 |
| EP0305760A3 (en) | 1990-06-06 |
| NO175004C (no) | 1994-08-17 |
| KR890003799A (ko) | 1989-04-18 |
| US5101013A (en) | 1992-03-31 |
| IL87385A0 (en) | 1989-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI91875B (fi) | Menetelmä emäksisten proteiinien eristämiseksi proteiiniseoksista, jotka sisältävät tällaisia emäksisiä proteiineja | |
| US20100210815A1 (en) | Insulin production methods and pro-insulin constructs | |
| JP4975895B2 (ja) | 高圧液体クロマトグラフィーによるインシュリンの単離方法 | |
| Levy et al. | The synthesis of triaminoacyl-insulins and the use of the t-butyloxycarbonyl group for the reversible blocking of the amino groups of insulin | |
| CA2050644C (en) | Process for the purification of insulins by chromatography | |
| SU1611217A3 (ru) | Способ получени инсулина человека | |
| Xue et al. | Total synthesis of the lipopeptide a-mating factor ofSaccharomyces cerevisiae | |
| DK149778B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af des-pheb1-humaninsulin eller derivater deraf | |
| US5334532A (en) | PDGF-B fusion protein, vectors, and host cells for use in production thereof | |
| Axen et al. | Chemical coupling of amino acids, peptides and proteins to sephadex | |
| HU196218B (en) | Process for preparing quinoline carboxylic acid boric acid anhydrides | |
| CA2552790C (en) | Process for the purification of bacterially expressed proteins | |
| Sugae et al. | Amino acid sequence next to tryptophan in human and bovine serum albumin | |
| JPH04504407A (ja) | Ｐｄｇｆ―ａ，ｐｄｇｆ―ａａ，ｐｄｇｆ―ａｂ，その生産方法及びそれを含む医薬 | |
| Aubert et al. | Glycosylated proline‐rich peptide of human parotid saliva. Circular dichroism study | |
| JPH04271794A (ja) | デス（６４，６５）−プロインシュリンの製造方法 | |
| JP7397583B2 (ja) | Ｎａｒの製造方法 | |
| Manao et al. | Guinea pig acylphosphatase: The amino acid sequence | |
| Katsoyannis et al. | Synthesis of deamino-A1 sheep insulin | |
| Epand et al. | Studies on the alkaline denaturation of glucagon | |
| EP4181946A1 (en) | Improved purification process of semaglutide | |
| BR112021015568A2 (pt) | Purificação de análogos de glp-1 | |
| RU2087151C1 (ru) | Способ получения высокочистого инсулина | |
| Chen et al. | THE SYNTHESIS OF HIGH PURITY Nα-BENZYLOXYCARBONYL Nε-t-BUTYLOXYCARBONYL-L-LYSINE | |
| CS206546B1 (cs) | Způsob čištěni peptidů kapalinovou chromatografii |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: AVENTIS PHARMA DEUTSCHLAND GMBH |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH Free format text: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH |
|
| MA | Patent expired |